СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СТИМУЛИРОВАННОГО ФАГОЦИТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, конкретно к лабораторной диагностике, может быть использовано в иммунологических лабораториях для оценки факторов неспецифической защиты организма, его функциональной активности и резервных возможностей, а также для контроля эффективности проводимой терапии (Лабораторные методы исследования в клинике./ Справочник. - Под ред. В.В. Меньшикова. - М., Мед. - 1987. - С. 310-311).

Для лечения больных с нарушениями естественной защиты, клинически выражающихся в частых повторных заболеваниях, протекающих в атипичной форме или торпидных к традиционным терапевтическим мероприятиям, необходима как можно более полная информация о состоянии неспецифической или естественной защиты организма от чужеродных агентов, которыми являются экзогенные биологические объекты (вирусы, бактерии, паразиты) и эндогенные-мутантные клетки, и различные химические частицы.

Такая информация может быть получена при проведении лабораторных тестов спонтанной и стимулированной фагоцитарной активности нейтрофилов. Стимулированная фагоцитарная активность нейтрофилов имеет высокую диагностическую значимость при любом типе патологических состояний, в основе которых лежит дисфункция факторов естественной защиты. Ее определение позволяет оценить резервные возможности организма и сформировать оптимальный комплекс лечебных и реабилитационных мероприятий.

Известен способ оценки функциональной активности нейтрофилов периферической крови путем определения параметров спонтанного и стимулированного фагоцитоза нейтрофилов лабораторными методами (Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. - М., Наука. - 1990. - С. 75; Земсков В. М. Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты./ Успехи соврем. биологии. - 1984. - Т. 98.- N 5. - С. 219-239; Иммунологические методы. - М.: Мед. - 1987. - С. 378-389; Лебедев К.А., Боглазова Е.К., Алексеева М.В., Виноградова Ю.Е. Угнетающее действие сыворотки крови на фагоцитарную активность макрофагов./ Журн. микробиол., эпидемиологии и иммунобиологии. - 1980. - N 4. - С. 65-69; Dunn P.A. Quantitation of neutrophil phagocytosis, using fluorescent latex beads./J. Lab. And Clin. Med. - 1981. - Vol. 98. - N 3. - P. 374-382; Nicolov C. Phagocytosis of formal treated red blood cells./Folia haematol. - 1980. - Vol. 107. - N 3. - P. 391-400).

В качестве объектов фагоцитоза используют живые или убитые клетки микроорганизмов, ядросодержащие эритроциты птиц, различные твердые частицы - полистирол, латекс, уголь, крахмал и др. Наиболее распространен метод, при котором в качестве объекта фагоцитоза используется полистироловый латекс, в качестве стимулятора фагоцитарных реакций - микробные полисахариды: зимозан, продигиозан, сальмозан и др. (Инструкция по использованию тест-набора для определения фагоцитоза ХК "Реакомплекс"). Методы требуют затрат реактивов, рабочего времени для постановки реакции, снятия результатов путем тщательной микроскопии и математической обработки полученных данных.

Целью изобретения является совершенствование способа оценки важного фактора неспецифической защиты организма - стимулированного фагоцитоза. Эта цель достигается путем сокращения затрат на реактивы и лабораторные исследования, сокращения рабочего времени для получения результатов, получения возможности применения в клиниках различного профиля, имеющих минимальное лабораторное оснащение и не имеющих высококвалифицированных кадров.

Наиболее близким аналогом предлагаемого способа определения параметров стимулированного фагоцитоза является способ, описанный в инструкции химической компании "РЕАКОМПЛЕКС" по использованию тест-набора "Определение фагоцитоза" (ТУ 2600-19310-93, Гигиенический сертификат 046/00059 от 20.01.94). По этой методике определение и спонтанного, и стимулированного фагоцитоза производится путем прямого подсчета количества фагоцитирующих клеток под микроскопом после сложной многоступенчатой подготовки мазков. Для определения стимулированного фагоцитоза дополнительно проводят предварительную стимуляцию фагоцитирующих клеток продигиозаном.

Предлагаемый способ исключает этап стимуляции и этапы повторного приготовления мазков и подсчета фагоцитирующих клеток.

При оценке неспецифических факторов защиты, включающихся в ходе реакций организма в специфические механизмы, был проведен статистический анализ взаимосвязи спонтанных и стимулированных зимозаном показателей нейтрофильного фагоцитоза у 764 детей с различными видами патологии в разных фазах заболеваний. Отбор детей для исследования осуществлялся сплошным методом.

Корреляционный анализ обнаружил линейную зависимость относительного и абсолютного числа нейтрофилов, участвующих в спонтанных и стимулированных зимозаном фагоцитарных реакциях. Регрессионный анализ данных позволил определить коэффициенты пересчета, которые дают возможность вычислять параметры стимулированного фагоцитоза нейтрофилов без лабораторного определения последних. Достоверность результатов, получаемых предлагаемым способом, не отличается от таковой при проведении лабораторных исследований, а ошибка измерений при этом не превышает ошибку, допустимую при лабораторном определении указанных параметров. Значения коэффициентов пересчета, а также их стандартные ошибки для разных возрастных групп приведены в таблицах 1 - 3. Оценки качества моделей (коэффициенты корреляции, R-квадрат и стандартные ошибки оценки σ) представлены в таблицах 2 и 4 и на фиг. 1 и 2.

Зависимость относительных параметров фагоцитоза выражается следующим уравнением:
ФагНейтрСтим(%) = 30.37 + 0.62 · ФагНейтрСпонт(%),
где ФагНейтрСтим(%) - относительное число фагоцитирующих нейтрофилов стимулированное; ФагНейтрСпонт(%) - относительное число фагоцитирующих нейтрофилов спонтанное.

Зависимость абсолютных параметров фагоцитоза выражается следующим уравнением:
ФагНейтрСтим(абс) = 350.80 + 0.99 · ФагНейтрСпонт(абс),
где ФагНейтрСтим(абс) - абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов стимулированное; ФагНейтрСпонт(абс) - абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов спонтанное.

В интервал ±2·σ около линии регрессии попадает 95.19% выборочных данных для относительных параметров фагоцитоза и 93.98% данных абсолютных параметров фагоцитоза.

Приведенные уравнения дают возможность вычислять показатели стимулированного нейтрофильного фагоцитоза чисто математическим способом, что позволяет сократить число лабораторных исследований, ведет к сокращению затрат реактивов, использования лабораторного оборудования и рутинного труда исследователей, при котором большая нагрузка падает на их органы зрения.

Изобретение относится к медицине, конкретно к лабораторной диагностике, может быть использовано в иммунологических лабораториях для оценки факторов неспецифической защиты организма, его функциональной активности и резервных возможностей. Способ основан на математической обработке данных спонтанного фагоцитоза. Вычисление показателей стимулированных фагоцитирующих нейтрофилов (ФагНейтрСтим) осуществляют по числу спонтанных фагоцитирующих нейтрофилов (ФагНейтрСтим) с помощью коэффициентов пересчета. Для вычисления относительных показателей используют формулу ФагНейтрСтим (%) = 30,37 + 0,62 · ФагНейтрСтим (%). Для вычисления абсолютных показателей используют формулу ФагНейтрСтим (абс. ) = 350,80 + 0,99 · ФагНейтрСпонт (абс). Способ позволяет сократить затраты на реактивы и время для получения достоверных результатов. 4 табл., 2 ил.

Способ определения параметров стимулированного фагоцитоза нейтрофилов путем математической обработки лабораторных данных спонтанного фагоцитоза, отличающийся тем, что вычисление относительных и абсолютных значений числа стимулированных фагоцитирующих нейтрофилов (ФагНейтрСтим) проводят по числу спонтанных фагоцитирующих нейтрофилов (ФагНейтрСпонт) с помощью вычисленных методом регрессионного анализа коэффициентов пересчета по формулам:
для относительных показателей
ФагНейтрСтим (%) = 30,37 + 0,62 · ФагНейтрСпонт (%);
для абсолютных показателей
ФагНейтрСтим (абс) = 350,80 + 0,99 · ФагНейтрСпонт (абс).