СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОСТИ ЛЕПРОЗНОГО ПРОЦЕССА Российский патент 2001 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования.

Известны способы определения активности лепрозного процесса, основанные на гистологическом исследовании биоптатов пораженной кожи больных лепрой (Ridley D. S. Skin biopsy in leprosy. Histological interpretation and clinical application. - Basel, 1977. - 57 p.), а также на исследовании сыворотки крови с целью определения состояния гуморального иммунитета, отражающие стадии течения лепрозного процесса (Roche, P.W., Britton, W.J., Failbus, S. S. , Williams, D., Pradhan, H.M., Theuvenet, W.J. Operational value of serological measurements in multibacilliary leprosy patients: clinical and bacteriological correlates of antibody responses // Int. J. of leprosy, 1990. - Vol. 58.- P. 480-490).

Наиболее близким к заявляемому изобретению по сущности является способ определения активности лепрозного процесса, основанный на обнаружении антител к фенольному гликолипиду-1 в сыворотке крови больных лепрой методом энзимсвязанного иммуносорбентного анализа (ELISA). Способ позволяет выявлять специфические антитела к микобактериям лепры в сыворотке крови у больных лепрой для определения активности лепрозного процесса. (Lyons N.F., Shannon E. J. , Ellis B.P.B., Naaf B. Association of IgG and IgM antibodies to phenolic glycolipid 1 antigen of Mycobacterium leprae with disease parameteres in multibacillary leprosy patients // Lepr. Rev. - 1988. - Vol. 59.- P.45-52). Однако известный способ обладает следующими недостатками:
- сложность и трудоемкость исследования;
- необходимость использования дорогостоящего оборудования и реактивов, что возможно лишь в условиях специализированной лаборатории.

Была поставлена задача создания более простого способа диагностики активности лепрозного процесса у больных лепрой, лишенного указанных недостатков.

Задача решается тем, что был разработан способ диагностики активности лепрозного процесса у больных лепрой, при котором готовят смесь 0,1 мл сыворотки крови с 0,02 мл лепронина или лепрозина, инкубируют ее в течение 60 минут при комнатной температуре, наносят на поверхность предметного стекла в форме капель 20 мкл нативной сыворотки крови в качестве контроля и 20 мкл смеси, высушивают их при комнатной температуре, производят сравнительную микроскопию образцов и при наличии патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки и отсутствии их в образце смеси диагностируют активный лепрозный процесс.

Изложенная сущность изобретения подтверждается фотографиями, где:
Фиг. 1 демонстрирует структуры в образцах при активном лепрозном процессе: а - наличие патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки крови больного лепрой, б - отсутствие патологических структур в образце смеси.

Фиг. 2 демонстрирует структуры в образцах при отсутствии активного лепрозного процесса (регресс заболевания): а - наличие патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки крови больного лепрой, б - наличие тех же патологических структур треугольной формы в образце смеси.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь из вены берется в количестве 2 мл в сухую пробирку. После отстаивания крови в течение 60 минут 0,1 мл полученной сыворотки помещается в сухую пробирку Флоринского, в которую добавляется 0,02 мл лепрозина или лепронина в концентрации 3 мкг/мл. Инкубацию сыворотки крови с лепрозином или лепронином проводили в течение 60 минут при комнатной температуре. Затем наносится 20 мкл нативной сыворотки крови (контроль) на поверхность предметного стекла и рядом 20 мкл инкубированной смеси в форме капель. После высушивания при комнатной температуре образцы микроскопируются в проходящем свете. У больных с активным лепрозным процессом регистрировали наличие патологических структур треугольной формы в нативной сыворотке крови, а в образце смеси отмечали их отсутствие. У больных с неактивной стадией лепры (регресс заболевания) патологические структуры треугольной формы регистрировали в обоих образцах.

Предлагаемый способ прошел успешную апробацию в клинике НИИ по изучению лепры МЗ РФ в течение 1998-1999 гг.

Ниже приводятся результаты апробации.

Примеры:
Больной К., 1935 г.р., история болезни N 3863, поступил в клинику НИИ по изучению лепры в 1999 г. с диагнозом лепроматозный тип лепры.

Одновременно у больного для исследований были взяты кровь и биопсия с пораженного участка кожи.

В день получения материала при исследовании образцов нативной сыворотки крови были выявлены патологические структуры треугольной формы, а в образце смеси с лепронином они отсутствовали.

Заключение: активная стадия лепрозного процесса.

Результаты гистологического исследования биоптатов пораженной кожи, на проведение которых обычно затрачивается 10 дней с момента взятия материала, подтвердили наличие активно формирующегося инфильтрата лепроматозной структуры, содержащего большое количество M.leprae.

Пример 2. Больной Т., 1930 г.р., история болезни N 2774. Болен лепроматозным типом лепры с 1956 года.

При исследовании образцов как в нативной сыворотке крови, так и в смеси сыворотки крови с лепронином были выявлены патологические структуры треугольной формы.

Заключение: неактивная стадия лепрозного процесса.

По данным гистологического исследования в кожных биоптатах определялись инфильтраты нехарактерной структуры, в которых M.leprae не обнаружены.

Способ позволяет в течение первых суток определить активность лепрозного процесса у больных лепрой, технически прост, не требует использования дорогостоящего оборудования и реактивов, что дает возможность использования его в клинике-диагностической лаборатории любого лечебно-профилактического учреждения.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть, в частности, использовано для диагностики активности лепрозного процесса. Проводят исследование сыворотки крови, при этом готовят смесь 0,1 мл сыворотки крови с 0,02 мл лепронина или лепрозина, инкубируют ее в течение 60 мин при комнатной температуре, наносят на поверхность предметного стекла в форме капель 20 мкл нативной сыворотки крови в качестве контроля и 20 мкл смеси, высушивают их при комнатной температуре, производят сравнительную микроскопию образцов и при наличии патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки и отсутствии их в образце смеси диагностируют активный лепрозный процесс. Способ обеспечивает упрощение диагностики активности лепрозного процесса. Предлагаемый способ рекомендуется использовать в клинико-диагностической лаборатории любого лечебно-профилактического учреждения. 2 ил.

Способ диагностики активности лепрозного процесса путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что готовят смесь 0,1 мл сыворотки крови с 0,02 мл лепронина или лепрозина, инкубируют ее в течение 60 мин при комнатной температуре, наносят на поверхность предметного стекла в форме капель 20 мкл нативной сыворотки крови в качестве контроля и 20 мкл смеси, высушивают их при комнатной температуре, производят сравнительную микроскопию образцов и при наличии патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки и отсутствии их в образце смеси диагностируют активный лепрозный процесс.