СОЛИ ЭТИЛОВОГО ЭФИРА 3-(2-(4-(4-(АМИНОИМИНОМЕТИЛ)ФЕНИЛ)-4-МЕТИЛ-2,5-ДИОКСОИМИДАЗОЛИДИН-1-ИЛ)АЦЕТИЛАМИНО)-3-ФЕНИЛПРОПИОНОВОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ Российский патент 2001 года по МПК C07D233/72 C07D233/74 C07D233/76 A61K31/415 A61K31/416 A61P9/10 A61P9/14 

Настоящее изобретение относится к солям 3-(2-(4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты общей формулы I,

где НВ означает малеиновую кислоту, а также к их физиологически приемлемым солям, к способу их получения и к их применению в лекарственных средствах.

Гидрохлориды этилового эфира 3-(2-(4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты и их фармакологические свойства уже описаны в заявке PCT/EP94/03491 (публикация WO 95/14008). Однако гидрохлориды этилового эфира (S)-3-(2-((S)- 4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил) ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты, этилового эфира (R) -3-(2-((R)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты, этилового эфира (S)-3-(2-((R)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4- метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) ацетиламино)-3- фенилпропионовой кислоты и этилового эфира (R)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты имеют тот недостаток, что являются аморфными и не могут быть получены в кристаллической форме. По этой причине их невозможно очищать путем кристаллизации, что делает их практически неприемлемыми для применения в качестве действующих веществ в лекарственных средствах, для которых согласно существующим законодательным предписаниям четко определены требования касательно степени чистоты ингредиентов; они в равной степени непригодны в качестве целевого продукта при синтезе фармакологически активных субстанций в промышленном масштабе, поскольку при осуществлении способов выделения и очистки этого продукта, также согласно законодательным положениям, должны соблюдаться строго определенные условия.

По своим физическим свойствам и из-за трудностей их использования для приготовления фармацевтических композиций в галеновой форме, таких, например, как таблетки, аморфные гидрохлориды также малопригодны.

Исходя из вышеизложенного, в основу изобретения была положена задача получить этиловые эфиры 3-(2-(4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4- метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты в пригодной для использования в указанных выше целях негигроскопичной форме, благодаря которой простым путем обеспечивается соблюдение требований касательно степени чистоты, равно как и выполнение требований, предъявляемых к синтезу в промышленном масштабе, а также соответствие требованиям галеники.

Указанная задача решается неожиданным образом благодаря получению малеиновокислотных солей этиловых эфиров 3-(2-(4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты, прежде всего солей, содержащих эти этиловые эфиры и малеиновую кислоту в солевой форме (т.е. в виде кислотно-аддитивной соли) в молярном соотношении приблизительно 1:1.

Предметом настоящего изобретения являются в соответствии с этим соли этилового эфира 3- (2-(4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты общей формулы I

где НВ означает малеиновую кислоту, во всех стереоизомерных формах и их смесях в любых соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

Соединения общей формулы I являются кристаллическими, они негигроскопичны и обладают тем самым неожиданными преимуществами. Их можно при соответствующих условиях кристаллизовать и очищать путем перекристаллизации и применять в лекарственных средствах, а также для приготовления лекарственных препаратов в галеновой форме.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединений общей формулы I, т.е. изомер с (S)-конфигурацией у хирального центра имидазолидинового кольца и (S)-конфигурацией у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте, изомер с (R)-конфигурацией у хирального центра в имидазолидиновом кольце и (S)-конфигурацией у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте, изомер с (S)-конфигурацией у хирального центра в имидазолидиновом кольце и (R)-конфигурацией у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте и изомер с (R)-конфигурацией у хирального центра в имидазолидиновом кольце и (R)-конфигурацией у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте. Предпочтителен из указанных изомер с (S)-конфигурацией у хирального центра в имидазолидиновом кольце и (S)-конфигурацией у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте, т. е. соль этилового эфира (S)-3-(2- ((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин- 1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты формулы Ia

в которой HB означает малеиновую кислоту, а также ее физиологически приемлемые соли.

Настоящее изобретение включает далее все смеси из двух или более стереоизомеров общей формулы 1 в любых количественных соотношениях.

В предлагаемых согласно изобретению соединениях общей формулы 1, содержащих этиловые эфиры 3-(2-(4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин- 1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты и малеиновую кислоту в молярном соотношении приблизительно 1:1, одна из обеих COOH-групп малеиновой кислоты нейтрализована основной амидиновой группой и представлена в солевой форме, т.е. в виде отрицательно заряженной карбоксилатной группы (амидиновая группа в этиловом эфире после протонирования малеиновой кислотой представлена в этом случае в виде положительно заряженной амидиновой группы). Вторая из обеих COOH-групп малеиновой кислоты может быть представлена в соединениях по изобретению в кислотной форме, т.е. в виде COOH-группы, либо она может быть представлена в солевой форме, т.е. в виде карбоксилатной группы. Предметом настоящего изобретения являются как гидромалеаты, в которых представлена еще одна COOH-группа и которые относятся к числу предпочтительных, так и их производные, представляющие собой физиологически приемлемые соли, получаемые из них с помощью неорганических и органических оснований.

Физиологически приемлемые соли представляют собой при этом прежде всего пригодные для применения в фармацевтике или нетоксичные соли. Катионы, имеющиеся в таких солях, являются производными, получаемыми, например, с помощью щелочных и щелочноземельных металлов, таких как натрий, калий, магний или кальций, аммиака или физиологически приемлемых органических аминов, таких как триэтиламин, этаноламин или трис-(2- гидроксиэтил) амин. Соли соединений общей формулы I могут быть получены непосредственно по описанному ниже способу за счет применения в нем, например, соответствующих солей малеиновой кислоты, или добавления соответствующих оснований. Другая возможность получения указанных солей состоит в том, что полученные сначала гидромалеаты общей формулы I, в которых представлена еще одна COOH-группа, обрабатывают соответствующими основаниями, например гидроксидами, карбонатами либо гидрокарбонатами щелочных или щелочноземельных металлов, оксидами щелочноземельных металлов или аминами. При этом COOH-группы могут полностью либо только частично переводиться в солевую форму. Эффективность процесса такого солеобразования зависит, в частности, от значения pH, которое хотят получить при таком предусмотренном проведении процесса. Перевод свободных COOH-групп - опять-таки полностью либо только частично - в солевую форму может осуществляться также в тех случаях, когда при приготовлении фармацевтических композиций гидромалеаты общей формулы I применяют совместно с основными субстанциями.

Соединения общей формулы I можно получить благодаря тому, что с соединениями общей формулы II

в которой HV представляет собой любую неорганическую либо органическую кислоту, отличную от малеиновой кислоты, по методам, известным специалисту в данной области техники, осуществляют анионный обмен с малеиновой кислотой и/или малеатами. Примерами кислот общей формулы HV являются хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота или метансульфокислота. Примеры соединений общей формулы II представлены соединениями формул IIa и llb


в которых HV в общей формуле II представляет собой хлористый водород, соответственно уксусную кислоту. Исходные соединения общей формулы II могут быть получены по методике, описанной в заявках PCT/EP94/03491 и PCT/EP96/01572 (публикация WO 96/33976), например, для гидрохлорида (соль с хлористым водородом) или для соли с уксусной кислотой. Касательно этого аспекта содержание заявок PCT/EP94/03491 и PCT/EP96/01572 в полном объеме является составной частью настоящей заявки. В качестве малеатов при анионном обмене могут использоваться, например, натриевые, литиевые, калиевые и аммониевые соли малеиновой кислоты либо соли малеиновой кислоты с органическими катионами аммония. Предпочтительно применяют малеиновую кислоту.

Для обмена анионов можно хроматографировать, например, раствор соединений общей формулы II с помощью ионообменника с малеиновой кислотой. Пригодными для этой цели растворителями являются, например, вода, спирты, такие как метанол, этанол, бутанол или изопропанол, а также смеси этих растворителей, в частности водно-спиртовые смеси. Возможно также использование коммерчески доступных анионообменных материалов, которые по обычной методике переводят сначала в форму малеиновой кислоты или, соответственно, при повторном использовании восстанавливают до этой формы. Анионный обмен осуществляют обычно при температурах в интервале от -10 до 40^oC, прежде всего от -5 до 30^oC, предпочтительно от 0 до 25^oC. Из элюата ионообменной хроматографии требуемый продукт можно затем - при необходимости после концентрирования - кристаллизовать, например, путем охлаждения и/или осаждения, и выделять путем фильтрации или центрифугирования.

Для проведения анионного обмена можно также, например, объединять соединения общей формулы II в растворителе с малеиновой кислотой и/или малеатами. Под растворителями при этом подразумеваются также смеси двух или более растворителей. Пригодными для этих целей являются, например, вода, спирты, в частности таковые с 1-8 C-атомами, прежде всего таковые с 1-6 C-атомами, предпочтительно таковые с 1-4 C-атомами, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, моно- и диметиловый эфир этиленгликоля и диэтиленгликоля, кетоны, такие как ацетон или бутанон, нитрилы, такие как ацетонитрил, диметилформамид, диметилсульфоксид, а также смеси таких растворителей, например смеси из воды и спиртов. В качестве спиртов могут использоваться среди прочих метанол, этанол, изо- и н-пропанол, н-, изо-, втор- и трет-бутанол, н-, изо-, втор- и трет-пентанол, н-гексанол, 2- этилбутанол, 2-этилгексанол, изооктиловый спирт, циклопентанол, метилциклогексанол (смесь) или бензиловый спирт.

Молярное соотношение соединение общей формулы II : малеиновая кислота, соответственно малеат составляет при таком проведении процесса обычно 1:1 -1:10, предпочтительно 1:1 - 1:2, наиболее предпочтительно приблизительно 1: 1. При этом можно сначала предварительно загружать соединения общей формулы II, а затем добавлять малеиновую кислоту, соответственно малеаты либо смеси из малеиновой кислоты и малеатов или можно работать в обратной последовательности, но возможна также одновременная загрузка обоих компонентов в реакционный сосуд. Компоненты могут объединяться в виде растворов, однако в зависимости от типа осуществления анионного обмена может оказаться целесообразным один из компонентов предварительно загружать в виде суспензии и/или добавлять другой компонент в виде суспензии или твердого вещества. Анионный обмен осуществляют обычно в диапазоне температур от -10 до 40^oC, прежде всего от -5 до 30^oC, предпочтительно от 0 до 25^oC.

Для выделения полученной соли малеиновой кислоты - при необходимости после концентрирования - последнюю можно кристаллизовать, например, путем охлаждения и/или осаждения и отделять путем фильтрации либо центрифугирования. В зависимости от соответствующих требований полученный продукт можно затем дополнительно промывать и при необходимости подвергать дальнейшей очистке, например, путем перекристаллизации или выщелачивания.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления способа получения солей малеиновой кислоты общей формулы I согласно изобретению в качестве исходных соединений применяют соли уксусной кислоты формулы IIb. Особенно предпочтительно при этом объединять эти соли в растворителе с малеиновой кислотой.

Применяемые при анионном обмене соединения общей формулы II в одном из предпочтительных вариантов осуществления способа могут быть получены следующим путем.

Соединения общей формулы III

получение которых может осуществляться согласно данным в заявках PCT/EP94/03491 и PCT/EP96/01572, в присутствии водосвязующих агентов, таких, например, как дициклогексилкарбодиимид (ДЦК), тетрафторборат O-((циан (этоксикарбонил)метилен)амино) -N, N, N', N' - тетраметилурония (ТОТУ) или ангидрид пропилфосфоновой кислоты (АПФК), в обычных для таких реакций условиях могут подвергаться реакции сочетания с соединениями общей формулы IV

получение которых может осуществляться по описанным в литературе методам (см. , например, Е. Juaristi, D. Quintana, J. Escalante, Aldrichimica Acta, том 27, N 1, 1994, -стр. 3-11; D.C. Cole, Tetrahedron, том 50, 1994, стр. 9517-9582), с получением в результате соединений общей формулы V

При этом в соединениях общих формул III, IV и V у хиральных центров в имидазолидиновом кольце и в пропионовокислотном фрагменте может быть представлена соответственно (R)-конфигурация либо (S)-конфигурация. Соединения общих формул III и IV могут применяться в виде чистых стереоизомеров (энантиомеров) или в виде смесей стереоизомеров, т.е., например, в рацемической форме или в оптически активной форме.

Соединения общей формулы V, например, по обычным методам, используемым для перевода нитрилов в амидоксимы, в соответствующем растворителе, например в спирте, таком как метанол или этанол, с помощью гидроксиламина, соответственно гидроксиламмониевой соли и основания, например третичного амина или гидроксида, карбоната либо гидрокарбоната щелочного металла, могут переводиться в соединения общей формулы VI

которые затем восстановлением в обычных условиях, например, путем гидрирования водородом в присутствии металлических катализаторов, и за счет добавления кислоты общей формулы HV, прежде всего путем гидрирования в присутствии кислоты общей формулы HV, могут быть переведены в соединения общей формулы II. В качестве катализаторов при гидрировании, которое может проводиться при атмосферном давлении или предпочтительно при повышенном давлении, могут использоваться среди прочих катализаторы на основе благородных металлов, такие как палладий на угле. При этом для получения соединений формулы IIb по более предпочтительной методике гидрирование можно проводить, например, в соответствующем растворителе в присутствии уксусной кислоты или же в самой уксусной кислоте, служащей растворителем.

Фармакологические свойства соединений общей формулы I не зависят от того факта, что речь идет о малеиновой кислоте. Так же, как и, например, соответствующие гидрохлориды, предлагаемые согласно изобретению соединения общей формулы I обладают способностью ингибировать межклеточную адгезию, обусловленную взаимодействием Arg-Gly-Asp-содержащих белков, таких как фибронектин, фибриноген, или фактора фон Виллебранда с так называемыми интегринами. Интегрины представляют собой трансмембранные гликопротеиды, рецепторы Arg-Gly-Asp-содержащих межклеточных белков (см. Е. Ruoslahti и M.D. Pierschbacher, Science 238 (1987) 491-497; D.R. Phillips, I.F. Charo, L.V. Parise и L. A. Fitzgerald, Blood 71 (1988) 831-843). Кроме того, они ингибируют связывание других адгезивных белков, таких как витронектин, коллаген и ламинин, с соответствующими рецепторами на поверхности клеток различных типов. Прежде всего соединения общей формулы I согласно изобретению подавляют агрегацию тромбоцитов и пригодны для предотвращения тромбозов. Соединения общей формулы I ингибируют также метастазирование раковых клеток. Предметом настоящего изобретения в соответствии с этим является также применение соединений общей формулы I и/или их физиологически приемлемых солей для этих целей, а также их применение для приготовления лекарственных средств, предназначенных для подавления агрегации тромбоцитов, для предотвращения тромбозов или для ингибирования метастазирования раковых клеток.

Соединения общей формулы I и их физиологически приемлемые соли могут вводиться животным, предпочтительно млекопитающим, и прежде всего человеку в качестве лекарственных средств индивидуально, в смесях друг с другом либо в виде фармацевтических композиций, которые пригодны для энтерального или парентерального применения и которые содержат в качестве активного ингредиента эффективную дозу по крайней мере одного соединения общей формулы I либо одной из его физиологически приемлемых солей наряду с обычными, фармацевтически безупречными наполнителями и добавками. Предметом настоящего изобретения в соответствии с этим являются также соединения общей формулы I и их физиологически приемлемые соли, предназначенные для применения в качестве лекарственных средств, а также фармацевтические композиции, содержащие в качестве активной субстанции одно или несколько соединений общей формулы I и/или одну или несколько из их физиологически приемлемых солей наряду с фармацевтически приемлемыми наполнителями и добавками и необязательно еще одно или несколько других фармакологически активных веществ. Такие фармацевтические композиции содержат обычно в своем составе от 0,5 до 90 мас.% соединений общей формулы I или их физиологически приемлемых солей.

Лекарственные средства могут вводиться оральным путем, например, в виде пилюль, таблеток, таблеток с пленочным покрытием, драже, гранул, твердожелатиновых и мягкожелатиновых капсул, растворов, сиропов, эмульсий или суспензий. Введение можно проводить также ректально, например, в виде суппозиториев, или парентерально, например, в виде растворов для инъекций, инфузионных растворов, микрокапсул или палочек, чрескожно, например, в виде мазей или настоек, или каким-либо другим путем, например, в виде носовых аэрозолей или аэрозольных смесей.

Приготовление фармацевтических композиций осуществляют по известной методике, используя при этом фармацевтически инертные неорганические и/или органические наполнители и добавки, из которых затем совместно с действующими веществами получают требуемую, готовую для применения форму. Для изготовления пилюль, таблеток, драже и твердожелатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее производные и т.п. В качестве наполнителей для мягкожелатиновых капсул и суппозиториев служат, например, жиры, воски, полутвердые и жидкие многоатомные спирты, природные или отвержденные масла и т.д. В качестве наполнителей для приготовления растворов и сиропов пригодны, например, вода, сахароза, инвертный сахар, спирты, растительные масла и т.д. В качестве наполнителей для микрокапсул, имплантатов или палочек пригодны сополимеры состава гликолевая кислота-молочная кислота.

Состав фармацевтических композиций наряду с действующими субстанциями и носителями может включать также добавки других веществ, как, например, наполнители, вещества, способствующие дезинтеграции, связующие, мягчители, смачиватели, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, сладкие вещества, красители, корригенты вкуса либо ароматизаторы, загустители, разбавители, буферные субстанции, кроме того, растворители либо агенты растворения или средства, способствующие достижению эффекта депо, а также соли для изменения осмотического давления, средства для покрытия или антиоксиданты. Они могут содержать также два или несколько соединений общей формулы I и/или их физиологически приемлемые соли и дополнительно одно или несколько других терапевтически эффективных веществ.

Примерами таких терапевтически эффективных субстанций являются среди прочих средства, способствующие кровоснабжению, такие как дигидроэргокристин, ницерголин, никотиновая кислота и ее эфиры, бенциклан, нафтгидрофурил, производные простациклина, PGE₁-производные, антиангенозные соединения, такие, как изосорбиддинитрат, изосорбидмононитрат, глицеролнитрат молзидомин, нифедипин и верапамил; -блокаторы, такие как пропанолол, окспренолол, атенолол, метопролол и пенбутолол. Кроме того, соединения по изобретению могут применяться в сочетании с АСЕ- ингибиторами (ингибиторы ангиотензин-конвертирующего фермента), такими как каптоприл, рамиприл, эналаприл, лизиноприл и трандолаприл, с ингибиторами функции тромбоцитов, такими как ацетилсалициловая кислота, тиклопидин и клопидогрел, и с антикоагулянтами, такими как гепарин и низкомолекулярные гепарины.

Дозировка может варьироваться в широких пределах и зависит от индивидуальных особенностей пациента. Как правило, при оральном введении для достижения требуемого эффекта суточную дозу назначают в количествах от 0,1 до 5 мг/кг веса тела, предпочтительно от 0,3 до 3 мг/кг, прежде всего от 0,5 до 2 мг/кг. При внутривенном введении суточная доза составляет, как правило, от 0,01 до 0,6 мг/кг веса тела, предпочтительно от 0,05 до 0,3 мг/кг, прежде всего от 0,05 до 0,1 мг/кг. Суточную дозу прежде всего при назначении увеличенных количеств можно разделить на несколько приемов, например на 2, 3 или 4. При определенных условиях в зависимости от конкретного состояния пациента может оказаться необходимым суточную дозу назначать выше соответственно ниже указанных пределов. Фармацевтические композиции содержат обычно от 0,2 до 500 мг, предпочтительно от 1 до 200 мг, прежде всего от 10 до 100 мг активного вещества общей формулы I, соответственно его солей на дозу.

Предлагаемые согласно изобретению соединения могут применяться, например, для борьбы, соответственно для предупреждения заболеваний сердечно-сосудистой системы, заболеваний системы коронарных сосудов, сосудистой системы головного мозга, или же периферических артериальных заболеваний. Они могут находить применение при опасности острого тромбоза и для предупреждения хронического артериосклероза и тромбоза, например, при терапии и профилактике заболеваний артериальных сосудов, таких как острый инфаркт миокарда, профилактика вторичного инфаркта миокарда, профилактика реокклюзии после лизиса и дилатации (РТСА), неустойчивая стенокардия, кратковременные приступы ишемической болезни, инсульт, коронарное шунтирование, включая профилактику реокклюзии при шунтировании, эмболия легочной артерии, периферический облитерирующий эндартерит, расслаивающая аневризма; далее, при терапии заболеваний венозных и микроциркуляционных сосудов, как, например, при глубоком флеботромбозе, диссеминированном внутрисосудистом коагулировании, послеоперационной или послеродовой травмы, хирургическом или инфекционном шоке, септицемии или при заболеваниях, связанных с гиперчувствительностью тромбоцитов, при тромбоцитопенической тромбогемолитической пурпуре, преэклампсии, предменструальном синдроме или при диализе или экстракорпоральной циркуляции; еще одна возможность применения касается также операции по поводу рака или профилактики рака. Применение предлагаемых согласно изобретению соединений общей формулы I и/или их физиологически приемлемых солей при лечении или профилактике этих болезней также является предметом настоящего изобретения, равно как и их применение для изготовления лекарственных средств для лечения и профилактики указанных выше болезней. Предметом изобретения является прежде всего применение предлагаемых соединений для изготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения и предупреждения заболеваний системы коронарных сосудов или сосудистой системы головного мозга, периферических артериальных заболеваний или заболеваний венозных и микроциркуляционных сосудов, а также применение для изготовления лекарственных средств, используемых при диализе или экстракорпоральной циркуляции.

Соединения общей формулы I проходили экспериментальную проверку на их ингибирующую эффективность при агрегации тромбоцитов и адгезии фибриногена к тромбоцитам (при этом использовали гель-фильтрованные тромбоциты донорской крови человека, активированные АДФ [аденозин-5'- дифосфат] или тробмином), а также на их in vivo-эффективность при подавлении агрегации тромбоцитов и при ингибировании тромбоза.

Примеры
Все продукты идентифицировали с помощью масс-спектроскопии и ЯМР-спектров.

Пример 1
Гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2- ((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты

100 г Amberlite® IRA93 (свободное основание, фирма Fluka) перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре с 1000 мл 2 М раствора малеиновой кислоты. Затем раствор малеиновой кислоты отфильтровывали и ионообменник повторно дважды обрабатывали подобным образом 2 М раствором малеиновой кислоты. Затем ионообменную смолу промывали водой до нейтрального состояния. 1,51 г (3 ммоля) гидрохлорида этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты растворяли в 15 мл воды.

Раствор пропускали через колонку ионообменника с малеиновой кислотой, как описано выше, заполненную 80 мл Amberlite® IRA93 . Затем колонку элюировали водой. Далее собирали фракции по 25 мл каждая. Из фракций 2 и 3 при комнатной температуре выпадал в виде кристаллов чистый гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты. Кристаллы выделяли путем фильтрации.

Выход: 771 мг белого кристаллического твердого вещества (44%). Т_пл 228^oC. [α]_D =-54,4^o (с=1; метанол; 22^oC). МС (FAB): 466 (М+Н)⁺.

Рентгеноструктурный анализ кристаллизата подтвердил, что полученный продукт представляет собой гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-(аминоиминометил) фенил)-4- метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)ацетил-амино)-3- фенилпропионовой кислоты (с молярным соотношением этиловый эфир:малеиновая кислота 1: 1), который может быть представлен следующей ионной формулой, эквивалентной приведенной выше формуле.

Из маточных растворов фракций 2 и 3 и из фракций 4-12 сушкой вымораживанием водного раствора выделили еще 740 мг чистого гидромалеата этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты.

Общий выход: 1,511 г (87%).

Пример 2
Гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4- метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты
2a. Этиловый эфир (S)-3-(2-((S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты
7,7 кг (33,5 моля) гидрохлорида этилового эфира (S)-3-амино-3- фенилпропионовой кислоты предварительно загружали в котел и смешивали с раствором из 9,14 кг (33,5 моля) 2-((S)-4-(4- цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) уксусной кислоты в 50 л этилацетата. При внутренней температуре 20-23^oC насосом подавали 7,72 кг (8,54 л; 67 молей) N-этилморфолина. Смесь перемешивали в течение 15 мин, после чего при 20-23^oC через загрузочный шлюз одной порцией добавляли 11 кг (33,5 моля) тетрафторбората О-((циан (этоксикарбонил)метилен)амино)-N, N, N', N'-тетраметилурония (ТОТУ). Перемешивание продолжали в течение 2 ч при температуре 20-23^oC, после чего добавляли 50 л воды и смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре 20-23^oC. Далее добавляли 50 л метил-трет-бутилового эфира, после чего смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре 8-12^oC. Белую суспензию перемещали в центрифугу и центрифугировали. Осадок на фильтре промывали сначала 28 л воды, затем 28 л этанола и в завершение повторно 56 л воды. Продукт сушили в вакуумно-сушильном шкафу при 40^oC в потоке азота.

Выход: 9,84 кг (85%). МС (FAB): 449 (М+Н)⁺.

2б. Этиловый эфир (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминогидроксииминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты
120 л этанола загружали предварительно в котел. При комнатной температуре в котел при перемешивании добавляли 12 кг (26,786 ммолей) этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты. 3атем добавляли 3,74 кг (53,813 моля) гидрохлорида гидроксиламина и 5,44 кг (7,45 л; 53,86 моля) триэтиламина. Реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 2 ч при 80^oC. При температуре бани 50^oC отгоняли под вакуумом 90 л этанола. Остаток растворяли в 220 л этилацетата и трижды экстрагировали порциями по 50 л воды соответственно. Этилацетатную фазу упаривали под вакуумом при температуре бани 50^oC до объема 30 л. Затем смешивали четыре раза с порциями по 10 л толуола соответственно и упаривали досуха.

Выход: 11,1 кг (85%). МС (FAB): 482 (М+Н)⁺.

2в. Уксуснокислая соль этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил) фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетил-амино)-3-фенилпропионовой кислоты
11 кг (22,869 моля) этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-(аминогидроксииминометил)фенил) -4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3- фенилпропионовой кислоты растворяли в 70 л уксусного эфира и помещали в автоклав объемом 125 л. К этому раствору добавляли суспензию из 1,0 кг палладия на угле (10%-ного; 50% воды) и 5 л уксусного эфира. Затем гидрировали в течение 15 ч при 50^oC и давлении водорода 10 бар. Катализатор отфильтровывали на нутче, работающем под давлением, в атмосфере азота и промывали 5 л уксусного эфира. Фильтрат полностью упаривали при температуре бани 60^oC под вакуумом с помощью ротационного испарителя. Остаток растворяли в 30 л ацетона и раствор в течение 30 мин при 20^oC добавляли к 200 л метил-трет-бутилового эфира. Затем в течение 1 ч перемешивали при комнатной температуре и выпавший в осадок продукт центрифугировали. Осадок на фильтре промывали 10 л метил-трет-бутилового эфира, выгружали и сушили под вакуумом. Таким путем получили 10,1 кг (85%) продукта. МС (FAB): 466 (М+Н)⁺.

Для очистки в котел предварительно загружали 90 л ацетона и добавляли 10,1 кг указанного выше продукта. Затем нагревали до 50^oC и перемешивали в течение 1 ч. При температуре рубашки 20^oC продолжали перемешивание в течение ночи, после чего твердое вещество выделяли с помощью центрифуги. Затем промывали 10 л ацетона. Влажный от промывки ацетоном продукт тщательно перемешивали с 50 л ацетона и нагревали до температуры дефлегмации (57^oC), перемешивая в течение 1 ч. Затем при перемешивании оставляли на 24 ч остывать, перемешивали в течение 1 ч при 15^oC, после чего продукт выделяли с помощью центрифуги. Осадок на фильтре промывали 10 л метил-трет-бутилового эфира, выгружали и сушили под вакуумом при давлении 0,1 бара и температуре 40^oC. Затем продукт размалывали.

Выход: 7,2 кг (60%). МС (FAB): 466 (М+Н)⁺.

2г. Гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2- ((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин- 1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты
75,68 г (144 ммоля) уксуснокислой соли этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1 - ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты растворяли в 340 мл воды. Раствор фильтровали и при перемешивании смешивали с раствором из 16,87 г (144 ммоля) малеиновой кислоты (99%-ной) в 48 мл воды. Перемешивание продолжали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего оставляли в течение ночи в ледяной бане. Продукт выпадал из раствора в виде кристаллического твердого вещества. Затем отфильтровывали и сушили под высоким вакуумом над пятиокисью фосфора.

Выход: 80,7 г белого кристаллического твердого вещества (96%). Т_пл 228^oC. [α] =-54,4^o (с=1; метанол; 22^oC). МС (FAB): 466 (М+Н)⁺.

Получение исходных соединений, используемых на стадии 2а
I. Гидрохлорид этилового эфира (S)-3-амино-3- фенилпропионовой кислоты
Iа. (R)-2-амино-2-фенилэтанол
20 г (920 ммолей) борогидрида лития растворяли в 420 мл абсолютного тетрагидрофурана. Затем при перемешивании добавляли по каплям 233,5 мл (1,84 моля) триметилхлорсилана, после чего в течение 4 ч порциями добавляли 69,5 г (0,46 моля) (R)-фенилглицина. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляли 690 мл метанола, перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли при перемешивании в 690 мл 20%-ного водного раствора гидроксида калия. Водную фазу трижды экстрагировали этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные органические фазы промывали водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом.

Выход: 41,2 г (65,3%). МС (FAB): 138 (М+Н)⁺.

Iб. (R)-2-бензилоксикарбониламино-2-фенилэтанол
40,5 г (295 молей) (R)-2-амино-2-фенилэтанола растворяли в 385 мл абсолютного диметилформамида. При перемешивании при 0^oC добавляли 73,5 г N-(бензилоксикарбонилокси)сукцинимида (295 ммолей) и перемешивали в течение 1 ч при 0^oC. Затем ледяную баню удаляли и смесь оставляли стоять в течение 48 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор концентрировали под вакуумом, после чего остаток растворяли в 500 мл этилового эфира уксусной кислоты. Органическую фазу дважды промывали 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и один раз водой. Затем сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Полученный кристаллический сырой продукт (82,3 г) повторно растворяли в этиловом эфире уксусной кислоты. Органическую фазу дважды промывали 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и один раз водой. Затем перекристаллизовывали из этиловый эфир/петролейного эфира.

Выход: 74,6 г (93,3%). МС (FAB): 272 (М+Н)⁺.

Iв. ((R)-2-бензилоксикарбониламино-2- фенилэтил)-4-метилфенилсульфонат
53,9 г (К)-2- бензилоксикарбониламино-2-фенилэтанола (198,7 ммолей) растворяли в смеси из 500 мл метиленхлорида и 80,3 мл (993,5 ммоля) пиридина. При перемешивании при 0^oC добавляли 45,5 г (238,4 ммолей) тозилхлорида в 240 мл метиленхлорида и оставляли для перемешивания в течение 7 ч при комнатной температуре. Затем добавляли еще 11,36 г (59,61 ммолей) тозилхлорида, после чего оставляли для перемешивания в течение 5 ч при 0^oC. Затем смесь оставляли стоять в течение ночи при комнатной температуре, после чего концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этиловом эфире уксусной кислоты. Органическую фазу трижды промывали 10%-ным раствором лимонной кислоты и дважды водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Остаток растирали с диэтиловым эфиром, отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили над пятиокисью фосфора.

Выход: 60,9 г (72%). Маточный раствор концентрировали, растворяли в н-гептан/этиловом эфире уксусной кислоты (6:4) и хроматографировали с помощью силикагеля. Выход: 3,5 г (4,2%).

Общий выход: 64,4 г (76,2%). МС (FAB): 426 (М+Н)⁺.

Iг. (S) -3-бензилоксикарбониламино-3-фенилпропионитрил
60,5 г ((R)-2-бензилоксикарбониламино-2-фенилэтил)-4-метилфенил- сульфоната (142,2 ммоля) растворяли в 675 мл диметилформамида. 3атем добавляли 13,9 г цианида калия (213,3 ммолей), 5,64 г 18- краун-6 (21,33 ммоля) и 520 мг иодида калия (3,13 ммоля) и перемешивали в течение 20 ч при 50^oC. Реакционный раствор сливали в 500 мл ледяной воды, после чего перемешивали в течение 5 ч при 0^oC. Затем отфильтровывали и осадок растворяли в этиловом эфире уксусной кислоты. Органическую фазу трижды промывали водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Остаток растирали с диэтиловым эфиром, отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили над пятиокисью фосфора.

Выход: 25,3 г (63,5%). МС (FAB): 281 (М+Н)⁺.

Iд. Этиловый эфир (S)-3-бензилоксикарбониламино-3- фенилпропионовой кислоты
15 г (S)-3-бензилоксикарбониламино-3- фенилпропионитрила (53,51 ммоля) суспендировали в смеси из 110 мл абсолютного этанола и 30 мл диоксана. При перемешивании и охлаждении при 10-15^oC вводили HCl-газ. Через некоторое время образовался прозрачный раствор. При охлаждении продолжали подачу HCl-газа, пока тонкослойная хроматограмма не показала полный расход исходного материала. Затем через реакционный раствор в течение 15 мин пропускали поток азота, после чего концентрировали под вакуумом. Остаток смешивали с водой до появления мутности. Далее перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, после чего водную фазу трижды экстрагировали этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные органические фазы промывали водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этиловый эфир уксусной кислоты/петролейном эфире (1:1) и хроматографировали с помощью силикагеля.

Выход: 10,55 г (60%). МС (FAB): 328 (М+Н)⁺.

Iе. Гидрохлорид этилового эфира (S)-3-амино- 3-фенилпропионовой кислоты
10,29 г этилового эфира (S)- бензилоксикарбониламино-3-фенилпропионовой кислоты (31,44 ммоля) растворяли в 125 мл этанола и с помощью автобюретки при одновременном добавлении раствора 2H HCl в этаноле при pH 4 осуществляли каталитическое гидрирование с использованием палладия на активированном угле. Катализатор отфильтровывали через силикагель и фильтрат концентрировали. Остаток растирали с диэтиловым эфиром, отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили над пятиокисью фосфора.

Выход: 5,05 г (70%). МС (FAB): 194 (М+Н)⁺.

II. 2-((S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил) уксусная кислота
IIа. (R,S)-4-(4- бромфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин
49,8 г (0,25 моля) 4- бромацетофенона, 21,2 г (0,325 моля) цианида калия и 211,4 г (2,2 моля) карбоната аммония суспендировали в 1,0 л водного раствора этанола (0,5 л дистиллированной воды и 0,5 л этанола). Суспензию перемешивали при 60^oC, пока тонкослойная хроматограмма не показала полный расход исходного материала (по истечении 8 ч). Затем давали остыть до комнатной температуры. Значение pH раствора с помощью полуконцентрированной соляной кислоты устанавливали равным 6,3. Продукт выпадал в виде белого осадка. Состав оставляли стоять в течение ночи при 4^oC. Белый осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили под вакуумом над пятиокисью фосфора.

Выход: 65,3 г белого твердого вещества (97%). МС (FAB): 269 (М+Н)⁺.

IIб. (R,S)-2-амино-2-(4-бромфенил)пропионовая кислота
5,3 г (20 ммолей) (R,S)-4-(4-бромфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидина суспендировали в 50 мл 3 H едкого натра. Суспензию нагревали в автоклаве в течение 1 ч при 145^oC при избыточном давлении азота 10 бар.

Охлажденный реакционный раствор разбавляли 150 мл воды и при интенсивном перемешивании с уксусной кислотой при охлаждении льдом устанавливали значение pH, равное 4. Затем перемешивали при 0^oC в течение 2 ч. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили под вакуумом над пятиокисью фосфора.

Выход: 3,65 г белого твердого вещества (75%). МС (FAB): 244 (М+H)⁺.

IIв. Этиловый эфир (R,S)-2-амино-2-(4-бромфенил)пропионовой кислоты
27,3 г (112,3 ммолей) (R,S)-2-амино-2-(4-бромфенил)пропионовой кислоты суспендировали в 150 мл 9,8 H раствора хлористого водорода в этаноле. Суспензию нагревали в течение 18 ч с обратным холодильником, повторно добавляли 50 мл 9,8 H раствора хлористого водорода в этаноле и продолжали нагрев с обратным холодильником еще в течение 5 ч. Затем раствор концентрировали и остаток распределяли между этиловым эфиром уксусной кислоты и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывали водой и сушили над сульфатом натрия. Сырой продукт (23,22 г) перегоняли с целью очистки под вакуумом (температура кипения 129-130^oC при давлении 2 торра).

Выход: 20,7 г (68%). МС (FAB): 272 (М+Н)⁺.

IIг. Этиловый эфир (S)-2-амино-2-(4-бромфенил)пропионовой кислоты
44,3 г (163 ммоля) этилового эфира (R,S)-2-амино-2-(4- бромфенил)пропионовой кислоты и 24,8 г (D)-(-)миндальной кислоты (163 ммоля) растворяли в 138 мл изопропанола при комнатной температуре. Затем добавляли 414 мл диизопропилового эфира и охлаждали в течение ночи при 0^oC. Выпавший осадок отфильтровывали. Полученную соль еще дважды перекристаллизовывали аналогичным образом. Таким путем получили 20 г соли в форме чистого энантиомера =-14^o (с = 1; 2,15 H раствор хлористого водорода в этаноле; 22^oC). Соль распределяли между этиловым эфиром уксусной кислоты и водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Степень чистоты энантиомера, которую определяли после дериватизации с помощью хлорида (R)-(-) -- метокси-α-(трифторметил) фенилуксусной кислоты (реагент Мошера) посредством ЖХВД, составляла более 99%.

Выход: 12,5 г (28%).

[α] = +52,7^o (c=1; 2,15 H раствор хлористого водорода в этаноле; 22^oC). МС (FAB): 272 (М+Н)⁺.

IIд. N-((S)-1-(4-бромфенил)-1- (этоксикарбонил)этил)-N'-(этоксикарбонилметил) мочевина
12,4 г (45,6 ммолей) этилового эфира (S)-2-амино-2-(4-бромфенил) пропионовой кислоты растворяли в 70 мл метиленхлорида. Затем при 0^oC в течение 15 мин по каплям добавляли раствор из 5,11 мл (45,6 ммолей) этилового эфира изоцианатуксусной кислоты в 35 мл метиленхлорида. В течение 2 ч перемешивали при 0^oC, после чего концентрировали.

Выход: 18,1 г (99%).

=+10,7^o (c=1; 2,15 H раствор хлористого водорода в этаноле; 22^oC). МС (FAB): 401 (М+Н)⁺.

IIе. 2-((S)-4-(4-бромфенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил) уксусная кислота
18 г (44,9 ммоля) N- ((S)-1-(4-бромфенил)-1-(этоксикарбонил)этил)-N'- (этоксикарбонилметил) мочевины смешивали с 180 мл 6 H раствора хлористого водорода. Далее реакционную смесь в течение 10 ч нагревали с обратным холодильником до кипения. Затем давали остыть до 0^oC и выпавший в осадок продукт отфильтровывали, после чего его промывали водой и сушили под вакуумом над пятиокисью фосфора.

Выход: 11,4 г (78%).

= +32,8^o (c=1; 2,15 H раствор хлористого водорода в этаноле; 22^oC). МС (FAB): 327 (М+Н)⁺.

IIж. 2-((S)-4-(4-цианфенил) - 4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) уксусная кислота
11,75 г (35,9 ммолей) 2-((S)-4-(4-бромфенил)-4-метил-2,5- диоксоимидазолидин-1-ил) уксусной кислоты растворяли в 90 мл диметилформамида. Затем добавляли 14,15 г (158 ммолей) цианида меди (1) и при перемешивании нагревали в течение 20 ч с обратным холодильником.

Реакционную смесь охлаждали, после чего сливали в 300 мл воды. Водную фазу подкисляли концентрированной соляной кислотой (pH= 1-1,5), перемешивали в течение 30 мин и отфильтровывали через фильтрующие пластины Зейтца. Водную фазу трижды экстрагировали этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные органические фазы промывали водой, сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом.

Выход: 9,3 г (95%).

=+33,4^o (с=1; 2,15 H раствор хлористого водорода в этаноле; 22^oC). МС (FAB): 274 (М+Н)⁺.

Пример 3
Определение сорбции паров воды
Определение водопоглощения субстанцией осуществляли с помощью автоматических двухплечных микровесов, задействуемых в вакууме, соответственно в атмосфере, имеющей определенный состав, соответственно определенное давление. На одной стороне весов находится сухая проба, на другой тарирующий вес. В весовой камере создавали атмосферу, насыщенную водяными парами, давление которых повышали ступенчатым путем. Увеличение веса пробы регистрировали в зависимости от давления водяных паров. Измерения проводили при постоянной температуре 25^oC.

В весовой камере сначала создавали вакуум до постоянства веса и определяли исходный вес пробы. Затем в вакуумированную весовую камеру через впускной клапан подавали определенное количество водяного пара. В описанном ниже опыте установленное на этой первой ступени давление водяного пара при температуре 25^oC соответствовало относительной влажности воздуха 4,7%. Когда после подачи водяного пара снова было достигнуто постоянство веса, т.е. когда проба находилась в состоянии равновесия с атмосферой водяного пара, регистрировали увеличение веса пробы. Затем за счет дальнейшей подачи водяного пара, которую осуществляли ступенчатым путем, повышали давление водяного пара (каждый показатель давления водяного пара соответствует при этом определенной относительной влажности воздуха при температуре 25^oC). На каждой ступени после достижения постоянства веса регистрировали увеличение веса пробы. При исследовании гидромалеата этилового эфира (S)-3-(2- ((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5 - диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты наблюдали следующее поэтапное увеличение веса пробы по отношению к ее исходному весу (см. табл. 1 в конце описания).

Результаты показывают, что даже при относительной влажности воздуха порядка 80% имеет место лишь незначительное увеличение веса (приблизительно 0,5%) гидромалеата этилового эфира (S)-3-(2- ((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил -2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты, что, следовательно, свидетельствует о негигроскопичности субстанции.

Пример 4
Фармакологические исследования на модели "Циклические колебания коронарного кровотока на собаке" (модель нестабильной стенокардии)
Собак, особей обоих полов весом 20-35 кг, наркотизировали, подключали к аппарату искусственного дыхания и готовили для определения параметров гемодинамики (периферического кровяного давления, давления в левом желудочке, сократимости сердечной мышцы, частоты сердечных сокращений) и для записи ЭКГ. Газы крови и гематокрит поддерживали постоянными введением электролитов. После вскрытия левой грудной полости обнажали сердце. Ramus circumflexus sin. коронарной артерии оснащали электромагнитной проточной измерительной головкой для определения среднего коронарного кровообращения. Дистально относительно этой измерительной головки Ramus circumflexus кратковременно зажимали клеммой для повреждения эндотелия сосудов. На поврежденном участке с помощью небольшого пластмассового цилиндра (внутренний диаметр в зависимости от величины сосудов составлял 1,0-1,7 мм, длина 4 мм) создавали концентрическое сжатие. Такая мера способствует подавлению реактивной гиперемии вследствие 10-секундной окклюзии Ramus circumflexus и приводит к появлению циклических колебаний кровообращения (приблизительно 10 в час), что обусловлено повторным образованием богатых тромбоцитами тромбов в области стеноза. По истечении 60 мин после первого проявления регулярных колебаний кровотока испытуемые субстанции вводили внутривенно либо внутридуоденально в виде болюса. Затем циклические колебания кровообращения наблюдали по крайней мере в течение 2-5 часов. Указанное в процентном выражении подавление циклических колебаний кровообращения в тромботических коронарных сосудах определяли на 5-8 подопытных животных путем сравнения среднего числа колебаний кровообращения в час до и после введения испытуемых субстанций. У наблюдавшихся животных число циклических колебаний кровообращения в час оставалось на протяжении нескольких часов постоянным (литература: Folts J.D. и др. (1976), Circulation 54: 365-370; Just М. и др. (1989), Journ. Cardiovasc. Pharmacol. 14 (Suppl. 11): стр.129-136).

При исследовании гидромалеата этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4- (аминоиминометил) фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1- ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты были получены следующие результаты. Ниже указано в процентном выражении снижение числа индуцированных стенозом циклических колебаний коронарного кровотока в час по истечении первого, второго и третьего часа после введения субстанции по сравнению с периодом времени до введения последней. Дозировка указана в мг на кг веса тела (см. табл. 2 в конце описания).

Полученные в этом опыте in vivo результаты подтверждают высокую антитромботическую активность испытуемой субстанции, прежде всего ее коронарную антитромботическую эффективность. Все выявленные в ходе экспериментальной проверки параметры гемодинамики не показали сколько-нибудь заметных изменений.

Пример 5
Фармакологические исследований на модели "Подавление ex vivo агрегации тромбоцитов на собаке"
Собакам, особям обоих полов (метисы лабрадора и хэрриера, вес 21-28 кг) в течение ночи не давали никакой пищи. Испытуемые субстанции вводили орально в виде желатиновых капсул или внутривенно. До введения испытуемых субстанций, а также несколько раз в течение 24 часов после введения брали 20 мл крови из Vena cephalica и антикоагулировали кислой цитратдекстрозой (объем 9+1). Центрифугированием получали богатую тромбоцитами плазму (БТП). Агрегацию тромбоцитов в БТП определяли после добавления АТФ (3-30 мкмолей/мл) или коллагена (0,3-10 мкг/мл) + эпинефрин (10 мкМ) при 37^oC с помощью агрегометра (BioData). Сравнение проводили по выраженной в процентах максимальной агрегации тромбоцитов до и после введения испытуемой субстанции. Ниже представлено в процентном выражении подавление агрегации тромбоцитов при самой низкой концентрации агониста, которая еще вызывала необратимую максимальную агрегацию. Далее, при заборе проб крови с внутренней стороны передней лапы животного, с которой предварительно удаляли волосяной покров, с помощью прибора Simplate® 1 измеряли продолжительность кожного кровотечения. На основании полученных данных рассчитывали в процентном выражении увеличение продолжительности кровотечения после введения испытуемой субстанции по сравнению с исходным показателем.

При исследовании гидромалеата этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-(аминоиминометил) фенил)-4-метил -2,5- диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты были получены следующие результаты. Ниже представлено в процентном выражении подавление агрегации тромбоцитов по истечении 1 ч, 4 ч, 8 ч и 24 ч после введения испытуемой субстанции.

Дозировка указана в мг на кг веса тела, n означает число подопытных животных (см. табл. 3).

Максимальные изменения продолжительности кровотечения составляли: увеличение продолжительности на 68% (р<0,05) через 4 ч после внутривенного введения дозы 0,5 мг/кг и соответственно на 122% (р<0,05) через 2 ч после орального введения дозы 2 мг/кг. При оральном введении более низких доз существенных изменений продолжительности кровотечения не наблюдалось. Результаты этого опыта подтверждают ярко выраженную эффективность испытуемой субстанции по сравнению с in vivo-ингибитором агрегации тромбоцитов.

Изобретение относится к соединениям формулы I, во всех стереоизомерных формах и их смесях в любых соотношениях, где НВ означает малеиновую кислоту, к способу получения соединений формулы I, который заключается в том, что с соединениями формулы II осуществляют анионный обмен с малеиновой кислотой и/или малеатами. Также изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующем действием на агрегацию тромбоцитов или подавляющим действием в отношении тромбозов, по этой причине соединения общей формулы I могут найти применение в качестве лекарственных средств для предупреждения заболеваний, связанных с сердечно-сосудистыми системами. 3 с. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Соли этилового эфира 3-(2-(4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты общей формулы I

где НВ означает малеиновую кислоту,
во всех стереоизомерных формах и их смесях в любых соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли. 2. Соединения общей формулы I по п.1, отличающиеся тем, что у хирального центра в имидазолидиновом кольце представлена (S)-конфигурация и у хирального центра в пропионовокислотном фрагменте представлена (S)-конфигурация, а также их физиологически приемлемые соли. 3. Соединение общей формулы I по п.1, представляющее собой гидромалеат этилового эфира (S)-3-(2-((S)-4-(4-(аминоиминометил)фенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)ацетиламино)-3-фенилпропионовой кислоты. 4. Соединения общей формулы I по пп.1 - 3 или их физиологически приемлемые соли, обладающие подавляющим действием на агрегацию тромбоцитов или профилактическим действием в отношении тромбозов. 5. Способ получения соединений общей формулы I по одному или нескольким пп.1 - 3, отличающийся тем, что с соединениями общей формулы II

в которой HV представляет собой любую неорганическую либо органическую кислоту, отличную от малеиновой кислоты,
осуществляют анионный обмен с малеиновой кислотой и/или малеатами. 6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для осуществления анионного обмена соединения общей формулы II хроматографируют с помощью ионообменника с малеиновой кислотой. 7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для осуществления анионного обмена соединения общей формулы II объединяют в растворителе с малеиновой кислотой или малеатами. 8. Способ по одному или нескольким пп.4 - 6, отличающийся тем, что анионный обмен осуществляют с солями уксусной кислоты формулы IIb

9. Способ по одному или нескольким пп.4 - 7, отличающийся тем, что для получения соединений общей формулы II соединения общей формулы III

и соединения общей формулы IV

подвергают реакции сочетания с получением соединений общей формулы V

которые с помощью гидроксиламина переводят в соединения общей формулы VI

которые путем гидрирования и добавления кислоты общей формулы HV переводят в соединения общей формулы II предпочтительно путем гидрирования в присутствии уксусной кислоты в соединения формулы IIb. 10. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием на агрегацию тромбоцитов или подавляющим действием в отношении тромбозов, содержащая соединение общей формулы I или его физиологически приемлемую соль, совместно с фармацевтически приемлемыми наполнителями и добавками.