ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ Российский патент 2004 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для бактериологической диагностики сальмонеллезов.

В настоящее время для данного целевого назначения используется висмутсульфит агар - питательная среда, предназначенная для выделения сальмонелл из инфицированного материала [1].

К недостаткам данной среды следует отнести слабые ингибирующие свойства, особенно в отношении бактерий рода Proteus. Последние, так же как и сальмонеллы, формируют на среде колонии черного цвета, тем самым с трудом дифференцируются от основного возбудителя.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению является селективная среда для выделения сальмонелл, содержащая пептон ферментативный с заданным содержанием аминного азота в качестве источника азотистого питания, стимулятор роста - экстракт кормовых дрожжей, лактозу, сахарозу, феноловый красный, бриллиантовый зеленый, агар микробиологический [2].

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что она обладает недостаточно высокими ингибирующими свойствами. На среде не ингибируются бактерии рода Proteus, грамположительные кокки ингибируются частично.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания она содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве стимулятора роста - экстракт кормовых дрожжей, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - бриллиантовый зеленый, а также хлорид натрия, лактозу, сахарозу, феноловый красный, агар, в качестве буферной соли дополнительно содержит трис(гидрооксиметил) аминометан, при следующем соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбы 6,6-6,8

Экстракт кормовых дрожжей 0,9-1,1

Хлорид натрия 3,2-3,4

Лактоза 9,9-10,1

Сахароза 9,9-10,1

Трис(гидрооксиметил)аминометан 0,09-0,11

Бриллиантовый зеленый 0,0124-0,0126

Феноловый красный 0,075-0,085

Агар микробиологический 9,9-10,1

Вода дистиллированная До 1 л

Сбалансированный состав питательной среды и концентрация бриллиантового зеленого в среде полностью подавляют рост сопутствующей микрофлоры (сальмонеллы тифи, грамположительные кокки, протей). Частично ингибируется кишечная палочка, клебсиеллы.

Среда обладает четкими дифференцирующими свойствами - колонии сальмонелл красного цвета, лактозо- и сахарозоположительные энтеробактерии желтого цвета. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО “Питательные среды” [3].

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбу с 0,6 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, взятые в количестве, г: панкреатический гидролизат рыбы - 6,6, экстракт кормовых дрожжей - 0,9, хлорид натрия - 3,2, лактоза - 9,9, сахароза - 9,9, трис(гидрооксиметил) аминометан - 0,09, бриллиантовый зеленый - 0,0124, феноловый красный - 0,075, агар микробиологический - 9,9. Навески сухих ингредиентов тщательно размешивают, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 литра, полученную суспензию доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара. рН среды 6,9±0,2, что соответствует минимальной концентрации ингредиентов. Среду охлаждают до температуры 45-50°С и разливают в стерильные чашки Петри слоем 4,0-5,0 мм и оставляют для застывания. Перед посевом чашки со средой подсушивают в течение 40-60 мин при температуре 37°С в термостате. Посев материала производят в соответствии с Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями (М., 1984). Учет результатов производят через 18-24 часа инкубации.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют, г: панкреатический гидролизат рыбы - 6,7, экстракт кормовых дрожжей - 1,0, хлорид натрия - 3,3, лактозу - 10,0, сахарозу - 10,0, трис(гидрооксиметил)аминометан - 0,1, бриллиантовый зеленый - 0,0125, феноловый красный - 0,08, агар микробиологический - 10,0. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 литра, рН среды 6,9±0,2, что соответствует оптимальной концентрации ингредиентов.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют, г: панкреатический гидролизат рыбы - 6,8, экстракт кормовых дрожжей - 1,1, хлорид натрия - 3,4, лактозу - 10,1, сахарозу - 10,1, трис(гидрооксиметил)аминометан - 0,11, бриллиантовый зеленый - 0,0126, феноловый красный - 0,085, агар микробиологический - 10,1. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 литра, рН среды 6,9±0,2, что соответствует максимальной концентрации ингредиентов.

Биологические показатели предлагаемой и прототипной сред для селективного выделения сальмонелл представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом - Brilliant Green Agar).

На контрольной среде степень ингибиции грамположительных кокков, протея ниже, чем на предлагаемой среде.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных гостированных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа.

Источники информации

1. ФС 42-3588-98 Питательная среда для выделения сальмонелл, сухая (висмут сульфит агар).

2. BGLSA (USP) Brilliant-green Phenol-red Lactose Sucrose Agar. Microbiology Manual Merk,1990, p.57-58.

3. ФС 42-224 ВС-88 Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к клинической микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики сальмонеллезов. Питательная среда данного целевого назначения содержит панкреатический гидролизат рыбы, экстракт кормовых дрожжей, хлорид натрия, лактозу, сахарозу, бриллиантовый зеленый, фениловый красный, агар микробиологический, трис(гидрооксиметил) аминометан. Питательная среда за счет сбалансированности азотистого питания, содержащего панкреатический гидролизат рыбы, экстракт кормовых дрожжей и включения трис(гидрооксиметил)аминометана позволяет полностью ингибировать рост сопутствующей микрофлоры (грамположительные кокки, протей) при сохранении высоких ростовых свойств среды по отношению к основному возбудителю. 1 табл.

Питательная среда для селективного выделения сальмонелл, содержащая источник азотистого питания, экстракт кормовых дрожжей, лактозу, сахарозу, бриллиантовый зеленый, феноловый красный, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит трис(гидрооксиметил)аминометан в качестве буферной соли, хлорид натрия и воду дистиллированную, а в качестве источника азотистого питания - панкреатический гидролизат рыбы при следующем соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбы 6,6-6,8

Экстракт кормовых дрожжей 0,9-1,1

Хлорид натрия 3,2-3,4

Лактоза 9,9-10,1

Сахароза 9,9-10,1

Трис(гидрооксиметил)аминометан 0,09-0,11

Бриллиантовый зеленый 0,0124-0,0126

Феноловый красный 0,075-0,085

Агар микробиологический 9,9-10,1

Вода дистиллированная До 1 л