ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И НАБОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОНИЖЕННОЙ КОСТНОЙ МАССЫ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2002 года по МПК A61K31/135 A61K31/557 A61P19/10 

Предпосылки создания изобретения
Данное изобретение относится к фармацевтической комбинации агонистов/антагонистов эстрогена и средств, стимулирующих остеогенез и увеличение костной массы, к наборам, содержащим такие комбинации, для лечения состояний, которые появляются при пониженной костной массе у млекопитающих, в том числе у людей.

Остеопороз является системным заболеванием скелета, характеризующимся пониженной костной массой и разрушением костной ткани с последующим возрастанием ломкости костей и подверженности переломам. В США это состояние каждый год поражает более 25 млн человек и является причиной более 1,3 млн переломов, в том числе 500000 переломов позвоночника, 250000 переломов тазобедренного сустава и 240000 переломов лучезапястного сустава ежегодно. Переломы тазобедренного сустава являются наиболее тяжелыми, причем в течение года умирает 5-20% пациентов, и свыше 50% оставшихся в живых становятся нетрудоспособными.

Лица пожилого возраста составляют группу наибольшего риска по остеопорозу, и поэтому прогнозируется существенное обострение проблемы в связи со старением населения. Прогнозируется троекратное увеличение частоты переломов в мире в последующие 60 лет, а в одном из исследований приблизительно подсчитано, что в мире в 2050 году будет насчитываться 4,5 млн переломов тазобедренного сустава.

Риск поражения остеопорозом среди женщин выше, чем среди мужчин. Женщины испытывают резкое ускорение разрежения костей сразу вслед за менопаузой. К другим факторам, которые усиливают разрежение костей, ведущее к остеопорозу, относятся курение, злоупотребление алкоголем, малоподвижный образ жизни и низкое потребление кальция.

В качестве средства для предупреждения остеопороза или постклимактерического разрежения костей у женщин выбран эстроген. Кроме того, в ЕР 0605193А1, Black et al., сообщается, что эстроген, в особенности при пероральном приеме, снижает уровень LDL в плазме и повышает содержание полезных липопротеинов высокой плотности (HDL). Однако длительное лечение эстрогеном влечет за собой различные расстройства, в том числе повышение опасности появления рака матки, рака эндометрия и, вероятно, рака молочной железы, что заставляет многих женщин либо избегать такого лечения, либо применять эту лекарственную терапию только в течение непродолжительного времени. Хотя полагают, что опасность рака эндометрия снижается при одновременном применении прогестерона, все еще существуют опасения по поводу возможной повышенной опасности рака молочной железы при применении эстрогена. Предложенные в последнее время схемы лечения, направленные на снижение опасности рака, такие как назначение комбинаций из прогестерона и эстрогена, вызывают у пациента кровотечение, что неприемлемо. Кроме того, оказывается, что сочетание прогестерона с эстрогеном снижает эффективность эстрогена в снижении уровня сывороточного холестерина. Значительные нежелательные побочные эффекты, связанные с лечением эстрогеном, подтверждают необходимость разработки альтернативных видов лечения остеопороза с желательным благоприятным действием на сывороточный LDL, но не вызывающих нежелательных побочных эффектов.

В последнее время для лечения остеопороза предложен ряд агонистов/антагонистов эстрогена. Сообщалось (Osteoporosis Conference Scrip No. 1812/13 April 16/20, 1993, р. 29), что ралоксифен, 6-гидрокси-2-(4-гидроксифенил)-3-[4-(2-пиперидиноэтокси)бензоил] -бензо[b] тиофен имитирует благоприятное действие эстрогена на кости и липиды, но в отличие от эстрогена оказывает минимальное стимулирующее действие на матку [Black L.J. et al., Raloxifene (LY139481 Hcl) Prevents Bone Loss and Reduces Serum Cholesterol Without Causing Uterine Hypertrophy in Ovariectomized Rats, J. Clin. Invest. , 1994, 93:63-69].

Такжеантиэстрогеномявляетсятамоксифен,1-(4-β-диметил-аминоэтоксифенил)-1,2-дифенил-бут-1-ен, предложенный в качестве средства против остеопороза, обладающий паллиативным действием на рак молочной железы, но, как сообщается, обладающий некоторым эстрогенным действием на матку. Gill-Sharma, et al., J. Reproduction and Fertility (1993) 99, 395, сообщают, что тамоксифен в количестве 200 и 400 мг/кг/сутки снижает массу семенников и вторичных половых органов у самцов крыс.

Кроме того, в патенте США 5254594 (который включен в настоящее описание в качестве ссылки) описывается применение дролоксифена для лечения костных заболеваний, в том числе остеопороза.

Такие средства, как дролоксифен, предотвращают костное разрежение и тем самым снижают опасность переломов при отсутствии побочных действий эстрогена. Однако предполагается, что каждый сам по себе эстроген и агонисты эстрогена снижают опасность переломов примерно только у 50%, оставляя приблизительно 50% женщин с нарушенным остеогенезом в опасности переломов вследствие остеопороза.

Для лечения остеопороза также предлагаются неэстрогеновые агонисты/антагонисты. Например, фосамакс^® представляет собой бисфосфонат, который в настоящее время имеется на рынке как средство для лечения остеопороза. В настоящее время проходят контрольную проверку другие бисфосфонаты, в том числе ризедронат, тилудронат и ибандронат.

Frost et al., в "Treatment of Osteoporosis by Manipulation of Coherent Bone Cell Populations", Clinical Orthopedics and Related Research, 143, 227 (1979), описывают теоретическую модель, которая предполагает возможность согласования активности и метаболизма костных клеток посредством введения сначала средства, активирующего костные клетки, а затем средства, подавляющего резорбцию кости, и после чего возможно осуществление нормального остеогенеза.

В работе Tang et al. Restoring and Maintaining Bone in Osteogenic Female Rat Skeleton: I. Changes in Bone Mass and Structure, J. Bone Mineral Research 7(9), p.1093-1104, 1992, описываются данные для концепции потери, восстановления и поддержания (LRM), практический подход к обратимости существующего остеопороза. Концепция LRM основывается на применении анаболических средств для восстановления костной массы и архитектуры (фаза +) и последующем переключении на средство с установленной способностью поддерживать костную массу, сохранять новую кость (фаза +/-). Исследования на крысах с использованием PGE₂ и ризедроната, бисфосфоната показывают, что большая часть нового губчатого вещества кости и кортикального слоя кости, индуцированных PGE₂, может поддерживаться по меньшей мере в течение 60 дней после прекращения введения PGE₂ посредством введения ризедроната.

Описываются комбинации бисфосфонатов и простагландинов для лечения остеопороза. В заявке на ЕР 0381296 описывается применение набора, когда за периодом активирования кости или лечебным режимом следует режим ингибирования резорбции кости. Примерами соединений, активирующих кость, приведенными в этой ссылке, являются паратиреоидный гормон (РТН), неорганический фосфат, гормон роста, фторид, тиреоидный гормон (например, тироксин), некоторые метаболиты витамина D и простагландины (PGE₂ при дозовом режиме 10 мг/кг в сутки). В качестве средств для ингибирования резорбции кости описываются полифосфонаты.

В заявке PCT/US93/08529 описывается одновременная доставка средства, активирующего кость, такого как простагландин, которое химически сочетается с соединением, ингибирующим костную резорбцию, при которой средство, активирующее кость, селективно доставляется в область мишени. При постепенном гидролизе нового соединения продукты гидролиза способны обеспечить ингибирующее действие на костную резорбцию (через бисфосфонаты) и рост кости или стимулирующее действие (через PGE₂).

Действие комбинации простагландина Е2 и ризедроната (бис-фосфоната) исследуется в работе Lin et al., Effects of Prosta-glandin E2 and Risedronate Administration on Cancellous Bone in Older Female Rats, Bone 15(5), p. 489-496, 1994.

В работе Qui et al. Experimental Study on Antiatherosclerotic Treatment by PGE₂ Combined With Vitamin E and Estradiol, Chinese Medical Journal, 108(1), p. 33-36, 1995, сообщается, что разовая доза PGE₂ в комбинации с витамином Е и эстрадиолом производит более координированное ингибирование в отношении аортных и коронарных атеросклеротических повреждений, а также агрегации тромбоцитов, пролиферации гладкомышечных клеток и перокисления липидов, чем разовая доза PGE₂.

В реферате работы "Nonhormonal Alternatives for the Management of Early Menopause in Younger Women with Breast Cancer", Monogr. Natl. Cancer Inst. (16), 161-167, 1994, отмечается: "Перспективно использование некоторых нестероидных подходов для предупреждения и лечения остеопороза. Традиционные рекомендации по поддержанию целостности скелета, такие как упражнения с отягощениями; диета, богатая кальцием и ограниченная в кофеине, алкоголе и белке; воздержание от курения; и мероприятия по минимизации травм расширяются и включают применение или изучение лекарственных средств (либо отдельных, либо в комбинации). К этим лекарственным средствам относятся прогестины, метаболиты витамина D, инъекционный и интраназальный синтетический лососевый кальцитонин, бисфосфонаты, фторид натрия, паратиреоидный гормон, факторы роста, тамоксифен и т.п.".

Таким образом, хотя существует много видов лечения остеопороза, существует постоянная потребность и продолжается поиск в этой области техники альтернативных способов лечения ввиду весьма незначительных успехов существующих в настоящее время способов лечения в части уменьшения числа переломов на почве остеопороза.

Краткое изложение сущности изобретения
Данное изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей агонисты/антагонисты эстрогена и анаболические средства, и к применению таких композиций для лечения состояний, которые появляются при пониженной костной массе, в том числе остеопороза у млекопитающих (например, у людей, в частности у женщин).

Композиция содержит терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение является агонистом/антагонистом эстрогена; и терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение является простагландином или агонистом/антагонистом простагландина.

Предпочтительными агонистами/антагонистами эстрогена являются дролоксифен, ралоксифен, тамоксифен, 4-гидрокситамоксифен,
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; и
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин.

Предпочтительными анаболическими средствами являются PGD₁, PGD₂, PGE₂, PGE₁, PGF₂, PGF₂α и 3S-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-2R-[6-(1Н-тетразол-5-ил)-гексил] циклопентанон.

Другим аспектом данного изобретения является синергическая фармацевтическая композиция, содержащая
а. некоторое количество первого соединения, причем указанное первое соединение является агонистом/антагонистом эстрогена; и
б. некоторое количество второго соединения, причем указанное второе соединение является простагландином или агонистом/антагонистом простагландина, при этом количество одного первого соединения и количество одного второго соединения является недостаточным для достижения терапевтического эффекта усиления остеогенеза и снижения резорбции кости, но если они вводятся одновременно, объединенное действие указанных количеств первого и второго соединений превышает суммарное терапевтическое действие, которого можно достичь с отдельными количествами первого и второго соединений, и фармацевтически приемлемого разбавителя или носителя.

Еще одним аспектом данного изобретения является набор, содержащий лекарства на курс лечения состояния, которое появляется при пониженной костной массе, включающий
а. терапевтически эффективное количество агониста/антагониста эстрогена и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; и
б. терапевтически эффективное количество простагландина или агониста/антагониста простагландина и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и
в. упаковочное средство для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм.

Еще один аспект данного изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей
а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет дролоксифен, ралоксифен, тамоксифен или идоксифен; и
б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет фторид натрия или N-[1(R)-[1,2-дигидро-1-метансульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин] -1'-ил)карбонил] -2-(фенилметилокси)этил]2-амино-2-метилпропанамид-МК-677.

Предпочтительным аспектом такой композиции является композиция, в которой первое соединение является дролоксифеном.

Другим аспектом данного изобретения является синергическая фармацевтическая композиция, содержащая
а. некоторое количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет дролоксифен, ралоксифен, тамоксифен или идоксифен; и
б. некоторое количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет фторид натрия или N-[1(R)-[1,2-дигидро-1-метансульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин] -1'-ил)-карбонил] -2-(фенилметилокси)этил] -2-амино-2-метилпропанамид-МК-677,
при этом количество одного первого соединения и количество одного второго соединения является недостаточным для достижения терапевтического эффекта усиления остеогенеза и снижения резорбции кости, но если они вводятся одновременно, при этом объединенное действие указанных количеств первого и второго соединений превышает суммарное терапевтическое действие, которого можно достичь с отдельными количествами первого и второго соединений, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

Предпочтительным видом такой синергической композиции является композиция, в которой первое соединение представляет дролоксифен.

Еще одним аспектом данного изобретения является набор, содержащий лекарства на курс лечения состояния, которое появляется при пониженной костной массе, включающий
а. терапевтически эффективное количество дролоксифена, ралоксифена, тамоксифена или идоксифена и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; и
б. терапевтически эффективное количество фторида натрия или N-[1(R)-[1,2-дигидро-1-метансульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин] -1'-ил)карбонил] -2-(фенилметилокси)этил]-2-амино-2-метилпропанамида-МК-677 и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и
в. упаковочные средства для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм.

Предпочтительным видом такого набора является набор, в котором первое соединение представляет дролоксифен.

цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил]-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил]-5,6,1,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин; и
б. терапевтически эффективного количества второго соединения, причем указанное второе соединение представляет фторид натрия, паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста.

Еще одним аспектом данного изобретения является синергическая фармацевтическая композиция, содержащая
а. некоторое количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил]-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] 5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин; и
б. некоторое количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет фторид натрия, паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста,
при этом количество одного первого соединения и количество одного второго соединения является недостаточным для достижения терапевтического эффекта усиления остеогенеза и снижения резорбции кости, но если они вводятся одновременно, при этом объединенное действие указанных количеств первого и второго соединений превышает суммарное терапевтическое действие, которого можно достичь с отдельными количествами первого и второго соединений, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

Еще одним аспектом данного изобретения является набор, содержащий лекарства на курс лечения состояния, которое появляется при пониженной костной массе, включающий
а. терапевтически эффективное количество
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталина;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидрохинолина;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина;
и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; и
б. терапевтически эффективное количество фторида натрия, паратиреоидного гормона, гормона роста или средства, усиливающего секрецию гормона роста, и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и
в. упаковочные средства для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм.

Еще одним аспектом данного изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая
а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет ралоксифен, тамоксифен или идоксифен, и
б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста.

Другими аспектами данного изобретения являются синергические композиции и наборы только что упомянутого состава.

Специалистам в этой области техники будет понятно, что аналогичным образом можно использовать другие противорезорбционные средства (бисфосфонат, эстроген, эстрадиол, премарин, эстрон, эстриол или 17α- или 17β-этинилэстрадиол) и другие костные анаболические средства (андроген, агонист/антагонист андрогена), вместе или с любым из средств, описанных в данном изобретении.

Например, противорезорбционное средство дролоксифен можно соединить с отдельным костным анаболическим средством, таким как паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста.

Выражение "состояние, которое появляется при пониженной костной массе" относится к состоянию, когда уровень костной массы ниже нормального уровня для данного возраста, определенного стандартами Всемирной Организации Здравоохранения, "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994), Report of a World Health Organization Study Group. World Health Organization Technical Series 843". Включаются также детский идеопатический и первичный остеопороз. В лечение остеопороза включаются предупреждение или ослабление длительных осложнений, таких как искривление позвоночника, потери в росте, хирургические операции в целях протезирования и предупреждение нарушения функции предстательной железы. Включаются также ускорение заживления костных переломов и ускорение успешного приживления костных трансплантатов. Включаются также периодонтальные заболевания и альвеолярные разрежения кости.

Выражение "состояние, которое появляется при пониженной костной массе" также имеет отношение к млекопитающему с известной, значительно выше средней, вероятностью развития таких заболеваний, какие описаны здесь выше, включая остеопороз (например, женщины в постклимактерический период, мужчины старше 60 лет и пациенты, лечащиеся лекарственными препаратами, известным побочным действием которых является остеопороз (например, глюкокортикоидами).

Специалистам в этой области техники будет понятно, что термин "костная масса" относится в действительности к костной массе на единицу площади, которая иногда (хотя не совсем точно) называется костной минеральной плотностью.

Термины "лечащий", "лечить" или "лечение", используемые здесь, включают предупредительное (например, профилактическое) и паллиативное лечение.

"Гало" обозначает хлор(о)-, бром(о)-, иод (о)- или фтор(о)-.

Алкил обозначает остаток линейного или разветвленного насыщенного углеводорода. Примерами таких алкильных групп (предполагающими, что определенная длина включает в себя конкретный пример) являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, гексил и изогексил.

Под "алкокси" подразумевается линейный или разветвленный насыщенный алкил, присоединенный через окси. Примерами таких алкоксигрупп (предполагающими, что определенная длина включает в себя конкретный пример) являются метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, трет-бутокси, пентокси, изопентокси, гексокси и изогексокси.

Выражение "соль с фармацевтически приемлемым анионом" относится к нетоксичным анионсодержащим солям, содержащим такие анионы, как (но не ограничивающимся перечисленным) хлорид-, бромид-, иодид-, сульфат-, бисульфат-, фосфат-, ацетат-, малеат-, фумарат-, оксалат-, лактат-, тартрат-, цитрат-, глюконат-, метансульфонат- и 4-толуолсульфонат-анион.

Выражение "соль с фармацевтически приемлемым катионом" относится к нетоксичным катионсодержащим солям, таким как (но не ограничивающимся перечисленным) соли натрия, калия, кальция, магния, аммония или протонированных бензатина (N, N'-дибензилэтилендиамина), холина, этаноламина, диэтаноламина, этилендиамина, мегламина (N-метилглюкамина), бенетамина (N-бензилфенетиламина), пиперазина или трометамина (2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропан-диола).

Заключенные в скобки + или -, используемые здесь в номенклатуре, отмечают направление вращения плоскости поляризованного света определенным стереоизомером.

Используемые здесь выражения "инертный для реакции растворитель" и "инертный растворитель" относятся к растворителям, которые не взаимодействуют с исходными веществами, реагентами, промежуточными соединениями или продуктами реакций таким образом, чтобы вредно воздействовать на выход нужного продукта.

Специалисту в области химии будет понятно, что некоторые соединения данного изобретения будут содержать один или несколько атомов, которые могут находиться в определенной стереохимической или геометрической конфигурации, давая начало стереоизомерам и изомерам положения. Все такие изомеры и их смеси включаются в данное изобретение. Также включаются гидраты соединений данного изобретения.

Специалисту в области химии будет понятно, что некоторые комбинации содержащих гетероатомы заместителей, перечисленных в данном изобретении, дают соединения, которые будут менее устойчивыми в физиологических условиях (например, содержащие ацетальные или аминные связи). Соответственно, такие соединения менее предпочтительны.

Фармацевтические композиции данного изобретения дают в результате более быстрый и больший по величине прирост костной массы, чем достижимый при тех же дозах одних агонистов/антагонистов эстрогена, описанных выше, или одного средства, которое стимулирует увеличение костной минеральной плотности, описанного выше. Таким образом, эти комбинации обладают синергическим действием, увеличивая костную массу и снижая частоту переломов в большей степени, чем этого можно достичь при применении какого-либо одного средства. Данное изобретение вносит существенный вклад в технику, предоставляя композиции, которые увеличивают и сохраняют костную массу, в результате чего предупреждается, замедляется и/или регрессирует остеопороз и родственные костные нарушения.

Другие особенности и преимущества станут очевидными из дальнейшего описания и формулы изобретения.

Подробное описание изобретения
Первое соединение данного изобретения является агонистом/антагонистом эстрогена млекопитающего. В качестве первого соединения данного изобретения можно использовать любой агонист/антагонист эстрогена. Термин "агонист/антагонист эстрогена" относится к соединениям, которые связываются с эстрогеновым рецептором, ингибируют костный обмен и предупреждают разрежение кости. Активность такого рода легко определяется специалистами в этой области техники с помощью стандартных анализов, в том числе анализов связывания рецепторов для эстрогена (см. далее раздел "In vitro Анализ связывания эстрогеновых рецепторов") и стандартных методов костной гистоморфометрии и денситометрии (см. далее здесь "Протокол испытаний агонистов/антагонистов эстрогена" и Eriksen et al. Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, pages 1-74; Grier S.J. et al. The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31 (1): 50-62; Wahner H.W. and Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, pages 1-296). Многие из этих соединений описываются и упоминаются ниже, однако специалистам в этой области техники должны быть известны и другие агонисты/антагонисты эстрогена.

Предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является дролоксифен (фенол, 3-[1-[4-[2-(диметиламино) этокси] фенил] -2-фенил-1-бутенил],-(Е)-) и родственные соединения, которые описываются в патенте США 5047431 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Другим предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является тамоксифен (этанамин, 2-[4-(1,2-дифенил-1-бутенил)фенокси]-N,N-диметил, (Z)-2-, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат (1: 1)) и родственные соединения, описанные в патенте США 4536516 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки). Другим родственным соединением является 4-гидрокситамоксифен, описанный в патенте США 4623660 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Еще одним предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является ралоксифен (метанон,[6-гидрокси-2-(4-гидрокси-фенил)бензо[b]тиен-3-ил][4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил]-,гидрохлорид) и родственные соединения, которые описываются в патенте США 4418068 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Еще одним предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является торемифен (этанамин, [4-(4-хлор-1,2-дифенил-1-бутенил)-фенокси]-N,N-диметил-, (Z)-, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат (1:1)) и родственные соединения, которые описываются в патенте США 4996225 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Еще одним предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является центхроман (1-[2-[[4-(метокси-2,2, -диметил-3-фенилхроман-4-ил)фенокси]-этил] -пирролидин) и родственные соединения, которые описываются в патенте США 3822287 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Еще одним предпочтительным агонистом/антагонистом эстрогена является идоксифен (Пирролидин, 1-[-[4-[[1-(4-иодфенил)-2-фенил-1-бутенил] -фенокси] этил] и родственные соединения, которые описываются в патенте США 4839155 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки).

Другими предпочтительными агонистами/антагонистами эстрогена являются соединения формулы

где
А выбирают из СН₂ и NR;
В, D и Е выбирают, независимо, из СН и N;
Y представляет
(а) фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
(б) нафтил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
(в) (С₃-С₈ )-циклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
(г) (С₃-С₈)-циклоалкенил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
(д) пятичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из -О-, -NR²- и -S(O)_n-, замещенный, необязательно, 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
(е) шестичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из -О-, -NR²- и -S(O)_n-, замещенный, необязательно, 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴; или
(ж) бициклическую кольцевую систему, состоящую из пяти- или шестичленного гетероциклического кольца, сконденсированного с фенильным концом, причем указанное гетероциклическое кольцо содержит до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из -О-, -NR²- и -S(O)_n-, замещенный, необязательно, 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴;
Z¹ представляет
(а) -(CH₂)_pW(CH₂)_q-;
(б) -O(CH₂)_pCR⁵R⁶-;
(в) -(CH₂)_pW(CH₂)_q;
(г) -OCHR²CHR³-; или
(д) -SCHR²CHR³-;
G представляет
(а) -NR⁷R⁸;
(б)

где n равен 0, 1 или 2; m равен 1, 2 или 3; Z² представляет -NH-, -О-, -S- или -СН₂-; необязательно слитый по соседним атомам углерода с одним или двумя фенильными кольцами и необязательно замещенный, независимо, по углероду, одним-тремя заместителями, и, необязательно, независимо, по азоту химически подходящим заместителем, выбранными из R⁴; или
(в) бициклический амин, содержащий пять-двенадцать атомов углерода, соединенный через мостик или сконденсированный, и необязательно замещенный 1-3 заместителями, выбранными, независимо, из R⁴; или
Z¹ и G в сочетании могут представлять

W представляет
(а) -СН₂-;
(б) -СН=СН-;
(в) -О-;
(г) -NR²-;
(Д) -S(O)_n-;
(е)

(ж) -CR²(OH)-;
(з) -CONR²-;
(и) -NR²CO-;
(й)

или
(к)
R является водородом или (C₁-C₆)-алкилом;
R² и R³, независимо, представляют
(а) водород; или
(б) (C₁-C₄)-алкил;
R⁴ представляет
(а) водород;
(б) галоген;
(в) (C₁-C₆)-алкил;
(г) (C₁-C₄)-алкокси;
(д) (C₁-C₄)-ацилокси;
(е) (C₁-C₄)-алкилтио;
(ж) (C₁-C₄) -алкилсульфинил;
(з) (C₁-C₄)-алкилсульфонил;
(и) гидрокси (C₁-C₄)-алкил;
(и) арил (C₁-C₄)-алкил;
(к) -СО₂Н;
(л) -CN;
(м) -CONHOR;
(н) -SO₂NHR;
(о) -NH₂;
(п) (C₁-C₄)-алкиламино;
(р) (C₁-C₄)-диалкиламино;
(с) -NHSO₂R;
(т) -NO₂;
(у) -арил; или
(ф) -ОН;
R⁵ и R⁶, независимо, представляют (C₁-C₈)-алкил или вместе образуют (С₃-С₁₀)-карбоциклическое кольцо;
R⁷ и R⁸, независимо, представляют
(а) фенил;
(б) (С₃-С₁₀)-карбоциклическое кольцо, насыщенное или ненасыщенное;
(в) (С₃-С₁₀)-гетероциклическое кольцо, содержащее до двух гетероатомов, выбранных среди -О-, -N- и -S-;
(г) Н;
(д) (C₁-C₆)-алкил; или
(е) образуют с R⁵ или R⁶ 3-8-членное азотсодержащее кольцо;
R⁷ и R⁸, либо в линейной, либо в циклической форме, необязательно, могут быть замещены заместителями (до трех), выбранными, независимо, среди (C₁-C₆)-алкила, галогена, алкокси, гидрокси и карбокси;
кольцо, образованное R⁷ и R⁸, необязательно, может быть сконденсировано с фенильным кольцом;
е равен 0, 1 или 2;
m равен 1, 2 или 3;
n равен 0, 1 или 2;
р равен 0, 1, 2 или 3;
q равен 0, 1, 2 или 3;
и их оптические и геометрические изомеры; и их нетоксичные фармакологически приемлемые соли присоединения кислот, N-оксиды, сложные эфиры и соли четвертичных аммониевых оснований.

Предпочтительными соединениями изобретения являются соединения формулы

где G представляет
,

или
;
и
R⁴ представляет Н, ОН, F или Сl; и В и Е выбирают, независимо, из СН и N.

Особенно предпочтительными соединениями являются
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7, 8-тетрагидронафталин-2-ол; и
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин.

Вышеуказанные соединения данного изобретения легко получаются с помощью реакций, показанных на схемах, приведенных ниже.

Некоторые соединения формулы I удобно получать из ненасыщенного промежуточного соединения

посредством гидрирования с катализатором на основе благородного металла при реакции в инертном растворителе. Давление и температура не являются критическими параметрами, и гидрирование нормально осуществляется за несколько часов при комнатной температуре при давлении водорода ~138-552 кПа (20-80 ф/д²).

Продукт гидрирования выделяют, очищают, если это желательно, и отщепляют простую эфирную группу с помощью кислотного катализатора в инертном для реакции растворителе при температуре от 0^oС до 100^oС, в зависимости от используемого кислотного катализатора. Обнаружено, что эффективными для этой реакции являются бромистый водород при повышенной температуре и трибромид бора и хлорид алюминия при температуре от 0^oС до температуры окружающей среды.

Продукт реакции формулы I выделяют и очищают обычными процедурами.

Промежуточные соединения формулы II, где А представляет СН₂, а В, D и Е являются СН, описываются в патенте США 3274213; J. Med. Chem. 10, 78 (1967); J. Med. Chem. 10, 138 (1967); и в J. Med. Chem. 12, 881 (1969); включенных в настоящее описание в качестве ссылок. Эти соединения можно также получить посредством процедур, описанных ниже.

Получение соединений формулы I, где е=l, А=СН₂, Z¹=OCH₂CH₂, G=циклоалкиламин, В= СН, показано на схеме 1. Соединения 1-2, где D и Е являются СН, получают посредством алкилирования 4-бромфенола соответствующим N-хлорэтиламином с использованием карбоната калия в качестве основания, в полярном апротонном растворителе, подобном диметилформамиду, при повышенных температурах. Предпочтительная температура составляет 100^oС. Соединения 1-2, где D или Е, или оба, представляют N, синтезируют с использованием реакции нуклеофильного замещения, осуществляемой с дибромидами (1-1), с использованием гидроксиэтилциклоалкиламинов, в условиях фазового перехода, и получают бромамины (1-2) (Synthesis, 77, 573 (1980)). После обмена галогена на металл при использовании н-бутиллития или металлического магния, бромамины (1-2) дают соответствующие литиевые или магниевые реактивы, которые позволяют осуществить взаимодействие при низкой температуре предпочтительно в присутствии хлорида цезия (реакция также протекает без хлорида цезия) с 6-метокси-1-тетралоном и после кислотной обработки получить либо карбинолы (1-3), либо стиролы (1-4). Обработка либо карбинолов (1-3), либо стиролов (1-4) бромирующим агентом, таким как пербромид пиридинийбромида, дает бромстиролы (1-5). Арил- или гетероарилхлориды цинка или арил- или гетероарилборные кислоты взаимодействуют с бромидами (1-5) в присутствии катализатора на основе металлического палладия, подобного тетракистрифенилфосфинпалладию(О), с образованием диарилстиролов (1-6) [Pure & Applied Chem. 63, 419 (1991), и Bull. Chem. Soc. Jpn. 61, 3008-3010 (1988)]. Чтобы получить предпочтительные соединения, в этой реакции используют замещенные фенилхлориды цинка или замещенные фенилборные кислоты. Арилхлориды цинка получают посредством гашения соответствующего литиевого реактива безводным хлоридом цинка. Арилборные кислоты, которые не доступны коммерчески, получают путем гашения соответствующего ариллитиевого реактива триалкилборатом, предпочтительно триметил- или триизопропилборатом, с последующей обработкой водной кислотой (Acta Chemica Scan. 47, 221-230 (1993)). Литиевые реактивы, которые не доступны коммерчески, получают путем обмена галогена на металл в соответствующем бромиде или галогениде с н-бутил- или трет-бутиллитием. С другой стороны, литиевый реактив получают посредством облегченного гетеро-атомом литирования, как описано в "Органические реакции", т. 27, гл. 1. Каталитическое гидрирование 1-6 в присутствии гидроксида палладия на угле, например, позволяет получить соответствующие промежуточные дигидрометоксисоединения, которые впоследствии деметилируют с использованием трибромида бора при 0^oС в метиленхлориде или с использованием 48% бромистого водорода в уксусной кислоте при 80-100^oC, и получают целевые структуры (1-7). Эти соединения являются рацемическими смесями, и их можно расщепить на энантиомеры посредством жидкостной хроматографии высокого давления с использованием колонки с хиральной фазой, подобной колонкам с хирацелом OD. С другой стороны, оптическое расщепление можно осуществить с помощью перекристаллизации диастереомерных солей, образованных с оптически чистыми кислотами, как 1,1'-би-нафтил-2,2'-диилгидрофосфат.

Цис-соединения (1-7) можно перевести в изомерные транс-соединения при обработке основанием.

Когда D и/или Е представляет азот, промежуточные соединения (формула II) и соединения формулы I можно получить из соответствующих дигалогенпиридинов или пиримидинов, как показано на схеме 1 (см. в конце описания)
Простой метиловый эфир соединения формулы 1, где е=1, А=СН₂, Z¹=OCH₂CH₂, G= пирролидин, D, Е, В=СН, Y=Ph, можно также получить подходящим образом с помощью первой стадии гидрирования нафоксидина (Upjohn & Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, MI 49001) в инертном для реакции растворителе в присутствии катализатора на основе благородного металла. Давление и температура не являются критическими параметрами; реакцию удобно осуществлять в этаноле при комнатной температуре приблизительно в течение 20 часов при ~345 кПа (50 ф/д²).

Второй стадией является отщепление метоксигруппы, которое удобно осуществлять при комнатной температуре с кислотным катализатором, таким как трибромид бора, в инертном для реакции растворителе, или при 80-100^oС с бромистым водородом в уксусной кислоте. Продукт реакции затем выделяют обычными способами и превращают, если желательно, в соль кислоты.

Соединения формулы 1, в которых В является азотом, получают с помощью процедур, показанных на схемах 2 и 3.

Синтез соединений формулы I, где B=N, показан на схеме 2. Хлорангидриды арильных кислот (2-1) при обработке первичными аминами дают вторичные ариламиды (2-2), которые восстанавливают алюмогидридом лития в эфирных растворителях, и получают вторичные амины (2-3). Последующее ацилирование (2-3) хлорангидридами ароил-кислот приводит к третичным амидам (2-4), которые циклизуют в горячем оксихлориде фосфора, и получают соли дигидроизохинолиния (2-5). Восстановление борогидридом натрия до алкокситетрагидроизохинолинов с последующим деметилированием трибромидом бора в метиленхлориде дает целевые структуры.

Синтез соединений формулы 1, где B=N, описывается также ниже на схеме 3 (см. в конце описания). Вторичные амины (3-1) при ацилировании бензилоксиароилхлоридами (3-2) дают третичные амиды (3-3), которые при циклизации с горячим оксихлоридом фосфора дают соли дигидроизохиниолина (3-4). Восстановление борогидридом натрия (3-4) с последующим дебензилированием соляной кислотой дает изохинолины (3-5), которые алкилируют соответствующим образом функционализированными хлоридами и деметилируют трибромидом бора, и получают нужные целевые структуры.

Другие агонисты/антагонисты эстрогена описываются в патенте США 4133814 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки). В патенте США 4133814 описываются производные 2-фенил-3-ароилбензотиофена и 2-фенил-3-ароилбензотиофен-1-оксида.

Lednicer, et al., J. Med. Chem., 12, 881 (1969), описывают антагонисты эстрогена формулы

где R² является фенилом или циклопентилом, и R³ представляет Н,

или -СН₂СНОНСН₂ОН.

В патенте США 3234090 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описывается агонист/антагонист эстрогена формулы

в которой Ph представляет радикал 1,2-фенилен, Аr является моноциклической карбоциклической арильной группой, замещенной низшим (третичный амино) алкилокси, где третичный амино отделяется от окси по меньшей мере двумя атомами углерода, R представляет водород, алифатический радикал, карбоциклический арильный радикал, карбоциклический арилалифатический радикал, гетероциклоарильный радикал или гетероциклоарилалифатический радикал, группа формулы -(С_nН_2n-2)- обозначает неразветвленный алкиленовый радикал с тремя-пятью атомами углерода, несущий группы Аr и R, соли, N-оксиды, соли N-оксидов или четвертичные аммониевые основания соединения такой формулы, а также способ получения таких соединений.

В патенте США 3277106 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описывается действие неполных эфиров агонистов/антагонистов эстрогена формулы

в которой Ph представляет радикал 1,2-фенилен, Аr является моноциклическим арильным радикалом, замещенным по меньшей мере одной низшей аминоалкилоксигруппой, в которой атом азота отделяется от атома кислорода по меньшей мере двумя атомами углерода, R представляет арильный радикал, и группа -(С_nН_2n-2)- обозначает низший алкилен, образующий с Ph шести- или семичленное кольцо, два из его кольцевых атомов углерода несут группы Аr и R, их солей, N-оксидов, солей N-оксидов и четвертичных аммониевых оснований.

В патенте США 3274213 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются агонисты/антагонисты эстрогена формулы

в которой R₁ и R₂ выбираются из группы, состоящей из низшего алкила и общего низшего алкила для образования 5-7-членного насыщенного гетероциклического радикала.

Второе соединение данного изобретения может представлять любое описанное ниже соединение, которое увеличивает костную массу до уровня, превышающего пороговую величину для перелома кости (что изложено подробно в исследовании Всемирной Организации Здравоохранения "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994), Report of a WHO Study Group. World Health Organization Technical Series 843").

В качестве второго соединения данного изобретения можно использовать любой простагландин или агонист/антагонист простогландина. Специалистам в этой области техники будет понятно, что можно также использовать фторид натрия, паратиреоидный гормон РТН), активные фрагменты паратиреоидного гормона, гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста. В последующих разделах описываются подробнее примеры второго соединения.

В качестве второго соединения данного изобретения можно использовать любой простагландин. Термин "простагландин" относится к соединениям, которые являются аналогами природных простагландинов PGD₁, PGD₂, PGE₂, PGE₁ и PGF₂α, полезных при лечении остеопороза. Эти соединения связываются с простагландиновыми рецепторами. Такое связывание легко устанавливается специалистами в этой области техники с помощью стандартных анализов (см., например, An S. et al. . Cloning and Expression of the ЕР₂ Subtype of Human Receptors for Prostaglandin Е₂, Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 197 (1):263-270).

Простагландины являются алициклическими соединениями, родственными основному соединению - простановой кислоте. Атомы углерода основного простагландина нумеруются последовательно от атома углерода карбоксильной группы через циклопентильное кольцо к последнему атому углерода на соседней боковой цепи. Обычно соседние боковые цепи находятся в транс-ориентации. Присутствие оксогруппы у С-9 циклопентильной группы является признаком простагландина класса Е, в то время как РGЕ₂ содержит транс-ненасыщенную двойную связь в положении C₁₃-C₁₄ и цис-двойную связь в положении С₅-С₆.

Различные простагландины упоминаются и описываются ниже, однако специалистам в этой области техники должны быть известны и другие простагландины. Примеры простагландинов описываются в патентах США 4171331 и 3927197 (включенных в настоящее описание в качестве ссылок).

Обзор действующих на кости простагландинов дается в работе Norrdin et al. The Role of Prostaglandins in Bone in Vivo, Prostaglandins Leukotreine Essential Fatty Acids 41, 139-150, 1990.

Любой агонист/антагонист простагландина можно использовать в качестве второго соединения данного изобретения. Термин "агонист/антагонист простагландина" относится к соединениям, связывающимся с простагландиновыми рецепторами (см., например, An S. et al. Cloning and Expression of the ЕР₂ Subtype of Human Receptors for Prostaglandin Е₂, Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 197(1): 263-270), и имитируют действие простагландина in vivo (например, стимулируют остеогенез и увеличение костной массы). Такое действие легко определяется специалистами в этой области техники с помощью стандартных анализов (см., например, приведенный здесь далее "Протокол испытаний анаболических средств" и Eriksen E.F. et al. Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, pages 1-74; Grier S.J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Animals, Inv. Radiol. , 1996, 31 (1): 50-62; Vahner H.V. and Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, pages 1-296). Многие из этих соединений описываются и упоминаются ниже, однако специалистам в этой области техники могут быть известны и другие агонисты/антагонисты простагландина. Ниже приводятся примеры описания агонистов/антагонистов простагландина.

В переданном обычным образом патенте США 3932389 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются замещенные в положении 15 2-декарбокси-2-(тетразол-5-ил)-11-дезокси-омега-пентано-простагландины, полезные для активации остеогенеза.

В переданном обычным образом патенте США 4018892 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются п-бифениловые эфиры 16-арил-13,14-дигидро-РGЕ₂, полезные для активации остеогенеза.

В переданном обычным образом патенте США 4219483 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются 2,3,6-замещенные 4-пироны, полезные для активации остеогенеза.

В переданном обычным образом патенте США 4132847 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются 2,3,6-замещенные 4-пироны, полезные для активации остеогенеза.

В патенте США 4000309 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются п-бифениловые эфиры 16-арил-13,14-дигидро-РGЕ₂, полезные для активации остеогенеза.

В патенте США 3982016 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются п-бифениловые эфиры 16-арил-13,14-дигидро-РGЕ₂, полезные для активации остеогенеза.

В патенте США 4621100 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются замещенные циклопентаны, полезные для активации остеогенеза.

В патенте США 5216183 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки) описываются циклопентаноны, полезные для активации остеогенеза.

В качестве второго соединения данного изобретения можно использовать фторид натрия. Название "фторид натрия" относится к фториду натрия во всех его формах (например, фторид натрия в форме с пролонгированным высвобождением или в форме с отсроченным высвобождением). Фторид натрия отсроченного высвобождения описывается в патенте США 4904478, включенном в настоящее описание в качестве ссылки. Активность фторида натрия легко определяется специалистами в этой области техники по соответствующим биологическим протоколам (см. , например, приведенный здесь ниже "Протокол испытаний анаболических средств" и Eriksen E.F. et al. Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, pages 1-74; Grier S.J. et al. The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Animals, Inv. Radiol., 1996, 31 (1): 50-62; Wahner H.W. and Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, pages 1-296).

В качестве второго соединения данного изобретения можно использовать любой паратиреоидный гормон (РТН). Термин "паратиреоидный гормон" относится к паратиреоидному гормону, его фрагментам или метаболитам и его структурным аналогам, которые могут стимулировать остеогенез и увеличивать костную массу. Такая функциональная активность легко определяется специалистами в этой области техники стандартными анализами (см., например, приведенный здесь ниже "Протокол испытаний анаболических средств" и Eriksen E.F. et al. Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, pages 1-74; Grier S.J. et al. The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50-62; Wahner H.W. and Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd. , London 1994, pages 1-296). Многие такие соединения описываются и упоминаются ниже, однако специалистам в этой области техники могут быть известны и другие паратиреоидные гормоны. Примеры паратиреоидных гормонов описываются в указанных далее ссылках.

"Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis", Osteoporosis Int., 3, (Supp 1):199-203.

"РТН 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy: Biochemical, Kinetic and Histological Responces", Osteoporosis Int., 1:162-170.

В качестве второго соединения данного изобретения можно использовать любой гормон роста или средство, усиливающее секрецию гормона роста. Термин "средство, усиливающее секрецию гормона роста" относится к соединениям, которые стимулируют секрецию гормона роста или имитируют действие гормона роста (например, увеличивают остеогенез, что ведет к возросшей костной массе). Такое действие легко определяется специалистами в этой области техники с помощью стандартных анализов (например, описанных здесь ниже). Многие такие соединения включены в опубликованные РСТ заявки на патент WO 95/14666; WO 95/13069; WO 94/19367; WO 94/13696 и WO 95/34311. Однако специалистам в этой области техники могут быть известны и другие средства, усиливающие секрецию гормона роста.

В частности, предпочтительным средством, усиливающим секрецию гормона роста, является N-[1(R)-[1,2-дигидро-1-метан-сульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин] -1'-ил)-карбонил] -2-(фенилметилокси)этил] -2-амино-2-метилпропанамид -МК-677.

Другими предпочтительными средствами, усиливающими секрецию гормона роста, являются
2-амино-N-[2-(3а-(R)-бензил-2-метил-3-оксо-2,3,3а, 4,6,7-гексагидропиразоло-[4,3-с] пиридин-5-ил)-1-(R)-бензилоксиметил-2-оксо-этил] изобутирамид или его соль L-винной кислоты;
2-амино-N-{ 1-(R)-бензилоксиметил-2-[3а-(R)-(4-фторбензил)-2-метил-3-оксо-2,3,3а, 4,6,7-гексагидропиразоло-[4,3-с] пиридин-5-ил]-2-оксоэтил}изобутирамид и
2-амино-N-[2-(3а-(R)-бензил-3-оксо-2,3,3а, 4,6,7-гексагидро-пиразоло-[4,3-с]пиридин-5-ил)-1-(R)-бензилоксиметил-2-оксоэтил]-изобутирамид.

Вообще, соединения данного изобретения можно получить способами, включающими процессы, известные в химии, в частности, в свете данного здесь описания.

Некоторые из способов получения, пригодные для получения соединений данного изобретения, могут включать защиту отдельных функциональных групп (например, первичного амина, вторичного амина, карбоксила). Потребность в такой защите будет изменяться в зависимости от природы функциональной группы и условий способов получения. Потребность в такой защите легко определяется специалистом в данной области техники. Применение таких методов защиты и отщепления защитных групп также входит в компетенцию специалиста в данной области техники. Для общего представления о защитных группах и их использовании см. T.W. Greene, Protective Groups in Organics Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991. Исходные вещества и реактивы для получения соединений данного изобретения также легко доступны или могут быть легко синтезированы специалистами в этой области техники с использованием традиционных методов органического синтеза. Например, многие соединения, используемые здесь, относятся к или образуются из соединений, обнаруженных в природе, к которым имеется большой научный интерес и в которых существует большая коммерческая потребность, и, соответственно, многие такие соединения доступны коммерчески или описаны в литературе, или легко получаются из других обычно доступных веществ с помощью методов, описанных в литературе. К таким соединениям относятся, например, простагландины.

Некоторые из соединений данного изобретения имеют асимметричные атомы углерода и, следовательно, являются энантиомерами или диастереомерами. Смеси диастереомеров можно разделить на отдельные диастереомеры, основываясь на их физических и химических различиях, с помощью методов, самих по себе известных, например хроматографии и/или фракционной кристаллизации. Энантиомеры можно разделить путем превращения смеси энантиомеров в смесь диастереомеров посредством взаимодействия с соответствующим оптически активным соединением (например, спиртом), разделения диастереомеров и превращения (например, при гидролизе) отдельных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Все такие изомеры, в том числе диастереомеры, энантиомеры и их смеси, рассматриваются как часть данного изобретения.

Хотя многие соединения данного изобретения не могут ионизироваться в физиологических условиях, некоторые из соединений данного изобретения ионизируются в физиологических условиях. Так, например, некоторые из соединений данного изобретения имеют кислотный характер, и они образуют соли с фармацевтически приемлемыми катионами. Все такие соли входят в объем данного изобретения, и такие соли можно получить обычными способами. Например, их можно получить просто путем приведения в контакт веществ кислотного и основного характера, обычно, в стехиометрическом соотношении, либо в водной, либо в неводной или частично водной среде, соответственно. Соли извлекают или с помощью фильтрации, с помощью осаждения нерастворителем с последующей фильтрацией, путем испарения растворителя, или, в случае водных растворов, посредством лиофилизации, что подходит.

Кроме того, некоторые соединения данного изобретения имеют основной характер, и такие соединения образуют соли с фармацевтически приемлемыми анионами. Все такие соли входят в объем данного изобретения, и их можно получить обычными способами. Например, их можно получить просто путем приведения в контакт веществ кислотного и основного характера, обычно в стехиометрическом соотношении, либо в водной, либо в неводной или частично водной среде, соответственно. Соли извлекают или с помощью фильтрации, с помощью осаждения нерастворителем с последующей фильтрацией, путем испарения растворителя, или, в случае водных растворов, посредством лиофилизации, что подходит.

Кроме того, когда соединения данного изобретения образуют гидраты или сольваты, такие гидраты и сольваты также входят в объем данного изобретения.

Все фармацевтические композиции и способы данного изобретения применимы для лечебного применения в качестве средств, которые или активируют костный обмен, или предотвращают резорбцию кости, или усиливают остеогенез у млекопитающих, в частности у людей. Так как эти функции тесно связаны с развитием остеопороза и родственными костными нарушениями, эти композиции вследствие своего воздействия на кости предупреждают, сдерживают, ослабляют и реверсируют остеопороз.

Полезность соединений настоящего изобретения в качестве лечебных средств при лечении у млекопитающих (в частности, у людей, точнее у женщин) состояний, которые появляются при пониженной костной массе (например, остеопороза), демонстрируется на основании активности соединений данного изобретения при обычных анализах, как vitro, так и in vivo, описанных ниже (разделы "Композиция и протокол последовательной обработки"; "Протокол испытаний агонистов/антагонистов эстрогена"; "Протокол испытаний анаболических средств"; "Анализ связывания эстрогеновых рецепторов in vitro" и "Протокол испытаний гормона роста и средств, усиливающих секрецию гормона роста"). Такие анализы также предоставляют способ, с помощью которого можно сравнивать между собой соединения данного изобретения по их активности. Результаты такого сравнения полезны для определения уровня дозировки для млекопитающих, в том числе людей, для лечения таких заболеваний.

Композиция и протокол последовательной обработки
Специалисты в этой области техники, конечно, могут изменять приведенные далее протоколы. Например, можно использовать интактных самцов или самок крыс, самцов крыс с недостатком половых гормонов (орхидектомия) или самок крыс с недостатком половых гормонов (овариэктомия). Кроме того, при данных исследованиях можно использовать самцов или самок крыс различного возраста (например, в возрасте 12 месяцев). Крысы могут быть или интактными, или кастрированными (перенесшими овариэтомию или орхидектомию), которым вводят анаболические средства, такие как простагландин Е2 (PGE₂), в различных дозах (например, 1, 3 или 6 мг/кг/сутки) в течение определенного периода (например, от двух недель до двух месяцев), а затем вводят противорезорбционное средство, такое как дролоксифен, в различных дозах (например, 1, 5, 10 мг/кг/сутки) в течение определенного периода (например, от двух недель до двух месяцев), или их подвергают комбинированной обработке как анаболическим средством, так и противорезорбционным средством при различных дозах на протяжении определенного периода (например, от двух недель до двух месяцев). Обработку кастрированных крыс можно начинать на следующий день после операции (с целью предупреждения разрежения кости) или в тот момент, когда уже происходит разрежение кости (с целью восстановления костной массы).

В приведенных ниже протоколах описывается как применение PGE₂ в качестве костного анаболического средства, так и дролоксифена в качестве противорезорбционного средства, однако по протоколу можно провести испытания других анаболических средств и других противорезорбционных средств.

В месяц 0 ста четырем самкам крыс Sprague-Dawley (Charles River, Уилмингтон, Миннесота) в возрасте 12 месяцев осуществляют ложную операцию или овариэктомию (OVX). Через три месяца после операции OVX-крысы получают в течение 2 месяцев либо простагландин Е2 (РСЕ₂) - известное костное анаболическое средство в количестве 3 мг/кг/сутки (подкожная инъекция), либо PGE₂ в количестве 3 мг/кг/сутки (подкожная инъекция) в комбинации с дролоксифеном (DRO) в количестве 10 мг/кг/сутки (перорально). После этого лечение PGE₂ прекращают и крыс обрабатывают либо носителем (10% спирта в физиологическом растворе), либо DRO (10 мг/кг/сутки, перорально) еще в течение полутора месяцев, как описано ниже.

Группа I. Восемь крыс вскрывают в месяц 0 в качестве основного контроля.

Группа II. Восемь ложно-оперированных крыс вскрывают в 3 месяц в качестве контроля перед обработкой.

Группа III. Восьми ложно-оперированным крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная с месяца 3 до 5 месяца, и вскрывают в месяц 5.

Группа IV. Восьми ложно-оперированным крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная месяца 3 до 6,5, и вскрывают в месяц 6,5.

Группа V. Восемь OVX-крыс вскрывают в месяц 3 в качестве контроля перед обработкой.

Группа VI. Восьми OVX-крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная с месяца 3 до 5 месяца, и вскрывают в месяц 5.

Группа VII. Восьми OVX-крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная месяца 3 до 6,5, и вскрывают в месяц 6,5.

Группа VIII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и вскрывают в месяц 5.

Группа IX. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и носитель, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа X. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и дают 10 мг/кг/сутки DRO, перорально, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа XI. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO, перорально, начиная с месяца 3 до 5, и затем вскрывают в месяц 5.

Группа XII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO, перорально, начиная с месяца 3 до 5, и носитель, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа XIII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO, перорально, начиная с месяца 3 до 5, и дают один DRO, начиная с месяца 5 до 6,5, затем вскрывают в месяц 6,5.

Порошок PGE₂ (Cayman Chemical Co., Анн-Арбор, Мичиган) или дролоксифена (Pfizer Inc., Гротон, Коннектикут) сначала растворяют в 100% этаноле, а затем разбавляют физиологическим раствором до нужной концентрации (конечная концентрация этанола 10%). Раствор PGE вводят ежесуточно подкожной инъекцией в спину в количестве 1 мл/кг. Раствор дролоксифена дают ежесуточно перорально в количестве 1 мл на крысу. Всем крысам делают подкожные инъекции 10 мг/кг кальцеина (флуорохромный костный маркер, Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури) за 12 и 2 дня перед умерщвлением и проверяют динамические изменения в костных тканях.

Крыс умерщвляют под кетаминовым наркозом и проводят определения, перечисленные ниже.

Минеральные показатели бедренной кости. При вскрытии у каждой крысы удаляют правое бедро и сканируют с применением двухуровневой рентгеновской абсорбциометрии (DXA, QDR 1000/W, Hologic Inc. , Уолтхам, Миннесота) с программным обеспечением "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота). Размер "скана" 5,08•1,902 см, разрешение составляет 0,0254•0,0127 см, и скорость скана составляет 7,25 мм/с. Полученные при сканировании изображения бедренных костей анализируют и определяют площадь кости, содержание минеральных веществ в кости (ВМС) и минеральную плотность кости (BMD) всей бедренной кости (WF), дистальных бедренных метафизов (DFM), тела бедренной кости (FS) и проксимальных частей бедренных костей (PF).

Минеральные показатели поясничных позвонков. Используют двухуровневую рентгеновскую абсорбциометрию (QDR 1000/W, Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) с программным обеспечением "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) для определения у находящихся под наркозом крыс площади кости, содержания минеральных веществ в кости (ВМС) и минеральной плотности кости (BMD) всего поясничного отдела позвоночника и каждого из шести поясничных позвонков (LV1-6). Крыс анестезируют посредством инъекции (ип) 1 мл/кг смеси кетамина с ромпуном (в соотношении 4-к 3) и затем помещают на площадку для крыс. Размер "скана" 6•1,9 см, разрешение составляет 0,0254•0,0127 см, и скорость скана составляет 7,25 мм/с. Получают и анализируют изображение всего поясничного отдела позвоночника. Определяют площадь кости (ВА) и содержание минеральных веществ в кости (ВМС), а минеральную плотность (BMD) вычисляют (МВС делят на ВА) для всего поясничного отдела позвоночника и для каждого из шести поясничных позвонков (LV1-6).

Гистоморфометрические анализы метафизарного губчатого вещества проксимальной части большеберцовой кости. При аутопсии извлекают правую большеберцовую кость, очищают от мышц и разрезают на три части. Проксимальную часть большеберцовой кости фиксируют в 70% этаноле, обезвоживают при переменной концентрации этанола, обезжиривают в ацетоне, и затем заливают метилметакрилатом (Eastman Organic Chemicals, Рочестер, Нью-Йорк). Делают фронтальные срезы метафизов проксимальной части большеберцовой кости толщиной в 4 и 10 мкм с использованием микротома Polycut S, Reichert-Jung. Один 4-мкм и один 10-мкм срезы от каждой крысы используют для гистоморфометрии губчатого вещества кости. Срезы в 4 мкм окрашивают модифицированным трихромовым красителем Массона, в то время как 10-мкм срезы оставляют неокрашенными.

Для статических и динамических гистоморфометрических измерений вторичных спонгиоз метафизов проксимальной части большеберцовой кости между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку используют гистоморфометрическую систему Bioquant OS/2 (R&M biometrics. Inc., Нашвилл, TN). Первые 1,2 мм области тибиального метафиза нужно пропустить, чтобы ограничить измерения вторичными спонгиозами. Срезы в 4 мкм используют для определения показателей, связанных с костным объемом, структурой кости и резорбцией кости, в то время как 10-мкм срезы используют для определения показателей, связанных с остеогенезом и обменом в кости.

I. Измерения и вычисления, относящиеся к объему губчатой кости и структуре
1. Общая метафизарная площадь (TV, мм²): метафизарная площадь между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку.

2. Площадь губчатой кости (BV, мм²): общая площадь губчатой кости в пределах TV.

3. Периметр губчатой кости (BS, мм): протяженность полного периметра губчатой кости.

4. Объем губчатой кости (BV/TV,%): BV/TV • 100.

5. Число трубчатой кости (TBN, #/мм); 1,199/2•BS/TV.

6. Толщина трубчатой кости (ТВТ, мкм): (2000/1,199)•(BV/BS).

7. Разделение губчатой кости (TBS, мкм): (2000•1,199)•(TV-BV).

II. Измерения и вычисления, относящиеся к резорбции кости
1. Число остеокластов (OCN, # ): общее число остеокластов в пределах общей метафизарной площади.

2. Периметр остеокластов (ОСР, мм): протяженность трабекулярного периметра, покрытого остеокластами.

3. Число остеокластов/мм (OCN/мм, #/мм): OCN/BS.

4. Периметр остеокластов, в процентах (% ОСР, %): ОСР/BS•100.

III. Измерения и вычисления, относящиеся к остеогенезу и обмену
1. Периметр, однократно помеченный кальцеином (SLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного одной кальцеиновой меткой.

2. Периметр, двукратно помеченный кальцеином (DLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного двумя кальцеиновыми метками.

3. Ширина помеченного пространства (ILW, мкм): среднее расстояние между двумя кальцеиновыми метками.

4. Периметр минерализации, в процентах (PMS,%): (SLS/2+DLS)/BS•100.

5. Скорость минеральной аппозиции (MAR, мкм/сутки): ILW/интервал между метками.

6. Скорость остеогенеза/соотв. поверхность (BFR/BS, мкм²/сутки/мкм): (SLS/2+DLS)•MAR/BS.

7. Степень костного обмена (BTR, %/y): (SLS/2+DLS)•MAR/BV•100.

Статистика
Статистические показатели можно вычислить с использованием пакетов StaView 4,0 (Abacus Concepts, Inc., Беркли, Калифорния). Анализ теста на дисперсность (ANOVA) с последующим PLSD по Фишеру можно использовать для сравнения различий между группами.

Протокол испытаний агонистов/антагонистов эстрогена
Агонисты/антагонисты эстрогена представляют класс соединений, которые ингибируют костный обмен и предупреждают индуцированное недостатком эстрогена разрежение кости. Овариэктомизованная крысиная модель разрежения кости широко используется в качестве модели постклимактерического разрежения кости. При использовании этой модели можно проверить эффективность агонистов/антагонистов эстрогена для предупреждения разрежения кости и ингибирования резорбции кости.

В этих исследованиях используют самок крыс Sprague-Dawley (Charles River, Уилмингтон, Миннесота) различного возраста (например, в возрасте 5 месяцев). Крыс во время эксперимента размещают по одной в клетках 20 см • 32 см • 20 см. Всем крысам предоставляют свободный доступ к воде и гранулированному коммерческому корму (Agway ProLab 3000, Agway County Food, Inc., Сиракьюс, Нью-Йорк), содержащему 0,97% кальция, 0,85% фосфора и 1,05 МЕ/г витамина D₃.

Группе крыс (8-10) делают ложную операцию и дают им перорально носитель (10% этанола и 90% физиологического раствора, 1 мл/сутки), в то время как остальным крысам проводят билактеральную овариэктомию (OVX) и дают им либо носитель (р. о.), либо 17β-эстрадиол (Sigma, Е-8876, E2, 30 мкг/кг, ежедневная подкожная инъекция), либо агонисты/антагонисты эстрогена (например, дролоксифен, 5, 10 или 20 мг/кг ежесуточно, перорально) в течение определенного периода (например, 4 недель). Всем крысам делают подкожные инъекции 10 мг/кг кальцеина (флуорохромный костный маркер) за 12 и 2 дня до умервщления с целью проверки динамических изменений в костной ткани. После обработки в течение 4 недель крыс вскрывают. Определяют перечисленные далее показатели.

Прирост массы тела. Из массы тела при аутопсии вычитают массу тела при операции.

Масса матки и гистология. У каждой крысы при аутопсии извлекают матку и сразу взвешивают. После этого проводят гистологические измерения матки, такие как площадь поперечного среза ткани матки, толщина стромы и толщина люминального эпителия.

Общее содержание холестерина в сыворотке. Берут кровь кардиальной пункцией и оставляют свертываться при 4^oС, и затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Образцы сыворотки анализируют на общее содержание холестерина в сыворотке с использованием высокоэффективного калориметрического анализа на холестерин (Boehringer Mannheim Biochemicals, Индианаполис, Индиана).

Минеральные показатели бедренной кости. При аутопсии извлекают из каждой крысы правую бедренную кость и сканируют с использованием двухуровневой рентгеновской абсорбциометрии (DEXA, QDR 1000/W, Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) с программным обеспечением "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота). Размер "скана" 5,08•1,902 см, разрешение составляет 0,0254•0,0127 см, и скорость скана составляет 7,25 мм/с. Полученные при сканировании изображения бедренных костей анализируют и определяют площадь кости, содержание минеральных веществ в кости (ВМС) и минеральную плотность кости (BMD) всей бедренной кости (WF), дистальных бедренных метафизов (DFM), тела бедренной кости (FS) и проксимальных частей бедренных костей (PF).

Гистоморфометрические анализы метафизарного губчатого вещества проксимальной части большеберцовой кости. При аутопсии извлекают правую большеберцовую кость, очищают от мышц и разрезают на три части. Проксимальную часть большеберцовой кости фиксируют в 70% этаноле, обезвоживают при переменной концентрации этанола, обезжиривают в ацетоне, и затем заливают метилметакрилатом (Eastman Organic Chemicals, Рочестер, Нью-Йорк). Делают фронтальные срезы метафизов проксимальной части большеберцовой кости толщиной в 4 и 10 мкм с использованием микротома Polycut S, Reichert-Jung. Один 4-мкм и один 10-мкм срезы от каждой крысы используют для гистоморфометрии губчатого вещества кости. Срезы в 4 мкм окрашивают модифицированным трихромовым красителем Массона, в то время как 10-мкм срезы оставляют неокрашенными.

Для статических и динамических гистоморфометрических измерений вторичных спонгиоз метафизов проксимальной части большеберцовой кости между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку используют гистоморфометрическую систему Bioquant OS/2 (R&M biometrics. Inc., Нашвилл, TN). Первые 1,2 мм области тибиального метафиза пропускают, чтобы ограничить измерения вторичными спонгиозами. Срезы в 4 мкм используют для определения показателей, связанных с костным объемом, структурой кости и резорбцией кости, в то время как 10-мкм срезы используют для определения показателей, связанных с остеогенезом и обменом в кости.

I. Измерения и вычисления, относящиеся к объему губчатой кости и структуре
1. Общая метафизарная площадь (TV, мм²): метафизарная площадь между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку.

2. Площадь губчатой кости (BV, мм²): общая площадь губчатой кости в пределах TV.

3. Периметр губчатой кости (BS, мм): протяженность полного периметра губчатой кости.

4. Объем губчатой кости (BV/TV,%): BV/TV•100.

5. Число трубчатой кости (TBN, #/мм): 1,199/2•BS/TV.

6. Толщина трубчатой кости (ТВТ, мкм): (2000/1,199)•(BV/BS).

7. Разделение губчатой кости (TBS, мкм): (2000•1,199)•(TV-BV).

II. Измерения и вычисления, относящиеся к резорбции кости
1. Число остеокластов (OCN, #): общее число остеокластов в пределах общей метафизарной площади.

2. Периметр остеокластов (ОСР, мм): протяженность трабекулярного периметра, покрытого остеокластами.

3. Число остеокластов/мм (OCN/мм, #/мм): OCN/BS.

4. Периметр остеокластов, в процентах (% ОСР, %): ОСР/BS•100.

III. Измерения и вычисления, относящиеся к остеогенезу и обмену
1. Периметр, однократно помеченный кальцеином (SLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного одной кальцеиновой меткой.

2. Периметр, двукратно помеченный кальцеином (DLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного двумя кальцеиновыми метками.

3. Ширина помеченного пространства (ILW, мкм): среднее расстояние между двумя кальцеиновыми метками.

4. Периметр минерализации, в процентах (PMS, %): (SLS/2+DLS) /BS•100.

5. Скорость минеральной аппозиции (MAR, мкм/сутки): ILW/интервал между метками.

6. Скорость остеогенеза/соотв. поверхность (BFR/BS, мкм²/сутки/мкм): (SLS/2+DLS)•MAR/BS.

7. Степень костного обмена (BTR, %/у): (SLS/2+DLS)•MAR/BV•100.

Статистика
Статистические показатели вычисляют с использованием пакетов StaView 4,0 (Abacus Concepts, Inc. , Веркли, Калифорния). Анализ теста на дисперсность (ANOVA) с последующим PLSD по Фишеру используют для сравнения различий между группами.

Протокол испытаний анаболических средств
Активность анаболических средств в стимулировании остеогенеза и увеличении костной массы можно испытать на интактных самцах или самках крыс, на самцах с недостатком половых гормонов (орхидектомия) или самках с недостатком половых гормонов (овариэктомия).

В этом исследовании используют самцов или самок крыс различного возраста (например, в возрасте 3 месяцев). Крысы являются или интактными, или кастрированными (овариэктомизованными или орхидектомизованными), и им подкожными инъекциями или перорально дают анаболические средства, такие как простагландин Е2 (PGE₂), в разных дозах (например, 1, 3 или 6 мг/кг/сутки) в течение определенного периода времени (например, от 2 недель до 2 месяцев). У кастрированных крыс обработку начинают на другой день после операции (с целью предупреждения разрежения кости) или в момент, когда разрежение кости уже происходит (с целью восстановления костной массы). Во время исследования всем крысам предоставляют свободный доступ к воде и гранулированному коммерческому корму (Teklad Rodent diet #8064, Harlan Teklad, Мэдисон, Висконсин), содержащему 1,46% кальция, 0,99% фосфора и 4,96 МЕ/г витамина D₃. Всем крысам делают подкожные инъекции 10 мк/кг кальцеина за 12 и 2 дня до умерщвления.

Крыс умерщвляют и определяют перечисленные ниже показатели.

Минеральные показатели бедренной кости. При аутопсии извлекают из каждой крысы правую бедренную кость и сканируют с использованием двухуровневой рентгеновской абсорбциометрии (DEXA, QDR 1000/W, Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) с программным обеспечением "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота). Размер "скана" 5,08•1,902 см, разрешение составляет 0,0254•0,0127 см, и скорость скана составляет 7,25 мм/с. Полученные при сканировании изображения бедренных костей анализируют, и определяют площадь кости, содержание минеральных веществ в кости (ВМС) и минеральную плотность кости (BMD) всей бедренной кости (WF), дистальных бедренных метафизов (DEW, тела бедренной кости (FS) и проксимальных частей бедренных костей (PF).

Гистоморфометрические анализы метафизарного губчатого вещества проксимальной части большеберцовой кости. При аутопсии извлекают правую большеберцовую кость, очищают от мышц и разрезают на три части. Проксимальную часть большеберцовой кости фиксируют в 70% этаноле, обезвоживают при переменной концентрации этанола, обезжиривают в ацетоне и затем заливают метилметакрилатом (Eastman Organic Chemicals, Рочестер, Нью-Йорк). Делают фронтальные срезы метафизов проксимальной части большеберцовой кости толщиной в 4 и 10 мкм с использованием микротома Polycut S, Reichert-Jung. Один 4-мкм и один 10-мкм срезы от каждой крысы используют для гистоморфометрии губчатого вещества кости. Срезы в 4 мкм окрашивают модифицированным трихромовым красителем Массона, в то время как 10-мкм срезы оставляют неокрашенными.

Для статических и динамических гистоморфометрических измерений вторичных спонгиоз метафизов проксимальной части большеберцовой кости между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку используют гистоморфометрическую систему Bioquant OS/2 (R&M biometrics. Inc., Нашвилл, TN). Первые 1,2 мм области тибиального метафиза пропускают, чтобы ограничить измерения вторичными спонгиозами. Срезы в 4 мкм используют для определения показателей, связанных с костным объемом, структурой кости и резорбцией кости, в то время как 10-мкм срезы используют для определения показателей, связанных с остеогенезом и обменом в кости.

I. Измерения и вычисления, относящиеся к объему губчатой кости и структуре
1. Общая метафизарная площадь (TV, мм²): метафизарная площадь между дистальными 1,2 мм и 3,6 мм к плоскости роста - эпифизарному стыку.

2. Площадь губчатой кости (BV, мм²): общая площадь губчатой кости в пределах TV.

3. Периметр губчатой кости (BS, мм): протяженность полного периметра губчатой кости.

4. Объем губчатой кости (BV/TV,%): BV/TV•100.

5. Число трубчатой кости (TBN, #/мм): 1,199/2•BS/TV.

6. Толщина трубчатой кости (ТВТ, мкм): (2000/1,199)•(BV/BS).

7. Разделение губчатой кости (TBS, мкм): (2000•1,199)•(TV-BV).

II. Измерения и вычисления, относящиеся к резорбции кости
1. Число остеокластов (OCN, #): общее число остеокластов в пределах общей метафизарной площади.

2. Периметр остеокластов (ОСР, мм): протяженность трабекулярного периметра, покрытого остеокластами.

3. Число остеокластов/мм (OCN/мм, #/мм): OCN/BS.

4. Периметр остеокластов, в процентах (% ОСР, %): ОСР/BS•100.

III. Измерения и вычисления, относящиеся к остеогенезу и обмену
1. Периметр, однократно помеченный кальцеином (SLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного одной кальцеиновой меткой.

2. Периметр, двукратно помеченный кальцеином (DLS, мм): общая протяженность трабекулярного периметра, помеченного двумя кальцеиновыми метками.

3. Ширина помеченного пространства (ILW, мкм): среднее расстояние между двумя кальцеиновыми метками.

4. Периметр минерализации, в процентах (PMS,%): (SLS/2+DLS)/BSx100.

5. Скорость минеральной аппозиции (MAR, мкм/сутки): ILW/интервал между метками.

6. Скорость остеогенеза/соотв. поверхность (BFR/BS, мкм²/сутки/мкм): (SLS/2+DLS)•MAR/BS.

7. Степень костного обмена (ВТК,%/у): (SLS/2+DLS)•MAR/BV•100.

Статистика
Статистические показатели вычисляют с использованием пакетов StaView 4.0 (Abacus Concepts, Inc. , Беркли, Калифорния). Анализ теста на дисперсность (ANOVA) с последующим PLSD по Фишеру используют для сравнения различий между группами.

Анализ связывания эстрогеновых рецепторов in vitro
Анализ связывания эстрогеновых рецепторов in vitro, при котором оценивается способность агонистов/антагонистов эстрогена настоящего изобретения вытеснять [3Н] эстрадиол из рецептора человеческого эстрогена, полученного рекомбинантными методами в дрожжах, используют для определения аффинности соединений данного изобретения к связыванию эстрогенового рецептора. При этом анализе используют перечисленные далее материалы. (1) Буфер для анализа TD-0,3 (содержащий 10 нМ трис, рН 1,6, 0,3 М хлорида калия и 5 ММ дитиотрейтола (DTT) (Sigma Co.), pH 7,6). (2) Используемый радиолиганд представляет [3Н] эстрадиол, полученный от New England Nuclear. (3) Используемый "холодный" лиганд представляет эстрадиол, полученный от Sigma. (4) Рекомбинантный рецептор для человеческого эстрогена hER.

Получают раствор подвергающегося испытанию соединения в TD-0,3 с 4% ДМСО и 16% этанола. Тритированный эстрадиол растворяют в TD-0,3 с таким расчетом, чтобы конечная концентрация при анализе составляла 5 нМ. Также растворяют hER в TD-0,3, чтобы общее количество белка в каждой лунке при анализе составляло 4-10 мкг. С использованием титрационных микропланшетов при каждой инкубации добавляют 50 мкл "холодного" эстрадиола (неспецифическое связывание) или раствора соединения, 20 мкл раствора тритированного эстрадиола и 30 мкл раствора hER. Каждый планшет содержит троекратно повторение для общего связывания и изменяющиеся концентрации соединения. Планшеты инкубируют в течение ночи при 4^oС. Затем реакцию связывания останавливают путем добавления и смешивания 100 мл 3% гидроксилапатита в 10 мМ трис, рН 7,6 и инкубации в течение 15 минут при 4^oС. Смеси центрифугируют и осадок промывают четыре раза 1% тритоном • 100 в 10 мМ трис, рН 7,6. Гидроксилапатитовые осадки суспендируют в экосцинте А, и оценивают радиоактивность с использованием бета-сцинтиграфии. Определяют среднюю величину по результатам всех трех посторных испытаний (число импульсов в минуту, чим). Специфическое связывание вычисляют путем вычитания чим неспецифического связывания (определяемого как чим, сохраняющееся после отделения реакционной смеси, содержащей рекомбинантный рецептор, радиоактивный лиганд и избыток немеченного лиганда) из общего чим (определяемого как число импульсов, сохраняющееся после отделения реакционной смеси, содержащей только рекомбинантный рецептор, радиоактивный лиганд). Возможности соединения определяют посредством определения IC50 (концентрация соединения, необходимая для ингибирования 50% общего специфического связывания тритированного эстрадиола). Определяют специфическое связывание в присутствии соединения в изменяющейся концентрации и вычисляют специфическое связывание как процент от общего специфического связывания радиоактивного лиганда. По данным строят график зависимости процента ингибирования соединением (линейная шкала) от концентрации соединения (логарифмическая шкала).

Протокол испытаний гормонов роста и средств, усиливающих секрецию гормона роста
Соединения, способные стимулировать секрецию GH из культивированных гипофизных клеток крысы, идентифицируют с использованием приведенного далее протокола. Эти испытания также пригодны для сравнения со стандартами для определения уровней дозировки. Клетки выделяют из гипофизов 6-недельных самцов крыс Wistar. После декапитации извлекают передние доли гипофиза и помещают в холодный стерильный сбалансированный солевой раствор Хэнкса в отсутствие кальция или магния (HBSS). Ткани мелко измельчают, затем подвергают двум циклам поддержанного механически ферментативного диспергирования в HBSS с использованием 10 Е/мл бактериальной протеазы (ЕС 3.4.24.4, Sigma P-6141). Смесь ткани с ферментом перемешивают во вращающейся колбе при 30 об/мин в атмосфере с 5% СО₂ примерно при 37^oС в течение примерно 30 мин, примерно через 15 мин гомогенизируют вручную с использованием 10-мл пипетки в течение примерно 30 мин. Эту смесь центрифугируют при 200 об/мин в течение примерно 5 мин. К супернатанту добавляют лошадиную сыворотку для нейтрализации избытка протеазы. Осадок ресуспендируют в свежей протеазе, перемешивают в течение примерно еще 30 мин при описанных ранее условиях и в итоге гомогенизируют вручную через иглу 23. Снова добавляют лошадиную сыворотку. Затем клетки из обоих переваров соединяют, осаждают (200•q в течение примерно 15 мин), промывают, ресуспендируют в культуральной среде и считают. Перед анализом на секрецию GH клетки высевают в 48-луночные планшеты Костара при плотности 6,0-6,5•10⁴ клеток на см² и культивируют в течение 3-4 суток в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (D-MEM) с добавлением 4,5 г/л глюкозы, 10% лошадиной сыворотки, 2,5% сыворотки плода коровы, 1% заменимых аминокислот, 100 Е/мл нистатина и 50 мг/мл гентамицинсульфата.

Непосредственно перед анализом лунки с культурой дважды промывают, затем уравновешивают в течение примерно 30 минут в среде для секреции (D-MEM, забуференная 25 мМ Hepes, рН 7,4, и содержащая 0,5% бычьего сывороточного альбумина, при 37^oС). Испытываемые соединения растворяют в ДМСО, затем разводят в предварительно подогретой среде для секреции. Анализы повторяют четыре раза. Анализ инициируют путем добавления 0,5 мл среды для секреции (с носителем для испытываемого соединения) в каждую культуральную лунку. Инкубацию осуществляют при температуре примерно 37^oС в течение примерно 15 минут, затем прекращают путем удаления культуральной среды, которую центрифугируют при 2000хg в течение примерно 15 минут для удаления клеточного материала. Концентрацию крысиного гормона роста в супернатантах определяют с помощью протокола стандартного радиоиммуноанализа с использованием эталонных препаратов крысиного гормона роста (NIDDK-rGH-RP-2) и антисыворотки к крысиному гормону роста от обезьян (NIDDK-anti-rGH-S-5), полученной от д-ра A. Parlow (Harbor-ULCA Medical Center, Torrence, CA). Еще некоторое количество гормона роста иодируют (1,5 Е/мг, #G2414, Scripps Labs, Сан-Диего, Калифорния) до специфической активности приблизительно 30 мкКи/мкг по методу с хлорамином Т для применения в качестве метки. Иммунные комплексы получают путем добавления козьей антисыворотки к обезьяньему IgG (Organon Teknika, Дарем, Северная Каролина) с добавлением полиэтиленгликоля, МБ 10000-20000, до конечной концентрации 4,3%; извлечение осуществляют центрифугированием. Этот анализ имеет рабочий интервал 0,08-2,5 мкг крысиного гормона роста на пробирку выше основного уровня. Активные соединения обычно стимулируют секрецию гормона роста более чем в 1,4 раза. Ссылка: Cheng, К., Chan, W.-S., Barreto, Jr.A., Convey, E.M., Smith R.G., 1989.

Анализ на экзогенно стимулированную секрецию гормона роста у крысы после внутривенного введения испытываемых соединений
Двадцатиоднодневным самкам крыс Sprague-Dawley (Charles River Laboratory, Уилмингтон, Миннесота) дают возможность акклиматизироваться в условиях местного вивария (24^oС, 12-часовой световой цикл (12 часов при освещении, 12 часов в темноте)) приблизительно в течение 1 недели до испытания соединений. Всем крысам предоставляют доступ к воде и гранулированному коммерческому корму (Agway Country Food, Сиракьюс, Нью-Йорк) ad libitum.

В день эксперимента испытываемые соединения растворяют в носителе, содержащем 1% этанола, 1 мМ уксусной кислоты и 0,1% бычьего сывороточного альбумина в физиологическом растворе. Каждое соединение испытывают при n=3. Крыс взвешивают и дают им наркоз посредством интраперитонеальной инъекции пентобарбитала натрия (нембутол, 50 мг на кг массы тела). Через четырнадцать минут после введения анестетика берут образец крови, надрезая кончик хвоста и позволяя крови капать в микроцентрифужную пробирку (базовый образец крови, приблизительно 100 мкл). Через пятнадцать минут после введения анестетика вводят испытываемое соединение посредством внутривенной инъекции в хвостовую вену, при общем объеме инъекции 1 мл на кг массы тела. Берут из хвоста образцы крови еще через 5, 10 и 15 минут после введения соединения. До отделения сыворотки путем центрифугирования (1430хg в течение 10 минут при 10^oC) образцы крови держат на льду. Сыворотку хранят при -80^oС до определения гормона роста методом радиоиммуноанализа, как описано выше и ниже.

Оценка экзогенно стимулированной секреции гормона роста у собаки после перорального введения испытываемых соединений
В день эксперимента отвешивают соответствующую дозу испытываемого соединения и растворяют в воде. Дозы дают в объеме 0,5 мл/кг посредством кормления через желудочный зонд 4 собакам для каждого режима дозировки. Берут образцы крови (2 мл) из яремной вены прямым уколом в вену перед дачей дозы и через 0,08, 0,17, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 6 и 8 часов после дачи дозы с использованием 2-мл герметичных емкостей, содержащих литийгепарин. Полученную плазму хранят до анализа при -20^oС.

Определение собачьего гормона роста
Концентрацию собачьего гормона роста определяют стандартным радиоиммуноанализом с использованием собачьего гормона роста (антиген для полирования и эталонный препарат AFP-1983B) и антисыворотки к собачьему гормону роста, полученной у обезьяны (AFP-21452578), полученной от д-ра А. Parlow (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA). Метку получают путем иодирования с хлорамином Т собачьего гормона роста до специфической активности 20-40 мкКи/мкг. Иммунные комплексы получают путем добавления козьей антисыворотки к обезьяньему IgG (Organon Teknika, Дарем, Северная Каролина) с добавлением полиэтиленгликоля, MB 10000-20000, до конечной концентрации 4,3%; извлечение осуществляют центрифугированием. Этот анализ имеет рабочий интервал 0,08-2,5 мкг собачьего гормона роста на пробирку.

Введение соединений данного изобретения можно осуществить любым способом, который доставит соединение данного изобретения системно и/или местно. К этим способам относятся пероральный способ, парентеральный, интрадуоденальный способы и т.д. Обычно соединения данного изобретения вводят перорально, но можно применять и парентеральное введение (например, внутривенное, внутримышечное, подкожное или интрамедуллярное), например, когда для данного объекта пероральное введение не подходит, или когда пациент не способен проглотить лекарственное средство. Два различных соединения данного изобретения можно вводить совместно, одновременно или последовательно в любом порядке, или можно вводить единую фармацевтическую композицию, содержащую описанное выше первое соединение и описанное выше второе соединение.

Например, костное анаболическое средство можно применять одно или в комбинации с противорезорбционным средством в течение периода от трех месяцев до трех лет, с последующим применением одного противорезорбционного средства в продолжение периода от трех месяцев до трех лет, с необязательным повторением полного цикла лечения. С другой стороны, например, костное анаболическое средство можно применять одно или в комбинации с противорезорбционным средством в течение периода от трех месяцев до трех лет, с последующим применением одного противорезорбционного средства в продолжение остального периода жизни пациента. Например, при одном из предпочтительных вариантов введения описанное выше второе соединение (например, PGE₂) можно вводить один раз в сутки, а описанное выше первое соединение (например, агонист/антагонист эстрогена) можно вводить ежесуточно в виде однократной или многократной дозы. С другой стороны, например, при другом предпочтительном варианте введения два соединения можно вводить последовательно, при этом второе описанное выше соединение (например, PGE₂) можно вводить один раз в сутки на протяжении периода, достаточного для нарастания костной массы до уровня, который превышает порог перелома (исследование Всемирной Организации Здравоохранения "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a World Health Organization Study Group. World Health Organization Technical Series 843"), с последующим введением описанного выше первого соединения (например, агониста/антагониста эстрогена) ежесуточно в виде однократной или множественной дозы. Предпочтительно, чтобы описанное выше второе соединение (например, РСЕ₂) вводили один раз в сутки в форме для быстрой доставки, такой как пероральная доставка (например, предпочтительно избегать формы с отсроченным высвобождением).

В любом случае количество вводимых соединений и хронометраж введения будут зависеть, конечно, от объекта, подвергающегося лечению, от тяжести болезни, от способа введения и от оценки врача, назначающего лечение. Таким образом, из-за возможности изменений при переходе от пациента к пациенту приведенные ниже дозы являются ориентировочными, и лечащий врач может назначить (оттитровать) дозы лекарственного средства для достижения воздействия (например, нарастания костной массы), которые он посчитает подходящими для отдельного пациента. При расчете желательной степени активности врач должен принять во внимание множество факторов, таких как исходный уровень костной массы, возраст пациента, имевшиеся ранее заболевания, а также наличие других заболеваний (например, сердечно-сосудистых). Например, введение агониста/антагониста эстрогена может стать благоприятным для сердечно-сосудистой системы, особенно у женщин в постклимактерический период. В приведенных ниже разделах даются предпочтительные дозовые интервалы для различных компонентов данного изобретения.

Количество используемого противорезорбционного средства определяется его активностью как средства, ингибирующего разрежение кости. Эту активность определяют по фармакокинетеке отдельного соединения и его минимальной максимально эффективной дозе при ингибировании разрежения кости с использованием описанного выше протокола (Протокол испытаний агонистов/антагонистов эстрогена).

Вообще, эффективная дозировка для воздействия по данному изобретению, например, на резорбцию кости для первого соединения данного изобретения находится в интервале 0,01-200 мг/кг/сутки, предпочтительно 0,5-100 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для дролоксифена находится в интервале от 0,1 до 40 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 5 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для ралоксифена находится в интервале от 0,1 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для тамоксифена находится в интервале от 0,1 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 5 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] 5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил] 5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталина;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4''-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола; или
1- (4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина находится в интервале от 0,0001 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,001 до 10 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для 4-гидрокситамоксифена находится в интервале от 0,0001 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,001 до 10 мг/кг/сутки.

Вообще, применяют количество костного анаболического средства (например, PGE₂), достаточное для наращивания костной массы до уровня, превышающего пороговый предел перелома кости (что подробно описывается в исследовании Всемирной Организации Здравоохранения, цитированном выше).

Вообще, эффективная дозировка для костного анаболического средства, описанного выше, находится в интервале от 0,001 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для PGE₂ находится в интервале от 0,001 до 10 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,01 до 1 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для 3S-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-2R-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил] -циклопентанона находится в интервале от 0,001 до 20 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,01 до 10 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для фторида натрия находится в интервале от 0,01 до 50 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,2 до 10 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для паратиреоидного гормона и его метаболитов и фрагментов находится в интервале от 0,00001 до 1 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,001 до 0,5 мг/кг/сутки.

В частности, эффективная дозировка для гормона роста или средств, усиливающих секрецию гормона роста, находится в интервале от 0,0001 до 100 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,01 до 5 мг/кг/сутки.

Соединения настоящего изобретения обычно вводят в форме фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно из соединений данного изобретения вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Таким образом, соединения данного изобретения можно вводить по отдельности или вместе в любой традиционной пероральной, парентеральной или трансдермальной лекарственной форме.

Фармацевтическая композиция для перорального введения может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и т.п. В таблетках, содержащих различные эксципиенты, такие как цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция, также используют различные дезинтеграторы, такие как крахмал, и предпочтительно картофельный крахмал или крахмал тапиоки, и некоторые комплексные силикаты, а также связующие, такие как поливинил-пирролидон, сахароза, желатин и аравийская камедь. Кроме того, для приготовления таблеток часто весьма полезны смазывающие вещества, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. Твердые композиции подобного типа также используются в качестве наполнителей в мягких или твердых желатиновых капсулах; предпочтительными веществами в таком случае также являются лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Когда для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, соединения данного изобретения можно соединять с различными смачивателями, корригентами, красителями, эмульгаторами и/или суспендирующими агентами, а также с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различными подобными их сочетаниями.

С целью парентерального введения можно использовать растворы в сезамовом или арахисовом масле или в водном пропиленгликоле, а также стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. Такие водные растворы можно, при необходимости, подходящим образом забуферить, а жидкому разбавителю придать сначала изотоничность достаточным количеством солевого раствора или глюкозы. Водные растворы особенно подходят для внутривенных, внутримышечных, подкожных и интраперитонеальных инъекций. Все применяемые для этого стерильные водные среды можно легко получить стандартными способами, хорошо известными специалистам в этой области техники.

Для целей трансдермального (например, местного) введения готовят разбавленные стерильные, водные или частично водные растворы (обычно в концентрации примерно 0,1-5%), или растворы, подобные описанным выше парентеральным растворам.

Способы получения различных фармацевтических композиций с определенным количеством активного ингредиента известны или будут очевидны для специалистов в этой области с учетом данного описания. Для примера см. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975).

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут содержать 0,1-95% соединения (соединений) изобретения, предпочтительно 1-70%. В любом случае композиция или состав, которые назначаются, будут содержать соединение (соединения) по изобретению в количестве, эффективном для лечения заболевания/состояния пациента, которого лечат.

Так как настоящее изобретение относится к наращиванию и сохранению костной массы посредством лечения комбинацией активных ингредиентов, которые можно вводить по отдельности, изобретение также относится к комбинации отдельных фармацевтических композиций в форме набора. Такой набор включает две отдельные фармацевтические композиции: агонист/антагонист эстрогена и анаболическое средство. Набор включает упаковочные средства для помещения в них отдельных композиций, такие как градуированный флакон или пакет из фольги с отдельными секциями. Как правило, набор включает инструкции по введению отдельных компонентов. Форма набора особенно выгодна, когда предпочтительно вводить отдельные компоненты в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), вводить с разными интервалами между дозами, или когда желательно титрование отдельных компонентов комбинации назначающим лечение врачом.

Примером такого набора является так называемая блистер-упаковка. Блистер-упаковки хорошо известны в индустрии упаковочных материалов и широко применяются для упаковки стандартных лекарственных форм (таблетки, капсулы и т. п. ). Блистер-упаковка обычно состоит из пленки из относительно жесткого материала, покрытого слоем фольги, предпочтительно прозрачного пластика. В процессе упаковки в пластиковой фольге формируются углубления. Эти углубления имеют размер и форму таблеток или капсул, которые упаковывают. Затем в углубления помещают таблетки или капсулы, и со стороны фольги, которая противоположна направлению формирования углублений, герметично закрывают пленкой относительно жесткого материала. В результате, таблетки или капсулы оказываются герметично упакованными в углублениях между пластиковой фольгой и пленкой. Предпочтительно прочность пленки такова, чтобы таблетки или капсулы можно было извлечь из блистер-упаковки вручную, надавив на углубление и образуя, таким образом, отверстие в пленки в месте углубления. Затем через указанное отверстие можно извлечь таблетку или капсулу.

Если желательно, на ярлыке дается памятка, например, в форме указанных за таблетками или капсулами номеров, где номера соответствуют дням режима, в которые помеченные таким образом таблетки или капсулы следует принимать. Другим примером такой памятки является отпечатанный на ярлыке календарь, например такой:
"Первая неделя, понедельник, вторник... и т.д.... Вторая неделя, понедельник, вторник..." и т.д. Легко можно представить и другие варианты памятки. "Суточная доза" может представлять одну таблетку или капсулу или несколько пилюль или капсул, которые принимают в данный день. Также суточная доза анаболического средства может состоять из одной таблетки или капсулы, в то время как суточная доза противорезорбционного средства может состоять из нескольких таблеток или капсул. В памятке это должно отражаться.

В другом конкретном варианте воплощения изобретения дается дозатор, сконструированный для отпуска ежесуточных доз в момент, предназначенный для применения. Предпочтительно дозатор снабжается памяткой, с тем чтобы в дальнейшем облегчить согласование с режимом. Примером такой памятки является механическое счетное устройство, которое показывает число ежесуточных доз, которые отпущены. Другим примером такой памятки является работающий на батарейках микропроцессор в сочетании с жидкокристаллическим выводом или со звуковым напоминающим сигналом, который, например, произносит вслух дату приема последней суточной дозы и/или напоминает пациенту, когда следует принимать следующую дозу.

Пример
В месяц 0 ста четырем самкам крыс Sprague-Dawley (Charles River, Уилмингтон, Миннесота) в возрасте 12 месяцев осуществляют ложную операцию или овариэктомию (OVX). Через три месяца после операции OVX-крысы получают в течение 2 месяцев либо простагландин Е₂ (PGE₂) - известное костное анаболическое средство в количестве 3 мг/кг/сутки (подкожная инъекция), либо PGE₂ в количестве 3 мг/кг/сутки (подкожная инъекция) в комбинации с дролоксифеном (DRO) в количестве 10 мг/кг/сутки (перорально). После этого обработку PGE₂ прекращают, и крыс обрабатывают либо носителем (10% спирта в физиологическом растворе), либо DRO (10 мг/кг/сутки, перорально) еще в течение полутора месяцев, как описано ниже.

Группа I. Восемь крыс вскрывают в месяц 0 в качестве основного контроля.

Группа II. Восемь ложно-оперированных крыс вскрывают в 3 месяц в качестве контроля перед обработкой.

Группа III. Восьми ложно-оперированным крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная с месяца 3 до 5 месяца, и вскрывают в месяц 5.

Группа IV. Восьми ложно-оперированным крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе) начиная с месяца 3 до 6,5, и вскрывают в месяц 6,5.

Группа V. Восемь OVX-крыс вскрывают в месяц 3 в качестве контроля перед обработкой.

Группа VI. Восьми OVX-крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная с месяца 3 до 5 месяца, и вскрывают в месяц 5.

Группа VII. Восьми OVX-крысам дают перорально носитель (10% этанола в физиологическом растворе), начиная с месяца 3 до 6,5, и вскрывают в месяц 6,5.

Группа VIII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и вскрывают в месяц 5.

Группа IX. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и носитель, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа X. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂, начиная с месяца 3 до 5, и дают 10 мг/кг/сутки DRO перорально, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа XI. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO перорально, начиная с месяца 3 до 5, и затем вскрывают в месяц 5.

Группа XII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO перорально, начиная с месяца 3 до 5, и носитель, начиная с месяца 5 до 6,5, и затем вскрывают в месяц 6,5.

Группа XIII. Восьми OVX-крысам делают подкожную инъекцию 3 мг/кг/сутки PGE₂ и дают 10 мг/кг/сутки DRO перорально, начиная с месяца 3 до 5, и дают один DRO, начиная с месяца 5 до 6,5, затем вскрывают в месяц 6,5.

Порошок PGE₂ (Cayman Chemical Co., Анн-Арбор, Мичиган) или дролоксифена (Pfizer Inc., Гротон, Коннектикут) сначала растворяют в 100% этаноле, а затем разбавляют физиологическим раствором до нужной концентрации (конечная концентрация этанола 10%). Раствор PGE₂ вводят ежесуточно подкожной инъекцией в спину в количестве 1 мл/кг. Раствор дролоксифена дают ежесуточно перорально в количестве 1 мл на крысу.

Минеральные показатели поясничных позвонков. Используют двухуровневую рентгеновскую абсорбциометрию (QDR 1000/W, Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) с программным обеспечением "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Уолтхам, Миннесота) для определения у находящихся под наркозом крыс площади кости, содержания минеральных веществ в кости (ВМС) и минеральной плотности кости (BMD) всего поясничного отдела позвоночника и каждого из шести поясничных позвонков (LV1-6). Крыс анестезируют посредством инъекции (ип) 1 мл/кг смеси кетамина с ромпуном (в соотношении 4:3) и затем помещают на площадку для крыс. Размер "скана" 6•1,9 см, разрешение составляет 0,0254•0,0127 см, и скорость скана составляет 7,25 мм/с. Получают и анализируют изображение всего поясничного отдела позвоночника. Определяют площадь кости (ВА) и содержание минеральных веществ в кости (ВМС), а минеральную плотность (BMD) вычисляют (МВС делят на ВА), для всего поясничного отдела позвоночника и для каждого из шести поясничных позвонков (LV1-6).

В месяцы 3, 5 или 6,5 после операции ВМС и BMD всего поясничного отдела позвоночника и каждого из поясничных позвонков у OVX-крыс существенно снижаются - на 15-27% по сравнению с контролем с ложной операцией. В месяц 3 крысы после OVX, обработанные в течение 2 месяцев либо одним PGE₂, либо в комбинации с DRO, полностью восстанавливают ВМС и BMD до уровня у ложно-оперированных контрольных крыс. Не отмечается различий в ВМС и BMD у OVX-крыс, обработанных либо одним PGE₂, либо PGE₂ в комбинации с DRO, что указывает, что DRO не притупляет анаболического действия PGE₂. После прекращения обработки PGE₂ наблюдается существенное снижение BMD LV1, LV2 и LV3 и ВМС LV2. С другой стороны, когда после прекращения обработки PGE₂a этим OVX-крысам дают DRO, восстановленная PGE₂ кость полностью сохраняется. Подобным образом, перерыв в приеме PGE₂ и DRO в течение 1,5 месяцев приводит к существенному снижению BMD LV3. Однако, когда прекращают обработку PGE₂, а обработку DRO продолжают еще в течение 1,5 месяцев, разрежение кости в поясничном отделе позвоночника этих OVX-крыс не обнаруживается. Можно сделать вывод, что противорезорбционное средство DRO не притупляет анаболического действия PGE₂ на остеогенез у крыс. Кроме того, DRO эффективно действует по сохранению восстановленной PGE₂ кости после прекращения подачи PGE₂. Эти данные подтверждают стратегию с применением анаболического средства для восстановления костной массы в пораженном остеопорозом скелете и последующем применении противорезорбционного средства для поддержания восстановленной костной массы.

Следует иметь в виду, что данное изобретение не ограничивается конкретными вариантами его воплощения, описанными здесь, но что можно осуществить различные изменения и модификации без отхода от сущности и объема этой новой концепции, которая определяется приведенной далее формулой изобретения.

Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим агонисты/антагонисты эстрогена и простагландины или агонисты/антагонисты простагландина, а также к наборам этих композиций для лечения костных нарушений, в том числе остеопороза. Изобретение увеличивает (сохраняет) костную массу, в результате чего предупреждается, замедляется и/или регрессирует остеопороз и родственные костные нарушения. 8 с. и 25 з.п. ф-лы.

1. Фармацевтическая композиция для лечения пониженной костной массы, содержащая а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение является агонистом/антагонистом эстрогена; и б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение является простагландином или агонистом/антагонистом простагландина. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая, кроме того, фармацевтический носитель. 3. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что агонист/антагонист эстрогена представляет собой дролоксифен, ралоксифен, тамоксифен, 4-гидрокситамоксифен,
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил]-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4"-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
4. Фармацевтическая композиция по п. 3, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой PGD₁, PGD₂, PGE₂, PGE₁, PGF₂, PGF₂, PGF₂α или 3S-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-2R-[6-(1Н-тетразол-5-ил)-гексил]-циклопентанон. 5. Фармацевтическая композиция по п. 4, отличающаяся тем, что агонист/антагонист эстрогена представляет собой дролоксифен. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой PGE₂. 7. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой 3S-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-2R-[6-(1Н-тетразол-5-ил)-гексил]-циклопентанон. 8. Фармацевтическая композиция по п. 4, отличающаяся тем, что агонист/антагонист эстрогена представляет собой
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4"-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин. 9. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой PGЕ₂. 10. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой 3S-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-2R-[6-(1Н-тетразол-5-ил)-гексил]-циклопентанон. 11. Набор, содержащий лекарства на курс лечения пониженной костной массы, содержащий а. терапевтически эффективное количество агониста/антагониста эстрогена и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; б. терапевтически эффективное количество простагландина или агониста/антагониста простагландина и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной леарственной форме; и в. упаковочное средство для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм. 12. Фармацевтическая композиция для лечения пониженной костной массы, содержащая а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет собой дролоксифен, ралоксифен, тамоксифен или идоксифен; и б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет собой фторид натрия или N-[1(R)-[1,2-Дигидро-1-метансульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин] -1'-ил)-карбонил] -2-(фенилметилокси)этил]-2-амино-2-метилпропанамид: МК-677. 13. Фармацевтическая композиция по п.12, содержащая, кроме того, фармацевтический носитель. 14. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что первое соединение представляет собой дролоксифен. 15. Набор, содержащий лекарства на курс лечения пониженной костной массы, содержащий a. терапевтически эффективное количество дролоксифена, ралоксифена, тамоксифена или идоксифен и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; б. терапевтически эффективное количество фторида натрия или N-[1(R)-[1,2-Дигидро-1-метансульфонилспиро[3Н-индол-3,4'-пиперидин]-1'-ил)-карбонил]-2-(фенилметилокси)этил]-2-амино-2-метилпропанамид:МК-677 и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и в. упаковочное средство для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм. 16. Набор по п.15, отличающийся тем, что первое соединение представляет собой дролоксифен. 17. Фармацевтическая композиция для лечения пониженной костной массы, содержащая а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет собой
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4"-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин; б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет собой фторид натрия, паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, стимулирующее секрецию гормона роста. 18. Фармацевтическая композиция по п.17, содержащая, кроме того, фармацевтический носитель. 19. Фармацевтическая композиция по п.18, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой фторид натрия. 20. Фармацевтическая композиция по п.18, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой паратиреоидный гормон. 21. Фармацевтическая композиция по п.18, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой гормон роста. 22. Фармацевтическая композиция по п.18, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой средство, стимулирующее секрецию гормона роста. 23. Набор, содержащий лекарства на курс лечения пониженной массы, содержащий а. терапевтически эффективное количество
цис-6-(4-фторфенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
(-)-цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-6-фенил-5-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол;
цис-1-[6'-пирролидиноэтокси-3'-пиридил] -2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин;
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-(4"-фторфенил)-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин;
цис-6-(4-гидроксифенил)-5-[4-(2-пиперидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол; или
1-(4'-пирролидиноэтоксифенил)-2-фенил-6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин; и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; б. терапевтически эффективное количество фторида натрия, паратиреоидного гормона, гормона роста или средства, стимулирующего секрецию гормона роста, и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и в. упаковочное средство для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм. 24. Фармацевтическая композиция для лечения пониженной костной массы, содержащая а. терапевтически эффективное количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет собой ралоксифен, тамоксифен или идоксифен; и б. терапевтически эффективное количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет собой паратиреоидный гормон, гормон роста или средство, стимулирующее секрецию гормона роста, при условии, что, когда первым соединением является ралоксифен, вторым соединением может быть любое из вышеупомянутых, кроме паратиреоидного гормона. 25. Фармацевтическая композиция по п.24, содержащая, кроме того, фармацевтический носитель. 26. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся тем, что первое соединение представляет собой ралоксифен. 27. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой паратиреоидный гормон. 28. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой гормон роста. 29. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся тем, что второе соединение представляет собой средство, стимулирующее секрецию гормона роста. 30. Набор, содержащий лекарства на курс лечения пониженной костной массы, содержащий а. терапевтически эффективное количество ралоксифена, тамоксифена или идоксифен и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме; б. терапевтически эффективное количество паратиреоидного гормона, гормона роста или средства, стимулирующего секрецию гормона роста, и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и в. упаковочное средство для упаковки указанных первой и второй лекарственных форм, при условии, что, когда первым соединением является ралоксифен, вторым соединением может быть любое из вышеупомянутых, кроме паратиреоидного гормона. 31. Фармацевтическая композиция по п.24, в которой первое соединение представляет собой ралоксифен, а вторым соединением является средство, стимулирующее секрецию гормона роста. 32. Фармацевтическая композиция по п.31, в которой указанное второе соединение представляет собой 2-амино-N-[2-(3a-(R)-бензил-2-метил-3-оксо-2,3,3а, 4,6,7-гексагидропиразоло-[4,3-с] пиридин-5ил)-1(R)-бензилоксиметил-2-оксо-этил]-изобутирамид или его соль L-винной кислоты. 33. Фармацевтическая композиция по п. 31 или 32, в которой указанным первым соединением является (-)-цис-6-фенил-5-[4(2-пирролидин-1-ил-этокси)-фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол или его фармацевтически приемлемая соль, а указанное средство, стимулирующее секрецию гормона роста представляет собой 2-амино-N-[2-(3a-(R)-бензил-2-метил-3-оксо-2,3,3а,4,6,7-гексагидропиразоло-[4,3-с]пиридин-5ил)-1(R)-бензилоксиметил-2-оксо-этил]-изобутирамид или его соль L-винной кислоты.