ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ Российский патент 2002 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 C12N1/20 C12R1/42 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики брюшного тифа, паратифов, сальмонеллеза.

В настоящее время для данного целевого назначения используется сухая селенитовая среда для накопления сальмонелл и шигелл [1].

Недостатком данной среды является незначительное накопление культур и слабая ингибиция кишечной палочки.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является Тетратионатный бульон (Tetrationate broth), содержащий в качестве азотистого питания пептон из мяса, мясной и дрожжевой экстракты, а также хлорид натрия, тиосульфат натрия, карбонат кальция, селективные агенты - бриллиантовый зеленый, сухую желчь и раствор Люголя [2].

Отечественный вариант Тетратионатного бульона - среда Мюллера-Кауфмана, готовится на мясопептонном бульоне, содержащем 0,5% хлорида натрия с добавлением тех же ингредиентов, а вместо сухой желчи в среду вводят нативную бычью желчь [3].

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда Мюллера-Кауфмана недостаточно селективная среда, кроме того, в состав среды входит нерастворимая углекислая соль кальция, образующая плотный белый осадок, вследствие чего возникают неудобства в ее использовании.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды, улучшение ее прозрачности и растворимости.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания она содержит панкреатический гидролизат рыбы и пептон ферментативный, в качестве углекислой соли - карбонат натрия, хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - раствор Люголя, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В - дополнительно содержит экстракт кормовых дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбы - 6,6-6,8
Хлорид натрия - 3,2-3,4
Пептон ферментативный, сухой - 4,9-5,1
Экстракт кормовых дрожжей - 2,4-2,6
Тиосульфат натрия - 39,0-41,0
Карбонат натрия - 0,45-0,55
Бриллиантовый зеленый - 0,009-0,011
Раствор Люголя - 18,0-22,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Содержание в данной среде тиосульфата натрия, раствора Люголя и бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (кишечная палочка, грамположительные кокки). Среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост и накопление культур при посеве из разведения 10^-7. Эффективность накопления в среде составляет 10⁶ раз. Время генерации культуры от 30 до 40 минут. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО "Питательные среды" [4].

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбу с 0,6 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, взятые в количестве: панкреатический гидролизат рыбы - 6,6 г, хлорид натрия - 3,2 г, пептон ферментативный, сухой - 4,9 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,40 г, тиосульфат натрия - 39,0 г, карбонат натрия - 0,45 г, бриллиантовый зеленый - 0,009 г. Навески сухих ингредиентов тщательно размешивают, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, полученную суспензию доводят до кипения, pН среды 7,6±0,2, что соответствует минимальной концентрации ингредиентов. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при 110^oС 20 минут. Охлаждают до температуры 45-50^oС и вносят 18 мл раствора Люголя (йод металлический - 4,0 г, йодистый калий - 5,0 г, вода дистиллированная - 20 мл). Тщательно перемешивают, разливают в стерильные пробирки по 9 мл. Среда после внесения раствора Люголя засевается сразу тест-культурами и не подлежит хранению. После посева микробной взвеси тест-штамма пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37^oС в течение 22±2 часа.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,7 г, хлорид натрия - 3,3 г, пептон ферментативный, сухой - 5,0 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,5 г, тиосульфат натрия - 40,0 г, карбонат натрия - 0,5 г, бриллиантовый зеленый - 0,01 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН среды 7,6±0,2, что соответствует оптимальной концентрации ингредиентов.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,8 г, хлорид натрия - 3,4 г, пептон ферментативный - 5,1 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,6 г, тиосульфат натрия - 41,0 г, карбонат натрия - 0,55 г, бриллиантовый зеленый - 0,011 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН 7,6±0,2, что соответствует максимальной концентрации ингредиентов.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления сальмонелл представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом - средой Мюллера-Кауфмана). На среде Мюллера-Кауфмана ингибиция кишечной палочки составляет 10%, на селенитовой среде - 20%, тогда как на предлагаемой питательной среде наблюдается полная 100% ингибиция кишечной палочки, при сохранении высоких накопительных свойств. Эффективность накопления на предлагаемой и контрольной среде составляет 10⁶ paз.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа.

Источники информации
1. ВФС 42-4ВС-85 Питательная среда для накопления сальмонелл, сухая (селенитовая среда Лейфсона).

2. Г.П. Калина, В.Л. Шиганова. Среда с хлористым магнием для обнаружения сальмонелл. Лаб. дело, 1972, 4, с. 240-243.

3. А. С. Лабинская. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978, с. 348-349, 361.

4. ФС 42-224ВС-88. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Может быть использовано для бактериологической диагностики брюшного тифа, паратифов, сальмонеллеза. Питательная среда содержит, г/л: панкреатический гидролизат рыбы 6,6-6,8; пептон ферментативный сухой 4,9-5,1; экстракт кормовых дрожжей 2,4-2,6; хлорид натрия 3,2-3,4; тиосульфат натрия 39,0-41,0; бриллиантовый зеленый 0,009-0,011; раствор Люголя 18,0-22,0; натрия карбонат 0,45-0,55; воду дистиллированную до 1 л. Питательная среда позволяет полностью ингибировать рост сопутствующей микрофлоры при сохранении высоких накопительных свойств. 1 табл.

Питательная среда для накопления сальмонелл, содержащая питательную основу, углекислую соль, хлорид натрия, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, раствор Люголя, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит панкреатический гидролизат рыбы и пептон ферментативный сухой, в качестве углекислой соли - натрия карбонат, дополнительно содержит экстракт кормовых дрожжей в качестве стимулятора роста при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбы - 6,6-6,8
Хлорид натрия - 3,2-3,4
Пептон ферментативный сухой - 4,9-5,1
Экстракт кормовых дрожжей - 2,4-2,6
Тиосульфат натрия - 39,0-41,0
Натрия карбонат - 0,45-0,55
Бриллиантовый зеленый - 0,009-0,011
Раствор Люголя - 18,0-22,0
Вода дистиллированная - До 1 л