ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ Российский патент 2006 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения шигелл, сальмонелл, кишечной палочки и других энтеробактерий в воде, пищевых продуктах, а также различном инфекционном материале.

В настоящее время для данного целевого назначения используется питательная среда №3 для контроля микробной загрязненности (1). Недостатком данной среды являются слабые ингибиторные свойства в отношении грамположительных кокков (S.aureus) и спорообразующих почвенных сапрофитов (B.cereus).

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является ЕЕ-бульон, для накопления энтеробактерий (ЕЕ Broth, Mossel), содержащий в качестве азотистого питания пептический перевар животной ткани, триптозу, а также глюкозу, натрий гидрофосфат, калий дигидрофосфат, селективные агенты - желчь очищенную и бриллиантовый зеленый (2).

Отечественный вариант ЕЕ-бульона для накопления энтеробактерий - среда обогащения ЕЕ, готовится на 1% пептонной воде с добавлением также ингредиентов, а вместо сухой желчи вводится нативная бычья желчь или желчные соли (3).

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда обогащения ЕЕ обладает слабой эффективностью накопления шигелл.

Задача предлагаемого изобретения - повышение эффективности накопления шигелл.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания среда содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве буферных солей - натрий гидрофосфат и калий дигидрофосфат, глюкозу, селективные агенты - желчь очищенную сухую и бриллиантовый зеленый, дополнительно содержит хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, и экстракт кормовых дрожжей - в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический гидролизат рыбы9,9-10,1Хлорид натрия4,9-5,1Глюкоза4,9-5,1Экстракт кормовых дрожжей1,9-2,1Натрий гидрофосфат3,7-3,9Калий дигидрофосфат0,9-1,1Желчь очищенная сухая19,0-21,0Бриллиантовый зеленый0,014-0,016

Содержание в данной среде сухой желчи и бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (грамположительные кокки, спорообразующие почвенные сапрофиты). Среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост и накопление культур - энтеробактерий при посеве из разведения 10^-7, эффективность накопления в среде составляет 2,0-10⁶ раз. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО «Питательные среды» (4).

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 9,9 г панкреатического гидролизата рыбы, 4,9 г хлорида натрия, 4,9 г глюкозы, 1,9 г экстракта кормовых дрожжей, 3,7 г натрия гидрофосфата, 0,9 г калия дигидрофосфата, 19,0 г желчи очищенной сухой, 0,014 г бриллиантового зеленого.

Среду доводят до кипения, рН должен соответствовать 7,3±0,2, разливают в стерильные пробирки по 9,5 мл, стерилизуют автоклавированием при температуре 110°С в течение 20 минут. Охлаждают до температуры 30-37°С и засевают тест-культурами. После посева микробной взвеси тест-штаммов пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37°С в течение 22±2 часа.

Пример 2. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 10,0 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,0 г хлорида натрия, 5,0 г глюкозы, 2,0 г экстракта кормовых дрожжей, 3,8 г натрия гидрофосфата, 1,0 г калия дигидрофосфата, 20,0 г желчи очищенной сухой, 0,015 г бриллиантового зеленого.

Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 10,1 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,1 г хлорида натрия, 5,1 г глюкозы, 2,1 г экстракта кормовых дрожжей, 3,9 г натрия гидрофосфата, 1,1 г калия дигидрофосфата, 21,0 г желчи очищенной сухой, 0,016 г бриллиантового зеленого. Далее согласно примеру 1.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления энтеробактерий представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом - ЕЕ-бульоном Mossel (Himedia)). На данном бульоне и других средах сравнения эффективность накопления шигелл составляет 10³-10⁴ раз, тогда как на предлагаемой питательной среде тот же показатель на два порядка выше и составляет 2,2·10⁶ раз при сохранении высоких ингибиторных свойств. На ЕЕ-бульоне и предлагаемой среде наблюдается полная 100% ингибиция грамположительных кокков и спорообразующих грамположительных палочек.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа.

Источники информации

1. М.М.Меджидов. Справочник по микробиологическим питательным средам. М.: Медицина, 2003, с.141-142.

2. EE-Broth, Mossel. Culture Media Catalogue Himedia, 2002-2003, p.303-305.

3. И.В.Голубева, В.А.Килессо и др. Энтеробактерий. Руководство для врачей. Под редакцией академика АМН СССР В.И.Покровского. М.: Медицина, 1985, с.262.

4. ФС 42-224 ВС-88. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления энтеробактерийПитательная средаСкорость роста (час)Чувствительность (мкт)Эффективность (кратность) накопления (п·10^п)Ингибиция сопутствующей микрофлоры, %шигеллсальмонеллкишечной палочкиграмположительные коккиспорообразующие грамположит. палочкиПредлагаемая среда22,0±2,05,02,2·10⁶3,0·10⁶5,5·10⁶100,0 полная100,0 полнаяЕЕ-бульон-прототип22,0±2,05,02,0·10⁴3,5-10⁶5,1·10⁶100,0 полная100,0 полнаяСреда обогащения ЕЕ в модификации Г.П.Калины22,0±2,05,03,0·10³2,0·10⁶3,0·10⁶90,0 частичная80,0 частичнаяПитательная среда №3 для контроля микробной загрязненности22,0±2,05,02,0·10⁴2,5·10⁶3,5·10⁶80,0 частичная5,0 частичная

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения шигелл, сальмонелл, кишечной палочки и других энтеробактерий в воде, пищевых продуктах, а также различном инфекционном материале. Питательная среда в качестве источника азотистого питания содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - желчь очищенную сухую и бриллиантовый зеленый, буферные соли - гидрофосфат натрия и дигидрофосфат калия, глюкозу и дополнительно хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, и экстракт кормовых дрожжей в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В. Питательная среда за счет сбалансированности азотистого питания позволяет повысить эффективность накопления шигелл при сохранении высоких ингибиторных свойств среды. 1 табл.

Питательная среда для накопления энтеробактерий, содержащая питательную основу, глюкозу, натрий гидрофосфат, калий дигидрофосфат, желчь очищенную сухую, бриллиантовый зеленый, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит хлорид натрия и экстракт кормовых дрожжей, в качестве питательной основы - панкреатический гидролизат рыбы, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический гидролизат рыбы9,9-10,1Хлорид натрия4,9-5,1Глюкоза4,9-5,1Экстракт кормовых дрожжей1,9-2,1Натрий гидрофосфат3,7-3,9Калий дигидрофосфат0,9-1,1Желчь очищенная сухая19,0-21,0Бриллиантовый зеленый0,014-0,016