ПИРАЗОЛ[3,4-D]ПИРИМИДИНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНЫМ И АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКИМ/ПРОТИВОАСТМАТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2002 года по МПК C07D487/04 A61K31/519 A61P25/08 A61P11/06 C07D487/04 C07D239/00 C07D231/10 

Изобретение относится к пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-онам и пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-тионам и их таутомерам, имеющим в положении 2 бензильный заместитель, к способу их получения и их применению в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения как различных форм эпилепсии, так и аллергических заболеваний, например, бронхиальной астмы, аллергического риноконъюнктивита или атопического дерматита.

Рецептор аденозина имеет значение как мишень для воздействия на расстройства различных систем организма (например, центральной нервной системы, дыхательных путей и др.). Пиразол[3,4-d]пиримидины представляют интерес с фармакологической точки зрения, как соединения, структурно аналогичные аденину.

2-Бензилзамещенные пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-тионы и их таутомеры неизвестны.

Пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-оны и их таутомеры, содержащие в положении 2 замещенный бензильный заместитель, также неизвестны.

До настоящего времени описан лишь 2-бензилпиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он [Р. Бем (R. Böhm, Pharmacie 1986, 41, 430); Айзенэхер, Пех и Бем (Th. Eisenächer, R. Pech, R. Böhm, Pharmazie 1991, 46, 747)]. Это соединение было получено путем циклизации этилового эфира 3-амино-1-бензилпиразол-4-карбоновой кислоты с применением формамида. 2-бензилзамещенные эфиры 3-аминопиразол-4-карбоновой кислоты можно получить путем бензилирования эфиров 3-аминопиразол-4-карбоновой кислоты [Сенда, Хирота, Янг (S. Senda, К. Hirota, G.-N. Yang, Chem. Pharm. Bull. 1972, 20(2), 391)].

Упоминания либо предположения о конкретном фармакологическом действии 2-бензилпиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-она неизвестны.

К недостаткам известных противосудорожных лекарственных средств относятся, с одной стороны, нежелательные побочные эффекты, например, нейротоксичность и идиосинкразии; с другой стороны, эти средства неэффективны при определенных формах эпилепсии.

Различные формы аллергических/астматических заболеваний, например, бронхиальная астма, также недостаточно поддаются лечению известными лекарственными средствами.

Таким образом, в основу настоящего изобретения положена задача создания соединений с благоприятными фармакологическими свойствами, пригодных в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения эпилепсии и различных аллергических/астматических заболеваний.

В соответствии с настоящим изобретением, такими новыми соединениями являются 2-ар(алкил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-оны и 2-ар(алкил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тионы общей формулы 1

или их таутомеры, в которых где Х - кислород или сера,
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил.

Примерами соединений общей формулы 1 являются:
(1) 2-(2-фторбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(2) 2-(2-хлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(3) 2-(2-бромбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(4) 2-(2-иодбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(5) 2-(2-трифторметилбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(6) 2-(2-метилбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(7) 2-(3-трифторметилбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(8) 2-(2,6-дифторбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(9) 2-(2-хлор-6-фторбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(10) 2-(2,6-дихлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(11) 2-(2,4-дихлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(12) 2-(4-метоксибензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он;
(15) 2-(2-хлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тион;
(16) 2-(2-бромбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тион;
(17) 2-(2-иодбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тион;
(18) 2-(2-тpифтopмeтилбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d]пиpимидин-4(5H)-тиoн;
(19) 2-(2,6-дифторбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тион.

Способ получения соединений общей формулы 1 и их таутомеров, в которых Х представляет собой кислород, основан на циклизации соединений общей формулы 2 с формамидом

где Z - гидроксил, алкоксигруппа или аминогруппа;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил.

Способ получения соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х представляет собой серу, основан на замещении в соединениях формулы 1 и их таутомерах группы X, представляющей собой кислород, серой с помощью пятисернистого фосфора или 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфэтан-2,4-дисульфида.

Способ получения соединений формулы 2 основан на использовании в качестве исходных продуктов производных 3-аминопиразол-4-карбоновой кислоты. Путем алкилирования этих продуктов соответственно замещенным галоидбензилом в условиях фазового переноса получают соединения формулы 2.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением пригодны для приготовления фармацевтических композиций и лекарственных средств.

Соответственно, настоящим изобретением предлагается фармацевтическая композиция, обладающая противосудорожной и противоаллергической/противоастматической активностью, содержащая активное вещество, представленное одним или несколькими из упомянутых выше соединений, в сочетании с одним или несколькими физиологически переносимыми вспомогательными веществами и/или носителями и, при необходимости, с разбавителем.

Лекарственные средства могут быть введены, например, парентеральным путем (например, внутривенно, внутримышечно, подкожно), местным способом (через нос, путем ингаляции) или перорально.

Лекарственные формы можно приготовлять общеизвестными в фармацевтической практике способами.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением обладают сильным противосудорожным и, соответственно, антиаллергическим/противоастматическим действием.

1. Противосудорожная эффективность
Соединения в соответствии с настоящим изобретением испытывали на противосудорожную эффективность in vivo на мышах (при внутрибрюшинном введении) или на крысах (при пероральном введении) в соответствии с международным стандартом (см. Pharmac. Weekblad, Sc. Ed. 14, 132 (1992) и Antiepileptic Drugs, 3^rd Ed., Raven Press, New York, 1989). Результаты представлены в таблице 1. Для перорального введения получены аналогичные результаты.

Например, для соединения 2 (2-(2-хлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он) у крыс в пробе на максимальный электрошок эффективная доза (ED₅₀) составила 32 мг/кг (перорально), а нейротоксичная доза (NT₅₀) превысила 250 мг/кг. Соединение 15 (2-(2-хлорбензил)-пиразол[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-тион) также обладает сильным противосудорожным действием при более широком терапевтическом диапазоне (у крыс при пероральном введении ED₅₀=12 мг/кг, NT₅₀>460 мг/кг).

2. Антиаллергическая/противоастматическая эффективность
Противоастматическое действие соединений в соответствии с настоящим изобретением испытывали in vivo на самцах морских свинок после перорального введения, при этом определяли торможение миграции эозинофильных гранулоцитов в легких.

Морские свинки-самцы линии Dunkin Hartley Shoe с массой тела 200-250 г были сенсибилизированы подкожными инъекциями яичного альбумина (10 мкг+1 мг гидроксида алюминия) и повторно сенсибилизированы через две недели. Спустя неделю после повторной сенсибилизации яичным альбумином животных подвергали провокационной пробе с помощью аэрозоля 0,5%-ного раствора яичного альбумина в течение 20-30 секунд. Спустя 24 часа животным под уретановым наркозом производили бронхоальвеолярное промывание (БАП) двумя порциями раствора поваренной соли по 5 мл каждая. Промывную жидкость собирали и центрифугировали при 400g в течение 10 мин. Осадок суспендировали в 1 мл раствора поваренной соли. Подсчет эозинофильных гранулоцитов производили микроскопическим методом в камере Нойбауэра. Для окрашивания использовали набор для испытания на эозинофилы типа Becton Dickinson (5877). В этом наборе для селективного окрашивания эозинофилов применяется флоксин В. Подсчет эозинофилов производили в промывной жидкости после БАП каждого животного и рассчитывали количество эозинофилов в миллионах для каждого животного. Испытуемые вещества вводили перорально за 2 часа до провоцирования аллергеном.

Процент торможения эозинофилов у животных, обработанных испытуемым веществом, рассчитывали по следующей формуле:
% торможения=(А-С)-(В-С)/(А-С)•100,
где А - количество эозинофилов у животных из провоцированной группы, не обработанных испытуемым веществом;
В - количество эозинофилов у животных из провоцированной группы, обработанных испытуемым веществом;
С - количество эозинофилов у животных из непровоцированной группы.

Например, соединение 3 в дозе 100 мг/кг тормозит характерную для бронхиальной астмы миграцию эозинофильных гранулоцитов в легких на 74%.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением пригодны для лечения, например, бронхиальной астмы, риноконъюнктивита и атопического дерматита.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением специфично связывают подтип А₃ рецепторов аденозина.

Антагонисты рецепторов А₃ аденозина могут путем блокирования этих рецепторов препятствовать выделению медиаторов. Недавно было показано, что антагонисты рецепторов А₃ аденозина препятствуют также понижению концентрации внутриклеточного сАМР также в эозинофильных гранулоцитах и тем самым подавлять высвобождение цитокинов и других медиаторов из этих клеток (Jacobson et al., 1995). Таким образом можно, с одной стороны, смягчить неприятные острые симптомы, сильно влияющие на качество жизни, а с другой стороны - подавить лежащие в основе заболевания воспалительные процессы.

Значения К_i, представленные в таблице 2, свидетельствуют, что соединения в соответствии с настоящим изобретением связываются с рецепторами, при этом данные о селективности (столбцы 3 и 4) указывают, что связывание происходит селективно. Возможно, что этот новый механизм связывания способствует биологической эффективности.

Нижеследующие примеры служат для дополнительной иллюстрации сущности изобретения и не ограничивают объем защиты.

Общий способ получения соединений формулы 1 и их таутомеров, где Х - кислород, согласно таблице 3 (примеры 1-13)
К 40 мл формамида прибавляют 30 ммоль соединения формулы 2 и нагревают при температуре в пределах от 100^oС до 200^oС в течение 8-16 часов. После охлаждения выпавший в осадок сырой продукт отфильтровывают с отсасыванием и перекристаллизовывают из соответствующего растворителя, например, из этанола или диметилформамида.

Общий способ получения соединений формулы 1 и их таутомеров, где Х - сера, согласно таблице 4 (примеры 14-20)
Методика А
К 100 мл пиридина прибавляют 20 ммоль соединения формулы 1, в котором Х - кислород, и 80 ммоль пятисернистого фосфора и нагревают при температуре в пределах от 80^oС до 115^oС в течение 4-8 часов. После охлаждения выпавший в осадок сырой продукт очищают путем перекристаллизации из соответствующего растворителя, например, из этанола.

Методика В
К 100 мл ксилола прибавляют 10 ммоль соединения формулы 1, в котором Х - кислород, и 20 ммоль 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфэтан-2,4-дисульфида и нагревают в течение 8-24 часов. После охлаждения выпавший в осадок сырой продукт отделяют фильтрованием и очищают, как указано в методике А.

Примеры фармацевтических композиций
Ниже в качестве примера приведен состав четырех композиций, соответствующих настоящему изобретению, где активным началом является предложенное настоящим изобретением соединение.

Пример 1, мг:
Активное начало - 200-250
Моногидрат лактозы - 300-375
Микрокристаллическая целлюлоза - 50
Гидроксипропилцеллюлоза - 50
Стеарат магния - 10-20
Композиция 2, мг:
Активное начало - 200-250
Набухающий кукурузный крахмал - 300-400
Натриевая соль поперечно-сшитой карбоксиметилцеллюлозы - 50
Стеаринпальмитиновая кислота - 10-20
Высокодисперсный диоксид кремния - 10-20
Гидроксипропилметилцеллюлоза - 10-20
Macrogol^® - 10-20
Композиция 3, мг:
Активное начало - 200-250
Лактоза - 300-400
Тальк - 50
Микрокристаллическая целлюлоза - 10-20
Кукурузный крахмал - 10-20
Eudragit^® - 10-20
Macrogol^® - 10-20
Композиция 4, мг:
Активное начало - 200-250
Натриевая соль карбоксиметилированного крахмала - 300-400
Порошковая целлюлоза - 10-20
Микрокристаллическая целлюлоза - 10-20
Сополимер поливинилпирролидона (Copolyvidon) - 10-20
Macrogol^® - 10-20
Моногидрат лактозы - 10-20
Стеарат магния - 10-20
Поли(О-2-гидроксипропил, О-метил)целлюлоза - 10-201

Изобретение относится к новым пиразол[3,4-d]пиримидинам, обладающим противосудорожным и антиаллергическим/противоастматическим действием, способам их получения (вариантам) и фармацевтической композиции на их основе. Пиразол[3,4-d]пиримидины соответствуют общей формуле 1 или ее таутомеру, где Х - кислород, сера, У - галоид, С_1-4-алкил, С_1-4-алкоксигруппа или трифторметил, m= 1 или 2. Способы получения соединений общей формулы 1 заключаются в циклизации соединения формулы 2 с формамидом или во взаимодействии соединения формулы 1, где Х - кислород, с пятисернистым фосфором или 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфоэтан-2,4-дисульфидом. Фармацевтическая композиция содержит одно или несколько соединений формулы 1 и одно или несколько физиологически переносимых вспомогательных веществ и/или носителей. 4 с. и 4 з.п.ф-лы, 4 табл.

1. Соединение общей формулы 1

или его таутомер,
где Х - кислород или сера;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил;
m = 1 или 2. 2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой
2-(2-фторбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(2-хлорбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(2-бромбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(2-иодбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(2-тpифтopмeтилбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(2-метилбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(3-тpифтopмeтилбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(2,6-дифтopбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(2-хлор-6-фторбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-он;
2-(2,6-диxлopбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(2,4-диxлopбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(4-мeтoкcибeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-oн;
2-(2-xлopбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-тиoн;
2-(2-бромбензил)-пиразол[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-тион;
2-(2-иoдбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-тиoн;
2-(2-тpифтopмeтилбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-тиoн;
2-(2,6-дифтopбeнзил)-пиpaзoл[3,4-d] пиpимидин-4(5H)-тиoн. 3. Соединение по п. 1 или 2 для приготовления лекарственных средств для лечения эпилепсии. 4. Соединение по п. 1 или п. 2 для приготовления лекарственных средств для лечения, в частности, аллергических/астматических заболеваний. 5. Способ получения соединения общей формулы 1

или его таутомера,
где Х - кислород;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил;
m = 1 или 2,
отличающийся тем, что соединение формулы 2

где Z - гидроксил, алкоксигруппа или аминогруппа;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил;
m = 1 или 2,
подвергают циклизации с формамидом. 6. Способ получения соединения общей формулы 1

или его таутомера,
где Х - сера;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил;
m = 1 или 2,
отличающийся тем, что соединение общей формулы 1

или его таутомер,
где Х - кислород;
Y - галоид, С₁-С₄-алкил, С₁-С₄-алкоксигруппа или трифторметил;
m = 1 или 2,
вводят в реакцию с пятисернистым фосфором или 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфэтан-2,4-дисульфидом. 7. Фармацевтическая композиция, обладающая противосудорожной и противоаллергической/противоастматической активностью, содержащая активное вещество в сочетании с одним или несколькими физиологически переносимыми вспомогательными веществами и/или носителями и при необходимости с разбавителем, отличающаяся тем, что активным веществом является один или несколько пиразол[3,4-d] пиримидинов по п. 1. 8. Фармацевтическая композиция по п. 7, отличающаяся тем, что активным веществом является один или несколько пиразол[3,4-d] пиримидинов по п. 2.