ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОПИРИМИДОНА ИЛИ ПИРРОЛОТРИАЗОНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2018 года по МПК C07D487/04 A61K31/519 A61K31/53 A61P35/00 A61P15/00 A61P13/08 A61P17/10 A61P25/28 A61P1/00 A61P17/14 A61P15/18 A61P15/08 A61P5/04 A61P5/24 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к новому производному пиразолопиримидона или производному пирролотриазона и их фармацевтически приемлемым солям, к способу их получения, а также к фармацевтической композиции, их содержащей, а также к применению указанных соединений в качестве антагониста рецептора гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ), в частности, в качестве терапевтического агента для лечения заболеваний, таких как эндометриоз.

Предшествующий уровень техники

Эндометриоз является распространенным эстроген-зависимым гинекологическим заболеванием, которое часто обнаруживается у женщин детородного возраста, хотя механизм возникновения остается неясным. Сложная диагностика и неясный патогенез эндометриоза серьезно препятствуют открытию эффективных методов лечения. В настоящее время эндометриоз в основном диагностируется с помощью лапароскопии и лечится хирургическим путем или контролируется приемом контрацептивов, агонистов рецептора ГнРГ или прогестина для снижения уровня эстрогена в организме.

В настоящее время уровень заболеваемости эндометриозом высок. Статистические данные Datamonitor за 2009 год показывает, что число женщин-пациенток, страдающих от эндометриоза, составляет более 68 миллионов человек только в двух странах (Индия и Китай) (31288000 в Индии, 37535000 в Китае), в то время как согласно данным семи основных рынков этот показатель составлял более 17 миллионов человек. Datamonitor ожидает, что в течение 2009-2018 гг рынок лекарств от эндометриоза вырастет с $ 764 млн в 2009 году ($ 596 млн в США, $ 117 млн в Европейском союзе, $ 51 млн в Японии) до 1156 млн $ в 2018 году ($ 844 млн в США, $ 206 млн в Европейском союзе, млн $ 106 в Японии), и растущее пространство на китайском рынке увеличится.

Гонадотропин-рилизинг-гормон (гонадолиберин, ГнРГ), также известный как рилизинг-гормон лютеинизирующего гормона (ЛГ-РГ), является декапептидным гормоном (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), синтезируемым нейроэндокринными клетками гипоталамуса, и является центральным регулирующим фактором эндокринной репродуктивной системы. ГнРГ играет важную роль в гипоталамо-гипофизарно-гонадной осевой системе, транспортируясь в гипофиз через гипоталамо-гипофизарную портальную систему кровотока, а затем связываясь с клетками, содержащими рецепторы ГнРГ в передней доле гипофиза, а также путем содействия секреции и высвобождению гонадотропин лютеинизирующего гормона, такого как лютеинизирующий гормон (ЛГ) и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), а также путем регулирования нормального развития яичников и желтого тела. Рецептор ГнРГ играет свою регулирующую роль посредством связывания с G-белком, который способен активировать систему фосфатидилинозитол-кальциевого вторичного мессенджера; ЛГ регулирует выработку половых стероидов; и ФСГ регулирует сперматогенез у мужчин и созревание фолликулов в яичниках у женщин.

ЛГ и ФСГ выбрасываются в кровоток и связываются с рецепторами на специфических клетках яичников или семенников, чтобы стимулировать производство стероидов. Такие заболевания, как эндометриоз, лейомиомы матки и рак предстательной железы, усугубляются в присутствии половых стероидов. Необходимо вводить длительно действующие пептиды агонисты и антагонисты рецептора ГнРГ, чтобы контролировать эти заболевания.

Пептиды антагонисты рецептора ГнРГ включают в себя ГнРГ-производные линейные пептиды (US 5,171,835), производные циклического гексапептида (US 2002/0065309), бициклические пептидные производные (Journal of Medicinal Chemistry, 1993; 36: 3265-73), и т.д.; и пептиды-агонисты рецепторов ГнРГ включают в себя Лейпрорелин (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt). Тем не менее, существует много нерешенных вопросов относительно пептидных соединений, включая оральную абсорбцию, лекарственные формы, объем дозы, стабильность препарата, устойчивые действия и метаболическую стабильность и подобные. Основная причина того, что терапия небольшими молекулами антагониста рецепторов ГнРГ превосходит существующую пептидную терапию, связана в значительной степени с оральным введением небольших молекул антагониста рецепторов ГнРГ, которое является удобным и эффективным. Исследования показали, что небольшие молекулы антагонистов имеют значительную эффективность при гормонально-зависимых заболеваниях, таких как эндометриоз, преждевременное половое созревание, рак предстательной железы.

Непрямой механизм подавления опухоли посредством агонистов ГнРГ заключается в том, что агонисты ГнРГ уменьшают секрецию половых гормонов, а затем косвенно подавляют рост опухолевых клеток путем длительного действия на гипоталамо-гипофизарно-гонадную ось, что приводит к уменьшению доли гипофиза гонадотропинов (ФСГ, ЛГ). Тогда как антагонисты рецепторов ГнРГ непосредственно ингибируют высвобождение гипофизарных гонадотропинов, а затем подавляют рост опухолевых клеток.

Ввиду ограничений пептидов-антагонистов рецепторов, некоторые непептидные антагонисты рецептора ГнРГ были предложены и введены в разработку, клинические испытания и этапы маркетинга. Например, Elagolix (также известный как NBI-56418 или АВТ-620) является маленькой молекулой антагониста рецептора ГнРГ, совместно разработанной Abbott и Neurocrine Biosciences Inc., которая в настоящее время находится в фазе III клинического этапа и в основном используется для лечения эндометриоза (фаза III) и лейомиомы матки (фаза II). В июне 2012 года данные по исследованию фазы II эндометриоза были представлены на 94-м ежегодном собрании Эндокринологических обществ в Хьюстоне: среди 131 женщин, страдающих от эндометриоза, которые получали Elagolix (150 или 250 мг ежедневно), лейпропелин (3,75 мг подкожно, один раз в месяц в течение 12 недель) или плацебо, уровень эстрогена в сыворотке крови у пациенток из группы лечения препаратом Elagolix был ниже, чем в группе лечения лейпропелином и группе плацебо. В то же время безопасность и переносимость Elagolix была хорошо проверена.

Relugolix, также известный как Astak-385, представляет собой небольшую молекулу перорального антагониста рецептора ГнРГ, разработанную Takeda Pharmaceutical в Японии, которая используется для лечения эндометриоза, лейомиомы матки и рака предстательной железы. Изучение эндометриоза и лейомиомы матки находилось в II фазе клинических исследований в 2011 году, а также изучение рака простаты было в фазе I клинических исследований в том же году.

В настоящее время был раскрыт ряд патентных заявок, касающихся небольших молекул-антагонистов рецепторов ГнРГ, в том числе WO 2006096785, WO 2010026993, WO 2011076687, WO 2012175514, и т.д.

Несмотря на то, что в этой области были проведены многочисленные значимые исследования, остается необходимость в разработке более эффективных малых молекул-антагонистов рецептора ГнРГ. Настоящее изобретение предоставляет новую структуру антагониста рецептора ГнРГ, и было обнаружено, что соединения, имеющие такие структуры, обладают хорошей активностью и проявляют отличный эффект при лечении эндокринных заболеваний репродуктивной системы.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к обеспечению соединения формулы (I), его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера или диастереомера, или их смеси, и его фармацевтически приемлемой соли:

где, когда G представляет собой N, D представляет собой C и Е представляет собой -CH-;

когда G представляет собой C, D и E представляют собой N;

R¹ выбирают из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила и -OR⁶, при этом независимо друг от друга каждый из алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, нитро, алкила, галогеналкила, гидроксиалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶, -NHC(O)OR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶

R² представляет собой алкил, при этом алкил дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из арила и гетероарила, при этом каждый из арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкила, галогеналкила, циано, нитро, -C(O)OR⁶, -C(O)NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -OR⁶, -NHS(O)_mR⁶, -NHC(O)R⁶ и -NR⁷R⁸, при этом галогеналкил предпочтительно представляет собой трифторметил;

R³ выбирают из группы, состоящей из арила и гетероарила, при этом каждый из арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкила, галогеналкила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -C(O)R⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHS(O)_mR⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶;

R⁴ представляет собой алкил;

R⁵ выбирают из группы, состоящей из водорода, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -NR⁷R⁸ и -NR⁷S(O)_mR⁶, при этом каждый из алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, оксо, алкила, галогеналкила, гидроксиалкила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NR⁷S(O)_mR⁶, -S(O)_mR⁶, -C(O)R⁶ и -NHC(O)R⁶;

R⁶ выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила, при этом независимо друг от друга каждый из алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, гидрокси, алкокси, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, карбоновой кислоты и эфира карбоновой кислоты;

независимо друг от друга каждый из R⁷ и R⁸ выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила, при этом независимо друг от друга каждый из алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, гидрокси, алкокси, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, карбоновой кислоты и эфира карбоновой кислоты;

или R⁷ и R⁸ вместе с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, при этом гетероциклил содержит один или несколько гетероатомов N, О или S(O)_m, и гетероциклил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, гидроксила, алкоксила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, карбоновой кислоты и эфира карбоновой кислоты;

m составляет 0, 1 или 2;

n составляет 1, 2, 3 или 4; и

p составляет 0, 1 или 2.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой соединение формулы (II) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемую соль:

где n, R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, представляет собой соединение формулы (III) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемую соль:

где n, R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ выбирают из группы, состоящей из арила и гетероарила, предпочтительно фенила и пиридазинила, при этом каждый из арила и гетероарила необязательно дополнительно замещены одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, нитро, алкила, галогеналкила, гидроксиалкила и -OR⁶.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, где R² представляет собой бензил, причем бензил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкила, галогеналкила, циано, нитро и -OR⁶.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, где R³ выбирают из арила, предпочтительно фенила, где арил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶, предпочтительно -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I), или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁴ представляет собой метил.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I), или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁵ представляет собой водород, и n составляет 1 или 2.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль, представляет собой соединение формулы (IV), или его таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемую соль:

где n, D, Е, G, R¹, R², R⁴ и R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

R^a выбирают из группы, состоящей из алкила и -OR⁶, где алкил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, гидрокси, алкокси, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, карбоновой кислоты и эфира карбоновой кислоты; и

R⁶ представляет собой алкил, где алкил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, гидрокси, алкокси, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, карбоновой кислоты и эфира карбоновой кислоты.

Типичные соединения по настоящему изобретению, включают в себя, но не ограничиваются, следующими:

или их таутомер, изомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или их фармацевтически приемлемая соль.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I), или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, включающему стадию:

взаимодействия соединения формулы (Iа) с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵; необязательно восстановления и/или ацилирования полученного продукта с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G и R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

Восстанавливающие агенты включают в себя, но не ограничиваются ими, водород или порошок железа.

Ацилирующие агенты включают в себя, но не ограничиваются карбоновыми кислотами, хлорангидридом, сульфури л хлоридом, галогенированным метилформиатом, изоцианатом или трифосгеном и метоксиамином.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, включающему стадию:

взаимодействия соединения формулы (IB) с R²X в присутствии щелочного реагента; необязательно восстановления и/или ацилирования полученного продукта с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G и R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

Щелочные реагенты включают в себя, но не ограничиваются органическими основаниями и неорганическими основаниями, где органическое основание включает в себя, но не ограничивается триэтиламином, пиридином, 2,6-лутидином, метоксидом натрия, гексаметилдисилазидом лития, гексаметилдисилазидом натрия, н-бутиллитием, трет-бутоксидом калия и бромидом тетрабутиламмония; неорганические основания включают в себя, но не ограничиваются гидридом натрия, карбонатом натрия, бикарбонатом натрия, карбонатом калия, бикарбонатом калия, карбонатом цезия, гидроксидом лития, гидроксидом натрия и гидроксидом калия, предпочтительно карбонатом калия и метоксидом натрия;

Восстанавливающие агенты включают, но не ограничиваются ими, водород и порошок железа.

Ацилирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, карбоновые кислоты, хлорангидрид, сульфурилхлорид, галогенированный метилформиат, изоцианат или трифосген и метоксиамин.

Соединение формулы (IA) или формулы (IB) или их фармацевтически приемлемая соль, которые используют в качестве промежуточного продукта при получении соединения формулы (I):

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G и R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

Способ получения соединения формулы (IA) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию:

проведения реакции галогенирования соединения формулы (1b) с получением соединения формулы (IA);

где D, Е, G и R¹-R³ являются такими, как определено формулой (I).

Способ получения соединения формулы (IB) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию:

проведения циклизации соединения формулы (Ig) с получением соединения формулы (IB);

где n, D, Е, G и R¹, R³-R⁵ являютcя такими, как определено формулой (I);

R^b представляет собой алкил.

Типичные соединения формулы (IA) включают в себя, но не ограничиваются следующими:

или их таутомеры, изомеры, рацематы, энантиомеры, диастереомеры или их смесь, или их фармацевтически приемлемая соль.

Соединение формулы (IVA) или его фармацевтически приемлемая соль, которое используют в качестве промежуточного продукта при получении соединения формулы (IV):

где n, D, Е, G, R¹, R², R⁴ и R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

Типичные соединения формулы (IVA) включают в себя, но не ограничиваются следующими:

или их таутомеры, изомеры, рацематы, энантиомеры, диастереомеры или их смесь, или их фармацевтически приемлемая соль.

Способ получения соединения формулы (IV), включающий стадию:

дополнительного взаимодействия соединения формулы (IVA) с ацилирующим агентом с получением соединения формулы (IV);

где n, D, Е, G, R¹, R², R⁴ и R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

Ацилирующие агенты включают в себя, но не ограничиваются карбоновыми кислотами, хлорангидридом, сульфурилхлоридом, галогенированным метилформиатом, изоцианатом или трифосгеном и метоксиамином.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей то же самое, для получения лекарственного средства в качестве антагониста рецептора гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ).

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей то же самое, для получения лекарственного средства для лечения заболеваний половых желез, связанных с гормонами.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемых солей, или фармацевтической композиции, содержащей то же самое, для получения лекарственных средств для лечения или предотвращения раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов (например, рак предстательной железы, рак матки, рак молочной железы, рак гипофиза и т.д.), костных метастазов раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов, гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, миомы матки, преждевременного полового созревания, аменореи, предменструального синдрома, дисменореи, синдрома многокамерного яичника, синдрома поликистозных яичников, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, бесплодия, синдрома раздраженного кишечника, доброкачественных или злокачественных опухолей, которые являются независимыми от гормонов и чувствительными к рилизинг-гормону лютеинизирующего гормона (ЛГ-РГ), или приливов; или для получения репродуктивного регулятора, контрацептивов, и эвокатора овуляции; или или для получения лекарственных средств для лечения или предотвращения послеоперационного рецидива ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, предпочтительно рака простаты, рака матки, рака молочной железы, эндометриоза или лейомиомы матки.

Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования активности рецептора ГнРГ, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтических композиций, содержащих их.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания половых желез, связанного с гормонами, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей их.

Настоящее изобретение также относится к способу предотвращения или лечения раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов (рак предстательной железы, рак матки, рак молочной железы, рак гипофиза и т.д.), костного метастаза рака, зависимого от половых гормонов, гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, миомы матки, преждевременного полового созревания, аменореи, предменструального синдрома, дисменореи, синдрома многокамерного яичника, синдрома поликистозных яичников, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, бесплодия, синдрома раздраженного кишечника, доброкачественных или злокачественных опухолей, которые являются независимыми от гормонов и чувствительными к ЛГ-РГ, или приливов, предпочтительно рака предстательной железы, рака матки, рака молочной железы, эндометриоза, или лейомиомы матки; или для регулирования репродукции, контрацепции или эвокации овуляции; или для предотвращения послеоперационного рецидива ракового заболевания, зависимого от половых гормонов.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей их, в качестве лекарственного средства для ингибирования активности рецептора ГнРГ.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей их, в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с половыми гормонами.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I), или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей их, в частности в качестве предотвращающего или регуляторного агента при заболеваниях, зависимых от гормонов; или в качестве предотвращающего или терапевтического агента для раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов (например, рак предстательной железы, рак матки, рак молочной железы, рак гипофиза и т.п.), гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, миомы матки, преждевременного полового созревания, синдрома аменореи, предменструального синдрома, синдрома многокамерного яичника, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, и т.д.; или в качестве регулятора беременности (средство контрацепции и тому подобное), терапевтического агента при бесплодии или регулятора менструального цикла; или в качестве предотвращающего или терапевтического средства для лечения синдрома раздраженного кишечника; или в качестве предотвращающего агента при послеоперационном рецидиве ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, и тому подобное; предпочтительно рака предстательной железы, рака матки, рака молочной железы, эндометриоза или лейомиомы матки.

Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетки, драже, пастилки, водные или масляные суспензии, дисперсные порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Пероральные композиции могут быть получены в соответствии с любым известным способом для получения фармацевтических композиций в данной области техники. Такие композиции могут содержать одну или несколько добавок, выбранных из группы, состоящей из подсластителей, ароматизаторов, красителей и консервантов, чтобы обеспечить приятный вкус фармацевтической композиции. Таблетки содержат активный ингредиент и нетоксичный фармацевтически приемлемый наполнитель, подходящий для получения таблеток. Этими наполнителями могут быть инертные наполнители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и разрыхляющие агенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза, поперечно сшитая натрий карбоксиметилцеллюлоза, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующее вещество, такое как крахмал, желатин, поливинилпирролидон или аравийская камедь; и смазывающее вещество, такое как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без покрытия или с покрытием, созданным при помощи известной технологии, которые могут маскировать вкус лекарственного средства или задержать разрыхление и абсорбцию лекарственного средства в желудочно-кишечном тракте, тем самым обеспечивая пролонгированное высвобождение в течение длительного периода. Например, растворимым в воде материалом, маскирующим вкус, который может быть использован в настоящем изобретении, является гидроксипропилметилцеллюлоза или гидроксипропилцеллюлоза, или материалом-пролонгатором, который может быть использован в настоящем изобретении, является этил целлюлоза, бутират ацетат-целлюлозы.

Пероральные композиции также могут быть предоставлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, таким как карбонат кальция, фосфат кальция или каолин, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водорастворимым носителем, таким как полиэтиленгликоль, или масляной средой, например, арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Водная суспензия содержит активный ингредиент в смеси с наполнителями, подходящими для получения водной суспензии. Могут включаться такие наполнители суспендирующие агенты, как натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон и аравийская камедь; диспергенты или увлажнители, которыми могут быть природные фосфатиды, такие как лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, такие как стеарат полиоксиэтилена, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, таким как гептадекаэтиленоксикетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гекситолов, такие как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с неполными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гекситола, такие как моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Водная суспензия может также содержать один или более консервантов, таких как этилпарабен или н-пропилпарабен, одно или более красящее вещество, один или более ароматизирующий агент и один или более подсластитель, такой как сахароза, сахарин или аспартам.

Масляная суспензия может быть получена суспендированием активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляная суспензия может содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Указанные подсластители и вкусовые агенты могут быть добавлены для получения приятного на вкус препарата. Эти композиции могут быть сохранены добавлением антиоксиданта, такого как бутилированный гидроксианизол или альфа-токоферол.

Дисперсные порошки и гранулы, пригодные для получения водной суспензии путем добавления воды, содержат активный ингредиент в смеси с диспергирующим агентом или увлажяющим агентом, суспендирующим агентом или одним или более консервантом. Подходящие диспергатор или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты представлены теми, которые уже упоминались выше. Также могу быть добавлены дополнительные наполнители, такие как подсластитель, вкусовой агент и краситель. Эти композиции могут быть сохранены добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Настоящая фармацевтическая композиция может также быть в виде эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, такое как жидкий парафин, или их смеси. Подходящими эмульгирующими средствами могут быть природные фосфатиды, такие как соевый лецитин, а также эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гекситола, такие как моноолеат сорбитана, и продукты конденсации указанных частичных сложных эфиров с окисью этилена, такие как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат. Эмульсия может также содержать подсластитель, вкусовой агент, консервант и антиоксидант. Сироп и эликсир могут быть приготовлены с подсластителем, таким как глицерин, пропиленгликоль, сорбит или сахароза. Такие препараты могут также содержать успокоительное средство, консервант, краситель и антиоксидант.

Фармацевтическая композиция может быть в форме стерильного водного раствора для инъекций. В качестве приемлемых разбавителей и растворителей могут быть использованы вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Стерильный инъекционный препарат может также быть стерильной инъецируемой микроэмульсией типа масло-в-воде, в которой активный ингредиент растворен в масляной фазе. Например, активный ингредиент может быть сначала растворен в смеси соевого масла и лецитина, масляный раствор затем вводят в смесь воды и глицерина и обрабатывают для получения микроэмульсии. Инъекционные растворы или микроэмульсии могут быть введены в кровоток пациента путем местной инъекции. В качестве альтернативы, может быть полезным введение раствора или микроэмульсии таким образом, чтобы поддерживать постоянную циркулирующую концентрацию данного соединения. Для того чтобы поддерживать такую постоянную концентрацию, может быть использовано устройство непрерывной внутривенной доставки. Примером такого устройства является помпа для внутривенных инъекций Deltec CADD-PLUS. ТМ. 5400.

Фармацевтическая композиция может быть в виде стерильной инъекционной водной или масляной суспензии для внутримышечного и подкожного введения. Такие суспензии могут быть получены с подходящими диспергаторами или увлажняющими агентами и суспендирующими агентами, как описано выше, в соответствии с известными методами. Стерильный инъекционный препарат может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией, приготовленной в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, раствор, приготовленный в 1,3-бутандиоле. Кроме того, стерильные нелетучие масла легко могут быть использованы в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели могут быть использованы любые нелетучие масла, включая синтетические моно- или ди-глицерин. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, могут быть использованы при получении инъекций.

Настоящее соединение может быть представлено в форме суппозиториев для ректального введения. Эти фармацевтические композиции могут быть получены путем смешивания лекарственного средства с подходящими не раздражающими наполнителями, которые имеют твердое агрегатное состояние при обычных температурах, но жидкое в прямой кишке, плавясь в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают масло какао, глицериновый желатин, гидрированные растительные масла, смеси полиэтиленгликолей и сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликоля с различной молекулярной массой.

Специалистам в данной области техники хорошо известно, что доза лекарственного препарата зависит от ряда факторов, в том числе, но не ограничено, от следующих факторов: активности конкретного соединения, возраста пациента, массы пациента, общего состояния здоровья пациента, поведения пациента, диеты пациента, времени введения, способа введения, скорости экскреции, комбинации лекарственных средств и тому подобное. Кроме того, особенности оптимального лечения, такие как модель лечения, суточная доза соединения формулы (I) или тип его фармацевтически приемлемой соли, могут быть проверены с помощью традиционного терапевтического лечения.

Подробное описание изобретения

Если не указано иное, термины, используемые в описании и формуле изобретения, имеют значения, описанные ниже.

"Алкил" относится к насыщенной алифатической углеводородной группе, включающей линейные и разветвленные цепи, предпочтительно алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, более предпочтительно, представляет собой алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, еще более предпочтительно алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, и наиболее предпочтительно метил. Типичные примеры включают, но не ограничиваются, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, 2,3-диметилбутил, н-гептил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, н-октил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, н-нонил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, н-децил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил, и их разветвленные изомеры. Более предпочтительно, чтобы алкильная группа представляла собой низший алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. Типичные примеры включают, но не ограничиваются, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, 2,3-диметилбутил, и тому подобное. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы) может быть замещена в любом доступном месте соединения, и замещающая группа(ы), предпочтительно, является одной или более группами, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкоксила, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклического алкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Алкенил" относится к алкилу, как определено выше, который имеет по меньшей мере два атома углерода и по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, например, винил, 1-пропенил, 2- пропенил, 1-, 2-, или 3-бутенил и т.д., предпочтительно C_2-10-алкенил, более предпочтительно C_2-6-алкенил, и наиболее предпочтительно C_2-4-алкенил. Алкенил может быть замещенным или незамещенным. При замещении замещающая группа(ы) предпочтительно является одной или более группой(ами), независимо друг от друга выбраными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Алкинил" относится к алкилу, как определено выше, который имеет по меньшей мере два атома углерода и по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь, например, этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-, 2-, или 3-бутинил и т.д., предпочтительно C_2-10-алкинил, более предпочтительно C_2-6-алкинила, и наиболее предпочтительно, C_2-4-алкинил. Алкинильная группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы), предпочтительно является одной или более группой(ами), независимо друг от друга выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Циклоалкил" относится к насыщенным или частично ненасыщенным моноциклическим или полициклическим углеводородным группам, содержащим от 3 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 3 до 12 атомов углерода, более предпочтительно от 3 до 10 атомов углерода, еще более предпочтительно от 3 до 6 атомов углерода, и наиболее предпочтительно циклопропильной. Типичные примеры моноциклического циклоалкила включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогексадиенил, циклогептил, циклогептатриенил, циклооктил и т.д., предпочтительно циклопропил или циклогексенил. Полициклические циклоалкилы включает циклоалкил, имеющий спиро-кольцо, конденсированное кольцо или кольцо-мостик. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы) предпочтительно является одной или более группами, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкоксила, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Гетероциклил" относится к 3 до 20-членной насыщенной или частично ненасыщенной моноциклической или полициклической углеводородной группой, содержащей один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, включающей N, О и S(O)_m (где m представляет собой целое число от 0 до 2) в качестве кольцевых атомов, но за исключением -O-O-, -O-S- или -S-S- в кольце, с остальными атомами кольцо C. Гетероциклил предпочтительно содержит от 3 до 12 кольцевых атомов, где 1 до 4 атомов представляют собой гетероатомы; более предпочтительно от 3 до 10 атомов в кольце; и наиболее предпочтительно от 5 до 6 атомов в кольце. Типичные примеры моноциклических гетероциклилов включают, но не исключительно, пирролидинил, пиперидил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, гомопиперазинил, пиранил, тетрагидрофуранил, и тому подобное. Полициклические гетероциклилы включают гетероциклилы, имеющие спиро-кольцо, конденсированное кольцо или кольцо-мостик. Гетероциклическая группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы) предпочтительно является одной или более группами, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкоксила, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Арил" относится к моноциклическому конденсированному кольцу от 6 до 14 атомов углерода или полициклическим конденсированным кольцам ("конденсированная" кольцевая система означает, что каждое кольцо имеет смежную пару атомов углерода с другим кольцом в системе), которые имеют полностью конъюгированную тт-электронная система. Арил предпочтительно представляет собой от 6 до 10-членный, более предпочтительно фенил и нафтил, и наиболее предпочтительно фенил. Арил может быть слит с кольцом гетероарила, гетероциклила или циклоалкила, причем кольцом, которое привязывается к исходной структуре, является арил. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, следующие группы:

и .

Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы) предпочтительно является одной или более группами, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Гетероарил" относится к 5-14-членному углеродному моноциклическому кольцу или полициклическому конденсированному кольцу, имеющим от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из O, S и N, которое имеет полностью конъюгированную систему π-электронов. Гетероарил предпочтительно является 5-10-членным, более предпочтительно 5- или 6- членным, и наиболее предпочтительно, фурилом, тиенилом, пиридинилом, пирролилом, N-алкил пирролилом, пиримидинилом, пиразинилом, имидазолилом, тетразолилом и подобным. Гетероарил может быть слит с кольцом арила, гетероциклила или циклоалкила, причем кольцо, которое привязывается к исходной структуре, представляет собой гетероарил. Типичные примеры включают, но не исключительно, следующие группы:

и .

Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении замещающая группа(ы) предпочтительно является одной или более группами, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиол, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Алкокси" относится к -O- (алкил) и -O- (незамещенный циклоалкил) группам где алкил и циклоалкил имеют указанные выше значения. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси и тому подобное. Алкокси группа может быть замещенной или незамещенной. При замещении заместитель предпочтительно является одной или более группой(ами), независимо друг от друга выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтиола, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арил, гетероарила, циклоалкоксиа, гетероциклоалкоксиа, циклоалкилтиоа, гетероциклоалкилтио, амино, галогеналкила, гидроксиалкила, карбоксила, алкоксикарбонила, -OR⁶, -C(O)OR⁶, -OC(O)R⁶, -NHS(O)_mR⁶, -C(O)R⁶, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NR⁷R⁸, -OC(O)NR⁷R⁸, -C(O)NR⁷R⁸, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

"Галогеналкил" относится к алкильной группе, замещенной одним или несколькими атомами галогена, в которой алкил такой, как определено выше.

"Гидрокси" относится к группе -OH.

"Гидроксиалкил" относится к алкильной группе, замещенной гидроксильной группой, в которой алкил определен выше.

"Галоген" относится к фтору, хлору или брому.

"Амино" относится к группе -NH₂.

"Циано" относится к группе -CN.

"Нитро" относится к группе -NO₂.

"Оксо группа" относится к группе =O.

"Карбоновая кислота" относится к (алкил) или (циклоалкил) -C(O)OH.

"Сульфурилхлорид" относится к (алкил) или (циклоалкил) -S(O)m-X(гало).

"Изоцианат" относится к (алкил) или (циклоалкил) -N=C=O.

"Трифосген" относится к бис(трихлорметил)карбонату.

"Карбоксил" относится к -C(O)ОН группе.

"Алкоксикарбонил" относится к -C(O)O (алкил) или (циклоалкил) группе, где алкил и циклоалкил имеют указанные выше значения.

"Необязательный" или "необязательно" означает, что событие или обстоятельство, описанные в дальнейшем может, но не обязательно, иметь место. Такое выражение означает случай, когда событие или обстоятельство происходит, или не происходит. Например, "гетероциклическая группа, необязательно замещенная алкилом" означает, что алкильная группа может присутствовать, но не обязательно присутствует, и такое выражение включает в себя случай, когда гетероциклическая группа замещена алкильной, и когда гетероциклическая группа не замещена алкильной группой.

"Замещенный" относится к одному или более атому водорода в группе, предпочтительно вплоть до 5, более предпочтительно от 1 до 3 атомов водорода, каждый из которых независимо заменен соответствующим количеством заместителей. Само собой разумеется, что заместители существуют в единственной возможной химической позиции. Специалист в данной области способен определить, является ли это возможной или невозможной заменой, без чрезмерных экспериментальных или теоретических шагов. Например, когда амино- или гидрокси группа, содержащая свободный водород, связывается с атомами углерода, имеющими ненасыщенные связи (такими как олефиновые), это состояние может быть нестабильным.

"Фармацевтическая композиция" относится к смеси одного или более из соединений, описанных в настоящем изобретении, или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или его пролекарства и других химических компонентов, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и наполнители. Целью фармацевтической композиции является облегчение введения соединения в организм, что способствует абсорбции активного ингредиента, тем самым показывая биологическую активность.

Где R⁶-R⁸ являются такими, как определено формулой (I).

Способ синтеза настоящего соединения

Для того, чтобы достичь цели настоящего изобретения, настоящее изобретение предлагает следующее техническое решение:

Способ получения соединения формулы (I) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли включает следующие стадии:

соединение формулы (Iа) подвергают взаимодействию с R²X в присутствии щелочного реагента с получением соединения формулы (Ib); соединение формулы (Ib) подвергают реакции галогенирования над катализатором с получением соединения формулы (IA), в котором катализатором предпочтительно является азобисизобутиронитрил, и галогенирующим агентом предпочтительно является N-бромсукцинимид; соединение формулы (IA), подвергают взаимодействию с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵, с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G, и R¹-R⁵ определены формулой (I);

R³ предпочтительно представляет собой арил, более предпочтительно представляет собой фенил, где арил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

Способ получения соединения формулы (I) или таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, включает следующие стадии:

соединение формулы (Ic) подвергают реакции галогенирования над катализатором с получением соединения формулы (Id), в котором катализатором предпочтительно является азобисизобутиронитрил, и галогенирующим агентом предпочтительно является N-бромсукцинимид; соединение формулы (Id) подвергают взаимодействию с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵ с получением соединения формулы (Ie); соединение формулы (Ie), дополнительно нагревают с трифторуксусной кислотой, чтобы получить соединение формулы (If); соединение формулы (If) последовательно подвергают взаимодействию с трифосгеном и амином R¹NH₂ с получением соединения формулы (Ig); соединение формулы (Ig) подвергают циклизации в присутствии щелочного агента с получением соединения формулы (IB); соединение формулы (IB) подвергают взаимодействию с R²X в присутствии щелочного реагента с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген; Rb представляет собой алкил;

n, D, Е, G, R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I); и

R³ предпочтительно представляет собой арил, более предпочтительно представляет собой фенил, причем арил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

Способ получения соединения формулы (II) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, включает следующие стадии:

соединение формулы (IIа) нагревают при температуре с трифторуксусной кислотой с получением соединения формулы (IIb), соединение формулы (IIb) последовательно подвергают взаимодействию с трифосгеном и амином R¹NH₂ с получением соединения формулы (IIс); соединение формулы (IIс) подвергают циклизации в присутствии щелочного агента с получением соединения формулы (IId); соединение формулы (IId) подвергают взаимодействию с R²X в присутствии щелочного реагента с получением соединения формулы (IIе); соединение формулы (IIе) подвергают реакции галогенирования над катализатором с получением соединения формулы (IIА), в котором катализатором предпочтительно является азобисизобутиронитрил и галогенирующим агентом предпочтительно является N-бромсукцинимид; соединение формулы (IIA) подвергают взаимодействию с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵, с получением соединения формулы (II);

где X представляет собой галоген; Rb представляет собой алкил;

n, R¹-R⁵ являются такими, как определено в формуле (I);

R³ предпочтительно представляет собой арил, более предпочтительно фенил, где арил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

Способ получения соединения формулы (III) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли включает в себя следующие стадии:

соединение формулы (IIIа), последовательно подвергают взаимодействию с трифосгеном и амином R¹NH₂ с получением соединения формулы (IIIb); соединение формулы (IIIb), подвергают взаимодействию со щелочью, с получением соединения формулы (IIIс); соединение формулы (IIIс) взаимодействует с R²X в присутствии щелочного реагента с получением соединения формулы (IIId); соединение формулы (IIId) подвергают реакции галогенирования над катализатором с получением соединения формулы (IIIА), в котором катализатор предпочтительно азобисизобутиронитрил, и галогенирующий агент предпочтительно N-бромсукцинимид; соединение формулы (IIIА) подвергают взаимодействию с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵, с получением соединения формулы (III);

где X представляет собой галоген; Rb представляет собой алкил;

n, R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I);

R³ предпочтительно представляет собой арил, более предпочтительно фенил, причем арил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

Способ получения соединения формулы (IV) или его таутомера, изомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, включает следующие стадии:

соединение формулы (IVa) получают согласно схемам 1-4; соединение формулы (IVa) подвергают взаимодействию с R²X в присутствии щелочного реагента с получением соединения формулы (IVb); соединение формулы (IVb) подвергают реакции галогенирования с катализатором с получением соединения формулы (IVc), в котором катализатором предпочтительно является азобисизобутиронитрил и галогенирующим агентом предпочтительно является N-бромсукцинимид; соединение формулы (IVc) подвергают взаимодействию с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵ с получением соединения формулы (IVd); соединение формулы (IVd) подвергают реакции восстановления с железом в присутствии хлорида аммония для восстановления нитрогруппы до аминогруппы с получением соединения формулы (IVA); соединение формулы (IVA) дополнительно реагирует с ацилирующим реагентом с получением соединения формулы (IV);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G, R^a, R¹-R⁵ являются такими, как определено формулой (I).

В вышеуказанных технических решениях щелочная среда обеспечивается органическим основанием или неорганическим основанием, где органические основания включают в себя, но не ограничиваются ими, триэтиламин, пиридин, 2,6-лутидин, метоксид натрия, лития гексаметилдисилазид, гексаметилдисилазид натрия, н-бутиллитий, трет-бутоксид калия или бромид тетрабутиламмония; и неорганические основания включают в себя, но не ограничиваются ими, гидрид натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия, бикарбонат калия, карбонат цезия, гидроксид лития, гидроксид натрия или гидроксид калия. В способе по настоящему изобретению, щелочная среда при циклизации предпочтительно обеспечивается органическим основанием, а более предпочтительно метоксидом натрия.

Восстанавливающий агент включает, но не ограничивается ими, водород или порошок железа.

Ацилирующий агент включает, но не ограничиваются ими, карбоновую кислоту, хлористый ацил, сульфонилхлоридом, галогенированный метилформиат, изоцианат или трифосген и метоксиамин.

Изобретение будет далее проиллюстрировано со ссылкой на следующие конкретные примеры. Следует понимать, что эти примеры предназначены только для демонстрации изобретения и не ограничивают объем изобретения.

Экспериментальные методы в следующих примерах, для которых не указано никаких конкретных условий, будет осуществляться в обычных условиях или в условиях, рекомендованных для сырья и производителями продукции. Экспериментальные реагенты, для которых не указаны никакие определенные источники, будут представлять собой обычные реагенты, которые являются коммерческими доступными.

Примеры

Структуры соединений определены с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и/или масс-спектрометрии (МС). Химический сдвиг ЯМР (δ) дается в 10^-6 (м.д. (миллионные доли)). ЯМР проводят с помощью Bruker AVANCE-400. Растворителями для ЯМР являются дейтерированный диметилсульфоксид (ДМСО-d₆), дейтерированный хлороформ (CDCl₃) и дейтерированный метанол (CD₃OD), с тетраметилсиланом (ТМС) в качестве внутреннего стандарта.

МС проводят с помощью масс-спектрометра FINNIGAN LCQ (ESI) (производитель: Thermo, тип: Finnigan LCQ advantage MAX).

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят на спектрометре жидкостной хроматографии высокого давления Agilent 1200 DAD (хроматографическая колонка Sunfire С18 150×4,6 мм) и спектрометре жидкостной хроматографии высокого давления Waters 2695-2996 (хроматографическая колонка Gemini С18 150×4,6 мм).

Среднюю степень ингибирования киназы и концентрацию полумаксимального ингибирования (IC₅₀) определяют NovoStar ELISA (BMG Co., Germany).

Yantai Huanghai HSG254 или Qingdao GF254 пластину силикагеля используют для тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле. Размер пластин, используемых в ТСХ, составляет от 0,15 мм до 0,2 мм, а размер пластин, используемых при очистке продукта, составляет от 0,4 мм до 0,5 мм.

Сетку из силикагеля Yantai Huanghai от 200 до 300 используют в качестве носителя для хроматографии.

Известные исходные вещества в настоящем изобретении могут быть получены обычными в данной области способами синтеза, или могут быть приобретены у ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc. или Dari Chemical Company, и т.д.

Если не указано иное, реакции можно проводить в атмосфере азота или в атмосфере аргона.

Термин "в атмосфере аргона" или "атмосфере азота" означает, что реакционная колба оснащена баллоном, объемом 1 л, с аргоном или азотом.

Если не указано иное, то раствор в примерах относится к водному раствору.

Если не указано иное, температура реакции в примерах комнатная, а диапазон комнатной температуры составляет от 20°C до 30°C.

Процесс реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ), а система проявляющего растворителя включает в себя: А: дихлорметан- метанольную систему, В: н-гексан-этилацетатную систему, С: систему петролейного эфира и этилацетата, D: ацетон. Объемное отношение растворителя можно регулировать в соответствии с полярностью соединений.

Система элюирования для очистки соединений с помощью хроматографии на колонках и тонкослойной хроматографии включает в себя: А: дихлорметан-метанольную систему, В: н-гексан-этилацетатную систему, С: дихлорметан-ацетоновую систему, D: этилацетат-дихлорметановую систему, Е: этилацетат-дихлорметан-н-гексановую систему, F: этилацетат-дихлорметан-ацетоновую систему. Объемное отношение растворителя можно регулировать в соответствии с полярностью соединений, а иногда можно добавить небольшое количество щелочного реагента, такого как триэтиламин, или кислотного реагента, такого как уксусная кислота.

Пример 1

N-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)ацетамид

Стадия 1

Этил 3-амино-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразоло-4-карбоксилат

Этил 3-(трет-бутиламино)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 1а (12,10 г, 34,93 ммоль, полученного с помощью хорошо известного способа, раскрытого в "Synthesis, 1988, (3), 203-207") и 100 мл трифторуксусной кислоты добавляли последовательно в колбу объемом 250 мл в форме баклажана. Смесь перемешивали в течение 2,5 ч при температуре 85°C, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. В остатки добавляли по каплям насыщенный раствор бикарбоната натрия для доведения pH более 7 и фильтровали. Осадок на фильтре растворяли в дихлорметане и органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток суспендировали в 50 мл смеси дихлорметана и метанола (V/V=20:1) и фильтровали. Продукт сушили с получением 5,30 г желтого твердого вещества. Маточный раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой A с получением указанного в заголовке соединения этил 3-амино-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат 1b (общий продукт 6,07 г, желтое твердое вещество), выход: 60,1%.

МС m/z (ESI): 291,2 [М+1]

Стадия 2

Этил 3-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Этил 3-амино-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 1b (550 мг, 1,89 ммоль) растворяли в 50 мл дихлорметана. В смесь, которая была недостаточно растворима при комнатной температуре, добавляли триэтиламин (0,66 мл, 4,75 ммоль) и трифосген (225 мг, 0,76 ммоль) и перемешивали до тех пор, пока она не растворилась полностью. После перемешивания в течение 30 минут в реакционный раствор добавляли 2-фтор-3-метоксианилин (283 мг, 2 ммоль) и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре, а затем реакцию прекращали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и в остаток добавляли 20 мл воды, экстрагировали дихлорметаном (50 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения этил 3-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилата 1с (640 мг, белое твердое вещество), выход: 73,9%.

МС m/z (ESI): 458,1 [М+1]

Стадия 3

5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион

Этил 3-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 1с (640 мг, 1,40 ммоль) растворяли в 30 мл этанола, а затем добавляли метоксид натрия (190 мг, 3,52 ммоль). После проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре, реакционный раствор нагревали до 80°C и дополнительно реакцию проводили в течение 1 часа. Затем реакцию останавливали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, а затем добавляли 3,5 мл 1 М раствора соляной кислоты и фильтровали. Осадок на фильтре промывали водой (20 мл×1), этанолом (10 мл×1) и метил-трет-бутиловым эфиром (5 мл×1) и сушили с получением указанного в заголовке соединения 5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-диона 1d (536 мг, светло-желтое твердое вещество), выход: 93,2%.

МС m/z (ESI): 412,2 [М+1]

Стадия 4

7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион

5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 1d (530 мг, 1,29 ммоль), 2-(хлорметил)-1,3-дифторбензол (230 мг, 1,41 ммоль), йодид калия (235 мг, 1,41 ммоль) и карбонат калия (196 мг, 1,42 ммоль) последовательно растворяли в 15 мл N,N-диметилформамида. После проведения реакции в течение 24 ч при комнатной температуре, реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. В остатки добавляли 30 мл воды и 20 мл метил-трет-бутилового эфира при перемешивании, а затем фильтровали. Осадок на фильтре растворяли в 50 мл дихлорметана, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 570 мг твердого вещества. Маточный раствор экстрагировали, органическую фазу промывали водой (20 мл×3), насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток суспендирували в 15 мл смеси н-гексана и метил-трет-бутилового эфира (V/V=1:1) и фильтровали. Осадок на фильтре сушили с получением 110 мг твердого вещества. Получали указанное в заголовке соединение 7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 1е (общий продукт 680 мг, рыжевато-коричневое твердое вещество), выход: 98,3%.

МС m/z (ESI): 538,2 [М+1]

Стадия 5

3-(бромметил)-7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион

В атмосфере аргона 7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 1е (660 мг, 1,23 ммоль), азобисизобутиронитрил (24 мг, 0,15 ммоль) и N-бромсукцинимид (262 мг, 1,47 ммоль) последовательно растворяли в 20 мл хлорбензола. После проведения реакции в течение 12 часов при температуре 85°C реакцию останавливали и реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, а затем промывали последовательно насыщенным раствором хлорида натрия (15 мл×1) и насыщенным раствором тиосульфата натрия (15 мл×1). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (40 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке неочищенного соединения 3-(бромметил)-7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-диона 1f (900 мг, светло-желтое твердое вещество), который непосредственно использовали на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 616,1 [М+1]

Стадия 6

7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион

Неочищенный 3-(бромметил)-7-(2,6-дифторбензил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 1f (900 мг, 1,46 ммоль) растворяли в 3 мл раствора диметиламина в тетрагидрофуране. После проведения реакции в течение 12 часов при комнатной температуре реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой D с получением 627 мг неочищенного соединения. Неочищенное соединение очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой Е с получением указанного в заголовке соединения 7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-диона 1g (223 мг, светло-желтое твердое вещество), выход: 31,0%.

МС m/z (ESI): 581,3 [М+1]

Стадия 7

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион 1g (212 мг, 0,36 ммоль) растворяли в 8 мл муравьиной кислоты, а затем добавляли 0,25 мл раствора 4 М HCl в 1,4-диоксан и палладий 10% на угле (Pd/C) (40 мг). Смесь продували водородом три раза и реакцию проводили в течение двух часов в атмосфере водорода и при нормальном давлении, затем реакцию останавливали и реакционную смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метанолом (20 мл ×2). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении. Остатки добавляли 50 мл дихлорметана и 15 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и перемешивали в течение 10 минут. Насыщенный раствор бикарбоната натрия добавляли по каплям для доведения pH более 7, и водная фаза подлежала экстракции. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (20 мл×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-диона 1h (180 мг, белое твердое вещество), выход: 89,5%.

МС m/z (ESI): 551,3 [М+1]

Стадия 8

N-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)ацетамид

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 1h (33 мг, 0,059 ммоль) растворяли в 5 мл дихлорметана, добавляли триэтиламин (13 мкл, 0,094 ммоль) и уксусный ангидрид (7 мкл, 0,072 ммоль). После проведения реакции в течение 12 ч при комнатной температуре, реакция была неполной. Затем добавляли 5 мкл уксусного ангидрида и смесь нагревали до 35°C и далее подвергали взаимодействию в течение 2-х часов. Реакцию останавливали и в реакционный раствор добавляли 2 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, перемешивали в течение 10 минут и экстрагировали. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (15 мл×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения N-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)ацетамида 1 (25 мг, белое твердое вещество), выход: 71,4%.

МС m/z (ESI): 593,1 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,89 (d, 2Н), 7,67 (d, 2Н), 7,36 (s, 1Н), 7,25-7,30 (m, 1Н), 7,19 (t, 1Н), 7,08 (t, 1Н), 7,89-7,94 (m, 3Н), 5,45 (s, 2Н), 3,93 (s, 3Н), 3,69-3,70 (m, 2Н), 2,35 (s, 6Н), 2,25 (s, 3Н).

Пример 2

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 1h (30 мг, 0,054 ммоль) растворяли в 5 мл дихлорметана, добавляли триэтиламин (0,045 мл, 0,32 ммоль) и трифосген (6,5 мг, 0,022 ммоль). После проведения реакции в течение 1 часа реакционный в раствор добавляли метоксиамин (6,8 мг, 0,081 ммоль), и далее подвергали взаимодействию в течение 12 часов при комнатной температуре, а затем добавляли трифосген (18 мг, 0,061 ммоль), и дополнительно реакцию проводили в течение 1 часа при 35°C с последующим добавлением метоксиамина (100 мг, 1,20 ммоль) и продолжали реакцию в течение 2 ч при 35°C. Реакцию останавливали и в реакционный раствор добавляли 10 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (15 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевины 2 (12 мг, бледно-желтое твердое вещетво), выход: 35.3%.

МС m/z (ESI): 624,5 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,90 (d, 2Н), 7,71 (s, 1Н), 7,67 (d, 2Н), 7,20-7,30 (m, 3Н), 7,06-7,08 (m, 1Н), 6,89-6,94 (m, 3Н), 5,45 (s, 2Н), 3,94 (s, 3Н), 3,87 (s, 3Н), 3,86 (s, 2Н), 2,35 (s, 6Н),

Пример 3

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмоченина

2-(4-аминофенил-7-(2,6-дифтобензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 1h (26 мг, 0,047 ммоль) растворяли в 3 мл тетрагидрофурана и добавяли этилизоцианат (55 мкл, 0,69 ммоль), и реакцию проводили в течение 12 часов при 35°C. Реакцию останавливали и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки добавляют 10 мл воды и 20 мл дихлорметана и экстрагировали. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (15 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевины 3 (12 мг, белое твердое вещество), выход: 41,4%.

МС m/z (ESI): 622,5 [М+1]

¹Н ЯМР (400 М МГц, CDCl₃7,80 (d, 2Н), 7,45 (d, 2Н), 7,22-7,26 (m, 2Н), 7,13-7,15 (m, 1Н), 6,99-7,04 (m, 1Н), 6,84-6,89 (m, 3Н), 6,45 (s, 1Н), 5,40 (s, 2Н), 3,89 (s, 3Н), 3,65 (s, 2Н), 3,33-3,35 (m, 2Н), 2,30 (s, 6Н), 1,20 (t, 3Н).

Пример 4

Метил (4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)карбамат

Стадия 1

Метил (4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)карбамат

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 1h (35 мг, 0,064 ммоль) растворяли в 5 мл дихлорметана и добавляли триэтиламин (0,8 мл, 5,8 ммоль) и метиловый эфир хлормуравьиной кислоты (0,5 мл, 4,14 ммоль). После проведения реакции в течение 12 ч при 35°C реакцию останавливали и охлаждали до комнатной температуры. В реакционный раствор добавляли 10 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (15 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения метил (4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)карбамата 4 (24 мг, белое твердое вещество), выход: 61,5%.

МС m/z (ESI): 609,5 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,88 (d, 2Н), 7,55 (d, 2Н), 7,25-7,27 (m, 1Н), 7,18-7,20 (m, 1Н), 7,06-7,08 (m, 1Н), 6,88-6,94 (m, 3Н), 6,78 (s, 1Н), 5,45 (s, 2Н), 3,93 (s, 3Н), 3,85 (s, 3Н), 3,65-3,73 (m, 2Н), 2,35 (s, 6Н).

Пример 5

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (46 мг, 0,77 ммоль) растворяли в 1 мл толуола и добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,2 мл, 1,13 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,16 мл, 0,73 ммоль). Смесь перемешивали в течение 1 ч при 70°C, а затем охлаждали на бане со льдом с последующим добавлением 2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-диона 1h (30 мг, 0,050 ммоль) и 2 мл дихлорметана на бане со льдом. Смесь подвергали взаимодействию в течение 12 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали, и в реакционный раствор добавляли 10 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном (25 мл ×1). Органическую фазу промывали водой (10 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевины 5 (8 мг, белое твердое вещество), выход: 24,4%.

МС m/z (ESI): 607,9 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,79 (d, 2Н), 7,50 (d, 2Н), 7,27-7,30 (m, 1Н), 7,19 (t, 1Н), 7,06 (t, 1Н), 6,880-6,93 (m, 4Н), 5,44 (s, 2Н), 4,95 (s, 1Н), 3,92 (s, 3Н), 3,78 (s, 2Н), 2,88 (d, 3Н), 2,39 (s, 6Н).

Пример 6

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина

Стадия 1

5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион

5-(2-фтор-3-метоксифенил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 1d (1,90 г, 4,62 ммоль), 2-(бромметил)-1-фтор-3-(трифторметил)бензол (1,31 г, 5,10 ммоль), йодид калия (844 мг, 5,08 ммоль) и карбонат калия (702 мг, 5,09 ммоль) последовательно растворяли в 54 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания в течение 20 часов при комнатной температуре реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки смешивали с водой и эфиром до суспендирования в течение 1 ч и фильтровали. Осадок на фильтре промывали эфиром (10 мл ×3) и сушили с получением указанного в заголовке соединения 5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-диона 6а (1,91 г, белое твердое вещество), выход: 70,7%.

МС m/z (ESI): 588,1 [М+1]

Стадия 2

3-(бромметил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион 6а (1,81 г, 3,08 ммоль), азобисизобутиронитрил (61 мг, 0,37 ммоль) и N-бромсукцинимид (660 мг, 3,71 ммоль) растворяли в 53 мл хлорбензола. Полученный раствор продували аргоном трижды, и реакцию проводили в течение 19 ч при 85°C в атмосфере аргона. Реакцию останавливали, и реакционный раствор промывали насыщенным раствором тиосульфата натрия (30 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл ×2), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке неочищенного соединения 3-(бромметил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-диона 6b (2,18 г, бледно-желтое твердое вещество), который непосредственно использовали на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 666,0 [М+1]

Стадия 3

3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

Неочищенный 3-(бромметил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 6b (2,18 г, 3,27 ммоль) и диметиламин (2 М раствор в тетрагидрофуране (ТГФ)) (6,8 мл 13,6 ммоль) добавляли в реакционную колбу и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративного метода разделения с получением указанного в заголовке соединения 3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-диона 6с (455 мг, белое твердое вещество), выход: 22,1%.

МС m/z (ESI): 630,8 [М+1]

Стадия 4

2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 6 с (200 мг, 0,32 ммоль) растворяли в 8 мл муравьиной кислоты, и добавляли 0,25 мл раствора 4 М HCl в 1,4-диоксане и 10% Pd/C (50 мг). Смесь продували водородом трижды и перемешивали в течение 2-х часов при комнатной температуре. Реакцию останавливали и фильтровали. Осадок на фильтре промывали небольшим количеством метанола. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, добавляли 50 мл дихлорметана и 20 мл раствора бикарбоната натрия и перемешивали в течение 10 минут. Водную фазу доводили до pH 8 и экстрагировали. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (25 мл ×2), органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-диона 6d (135 мг, белое твердое вещество), выход: 71,1%.

МС m/z (ESI): 600,9 [М+1]

Стадия 5

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина

2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 6d (30 мг, 0,050 ммоль) растворяли в 1 мл дихлорметана и к нему добавляли этилизоцианат (0,06 мл, 0,76 ммоль). После проведения реакции в течение 12 часов при температуре 35°C, реакцию останавливали и в реакционный раствор добавляли 5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 20 мл раствора дихлорметана, и подвергали экстракции. Органическую фазу промывали водой (10 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (5 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с использованием элювиальной системы А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевины 6 (15 мг, белое твердое вещество), выход: 44,1%.

МС m/z (ESI): 671,9 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,75 (d, 2Н), 7,51 (d, 1Н), 7,46 (d, 2Н), 7,37-7,40 (m, 1Н), 7,18-7,24 (m, 2Н), 7,15 (t, 1Н), 6,91 (t, 1Н), 6,85 (s, 1Н), 5,60 (s, 2Н), 4,92 (s, 1Н), 3,90 (s, 3Н), 3,69-3,76 (m, 2Н), 3,28-3,35 (m, 2Н), 2,35 (s, 6Н), 1,19 (t, 3H).

Пример 7

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 6d (30 мг, 0,050 ммоль) растворяли в 3 мл дихлорметана, и к нему добавляли триэтиламин (0,07 мл, 0,50 ммоль) и трифосген (15 мг, 0,051 ммоль). После проведения реакции в течение 1 часа при комнатной температуре, реакцию останавливали и в реакционный раствор добавляли 10 мл воды, а затем экстрагировали дихлорметаном (25 мл ×1). Органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл ×1), водой (10 мл×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевины 7 (12 мг, белое твердое вещество), выход: 33,6%.

МС m/z (ESI): 673,8 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,85 (d, 2Н), 7,64-7,70 (m, 3Н), 7,53 (d, 1Н), 7,39-7,42 (m, 1Н), 7,23-7,28 (m, 3Н), 7,06 (t, 1Н), 6,92 (t, 1Н), 5,57-5,65 (m, 2Н), 3,93 (s, 3Н), 3,87 (s, 3Н), 3,72 (s, 2Н), 2,36 (s, 6Н).

Пример 8

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (62 мг, 1,03 ммоль) растворяли в 1 мл толуола и добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,28 мл, 1,58 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,20 мл, 0,98 ммоль). После проведения реакции в течение 1,5 ч при 70°C в реакционный раствор добавляли 2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 6d (30 мг, 0,050 ммоль) и 1 мл дихлорметана, и дополнительно проводили реакцию в течение 12 ч при комнатной реакции температуре и останавливали. В реакционный раствор добавляли 5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, а затем экстрагировали дихлорметаном (25 мл×1). Органическую фазу промывали водой (10 мл×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке неочищенного соединения, которое дополнительно очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(3-((диметиламино)метил)-5-(2-фтор-3-метоксифенил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевины 8 (13 мг, белое твердое вещество), выход 39,4%.

МС m/z (ESI): 658,2 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,76 (d, 2Н), 7,51-7,53 (m, 1Н), 7,47 (d, 2Н), 7,39-7,40 (m, 1Н), 7,24 (t, 1Н), 7,19 (t, 1Н), 7,04 (t, 1Н), 6,89 (t, 1Н), 6,74 (m, 1Н), 5,56-5,64 (m, 2Н), 4,85 (s, 1Н), 3,92 (s, 3Н), 3,77 (s, 2Н), 2,88 (d, 3Н), 2,38 (s, 6Н).

Пример 9

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

Этил 5-(бромметил)-3-(трет-бутиламино)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Этил 3-(трет-бутиламино)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 1а (23 г, 66,40 ммоль), азобисизобутиронитрил (2,18 г, 13,28 ммоль), N-бромсукцинимид (14,18 г, 79,68 ммоль) и 400 мл хлорбензола добавляли в реакционную колбу объемом 1 литр с одним отверстием. Реакционный раствор перемешивали равномерно и продували аргоном трижды. После проведения реакции в течение 64 ч при 85°C реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. К остаткам добавляли 300 мл дихлорметана и последовательно промывали водой (100 мл×2), насыщенным раствором тиосульфата натрия (100 мл×2) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл×2). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке неочищенного соединения этил 5-(бромметил)-3-(трет-бутиламино)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилата 9а (25 г, коричневая масляная жидкость), которое непосредственно используется на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 427,1 [М+2]

Стадия 2

Этил 3-(трет-бутиламино)-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат

Неочищенный этил 5-(бромметил)-3-(трет-бутиламино)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 9а (25 г, 58,78 ммоль), раствор диметиламина в ТГФ (88 мл, 176,35 ммоль) и 120 мл ТГФ добавляли в реакционную колбу объемом 500 мл с одним отверстием и перемешивали до растворения. После перемешивание в течение 3 часов при комнатной температуре реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой С с получением указанного в заголовке соединения этил 3-(трет-бутиламино)-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилата b (6 г, коричневая масляная жидкость), выход 26,2%.

MS m/z (ESI): 390,2 [М+1]

Стадия 3

Метил 3-амино-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Этил 3-(трет-бутиламино)-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат 9b (6 г, 15,41 ммоль) и 80 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу объемом 100 мл с одним отверстием и равномерно перемешивали. Смесь нагревали с обратным охлаждением в течение 1 часа, и реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. К остаткам добавляли 50 мл дихлорметана, а затем добавляли по каплям насыщенный раствор бикарбоната натрия для доведения pH более 7. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остатки добавляли 100 мл метанола и 20 мл дихлорметана, и перемешивали до растворения. В полученный раствор добавляли карбонат калия (6,37 г, 46,16 ммоль) и перемешивали в течение 17 ч при комнатной температуре, а затем фильтроапли. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой В, получая указанное в заголовке соединение метил 3-амино-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 9с (3,30 г, желтое твердое вещество), выход 67,1%.

МС m/z (ESI): 320,2 [М+1]

Стадия 4

Метил 5-((диметиламино)метил)-3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Метил 3-амино-5-((диметиламино)метил)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 9с (3,30 г, 10,33 ммоль) и 100 мл дихлорметана добавляли в реакционную колбу объемом 250 мл с одним отверстием и равномерно перемешивали. В полученный раствор добавляли триэтиламин (5,8 мл, 41,32 ммоль) и трифосген (1,84 г, 6,20 ммоль), а затем перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. В реакционный раствор добавляли 3-амино-6-метоксипиридазин (1,94 г, 15,50 ммоль, полученный известным способом, описанным в "Journal of Medicinal Chemistry", 2006, 49 (14), 4409-4424) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем реакцию прекращали. В реакционный раствор добавляли 200 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (100 мл ×3). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой В с получением указанного в заголовке соединения метил 5-((диметиламино)метил)-3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилата 9d (2,80 г, желтое твердое вещество), выход 57,6%.

МС m/z (ESI): 470,9 [М+1]

Стадия 5

3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион

Метил 5-((диметиламино)метил)-3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 9d (2,80 г, 5,95 ммоль) и 120 мл метанола добавляли в реакционную колбу объемом 250 мл с одним отверстием и равномерно перемешивали. В полученный раствор добавляли метоксид натрия (1,61 г, 29,76 ммоль). Смесь нагревали до 50°C и перемешивали в течение 4-х часов, и затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. В остатки добавляли 100 мл воды, а затем добавляли по каплям концентрированную соляную кислоту, чтобы довести pH до значения 5-6. Раствор экстрагировали дихлорметаном (100 мл ×3). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой В с получением указанного в заголовке соединения 3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-диона 9е (1,80 г, желтое твердое вещество), выход 69,0%.

МС m/z (ESI): 438,9 [М+1]

Стадия 6

7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил1)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион

3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 9е (900 мг, 2,05 ммоль) и 50 мл N,N-диметилформамида добавляли в реакционную колбу объемом 100 мл с одним отверстием и равномерно перемешивали. В полученный раствор добавляли 2,6-дифторбензил хлорид (367 мг, 2,26 ммоль) и карбонат калия (850 мг, 6,16 ммоль). Смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 17 ч, а затем реакцию прекращали. В реакционный раствор добавляли 250 мл воды и перемешивали в течение 20 минут. Смесь фильтровали, и осадок на фильтре сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения 7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил1)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-диона 9f (1,10 г, желтое твердое вещество), выход 94,9%.

МС m/z (ESI): 564,9 [М+1]

Стадия 7

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-дион

7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил1)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 9f (1 г, 1,77 ммоль), палладий 10% на угле (200 мг) и 80 мл метанола добавляли в реакционную колбу объемом 250 мл с одним отверстием и равномерно перемешивали. Полученный раствор продували водородом 6 раз и затем перемешивали в течение 17 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали. Реакционный раствор фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения 2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-диона 9g (785 мг, желтое твердое вещество), выход 82,9%.

МС m/z (ESI): 534,9 [М+1]

Стадия 8

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (483 мг, 8,04 ммоль) и 15 мл толуола перемешивали до растворения в химическом реакторе объемом 600 мл. В полученный раствор последовательно добавляли N,N-диизопропилэтиламин (2,1 мл, 12,07 ммоль) и дифенилфосфорилазид (2,22 г, 8,07 ммоль). Смесь нагревали до 75°C и перемешивали в течение 1,5 часов. В реакционный раствор добавляли 10 мл раствора 2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-диона 9g (480 мг, 0,80 ммоль) в ТГФ в бане со льдом при температуре 0°C. После завершения добавления реакционный раствор нагревали до 55°C и перемешивали в течение 16 ч, а затем реакцию прекращали. В реакционный раствор добавляли 20 мл дихлорметана и 20 мл воды и подвергали экстракции. Органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл ×1), водой (50 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл ×1) последовательно. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой A с получением неочищенного продукта, который очищали далее тонкослойной хроматографией с элювиальной системой A с получением неочищенного продукта (387 мг, коричневое твердое вещество), выход неочищенного продукта: 81,3%. Две порции сырья объединяли, чтобы получить общий продукт 823 мг, который очищали тонкослойной хроматографией с элювиальной системой F. Полученный продукт растворяли в метаноле и концентрировали при пониженном давлении, отделенное твердое вещество подвергалось кристаллизации с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевины 9 (450 мг, белое твердое вещество), общий выход: 36.0%.

МС m/z (ESI): 592,3[М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 8.17 (s, 1Н), 7.54 (s, 1Н), 7.42-7.45 (m, 4Н), 7.24-7.30 (m, 2Н), 6.88 (t, 2Н), 5.95 (s, 1Н), 5.38 (s, 2Н), 4.23 (s, 3Н), 3.69 (s, 2Н), 2.91 (s, 3Н), 2.33 (s, 6Н).

Пример 10

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 9g (22 мг, 0,041 ммоль) растворяли в 2 мл дихлорметана и к нему добавляли этилизоцианат (0,1 мл, 1,26 ммоль). После проведения реакции в течение 12 ч при 35°C реакцию останавливали. В реакционный раствор добавляли 5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном (30 мл ×1). Органическую фазу промывали водой (10 мл ×1), насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-этилмочевины 10 (10 мг, белое твердое вещество), выход: 40,0%.

МС m/z (ESI): 606,2 [М+1]

¹Н ЯМР (400МГц, CDCl₃) 8.07 (s, 1Н), 7.55 (d, 1Н), 7.38-7.43 (m, 4Н), 7.25-7.28 (m, 2Н), 6.858 (t, 2Н), 5.87 (t, 1Н), 5.38 (s, 2Н), 4.23 (s, 3Н), 3.50 (s, 2Н), 3.37 (t, 2Н), 2.25 (s, 6Н), 1.23 (t, 3Н).

Пример 11

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

2-(4-аминофенил)-7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 9д (100 мг, 0,18 ммоль) растворяли в 5 мл дихлорметана и добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,5 мл, 2,90 ммоль) и трифосген (46 мг, 0,15 ммоль). Смесь подвергали взаимодействию в течение 45 минут при комнатной температуре, а затем добавляли гидрохлорид метоксиамина (92 мг, 1,12 ммоль). Смесь дополнительно подвергали взаимодействию в течение 12 ч при 40°C, а затем реакцию прекращали. В реакционный раствор добавляли 5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, а затем экстрагировали дихлорметаном (25 мл ×1). Органическую фазу последовательно промывали водой (10 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А, с получением 62 мг неочищенного продукта, который затем очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А за два раза, чтобы получить указанное в заголовке соединение 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевину 11 (45 мг, белое твердое вещество), выход: 24,7%.

МС m/z (ESI): 608,3 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7.90 (d, 2Н), 7.73 (s, 1Н), 7.68 (d, 2Н), 7.41 (d, 1Н), 7.26-7.30 (m, 1Н), 7.22 (s, 1Н), 7.13 (s, 1Н), 6.92 (t, 2Н), 5.44 (s, 2Н), 4.21 (s, 3Н), 3.88 (s, 3Н), 3.70 (s, 2Н), 2.35 (s, 6Н).

Пример 12

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

Этил 3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат

Этил 3-амино-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 1b (10,80 г, 37,20 ммоль) растворяли в 500 мл дихлорметана, а затем добавляли триэтиламин (20 мл, 144 ммоль) и трифосген (5,20 г, 17,5 ммоль) последовательно. После проведения реакции в течение 1 часа при комнатной температуре в реакционный раствор добавляли 3-амино-6-метоксипиридазин (6,60 г, 52,3 ммоль) и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре, а затем реакцию останавливали. Полученные продукты объединяли и добавляли 100 мл воды. Раствор подвергался экстракции. Органическую фазу промывали водой (100 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой С с получением указанного в заголовке соединения этил 3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилата 12а (8,72 г, бледно-желтое твердое вещество), выход: 53,0%.

Стадия 2

5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион

Этил 3-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-5-метил-1-(4-нитрофенил)-1Н-пиразол-4-карбоксилат 12а (8,72 г, 19,70 ммоль) растворяли в 150 мл метанола, и к нему добавляли метоксид натрия (2,70 г, 50 ммоль). Смесь нагревали до 55°C и перемешивали в течение 12 ч, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки добавляли по каплям 1 М раствором соляной кислоты для доведения рН менее 7 и фильтровали. Осадок на фильтре последовательно промывали водой (30 мл ×1), метанолом (30 мл ×1) и эфиром (20 мл ×1), и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке неочищенного соединения 5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7Н)-диона 12b (8,34 мг, светло-желтое твердое вещество), которое непосредственно использовали на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 396,0 [М+1]

Стадия 3

7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-фиримидин-4,6(5Н,7H)-дион

2-(бромметил)-1-фтор-3-(трифторметил)бензол (приобретенный у Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., номер продукта XW239870821) (308 мг, 1,20 ммоль) растворяли в 20 мл N,N-диметилформамида и к нему последовательно добавляли неочищенный 5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 12b (395 мг, 1 ммоль) и карбонат калия (276 мг, 2 ммоль). После взаимодействия в течение 2-х часов при комнатной температуре реакцию останавливали. Реакционный раствор выливали в 100 мл воды и фильтровали. Осадок на фильтре сушили с получением указанного в заголовке соединения 7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-диона 12 с (465 мг, желтое твердое вещество), выход: 81,4%.

МС m/z (ESI): 570,0 [М-1]

Стадия 4

3-(бромметил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-3-метил-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион 12 с (465 мг, 0,81 ммоль), азобисизобутиронитрил (13 мг, 0,081 ммоль), N-бромсукцинимид (174 мг, 0,97 ммоль) и 20 мл хлорбензола добавляли в реакционную колбу объемом 100 мл. Смесь подвергали взаимодействию в течение 17 ч при 80°C в атмосфере аргона, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения неочищенного 3-(бромметил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 12d (600 мг, желтое масло), которое непосредственно использовали на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 650,1 [М+1]

Стадия 5

3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-дион

Неочищенный 3-(бромметил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 12d (15 мг, 0,033 ммоль) растворяли в 20 мл ТГФ и добавляли 2 М раствор диметиламина в ТГФ (1 мл, 2,03 ммоль). Смесь подвергали взаимодействию в течение 2-х часов при комнатной температуре, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-диона 12е (85 мг, желтое твердое вещетво), выход: 17,0%.

МС m/z (ESI): 615,2 [М+1]

Стадия 6

2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион

3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2-(4-нитрофенил)-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7H)-дион 12е (100 мг, 0,14 ммоль) растворяли в 5 мл муравьиной кислоты, и к нему добавляли палладий 10% на угле (48 мг). Смесь продували водородом при нормальном давлении трижды, а затем подвергали реакции в течение 3-х часов при комнатной температуре в атмосфере водорода. Реакцию останавливали и фильтровали. В фильтрат добавляли в 10 мл воды, а затем добавляли по каплям насыщенный раствор бикарбоната натрия для доведения pH более 7. Раствор экстрагировали дихлорметаном (25 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой A с получением указанного в заголовке соединения 2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5Н,7Н)-диона 12f (50 мг, белое твердое вещество), выход: 53,0%.

МС m/z (ESI): 585,2 [М+1]

Стадия 7

1-(4-(3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (51 мг, 085 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,22 мл, 1,28 ммоль) растворяли в 2 мл толуола и добавляли дифенилфосфорилазид (236 мг, 0,86 ммоль). После проведения реакции в течение 1,5 ч при 75°C в реакционный раствор добавляли 2 мл раствора 2-(4-аминофенил)-3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6(5H,7H)-дион 12f (15 мг, 0,033 ммоль) в ТГФ. Полученный раствор подвергали реакции в течение 12 ч при 50°C, а затем реакцию останавливали. В реакционный раствор добавляли 10 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, а затем экстрагировали дихлорметаном (20 мл ×1). Органическую фазу собирали и последовательно промывали водой (10 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(3-((диметиламино)метил)-7-(2-фтор-6-(трифторметил)бензил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метилмочевины 12 (20 мг, белое твердое вещество), выход: 36,3%.

МС m/z (ESI): 642,3 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 8.19 (s, 1Н), 7.56 (d, 1Н), 7.43-7.46 (m, 3Н), 7.34-7.39 (m, 3Н), 7.27 (d, 1Н), 7.16 (t, 1Н), 6.05 (s, 1Н), 5.48 (s, 2Н), 4.22 (s, 3Н), 3.48 (s, 2Н), 2.93 (d, 3Н), 2.21 (s, 6Н).

Пример 13

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-этилмочевина

Стадия 1

(Е)-4-(диметиламино)-3-(4-нитрофенил)бут-3-ен-2-он

1-(4-нитрофенил)пропан-2-он 13а (3,8 г, 21,21 ммоль) и N,N-диметилформамид диметилацеталь добавляли в колбу объемом 50 мл. После проведения реакции в течение 30 минут при температуре 100°C, реакцию останавливали и добавляли 150 мл дихлорметана, перемешивая. Полученный продукт очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения (Е)-4-(диметиламино)-3-(4-нитрофенил)бут-3-ен-2-она 13b (3 г, желтое твердое вещество), выход: 60,5%.

МС m/z (ESI): 235,0 [М+1]

Стадия 2

Этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат

(Е)-4-(диметиламино)-3-(4-нитрофенил)бут-3-ен-2-он 13b (1,50 г, 6,48 ммоль) и 2-аминоацетилацетгидрохлорид (1,40 г, 7.78 ммоль) растворяли в 40 мл уксусной кислоты. Смесь подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 16 часов и при 100°C в течение 5 ч, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. В остаток добавляли 120 мл дихлорметана и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл ×1). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток суспендировали в 15 мл этилацетата, а затем фильтровали. Осадок на фильтре сушили с получением указанного в заголовке соединения этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата 13 с (412 мг, желтое твердое вещество), выход: 24,5%.

МС m/z (ESI): 273,1 [М-1]

Стадия 3

Этил 1-амино-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат Этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 13с (412 мг, 1,50 ммоль) растворяли в 6 мл N,N-диметилформамида и затем добавляли гидрид натрия (72 мг, 1,80 ммоль) в бане со льдом. Смесь подвергали взаимодействию в течение 30 минут при комнатной температуре, а затем добавляли 20 мл раствора хлорамина. Затем смесь дополнительно подвергали взаимодействию в течение 2-х часов при комнатной температуре и затем реакцию останавливали. Затем добавляли 50 мл насыщенного водного раствора тиосульфата натрия и перемешивали в течение 10 минут до расслоения. Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (30 мл×3). Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл ×2), сушили над безводным сульфатом натрия, и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения этил 1-амино-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата 13d (381 мг, желтое твердое вещество), выход 87,7%.

МС m/z (ESI): 290,2 [М+1]

Стадия 4

Этил 1-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1H-пиррол-2-карбоксилат

Этил 1-амино-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 13d (381 мг, 1,30 ммоль) добавляли к 30 мл дихлорметана и перемешивали до растворения, затем добавляли триэтиламин (328 мг, 3,25 ммоль) и трифосген (157 мг, 0,53 ммоль). После проведения реакции в течение 30 минут при комнатной температуре в реакционный раствор добавляли 2-фтор-3-метоксианилина (202 мг, 1,43 ммоль). Смесь дополнительно подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение 2-х часов. Затем реакцию останавливали и реакционный раствор фильтровали. Осадок на фильтре последовательно промывали водой (10 мл×2) и этилацетатом (2 мл×3), а затем сушили с получением указанного в заголовке соединения этил 1-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата 13е (296 мг, желтое твердое вещество), выход 49,9%.

МС m/z (ESI): 457,3 [М+1]

Стадия 5

3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион

Этил 1-(3-(2-фтор-3-метоксифенил)уреидо)-3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 13е (290 мг, 0,64 ммоль) и гидроксид натрия (128 мг, 3,20 ммоль) растворяли в 10 мл дихлорметана. После проведения реакции в течение 2 ч при 80°C реакцию прекращали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, а затем добавляли по каплям 1 М раствор соляной кислоты для доведения рН до значения 3-4. Твердое вещество отделяли и фильтровали. Осадок на фильтре последовательно промывали водой (20 мл ×3) и этанолом (10 мл ×1) и в результате получали указанное в заголовке соединение 3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-дион 13f (192 мг, серое твердое вещество), выход 73,3%.

МС m/z (ESI): 411,0 [М+1]

Стадия 6

1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-дион

3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-дион 13f (192 мг, 0,47 ммоль), 2-(хлорметил)-1,3-дифторбензол (84 мг, 0,52 ммоль) и карбонат калия (162 мг, 1,75 ммоль) добавляли к 10 мл N,N-диметилформамида. После проведения реакции в течение 16 ч при 50°C реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. В остатки добавляли 20 мл воды (20 мл×1) и экстрагировали дихлорметаном (20 мл×1). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (10 мл×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с использованием элювиальной системы А с получением указанного в заголовке соединения 1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3Н)-диона 13g (160 мг, желтое твердое вещество), выход 63,7%.

МС m/z (ESI): 537,0 [М+1]

Стадия 7

5-(бромметил)-1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-дион

1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-5-метил-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-дион 13g (120 мг, 0,22 ммоль), азобисизобутиронитрил (8 мг, 0,044 ммоль) и N-бромсукцинимид (47 мг, 0,26 ммоль) растворяли в 5 мл хлорбензола. Смесь подвергали взаимодействию в течение 16 ч при 85°C в атмосфере аргона, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остатки добавляли 10 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (10 мл ×1). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (10 мл ×3). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения 5-(бромметил)-1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион 13h (130 мг, желтое твердое вещество), выход: 96,2%.

МС m/z (ESI): 616,0 [М+1]

Стадия 8

1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3Н)-дион

Неочищенный 5-(бромметил)-1-(2,6-дифторбензил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион 13h (130 мг, 0,21 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (81 мг, 0,63 ммоль) растворяли в 5 мл ТГФ и добавляли 1,6 мл раствора диметиламина в тетрагидрофуране. Смесь подвергали взаимодействию в течение 1 ч при температуре от 0 до 5°C, а затем реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-диона 13i (40 мг, желтое твердое вещество), выход: 33,1%.

МС m/z (ESI): 580,2 [М+1]

Стадия 9

6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-дион

1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион 13i (40 мг, 0,069 ммоль), хлорид аммония (30 мг, 0,55 ммоль) и железа (16 мг, 0,28 ммоль) растворяли в 5 мл смеси этанола и воды (V/V=4:1). Смесь подвергали взаимодействию в течение 1 ч при 80°C, а затем реакцию останавливали. В реакционный раствор добавляли 20 мл воды, а затем экстрагировали дихлорметаном (10 мл ×3). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой A с получением указанного в заголовке соединения 6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3Н)-диона 13j (20 мг, желтое твердое вещество), выход: 52,6%.

МС m/z (ESI): 550,2 [М+1]

Стадия 10

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-этилмочевина

6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-дион 13j (20 мг, 0,036 ммоль) и этилизоцианат (13 мг, 0,18 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана в герметично закрытой пробирке объемом 30 мл. После проведения реакции в течение 16 ч при 50°C реакцию прекращали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-этил мочевины 13 (15 мг, белое твердое вещество), выход: 68,1%.

МС m/z (ESI): 621,3 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО (диметилсульфоксид)d₆) 7.87-7.77 (m, 4Н), 7.69 (s, 1Н), 7.58-7325 (m, 4Н), 7.12-7.08 (m, 1Н), 6.80-6.71 (m, 1Н), 4.42 (s, 2Н), 3.83 (s, 3Н), 3.45-3.50 (m, 2Н), 3.20-3.31 (m, 2Н), 2.16 (s, 6Н), 1.12-1.03 (m, 3Н).

Пример 14

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (70 мг, 1,12 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,32 мл, 1,80 ммоль) растворяли в 1 мл толуола, а затем добавляли дифенилфосфорилазид (0,25 мл, 1,20 ммоль). После проведения реакции в течение 1,5 ч при 70°C, в реакционный раствор добавляли 1 мл раствора 6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-диона 13j (30 мг, 0,054 ммоль) в дихлорметане. Реакционный раствор подвергали взаимодействию в течение 12 ч при комнатной температуре, а затем добавляли 15 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (30 мл ×1). Органическую фазу последовательно промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл ×1), водой (10 мл ×1) и насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевины 14 (9 мг, белое твердое вещество), выход: 27,3%.

МС m/z (ESI): 606,9 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 8.86 (s, 1Н), 7.55 (s, 2Н), 7.24-7.35 (m, 3Н), 7.68-7.14 (m, 6Н), 6.21 (s, 1Н), 5.60-5.74 (m, 2Н), 4.54-4.59 (m, 2Н), 3.97 (s, 3Н), 2.77 (s, 3Н), 2.55 (s, 6Н).

Пример 15

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевина

6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3Н)-дион 13j (55 мг, 0,10 ммоль) растворяли в 4 мл тетрагидрофурана, а затем добавляли 4-нитрофенилхлорформиат (30 мг, 0,15 ммоль) и пиридин (32 мг, 0,40 ммоль). После проведения реакции в течение 3 ч при температуре 30°C в реакционный раствор дополнительно добавляли гидрохлорид метоксиламина (25 мг, 0,30 ммоль) и проводили реакцию в течение 8 часов при герметизации. Реакцию останавливали и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А трижды с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(2-фтор-3-метоксифенил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевины 15 (5 мг, желтое твердое вещество), выход: 8,1%.

МС m/z (ESI): 623,4 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) 7,90-7,87 (m, 2Н), 7,85-7,80 (m, 2Н), 7,60 (s, 1Н), 7,55-7,25 (m, 4Н), 7,09-7,02 (m, 1Н), 6,71-6,65 (m, 1Н), 4,50 (s, 2Н), 3,84(s, 3Н), 3,67 (s, 3Н), 3,54 (s, 2Н), 2,15(s, 6Н)

Пример 16

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевина

Стадия 1

Этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат

Этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1H-пиррол-2-карбоксилат 13с (4,30 г, 15,70 ммоль) растворяли в 200 мл дихлорметана и к нему последовательно добавляли триэтиламин (21,7 мл, 157 ммоль), 4-диметиламинопиридин (192 мг, 1,57 ммоль) и ди-трет-бутил-дикарбонил (5,14 г, 23,50 ммоль). После проведения реакции в течение 12 ч при комнатной температуре реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, в остаток добавляли 100 мл воды, а затем экстрагировали дихлорметаном (50 мл ×4). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле с элювиальной системой B, получая указанное в заголовке соединение этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат 16b (4 г, желтое твердое вещество), выход: 68,1%.

МС m/z (ESI): 273,1 [М-100]

Стадия 2

Этил 3-бромметил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат

Этил 3-метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат 16b (4 г, 10,70 ммоль), азобисизобутиронитрил (351 мг, 2,14 ммоль) и N-бромсукцинимид (2,28 г, 12,80 ммоль) растворяли в 40 мл хлорбензола последовательно. Реакционный раствор подвергали взаимодействию в течение 16 ч при 80°C в атмосфере аргона. Реакцию останавливали и охлаждали до комнатной температуры. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения этил 3-бромметил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилата 16с (5,2 г, желтое твердое вещество), который непосредственно использовали на следующей стадии.

МС m/z (ESI): 453,0 [М-100]

Стадия 3

Этил 3-(диметиламино)метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат

Этил 3-бромметил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат 16 с (4,80 г, 10,70 ммоль) растворяли в 50 мл тетрагидрофурана и к нему добавляли раствор диметиламина в тетрагидрофуране (26 мл, 53,50 ммоль). После проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке на силикагеле элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения этил 3-(диметиламино)метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилата 16d (3 г, желтое твердое вещество), выход: 67,4%.

МС m/z (ESI): 317,0 [М-100]

Стадия 4

Этил 3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат

Этил 3-(диметиламино)метил-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-1-трет-бутилкарбоксилат-2-карбоксилат 16d (3 г, 7,18 ммоль) растворяли в 30 мл 2 М раствора соляной кислоты в метаноле. После проведения реакции в течение 3-х часов при комнатной температуре реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. К остаткам добавляли 30 мл насыщенного раствора карбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном (30 мл ×4). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (60 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения этил 3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1H-пиррол-2-карбоксилата 16е (2 г, желтое твердое вещество), выход: 90,9%.

МС m/z (ESI): 318,1 [М+1]

Стадия 5

Этил 1-амино-3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат

Этил 3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 16е (1,8 г, 5,68 ммоль) растворяли в 20 мл N,N-диметилформамида и к нему добавляли 60%-ный раствор гидроксида натрия (307 мг, 7,66 ммоль). После проведения реакции в течение 30 минут при комнатной температуре реакционную смесь добавляли 50 мл хлорамин и далее подвергали взаимодействию в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакцию останавливали, и в реакционный раствор добавляли 200 мл воды и экстрагировали эфиром (50 мл ×3). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл ×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения этил 1-амино-3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата 16f (620 мг, желтое твердое вещество), выход: 32,9%.

МС m/z (ESI): 333,2 [М+1]

Стадия 6

Этил 3-((диметиламино)метил)-1-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат

Этил 1-амино-3-((диметиламино)метил)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 16f (420 мг, 1,26 ммоль) растворяли в 15 мл дихлорметана, а затем последовательно добавляли триэтиламин (382 мг, 3,78 ммоль), трифосген (131 мг, 0,44 ммоль) и 3-амино-6-метоксипиридазин (236 мг, 1,89 ммоль). После проведения реакции в течение 2-х часов при комнатной температуре реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения этил 3-((диметиламино)метил)-1-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата 16g (298 мг, желтое твердое вещество), выход: 30,2%.

Стадия 7

5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион

Этил 3-((диметиламино)метил)-1-(3-(6-метоксипиридазин-3-ил)уреидо)-4-(4-нитрофенил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат 16g (260 мг, 0,54 ммоль) растворяли в 10 мл метанола, а затем добавляли метоксид натрия (151 мг, 2,69 ммоль). После проведения реакции в течение 3 ч при 50°C реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А, с получением указанного в заголовке соединения 5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-диона 16h (76 мг, желтое твердое вещество) выход: 32,3%.

МС m/z (ESI): 438,3 [М+1]

Стадия 8

1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион

5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3Н)-дион 16h (78 мг, 0,18 ммоль), 2-хлорметил-1,3-дифторфенил (35 мг, 0,21 ммоль) и карбонат калия (37 мг, 0,26 ммоль) растворяли в 5 мл N,N-диметилформамида. После проведения реакции в течение 16 ч при 50°C реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-диона 16i (72 мг, желтое твердое вещество), выход: 72,0%.

МС m/z (ESI): 564,1 [М+1]

Стадия 9

6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3Н)-дион

1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-6-(4-нитрофенил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-дион 16i (72 мг, 0,13 ммоль), железо (29 мг, 0,51 ммоль) и хлорид аммония (55 мг, 1,02 ммоль) растворяли в 20 мл смеси этанола и воды (V/V=4:1). После проведения реакции в течение 1 часа при температуре 80°C реакцию останавливали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, а затем добавляли 20 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (10 мл ×4). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл×1), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остатки очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-диона 16j (25 мг, твердое вещество защитного цвета), выход: 42,8%.

МС m/z (ESI): 534,3[М+1]

Стадия 10

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевина

Уксусную кислоту (51 мг, 0,84 ммоль) добавляли в запаянную пробирку объемом 25 мл и к ней последовательно добавляли 2 мл толуола, N,N-диизопропилэтиламина (163 мг, 1,26 ммоль) и дифенилфосфорилазида (231 мг, 0,84 ммоль). Смесь подвергали взаимодействию в течение 1 ч в запаянной пробирке. После охлаждения до 0°C, в реакционный раствор добавляли 2 мл раствора 6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1Н,3H)-диона 16j (45 мг, 0,084 ммоль) в дихлорметане, и далее подвергали взаимодействию в течение 16 ч при 40°C в герметично запаянной пробирке. Реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остатки очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метилмочевины 16 (18 мг, белое твердое вещество), выход: 36,0%.

МС m/z (ESI): 591,3 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) 7,92-7,87 (m, 2Н), 7,77-7,70 (m, 2Н), 7,69 (s, 1Н), 7,60-7,55 (m, 1Н), 7,25-7,13 (m, 2Н), 7,05-6,99 (m, 1Н), 6,79-6,71 (m, 1Н), 4,48 (s, 2Н), 4,06 (s, 3Н), 3,54 (s, 2Н), 2,75 (s, 3Н), 2,16 (s, 6Н)

Пример 17

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-гидроксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-гидроксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевина

1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-метоксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевину 11 (122 мг, 0,20 ммоль) растворяли в 6 мл тетра гидрофура на и перемешивали до тех пор, пока она не растворялась полностью. В раствор добавляли 40%-ную бромистоводородную кислоту (103 мг, 0,51 ммоль) и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали и в реакционный раствор добавляли 5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и дополнительно перемешивали в течение 5 минут. Полученную смесь экстрагировали. Органические фазы объединяли и очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(7-(2,6-дифторбензил)-3-((диметиламино)метил)-5-(6-гидроксипиридазин-3-ил)-4,6-диоксо-4,5,6,7-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-2-ил)фенил)-3-метоксимочевины 17 (16 мг, белое твердое вещество), выход: 13,5%.

МС m/z (ESI): 594,3 [М+1]

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) 13,36-13,18 (m, 1Н), 9,69 (s, 1Н), 9,21-9,14 (m, 1Н), 7,83-7,76 (m, 2Н), 7,71-7,64 (m, 2Н), 7,52-7,46 (m, 1Н), 7,46-7,36 (m, 1Н), 7,09 (s, 3Н), 5,32-5,21 (m, 2Н), 3,71-3,62 (m, 5Н), 2,17 (s, 6Н)

Пример 18

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевина

Стадия 1

1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевина

6-(4-аминофенил)-1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-2,4(1H,3H)-дион 16j (170 мг, 0,319 ммоль), метил 4-нитрофенилметоксиаминоформиат (81 мг, 0,382 ммоль, полученный известным способом, раскрытым в разделе WO 2011090935) и N,N-диизопропилэтиламин (109 мкл, 0,638 ммоль) растворяли в 10 мл тетрагидрофурана. После проведения реакции в течение 4-х часов при комнатной температуре реакцию останавливали, и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с элювиальной системой А с получением указанного в заголовке соединения 1-(4-(1-(2,6-дифторбензил)-5-((диметиламино)метил)-3-(6-метоксипиридазин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-ил)фенил)-3-метоксимочевины 18 (15 мг, желтое твердое вещество), выход: 7,8%.

МС m/z (ESI): 607,2 [М+1]

Пример испытаний

Биологическая оценка

Пример испытания 1. Анализ активности представленных соединений с помощью человеческого GnRHr (ГнРГ рецептора)

Активность белка GnRHr in vitro тестируют следующими способами.

Этот анализ используют для определения ингибирующего действия представленного соединения на активность белка GnRHr человека, демонстрируемую стабильно трансфицированными клеточными линиями человеческий GnRHr/CHO.

1. Экспериментальные материалы и оборудование

1) Наборы Fluo-4 NW Calcium Assay (F36206, Invitrogen)

2) DMEM/F12 (смесь модифицированной по способу Дульбекко среды Игла и питательной среды F-12)(SH30023.01B, термо)

3) G418 (11811-031, Invitrogen)

4) Ридер микропланшетов FlexStation3

2. Протокол эксперимента

Вектор экспрессии в клетках млекопитающих, содержащий ген GnRHr человека переносили в клетки СНО (клетки яичников китайских хомячков) путем добавления реагента Lipofectamine®LTX, содержащего Plus™; антибиотики были добавлены на следующий день для скрининга, чтобы выбрать моноклональные клеточные линии.

Стабильно трансфицированные клеточные линии GnRHr/CHO высевали в 96-луночные планшеты с плотностью инокуляции 25000 на лунку. Питательную среду удаляли на следующий день, добавляли к планшету загрузочный буфер, содержащий краситель Fluo-4 (100 мкл на лунку) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Планшет переносили в комнатную температуру и уравновешивали в течение 10 минут. Каждое соединение разбавляли ДМСО до семи градиентов концентрации: 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 0,1 мкМ, 0,01 мкМ, 0,001 мкМ, 0,0001 мкМ. Затем 1 мкл каждого градиента добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. После автоматического добавления 50 мкл стимулирующего раствора ГнРГ полипептида, немедленно детектировали значение при 494/516 нМ с помощью ридера микропланшетов (flexstation 3). Величины IC₅₀ для соединений рассчитывали с помощью программного обеспечения исходя из различных сигналов флуоресценции при различных соответствующих концентрациях.

Ингибирующую активность представленных соединений по отношению к человеческому GnRHr определяли с помощью приведенного выше анализа, и значения IC₅₀ приведены в таблице 1.

Вывод: представленные соединения обладают значительной ингибиторной активностью по отношению к человеческому GnRHr.

Пример испытания 2. Анализ активности представленных соединений с помощью GnRHr обезьяны.

Этот анализ используют для определения ингибирующего эффекта представленного соединения на активность белка GnRHr обезьяны, демонстрируемую стабильно трансфицированными клеточными линиями GnRHr/CHO обезьяны.

1. Экспериментальные материалы и оборудование

1) Наборы Fluo-4 NW Calcium Assay (F36206, Invitrogen)

2) DMEM/F12 (SH30023.01B, термо)

3) G418 (11811-031, Invitrogen)

4) Ридер микропланшетов FlexStation3

2. Протокол эксперимента

Вектор экспрессии в клетках млекопитающих, содержащий ген GnRHr обезьяны переносили в клетки СНО путем добавления реагента Lipofectamine®LTX, содержащего Plus™; антибиотики были добавлены на следующий день для скрининга, чтобы выбрать моноклональные клеточные линии.

Стабильно трансфицированные клеточные линии GnRHr/CHO высевали в 96-луночные планшеты с плотностью инокуляции 25000 на лунку. Питательную среду удаляли на следующий день, добавляли к планшету загрузочный буфер, содержащий краситель Fluo-4 (100 мкл на лунку) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Планшет переносили в комнатную температуру и уравновешивали в течение 10 минут. Каждое соединение разбавляли ДМСО до семи градиентов концентрации: 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 0,1 мкМ, 0,01 мкМ, 0,001 мкМ, 0,0001 мкМ. Затем 1 мкл каждого градиента добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. После автоматического добавления 50 мкл стимулирующего раствора ГнРГ полипептида, немедленно детектировали значение при 494/516 нМ с помощью ридера микропланшетов (flexstation 3). Величины IC₅₀ для соединений рассчитывали с помощью программного обеспечения исходя из различных сигналов флуоресценции при различных соответствующих концентрациях.

Ингибирующую активность представленных соединений по отношению к GnRHr обезьяны определяли с помощью приведенного выше анализа, и значения IC₅₀ приведены в таблице 1.

Заключение: представленные соединения обладают значительной ингибиторной активностью по отношению к GnRHr обезьяны.

Пример испытания 3. Анализ активности представленных соединений с помощью кроличьего GnRHr

Этот анализ используют для определения ингибирующего эффекта представленного соединения на активность белка GnRHr кролика, демонстрируемую стабильно трансфицированными клеточными линиями кроличий GnRHr/CHO.

1. Экспериментальные материалы и оборудование

1) Наборы Fluo-4 NW Calcium Assay (F36206, Invitrogen)

2) DMEM/F12 (SH30023.01B, термо)

3) G418 (11811-031, Invitrogen)

4) Ридер микропланшетов FlexStation3

2. Протокол эксперимента

Вектор экспрессии в клетках млекопитающих, содержащий ген GnRHr кролика, переносили в клетки СНО путем добавления реагента Lipofectamine®LTX, содержащего Plus™; антибиотики были добавлены на следующий день для скрининга, чтобы выбрать моноклональные клеточные линии.

Стабильно трансфицированные клеточные линии GnRHr/CHO высевали в 96-луночные планшеты с плотностью инокуляции 25000 на лунку. Питательную среду удаляли на следующий день, добавляли к планшету загрузочный буфер, содержащий краситель Fluo-4 (100 мкл на лунку) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Планшет переносили в комнатную температуру и уравновешивали в течение 10 минут. Каждое соединение разбавляли ДМСО до семи градиентов концентрации 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 0,1 мкМ, 0,01 мкМ, 0,001 мкМ, 0,0001 мкМ. Затем 1 мкл каждого градиента добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. После автоматического добавления 50 мкл стимулирующего раствора ГнРГ полипептида, немедленно детектировали значение при 494/516нМ с помощью ридера микропланшетов (flexstation 3). Величины IC₅₀ для соединений рассчитывали с помощью программного обеспечения исходя из различных сигналов флуоресценции при различных соответствующих концентрациях.

Ингибирующую активность представленных соединений по отношению к кроличьему GnRHr определяли с помощью приведенного выше анализа, и значения IC₅₀ приведены в таблице 1.

Заключение: представленные соединения обладают значительной ингибиторной активностью по отношению к кроличьему GnRHr.

Оценка фармакокинетики.

Пример испытаний 4.

Оценка фармакокинетики соединений из Примера 2, Примера 3, Примера 5, Примера 9, Примера 10, Примера 11 и Примера 13 из настоящего изобретения с использованием крыс.

1. Резюме

Крыс Sprague-Dawley (SD) использовали в качестве тестируемых животных. Концентрации в плазме в разное время определяли с помощью жидкостной хромотографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ/МС/МС) после внутрижелудочно введения соединений из Примера 2, Примера 3, Примера 5, Примера 9, Примера 10, Примера 11 и Примера 13 и внутривенного введения соединения из Примера 11 крысам. Было изучено фармакокинетическое поведение представленных соединений у крыс и были оценены фармакокинетические характеристики.

2. Протокол испытания

2.1 Образцы

Соединения из Примера 2, Примера 3, Примера 5, Примера 9, Примера 10, Примера 11 и Примера 13

2.2 Экспериментальные животные

32 здоровых взрослых крысы SD (половина самок и половина самцов) были равномерно разделены на 8 групп (4 в каждой группе). Животные были приобретены у Shanghai Super B & К Laboratory Animal Corp. Ltd (сертификат на производство лабораторных животных №SCXK (HU) 2008-0016).

2.3 Состав препарата

Надлежащее количество образца взвешивали и добавляли 0,5% карбоксиметилцеллюлозы натрия (CMC-Na) с получением суспензии 1 мг/мл после ультразвуковой обработки; соответствующие количества лекарств взвешивали и растворяли с помощью 0,5 мл ДМСО и 0,5 мл Tween 80; солевой раствор добавляли до конечного объема.

2.4 Введение

32 крысы SD (половина самки и половина самцы) равномерно разделили на 8 групп (4 в каждой группе), и осуществляли введение перорально через зонд или с помощью внутривенной инъекции (в.в.) (перорально через зонд в дозе 10 мг/кг или 30 мг/кг и в.в. в дозе 5,0 мг/кг), соответственно, в объеме 10 мл/кг после голодания в течение ночи.

3. Манипуляции

0,1 мл крови отбирали до и через 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 ч после введения, собирали в гепаринизированную тестовую пробирку и центрифугировали при 3500 оборотах в минуту в течение 10 минут, чтобы отделить плазму, которую хранили при -20°C. Животным был разрешен доступ к еде через 2 часа после введения.

Содержание тестируемого соединения в плазме крыс после введения соединения с помощью перорального зонда определяли с помощью ЖХ/МС/МС.

4. Результаты измерения фармакокинетических параметров.

Фармакокинетические параметры представленных соединений приведены в следующей ниже таблице 4:

Заключение: представленные соединения хорошо всасываются в пероральной форме у крыс и характеризуются очевидным фармакокинетическим поглощением. Соединение Примера 11 имеет особенно предпочтительную биодоступность при пероральном приеме.

Пример испытаний 5. Оценка фармакокинетики соединений из Примера 11 из настоящего изобретения с использованием кроликов.

1. Резюме

Кроликов использовали в качестве тестируемых животных. Концентрации в плазме в разное время определяли с помощью ЖХ/МС/МС после внутрижелудочного введения соединений из Примера 11 и внутривенного введения соединения из Примера 11 кроликам. Было изучено фармакокинетическое поведение представленных соединений у кроликов и были оценены фармакокинетические характеристики.

2. Протокол испытания

2.1 Образцы

Соединение из Примера 11

2.2 Экспериментальные животные

6 здоровых новозеландских кроликов (самки) были равномерно разделены на 2 группы. Животные были приобретены у Jie Sijie Corp.Ltd.

2.3 Состав препарата

Надлежащее количество образца взвешивали и добавляли 0,5% CMC-Na с получением суспензии 3 мг/мл после ультразвуковой обработки;

Соответствующие количества лекарств взвешивали и растворяли с помощью 1 мл ДМСО и 1 мл Tween 80; солевой раствор добавляли до конечного объема.

2.4 Введение

6 здоровых новозеландских кроликов (самки) равномерно разделили на 2 группы, и осуществляли введение перорально через зонд или с помощью внутривенной инъекции (в.в.) (перорально через зонд в дозе 30 мг/кг с объемом введения 5 мл/кг, и в.в. в дозе 5 мг/кг с объемом введения 2 мл/кг) после голодания в течение ночи.

3. Манипуляции

0,2 мл крови отбирали до и через 5 минут, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 11, 24 ч после внутривенного введения, собирали в гепаринизированную тестовую пробирку и центрифугировали при 3500 оборотах в минуту в течение 10 минут, чтобы отделить плазму, которую хранили при -20°C. Кровь отбирали до и через 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 ч после перорального введения и обрабатывали так же, как таковую от группы, которой вводили соединение внутривенно.

Содержание тестируемого соединения в плазме кроликов после введения соединения перорально и с помощью внутривенной инъекции определяли с помощью ЖХ/МС/МС.

4. Результаты измерения фармакокинетических параметров.

Фармакокинетические параметры представленных соединений приведены в следующей ниже таблице 5:

Заключение: соединение из Примера 11 по настоящему изобретению хорошо всасывается у кроликов и имеет предпочтительную пероральную биодоступность.

Пример испытаний 6. Оценка фармакокинетики соединения из Примера 11 из настоящего изобретения с использованием биглей (гончие собаки).

1.Резюме

Биглей использовали в качестве тестируемых животных. Концентрации в плазме в разное время определяли с помощью ЖХ/МС/МС после внутрижелудочного введения соединения из Примера 11 и внутривенного введения соединения из Примера 11 биглям. Было изучено фармакокинетическое поведение представленных соединений у биглей и были оценены фармакокинетические характеристики.

Протокол испытания

2.1 Образцы

Соединение из Примера 11

2.2 Экспериментальные животные

8 здоровых биглей (половина самок и половина самцов) были равномерно разделены на 2 группы. Животные были приобретены у SuzhouXishan Zhongke Laboratory Animal Corp.Ltd.

2.3 Состав препарата

Надлежащее количество образца взвешивали и добавляли 0,5% CMC-Na с получением суспензии 1 мг/мл после ультразвуковой обработки. Соответствующие количества лекарств взвешивали и растворяли с помощью 5 мл ДМСО и 5 мл Tween 80; солевой раствор добавляли до конечного объема.

2.4 Введение

8 здоровых биглей (половина самок и половина самцов) равномерно разделили на 2 группы, и осуществляли пероральное введение через зонд или внутривенное введение (в.в.) (перорально в дозе 5 мг/кг с объемом введения 5 мл/кг, и в.в. в дозе 2 мг/кг с объемом введения 2 мл/кг) после голодания в течение ночи.

3. Манипуляции

1,0 мл крови отбирали из вены на передней ноге из до и через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 ч после перорального введения, собирали в гепаринизированную тестовую пробирку и центрифугировали при 3500 оборотах в минуту в течение 10 минут, чтобы отделить плазму, которую хранили при -20°C. Кровь отбирали до и через 5 минут, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 ч после внутривенного введения и обрабатывали так же, как таковую от группы, которой вводили соединение перорально. Содержание тестируемого соединения в плазме биглей после введения соединения перорально через зонд и внутривенно определяли с помощью ЖХ/МС/МС.

4. Результаты измерения фармакокинетических параметров.

Фармакокинетические параметры представленных соединений приведены в следующей ниже таблице 6:

Заключение: соединение из Примера 11 по настоящему изобретению хорошо всасывается у биглей и имеет предпочтительную пероральную биодоступность.

Пример испытания 7. Испытание фармакодинамики in vivo соединения из Примера 11 по настоящему изобретению у крыс

1. Резюме

Была создана модель эндометриоза у кроликов, и был реализован фармакодинамический скрининговый тест для эндометриоза у кроликов, получающих лечение соединением из Примера 11.

2. Протокол теста.

2.1 Образец

Соединение из Примера 11

2.2 Экспериментальные животные

15 здоровых новозеландских кроликов (самки) были равномерно разделены на 3 группы. Животные были приобретены у Shanghai Songjiang District Songlian Laboratory Animal Farm (сертификат на производство лабораторных животных №SCXK (HU) 2008-0016).

3. Манипуляции

Кроликов кормили для адаптации и содержали в карантине в течение семи дней, и им подкожно вводили 30 мкг/кг бензоата эстрадиола один раз в день в течение двух дней до операции; когда модель была создана, кроликов анестезировали с помощью 3% пентобарбитала натрия, и делали лапаротомию в стерильных условиях. Затем одну сторона матки отделяли и перевязывали маточно-мезоректальный сосуд. Затем часть матки вырезали и помещали в теплую ванну с солевым раствором, а затем рассекали в продольном направлении и разделяли на миометрий и эндометрий. Часть эндометрия (около 0,5 см*0,5 см) пришивали к брюшной стенке, богатой кровеносными сосудами, при этом поверхность интимы была обращена к брюшной полости. Через три недели после того, как пересадки эндометрия кроликов подвергали лапаротомии, чтобы проверить размер трансплантата интимы. 15 животных, для которых моделирование прошло успешно, были случайным образом разделены на 3 группы (5 в каждой группе), которые были контрольной группой, получающей носитель, группой, получающей низкую дозу, (10 мг/кг соединения из Примера 11) и группой, получающей высокую дозу (30 мг/кг соединения из Примера 11), соответственно. Каждой группе осуществляли введение перорально через зонд один раз в день в объеме 5 мл/кг, непрерывно в течение 28 дней после успешного создания модели. В конце кролика взвешивали и измеряли объем эктопического эндометрия, чтобы оценить влияние представленного соединения на активность эндометрия.

2.4 Результаты

После введения 30 мг/кг соединения из Примера 11 модели эндометриоза у кролика в течение 4 недель при использовании в качестве контроля перорального введения такого же количества 0,5% CMC-Na, рост эктопического эндометрия значительно ингибировался, в то время как ингибирование соединением из Примера 11 эктопического эндометриального объема при дозе 10 мг/кг не было очевидно. Таким образом, токсикологическая доза NOAEL (No Observed Adverse Effect Level, доза, при которой повреждающего эффекта дозы не наблюдалось) соединения из Примера 11 в кроличьей модели эндометриоза составляет 30 мг/кг.

Пример испытания 8. Семидневная токсикокинетическая оценка соединения из Примера 11 на крысах.

1. Резюме

Крыс SD использовали в качестве тестируемых животных. Концентрации в плазме в разное время определяли с помощью ЖХ/МС/МС после введения соединения из примера 11 перорально через зонд в течение 7 дней. Токсичность соединения у грызунов была предварительно оценена в соответствии с потенциальной реакцией на токсичность и степенью тяжести состояния организма.

2. Протокол теста

2.1 Образец

Соединение из Примера 11

2.2 Экспериментальные животные

24 здоровые взрослые крысы SD (половина женского пола и половина мужского пола) были равномерно распределены на 4 группы (6 для каждой группы). Животные были приобретены у Shanghai SLAC Laboratory Animal Corp.Ltd (сертификат на производство лабораторных животных сертификат №SCXK (HU) 2012-0002).

2.3. Состав препарата

Надлежащее количество образца точно взвешивали и добавляли небольшое количество 0,5% CMC-Na для образования однородной суспензии после обработки с помощью ультразвукового измельчения, а затем разводили до конечного объема. Остатки растворов образцов от 1-го и 7-го дня хранили для определения токсикокинетической концентрации введения.

2.4. Введение

Повторные пероральные дозы составляли 80, 240 и 720 мг/кг, и концентрации для введения составляли 8, 24 и 72 мг/мл, соответственно. Объем дозы составлял 10 мл/кг один раз в день в течение 7 дней.

3. Манипуляции

Кровь отбирали на 1-й день и 7-й день после введения со временем отбора до, и через 1, 2, 4, 8 и 24 ч после перорального введения в день 1, а также до и через 1, 2, 4, 8, 24 и 48 часов после перорального введения в день 7. Образец крови собирали в гепаринизированную тестовую пробирку и центрифугировали для отделения плазмы, которую хранили при -20°C. Содержание тестируемого соединения в плазме крыс после введения соединения перорально через зонд определяли с помощью ЖХ/МС/МС.

4. Результаты

4.1. Воздействие на клинические признаки

4.1.1 Смерть

Крыса №1 из группы с токсичностью 720 мг/кг соединения из Примера 11 умерла на 7-й день перед дозированием; крыса №5 из группы с токсикокинетикой 720 мг/кг соединения из Примера 11 умерла на 7-й день перед дозированием, и крыса №6 умерла на 9-й день.

4.1.2 Клиническое наблюдение

Во время введения, по сравнению с контрольной группой, все крысы в группе с токсичностью и токсикокинетикой 720 мг/кг демонстрировали потерю веса и плохое психическое состояние после введения соединения из Примера 11 на 6-й день; все крысы в группе с токсичностью и токсикокинетикой 720 мг/кг после введения соединения из Примера 11 на 7-й день демонстрировали уменьшение потребления пищи, потерю веса, пониженную активность, плохое психическое состояние, тусклый мех на спине, топорщение шерсти, провислую спину, кровоизлияния вокруг носа и глаз, понос и загрязнение области вокруг заднего прохода.

4.2. Воздействие на вес тела

По сравнению с контрольной группой, процент изменения веса в группе с высокой дозовой демонстрировал значительное снижение (p<0,05) после введения соединения из Примера 11 на 3-й день и 7-й день.

4.3 Воздействие на потребление пищи

По сравнению с контрольной группой, потребление пищи в группе 147280 с дозой 720 мг/кг значительно снижалось на 3-й день и 7-й день.

4.4. Результаты гематологических тестов

По сравнению с контрольной группой, которой давали носитель, показатели БКК (белых клеток крови), Neut (относительная величина для нейтрофилов и абсолютное число нейтрофилов), Lymph (абсолютное число лимфоцитов), ЕО (абсолютное число клеток эозинофилов) и RET (относительная величина для ретикулоцитов и абсолютное и абсолютное число ретикулоцитов) у крыс в группе с дозой 720 мг/кг соединения из Примера 11, значительно уменьшились (p<0,05).

4.5. Результаты биохимических тестов крови

По сравнению с контрольной группой, которой давали носитель, АМК (азот мочевины крови), ХОЛ (общий холестерин), CREA (креатинин), TBIL (общий билирубин), TP (общий белок), ACT (аспартатаминотрансферазы) крыс в группе с дозой 720 мг/кг соединения из Примера 11 были значительно увеличены (p<0,05). Хотя статистических различий по показателю АПТ (аланинаминотрансфераза) не было, АПТ двух животных были значительно увеличены. Показатели ALB (альбумин), ALP (щелочная фосфатаза) были значительно снижены (p<0,05). В то же время результаты детектирования ионов отсутствуют из-за нехватки образцов крови для группы SHR 147280 с дозой 720 мг/кг. Других видимых токсикологических аномалий обнаружено не было.

4.6. Параметры свертываемости

По сравнению с контрольной группой, которой давали носитель, у крыс в группах с дозами 80 мг/кг и 240 мг/кг соединения из Примера 11 не демонстрировали существенной разницы. Результаты измерения параметров свертываемости отсутствуют из-за нехватки образцов крови для группы SHR 147280 с дозой 720 мг/кг.

4.7. Анализы мочи

По сравнению с контрольной группой, группы, к которым применялось лечение, не продемонстрировали регулярных аномальных изменений показателей мочи.

4.8. Общие результаты оценки патологии

Анализ вскрытия был в целом визуальным. По сравнению с контрольной группой, которой давали носитель, группа с дозой 720 мг/кг соединения из Примера 11 демонстрировала кровоизлияние и атрофию в тимусе, застой и атрофию в селезенке, разнообразные степени застоя в листьях печени с хлопьевидными серо-красными некротическими поражениями, гиперемию и кровоизлияния в легких; кровоизлияния в надпочечниках и их гипертрофию; кровоизлияния и застой в яичниках; истончение желудочно-кишечной стенки, белое содержимое в желудке, желтое содержимое в тонком кишечнике, кишечные кровотечения, кровоизлияния в толстой и прямой кишке и слизь в кишечнике. Кроме того, умершие животные демонстрировали некротические повреждения сердца. Остальные группы не демонстрировали никаких видимых отклонений от нормы.

4.9. Результаты оценки коэффициента органов

По сравнению с контрольной группой, которой давали носитель, абсолютный сырой вес тимуса, сердца, легких и селезенки у самцов и самок крыс из группы с дозой 720 мг/кг соединения из Примера 11 был значительно снижен (p<0,05); напротив, абсолютный сырой вес надпочечников был значительно увеличен (p<0,05). Относительные коэффициенты органа для тимуса и селезенки были значительно снижены (p<0,05), тогда как относительные коэффициенты органа для головного мозга, печени, легких, почек и надпочечников значительно увеличены (p<0,05).

4.10. Результаты оценки токсикокинетических параметров Токсикокинетические параметры самок крыс после внутрижелудочного введения

Таким образом, токсикологическая доза NOAEL Примера 11 составляет 240 мг/кг, а смертельная доза составляет 720 мг/кг. Потенциальные органы-мишени токсичности это кроветворная система костного мозга, тимус, сердце, печень, легкие, селезенка, надпочечники, яичники и пищеварительная система.

Заключение: при сравнении фармакокинетического теста Примера испытания 5, фармакодинамического теста Примера испытания 7 и токсикологического фармакокинетического теста Примера испытания 8, предварительная оценка окна безопасности соединения из Примера 11 была следующей:

Настоящее изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающему свойствами антагонистов гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ). Соединения могут найти применение для получения лекарственных средств для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с рецептором ГнРГ, где заболевание выбрано из группы ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, костного метастаза раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов, гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, фибромы матки, преждевременного полового созревания, аменореи, предменструального синдрома, дисменореи, синдрома многокамерного яичника, синдрома поликистоза яичника, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, бесплодия, синдрома раздраженного кишечника, доброкачественных или злокачественных опухолей, которые являются независимыми от гормонов и чувствительными к рилизинг-гормону лютеинизирующего гормона (ЛГ-РГ), или приливов; для получения репродуктивного регулятора, противозачаточной таблетки, эвокатора овуляции; или для получения лекарственных средств для предотвращения послеоперационного рецидива ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, выбранного из группы, состоящей из рака простаты, рака матки, рака молочной железы и рака гипофиза. В формуле (I)

когда G представляет собой N, D представляет собой С и Е представляет собой СН-; когда G представляет собой С, D и Е представляют собой N; R¹ выбирают из группы, состоящей из фенила и пиридазинила, при этом независимо друг от друга каждый из фенила и пиридазинила необязательно дополнительно замещены одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена и -OR⁶; R² представляет собой C₁-С₆ алкил, при этом C₁-С₆ алкил дополнительно замещен фенилом, где фенил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, С₁-С₆ алкила и C₁-С₆ галогеналкила; R³ представляет собой фенил, при этом фенил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NR⁷R⁸, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶; R⁴ представляет собой C₁-C₄ алкил; R⁵ представляет собой водород; R⁶ выбирают из группы, состоящей из водорода и C₁-С₆ алкила; независимо друг от друга каждый R⁷ и R⁸ выбирают из группы, состоящей из водорода и C₁-С₆ алкила; n составляет 1, 2, 3 или 4. Изобретение также относится к вариантам способа получения соединения формулы (I), промежуточным продуктам формулы (IVc) и формулы (IB) для получения соединения формулы (I) и способам их получения. 15 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 табл., 18 пр.

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль

где, когда G представляет собой N, D представляет собой С и Е представляет собой СН-;

когда G представляет собой С, D и Е представляют собой N;

R¹ выбирают из группы, состоящей из фенила и пиридазинила, при этом независимо друг от друга каждый из фенила и пиридазинила необязательно дополнительно замещены одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена и -OR⁶;

R² представляет собой C₁-С₆ алкил, при этом C₁-С₆ алкил дополнительно замещен фенилом, где фенил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, С₁-С₆ алкила и C₁-С₆ галогеналкила;

R³ представляет собой фенил, при этом фенил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NR⁷R⁸, -NHC(O)R⁶, -NHC(O)OR⁶, -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶;

R⁴ представляет собой C₁-C₄ алкил;

R⁵ представляет собой водород;

R⁶ выбирают из группы, состоящей из водорода и C₁-С₆ алкила;

независимо друг от друга каждый R⁷ и R⁸ выбирают из группы, состоящей из водорода и C₁-С₆ алкила;

n составляет 1, 2, 3 или 4.

2. Соединение формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль:

где n и R¹-R⁵ являются такими, как определено в п. 1.

3. Соединение формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой соединение формулы (III) или его фармацевтически приемлемую соль:

где n и R¹-R⁵ являются такими, как определено в п. 1.

4. Соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где R³ представляет собой фенил, при этом фенил необязательно дополнительно замещен одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из -NHC(O)NHR⁶ и -NHC(O)NHOR⁶.

5. Соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁴ представляет собой метил.

6. Соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁵ представляет собой водород и n составляет 1 или 2.

7. Соединение формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой соединение формулы (IV) или его фармацевтически приемлемую соль:

где n, D, Е, G, R¹, R², R⁴ и R⁵ являются такими, как определено в п. 1;

R^a выбирают из группы, состоящей из C₁-С₆ алкила и -OR⁶; и

R⁶ представляет собой C₁-C₆ алкил.

8. Соединение формулы (I) по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение выбирают из группы, состоящей из

9. Способ получения соединения формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию

взаимодействия соединения формулы (IVc) с амином NH(R⁴)(CH₂)nR⁵ с получением (IVd); восстановления (IVd) с получением (IVA) и ацилирования полученного продукта (IVA) с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G и R¹-R⁵ являются такими, как определено в п. 1.

10. Способ получения соединения формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию:

взаимодействия соединения формулы (IB) с R²X в присутствии щелочного реагента с получением (IVd); восстановления (IVd) с получением (IVA) и ацилирования полученного продукта (IVA) с получением соединения формулы (I);

где X представляет собой галоген, a n, D, Е, G и R¹-R⁵ являются такими, как определено в п. 1.

11. Соединение формулы (IVc) или его фармацевтически приемлемая соль, используемое в качестве промежуточного продукта при получении соединения формулы (I)

где X представляет собой галоген, a D, Е, G, R¹ и R² являются такими, как определено в формуле (I).

12. Соединение формулы (IB) или его фармацевтически приемлемая соль, используемое в качестве промежуточного продукта при получении соединения формулы (I)

где R³ представляет собой 4-нитрофенил, a n, D, Е, G, R¹, R⁴ и R⁵ являются такими, как определено в формуле (I).

13. Способ получения соединения формулы (IVc) по п. 11 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию

проведения реакции галогенирования соединения формулы (Ib) с получением соединения формулы (IVc);

R³ представляет собой 4-нитрофенил;

где D, Е, G, R¹ и R² являются такими, как определено в п. 1.

14. Способ получения соединения формулы (IB) по п. 12 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадию

проведения циклизации соединения формулы (Ig) с получением соединения формулы (IB);

R³ представляет собой 4-нитрофенил;

где n, D, Е, G, R¹, R⁴ и R⁵ являются такими, как определено в п. 1;

R^b представляет собой C₁-С₆ алкил.

15. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из

16. Фармацевтическая композиция, обладающая антагонизмом к рецептору гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ), содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.

17. Применение соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16, для получения лекарственного средства в качестве антагониста рецептора гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ).

18. Применение соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16, для получения лекарственных средств для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с рецептором ГнРГ, где заболевание выбрано из группы ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, костного метастаза раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов, гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, фибромы матки, преждевременного полового созревания, аменореи, предменструального синдрома, дисменореи, синдрома многокамерного яичника, синдрома поликистоза яичника, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, бесплодия, синдрома раздраженного кишечника, доброкачественных или злокачественных опухолей, которые являются независимыми от гормонов и чувствительными к рилизинг-гормону лютеинизирующего гормона (ЛГ-РГ), или приливов; для получения репродуктивного регулятора, противозачаточной таблетки, эвокатора овуляции; или для получения лекарственных средств для предотвращения послеоперационного рецидива ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, выбранного из группы, состоящей из рака простаты, рака матки, рака молочной железы и рака гипофиза.

19. Применение соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16, для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с рецептором ГнРГ, где заболевание выбрано из группы рака простаты, рака матки, рака молочной железы, эндометриоза или лейомиомы матки.

20. Способ ингибирования активности рецептора ГнРГ, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16.

21. Способ лечения заболеваний, связанных с рецептором ГнРГ, где заболевание выбрано из группы раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов, костного метастаза раковых заболеваний, зависимых от половых гормонов, гиперплазии предстательной железы, лейомиомы матки, эндометриоза, фибромы матки, преждевременного полового созревания, аменореи, предменструального синдрома, дисменореи, синдрома многокамерного яичника, синдрома поликистоза яичника, акне, алопеции, болезни Альцгеймера, бесплодия, синдрома раздраженного кишечника, доброкачественных или злокачественных опухолей, которые являются независимыми от гормонов и чувствительными к ЛГ-РГ, или приливов; или для регулирования репродукции, контрацепции или эвокации овуляции; или для предотвращения послеоперационного рецидива ракового заболевания, зависимого от половых гормонов, при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16.

22. Способ лечения заболеваний, связанных с рецептором ГнРГ, где заболевание выбрано из группы рака предстательной железы, рака матки, рака молочной железы, эндометриоза или лейомиомы матки, при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п. 16.