СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ КУЛЬТУРЫ LISTERIA MONOCYTOGENES Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для санитарно-эпидемиологического контроля зараженности продуктов питания в центрах Госсанэпиднадзора и пищевой промышленности.

Вид Listeria monocytogenes является единственным патогенным для человека и животных представителем рода Listeria, поэтому необходимо четко дифференцировать этот вид от близкородственных. Дифференциация листерий возможна на основе их биохимических характеристик, например, на основе различий в способности гидролизовать углеводы и фосфолипиды (лецитин).

Известен способ дифференциации выделенной культуры Listeria monocytogenes от других представителей рода листерий, включающий определение гидролитической активности в отношении 3 углеводов. Одну колонию выделенной культуры засевают в 2 мл пурпурной карбогидратной питательной среды, содержащей краситель фенол ред и каждый в отдельности из следующих углеводов в концентрации 0,5%: маннит, рамноза, ксилоза. Культуру инкубируют при 37^oС в течение 7 дней, наличие ферментации определяется по изменению цвета индикатора с красного на желтый. L.monocytogenes ферментирует рамнозу и не ферментирует маннит и ксилозу (1).

Однако данный способ является дорогостоящим, а также недостаточно специфичен, не позволяет, в частности, достоверно дифференцировать L.monocytogenes от непатогенного вида L.innocua.

Целью предлагаемого изобретения является упрощение и повышение специфичности способа дифференциации возбудителя листериоза L.monocytogenes от других Listeria spp.

Сущность заключается в том, что дифференциацию L.monocytogenes проводят путем определения гидролиза лецитина на питательной среде, содержащей 0,5% эмульсии желтка куриного яйца с добавлением 0,5% активированного угля.

Пример. Агаризованную среду ГРМ 1 (Оболенск) готовят в двух различных емкостях путем добавления в каждую из емкостей 100 мл дистилированной воды на 39,5 г среды. В одну из емкостей добавляют активированный уголь в порошке в количестве 0,5 г на 100 мл воды. После автоклавирования, которое производится при 121^oС в течение 15 мин, в каждую емкость добавляют в качестве источника лецитина 5 мл стерильной 10%-ной эмульсии желтка куриного яйца в физиологическом растворе (0,9% раствор хлористого натрия в дистилированной воде), и среды стерильно разливают по чашкам Петри.

На чашки штрихом засевают исследуемую культуру. Засеянные культуры инкубируют в течение 48 ч при 37^oС. Спустя это время на среде, содержащей активированный уголь, вокруг культуры L.monocytogenes и L.ivanovii, но не других видов Listeria spp., наблюдается гидролиз лецитина, проявляющийся в виде появления плотного ореола шириной 0,2-1 см. На среде, не содержащей активированный уголь, у L.monocytogenes лецитиназной активности не выявляется, у L. ivanovii активность достигает того же уровня, что и на среде, содержащей уголь, у других видов Listeria spp. активность не выявляется (табл. 1). В табл. 2 представлен способ внутриродовой дифференциации Listeria monocytogenes на основе реакции гидролиза углеводов (аналог). Данный способ требует более длительного времени инкубации, является дорогостоящим, т.к. требует использования дорогостоящих углеводов, недостаточно специфичен при дифференциации L.monocytogenes от непатогенного вида L.innocua.

Таким образом, способ дифференциации L.monocytogenes от других листерий путем сравнения лецитизной активности культуры, выращенной на питательной среде, содержащей и не содержащей активированный уголь, является специфичным, дешевым и быстрым. Дифференциация производится путем сравнения лецитиназной активности на среде, содержащей активированный уголь, и не содержащей: у L.monocytogenes лецитиназная активность наблюдается только в присутствии активированного угля, у L.ivanovii лецитиназная активность наблюдается независимо от присутствия угля, а у других видов листерий лецитиназная активность не выявляется ни в присутствии угля, ни в его отсутствие.

Литература
1. Бактериологическое аналитическое руководство FDA, часть 10, Anthony D. Hitchins, издание 8-е, 1995 г.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для санитарно-эпидемиологического контроля зараженности продуктов питания в центрах Госсанэпиднадзора и пищевой промышленности. Вид Listeria monocytogenes является единственным патогенным для человека и животных представителем рода Listeria, поэтому необходимо четко дифференцировать этот вид от близкородственных. Для дифференции L. monocytogenes определяют гидролиз лецитина на питательной среде, с добавлением и без добавления активированного угля. В 100 мл среды ГРМ-1 (Оболенск) добавляют 5 мл 10% суспензии желтка яичного яйца в физиологическом растворе и определяют гидролиз лецитина без дополнительных добавок и в присутствии 0,5% активированного угля. L. monocytogenes показывает гидролитическую активность в отношении лецитина только в присутствии активированного угля в отличие от других видов листерий. Способ является специфичным, дешевым и быстрым. 2 табл.

Способ дифференциации культуры Listeria monocytogenes от других видов Listeria spp. , включающий посев на питательную среду, определение гидролитической активности, отличающийся тем, что гидролитическую активность определяют в отношении лецитина на питательной среде, содержащей 0,5% эмульсии желтка куриного эмбриона, с добавлением 0,5% активированного угля.