СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНОГО ПРЕПАРАТА ГИПОРАМИНА (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2003 года по МПК A61K35/78 A61P31/12 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способам получения фитохимического препарата гипорамина, обладающего противовирусной активностью.

Препарат гипорамин представляет собой очищенный комплекс полифенольных веществ - гидролизуемых галло- и эллаго-таннинов, получаемых из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.): стриктинина, изостриктинина, казуаринина, казуариктина, гипофенина В, педункулагина и некоторые других, которые составляют более 60% от суммы гидрофильных веществ в пересчете на казуаринин [1-2]. В состав препарата, получаемый по способу, указанному в цитируемых патентах, входит также циклический полиол квебрахит (до 5-13%), а также флавоноиды и их производные (менее 17-20%), не обладающие противовирусной активностью. Полифенольные вещества облепихи выделяют в виде металлокомплексов с макро- и микроэлементами (K⁺, Mn⁺⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ и др.) [2-3]. Флавоноиды листьев облепихи в основном представлены гликозидами, например гликозидами изорамнетина, кверцетина, кемпферола, мирицетина и др. [4-9], которые частично переходят в танниновую фракцию в процессе экстракции водными полярными растворителями.

Существует способ получения препарата "Гипорамин", заключающийся в следующем: измельченные и высушенные листья облепихи крушиновидной экстрагируют водным ацетоном, фильтруют, отгоняют органический растворитель, водный кубовый остаток обрабатывают двухкомпонентной смесью органических растворителей, не смешивающихся с водой, содержащей алифатический спирт, а затем водную фазу отделяют и упаривают в вакууме досуха [2]. Этот способ взят нами в качестве прототипа.

Указанный способ имеет следующие ограничения. Растительное сырье с содержанием таннинов менее 15%, собранное в поздние сроки вегетации, переработанное по данной технологии, дает целевой продукт заниженного качества (с содержанием таннинов менее 60%). Кроме того, ацетон обладает низкой температурой воспламенения, что ограничивает возможность его использования в технологических процессах.

Однако позже в сравнительных экспериментах было найдено, что водный спирт обладает меньшей избирательностью извлечения по отношению к таннинам по сравнению с водным ацетоном и больше экстрагирует некоторые сопутствующие вещества, например флавоноиды и полиолы, не проявляющие противовирусной активности, но понижающие содержание целевых таннинов в сухом экстракте до 50-52%. Поскольку соотношение компонентов в сырье зависит от сроков заготовки сырья, места и условий произрастания растения (географических и экологических факторов, погодных условий и др.), то, таким образом, состав целевой танниновой фракции может в известных пределах колебаться. Экспериментально показано, что гидролизуемые таннины накапливаются в листьях облепихи наиболее интенсивно в период активного роста растения, в то время как наибольшая концентрация квебрахита в растении наблюдается в конце вегетационного периода [10].

С целью получения стандартного препарата гипорамина из сырья различных сроков сбора и с различным содержанием действующих веществ, упрощения способа его получения, повышения эффективности технологии получения препарата и показателей рентабельности его производства, улучшения экологии производства путем исключения из технологической схемы галогенсодержащих растворителей, а также облегчения контроля качества препарата предлагается следующий способ, заключающийся в следующем: высушенные и измельченные листья облепихи крушиновидной обрабатывают этиловым спиртом, предпочтительно при комнатной температуре, или при нагревании, форэкстракт отделяют фильтрованием, затем твердофазную экстракцию проводят водным спиртом при обычной температуре или при нагревании, после отделения шрота и отгонки растворителя из фильтрата получают искомый продукт, удовлетворяющий требованиям проекта ВФС на субстанцию гипорамина по содержанию в ней гидролизуемых таннинов не менее 60%. При необходимости, в случае использования нестандартного лекарственного растительного сырья, водный кубовый остаток оставляют стоять для коагуляции сопутствующих веществ, а затем экстрагируют двухкомпонентной смесью растворителей, не смешивающейся с водой, состоящей из алифатического спирта и алифатического углеводородного растворителя гексанового типа, с последующей сушкой водного pacтвора.

Предлагаемый способ позволяет получать субстанцию препарата гипорамина с более высоким содержанием действующих веществ по сравнению с прототипом, использовать растительное лекарственное сырье различного происхождения (дикорастущего или культивируемого, в том числе различных сортов растения), расширить сроки заготовки лекарственного растительного сырья, контролировать соотношение компонентов в препарате на стадии отделения сопутствующих балластных веществ, а также исключить из технологического процесса ацетон и хлорсодержащие растворители, используемые в прототипе, за счет применения в технологическом процессе одного органического гидроксилсодержащего растворителя, например водного этилового спирта, различной концентрации на разных этапах технологического процесса (от 40 до 96%), что упрощает регенерацию растворителя, делает технологический процесс экологически более безопасным по сравнению с прототипом и другими вариантами получения таннинов, являющимися аналогами предлагаемого способа получения.

Повышение содержания таннинов в препарате достигается также за счет частичного удаления полиола квебрахита из танниновой фракции, полученной из сырья, собранного в поздние сроки заготовки, в котором он кумулируется к концу вегетации, и, таким образом, за счет обогащения последней целевыми таннинами, и также используя дополнительную жидкостную экстракцию двухкомпонентной нефрас-бутанольной смесью.

Ниже приведены конкретные примеры получения препарата гипорамина.

Пример 1. Высушенные и измельченные листья облепихи крушиновидной с содержанием таннинов 20% и влажностью 6,53% в количестве 50,0 г экстрагируют 96% этиловым спиртом при комнатой температуре (3 раза по 2 часа), соотношение растворитель-сырье (10:1, v:w), причем объем заливаемого растворителя на вторую и последующую экстракцию равны объему сливаемого экстракта на первой экстракции. После удаления растворителя из суммарного экстракта получают 10,8 г (21,6%) сухого остатка экстрактивных веществ. Последующую экстракцию танниновой фракции осуществляют 50%-ным водным спиртом (4 раза по 2 часа) при комнатой температуре при соотношении растворитель-сырье 10:1 (v:w), как на стадии форэкстракции. При этом объем подаваемого растворителя на вторую и последующие экстракции равны объему сливаемого экстракта от предыдущей экстракции. Спирт из водно-этанольных экстрактов (по мере поступления) удаляют в вакууме при температуре 50-55^oС и давлении в аппарате 98 кПа (-1 кГс/м²). Полученные водные кубовые остатки объединяют и оставляют в холодильной камере или при комнатной температуре (0-20^oС) в течение 10-12 ч. Затем экстракт декантируют и дополнительно фильтруют от скоагулировавших сопутствующих веществ. Водный фильтрат отделяют, концентрируют его до объема 1,2 л с концентрацией твердых веществ 16-17%, а затем высушивают (в лиофильной или в распылительной сушилке). Получают суммарно после удаления растворителя и сушки остатка 28,65% препарата с содержанием таннинов в готовом продукте 76,96% при использовании сушки в роторно-пленочном аппарате.

Пример 2. Процесс осуществляют, как в примере 1, с тем отличием, что используют сырье осеннего сбора с содержанием таннинов 19,68% и влажностью 9,95%. Форэкстракцию проводят 96%-ным спиртом при 40-45^oС с обратным холодильником (3 раза по 2 часа). Получают 15,95 г (31,9%) сухого остатка веществ, полученных при форэкстракции, которые выводят из технологического процесса. Затем экстракцию 60%-ным водным спиртом проводят при комнатой температуре. Спирт из водно-этанольных экстрактов (по мере поступления) удаляют в вакууме при температуре 50-55^oС и давлении в аппарате 98 кПа (-1 кгс/м²). Полученные водные кубовые остатки объединяют и оставляют в холодильной камере или при комнатной температуре (0-20^oС) в течение 10-12 ч. Затем экстракт декантируют и дополнительно фильтруют от скоагулировавших сопутствующих веществ. Водный фильтрат экстрагируют двухкомпонентной смесью растворителей, содержащей н-бутанол и углеводород гексанового типа, например петролейный эфир (1:2) 5 раз по 20 мин в соотношении (1:1). Водную фазу отделяют, концентрируют ее в вакууме для удаления остаточных количеств органических растворителей, а затем высушивают (в распылительной или лиофильной сушилке). Получают 14 г (28%) готового продукта с содержанием в нем таннинов 76,18% и влажностью 7,64% при использовании роторно-пленочного аппарата.

Пример 3. Процесс осуществляют, как в примере 2, с тем отличием, что форэкстракцию 96% спиртом проводят при комнатной температуре. Получают 14 г (28%) готового продукта с содержанием в нем таннинов 57,31% и влажностью 6,22%.

Пример 4. Процесс осуществляют, как в примере 1, с тем отличием, что форэкстракцию 96% спиртом и экстракцию 50%-ным водным спиртом проводят при кипении растворителя. Получают 23,76% сухого остатка веществ, полученных при форэкстракции, и 17,61% целевого продукта с содержанием в нем таннинов 64,58%.

Пример 5. Процесс осуществляют, как в примере 4, с тем отличием, что на стадии экстрагирования танниновой фракции используют 60% водный спирт при кипении растворителя. В результате получают 28,65% сухого остатка после форэкстракции и 17,90% готового продукта с содержанием в нем таннинов 76,96%.

Пример 6. Процесс осуществляют, как в примере 5, с тем отличием, что форэкстракцию 96%-ным спиртом и экстрагирование целевых соединений 60%-ным водным спиртом проводят при комнатной температуре. Получают 10,21% сухого остатка из форэкстракта и 27,84% готового продукта с содержанием в нем таннинов 71,45%.

Пример 7. Процесс осуществляют, как в примере 4, с тем отличием, что экстрагирование целевого продукта осуществляют 40%-ным водным спиртом при кипении растворителя. Получают 24,0% сухого остатка из форэкстракта и 18,90% готового продукта с содержанием в нем таннинов 66,08%.

Пример 8. Процесс осуществляют, как в примере 6, с тем отличием, что экстрагирование целевого продукта проводят 40% водным спиртом при комнатной температуре. Выход сухого остатка из форэкстракта 8,97%, а готового продукта 28,20% с содержанием в нем таннинов 60,25%.

Пример 9. Процесс осуществляют, как в примере 4, с тем отличием, что экстрагирование целевого продукта осуществляют 50% водным ацетоном при комнатной температуре. Получают 32% сухого остатка из форэкстракта и 10,10% готового продукта с содержанием в нем таннинов 86,95%.

Пример 10. Процесс осуществляют, как в примере 9, с тем отличием, что форэкстракцию и экстрагирование целевого продукта осуществляют при комнатной температуре. Получают 9,19% сухого остатка из форэкстракта и 32,30% готового продукта с содержанием в нем таннинов 68,11%.

Пример 11. Процесс осуществляют как в примере 2 с тем отличием, что используют сырье летнего сбора с содержанием таннинов 24,23% и влажностью 7,79%. Выход готового продукта 20% с содержанием в нем таннинов 71,2% и влажностью 8,1%.

Пример 12. Процесс осуществляют, как в примере 11, с тем отличием, что процесс осуществляют без обработки водного кубового остатка петролейно-бутанольной смесью. Выход 18,8% с содержанием в нем таннинов 68% и влажностью 6,5%.

Осуществление процесса экстракции 40%-ным водным спиртом при комнатной температуре и при кипячении без форэкстракции получают продукт с выходами соответственно 25,13 и 38,09% с содержанием таннинов в продукте 49,82 и 52,10% соответственно, что ниже заложенного нижнего предела содержания в ВФС на гипорамин. Таким образом, из экспериментальных данных следует, что в случае использования водного этилового спирта в качестве экстрагента для получения танниновой фракции необходимо применять форэкстракцию для отделения веществ, не обладающих противовирусной активностью. В форэкстракт переходят вещества липофильного характера (хлорофилл, некоторые флавоноиды, терпеноиды и квебрахит), причем степень извлечения этих веществ обусловлена условиями проведения экстракции на головной стадии. В прототипе подобные вещества частично отделяют на последующей стадии жидкофазной экстракции.

Применение предлагаемого метода к субстанции с низким содержанием в ней таннинов, полученной по прототипу, позволяет значительно увеличить в ней концентрацию целевых соединений.

Экспериментально нами установлено, что выход препарата находится в обратной зависимости от содержания таннинов в готовом продукте (таблица)
Таким образом, цель изобретения - повышение содержания действующих веществ, обладающих противовирусной активностью, в субстанции полифенольных веществ - гидролизуемых галло- и эллаго-таннинов, получаемых из листьев облепихи крушиновидной, достигается за счет предварительного отделения веществ липофильного характера (хлорофилла, флавоноидов, терпеноидов), а также определенного количества циклического полиола квебрахита путем применения форэкстракции 96% этиловым спиртом предпочтительно при комнатной температуре или при нагревании, в котором указанные выше гидролизуемые танинны не растворяются, с последующей экстракцией целевых соединений водным этиловым спиртом, предпочтительно 40-60%-ной концентрации.

Предлагаемый способ позволяет использовать в качестве лекарственного растительного сырья листья облепихи крушиновидной (культивируемой и дикорастущей), а также растений различных сортов, образцов различного географического происхождения и разных сроков сбора, в том числе поздних сроков сбора, с разным содержанием в них действующих веществ.

Способ прост в технологическом и аппаратурном оформлении.

Источники информации
1. Патент РФ 2118163, 27.08.1988 по заявке 94016333, приоритет 27.04.1994, опубликовано 27.08.98, БИ 24.

2. Патент РФ 2098111, 10.12.1997 по заявке 94011336, приоритет 30.03.1994, опубликовано 10.12.97, БИ 34.

3. Патент РФ 1805967, 09.10.92, по заявке 4335127, приоритет 03.11.87, опубликовано 30.03.93, БИ 12.

4. Распутина и др. Химия природ. соедин., 1975, 1, с. 96-97; 1976, 1, с. 97-98.

5. Мухамедьярова и др. Химия природ. соедин., 1977, 2, с. 281-282; 1979, 6, с. 854.

6. Глазунова и др. Физиология и биохимия растений. Горький, 1985, с. 107-109.

7. IV Всес. Симпозиум по фенольным соединениям. Тезисы докладов, Ташкент, ФАН Уз. ССР, 1982, с. 20.

8. Новрузов и др., Растит. ресурсы, 19(3), 354-356 (1983).

9. Потапова и др., Биология, химия и фармакология облепихи, Новосибирск, 1983, с. 36-42.

10. О. П. Шейченко и др. , Химия, Технология, Медицина, Труды ВИЛАР, Москва, 2000, с. 76-79.

Изобретение относится к медицине. Получают препарат из листьев (Hippophae rhamnoides L.) c содержанием галло- и эллаго-танинов (гэт)>20% с использованием метода форэкстракции растительного сырья полярным органическим растворителем с последующим извлечением целевых соединений водным органическим экрагентом. Из обедненного сырья облепихи с содержанием гэт>20% извлекают действующие вещества безводным полярным экстрагентом, затем водным полярным растворителем с последующей дополнительной очисткой от побочных веществ экстракцией водного кубового остатка после удаления экстрагента двухкомпонентной смесью растворителей, содержащей алифатический спирт и алифатический углеводородный растворитель гексанового типа. Изобретение позволяет получать стандартный препарат из различных видов сырья. 2 c.п.ф-лы, 1 табл.

1. Способ получения противовирусного препарата гипорамина из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.), с содержанием гидролизуемых галло-таннинов более 20%, экстракцией фракции полифенольных веществ полярным органическим растворителем и фильтрацией, отличающийся тем, что осуществляют форэкстракцию балластных веществ безводным полярным органическим растворителем, предпочтительно этиловым спиртом, при комнатной температуре или при нагревании, форэкстракт отделяют фильтрацией, а затем экстрагируют целевой продукт водным органическим растворителем, например спиртом, предпочтительно водным этиловым спиртом, при комнатной температуре или нагревании, с последующим удалением экстрагента в вакууме. 2. Способ получения противовирусного препарата гипорамина из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) экстракцией фракции полифенольных веществ органическим растворителем, фильтрацией, обработкой водного кубового остатка после удаления органического экстрагента двухкомпонентной системой растворителей, содержащей алифатический спирт, например н-бутанол, и алифатический углеводородный растворитель гексанового типа, например экстракционный бензин, петролейный эфир или нефрас, отличающийся тем, что используют сырье, заготавливаемое в поздние сроки вегетации с содержанием в нем таннинов меньше 20%, осуществляют форэкстрацию балластных веществ безводным полярным органическим растворителем, например спиртом, затем проводят экстракцию водным полярным органическим растворителем, например водным этиловым спиртом, при комнатной температуре или при нагревании с последующим удалением органического экстрагента в вакууме, причем водный кубовый остаток до обработки двухкомпонентной системой оставляют стоять для коагуляции сопутствующих веществ, которые отделяют.