ПРИМЕНЕНИЕ ОКСИМА (3-ХЛОР-1-АДАМАНТИЛ)МЕТИЛКЕТОНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ВИРУСА ГЕРПЕСА ПРОСТОГО ТИПА 1 И ВИРУСА ГРИППА А Российский патент 2003 года по МПК A61K31/15 A61P31/16 A61P31/22 

Изобретение относится к новому азотсодержащему соединению, в частности к производному адамантана - оксиму (3-хлор-1-адамантил)метилкетона, обладающего антивирусной активностью, что может быть использовано в медицине.

В медицинской практике применяют для лечения заболеваний герпетической природы эффективные препараты адамантанового ряда: тромантадин (гидрохлорид 1-(1-адамантил)-2- [(2-диметиламино)этокси] -ацетамида) и этмантин (1-(3-этиладамантил)-1-этилкарбамат).

Однако существуют данные о возможности аллергических дерматитов вызываемых тромантадином (А. с. СССР 1721048, 1992, бюл. 11). Это обуславливает необходимость поиска новых, более эффективных противогерпетических препаратов ряда адамантана.

Синтез оксима (3-хлор-1-адамантил)метилкетона ведут смешиванием спиртового раствора (3-хлор-1-адамантил)метилкетона с водным раствором гидрохлорида гидроксиламина и карбоната натрия при комнатной температуре и перемешивании в течение часа. Выход 84%, т. пл. 154-156^oС (лит. данные 148-150^oС (из изооктана) [Известия Академии Наук. Серия химическая, 1992, 8, с. 1798-1803]), противовирусная активность в отношении вируса герпеса выше действия известного тромантадина в 2 раза и равно активности этмантина; соединение обладает также слабой противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А.

Технический результат - изыскание нового биологически активного соединения адамантанового ряда.

Биологическая активность оксима (3-хлор-1-адамантил)метилкетона подтверждается примерами 1-2.

Пример 1. Испытание противовирусных свойств оксима (3-хлор-1-адамантил)метилкетона в отношении вируса гриппа.

Исследуемое вещество предварительно растворяли в диметилсульфоксиде (маточный раствор с концентрацией 5 мг/мл, содержание диметилсульфоксида в маточном растворе - 10%).

При проведении испытаний использовали культуру клеток первичных эмбрионов кур (ФЭК) и вирус гриппа A Rostock/34 (H7N1). Испытания проводили методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием. Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывали от ростовой среды, инфицировали различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка вируса путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37^oС. Затем жидкость удаляли и клетки покрывали расплавом питательной среды на основе концентрата среды 199 с добавлением 1% бактагара и 0,005% нейтрального красного (все реактивы - Sigma) и различных концентраций исследуемых соединений. После застывания покрытия флаконы помещали в термостат на 36 ч и затем подсчитывали количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляли титр вируса. Максимальную концентрацию исследуемых веществ, не токсичную для культуры клеток (максимальная переносимая концентрация, МПК), определяли на основе оценки прокрашивания монослоя.

Обработку полученных данных (вычисление титра вируса и средней ошибки средней арифметической, S_x) выполняли методами статистики для малых значений n в несгруппированном ряду данных. Концентрацию веществ, подавляющих размножение вируса на 50% (IC₅₀), определяли на основе пробит-анализа и взвешенной линейной регрессии.

Полученные результаты приведены в табл. 1.

Исследуемое вещество обладает определенной способностью подавлять размножение вируса гриппа в культуре клеток ФЭК. В его присутствии в концентрации 800-400 мкг/мл снижение инфекционности вируса превышает 2,23 lg БОЕ/мл. С уменьшением концентрации противовирусное действие снижается, и уже в концентрации 100 мкг/мл противовирусное действие отсутствует. Среднеэффективная концентрация (IС₅₀) соединения составляет 198,47 (209,93-187,64) мкг/мл. С учетом общепринятой оценки величины противовирусного действия, основанной на определении химиотерапевтического индекса (отношение максимальной концентрации, переносимой клетками, к минимальной концентрации, снижающей титр вируса на величину 1,25 lg или более), активность соединения в отношении вируса гриппа может быть оценена как слабая (++).

Пример 2. Испытание противовирусных свойств заявляемого соединения в отношении вируса простого герпеса.

При проведении испытаний использовали перевиваемую культуру клеток рабдомиосаркомы (RD) человека и вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ, штамм 1 С). Монослойную культуру клеток RD, выращенную во флаконах, отмывали от ростовой среды, инфицировали 0,01-0,001 ТЦИД5о/клетка вируса путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37^oС. Затем жидкость удаляли и клетки покрывали средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации исследуемых веществ. После 48 ч инкубации при 37^oС регистрировали морфологические изменения монослоя клеток (цитопатический эффект вируса, увеличение х80). Титр вируса в присутствии исследуемых веществ и в контроле рассчитывали в lg ТЦИД₅₀. Критерием противовирусного действия считали наличие различий в сравнении с контролем вируса. Максимальную концентрацию исследуемых веществ, не токсичную для культуры клеток (с отсутствием морфологических изменений монослоя неинфицированных клеток), определяли как максимальную переносимую (МПК).

Обработку полученных данных выполняли общепринятым в вирусологии методом Рида и Менча. IC₅₀ определяли так же, как и при выполнении экспериментов с вирусом гриппа.

Полученные результаты приведены в табл. 2.

Из данных табл. 2 видно, что исследуемое соединение обладает способностью подавлять размножение вируса простого герпеса. С учетом общепринятой оценки величины противовирусного действия, основанной на определении химиотерапевтического индекса (отношение максимальной концентрации, переносимой клетками, к минимальной концентрации, снижающей титр вируса на величину 1,25 lg или более), активность соединения в отношении вируса герпеса может быть условно оценена как высокая (++++, ближе к высокой, чем средней).

Изобретение относится к фармакологии и медицине и касается изыскания новых антивирусных средств. Предлагается применение оксима (3-хлор-1-адамантил)метилкетона формулы

в качестве антивирусного ингибитора, обладающего высокой антивирусной активностью в отношении вируса герпеса простого типа 1 и слабой в отношении вируса гриппа А. Данное соединение может быть использовано для создания новых лекарственных средств антивирусного действия. 2 табл.

Применение оксима (3-хлор-1-адамантил)метилкетона формулы

в качестве антивирусного ингибитора, обладающего высокой антивирусной активностью в отношении вируса герпеса простого типа 1 и слабой в отношении вируса гриппа А.