СПОСОБ ЗАРАЖЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ БЛАСТОЦИСТАМИ Российский патент 2004 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к заражению экспериментальных животных бластоцистами.

Наиболее распространенными способами такого заражения являются разнообразные способы введения бластоцист животным (1, 2). При этом применяется шприц-инъекция этих простейших в мышцу и слепую кишку. Перечисленные способы не адекватны естественным условиям заражения бластоцистозом, так как известно, что простейшие попадают в организм фекально-оральным путем и основной патологический процесс развивается в толстой кишке. Применение вышеназванных способов не соответствует механизмам развития кишечного бластоцистоза. Известны также способы перорального (через рот) введения животным цистных форм простейших (3, 4). По мнению авторов, только цисты могут передаваться от человека к человеку и вызывать заболевание. Однако цисты образуются лишь в неблагоприятных условиях и направлены на сохранение вида. При этом цистные формы не обладают патогенностью и при попадании в благоприятные условия (организм человека или животного) превращаются в вакуолярные и (или) гранулярные формы, которые и вызывают кишечный бластоцистоз. Собственные исследования показали, что наряду с цистами в фекалиях обнаруживаются и вакуолярные формы бластоцист, способные непосредственно вызывать бластоцистоз, минуя переход в другие стадии.

Целью изобретения является создание способа заражения экспериментальных животных бластоцистами, адекватного естественным условиям, связанного с пероральным введением вакуолярных форм бластоцист.

Цель достигается при помощи перорального введения экспериментальным животным взвеси вакуолярных форм бластоцист, вызывающих кишечный бластоцистоз. Это позволяет воспроизвести инфекционный процесс адекватно естественным условиям заражения и дальнейшего развития кишечного бластоцистоза. Заражение вакуолярными формами бластоцист ведет к более ранним и более выраженным проявлениям заболевания, что связано с отсутствием необходимости перехода бластоцист из одной формы в другую, а также выраженной патогенностью используемых вакуолярных форм.

Способ осуществляют следующим образом.

Вакуолярную форму бластоцист человека выделяют из фекалий путем обогащения фекалий и последующего фильтрования полученной взвеси через мембрану (диаметр пор 10 мкм). При этом цисты, имеющие диаметр до 5 мкм, проходят через фильтр, а вакуолярные формы бластоцист остаются на нем. Далее вакуолярные формы бластоцист вымывают из фильтров стерильным физиологическим раствором и готовят взвесь простейших в концентрации 10⁶-10⁷/мл. Наличие вакуолярной формы во взвеси подтверждают путем микроскопии приготовленных из нее мазков. Выделенные бластоцисты имеют типичное для вакуолярной формы строение: центральное тело, занимающее большую часть клетки, цитоплазма, располагающаяся тонким слоем по периферии, плотные или фрагментированные ядра.

Взвесь вакуолярных форм простейших вводят лабораторным мышам и крысам однократно в объеме 0,5-1,0 мл соответственно в концентрации 10⁶-10⁷/мл через рот при помощи градуированной пипетки.

В течение 12-24 часов у животных развиваются симптомы кишечного бластоцистоза. Животные становятся вялыми, фекалии приобретают жидкую консистенцию, иногда с примесью крови. Наличие воспалительного процесса подтверждается увеличением количества лейкоцитов в периферической крови. При морфологическом исследовании кишечника отмечаются воспалительные изменения различной степени выраженности (гиперемия и отек слизистой оболочки, лимфоцитарная инфильтрация, дилатация сосудов, стаз и диапедез эритроцитов). Наряду с этим изменяется микрофлора кишечника, развивается дисбактериоз, проявляющийся в снижении количества нормальных представителей, таких как лактобактерии (lg 1,6±0,3 КОЕ/г, в контроле lg 2,5±0,5 КОЕ/г) и бифидобактерии (lg 1,2±0,3 КОЕ/г, в контроле lg 6,5±0,3 КОЕ/г).

Использованные источники
1. Markell E. K. , Udkow M.P. B. hominis Pathogen or fellow traveller. //Am. J. Trop. Med. Hyg. - 1986. - V. 35. - P.1023-1026.

2. Мое К. Т., Singh M, Howe J., Но L.C., Tan S.W., Hg G.C., Chen X.Q., Yap E. H. Observations on the ultrastruсture and viability of the cystic stage of B. hominis from human feces. //Parasitol. Res. - 1996. - V.82 - 5. - P.439-444.

3. Мое К. Т., Singh M, Howe J., Но L.C., Tan S.W., Chen X.Q., Hg G.C., Yap E. H. Experimental Blastocystis hominis infection in laboratory mice. //Parasitol. Res. - 1997. - V.83. - P.319-325.

4. Suresh K., Ng G.C., Ramachandran N.P. In vitro encystment and experimental infections of B. hominis. //Parasitol. Res. - 1993. - V.79. - 6. - Р - 456-460.

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Мышам и крысам однократно вводят взвесь вакуолярных форм бластоцист в количестве 0,5-1,0 мл соответственно в концентрации 10⁶-10⁷/мл через рот. Способ позволяет воспроизвести кишечный бластоцистоз адекватно естественным условиям, сократить сроки начала заболевания и увеличить степень выраженности его проявлений.

Способ заражения экспериментальных животных бластоцистами, отличающийся тем, что лабораторным мышам и крысам через рот однократно вводят взвесь вакуолярных форм бластоцист человека в объеме 0,5-1,0 мл соответственно в концентрации 10⁶-10⁷/мл, полученную из фекалий путем обогащения и последующего фильтрования полученной взвеси через мембрану.