СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ СПЕРМЫ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/483 G01N33/52 G01N33/569 

Изобретение относится к области медицины, а именно урологии, и может быть использовано, в частности, для количественного определения факторов естественной резистентности спермы.

В настоящее время достаточно большое внимание уделяется изучению иммунологических характеристик спермы специалистами ветеринарного профиля, в связи с тем, что процесс искусственного осеменения достаточно давно вошел в практику сельского хозяйства. К примеру, описан эффект снижения фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к сперматозоидам быка под влиянием бычьей семенной плазмы (Strzemienski P.J. Effect of bovine seminal plasma on neutrophil phagocytosis of bull spermatozoa. J Reprod. Fertil., 1989, vol.87(2): 519-528). В то же время, работы по определению иммунологических показателей спермы человека носят эпизодический характер или отсутствуют.

До недавнего времени единственным материалом для исследования иммунной системы человека являлась периферическая кровь и сыворотка. Анализ крови позволяет дать интегральную оценку иммунной системы в целом, но не позволяет идентифицировать локализацию патологического процесса. В то же время, существуют данные литературы о том, что патологический очаг вызывает наибольшие изменения иммунологических показателей в месте своей локализации, а также данные о большей информативности определения отдельных показателей иммунитета в различных биологических жидкостях организма при иммунопатологических состояниях. Это позволяет предположить, что биологические жидкости, являющиеся продуктом жизнедеятельности соответствующих органов, тканей и систем, в наибольшей степени будут отражать именно их состояние, а иммунологический анализ этих жидкостей позволит более четко выявить наличие патологических нарушений.

Это связано с тем, что в очаге воспаления иммунокомпетентные клетки приобретают черты активированных клеток: экспрессируются иные антигены и рецепторы, продуцируют иные цитокины по сравнению с клетками циркулирующей крови и так далее. Поэтому определение состояния факторов естественной резистентности непосредственно в сперме дает высокую достоверность исследований, так как на величину этих показателей оказывает меньшее влияние очаг воспаления любой другой локализации, имеющийся в организме.

С этих позиций, бактерицидная активность спермы, относимая к факторам естественной резистентности организма и контролирующая выживание бактерий в урогенитальном тракте мужчин, представляет собой интегральный показатель врожденных адаптивных механизмов защиты слизистой оболочки. Изучение этого показателя позволит охарактеризовать изменения со стороны бактерицидных систем организма, а также расширит возможности диагностики как уже существующих инфекций урогенитального тракта мужчин, так и состояний, предрасполагающих к их возникновению.

Целью представленного изобретения является количественное определение бактерицидной активности спермы (БАСп), которую можно отнести к факторам естественной резистентности организма, контролирующих выживание бактерий в урогенитальном тракте мужчин.

Поставленная цель достигается внесением в исследуемый образец спермы бактериальной взвеси тест-культуры, инкубацию при 37°С, остановку бактерицидной реакции и инкубацию при 37°С, определение бактерицидной активности по формуле:

БАСп=(С-(А+В))·100,

в которой БАСп - бактерицидная активность спермы;

С - оптическая плотность выживших бактерий в опыте;

А - оптическая плотность спермы;

В - оптическая плотность бактериальной взвеси.

Предложенный способ был успешно апробирован на 50 образцах в практической работе кафедры общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии в течение 2002 года.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1

Определяли бактерицидную активность спермы донора спермы О-ва А. В., 1978 года рождения, следующим образом:

1. Готовится взвесь тест-культуры в концентрации 1×10²⁰.

2. В первую пробирку вносят 0,2 мл спермы и 0,3 мл питательного бульона. Это контроль №1.

3. Во вторую пробирку вносят 0,2 мл питательного бульона и 0,3 мл бактериальной взвеси. Это контроль №2.

4. В третью пробирку вносят 0,2 мл спермы и 0,3 мл взвеси тест-культуры. Это опытная пробирка.

5. Инкубируем пробирки в течение 30 мин при 37°С.

6. Останавливаем бактерицидную реакцию разведением по всем пробам 5 мл питательного бульона.

7. Инкубируем при 37°С 2 ч 20 мин.

8. Для выявления выживших бактерий определяем оптическую плотность на фотоэлектрокалориметре.

9. Обозначаем полученный результат в контроле №1 как А. В контроле №2 как В. В опыте как С.

10. Бактерицидная активность спермы рассчитывается по формуле:

БАСп=(С-(А+В))·100.

В данном случае БАСп составила 91% (таблица).

Пример 2

Пациент И-ов П.П., 1969 года рождения.

Определяли бактерицидную активность спермы описанным выше способом. У этого донора бактерицидная активность спермы не определялась (таблица).

Применение способа определения бактерицидной активности спермы приводит к количественному определению комплексного показателя, характеризующего состояние механизмов естественной резистентности урогенитального тракта мужчин.

Изучение этого показателя позволит охарактеризовать изменения со стороны бактерицидных систем организма, регулирующих выживание бактерий в присутствии бактерицидных систем спермы. Это расширит возможности диагностики как уже существующих инфекций урогенитального тракта мужчин, так и состояний, предрасполагающих к их возникновению.

Изобретение может быть рекомендовано к применению в практическом здравоохранении в венерологических, урологических и андрологических учреждениях, а также в научной работе лабораторий соответствующего профиля.

Изобретение относится к медицине (урологии) и ветеринарии. Предложено: способ определения бактерицидной активности спермы путем инкубации спермы с тест-культурой. Изобретение расширяет арсенал способов определения факторов естественной резистентности организма в случае локализации патологического процесса в урогенитальном тракте. 1 табл.

Способ определения бактерицидной активности спермы, включающий внесение бактериальной взвеси тест-культуры, инкубацию при 37°С, остановку бактерицидной реакции и инкубацию при 37°С, определение бактерицидной активности по формуле

БАСп=(С-(А+В))х100,

в которой БАСп - бактерицидная активность спермы;

С - оптическая плотность выживших бактерий в опыте;

А - оптическая плотность спермы;

В - оптическая плотность бактериальной взвеси.