ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ Российский патент 2006 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и предназначено для родовой идентификации энтеробактерий.

Известны среды для идентификации энтеробактерий, содержащие пептон, тиосульфат натрия, соли железа, агар микробиологический (1, 2, 3). Среды данного назначения позволяют определять биохимическую активность микроорганизмов и по совокупности признаков идентифицировать микроорганизмы.

Известна также дифференциальная среда для идентификации энтеробактерий, содержащая пептон, соль железа, тиосульфат натрия, агар микробиологический, воду (4).

Недостатком указанных сред является громоздкость выполнения анализа, т.к. для определения каждого признака необходимо использовать разные среды, недостаточно четкая интерпретация результатов, а также эти среды содержат компоненты, не имеющие отечественного производства.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков, по составу и назначению является питательная среда SIM (5), содержащая пептон казеиновый, пептон мясной, железо аммиачное цитрат, натрия тиосульфат, агар.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной питательной среды, принятой за прототип, является ее низкая чувствительность, что затрудняет учет результатов при слабовыраженной положительной реакции. Недостатком среды является также высокая цена, что ограничивает ее использование в клинической практике.

Задача предлагаемого изобретения - повышение дифференцирующих свойств среды и чувствительности, упрощение определения родовой и видовой принадлежности энтеробактерий и удешевление ее стоимости.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит в качестве источника органической серы триптический гидролизат казеина, в качестве индикатора роста микроорганизмов - трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ), неорганические соли натрия при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Пептон ферментативный- 9,0-11,0Триптический гидролизат казеина- 9,0-11,0Натрия хлорид- 4,5-5,5Натрий фосфорнокислый 2-замещенный- 0,10-0,14Натрия тиосульфат- 0,25-0,35Железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое- 0,23-0,27Трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ)- 0,04-0,06Агар микробиологический- 2,8-3,2Вода дистиллированнаяДо 1 л

Содержание в предлагаемой среде в качестве питательной основы триптического гидролизата казеина в сочетании с пептоном ферментативным в соотношении 1:1 обеспечивает необходимое содержание триптофана, обеспечивающего продукцию индола, аминокислот, содержащих серу, способствует максимальному проявлению ферментативной активности бактерий. Введение в состав среды неорганического источника серы - натрия тиосульфата и индикатора на сероводород (железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое) позволяет определить образование сероводорода по почернению среды в результате образования нерастворимого преципитата черного цвета. Введение в состав среды трифенил-тетразолия хлористого (ТТХ) позволяет четко определить зоны роста и подвижность микроорганизмов за счет восстановления из бесцветной соли в окрашенную. В качестве уплотнителя среда содержит агар микробиологический.

Предлагаемая диагностическая среда позволяет одновременно дифференцировать микроорганизмы по 3 признакам: подвижности, образованию сероводорода и индола, что способствует упрощению процесса идентификации.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В дистиллированной воде растворяют следующие компоненты среды, взятые в количестве (минимальное), г/л:

Пептон ферментативный- 9,0Триптический гидролизат казеина- 9,0Натрия хлорид- 4,5Натрий фосфорнокислый 2-замещенный- 0,10Натрия тиосульфат- 0,25Железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое- 0,23Трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ)- 0,04Агар микробиологический- 2,8Вода дистиллированнаяДо 1 л

Среду доводят до кипения, кипятят 2-3 мин. Разливают в стерильные пробирки. Стерилизуют автоклавированием при температуре 121°С и остужают в вертикальном положении, столбиком.

Посев производят уколом на 1/3 высоты столбика среды, под ватномарлевую пробку вставляют полоску фильтровальной бумаги, пропитанной реактивом для определения индола. Посевы микробов инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 37°С. После инкубации микробов учитывают изменение цвета столбика среды, характер роста микроорганизмов, наличие образования индола и сероводорода.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что растворяют в дистиллированной воде следующие компоненты среды, взятые в количестве (оптимальное), г/л:

Пептон ферментативный- 10,0Триптический гидролизат казеина- 10,0Натрия хлорид- 5,0Натрий фосфорнокислый 2-замещенный- 0,12Натрия тиосульфат- 0,3Железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое- 0,25Трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ)- 0,05Агар микробиологический- 3,0Вода дистиллированнаяДо 1 л

Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примеров 1 и 2 тем, что растворяют следующие компоненты среды, взятые в следующем количестве (максимальное), г/л:

Пептон ферментативный- 11,0Триптический гидролизат казеина- 11,0Натрия хлорид- 5,5Натрий фосфорнокислый 2-замещенный- 0,14Натрия тиосульфат- 0,35Железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое- 0,27Трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ)- 0,06Агар микробиологический- 3,2Вода дистиллированнаяДо 1 л

Далее согласно примеру 1.

Биологический контроль разработанной среды осуществляли согласно «Методическим рекомендациям к контролю питательных сред по биологическим показателям», М., 1980 г.

Испытание образцов разработанной среды проводили с использованием тест-штаммов и свежевыделенных клинических штаммов энтеробактерий на базе баклаборатории РЦИБ г.Махачкалы.

Результаты испытания предлагаемой и известных сред по биологическим показателям приведены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет ряд преимуществ по сравнению с контрольной средой по скорости роста и дифференцирующим свойствам. Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, дешевле среды прототипа, проста в изготовлении и применении. Использование предлагаемой среды в бактериологических лабораториях при родовой идентификации энтеробактерий будет способствовать упрощению диагностики энтеробактерий и позволит ускорить процесс родовой и видовой идентификации энтеробактерий.

Литература

1. Энтеробактерии. Под ред. В.И.Покровского, М., 1985, с.286-288.

2. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, М., 1984, с.96.

3. Методы общей бактериологии. 3 т. Под ред. Ф.Герхардта, М., 1984, с.26-27.

4. Информация о продукции. Himedia Laboratories Pvt. Limited, 1993, c.204.

5. Microbiolody Manual. Merck Darstadt, 1990, p.184.

Таблица
Сравнительные данные идентификации энтеробактерий с использованием предлагаемой и известной сред№№Тест-штаммыКоличество штаммовПредлагаемая средаСреда SimСкорость роста (ч)СероводородИндолПодвижностьСкорость роста (ч)СероводородИндолПодвижность1.Е.coli196-18-++19-24-+±2.Е.cloaceae26-18+--19-24+--3.S. typhimurium26-18+-+19-24+-+4.S.typhi36-18+-+19-24±-±5.S. gallinarum106-18---19-24---6.S.london106-18+-+19-24±-+7.S.paratyphi A126-18--+19-24--+8.S.paratyphi В126-18+-+19-24+-+9.S.flexneri1014-18---19-24---10.Sh.zonnei1014-18---19-24---11.P.vulgaris106-18+++19-24+++12.K.pneumonia1014-18---19-24-- (+) - положительная реакция
(-) - отрицательная реакция
(±) - нет четкой реакции

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для родовой идентификации энтеробактерий. Питательная среда содержит пептон ферментативный, триптический гидролизат казеина, натрия хлорид, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, натрия тиосульфат, железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое, трифенил-тетразолий хлористый (ТТХ), агар микробиологический, воду дистиллированную. Изобретение позволяет повысить чувствительность питательной среды, повысить дифференцирующие свойства питательной среды, упростить определение видовой и родовой принадлежности энтеробактерий и удешевить ее стоимость. 1 табл.

Диагностическая питательная среда для идентификации энтеробактерий, содержащая пептон, натрия хлорид, натрия тиосульфат, агар микробиологический, индикатор продукции сероводорода, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит триптический гидролизат казеина, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, трифенил-тетразолий хлористый, а в качестве индикатора продукции сероводорода - железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое, при следующем содержании компонентов, г/л:

Пептон ферментативный9,0-11,0Триптический гидролизат казеина9,0-11,0Натрия хлорид4,5-5,5Натрий фосфорнокислый 2-замещенный0,10-0,14Натрия тиосульфат0,25-0,35Железо (III) лимонно-аммиачное, зеленое0,23-0,27Трифенил-тетразолий хлористый0,04-0,06Агар микробиологический2,8-3,2Вода дистиллированнаяДо 1 л