ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА (ЖИДКАЯ) ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЧУМНОГО МИКРОБА ВАКЦИННОГО ШТАММА ЕВ Российский патент 2005 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к биотехнологии, именно к приготовлению микробиологических питательных сред для выращивания чумного микроба вакцинного штамма ЕВ.

Известна питательная среда - мясо-пептонный бульон для культивирования микроорганизмов, включающий, г/л: к мясной воде прибавляют 1% пептона и 0,5% хлорида натрия. После растворения пептона устанавливают рН 20% раствором едкого натра до 7,2±0,1 («Справочник по микробиологии и вирусологическим методам исследования», Биргер М.О., 1982 г., с.48).

Недостатком данной среды является ее дороговизна.

Наиболее близкой к предполагаемому изобретению является питательная среда для выращивания чумного микроба, включающая, г/л: ферментативный гидролизат мясокостного фарша тушек лисицы 20,0-25,0; агар-агар 15,0-20,0; хлористый натрий 4,0-5,0; фосфорнокислый натрий двузамещенный 1,0-1,1; дистиллированную воду до 1 л. («Патент PU №20833664 С1, Бюлл. №19, 10.07.1997).

Недостатком данной среды является ее высокая себестоимость.

Целью изобретения является получение качественной дешевой питательной среды для культивирования вакцинного штамма чумного микроба ЕВ на белковой основе из растительного сырья - бобов сои, которая достигается за счет замены мясных питательных основ на соевые.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат соевых бобов и симулирующие добавки: натрий сернистокислый и липоевую кислоту при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Ферментативный гидролйзат бобов сои 320,0-420,0Натрий хлористый 4,0-6,0Натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0-5,0Натрий сернистокислый 0,3-0,5Липоевая кислота 0,4-0,620% раствор натрия гидроокиси 2,5-3,5Дистиллированная вода до 1 л.

Для приготовления питательной основы в качестве исходного сырья используют сою, семена которой представляют бобы, содержащие в среднем 40% белка, кроме того, соя богата микроэлементами и витаминами. Как известно, соевые белки характеризуются повышенным содержанием глутаминовой и аспарагиновой кислот, которые тесно связаны с углеводным обменом через цикл трикарбоновых кислот, поставляющих макроэргические связи (Y.P.Ypta, 1987). Кроме того, соевые белки содержат большое количество таких незаменимых аминокислот, как лизин, лейцин, аргинин. Имеются также сведения о способности лейцина, как аминокислоты с разветвленной белковой цепью, инициировать синтез белка (Е.И.Чазов, Х.С.Морган, /США/ 1989).

Способ изготовления питательной основы предлагаемой питательной среды для выращивания микроорганизмов заключается в следующем. Семена бобы сои в количестве 0,5 кг пятикратно вымачивают в 5 л горячей воды в течение 1 суток, причем последний настой с бобами кипятят в течение 40 мин. Затем настой сливают в 10 л баллон, охлаждают, бобы измельчают мясорубкой и помещают в настой. Добавляют поджелудочную железу КРС из расчета 20,0 г на 1 л, устанавливают рН до 8,2 20% раствором натрия гидроокиси 3 мл, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 37°С в течение 3 сут. В первые 2 ч смесь перемешивают через каждые 15 мин по 5 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 6 ч по 5 мин. Ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на 5 сут гидролиза составил 0,86%.

Питательную среду дня выращивания микроорганизмов на основе соевого ферментативного гидролизата готовят следующим способом. Ферментативного гидролизата из бобов сои, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12%-370,0; натрия хлористого - 5 г; натрия хлористокислого двузамещенного - 4 г; 20% раствора натрия гидроокиси - 3 мл; дистиллированная вода - до 1 л.

Среду кипятят до полного растворения ингредиентов, фильтруют через полотно и фильтровальную бумагу, затем устанавливают рН 7,2±0,1 с помощью 20% раствора натрия гидроокиси 3 мл, добавляют добавки: натрий сернистокислый и липоевую кислоту в концентрации соответственно 0,4 и 0,5 г/л, разливают в бактериологические пробирки по 10 мл, стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

В качестве примера испытывали культуру вакцинного штамма чумного микроба ЕВ, выращенную на пластинках 2% раствора агара Хоттингера, рН (7,2) при температуре 28°С в течение 24 ч. Затем готовили взвесь односуточной культуры тест-штамма, соответствующую 10 ед. оптического стандартного образца мутности (ОСО 42-28-85 П), эквивалентную 1,0·10⁹ м.к./мл в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида. Серийными 10-кратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 10 000 и 1000 м.к. Из каждого разведения взвеси культуры высевали по 0,1 мл в 3 пробирки. Учет результатов проводили через 24-48 час.

Пример 1.

Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей г/л: ферментативный гидролизат бобов сои - 320,0; натрий хлористый - 4,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный - 3,0; натрий сернистокислый - 0,3; липоевая кислота - 0,4; 20% раствор натрия гидроокиси 2,5; дистилированная вода - до 1 л.

При таком соотношении ингредиентов наблюдался агглютинабельный рост в виде незначительного количества взвешенных в прозрачном бульоне хлопьев с рыхлым осадком на дне пробирки.

Пример 2.

Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей г/л: ферментативный гидролизат бобов сои - 370,0: натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,4; липоевая кислота - 0,5; 20% раствор натрия гидроокиси 3,0; дистиллированная вода - до 1 л.

При таком соотношении ингредиентов наблюдался агглютинабельный рост в виде большого количества взвешенных в прозрачном бульоне хлопьев с рыхлым осадком на дне пробирки.

Пример 3.

Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей г/л: ферментативный гидролизат бобов сои - 420,0; натрий хлористый - 6,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,0; натрий сернистокислый - 0,5; липоевая кислота - 0,6; 20% раствор атрия гидроокиси 3,5; дистиллированная вода - до 1 л.

При таком соотношении ингредиентов наблюдался агглютинабельный рост в виде малого количества взвешенных в прозрачном бульоне хлопьев с рыхлым осадком на дне пробирки.

Таким образом, заявленная питательная среда (жидкая) для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ЕВ (пример 2), приготовленная на основе ферментативного гидролизата бобов сои, может применяться как экономически выгодная.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда в 1 л дистиллированной воды содержит ферментативный гидролизат бобов сои, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, натрий сернистокислый, липоевую кислоту, 20% раствор натрия гидроокиси. Изобретение позволяет получить качественную и дешевую питательную среду для культивирования чумного микроба.

Питательная среда (жидкая) для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ЕВ, содержащая питательную основу, натрий фосфорно-кислый двузамещенный, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат бобов сои, натрий сернисто-кислый, липоевую кислоту, дополнительно содержит 20%-ый раствор гидроокиси натрия при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Ферментативный гидролизат бобов сои320,0-420,0Натрий хлористый4,0-6,0Натрий фосфорнокислый двузамещенный3,0-5,0Натрий сернистокислый0,3-05Липоевая кислота0,4-0,620%-ый раствор натрия гидроокиси2,5-3,5Дистиллированная водаДо 1 л