СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАЛЬЦИЯ ФРУКТОЗОДИФОСФАТА Российский патент 2006 года по МПК C12P19/02 A61K31/7024 

Описание патента на изобретение RU2278164C2

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства кальция фруктозодифосфата (Са-ФДФ).

Кальция фруктозодифосфат - смесь кальциевых солей фосфорных эфиров моносахаридов с преобладающим количеством монокальциевой соли фруктозо-1,6 дифосфорной кислоты. Кальция фруктозодифосфат содержит как действующее начало органически связанный фосфор и кальций. Кальция фруктозодифосфат используют для приготовления лекарственных препаратов для лечения и профилактики сахарного диабета, нарушений сердечно-сосудистой и нервной системы, отравлений токсическими веществами, в частности для создания антиалкогольного препарата "Фруктогликол-комплекс" - биологически активной пищевой добавки, таблеток "Феррокаль" пролонгированного действия (общеукрепляющее и антианемическое средство) и ветеринарного препарата "Пуриветин", обладающего иммуностимулирующим действием.

Описано получение фруктозо-1-6-дифосфата путем биологической трансформации с использованием иммобилизированных клеток [1, 2].

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является способ получения гексозофосфата с использованием дрожжей Saccharomyces cerevisiae 6-11 генераций и толуола в качестве агента, повышающего проницаемость клеток [3, 4].

Согласно этому способу ферментацию проводили при 37°С в присутствии толуола в течение 3 часов.

В состав инкубационной смеси входили толуол, двузамещенный фосфорнокислый натрий, однозамещенный фосфорнокислый калий и сахароза в следующем соотношении 2,4:2:6:10, а дрожжевая культура вносилась в питательную смесь в количестве 0,4 объема на 1 объем питательной среды. По окончании фосфорилирования дрожжевой белок осаждали путем коагуляции в кислой среде (рН 5,0-5,2) при температуре 85-90°С и отделяли фильтрацией, затем пропускали через уголь марки ОУ-Б в кислой среде при рН 5,8-6,2. Полученный раствор, содержащий гексозофосфаты, стерилизовали и использовали для экспериментального изучения в виде 6%-ного стерильного раствора.

Оптимальный выход основного продукта (по фосфору органическому) - 8,26 г на 100 г сахарозы.

Однако указанный способ касался получения препарата гексозофосфат и характеризовался невысокой производительностью, кроме того, в процессе культивирования добавлялось очень большое количество толуола.

В предлагаемом изобретении в качестве продуцента использовали дрожжи Saccharomyces carlsbergensis 776 (2-10 генерации).

Способ получения Са-ФДФ осуществляли следующим образом: дрожжи помещали в фосфатный буфер (рН-7,0), содержащий сахарный песок, а в качестве веществ, повышающих проницаемость клеточной стенки дрожжей, использовали смесь толуола, н-пропанола и изопропанола.

Процесс проводили в течение 2-2,5 часов при температуре 35°С. По окончании трансформации дрожжи отделяли центрифугированием, а в супернатант добавляли хлористый кальций при температуре 85°С. Полученный осадок отделяли, промывали этанолом и сушили при 50°С.

Получали 0,55 кг Са-ФДФ с содержанием органического фосфора 10-12% на сухую массу.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами

Пример 1

Процесс трансформации осуществляли в аппарате вместимостью 15 л, снабженном мешалкой. На 5 кг отстоявшихся дрожжей Saccharomyces carlsbergensis 776 4 генерации готовили 2,5 л фосфатного буфера (0,3 кг 82% фосфорной кислоты нейтрализовали до рН 7,0 25% едким натром). В полученную смесь, содержащую дрожжи и фосфатный буфер, вносили 560 г сахарного песка. Общий объем смеси 8 л. Процесс проводили при 35°С в течение 2,0-2,5 часов в присутствии 0,5% толуола, 0,5% н-пропанола и 0,5% изопропанола.

По окончании трансформации дрожжи отделяли на сепараторе. Супернатант нагревали на водяной бане до 85°С, добавляли 300 г безводного хлористого кальция и выдерживали при этой температуре 15-20 мин. Осадок отделяли, промывали 2 л этанола 96% и сушили при 50°С. Получили 0,55 кг кальция фруктозодифосфат с содержанием органического фосфора 11%. Выход основного продукта (по фосфору органическому) составлял 10,8 г на 100 г сахарного песка.

Пример 2

Условия трансформации и выделения те же, что в примере 1, за исключением количества поверхностно-активных веществ.

В смесь дрожжей, буфера и сахарного песка добавляли по 0,3% толуола, н-пропанола и изопропанола. Трансформация проходила не полностью, продукт был некачественный, содержание органического фосфора 5-6%.

Пример 3

Условия трансформации и выделения те же, что в примере 1, за исключением количества поверхностно-активных веществ. В смесь дрожжей, буфера и сахарного песка добавляли по 0,7% толуола, н-пропанола и изопропанола. Образование продукта не наблюдали в связи с лизисом дрожжевых клеток.

Источники информации

1. Патент Италии C 12N №3709718, 1986.

2. Патент Италии С 12Р №8711056, 1987.

3. Баскович Г.А. Получение препарата гексозофосфат, его состав и свойства. Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук, Л., 1973.

4. Михайлова Л.Г., Баскович Г.А. Получение препарата гексозофосфатов из дрожжей. Прикладная биохимия и микробиология, 1969, 6, 738-739.

Похожие патенты RU2278164C2

название год авторы номер документа
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS PS105(PBIG)-ПРОДУЦЕНТ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ИНТЕРФЕРОНА БЫКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PBIG, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ БИОСИНТЕЗ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ИНТЕРФЕРОНА БЫКА И СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК PBIG 2002
  • Градобоева А.Е.
  • Падкина М.В.
  • Парфенова Л.В.
  • Самбук Е.В.
  • Смирнов М.Н.
RU2231545C1
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА МУЛЬТИФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА 2009
  • Крупин Алексей Владимирович
  • Бабич Ольга Олеговна
  • Сухих Станислав Алексеевич
  • Просеков Александр Юрьевич
  • Короткая Елена Валерьевна
RU2437935C2
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ФИБРОБЛАСТНОГО ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА КЛЕТКАМИ ДРОЖЖЕЙ, СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ И ШТАММ ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE-ПРОДУЦЕНТ ФИБРОБЛАСТНОГО ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА 1998
  • Падкина М.В.
  • Парфенова Л.В.
  • Самбук Е.В.
  • Смирнов М.Н.
RU2180003C2
Рекомбинантная плазмидная ДНК pJDB (MSIL), обеспечивающая синтез интерлейкина-2 человека в клетках дрожжей SасснаRомUсеS ceReUISIaL, способ ее получения и штамм дрожжей SасснаRомYсеS ceReUISIaL - продуцент интерлейкина-2 человека 1988
  • Мясников Андрей Новомирович
  • Смирнов Михаил Николаевич
  • Авот Андрис Янович
  • Грен Элмар Янович
  • Романчикова Надежда Викторовна
  • Циманис Александр Юрьевич
SU1770359A1
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS - ПРОДУЦЕНТ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА-16 ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PHIN И СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ 2002
  • Падкина М.В.
  • Парфенова Л.В.
  • Самбук Е.В.
  • Смирнов М.Н.
RU2203950C1
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Pichia pastoris PS106(pHIG), ЯВЛЯЮЩИЙСЯ ПРОДУЦЕНТОМ ИММУННОГО ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pHIG И СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ 2006
  • Градобоева Анастасия Евгеньевна
  • Падкина Марина Владимировна
  • Самбук Елена Викторовна
  • Смирнов Михаил Николаевич
RU2315806C1
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS - ПРОДУЦЕНТ ФИБРОБЛАСТНОГО ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PHIF И СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ 2000
  • Падкина М.В.
  • Парфенова Л.В.
  • Самбук Е.В.
  • Смирнов М.Н.
RU2180687C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДВУСПИРАЛЬНОЙ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae 2022
  • Белый Петр Александрович
  • Лопатухин Эдуард Юрьевич
  • Королев Владимир Львович
  • Заславская Кира Яковлевна
  • Рогожина Екатерина Алексеевна
  • Левина Екатерина Александровна
RU2781833C1
Рекомбинантная плазмидная ДНК, способ ее конструирования и штамм дрожжей Komagataella pastoris - продуцент фрагмента белка VP2 вируса инфекционной бурсальной болезни птиц 2021
  • Румянцев Андрей Михайлович
  • Цыганков Михаил Александрович
  • Падкина Марина Владимировна
RU2800472C2
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE 1-60-Д578 (MSIL), - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2002
  • Смирнов М.Н.
  • Падкина М.В.
  • Самбук Е.В.
RU2230781C1

Реферат патента 2006 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАЛЬЦИЯ ФРУКТОЗОДИФОСФАТА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения кальция фруктозодифосфата. Кальция фруктозодифосфат используют для приготовления лекарственных препаратов для лечения и профилактики сахарного диабета, нарушения сердечно-сосудистой и нервной системы, отравлений токсическими веществами. Предложенный способ получения кальция фруктозодифосфата включает трансформацию дрожжами Saccharomyces carlsbergensis при 34-36°С в присутствии одновременно толуола, пропанола и изопропанола в количестве 0,4-0,5% каждого. Целевой продукт выделяли из супернатанта при температуре 85°С в присутствии хлористого кальция в течение 15-20 мин с последующей промывкой этиловым спиртом и сушкой. Выход основного продукта (по фосфору органическому) на субстрат увеличен на 30%, способ обеспечивает стабильность процесса трансформации, повышение производительности и качества продукта.

Формула изобретения RU 2 278 164 C2

Способ получения кальция фруктозодифосфата, предусматривающий культивирование дрожжей Saccharomyces carlgbergensis в фосфатосодержащей среде с сахарозой при содержании ее в количестве 7,5-8,0%, в присутствии толуола, пропанола и изопропанола в количестве 0,4-0,5% каждого при 34-36°С с последующим отделением дрожжей и выделением целевого продукта в виде вышеуказанной кальциевой соли при термообработке при 80-85°С в течение 15-20 мин с последующей промывкой этиловым спиртом и сушкой.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2006 года RU2278164C2

Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
БАСКОВИЧ Г.А
Получение препарата гексозофосфат, его состав и свойства: Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд
биол
наук
Л., 1973
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
МИХАЙЛОВА Л.Г., БАСКОВИЧ Г.А
"Получение препарата гексозофосфатов из дрожжей
Прикладная биохимия и микробиология
Приспособление к индикатору для определения момента вспышки в двигателях 1925
  • Ярин П.С.
SU1969A1

RU 2 278 164 C2

Авторы

Малков Марк Абович

Полатовская Ольга Григорьевна

Каминская Алла Юрьевна

Фадеева Ирина Павловна

Даты

2006-06-20Публикация

2003-09-15Подача