ШТАММ STREPTOCOCCUS VESTIBULARIS СЛК-92, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2008 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12R1/46 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для изготовления пробиотического препарата, обладающего профилактическим и лечебным действием при кишечных инфекциях молодняка сельскохозяйственных животных, вызываемых патогенными энтеробактериями родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, Salmonella, протекающих с участием названных бактерий.

Известен штамм Streptococcus faecium M-3185 (Патент РФ 2152 433, МКИ⁷ С12N 1\20, опубл. 10.07.2000), используемый для приготовления бактериальных препаратов. Данный штамм не обладает антагонистической активностью на энтеробактерии родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Providencia и требует для нормального роста субстраты со сложными органическими формами азота (гидролизаты белков, смеси аминокислот, витамины и факторы роста).

Известен штамм Streptococcus faecium TE-17 (Патент РФ 2217493, МКИ⁷ С12N 1/20, опубл. 27.11.2003), используемый для приготовления бактериальных препаратов, имеющий длительный срок выращивания, сложную по своему составу питательную среду для культивирования микроорганизма, требующий большую дозу посевного материала и имеющий низкую концентрацию активного начала в весовой дозе.

Технической задачей предлагаемого изобретения является использование нового штамма Streptococcus vestibularis СЛК-92, позволяющего более эффективно и упрощенно проводить профилактику и лечение бактериальных кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных за счет более длительного персистирования штамма в кишечнике животных (эшерихий, морганелл, клебсиелл, провиденций, протея, цитробактер, энтеробактер, золотистому стафилококку).

Штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 относится к семейству Streptococcaecea, выделен из кишечника трупа теленка, принадлежащего ОАО «Большевик» Серпуховского района Московской области, сотрудниками ГНЦПМ Светочем Э.А., Левчуком В.П., Ковалевым Ю.Н. и депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов при Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»).

Штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 характеризуются следующими признаками.

Морфологические свойства. При микроскопическом исследовании 24-48-часовых культур на стандартном мясопептонном агаре средних размеров кокки, грамположительные, капсул не образуют, неподвижные, располагаются вмазках одиночно, попарно, короткими и средних размеров цепочками.

Культуральные свойства. Штамм неприхотлив к условиям культивирования в жидких и на плотных питательных средах; оптимальная температура роста 36-38°С, рН среды 7,2-7,4, факультативный анаэроб, не растет при температуре 43-45°С. На простом МПА, среде MRS - рост в виде мелких округлых колоний S-формы, с ровными краями и гладкой блестящей поверхностью. Колонии умеренно выпуклые, серовато-белого цвета; в жидких средах (МПБ, пептонная вода, бульон Хоттингера и др.) рост в виде хлопьев, при встряхивании пробирки они равномерно разбиваются в гомогенную взвесь.

Биохимические свойства. Ферментирует с образованием одной кислоты лактозу, салицин, трегалозу. Не изменяет инулин, маннит, раффинозу, сорбит. Реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная, реакция с метилротом положительная. Растет в присутствии 6,5% NaCl. Гидролизует гиппурат натра.

Безвредность для животных. Штамм не патогенен для белых мышей при внутрибрюшинном заражении в дозе 1,5 млрд.м.к.; не оказывает побочных реакций и не влияет на общее клиническое состояние животных при скармливании суспензий в дозах 5-6 млрд.м.к. новорожденным поросятам и 60-70 млрд.м.к. 1-2-дневным телятам.

Спектр антибактериального действия. При 48-часовом культивировании штамма на плотных стандартных средах (МПА, MRS-агаре) и в жидких средах (МПБ, бульоне Хотингера) продуцирует антибактериальные вещества, обладающие бактериостатическим и бактерицидным действием на патогенные штаммы энтеробактерий родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, Staphylococcus aureus-209P. Штамм обладает широким спектром антагонистического действия за исключением синегнойных бактерий и иерсиний. Штамм способен колонизироваться в кишечнике и сохранять исходные концентрации в течение 4 суток у телят и 5 суток у поросят, что позволяет применять штамм с интервалом в 4-5 суток, двукратно, на первый и пятый день, когда новорожденные телята и поросята уязвимы к диарее бактериальной этиологии.

Штамм стабилен. При многократных пересевах на питательные среды не диссоциирует, сохраняет свои исходные морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, а также способность продукции антибактериальных веществ; дает обильный рост бактериальной массы спустя 24-48 часов культивирования, необходимой для изготовления препарата.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. На молочных фермах, неблагополучных по заболеванию новорожденных телят смешанной кишечной инфекцией, вызванной разными видами энтеробактерий, в том числе представителями родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, были сформированы три группы животных по 30 голов в каждой.

1-й группе (опытная) - выпаивали с профилактической целью штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 в дозе по 70 млрд. м.к. в первый и на 5 день жизни телят;

2-й группе (прототип) - выпаивали с профилактической целью штамм Streptococcus faecium ТЕ-17 в дозе по 70 млрд. м.к. ежедневно в течение 10 дней;

3-я группа (контрольная) - ничего не выпаивали.

Учет результатов проводили через 10-12 дней.

В 1-й группе (опытная) - использование штамма Streptococcus vestibularis СЛК-92 предотвращало возникновение диареи у 82% новорожденных телят, летальный исход отмечался в среднем у 14% животных.

Во 2-й группе (прототип) - использование штамма Streptococcus faecium TE-17 предотвращало возникновение диареи у 55% новорожденных телят, летальный исход отмечался у 18% животных.

В 3-й группе (контрольная) - диарея отмечалась у 75% от числа родившихся телят, летальный исход от диареи составлял 24% животных.

Пример 2. На молочных фермах, неблагополучных по заболеванию новорожденных телят смешанной кишечной инфекцией, вызванной разными видами энтеробактерий, в том числе представителями родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, были сформированы три группы животных по 30 голов в каждой.

1-й группе (опытная) - выпаивали с лечебной целью штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 в дозе по 70 млрд. м.к. на один прием 2 раза в сутки ежедневно в течение 3 дней (до прекращения признаков диареи);

2-й группе (прототип) - выпаивали с лечебной целью штамм Streptococcus faecium TE-17 в дозе по 70 млрд. м.к. на один прием 2 раза в сутки ежедневно в течение 4-6 дней;

3-я группа (контрольная) - животным скармливали тетрациклин из расчета 300 ЕД на кг веса животного однократно в сутки в течение 5-6 дней.

Учет результатов проводили через 10 дней.

В 1-й группе (опытная) - использование штамма Streptococcus vestibularis СЛК-92 с лечебной целью предотвращало возникновение признаков диареи у 83% новорожденных телят на 2-3 день его применения, летальный исход отмечался в среднем у 16% телят.

Во 2-й группе (прототип) - использование штамма Streptococcus faecium TE-17 с лечебной целью вызывало излечение диареи у 55% новорожденных телят на 4-6 день из числа больных диареей телят, летальный исход отмечался у 21% животных.

В 3-й группе (контрольная) - излечение диареи антибиотиками совместно с симптоматическими препаратами составило 65% телят, летальный исход от диареи отмечался у 23% больных животных.

Пример 3. На свиноводческих фермах, неблагополучных по заболеванию новорожденных поросят смешанной кишечной инфекцией, вызванной разными видами бактерий семейства Enterobacteriaceae, в т.ч. родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, были сформированы три группы животных по 30 голов в каждой.

1-й группе (опытная) - выпаивали с профилактической целью штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 в дозе по 5 млрд. м.к. на один прием двукратно: в первые и на 6 сутки жизни поросят.

2-й группе (прототип) - выпаивали с профилактической целью штамм Streptococcus faecium TE-17 в дозе по 5 млрд. м.к. на один прием ежедневно в течение 12-15 дней.

3-я группа (контрольная) - ничего не выпаивали.

Учет результатов проводили через 15 дней.

В 1-й группе (опытная) - использование штамма Streptococcus vestibularis СЛК-92 снижало заболеваемость новорожденных поросят диареей на 78% и сокращало падеж животных на 18% по сравнению с контрольными животными, не получавшими штамм-антагонист, летальный исход отмечался у 12%.

Во 2-й группе (прототип) - использование штамма Streptococcus faecium TE-17 предотвращало возникновение диареи у 58% новорожденных поросят и сокращало падеж животных на 12% по сравнению с контрольными животными, не получавшими штамм-антагонист, летальный исход отмечался у 26% животных.

В 3-й группе (контрольная) - заболеваемость диареей составила 65% новорожденных поросят, летальный исход отмечался у 26% поросят.

Пример 4. На свиноводческих фермах, неблагополучных по заболеванию новорожденных поросят смешанной кишечной инфекцией, вызванной разными видами бактерий семейства Enterobacteriaceae, в т.ч. родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia, были сформированы три группы животных по 30 голов в каждой.

1-й группе (опытная) - выпаивали с лечебной целью штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 в дозе 6 млрд. м.к. на один прием двукратно в сутки в течение 2-3 дней;

2-й группе (прототип) - выпаивали с лечебной целью штамм Streptococcus faecium ТЕ-17 в дозе 6 млрд. м.к. на один прием двукратно в сутки в течение 5-6 дней;

3-я группа (контрольная) - животным скармливали тетрациклин и неомицин из расчета 500 ЕД на кг веса животного каждого препарата однократно в сутки в течение 3-4 дней.

Учет результатов проводили через 10 дней.

В 1-й группе (опытная) - использование штамма Streptococcus vestibularis СЛК-92 с лечебной целью приводило к выздоровлению 84% больных животных на 2-3 суткам, летальный исход отмечался в среднем у 12% животных.

Во 2-й группе (прототип) - использование штамма Streptococcus faecium TE-17 с лечебной целью приводило к выздоровлению 60% больных животных через 3-4 суток, летальный исход отмечался в среднем у 21% животных.

В 3-й группе (контрольная) - излечение диареи составило у 44% животных, летальный исход отмечался у 23%.

Таким образом, применение штамма - антагониста Streptococcus vestibularis СЛК-92 новорожденным телятам и поросятам с профилактической и лечебной целями позволило снизить их заболеваемость соответственно в 1,5 и 1,7 раза, сократить падеж животных соответственно в 1,3-2 раза, уменьшить кратность скармливания препарата в 3-4 раза по сравнению с прототипом.

Изобретение относится к ветеринарии, может быть использовано для изготовления пробиотического препарата, обладающего профилактическим и лечебным действием при кишечных инфекциях молодняка сельскохозяйственных животных, вызываемых патогенными энтеробактериями родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Providencia. Штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92 выделен из кишечника трупа теленка и депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов при ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ФГУ «ВГНКИ» - 08.12.39. Применение штамма новорожденным телятам и поросятам для профилактики и лечения бактериальных кишечных инфекций позволило снизить их заболеваемость, сократить падеж животных и уменьшить кратность скармливания молодняка сельскохозяйственных животных.

Штамм Streptococcus vestibularis СЛК-92, ФГУ «ВГНКИ» - 08.12.39, используемый для изготовления пробиотического препарата против бактериальных кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных.