СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И КОНТРОЛЯ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2008 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве пробиотических препаратов на основе лакто- и бифидобактерий.

Известно, что в производстве пробиотических препаратов на основе лакто- и бифидобактерий (лактобактерин, бифидумбактерин, ацилакт, бифилиз, бифидин и др.) используют разнообразные питательные среды, наборы которых для каждого препарата отличаются между собой. Для приготовления маточных культур бактерий реакторного культивирования и контроля препаратов применяют печеночную, гидролизатно-молочную, дрожже-молочную и др. среды (см. патенты РФ №2072856, №2087532, №2160594).

Недостатком такого способа является необходимость приготовления большого количества полуфабрикатов для питательных сред, что повышает себестоимость и увеличивает трудоемкость процесса изготовления препарата.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения и контроля бифидосодержащих пробиотиков, предусматривающий использование модифицированной среды Блаурокка для трех пассажей при приготовлении маточной культуры производственного штамма В. bifidum 1, культивирование бифидобактерий в реакторе типа «Биор» на казеиново-дрожжевой среде и определение биологических параметров готового продукта путем подсчета общей концентрации клеток по оптической плотности суспензии и количества жизнеспособных клеток КОЕ/мл в модифицированной среде Блаурокка, активности кислотообразования (см. ДЕМЕШЕВА М.И. и др. Биотехнологические аспекты производства бифидосодержащих пробиотиков. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. Сборник материалов международной конференции, М., 1-4 июня 2004, с.183-184).

Для достижения указанного технического результата предлагается в способе получения и контроля пробиотических препаратов на основе лакто- или бифидобактерий, включающем последовательные посевы бактерий на питательную среду при приготовлении маточной культуры, реакторное накопление биомассы бактерий и определение биологических параметров готового препарата, в качестве питательной среды использовать казеиново-дрожжевую среду, содержащую 20-25% дрожжевого аутолизата и 10-15% казеинового гидролизата от всего объема среды, при этом при приготовлении маточной культуры бактерий посев на казеиново-дрожжевую среду предлагается чередовать с посевом на другую питательную среду, например МРС-1 (Фармакопейная статья ФС 42-0054-00 "Лактобактерин сухой") для лактобактерий и модифицированную печеночную среду Блаурокка (Фармакопейная статья ФС 42-3947-00 "Бифидумбактерин сухой") для бифидобактерий.

Отличительными признаками предложенного способа получения и контроля пробиотических препаратов являются: использование в качестве питательной среды казеиново-дрожжевой среды, содержащей 20-25% дрожжевого аутолизата и 10-15% казеинового гидролизата от всего объема среды, при этом при приготовлении маточной культуры бактерий посев на казеиново-дрожжевую среду чередуют с посевом на другую питательную среду, например МРС-1 для лактобактерий и модифицированную печеночную среду Блаурокка для бифидобактерий.

Предлагаемый способ получения и контроля пробиотических препаратов на основе лакто- или бифидобактерий осуществляют следующим образом.

Производят последовательно посев бактерий на питательную среду при приготовлении маточной культуры, реакторное накопление биомассы бактерий и определение биологических параметров готовых препаратов. В качестве питательной среды на всех этапах используют казеиново-дрожжевую среду, содержащую 20-25% дрожжевого аутолизата и 10-15% казеинового гидролизата от всего объема среды. На этапе приготовления маточной культуры, включающей не менее 3-х посевов (пробирка-флакон-бутыль) казеиново-дрожжевую среду используют для 1-го и 3-го посевов. Посев на казеиново-дрожжевую среду чередуют с посевом на другую питательную среду, например МРС-1 для лактобактерий и модифицированную печеночную среду Блаурокка для бифидобактерий. При этом удельный вес казеиново-дрожжевой среды в общем расходе питательных сред на данном этапе составляет не менее 90%. Полученную бактериальную культуру используют в качестве инокулята для реакторного культивирования клеток в казеиново-дрожжевой среде. После завершения производственного накопления биомассы клеток бактериальную взвесь стабилизируют высушиванием.

В готовом препарате с помощью казеиново-дрожжевых сред определяют содержание жизнеспособных клеток и активность кислотообразования. Казеиново-дрожжевые среды обладают высокой эффективностью и чувствительностью, что является предпосылкой для применения этих сред на всех этапах получения и контроля пробиотических препаратов. Снижение содержания в их составе казеинового гидролизата (до 10-15%) и дрожжевого аутолизата (до 20-25%) не приводит к ухудшению указанных биологических параметров казеиново-дрожжевых сред, что позволяет использовать их в производстве пробиотиков. При приготовлении маточной культуры производственного штамма бактерий пассирование на одной питательной среде уступает, как правило, по эффективности чередованию посевов на разные питательные среды. Смена питательных сред способствует более высокому накоплению жизнеспособных клеток в последующем посеве при стационарном культивировании. Этим обусловлена предлагаемая частичная, а не полная замена применяемых питательных сред на казеиново-дрожжевые при приготовлении маточной культуры бактерий в производстве пробиотических препаратов.

Пример 1. Получение и контроль бифидумбактерина.

Из 33 л казеинового гидролизата и 44 л дрожжевого аутолизата готовят 220 л казеино-дрожжевой среды, в том числе 19 л для приготовления маточной культуры бифидобактерий штамма Bifidobacterium bifidum 1, 200 л для реакторного культивирования бифидобактерий и 1 л для контроля сухого препарата бифидобактерий. При приготовлении маточной культуры производят три последовательных посева бифидобактерий с использованием казеиново-дрожжевой среды (1-й и 3-й посевы) и среды Блаурокка (2-й посев), вся культура предыдущего посева является при этом инокулятом для последующего посева. Полученную маточную культуру бифидобактерий в количестве 20 л загружают в реактор, содержащий 200 л казеиново-дрожжевой среды, и проводят процесс культивирования в течение 20±4 ч при температуре 38°С. Полученную бактериальную взвесь, содержащую не менее 10⁸ КОЕ/мл, смешивают с защитной средой, разливают во флаконы и подвергают лиофилизации. В готовом препарате с помощью казеиново-дрожжевой среды по стандартным методикам (Фармакопейная статья ФС 42-3947-00 "Бифидумбактерин сухой") определяют содержание жизнеспособных клеток, количество которых составляет не менее 10⁷ КОЕ/ доза, а также активность кислотообразования, уровень которого составляет не менее 100°Т.

Пример 2. Получение и контроль лактобактерина.

Из 45 л дрожжевого аутолизата и 18 л казеинового гидролизата готовят 180 л казеиново-дрожжевой среды, в том числе 19 л для приготовления маточной культуры лактобактерий штамма Lactobacillus plantarum 8P-A3, 160 л для реакторного культивирования лактобактерий и 1 л для контроля сухого лактобактерина. При приготовлении маточной культуры производят три последовательных посева лактобактерий с использованием казеиново-дрожжевой среды (1-й и 3-й посев) и среды МРС-1 (2-й посев). Полученную маточную культуру лактобактерий в количестве 20 л загружают в реактор, содержащий 160 л казеиново-дрожжевой среды, и проводят процесс культивирования в течение 9±1 ч при температуре 37°С. Полученную бактериальную взвесь, содержащую не менее 10¹⁰ КОЕ/мл, смешивают с защитной средой, разливают во флаконы и подвергают лиофилизации. В готовом препарате с помощью казеиново-дрожжевой среды по стандартным методикам (Фармакопейная статья ФС 42-0054-00 "Лактобактерин сухой") определяют содержание жизнеспособных клеток, количество которых составляют не менее 10⁹ КОЕ/доза, а также активность кислотообразования, уровень которого составляет не менее 220°Т.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве пробиотических препаратов на основе лакто- и бифидобактерий. Способ включает последовательные 3-кратные посевы бактерий на питательную среду при приготовлении маточной культуры, реакторное накопление биомассы бактерий и определение биологических параметров готового препарата. В качестве питательной среды используют казеиново-дрожжевую среду, содержащую 20-25% дрожжевого аутолизата и 10-15% казеинового гидролизата. При приготовлении маточной культуры бактерий 1-й и 3-й посев на казеиново-дрожжевую среду чередуют с посевом на другую питательную среду - МРС-1 для лактобактерий и модифицированную печеночную среду для бифидобактерий. Изобретение обеспечивает снижение затрат, унификацию питательных сред на этапах изготовления и контроля препаратов, а также снижение расхода полуфабрикатов при приготовлении казеиново-дрожжевой среды.

Способ получения и контроля пробиотических препаратов на основе лакто- или бифидобактерий, включающий последовательные 3-кратные посевы бактерий на питательную среду при приготовлении маточной культуры, реакторное накопление биомассы бактерий на казеиново-дрожжевой среде и определение биологических параметров готового препарата, отличающийся тем, что используют казеиново-дрожжевую среду, содержащую 20-25% дрожжевого аутолизата и 10-15% казеинового гидролизата от объема среды, причем при приготовлении маточной культуры 1-й и 3-й посев на казеиново-дрожжевую среду чередуют с посевом на другую питательную среду - МРС-1 для лактобактерий и модифицированную печеночную среду Блаурокка для бифидобактерий, а при определении биологических параметров готового продукта используют казеиново-дрожжевую среду.