СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛА В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ Российский патент 2009 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть применено для определения α-токоферола (альфа-токоферола) в различных объектах растительного и животного происхождения.

Наиболее близкими по технической сущности и достигаемому эффекту являются способы определения α-токоферола методом ТСХ с применением элюентов: 1) бензол:этилацетат (8:2) (Надиров Н.К. Токоферолы и их использование в медицине и сельском хозяйстве. М.: Наука, 1991, с.71); 2) бензол:петролейный эфир (1:1); 3) хлороформ (Экспериментальная витаминология. Справочное руководство. Под. ред. Островского Ю.М. Мн.: Наука и техника, 1979, с.48); 4) гексан:этилацетат (37:3) (Кирхнет Ю. Тонкослойная хроматография. Москва: Изд. Мир, 1981, с.410). В данном способе в качестве адсорбента используют силикагель марки КСК и АСК с добавлением 15% гипса. Перед применением пластины активируют в течение 2 часов при 110°С. Хроматограмма развивается в темноте, подвижным растворителем является хлороформ. Это занимает 35 -45 мин. Пластинки опрыскивают реактивом Эммери - Энгеля, состоящим из равных объемов 0,25% раствора α,α′-дипиридила и 0,1%-ного спиртового раствора FeCl₃. Токоферолы окрашиваются в розовый цвет. Для количественного определения токоферолов пластинку делят на две части. После развития хроматограммы и подсушивания пластинок левую половину закрывают, а правую опрыскивают раствором Эммери-Энгеля. Далее на левой части пластинки на высоте окрашенных пятен токоферолов соскабливают силикагель и помещают его в пробирку, куда добавляют 5 мл этанола. Адсорбент отделяют центрифугированием. К 4 мл элюата добавляют 0,5 мл 0,25%-ного спиртового раствора α,α′-дипиридила и 0,5 мл 0,1% спиртового раствора FeCl₃._{Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют через 5 мин при 520 нм. Содержание токоферолов рассчитывают по градуировочным графикам в перерасчете на α-токоферол.}

Недостатки известного способа - невозможность получения округлой формы хроматографических зон α-токоферола, соответствующих линейной изотерме сорбции, объясняющаяся значительным сродством витамина Е к неподвижной фазе (элюент №1 и 3) и подвижной фазе (элюент №2 и 4), а также длительное по времени количественное определение витамина Е.

Задачей изобретения является определение α-токоферола методом хроматографии в тонком слое сорбента с применением элюента, обеспечивающего получение хроматографических зон α-токоферола, соответствующих линейной изотерме сорбции.

Технический результат заключается в повышении точности и достоверности количественного определения α-токоферола за счет улучшения качества хроматографических зон.

Технический результат достигается тем, что способ определения альфа-токоферола методом хроматографии в тонком слое сорбента включает приготовление спиртового раствора исследуемого объекта, нанесение пробы раствора на хроматографическую пластину марки "Sorbfil", хроматографирование в присутствии элюента октан:диэтиловый эфир (7:1), высушивание пластины на воздухе, проявление хроматографических зон альфа-токоферола концентрированной азотной кислотой, выдержку в термостате, сканирование хроматограммы, обработку полученных изображений хроматограмм компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer» и нахождение количественного содержания альфа-токоферола по градуировочной зависимости.

На фиг.1 - хроматограмма, полученная в системе октан:диэтиловый эфир (7: 1), проявитель - HNO₃ конц., концентрации растворов α-токоферола - 2,5, 5, 10, 15 мг/мл.; на фиг.2 - градуировочный график для определения содержания α-токоферола в области концентраций (2,5-15 мг/мл), на фиг.3 - хроматограмма масляного экстракта череды; 1 - хроматограмма стандартного раствора α-токоферола (с=10 мг/мл, V проб.=1 мкл), 2 - хроматограмма спиртового раствора неомыляемой части масляного экстракта череды (с=165,8 мг/мл, V проб.=10 мкл).

Предлагаемый способ определения α-токоферола методом хроматографии в тонком слое сорбента осуществляется по следующей методике.

Приготовленные стандартные растворы α-токоферола с концентрациями 2,5, 5, 10, 15 мг/мл и объемом 1 мкл наносят на хроматографическую пластину марки "Sorbfil" (Краснодар) размером 10×10 см, сорбент - силикагель зернением 5-12 мкм, и помещают в предварительно насыщенную элюентом октан:диэтиловый эфир (7:1) хроматографическую камеру. Элюирование проводят в течение 15 минут и прекращают, когда элюент поднимется на высоту 9 см. Далее пластину вынимают из камеры и высушивают на воздухе, после чего ее обрабатывают концентрированной азотной кислотой и помещают на 10 мин в термостат, нагретый до температуры 100°С. На белом фоне хроматографические зоны α-токоферола, окисляясь до α-токоферилхинона, окрашиваются в красный цвет (фиг.1).

Количественное определение альфа-токоферола проводят относительно стандартных растворов индивидуальных веществ путем построения градуировочной кривой зависимости площади хроматографической зоны от концентрации раствора. Сразу же после проявления хроматографических зон пластины сканируют, а полученные изображения обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». Принцип работы программы состоит в построении аналоговой кривой хроматограммы по отклонению яркости пятен от яркости фона с последующим нахождением пиков на этой кривой и расчетом их площади. Анализ полученных данных позволил установить линейную зависимость между концентрацией α-токоферола и площадью соответствующего пика в области изучаемых концентраций (2,5-15 мг/мл). По полученным данным был построен градуировочный график, иллюстрирующий эту зависимость (фиг.2).

Осуществление способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Выделение неомыленной фракции из масляного экстракта череды проводят по методике [1]. В результате эксперимента получают неомыляемую часть экстракта череды массой 663,2 мг, которую немедленно растворяют в 4 мл этилового спирта. Таким образом, концентрация неомыляемой части составляет 165,8 мл. Далее раствор неомыляемой части объемом 10 мкл и спиртовый раствор альфа-токоферола концентрацией 25 мг/мл и объемом 1 мкл наносят на силикагелевую пластину и помещают в камеру для хроматографирования, насыщенную раствором элюента: октан:диэтиловый эфир (7:1). После завершения процесса хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе, обрабатывают концентрированной азотной кислотой и помещают в термостат, нагретый до температуры 100°С. Хроматограмма, полученная в описанных выше условиях, представлена на фиг.3.

Затем проводят количественное определение альфа-токоферола по градуировочной зависимости. Сразу же после проявления хроматографических зон пластины сканируют, а полученные изображения обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». По градуировочному графику (фиг.2) находят концентрацию альфа-токоферола в масляном экстракте череды. Установлено, что концентрация альфа-токоферола равна 40 мг,% (40 мг/100 г масла).

Пример 2.

Выделение неомыляемой фракции из подсолнечного масла проводят по методике ГОСТ 30417-96. Этапы выделения и определения альфа-токоферола в различных растительных маслах принципиально не отличаются, поэтому ход эксперимента по определению альфа-токоферола в подсолнечном масле аналогичен определению данного вещества в масляном экстракте череды, подробно описанному в примере 1. В результате эксперимента масса неомыляемой части подсолнечного масла составляет 872,8 мг. Концентрация неомыляемой части в этаноле равна 218,2 мг/мл, объем наносимой на хроматографическую пластину спиртового раствора неомыляемой части - 10 мкл. Концентрация альфа-токоферола в подсолнечном масле составляет 36 мг,% (36 мг/100 г масла).

Источники информации

1. ГОСТ 30417-96. Методы определения массовой доли витамина Е в растительных маслах. - Введ. 1998-01-01. - М.: Изд. Стандартов, 1997.

Способ определения альфа-токоферола включает приготовление спиртового раствора исследуемого объекта, нанесение пробы раствора на хроматографическую пластину марки "Sorbfil", хроматографирование в присутствии элюента октан:диэтиловый эфир (7:1), проявление хроматографических зон альфа-токоферола концентрированной азотной кислотой, сканирование хроматограммы. Обработку полученного изображения хроматограммы проводят компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». Нахождение количественного содержания альфа-токоферола осуществляют по градуировочной зависимости. Изобретение обеспечивает повышение точности и достоверности количественного определения альфа-токоферола за счет улучшения качества хроматографических зон. 3 ил.

Способ определения альфа-токоферола, включающий приготовление спиртового раствора исследуемого объекта, нанесение пробы раствора на хроматографическую пластину марки "Sorbfil", хроматографирование в присутствии элюента октан-диэтиловый эфир (7:1), высушивание пластины на воздухе, проявление хроматографических зон альфа-токоферола концентрированной азотной кислотой, выдержка в термостате, сканирование хроматограммы, обработка полученного изображения хроматограммы компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer» и нахождение количественного содержания альфа-токоферола по градуировочной зависимости.