Способ определения витамина @ в травяной муке Советский патент 1985 года по МПК G01N30/94 

ч

О1

00

4

11

Изобретение относится к химичесим методам определения витамина К j филлохинона) с Применением, хроматографических методов очистки, в частности тонкослойной хроматографии, и ожет быть использовано в различных аналитических лабораториях при определении содержания витамина К в кормах и других продуктах растительного происхождения и кормовых препаратах,

Цель изобретения - сокращение у длительности определения и повышение чувствительности способа.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1, Берут 500 мг травяной муки, вносят в пробирку с притертой пробзсой, заливают 10 мл экстрагирующей смеси - бензол с 2% (объем) н-бутан®ла к 10 мл бензола добавляют 0,2 мл н-бутанола и. хорошо перемешивают. Пробирку ставят в темное место на 3 ч. Заполняют колошсу диаметром 10 см слоем силикагеля

(2 см и сверху него насыпают 1 см безводного сульфата натрия. Содержимое пробирки пропускают через -колонку, а пробирку .ополаскивают пятью порциями по 5 мл экстрагирующей смеси, которые также пропускают через колошсу. Фильтрат вьтаривают на роторном испарителе при 80°С и сухой остаток растворяют в 0,2 мл бензола,

Затем с помощью микропипетки переносят полученный раствор (0,2 мл) на пластинку Силуфол, размером 15x15 см, и по обе стороны.образовавшейся полости наносят свидетель-раствор - 3 мкг филлохинона в 0,1 мл хлороформа,

Развитие хроматограммы проводят в камере (180x70x170 см), насыщенной в течение 30 мин парами смеси раствоОпределение оптимальной концентрации боргидрида натрия для востановления Филлохинона

{Используемая концентрация боргидрида натрия в этаноле, %

175874

рителей гексан-хлороформ, взятых в объемном соотношении 50:50. После тго, Kaic фронт подвижной Аазы поднимается на высоту 15 см, пластинку ; вынимают из камеры, просушивают и быстро определяют положение витамина К j по свидетелю под ультрафиолетовой лампой (проявляется в виде текгаой полосы j,

Пятно силикагеля с адсорбированным на нем витамином К, соскабливают с пластинки, переносят в пробирку с притертой пробкой, заливают 3 мл 96%-ного этилового спирта и ствят в темное место на 30 мин. Затем отфильтровьшают раствор через бумажньШ фильтр (красная полоса), смоченный .этиловым спиртом, пробирку ополаскивают 1 мл этанола, который переносят на этот же фильтр,

Далее к элюату добавляют 0,1 мл 0 1%-ного раствора боргидрида натри в этаноле. Содержимое пробирки быстро перемешивают, переносят в кювету для измерений и через 20 с после внесегаш боргидрида натрия проводят первое фотометрирование элюата на длине волны 243 нм. Затем после достижения максимума экстинции (через 3-4 мин проводят повторное фотометрирование и по разнице показаний между начальным и конечным измерениями находят прирост экстинцин и определяют к.оличество витамина Ki по калибровочной кривой.

Пример 2, Осуществляют определение витамина К j, аналогично примеру 1 с раствором боргидрида натрия различной концентрации .с целью установления оптимальных количеств используемого восстановителя. Результаты представлены в табл, 1.

Таблица 1

)

В каждом варианте добавляли по 0,1 раствора.

Пример 3. Осутцествляют

ределение витамина К аналогично . ты примеру I , анализируя усредненный табл.2.

Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что оптимальной концентрацией раствора боргидрида натрия в этаноле является. 0,1-0,2%. .добавлении низких концентраций (0,02-0,05%) прирост экстинций идет очень медлен 1758744

оп- образец люцерновой муки. Результаэкспериментов представлены в

Таблица 2.

но и весь находящийся в растворе витамин К, не определяется. В случае добавления к исследуемому элюату витамина КI избытка боргидрида натрия злюат мутнеет, что делает невозможным фотометрировакие.