СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2000 года по МПК A61K39/35 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней крупного рогатого скота.

В практике ветеринарной медицины для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота используют аллергический способ, при котором в качестве диагностикума выступает широко известный ППД-туберкулин для млекопитающих. Сущность способа заключается в том, что на аллерген, введенный внутрикожно, у больного туберкулезом и сенсибилизированного микобактериями животного, через 72 часа отмечают аллергическую реакцию, выражающую припухлостью (утолщение кожной складки), болезненностью при пальпации и повышением местной температуры. Реагирующими (больными) считаются животные, у которых обнаруживают разницу в толщине кожной складки в месте введения ППД-туберкулина в сравнении с таковой неизменной кожи (вблизи места введения) 3 и более мм.

Известно, что, кроме М. бовис и туберкулезис, способностью сенсибилизировать микроорганизм к ППД-туберкулину обладают атипичные микобактерии и кислотоустойчивые сапрофиты (1), стрессовые факторы (2), нокардии (3). Было установлено, что аналогичными свойствами обладают близкородственные к микобатериям по генетическим, хемотаксономическим и иммунологическим свойствам микроорганизмы из рода родококкус (4). Перечисленные факторы могут быть причинами реакций на ППД-туберкулин, объединенных под общим названием "неспецифические реакции". Проблема состоит в дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин, которая стала особенно актуальной за последние 30 лет.

Известно, что микобактерии, нокардии и родококки имеют перекрестно-реагирующие антигенты, свойства которых проявляются в иммунологических реакциях in vitro в виде неспецифических реакций.

В целях дифференциации неспецифических реакций предложен способ (5), при котором одновременно с ППД-туберкулином для млекопитающих применяют аллерген из М. авиум (туберкулин для птиц). Пробу ставят на шее животного. ППД-туберкулин для млекопитающих вводят внутрикожно в верхнюю среднюю треть шеи, в дозе 10 тыс. МЕ, в объеме 0,2 мл с правой стороны, а туберкулин для птиц - с левой стороны. Учет и оценку реакции дают через 72 ч после введения аллергенов. При обнаружении большего числа реагирующих на ППД-туберкулин животных делают заключение о возможности (большей вероятности) сенсибилизации микобактериями бычьего вида, а в противном случае - М. авиум.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин в так называемой "симультанной пробе" с одновременным использованием очищенного комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ), с последующим определением достоверности различия в интенсивности (степени проявления) реакций на эти аллергены. Под достоверностью различия понимают разницу в величине показателей интенсивности реакций на туберкулин и КАМ, которая дает возможность с уверенностью не менее чем 95% сделать заключение о состоянии по туберкулезу исследуемой группы животных (6).

Принцип, на котором основаны способы дифференциации аллергических реакций в аналоге и прототипе, заключается в том, что интенсивность реакций, а значит и количество реагирующих животных на гомологичный сенсибилизации аллерген обнаруживается больше, чем на гетерологичный. Иначе говоря, если животные сенсибилизированы М. бовис, то интенсивность реакций и количество реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих достоверно выше, чем на другие аллергены и наоборот.

Недостатком этого способа является невозможность установления в симультанной пробе с КАМ сенсибилизации организма животных нокардиями, а значит дифференциации неспецифических реакций ими вызванных. В таких случаях результаты симультанной пробы с КАМ остаются неопределенными.

Целью изобретения является повышение эффективности дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих у крупного рогатого скота.

Указанная цель достигается тем, что в симультанной пробе комплексный аллерген из атипичных микобктерий (КАМ) заменяется аллергеном, изготовленным из нокардий (нокардин). Такая замена обосновывается тем, что сенсибилизированный нокардиями организм животного интенсивнее реагирует на аллерген из нокардий, чем на КАМ или на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Туберкулин и нокардин вводят соответственно с левой и правой стороны шеи внутрикожно в дозе 0,2 мл. Учет и оценку реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих и нокардин проводят через 72 часа после их введения. При учете реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина. В случае обнаружения припухлости в месте его инъекции у этого животного прощупывают место введения нокардина. Затем сравнивают степень выраженности реакций кутиметром. Более выраженную реакцию на туберкулин при менее выраженной или полностью отсутствующей на нокардин обозначают знаком "+", менее выраженную реакцию на туберкулин - знаком "-", при одинаковых реакция - знаком "=". Нереагирующих на туберкулин животных, независимо от наличия или отсутствия у них реакции на нокардин не учитывают. Результаты оценки реакций в знаках ("+", "-", "=") вносят в ведомость учета симультанной пробы. В дальнейшем поступают в соответствии с "Наставлением по постановке симультанной пробы с КАМ".

Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в качестве второго, сравниваемого, берется аллерген, изготовленный из бактерий совершенно другого рода, не относящихся к роду микобактериум, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию "новизна". Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, а именно возможность дифференциации сенсибилизации макроорганизма нокардиями или микобактериями, не выявлены в других технических решениях при изучении данной области диагностики и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию "существенные отличия".

Ниже приводятся конкретные примеры осуществления заявляемого способа.

Пример 1. 20 кроликов, сгруппированные по 5 голов были сенсибилизированы микобактериями: БЦЖ, авиум, флей и скрофуляцеум. Исследования проводили через один, два и три месяца после заражения симультанно (ППД-туберкулин для млекопитающих и нокардин), пробой на ушах (7). Аллерген вводили подкожно соответственно в правое и левое ухо. Оценку реакции давали через 48 ч после введения препаратов. При этом как интенсивность реакции, так и число реагирующих животных на ППД-туберкулин для млекопитающих превосходило при всех исследованиях (см. таблицу). У контрольных животных реакции на аллергены не обнаружены.

Пример 2. 20 кроликов, сгруппированные по 5 голов, были сенсибилизированы нокардиями: астероидес, трансвалензис, вакцинии и полевым изолятом астероидес. Исследования проводили через один, два и три месяца после заражения симультанно (ППД-туберкулином для млекопитающих и нокардин) пробой на ушах. Аллергены вводили подкожно соответственно в правое и левое ухо. Оценку реакций давали через 48 ч после введения препаратов. При этом интенсивность реакций и число реагировавших животных на нокардин превосходило при всех исследованиях. У контрольных животных реакции на аллерген не обнаружены (см. таблицу).

Пример 3. Исследовали 326 голов крупного рогатого скота внутрикожной пробой в дозе 0,2 мл симультанно ППД-туберкулином для млекопитающих и нокардином. Учет и оценку реакции девали через 72 ч после введения препаратов. При этом у 18 животных реакция была более выражена на туберкулин, а у 38 голов на нокардин. Общее число реагирующих животных (18+38) равно 56 (показатель А). По таблице определения достоверности различий находили число, соответствующее 56 (показатель Б), которое равно 36, что указывает на достоверность различий в реакциях. Иначе говоря, животные данной группы с вероятностью 95% сенсибилизированы нокардиями. Результаты симультанной пробы в последующем были подтверждены бактериологическими исследованиями.

Использование заявляемого изобретения позволит дифференцировать аллергические реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих в случаях получения неопределенных результатов в симультанной пробе с КАМ. Это позволит ускорить постановку диагноза и предотвратить неоправданный убой скота.

Источники информации
1. Борисович Ю.Ф., Кириллов Л.В. Ветеринарные препараты. - Москва, Колос. - 1981. - 448 с.

2. Васин А.В. К вопросу о влиянии внешних факторов на аллергическое состояние при туберкулезе крупного рогатого скота. // Ветеринария. - 1951. - N 12. - С. 29-30.

3. Awad F.J. Studies on Bovine Nocaroliosis with Particular Reference to its Interference in the Interpertation of the Results of Tuberculin Testing // Kongressberichte Proccedings Rapports Actas. - Hannover - 1963. - P. - 465 - 471.

4. Нуратинов Р. А., Ургуев К.Р. Экспериментальное обоснование неспецифической сенсибилизации к туберкулину кроликов, зараженных бактериями рода Rhodococcus /Тезисы докладов международной конференции //Современное состояние и перспективы интеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформирования сельскохозяйственного производства прикаспийского региона". - Махачкала - 1997. - с. 49-50.

5. Plum N. Gefluqeltuberculose bei Saequetieren // Druck von Kandripa Wunsch. Kopengagen - 1925.

6. Шаров А. Н. Изучение эффективности применения симультанной пробы с комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза /Сб. научн. трудов ВГНКИ. - 1985. - с. 3-9.

7. Иванова Н.А., Соколова А.С. Туберкулинизация кроликов //Ветеринария - 1988. N 4. - с. 64-65.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней крупного рогатого скота. Разработан способ дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, инфицированных бактериями из рода Nocardium. Для этого в симультанной пробе одновременно с туберкулином, на другой стороне шеи, внутрикожно вводится аллерген из нокардий. В случаях установления достоверных различий в степени выраженности реакций на тот или иной аллерген делают вывод о вероятности (95%) заражения животных микобактериями или нокардиями. Способ позволяет ускорить процесс дифференциации неспецифических реакций на туберкулин и предотвратить неоправданный убой животных. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики туберкулеза, включающий использование одновременно с ППД-туберкулином для млекопитающих диагностикума неспецифической сенсибилизации макроорганизма в симультанной пробе с последующим определением достоверности различий в интенсивности реакций, отличающийся тем, что в качестве диагностикума неспецифической сенсибилизации макроорганизма используют нокардин.