Способ подавления повышенной чувствительности животных при введении туберкулина или малеина Советский патент 1993 года по МПК A61K39/35 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к методам подавления повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ), разработанными высокоэффективными толерогенами из аллергенов с целью получения ускоренной специфической длительной десенсибилизации, изучения роли этого подавления, толерантности для диагностики заболевания и устойчивости организма к заражению или неспецифической реактивности в учебном процессе и эксперименте.

Цель - разработка эффективного способа подавления аллергии у животных за счет использования препаратов, обладающих повышенными толерогенными свойствами, обеспечивающие ускоренное проявление десенсибилизации, изучения роли этого подавления для изучения неспецифической реактивности организма в учебном процессе и эксперименте

Для достижения поставленной цели в способе, заключающийся введением аллергенов, аллергеновые препараты, например

туберкулин для подавления туберкулезной аллергии, малеин для подавления ПЧЗТ при сапе, обработанные 0,5 - 0,7%-ным раствором формалина,в течение 5-10 дней при 37 - 40° вводят однократно подкожно крупному рогатому скоту 4-5 мл, морским свинкам - 1,2 - 1,5 мл. Обработку аллергенов проводили с учетом того, что реакция формальдегид-белок (пептид) состоит из двух стадий. В течение первой стадии, быстрой и необратимой, происходит взаимодействие формальдегида с аминогруппами белка и особенно лизина с образованием метилола- минной группы. На втором этапе в реакции участвуют активные радикалы циклических аминокислот, содержащие фенольные, гуа- нидиновые и индольные группы. Наибольшее значение имеет соединение через формальдегид свободных аминогрупп лизина с СН-группами ядер тирозина и гистиди- на, которые характеризуются большой стойкостью. В результате блокирования свободных аминогрупп происходит увеличение отрицательных зарядов аллергенов, например туберкулина, малеина и т.д.

Ј

СО

ю ел о со

о

В целом, перестройка азотистого состава выражается в значительном уменьшении количества аминного азота и увеличении содержания высокомолекулярных пептидов в эялергене. Важное значение для увеличения десенсибилизирующих свойств формо- лаллергенов или их целесообразнее именовать соответствующим аллергену то- лерсгеном или антиаллергеном имеет фиксация формальдегида, которая лучше происходит после стерилизации в течение 5 - iG дней при 37 - 40° и рН 6,8 - 7,3. Для усиления десенсибилизирующих свойств зллергенов проводились исследования по лс/. толерогенов из туберкулина, ма- :е(ьа. с;афилококхового аллергена и т.д. луте,у обработки аллергенов циклофосфа- ном, 6-меркаптопурином. фенолом, уротро- гл.ко,, формалином с адьюеантами и без них с - .елею индуцирования специфической десенсибилизации аллергии у животных. В качестве здыовантов использовали поли- эт лемгликоль .дроксид алюминия, мине- озгьмое масло, ланолин, сапонин

С обильные результаты свыше 95% вос- гф И38О/;кмосги полной десенсибилизации .юкученг-. с использованием нативных ал- лергзноз. обработанных 0.5 0.7%-ным rjaci 30po.v) формалина, 0,8 1.0% уротропина. Кроме формальдегида формалин содержит г ургвьиную кислоту и 10 12% метанола, хсторые способствуют сохранению устойчивости препарата, препятствуют его полимеризации Известно что для лечения аллергических заболеваний используется уротропин (гексаметилентетрамин), который в «исгюй среде разлагается до образовании формальдегида, а избирательность действия препаратов заключается в образовании гмстамина при декарбоксилировании незаменимой йминокислоты гисгидина. В практике одним из антиаллергических препаратов является гисгаглобулин, представляющим .обой комплекс гамма-глобулина и гистамина. Зтог препарат увеличивает способность организма связывать и инактивиро- вать свободный гистамин, выделяющийся при оброэован.ии комплекса антиген-анти- гелп v сенсибилизированных животных. В здоровом организме свободный гистамин быстро иьахтиеируется.

Следовательно, соединение формальдегида с аминогруппами лизина, тирозина и гистидинь аллергенов один; из вариантов получения специфических антиаллергиче- ских средств, a T.IJ. для дифференциации истинной и ложной аллергии у животных. Возможно принцип получения толерогенов из опчаргеноз или других препаратов с по- формллина, уротропина сапонина

может представлять и другое значение замедленной аллергии.

С учетом полученных данных по десенсибилизации был определен количествен- ный состав формалина, режим обработки при получении толерогенов. При внесении менее 0,5% формалина в аллерген, содержащий белка свыше 0,5 мг/мл для усиления десенсибилизирующих свойств препарата

после стерилизации и инкубировании при 37 - 40° необходимо прибавление формалина до 0,2 - 0,3%. а использование формалина свыше 0,8% практически не отражалось на толерогенном действии препарата. В оп5 ределенной степени соотношение формалина и белка должно находиться соответственно в пределах 0,5% формалина и 0.5 мг/мл белка или 0,6% формалина и 0,6 мг/мл белка для получения биологически активных де0 сенсибилизирующих препаратов.

При изучении толерогенных свойств ряда препаратов было установлено, что десенсибилизация крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин увеличением

5 кожной складки в пределах 15 - 25 мм, наступает в 95% воспроизводимости через 24 ч после однократного подкожного введения формолбезэльбумозного туберкулина в дозе 4 - 5 мл и продолжается 1,5-2 месяца.

0 Десенсибилизация бецежированных морских свинок наступает через 24 - 30 ч после подкожного введения 1,2 - 1,5 мл формолту- беркулина, а морских свинок, сенсибилизированных убитой сапной культурой

5 подкожным введением также 1,2 - 1,5 мл формолмалеина.

В медицинской и ветеринарной практике формалин применяется для консервирования патологического материала,

0 дезинфекции, получения вакцин и анатоксинов из токсинов. Получение толерогенов из аллергенов с помощью формалина впервые использовано нами при обработке туберкулина, малеина стафилококкового и других

5 аллергенов. Формолаллергены обеспечивают полную в 95% воспроизводимости десенсибилизацию кожной чувствительности к соответствующему аллергену от однократного применения. В то же время при применении

0 существующих способов десенсибилизации необходимо курс введения препаратов от 30 до 60 в течение многих месяцев или проводить непрерывный курс в течение 2-3 лет. Формолаллергены или толерогены техноло5 гически удобно и оперативно готовить путем обработки того или иного очищенного или нативного аллергена 0,5 - 0,7% формалина путем стерилизации с последующим выдерживанием в термостате при 37-40° в течение 5 10 дней, или без стерилизации.

но при инкубировании в течение 15 - 20 дней.

Пример1.В опыте использовано 18 коров, сенсибилизированных убитыми мик- обактериями туберкулеза бычьего вида со средним до15 - 20 мм увеличением кожной складки на внутрикожное введение туберкулина. За сутки до очередной туберкулиниза- ции 6 коровам ввели 4 - 5 мл подкожно формолтуберкулин безальбумозный и 7 ко- ровам формолтуберкулин безальбумозный с 1% гидроокиси алюминия и 0,5% сапонина. Через 24 ч всем животным был введен ППД туберкулин, в т.ч. и 5 контрольным коровам, которым не вводили перед туберку- линизацией формолтуберкулин,

При учете реакций через 24, 48 и 72 ч у 13 коров увеличение кожной складки до 2 - 3 мм на введение туберкулина не отмечено. Животные первой группы были энергичны к туберкулину в течение 2 месяцев. У сенсибилизированных 5 контрольных коров увеличение кожной складки находилось на прежнем уровне.

П р и м е р 2. Сенсибилизированным живой вакциной БЦЖ 17 морским свинкам подкожно 13 животным через месяц ввели по 1,2 - 1,5 мл формолбезальбумозного туберкулина, а на следующий день внутри- кожно по 0,1 мл ввели ППД туберкулин для млекопитающих в разведениях 1:100, 1:500, и 1:1000. При учете реакций через 24 ч у 15 морских свинок гиперемии кожи к туберкулину не отмечено, а у двух морских свинок реакции находились в пределах 10-12,8- 9 и 7 - 8 мм соответственно вышеуказанным разведениям аллергена. У контрольных четырех свинок средние размеры диаметров гиперемии кожи составляли соответственно 14-16, 11 - 13. 9-10мм.

ПримерЗ.В опыте было использовано 11 морских свинок, сенсибилизированных убитой сапной культурой с реакцией в диаметре 13-14 мм на внутрикожное введение 0,1 мл 1:20 разведения малеина за 24 ч до очередного введения аллергена подкожно 9 животным ввели 1,2 - 1,5 мл формолмалеи- на. На внутрикожное введение малеина у 8 сенсибилизированных морских свинок реакций не отмечено, а у одной - 50% интенсивности, по сравнению с реакциями у двух контрольных свинок.

По сравнению с прототипом, предлагаемый способ подавления аллергии за счет обработки аллергенов формалином обеспечивает воспроизведение ускоренного проявления десенсибилизации через 24 ч после однократного введения соответствующего толерогена (формолаллергена), безвреден, доступен, хорошо переносится животными, пригоден для оперативного изготовления и применения с целью изучения толерантности, специфической и неспецифической реактивности организма, а также для установления развития механизма толерантности и ее роли в усилении или ослаблении иммунитета, в диагностике и профилактике инфекционно-аллергических заболеваний.

Способ апробирован в учхозе Nt 1 Курского сельскохозяйственного института и может быть рекомендован для учебных, научных целей и практической иммунологии.

Формула изобретения Способ подавления повышенной чувствительности животных при введении туберкулина или малеина, включающий снижение аллергического действия указанных препаратов, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, снижение аллергического действия препаратов проводят путем их обработки 0,5 -0,7%-ным раствором формалина в течение 5 - 10 дней при 37 - 40°С. а их введение животным осуществляют в дозе 1,2 - 5,0 мл в зависимости от вида животного однократно.

Использование: в ветеринарии. Сущность изобретения: для снижения аллергического действия препаратов проводят путем их обработки 0,5 - 0.7%-ным раствором формалина в течение 5-10 дней при температуре 37 - 40°С, а введение препаратов туберкулина или малеина осуществляют в дозе 1,2 -5 мл в зависимости от вида животного однократно