СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ДРОЖЖЕПОДОБНЫХ ГРИБОВ CANDIDA ALBICANS Российский патент 2010 года по МПК C12N1/16 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в здравоохранении, в лабораторной диагностике, микологии.

Дрожжеподобные грибы Candida albicans занимают ведущее место среди дрожжеподобных грибов при патологии урогенитального тракта и полости рта (Кашкин П.Н. Практическое руководство по медицинской микологии. - М.: Медицина, 1983 г., с.35-39, 98-110; Сергеев А.Ю. Грибковые инфекции. Руководство для врачей. - М.: БИНОМ, 2004 г., с.193-234).

Стандартная методика выделения и идентификации дрожжеподобных грибов предусматривает посев первичного материала на среду (агар) Сабуро с антибиотиками, выделение чистой культуры, биохимическую идентификацию методом ферментации сахаров. Общее время исследования составляет 96 часов.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ идентификации гриба Candida albicans и гриба Candida tropicalis (дрожжеподобные грибы рода Candida) путем выращивания культуры гриба в течение 20-24 ч в сыворотке крови с лактозой, определения морфологических особенностей культуры гриба. Для чего добавляют индикатор и проводят дополнительное культивирование в течение 4-6 ч на агаризированной среде отдельно с двумя индикаторами, в качестве которых используют резазурин и 2,3,5-трифенилтетразолиум хлорид. В качестве идентификации используют изменение цвета среды с сахарозой и этими индикаторами (RU, патент №2070934, МПК C12Q 1/04, C12N 1/16, C12Q 1/04, C12R 1/72, опубл. 27.12.1996 г.) - прототип.

Все дрожжеподобные грибы ферментируют глюкозу, Candida albicans - глюкозу, мальтозу; Candida tropikalis - глюкозу, мальтозу, сахарозу с образованием поверхностной пленки на жидкой среде. Учитывая время для выделения культуры, окончательный результат по идентификации составит 78 ч.

Задачей данного изобретения является модифицирование метода идентификации дрожжеподобных грибов Candida albicans.

Технический результат, который будет достигнут от использования изобретения, заключается в сокращении времени идентификации.

Технический результат достигается тем, что в способе идентификации дрожжеподобных грибов Candida albicans, предусматривающем посев гриба на среде с индикаторами, инкубацию при 37°С и выделение культуры гриба по изменению цвета колоний на среде, посев осуществляют на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, и на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с сахарозой, инкубацию проводят в течение 24-48 ч. Выделение дрожжеподобных грибов Candida albicans осуществляют по изменению цвета колоний: при этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колонии синего цвета, на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - бледно-голубого цвета.

Сущность изобретения заключается в модифицировании метода идентификации культуры грибов.

Посев на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, и на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с сахарозой, инкубацию в течение 24-48 ч при 37°С и выделение дрожжеподобных грибов Candida albicans по изменению цвета колоний: при этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колоний синего цвета, на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - колоний бледно-голубого цвета, обеспечивают за счет одновременного проведения (совмещения) операции выращивания культуры и идентификации, сокращения времени для постановки диагноза Candida albicans и non-albicans.

Из анализа научно-технической и патентной литературы заявляемой совокупности признаков, обеспечивающей значительное сокращение времени проведения идентификации, не выявлено, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение осуществляется следующим образом.

Предварительно готовят навески сред Гисса с индикаторами и сахарами (навески сред: одна - с глюкозой и мальтозой, другая - с сахарозой, содержащие индикаторы водный голубой и розоловую кислоту) по 1 г, которые затем вводят в один флакон со 100 мл расплавленного и остуженного до 56°С агара Сабуро. Среды тщательно перемешивают, не подвергая дополнительной стерилизации, и разливают по чашкам Петри. После застывания чашки могут быть использованы для посева.

Прямой посев проводят на обе среды:

- агар Сабуро + среда Гисса с глюкозой + среда Гисса с мальтозой,

- агар Сабуро + среда Гисса с сахарозой.

Использование двух сред необходимо для ускоренной идентификации при прямом посеве Candida albicans и является обязательным условием для исключения Candida tropikalis.

Среда Гисса с глюкозой и мальтозой имеет нежно-голубой цвет, среда Гисса с сахарозой - кремовый. Учитывая, что среды не подвергались дополнительной стерилизации, желательно использовать (хранить) их в течение 2-х недель.

Инкубация осуществляется в течение 24-48 ч при 37°С. Грибы Candida albicans растут газоном или единичными колониями синего цвета на среде Гисса, содержащей глюкозу и мальтозу, и бледно-голубого цвета на среде Гисса, содержащей сахарозу. Грибы Candida tropicalis имеют интенсивно синий цвет на обеих средах, а грибы Candida krusei и другие остаются белыми.

Таким образом, заявляемый способ позволяет выдать результат о выделении грибов Candida albicans максимально через 48 ч, позволяет использовать отечественные стандартные среды и выдавать результат в два раза быстрее, чем в классическом варианте и в прототипе. При необходимости non-albicans подвергают дополнительной биохимической идентификации по стандартной методике.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для идентификации дрожжеподобных грибов Candida albicans. Способ предусматривает посев дрожжеподобного гриба на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, и на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с сахарозой; инкубирование посева на вышеприведенных средах в течение 24-48 ч при температуре 37°С; выделение дрожжеподобного гриба Candida albicans по изменению цвета колоний. При этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колонии синего цвета, а на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - бледно-голубого цвета. Изобретение позволяет сократить сроки идентификации гриба.

Способ идентификации дрожжеподобных грибов Candida albicans, предусматривающий посев гриба на среде с индикаторами, инкубацию при 37°С и выделение культуры гриба по изменению цвета колоний на среде, отличающийся тем, что посев осуществляют на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, и на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с сахарозой, инкубацию проводят в течение 24-48 ч, а выделение дрожжеподобных грибов Candida albicans осуществляют по изменению цвета колоний, при этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колонии синего цвета, на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - бледно-голубого цвета.