СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИТРОМБОГЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/4188 A61P7/02 

Изобретение относится к фармакологии, а именно к биологически активным веществам, обладающим антитромбогенной активностью, которые могут быть использованы в качестве действующего начала лекарственных препаратов, способных предупреждать возникновение артериальных тромбозов.

Именно проблема артериальных тромбозов является одним из важных факторов, определяющих исход заболеваний сердечно-сосудистой системы. Они часто служат причиной внезапной смерти, инфаркта миокарда, сосудистых осложнений сахарного диабета, снижают результативность хирургического лечения ишемической болезни сердца (А.П.Комаров, Е.П.Панченко. Значение антитромботической терапии для профилактики осложнений атеросклероза. Русский мед. журнал, 2003, №9, с.1102-1107). Механизмы возникновения тромбозов могут быть самые различные. Это активация тромбоцитарного и коагуляционного звена гемостаза, снижение фибринолитической активности крови, активация перикисного окисления липидов, нарушение функциональной активности эндотелия и т.д. (Г.Н.Сушкевич. Патогенез и лабораторная диагностика гемостатических нарушений при тромбофилиях различного генеза. Лабораторная медицина, 2009, №10, с.11-22). Следовательно, среди препаратов, обладающих антитромботическим действием, могут быть как антиагрегантные, антикоагулянтные, фибринолитические, эндотелиотропные, так и антиоксидантные средства.

Повышение активности тромбоцитов приводит к возрастанию протромбогенного потенциала крови и может являться одной из причин повышенного риска возникновения тромботических осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы (В.В.Никонов, Е.И.Киношенко. Тромбоцитарный гемостаз и антитромбоцитарная терапия при остром коронарном синдроме. Медицина неотложных состояний, 2008, т.16, №3, с.109-119).

В последние годы показана роль перекисного окисления липидов в патогенезе образования тромбов (J.E.Freedman. Oxidative stress and platelets // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology, 2008 vol.28, p.11). Радикалы кислорода оказывают действие на структуру и функцию клеток. Эти изменения играют важную роль в возникновении тромбозов, действуя на тромбоциты, сосудистую стенку и факторы коагуляции. Кроме того, оксиданты нарушают процессы синтеза эндотелием веществ, ингибирующих васкулярные тромбозы, таких, как тромбомодулин, ингибитор тканевого фактора, простациклин, тканевой активатор плазминогена. В присутствии супероксидных радикалов утрачивается период жизни NO, что приводит к эндотелиальной дисфункции, повышается синтез тканевого фактора, который запускает процессы коагуляции (S.R.Willoughby, S.Stewart, A.S.Holmes, Y.Y.Chirkov, J.D.Horowitz. Platelet nitric oxide responsiveness: a novel prognostic marker in acute coronary syndromes. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol, 2005, vol.25, p.2661-2666). Все эти явления приводят к формированию тромботических процессов в сосудистом русле. Кроме того, оксидативный стресс способствует атерогенной модификации липопротеинов низкой плотности и появлению на поверхности сосудов липидных отложений, а также повреждению клеточного гликокаликса, изъязвлению и разрыву атеросклеротических бляшек.

Исследования новых антитромботических препаратов весьма актуальны и широки (В.Е.Пасторова, Л.А.Ляпина, И.П.Ашмарин. Предуперждение тромбообразования глипролинами на различных моделях предтромбоза и тромбоза у крыс. Бюл. эксперим. биологии и медицины, 2003, т.136, №10, с.365-367; Н.Н.Дрозд, В.А.Макаров, Н.Т.Мифтахова и др. Антитромботическая активность отечественного препарата «Антитромбина III» на модели индуцированного венозного тромбоза. Бюл. эксперим. биологии и медицины, 2006, т.142, №7, с.75-77).

Доступные в настоящее время антитромбоцитарные и антикоагулянтные препараты оказывают влияние на некоторые этапы в процессе агрегации тромбоцитов и активации свертывающей системы крови и тем самым заметно влияют на риск развития артериального тромбоза (И.Д.Санодзе, И.С.Святов, А.М.Шилов. Антиагреганты - современное состояние вопроса. Русский мед. журнал, 2003, №9, с.552-556).

Однако их эффективность часто не удовлетворяет клиницистов, занимающихся лечением таких больных. Кроме того, наличие побочных эффектов у данных препаратов со стороны желудочно-кишечного тракта ограничивают их применение у некоторых категорий больных.

Известно использование для лечения тромбозов ацетилсалициловой кислоты, составляющей основу современной антитромбоцитарной терапии, и которая признана стандартом в данной области [Guidelines on the management of stable angina pectoris: executive summary: The Task Force on the Management of Stable Angina Pectoris of the European Society of Cardiology. Eur. Heart. J., 2006, 27, 1341-1381 (Рекомендации Европейского кардиологического сообщества, 2006)].

Однако хорошо известны свойственные аспирину желудочно-кишечные побочные эффекты, прежде всего увеличение риска кровотечений. Другим "слабым" местом аспирина считается наличие так называемой "резистентности" к аспирину у 15-45% лиц. Появившееся в последние годы отрицательное отношение к длительному использованию аспирина у больных, с перенесенным ранее инфарктом миокарда и имеющих сердечную недостаточность или предрасположенных к ее развитию, основано на косвенных указаниях о способности аспирина ослаблять положительное влияние ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента. Кроме того, описан так называемый "аспириновый парадокс" - относительно высокая частота ишемических событий на фоне использования аспирина.

В последние годы сформировалась концепция о важнейшей роли перекисного окисления липидов в генезе тромботических процессов. Усиление интенсивности перекисного окисления липидов приводит к активации тромбоцитарно-сосудистого и коагуляционного звеньев гемостаза, поэтому определенным образом изменяя интенсивность свободно-радикального окисления можно регулировать тромбогенный потенциал крови (D.Ambrosio, I.Tritto, P.GoIino. Reactive oxygen metabolites and arterial thrombosis. Cardiovascular Research, 1998, vol.34, p.445-452).

Поэтому весьма оправданным и перспективным является выявление и изучение антитромбогенных свойств у препаратов с антиоксидантной активностью.

Широкое применение в настоящее время нашел синтетический водорастворимый антиоксидант мексидол (2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцинат).

Однако в результате экспериментальных исследований установлено, что антиоксидантная активность препарата все же является невысокой (Косолапов В.А. Антиоксидантные средства: стратегия отбора, перспективы применения. Дисс.… д-ра мед. наук, Волгоград, 2005, 303 с.).

Техническим результатом изобретения является повышение антитромботической активности.

Технический результат достигается дигидробромидом 9-(2-диэтиламиноэтил)-2-(3,4-диоксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I:

Известно, что дигидробромид вышеуказанного соединения (I) оказывает церебропротекторное действие при радиационных поражениях (патент РФ №2238938, C07D 487/04, 2004 г.). У соединения I выявлены также противоишемические, гемореологические и антирадикальные свойства (патент РФ №2391979, C07D 487/04, 2010 г.).

Способы получения дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтил-аминоэтилимидазо[1,2-a]бензимидазола I описаны в вышеуказанных статье и патентах и заключаются в конденсации 1-диэтиламиноэтил-2-аминобензимидазола с 3,4-диметоксифенацилбромидом или 3,4-диоксифенацилгалогенидом, последующей циклизации образующихся в результате конденсации галогенидов 1-диэтиламиноэтил-3-(3,4-диметокси(3,4-дигидрокси)фенацил)-2-аминобензимидазолия в 48%-ной бромистоводородной кислоте (т.кип. 127°C), в результате чего образуется искомый продукт I.

Ниже приведен пример исследования антитромбогенной активности этого соединения.

Пример 1. Изучение антитромботической активности на модели артериального тромбоза, индуцированного раствором хлорида железа.

Эксперименты выполнены на 55 белых нелинейных крысах-самцах, массой 450-500 г, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24°C, относительная влажность воздуха 40-50%) с естественным световым режимом на стандартной диете (ГОСТ Р 50258-92), соблюдая правила лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 1000.4-96), а также правила и Международные рекомендации Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемые при экспериментальных исследованиях (1997). Изучение антитромботической активности соединений проводили на модели артериального тромбоза у крыс, вызванного поверхностной аппликацией 50% раствора хлорида железа (III) (Kurz K.D., 1990). Соединение I вводили перорально в дозах, которые составили 58, 29 и 14,5 мг/кг. В качестве препаратов сравнения были изучены известное антиагрегантное средство - ацетилсалициловая кислота, которая составляет основу современной антитромбоцитарной терапии и признана ее стандартом (Рекомендации Европейского кардиологического сообщества, 2006 г.), и антиоксидантное средство мексидол. Ацетилсалициловую кислоту вводили в дозах 20, 125 и 350 мг/кг, а мексидол - в дозах 28, 100 и 150 мг/кг. Группе контрольных животных вводили дистиллированную воду в эквивалентном количестве. Моделирование артериального тромбоза осуществляли спустя 2 ч после перорального введения соединений. Крыс интраперитониально наркотизировали нембуталом (50 мг/кг), отпрепаровывали сонную артерию на 4 см в длину, на участок длиной около 1 см укладывали ватный диск размером 2 мм×8 мм, смоченный 50% раствором хлорида железа (0,025 мл), и пленку Parafilm для изоляции окружающих тканей. На расстоянии 1 см от данного участка устанавливали ультразвуковой датчик аппарата Доплера. Доплерографические исследования проводили на ультразвуковом компьютеризированном приборе «Минимакс-Доплер-К» (Санкт-Петербург) для исследования кровотока как в крупных кровеносных сосудах (артериальных и венозных диаметром 1-7 мм), так и в микрососудах (диаметром менее 1 мм) неинвазивным способом. Регистрацию кровотока вели до полной окклюзии сосуда (характеризуется отсутствием пульсации сонной артерии выше участка наложения тромбообразующего агента и характерного артериального звукового сигнала).

В качестве критериев оценки эффективности препаратов использовали удлинение интервала времени, необходимого для развития полной окклюзии сонной артерии и определение ЭК₅₀.

Статистическую обработку результатов проводили в электронной таблице Excell 5.0 с использованием t-критерия Стьюдента при помощи пакета статистических программ программного обеспечения Microsoft Excell 2006.

В контрольной группе животных, которым вводили дистиллированную воду, среднее время окклюзии сонной артерии составило 17,4 мин (табл.1), что совпадает с данными, полученными другими авторами (G. DiMinno, MJ. Silver. Mouse Antithrombotic Assay: A Simple Method for the Evaluation of Antithrombotic Agents in vivo. Potentiation of Antithrombotic Activity be Ethyl Alcohol. J. Pharmacol. Exp.Ther., 1983, vol.225, №1, p.57-60. Предварительное введение соединения I в дозе 58 мг/кг предупреждало время развития окклюзии сонной артерии крыс. Время образования соответствовало увеличению времени окклюзии сосуда по отношению к контролю на 78,1%. При снижении дозы данного соединения до 29 и 14,5 мг/кг время наступления полной окклюзии сосуда по отношению к контролю составило 59,5 и 30,3% соответственно. ЭК₅₀ соединения I составила 24,5 мг/кг. Ацетилсалициловая кислота в дозе 20 мг/кг оказалась практически неэффективной, так как увеличивала время полной окклюзии сосуда по сравнению с контрольной группой животных всего на 16,8%. А в дозах 125 и 350 мг/кг данный показатель увеличился на 32,2 и 85,8%, соответственно. ЭК₅₀ ацетилсалициловой кислоты при этом составила 114,7 мг/кг. Мексидол в дозе 28 мг/кг не проявил активности и увеличивал время тромбообразования всего на 8% по сравнению с контролем. Однако при увеличении дозы до 100 и 150 мг/кг этот показатель увеличивался до 43,7 и 95,5%. ЭК₅₀ мексидола при этом составила 76,2 мг/кг (табл.1).

Также был определен условный терапевтический индекс изученных соединений. Из таблицы 2 видно, что терапевтический индекс соединения I в 3,3 раза превосходит таковой ацетилсалициловой кислоты и в 1,4 раза терапевтический индекс мексидола.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что соединение I проявило выраженную антитромботическую активность на модели артериального тромбоза, индуцированного раствором хлорида железа. По данным ЭК₅₀ данное вещество оказалось в 4,7 раза активнее известного антиагрегантного средства ацетилсалициловой кислоты и в 3,1 раза активнее антиоксидантного средства мексидол.

По условному терапевтическому индексу соединение I превосходило ацетилсалициловую кислоту в 3,3 раза, а мексидол в 1,4 раза.

Следовательно, изучение антитромботической активности

конденсированного производного бензимидазола I имеет важное значение для разработки новых лекарственных средств, применяющихся в терапии тромбозов.

Таблица 1 Антитромботическая активность соединения I, ацетилсалициловой кислоты и мексидола на модели тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного 50% раствором хлорида железа (M±m). № п/п Вещество Кол-во животных Доза, мг/кг Время наступления полной окклюзии сосуда, мин % увеличения времени окклюзии по отношению к контролю ЭК₅₀ мг/кг 1 Контроль 8   17,4±0,5     2 I 5 58 31,0±1,04*** 78,1±6,0***   3 I 5 29 27,8±1,31*** 59,5±7,55*** 24,5 4 I 5 14,5 22,7±0,88* 30,3±5,07*   5 Аспирин 5 20 20,2±0,86* 16,8±4,54*   6 Аспирин 5 125 23,0±0,58*** 32,12±3,33*** 114,7 7 Аспирин 5 350 32,3±1,76*** 85,8±10,1***   8 Мексидол 5 28 18,7±0,33 8,4±0,79   9 Мексидол 5 100 25,0±0,57*** 43,7±3,31*** 76,2 10 Мексидол 5 150 34±1,52*** 95,2±8,57***   достоверность к контролю * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001

Таблица 2 Величина антиагрегантной активности (ЭК₅₀), острой токсичности (ЛД₅₀) и условного терапевтического индекса (УТИ) соединения I, ацетилсалициловой кислоты и мексидола на животных с экспериментальной моделью тромбоза № п/п Соединение ЭК₅₀, мг/кг ЛД₅₀, мг/кг Условный терапевтический индекс 1 I 24,5 218 8,89795 2 Ацетилсалициловая кислота 114,74 310 2,70176 3 Мексидол 76,2 475 6,23359

Изобретение относится к фармакологии, а именно к применению дигидробромида 9-(2-диэтиламиноэтил)-2-(3,4-диоксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I в качестве соединения, проявляющего повышенную антитромботическую активность. 2 табл.

1. Применение дигидробромида 9-(2-диэтиламиноэтил)-2-(3,4-диоксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I:

в качестве соединения, проявляющего антитромботическую активность.
2 Применение дигидробромида 9-(2-диэтиламиноэтил)-2-(3,4-диоксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола по п.1 как действующего начала в фармацевтических композициях.