СОСТАВ РАСШИРЕННОЙ КВАЛИФИКАЦИОННОЙ ПАНЕЛИ КОНТРОЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ВНЕШНЕГО И ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/53 G01N33/96 

Область применения изобретения

Настоящее изобретение относится к области медицины (дерматовенерологии и клинической лабораторной диагностике), в частности к иммунологическим (серологическим) исследованиям, применяемым при обследовании населения с целью диагностики сифилитической инфекции.

Предшествующий уровень техники

Уровень заболеваемости сифилитической инфекцией в Российской Федерации остается высоким; по данным официальной государственной статистики интенсивные показатели, характеризующие выявление новых случаев заболевания в 2009 и 2010 годах, составляли 53,3 и 44,9 случаев на 100 тыс. населения соответственно [Заболеваемость, ресурсы и деятельность дерматовенерологических учреждений: Статистические материалы. Москва: ФГУ «ЦНИИОИЗ», ФГУ ГНЦД Росмедтехнологий, 2010, 2011], что существенно превышало аналогичные показатели, наблюдаемые в большинстве стран Европы и мира (10,0-16,0 случаев на 100 тыс. населения).

Важным фактором, влияющим на распространение сифилитической инфекции, является активное выявление больных при проведении профилактических осмотров и обследовании населения с применением иммунологических (серологических) методов исследования (выявление антител к антигенам Т.pallidum в образцах биологического материала, полученного от пациентов: сыворотка или плазма крови, ликвор).

Эффективными методами обеспечения надлежащего качества клинических лабораторных исследований является регулярное проведение мероприятий внутрилабораторного и внешнего контроля качества [Гаранина Е.Н., 1997; Приказы Минздрава РФ №45 от 07.02.2000 и №220 от 26.05.2003; Потемкина Е.Е., Манукян М.М., 2002; Меньшиков В.В., 2002, 2004, 2005; Михайлова B.C. и др., 2002; Заикин Е.В., 2004; Мошкин А.В., Долгов В.В., 2004; Кубанова А.А. и др., 2006; Кишкун А.А., Миколаускас В.П., 2006; Anderson M.А., 2002].

При внутрилабораторном контроле качества иммунологических (серологических) исследований на сифилис в каждую аналитическую серию (постановку реакции) наряду с образцами клинических материалов, полученных от пациентов, дополнительно включают образцы аттестованных контрольных материалов. После окончания лабораторного теста результаты исследования контрольных материалов сопоставляют с их аттестованными характеристиками, что позволяет врачу клинической лабораторной диагностики оценить правильность и качество проведения процедуры исследования и приемлемость полученных во всей аналитической серии данных [Павлова Е.С. и др., 2002; Меньшиков В.В., 2003; Мошкин А.В., 2002; Шибанов А.Н., 2008; EQAS, 2006; ISO 5725-1; ISO 15189: 2003].

Мероприятия внешнего контроля качества позволяют обеспечивать качество и единство измерений в клинических лабораториях определенного административного или территориального региона. Внешний контроль качества осуществляется путем направления аттестованных контрольных образцов в зашифрованном виде для исследования в контролируемые лаборатории и последующей оценки результатов, полученных в этих лабораториях, в соответствии с разработанными критериями оценки качества [Баллок Д.Г., 1993; Малахов В.Н., 1995, 1996, 1998, 2002; Кубанова А.А. и др., 2006].

Внутрилабораторный и внешний контроль качества представляют собою два взаимно дополняемых способа контроля, выявляющих различные виды аналитических ошибок в клинических диагностических лабораториях [Арефьева И.А. и др., 2005; Фриго Н.В. и др., 2007]. Внутрилабораторный контроль качества предназначен для поддержания стабильности аналитической системы в лаборатории, своевременного определения и устранения недопустимых случайных и систематических погрешностей аналитического измерения; это мероприятия текущего контроля качества. Внешняя оценка качества направлена на обнаружение систематических ошибок лабораторных методов, не определяемых при осуществлении внутрилабораторного контроля качества, и по своему характеру является последующим контролем, непосредственно не оказывающим влияние на результаты исследования в аналитической серии [Малахов В.Н., 1995, 1996, 1998, 2002; Кубанова А.А. и др., 2005, 2006; Фриго Н.В. и др., 2007; Chaloner-Larsson G. et al., 1997; EQAS, 2006; ISO 5725-1; ISO 15189: 2003].

Мониторинг качества серологических исследований для диагностики сифилитической инфекции, осуществляемый среди серологических лабораторий медицинских организаций дерматовенерологического профиля под руководством ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздравсоцразвития России, в течение 2003-2010 годов позволил установить, что во многих регионах Российской Федерации качество лабораторной диагностики сифилиса остается низким. Об этом свидетельствовал высокий процент неудовлетворительных результатов контроля нетрепонемных (10-25%) и трепонемных (0,9-8%) тестов, что могло повлечь за собой как недовыявление случаев заболевания, так и их гипердиагностику [Фриго Н.В. и др., 2005, 2008; Ротанов С.В. и др., 2007, 2008, 2009; Кубанова А.А. и др., 2009].

Таким образом, мероприятия внутрилабораторного и внешнего контроля качества диагностических методов исследования основаны на использовании в качестве необходимых средств измерения аттестованных различными методами образцов биологического материала - контрольных материалов. В соответствии с требованиями нормативных документов контрольные материалы для оценки качества диагностических исследований должны быть разрешены к медицинскому применению в установленном порядке [ОСТ 91500.13.0001-2003; Петухов В.Г., 2003; Садовой М.А., Бедорева И.Ю., 2008; Jeffcoate S.L., 1992; WHO Technical Report Series, 2004].

В Российской Федерации для контроля качества серологических исследований при диагностике сифилитической инфекции длительное время выпускали лиофилизованные контрольные сыворотки (не содержавшие и содержавшие антитела, ассоциированные с сифилитической инфекцией), полученные из крови здоровых и зараженных сифилисом лабораторных животных (кроликов) [Овчинников Н.М. и др., 1987; Приказ Минздрава Российской Федерации №87 от 26.03.2001]. Однако в ряде современных методов исследований на сифилис применяются технологии, основанные на использовании видоспецифических конъюгатов, вступающих во взаимодействие с иммуноглобулинами человека, что исключает применение кроличьих сывороток в качестве адекватных контрольных материалов.

В ряде научных работ имеются указания о производстве на отечественных предприятиях ЗАО «Вектор-Бест» и ЗАО «Медико-Биологический Союз» лиофилизованных сывороток крови человека, предназначенных для оценки качества работы лабораторий и тест-систем для диагностики сифилиса. Однако указанные материалы до последнего времени не были разрешены к применению в учреждениях здравоохранения Российской Федерации [Дмитриев Г.А., 2004; ЗАО «Медико-биологический союз», 2007]. Кроме того, использование контрольных материалов, выпускаемых в лиофилизованном виде, может приводить к систематическим ошибкам измерения по причине потери массы препарата во время сушки, при открывании ампул или флаконов и погрешностей дозирования восстанавливающих первоначальный объем растворителей. Полученные из лиофилизатов жидкие контрольные материалы нередко характеризуются повышенной мутностью и опалесценцией, что оказывает негативное влияние на качество учета результатов серологических исследований на сифилис.

На практике во многих лабораториях для контроля качества при проведении серологических исследований на сифилис используют так называемые «сливные» сыворотки - пул объединенных сывороток крови человека, ранее исследованных в различных серологических реакциях [Овчинников Н.М. и др., 1987; Приказ Минздрава Российской Федерации №87 от 26.03.2001; Циркулярные письма Министра здравоохранения РСФСР по серологии от 14.10.1958 и №55-757 от 18.10.1958]. Однако данные контрольные материалы производятся непосредственно в лаборатории и не аттестованы надлежащим образом.

В связи с вышеизложенным разработка современных контрольных материалов для диагностики сифилитической инфекции явилась одной из приоритетных задач подпрограммы «О мерах по предупреждению дальнейшего распространения заболеваний, передаваемых половым путем» Федеральной целевой программы «Предупреждение и борьба с заболеваниями социального характера (2002-2006 годы)» [Постановление Правительства Российской Федерации №790 от 13.11.2001].

Разработка и производство стандартов, калибраторов и контрольных материалов для клинических лабораторных исследований является важным разделом исследований многих научных центров. Требования и рекомендации по производству, аттестации и внедрению международных биологических стандартов разрабатываются Комитетом по стандартизации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) [WHO Technical Report Series, 2004; ISO 15194], а также национальными органами здравоохранения [СП 3.3.2.1288-03, утв. Гл. государственным санитарным врачом РФ от 17.04.2003].

В зависимости от назначения контрольные материалы биологического происхождения могут выпускаться в виде отдельных стандартов, представленных ограниченным количеством не возобновляемых доз-аликвот, или панелей контрольных сывороток, регулярно выпускаемых промышленным способом.

В соответствии с международными рекомендациями при разработке панелей контрольных материалов в настоящее время отдают предпочтение неразведенным сывороткам крови человека, содержащим разные сочетания антител к возбудителю заболевания, выпускаемым в жидкой (нативной) форме, так как они по своим свойствам наиболее приближены к образцам пациентов, с которыми проводятся диагностические исследования в клинических лабораториях [СП 3.3.2.1288-03, утв. Гл. госуд. санитарным врачом РФ от 17.04.2003; Курбатова Е.А., 2000; Ricós С. et al., 1999].

Степень активности содержащихся в контрольных материалах антител должна находиться в области значений, соответствующих клиническим образцам, и не ниже порога аналитической чувствительности используемых в практическом здравоохранении лабораторных методов [Канев А.Н. и др., 1998; Приказ Минздрава РФ №45 от 07.02.2000 г.].

Необходимым условием создания биологических стандартов и контрольных материалов является обеспечение их стабильности способности сохранять свои специфические характеристики (уровень активности антител и воспроизводимые результаты лабораторного исследования) при их хранении в течение длительного периода времени (не менее 1-2 лет) [СП 3.3.2.1288-03; Jeffcoate S.L., 1992; WHO Technical Report Series, 2004; ISO 15194].

Наиболее близким прототипом при разработке настоящего изобретения явилось изделие медицинского назначения «Экспертная панель контрольных материалов для серодиагностики сифилиса «ЭП СИФИЛИС», разработанная и выпускаемая ФГБУ «ГНЦДК» Минздравсоцразвития России по ТУ 9398-001-01897647-2007 (РУ №ФСР-2007/00695, утв. Приказом Росздравнадзора №2797 от 18.09.2007). Недостатком данного изделия медицинского назначения является небольшое разнообразие контрольных материалов в составе панели (4 контрольных образца, 2 из которых содержат антитела к антигенам возбудителя сифилиса в высокой и низкой концентрации и 2 - не содержат) и короткий срок годности контрольных сывороток (6 месяцев).

Технической задачей изобретения являлась разработка состава расширенной квалификационной панели контрольных материалов с различным вариационным уровнем антител к возбудителю сифилиса, позволяющим осуществлять внутрилабораторный и внешний контроль качества серологических методов исследования при диагностике сифилитической инфекции в течение длительного времени.

Эта задача решается за счет того, что в состав расширенной квалификационной панели включены 24 контрольные сыворотки с разным уровнем антител к антигенам возбудителя сифилиса. Состав панели контрольных материалов включает 16 образцов, приготовленных на основе матрицы сыворотки крови больных сифилисом и содержащих антитела к антигенам T.pallidum: в том числе 8 образцов с высоким уровнем антитрепонемных антител и титром антител к кардиолипиновому антигену от 1:16 до 1:128; 8 образцов с более низким содержанием антитрепонемных антител и титром антител к кардиолипину от 1:1 до 1:8. Расширенная панель контрольных материалов также включает 8 образцов, приготовленных на основе сыворотки крови здоровых доноров, не содержащей антитрепонемные антитела. Для обеспечения вариационного разнообразия по составу антител к отдельным антигенным детерминантам возбудителя сифилитической инфекции образцы контрольных материалов в комплекте расширенной панели не повторяются.

Длительное сохранение специфической активности контрольных материалов расширенной квалификационной панели обеспечивается путем внесения в каждый контрольный образец консервирующей добавки, разработанной в ФГБУ «ГНЦДК Минздравсоцразвития России (положительное решение ФИПС от 25.02.2011 г. о выдаче патента на изобретение по заявке №2009120638/15 «Состав консервирующей добавки к контрольным материалам, используемым при серодиагностике сифилиса», приоритет от 02.06.2009 г.).

Техническим результатом изобретения является получение расширенной квалификационной панели контрольных материалов для осуществления мероприятий внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований на сифилис, содержащих разные оттитрованные уровни антител к антигенам T.pallidum, соответствующие клиническим значениям, наблюдаемым у больных с сифилитической инфекцией, и не содержащих указанные антитела, что соответствует клиническим показателям, определяемым у здоровых людей.

Образцы панели контрольных материалов, содержащие антитрепонемные антитела, позволяют изучать показатели аналитической и клинической чувствительности наборов реагентов для диагностических методов исследования; в то время как образцы панели контрольных материалов, не содержащих антитрепонемные антитела, предназначены для оценки клинической специфичности диагностических тестов.

Расширенный состав неповторяющихся контрольных материалов квалификационной панели, содержащих различные уровни антитрепонемных антител, обеспечивает репрезентативный уровень проведения исследований как с использованием только образцов указанной панели, так и в сочетании их с другими контрольными материалами или аттестованными образцами.

Раскрытие настоящего изобретения

Сущность настоящего изобретения заключается в том, что в состав расширенной квалификационной панели контрольных материалов для внешнего и внутрилабораторного контроля качества серологических исследований для диагностики сифилиса входят 24 неповторяющиеся образца контрольных материалов с разным уровнем антител к возбудителю сифилиса, в том числе: 8 образцов - с высоким содержанием антител - титр антител к кардиолипину в образцах варьирует от 1:16 до 1:128, 8 образцов - с низким - титр антител к кардиолипину от 1:1 до 1:8, и 8 образцов, которые не содержат антитрепонемные антитела; для повышения аналитических свойств контрольные материалы выпускаются на основе матрицы сыворотки крови человека в готовой к использованию нативной жидкой форме, они содержат консервирующие добавки, не оказывающие влияния на проведение исследования.

Варианты применения настоящего изобретения

Пример №1. Применение контрольных материалов для внутрилабораторного контроля качества серологических исследований для диагностики сифилиса

Врач клинической лабораторной диагностики, осуществляющий серологические исследования на сифилис, отбирает из состава расширенной панели 3 или более образца контрольных материалов и включает их в аналитическую серию исследования наряду с образцами биологических материалов, предоставленных из лечебных отделений медицинских организаций. Результаты проведенного исследования контрольных материалов врач сопоставляет с аттестационными характеристиками каждого образца, содержащимися в аналитическом паспорте на серию панели контрольных материалов, или полученными в этой же лаборатории с этими контрольными материалами в серии предварительно проведенных установочных испытаний. В соответствии с технологией статистической обработки аналитических данных, используемой в лаборатории, врач клинической лабораторной диагностики принимает решение о допустимости (приемлемости) полученных отклонений в результатах исследования каждого контрольного материала от аттестованных или установочных значений анализируемого параметра. Принятое решение позволяет оценить качество проведения процедуры исследования всей аналитической серии и возможность выдачи результатов исследования клинических образцов, предоставленных от пациентов, в соответствующие лечебные подразделения.

Критерием удовлетворительного качества проведения исследования является полное совпадение результатов исследования всех использованных контрольных материалов в лаборатории с их аттестационными характеристиками; допускается возможное отклонение качественного (измеряемого в условных единицах - «плюсах») или полуколичественного параметра (оцениваемого по степени разведения образца - титру) на одну ступень в большую или меньшую сторону.

При удовлетворительном качестве исследования контрольных материалов врач принимает решение о представлении результатов исследования образцов биологических материалов, полученных от пациентов, в соответствующие лечебные отделения медицинских организаций.

Критерием неудовлетворительного качества проведения исследования является полное расхождение результатов исследования в лаборатории хотя бы одного из использованных контрольных материалов с их аттестационными характеристиками по качественному параметру (определены или нет в образце антитела к антигенам T.pallidum) и отклонение качественного (измеряемого в условных единицах - «плюсах») или полуколичественного параметра (оцениваемого по степени разведения образца - титру) более чем на одну ступень в большую или меньшую сторону.

При неудовлетворительном качестве исследования контрольных материалов специалистом клинической лабораторной диагностики осуществляется поиск причин возможной ошибки, их устранение и повторное исследование всей аналитической серии.

Пример №2. Применение контрольных материалов для внешнего контроля качества выполнения серологических исследования для диагностики сифилиса

Мероприятия внешнего контроля качества включают в себя несколько последовательных этапов:

- разработка в контролирующей медицинской организации списка организаций и методов лабораторных исследований, подлежащих контролю, графика и условий проведения мероприятий внешнего контроля качества, критериев оценки качества исследований в контролируемых лабораториях;

- разработка контрольных заданий в виде нескольких образцов контрольных материалов (от 3 до 8), содержащих и не содержащих антитела к возбудителю сифилитической инфекции, выбранных из состава расширенной квалификационной панели; образцы контрольных материалов в составе контрольного задания могут повторяться (оценка воспроизводимости результатов исследования);

- предоставление контрольного задания, сроков его выполнения и протокола предоставления полученных результатов в контролируемые лаборатории;

- исследование контрольных образцов в условиях контролируемых лабораторий с применением контролируемых методов исследования и предоставление полученных результатов в контролирующую организацию;

- оценка представленных из контролируемых лабораторий результатов в соответствии с разработанными критериями оценки качества.

Критерием удовлетворительного качества проведения исследования является полное совпадение результатов исследования всех контрольных образцов в контролируемой лаборатории с их аттестационными характеристиками; допускается возможное отклонение качественного (измеряемого в условных единицах - «плюсах») или полуколичественного результата (оцениваемого по степени разведения образца - титру) на одну ступень в большую или меньшую сторону.

Критерием неудовлетворительного качества проведения исследования в контролируемой лаборатории является несовпадение результатов исследования контрольных образцов с их аттестационными характеристиками: в том числе отклонение качественного (измеряемого в условных единицах - «плюсах») или полуколичественного результата (оцениваемого по степени разведения образца - титру) более чем на одну ступень в большую или меньшую сторону.

По результатам проведения мероприятий внешнего контроля качества контролирующая организация направляет руководителю контролируемой лаборатории заключение с оценкой качества проведенных в этой лаборатории исследований и рекомендациями по устранению выявленных нарушений. Неудовлетворительное качество лабораторных исследований, установленное в последовательных циклах внешнего контроля качества серодиагностики сифилиса, может служить основанием для руководителя соответствующей медицинской организации или клинической диагностической лаборатории для принятия административного решения о временном приостановлении выполнения соответствующего вида исследований, досрочном направлении специалистов клинической лабораторной диагностики на циклы тематического усовершенствования или обучения на рабочих местах в медицинских организациях последипломного обучения.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии и клинической лабораторной диагностике, и представляет собой состав расширенной квалификационной панели контрольных материалов, приготовленных на основе сыворотки крови человека в жидкой нативной форме, готовых к использованию без предварительной подготовки. Расширенный количественный состав панели включает 24 не повторяющихся контрольных материала, в том числе: 8 - с высоким, 8 - с низким содержанием антитрепонемных антител и 8 образцов, не содержащих указанные антитела. Образцы контрольных материалов, содержащие антитрепонемные антитела, подобранных в панель по нарастающему уровню антител к кардиолипиновому антигену: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128 - по два образца с каждым титром. Контрольные материалы расширенной панели характеризуются длительным сроком сохранения специфической активности за счет содержания консервирующей добавки, которая не оказывает влияния на результаты серологических исследований. Вариационное разнообразие контрольных материалов расширенной панели, их длительный срок годности и нативная форма выпуска позволяют осуществлять внутрилабораторный и внешний контроль качества проведения серологических исследований при диагностике сифилитической инфекции в клинических диагностических лабораториях медицинских организаций. 2 пр.

Состав расширенной квалификационной панели контрольных материалов для осуществления внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований для диагностики сифилитической инфекции, приготовленных на основе сыворотки крови человека в нативной жидкой форме, полностью готовых к использованию без предварительной подготовки, отличающийся:
- расширенным количественным составом неповторяющихся образцов - панель включает 24 контрольных материала, в том числе 8 - с высоким, 8 - с низким содержанием антитрепонемных антител и 8 образцов, не содержащих указанные антитела;
- вариационным разнообразием образцов контрольных материалов, содержащих антитрепонемные антитела, подобранных в панель по нарастающему уровню антител к кардиолипиновому антигену: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128 - по два образца с каждым титром;
- длительным сроком сохранения специфической активности за счет содержания консервирующей добавки, которая не оказывает влияние на результаты серологических исследований.