СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2015 года по МПК A61K31/395 A61P25/22 A61K36/714 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции заболеваний ЦНС, и заключается в применении дитерпенового алкалоида зонгорина в качестве анксиолитического средства.

По данным эпидемиологических исследований на протяжении жизни тревожные состояния развиваются примерно у каждого четвертого жителя планеты. В России распространенность тревожных и депрессивных состояний достигает 6-7% от общего числа населения, при этом специалисты отмечают неуклонный рост числа этих заболеваний [1]. Симптомы патологической тревоги выявляются у 30-40% больных, обращающихся к врачам общей практики [2]. Повышенная тревожность увеличивает вероятность инфаркта миокарда в 2, 3 раза и внезапной смерти в 4, 5 раза. Треть от всех затрат на лечение психических заболеваний приходится на лечение тревоги [3].

Известен широкий спектр лекарственных средств - анксиолитиков, снижающих не только психические проявления тревоги, но и процесс ее соматизации. Наиболее популярны анксиолитики бензодиазепиновой структуры [4]. Они оказывают выраженное противотревожное действие - уменьшают тревогу, беспокойство, повышают резистентность к стрессогенным факторам, но не лишены побочных эффектов - вызывают дневную сонливость, нарушение когнитивных процессов, ослабление внимания, памяти, мышечного тонуса, формирование лекарственной зависимости [5].

Многочисленные отрицательные свойства бензодиазепиновых анксиолитиков ограничивают возможность их применения, особенно в условиях непрекращающейся трудовой деятельности [6]. Это делает актуальным поиск новых средств, обладающих высокой анксиолитической активностью, но не вызывающих серьезных побочных эффектов. Препараты природного происхождения могут сыграть существенную роль в решении этой проблемы [7].

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала средств, обладающих выраженной анксиолитической активностью. Поставленная задача решается применением зонгорина в качестве средства, обладающего анксиолитической активностью.

Дитерпеновые алкалоиды на сегодняшний день являются перспективным классом веществ, для получения новых фармакологических препаратов, благодаря их способности оказывать влияние на жизненно важные процессы организма [6]. Наши исследования выявили разнообразную физиологическую активность у дитерпеновых алкалоидов аконита байкальского: регенераторную [8], антиметастатическую [9], противовоспалительную [10], антигипоксическую [11], антипиретическую [12] и другие.

Факт применения зонгорина с достижением нового технического результата, заключающегося в снижении тревожности, для специалиста не является очевидным. Новые свойства не вытекают явным образом из уровня техники в данной области их описание не содержится в патентной и научно-технической литературе. Предлагаемое изобретение может быть использовано в практическом здравоохранении. Исходя из вышеизложенного следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: “Новизна”, “Изобретательский уровень”, “Промышленная применимость”.

Предлагаемые нами средства получали следующим образом.

Пример 1. Надземная часть аконита бородатого (A. Barbatum Pers.), собранная в период цветения, измельчалась до размера частиц менее 5 мм, обрабатывалась раствором карбоната натрия и подвергалась непрерывной экстракции хлороформом в течение 5 суток. Хлороформный экстракт упаривали до небольшого объема и тщательно экстрагировали 5% серной кислотой. Кислотную вытяжку подщелачивали карбонатом натрия до рН 9-10 и последовательно экстрагировали сначала эфиром, затем хлороформом. Эфирный экстракт упаривали досуха, растворяли в небольшом количестве эфира и хроматографировали на дезактивированной окиси алюминия в системе гексан-ацетон (90→50%). Эфирорастворимую фракцию подвергли дробной экстракции буферными растворами с увеличивающимися значениями рН. Эфирный раствор, оставшийся после экстракции наиболее щелочным буфером, упаривали досуха и хроматографировали на окиси алюминия в системе гексан-метанол до элюции зоноргина, происходящей после выхода напеллина. Вещество растворяли в дистиллированной воде до конечной концентрации. Зонгорин (C22H33NO3),

представляет собой гетероциклическое азотсодержащее органическое соединение растительного происхождения. Чаще всего он встречается в растениях рода Аконит, хотя обнаруживается и в других растениях.

Наиболее близким по анксиолитическому эффекту (прототипом) является феназепам, который мы использовали в качестве препарата сравнения. По силе противотревожного действия феназепам превосходит анксиолитики других химических групп, также оказывает выраженное противосудорожное, миорелаксантное (мышечно-расслабляющее), седативное и снотворное действие. Феназепам назначают при различных невротических, неврозоподобных, психопатических и психопатоподобных состояниях, сопровождающихся тревогой, страхом, повышенной раздражительностью, эмоциональной лабильностью. Препарат эффективен при навязчивости, фобии, ипохондрических синдромах (в том числе резистентных к действию других транквилизаторов), показан также при панических реакциях, так как снимает состояние тревоги и страха [6].

Исследования анксиолитической активности зонгорина выполняли на 19 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 20-22 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986). Исследования проводили в соответствии с “Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств” [13]. Предлагаемое средство в дозах 2,5 и 0,25 мг/кг и препарат сравнения феназепам в дозе 1 мг/кг вводили животным курсом ежедневно в течение пяти дней однократно через зонд в желудок в виде раствора или суспензии в воде очищенной за 1 ч до тестирования. Животные в группе контроля получали эквивалентное количество воды очищенной. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t критерия Стьюдента и непараметрического U критерия Вилкоксона-Манна-Уитни с помощью пакета программ Statistica 6.0.

Исследование анксиолитической активности дитерпенового алкалоида зонгорина проводили в условиях модели “конфликтной ситуации” по Vogel [14]. В основе теста лежит столкновение двух мотиваций: безусловной реакцией страха перед электроболевым раздражением и чувством жажды на фоне водной депривации. Таким образом, “конфликтная ситуация” представляет собой ошибку условного питьевого рефлекса с перенапряжением нервной системы и служит наиболее распространенной моделью неврозов. Она хорошо предсказывает противоневротические свойства препаратов.

Экспериментальная процедура выглядит следующим образом: животных предварительно оставляли на двое суток без воды, затем в течение 4 суток на 15 мин ежедневно помещали в пластиковую камеру размерами 30×40×20 см, в одной из торцевых стенок которой была устроена ниша с поилкой, где мышь могла напиться. Зонгорин и препарат сравнения - феназепам вводили, начиная с первого дня обучения. В день регистрации мышь помещали в камеру и между металлическим полом камеры и электродом, опущенным в поилку, создавалась разность потенциалов так, что при попытке взятия воды животное получало удар током. Силу тока регулировали таким образом, чтобы она имела надпороговое значение, увеличивая ее при первом пробном тестировании на пробных животных до первых реакций избегания боли при касании языком воды. Об анксиолитической активности веществ судили по разнице в числе взятий воды, несмотря на удар током (наказуемое взятие воды), в контрольной и опытной группах. Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную, эмоциональную и смещенную активность, служили число подходов к поилке, горизонтальные перемещения по клетке, груминг, число вертикальных стоек. Каждое животное наблюдали индивидуально в течение 15 мин.

В ходе эксперимента было выявлено, что курсовое введение зонгорина в обеих дозах значительно увеличивало количество наказуемых взятий воды, обеспечивая тем самым противотревожный эффект (табл. 1). Так у животных, получавших зонгорин в дозе 2,5 мг/кг, этот показатель увеличивался в 1,4 раза, а в опытной группе, в которой зонгорин вводили в дозе 0,25 мг/кг - в 2 раза по сравнению с контрольными значениями. Однако статистически значимые различия были лишь во втором случае. Назначение мышам препарата сравнения - феназепама, также обеспечивало анксиолитический эффект, что проявилось в достоверном увеличении в 1,8 раза количества наказуемых взятий воды у опытных животных относительно контрольных. Таким образом, анксиолитическая активность зонгорина в дозе 0,25 мг/кг незначительно превышала активность феназепама. Кроме того, следует отметить, что при назначении животным зонгорина в дозе 0,25 мг/кг отмечалась устойчивая тенденция к увеличению показателей поведенческой активности, свидетельствующих об устранении подавляющего действия конфликтной ситуации на эксплоративное поведение животных. Так введение животным зонгорина в дозе 0,25 мг/кг способствовало увеличению количества подходов к поилке в 1,6 раза, горизонтальных перемещений в 1,4 раза, суммарной двигательной активности и вертикальных стоек - в 1,3 раза относительно контроля. Тогда как в группе животных, получавших феназепам все эти показатели снижались, а число вертикальных стоек достоверно уменьшалось в 7 раз по сравнению с группой контроля, что указывает на проявление седативного действия.

Таким образом, применение дитерпенового алкалоида зонгорина в дозе 0,25 мг/кг обеспечивало анксиолитическую активность, превышающую активность феназепама. Кроме того, введение зонгорина в дозе 0,25 мг/кг в отличие от феназепама не вызывало седативного эффекта.

ЛИТЕРАТУРА

1. Булдакова Н.Г. Антидепрессанты и анксиолитики: преимущества и недостатки // Рус. мед. журн. - 2006. - Т. 14. - №21. - С. 1516-1519.

2. Воробьева О.В. Психовегетативный синдром, ассоциированный с тревогой (вопросы диагностики и терапии) // Рус. мед. журн. - 2006. - Т. 14. - №23. - С. 1696-1699.

3. Зарецкий М.М. Тревожные расстройства в медицинской практике и подходы к их терапии // Превентивна неврологiя. - №5 (11). - 2009. - С. 48-52.

4. Fricchione G. Generalized anxiety disorder // New Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 351, N7. - P. 675-682.

5. Barbui C., Cipriani A, Patel V., et al. Efficacy of antidepressants and benzodiazepines in minor depression: systematic review and meta-analysis // British J. Psych. - 2011. - Vol. 198, N l. - P. 11-16.

6. Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. - М.: ОО "Изд-во Новая Волна", 2008. - 1206 с.

7. Суслов Н.И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения (экспериментальное исследование): Дисс. докт. мед. наук. - Томск, 1995. - С. 81-82.

8. Nesterova Yu.V., Povetieva T.N., Suslov N.I., et al. / Regeneratory Characteristics of Extract and Isolated Diterpene Alkaloids of Aconitum baicalense // Bull. Exp. Biol. Med. - 2012. - Vol. 152, №4. - P. 439-443.

9. Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Нестерова Ю.В. и др. Противометастатические свойства алкалоидов аконита байкальского // Сибирский онкологический журнал. - 2006. - №4. - С. 43-46.

10. Нестерова Ю.В., Поветьева Т.Н., Суслов Н.И. и др. Противовоспалительная активность дитерпеновых алкалоидов аконита байкальского // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 2013. - Т. 156. - №11. - С. 611-616.

11. Nesterova Yu.V., Pashinsky V.G., Povetieva T.N., et al. Antihypoxic activity extracts // Traditional medicine: A current situation and perspectives of development (Materials of the III scientific conference. August 18-22, 2008, Ulan-Ude, Russia) P. 78.

12. Нестерова Ю.В., Поветьева Т.Н., Суслов Н.И. и др. Исследование антипиретической активности водно-спиртовых экстрактов и дитерпеновых алкалоидов, полученных из алкалоидоносных растений // Вопросы биол., мед. и фарм. химии. - 2010. - №10. - С. 44-48.

13. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

14. Клыгуль Т.А., Кривопалов В.А. Установка с автоматической регистрацией поведения крыс для оценки действия малых транквилизаторов // Фармакология и токсикология. - 1966. - №2. - С. 241-244.

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции заболеваний ЦНС. Предложено применение дитерпенового алкалоида зонгорина, выделенного из надземной части аконита бородатого, в качестве средства, обладающего анксиолитической активностью. Технический результат состоит в реализации выраженной анксиолитической активности при отсутствии седативного эффекта. 1 табл.

Применение дитерпенового алкалоида аконита бородатого - зонгорина в качестве средства, обладающего анксиолитической активностью.