ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ПОЛИПРЕНИЛФОСФАТОВ И БЕТА-СИТОСТЕРИНА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2015 года по МПК A61K31/66 A61K31/575 A61K47/10 A61P3/06 

Изобретение относится к лекарственным средствам и способам их получения. Лекарственное средство предназначено для профилактики и лечения заболеваний сердца и сосудов, а также дислипидемий.

Наиболее близким аналогом является биологически активная добавка (БАД) и способ ее получения (RU 2427284, опубл. 27.08.2011).

Однако концентрации активных компонентов в организме, получаемые при использовании указанной БАД, существенно ниже терапевтических. Кроме того, технология приготовления, описанная в патенте RU 2427284, не позволяет достичь равномерного распределения действующих веществ в таблетке. В результате эффективность применения БАД снижается, а выраженный терапевтический эффект может быть достигнут только при длительном применении средства.

Для смешивания активных фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ (наполнителей), имеющих различные физико-химические свойства, применяются различные методы: предварительное растворение и нанесение на наполнитель, смешивание расплавленных АФИ и субстанции, карамелизация и др.

Анализ показывает, что ни один из перечисленных методов в нашем случае не подходит, т.к. существуют ограничения по растворимости и температуре разложения активной фармацевтической субстанции натрия полипренилфосфата и вспомогательного вещества (наполнителя) сорбита.

Предлагается сухое смешивание полипренилфосфатов и сорбита.

Техническим результатом является получение стабильной таблетированной формы с максимально эффективной концентрацией активных компонентов, равномерно распределенных по всей массе таблетки и повышенной биодоступностью ингредиентов.

Технический результат достигается способом получения лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина, который отличается тем, что растирают полипренилфосфат и сорбит в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ, до получения сухой смеси полипренилфосфата и сорбита, после чего осуществляют гомогенизацию сорбита, бета-ситостерина и сухой смеси полипренилфосфата и сорбита, при этом гомогенизация проводится в течение 10 минут в импульсном режиме.

Технологический процесс смешивания состоит из двух основных этапов

Предварительное смешивание осуществляют посредством растирания полипренилфосфатов в сорбите.

Гомогенизация полученной смеси полипренилфосфатов в сорбите с использованием гомогенизатора.

Предварительное смешивание полипренилфосфатов и сорбита производится в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ.

Оптимальное соотношение для смешивания растиранием: 20 г сорбита на 10 г полипренилфосфатов.

Для подготовки процесса в ступку засыпают 20 г сорбита, размер гранул 80-120 меш. Полипренилфосфаты, общей массой 10 г, вводят небольшими частями 1-2 г. После каждого введения полипренилфосфаты растирают, смешивая с сорбитом до получения сухой смеси. Время растирания не должно быть слишком долгим, т.к. длительное растирание приводит к агрегации (слипанию) измельченных частиц.

Полипренилфосфаты при диспергировании могут спрессовываться и прилипать к стенкам ступки, поэтому надо обращать внимание на то, чтобы между стенкой или дном ступки и вводимыми полипренилфосфатами находился слой сорбита.

По мере образования комков полипренилфосфатов, которые при соединении с сорбитом теряют способность прилипать к стенкам ступки, добавляется 3-5 г сорбита и перемешивается для получения однородной смеси. Полученную смесь направляют на 2 стадию.

Гомогенизация полученной смеси полипренилфосфатов в сорбите с использованием гомогенизатора.

Полученную на 1 этапе смесь гомогенизируют с использованием универсального гомогенизатора для твердых образцов типа Universal Mixer GK.

Для этого в гомогенизатор засыпают расчетное количество сорбита (но не более 1 кг) и смесь полипренилфосфатов в сорбите. Оптимальное соотношение полипренилфосфат: сорбит -1:8 (сорбит, введенный на 1 этапе, учитывается).

Загрузка ингредиентов в гомогенизатор производится в следующем порядке:

1-й слой - сорбит, 1/2 расчетного количества

2-й слой - смесь полипренолов и сорбита

3-й слой - сорбит, вторая половина расчетного количества.

Гомогенизация производится в течение 10 минут в импульсном режиме. После каждой остановки процесса - интенсивное встряхивание чаши со смесью.

Время и скорость вращения:

4 мин - 500-700 об/мин, перерыв 20 мин.

2 мин - 1000-1200 об/мин, перерыв 20 мин.

4 мин - 500-600 об/мин - окончание процесса.

Для проверки однородности смеси следует просеять полученный порошок через сито с размером ячейки 20 мкм. При появлении на поверхности сита отсева необходимо определить его вес и состав. Если вес отсева составляет менее 0,1% от массы загруженных ингредиентов, процесс гомогенизации заканчивается. Если вес отсева составляет более 0,2% от массы загруженных ингредиентов, а в отсеве просматриваются частицы полипренилфосфата, процесс гомогенизации продолжается на скорости вращения 1000-1200 об/мин в течение одной минуты. После этого производится повторное просеивание и определение веса отсева. Если отсев соответствует названным ранее условиям, процесс прекращается.

Визуальная оценка производится путем просматривания поверхности полученного порошка: невооруженным глазом на расстоянии 25 см не должно наблюдаться отдельных частиц, блесток или вкраплений желтого или желтоватого цвета.

При приготовлении смеси для получения таблетированной формы лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина на этапе гомогенизации вместе с сорбитом добавляют также бета-ситостерин.

Оптимизированное соотношение активных фармацевтических субстанций (полипренилфосфатов и бета-ситостерина) и наполнителя (сорбита) для качественного прессования таблеток, исключения подлипания, разрушения формы таблетки массой 250 мг составляет 8 мг полипренилфосфатов и 10 мг бета-ситостерина. Снижение массы таблетки за счет уменьшения ввода сорбита не позволяет осуществлять прямое таблетирование таблетмассы. В то же время увеличение массы вводимых субстанций >10 мг для бета-ситостерина и, в особенности, >8 мг для полипренилфосфата приводит к разрушению формы таблетки и подлипанию.

Таким образом, предельное содержание полипренилфосфатов в одной таблетке составляет 8 мг, а бета-ситостерина - 10 мг.

Для определения оптимального содержания бета-ситостерина в препарате готовят 3 образца смеси, содержащих субстанцию бета-ситостерина (БСС) в количестве: 0,0 мг (контроль); 6,0 мг (образец 1) и 10,0 мг (образец 2) и наполнитель - сорбит.

У всех участвующих в опыте животных вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Для исследования влияния препаратов на уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови гиперлипидемичных мышей формируют следующие группы экспериментальных животных (по 7 мышей в каждой группе):

1. Контрольная группа - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь пищевого сорбита в 0,5 мл растворителя (среда RPMI-1640).

2. Опытная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №1 в 0,5 мл растворителя.

3. Опытная группа II - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №2 в 0,5 мл растворителя.

Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы, через желудочный зонд. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.

Пробы крови берут у животных из хвостовых вен (мышам надрезают кончик хвоста и в пластиковый капилляр забирают 20-30 мкл крови), трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).

Полученные данные представлены на фиг. 1. Образец №2, содержащий максимально возможную дозу БСС, достоверно снижает уровень холестерина.

Фиг. 1. Показывает влияние бета-ситостерина на уровень холестерина в сыворотке гиперлипидемичных мышей.

Специфические свойства полученной смеси можно проиллюстрировать следующими примерами.

Пример 1

Готовят 6 образцов лекарственной формы, содержащей по 10 мг БСС и разные дозы полипренилфосфатов (ППФ).

В таблице 1 приведены номера образцов и соответствующее им содержание БСС в лекарственном средстве.

Таблица 1. Образцы смеси и соответствующие им лекарственные формы.

У всех участвующих в опыте животных вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Для исследования влияния препаратов на уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови гиперлипидемичных мышей формируют следующие группы экспериментальных животных (по 7 мышей в каждой группе):

1. Контрольная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №1 в 0,5 мл растворителя.

2. Опытная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №2 в 0,5 мл растворителя.

3. Опытная группа II - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №3 в 0,5 мл растворителя.

4. Опытная группа III - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №4 в 0,5 мл растворителя.

5. Опытная группа IV - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №5 в 0,5 мл растворителя.

6. Опытная группа V - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №6 в 0,5 мл растворителя.

Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы, через желудочный зонд. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.

Пробы крови берут у животных из хвостовых вен (мышам надрезают кончик хвоста и в пластиковый капилляр забирают 20-30 мкл крови), трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).

Полученные данные представлены на фиг. 2. Добавление ППФ дозозависимо усиливает действие БСС и приводит к дополнительному снижению уровня холестерина, причем максимальный эффект наблюдается при максимально возможном содержании ППФ в таблетке (8 мг).

Фиг. 2. Показывает влияние полипренилфосфата на содержание холестерина в сыворотке крови.

Таким образом, максимальный терапевтический эффект, определяемый по уровню снижения холестерина, достигается при предельном содержании полипренилфосфатов (8 мг), а бета-ситостерина (10 мг) в одной таблетке.

Пример 2.

На основе описанной выше смеси, содержащей 8 мг полипренилфосфатов и 10 мг бета-ситостерина, готовят таблетки массой 250 мг с сорбитом в качестве наполнителя - готовая лекарственная форма (ГЛФ).

У мышей гибридов первого поколения (C57Bl/6xDBA/2)F₁ или мышей С57 В1/6 самок, в возрасте 2-х месяцев вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят двух-четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Формируют следующие группы экспериментальных животных:

1. Контрольная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят растворитель (среду RPMI-1640 - 0,5 мл) - группа плацебо.

2. Контрольная группа II - мыши с гиперлипидемией.

3. Опытная группа III - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 0,2 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя.(6,25 мг ГЛФ).

4. Опытная группа IV - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 0,8 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (25 мг ГЛФ).

5. Опытная группа V - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 1,6 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (50 мг ГЛФ).

6. Опытная группа VI - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 2,4 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (75 мг ГЛФ).

7. Опытная группа VII - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 3,2 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (100 мг ГЛФ).

Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.

Количество животных в группе формируют, исходя из необходимости трехкратного взятия крови. Пробы крови берут у животных из группы после декапитации, трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).

Определение общего холестерина, триглицеридов, холестерина ЛПНП, холестерина ЛПВП проводят на биохимическом анализаторе Olympus 640 (Япония) с использованием коммерческих наборов фирмы Olympus (кат. №OSR6516, OSR6133, OSR6283, OSR6587, соответственно).

У мышей группы I показатели холестерина и триглицеридов (фиг. 3) достоверно (Р>0,05) не отличаются от соответствующих показателей мышей группы II.

Фиг. 3 показывает сравнение групп I (плацебо) и II (контроль) по уровню холестерина и триглицеридов.

Сравнение групп животных III-VII, получивших разные ГЛФ, с контрольной группой II позволяет определить эффективные дозы по исследованным параметрам.

Фиг. 4 показывает влияние ГЛФ на уровень холестерина в крови гиперлипидемичных мышей.

Уровень холестерина в крови гиперлипидемичных животных (фиг. 4) в наибольшей степени снижается в группе IV после введения 25 мг ГЛФ (0,8 мг полипренилфосфата натрия), что соответствует 1,25 г/кг. Дозы 75 и 100 мг достоверного влияния на уровень холестерина не оказывали.

Похожая картина наблюдается при исследовании уровня триглицеридов в крови (фиг. 5): максимальный эффект отмечается при введении 25 мг препарата. Дозы 50-75 мг оказывают чуть меньший, но достоверный эффект (Р<0,05) снижения уровня триглицеридов.

Фиг. 5 показывает влияние ГЛФ на уровень триглицеридов в крови гиперлипидемичных мышей.

Фиг. 6 - влияние ГЛФ на уровень ЛПВП в крови гиперлипидемичных мышей.

Фиг. 7 - влияние ГЛФ на уровень ЛПНП в крови гиперлипидемичных мышей.

Достоверное влияние ГЛФ на уровень ЛПВП (фиг. 6) и ЛПНП (фиг. 7) наблюдается в более широком диапазоне доз - от 6,25 до 100 мг. При этом наблюдается повышение уровня ЛПВП и снижение ЛПНП.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина, заключающийся в предварительном смешивании полипренилфосфатов и сорбита в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ, при этом между стенкой и/или дном ступки и вводимыми полипренилфосфатами находится слой сорбита, полученную при смешивании смесь полипренилфосфатов в сорбите гомогенизируют, при этом в гомогенизатор добавляют сорбит, сухую смесь полипренилфосфатов в сорбите в соотношении 1:8 и бета-ситостерин, и гомогенизация производится в течение 10 минут в импульсном режиме, причем гомогенизацию осуществляют при скорости вращения 500-700 об/мин в течение 4 минут, 1000-1200 об/мин в течение 2 минут и затем со скоростью 500-600 об/мин в течение 4 минут, при этом при изменении скорости вращения делают перерыв 20 минут, причем после каждой остановки процесса производится интенсивное встряхивание чаши со смесью, после чего полученный порошок просеивают через сито с размером ячейки 20 мкм и, если масса отсева составляет менее 0,1% от массы загруженных ингредиентов, процесс гомогенизации заканчивают. Изобретение обеспечивает получение лекарственного средства с максимально эффективной концентрацией активных веществ, равномерно распределенных по всей массе, и повышенной биодоступностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 1 табл., 7 ил.

1. Способ получения лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина, заключающийся в предварительном смешивании полипренилфосфатов и сорбита в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ, при этом между стенкой и/или дном ступки и вводимыми полипренилфосфатами находится слой сорбита, полученную при смешивании смесь полипренилфосфатов в сорбите гомогенизируют, при этом в гомогенизатор добавляют сорбит, сухую смесь полипренилфосфатов в сорбите в соотношении 1:8 и бета-ситостерин, и гомогенизация производится в течение 10 минут в импульсном режиме, причем гомогенизацию осуществляют при скорости вращения 500-700 об/мин в течение 4 минут, 1000-1200 об/мин в течение 2 минут и затем со скоростью 500-600 об/мин в течение 4 минут, при этом при изменении скорости вращения делают перерыв 20 минут, причем после каждой остановки процесса производится интенсивное встряхивание чаши со смесью, после чего полученный порошок просеивают через сито с размером ячейки 20 мкм и, если масса отсева составляет менее 0,1% от массы загруженных ингредиентов, процесс гомогенизации заканчивают.

2. Лекарственное средство на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина для лечения гиперлипидемии, полученное способом по п. 1.

3. Лекарственное средство по п. 2, отличающееся тем, что содержит 8 мг полипренилфосфатов и 10 мг бета-ситостерина.