УЛУЧШЕННЫЕ ЭКСПРЕССИЯ И ПРОЦЕССИНГ ТРАНСГЕНА Российский патент 2020 года по МПК C12N15/90 C12N7/00 C07K16/00 C07K16/32 C12N15/85 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение направлено на обеспечение конструкций нуклеиновых кислот и белков, которые вовлечены или воздействуют на метаболические пути, опосредующие или влияющие на метаболизм клетки, например, на перемещение через мембрану эндоплазматического ретикулума (ЭР) и/или секрецию через цитоплазматическую мембрану, а также на способы влияния на клеточный метаболизм. Настоящее изобретение также направлено на получение и применение рекомбинантных клеток млекопитающих, в которых, например, модифицированы перемещение/секреция большого разнообразия гетерологичных белков (продуктов экспрессии трансгенов). Указанные способы, конструкции нуклеиновых кислот, как правило, разработаны таким образом, чтобы улучшить экспрессию трансгена.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Получение терапевтических белков биотехнологическими способами, а также генная и клеточная терапия зависят от успешной экспрессии трансгенов, внедренных в эукариотическую клетку. Для успешной экспрессии трансгена, как правило, требуется встраивание трансгена в хромосому хозяина, при этом указанная экспрессия ограничена, среди прочего, количеством встроенных копий трансгена и эпигенетическими эффектами, которые могут вызывать низкий уровень или нестабильность транскрипции и/или высокую клональную изменчивость. Недостаточный или пониженный транспорт продукта экспрессии трансгена из клетки также часто ограничивает получение терапевтических белков, а также генную и клеточную терапию.

Публикации и другие материалы, включая патенты, заявки на патент и номера доступа, используемые в данной заявке для иллюстрации настоящего изобретения и, в частности, для предоставления дополнительных подробностей касательно осуществления настоящего изобретения, полностью включены в данную заявку посредством ссылки.

Для повышения и стабилизации экспрессии трансгена в клетках млекопитающих все чаще применяют эпигенетические регуляторы, для того чтобы защитить трансгены от отрицательных эффектов положения (Bell и Felsenfeld, 1999). Данные эпигенетические регуляторы включают граничные или инсуляторные элементы, регуляторные области локусов (LCR), стабилизирующие и антирепрессорные (STAR) элементы, универсальные элементы, открывающие хроматин (UCOE), и упомянутые выше участки прикрепления к матриксу (MAR). Все эти эпигенетические регуляторы применялись для получения рекомбинантного белка в линиях клеток млекопитающих (Zahn-Zabal и др., 2001; Kim и др., 2004) и в способах генной терапии (Agarwal и др., 1998; Allen и др., 1996; Castilla и др., 1998).

Процессинг и транспорт из клетки продукта экспрессии трансгена часто сопряжен с различными затруднениями. Клетка, которая снабжена лишь средствами для процессинга и транспорта ее нативных белков, может быстро испытать перегрузку от транспорта некоторых типов продуктов экспрессии трансгенов, особенно когда они продуцируются на аномально высоких уровнях, что часто желательно, что приводит к агрегации продукта внутри клетки и/или, например, препятствует правильному фолдингу функционального белкового продукта.

Для преодоления затруднений, связанных с транспортом и процессингом, использовались различные подходы. Например, сконструированы клетки СНО с улучшенными секреторными свойствами путем экспрессии белков семейства SM Munc18c или Sly1, которые действуют как регуляторы транспорта мембранных везикул и, следовательно, экзоцитоза секретируемых белков (публикация заявки на патент США 20090247609). Х-бокс-связывающий белок 1 (Xbp1) - фактор транскрипции, который регулирует дифференцировку секреторных клеток и поддержание и экспансию ЭР, или различные протеиндисульфидизомеразы (PDI) применяли для снижения стресса ЭР и повышения секреции белка (Mohan и др. 2007). Другие попытки повышения секреции белка включали экспрессию шаперонов ERp57, кальнексина, кальретикулина и BiP1 в клетках СНО (Chung и др., 2004). Было показано, что экспрессия белка, индуцированного холодовым шоком, в частности, индуцированного холодом РНК-связывающего белка (CIRP), повышает выход рекомбинантного гамма-интерферона. Также были предприняты попытки сверхэкспрессировать белки секреторных комплексов. Тем не менее, например, Lakkaraju и др. (2008) сообщили, что экспрессия экзогенного SRP14 в человеческих клетках дикого типа (например, в клетках, которые не были сконструированы для экспрессии низких уровней SRP14) не улучшала эффективность секреции секретируемого белка щелочной фосфатазы.

Таким образом, существует потребность в эффективной, надежной экспрессии трансгена, например, при получении рекомбинантного белка и для генной терапии. Также существует потребность в успешном транспорте продукта экспрессии трансгена за пределы клетки.

На удовлетворение данной и других потребностей, существующих в данной области техники, направлены варианты реализации настоящего изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение в одном варианте реализации направлено на рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую:

(a) 5'- и 3'-транспозон-специфичный инвертированный концевой повтор (ITR),

(b) по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР), или функциональную РНК ТЕР, расположенную между 5'- и 3'-ITR, которая находится под контролем промотора, и

(c) возможно по меньшей мере один трансген, также расположенный между 5'- и 3'-ITR, который находится под контролем трансгенного промотора, при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты необязательно является частью вектора.

Указанная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере один эпигенетический регуляторный элемент, в частности, по меньшей мере один элемент MAR (участок прикрепления к матриксу).

Элемент MAR может быть расположен между 5'- и 3'-ITR. Трансген, такой как ген устойчивости к антибиотику или ген, кодирующий иммуноглобулин, возможно под контролем дополнительного промотора, может быть расположен между 5'- и 3'-ITR, например, между 5'-ITR и MAR.

Белок ТЕР или функциональная РНК ТЕР может представлять собой белок или функциональную РНК, которая непосредственно или опосредованно вовлечена во встраивание последовательностей нуклеиновых кислот в геном, в процессинг или трансляцию продукта трансгенной РНК или участвует в перемещении в ЭР, секреции, процессинге, фолдинге, транспорте ЭР-Гольджи-плазматическая мембрана, гликозилировании и/или другой посттрансляционной модификации белков, таких как продукты экспрессии трансгенов.

Белок ТЕР может представлять собой белок пути секреции белка, белок путей рекомбинации или репарации ДНК, белок процессинга белка или метаболический белок, включая шапероны, такие как BiP, или комбинацию перечисленных белков.

Белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков пути секреции белка: SRP14 человека (hSRP14), hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27 и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29 и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4, hCMPSAT, ST6Gal1 крысы (rST6Gal1), hCOMSC, Т-синтазу человека, hP4HA1, hP4HB, hGILZ, hCyPB, hNRF2, hHK1, hPDI, hPIN1, hSEPW1, hCALR, hDDOST, hHSP40, hATP5A1, hSERCA2, hPDIA4, hHSC70/HSPA8, hHYOU1, hCMP-SAS, беклин-1 человека, hERdj3, CHO-AGE, hWipl, hRTP4, hREEP2, hDPM1 и hDRiP78.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4 с последовательностью SEQ ID NO: 31, hCMPSAT с последовательностью SEQ ID NO: 33, rST6GaI1 с последовательностью SEQ ID NO: 35, hCOMSC с последовательностью SEQ ID NO: 37, Т-синтазы человека с последовательностью SEQ ID NO: 39, hP4HA1 с последовательностью SEQ ID NO: 41, hP4HB с последовательностью SEQ ID NO: 43, hGILZ с последовательностью SEQ ID NO: 45, hCyPB с последовательностью SEQ ID NO: 47, hNRF2 с последовательностью SEQ ID NO: 49, hHK1 с последовательностью SEQ ID NO: 51, hPDI с последовательностью SEQ ID NO: 53, hPIN1 с последовательностью SEQ ID NO: 55, hSEPW1 с последовательностью SEQ ID NO: 57, hCALR с последовательностью SEQ ID NO: 59, hDDOST с последовательностью SEQ ID NO: 62, hHSP40 с последовательностью SEQ ID NO: 64, hATP5A1 с последовательностью SEQ ID NO: 66, hSERCA2 с последовательностью SEQ ID NO: 68, hPDIA4 с последовательностью SEQ ID NO: 70, hHSC70 /HSPA8 с последовательностью SEQ ID NO: 72, hHYOU1 с последовательностью SEQ ID NO: 74, hCMP-SAS с последовательностью SEQ ID NO: 76, беклина-1 человека с последовательностью SEQ ID NO: 78, hERdj3 с последовательностью SEQ ID NO: 80, CHO-AGE с последовательностью SEQ ID NO: 82, hWip1 с последовательностью SEQ ID NO: 84, hRTP4 с последовательностью SEQ ID NO: 86, hREEP2 с последовательностью SEQ ID NO: 88, hDPM1 с последовательностью SEQ ID NO: 90 и hDRiP78 с последовательностью SEQ ID NO: 92 и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой шаперон, в частности, белок BiP, а конкретнее, модифицированное производное белка BiP дрозофилы (DroBiP), последовательность которого идентична на 80%, 90%, 95% или 100% последовательности SEQ ID NO: 60.

Элемент MAR можно выбрать из последовательностей SEQ ID NO: 1 (MAR 1-68), 2 (MAR 1_6), 3 (MAR X_S29), 4 (MAR S4), 5 (MAR лизоцима цыпленка), или он предпочтительно представляет собой сконструированный, в частности, перестроенный аналог, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: с 1 по 5 или любой из последовательностей SEQ ID NO: с 6 по 10.

Функциональная РНК ТЕР внутри указанной клетки может включать/состоять из последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или короткую шпилечную РНК (кшРНК), которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка пути рекомбинации или репарации ДНК, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.

Функциональная РНК ТЕР также может препятствовать экспрессии генов, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентична Rad51 с последовательностью SEQ ID NO: 93, Rad51B с последовательностью SEQ ID NO: 94, Rad51C с последовательностью SEQ ID NO: 95, Rad51D с последовательностью SEQ ID NO: 96, Xrcc2 с последовательностью SEQ ID NO: 99, Xrcc3 с последовательностью SEQ ID NO: 100, Rad52 с последовательностью SEQ ID NO: 97, Rad54 с последовательностью SEQ ID NO: 98, Brca1 с последовательностью SEQ ID NO: 101, Brca2 с последовательностью SEQ ID NO: 102, циклину D1 с последовательностью SEQ ID NO: 103, Ercc1 с последовательностью SEQ ID NO: 104, MDC1 с последовательностью SEQ ID NO: 105, Bard1 с последовательностью SEQ ID NO: 106, лигазе 1 с последовательностью SEQ ID NO: 107, Mre11 с последовательностью SEQ ID NO: 108 и/или 53BP1 с последовательностью SEQ ID NO: 109.

Длина рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты может составлять по меньшей мере 5000, 6000, 7000, 8000, 90000 или 10000 п.о.

5'- и 3'-ITR могут представлять собой 5'- и 3'-ITR транспозона Спящая Красавица или предпочтительно транспозона PiggyBac.

После первой трансфекции клетки млекопитающего одной из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот и второй последующей трансфекции дополнительной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей трансген, встраивание и/или экспрессия трансгена могут быть повышены в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой указанной первой трансфекции.

Последовательность, кодирующая ТЕР, или функциональная РНК ТЕР, упомянутые в данной заявке, могут представлять собой часть вектора, включая вектор экспрессии. Указанный вектор может содержать единичный элемент MAR, два или более элементов MAR, при этом указанный элемент(ы) может быть расположен между 5'- и 3'-ITR.

Например, указанный вектор может содержать два элемента MAR. Первый элемент MAR может быть расположен в 3'-5' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР и второй элемент MAR может быть расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, при этом указанный первый элемент MAR может включать элемент MAR 1_6 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, перестроенные MAR на основе MAR 1-6, а конкретнее, элементы, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательности SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR может включать элемент MAR 1-68 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.

Вектор также может содержать единичный элемент MAR. Указанный единичный элемент MAR может быть расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, при этом указанный единичный элемент MAR может представлять собой MAR 1-68, или элемент MAR Х-29, и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и может предпочтительно представлять собой элемент MAR Х-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3.

ТЕР или функциональная РНК ТЕР может находиться под контролем промотора EF1-альфа, и за ним возможно следует поли(А) сигнал гормона роста быка (BGH).

Вектор может содержать промотор(ы) и/или эмхансер(ы) или продукты их слияния, такие как промотор(ы) и/или энхансер(ы) GAPDH, SV40p, CMV, EF1-альфа клеток СНО, Actb СНО и/или Hspa5 СНО, или сконструированные продукты их слияния, такие как CGAPDH.

Промоторы, которые являются частью вектора, могут представлять собой GAPDH с последовательностью SEQ ID NO: 111, SV40p с последовательностью SEQ ID NO: 114, CMVp с последовательностью SEQ ID NO: 113, EF1-альфа СНО с последовательностью SEQ ID NO: 112, Actb СНО с последовательностью SEQ ID NO: 115, Hspa5 СНО с последовательностью SEQ ID NO: 116, и/или продукты их слияния, такие как CGAPDH с последовательностью SEQ ID NO: 11, или их последовательности нуклеиновых кислот могут быть идентичны указанным последовательностям более чем на 80%, 90%, 95% или 98%.

Настоящее изобретение также направлено на способ экспрессии ТЕР или функциональной РНК ТЕР, включающий:

обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей трансген, и вектор представляет собой вектор экспрессии, который экспрессирует ТЕР или функциональную РНК ТЕР, при этом ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с указанного вектора, возможно повышает экспрессию трансгена в указанной клетке млекопитающего на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

Указанный вектор может содержать единичный элемент MAR Х-29 и/или последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и при этом через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с указанного вектора, может повышать экспрессию интересующего гена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

Настоящее изобретение также направлено на рекомбинантную клетку млекопитающего, содержащую не более чем 20, 15, 10 или 5 рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот, предпочтительно встроенных в геном указанной клетки в виде единичных копий.

Выше отмечено, что белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков пути секреции белка: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27 и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29, и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4, hCMPSAT, rST6Gal1, hCOMSC, T-синтазу человека, hP4HA1, hP4HB, hGILZ, hCyPB, hNRF2, hHK1, hPDI, hPIN1, hSEPW1, hCALR, hDDOST, hHSP40, hATP5A1, hSERCA2, hPDIA4, hHSC70/HSPA8, hHYOU1, hCMP-SAS, беклин-1 человека, hERdj3, CHO-AGE, hWip1, hRTP4, hREEP2, hDPM1 и hDRiP78.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4 с последовательностью SEQ ID NO: 31, hCMPSAT с последовательностью SEQ ID NO: 33, rST6Gal1 с последовательностью SEQ ID NO: 35, hCOMSC с последовательностью SEQ ID NO: 37, Т-синтазы человека с последовательностью SEQ ID NO: 39, hP4HA1 с последовательностью SEQ ID NO: 41, hP4HB с последовательностью SEQ ID NO: 43, hGILZ с последовательностью SEQ ID NO: 45, hCyPB с последовательностью SEQ ID NO: 47, hNRF2 с последовательностью SEQ ID NO: 49, hHK1 с последовательностью SEQ ID NO: 51, hPDI с последовательностью SEQ ID NO: 53, hPIN1 с последовательностью SEQ ID NO: 55, hSEPW1 с последовательностью SEQ ID NO: 57, hCALR с последовательностью SEQ ID NO: 59, hDDOST с последовательностью SEQ ID NO: 62, hHSP40 с последовательностью SEQ ID NO: 64, hATP5A1 с последовательностью SEQ ID NO: 66, hSERCA2 с последовательностью SEQ ID NO: 68, hPDIA4 с последовательностью SEQ ID NO: 70, hHSC70/HSPA8 с последовательностью SEQ ID NO: 72, hHYOU1 с последовательностью SEQ ID NO: 74, hCMP-SAS с последовательностью SEQ ID NO: 76, беклина-1 человека с последовательностью SEQ ID NO: 78, hERdj3 с последовательностью SEQ ID NO: 80, CHO-AGE с последовательностью SEQ ID NO: 82, hWip1 с последовательностью SEQ ID NO: 84, hRTP4 с последовательностью SEQ ID NO: 86, hREEP2 с последовательностью SEQ ID NO: 88, hDPM1 с последовательностью SEQ ID NO: 90 и hDRiP78 с последовательностью SEQ ID NO: 92, и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой шаперон, в частности, белок BiP, а конкретнее, сконструированное производное белка BiP дрозофилы (DroBiP), последовательность которого на 80%, 90%, 95% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 60.

Функциональная РНК ТЕР внутри рекомбинантной клетки млекопитающего может включать/состоять из последовательности нуклеиновой кислоты (последовательностей нуклеиновых кислот), кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка рекомбинации, предпочтительно гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1. Последовательность нуклеиновых кислот может быть по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентична Rad51 с последовательностью SEQ ID NO: 93, Rad51B с последовательностью SEQ ID NO: 94, Rad51C с последовательностью SEQ ID NO: 95, Rad51D с последовательностью SEQ ID NO: 96, Xrcc2 с последовательностью SEQ ID NO: 99, Xrcc3 с последовательностью SEQ ID NO: 100, Rad52 с последовательностью SEQ ID NO: 97, Rad54 с последовательностью SEQ ID NO: 98, Brcal с последовательностью SEQ ID NO: 101, Brca2 с последовательностью SEQ ID NO: 102, циклину D1 с последовательностью SEQ ID NO: 103, Ercc1 с последовательностью SEQ ID NO: 104, MDC1 с последовательностью SEQ ID NO: 105, Bard1 с последовательностью SEQ ID NO: 106, лигазе 1 с последовательностью SEQ ID NO: 107, Mre11 с последовательностью SEQ ID NO: 108 и/или 53BP1 с последовательностью SEQ ID NO: 109.

Рекомбинантная клетка млекопитающего может представлять собой первичную стволовую клетку, клетку хомячка, например, клетку яичника китайского хомячка (СНО), или клетку человека, например, клетку HEK293.

Настоящее изобретение также направлено на рекомбинантную клетку млекопитающего, содержащую:

a.) по меньшей мере одну функциональную РНК ТЕР и/или по меньшей мере одну рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ТЕР или кодирующую функциональную РНК ТЕР,

и

b.) рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую:

(i) по меньшей мере один интересующий трансген, и

(ii) возможно, элемент MAR.

Выше отмечено, что белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков пути секреции белка: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27, и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29 и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой один или более из следующих белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4, hCMPSAT, rST6GaI1, hCOMSC, T-синтазу человека, hP4HA1, hP4HB, hGILZ, hCyPB, hNRF2, hHK1, hPDI, hPIN1, hSEPW1, hCALR, hDDOST, hHSP40, hATP5A1, hSERCA2, hPDIA4, hHSC70/HSPA8, hHYOU1, hCMP-SAS, беклин-1 человека, hERdj3, CHO-AGE, hWip1, hRTP4, hREEP2, hDPM1 и hDRiP78.

Белок ТЕР также может соответствовать одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4 с последовательностью SEQ ID NO: 31, hCMPSAT с последовательностью SEQ ID NO: 33, rST6GaI1 с последовательностью SEQ ID NO: 35, hCOMSC с последовательностью SEQ ID NO: 37, Т-синтазы человека с последовательностью SEQ ID NO: 39, hP4HA1 с последовательностью SEQ ID NO: 41, hP4HB с последовательностью SEQ ID NO: 43, hGILZ с последовательностью SEQ ID NO: 45, hCyPB с последовательностью SEQ ID NO: 47, hNRF2 с последовательностью SEQ ID NO: 49, hHK1 с последовательностью SEQ ID NO: 51, hPDI с последовательностью SEQ ID NO: 53, hPIN1 с последовательностью SEQ ID NO: 55, hSEPW1 с последовательностью SEQ ID NO: 57, hCALR с последовательностью SEQ ID NO: 59, hDDOST с последовательностью SEQ ID NO: 62, hHSP40 с последовательностью SEQ ID NO: 64, hATP5A1 с последовательностью SEQ ID NO: 66, hSERCA2 с последовательностью SEQ ID NO: 68, hPDIA4 с последовательностью SEQ ID NO: 70, hHSC70/HSPA8 с последовательностью SEQ ID NO: 72, hHYOU1 с последовательностью SEQ ID NO: 74, hCMP-SAS с последовательностью SEQ ID NO: 76, беклина-1 человека с последовательностью SEQ ID NO: 78, hERdj3 с последовательностью SEQ ID NO: 80, CHO-AGE с последовательностью SEQ ID NO: 82, hWip1 с последовательностью SEQ ID NO: 84, hRTP4 с последовательностью SEQ ID NO: 86, hREEP2 с последовательностью SEQ ID NO: 88, hDPM1 с последовательностью SEQ ID NO: 90 и hDRiP78 с последовательностью SEQ ID NO: 92 и/или может соответствовать последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Белок ТЕР может представлять собой шаперон, в частности, белок BiP, а конкретнее, синтетическое производное белка BiP дрозофилы (DroBiP), последовательность которого на 80%, 90%, 95% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 60.

Функциональная РНК может представлять собой временно трансфицированную миРНК или кшРНК, которая транскрибируется с указанной по меньшей мере одной изолированной последовательности нуклеиновой кислоты, при этом указанная миРНК или указанная процессированная кшРНК представляет собой антисмысловую РНК длиной 20, 21, 22, 23, 24 или 25 пар оснований, которая полностью комплементарна 20, 21, 22, 23, 24 или 25 последовательным нуклеотидам мРНК по меньшей мере одного целевого гена, который является частью рекомбинантного пути НГСК (негомологичного соединения концов), ГР (гомологичной рекомбинации), ОМСК (опосредованного микрогомологией соединения концов) или представляет собой белок репарации ДНК, такой как MDC1 (медиатор контрольных точек повреждения ДНК 1).

Указанный по меньшей мере один целевой ген, который может быть частью:

- репарации ДНК и НГСК, представляет собой

53ВР1 (белок 1, связывающий опухолевый супрессор р53),

- ГР, представляет собой

Rad51 (белок репарации ДНК RAD51), Rad51B (гомолог 2 белка репарации ДНК RAD51), Rad51C (гомолог 3 белка репарации ДНК RAD51),

Rad51D (гомолог 4 белка репарации ДНК RAD51), Rad52 (белок репарации ДНК RAD52), Rad54 (белок репарации и рекомбинации ДНК RAD54),

Xrcc2 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, исправляющая (комплементирующая) нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 2),

Xrcc3 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, комплементирующая нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 3),

Brca1 (рак молочной железы 1, раннее начало),

Brca2 (рак молочной железы 2, раннее начало),

Bard1 (ассоциированный с BRCA1 RING-домен 1),

- ОМСК, представляет собой

Ercc1 (эксцизионная репарация, кросс-комплементирующая нарушенную репарацию у грызунов, группа комплементации 1),

Mre11 (мейотическая рекомбинация 11)

лигазу 1 (ДНК-лигаза 1),

и/или

представляет собой белок репарации ДНК MDC1.

Целевые гены могут представлять собой нуклеиновые кислоты, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентична Rad51 с последовательностью SEQ ID NO: 93, Rad51B с последовательностью SEQ ID NO: 94, Rad51C с последовательностью SEQ ID NO: 95, Rad51D с последовательностью SEQ ID NO: 96, Xrcc2 с последовательностью SEQ ID NO: 99, Xrcc3 с последовательностью SEQ ID NO: 100, Rad52 с последовательностью SEQ ID NO: 97, Rad54 с последовательностью SEQ ID NO: 98, Brca1 с последовательностью SEQ ID NO: 101, Brca2 с последовательностью SEQ ID NO: 102, циклину D1 с последовательностью SEQ ID NO: 103, Ercc1 с последовательностью SEQ ID NO: 104, MDC1 с последовательностью SEQ ID NO: 105, Bard1 с последовательностью SEQ ID NO: 106, лигазе 1 с последовательностью SEQ ID NO: 107, Mre11 с последовательностью SEQ ID NO: 108 и/или 53BP1 с последовательностью SEQ ID NO: 109.

С указанного по меньшей мере одного трансгена можно экспрессировать терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, такой как эритропоэтин, или фактор роста, и при этом необязательно встраивание и/или экспрессия трансгена повышена в рекомбинантной клетке млекопитающего по сравнению с клеткой, не содержащей указанную рекомбинантную молекулу(ы) нуклеиновой кислоты.

Рекомбинантная клетка млекопитающего может содержать по меньшей мере две функциональные РНК ТЕР, при этом одна или обе РНК ТЕР представляют собой временно трансфицированные миРНК, или экспрессируются с указанной изолированной последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональную РНК ТЕР.

Рекомбинантная клетка млекопитающего может содержать элемент MAR.

Настоящее изобретение также направлено на способ трансфекции клеток млекопитающих, в частности, клеток хомячка, включающий:

трансфекцию, возможно при первой трансфекции, указанных клеток млекопитающих

(i) по меньшей мере одной из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот по любому из пп. 1-13 и/или

(ii) по меньшей мере одной изолированной функциональной РНК ТЕР и по меньшей мере одним трансгеном, который необязательно является частью рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты, которой возможно трансфицируют при второй, последующей трансфекции, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая узнает указанные 5'- и 3'-ITR.

Рекомбинантную клетку млекопитающего можно трансфицировать более чем одной молекулой нуклеиновой кислоты, включая по меньшей мере две, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот, кодирующих один, два или три из следующих белков: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX.

Ее также можно трансфицировать hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27, и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29, и/или последовательностями аминокислот, идентичными более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Любые из рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот могут представлять собой часть вектора, при этом можно осуществить котрансфекцию указанными векторами.

Котрансфекция векторами, кодирующими несколько белков ТЕР, предпочтительно котрансфекция рекомбинантными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими белки SRP14, SRP9 и SRP54, может повышать встраивание и/или экспрессию трансгена в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой такой котрансфекции. Котрансфекция векторами, содержащими последовательности нуклеиновых кислот, которые по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 20, также входит в объем настоящего изобретения.

Можно получить множество указанных клеток млекопитающих, которые стабильно экспрессируют указанный белок ТЕР или функциональную РНК ТЕР, чтобы получить рекомбинантные клетки млекопитающих, и при этом указанное количество рекомбинантных клеток млекопитающих может не зависеть от наличия указанного элемента MAR. Указанные клетки млекопитающих можно трансфицировать два и возможно три раза.

Предпочтительно, по меньшей мере 30%, 40% или 45% указанных клеток млекопитающих могут стать рекомбинантными клетками млекопитающих и экспрессировать указанный трансген.

Клетку млекопитающего можно трансфицировать указанной по меньшей мере одной изолированной функциональной РНК ТЕР и вектором, содержащим указанный по меньшей мере один трансген и необязательно 3'-ITR и 5'-ITR, фланкирующие указанный по меньшей мере один трансген, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая узнает указанные 5'- и 3'-ITR.

Трансген может представлять собой терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, цитокин или фактор роста.

Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты может необязательно содержать маркер отбора, и при этом указанный по меньшей мере один трансген экспрессируется

(а) без отбора по указанному маркеру, или

(b) с отбором по указанному маркеру, например, путем добавления селекционного агента в культуральную среду, и

(c) в отсутствие транспозазы, или

(d) в присутствии транспозазы.

Функциональная РНК ТЕР может кодироваться рекомбинантными последовательностями нуклеиновых кислот, кодирующими кшРНК или микроРНК, или может включать/состоять из миРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bardl, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.

Функциональная РНК ТЕР также может препятствовать экспрессии генов, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентична Rad51 с последовательностью SEQ ID NO: 93, Rad51B с последовательностью SEQ ID NO: 94, Rad51C с последовательностью SEQ ID NO: 95, Rad51D с последовательностью SEQ ID NO: 96, Xrcc2 с последовательностью SEQ ID NO: 99, Xrcc3 с последовательностью SEQ ID NO: 100, Rad52 с последовательностью SEQ ID NO: 97, Rad54 с последовательностью SEQ ID NO: 98, Brca1 с последовательностью SEQ ID NO: 101, Brca2 с последовательностью SEQ ID NO: 102, циклину D1 с последовательностью SEQ ID NO: 103, Ercc1 с последовательностью SEQ ID NO: 104, MDC1 с последовательностью SEQ ID NO: 105, Bardl с последовательностью SEQ ID NO: 106, лигазе 1 с последовательностью SEQ ID NO: 107, Mre11 с последовательностью SEQ ID NO: 108 и/или 53BP1 с последовательностью SEQ ID NO: 109.

Встраивание и/или экспрессию трансгена можно повысить в такой клетке по сравнению с клеткой, не трансфицированной указанными изолированными молекулами нуклеиновых кислот и/или по меньшей мере одной из указанных изолированных функциональных РНК ТЕР.

Настоящее изобретение также направлено на набор, в одном контейнере содержащий по меньшей мере один вектор, содержащий любую из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот согласно пп. 1-13, и во втором необязательном контейнере содержащий вектор, кодирующий подходящую транспозазу, и в дополнительном контейнере содержащий инструкцию по применению указанного вектора или векторов.

Предложен указанный выше набор, в котором более чем один вектор предусмотрен в одном или более контейнерах и в котором белки ТЕР представляют собой по меньшей мере два из следующих белков: шаперон, SRP14, SRP9, SRP54, SR или транслокон.

Предложен указанный выше набор, в котором функциональная(ые) РНК ТЕР внутри указанного вектора(ов) включает(ют)/состоит(ят) из последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих микроРНК, миРНК или кшРНК, которые препятствуют экспрессии по меньшей мере одного гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Хгсс2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1, и предпочтительно в дополнительном контейнере указанный набор содержит одну или более миРНК, которые препятствуют экспрессии по меньшей мере одного другого гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.

Ген гомологичной рекомбинации может соответствовать нуклеиновым кислотам, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 100% идентична Rad51 с последовательностью SEQ ID NO: 93, Rad51B с последовательностью SEQ ID NO: 94, Rad51C с последовательностью SEQ ID NO: 95, Rad51D с последовательностью SEQ ID NO: 96, Xrcc2 с последовательностью SEQ ID NO: 99, Xrcc3 с последовательностью SEQ ID NO: 100, Rad52 с последовательностью SEQ ID NO: 97, Rad54 с последовательностью SEQ ID NO: 98, Brca1 с последовательностью SEQ ID NO: 101, Brca2 с последовательностью SEQ ID NO: 102, циклину D1 с последовательностью SEQ ID NO: 103, Ercc1 с последовательностью SEQ ID NO: 104, MDC1 с последовательностью SEQ ID NO: 105, Bard1 с последовательностью SEQ ID NO: 106, лигазе 1 с последовательностью SEQ ID NO: 107, Mre11 с последовательностью SEQ ID NO: 108 и/или 53BP1 с последовательностью SEQ ID NO: 109.

Настоящее изобретение также направлено на применение рекомбинантных нуклеиновых кислот, описанных в данной заявке, и/или рекомбинантных клеток млекопитающих, описанных в данной заявке, предпочтительно для повышения встраивания и/или экспрессии трансгена.

Настоящее изобретение также направлено на вектор экспрессии, содержащий:

(a) трансген, который фланкирован в 3'-5' направлении промотором и в 5'-3' направлении сигналом полиаденилирования,

(b) единичный элемент MAR в 5'-3' направлении от сигнала полиаденилирования, или

(c) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от места встраивания указанного трансгена.

Единичный или первый и второй элементы MAR можно выбрать из элементов MAR 1_68, 1_6, 1_6R2, 1_68R, 1_68R2, X_29R3 или X_29 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 или 10.

Единичный или первый и второй элемент(ы) MAR можно выбрать из перестроенных элементов MAR 1_6R2, 1_68R, 1_68R2 или X_29R3 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 6, 7, 8, или 10, при этом необязательно указанный элемент(ы) MAR повышает экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70% по сравнению с их неперестроенными аналогами.

Промотор может представлять собой промотор EF1-альфа и сигнал полиаденилирования представляет собой поли(А) сигнал BGH.

Указанный вектор может содержать промотор(ы) и/или энхансер(ы) или продукты их слияния, такие как GAPDH, CGAPD, CSV40p, CMVp, СНО Ef1-альфа, Actb СНО или Hspa5 СНО.

Промоторы могут представлять собой промоторы GAPDH с последовательностью SEQ ID NO: 111, CGAPDH с последовательностью SEQ ID NO: 11, SV40p с последовательностью SEQ ID NO: 114, CMVp с последовательностью SEQ ID NO: 113, EF1-альфа СНО с последовательностью SEQ ID NO: 112, Actb СНО с последовательностью SEQ ID NO: 115 и/или Hspa5 СНО с последовательностью SEQ ID NO: 116 и последовательности нуклеиновых кислот, идентичные более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям.

Промотор может представлять собой промотор GAPDH и включать энхансер CMV.

Первый и/или второй MAR, энхансер, промотор, интересующий трансген и сигнал полиаденилирования могут быть расположены между 5'- и 3'-ITR.

В некотором варианте реализации указанный вектор экспрессии может содержать:

(a) единичный элемент MAR в 5'-3' направлении от сигнала полиаденилирования, при этом указанный единичный элемент MAR предпочтительно представляет собой элемент MAR 1-68 или MARX-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или SEQ ID NO: 9, и предпочтительно представляет собой элемент MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, или

(b) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена, при этом указанный первый элемент MAR предпочтительно включает элемент 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, идентична перестроенным элементам MAR на основе MAR 1-6, в частности, элементам, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательности SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR, который предпочтительно включает элемент MAR 1-68, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.

Вектор экспрессии может содержать единичный элемент MAR, и указанный единичный элемент MAR может быть расположен в 5'-3' направлении от сайта полиаденилирования и представляет собой MAR 1-68 или MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, идентична перестроенным элементам MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элементам, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и может предпочтительно представлять собой полученный из MAR Х-29 элемент, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 3.

Указанный первый элемент MAR может находиться в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR может находиться в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена, при этом указанный первый элемент MAR может включать элемент MAR 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO 2, и указанный второй элемент MAR может включать элемент MAR 1_68, и/или его последовательность может быть по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 1.

Настоящее изобретение также направлено на способ экспрессии трансгена, включающий:

обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей один из упомянутых выше векторов, содержащих указанный трансген и экспрессирующих указанный трансген, при этом указанный элемент(ы) MAR может повышать экспрессию указанного трансгена предпочтительно на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%. Указанный вектор может содержать единичный элемент MAR Х_29 и/или нуклеиновую кислоту, последовательность которой по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и при этом через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования указанный элемент MAR может повышать экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1. Конструирование вектора, несущего транспозон.

Для того, чтобы проверить, может ли влиять добавление элемента MAR к транспозону РВ (PiggyBac) на эффективность транспозиции и экспрессию трансгена, и чтобы оценить, оказывало ли расположение MAR в конструкции какое-либо влияние на данные эффекты, разработали серию донорных конструкций транспозонов, содержащих ген зеленого флуоресцентного белка (GFP) и ген устойчивости к пуромицину (Puro), в которые встроили MAR 1_68 или контрольную нейтральную спейсерную последовательность ДНК в различные положения в указанной плазмиде. Исходную плазмиду, несущую транспозон, Puro-GFP без вставки использовали в качестве контроля транспозиции, чтобы отличить вклад увеличенного размера транспозона от влияния добавления MAR или спейсерной последовательности.

Фиг. 2. Векторы, несущие транспозоны: эффективность транспозиции.

Эффективность транспозиции различных конструкций, несущих транспозоны, измеряли путем оценки (А) процента клеток, экспрессирующих GFP, после трансфекции и трех недель культивирования без селекции антибиотиком и (В) путем подсчета устойчивых к пуромицину колоний.

Фиг. 3. Векторы, несущие транспозоны: уровень экспрессии.

Анализ уровня экспрессии, обеспеченного различными векторами, несущими транспозоны, трансфицированными совместно (+РВ) или без (-РВ) плазмиды, экспрессирующей транспозазу, путем измерения уровней флуоресценции GFP в клетках СНО после 3 недель культивирования без селекции (А) или при селекции (В) по устойчивости к пуромицину после трансфекции, с учетом флуоресценции только GFP-положительных клеток.

Фиг. 4. Влияние MAR и транспозазы на встраивание трансгена в геном.

Количество встроенных копий GFP-трансгена определяли, применяя количественную ПЦР, и значения нормировали по отношению к клеточному гену В2М, применяя геномную ДНК, выделенную из не подвергнутых селекции клеток СНО (А), или устойчивых к пуромицину клеток (В), полученных как описано в подписях к фигурам 1-3. Значения представляют средние значения ± стандартная ошибка среднего (n=3). *Р<0,05.

Фиг. 5. Экспрессия трансгена относительно трансгена.

Оценка внутреннего экспрессионного потенциала векторов независимо от их способности встраиваться в геном, без селекции (А) и при селекции (В) пуромицином.

Фиг. 6. Влияние экспрессии секреторных белков с векторов на основе транспозонов и плазмидных векторов на экспрессию рекомбинантного белка (трансгена). Векторы на основе транспозонов или обычные плазмидные векторы сконструировали для экспрессии секреторных белков SRP9, SRP14, SRP54, альфа и бета субъединиц (SR) рецептора SRP или транслокона. Векторы на основе транспозонов котрансфицировали с вектором экспрессии транспозазы PiggyBac (правая панель), тогда как не основанные на транспозонах плазмидные векторы трансфицировали отдельно (левая панель) в клон клетки, экспрессирующей антитело инфликсимаб, как описано в данном тексте. После трех недель культивирования при селекции (левая панель) или без селекции (правая панель) анализировали уровни секретируемого антитела инфликсимаба в культуральных супернатантах. Можно увидеть, что удельная продуктивность, которая представляет собой относительную экспрессию в клетке, содержащей последовательность, кодирующую белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР), или функциональную РНК ТЕР, повышалась при применении вектора, несущего транспозон, от 0,25-1,5 до 1-2,5, соответственно, по сравнению с исходной клеткой без ТЕР.

Фиг. 7. Экспрессия рекомбинантного белка в суспензиях подвергнутых электропорации клеток СНО-М.

(A) Клетки СНО-М, которые подвергали электропорации один или два раза несущим MAR Х-29 вектором, экспрессирующим GFP и транспозон, в присутствии (+РВ) или отсутствие (-РВ) транспозазы piggyBac. Показан процент стабильно экспрессирующих GFP клеток после 3 недель культивирования, осуществленного в отсутствие селекции.

(B) Среднее значение флуоресценции GFP в GFP-положительных клетках.

(C) кДНК, кодирующие легкие и тяжелые цепи антитела бевацизумаба (Beva), адалимумаба (Adal) и ритуксимаба (Ritu), встраивали вместо GFP в плазмиды, несущие транспозон, содержащие MAR Х29. Клетки СНО-М подвергали электропорации три раза с интервалами по 12 дней конструкциями, несущими транспозоны, содержащими легкую и тяжелую цепь, вместе с вектором экспрессии, несущим транспозазу piggyBac. Показаны уровни иммуноглобулина, секретируемого в культуральные супернатанты совокупностью поликлональных клеток, которых растили без селекции (незакрашенные столбики). В качестве альтернативы, не подвергнутые селекции поликлональные популяции клеток подвергали сортировке путем пэннинга (просеивания) клеток, на поверхностях которых были выставлены иммуноглобулины, применяя магнитные микрогранулы. Показаны уровни иммуноглобулинов, секретируемых не подвергнутыми сортировке популяциями (закрашенные столбики).

(D) Популяции трансфицированных клеток подвергали сортировке для обнаружения экспрессирующих иммуноглобулины колоний, применяя устройство, собирающее колонии, и по два клона, экспрессирующих каждый из трех указанных иммуноглобулинов, растили в культурах с подпиткой в биореакторах в виде центрифужных пробирок. Показаны уровни секретируемых иммуноглобулинов, и их определяли также, как и для панели (С).

Фиг. 8. Гетерологичная экспрессия SRP14 улучшает секрецию трастузумаба и восстанавливает секрецию инфликсимаба.

Клоны HP и LP СНО-K1, экспрессирующие иммуноглобулины трастузумаб (А) или инфликсимаб (В) на наиболее высоких из полученных уровней, повторно стабильно трансфицировали вектором экспрессии SRP14, и выделяли моноклональные популяции. Оценивали рост и продуктивность клеток в условиях периодической культуры для полученных субклонов, обозначенных от А до Е. Концентрацию клеток (клетки/мл) и титр IgG (мкг/мл) наносили на график для каждого дня отбора образцов на протяжении 7 дней культивирования. (С) Распределение удельной продуктивности субклонов трастузумаба (HP) и инфликсимаба (LP) после трансфекции вектором экспрессии SRP14 (дорожки S) по сравнению с таковой для исходных клонов HP и LP (-). (D) Определяли относительные уровни мРНК SRP14 для 5 отдельных субклонов А-Е SRP14-LP и исходного контрольного клона LP, и наносили их на график в зависимости от удельной продуктивности IgG для 4 полученных культур. Средние значения и стандартные отклонения уровней мРНК и удельной продуктивности выражали в виде кратности превышения соответствующих значений для контрольного клона LP.

Фиг. 9. Гетерологичная экспрессия SRP14 опосредует высокий выход с трудом экспрессируемого иммуноглобулина в процессе получения.

Трансфицированные вектором, несущим SRP14, субклон HP В, экспрессирующий трастузумаб (А), и субклон LP Е, экспрессирующий инфликсимаб (В), проанализированные на фиг. 8, культивировали в вентилируемых встряхиваемых колбах объемом 125 мл в культурах с подпиткой с рабочим объемом 25 мл и определяли концентрацию жизнеспособных клеток и титр IgG в течение 11-дневного периода.

Фиг. 10. Экспрессия SRP14 нарушает агрегацию легких цепей в клонах клеток СНО.

(А) Собранные путем центрифугирования супернатанты и осадки пермеабилизованных Triton Х100 (Tx100) клеток анализировали с помощью ЭФ в ПААГ/ДСН, как изображено на панелях с обозначением растворимых в Тх-100 и нерастворимых в Тх-100 агрегатов, соответственно, для субклона Е SRP14-LP, полученного из LP, и субклона В SRP14-HP, полученного из HP (дорожки S), или для субклонов СНО, экспрессирующих контрольный белок GFP (дорожки G). Стрелками показаны недостаточно процессированная свободная легкая цепь (LC) и агрегировавшая (агр.) LC. (В) Осуществляли анализ с вытеснением для различных промежуточных вариантов агрегации LC, НС и IgG, полученных в клоне Е SRP14-LP и LP-контрольном клоне Е, результаты которого показаны на данной фигуре.

Фиг. 11. Влияние совместной экспрессии субъединиц SRP, SR и транслокона на секрецию иммуноглобулина.

(А) Клон LP Е, экспрессирующий инфликсимаб, повторно трансфицировали различными комбинациями векторов экспрессии на основе транспозонов, несущих SRP, SR и транслокон. Удельную продуктивность полученных популяций клеток затем оценивали при периодическом культивировании и представили в виде % от значений в пикограммах на клетку в день (pcd) для LP-контрольных клеток. На диаграммах размаха представлены средняя, верхняя и нижняя квартили нормированных удельных продуктивностей, определенных в день 3 для независимых серий культивирования. (В) Субклон клетки Е, экспрессирующий SRP14 и продуцирующий инфликсимаб, повторно трансфицировали различными комбинациями векторов экспрессии на основе транспозонов, несущих SR и транслокон. Удельная продуктивность популяций клеток представлена аналогично панели А.

Фиг. 12. Модель восстановления секреции инфликсимаба экспрессирующими SRP14 клонами

Модель фолдинга и секреции IgG клонами с низкой продуцирующей способностью до (А) и после (В) сверхэкспрессии субъединиц SRP/транслокона. Полученные результаты свидетельствуют о том, что вновь синтезированная LC, продуцируемая клонами с низкой продуцирующей способностью, недостаточно процессируется и имеет неправильный фолдинг. Недостаточный процессинг сигнального пептида LC инфликсимаба может приводить к насыщению аппарата котрансляционной транслокации ЭР (панель А, номер 1). Ее агрегация в ЭР внутри не способных к сборке IgG агрегировавших форм LC (панель А, номер 2) вызывает ЭР-стресс и вызывает образование подобной аутофагосоме структуры (панель А, номер 3). Сверхэкспрессия SRP14 и других компонентов белков SRP/транслокона полностью восстанавливала процессинг и секрецию инфликсимаба IgG (панель В). Активность SRP14, останавливающая элонгацию, возможно задерживает перемещение LC в ЭР в процессе трансляции ее мРНК (панель В, номер 1). Это, в свою очередь, будет способствовать правильному процессингу LC и ее правильному взаимодействию с осуществляющими фолдинг шаперонами в ЭР (панель В, номер 2). Поддержание вновь синтезированной LC в состоянии, позволяющем сборку IgG, таким образом, восстанавливает высокий выход секреции полностью собранных антител (панель В, номер 3).

Фиг. 13. Влияние подавления ГР и НГСК молекулами миРНК на экспрессию.

Кратность различий в проценте GFP-положительных клеток (по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной плазмидой GFP, представленными на данной фигуре как 1,0), представляющем частоты событий рекомбинации в необработанных клетках (ложных), клетках, обработанных миРНК отрицательного контроля (миОтр), миРНК против факторов НГСК (миРНК против Ku70, Ku80 и каталитической субъединицы ДНК-зависимой протеинкиназы (миKu70+80+ДНК-ПКкс)) и миРНК против ГР (миRad51). На дорожках GFP показан положительный контроль экспрессирующих GFP клеток. На дорожках, обозначенных «нерасщепленные ГР» и «нерасщепленные НГСК», показаны клетки отрицательного контроля, т.е. клетки, трансфицированные кольцевыми репортерными плазмидами ГР и НГСК. На дорожках, обозначенных «ГР I-Scel» и «НГСК I-Scel», представлены клетки, трансфицированные расщепленными Scel репортерными плазмидами, которые восстанавливают экспрессию GFP после репарации расщепления ДНК путем гомологичной рекомбинации или негомологичного соединения концов, соответственно. На данной фигуре показана эффективность ингибирования ГР или НГСК молекулами миРНК, о чем свидетельствует процент GFP-положительных клеток, который нормировали на процент dsRed-положительных клеток и выразили в виде кратности изменения относительно процента контрольных экспрессирующих GFP клеток, который приравняли к 1. Среднее значение для 3 экспериментов, усы показывают стандартную ошибку среднего. Статистическую значимость определяли с помощью непарного критерия Стьюдента; уровень значимости р<0,05 (*) и р<0,01 (**).

Фиг. 14. Влияние элементов MAR на подавление НГСК молекулами миРНК.

Показана кратность повышения экспрессии и встраивания GFP в клетки СНО, обработанные молекулами миРНК, направленными против факторов НГСК, и повторно трансфицированные плазмидами GFP или MAR-GFP. Средняя флуоресценция GFP, число копий и флуоресценция на копию GFP показаны в виде кратности превышения результата, полученного для необработанных клеток (обозначенных как «ложные»), трансфицированных плазмидой GFP. А) Результаты проточной цитометрии, В) анализ числа копий GFP в геноме с помощью количественной ПЦР, С) средняя флуоресценция каждого встроенного гена GFP (рассчитанная для каждого эксперимента как отношение экспрессии к числу копий). Среднее значение для 3 или более экспериментов; статистическую значимость определяли с помощью непарного критерия Стьюдента. Звездочками указаны значимые различия между обработанным миРНК образцом и соответствующим необработанным контролем; уровни значимости: p<0,05 (*), p<0,01 (**); усы показывают стандартную ошибку среднего.

Фиг. 15. Влияние элементов MAR на подавление ГР молекулами миРНК.

Показана кратность повышения экспрессии и встраивания GFP в клетки СНО, обработанные молекулами миРНК, направленными против факторов ГР, и повторно трансфицированные плазмидами GFP или MAR-GFP. Средняя флуоресценция GFP, число копий и флуоресценция на копию GFP показаны в виде кратности превышения результата, полученного для необработанных клеток (обозначенных как «ложные»), трансфицированных плазмидой GFP. А) Результаты проточной цитометрии, В) анализ числа копий GFP в геноме с помощью количественной ПЦР, С) средняя флуоресценция каждого встроенного гена GFP (рассчитанная для каждого эксперимента как отношение экспрессии к числу копий). Среднее значение для 3 или более экспериментов; статистическую значимость определяли с помощью непарного критерия Стьюдента. Звездочками указаны значимые различия между обработанным миРНК образцом и соответствующим необработанным контролем; уровни значимости: р<0,05 (*), р<0,01 (**); усы показывают стандартную ошибку среднего.

Фиг. 16. Влияние элементов MAR на подавление ОМСК молекулами миРНК.

Показана экспрессия и встраивание GFP в клетки СНО, обработанные молекулами миРНК, направленными против факторов ОМСК (и некоторых факторов ГР), и повторно трансфицированные плазмидами GFP (А) или MAR-GFP (В). Средняя флуоресценция GFP, число копий и флуоресценция на копию GFP показаны в виде кратности превышения результата, полученного для необработанных клеток (обозначенных как «ложные»), трансфицированных плазмидой GFP. На фигурах показаны результаты проточной цитометрии. Показано среднее значение для количества экспериментов, указанных внизу под графиком. Клетки, трансфицированные миMDC1, экспрессировали GFP даже без MAR на уровне, в 11,8 раз превышающем таковой для клеток, не трансфицированных миMDC. Особенно хороших результатов также можно было добиться для некоторых плазмид, которые не содержали MAR, а именно, для миBard1 и миLigl.

Фиг. 17. Влияние опосредованного миРНК подавления белка ГР.

На фигуре показано, что можно добиться более высокой экспрессии GFP и иммуноглобулина клетками СНО-М, стабильно экспрессирующими кшРНК, направленную против Rad51. Клетки СНО-М трансфицировали вектором экспрессии, полученным на основе транспозона PiggyBac, экспрессирующим кшРНК, направленную против Rad51, и полученную поликлональную популяцию клеток, а также клоны клеток, полученные из нее, повторно трансфицировали плазмидой, экспрессирующей GFP, наряду с исходными клетками СНО-М. Флуоресценцию GFP исходных СНО-М, популяции клеток, экспрессирующих Rad51-кшPHK, и полученных клонов оценивали через 10 дней после отбора на основании стабильной экспрессии гена GFP и гена устойчивости к пуромицину. Профили флуоресценции двух наиболее флуоресцирующих клонов показаны рядом с таковыми для объединенной популяции клеток и исходных клеток (А), а также процент клеток в секторах М1, М2 и М3 через 10 дней после отбора на основании устойчивости к пуромицину (В), который изображен на панели А в виде горизонтальных полос, отмеченных как 1, 2 и 3. Количественное соотношение клеток МЗ с высоким уровнем экспрессии отслеживали в течение дополнительных 68 дней культивирования без селекции, чтобы показать, что можно получить более стабильную экспрессию на более высоком уровне в клонах клеток, экспрессирующих кшРНК, по сравнению с исходными клетками СНО-М (С). В качестве альтернативы, экспрессионными плазмидами, кодирующими легкие и тяжелые цепи антитела инфликсимаба, трансфицировали типичные клоны, и оценивали удельную продуктивность секретируемого иммуноглобулина после селекции в течение дополнительных трех недель культивирования без антибиотика.

Фиг. 18. Влияние различных рекомбинантных элементов MAR человека, расположенных в 3'-5' направлении, на процентиль клеток с высоким и очень высоким уровнем продукции (% М3/М2), которое оценивали с помощью анализа методом сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (FACS) по флуоресценции GFP для двух конструкций MAR.

(А) Указанные элементы MAR представляли собой перестроенные производные MAR Х-29 (X_29R2 (SEQ ID NO: 9), X_29R3 (SEQ ID NO: 10)), MAR 1-42 (1_42R2Bis, 1_42R3), MAR 1-6 (1_6R2 (SEQ ID NO: 8), 1_6R3) или MAR 1-68 (1_68R2 (SEQ ID NO: 7)), о чем свидетельствуют названия указанных конструкций. (В) Типичные профили FACS, полученные для лучших расположенных в 3'-5' направлении элементов MAR (MAR 1_68R (SEQ ID NO: 6)).

Фиг. 19. Стабильность экспрессии для двух векторов MAR.

Поликлональные популяции, сконструированные из векторов, содержащих производные MAR 1_68R2, 1_6R2 и X_29R3, исследовали в течение 5 недель культивирования без селекции, и еженедельно оценивали флуоресценцию GFP на протяжении данного периода. Оценивали процентиль субпопуляции МЗ: элемент MAR 1_6R2, расположенный в 3'-5' направлении, и неперестроенный MAR 1-68, расположенный в 5'-3' направлении, представляли собой лучшую исследованную комбинацию для вектора с двумя элементами MAR. Также показаны субпопуляции М1 и М2.

Фиг. 20. Векторы экспрессии, содержащие единичный генетический элемент.

Исследовали MAR 1_68 и Х_29 и использовали их в комбинации с репликатором LmnB2. Элементы MAR расположили в 5'-3' направлении от кассеты экспрессии трансгена, и оценивали в анализе трансфекции трансгеном на протяжении двух месяцев. Поликлональную популяцию стабильно трансфицированных клеток подвергали отбору по устойчивости к антибиотику в течение двух недель и исследовали флуоресценцию GFP с помощью анализа методом сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (FACS) в течение семи недель. Соотношение клеток МЗ с высоким уровнем продукции показано на графике (А), тогда как на графике (В) показаны типичные профили FACS.

Фиг. 21. Векторы экспрессии, содержащие единичный генетический элемент Х-29.

Анализ стабильности вектора Х_29: показали, что вектор экспрессии, содержащий единичный Х_29 в 5'-3' направлении от кассеты экспрессии, оказался стабильным и позволял получить очень высокую процентиль субпопуляций М2 и М3 даже через 14 недель культивирования (27 пассажей).

Фиг. 22. Сравнительный анализ стабильно трансфицированных популяций СНО после 24 недель селекции антибиотиком.

Вектор с единичным MAR Х_29, расположенным в 5'-3' направлении от кассеты экспрессии (Puro_CGAPD_GFP_гастрин_X29), повышает появление клеток, экспрессирующих высокий уровень GFP, а также стабильность экспрессии с течением времени по сравнению с вектором с двумя элементами MAR: с 1_6R2 в качестве MAR, расположенного в 3'-5' направлении, и 1_68 в качестве MAR, расположенного в 5'-3' направлении (Puro_1_6R2_CGAPD_GFP_гастрин_1_68).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ И ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ

РЕАЛИЗАЦИИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Термин трансген, используемый в контексте настоящего изобретения, представляет собой изолированную последовательность дезоксирибонуклеотидов (ДНК), кодирующую данный зрелый белок (также называемую в данном тексте ДНК, кодирующей белок), предшественника белка или функциональную РНК, которая не кодирует белок (некодирующую РНК). Трансген выделяют и встраивают в клетку для получения продукта трансгена. Некоторые предпочтительные трансгены согласно настоящему изобретению представляют собой трансгены, кодирующие иммуноглобулины (Ig), Fc-слитые белки и другие белки, в частности, белки с терапевтической активностью ("биотерапевтические средства"). Например, некоторые иммуноглобулины, такие как инфликсимаб (ремикейд) или другие секретируемые белки, такие как фактор коагуляции VIII, достаточно трудно экспрессировать вследствие клеточных затруднений, преимущественно неохарактеризованных. С помощью рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот, векторов и способов согласно настоящему изобретению данные затруднения можно обнаружить и/или раскрыть. Это, как правило, позволяет повысить количество терапевтических белков, которые можно получить, и/или их качество, например, их процессинг и гомогенность посттрансляционных модификаций, таких как гликозилирование.

В данном тексте термин трансген не должен, в контексте ДНК, кодирующей белок, включать нетранскрибируемые, фланкирующие участки, такие как сигналы инициации транскрипции РНК, сайты полиаденилирования, промоторы или энхансеры. Другие предпочтительные трансгены включают последовательности ДНК, кодирующие функциональные РНК. Таким образом, термин трансген в контексте настоящего изобретения относится к последовательности ДНК, которую вводят в клетку, такую как эукариотическая клетка-хозяин, путем трансфекции (которая включает, в контексте настоящего изобретения, также трансдукцию, т.е., внедрение посредством вирусных векторов), и которая кодирует интересующий продукт, также называемый в данном тексте "продуктом экспрессии трансгена", например, "гетерологичными белками". Указанный трансген может быть функционально присоединен к последовательности, которая кодирует сигнальный пептид, который, в свою очередь, опосредует и/или способствует перемещению и/или секреции через эндоплазматический ретикулум и/или цитоплазматическую мембрану и удаляется до или в процессе секреции.

Малые интерферирующие РНК (миРНК) представляют собой двунитевые молекулы РНК, как правило, длиной 20-25 пар оснований, которые играют роль в РНК-интерференции (РНКи) путем интерференции с экспрессией определенных генов с комплементарной последовательностью нуклеотидов. миРНК можно непосредственно ввести в клетки или можно экспрессировать в клетке посредством вектора. Изолированная миРНК ТЕР, упоминаемая в данном тексте, представляет собой такую миРНК длиной 20-25 пар оснований, которую обычно вводят непосредственно в клетку, т.е., без экспрессии посредством нуклеиновой кислоты, которую внедрили в клетку.

Малая/короткая шпилечная РНК (кшРНК) представляет собой последовательность РНК, которая образует плотный шпилечный изгиб, который можно применять для замалчивания экспрессии целевого гена посредством РНКи. Экспрессию кшРНК в клетках обычно осуществляют путем доставки плазмид или вирусных векторов, таких как ретровирусные векторы. Для того, чтобы получить молекулы кшРНК, последовательность миРНК обычно модифицируют, чтобы ввести короткую петлю между двумя нитями миРНК. Нуклеиновую кислоту, кодирующую кшРНК, затем доставляют посредством вектора в клетку, и она транскрибируется в виде короткой шпилечной РНК (кшРНК), которую, возможно, дайсер обычным способом процессирует в функциональную миРНК.

Ми/кшРНК способна зависимым от последовательности способом снижать экспрессию целевого гена. КшРНК может гибридизоваться с участком транскрипта мРНК, кодирующего продукт целевого гена, тем самым ингибируя экспрессию целевого гена посредством РНК-интерференции. Бифункциональные кшРНК имеют больше одной мишени, например, кодирующую область, а также некоторые нетранслируемые области мРНК. Встраивание в геном клетки способствует длительному или конститутивному замалчиванию гена, которое может распространяться на дочерние клетки.

МикроРНК (миРНК) представляет собой малую молекулу РНК, например, длиной от 20 до 24 нуклеотидов, в частности, 22 нуклеотида, которая участвует в транскрипционной и посттранскрипционной регуляции экспрессии генов посредством спаривания с комплементарными последовательностями внутри мРНК. Замалчивание гена может происходить либо путем ингибирования транскрипции трансгена, либо путем деградации мРНК, либо путем предотвращения трансляции мРНК. МикроРНК можно экспрессировать путем доставки плазмид или вирусных векторов, таких как ретровирусные векторы. В качестве альтернативы, можно синтезировать молекулы РНК, ингибирующие или имитирующие микроРНК, и непосредственно трансфицировать ими клетки.

"Последовательность, кодирующая белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональную РНК ТЕР" позволяет экспрессировать или экспрессировать на повышенном уровне данный белок ТЕР после его переноса в клетку, тогда как последовательность, кодирующая некодирующие функциональные молекулы РНК, ингибирует экспрессию клеточных белков, соответственно. Белки ТЕР могут быть идентичны или аналогичны клеточным белкам, или они могут представлять собой белки из отличной клетки или вида. Клеточные белки, экспрессия которых, например, ингибируется функциональными молекулами РНК, представляют собой конститутивные белки клетки, в которую ввели функциональные молекулы РНК. Белок ТЕР также может дополнять экспрессию другого клеточного белка и, в результате, предпочтительно, повышает экспрессию трансгена. Указанные белки могут участвовать в рекомбинации; в процессах трансляции мРНК; в перемещении в ЭР, секреции, процессинге или фолдинге полипептидов, в транспорте ЭР-Гольджи-плазматическая мембрана, в гликозилировании и/или другой посттрансляционной модификации. Функциональные молекулы РНК включают, например, миРНК, кшРНК, микроРНК, сплайсированную в форме лассо РНК, малую временную смысловую РНК (мвРНК), антисмысловую РНК (аРНК), РНК рибозима и другие РНК, в частности, такие, которые могут подавлять экспрессию целевого гена. В особо предпочтительном варианте реализации данные белки вовлечены в "путь секреции белка" или в "пути рекомбинации", но также включают некоторые белки процессинга белка или метаболические белки, описанные ниже.

Функциональные РНК ТЕР можно не только экспрессировать с последовательности нуклеиновой кислоты, описанной выше, но их можно непосредственно ввести в клетку. Это, в частности, справедливо для изолированных миРНК ТЕР.

Термин "изолированная молекула нуклеиновой кислоты" в контексте настоящего изобретения эквивалентен термину "рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты", т.е. молекула нуклеиновой кислоты, которая не существует в данной форме в природе, но которую сконструировали из частей, которые существуют в природе.

Последовательность нуклеиновой кислоты, такая как ДНК или РНК, комплементарна другой ДНК или РНК, если нуклеотиды, например, из двух нитей однонитевых ДНК или двух нитей однонитевых РНК, могут образовывать стабильные водородные связи, например, водородную связь между гуанином (G) и цитозином (С). В клетке комплементарное спаривание оснований позволяет, например, клеткам копировать информацию от одного поколения к другому. При РНК-интерференции (РНКи) комплементарное спаривание оснований позволяет замалчивание или полный нокаут некоторых целевых генов. По существу, последовательность миРНК, кшРНК или микроРНК специфично снижает или нарушает экспрессию целевого гена путем выравнивания одинарной нити РНК (например, антисмысловой нити в миРНК) с РНК, в частности, мРНК клетки-хозяина. Степень комплементарности между двумя нитями нуклеиновой кислоты может изменяться от полной комплементарности (каждый нуклеотид напротив противоположного) до частичной комплементарности (50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95%). Степень комплементарности определяет стабильность комплекса и, таким образом, то, насколько успешно ген можно, например, нокаутировать. Таким образом, полная или по меньшей мере 95% комплементарность является предпочтительной.

Активность молекул миРНК при РНКи в значительной мере зависит от их способности связываться с индуцируемым РНК комплексом сайленсинга (RISC). За связыванием дуплекса миРНК с RISC следует разворачивание и расщепление смысловой нити эндонуклеазами. Оставшийся комплекс антисмысловая нить-RISC затем может связываться с целевыми мРНК для инициации замалчивания транскрипции.

В контексте настоящего изобретения трансгены, определение которых приведено выше, экспрессируют, как правило, белки, которые желательно получить в больших количествах, например, для применения в фармацевтике, тогда как последовательности, кодирующие белки ТЕР/функциональные РНК ТЕР, или сами функциональные молекулы РНК, разработаны таким образом, чтобы помогать экспрессии таких трансгенов либо непосредственно, либо опосредованно. "Типичный перечень белков ТЕР, экспрессированных с применением векторов, несущих транспозоны", приведен в таблице А. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что огромное количество таких белков было описано в данной области, и в таблице А представлены как идентификационные номера последовательностей NCBI для соответствующих белков, так и последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие их. В последней колонке приведены идентификаторы последовательностей для некоторых из данных последовательностей. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что варианты белков, а также последовательности, идентичные им более чем на 80%, 90%, 95% или 98%, входят в объем настоящего изобретения.

"Типичный перечень кшРНК, экспрессируемых с применением, например, определенных векторов, несущих транспозоны piggybac", приведен в таблице В. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что такие кшРНК можно легко сконструировать после того, как выбран целевой ген. Например, любой из известных генов пути рекомбинации представляет собой готовый целевой ген. Тем не менее, другие гены, такие как гены, кодирующие белки, представленные в таблице А, могут представлять собой готовые мишени для миРНК, полученных из таких кшРНК. Таблица С представляет собой перечень примеров миРНК (смысловая нить) и примеров кшРНК, полученных из соответствующих миРНК. Антисмысловую нить миРНК в конечном счете применяют, чтобы блокировать и/или вызвать деградацию клеточной мРНК. Это, как правило, приводит к снижению уровней белка, кодируемого указанной мРНК.

Идентичность означает степень родства между двумя последовательностями нуклеотидов, которую определяют по идентичности пар между двумя нитями таких последовательностей, например, целой и полной последовательности. Идентичность можно легко рассчитать. Несмотря на то, что существует множество способов измерения идентичности между двумя последовательностями нуклеотидов, термин "идентичность" хорошо известен квалифицированным специалистам (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ред., Oxford University Press, Нью-Йорк, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ред., Academic Press, Нью-Йорк, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, часть I, Griffin, A.M., и Griffin, H.G., ред., Human Press, Нью-Джерси, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. и Devereux, J., ред., M Stockton Press, Нью-Йорк, 1991). Способы, широко используемые для определения идентичности между двумя последовательностями, включают, но не ограничены способами, описанными в Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ред., Academic Press, Сан-Диего, 1994, и Carillo, H., и Lipman, D., SIAM J Applied Math. 48: 1073 (1988). Разработаны предпочтительные способы определения идентичности, чтобы получить наибольшие совпадения между двумя исследуемыми последовательностями. Такие способы закодированы в компьютерных программах. Предпочтительные способы на основе компьютерных программ для определения идентичности между двумя последовательностями включают, но не ограничены пакетом программ GCG (Genetics Computer Group, Мэдисон, Висконсин) (Devereux, J., и др., Nucleic Acids Research 12(1). 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, FASTA (Altschul и др. (1990); Altschul и др. (1997)). Хорошо известный алгоритм Smith Waterman также можно применять для определения идентичности.

В качестве примера, нуклеиновая кислота, включающая последовательность нуклеотидов, "идентичную" по меньшей мере, например, на 95% эталонной последовательности нуклеотидов, означает, что последовательность нуклеотидов нуклеиновой кислоты идентична эталонной последовательности за исключением того, что указанная последовательность нуклеотидов может содержать до пяти точечных мутаций на каждые 100 нуклеотидов эталонной последовательности нуклеотидов. Другими словами, чтобы получить последовательность нуклеотидов, по меньшей мере на 95% идентичную эталонной последовательности нуклеотидов, до 5% нуклеотидов в указанной эталонной последовательности можно удалить или заменить на другой нуклеотид, или множество нуклеотидов, составляющее до 5% от всех нуклеотидов в эталонной последовательности, можно вставить в эталонную последовательность. Данные мутации эталонной последовательности могут встречаться в 5'- или 3'-концевых положениях эталонной последовательности нуклеотидов или в любом месте между этими концевыми положениями, либо разбросанные отдельно среди нуклеотидов в эталонной последовательности, либо расположенные в одной или более непрерывных группах внутри эталонной последовательности. Идентичности последовательностей более чем на приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 85% или приблизительно 90% для любой последовательности, описанной в данной заявке (например, путем указания SEQ ID и/или номера доступа), также входят в объем настоящего изобретения.

Последовательность нуклеиновой кислоты, по существу идентичная другой последовательности нуклеиновой кислоты, относится к последовательности, содержащей точечные мутации, делеции или вставки в последовательности, которые не оказывают или оказывают несущественное влияние на соответствующий описанный способ и часто представлены одной, двумя, тремя или четырьмя мутациями на 100 п.о.

Настоящее изобретение относится к вариантам как полинуклеотида, так и полипептида. "Вариант" относится к полинуклеотиду или полипептиду, отличающемуся от описанного полинуклеотида или полипептида, но сохранившему его существенные свойства. Как правило, варианты в целом очень сходны и на многих участках идентичны полинуклеотиду или полипептиду согласно настоящему изобретению. Указанные варианты могут включать изменения в кодирующих областях, некодирующих областях или в обоих указанных типах областей. Особенно предпочтительны полинуклеотидные варианты, включающие изменения, которые вызывают молчащие замены, вставки или делеции, но не изменяют свойства или активности кодированного полипептида. Нуклеотидные варианты, полученные путем молчащих замен, вследствие вырожденности генетического кода, являются предпочтительными. Более того, варианты, в которых 5-10, 1-5 или 1-2 аминокислоты, описанные в данной заявке, заменены, удалены или вставлены в любой комбинации, также предпочтительны. В объем настоящего изобретения также входят аллельные варианты указанных полинуклеотидов. Аллельный вариант обозначает любую из двух или более альтернативных форм гена, занимающих один и тот же хромосомный локус. Аллельная вариация в природе возникает в результате мутации и может приводить к полиморфизму внутри популяции. Мутации в гене могут быть молчащими (без изменений в кодируемом полипептиде) или могут кодировать полипептиды, последовательности аминокислот которых изменены. Аллельный вариант полипептида представляет собой полипептид, кодируемый аллельным вариантом гена. Варианты любых из молекул нуклеиновых кислот, описанных в данной заявке, входят в объем настоящего изобретения.

Последовательность промотора или сам промотор представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, которая узнается клеткой-хозяином для экспрессии определенной последовательности нуклеиновой кислоты. Последовательность промотора включает последовательности, контролирующие транскрипцию, которые регулируют экспрессию указанного полинуклеотида. Промотор может представлять собой любую последовательность нуклеиновой кислоты, которая проявляет транскрипционную активность в выбранной клетке хозяина, включая мутантные, укороченные и гибридные промоторы, и его можно получить из генов, кодирующих внеклеточные или внутриклеточные полипептиды, либо гомологичные, либо гетерологичные для клетки хозяина. Промоторы согласно настоящему изобретению включают индуцируемые и неиндуцируемые промоторы. Последовательность нуклеиновой кислоты находится под контролем промотора, когда промотор выполняет свою функцию на указанной нуклеиновой кислоте.

CGAPDH (также называемый в данном тексте C_GAPDH) представляет собой слитые энхансер и промотор, которые включают промотор GAPDH человека и энхансер немедленно-раннего гена CMV человека. В одном варианте реализации для его получения промотор GAPDH человека и его 5'-нетранслируемую область (НТО) амплифицировали путем ПЦР из геномной ДНК клеток HEK293 человека. Полученный продукт помещали в 5'-3' направлении от энхансера немедленно-раннего гена CMV человека. См. пример последовательности в SEQ ID NO: 11. Последовательности, которые на по меньшей мере 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательности SEQ ID NO: 11, также входят в объем настоящего изобретения. Другой желательный промотор(ы) и/или энхансер(ы) или продукты их слияния представляют собой, но не ограничены перечисленными: энхансер немедленно-раннего гена CMV человека, промотор GAPDH человека, промотор EF1-альфа человека, промотор CMV, промотор SV40, промотор Actb СНО или промотор Hspa5 СНО. Данные элементы хорошо известны в данной области, и примеры последовательностей перечислены в SEQ ID NO: 110-116. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что их варианты также входят в объем настоящего изобретения, также, как и элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 110-116.

"Транспозон" представляет собой мобильный генетический элемент, который эффективно перемещается между векторами и хромосомами с помощью механизма "вырезать и вставить" или "копировать и вставить". В процессе транспозиции транспозаза (например, транспозаза РВ в системе транспозона PiggyBac) узнает транспозон-специфичные последовательности инвертированных концевых повторов (ITR), расположенные на обоих концах транспозона (существуют 5'- и а 3'-ITR в любой системе транспозона), перемещает содержимое из исходных сайтов и встраивает их в хромосомные сайты, такие как хромосомные сайты ТТАА. Мощная активность системы транспозона PiggyBac позволяет легко перемещать интересующие гены, расположенные между двумя ITR, в целевые геномы. Система транспозона PiggyBac описана, например, в 2010/0154070, которая полностью включена в данную заявку посредством ссылки.

Элементы MAR (конструкции MAR, последовательности MAR, S/MAR или просто MAR) принадлежат к более широкой группе эпигенетических регуляторных элементов, которые также включают граничные или инсуляторные элементы, такие как cHS4, регуляторные области локусов (LCR), стабилизирующие и антирепрессорные (STAR) элементы, универсальные элементы, открывающие хроматин (UCOE), или модификаторы гистонов, такие как гистоновая дезацетилаза (HDAC).

Элементы MAR могут быть определены на основании идентифицированного MAR, на котором они первично основаны: конструкция MAR S4, соответственно, представляет собой элементы MAR, большинство нуклеотидов которых (50% и более, предпочтительно 60%, 70% или 80%) основаны на MAR S4. Некоторые простые мотивы последовательности, такие как мотивы с высоким содержанием А и Т, часто обнаруживают внутри элементов MAR. Другие широко распространенные мотивы представляют собой мотивы А-бокс, Т-бокс, мотивы раскручивания спирали ДНК, сайты связывания SATB1 (Н-бокс, A/T/С25) и консенсусные сайты топоизомеразы II для позвоночных или дрозофилы.

MAR, как правило, описывают как последовательности в ДНК эукариотических хромосом, к которым присоединяется ядерный матрикс. Свойства MAR лишь отчасти определяются их первичной структурой. Например, известно, что типичная первичная структура, обнаруженная в элементах MAR, таких как АТ-богатые области, приводит к образованию третичных структур, а именно, некоторых изгибов, которые определяют функцию MAR. Таким образом, MAR часто определяют не только по их первичной структуре, но также по их вторичной, третичной структуре, например, степени их изогнутости и/или физическим свойствам, таким как температура плавления.

Обогащенная АТ/TA-динуклеотидами область изгиба ДНК (здесь и далее называемая "AT-богатой областью"), обнаруживаемая в большинстве элементов MAR, представляет собой область изгиба ДНК, содержащую большое количество А и Т, в частности, в виде динуклеотидов AT и ТА. В предпочтительном варианте реализации она содержит по меньшей мере 10% динуклеотида ТА, и/или по меньшей мере 12% динуклеотида AT на участке из 100 непрерывных пар оснований, предпочтительно, по меньшей мере 33% динуклеотида ТА, и/или по меньшей мере 33% динуклеотида AT на участке из 100 непрерывных пар оснований (или на соответствующем более коротком участке при меньшей длине АТ-богатой области), и при этом имеет изогнутую вторичную структуру. Тем не менее, "АТ-богатые области" могут быть настолько короткими, как приблизительно 30 нуклеотидов или менее, но предпочтительно их длина составляет приблизительно 50 нуклеотидов, приблизительно 75 нуклеотидов, приблизительно 100 нуклеотидов, приблизительно 150, приблизительно 200, приблизительно 250, приблизительно 300, приблизительно 350 или приблизительно 400 нуклеотидов или более.

Некоторые сайты связывания также часто имеют относительно высокое содержание А и Т, такие как сайты связывания SATB1 (Н-бокс, А/Т/С25) и консенсусные сайты топоизомеразы II для позвоночных (RNYNNCNNGYNGKTNYNY) или дрозофилы (GTNWAYATTNATNNR). Тем не менее, область сайта связывания (модуль), в частности, область TFBS, которая содержит кластер сайтов связывания, можно легко отличить от областей, обогащенных динуклеотидами AT и ТА ("АТ-богатых областей"), от элементов MAR, богатых содержанием А и Т, путем сравнения паттерна кривизны указанных областей. Например, средняя степень кривизны MAR 1_68 человека может превышать приблизительно 3,8 или приблизительно 4,0, тогда как средняя степень кривизны участка TFBS может быть ниже приблизительно 3,5 или приблизительно 3,3. Области идентифицированного MAR также можно подтвердить с помощью альтернативных способов, таких как, но не ограничиваясь определением относительных температур плавления, описанных в других местах в данной заявке. Тем не менее, такие значения видоспецифичны и, следовательно, могут изменяться от вида к виду и могут, например, быть ниже. Таким образом, градусы кривизны соответствующих областей, богатых динуклеотидами AT и ТА, могут быть ниже, например, от приблизительно 3,2 до приблизительно 3,4, или от приблизительно 3,4 до приблизительно 3,6, или от приблизительно 3,6 до приблизительно 3,8, и градусы кривизны областей TFBS могут быть пропорционально ниже, например, ниже приблизительно 2,7, ниже приблизительно 2,9, ниже приблизительно 3,1, ниже приблизительно 3,3. Квалифицированный специалист выберет, соответственно, меньшие размеры окна в программе SMAR Scan II.

Элемент MAR, конструкция MAR, последовательность MAR, S/MAR или просто MAR согласно настоящему изобретению представляет собой последовательность нуклеотидов, одно или более (например, два, три или четыре) свойств которой, таких как описанные выше, аналогичны таковым у встречающихся в природе "SAR" или "MAR". Предпочтительно у такого элемента MAR, конструкции MAR, последовательности MAR, S/MAR или просто MAR по меньшей мере одно свойство способствует экспрессии белка любого гена, находящегося под влиянием указанного MAR. Элемент MAR, как правило, также обладает свойством изолированной и/или очищенной нуклеиновой кислоты, предпочтительно проявляющей активность MAR, в частности, проявляющей активность модуляции транскрипции, предпочтительно активность усиления транскрипции, но также проявляющей, например, активность стабилизации экспрессии и/или другие активности.

Термины элемент MAR, конструкция MAR, последовательность MAR, S/MAR или просто MAR также включают, в некоторых вариантах реализации, улучшенные конструкции MAR, которые обладают свойствами, которые обеспечивают улучшение по сравнению со встречающимся в природе и/или идентифицированным MAR, на котором может быть основана конструкция MAR согласно настоящему изобретению. Такие свойства включают, но не ограничены перечисленными: уменьшенную длину по сравнению с полноразмерным встречающимся в природе и/или обнаруженным MAR, повышенную экспрессию гена/транскрипции, повышенную стабильность экспрессии, тканеспецифичность, способность к индуцированию или комбинацию перечисленных свойств. Соответственно, элемент MAR, который подвергли улучшению, например, содержит менее чем приблизительно 90%, предпочтительно менее чем приблизительно 80%, еще более предпочтительно менее чем приблизительно 70%, менее чем приблизительно 60%, или менее чем приблизительно 50% от количества нуклеотидов идентифицированной последовательности MAR. Элемент MAR может повышать экспрессию гена и/или транскрипцию трансгена после трансформации подходящей клетки указанной конструкцией.

Элемент MAR предпочтительно встраивают в 3'-5' направлении от промоторной области, с которой функционально связан или может быть функционально связан интересующий ген. Тем не менее, в некоторых вариантах реализации предпочтительно, чтобы элемент MAR был расположен как в 3'-5' направлении, так и в 5'-3' направлении, или только в 5'-3' направлении от интересующего гена/последовательности нуклеиновой кислоты. Другие разнообразные цис- и/или транс-расположения MAR также входят в объем настоящего изобретения.

Термин «синтетический», когда его применяют в контексте элемента MAR, относится к MAR, разработка которого включала больше изменений, чем простая перестановка, дупликация и/или делеция последовательностей/областей или части областей идентифицированных MAR или MAR, основанных на них. В частности, синтетические MAR/элементы MAR как правило включают одну или более, предпочтительно одну область идентифицированного MAR, которая, тем не менее, в некотором варианте реализации могла быть синтезирована или модифицирована, а также специально разработанные, хорошо охарактеризованные элементы, такие как единичный TFBS или серия TFBS, которые, в предпочтительном варианте реализации, получают синтетическим путем. Данные разработанные элементы во многих вариантах реализации относительно коротки, в частности, их длина, как правило, составляет не больше чем приблизительно 300 п.о., предпочтительно не больше чем приблизительно 100, приблизительно 50, приблизительно 40, приблизительно 30, приблизительно 20 или приблизительно 10 п.о. Данные элементы в некоторых вариантах реализации могут быть мультимеризованы. Такие синтетические элементы MAR также входят в объем настоящего изобретения, и должно быть очевидно, что, как правило, в настоящем описании следует понимать, что все, что указано как применимое к "элементу MAR", в равной степени применимо к синтетическому элементу MAR.

Функциональные фрагменты последовательностей нуклеотидов обнаруженных элементов MAR также включены при условии, что они сохраняют функции элемента MAR, описанные выше.

Некоторые предпочтительные идентифицированные элементы MAR включают, но не ограничены перечисленными: MAR 1_68, MAR Х_29, MAR 1_6, MAR S4, MAR S46, включая все их перестановки, описанные в WO 2005040377 и публикации патента США 20070178469, которые особенно включены в настоящую заявку посредством ссылки для описания последовательностей данных и других элементов MAR. MAR лизоцима цыпленка также представляет собой предпочтительный вариант реализации (см., патент США номер 7129062, который также особенно включен в данную заявку для описания элементов MAR).

Если указано, что вектор содержит единичный MAR, это означает, что внутри указанного вектора присутствует один MAR и нет других MAR либо такого же, либо отличного типа или структуры.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения присутствует несколько MAR, которые могут иметь одинаковый или отличный тип или структуру, все из которых могут быть расположены в 5'-3' направлении от интересующего гена. Это называется кластером единичных MAR.

Если указано, что что-либо, например, количество клеток, стабильно экспрессирующих полипептид, "не зависит" от присутствия, например, последовательности, то указанная последовательность не оказывает влияния (например, на количество клеток, стабильно экспрессирующих полипептид) до любой статистически значимой степени.

Трансген или последовательность, кодирующая белок экспрессии/процессинга трансгена или функциональную РНК согласно настоящему изобретению, часто является частью вектора.

Вектор согласно настоящему изобретению представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, способную переносить другую нуклеиновую кислоту, такую как трансген, которую нужно экспрессировать с помощью данного вектора, с которым она была связана, как правило, в который она была встроена. Например, плазмида представляет собой тип вектора, ретровирус или лентивирус представляет собой другой тип вектора. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения вектор линеаризуют перед трансфекцией. Вектор экспрессии содержит регуляторные элементы или находится под контролем таких регуляторных элементов, которые разработаны таким образом, чтобы способствовать транскрипции и/или экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты, которую несет указанный вектор экспрессии. Регуляторные элементы включают энхансеры и/или промоторы, но также различные другие элементы, описанные в данной заявке (см. также раздел "Разработка вектора").

Последовательность вектора представляет собой последовательность ДНК или РНК указанного вектора, за исключением любых "других" нуклеиновых кислот, таких как трансгены, а также генетических элементов, таких как элементы MAR.

Эукариотическую клетку, включая клетку млекопитающего, такую как рекомбинантная клетка млекопитающего/эукариотическая клетка-хозяин, согласно настоящему изобретению можно поддерживать в условиях культуры клеток. Лишь некоторые из примеров данного типа клеток представляют собой эукариотические клетки-хозяева, не относящиеся к приматам, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО) и клетки почки детеныша хомячка (ВНК, АТСС CCL 10). Эукариотические клетки-хозяева примата включают, например, клетки карциномы шейки матки человека (HELA, АТСС CCL 2) и линию клеток почки обезьяны CV1, трансформированную SV40 (COS-7, АТСС CRL-1587). Рекомбинантная эукариотическая клетка-хозяин или рекомбинантная клетка млекопитающего означает клетку, которую модифицировали, например, путем трансфекции, например, трансгенной последовательностью, и/или путем мутации. Эукариотические клетки-хозяева или рекомбинантные клетки млекопитающих способны осуществлять посттранскрипционные модификации белков, экспрессируемых указанными клетками. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения клеточный аналог в эукариотической (например, не относящейся к примату) клетке-хозяине полностью функционален, т.е., не был, например, инактивирован путем мутации. Предпочтительно, чтобы трансгенная последовательность (например, примата) экспрессировалась дополнительно к ее клеточному аналогу (например, не относящемуся к примату).

Трансфекция согласно настоящему изобретению представляет собой внедрение нуклеиновой кислоты в реципиентную эукариотическую клетку, например, не ограничиваясь перечисленными, путем электропорации, липофекции, как правило с помощью невирусного вектора (опосредованная вектором трансфекция) или с помощью химических способов, включая применение поликатионных липидов. Трансфекция, не опосредованная вектором, включает, например, непосредственное внедрение изолированных миРНК ТЕР в клетку. Во временно трансфицированной клетке, например, миРНК сохраняется лишь временно. В контексте настоящего изобретения можно осуществить первую трансфекцию по меньшей мере одной молекулой нуклеиновой кислоты с последовательностью, кодирующей белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональную РНК ТЕР, или, в качестве альтернативы, непосредственно функциональной РНК ТЕР (например, миРНК), и вторую последующую трансфекцию нуклеиновой кислотой, кодирующей трансген. Как первую, так и вторую трансфекцию можно повторить. Например, миРНК, внедренная в процессе первой трансфекции, действует, в частности, ингибирует, рекомбинационный белок (белок, который участвует в событиях рекомбинации в трансфицированной клетке). После этого в процессе второй последующей трансфекции вводят трансген.

Транскрипция означает синтез РНК по матрице ДНК. 'Транскрипционно активный" относится, например, к трансгену, который транскрибируется. Трансляция представляет собой процесс, с помощью которого по РНК синтезируется белок.

Улучшение секреции измеряют по сравнению со значением, полученным для контрольной клетки, которая не содержит соответствующую трансгенную последовательность. Любое статистически значимое улучшение по сравнению со значением для контроля называют стимуляцией.

Маркер отбора представляет собой нуклеиновую кислоту, которая содержит ген, продукт которого придает устойчивость к селекционному агенту - антибиотику (например, хлорамфениколу, ампициллину, гентамицину, стрептомицину, тетрациклину, канамицину, неомицину, пуромицину) или способность расти на селективных средах (например, с DHFR (дигидрофолатредуктазой)).

Класс белков, известных как шапероны, определяют как белки, которые связываются и стабилизируют в противном случае нестабильный конформационный изомер другого белка и, путем контролируемого связывания и высвобождения, способствуют его правильной судьбе in vivo, будь то фолдинг, сборка олигомера, транспорт в конкретный клеточный компартмент или утилизация путем деградации. BiP (также известный как GRP78, белок, связывающий тяжелую цепь lg, и Kar2p в дрожжах) представляет собой распространенный шаперон массой приблизительно 70 кДа из семейства hsp 70, находящийся в эндоплазматическом ретикулуме (ER), который, среди прочих функций, способствует транспорту в секреторной системе и способствует фолдингу белков. Протеиндисульфидизомераза (PDI) представляет собой белок-шаперон, находящийся в ЭР, который участвует в катализе образования дисульфидной связи при посттрансляционном процессинге белков.

КЛЕТОЧНАЯ МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

В клеточной метаболической инженерии, например, модифицируют процессы, свойственные экспрессирующей клетке. Например, некоторые белки секреторного пути, например, экспрессируют сверх меры. В качестве альтернативы, изменяют события рекомбинации путем влияния на пути рекомбинации.

ПУТЬ СЕКРЕЦИИ БЕЛКА

Секреция белков представляет собой процесс, общий для организмов из всех трех царств. Для такого сложного пути секреции в первую очередь требуется перемещение белка из цитозоля через цитоплазматическую мембрану клетки. Для достижения белком конечного назначения необходимо несколько этапов и различных факторов. В клетках млекопитающих такой путь секреции включает два основных макромолекулярных ансамбля: сигналузнающую частицу (SRP) и секреторный комплекс (Sec-комплекс или транслокон). SRP состоит из шести белков с массами 9, 14, 19, 54, 68 и 72 кДа и 7S РНК, а транслокон представляет собой тороидальную частицу, состоящую из Sec61αβy, Sec62 и Sec63. Номера доступа (в скобках), представленные для человеческого варианта некоторых из данных белков, описаны далее: hSRP14 (номер доступа Х73459.1); hSRP9 (NM_001130440); hSRP54 (NM_003136); hSRPRα (NM_003139); hSRPRβ (NM_021203); hSEC61α1 (NM_013336); hSEC61 β (L25085.1); hSEC61 γ (AK311845,1).

Первый этап секреции белка зависит от сигнальных пептидов, которые содержат определенную пептидную последовательность на аминоконце полипептида, которая опосредует перемещение образующегося белка через мембрану и в просвет эндоплазматического ретикулума (ЭР). На данном этапе сигнальный пептид, который выходит из лидирующей транслирующей рибосомы, взаимодействует с субъединицей частицы SRP, которая узнает сигнальный пептид, а именно, с SRP54. Связывание SRP с сигнальным пептидом блокирует дальнейшую элонгацию образующегося полипептида, что приводит к остановке трансляции. Белки SRP-9 и -14 необходимы для остановки элонгации (Walter и Blobel 1981). На втором этапе комплекс рибосома-образующийся полипептид-SRP стыкуется с мембраной ЭР посредством взаимодействия SRP54 с рецептором SRP (SR) (Gilmore, Blobel и др. 1982; Pool, Stumm и др. 2002). SR представляет собой гетеродимерный комплекс, содержащий два белка, SRα и SRβ, которые проявляют ГТФазную активность (Gilmore, Walter и др. 1982). Взаимодействие SR с SRP54 зависит от связывания ГТФ (Connolly, Rapiejko и др. 1991). SR координирует высвобождение SRP из комплекса рибосома-образующийся полипептид и ассоциацию сайта выхода из рибосомы с комплексом Sec61 (транслоконом). Растущий образующийся полипептид проникает в ЭР через канал транслокона, и трансляция возобновляется с обычной скоростью. Рибосома остается связанной на цитоплазматической стороне транслокона до тех пор, пока трансляция не завершится. Дополнительно к рибосомам, транслоконы тесно связаны с рибофорином на цитоплазматической стороне и с шаперонами, такими как кальретикулин и кальнексин, и протеиндисульфидизомеразами (PDI) и олигосахарид-трансферазой на стороне просвета ЭР. После внедрения растущего образующегося полипептида в просвет ЭР сигнальный пептид отщепляется от пре-белка ферментом, называемым сигнальной пептидазой, что приводит к высвобождению зрелого белка в ЭР. После посттрансляционной модификации, правильному фолдингу и мультимеризации белки покидают ЭР и мигрируют в аппарат Гольджи, а затем в секреторные везикулы. Слияние секреторных везикул с плазматической мембраной приводит к высвобождению содержимого везикулы во внеклеточное пространство.

Удивительно, что секретируемые белки в ходе эволюции обрели определенные сигнальные последовательности, которые хорошо подходят для их перемещения через мембрану клетки. Различные последовательности, обнаруженные как отдельные сигнальные пептиды, могут взаимодействовать уникальными путями с секреторным аппаратом. Сигнальные последовательности преимущественно гидрофобны по своей природе, и это свойство может способствовать получению из образующегося пептида секреторного белка. Дополнительно к гидрофобному участку аминокислот последовательности большинства сигналов секреции млекопитающих обладают множеством общих свойств. Различные сигнальные пептиды отличаются по эффективности, с которой они направляют секрецию гетерологичных белков, но были обнаружены несколько сигнальных пептидов секреции (т.е. сигнальных последовательностей из интерлейкина, иммуноглобулина, рецептора гистосовместимости и т.д.), которые можно применять, чтобы направлять секрецию гетерологичных рекомбинантных белков. Несмотря на сходства, данные последовательности не оптимальны для стимуляции эффективной секреции некоторых белков, которые трудно поддаются экспрессии, вследствие того, что нативный сигнальный пептид не может правильно функционировать вне нативного контекста, или из-за различий, связанных с клеткой-хозяином или процессом секреции. Выбор подходящей сигнальной последовательности для эффективной секреции гетерологичного белка может дополнительно осложняться взаимодействием последовательностей внутри отщепленного сигнального пептида с другими участками зрелого белка (Johansson, Nilsson и др. 1993).

ПУТИ РЕКОМБИНАЦИИ

Пути рекомбинации, также известные как пути рекомбинации ДНК, представляют собой клеточные пути, которые приводят к репарации повреждения ДНК, например, к соединению концов молекулы ДНК после двухнитевых разрывов хромосомы и к обмену или слиянию последовательностей ДНК между хромосомными и нехромосомными молекулами ДНК, как, например, при кроссинговере хромосом при мейозе или перестройке генов иммуноглобулинов в лимфоцитарных клетках. Существует три основных пути рекомбинации: путь гомологичной рекомбинации (ГР), путь негомологичного соединения концов (НГСК), путь опосредованного микрогомологией соединения концов (ОМСК) и альтернативного соединения концов (Альт-СК).

МЕХАНИЗМЫ ГОМОЛОГИЧНОЙ РЕКОМБИНАЦИИ (ГР), НЕГОМОЛОГИЧНОГО СОЕДИНЕНИЯ КОНЦОВ (НГСК) И ОПОСРЕДОВАННОГО МИКРОГОМОЛОГИЕЙ СОЕДИНЕНИЯ КОНЦОВ (ОМСК)

Трансгены используют аппарат рекомбинации для встраивания в двухнитевой разрыв в геноме хозяина.

Двухнитевые разрывы (ДНР) представляют собой биологически наиболее разрушительный тип геномного повреждения, потенциально приводящий к тбели клетки или большому разнообразию генетических перестроек. Точная репарация необходима для успешного поддержания и передачи генетической информации.

Существует два основных механизма репарации ДНР: негомологичное соединение концов (НГСК) и гомологичная рекомбинация (ГР). Третий механизм, называемый опосредованным микрогомологией соединением концов (ОМСК), часто начинает действовать, когда два основных механизма репарации ДНР претерпевают неудачу. Гомологичная рекомбинация представляет собой процесс генетического обмена между последовательностями ДНК, которые гомологичны друг другу, и действует преимущественно в течение фаз S/G2 клеточного цикла, тогда как НГСК просто соединяет два разорванных конца ДНК, обычно при отсутствии гомологии последовательностей, и действует на всех фазах клеточного цикла, но имеет особое значение во время G0-G1 и ранней S фазы митотических клеток (Wong и Capecchi, 1985; Delacote и Lopez, 2008). У позвоночных ГР, НГСК и ОМСК различным образом участвуют в репарации ДНР, в зависимости от природы ДНР и фазы клеточного цикла (Takata и др., 1998).

НГСК: основные механизмы

По существу, молекулярный механизм процесса НГСК кажется простым: 1) набор ферментов захватывает разорванную молекулу ДНК, 2) образуется молекулярный мостик, который сближает два конца ДНК, и 3) разорванные молекулы заново лигируются. Аппарат НГСК в клетках млекопитающих включает два белковых комплекса для осуществления таких реакций: гетеродимер Ku80/Ku70, связанный с ДНК-ПКкс (каталитической субъединицей ДНК-зависимой протеинкиназы), и ДНК-лигаза IV с ее кофактором XRCC4 (комплементирующий ген 4 репарации рентгеновских повреждений у китайского хомячка) и множеством белковых факторов, таких как Artemis (Артемида) и XLF (XRCC4-подобный фактор; или Cernunnos (Цернун)) ( и др., 2002). НГСК часто считают допускающая ошибки репарацией ДНР, так как она просто соединяет два разорванных конца ДНК, обычно при отсутствии гомологии последовательностей, и порождает небольшие вставки и делеции (Moore и Haber, 1996; Wilson и др., 1999). НГСК обеспечивает механизм репарации ДНР на всем протяжении клеточного цикла, но особое значение имеет в течение G0-G1 и ранней S-фазы митотических клеток (Takata и др., 1998; Delacote и Lopez, 2008). Репарацию ДНР посредством НГСК наблюдают в организмах начиная с бактерий и заканчивая млекопитающими, что указывает на ее консервативный характер в процессе эволюции.

После образования ДНР ключевым этапом в пути репарации НГСК является физическое сближение разорванных концов ДНК. НГСК запускается при взаимодействии гетеродимерного белкового комплекса Ku70/80 с обоими концами разорванной молекулы ДНК, чтобы захватить, сблизить концы и создать каркас для сборки других ключевых факторов НГСК. Связанный с ДНК гетеродимерный комплекс Ku привлекает в место ДНР ДНК-ПКкс, белок массой 460 кДа, принадлежащий к семейству PIKK (фосфоинозитид-3-киназа-подобному семейству протеинкиназ) (Gottlieb и Jackson, 1993), и активирует его серин/треонинкиназную функцию (Yaneva и др., 1997). Две молекулы ДНК-ПКкс с двух концов ДНР взаимодействуют, таким образом образуя молекулярный мостик между обоими разорванными концами ДНК и ингибируя их деградацию (DeFazio и др., 2002). Затем концы ДНК можно непосредственно лигировать, хотя большинство концов, возникших в результате ДНР, должны быть надлежащим образом процессированы перед лигированием (Nikjoo и др., 1998). В зависимости от природы разрыва может потребоваться действие различных комбинаций ферментов процессинга для получения совместимых выступов путем заполнения брешей, удаления поврежденной ДНК или вторичных структур, окружающих разрыв. Данный этап в процессе НГСК считают ответственным за случайную потерю нуклеотидов, связанную с репарацией НГСК. Один ключевой фермент процессинга концов при НГСК млекопитающих представляет собой Artemis, член суперсемейства ферментов металло-β-лактамаз, ген которого оказался мутированным у большинства пациентов с радиочувствительным тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID) (Moshous и др., 2001). Artemis обладает как 5'→3' экзонуклеазной активностью, так и ДНК-ПКкс-зависимой эндонуклеазной активностью по отношению к ДНК, содержащей дн-он переходы (переходы от двух нитей к одной), и шпилькам ДНК (Ма и др., 2002). Его активность также регулируется протеинкиназой ATM. Таким образом, похоже, что Artemis, вероятно, участвует во множестве реакций на повреждение ДНК. Тем не менее, похоже, что Artemis участвует в репарации лишь подгруппы повреждений ДНК, так как не наблюдали значительного дефекта репарации ДНР в клетках, лишенных Artemis (Wang и др., 2005, Darroudi и др., 2007).

Бреши в ДНК должны быть заполнены, чтобы репарация стала возможной. Добавление нуклеотидов в ДНР могут осуществлять только полимеразы μ и λ (Lee и др., 2004; Сарр и др., 2007). Посредством взаимодействия с XRCC4 полинуклеотидкиназа (PNK) также привлекается к концам ДНК, чтобы позволить полимеризацию, а также лигирование ДНК (Koch и др., 2004). Наконец, НГСК завершается путем лигирования концов ДНК, этапа, осуществляемого комплексом, содержащим XRCC4, ДНК-лигазу IV и XLF (Grawunder и др., 1997). Другие лигазы могут частично заменять ДНК-лигазу IV, так как НГСК может происходить в отсутствие XRCC4 и лигазы IV (Yan и др., 2008). Более того, исследования показали, что XRCC4 и лигаза IV не играют роли вне НГСК, тогда как, напротив, KU принимает участие в других процессах, таких как транскрипция, апоптоз и реакции на микроокружение (Monferran и др., 2004; и др., 2005; Downs и Jackson, 2004).

НГСК можно ослабить или прекратить различными способами, многие из которых непосредственно затрагивают упомянутые выше белки (например, гетеродимер Ku80/Ku70, ДНК-ПКкс, но, в особенности, ДНК-лигазу IV, XRCC4, Artemis и XLF (XCC4-подобный фактор; или Cernunnos), PIKK (фосфоинозитид-3-киназа-подобное семейство протеинкиназ).

ГР: основные механизмы

Гомологичная рекомбинация (ГР) представляет собой очень точный механизм репарации. Гомологичная хроматида служит в качестве матрицы для репарации разорванной нити. ГР происходит в фазах S и G2 клеточного цикла, когда сестринские хроматиды становятся доступными. Классическая ГР главным образом характеризуется тремя этапами: 1) удаление 5'-нуклеотидов с разорванных концов, 2) внедрение нити и обмен с гомологичным дуплексом ДНК и 3) расхождение промежуточных продуктов (интермедиатов) рекомбинации. Репарация ДНР может завершаться различными путями, в зависимости от способности осуществлять внедрение нити, которые включают путь зависимого от синтеза ДНК отжига нитей (ЗСОН), классическую репарацию двухнитевого разрыва (РДНР) (Szostak и др., 1983), вызванную разрывом репликацию (ВРР) и, в качестве альтернативы, путь однонитевого отжига (ОНО). Все механизмы ГР взаимосвязаны и включают много общих ферментативных этапов.

Первый этап из всех реакций ГР соответствует удалению 5'-конца разорванной нити ДНК нуклеазами с помощью комплекса MRN (MRE11, RAD50, NBN (ранее NBS1, синдром разрывов Неймеген 1)) и CtIP (CtBP-взаимодействующий белок) (Sun и др., 1991; White и Haber, 1990). Полученная в результате этого совокупность последовательностей с 3'-одноцепочечными ДНР может искать гомологичную последовательность. Внедрение гомологичного дуплекса осуществляют с помощью нуклеофиламента, состоящего из 3'-онДНК, покрытой белком рекомбиназой RAD51 (Benson и др., 1994). Для сборки RAD51-филамента требуется привлечение репликативного белка A (RPA), гетеротримерного онДНК-связывающего белка, вовлеченного в метаболические процессы ДНК, связанные с онДНК, у эукариотов (Wold, 1997, Song и Sung, 2000). Затем RAD51 взаимодействует с RAD52, который обладает кольцеобразной структурой (Shen и др., 1996), чтобы вытеснить молекулы RPA и способствовать загрузке RAD51 (Song и sung, 2000). Rad52 важен для процессов рекомбинации у дрожжей (Symington, 2002). Тем не менее, у позвоночных, похоже, скорее BRCA2 (белок чувствительности к раку молочной железы 2 типа), чем RAD52 играет важную роль во внедрении и обмене нитей (Davies и Pellegrini, 2007; Esashi и др., 2007). Взаимодействие RAD51/RAD52 стабилизируется путем связывания с RAD54. RAD54 также играет роль в созревании интермедиатов рекомбинации после образования D-петли (Bugreev и др., 2007). С другой стороны, BRCA1 (рак молочной железы 1) взаимодействует с BARD1 (ассоциированный с BRCA1 RING-домен 1) и ВАСН1 (гомолог 1 ВТВ и CNC), чтобы осуществить лигазную и геликазную активность репарации ДНР, соответственно (Greenberg и др., 2006). BRCA1 также взаимодействует с CtIP CDK-зависимым образом и подвергается убиквитинированию в ответ на повреждение ДНК (Limbo и др., 2007). Следовательно, BRCA1, CtIP и комплекс MRN играют роль в активации ГР-опосредованной репарации ДНК в S и G2 фазах клеточного цикла.

Внедрение нуклеофиламента приводит к образованию гетеродуплекса, называемого петлей замещения (D-петлей), и включает замещение одной нити дуплекса внедряющейся нитью и ее спаривание с другой нитью дуплекса. Затем несколько путей ГР могут завершить репарацию, используя гомологичную последовательность в качестве матрицы для замещения последовательности, окружающей ДНР. В зависимости от используемого механизма взаимные обмены (кроссинговеры) между гомологичной матрицей и разорванной молекулой ДНК могут быть или не быть связаны с репарацией ГР. Кроссинговеры могут приводить к значительным генетическим последствиям, таким как геномные перестройки или утрата гетерозиготности.

В гомологичной рекомбинации также участвуют пять паралогов Rad51: Xrcc2, Xrcc3, Rad51B, Rad51C, Rad51D (Suwaki и др., 2011). Паралоги Rad51 образуют два типа комплексов: один, названный BCDX2, содержит Rad51B, Rad51C, Rad51D и Xrcc2; другой содержит Rad51C и Xrcc3 (СХ3) (Masson и др., 2001). Предположили, что первый комплекс участвует в образовании и/или стабилизации комплекса Rad51-ДНК (Masson и др., 2001). Похоже, что роль второго комплекса состоит в миграции ветви и расщеплении структуры Холлидея (Liu и др., 2007).

Ранее сообщалось, что увеличение ГР по сравнению с НГСК (см. публикацию патента США 20120231449, которая полностью включена в данную заявку посредством ссылки) можно применять, чтобы усилить и/или способствовать экспрессии трансгена.

Настоящее изобретение направлено на уменьшение или выключение ГР. ГР можно уменьшить или выключить различными способами, многие из которых непосредственно затрагивают упомянутые выше белки (например, белки комплекса MRN (MRE11, RAD50, NBN (ранее NBS1, синдром разрывов Неймеген 1)) и CtIP (CtBP-взаимодействующий белок), RAD51, белок репликации A (RPA), Rad52, BRCA2 (белок чувствительности к раку молочной железы 2 типа), RAD54, BRCA1 (рак молочной железы 1), взаимодействующий с BARD1 (ассоциированный с BRCA1 RING-домен 1), ВАСН1 (гомолог 1 ВТВ и CNC)). Настоящее изобретение сосредоточено на получении молекул РНК, таких как миРНК, для достижения данной цели.

Опосредованное микрогомологией соединение концов (ОМСК)

Когда другие пути рекомбинации не справляются или не активны, ДНР могут подвергаться репарации с помощью другого допускающего ошибки механизма репарации, называемого опосредованным микрогомологией соединением концов (ОМСК). Данный путь все еще требуется полностью охарактеризовать, и иногда его также называют альтернативным соединением концов (альт-СК), хотя не ясно, действительно ли в основе данных двух процессов лежит один и тот же механизм. Наиболее отличительное свойство данного пути, которое отличается от НГСК, состоит в использовании микрогомологий по 5-25 п.о. в процессе выравнивания разорванных нитей ДНК (McVey и Lee, 2008).

ОМСК может происходить на любой стадии клеточного цикла и не зависит от основных факторов НГСК и ГР, т.е. генов Ku70, лигазы IV и Rad52 (Boboila и др., 2010; Yu и McVey, 2010; Lee и Lee, 2007; Ma и др., 2003). Вместо того, чтобы использовать для инициации ОМСК собственный набор белков, наиболее важные применяемые для инициации белки являются компонентами комплекса MRN (MRX в дрожжах), содержащего Mre11, Rad50 и Nbs1 (Xrs2 в дрожжах), также участвующего в первых этапах ГР (Ма и др., 2003). Помимо комплекса MRN многие другие факторы были предложены в качестве участников в ОМСК, например, СТВР-взаимодействующий белок (CtIP; Yun и Hiom, 2009), поли(АДФ-рибоза)-полимераза 1 (PARP1), комплекс лигаза III/Xrcc1, лигаза I (Audebert и др., 2004), ДНК-полимераза θ (Yu и McVey, 2010) и комплекс ERCC1/XPF (Ма и др., 2003). Тем не менее, еще многие другие белки принимают участие в данном процессе.

Предположили, что в отсутствие других белков, связывающися с концом ДНК (таких как Ku или Rad51), ДНР узнаются PARP1, который затем инициирует их репарацию посредством ОМСК (McVey и Lee, 2008). Процесс репарации, аналогично ГР, начинается с удаления нуклеотидов с 5'- к 3'-концу, которое открывает короткие участки гомологии на каждой стороне от разрыва. Данный этап процессинга осуществляется комплексом MRN и регулируется CtIP (Mladenov и Iliakis, 2011). Комплементарные участки (присутствующие во фрагментах 3'-онДНК) спариваются и некомплементарные фрагменты (флэпы) удаляются (Yu и McVey, 2010), вероятно, комплексом ERCC1/XPF. Бреши (если такие есть) затем заполняются полимеразой (например, ДНК-полимеразой θ или δ (Yu и McVey, 2010; Lee и Lee, 2007)) и разрывы соединяются лигазой I или комплексом лигаза III/Xrcc1.

В отсутствие участков непосредственной микрогомологии на концах ДНК, что наиболее часто встречается, более удаленный фрагмент подвергнутой репарации молекулы можно скопировать, применяя точную ДНК-полимеразу (например, полимеразу θ). Данный дуплицированный участок затем участвует в выравнивании концов ДНК, что приводит к образованию вставки в месте соединения. Данный более сложный вариант опосредованной микрогомологией репарации назвали синтез-зависимой ОМСК (СЗ-ОМСК) (Yu и McVey, 2010).

Хотя ОМСК считали альтернативным путем рекомбинационной репарации, было показано, что он очень эффективен в процессе рекомбинации переключения классов IgH в В-лимфоцитах (Boboila и др., 2010), позволяя предложить, что он может играть большую роль, чем просто быть запасным механизмом. Также возможно, что некоторые ДНР, например, несовместимые выступы или тупые концы (которые плохо поддаются репарации посредством НГСК и/или ГР), могут более эффективно репарироваться посредством ОМСК (Zhang и Paull, 2005).

В ТАБЛИЦЕ D перечислены некоторые из ключевых генов в каждом из трех путей, которые, следовательно, также являются ключевыми мишенями для влияния на каждый из трех путей (см. также публикацию патента США 20120231449, которая полностью включена в данную заявку посредством ссылки). В указанную таблицу также включены белки, участвующие в репарации ДНК, такие как MDC1 и MHS2. MDC1 необходим для активации в ответ на повреждение ДНК контрольной точки в S-фазе и контрольной точки фазы G2/M клеточного цикла. Тем не менее, MDC1 также функционирует в опосредованной Rad51 гомологичной рекомбинации путем удерживания Rad51 в хроматине.

"Нокдаун" в контексте настоящего изобретения означает, что экспрессия целевого гена снижается, например, на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более. Полное подавление означает, что больше нет детектируемой экспрессии целевого гена. В таблице D также показаны результаты, полученные для некоторых мишеней для нокдауна. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что существуют вариации в последовательностях нуклеиновых кислот указанных мишеней, следовательно, варианты генов, в частности, варианты, последовательности которых идентичны на 80%, 90% или 95% последовательностям мишеней, входят в объем настоящего изобретения.

ПРОЦЕССИНГ БЕЛКА И МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ БЕЛКИ

Данная категория белков, которые можно применять для клеточной метаболической инженерии, не принадлежит ни к пути секреции белка, ни к пути рекомбинации, но иным образом влияет на процессы, свойственные экспрессирующей клетке.

Белки процессинга белка или метаболические белки часто представляют собой ферменты, такие как шапероны (см. выше определения шаперонов), протеин-изомеразы, добавляющие сахар ферменты (например, сиалил- или гликозилтрансферазы) или фосфатазы, или белки, контролирующие уровень энергии клетки или функции митохондрий.

В ТАБЛИЦЕ А приведен перечень белков, которые экспрессировали (экспр.) и/или экспрессию которых "подавляли" (нокдаун, НД), под подзаголовком "Процессинг белка и метаболические белки".

РАЗРАБОТКА ВЕКТОРА

Среди невирусных векторов транспозоны особенно привлекательны благодаря их способности встраивать единичные копии последовательностей ДНК с высокой частотой в многочисленные локусы внутри генома хозяина. Сообщалось, что, в отличие от вирусных векторов, некоторые транспозоны преимущественно не встраиваются близко к клеточным генам, и они, таким образом, с меньшей вероятностью приводят к повреждающим мутациям. Более того, транспозоны легко получить и легко с ними обращаться, включая, как правило, донорную плазмиду, несущую транспозон, которая содержит перемещаемую ДНК, фланкированную последовательностями инвертированных повторов, и экспрессирующую транспозазу вспомогательную плазмиду или мРНК. Разработали несколько систем транспозонов для перемещения ДНК в различных линиях клеток, не препятствуя эндогенным копиям транспозона. Например, транспозон PiggyBac (РВ), изначально выделенный из металловидки серой, эффективно переносит целевую ДНК в различные клетки млекопитающих.

Эпигенетические регуляторные элементы можно применять, чтобы защитить перемещаемую ДНК от нежелательных эпигенетических эффектов, когда ее помещают рядом с трансгеном в плазмидные векторы. Например, предложили элементы, называемые участками прикрепления к матриксу (MAR), чтобы повысить встраивание в геном и транскрипцию перемещаемой ДНК, при этом предотвращая замалчивание гетерохроматина, примером которых является эффективный MAR 1-68 человека. Они также могут действовать как инсуляторы и, тем самым, предотвращать активацию соседних клеточных генов. Элементы MAR, таким образом, применяют, чтобы опосредовать высокий уровень продолжительной экспрессии в контексте плазмидных или вирусных векторов.

В данной заявке показано, что при правильной разработке вектора благоприятные свойства эпигенетических регуляторов, в частности, элементов MAR, можно комбинировать с таковыми у векторов на основе транспозонов.

Транспозоны и векторы на основе транспозонов согласно настоящему изобретению можно применять в клеточной метаболической инженерии, например, для экспрессии секреторных белков из различных секреторных путей, описанных в данной заявке. Они также особенно полезны, когда требуется несколько раундов внедрения перемещаемой ДНК. Это подтвердили, когда тестировали множество белков секреторного пути клетки, когда трансфекция множеством векторов и/или множество следующих друг за другом циклов трансфекции могут исчерпать доступный антибиотик или помешать другим способам селекции. Возможность быстро экспрессировать терапевтические белки без необходимости селекции антибиотиком также представляет особый интерес, например, когда нужно экспрессировать множество кандидатных терапевтических белков с целью скрининга, поскольку можно получить значительные количества белков из не подвергнутых селекции популяций клеток через 2-3 недели после трансфекции. В частности, содержащие MAR векторы, несущие транспозоны, таким образом, представляют собой перспективное дополнение к доступному на сегодняшний день арсеналу векторов экспрессии.

Выбранные экспериментальные подходы позволили (в противоположность подходам, в которых полагаются на анализы на основе антибиотиков) провести различие между эффектами, основанными на (1) числе копий перемещаемой ДНК, и эффектами, основанными на (2) уровни экспрессии перемещаемой ДНК.

MAR 1-68 был особенно эффективен, когда он был расположен посередине между ITR транспозона PiggyBac, так как он не снижал эффективность транспозиции. MAR Х-29 также хорошо работал на краях транспозона, не снижая эффективность транспозиции или экспрессии.

Примечательно, что степень MAR-опосредованной активации перемещенных генов была меньше, по сравнению с таковой для самопроизвольного встраивания плазмиды. Более того, уровень экспрессии, нормированный, например, на копии трансгена, был выше при применении транспозонов, чем полученный в результате самопроизвольного встраивания плазмид в отсутствие транспозазы. Данный эффект наблюдали независимо от размера конструкций, присутствия MAR или силы промотора. Этого будут ожидать, так как транспозиция часто может происходить в геномных локусах, относительно позволяющих экспрессию, например, благодаря тому, что структуры хроматина могут быть более доступны как для транспозазы, так и для факторов транскрипции. В этом отношении, предшествующие исследования позволили предположить, что транспозоны преимущественно могут встраиваться внутрь интронов генов, в промоторы или в геномные локусы с более низкой способностью к замалчиванию, хотя данное утверждение остается темой для обсуждения. В качестве альтернативы, совместное встраивание множества копий плазмиды в один и тот же геномный локус, которое происходит в результате событий самопроизвольного встраивания, может приводить к образованию гетерохроматина и к замалчиванию повторяемых последовательностей, которому будет препятствовать MAR, тогда как встраивание единственной копии транспозона может в меньшей степени способствовать такому опосредованному хроматином замалчиванию. Кроме того, встраивание транспозонов в множество независимых геномных локусов повышает вероятность того, что по меньшей мере одна копия встроилась в благоприятное геномное окружение и экспрессируется, тогда как обнаружили, что встраивание плазмиды происходит преимущественно только в один геномный локус.

Наиболее высокие уровни экспрессии перемещаемой ДНК, например, трансген/TER, получили для содержащего MAR транспозона, когда он был связан с сильным промотором. Неожиданно было обнаружено, что высокие уровни экспрессии можно получить при перемещении незначительного числа копий ДНК, например, не более чем 20, 15, 10 или 5. Если, тем не менее, удается добиться высокой продуктивности, меньшее количество встроенных, например, перемещаемых копий ДНК является преимуществом, так как благодаря этому снижается вероятность возникновения точечных мутаций в одном или в подгруппе указанных трансгенов, возникающих в результате спонтанных событий мутагенеза. Кроме того, опосредованные транспозазой события встраивания менее мутагенны, чем механизмы репарации и рекомбинации ДНК, вовлеченные в самопроизвольное встраивание плазмиды, которые могут приводить к встраиванию неполных или перестроенных копий трансгена.

Высокая эффективность встраивания в геном с помощью транспозона piggyBac (РВ) также полезна, когда количество целевых клеток ограничено, например, для невирусного переноса терапевтических генов в первичные стволовые клетки для получения клональных популяций, например, для основанных на клеточной системе методов лечения или регенеративной медицины. В данном контексте, физиологические уровни экспрессии с нескольких перемещенных копий ДНК и частое возникновение событий транспозиции, таким образом, избавляющие от необходимости селекции антибиотиком, являются преимуществом, поскольку использование генов устойчивости к антибиотикам и/или ненадежной, например, экспрессии трансгена может вызывать сомнения относительно безопасности.

Влияние включения MAR на эффективность транспозиции

Так как устойчивость к антибиотику не обязательно отражает эффективную экспрессию трансгена, в качестве индикатора использовали зеленый флуоресцентный белок (GFP), экспрессируемый с производного сильного клеточного промотора GAPDH. Для того, чтобы проверить, может ли добавление элемента MAR в транспозон РВ влиять на эффективность транспозиции и экспрессию трансгена, и чтобы оценить, оказывает ли расположение MAR в конструкции какое-либо влияние на данные эффекты, разработали серию донорных конструкций, несущих транспозоны, содержащих GFP и ген устойчивости к пуромицину (Puro), в которые встроили MAR 1-68 или контрольную нейтральную спейсерную последовательность ДНК в различные положения в указанной плазмиде (фигура 1). Исходную несущую транспозон плазмиду Puro-GFP без вставки использовали в качестве контроля транспозиции, чтобы отличить вклад увеличенного размера транспозона от влияния добавления MAR или спейсерной последовательности.

В присутствии транспозазы наблюдали наиболее высокий уровень экспрессии GFP в не подвергнутых отбору клетках, когда MAR был расположен посередине, но не тогда, когда MAR помещали в 5'-3' направлении от последовательности, кодирующей GFP, и не тогда, когда его вставляли вне перемещенной последовательности, как и ожидалось (фигура 3А). При селекции пуромицином MAR-опосредованная активация уменьшалась, как с транспозазой, так и без нее, тогда как средние значения экспрессии GFP были повышены на один порядок величины (фигура 3В). Полученные рзультаты подтвердили, что отбор пуромицином позволял получить лишь небольшое число клеток, в которых уровни экспрессии наиболее высоки, что предполагали выше по подсчету событий транспозиции. Дополнительно показано, что векторы на основе транспозонов, содержащие MAR, расположенный по центру, позволяли получить уровни экспрессии, аналогичные таковым для такой же плазмиды, трансфицированной без транспозаз.

Влияние включения MAR на число копий встроенного транспозона

Более высокие уровни флуоресценции GFP могут возникать в результате повышенной транскрипции трансгенов и/или встраивания большего числа копий трансгена. Это оценивали путем определения количества встроенных в геном копий трансгена, внедренных с помощью различных типов векторов. Общую геномную ДНК выделяли из объединенных популяций клеток, либо после цитофлуориметрической сортировки флуоресцирующих клеток из не подвергнутых селекции популяций, либо после отбора по устойчивости к пуромицину. Число копий трансгена определяли с помощью анализа методом количественной полимеразной цепной реакции (qPCR) последовательности, кодирующей GFP, по сравнению с клеточным геном β2-микроглобулина (В2М). В отсутствие отбора антибиотиком среднее количество встроенных трансгенов, либо транспозазой, либо клеточными ферментами рекомбинации, было сходным, около 1-6 копий на геном, и на него значительно не влияли MAR или контрольная последовательность (фиг. 4А). Тем не менее, наименьшее число копий получали, когда MAR вставляли на границе транспозона, что поддерживает наше более раннее заключение, что он уменьшает транспозицию в данном положении. После селекции пуромицином клеток с высоким уровнем экспрессии количество перемещенных трансгенов оказалось в аналогичном диапазоне 2-7 копий (фиг. 4В). Тем не менее, количество копий трансгенов, встроенных в отсутствие транспозазы, как правило, было значительно выше и находилось в диапазоне от 6 до 14 копий. Это можно легко объяснить тем фактом, что самопроизвольное встраивание обычно приводит к встраиванию конкатемеров нескольких копий плазмиды в один геномный локус (результаты не представлены), и что большее число копий трансгенов должно приводить к более высоким уровням экспрессии, если клетки, подвергнутые влиянию замалчивания, были удалены путем отбора антибиотиком. Наряду с предшествующим заключением, что отбор антибиотиком позволяет получить преимущественно клетки с высоким уровнем экспрессии, это также свидетельствует о том, что самопроизвольное встраивание плазмиды приводит к большей вариабельности числа копий трансгена, чем при применении векторов на основе транспозонов.

Уровень экспрессии GFP затем нормировали на число копий гена, чтобы оценить внутренний экспрессионный потенциал указанных векторов независимо от их способности встраиваться в геном. В целом, получали более низкий уровень экспрессии на копию трансгена для не подвергнутых селекции клеток или для подверпнутых селекции антибиотиком клеток, трансфицированных без транспозазы или с MAR в центральном положении, что указывает на то, что на экспрессию трансгена влияет как включение эпигенетического регуляторного элемента, так и способ встраивания трансгена (фиг. 5). Уровень экспрессии на копию гена, как правило, повышался при применении транспозазы, когда проводили оценку различных векторов и комбинаций элементов, и данный эффект наблюдали как при отборе антибиотиком, так и без него. Наиболее высокие уровни экспрессии на копию трансгена получали после отбора антибиотиком клеток, в которые был внедрен вектор, несущий транспозон, содержащий элемент MAR в центральном положении, в присутствии транспозазы. Включение MAR непосредственно в 5'-3' направлении от последовательности, кодирующей GFP, значительно не повышало экспрессию трансгена, что было отмечено ранее для абсолютных уровней экспрессии.

Наконец, оценивали, может ли благоприятное влияние MAR 1-68 на экспрессию быть ограничено использованием сильного промотора GAPDH человека, применяемого в данном случае, или оно также будет иметь место с другими промоторами. Таким образом, мы заменили промотор GAPDH человека, запускающий экспрессию GFP, на более слабый ранний промотор вируса обезьян 40 (SV40). Применение более слабого промотора позволяло получить сравнимое количество GFP-положительных клеток и встроенных трансгенов, указывая на то, что экспрессия трансгена не изменяет эффективность транспозиции (не представленные результаты, фиг. 2А и фиг. 4В). Тем не менее, абсолютные уровни экспрессии были ниже при применении промотора SV40 (не представленные результаты по сранению с фиг. 3В). Кроме того, уровень экспрессии, нормированный на число копий транспозона, снижался в 4,6 раз при применении промотора SV40 в отсутствие MAR и в 3,1 раза в присутствии MAR 1-68 (результаты не представлены). Это свидетельствует о том, что MAR мог частично, но не полностью, предотвращать снижение экспрессии, возникшее в результате применения более слабого промотора, даже в присутствии транспозазы. В целом, можно показать, что нескольких встроенных копий достаточно для получения высокого уровня экспрессии трансгена с помощью транспозонов, и что наиболее высокий уровень экспрессии на трансген получали, когда, в данном контексте, MAR-68 помещали в 3'-5' направлении от сильного промотора.

Клетки СНО-М подвергали электропорации один или два раза одним вектором на основе транспозонов, содержащим трансген MAR Х_29. Эффективность транспозиции была наиболее высокой после электропорации (стабильная экспрессия наблюдалась в 30%-45% клеток). Тем не менее, уровни экспрессии трансгена были аналогичны таковым при химической трансфекции, при которой наблюдали меньшее количество положительных клеток и, следовательно, более низкую эффективность транспозиции. На фиг. 7 показаны результаты для легких и тяжелых цепей терапевтических иммуноглобулинов, встроенных в 3'-5' направлении от MAR Х_29, и были получены титры в диапазоне от 1 до 8 мкг/мл. Указанные уровни дополнительно повышались до 23-55 мкг/мл после сортировки экспрессирующих клеток (фиг. 7С).

Экспрессию трансгенов также можно существенно повысить, часто независимо от применения транспозонов, путем разработки определенного вектора, в частности, с применением определенного элемента(ов) MAR в определенных положениях относительно трансгена и, предпочтительно, комбинации данного элемента(ов) MAR с промоторами, энхансерами или продуктами их слияния.

Соответствующий вектор может содержать элементы MAR, которые фланкируют кассету экспрессии трансгена. Например, указанный вектор может содержать, например, элементы MAR (один или более), расположенные в 3'-5' направлении, и элементы MAR (один или более), расположенные в 5'-3' направлении, например, один MAR, расположенный в 3'-5' направлении от кассеты экспрессии трансгена, и один MAR, расположенный в 5'-3' направлении от нее (фиг. 18А, фиг. 18В, фиг. 19). Указанный вектор может содержать встроенный ген устойчивости к пуромицину под контролем промотора SV40. Трансген может находиться под контролем промотора GAPDH человека, слитого с энхансером немедленно-ранних генов цитомегаловируса (CMV) человека (в частности, слитый промотор CGAPD, обсуждаемый выше).

Наиболее высокий процентиль клеток с высоким и очень высоким уровнем продукции (% М3/М2), который оценивали по флуоресценции GFP с помощью анализа FACS и наименьшей вариабельности, можно было получить при применении 1_6R2, 1_68R2 и X_29R3 в качестве MAR, расположенных в 3'-5' направлении (свыше 80%, 80% и свыше 80%). Таким образом, процентили клеток с высоким и очень высоким уровнем продукции (% М3/М2), составляющие более чем 70%, более чем 75% или более чем 80%, входят в объем настоящего изобретения. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что допустимы некоторые отклонения от определенной последовательности данных элементов MAR. Соответственно, векторы, содержащие последовательности нуклеиновых кислот, более чем на 80%, 85%, 90%, 95% идентичные последовательностям SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9 и 10, входят в объем настоящего изобретения (фиг. 18А, фиг. 18В).

Затухание экспрессии в биореакторе и/или в отсутствие селекционного давления часто ограничивает получение интересующего белка. Векторы, содержащие производные 1_68R2, 1_6R2 и X_29R3 MAR в качестве MAR, расположенных в 3'-5' направлении, исследовали на протяжении периода культивирования 5 недель в отсутствие селекции, и флуоресценцию GFP оценивали еженедельно в течение данного периода. При рассмотрении процентиля субпопуляции М3 обнаружили, что элемент 1_6R2 в качестве MAR, расположенного в 3'-5' направлении, и неперестроенный MAR 1-68 в качестве MAR, расположенного в 5'-3' направлении, оказались наилучшей из исследованных комбинаций в векторах с по меньшей мере одним элементом MAR, расположенным в 3'-5' направлении, и одним элементом MAR, расположенным в 5'-3' направлении (значительно выше 80% после более 2, 3, 4 недель) (см. фиг. 19).

Разработанный аналогичным образом вектор также может содержать, например, только элементы MAR (один или более), расположенные в 5'-3' направлении, например, один MAR, расположенный в 5'-3' направлении от кассеты экспрессии трансгенов (фиг. 20А, 20В, 21 и 22), и не содержать MAR, расположенного в 3'-5' направлении. Указанный вектор также, в данном случае, может содержать встроенный ген устойчивости к пуромицину под контролем промотора SV40. Трансген может находиться под контролем промотора GAPDH человека, слитого с энхансером немедленно-ранних генов цитомегаловируса (CMV) человека. См., например, SEQ ID NO: 11 и другие последовательности, идентичные более чем на 80%, 85%, 90% или 95% указанной последовательности. В такой комбинации с единичным MAR, где в качестве MAR выступал Х_29, добились превосходных результатов. Процентиль клеток с высоким уровнем экспрессии GFP (определенная, как описано выше), а также стабильность экспрессии с течением времени (определенная, как описано выше) были лучше, чем, например, таковые для векторов с высоким уровнем экспрессии, в которых элементы MAR фланкировали кассету экспрессии трансгена, а именно, для вектора, содержащего MAR 1_6R2, расположенный в 3'-5' направлении, и неперестроенный MAR 1-68, расположенный в 5'-3' направлении (см. фиг. 22). Данное открытие противопоставляется общепринятым предположениям, что элементы MAR наиболее эффективны, когда они фланкируют трансген (см. патент США 5731178). Стабильность экспрессии означает, что интересующая ДНК, например, трансген, экспрессируется популяцией клеток даже после некоторого периода времени, например, после более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11, 12,13 или 14 недель, на уровне, сравнимом (не более чем на 20%, 10 или 5% меньшем) и, особенно, даже более высоком, чем в течение двух недель от начала экспрессии. Часто стабильная экспрессия связана с высокой процентилью (например, более чем 80%) субпопуляций клеток с высоким уровнем экспрессии.

КЛЕТОЧНАЯ МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ: СЕКРЕТОРНЫЕ БЕЛКИ

Секреция гетерологичных белков, таких как IgG, снижается при неправильном процессинге полипептида и низкой продукции IgG в культивируемых клетках, таких как клетки СНО.

Наблюдали, что вызывалась экспрессия индуцированных стрессом шаперонов, таких как BiP, и что шаперон правильно локализовался в ЭР и был способен взаимодействовать с цепями предшественника IgG. Впрочем, IgG, содержащие определенные вариабельные последовательности, такие, которые обнаруживаются в инфликсимабе, тем не менее, неправильно процессировались и собирались, что приводило к низкой секреции. Следовательно, активация реакции несвернутых белков (UPR) в данных клетках оставалась неэффективной для восстановления существенного уровня иммуноглобулина.

Было показано, что SRP14 вовлечен в молекулярный этап секреторного пути, который является лимитирующим в клетках СНО, экспрессирующих сверх меры экзогенный белок. Примечательно, что данный лимитирующий этап также наблюдается для легко экспрессируемого трастузумаба, что легко приводит к получению клонов с высоким уровнем экспрессии. Данное заключение следовало за открытием, что экспрессия SRP14 человека легко восстанавливала экспрессию LP клонов, но она также повышала секрецию легко экспрессируемого IgG. Обнаружили, что экспрессия SRP14 повышает процессинг и доступность предшественников LC и НС и позволяет получить сравнимые уровни секреции обоих типов IgG. В целом, продемонстрировали, что SRP14 может быть, как правило, лимитирующим, когда секретируемые белки, такие как IgG, чрезмерно экспрессируются в клетках СНО.

Сильный эффект, полученный при экспрессии SRP14 в клетках СНО, наблюдаемый в данном исследовании, был неожиданным и позволил предположить, что SRP14 вызывает длительную задержку элонгации LC в клонах, с трудом продуцирующих IgG (фиг. 12В, пункт 1).

Предшествующее исследование показало, что сигнальный пептид, который выходит из транслирующей рибосомы, первый взаимодействует с субъединицей SRP54 частицы SRP, тогда как ассоциация с SRP9 и SRP14 может блокировать дальнейшую элонгацию образующегося полипептида, что приводит к остановке трансляции (Walter и Blobel 1981). На втором этапе комплекс рибосома-образующийся полипептид-SRP стыкуется с мембраной ЭР посредством взаимодействия с рецептором SR (Gilmore и др., 1982; Walter и др., 1982). SR затем может координировать высвобождение SRP из комплекса рибосома-образующийся полипептид и ассоциацию сайта выхода из рибосомы с каналом транслокона, через который растущий образующийся полипептид проникает в ЭР (Lakkaraju и др., 2008). Затем сопряженное с трансляцией перемещение может возобновиться, что приводит к удалению сигнального пептида и к синтезу правильно процессированных и секретируемых полипептидов.

Для правильного процессинга с трудом поддающихся экспрессии IgG может потребоваться необычно длинная трансляционная пауза, если кинетика стыковки с ЭР может быть медленнее для конкретных комбинаций последовательностей вариабельного домена IgG и сигнального пептида, вследствие неблагоприятных структур образующегося пептида. Таким образом, считали, что, в свою очередь, модуляция кинетики остановки трансляции путем экспрессии экзогенного компонента SRP14 человека улучшает правильную стыковку с ЭР и перемещение пре-LC в ЭР и, таким образом, восстанавливает эффективный процессинг сигнального пептида (фиг. 12В, пункт 2). Соответственно, снижение уровней SRP14 в клетках человека приводит к отсутствию задержки элонгации трансляции в полисомах, что может привести к чрезмерному увеличению длины образующихся полипептидов сверх критического значения, после которого SRP больше не сможет правильно нацелить секретируемый белок на ЭР.

Таким образом, аффинность SRP14 и возможно также SRP54 в клетках СНО к сигнальным последовательностям гетерологичного белка инфликсимаба человека будет снижена, что приведет к неправильной стыковке с ЭР и/или к элонгации образующегося пептида до того, как произойдет правильная стыковка. Это будет исправлено путем сверхэкспрессии SRP14 человека, увеличения периода времени, в течение которого остановленный комплекс рибосома-SRP может искать правильно организованный сайт стыковки на ЭР, несмотря на 'молекулярный затор' из сверхэкспрессированных белков IgG, происходящий на входе в ЭР.

Соответственно, сверхэкспрессия SR и транслокона, которые могут повышать вместительность ЭР в отношении транслокации, также приводила к улучшению секреции, даже в отсутствие сверхэкспрессии SRP14 человека. Наконец, продемонстрировали, что метаболическая инженерия секреторного пути посредством коэкспрессии комбинаций SRP человека, транслокона и субъединиц SR, приводит к дополнительному улучшению способности клетки секретировать белок, позволяя получить даже более высокие уровни секреции. В целом, пришли к заключению, что белки SRP, их рецепторы и транслокон могут быть, как правило, лимитирующими, когда секретируемые белки, такие как иммуноглобулины человека, чрезмерно экспрессируются в клетках СНО.

Немногое известно об относительном содержании SRP и компонентов мембраны ЭР по сравнению с секретируемыми белками и рибосомами в различных типах клеток, но в клетках, экспрессирующих большие количества рекомбинантного белка, потенциально могут возникать нарушения транслокации. Например, SR и/или транслокон могут стать лимитирующими, когда секретируемые белки экспрессируется на аномально высоких уровнях, или SRP14 может встречаться в клетках СНО на субстехиометрических уровнях по сравнению с другими субъединицами SRP. Соответственно, SRP9 и SRP14 присутствуют в 20-кратном избытке по сравнению с другими белками SRP в клетках приматов, но не в клетках мышей, и сверхэкспрессия SRP14 человека в нормальных клетках человека не повышает эффективность секреции щелочной фосфатазы. Более того, SRP14 человека крупнее, чем SRP14 грызуна, так как он содержит аланин-богатый хвост на С-конце, который не обнаружен в SRP14 грызуна. Таким образом, включение более крупного SRP14 человека в SRP СНО может приводить к образованию функциональной химеры SRP с более высокой активностью, с доминирующе-положительным эффектом.

Открытие того, что экспрессия цитозольных компонентов SRP, таких как SRP14, приводит к эффективному процессингу и секреции сверхэкспрессированных белков в клетках СНО, указывает на затруднение, которое можно использовать для увеличения выхода рекомбинантного белка. Данное затруднение ограничивает экспрессию различных и неродственных IgG и, возможно, также множества других моноклональных антител и производных, которые составляют несомненно наиболее распространенный класс рекомбинантных терапевтических белков.

Анализ интермедиатов секреции и возможных стрессовых реакций клетки с последующим систематическим поиском вышележащих лимитирующих действующих факторов, которые вызывают такую стрессовую реакцию, а затем, в конечном счете, разработкой метаболизма секреции клеток СНО привел к лучшему пониманию метаболических ограничений в данных клетках и того, как их обходить.

Гетерологичная экспрессия SRP14 восстанавливает секрецию и процессинг LC

Клоны IgG HP (с высоким уровнем продукции) и LP (с низким уровнем продукции) котрансфицировали с вектором, кодирующим компонент SRP14 SRP, и с плазмидой устойчивости к неомицину. Отдельные клетки из устойчивой к неомицину популяции клеток отделяли с помощью метода серийных разведений, а затем исследовали их рост и секрецию иммуноглобулина в партии чашек для культивирования при взбалтывании. Экспрессирующие SRP14 полученные из клонов LP субклоны секретировали значительно более высокие количества антитела, чем исходные клоны во всей культуре, и позволяли получить титры иммуноглобулина, аналогичные таковым для субклонов HP, экспрессирующих SRP14 (фиг. 8А и 8В, левые панели).

Экспрессия SRP14 не влияла на жизнеспособность клеток, но, похоже, она замедляла и продлевала рост культуры HP-клеток до аналогичных плотностей клеток (фиг. 8А и 8В, правые панели). Собрали культуральные супернатанты различных субклонов и анализировали в них концентрацию антитела. На фиг. 8С показано, что экспрессия SRP14 повышала секрецию из LP-клеток, что приводило к 7-кратному увеличению удельной продуктивности IgG. Более того, экзогенная экспрессия SRP14 также улучшала секрецию IgG из НР-субклонов, что приводило к 30% увеличению удельной продуктивности. Примечательно, что отдельные субклоны, экспрессирующие SRP14, секретировали трудно- и легкоэкспрессируемые IgG на по существу идентичных средних уровнях, при этом срединные значения удельных продуктивностей превышали 30 пикограмм на клетку в день (pcd). Такие очень высокие уровни секреции IgG поддерживались в течение более чем 6 месяцев культивирования, указывая на то, что это является постоянным свойством клеток, экспрессирующих SRP14.

Для того, чтобы дополнительно исследовать взаимосвязь между экспрессией SRP14 и продуктивностью в отношении IgG, анализировали уровни мРНК SRP14 в 5 отдельных экспрессирующих SRP14 LP-субклонах с помощью сравнительной количественной ПЦР. На фиг. 8D показано, что субклоны сверхэкспрессировали SRP14 на уровнях, находящихся в диапазоне от 50 до почти 200-кратных по сравнению с таковыми для эндогенных мРНК SRP14 в клетках СНО. Это сопровождалось улучшением секреции IgG в 4-6 раз по сравнению с LP контрольным клоном клетки. Примечательно, что наибольшую удельную продуктивность получили у субклона с промежуточным уровнем повышения экспрессии SRP14, приблизительно в 100 раз относительно уровня эндогенной мРНК SRP14 в клетках СНО (SRP14-LP субклон Е, результаты не представлены). Это подразумевает взаимозависимость уровня сверхэкспрессии SRP14 и удельной продуктивности IgG вплоть до порогового уровня SRP14, соответствующего 100-кратному повышению относительно эндогенного уровня экспрессии. Это позволило предположить, что другие компоненты секреторного пути, в свою очередь, могут стать лимитирующими при очень высоких уровнях SRP14, и что для оптимальной экспрессии IgG может быть необходима сбалансированная экспрессия компонентов данного пути.

Для того, чтобы проверить, может ли повышенная удельная продуктивность, полученная в процессе оценки клональной линии клеток, применяться в производственном процессе, лучшие экспрессирующие HP и LP субклоны SRP14 исследовали в чашках для культивирования при взбалтывании в условиях периодической культуры с подпиткой (т.е. LP субклон Е и HP субклон В, см. фиг. 8). Экспрессирующий SRP14 LP субклон позволял получить большие количества жизнеспособных клеток и титры иммуноглобулина, сходные с экспрессирующим SRP14 HP субклоном, при этом максимальная концентрация клеток составляла 8×10⁶ клеток/мл и максимальный титр был выше 2 г на литр по окончании производственного цикла (фиг. 9А и В).

Затем исследовали вклад сверхэкспрессии SRP14 в синтез иммуноглобулина для двух данных субклонов. Результаты показали, что экспрессия SRP14 человека в субклоне, полученном из LP, позволяла получить нормально процессированную и зрелую LC, способную к фолдингу и сборке IgG (фиг. 10А, LP, дорожка S по сравнению с дорожкой -). Миграция свободной НС не изменилась, указывая на то, что экспрессия SRP14 действовала, в частности, на неправильно процессированную LC с трудом поддающегося экспрессии белка. Удивительно, что экспрессия SRP14 полностью нарушала накопление агрегировавшей LC в нерастворимой в Triton X фракции (фиг. 9А, нижняя панель). Экспрессия контрольного белка GFP не улучшала растворимость белка, а также не восстанавливала правильный процессинг LC (фиг. 10А, дорожка G для LP клеток). Экспрессия SRP14 не влияла на паттерн миграции НС и LC, полученный для HP субклона, и наблюдали небольшое влияние на количество свободных цепей и полностью собранного IgG по сравнению с контролями (фиг. 10А, дорожка G для HP клеток).

Осуществляли анализы с вытеснением на основе циклогексимида, чтобы исследовать кинетику фолдинга и сборки IgG, а также судьбу агрегатов IgG в экспрессирующем SRP14 субклоне, продуцирующем инфликсимаб. В противоположность исходным LP клеткам, содержащим агрегировавшие LC, неспособные участвовать в сборке IgG, экспрессирующий SRP14 LP субклон более не накапливал нерастворимые в Тх-100 LC (фиг. 9В, нижняя панель). Тем не менее, свободная LC оставалась в небольших количествах по сравнению со свободной НС, что также было отмечено для HP клеток, указывая на то, что она быстро включалась в состав HC-LC димеров и зрелого IgG и что она, возможно, ограничивала сборку IgG (фиг. 9А и 9В). В совокупности данные результаты позволяют предположить, что SRP14 может играть важную роль в процессинге LC в LP клетках, и что дополнительная экспрессия белка SRP может улучшить секрецию с трудом поддающихся экспрессии и легко поддающихся экспрессии IgG до аналогичных уровней.

Инженерия перемещения в ЭР улучшает секрецию рекомбинантного IgG

В связи с тем, что сверхэкспрессия гетерологичного SRP14 повышала секрецию IgG до данного порога, сделали вывод, что другие компоненты секреторного пути, которые взаимодействуют непосредственно или опосредованно с SRP14, могут стать лимитирующими в SRP14-LP субклонах. Следовательно, мы исследовали, может ли сверхэкспрессия других компонентов секреторного пути также улучшать экспрессию IgG, либо отдельно, либо в комбинации с SRP14. Данные компоненты включали белки SRP9 и SRP54 человека, которые входят в состав комплекса SRP вместе с SRP14, субъединицы рецептора SRP (SR) и субъединицы транслокона Sec61α, β и γ.

В первой серии экспериментов наилучший LP клон, а именно LP клон Е на фиг. 1, трансфицировали векторами экспрессии, кодирующими белки SRP или белки транслокона, отдельно или в комбинации. Затем оценивали продукцию IgG в полученных поликлональных популяциях LP клеток при периодическом культивировании. Экспрессия компонентов SRP или белков транслокона повышала секрецию иммуноглобулина данными повторно трансфицированными поликлональными популяциями LP клеток (фиг. 11А и не представленные результаты). По сравнению с экспрессией SRP14 отдельно сверхэкспрессия комбинаций белков SRP или транслокона улучшала удельную продуктивность трансфицированных поликлональных популяций LP клеток на дополнительные 20%-40% (фиг. 11А, сравнение срединных значений). Полученные результаты явно свидетельствуют о том, что определенные комбинации более эффективно восстанавливали секрецию инфликсимаба, чем экспрессия SRP14 отдельно, такие как комбинации, состоящие из экспрессии трех полипептидов SRP и его рецептора (SR), или из совместной экспрессии SR и транслокона (фиг. 11А).

Также оценивали, можно ли дополнительно оптимизировать экспрессирующий SRP14 LP субклон Е путем экспрессии комбинаций SR и/или транслокона. По сравнению с 30 pcd для SRP14-LP субклона Е, поликлональные популяции клеток, подвергнутые отбору после трансфекции белками SR и транслоконом, позволяли получить удельные продуктивности выше 60 pcd с трудом поддающегося экспрессии иммуноглобулина (фиг. 10В). Пришли к заключению, что векторы, экспрессирующие белки SR и транслокон, также можно применять для получения клонов с повышенными удельными продуктивностями по сравнению с SRP14-LP клоном E, и что можно успешно применять подход, основанный на сериях последовательных циклов трансфекции и селекции.

КЛЕТОЧНАЯ МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ: подавление пути рекомбинации и экспрессии ТЕР и функциональной РНК ТЕР

Для того, чтобы повлиять на рекомбинацию, можно подвергнуть замалчиванию важные гены рекомбинации ДНК. Мишенями для нокдауна являются гены, известные из литературы как важные для определенных путей рекомбинационной репарации у млекопитающих (таблица D). Поскольку большинство из данных генов необходимы для выживаемости и развития клетки, постоянное их замалчивание может привести к снижению жизнеспособности клетки. Следовательно, предпочтительно временное замалчивание данных целевых генов с применением РНК-интерференции (РНКи).

В клетках, обработанных смесью миРНК против факторов, вовлеченных в первые этапы НГСК, т.е. Ku 70, Ku80 и ДНК-ПКкс (один дуплекс миРНК на белок), частота событий НГСК была значительно ниже, чем в необработанных клетках. Взамен, в данных клетках ГР была более эффективной, что приводило к уменьшению отношения НГСК к ГР (от 2,7:1 до 1,3:1). Напротив, в клетках, обработанных миРНК, направленной против незаменимого фактора ГР - Rad51, ГР-зависимое восстановление уровня GFP почти полностью прекращалось, что повышало отношение НГСК : ГР до 5:1. Похоже, что данные результаты свидетельствуют о том, что репортерный анализ ГР и НГСК обладает достаточной чувствительностью, чтобы его можно было применять в экстрахромосомной форме. Они также дополнительно подвергают сомнению надежность используемых ранее мутантных линий клеток СНО (а именно, клеток 51D1, изначально опубликованных как ГР-отрицательные клетки, но, по-видимому, способных осуществлять ГР согласно данному анализу, результаты не представлены).

Повышение экспрессии и встраивания GFP в присутствии MAR. В параллельных экспериментах клетки СНО, обработанные различными миРНК, направленными против ГР или против НГСК, трансфицировали плазмидами, содержащими GFP или MAR-GFP. После двух недель отбора антибиотиком анализировали экспрессию и встраивание GFP в данных клетках с помощью FACS и количественной ПЦР, соответственно. При всех исследованных условиях добавление MAR приводило к 4-5-кратному повышению экспрессии GFP по сравнению с клетками, трансфицированными плазмидой без MAR (фиг. 13, фиг. 14А), что согласовалось с предшествующими сообщениями (Grandjean и др., 2011). Это повышение сопровождалось приблизительно 3-кратным увеличением числа копий встроенного GFP в клетках, трансфицированных плазмидой MAR-GFP, по сравнению с клетками, которые получили вектор без MAR (фиг. 13, фиг. 14В). Также наблюдалось 2-кратное увеличение средней флуоресценции GFP на копию гена (фиг. 13, фиг. 14С), возможно, вследствие более благоприятной локализации сайта встраивания (например, на участке, богатом эухроматином). Следовательно, можно предположить, что элементы MAR обладают способностью направлять гены в геномные локусы, позволяющие экспрессию гена. Комбинация миРНК против ГР с MAR (миРНК: RAD51, Rad51C и Brca1) приводила к изменению среднего уровня экспрессии GFP больше, чем в 11 раз, тогда как одна миРНК против ГР (миРНК: Rad51) приводила к изменению меньше, чем в 9 раз. Другое комбинации, такие как комбинация миРНК против ОМСК с MAR, также приводили к улучшенной экспрессии по сравнению с одной миРНК (результаты не представлены). Соответственно, комбинация различных миРНК (2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10) к мишеням в том же или отличных метаболических путях, в частности, в пути рекомбинации, входит в объем настоящего изобретения.

Отсутствие влияния подавления гена НГСК на экспрессию и встраивание трансгена. Обработка миРНК против белков НГСК, похоже, значительно не влияла на стабильную экспрессию трансгена. Также не наблюдалось существенного изменения числа копий GFP в геноме по сравнению с необработанными клетками (за исключением клеток, обработанных миРНК против 53 ВР1, но только в отсутствие MAR, что, возможно, указывает на эффект, не свойственный рекомбинации посредством пути НГСК).

Повышение экспрессии и встраивания трансгена в отсутствие факторов ГР. В противоположность подавлению факторов НГСК, присутствие миРНК против белков ГР часто приводило к существенному повышению уровней стабильной экспрессии GFP по сравнению с необработанными клетками (за исключением Brca2, для которого наблюдалось существенное снижение уровня, но снова лишь в отсутствие MAR) (фиг. 15А). Как и в случае с замалчиванием генов НГСК, присутствие MAR приводило к повышению уровней стабильной экспрессии и встраивания GFP, а также к повышению уровней экспрессии на копию гена. На этот раз, тем не менее, замалчивание факторов ГР увеличивало данный эффект в 5-7 раз (наиболее ярким было подавление Rad51, приводящее к уровням экспрессии GFP, большим в 7,4 раза) (фиг. 15А), что может свидетельствовать о том, что белки ГР противодействуют положительному влиянию элемента MAR на экспрессию трансгена. В отсутствие MAR повышение экспрессии GFP коррелировало с увеличенным числом копий GFP в геноме (результаты не представлены). Неожиданно, этого не наблюдали в присутствии MAR, что указывает на то, что подавление белка ГР не влияло на опосредованное MAR увеличение числа копий (за исключением миРНК Rad51D). Похоже, это позволяет предположить, что отсутствие функционального пути репарации ГР не увеличивает количество событий рекомбинации, вызванных MAR. Вместо этого, оно стимулирует встраивание MAR и трансгена в более благоприятный локус, позволяя ему более эффективно экспрессироваться. Эта точка зрения также поддерживается повышенной экспрессией отдельных копий GFP в присутствии MAR в клетках, обработанных миРНК против ГР (фиг. 14С). Другая возможность состоит в том, что количество копий плазмиды, встроенных в геном, уже находится на максимальном уровне в контрольных клетках (при количестве плазмидной ДНК, используемом здесь), и его невозможно дополнительно увеличить даже в условиях, более благоприятных для MAR.

В совокупности, данные результаты позволяют предположить, что процесс опосредованного MAR встраивания трансгена преимущественно опосредован путем, противоположным гомологичной рекомбинации, хотя, вероятно, не путем НГСК, поскольку подавление его компонентов не влияло на встраивание или экспрессию. Можно предположить, что данный альтернативный путь менее активен в присутствии функционального пути ГР, но становится более важным, если ГР не работает.

ЭКСПРЕССИЯ кшРНК ПРОТИВ ГР ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ БЕЛКОВ

Три миРНК, нацеленные на Rad51, превратили в последовательности кшРНК, которые могут образовывать шпилечные структуры, и последовательность, кодирующую кшРНК, встраивали в вектор, несущий транспозон piggyBac, под контролем слитых энхансера GAPDH и промотора CMV, за которыми следовал MAR Х-29, но без гена селекции антибиотиком. Адаптированные для суспензии клетки СНО-М трансфицировали три раза донорной плазмидой, несущей транспозон, и вектором экспрессии транспозазы, после чего произвольно собирали 30 отдельных клонов клеток, применяя устройство ClonePix. Исходные клетки, а также экспрессирующую кшРНК популяцию клеток и клоны, повторно трансфицировали плазмидой, экспрессирующей GFP (а именно, конструкцией Puro-GFP-MAR Х_29), а затем осуществляли селекцию пуромицином поликлональных популяций экспрессирующих GFP клеток. Сравнение профилей флуоресценции GFP свидетельствовало о том, что получили более высокое соотношение клеток со средним-высоким уровнем флуоресценции (популяция клеток М2) или очень высоким уровнем флуоресценции (популяция клеток М3) из популяции клеток, трансфицированных вектором, несущим кшРНК, по сравнению с исходными клетками СНО-М (фиг. 17А).

Несколько клонов, экспрессирующих кшРНК, опосредовали очень высокие уровни GFP, при этом более 80% устойчивых к антибиотику клеток находились в субпопуляции МЗ с высоким уровнем флуоресценции через 10 дней после трансфекции, например, клон 16 и клон 26 (фиг. 17А и В). Высокие уровни флуоресценции GFP поддерживались в данных двух клонах после 35 дней дополнительного культивирования без селекции (фиг. 17С). Напротив, клон 17 не экспрессировал очень высокие уровни GFP в день 10, и экспрессия GFP, похоже, была нестабильной (фиг. 17В и С). Промежуточные уровни экспрессии и промежуточную стабильность получили для клона 8 и клона 22. Данные клоны также трансфицировали экспрессионными плазмидами, кодирующими легкую и тяжелую цепь с трудом поддающегося экспрессии терапевтического антитела инфликсимаба. По-прежнему, клоны 16 и 26 продуцировали наиболее высокие уровни антитела, за ними следовали клоны 8 и 22, тогда как клон 17 экспрессировал количества иммуноглобулина, которые были близки к 0,5-1 pcd, полученным для исходных клеток СНО-М (фиг. 17D и не представленные результаты). В клонах клеток, демонстрирующих наиболее значительно сниженные уровни мРНК Rad51, обнаруживали высокие уровни экспрессии как GFP, так и иммуноглобулина инфликсимаба, указывая на то, что повышенная экспрессия трансгена происходила в результате пониженной экспрессии рекомбинационного белка (результаты не представлены).

Таким образом, можно добиться более высоких уровней и более стабильной продукции секретируемых терапевтических белков, таких как инфликсимаб, клетками, экспрессирующими кшРНК, нацеленную на Rad51, или клетками, временно трансфицированными миРНК, такими как миРНК, нацеленная на Rad51.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Плазмиды и векторы ДНК

Вектор экспрессии, несущий транспозазу РВ, pCS2+U5V5PBU3, содержит последовательность, кодирующую транспозазу РВ, окруженную 5'- и 3'-нетранслируемыми концевыми участками (НТО) гена β-глобина Xenopus laevis. Данную плазмиду сконструировали, как описано далее: фрагмент 3'-НТО размером 317 п.о. из pBSSK/SB10 (любезно предоставленный доктором S. Ivies) встраивали в pCS2+U5 (Invitrogen/nife Technologies, Пейсли, Великобритания) с получением pCS2+U5U3. Последовательность, кодирующую транспозазу РВ (2067 п.о., номер доступа в GenBank: EF587698), синтезировали в ATG:biosynthetic (Мерцхаузен, Германия) и клонировали в каркас pCS2+U5U3 между двумя НТО. Контрольный вектор РВ соответствует немодифицированной плазмиде pCS2+U5 (фигура 1, левая панель).

Векторы, несущие различные транспозоны, используемые в данном исследовании, получали путем вставки 3'- и 5'-инвертированных концевых повторов (ITR) РВ размером 235 п.о. и 310 п.о., соответственно, синтезированных в ATG:biosynthetic (Мерцхаузен, Германия), в плазмиду pBluescript SK (pBSK ITR3'-ITR5', фигура 1, правая панель). Затем вставляли ген устойчивости к пуромицину (Puro^R) под контролем промотора SV40 из плазмиды pRc/RSV (Invitrogen/Life Technologies) между двумя указанными ITR. Элементы MAR 1-68 и MAR Х-29, гены устойчивости к пуромицину и GFP, применяемые в данном исследовании, были такие, как описано ранее. Векторы экспрессии иммуноглобулинов и последовательности, кодирующие SRP9, SRP14, SRP54, SRPR-альфа, SRPR-бета, SEC61A1, SEC61B и SEC61G, были такие, как описано в Le Fourn и др. (Metab. Eng., Epub, 1 февраля 2013 г.)

GFP, иммуноглобулин или секреторные белки экспрессировали, применяя эукариотическую кассету экспрессии, состоящую из энхансера CMV человека и промотора GAPDH человека, расположенных в 3'-5' направлении от кодирующей последовательности, за которыми следовал сигнал полиаденилирования SV40, терминатор гастрина человека и энхансер SV40 (см. Le Fourn и др., 2013). Кассеты экспрессии и/или элементы MAR встраивали между последовательностями ITR или в каркас бактериального вектора, как показано на фигуре 1 и в описаниях к фигуре, применяя стандартные способы клонирования.

Культивирование клеток и анализ трансфекции

Линию клеток DG44 СНО культивировали в DMEM: F12 (Gibco), дополненной гипоксантином/тимидином (НТ, Gibco) и 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS, Gibco). Трансфекцию осуществляли, применяя PEI (JetPRIME, Polyplus Transfection), следуя инструкциям производителя. Клетки трансфицировали различными количествами плазмидной ДНК, содержащей транспозазу РВ (в диапазоне от 0 до 1500 нг), для экспериментов с титрованием или котрансфицировали оптимальным соотношением 300 нг плазмиды, экспрессирующей транспозазу РВ, и 300 нг донорной плазмиды, несущей транспозон. Через два дня после трансфекции клетки переносили в несколько чашек Петри в зависимости от эксперимента. Для анализа не подвергнутых селекции трансфицированных клеток СНО, клетки пересевали без селекции антибиотиком в течение 3 недель и процент флуоресцентных клеток и интенсивность флуоресценции GFP-положительных клеток определяли с помощью анализа FACS, применяя проточный цитометр CyAn ADP (Beckman Coulter). Для анализа числа копий гена в не подвергнутых селекции клетках стабильные GFP-положительные клетки СНО подвергали сортировке, применяя FACSAriall. Для количественного анализа устойчивых к антибиотику колоний, 50000 трансфицированных клеток высевали в чашки диаметром 100 мм и подвергали селекции 5 мкг/мл пуромицина в течение 2 недель. Затем устойчивые колонии фиксировали и окрашивали 0,7% метиленовым синим в 70% EtOH в течение 10 мин, и подсчитывали колонии диаметром >0,5 мм. Для исследования экспрессии GFP клетки подвергали селекции в течение двух недель перед анализом FACS флуоресценции GFP, описанным выше.

Клетки СНО-М поддерживали в суспензионной культуре в бессывороточной среде SFM4CHO Hyclone (ThermoScientific), дополненной L-глутамином (РАА, Австрия) и добавкой НТ (Gibco, Invitrogen life sciences), при 37°C, 5% CO₂ в увлажненном воздухе. Несущие транспозон донорные плазмиды переносили в данные клетки путем электропорации согласно рекомендациям производителя (Neon devices, Invitrogen). Проводили количественный анализ секреции иммуноглобулина периодическими культурами, как описано ранее (см. Le Fourn и др., 2013). Вкратце, популяции клеток, экспрессирующих иммуноглобулины, оценивали при периодическом культивировании в минибиореакционных пробирках объемом 50 мл (ТРР, Швейцария) при 37°С во влажной камере при 5% CO₂ в течение 7 дней. Концентрации иммуноглобулина в культуральных супернатантах измеряли с помощью «сэндвич»-иммуноферментного анализа (ИФА).

Анализы числа копий генов методом количественной ПЦР (qPCR)

Общую ДНК выделяли из популяций стабильных клеток СНО после анализов транспозиции, применяя набор DNeasy Tissue (Qiagen, Хильден, Германия), следуя протоколу производителя. Число копий встроенных в геном трансгенов оценивали, применяя 6 нг геномной ДНК, с помощью количественной ПЦР, применяя набор с SYBR Green-Taq полимеразой от Eurogentec Inc и устройство для проведения ПЦР ABI Prism 7700 (Applied Biosystems). Праймеры GFP-прямой: ACATTATGCCGGACAAAGCC и GFP-обратный: TTGTTTGGTAATGATCAGCAAGTTG использовали для определения количества гена GFP, тогда как праймеры В2М-прямой: ACCACTCTGAAGGAGCCCA и В2М-обратный: GGAAGCTCTATCTGTGTCAA использовали для амплификации гена бета-2 микроглобулина. Для ампликона, полученного с помощью праймеров В2М, обнаружили одно совпадение на гаплоидный геном СНО после выравнивания с нашей сборкой генома СНО, применяя программное обеспечение NCBI BLAST. Так как СНО являются почти диплоидными клетками, приблизительно подсчитали, что В2М присутствует в 2 копиях на геном. Соотношения числа копий целевого гена GFP рассчитывали по сравнению с таковым для эталонного гена В2М, как описано ранее.

Сортировка и анализ экспрессирующих иммуноглобулин клеток

Для сортировки магнитным способом экспрессирующих IgG клеток, трансфицированные клетки СНО-М высевали при концентрации клеток 3×10⁵ клеток в мл в среде SFM4CHO (Thermo Scientific), дополненной 8 мМ L-глутамином и добавкой 1×НТ (оба от Gibco), называемой полной средой. После 4 дней в культуре 2×10⁶ клеток промывали, ресуспендировали в ФБР и инкубировали с биотинилированным IgG человека (KPL216-1006) в конечной концентрации 3 мкг/мл вместе с 30 мкл заранее промытых покрытых стрептавидином гранул MyOne Т1 Dynabeads (Invitrogen), на вращающемся колесе в течение 30 минут при комнатной температуре. Смесь клеток и гранул затем помещали на магнит, чтобы отделить помеченные клетки от не помеченных клеток. Гранулы промывали 4 раза фосфатно-солевым буферным раствором (ФБР). После последней промывки ФБР гранулы и клетки ресуспендировали в 500 мкл заранее нагретой полной среды, переносили в 24-луночный планшет и инкубировали при 37°С при 5% CO₂. После 24 ч отделенные методом магнитной сортировки поликлональные клетки отделяли от гранул и продолжали инкубацию до тех пор, пока клетки не достигли достаточной плотности для их размножения в 50 мл центрифужных биореакторах ТРР (TECHNO PLASTIC PRODUCTS AG, Швейцария).

В качестве альтернативы, выделяли два клона из не подвергнутых сортировке и не подвергнутых селекции популяций, экспрессирующих каждый из трех IgG, применяя устройство clonePix. Вкратце, для иммобилизации отдельных клеток применяли полутвердые среды, и колонии, секретирующие большие количества IgG, собирали через десять дней после заливки. Данные линии клеток пересевали каждые 3-4 дня в центрифужные биореакторы при плотности 3×10⁵ клеток/мл в содержащую пептон ростовую среду (SFM4CHO, дополненную 8 мМ глутамином, от Hyclone) и инкубировали во влажной камере при 37°С и 5% CO₂ при вращении на 180 об/мин.

При оценке поликлональных популяций клеток титры IgG определяли для клеток, которые высевали при концентрации 1×10⁵ клеток в мл и растили в течение 6 дней в 5 мл полной среды в 50 мл центрифужных биореакторах. В качестве альтернативы, культуры клональных популяций во встряхиваемых колбах инокулировали при плотности 3×10⁵ клеток/мл в среде SFM4CHO, чтобы начать производственный процесс периодического культивирования с подпиткой. Производство периодических культур с подпиткой осуществляли в культуре объемом 25 мл во встряхиваемых колбах объемом 125 мл или в культуре объемом 5 мл в культуральных пробирках ТРР объемом 50 мл во влажных камерах при 37°С и 5% CO₂ при взбалтывании при 150 об/мин (встряхиваемые колбы и центрифужные пробирки объемом 125 мл). Производство осуществляли в течение десяти дней с подпиткой 16% от исходного объема культуры концентрированной подпитки с определенным химическим составом (Hyclone, Cell Boost 5, 52 г/л) в дни ноль, три и шесть-восемь. В процессе культивирования не применяли подпитку глутамином и глюкозой. Жизнеспособность и концентрацию жизнеспособных клеток (VCD) в культуре измеряли ежедневно, применяя устройство GUAVA (Millipore). Двойной анализ «сэндвич»-ИФА применяли, чтобы определить концентрации МАТ, секретируемых в культуральные среды.

Плазмиды и относительный количественный анализ ПЦР

Клонирующие векторы, применяемые в данном исследовании, представляли собой векторы для экспрессии в млекопитающем SLXplasmid_082 от Selexis. Последовательность люциферазы контрольного вектора pGL3 (Promega) заменяли на эукариотическую кассету экспрессии, состоящую из энхансера CMV человека и промотора GAPDH человека, расположенную в 3'-5' направлении от последовательности, кодирующей EGFP, за которой следовал сигнал полиаденилирования SV40, терминатор гастрина человека и энхансер SV40. Два полученных из MAR генетических элемента человека фланкировали указанную кассету экспрессии, и ген устойчивости к пуромицину экспрессировался под контролем промотора SV40, при этом SLXplasmid_082 отличается по типу элемента MAR, расположенного в 3'-5' направлении от указанной кассеты экспрессии (hMAR 1-68 и hMAR X-29; Girod и др., 2007).

кДНК тяжелых и легких цепей трастузумаба и инфликсимаба клонировали в вектор экспрессии, чтобы заменить EGFP. Вектор, несущий кассеты экспрессии обеих тяжелой и легкой цепей каждого IgG, получали путем объединения кассет экспрессии тяжелой и легкой цепей на одном плазмидном векторе. Последовательности сигнальных пептидов из всех тяжелых и легких цепей, а также константные области легких цепей идентичны. Константные области тяжелых цепей отличаются в нескольких положениях аминокислот (варианты DEL по сравнению с ЕЕМ).

Праймеры для амплификации методом ПЦР и номера доступа в GenBank кДНК SRP9, SRP14, SRP54, SRPR-альфа, SRPR-бета, SEC61A1 и SEC61B перечислены в других местах в данном тексте. Продукты ПЦР, кодирующие секреторные белки, клонировали в вектор, чтобы заменить последовательность EGFP. Когда несколько секреторных белков экспрессировали совместно, инвертированные концевые последовательности транспозона piggyBac встраивали в векторы, чтобы заключить в них кассету экспрессии, и полученные в результате этого векторы котрансфицировали с вектором экспрессии, несущим транспозазу piggyBac, чтобы улучшить встраивание трансгена и избавиться от необходимости отбора антибиотиком.

Обычный вектор экспрессии, несущий транспозазу РВ, который представлял собой pCS2+U5V5PBU3, содержащий последовательность, кодирующую транспозазу РВ, окруженную 5'- и 3'-нетранслируемыми концевыми областями (НТО) гена β-глобина Xenopus laevis, применяли в смежных экспериментах. Данную плазмиду конструировали, как описано далее: фрагмент 3'-НТО размером 317 п.о. из pBSSK/SB10 встраивали в pCS2+U5 (Invitrogen/Life Technologies, Пейсли, Великобритания) с получением pCS2+U5U3. Последовательность, кодирующую транспозазу РВ (2067 п.о., номер доступа в GenBank: EF587698), синтезировали в ATG:biosynthetic (Мерцхаузен, Германия) и клонировали в каркас pCS2+U5U3 между двумя НТО. Контрольный вектор РВ соответствовал немодифицированной плазмиде pCS2+U5.

Векторы, несущие различные транспозоны, получали путем вставки 3'- и 5'-инвертированных концевых повторов РВ (ITR) размером 235 п.о. и 310 п.о., соответственно, синтезированных в ATG:biosynthetic (Мерцхаузен, Германия), в плазмиду pBluescript SK (pBSK ITR3'-ITR5'). Ген фосфотрансферазы неомицина (Neo^R) под контролем промотора SV40 из плазмиды pRc/RSV (Invitrogen/Life Technologies) затем вставляли между двумя указанными ITR. Элементы MAR 1-68 и MAR Х-29, гены устойчивости к пуромицину и GFP, применяемые в данном исследовании, были такие, как описано ранее (Girod и др. 2007; Grandjean и др. 2011; Hart и Laemmli 1998). Векторы экспрессии иммуноглобулинов и последовательности, кодирующие SRP9, SRP14, SRP54, SRPR-альфа, SRPR-бета, SEC61A1 и SEC61B, описаны в данной заявке. Секреторные белки экспрессировали, применяя эукариотическую кассету экспрессии, состоящую из энхансера CMV человека и промотора GAPDH человека, расположенных в 3'-5' направлении от кодирующей последовательности, за которыми следовал сигнал полиаденилирования SV40, терминатор гастрина человека и энхансер SV40. Кассеты экспрессии и/или элементы MAR встраивали между последовательностями ITR или в каркас бактериального вектора, применяя стандартные способы клонирования.

Системы транспозона PiggyBac, включая подходящие 3'- и 5'-ITR, а также транспозазу, например, доступны для приобретения у SYSTEM BIOSCIENCE.

Для относительного анализа методом количественной ПЦР общую РНК выделяли из 1×10⁵ клеток и транскрибировали с помощью обратной транскриптазы в кДНК, применяя набор FastLane Cell cDNA (Qiagen), следуя инструкциям производителя. Осуществляли количественный анализ экспрессии SRP14 и GAPDH с помощью количественной ПЦР, применяя Rotor Gene Q (Qiagen) и LightCycler^®480 SYBR Green I Master (Roche), с применением праймеров, перечисленых в приложенной таблице S1. Уровни информационной РНК SRP14 нормировали на таковые для GAPDH, применяя программное обеспечение Rotor-Gene Q Series (Qiagen).

Культивирование клеток, стабильная трансфекция и субклонирование линий клеток СНО

Суспензионные клетки яичника китайского хомячка (CHO-K1) поддерживали в бессывороточной среде SFM4CHO Hyclone (ThermoScientific), дополненной L-глутамином (РАА, Австрия) и добавкой НТ (Gibco, Invitrogen life sciences), при 37°C, 5% CO₂ в увлажненном воздухе. Клетки СНО-K1 трансфицировали векторами экспрессии тяжелых и легких цепей трастузумаба или инфликсимаба, несущими ген устойчивости к пуромицину, путем электропорации согласно рекомендациям производителя (Neon devices, Invitrogen). Через два дня клетки переносили в планшеты Т75 в среду, содержащую 10 мкг/мл пуромицина, и указанные клетки дополнительно культивировали в условиях селекции в течение двух недель. Затем получали стабильные отдельные клоны клеток, экспрессирующих IgG трастузумаб и инфликсимаб, с помощью метода серийных разведений, растили и анализировали эффективность их роста и уровни продукции IgG. Продуцирующие IgG трастузумаб и инфликсимаб клоны клеток, экспрессирующих наиболее высокие уровни IgG, отбирали для дополнительных биохимических экспериментов. Некоторые из данных клонов затем котрансфицировали путем электропорации вектором, экспрессирующим SRP14, и плазмидой, несущей ген устойчивости к неомицину. Клетки затем культивировали в среде, содержащей 300 мкг/мл G418, в течение двух недель, как описано выше. Стабильные клоны выделяли с помощью ограниченного разведения и подтверждали экспрессию SRP14 с помощью анализов методом количественной ПЦР перед выращиванием культуры для биохимического анализа.

Периодическое культивирование и периодическое культивирование с подпиткой

Эффективность роста и продукции для отдельных клонов, экспрессирующих трастузумаб и инфликсимаб, оценивали при периодическом культивировании в минибиореакторе объемом 50 мл (ТРР, Швейцария) при 37°С во влажной камере при 5% CO₂ в течение 7 дней. В день 3, день 4 и день 7 культивирования клеток определяли концентрацию и жизнеспособность клеток, применяя систему для проточной цитометрии Guava EasyCyte (Millipore). Титр IgG в культуральных супернатантах измеряли с помощью «сэндвич»-ИФА. Плотность клеток (Cv*мл^-1) и значения титра IgG (мкг*мл^-1) наносили на график в указанный день отбора образцов в процессе эксперимента. Удельную продуктивность IgG клонов, экспрессирующих трастузумаб и инфликсимаб, определяли как падение концентрации IgG в зависимости от суммарного количества жизнеспособных клеток (IVCD), рассчитанное в день 3 - день 7 (фаза продукции), и выражали в виде пг на клетку в день (pcd).

Для периодических культур с подпиткой клетки высевали при плотности 0,3×10⁶ клеток/мл во встряхиваемые колбы объемом 125 мл в 25 мл бессывороточной среды SFM4CHO Hyclone. Культуры поддерживали при 37°С и 5% CO₂ при встряхивании. Культуры подпитывали ежедневно коммерчески доступной подпиткой Hyclone (ThermoScientific). Плотности клеток и продукцию IgG оценивали ежедневно.

Анализ экспрессии и агрегации белков

Растворимые цитоплазматические белки экстрагировали путем пермеабилизации клеток 1% Triton Х-100 в буфере ФБР в присутствии коктейля ингибиторов протеаз (Roche, inc). После инкубации в течение 30 мин на льду клетки центрифугировали 10 мин при 14000 об/мин. Супернатант назвали фракцией "растворимых цитозольных и ЭР белков". Осадок растворяли путем обработки ультразвуком в буфере Лэммли с мочевиной (62,5 мМ Трис, 2% ДСН, 8 М мочевина, 5% глицерин, краситель бромфеноловый синий), что позволяло получить нерастворимую фракцию агрегировавших и везикулярных белков. Растворимую и нерастворимую фракции затем разбавляли буфером Лэммли с добавлением или без 2-меркаптоэтанола и кипятили 8 мин при 95°С. Образцы в восстанавливающем и невосстанавливающем буферах разделяли на 10% или градиентном 4-10% акриламидных гелях с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с добавлением додецилсульфата натрия (ЭФ в ПААГ/ДСН), соответственно.

Белки затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану. После блокирования в 5% молоке, разбавленном в TBS-Tween (20 мМ Трис, 0,5 М NaCl, 0,1% Tween 20), мембраны анализировали для обнаружения различных белков, применяя следующие первичные антитела: антитело осла против IgG (H+L) человека, конъюгированное с пероксидазой хрена (JK immunoresearch, №709035149, 1:5000), поликлональные антитела кролика против BiP человека (Cell signalling, BiP, С50В12, 1:2000), моноклональное антитело мыши против CHOP человека (Cell signalling, CHOP, L63F7, 1:500), поликлональное антитело козы против GAPDH человека. После инкубации в течение ночи при 4°С каждую мембрану обрабатывали конъюгированными с пероксидазой хрена HRP IgG против антител кролика или IgG против антител мыши (Cell signalling, 1:20000). Белки, специфично узнаваемые каждым антителом, детектировали, применяя реагенты для улучшенной хемилюминесценции (ECL) и экспонирование с пленкой для ECL (Amersham Biosciences).

Эксперименты с вытеснением белков на основе циклогексимида

Эксперименты с вытеснением на основе циклогексимида осуществляли на клонах СНО-K1 с высоким (HP) и низким (LP) уровнем продукции IgG. Равные количества клеток высевали на 6-луночные планшеты в полной культуральной среде, дополненной 100 мкМ циклогексимида (Sigma). В различные моменты времени клетки собирали и лизировали в ФБР, 1% Triton Х-100. Растворимые и нерастворимые в Тх фракции затем разделяли на 4-10% акриламидном геле с помощью ПААГ/ДСН в невосстановительных условиях и подвергали иммуноблоттингу с антителом к IgG человека.

Анализы дифференциального фракционирования детергентом

Фракционирование цитозольных и мембранных белков осуществляли путем дифференциального экстрагирования детергентом из осадка клеток. Клетки сначала промывали в 1 мл ФБР, и плазматические мембраны HP и LP клеток пермеабилизовали в буфере КНМ (110 мМ KAc, 20 мМ HEPES, 2 мМ MgCl₂, pH 7,2), содержащем 0,01% дигитонин (Sigma), в течение 10 мин в присутствие или без 1% Triton Х-100. Полупермеабилизованные клетки однократно промывали в буфере КНМ и добавляли трипсин до конечной концентрации 50 мкг/мл на 10 мин при комнатной, температуре, чтобы расщепить растворимые белки. Расщепление трипсином останавливали путем добавления 1 мМ фенилметилсульфонилфторида (PMSF) и 4 мМ 4-(2-аминоэтил)-бензосульфонилфторида (AEBSF). Клетки собирали путем центрифугирования и растворимые белки экстрагировали в присутствии Triton Х-100 и ингибитора протеаз, как описано а разделе 2.4. Восстанавливающий буфер Лэммли, содержащий 2-меркаптоэтанол, добавляли к осадку и фракциям супернатанта, которые затем подвергали ЭФ в 8% ПААГ/ДСН. Осуществляли иммуноблоттинг, чтобы детектировать белки IgG и BiP.

Перекрестное сшивание белков и анализ методом вестерн-блоттинга

Клетки, продуцирующие инфликсимаб на низком уровне (LP), однократно промывали в ФБР и инкубировали с добавлением или без 1 мМ кросслинкера дитиобис(сукцинимидилпропионата) (DSP) (ThermoScientific) в течение 30 мин на льду. Перекрестное сшивание гасили путем инкубации с добавлением 50 мМ Трис-HCl (pH 7,4) в течение 10 мин перед экстрагированием белка в буфере ФБР, содержащем 1% Triton Х-100. После центрифугирования в течение 10 мин при 14000 об/мин в микроцентрифуге нерастворимую в Triton Х-100 фракцию или цельный экстракт белка анализировали с помощью ЭФ в ПААГ/ДСН в восстановительных условиях, подвергали иммуноблоттингу и окрашивали антителами против BiP и LC. Равные количества белков из нерастворимых в Тх фракций анализировали параллельно.

Должно быть очевидно, что способы и композиции согласно настоящему изобретению могут быть включены в виде различных вариантов реализации, лишь незначительное количество которых описано в данной заявке. Для специалиста должно быть очевидно, что существуют другие варианты реализации, которые не выходят за рамки сущности настоящего изобретения. Таким образом, описанные варианты реализации являются иллюстративными и не должны истолковываться как ограничительные.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SELEXIS S.A.

<120> УЛУЧШЕННЫЕ ЭКСПРЕССИЯ И ПРОЦЕССИНГ ТРАНСГЕНА

<130> 3024-192PCT

<160> 116

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 3616

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_BINDING

<222> (1)..(320)

<223> MAR 1_68 хромосомы 1

<400> 1

gactctagat tataccaacc tcataaaata agagcatata taaaagcaaa tgctcttatc 60

ttgcagatcc ctgaactgag gaggcaagat cagtttggca gttgaagcag ctggaatctg 120

caattcagag aatctaagaa aagacaaccc tgaagagaga gacccagaaa cctagcagga 180

gtttctccaa acattcaagg ctgagggata aatgttacat gcacagggtg agcctccaga 240

ggcttgtcca ttagcaactg ctacagtttc attatctcag ggatcacaga ttgtgctacc 300

tattgcctac catctgaaaa cagttgcttc ctatatttca tccagtttaa tatttattta 360

aaccaagaag gttaatctgg caccagctat tccgttgtga gtggatgtga aagtaccaat 420

tccattctgt tttactatta actatccttt gccttaatat gtatcagtag gtggcttgtt 480

gctaggaaat attaaatgaa tggcatgttt cataggttgt gtttaaagtt gttttttgag 540

ttaaatcttt ctttaataat actttctgat gtcaaaaaca cttagaagtc atggtgttga 600

acatctatat agggttggat ctaaaatagc ttcttaacct ttcctaacca ctgtttttgt 660

ttgtttgttt ttaactaagc atccagtttg ggaaattctg aattagggga atcataaaag 720

gtttcatttt agctgggcca cataaggaaa gtaagatatc aaattgtaaa aatcgttaag 780

aacttctatc ccatctgaag tgtgggttag gtgcctcttc tctgtgctcc cttaacatcc 840

tattttatct gtatatatat atattcttcc aaatatccat gcatgggaaa aaaaatctga 900

tcataaaaat attttaggct gggagtggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga 960

ggctgaggtg ggcggatcat gaggtcaaga gatcgagacc atcctgacca atatggtgaa 1020

accccatctc tactaaagat acaaaactat tagctggacg tggtggcacg tgcctgtagt 1080

cccagctact cgggaggctg aggcaggaga acggcttgaa cccaggaggt ggaggttgca 1140

gtgagctgag atcgcgccac tgcactccag cctgggcgac agagcgagac tctgtctcaa 1200

aaaaaaaata tatatatata tatatataca catatatata taaaatatat atatatacac 1260

acatatatat ataaaatata tatatataca cacatatata taaaatatat atatatacac 1320

acatatatat aaaatatata tatacacaca tatatataaa atatatatat acacacatat 1380

atataaaata tatatataca cacatatata taaaatatat atatacacac atatatataa 1440

aatatatata tacacacata tatataaaat atatatatac acacatatat ataaaatata 1500

tatatacaca catatatata aaatatatat atacacacat atatataaaa tatatatata 1560

cacacatata tataaaatat atatatacac acatatataa aatatatata tacacacata 1620

tataaaatat atatatacac atatatataa aatatatata tacacatata tataaaatat 1680

atatacacac atatatataa aatatatata tacacacata tatataaaat atatatatac 1740

acatatatat aaaatatata tatacacata tatataaaat atatatatat acacatatat 1800

ataaaatata tatacacaca tatatataaa gtatatatat acacacatat atataaaata 1860

tatatataca catatatata aaatatatat atacacatat atataaaata tatatataca 1920

catatatata aaaatatata tatatatttt ttaaaatatt ccaattgtct cactttgtgg 1980

atgagaaaaa gaagtagtta gaggtcaagt aacttggcct acatcttttc tcaagattgt 2040

aaactcctag tgagcaataa ccacatcttc attttctttg tataaaacaa gaaagtttag 2100

catgaaaaag gtactcaatt acaaatgtgt tggattgaat tgaagaccct tggaagggga 2160

ttttgtacct gaggatctct ttcttttggc catattgttc aatggacaaa atttagcctt 2220

cgaaggcagg ccgatttgag gttaatacta cctttaccac ttgatagcta tgtgaccttg 2280

gccatgtggt ttcaacagtc tgaacctcat tttctctgtg tatgtgtggt cctccttaca 2340

agtttgtgaa aaatgtgaag tccttagcca tgatagccca atataacagg ctaaatgata 2400

ataggtttat gttcttttcc tttatattct cagataagca ctgtccaagt ttgaggtgtt 2460

ttgaggtctc gcctgatttg gattgtttga gtttatgcta ttctttgaat tctttgagct 2520

gttctgaagc agtgtatcat gaacaaaaac atccccagtt cagtccaaac ccctggttac 2580

atatcattct tatgccatgt tataaccagt ttgagagtgt tccctctgtt attgcattta 2640

agtttcagcc tcacacagaa attcagcagc caatttctaa gccctaagca taaaatctgg 2700

ggtggggggg ggggatggcc tgaagagcag cattatgaat agcaccatta taattaatga 2760

tctctcagga agatttacaa tcacaggtag cagataaaac aaatagtact gcttctgcac 2820

ttcccctcct tttattcgct atgaaatttt atgggaaatc agtccagtga aaaatgtaag 2880

ctcttaatct ttcccagaaa tcctacctca tttgatgaat actttgaggg aatgaattag 2940

agcatttttt tcttttatag tctacttcgc atttacgaag tgaggacggt agcttaggct 3000

gcctggccaa ctgatgagaa ggtcagaggc atttttagag acctctgttg tctttcattc 3060

atgttcattt tccacaaggc aagtaatttc caacaaatca gtgtcttcat tagtaataag 3120

attattaaca acaataatag tcatagtaac tattcagtga gagtccatta tatatcaggc 3180

attctacaag gtactttata tacatctgag taaacctcac acaattctac agggaggtat 3240

ttctatcccc atttaacaaa taaggaaacg aagtccaagt aaattaactt gcccaaggtc 3300

acacagatag tacctggcag aacaggaatt taaacctaaa tttgtccaac tccaaaagca 3360

gccttctatt tgttataaat gctgcctctc attatcacat attttattat taacaacaac 3420

aaacatacca attagcttaa gatacaatac aaccagataa tcatgatgac aacagtaatt 3480

gttatactat tataataaaa tagatgtttt gtatgttact ataatcttga atttgaatag 3540

aaatttgcat ttctgaaagc atgttcctgt catctaatat gattctgtat ctattaaaat 3600

agtactacat ctagag 3616

<210> 2

<211> 4624

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_BINDING

<222> (1)..(4624)

<223> MAR 1_6 хромосомы 1

<400> 2

ggatcttaaa tctattttat ttatttattt ttcatgtggc caataccctc cacccccttc 60

ttctgtctct ttcaacttat tgtggttacc ttgaggctac ctgagacagt aggcttgggt 120

ggggaagtat gcattctaag tgtaaagttt gatgagcttt gacaaatgtc aacccatgta 180

ccagaacatt ttcatcaccc ataaaatctc ccttgtgtca cttgccagtc agtgtctatt 240

ctagtatcca actcctggct ccaagaaacc attgaactgt tttctgtcac tataaattag 300

atttgtcttt tctagagttt catgtaaatg gaatcataca ctaagtactc tttgtgcctg 360

gcttctgctc agcataatgt ttttgagaat cattcatgct gctgcatgtt ttcagtagtt 420

cattttttta aataggtgaa ttgtaactca ttctgtgaat ataccatatt ctgtcttcca 480

tttatctgtt agtggatctt taggtcgttt ctagttttgg gctattgcaa ataaagctgc 540

tgtaaatatt aatgcacaag ttttccatgt tcatatgttt catttcactt aggaaaatac 600

ctaagagagg aattgcacat attaaaaaaa ttttaaaaac tactaagctg ttctccaaaa 660

tggttgtaca atttttattc ccaagagcaa tatgagtgtt taattgctcc acattctcac 720

caacacttgg tgcttgttag ttttattttc attgttttca ttgttatgtc tgtgaggcag 780

cattgatgtg catgtctctg agtgtcatct tagcggtgat gctgagcatc agttcacgtc 840

cttataggcc gtttgtatat ctgctttgtg aaatgtctgt tcaaatcttt tgcctatttt 900

aaattgagtt gtgttcgtct tcttaggatt aagtaatgag ttaaaaatat ttctgataca 960

aatctttcat tatatatttc taatgctttc tcatctatag tttattttct catattcttt 1020

aactgtatct tttgaagagc aaattttact tttgattatg cccaatttat caagttttta 1080

tatggctctt ttgattatgc ccataatcac attagacttt gcctaaccca agtttgcaga 1140

gattttttct tttatgcttt tatctagaaa ttttgtagtt ttaggtttta aaaaagttta 1200

atttatttat ttgagacagg gtattgctct ttacatatac tggagtgcag tgatgcaatc 1260

atggctcact gcagcctcaa cctcttgggc tcaagcggtt ctcccatctc agagtcctga 1320

gtagctggcc aggtgcatgc cagcttcaat gtgtttttca tttgcatttc cctgataatt 1380

attgacgttg agcatttttt tcatatatca gttagctatt tgtacgtctt cttttgagaa 1440

acatctattc gggtcttttg cccattttaa agtcagatgg tttgtttgtc agctattgag 1500

ttgtttgagt tccttgtata ttctggatat taccatcttg tcagatgcac agtttgcaaa 1560

tttttttttt ctattttgta ggttgtctct ttctctgttg tttcctccgg tatgcagaag 1620

ttttttagtg tgatgtaatt tcatttgtct gtttttgctt ttgttgcctg tactttctta 1680

ttcttatcca aaaaatcttt atctagatca atgtcacgaa gagtttctcc tctgttttct 1740

tcgagtagtt ttttataatt ttgggtatac atttaagtct ttaatctatt tggaattgat 1800

ttttgcatat ggtgagagat cagagtctaa tttcatactt ttggatgtgg aaagctagtt 1860

ttttcagcac catttattga agagactgtc tcttctccaa tgtgtgttct ttgtgccttc 1920

gtcaaaaatc agttggctgt gcgtggattt atttctgtgt tctctatttt gttccattgg 1980

tctagtttta gccttaaatt taggtctgca attttttttt ttttgtatat ggtgtgaagt 2040

aagagtcaaa gttcattatt tttcatatgg atatgtaatt actccagtac catcatttag 2100

tttgaatgga ctgtcctttc tccatggaat tacatgggca tcttttgtct gaaaccaatt 2160

atgtatgttt acgtatgtgt atgtttatgc atatgttata ggtttaatat atattaatat 2220

atataatata taatatataa atattaatat gtattatata atatatatta atatattata 2280

ttatattact atataaataa tattaatata ttatattaaa atattaataa atatatcata 2340

ttaaatatta tattaattaa atattaataa atatattata ttaatatatt tatatattaa 2400

acctataaca tatgcatata cttatttata tataacatgc atgtacttat ttatatatac 2460

aatatatatt tatatattat ataatatatt atatgtattt atatattata tatcatatat 2520

tatatgtatt tatatattat atatcatata atatatatat ttatattata tatattatat 2580

gatatataat attatataat gtattaatat atattaaacc tatatttata attctggact 2640

cactattttg tttcattggt gtctgtgtgt atctaaccct atgccaataa tgtactatct 2700

taattaccat agctttatag taagctttga aatcagatag tgtatttttt atcattgttt 2760

tttaaaataa tagtttatct ttttatttga atttgtaatc agctagtcag tttctgcaaa 2820

aagcttactg ggattttgct tggaattatg ttacatctgt agcatgtact atccaatatt 2880

ctagccttta tccacatgtg gctattaagg tttaaattaa ttaaattaaa atttaattaa 2940

ttaaaattaa aacttaataa ttggttcctc attcacacta ccatatgtca agtgttcaat 3000

agccacatat ggtcaatgtc ttggaaaagt caatacagta catttccatt attgcagtaa 3060

gttctgtcaa acagcactat cgtagaccga ttaggagaga actgacttaa cagtattgga 3120

tgctccagtc aatgaacatc tttttttttt tcatttattt cagtagtctc tgcagtatat 3180

tatagatttc agtttacata ttttgcatat attttattaa atgtataacg gtagaagtac 3240

tattattgga tgatgtgttc tatagatgta ttttaggtca agtttgttga tagtgttgtt 3300

taaatctcgt atacctcttg atttttttat ttacttgttc tttgaattac tgagacagga 3360

atgttatatc cttaactata tttgtgaatt tattcacttc ttccttcagt tctgttaact 3420

tttgcttagg tgctttttaa aaatgaaact ttcaatctct gccttttaat tgtagcattt 3480

agaccattta cattcaatgt aattatcaat atcagtttat ttaagtctga agttgtgcaa 3540

tttttcctct acctatatta taaatctttc tatatacaaa acacatgcta tgttttctgc 3600

atatgtttta aatgacaccc ggaaagcatt gacactattt ttgctttagg ttatctttca 3660

aagatgttaa aaatgagaaa gaaatattct gcatttatcc atacacttat tatttgcaaa 3720

ggttttttta aatacctttg tgtagatttc agttaccaac ttgtatttcc ttcagcttga 3780

agaacttaca atttcttgta ggacaggtct ctgacaacaa attatctcag cttttctttg 3840

tctaaaaaag ttattgcctt tatttttaaa atatattttc actggatatt gaattttagg 3900

tgataatctt tttttttttg ttagcacttt aaatatgtct tctaatgtcc tcttgctttc 3960

atagtttctg atgagaagtc tactgttatt agtatctctt tgtgtgtgtc tctctttttt 4020

ccctctctgc tattatggct attttttttt tttttttttt ttttggtcac tggtgtcagc 4080

aatttaatta tggtgtgcct tggtatgttt tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 4140

tgtgtgtgtg tagctgatgt tctttgagct ttagaatctg tgagtttgta gttttcatca 4200

attatttttt cttttcattc cttttattta ctcatgttcg tgttttattt tatattttta 4260

agaattttgt gcgtatttgt aataactgtt taaatgtcat ttgtgaattc cattgcttct 4320

aggtaggatt ctattgacag atattttttc cctgacgaga ggtcatactt tccttattct 4380

tcatgtatct agtggttttt ggttgaatac tggatatttt gaattttatg ggagtgctga 4440

attctacaat attccttaaa aatgtgttgg attttgtttt agcagatagc tatcttactt 4500

gaagatcaat ttcatatttt ttgatgttca ttttttcatt tattaaagaa taggtccatg 4560

gtagagttta ctgatatcaa cctttctggt gtctctaata aatgcaacat attcaataag 4620

atcc 4624

<210> 3

<211> 3354

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_BINDING

<222> (1)..(3354)

<223> MAR X_S29 хромосомы X

<400> 3

gatcccttta taaaaccaca atataatgga gtgctataat ttcaaacagt gtttggtctg 60

ctggcagagt ggtcattcta acagcagtca cagtagagta gaaataagac tgcagtatat 120

ctaaggcaaa aagctgaggt ttcaggagct tgaaggtaaa gaggaagaaa gaaatgggaa 180

tgggaattgg aaagacaaat atcgttaaga gaaaattgct tttaggagag gggaaagaat 240

ctatgtgtac ttaagactat ggaatcaatc ccatttaagc tgggaaacta gtttcatata 300

taactaataa attttattta cagaatatct atttacctga tctaggcttc aagccaaagg 360

gactgtgtga aaaaccatca gttctgtcat attcctaaaa aaaaattaaa aagttaaaaa 420

taaataaata ataaaacttc ttttctttca aaataatcaa ggtgcttatt cacatccatt 480

ccaatttggg gaaatactta ttttcctatg attagcgaag agaaaagtaa cttgcatttc 540

aattcaagtt gatacatgtc acttttaaga ggtcaactaa tatttgctag ttgagctaac 600

catataggct ttaaatactt tcatagtaga aagaaaatga aaatcattag tgaactgtat 660

aaaatagatc atactttttg aaagaatcag actgaagttt ccgaaaaaaa gaagtaagct 720

tcaatgaaaa ggtaagtgaa tttagcattt actcagcatc tactatggac ttaacaccta 780

acagtagata atctgaaggc aaacatattt gtatagggac tgcagaatga tagatgataa 840

atatcatctc ttctatttga atgaatattt tttcaaatct ttcacacaca gtggtttgct 900

atggaaagat ttgtagtaca ttaaacaaat ctgaagatgg agttagaaag cttaggctat 960

gttttgagca caacatataa tttctctgtg attgtttctt catctttcaa atgaggttac 1020

tgtgaagatt aaatgagata actaaatgat gataaaataa tgtaatctta gcagcacctt 1080

atttaatctg tgcaacaact ctgtgaagtg agtagggctc agcttcagtc acttctctgc 1140

catttattaa ctaagatagt ttggaaagtt acccatctct tcagctgtaa aatgatgagg 1200

atcataccta ttttatgggg ctgcttttag gtacaaatat acaggcaagc actttgttaa 1260

tactaaagca ttacaccaat tagttttact cttttccatt cacacatgaa attaatgtaa 1320

tcagaattct gtagattacc taaatcttct gttaacacgt gatatgcagt tcaggttaaa 1380

tgtcagttga gttaccaaag cacatacata ctcaccaccc tatccaaatc tacaagcctc 1440

ccagtttgtc ttcactattt tggttaaatt aatatgaatt cctagatgaa aatttcactg 1500

atccaaatga aataaaaaat atattacaaa actcacacct gtaatctcaa cattttggga 1560

ggccaaggca ggtagatcac ttgaggccag gagttcaaga ccagcctgat caacatggtg 1620

aaaccctgtc tctactaaaa atacaaaaat tagccaggtg tggtggcatg tgcctgtagt 1680

cctacctact cgggaggctg aggcacaaga atcgcttgaa tgtgggaggt ggaggttgca 1740

gtgacctgag atcgtgccac tgcactccag cctaggcaac agagtgagat catgtgtcat 1800

atatatatat atatatatat atatatatat atatatatac acacacacac acatatatat 1860

atacacatat atatacgtat atatatatat gtatatatat acatatatat acatatatat 1920

atatacgtat atatatacgt atatatatat caatgtaaat tatttgggaa atttggtatg 1980

aatagtcttc cctgtgaaca cagatcataa aatcatatat caagcagaca aataagtagt 2040

agtcacttat atgcttatac ttgtaactta aagtaaaaga attacaaaag catatgacaa 2100

agactaattt taagatatcc taatttaaat tgttttctaa aagtgtgtat accattttac 2160

ctatcatatg aataatttag aaacatgttt ataaaattaa tgtccaaatc cattcaaaag 2220

ttttgtaatg cagatcaccc acaacaacaa agaatcctag cctattaaaa aagcaacacc 2280

acctacatat aatgaaatat tagcagcatc tatgtaacca aagttacaca gtgaatttgg 2340

gccatccaac actttgagca aagtgttgaa ttcatcaaat gaatgtgtaa tcatttactt 2400

actaatgcca atacacttta aggtaatctt aagtagaaga gatagagttt agaatttttt 2460

aaatttatct cttgttgtaa agcaatagac ttgaataaat aaattagaag aatcagtcat 2520

tcaagccacc agagtatttg atcgagattt cacaaactct aactttctga tacccattct 2580

cccaaaaacg tgtaacctcc tgtcgatagg aacaacccac tgcagggatg tttctcgtgg 2640

aaaaaggaaa tttcttttgc attggtttca gacctaactg gttacaagaa aaaccaaagg 2700

ccattgcaca atgctgaagt acttttttca aatttaaaat ttgaaagttg ttcttaaaat 2760

ctatcattta ttttaaaata cggatgaatg agaaagcata gatttgataa agtgaattct 2820

tttctgcaat ctacagacac ttccaaaaat cactacagac actacagaca ctacagaaaa 2880

tcataaataa acaagtgcta gtatcaatat ttttaccaaa aaatggcatt cttagaattt 2940

tttataggct agaaggtttg tacaaactaa tctgccacgg attttaaaat atgagtgaat 3000

aaattatatt gcaaaaaaaa tcaggttaca gagaactggc aaggaagact cttatgtaaa 3060

acacagaaaa catacaaaac gtatttttaa gacaaataaa aacagaactt gtacctcaga 3120

tgatactgga gattgtgttg acatattagc attatcactg tcttgctaaa acataaaaat 3180

aaaaagatgg aagatgaaat tacaatacaa atgatgattt aaacatataa aaggaaaata 3240

aaaattgttc tgaccaacta ctaaaggaag acctactaaa gatatgccat ccagcacatt 3300

gccactctac atgtggtctg taaaccagca gcatagggat cctctagcta gagt 3354

<210> 4

<211> 5463

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Конструкция S4_1-703_2328-5457 с целыми сайтами AvaI

<400> 4

ctcgaggtct caagataaga atgactgctg taactcaaat ccaccaaagc tatttgtgtt 60

agaatgcttt cctttggtaa taacataata ccacagagtg agtgaatgta tcaagcaaag 120

tactcactca taatctctcc acccaaatga ctttgtcttc taaaattaaa cccttcccag 180

aggcctctcc ccttaatacc atattgggct cttcacactt cttccaacat cgccttccat 240

cctggccctt ccaacctccc ttctgtttgt gctaggaaca gctcaaggcc tcctatctac 300

cacagagtta catggcttgc cccttgccaa ccccccagta ccacacagtg agtgcaaaat 360

ctcaccacat tcagaaccca gtcactattc aaatcatatt ttaacctttg cagtactgac 420

tacttttgat tcatctaaac attactgaac tttattctag aaaacattta agaaatttgt 480

agttaggttc atcctttgag accttacatt taatttcttt ctatgtaaac ggaaagcatt 540

gttcagtccc acgctcatta tggcaaccca cttccaagta cttcgtttac tacgtgggct 600

ggaatcatac agttttctgt tgtgcttgtg ggagcagatc cccctaacct ctgctgattt 660

ttctcaccac ttatcataca tttattacat gcatgcactg ctgtgtgagt ttctaaatac 720

ttgggtagca attctctact attactttaa ttttcctact tgtctgcaaa tacgaaaagt 780

agcttgaaag aacttcagat ctttgttgtt atctgttgca aacactccat ttttctgttg 840

tagcaaaaaa aaaaaaaaag acatccatag ttgtcaatga gaatgcaaga tacatacatt 900

ctgcacctgt gtgctaacat aagtggctgc cctgtgactc agagattgct tgtccttctc 960

ctaagcctat ccttttttgt tactttggat acttttgttc aatgaatcca gaaaaagtgt 1020

ttttcagatt caccatgtga ccctcattta aaacctgtaa tccccctatg gttaagttcc 1080

tgcttttgtt tctgttttct ttctttcagt aaaaggaatt gaacccagtc cttccactta 1140

ctatctgagc atatggctct tttagattat gatgttggtg gtgttcattg gtctcaccaa 1200

aatgctaaag aagccttcat cttctacttg tgggtagtct ttacattcat tactgcaagt 1260

ttagtttatg tggtagtacc agatcctttg cttcttttga cttcatgcct acctaacagc 1320

agctctttcc tttagttaag cttatgaaat agtgtttctc tcatgtttcc tctatattct 1380

ctcttttgcc ttcctgtttc ttcctgttga ttccatccca ttggagtgaa atcttatgat 1440

cttttggcat caacaaagtg atctgcatcc aaataattcc acatctcatt ccatgttgac 1500

tgtggatcta tatatatata tatgtatata tgtatatatg tatatatgta tatatgtata 1560

tatgtatata tgtatatatg tatatatgta tatatgtata tatgtatata tgtatatatg 1620

tatatatgta tatatgtata tatgtatata tgtatatatg tatatatgta tatatgtata 1680

tatgtatata tgtatatatg tatatatgta tatatgtata tatgtatata tgtatatatg 1740

tatatatgta tatatgtata tatgtatata tgtatatatg tatatacgta tatatgcata 1800

tacgtatata tgtatatatg tatatatgta tatatgtata tatgtatata tgtatatatg 1860

tatatatgta tatatgtatg tatgtatgta tgtatgtata tatgtatata tgtatgtatg 1920

tatgtatgta tgtatgtatg tatatatgta tatatatatg tatgtatgta tgtatgtatg 1980

tatgtatatg tgtatatgtg tatatgtgta tatgtgtata tgtgtatata tgtatatatg 2040

tatatatgta tatatgtata tgtgtatatg tgtatatgtg tatatatgta tatatgtata 2100

tatgtatata tgtatatata taacatagta ttaaattata tatacatata taagtgaaat 2160

gtcacaatct tctagaactt gctctgtatg tccacttaac atggtagagt gagctatgtc 2220

agcattttct atttcctgtg aatcattctg tgtgttgcca agaagaaata tgatatattc 2280

tgaggttatg aaatgatatt ttggtcatca tgtttctcat cctattttca tattacctaa 2340

atacttttgc ttttaaaatt attattatta ataataatat aattatttat acaataatat 2400

ttaaataata tatttattta atataattat tatatttcac ataaaagcaa tagttccagt 2460

gttacaaatt gtaggcaact gggctgttct gattatctaa gttgggccca ggatatgtgc 2520

tgaatagtta aagcacatgc ccagcatgta tgagggtaaa aggatgggtg gatgtagtga 2580

cccatttgta atttaagcct tagcaggcag aggtgtgacc catagtgcaa agtacatagt 2640

cattataagg tcatctatat cacaatctct ggattagatt gattgaacct gctcagtgac 2700

caatgtgtta gcaatataca ggaggatgat aacatcaacg tcagaagaca cattgaaggg 2760

cttacaaata gtgcccattt actttaatac agaaaaattc aatgtaccct ctaggcaatt 2820

tcaactttta gtctcttggt aggatagtct acatttagaa tggctaattc ataaattaga 2880

aagcttcttc accccctact tttctggtta tttctctatg aatgtggtag gcatgagtta 2940

gtacacatgt ttccatgtac atgtgtttct atgtgtctgc atgcatatgg tagaatgtac 3000

tcatattcta tgtacagtta gaacaatatt tatattgtca aagaaatcaa aaggagtatt 3060

ataagcttca gaaataagga taagtttgaa atattcattg ttttattttt tacagtattt 3120

tttcctttga gaattctatg taaagtactt tgaacatatt tgccttcaac tcctccctca 3180

ctttcaccct ctcttcattc ctccctttcc tttccactca aagttgagat tcctttattt 3240

atttatttat ccttcaaata tcactggtac tatccacatg atctcaggat tgaggtctgc 3300

tctgacgtgt catcctgctt tcatgcaatg gccttatagg tggaacaaca ttatgaacta 3360

accagtaccc cggagctctt gactctagct gcatatatat caaaagatgg cctagtcggc 3420

catcactgga aagagaggct cattggactt gcaaacttta tatgccccag tacaggggaa 3480

caccagggcc aaaaaggggg agtgggtggg caggggagtg ggggtgggtg gatatggggg 3540

acttttggta tagcattgga aatgtaaatg agttaaatac ctaataaaaa atggaaaaaa 3600

aaagtttcta atgtgtgttt ctagaaactt cctctcttaa agcaacaaca tgtccatgag 3660

caatatagaa ttgaagatca ccatcaaatc ctctttattc ctcattgttt ccatcatgta 3720

ctaccagacc tctttaaagt gtagtacagt gtgttaggaa atgagcagat tatcctgggt 3780

atgtgctaaa ttagctactg agtcaaaata cattttttgc tgaacattaa gtgtttggtc 3840

atttctgggc aaaagaaaga aagaaagaaa gaaaagaaag aaagaaagga aggaaggaag 3900

gaaggaagga aggaaggaag gaaagaagga aggaaagaaa aaatggatgt aaattgttct 3960

gacagcatct gtctgagtca ggcagtggaa tgaaggagga atcctagaga atgcacagga 4020

aagcagccca aggagagtgt gggctgaaag gcatcatgtt agaaacatgc actcgatgac 4080

agaaccttga gaaaaaggaa ctcaagcaaa agcacttatt taaaattgta aaacgcactt 4140

tattcatagc catgggggat gtcaatattc caagcataag aatgatcagt ttccaatcac 4200

tgtgaacccc caaaacacaa agtgaaaacc cactacttta tttgatgaga tttggggttg 4260

ctctattaat ttataaaatc agagtaagac acgatataaa tgaaacgatt gtagttctaa 4320

agcagcggca cttccctgaa cagtgtcatt ttgacaagta actgctaaca tcttcaggtc 4380

acagcgactg aagaaaaagt agggaaagaa ggctggctgt gctgtttgac attttctttt 4440

cttatctggt gacatgaaga gaagctctgg gtccccctac tcttgttcat atatctgttg 4500

cttttatgct gcatcctgag gtttgaagaa atgcatttgg cactgagaaa agatgaggag 4560

agaatgcctt ggacatggtc ctaacatgct ttggtactga gaaaagagag cagaggagat 4620

gacatagaat aggagagata atttggccta ttttggcctt catctgagtg atagatttta 4680

cttaacaaat agaaacaaag ttttacttat aaacagaacc aatgacctgt gtcatctctg 4740

atatattgag ctttgaattc agtgaaatta tgaactaaat atatcactcc ataattttct 4800

aagagggcta tttgtatagt ttcagtgata gtgtgacaaa gtgtaatcta aatttctaaa 4860

aagtaaaata agtagataaa atagtaggta gaatagtata ataatagaat aagtataggt 4920

atggactaga ataaatagac aaaatagtag ataaaatgct aatgattttg ttgacagggt 4980

aatcatgaat atttttatta tttagctaaa gaaccaatgt tcatgtactc aagaagtgta 5040

ttgaggaact taggaaatta gtctgaacag gtgagagggt gcgccagaga acctgacagc 5100

ttctggaaca ggcggaagca cagaggcact gaggcagcac cctgtgtggg ccggggacag 5160

ccggccacct tccggaccgg aggacaggtg cccgcccggc tggggaggcg acctaagcca 5220

cagcagcagc ggtcgccatc ttggtccggg acccgccgaa cttaggaaat tagtctgaac 5280

aggtgagagg gtgcgccaga gaacctgaca gcttctggaa caggcagaag cacagaggcg 5340

ctgaggcagc accctgtgtg ggccggggac agccggccac cttccggacc ggaggacagg 5400

tgcccacccg gctggggagg cggcctaagc cacagcagca gcggtcgcca tcttggtccc 5460

ggg 5463

<210> 5

<211> 2957

<212> ДНК

<213> Лизоцим цыпленка

<400> 5

tctagaaaac aatatatttc caaatgaaaa aaaaatctga taaaaagttg actttaaaaa 60

agtatcaata aatgtatgca tttctcacta gccttaaact ctgcatgaag tgtttgatga 120

gcagatgaag acaacatcat ttctagtttc agaaataata acagcatcaa aaccgcagct 180

gtaactccac tgagctcacg ttaagttttg atgtgtgaat atctgacaga actgacataa 240

tgagcactgc aaggatatca gacaagtcaa aatgaagaca gacaaaagta ttttttaata 300

taaaaatggt ctttatttct tcaatacaag gtaaactact attgcagttt aagaccaaca 360

caaaagttgg acagcaaatt gcttaacagt ctcctaaagg ctgaaaaaaa ggaacccatg 420

aaagctaaaa gttatgcagt atttcaagta taacatctaa aaatgatgaa acgatcccta 480

aaggtagaga ttaactaagt acttctgctg aaaatgtatt aaaatccgca gttgctagga 540

taccatctta ccttgttgag aaatacaggt ctccggcaac gcaacattca gcagactctt 600

tggcctgctg gaatcaggaa actgcttact atatacacat ataaatcctt tggagttggg 660

cattctgaga gacatccatt tcctgacatt ttgcagtgca actctgcatt ccaactcaga 720

caagctccca tgctgtattt caaagccatt tcttgaatag tttacccaga catccttgtg 780

caaattggga atgaggaaat gcaatggtac aggaagacaa tacagcctta tgtttagaaa 840

gtcagcagcg ctggtaatct tcataaaaat gtaactgttt tccaaatagg aatgtatttc 900

acttgtaaaa cacctggtcc tttttatatt actttttttt ttttttaagg acacctgcac 960

taatttgcaa tcacttgtat ttataaaagc acacgcactc ctcattttct tacatttgaa 1020

gatcagcaga atgtctcttt cataatgtaa taatcatatg cacagtttaa aatattttct 1080

attacaaaat acagtacaca agagggtgag gccaaagtct attacttgaa tatattccaa 1140

agtgtcagca ctgggggtgt aaaattacat tacatggtat gaataggcgg aattctttta 1200

caactgaaat gctcgatttc attgggatca aaggtaagta ctgtttacta tcttcaagag 1260

acttcaatca agtcggtgta tttccaaaga agcttaaaag attgaagcac agacacaggc 1320

cacaccagag cctacacctg ctgcaataag tggtgctata gaaaggattc aggaactaac 1380

aagtgcataa tttacaaata gagatgcttt atcatacttt gcccaacatg ggaaaaaaga 1440

catcccatga gaatatccaa ctgaggaact tctctgtttc atagtaactc atctactact 1500

gctaagatgg tttgaaaagt acccagcagg tgagatatgt tcgggaggtg gctgtgtggc 1560

agcgtgtccc aacacgacac aaagcacccc acccctatct gcaatgctca ctgcaaggca 1620

gtgccgtaaa cagctgcaac aggcatcact tctgcataaa tgctgtgact cgttagcatg 1680

ctgcaactgt gtttaaaacc tatgcactcc gttaccaaaa taatttaagt cccaaataaa 1740

tccatgcagc ttgcttccta tgccaacata ttttagaaag tattcattct tctttaagaa 1800

tatgcacgtg gatctacact tcctgggatc tgaagcgatt tatacctcag ttgcagaagc 1860

agtttagtgt cctggatctg ggaaggcagc agcaaacgtg cccgttttac atttgaaccc 1920

atgtgacaac ccgccttact gagcatcgct ctaggaaatt taaggctgta tccttacaac 1980

acaagaacca acgacagact gcatataaaa ttctataaat aaaaatagga gtgaagtctg 2040

tttgacctgt acacacagag catagagata aaaaaaaaag gaaatcagga attacgtatt 2100

tctataaatg ccatatattt ttactagaaa cacagatgac aagtatatac aacatgtaaa 2160

tccgaagtta tcaacatgtt aactaggaaa acatttacaa gcatttgggt atgcaactag 2220

atcatcaggt aaaaaatccc attagaaaaa tctaagcctc gccagtttca aaggaaaaaa 2280

accagagaac gctcactact tcaaaggaaa aaaaataaag catcaagctg gcctaaactt 2340

aataaggtat ctcatgtaac aacagctatc caagctttca agccacacta taaataaaaa 2400

cctcaagttc cgatcaacgt tttccataat gcaatcagaa ccaaaggcat tggcacagaa 2460

agcaaaaagg gaatgaaaga aaagggctgt acagtttcca aaaggttctt cttttgaaga 2520

aatgtttctg acctgtcaaa acatacagtc cagtagaaat tttactaaga aaaaagaaca 2580

ccttacttaa aaaaaaaaaa caacaaaaaa aacaggcaaa aaaacctctc ctgtcactga 2640

gctgccacca cccaaccacc acctgctgtg ggctttgtct cccaagacaa aggacacaca 2700

gccttatcca atattcaaca ttacttataa aaacgctgat cagaagaaat accaagtatt 2760

tcctcagaga ctgttatatc ctttcatcgg caacaagaga tgaaatacaa cagagtgaat 2820

atcaaagaag gcggcaggag ccaccgtggc accatcaccg ggcagtgcag tgcccaactg 2880

ccgttttctg agcacgcata ggaagccgtc agtcacatgt aataaaccaa aacctggtac 2940

agttatatta tggatcc 2957

<210> 6

<211> 3659

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 1_68R(заполненный NcoI+XbaI)

<400> 6

gtacccccaa aagaaagaga tcctcaggta caaaatcccc ttccaagggt cttcaattca 60

atccaacaca tttgtaattg agtacctttt tcatgctaaa ctttcttgtt ttatacaaag 120

aaaatgaaga tgtggttatt gctcactagg agtttacaat cttgagaaaa gatgtaggcc 180

aagttacttg acctctaact acttcttttt ctcatccaca aagtgagaca attggaatat 240

tttaaaaaat atatatatat atttttatat atatgtgtat atatatattt tatatatatg 300

tgtatatata tattttatat atatgtgtat atatatattt tatatatatg tgtgtatata 360

tatactttat atatatgtgt gtatatatat tttatatata tgtgtatata tatatatttt 420

atatatatgt gtatatatat attttatata tatgtgtata tatatatttt atatatatgt 480

gtgtatatat atattttata tatatgtgtg tatatatatt ttatatatat gtgtatatat 540

atattttata tatatgtgta tatatatatt ttatatatgt gtgtatatat atattttata 600

tatgtgtgta tatatatatt ttatatatat gtgtgtatat atatatttta tatatatgtg 660

tgtatatata tattttatat atatgtgtgt atatatatat tttatatata tgtgtgtata 720

tatatatttt atatatatgt gtgtatatat atattttata tatatgtgtg tatatatata 780

ttttatatat atgtgtgtat atatatattt tatatatatg tgtgtatata tatattttat 840

atatatgtgt gtatatatat attttatata tatgtgtgta tatatatata ttttatatat 900

atgtgtgtat atatatatat tttatatata tatgtgtgta tatatatata ttttatatat 960

atatgtgtat atatatatat atatatattt tttttttgag acagagtctc gctctgtcgc 1020

ccaggctgga gtgcagtggc gcgatctcag ctcactgcaa cctccacctc ctgggttcaa 1080

gccgttctcc tgcctcagcc tcccgagtag ctgggactac aggcacgtgc caccacgtcc 1140

agctaatagt tttgtatctt tagtagagat ggggtttcac catattggtc aggatggtct 1200

cgatctcttg acctcatgat ccgcccacct cagcctccca aagtgctggg attacaggcg 1260

tgagccacca ctcccagcct aaaatatttt tatgatcaga ttttttttcc catgcatgga 1320

tatttggaag aatatatata tatacagata aaataggatg ttaagggagc acagagaaga 1380

ggcacctaac ccacacttca gatgggatag aagttcttaa cgatttttac aatttgatat 1440

cttactttcc ttatgtggcc cagctaaaat gaaacctttt atgattcccc taattcagaa 1500

tttcccaaac tggatgctta gttaaaaaca aacaaacaaa aacagtggtt aggaaaggtt 1560

aagaagctat tttagatcca accctatata gatgttcaac accatgactt ctaagtgttt 1620

ttgacatcag aaagtattat taaagaaaga tttaactcaa aaaacaactt taaacacaac 1680

ctatgaaaca tgccattcat ttaatatttc ctagcaacaa gccacctact gatacatatt 1740

aaggcaaagg atagttaata gtaaaacaga atggaattgg tactttcaca tccactcaca 1800

acggaatagc tggtgccaga ttaaccttct tggtttaaat aaatattaaa ctggatgaaa 1860

tataggaagc aactgttttc agatggtagg caataggtag cacaatctgt gatccctgag 1920

ataatgaaac tgtagcagtt gctaatggac aagcctctgg aggctcaccc tgtgcatgta 1980

acatttatcc ctcagccttg aatgtttgga gaaactcctg ctaggtttct gggtctctct 2040

cttcagggtt gtcttttctt agattctctg aattgcagat tccagctgct tcaactgcca 2100

aactgatctt gcctcctcag ttcagggatc tgcaagataa gagcatttgc ttttatatat 2160

gctcttattt tatgaggttg gtataatcta gctagagtcg agatctttgg ccatattgtt 2220

caatggacaa aatttagcct tcgaaggcag gccgatttga ggttaatact acctttacca 2280

cttgatagct atgtgacctt ggccatgtgg tttcaacagt ctgaacctca ttttctctgt 2340

gtatgtgtgg tcctccttac aagtttgtga aaaatgtgaa gtccttagcc atgatagccc 2400

aatataacag gctaaatgat aataggttta tgttcttttc ctttatattc tcagataagc 2460

actgtccaag tttgaggtgt tttgaggtct cgcctgattt ggattgtttg agtttatgct 2520

attctttgaa ttctttgagc tgttctgaag cagtgtatca tgaacaaaaa catccccagt 2580

tcagtccaaa cccctggtta catatcattc ttatgccatg ttataaccag tttgagagtg 2640

ttccctctgt tattgcattt aagtttcagc ctcacacaga aattcagcag ccaatttcta 2700

agccctaagc ataaaatctg gggtgggggg gggggatggc ctgaagagca gcattatgaa 2760

tagcaccatt ataattaatg atctctcagg aagatttaca atcacaggta gcagataaaa 2820

caaatagtac tgcttctgca cttcccctcc ttttattcgc tatgaaattt tatgggaaat 2880

cagtccagtg aaaaatgtaa gctcttaatc tttcccagaa atcctacctc atttgatgaa 2940

tactttgagg gaatgaatta gagcattttt ttcttttata gtctacttcg catttacgaa 3000

gtgaggacgg tagcttaggc tgcctggcca actgatgaga aggtcagagg catttttaga 3060

gacctctgtt gtctttcatt catgttcatt ttccacaagg caagtaattt ccaacaaatc 3120

agtgtcttca ttagtaataa gattattaac aacaataata gtcatagtaa ctattcagtg 3180

agagtccatt atatatcagg cattctacaa ggtactttat atacatctga gtaaacctca 3240

cacaattcta cagggaggta tttctatccc catttaacaa ataaggaaac gaagtccaag 3300

taaattaact tgcccaaggt cacacagata gtacctggca gaacaggaat ttaaacctaa 3360

atttgtccaa ctccaaaagc agccttctat ttgttataaa tgctgcctct cattatcaca 3420

tattttatta ttaacaacaa caaacatacc aattagctta agatacaata caaccagata 3480

atcatgatga caacagtaat tgttatacta ttataataaa atagatgttt tgtatgttac 3540

tataatcttg aatttgaata gaaatttgca tttctgaaag catgttcctg tcatctaata 3600

tgattctgta tctattaaaa tagtactaca tctagcccgg gctcgacatt gattattga 3659

<210> 7

<211> 2751

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 1_68R2 (заполненный NcoI + XbaI)

<400> 7

gtacccccaa aagaaagaga tcctcaggta caaaatcccc ttccaagggt cttcaattca 60

atccaacaca tttgtaattg agtacctttt tcatgctaaa ctttcttgtt ttatacaaag 120

aaaatgaaga tgtggttatt gctcactagg agtttacaat cttgagaaaa gatgtaggcc 180

aagttacttg acctctaact acttcttttt ctcatccaca aagtgagaca attggaatat 240

tttaaaaaat atatatatat atttttatat atatgtgtat atatatattt tatatatatg 300

tgtatatata tattttatat atatgtgtat atatatattt tatatatatg tgtgtatata 360

tatactttat atatatgtgt gtatatatat tttatatata tgtgtatata tatatatttt 420

atatatatgt gtatatatat attttatata tatgtgtata tatatatttt atatatatgt 480

gtgtatatat atattttata tatatgtgtg tatatatatt ttatatatat gtgtatatat 540

atattttata tatatgtgta tatatatatt ttatatatgt gtgtatatat atattttata 600

tatgtgtgta tatatatatt ttatatatat gtgtgtatat atatatttta tatatatgtg 660

tgtatatata tattttatat atatgtgtgt atatatatat tttatatata tgtgtgtata 720

tatatatttt atatatatgt gtgtatatat atattttata tatatgtgtg tatatatata 780

ttttatatat atgtgtgtat atatatattt tatatatatg tgtgtatata tatattttat 840

atatatgtgt gtatatatat attttatata tatgtgtgta tatatatata ttttatatat 900

atgtgtgtat atatatatat tttatatata tatgtgtgta tatatatata ttttatatat 960

atatgtgtat atatatatat atatatattt tttttttgag acagagtctc gctctgtcgc 1020

ccaggctgga gtgcagtggc gcgatctcag ctcactgcaa cctccacctc ctgggttcaa 1080

gccgttctcc tgcctcagcc tcccgagtag ctgggactac aggcacgtgc caccacgtcc 1140

agctaatagt tttgtatctt tagtagagat ggggtttcac catattggtc aggatggtct 1200

cgatctcttg acctcatgat ccgcccacct cagcctccca aagtgctggg attacaggcg 1260

tgagccacca ctcccagcct aaaatatttt tatgatcttt ggccatattg ttcaatggac 1320

aaaatttagc cttcgaaggc aggccgattt gaggttaata ctacctttac cacttgatag 1380

ctatgtgacc ttggccatgt ggtttcaaca gtctgaacct cattttctct gtgtatgtgt 1440

ggtcctcctt acaagtttgt gaaaaatgtg aagtccttag ccatgatagc ccaatataac 1500

aggctaaatg ataataggtt tatgttcttt tcctttatat tctcagataa gcactgtcca 1560

agtttgaggt gttttgaggt ctcgcctgat ttggattgtt tgagtttatg ctattctttg 1620

aattctttga gctgttctga agcagtgtat catgaacaaa aacatcccca gttcagtcca 1680

aacccctggt tacatatcat tcttatgcca tgttataacc agtttgagag tgttccctct 1740

gttattgcat ttaagtttca gcctcacaca gaaattcagc agccaatttc taagccctaa 1800

gcataaaatc tggggtgggg gggggggatg gcctgaagag cagcattatg aatagcacca 1860

ttataattaa tgatctctca ggaagattta caatcacagg tagcagataa aacaaatagt 1920

actgcttctg cacttcccct ccttttattc gctatgaaat tttatgggaa atcagtccag 1980

tgaaaaatgt aagctcttaa tctttcccag aaatcctacc tcatttgatg aatactttga 2040

gggaatgaat tagagcattt ttttctttta tagtctactt cgcatttacg aagtgaggac 2100

ggtagcttag gctgcctggc caactgatga gaaggtcaga ggcattttta gagacctctg 2160

ttgtctttca ttcatgttca ttttccacaa ggcaagtaat ttccaacaaa tcagtgtctt 2220

cattagtaat aagattatta acaacaataa tagtcatagt aactattcag tgagagtcca 2280

ttatatatca ggcattctac aaggtacttt atatacatct gagtaaacct cacacaattc 2340

tacagggagg tatttctatc cccatttaac aaataaggaa acgaagtcca agtaaattaa 2400

cttgcccaag gtcacacaga tagtacctgg cagaacagga atttaaacct aaatttgtcc 2460

aactccaaaa gcagccttct atttgttata aatgctgcct ctcattatca catattttat 2520

tattaacaac aacaaacata ccaattagct taagatacaa tacaaccaga taatcatgat 2580

gacaacagta attgttatac tattataata aaatagatgt tttgtatgtt actataatct 2640

tgaatttgaa tagaaatttg catttctgaa agcatgttcc tgtcatctaa tatgattctg 2700

tatctattaa aatagtacta catctagccc gggctcgaca ttgattattg a 2751

<210> 8

<211> 2082

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 1_6R2(заполненный HindIII)

<400> 8

tcgacatgga attacatggg catcttttgt ctgaaaccaa ttatgtatgt ttacgtatgt 60

gtatgtttat gcatatgtta taggtttaat atatattaat atatataata tataatatat 120

aaatattaat atgtattata taatatatat taatatatta tattatatta ctatataaat 180

aatattaata tattatatta aaatattaat aaatatatca tattaaatat tatattaatt 240

aaatattaat aaatatatta tattaatata tttatatatt aaacctataa catatgcata 300

tacttattta tatataacat gcatgtactt atttatatat acaatatata tttatatatt 360

atataatata ttatatgtat ttatatatta tatatcatat attatatgta tttatatatt 420

atatatcata taatatatat atttatatta tatatattat atgatatata atattatata 480

atgtattaat atatattaaa cctatattta taattctgga ctcactattt tgtttcattg 540

gtgtctgtgt gtatctaacc ctatgccaat aatgtactat cttaattacc atagctttat 600

agtaagctag cttgatatcg aattcctgca gcccggggga tccactagat ttggccatat 660

tgttcaatgg acaaaattta gccttcgaag gcaggccgat ttgaggttaa tactaccttt 720

accacttgat agctatgtga ccttggccat gtggtttcaa cagtctgaac ctcattttct 780

ctgtgtatgt gtggtcctcc ttacaagttt gtgaaaaatg tgaagtcctt agccatgata 840

gcccaatata acaggctaaa tgataatagg tttatgttct tttcctttat attctcagat 900

aagcactgtc caagtttgag gtgttttgag gtctcgcctg atttggattg tttgagttta 960

tgctattctt tgaattcttt gagctgttct gaagcagtgt atcatgaaca aaaacatccc 1020

cagttcagtc caaacccctg gttacatatc attcttatgc catgttataa ccagtttgag 1080

agtgttccct ctgttattgc atttaagttt cagcctcaca cagaaattca gcagccaatt 1140

tctaagccct aagcataaaa tctggggtgg ggggggggga tggcctgaag agcagcatta 1200

tgaatagcac cattataatt aatgatctct caggaagatt tacaatcaca ggtagcagat 1260

aaaacaaata gtactgcttc tgcacttccc ctccttttat tcgctatgaa attttatggg 1320

aaatcagtcc agtgaaaaat gtaagctctt aatctttccc agaaatccta cctcatttga 1380

tgaatacttt gagggaatga attagagcat ttttttcttt tatagtctac ttcgcattta 1440

cgaagtgagg acggtagctt aggctgcctg gccaactgat gagaaggtca gaggcatttt 1500

tagagacctc tgttgtcttt cattcatgtt cattttccac aaggcaagta atttccaaca 1560

aatcagtgtc ttcattagta ataagattat taacaacaat aatagtcata gtaactattc 1620

agtgagagtc cattatatat caggcattct acaaggtact ttatatacat ctgagtaaac 1680

ctcacacaat tctacaggga ggtatttcta tccccattta acaaataagg aaacgaagtc 1740

caagtaaatt aacttgccca aggtcacaca gatagtacct ggcagaacag gaatttaaac 1800

ctaaatttgt ccaactccaa aagcagcctt ctatttgtta taaatgctgc ctctcattat 1860

cacatatttt attattaaca acaacaaaca taccaattag cttaagatac aatacaacca 1920

gataatcatg atgacaacag taattgttat actattataa taaaatagat gttttgtatg 1980

ttactataat cttgaatttg aatagaaatt tgcatttctg aaagcatgtt cctgtcatct 2040

aatatgattc tgtatctatt aaaatagtac tacatctagc cc 2082

<210> 9

<211> 3345

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> X_S29(заполненный 2*HindIII, SalI)

<222> (1)..(3345)

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(3345)

<400> 9

gatcccttta taaaaccaca atataatgga gtgctataat ttcaaacagt gtttggtctg 60

ctggcagagt ggtcattcta acagcagtca cagtagagta gaaataagac tgcagtatat 120

ctaaggcaaa aagctgaggt ttcaggagct tgaaggtaaa gaggaagaaa gaaatgggaa 180

tgggaattgg aaagacaaat atcgttaaga gaaaattgct tttaggagag gggaaagaat 240

ctatgtgtac ttaagactat ggaatcaatc ccatttaagc tgggaaacta gtttcatata 300

taactaataa attttattta cagaatatct atttacctga tctaggcttc aagccaaagg 360

gactgtgtga aaaaccatca gttctgtcat attcctaaaa aaaaattaaa aagttaaaaa 420

taaataaata ataaaacttc ttttctttca aaataatcaa ggtgcttatt cacatccatt 480

ccaatttggg gaaatactta ttttcctatg attagcgaag agaaaagtaa cttgcatttc 540

aattcaagtt gatacatgtc acttttaaga ggtcaactaa tatttgctag ttgagctaac 600

catataggct ttaaatactt tcatagtaga aagaaaatga aaatcattag tgaactgtat 660

aaaatagatc atactttttg aaagaatcag actgaagttt ccgaaaaaaa gaagtaagct 720

agcttcaatg aaaaggtaag tgaatttagc atttactcag catctactat ggacttaaca 780

cctaacagta gataatctga aggcaaacat atttgtatag ggactgcaga atgatagatg 840

ataaatatca tctcttctat ttgaatgaat attttttcaa atctttcaca cacagtggtt 900

tgctatggaa agatttgtag tacattaaac aaatctgaag atggagttag aaagctagct 960

taggctatgt tttgagcaca acatataatt tctctgtgat tgtttcttca tctttcaaat 1020

gaggttactg tgaagattaa atgagataac taaatgatga taaaataatg taatcttagc 1080

agcaccttat ttaatctgtg caacaactct gtgaagtgag tagggctcag cttcagtcac 1140

ttctctgcca tttattaact aagatagttt ggaaagttac ccatctcttc agctgtaaaa 1200

tgatgaggat catacctatt ttatggggct gcttttaggt acaaatatac aggcaagcac 1260

tttgttaata ctaaagcatt acaccaatta gttttactct tttccattca cacatgaaat 1320

taatgtaatc agaattctgt agattaccta aatcttctgt taacacgtga tatgcagttc 1380

aggttaaatg tcagttgagt taccaaagca catacatact caccacccta tccaaatcta 1440

caagcctccc agtttgtctt cactattttg gttaaattaa tatgaattcc tagatgaaaa 1500

tttcactgat ccaaatgaaa taaaaaatat attacaaaac tcacacctgt aatctcaaca 1560

ttttgggagg ccaaggcagg tagatcactt gaggccagga gttcaagacc agcctgatca 1620

acatggtgaa accctgtctc tactaaaaat acaaaaatta gccaggtgtg gtggcatgtg 1680

cctgtagtcc tacctactcg ggaggctgag gcacaagaat cgcttgaatg tgggaggtgg 1740

aggttgcagt gacctgagat cgtgccactg cactccagcc taggcaacag agtgagatca 1800

tgtgtcatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatacac acacacacac 1860

atatatatat acacatatat atacgtatat atatatatgt atatatatac atatatatac 1920

atatatatat atacgtatat atatacgtat atatatatca atgtaaatta tttgggaaat 1980

ttggtatgaa tagtcttccc tgtgaacaca gatcataaaa tcatatatca agcagacaaa 2040

taagtagtag tcacttatat gcttatactt gtaacttaaa gtaaaagaat tacaaaagca 2100

tatgacaaag actaatttta agatatccta atttaaattg ttttctaaaa gtgtgtatac 2160

cattttacct atcatatgaa taatttagaa acatgtttat aaaattaatg tccaaatcca 2220

ttcaaaagtt ttgtaatgca gatcacccac aacaacaaag aatcctagcc tattaaaaaa 2280

gcaacaccac ctacatataa tgaaatatta gcagcatcta tgtaaccaaa gttacacagt 2340

gaatttgggc catccaacac tttgagcaaa gtgttgaatt catcaaatga atgtgtaatc 2400

atttacttac taatgccaat acactttaag gtaatcttaa gtagaagaga tagagtttag 2460

aattttttaa atttatctct tgttgtaaag caatagactt gaataaataa attagaagaa 2520

tcagtcattc aagccaccag agtatttgat cgagatttca caaactctaa ctttctgata 2580

cccattctcc caaaaacgtg taacctcctg tcgataggaa caacccactg cagggatgtt 2640

tctcgtggaa aaaggaaatt tcttttgcat tggtttcaga cctaactggt tacaagaaaa 2700

accaaaggcc attgcacaat gctgaagtac ttttttcaaa tttaaaattt gaaagttgtt 2760

cttaaaatct atcatttatt ttaaaatacg gatgaatgag aaagcataga tttgataaag 2820

tgaattcttt tctgcaatct acagacactt ccaaaaatca ctacagacac tacagacact 2880

acagaaaatc ataaataaac aagtgctagt atcaatattt ttaccaaaaa atggcattct 2940

tagaattttt tataggctag aaggtttgta caaactaatc tgccacggat tttaaaatat 3000

gagtgaataa attatattgc aaaaaaaatc aggttacaga gaactggcaa ggaagactct 3060

tatgtaaaac acagaaaaca tacaaaacgt atttttaaga caaataaaaa cagaacttgt 3120

acctcagatg atactggaga ttgtgttgac atattagcat tatcactgtc ttgctaaaac 3180

ataaaaataa aaagatggaa gatgaaatta caatacaaat gatgatttaa acatataaaa 3240

ggaaaataaa aattgttctg accaactact aaaggaagac ctactaaaga tatgccatcc 3300

agcacattgc cactctacat gtggtctgta aaccagcagc atagg 3345

<210> 10

<211> 892

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(892)

<223> X_S29R3

<400> 10

aattcaacac tttgctcaaa gtgttggatg gcccaaattc actgtgtaac tttggttaca 60

tagatgctgc taatatttca ttatatgtag gtggtgttgc ttttttaata ggctaggatt 120

ctttgttgtt gtgggtgatc tgcattacaa aacttttgaa tggatttgga cattaatttt 180

ataaacatgt ttctaaatta ttcatatgat aggtaaaatg gtatacacac ttttagaaaa 240

caatttaaat taggatatct taaaattagt ctttgtcata tgcttttgta attcttttac 300

tttaagttac aagtataagc atataagtga ctactactta tttgtctgct tgatatatga 360

ttttatgatc tgtgttcaca gggaagacta ttcataccaa atttcccaaa taatttacat 420

tgatatatat atacgtatat atatacgtat atatatatat gtatatatat gtatatatat 480

acatatatat atatacgtat atatatgtgt atatatatat gtgtgtgtgt gtgtatatat 540

atatatatat atatatatat atatatatat atatgacaca tgatctcact ctgttgccta 600

ggctggagtg cagtggcacg atctcaggtc actgcaacct ccacctccca cattcaagcg 660

attcttgtgc ctcagcctcc cgagtaggta ggactacagg cacatgccac cacacctggc 720

taatttttgt atttttagta gagacagggt ttcaccatgt tgatcaggct ggtcttgaac 780

tcctggcctc aagtgatcta cctgccttgg cctcccaaaa tgttgagatt acaggtgtga 840

gttttgtaat atatttttta tttcatttgg atcagtgaaa ttttcatcta gg 892

<210> 11

<211> 1173

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> Промотор C_GAPDH

<222> (1)..(363)

<223> Энхансер немедленно-ранних генов CMV человека

<400> 11

ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc 60

gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 120

tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 180

aatgggtgga ctatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 240

caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 300

acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 360

ccatgacctc gaggagaagt tccccaactt tcccgcctct cagcctttga aagaaagaaa 420

ggggaggggg caggccgcgt gcagccgcga gcggtgctgg gctccggctc caattcccca 480

tctcagtcgt tcccaaagtc ctcctgtttc atccaagcgt gtaagggtcc ccgtccttga 540

ctccctagtg tcctgctgcc cacagtccag tcctgggaac cagcaccgat cacctcccat 600

cgggccaatc tcagtccctt cccccctacg tcggggccca cacgctcggt gcgtgcccag 660

ttgaaccagg cggctgcgga aaaaaaaaag cggggagaaa gtagggcccg gctactagcg 720

gttttacggg cgcacgtagc tcaggcctca agaccttggg ctgggactgg ctgagcctgg 780

cgggaggcgg ggtccgagtc accgcctgcc gccgcgcccc cggtttctat aaattgagcc 840

cgcagcctcc cgcttcgctc tctgctcctc ctgttcgaca gtcagccgca tcttcttttg 900

cgtcgccagg tgaagacggg cggagagaaa cccgggaggc tagggacggc ctgaaggcgg 960

caggggcggg cgcaggccgg atgtgttcgc gccgctgcgg ggtgggcccg ggcggcctcc 1020

gcattgcagg ggcgggcgga ggacgtgatg cggcgcgggc tgggcatgga ggcctggtgg 1080

gggaggggag gggaggcgtg tgtgtcggcc ggggccacta ggcgctcact gttctctccc 1140

tccgcgcagc cgagccacat cgctcagaca cca 1173

<210> 12

<211> 411

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSRP14

<400> 12

atggtgttgt tggagagcga gcagttcctg acggagctga ccagactttt ccagaagtgc 60

cggacgtcgg gcagcgtcta tatcaccttg aagaagtatg acggtcgaac caaacccatt 120

ccaaagaagg gtactgtgga gggctttgag cccgcagaca acaagtgtct gttaagagct 180

accgatggga agaagaagat cagcactgtg gtgagctcca aggaagtgaa taagtttcag 240

atggcttatt caaacctcct tagagctaac atggatgggc tgaagaagag agacaaaaag 300

aacaaaacta agaagaccaa agcagcagca gcagcagcag cagcagcacc tgccgcagca 360

gcaacagcac caacaacagc agcaacaaca gcagcaacag cagcacagta a 411

<210> 13

<211> 136

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSRP14

<400> 13

Met Val Leu Leu Glu Ser Glu Gln Phe Leu Thr Glu Leu Thr Arg Leu

1 5 10 15

Phe Gln Lys Cys Arg Thr Ser Gly Ser Val Tyr Ile Thr Leu Lys Lys

20 25 30

Tyr Asp Gly Arg Thr Lys Pro Ile Pro Lys Lys Gly Thr Val Glu Gly

35 40 45

Phe Glu Pro Ala Asp Asn Lys Cys Leu Leu Arg Ala Thr Asp Gly Lys

50 55 60

Lys Lys Ile Ser Thr Val Val Ser Ser Lys Glu Val Asn Lys Phe Gln

65 70 75 80

Met Ala Tyr Ser Asn Leu Leu Arg Ala Asn Met Asp Gly Leu Lys Lys

85 90 95

Arg Asp Lys Lys Asn Lys Thr Lys Lys Thr Lys Ala Ala Ala Ala Ala

100 105 110

Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Thr Ala Pro Thr Thr Ala Ala

115 120 125

Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ala Gln

130 135

<210> 14

<211> 1431

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSEC61A1

<400> 14

atggcaatca aatttctgga agtcatcaag cccttctgtg tcatcctgcc ggaaattcag 60

aagccagaga ggaagattca gtttaaggag aaagtgctgt ggaccgctat caccctcttt 120

atcttcttag tgtgctgcca gattcccctg tttgggatca tgtcttcaga ttcagctgac 180

cctttctatt ggatgagagt gattctagcc tctaacagag gcacattgat ggagctaggg 240

atctctccta ttgtcacgtc tggccttata atgcaactct tggctggcgc caagataatt 300

gaagttggtg acaccccaaa agaccgagct ctcttcaacg gagcccaaaa gttatttggc 360

atgatcatta ctatcggcca gtctatcgtg tatgtgatga ccgggatgta tggggaccct 420

tctgaaatgg gtgctggaat ttgcctgcta atcaccattc agctctttgt tgctggctta 480

attgtcctac ttttggatga actcctgcaa aaaggatatg gccttggctc tggtatttct 540

ctcttcattg caactaacat ctgtgaaacc atcgtatgga aggcattcag ccccactact 600

gtcaacactg gccgaggaat ggaatttgaa ggtgctatca tcgcactttt ccatctgctg 660

gccacacgca cagacaaggt ccgagccctt cgggaggcgt tctaccgcca gaatcttccc 720

aacctcatga atctcatcgc caccatcttt gtctttgcag tggtcatcta tttccagggc 780

ttccgagtgg acctgccaat caagtcggcc cgctaccgtg gccagtacaa cacctatccc 840

atcaagctct tctatacgtc caacatcccc atcatcctgc agtctgccct ggtgtccaac 900

ctttatgtca tctcccaaat gctctcagct cgcttcagtg gcaacttgct ggtcagcctg 960

ctgggcacct ggtcggacac gtcttctggg ggcccagcac gtgcttatcc agttggtggc 1020

ctttgctatt acctgtcccc tccagaatct tttggctccg tgttagaaga cccggtccat 1080

gcagttgtat acatagtgtt catgctgggc tcctgtgcat tcttctccaa aacgtggatt 1140

gaggtctcag gttcctctgc caaagatgtt gcaaagcagc tgaaggagca gcagatggtg 1200

atgagaggcc accgagagac ctccatggtc catgaactca accggtacat ccccacagcc 1260

gcggcctttg gtgggctgtg catcggggcc ctctcggtcc tggctgactt cctaggcgcc 1320

attgggtctg gaaccgggat cctgctcgca gtcacaatca tctaccagta ctttgagatc 1380

ttcgttaagg agcaaagcga ggttggcagc atgggggccc tgctcttctg a 1431

<210> 15

<211> 476

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSEC61A1

<400> 15

Met Ala Ile Lys Phe Leu Glu Val Ile Lys Pro Phe Cys Val Ile Leu

1 5 10 15

Pro Glu Ile Gln Lys Pro Glu Arg Lys Ile Gln Phe Lys Glu Lys Val

20 25 30

Leu Trp Thr Ala Ile Thr Leu Phe Ile Phe Leu Val Cys Cys Gln Ile

35 40 45

Pro Leu Phe Gly Ile Met Ser Ser Asp Ser Ala Asp Pro Phe Tyr Trp

50 55 60

Met Arg Val Ile Leu Ala Ser Asn Arg Gly Thr Leu Met Glu Leu Gly

65 70 75 80

Ile Ser Pro Ile Val Thr Ser Gly Leu Ile Met Gln Leu Leu Ala Gly

85 90 95

Ala Lys Ile Ile Glu Val Gly Asp Thr Pro Lys Asp Arg Ala Leu Phe

100 105 110

Asn Gly Ala Gln Lys Leu Phe Gly Met Ile Ile Thr Ile Gly Gln Ser

115 120 125

Ile Val Tyr Val Met Thr Gly Met Tyr Gly Asp Pro Ser Glu Met Gly

130 135 140

Ala Gly Ile Cys Leu Leu Ile Thr Ile Gln Leu Phe Val Ala Gly Leu

145 150 155 160

Ile Val Leu Leu Leu Asp Glu Leu Leu Gln Lys Gly Tyr Gly Leu Gly

165 170 175

Ser Gly Ile Ser Leu Phe Ile Ala Thr Asn Ile Cys Glu Thr Ile Val

180 185 190

Trp Lys Ala Phe Ser Pro Thr Thr Val Asn Thr Gly Arg Gly Met Glu

195 200 205

Phe Glu Gly Ala Ile Ile Ala Leu Phe His Leu Leu Ala Thr Arg Thr

210 215 220

Asp Lys Val Arg Ala Leu Arg Glu Ala Phe Tyr Arg Gln Asn Leu Pro

225 230 235 240

Asn Leu Met Asn Leu Ile Ala Thr Ile Phe Val Phe Ala Val Val Ile

245 250 255

Tyr Phe Gln Gly Phe Arg Val Asp Leu Pro Ile Lys Ser Ala Arg Tyr

260 265 270

Arg Gly Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Ile Lys Leu Phe Tyr Thr Ser Asn

275 280 285

Ile Pro Ile Ile Leu Gln Ser Ala Leu Val Ser Asn Leu Tyr Val Ile

290 295 300

Ser Gln Met Leu Ser Ala Arg Phe Ser Gly Asn Leu Leu Val Ser Leu

305 310 315 320

Leu Gly Thr Trp Ser Asp Thr Ser Ser Gly Gly Pro Ala Arg Ala Tyr

325 330 335

Pro Val Gly Gly Leu Cys Tyr Tyr Leu Ser Pro Pro Glu Ser Phe Gly

340 345 350

Ser Val Leu Glu Asp Pro Val His Ala Val Val Tyr Ile Val Phe Met

355 360 365

Leu Gly Ser Cys Ala Phe Phe Ser Lys Thr Trp Ile Glu Val Ser Gly

370 375 380

Ser Ser Ala Lys Asp Val Ala Lys Gln Leu Lys Glu Gln Gln Met Val

385 390 395 400

Met Arg Gly His Arg Glu Thr Ser Met Val His Glu Leu Asn Arg Tyr

405 410 415

Ile Pro Thr Ala Ala Ala Phe Gly Gly Leu Cys Ile Gly Ala Leu Ser

420 425 430

Val Leu Ala Asp Phe Leu Gly Ala Ile Gly Ser Gly Thr Gly Ile Leu

435 440 445

Leu Ala Val Thr Ile Ile Tyr Gln Tyr Phe Glu Ile Phe Val Lys Glu

450 455 460

Gln Ser Glu Val Gly Ser Met Gly Ala Leu Leu Phe

465 470 475

<210> 16

<211> 291

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSEC61B

<400> 16

atgcctggtc cgacccccag tggcactaac gtgggatcct cagggcgctc tcccagcaaa 60

gcagtggccg cccgggcggc gggatccact gtccggcaga ggaaaaatgc cagctgtggg 120

acaaggagtg caggccgcac aacctcggca ggcaccgggg ggatgtggcg attctacaca 180

gaagattcac ctgggctcaa agttggccct gttccagtat tggttatgag tcttctgttc 240

atcgcttctg tatttatgtt gcacatttgg ggcaagtaca ctcgttcgta g 291

<210> 17

<211> 96

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSEC61B

<400> 17

Met Pro Gly Pro Thr Pro Ser Gly Thr Asn Val Gly Ser Ser Gly Arg

1 5 10 15

Ser Pro Ser Lys Ala Val Ala Ala Arg Ala Ala Gly Ser Thr Val Arg

20 25 30

Gln Arg Lys Asn Ala Ser Cys Gly Thr Arg Ser Ala Gly Arg Thr Thr

35 40 45

Ser Ala Gly Thr Gly Gly Met Trp Arg Phe Tyr Thr Glu Asp Ser Pro

50 55 60

Gly Leu Lys Val Gly Pro Val Pro Val Leu Val Met Ser Leu Leu Phe

65 70 75 80

Ile Ala Ser Val Phe Met Leu His Ile Trp Gly Lys Tyr Thr Arg Ser

85 90 95

<210> 18

<211> 207

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSEC61G

<400> 18

atggatcagg taatgcagtt tgttgagcca agtcggcagt ttgtaaagga ctccattcgg 60

ctggttaaaa gatgcactaa acctgataga aaagaattcc agaagattgc catggcaaca 120

gcaataggat ttgctataat gggattcatt ggcttctttg tgaaattgat ccatattcct 180

attaataaca tcattgttgg tggctga 207

<210> 19

<211> 68

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSEC61G

<400> 19

Met Asp Gln Val Met Gln Phe Val Glu Pro Ser Arg Gln Phe Val Lys

1 5 10 15

Asp Ser Ile Arg Leu Val Lys Arg Cys Thr Lys Pro Asp Arg Lys Glu

20 25 30

Phe Gln Lys Ile Ala Met Ala Thr Ala Ile Gly Phe Ala Ile Met Gly

35 40 45

Phe Ile Gly Phe Phe Val Lys Leu Ile His Ile Pro Ile Asn Asn Ile

50 55 60

Ile Val Gly Gly

65

<210> 20

<211> 1515

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSRP54

<400> 20

atggttctag cagaccttgg aagaaaaata acatcagcat tacgctcgtt gagcaatgcc 60

accattatca atgaagaggt attgaatgct atgctaaaag aagtctgtac cgctttgttg 120

gaagcagatg ttaatattaa actagtgaag caactaagag aaaatgttaa gtctgctatt 180

gatcttgaag agatggcatc tggtcttaac aaaagaaaaa tgattcagca tgctgtattt 240

aaagaacttg tgaagcttgt agaccctgga gttaaggcat ggacacccac taaaggaaaa 300

caaaatgtga ttatgtttgt tggattgcaa gggagtggta aaacaacaac atgttcaaag 360

ctagcatatt attaccagag gaaaggttgg aagacctgtt taatatgtgc agacacattc 420

agagcagggg cttttgacca actaaaacag aatgctacca aagcaagaat tccattttat 480

ggaagctata cagaaatgga tcctgtcatc attgcttctg aaggagtaga gaaatttaaa 540

aatgaaaatt ttgaaattat tattgttgat acaagtggcc gccacaaaca agaagactct 600

ttgtttgaag aaatgcttca agttgctaat gctatacaac ctgataacat tgtttatgtg 660

atggatgcct ccattgggca ggcttgtgaa gcccaggcta aggcttttaa agataaagta 720

gatgtagcct cagtaatagt gacaaaactt gatggccatg caaaaggagg tggtgcactc 780

agtgcagtcg ctgccacaaa aagtccgatt attttcattg gtacagggga acatatagat 840

gactttgaac ctttcaaaac acagcctttt attagcaaac ttcttggtat gggcgacatt 900

gaaggactga tagataaagt caacgagttg aagttggatg acaatgaagc acttatagag 960

aagttgaaac atggtcagtt tacgttgcga gacatgtatg agcaatttca aaatatcatg 1020

aaaatgggcc ccttcagtca gatcttgggg atgatccctg gttttgggac agattttatg 1080

agcaaaggaa atgaacagga gtcaatggca aggctaaaga aattaatgac aataatggat 1140

agtatgaatg atcaagaact agacagtacg gatggtgcca aagtttttag taaacaacca 1200

ggaagaatcc aaagagtagc aagaggatcg ggtgtatcaa caagagatgt tcaagaactt 1260

ttgacacaat ataccaagtt tgcacagatg gtaaaaaaga tgggaggtat caaaggactt 1320

ttcaaaggtg gcgacatgtc taagaatgtg agccagtcac agatggcaaa attgaaccaa 1380

caaatggcca aaatgatgga tcctagggtt cttcatcaca tgggtggtat ggcaggactt 1440

cagtcaatga tgaggcagtt tcaacagggt gctgctggca acatgaaagg catgatggga 1500

ttcaataata tgtaa 1515

<210> 21

<211> 504

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSRP54

<400> 21

Met Val Leu Ala Asp Leu Gly Arg Lys Ile Thr Ser Ala Leu Arg Ser

1 5 10 15

Leu Ser Asn Ala Thr Ile Ile Asn Glu Glu Val Leu Asn Ala Met Leu

20 25 30

Lys Glu Val Cys Thr Ala Leu Leu Glu Ala Asp Val Asn Ile Lys Leu

35 40 45

Val Lys Gln Leu Arg Glu Asn Val Lys Ser Ala Ile Asp Leu Glu Glu

50 55 60

Met Ala Ser Gly Leu Asn Lys Arg Lys Met Ile Gln His Ala Val Phe

65 70 75 80

Lys Glu Leu Val Lys Leu Val Asp Pro Gly Val Lys Ala Trp Thr Pro

85 90 95

Thr Lys Gly Lys Gln Asn Val Ile Met Phe Val Gly Leu Gln Gly Ser

100 105 110

Gly Lys Thr Thr Thr Cys Ser Lys Leu Ala Tyr Tyr Tyr Gln Arg Lys

115 120 125

Gly Trp Lys Thr Cys Leu Ile Cys Ala Asp Thr Phe Arg Ala Gly Ala

130 135 140

Phe Asp Gln Leu Lys Gln Asn Ala Thr Lys Ala Arg Ile Pro Phe Tyr

145 150 155 160

Gly Ser Tyr Thr Glu Met Asp Pro Val Ile Ile Ala Ser Glu Gly Val

165 170 175

Glu Lys Phe Lys Asn Glu Asn Phe Glu Ile Ile Ile Val Asp Thr Ser

180 185 190

Gly Arg His Lys Gln Glu Asp Ser Leu Phe Glu Glu Met Leu Gln Val

195 200 205

Ala Asn Ala Ile Gln Pro Asp Asn Ile Val Tyr Val Met Asp Ala Ser

210 215 220

Ile Gly Gln Ala Cys Glu Ala Gln Ala Lys Ala Phe Lys Asp Lys Val

225 230 235 240

Asp Val Ala Ser Val Ile Val Thr Lys Leu Asp Gly His Ala Lys Gly

245 250 255

Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Ala Ala Thr Lys Ser Pro Ile Ile Phe

260 265 270

Ile Gly Thr Gly Glu His Ile Asp Asp Phe Glu Pro Phe Lys Thr Gln

275 280 285

Pro Phe Ile Ser Lys Leu Leu Gly Met Gly Asp Ile Glu Gly Leu Ile

290 295 300

Asp Lys Val Asn Glu Leu Lys Leu Asp Asp Asn Glu Ala Leu Ile Glu

305 310 315 320

Lys Leu Lys His Gly Gln Phe Thr Leu Arg Asp Met Tyr Glu Gln Phe

325 330 335

Gln Asn Ile Met Lys Met Gly Pro Phe Ser Gln Ile Leu Gly Met Ile

340 345 350

Pro Gly Phe Gly Thr Asp Phe Met Ser Lys Gly Asn Glu Gln Glu Ser

355 360 365

Met Ala Arg Leu Lys Lys Leu Met Thr Ile Met Asp Ser Met Asn Asp

370 375 380

Gln Glu Leu Asp Ser Thr Asp Gly Ala Lys Val Phe Ser Lys Gln Pro

385 390 395 400

Gly Arg Ile Gln Arg Val Ala Arg Gly Ser Gly Val Ser Thr Arg Asp

405 410 415

Val Gln Glu Leu Leu Thr Gln Tyr Thr Lys Phe Ala Gln Met Val Lys

420 425 430

Lys Met Gly Gly Ile Lys Gly Leu Phe Lys Gly Gly Asp Met Ser Lys

435 440 445

Asn Val Ser Gln Ser Gln Met Ala Lys Leu Asn Gln Gln Met Ala Lys

450 455 460

Met Met Asp Pro Arg Val Leu His His Met Gly Gly Met Ala Gly Leu

465 470 475 480

Gln Ser Met Met Arg Gln Phe Gln Gln Gly Ala Ala Gly Asn Met Lys

485 490 495

Gly Met Met Gly Phe Asn Asn Met

500

<210> 22

<211> 249

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSRP9

<400> 22

atgccgcagt accagacctg ggaggagttc agccgcgctg ccgagaagct ttacctcgct 60

gaccctatga aggcacgtgt ggttctcaaa tataggcatt ctgatgggaa cttgtgtgtt 120

aaagtaacag atgatttagt tagacagtgt cttgctctat tgctcaggct gcagtgcagt 180

ggcatgatca tagctcactg catcctcgac ctcctgggct caagcggtcc tcttgcttca 240

gcctcctga 249

<210> 23

<211> 82

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSRP9

<400> 23

Met Pro Gln Tyr Gln Thr Trp Glu Glu Phe Ser Arg Ala Ala Glu Lys

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Ala Asp Pro Met Lys Ala Arg Val Val Leu Lys Tyr Arg

20 25 30

His Ser Asp Gly Asn Leu Cys Val Lys Val Thr Asp Asp Leu Val Arg

35 40 45

Gln Cys Leu Ala Leu Leu Leu Arg Leu Gln Cys Ser Gly Met Ile Ile

50 55 60

Ala His Cys Ile Leu Asp Leu Leu Gly Ser Ser Gly Pro Leu Ala Ser

65 70 75 80

Ala Ser

<210> 24

<211> 1917

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSRPR-альфа

<400> 24

atgctcgact tcttcaccat tttctccaag ggcgggcttg tgctctggtg cttccagggc 60

gttagcgact catgcaccgg acccgttaac gcgttgattc gttccgtgct gctgcaggaa 120

cggggaggta acaactcctt cacccatgag gcactcacac tcaagtataa actggacaac 180

cagtttgagc tggtgtttgt ggttggtttt cagaagatcc tgacactgac atatgtagac 240

aaattgatag atgacgtgca tcggctgttt cgggacaagt accgcacaga gatccaacag 300

caaagtgctt taagtttatt aaatggcact tttgatttcc aaaatgactt cctgcggctc 360

cttcgtgaag cagaggagag cagtaagatc cgtgctccca ctaccatgaa gaaatttgaa 420

gattctgaaa aggccaagaa acctgtgagg tccatgattg agacacgggg ggaaaagccc 480

aaggaaaaag caaagaatag caaaaaaaag ggggccaaga aggaaggttc tgatggtcct 540

ttggctacca gcaaaccagt ccctgcagaa aagtcaggtc ttccagtggg tcctgagaac 600

ggagtagaac tttccaaaga ggagctgatc cgcaggaagc gcgaggagtt cattcagaag 660

catgggaggg gtatggagaa gtccaacaag tccacgaagt cagatgctcc aaaggagaag 720

ggcaaaaaag caccccgggt gtgggaactg ggtggctgtg ctaacaaaga agtgttggat 780

tacagtactc ccaccaccaa tggaacccct gaggctgcct tgtctgagga catcaacctg 840

attcgaggga ctgggtctgg ggggcagctt caggatctgg actgcagcag ctctgatgac 900

gaaggggctg ctcaaaactc taccaaacct agtgcgacca agggaacact gggtggcatg 960

tttggtatgc tgaagggcct tgtgggttca aagagcttga gtcgtgaaga catggaatct 1020

gtgctggaca agatgcgtga tcatctcatt gctaagaacg tggctgcaga cattgccgtc 1080

cagctctgtg aatctgttgc caacaagttg gaagggaagg tgatggggac gttcagcacg 1140

gtgacttcca cagtaaagca agccctacag gagtccctgg tgcagattct gcagccacag 1200

cgtcgtgtag acatgctccg ggacatcatg gatgcccagc gtcgccagcg cccttatgtc 1260

gtcaccttct gcggcgttaa tggagtgggg aaatctacta atcttgccaa gatttccttc 1320

tggttgttag agaatggctt cagtgtcctc attgctgcct gtgatacatt tcgtgctggg 1380

gccgtggagc agctgcgtac acacacccgg cgtttgagtg ccctacaccc tccagagaag 1440

catggtggcc gcaccatggt gcagttgttt gaaaagggct atggcaagga tgctgctggc 1500

attgccatgg aagccattgc ttttgcacgt aaccaaggct ttgacgtggt gctggtggac 1560

acggcaggcc gcatgcaaga caatgcccct ctgatgactg ccctggccaa actcattact 1620

gtcaatacac ctgatttggt gctgtttgta ggagaagcct tagtaggcaa tgaagccgtg 1680

gaccagctgg tcaagttcaa cagagccttg gctgaccatt ctatggctca gacacctcgg 1740

ctcattgatg gcattgttct taccaaattt gataccattg atgacaaggt gggagctgct 1800

atttctatga cgtacatcac aagcaaaccc atcgtctttg tgggcaccgg ccagacctac 1860

tgtgacctac gcagcctcaa tgccaaggct gtggtggctg ccctcatgaa ggcttaa 1917

<210> 25

<211> 638

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSRPR-альфа

<400> 25

Met Leu Asp Phe Phe Thr Ile Phe Ser Lys Gly Gly Leu Val Leu Trp

1 5 10 15

Cys Phe Gln Gly Val Ser Asp Ser Cys Thr Gly Pro Val Asn Ala Leu

20 25 30

Ile Arg Ser Val Leu Leu Gln Glu Arg Gly Gly Asn Asn Ser Phe Thr

35 40 45

His Glu Ala Leu Thr Leu Lys Tyr Lys Leu Asp Asn Gln Phe Glu Leu

50 55 60

Val Phe Val Val Gly Phe Gln Lys Ile Leu Thr Leu Thr Tyr Val Asp

65 70 75 80

Lys Leu Ile Asp Asp Val His Arg Leu Phe Arg Asp Lys Tyr Arg Thr

85 90 95

Glu Ile Gln Gln Gln Ser Ala Leu Ser Leu Leu Asn Gly Thr Phe Asp

100 105 110

Phe Gln Asn Asp Phe Leu Arg Leu Leu Arg Glu Ala Glu Glu Ser Ser

115 120 125

Lys Ile Arg Ala Pro Thr Thr Met Lys Lys Phe Glu Asp Ser Glu Lys

130 135 140

Ala Lys Lys Pro Val Arg Ser Met Ile Glu Thr Arg Gly Glu Lys Pro

145 150 155 160

Lys Glu Lys Ala Lys Asn Ser Lys Lys Lys Gly Ala Lys Lys Glu Gly

165 170 175

Ser Asp Gly Pro Leu Ala Thr Ser Lys Pro Val Pro Ala Glu Lys Ser

180 185 190

Gly Leu Pro Val Gly Pro Glu Asn Gly Val Glu Leu Ser Lys Glu Glu

195 200 205

Leu Ile Arg Arg Lys Arg Glu Glu Phe Ile Gln Lys His Gly Arg Gly

210 215 220

Met Glu Lys Ser Asn Lys Ser Thr Lys Ser Asp Ala Pro Lys Glu Lys

225 230 235 240

Gly Lys Lys Ala Pro Arg Val Trp Glu Leu Gly Gly Cys Ala Asn Lys

245 250 255

Glu Val Leu Asp Tyr Ser Thr Pro Thr Thr Asn Gly Thr Pro Glu Ala

260 265 270

Ala Leu Ser Glu Asp Ile Asn Leu Ile Arg Gly Thr Gly Ser Gly Gly

275 280 285

Gln Leu Gln Asp Leu Asp Cys Ser Ser Ser Asp Asp Glu Gly Ala Ala

290 295 300

Gln Asn Ser Thr Lys Pro Ser Ala Thr Lys Gly Thr Leu Gly Gly Met

305 310 315 320

Phe Gly Met Leu Lys Gly Leu Val Gly Ser Lys Ser Leu Ser Arg Glu

325 330 335

Asp Met Glu Ser Val Leu Asp Lys Met Arg Asp His Leu Ile Ala Lys

340 345 350

Asn Val Ala Ala Asp Ile Ala Val Gln Leu Cys Glu Ser Val Ala Asn

355 360 365

Lys Leu Glu Gly Lys Val Met Gly Thr Phe Ser Thr Val Thr Ser Thr

370 375 380

Val Lys Gln Ala Leu Gln Glu Ser Leu Val Gln Ile Leu Gln Pro Gln

385 390 395 400

Arg Arg Val Asp Met Leu Arg Asp Ile Met Asp Ala Gln Arg Arg Gln

405 410 415

Arg Pro Tyr Val Val Thr Phe Cys Gly Val Asn Gly Val Gly Lys Ser

420 425 430

Thr Asn Leu Ala Lys Ile Ser Phe Trp Leu Leu Glu Asn Gly Phe Ser

435 440 445

Val Leu Ile Ala Ala Cys Asp Thr Phe Arg Ala Gly Ala Val Glu Gln

450 455 460

Leu Arg Thr His Thr Arg Arg Leu Ser Ala Leu His Pro Pro Glu Lys

465 470 475 480

His Gly Gly Arg Thr Met Val Gln Leu Phe Glu Lys Gly Tyr Gly Lys

485 490 495

Asp Ala Ala Gly Ile Ala Met Glu Ala Ile Ala Phe Ala Arg Asn Gln

500 505 510

Gly Phe Asp Val Val Leu Val Asp Thr Ala Gly Arg Met Gln Asp Asn

515 520 525

Ala Pro Leu Met Thr Ala Leu Ala Lys Leu Ile Thr Val Asn Thr Pro

530 535 540

Asp Leu Val Leu Phe Val Gly Glu Ala Leu Val Gly Asn Glu Ala Val

545 550 555 560

Asp Gln Leu Val Lys Phe Asn Arg Ala Leu Ala Asp His Ser Met Ala

565 570 575

Gln Thr Pro Arg Leu Ile Asp Gly Ile Val Leu Thr Lys Phe Asp Thr

580 585 590

Ile Asp Asp Lys Val Gly Ala Ala Ile Ser Met Thr Tyr Ile Thr Ser

595 600 605

Lys Pro Ile Val Phe Val Gly Thr Gly Gln Thr Tyr Cys Asp Leu Arg

610 615 620

Ser Leu Asn Ala Lys Ala Val Val Ala Ala Leu Met Lys Ala

625 630 635

<210> 26

<211> 816

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSRPR-бета

<400> 26

atggcttccg cggactcgcg ccgggtggca gatggcggcg gtgccggggg caccttccag 60

ccctacctag acaccttgcg gcaggagctg cagcagacgg acccaacgct gttgtcagta 120

gtggtggcgg ttcttgcggt gctgctgacg ctagtcttct ggaagttaat ccggagcaga 180

aggagcagtc agagagctgt tcttcttgtt ggcctttgtg attccgggaa aacgttgctc 240

tttgtcaggt tgttaacagg cctttataga gacactcaga cgtccattac tgacagctgt 300

gctgtataca gagtcaacaa taacaggggc aatagtctga ccttgattga ccttcccggc 360

catgagagtt tgaggcttca gttcttagag cggtttaagt cttcagccag ggctattgtg 420

tttgttgtgg atagtgcagc attccagcga gaggtgaaag atgtggctga gtttctgtat 480

caagtcctca ttgacagtat gggtctgaag aatacaccat cattcttaat agcctgcaat 540

aagcaagata ttgcaatggc aaaatcagca aagttaattc aacagcagct ggagaaagaa 600

ctcaacacct tacgagttac ccgttctgct gcccccagca cactggacag ttccagcact 660

gcccctgctc agctggggaa gaaaggcaaa gagtttgaat tctcacagtt gcccctcaaa 720

gtggagttcc tggagtgcag tgccaagggt ggaagagggg acgtgggctc tgctgacatc 780

caggacttgg agaaatggct ggctaaaatt gcctga 816

<210> 27

<211> 271

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSRPR-бета

<400> 27

Met Ala Ser Ala Asp Ser Arg Arg Val Ala Asp Gly Gly Gly Ala Gly

1 5 10 15

Gly Thr Phe Gln Pro Tyr Leu Asp Thr Leu Arg Gln Glu Leu Gln Gln

20 25 30

Thr Asp Pro Thr Leu Leu Ser Val Val Val Ala Val Leu Ala Val Leu

35 40 45

Leu Thr Leu Val Phe Trp Lys Leu Ile Arg Ser Arg Arg Ser Ser Gln

50 55 60

Arg Ala Val Leu Leu Val Gly Leu Cys Asp Ser Gly Lys Thr Leu Leu

65 70 75 80

Phe Val Arg Leu Leu Thr Gly Leu Tyr Arg Asp Thr Gln Thr Ser Ile

85 90 95

Thr Asp Ser Cys Ala Val Tyr Arg Val Asn Asn Asn Arg Gly Asn Ser

100 105 110

Leu Thr Leu Ile Asp Leu Pro Gly His Glu Ser Leu Arg Leu Gln Phe

115 120 125

Leu Glu Arg Phe Lys Ser Ser Ala Arg Ala Ile Val Phe Val Val Asp

130 135 140

Ser Ala Ala Phe Gln Arg Glu Val Lys Asp Val Ala Glu Phe Leu Tyr

145 150 155 160

Gln Val Leu Ile Asp Ser Met Gly Leu Lys Asn Thr Pro Ser Phe Leu

165 170 175

Ile Ala Cys Asn Lys Gln Asp Ile Ala Met Ala Lys Ser Ala Lys Leu

180 185 190

Ile Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu Asn Thr Leu Arg Val Thr Arg

195 200 205

Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Asp Ser Ser Ser Thr Ala Pro Ala Gln

210 215 220

Leu Gly Lys Lys Gly Lys Glu Phe Glu Phe Ser Gln Leu Pro Leu Lys

225 230 235 240

Val Glu Phe Leu Glu Cys Ser Ala Lys Gly Gly Arg Gly Asp Val Gly

245 250 255

Ser Ala Asp Ile Gln Asp Leu Glu Lys Trp Leu Ala Lys Ile Ala

260 265 270

<210> 28

<211> 1779

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCANX

<400> 28

atggaaggga agtggttgct gtgtatgtta ctggtgcttg gaactgctat tgttgaggct 60

catgatggac atgatgatga tgtgattgat attgaggatg accttgacga tgtcattgaa 120

gaggtagaag actcaaaacc agataccact gctcctcctt catctcccaa ggttacttac 180

aaagctccag ttccaacagg ggaagtatat tttgctgatt cttttgacag aggaactctg 240

tcagggtgga ttttatccaa agccaagaaa gacgataccg atgatgaaat tgccaaatat 300

gatggaaagt gggaggtaga ggaaatgaag gagtcaaagc ttccaggtga taaaggactt 360

gtgttgatgt ctcgggccaa gcatcatgcc atctctgcta aactgaacaa gcccttcctg 420

tttgacacca agcctctcat tgttcagtat gaggttaatt tccaaaatgg aatagaatgt 480

ggtggtgcct atgtgaaact gctttctaaa acaccagaac tcaacctgga tcagttccat 540

gacaagaccc cttatacgat tatgtttggt ccagataaat gtggagagga ctataaactg 600

cacttcatct tccgacacaa aaaccccaaa acgggtatct atgaagaaaa acatgctaag 660

aggccagatg cagatctgaa gacctatttt actgataaga aaacacatct ttacacacta 720

atcttgaatc cagataatag ttttgaaata ctggttgacc aatctgtggt gaatagtgga 780

aatctgctca atgacatgac tcctcctgta aatccttcac gtgaaattga ggacccagaa 840

gaccggaagc ccgaggattg ggatgaaaga ccaaaaatcc cagatccaga agctgtcaag 900

ccagatgact gggatgaaga tgcccctgct aagattccag atgaagaggc cacaaaaccc 960

gaaggctggt tagatgatga gcctgagtac gtacctgatc cagacgcaga gaaacctgag 1020

gattgggatg aagacatgga tggagaatgg gaggctcctc agattgccaa ccctagatgt 1080

gagtcagctc ctggatgtgg tgtctggcag cgacctgtga ttgacaaccc caattataaa 1140

ggcaaatgga agcctcctat gattgacaat cccagttacc agggaatctg gaaacccagg 1200

aaaataccaa atccagattt ctttgaagat ctggaacctt tcagaatgac tccttttagt 1260

gctattggtt tggagctgtg gtccatgacc tctgacattt tttttgacaa ctttatcatt 1320

tgtgctgatc gaagaatagt tgatgattgg gccaatgatg gatggggcct gaagaaagct 1380

gctgatgggg ctgctgagcc aggcgttgtg gggcagatga tcgaggcagc tgaagagcgc 1440

ccgtggctgt gggtagtcta tattctaact gtagcccttc ctgtgttcct ggttatcctc 1500

ttctgctgtt ctggaaagaa acagaccagt ggtatggagt ataagaaaac tgatgcacct 1560

caaccggatg tgaaggaaga ggaagaagag aaggaagagg aaaaggacaa gggagatgag 1620

gaggaggaag gagaagagaa acttgaagag aaacagaaaa gtgatgctga agaagatggt 1680

ggcactgtca gtcaagagga ggaagacaga aaacctaaag cagaggagga tgaaattttg 1740

aacagatcac caagaaacag aaagccacga agagagtga 1779

<210> 29

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCANX

<400> 29

Met Glu Gly Lys Trp Leu Leu Cys Met Leu Leu Val Leu Gly Thr Ala

1 5 10 15

Ile Val Glu Ala His Asp Gly His Asp Asp Asp Val Ile Asp Ile Glu

20 25 30

Asp Asp Leu Asp Asp Val Ile Glu Glu Val Glu Asp Ser Lys Pro Asp

35 40 45

Thr Thr Ala Pro Pro Ser Ser Pro Lys Val Thr Tyr Lys Ala Pro Val

50 55 60

Pro Thr Gly Glu Val Tyr Phe Ala Asp Ser Phe Asp Arg Gly Thr Leu

65 70 75 80

Ser Gly Trp Ile Leu Ser Lys Ala Lys Lys Asp Asp Thr Asp Asp Glu

85 90 95

Ile Ala Lys Tyr Asp Gly Lys Trp Glu Val Glu Glu Met Lys Glu Ser

100 105 110

Lys Leu Pro Gly Asp Lys Gly Leu Val Leu Met Ser Arg Ala Lys His

115 120 125

His Ala Ile Ser Ala Lys Leu Asn Lys Pro Phe Leu Phe Asp Thr Lys

130 135 140

Pro Leu Ile Val Gln Tyr Glu Val Asn Phe Gln Asn Gly Ile Glu Cys

145 150 155 160

Gly Gly Ala Tyr Val Lys Leu Leu Ser Lys Thr Pro Glu Leu Asn Leu

165 170 175

Asp Gln Phe His Asp Lys Thr Pro Tyr Thr Ile Met Phe Gly Pro Asp

180 185 190

Lys Cys Gly Glu Asp Tyr Lys Leu His Phe Ile Phe Arg His Lys Asn

195 200 205

Pro Lys Thr Gly Ile Tyr Glu Glu Lys His Ala Lys Arg Pro Asp Ala

210 215 220

Asp Leu Lys Thr Tyr Phe Thr Asp Lys Lys Thr His Leu Tyr Thr Leu

225 230 235 240

Ile Leu Asn Pro Asp Asn Ser Phe Glu Ile Leu Val Asp Gln Ser Val

245 250 255

Val Asn Ser Gly Asn Leu Leu Asn Asp Met Thr Pro Pro Val Asn Pro

260 265 270

Ser Arg Glu Ile Glu Asp Pro Glu Asp Arg Lys Pro Glu Asp Trp Asp

275 280 285

Glu Arg Pro Lys Ile Pro Asp Pro Glu Ala Val Lys Pro Asp Asp Trp

290 295 300

Asp Glu Asp Ala Pro Ala Lys Ile Pro Asp Glu Glu Ala Thr Lys Pro

305 310 315 320

Glu Gly Trp Leu Asp Asp Glu Pro Glu Tyr Val Pro Asp Pro Asp Ala

325 330 335

Glu Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Asp Met Asp Gly Glu Trp Glu Ala

340 345 350

Pro Gln Ile Ala Asn Pro Arg Cys Glu Ser Ala Pro Gly Cys Gly Val

355 360 365

Trp Gln Arg Pro Val Ile Asp Asn Pro Asn Tyr Lys Gly Lys Trp Lys

370 375 380

Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Ser Tyr Gln Gly Ile Trp Lys Pro Arg

385 390 395 400

Lys Ile Pro Asn Pro Asp Phe Phe Glu Asp Leu Glu Pro Phe Arg Met

405 410 415

Thr Pro Phe Ser Ala Ile Gly Leu Glu Leu Trp Ser Met Thr Ser Asp

420 425 430

Ile Phe Phe Asp Asn Phe Ile Ile Cys Ala Asp Arg Arg Ile Val Asp

435 440 445

Asp Trp Ala Asn Asp Gly Trp Gly Leu Lys Lys Ala Ala Asp Gly Ala

450 455 460

Ala Glu Pro Gly Val Val Gly Gln Met Ile Glu Ala Ala Glu Glu Arg

465 470 475 480

Pro Trp Leu Trp Val Val Tyr Ile Leu Thr Val Ala Leu Pro Val Phe

485 490 495

Leu Val Ile Leu Phe Cys Cys Ser Gly Lys Lys Gln Thr Ser Gly Met

500 505 510

Glu Tyr Lys Lys Thr Asp Ala Pro Gln Pro Asp Val Lys Glu Glu Glu

515 520 525

Glu Glu Lys Glu Glu Glu Lys Asp Lys Gly Asp Glu Glu Glu Glu Gly

530 535 540

Glu Glu Lys Leu Glu Glu Lys Gln Lys Ser Asp Ala Glu Glu Asp Gly

545 550 555 560

Gly Thr Val Ser Gln Glu Glu Glu Asp Arg Lys Pro Lys Ala Glu Glu

565 570 575

Asp Glu Ile Leu Asn Arg Ser Pro Arg Asn Arg Lys Pro Arg Arg Glu

580 585 590

<210> 30

<211> 972

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hUCP4

<400> 30

atgtccgtcc cggaggagga ggagaggctt ttgccgctga cccagagatg gccccgagcg 60

agcaaattcc tactgtccgg ctgcgcggct accgtggccg agctagcaac ctttcccctg 120

gatctcacaa aaactcgact ccaaatgcaa ggagaagcag ctcttgctcg gttgggagac 180

ggtgcaagag aatctgcccc ctatagggga atggtgcgca cagccctagg gatcattgaa 240

gaggaaggct ttctaaagct ttggcaagga gtgacacccg ccatttacag acacgtagtg 300

tattctggag gtcgaatggt cacatatgaa catctccgag aggttgtgtt tggcaaaagt 360

gaagatgagc attatcccct ttggaaatca gtcattggag ggatgatggc tggtgttatt 420

ggccagtttt tagccaatcc aactgaccta gtgaaggttc agatgcaaat ggaaggaaaa 480

aggaaactgg aaggaaaacc attgcgattt cgtggtgtac atcatgcatt tgcaaaaatc 540

ttagctgaag gaggaatacg agggctttgg gcaggctggg tacccaatat acaaagagca 600

gcactggtga atatgggaga tttaaccact tatgatacag tgaaacacta cttggtattg 660

aatacaccac ttgaggacaa tatcatgact cacggtttat caagtttatg ttctggactg 720

gtagcttcta ttctgggaac accagccgat gtcatcaaaa gcagaataat gaatcaacca 780

cgagataaac aaggaagggg acttttgtat aaatcatcga ctgactgctt gattcaggct 840

gttcaaggtg aaggattcat gagtctatat aaaggctttt taccatcttg gctgagaatg 900

accccttggt caatggtgtt ctggcttact tatgaaaaaa tcagagagat gagtggagtc 960

agtccatttt aa 972

<210> 31

<211> 323

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hUCP4

<400> 31

Met Ser Val Pro Glu Glu Glu Glu Arg Leu Leu Pro Leu Thr Gln Arg

1 5 10 15

Trp Pro Arg Ala Ser Lys Phe Leu Leu Ser Gly Cys Ala Ala Thr Val

20 25 30

Ala Glu Leu Ala Thr Phe Pro Leu Asp Leu Thr Lys Thr Arg Leu Gln

35 40 45

Met Gln Gly Glu Ala Ala Leu Ala Arg Leu Gly Asp Gly Ala Arg Glu

50 55 60

Ser Ala Pro Tyr Arg Gly Met Val Arg Thr Ala Leu Gly Ile Ile Glu

65 70 75 80

Glu Glu Gly Phe Leu Lys Leu Trp Gln Gly Val Thr Pro Ala Ile Tyr

85 90 95

Arg His Val Val Tyr Ser Gly Gly Arg Met Val Thr Tyr Glu His Leu

100 105 110

Arg Glu Val Val Phe Gly Lys Ser Glu Asp Glu His Tyr Pro Leu Trp

115 120 125

Lys Ser Val Ile Gly Gly Met Met Ala Gly Val Ile Gly Gln Phe Leu

130 135 140

Ala Asn Pro Thr Asp Leu Val Lys Val Gln Met Gln Met Glu Gly Lys

145 150 155 160

Arg Lys Leu Glu Gly Lys Pro Leu Arg Phe Arg Gly Val His His Ala

165 170 175

Phe Ala Lys Ile Leu Ala Glu Gly Gly Ile Arg Gly Leu Trp Ala Gly

180 185 190

Trp Val Pro Asn Ile Gln Arg Ala Ala Leu Val Asn Met Gly Asp Leu

195 200 205

Thr Thr Tyr Asp Thr Val Lys His Tyr Leu Val Leu Asn Thr Pro Leu

210 215 220

Glu Asp Asn Ile Met Thr His Gly Leu Ser Ser Leu Cys Ser Gly Leu

225 230 235 240

Val Ala Ser Ile Leu Gly Thr Pro Ala Asp Val Ile Lys Ser Arg Ile

245 250 255

Met Asn Gln Pro Arg Asp Lys Gln Gly Arg Gly Leu Leu Tyr Lys Ser

260 265 270

Ser Thr Asp Cys Leu Ile Gln Ala Val Gln Gly Glu Gly Phe Met Ser

275 280 285

Leu Tyr Lys Gly Phe Leu Pro Ser Trp Leu Arg Met Thr Pro Trp Ser

290 295 300

Met Val Phe Trp Leu Thr Tyr Glu Lys Ile Arg Glu Met Ser Gly Val

305 310 315 320

Ser Pro Phe

<210> 32

<211> 1014

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCMPSAT

<400> 32

atggctgccc cgagagacaa tgtcacttta ttattcaagt tatactgctt ggcagtgatg 60

accctgatgg ctgcagtcta taccatagct ttaagataca caaggacatc agacaaagaa 120

ctctactttt caaccacagc cgtgtgtatc acagaagtta taaagttatt gctaagtgtg 180

ggaattttag ctaaagaaac tggtagtctg ggtagattca aagcatcttt aagagaaaat 240

gtcttgggga gccccaagga actgttgaag ttaagtgtgc catcgttagt gtatgctgtt 300

cagaacaaca tggctttcct agctcttagc aatctggatg cagcagtgta ccaggtgacc 360

taccagttga agattccgtg tactgcttta tgcactgttt taatgttaaa ccggacactc 420

agcaaattac agtgggtttc agtttttatg ctgtgtgctg gagttacgct tgtacagtgg 480

aaaccagccc aagctacaaa agtggtggtg gaacaaaatc cattattagg gtttggcgct 540

atagctattg ctgtattgtg ctcaggattt gcaggagtat attttgaaaa agttttaaag 600

agttcagata cttctctttg ggtgagaaac attcaaatgt atctatcagg gattattgtg 660

acattagctg gcgtctactt gtcagatgga gctgaaatta aagaaaaagg atttttctat 720

ggttacacat attatgtctg gtttgtcatc tttcttgcaa gtgttggtgg cctctacact 780

tctgttgtgg ttaagtacac agacaacatc atgaaaggct tttctgcagc agcggccatt 840

gtcctttcca ccattgcttc agtaatgctg tttggattac agataacact cacctttgcc 900

ctgggtactc ttcttgtatg tgtttccata tatctctatg gattacccag acaagacact 960

acatccatcc aacaaggaga aacagcttca aaggagagag ttattggtgt gtga 1014

<210> 33

<211> 337

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCMPSAT

<400> 33

Met Ala Ala Pro Arg Asp Asn Val Thr Leu Leu Phe Lys Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Leu Ala Val Met Thr Leu Met Ala Ala Val Tyr Thr Ile Ala Leu Arg

20 25 30

Tyr Thr Arg Thr Ser Asp Lys Glu Leu Tyr Phe Ser Thr Thr Ala Val

35 40 45

Cys Ile Thr Glu Val Ile Lys Leu Leu Leu Ser Val Gly Ile Leu Ala

50 55 60

Lys Glu Thr Gly Ser Leu Gly Arg Phe Lys Ala Ser Leu Arg Glu Asn

65 70 75 80

Val Leu Gly Ser Pro Lys Glu Leu Leu Lys Leu Ser Val Pro Ser Leu

85 90 95

Val Tyr Ala Val Gln Asn Asn Met Ala Phe Leu Ala Leu Ser Asn Leu

100 105 110

Asp Ala Ala Val Tyr Gln Val Thr Tyr Gln Leu Lys Ile Pro Cys Thr

115 120 125

Ala Leu Cys Thr Val Leu Met Leu Asn Arg Thr Leu Ser Lys Leu Gln

130 135 140

Trp Val Ser Val Phe Met Leu Cys Ala Gly Val Thr Leu Val Gln Trp

145 150 155 160

Lys Pro Ala Gln Ala Thr Lys Val Val Val Glu Gln Asn Pro Leu Leu

165 170 175

Gly Phe Gly Ala Ile Ala Ile Ala Val Leu Cys Ser Gly Phe Ala Gly

180 185 190

Val Tyr Phe Glu Lys Val Leu Lys Ser Ser Asp Thr Ser Leu Trp Val

195 200 205

Arg Asn Ile Gln Met Tyr Leu Ser Gly Ile Ile Val Thr Leu Ala Gly

210 215 220

Val Tyr Leu Ser Asp Gly Ala Glu Ile Lys Glu Lys Gly Phe Phe Tyr

225 230 235 240

Gly Tyr Thr Tyr Tyr Val Trp Phe Val Ile Phe Leu Ala Ser Val Gly

245 250 255

Gly Leu Tyr Thr Ser Val Val Val Lys Tyr Thr Asp Asn Ile Met Lys

260 265 270

Gly Phe Ser Ala Ala Ala Ala Ile Val Leu Ser Thr Ile Ala Ser Val

275 280 285

Met Leu Phe Gly Leu Gln Ile Thr Leu Thr Phe Ala Leu Gly Thr Leu

290 295 300

Leu Val Cys Val Ser Ile Tyr Leu Tyr Gly Leu Pro Arg Gln Asp Thr

305 310 315 320

Thr Ser Ile Gln Gln Gly Glu Thr Ala Ser Lys Glu Arg Val Ile Gly

325 330 335

Val

<210> 34

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Оптимизированная последовательность

<220>

<221> misc_feature

<223> rST6Gal1

<400> 34

atgatccaca ccaacctgaa gaagaagttc tccctgttca tcctggtgtt tctgctgttc 60

gccgtgatct gcgtgtggaa gaagggctcc gactacgagg ctctgaccct gcaggccaaa 120

gaattccaga tgcccaagtc ccaagaaaag gtggcaatgg gctccgccag ccaggtggtg 180

ttctccaact ccaagcagga ccctaaagag gacatcccta tcctgtccta ccacagagtg 240

accgccaaag tgaagcctca gcctagcttc caggtctggg acaaggactc cacctacagc 300

aagctgaacc ctcggctgct gaagatctgg cggaactacc tgaacatgaa caagtacaag 360

gtgtcctaca agggccctgg ccctggcgtg aagttctccg tggaggccct gaggtgccac 420

ctgagggacc acgtgaacgt gtccatgatc gaggccaccg acttcccatt caacaccacc 480

gagtgggagg gctacctgcc taaagagaac ttccggacca aagtgggccc ttggcagaga 540

tgcgccgtgg tgtcctccgc cggctccctg aagaactctc agctgggccg ggagatcgac 600

aaccacgacg ccgtgctgag gttcaacggc gctcctaccg acaacttcca gcaggacgtg 660

ggctccaaga ccaccatcag actgatgaac agccagctgg tgaccaccga gaagcggttt 720

ctgaaggact ccctgtacac cgagggcatc ctgatcgtgt gggacccttc cgtgtaccac 780

gccgacatcc ctaagtggta tcagaagccc gactacaact tcttcgagac atacaagtcc 840

taccggcggc tgaacccttc ccagcctttc tacatcctga agccccagat gccttgggag 900

ctgtgggaca tcatccagga aatctccgcc gacctgatcc agcctaaccc tccttcctcc 960

ggcatgctgg gcatcatcat catgatgacc ctgtgcgacc aggtggacat ctacgagttt 1020

ctgccttcca agagaaagac cgacgtgtgc tactaccacc agaagttctt cgactccgcc 1080

tgcacaatgg gcgcctacca ccccctgctg ttcgagaaga acatggtgaa gcacctgaac 1140

gagggcaccg acgaggacat ctacctgttc ggcaaggcca ccctgtccgg cttccggaac 1200

atccggtgct ga 1212

<210> 35

<211> 403

<212> ПРТ

<213> Rattus norvegicus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> rST6Gal1

<400> 35

Met Ile His Thr Asn Leu Lys Lys Lys Phe Ser Leu Phe Ile Leu Val

1 5 10 15

Phe Leu Leu Phe Ala Val Ile Cys Val Trp Lys Lys Gly Ser Asp Tyr

20 25 30

Glu Ala Leu Thr Leu Gln Ala Lys Glu Phe Gln Met Pro Lys Ser Gln

35 40 45

Glu Lys Val Ala Met Gly Ser Ala Ser Gln Val Val Phe Ser Asn Ser

50 55 60

Lys Gln Asp Pro Lys Glu Asp Ile Pro Ile Leu Ser Tyr His Arg Val

65 70 75 80

Thr Ala Lys Val Lys Pro Gln Pro Ser Phe Gln Val Trp Asp Lys Asp

85 90 95

Ser Thr Tyr Ser Lys Leu Asn Pro Arg Leu Leu Lys Ile Trp Arg Asn

100 105 110

Tyr Leu Asn Met Asn Lys Tyr Lys Val Ser Tyr Lys Gly Pro Gly Pro

115 120 125

Gly Val Lys Phe Ser Val Glu Ala Leu Arg Cys His Leu Arg Asp His

130 135 140

Val Asn Val Ser Met Ile Glu Ala Thr Asp Phe Pro Phe Asn Thr Thr

145 150 155 160

Glu Trp Glu Gly Tyr Leu Pro Lys Glu Asn Phe Arg Thr Lys Val Gly

165 170 175

Pro Trp Gln Arg Cys Ala Val Val Ser Ser Ala Gly Ser Leu Lys Asn

180 185 190

Ser Gln Leu Gly Arg Glu Ile Asp Asn His Asp Ala Val Leu Arg Phe

195 200 205

Asn Gly Ala Pro Thr Asp Asn Phe Gln Gln Asp Val Gly Ser Lys Thr

210 215 220

Thr Ile Arg Leu Met Asn Ser Gln Leu Val Thr Thr Glu Lys Arg Phe

225 230 235 240

Leu Lys Asp Ser Leu Tyr Thr Glu Gly Ile Leu Ile Val Trp Asp Pro

245 250 255

Ser Val Tyr His Ala Asp Ile Pro Lys Trp Tyr Gln Lys Pro Asp Tyr

260 265 270

Asn Phe Phe Glu Thr Tyr Lys Ser Tyr Arg Arg Leu Asn Pro Ser Gln

275 280 285

Pro Phe Tyr Ile Leu Lys Pro Gln Met Pro Trp Glu Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Ile Gln Glu Ile Ser Ala Asp Leu Ile Gln Pro Asn Pro Pro Ser Ser

305 310 315 320

Gly Met Leu Gly Ile Ile Ile Met Met Thr Leu Cys Asp Gln Val Asp

325 330 335

Ile Tyr Glu Phe Leu Pro Ser Lys Arg Lys Thr Asp Val Cys Tyr Tyr

340 345 350

His Gln Lys Phe Phe Asp Ser Ala Cys Thr Met Gly Ala Tyr His Pro

355 360 365

Leu Leu Phe Glu Lys Asn Met Val Lys His Leu Asn Glu Gly Thr Asp

370 375 380

Glu Asp Ile Tyr Leu Phe Gly Lys Ala Thr Leu Ser Gly Phe Arg Asn

385 390 395 400

Ile Arg Cys

<210> 36

<211> 957

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCOMSC

<400> 36

atgctttctg aaagcagctc ctttttgaag ggtgtgatgc ttggaagcat tttctgtgct 60

ttgatcacta tgctaggaca cattaggatt ggtcatggaa atagaatgca ccaccatgag 120

catcatcacc tacaagctcc taacaaagaa gatatcttga aaatttcaga ggatgagcgc 180

atggagctca gtaagagctt tcgagtatac tgtattatcc ttgtaaaacc caaagatgtg 240

agtctttggg ctgcagtaaa ggagacttgg accaaacact gtgacaaagc agagttcttc 300

agttctgaaa atgttaaagt gtttgagtca attaatatgg acacaaatga catgtggtta 360

atgatgagaa aagcttacaa atacgccttt gataagtata gagaccaata caactggttc 420

ttccttgcac gccccactac gtttgctatc attgaaaacc taaagtattt tttgttaaaa 480

aaggatccat cacagccttt ctatctaggc cacactataa aatctggaga ccttgaatat 540

gtgggtatgg aaggaggaat tgtcttaagt gtagaatcaa tgaaaagact taacagcctt 600

ctcaatatcc cagaaaagtg tcctgaacag ggagggatga tttggaagat atctgaagat 660

aaacagctag cagtttgcct gaaatatgct ggagtatttg cagaaaatgc agaagatgct 720

gatggaaaag atgtatttaa taccaaatct gttgggcttt ctattaaaga ggcaatgact 780

tatcacccca accaggtagt agaaggctgt tgttcagata tggctgttac ttttaatgga 840

ctgactccaa atcagatgca tgtgatgatg tatggggtat accgccttag ggcatttggg 900

catattttca atgatgcatt ggttttctta cctccaaatg gttctgacaa tgactga 957

<210> 37

<211> 318

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCOMSC

<400> 37

Met Leu Ser Glu Ser Ser Ser Phe Leu Lys Gly Val Met Leu Gly Ser

1 5 10 15

Ile Phe Cys Ala Leu Ile Thr Met Leu Gly His Ile Arg Ile Gly His

20 25 30

Gly Asn Arg Met His His His Glu His His His Leu Gln Ala Pro Asn

35 40 45

Lys Glu Asp Ile Leu Lys Ile Ser Glu Asp Glu Arg Met Glu Leu Ser

50 55 60

Lys Ser Phe Arg Val Tyr Cys Ile Ile Leu Val Lys Pro Lys Asp Val

65 70 75 80

Ser Leu Trp Ala Ala Val Lys Glu Thr Trp Thr Lys His Cys Asp Lys

85 90 95

Ala Glu Phe Phe Ser Ser Glu Asn Val Lys Val Phe Glu Ser Ile Asn

100 105 110

Met Asp Thr Asn Asp Met Trp Leu Met Met Arg Lys Ala Tyr Lys Tyr

115 120 125

Ala Phe Asp Lys Tyr Arg Asp Gln Tyr Asn Trp Phe Phe Leu Ala Arg

130 135 140

Pro Thr Thr Phe Ala Ile Ile Glu Asn Leu Lys Tyr Phe Leu Leu Lys

145 150 155 160

Lys Asp Pro Ser Gln Pro Phe Tyr Leu Gly His Thr Ile Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Leu Glu Tyr Val Gly Met Glu Gly Gly Ile Val Leu Ser Val Glu

180 185 190

Ser Met Lys Arg Leu Asn Ser Leu Leu Asn Ile Pro Glu Lys Cys Pro

195 200 205

Glu Gln Gly Gly Met Ile Trp Lys Ile Ser Glu Asp Lys Gln Leu Ala

210 215 220

Val Cys Leu Lys Tyr Ala Gly Val Phe Ala Glu Asn Ala Glu Asp Ala

225 230 235 240

Asp Gly Lys Asp Val Phe Asn Thr Lys Ser Val Gly Leu Ser Ile Lys

245 250 255

Glu Ala Met Thr Tyr His Pro Asn Gln Val Val Glu Gly Cys Cys Ser

260 265 270

Asp Met Ala Val Thr Phe Asn Gly Leu Thr Pro Asn Gln Met His Val

275 280 285

Met Met Tyr Gly Val Tyr Arg Leu Arg Ala Phe Gly His Ile Phe Asn

290 295 300

Asp Ala Leu Val Phe Leu Pro Pro Asn Gly Ser Asp Asn Asp

305 310 315

<210> 38

<211> 1092

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hT-синтаза

<400> 38

atggcctcta aatcctggct gaatttttta accttcctct gtggatcagc aataggattt 60

cttttatgtt ctcagctatt tagtattttg ttgggagaaa aggttgacac ccagcctaat 120

gttcttcata atgatcctca tgcaaggcat tcagatgata atggacagaa tcatctagaa 180

ggacaaatga acttcaatgc agattctagc caacataaag atgagaacac agacattgct 240

gaaaacctct atcagaaagt tagaattctt tgctgggtta tgaccggccc tcaaaaccta 300

gagaaaaagg ccaaacacgt caaagctact tgggcccagc gttgtaacaa agtgttgttt 360

atgagttcag aagaaaataa agacttccct gctgtgggac tgaaaaccaa agaaggcaga 420

gatcaactat actggaaaac aattaaagct tttcagtatg ttcatgaaca ttatttagaa 480

gatgctgatt ggtttttgaa agcagatgat gacacgtatg tcatactaga caatttgagg 540

tggcttcttt caaaatacga ccctgaagaa cccatttact ttgggagaag atttaagcct 600

tatgtaaagc agggctacat gagtggagga gcaggatatg tactaagcaa agaagccttg 660

aaaagatttg ttgatgcatt taaaacagac aagtgtacac atagttcctc cattgaagac 720

ttagcactgg ggagatgcat ggaaattatg aatgtagaag caggagattc cagagatacc 780

attggaaaag aaacttttca tccctttgtg ccagaacacc atttaattaa aggttatcta 840

cctagaacgt tttggtactg gaattacaac tattatcctc ctgtagaggg tcctggttgc 900

tgctctgatc ttgcagtttc ttttcactat gttgattcta caaccatgta tgagttagaa 960

tacctcgttt atcatcttcg tccatatggt tatttataca gatatcaacc taccttacct 1020

gaacgtatac taaaggaaat tagtcaagca aacaaaaatg aagatacaaa agtgaagtta 1080

ggaaatcctt ga 1092

<210> 39

<211> 363

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hT-синтаза

<400> 39

Met Ala Ser Lys Ser Trp Leu Asn Phe Leu Thr Phe Leu Cys Gly Ser

1 5 10 15

Ala Ile Gly Phe Leu Leu Cys Ser Gln Leu Phe Ser Ile Leu Leu Gly

20 25 30

Glu Lys Val Asp Thr Gln Pro Asn Val Leu His Asn Asp Pro His Ala

35 40 45

Arg His Ser Asp Asp Asn Gly Gln Asn His Leu Glu Gly Gln Met Asn

50 55 60

Phe Asn Ala Asp Ser Ser Gln His Lys Asp Glu Asn Thr Asp Ile Ala

65 70 75 80

Glu Asn Leu Tyr Gln Lys Val Arg Ile Leu Cys Trp Val Met Thr Gly

85 90 95

Pro Gln Asn Leu Glu Lys Lys Ala Lys His Val Lys Ala Thr Trp Ala

100 105 110

Gln Arg Cys Asn Lys Val Leu Phe Met Ser Ser Glu Glu Asn Lys Asp

115 120 125

Phe Pro Ala Val Gly Leu Lys Thr Lys Glu Gly Arg Asp Gln Leu Tyr

130 135 140

Trp Lys Thr Ile Lys Ala Phe Gln Tyr Val His Glu His Tyr Leu Glu

145 150 155 160

Asp Ala Asp Trp Phe Leu Lys Ala Asp Asp Asp Thr Tyr Val Ile Leu

165 170 175

Asp Asn Leu Arg Trp Leu Leu Ser Lys Tyr Asp Pro Glu Glu Pro Ile

180 185 190

Tyr Phe Gly Arg Arg Phe Lys Pro Tyr Val Lys Gln Gly Tyr Met Ser

195 200 205

Gly Gly Ala Gly Tyr Val Leu Ser Lys Glu Ala Leu Lys Arg Phe Val

210 215 220

Asp Ala Phe Lys Thr Asp Lys Cys Thr His Ser Ser Ser Ile Glu Asp

225 230 235 240

Leu Ala Leu Gly Arg Cys Met Glu Ile Met Asn Val Glu Ala Gly Asp

245 250 255

Ser Arg Asp Thr Ile Gly Lys Glu Thr Phe His Pro Phe Val Pro Glu

260 265 270

His His Leu Ile Lys Gly Tyr Leu Pro Arg Thr Phe Trp Tyr Trp Asn

275 280 285

Tyr Asn Tyr Tyr Pro Pro Val Glu Gly Pro Gly Cys Cys Ser Asp Leu

290 295 300

Ala Val Ser Phe His Tyr Val Asp Ser Thr Thr Met Tyr Glu Leu Glu

305 310 315 320

Tyr Leu Val Tyr His Leu Arg Pro Tyr Gly Tyr Leu Tyr Arg Tyr Gln

325 330 335

Pro Thr Leu Pro Glu Arg Ile Leu Lys Glu Ile Ser Gln Ala Asn Lys

340 345 350

Asn Glu Asp Thr Lys Val Lys Leu Gly Asn Pro

355 360

<210> 40

<211> 1605

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hP4HA1

<400> 40

atgatctggt atatattaat tataggaatt ctgcttcccc agtctttggc tcatccaggc 60

ttttttactt caattggtca gatgactgat ttgatccata ctgagaaaga tctggtgact 120

tctctgaaag attatattaa ggcagaagag gacaagttag aacaaataaa aaaatgggca 180

gagaagttag atcggctaac tagtacagcg acaaaagatc cagaaggatt tgttgggcat 240

ccagtaaatg cattcaaatt aatgaaacgt ctgaatactg agtggagtga gttggagaat 300

ctggtcctta aggatatgtc agatggcttt atctctaacc taaccattca gagacagtac 360

tttcctaatg atgaagatca ggttggggca gccaaagctc tgttacgtct ccaggatacc 420

tacaatttgg atacagatac catctcaaag ggtaatcttc caggagtgaa acacaaatct 480

tttctaacgg ctgaggactg ctttgagttg ggcaaagtgg cctatacaga agcagattat 540

taccatacgg aactgtggat ggaacaagcc ctaaggcaac tggatgaagg cgagatttct 600

accatagata aagtctctgt tctagattat ttgagctatg cggtatatca gcagggagac 660

ctggataagg cacttttgct cacaaagaag cttcttgaac tagatcctga acatcagaga 720

gctaatggta acttaaaata ttttgagtat ataatggcta aagaaaaaga tgtcaataag 780

tctgcttcag atgaccaatc tgatcagaaa actacaccaa agaaaaaagg ggttgctgtg 840

gattacctgc cagagagaca gaagtacgaa atgctgtgcc gtggggaggg tatcaaaatg 900

acccctcgga gacagaaaaa actcttttgc cgctaccatg atggaaaccg taatcctaaa 960

tttattctgg ctccagctaa acaggaggat gaatgggaca agcctcgtat tattcgcttc 1020

catgatatta tttctgatgc agaaattgaa atcgtcaaag acctagcaaa accaaggctg 1080

agccgagcta cagtacatga ccctgagact ggaaaattga ccacagcaca gtacagagta 1140

tctaagagtg cctggctctc tggctatgaa aatcctgtgg tgtctcgaat taatatgaga 1200

atacaagatc taacaggact agatgtttcc acagcagagg aattacaggt agcaaattat 1260

ggagttggag gacagtatga accccatttt gactttgcac ggaaagatga gccagatgct 1320

ttcaaagagc tggggacagg aaatagaatt gctacatggc tgttttatat gagtgatgtg 1380

tctgcaggag gagccactgt ttttcctgaa gttggagcta gtgtttggcc caaaaaagga 1440

actgctgttt tctggtataa tctgtttgcc agtggagaag gagattatag tacacggcat 1500

gcagcctgtc cagtgctagt tggcaacaaa tgggtatcca ataaatggct ccatgaacgt 1560

ggacaagaat ttcgaagacc ttgtacgttg tcagaattgg aatga 1605

<210> 41

<211> 534

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hP4HA1

<400> 41

Met Ile Trp Tyr Ile Leu Ile Ile Gly Ile Leu Leu Pro Gln Ser Leu

1 5 10 15

Ala His Pro Gly Phe Phe Thr Ser Ile Gly Gln Met Thr Asp Leu Ile

20 25 30

His Thr Glu Lys Asp Leu Val Thr Ser Leu Lys Asp Tyr Ile Lys Ala

35 40 45

Glu Glu Asp Lys Leu Glu Gln Ile Lys Lys Trp Ala Glu Lys Leu Asp

50 55 60

Arg Leu Thr Ser Thr Ala Thr Lys Asp Pro Glu Gly Phe Val Gly His

65 70 75 80

Pro Val Asn Ala Phe Lys Leu Met Lys Arg Leu Asn Thr Glu Trp Ser

85 90 95

Glu Leu Glu Asn Leu Val Leu Lys Asp Met Ser Asp Gly Phe Ile Ser

100 105 110

Asn Leu Thr Ile Gln Arg Gln Tyr Phe Pro Asn Asp Glu Asp Gln Val

115 120 125

Gly Ala Ala Lys Ala Leu Leu Arg Leu Gln Asp Thr Tyr Asn Leu Asp

130 135 140

Thr Asp Thr Ile Ser Lys Gly Asn Leu Pro Gly Val Lys His Lys Ser

145 150 155 160

Phe Leu Thr Ala Glu Asp Cys Phe Glu Leu Gly Lys Val Ala Tyr Thr

165 170 175

Glu Ala Asp Tyr Tyr His Thr Glu Leu Trp Met Glu Gln Ala Leu Arg

180 185 190

Gln Leu Asp Glu Gly Glu Ile Ser Thr Ile Asp Lys Val Ser Val Leu

195 200 205

Asp Tyr Leu Ser Tyr Ala Val Tyr Gln Gln Gly Asp Leu Asp Lys Ala

210 215 220

Leu Leu Leu Thr Lys Lys Leu Leu Glu Leu Asp Pro Glu His Gln Arg

225 230 235 240

Ala Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Phe Glu Tyr Ile Met Ala Lys Glu Lys

245 250 255

Asp Val Asn Lys Ser Ala Ser Asp Asp Gln Ser Asp Gln Lys Thr Thr

260 265 270

Pro Lys Lys Lys Gly Val Ala Val Asp Tyr Leu Pro Glu Arg Gln Lys

275 280 285

Tyr Glu Met Leu Cys Arg Gly Glu Gly Ile Lys Met Thr Pro Arg Arg

290 295 300

Gln Lys Lys Leu Phe Cys Arg Tyr His Asp Gly Asn Arg Asn Pro Lys

305 310 315 320

Phe Ile Leu Ala Pro Ala Lys Gln Glu Asp Glu Trp Asp Lys Pro Arg

325 330 335

Ile Ile Arg Phe His Asp Ile Ile Ser Asp Ala Glu Ile Glu Ile Val

340 345 350

Lys Asp Leu Ala Lys Pro Arg Leu Ser Arg Ala Thr Val His Asp Pro

355 360 365

Glu Thr Gly Lys Leu Thr Thr Ala Gln Tyr Arg Val Ser Lys Ser Ala

370 375 380

Trp Leu Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Val Val Ser Arg Ile Asn Met Arg

385 390 395 400

Ile Gln Asp Leu Thr Gly Leu Asp Val Ser Thr Ala Glu Glu Leu Gln

405 410 415

Val Ala Asn Tyr Gly Val Gly Gly Gln Tyr Glu Pro His Phe Asp Phe

420 425 430

Ala Arg Lys Asp Glu Pro Asp Ala Phe Lys Glu Leu Gly Thr Gly Asn

435 440 445

Arg Ile Ala Thr Trp Leu Phe Tyr Met Ser Asp Val Ser Ala Gly Gly

450 455 460

Ala Thr Val Phe Pro Glu Val Gly Ala Ser Val Trp Pro Lys Lys Gly

465 470 475 480

Thr Ala Val Phe Trp Tyr Asn Leu Phe Ala Ser Gly Glu Gly Asp Tyr

485 490 495

Ser Thr Arg His Ala Ala Cys Pro Val Leu Val Gly Asn Lys Trp Val

500 505 510

Ser Asn Lys Trp Leu His Glu Arg Gly Gln Glu Phe Arg Arg Pro Cys

515 520 525

Thr Leu Ser Glu Leu Glu

530

<210> 42

<211> 1527

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hP4HB

<400> 42

atgctgcgcc gcgctctgct gtgcctggcc gtggccgccc tggtgcgcgc cgacgccccc 60

gaggaggagg accacgtcct ggtgctgcgg aaaagcaact tcgcggaggc gctggcggcc 120

cacaagtacc tgctggtgga gttctatgcc ccttggtgtg gccactgcaa ggctctggcc 180

cctgagtatg ccaaagccgc tgggaagctg aaggcagaag gttccgagat caggttggcc 240

aaggtggacg ccacggagga gtctgacctg gcccagcagt acggcgtgcg cggctatccc 300

accatcaagt tcttcaggaa tggagacacg gcttccccca aggaatatac agctggcaga 360

gaggctgatg acatcgtgaa ctggctgaag aagcgcacgg gcccggctgc caccaccctg 420

cctgacggcg cagctgcaga gtccttggtg gagtccagcg aggtggctgt catcggcttc 480

ttcaaggacg tggagtcgga ctctgccaag cagtttttgc aggcagcaga ggccatcgat 540

gacataccat ttgggatcac ttccaacagt gacgtgttct ccaaatacca gctcgacaaa 600

gatggggttg tcctctttaa gaagtttgat gaaggccgga acaactttga aggggaggtc 660

accaaggaga acctgctgga ctttatcaaa cacaaccagc tgccccttgt catcgagttc 720

accgagcaga cagccccgaa gatttttgga ggtgaaatca agactcacat cctgctgttc 780

ttgcccaaga gtgtgtctga ctatgacggc aaactgagca acttcaaaac agcagccgag 840

agcttcaagg gcaagatcct gttcatcttc atcgacagcg accacaccga caaccagcgc 900

atcctcgagt tctttggcct gaagaaggaa gagtgcccgg ccgtgcgcct catcaccctg 960

gaggaggaga tgaccaagta caagcccgaa tcggaggagc tgacggcaga gaggatcaca 1020

gagttctgcc accgcttcct ggagggcaaa atcaagcccc acctgatgag ccaggagctg 1080

ccggaggact gggacaagca gcctgtcaag gtgcttgttg ggaagaactt tgaagacgtg 1140

gcttttgatg agaaaaaaaa cgtctttgtg gagttctatg ccccatggtg tggtcactgc 1200

aaacagttgg ctcccatttg ggataaactg ggagagacgt acaaggacca tgagaacatc 1260

gtcatcgcca agatggactc gactgccaac gaggtggagg ccgtcaaagt gcacagcttc 1320

cccacactca agttctttcc tgccagtgcc gacaggacgg tcattgatta caacggggaa 1380

cgcacgctgg atggttttaa gaaattcctg gagagcggtg gccaggatgg ggcaggggat 1440

gatgacgatc tcgaggacct ggaagaagca gaggagccag acatggagga agacgatgat 1500

cagaaagctg tgaaagatga actgtaa 1527

<210> 43

<211> 508

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hP4HB

<400> 43

Met Leu Arg Arg Ala Leu Leu Cys Leu Ala Val Ala Ala Leu Val Arg

1 5 10 15

Ala Asp Ala Pro Glu Glu Glu Asp His Val Leu Val Leu Arg Lys Ser

20 25 30

Asn Phe Ala Glu Ala Leu Ala Ala His Lys Tyr Leu Leu Val Glu Phe

35 40 45

Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His Cys Lys Ala Leu Ala Pro Glu Tyr Ala

50 55 60

Lys Ala Ala Gly Lys Leu Lys Ala Glu Gly Ser Glu Ile Arg Leu Ala

65 70 75 80

Lys Val Asp Ala Thr Glu Glu Ser Asp Leu Ala Gln Gln Tyr Gly Val

85 90 95

Arg Gly Tyr Pro Thr Ile Lys Phe Phe Arg Asn Gly Asp Thr Ala Ser

100 105 110

Pro Lys Glu Tyr Thr Ala Gly Arg Glu Ala Asp Asp Ile Val Asn Trp

115 120 125

Leu Lys Lys Arg Thr Gly Pro Ala Ala Thr Thr Leu Pro Asp Gly Ala

130 135 140

Ala Ala Glu Ser Leu Val Glu Ser Ser Glu Val Ala Val Ile Gly Phe

145 150 155 160

Phe Lys Asp Val Glu Ser Asp Ser Ala Lys Gln Phe Leu Gln Ala Ala

165 170 175

Glu Ala Ile Asp Asp Ile Pro Phe Gly Ile Thr Ser Asn Ser Asp Val

180 185 190

Phe Ser Lys Tyr Gln Leu Asp Lys Asp Gly Val Val Leu Phe Lys Lys

195 200 205

Phe Asp Glu Gly Arg Asn Asn Phe Glu Gly Glu Val Thr Lys Glu Asn

210 215 220

Leu Leu Asp Phe Ile Lys His Asn Gln Leu Pro Leu Val Ile Glu Phe

225 230 235 240

Thr Glu Gln Thr Ala Pro Lys Ile Phe Gly Gly Glu Ile Lys Thr His

245 250 255

Ile Leu Leu Phe Leu Pro Lys Ser Val Ser Asp Tyr Asp Gly Lys Leu

260 265 270

Ser Asn Phe Lys Thr Ala Ala Glu Ser Phe Lys Gly Lys Ile Leu Phe

275 280 285

Ile Phe Ile Asp Ser Asp His Thr Asp Asn Gln Arg Ile Leu Glu Phe

290 295 300

Phe Gly Leu Lys Lys Glu Glu Cys Pro Ala Val Arg Leu Ile Thr Leu

305 310 315 320

Glu Glu Glu Met Thr Lys Tyr Lys Pro Glu Ser Glu Glu Leu Thr Ala

325 330 335

Glu Arg Ile Thr Glu Phe Cys His Arg Phe Leu Glu Gly Lys Ile Lys

340 345 350

Pro His Leu Met Ser Gln Glu Leu Pro Glu Asp Trp Asp Lys Gln Pro

355 360 365

Val Lys Val Leu Val Gly Lys Asn Phe Glu Asp Val Ala Phe Asp Glu

370 375 380

Lys Lys Asn Val Phe Val Glu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His Cys

385 390 395 400

Lys Gln Leu Ala Pro Ile Trp Asp Lys Leu Gly Glu Thr Tyr Lys Asp

405 410 415

His Glu Asn Ile Val Ile Ala Lys Met Asp Ser Thr Ala Asn Glu Val

420 425 430

Glu Ala Val Lys Val His Ser Phe Pro Thr Leu Lys Phe Phe Pro Ala

435 440 445

Ser Ala Asp Arg Thr Val Ile Asp Tyr Asn Gly Glu Arg Thr Leu Asp

450 455 460

Gly Phe Lys Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gln Asp Gly Ala Gly Asp

465 470 475 480

Asp Asp Asp Leu Glu Asp Leu Glu Glu Ala Glu Glu Pro Asp Met Glu

485 490 495

Glu Asp Asp Asp Gln Lys Ala Val Lys Asp Glu Leu

500 505

<210> 44

<211> 603

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hGILZ

<400> 44

atggcccagt ccaagctcga ttgccgctca cctgtcggcc tcgactgctg caactgctgc 60

ctggacctgg cccatcggag tgggctccag cgaggcagca gcggggagaa caacaacccg 120

ggcagcccta cagtgagcaa ctttcggcag ctgcaggaaa agctggtctt tgagaacctc 180

aataccgaca agctcaacag cataatgcgg caggattcgc tagagccggt gctgcgggac 240

ccctgctacc tgatcaacga gggcatctgc aaccgcaaca tcgaccagac catgctctcc 300

atcctgctct tcttccacag tgcctccgga gccagcgtgg tggccataga caacaagatc 360

gaacaggcca tggatctggt gaagaatcat ctgatgtatg ctgtgagaga ggaggtggag 420

atcctgaagg agcagatccg agagctggtg gagaagaact cccagctaga gcgtgagaac 480

accctgttga agaccctggc aagcccagag cagctggaga agttccagtc ctgtctgagc 540

cctgaagagc cagctcccga atccccacaa gtgcccgagg cccctggtgg ttctgcggtg 600

taa 603

<210> 45

<211> 200

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hGILZ

<400> 45

Met Ala Gln Ser Lys Leu Asp Cys Arg Ser Pro Val Gly Leu Asp Cys

1 5 10 15

Cys Asn Cys Cys Leu Asp Leu Ala His Arg Ser Gly Leu Gln Arg Gly

20 25 30

Ser Ser Gly Glu Asn Asn Asn Pro Gly Ser Pro Thr Val Ser Asn Phe

35 40 45

Arg Gln Leu Gln Glu Lys Leu Val Phe Glu Asn Leu Asn Thr Asp Lys

50 55 60

Leu Asn Ser Ile Met Arg Gln Asp Ser Leu Glu Pro Val Leu Arg Asp

65 70 75 80

Pro Cys Tyr Leu Ile Asn Glu Gly Ile Cys Asn Arg Asn Ile Asp Gln

85 90 95

Thr Met Leu Ser Ile Leu Leu Phe Phe His Ser Ala Ser Gly Ala Ser

100 105 110

Val Val Ala Ile Asp Asn Lys Ile Glu Gln Ala Met Asp Leu Val Lys

115 120 125

Asn His Leu Met Tyr Ala Val Arg Glu Glu Val Glu Ile Leu Lys Glu

130 135 140

Gln Ile Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Gln Leu Glu Arg Glu Asn

145 150 155 160

Thr Leu Leu Lys Thr Leu Ala Ser Pro Glu Gln Leu Glu Lys Phe Gln

165 170 175

Ser Cys Leu Ser Pro Glu Glu Pro Ala Pro Glu Ser Pro Gln Val Pro

180 185 190

Glu Ala Pro Gly Gly Ser Ala Val

195 200

<210> 46

<211> 651

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCyPB

<400> 46

atgctgcgcc tctccgaacg caacatgaag gtgctccttg ccgccgccct catcgcgggg 60

tccgtcttct tcctgctgct gccgggacct tctgcggccg atgagaagaa gaaggggccc 120

aaagtcaccg tcaaggtgta ttttgaccta cgaattggag atgaagatgt aggccgggtg 180

atctttggtc tcttcggaaa gactgttcca aaaacagtgg ataattttgt ggccttagct 240

acaggagaga aaggatttgg ctacaaaaac agcaaattcc atcgtgtaat caaggacttc 300

atgatccagg gcggagactt caccagggga gatggcacag gaggaaagag catctacggt 360

gagcgcttcc ccgatgagaa cttcaaactg aagcactacg ggcctggctg ggtgagcatg 420

gccaacgcag gcaaagacac caacggctcc cagttcttca tcacgacagt caagacagcc 480

tggctagatg gcaagcatgt ggtgtttggc aaagttctag agggcatgga ggtggtgcgg 540

aaggtggaga gcaccaagac agacagccgg gataaacccc tgaaggatgt gatcatcgca 600

gactgcggca agatcgaggt ggagaagccc tttgccatcg ccaaggagta g 651

<210> 47

<211> 216

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCyPB

<400> 47

Met Leu Arg Leu Ser Glu Arg Asn Met Lys Val Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

Leu Ile Ala Gly Ser Val Phe Phe Leu Leu Leu Pro Gly Pro Ser Ala

20 25 30

Ala Asp Glu Lys Lys Lys Gly Pro Lys Val Thr Val Lys Val Tyr Phe

35 40 45

Asp Leu Arg Ile Gly Asp Glu Asp Val Gly Arg Val Ile Phe Gly Leu

50 55 60

Phe Gly Lys Thr Val Pro Lys Thr Val Asp Asn Phe Val Ala Leu Ala

65 70 75 80

Thr Gly Glu Lys Gly Phe Gly Tyr Lys Asn Ser Lys Phe His Arg Val

85 90 95

Ile Lys Asp Phe Met Ile Gln Gly Gly Asp Phe Thr Arg Gly Asp Gly

100 105 110

Thr Gly Gly Lys Ser Ile Tyr Gly Glu Arg Phe Pro Asp Glu Asn Phe

115 120 125

Lys Leu Lys His Tyr Gly Pro Gly Trp Val Ser Met Ala Asn Ala Gly

130 135 140

Lys Asp Thr Asn Gly Ser Gln Phe Phe Ile Thr Thr Val Lys Thr Ala

145 150 155 160

Trp Leu Asp Gly Lys His Val Val Phe Gly Lys Val Leu Glu Gly Met

165 170 175

Glu Val Val Arg Lys Val Glu Ser Thr Lys Thr Asp Ser Arg Asp Lys

180 185 190

Pro Leu Lys Asp Val Ile Ile Ala Asp Cys Gly Lys Ile Glu Val Glu

195 200 205

Lys Pro Phe Ala Ile Ala Lys Glu

210 215

<210> 48

<211> 1818

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hNRF2

<400> 48

atgatggact tggagctgcc gccgccggga ctcccgtccc agcaggacat ggatttgatt 60

gacatacttt ggaggcaaga tatagatctt ggagtaagtc gagaagtatt tgacttcagt 120

cagcgacgga aagagtatga gctggaaaaa cagaaaaaac ttgaaaagga aagacaagaa 180

caactccaaa aggagcaaga gaaagccttt ttcgctcagt tacaactaga tgaagagaca 240

ggtgaatttc tcccaattca gccagcccag cacatccagt cagaaaccag tggatctgcc 300

aactactccc aggttgccca cattcccaaa tcagatgctt tgtactttga tgactgcatg 360

cagcttttgg cgcagacatt cccgtttgta gatgacaatg aggtttcttc ggctacgttt 420

cagtcacttg ttcctgatat tcccggtcac atcgagagcc cagtcttcat tgctactaat 480

caggctcagt cacctgaaac ttctgttgct caggtagccc ctgttgattt agacggtatg 540

caacaggaca ttgagcaagt ttgggaggag ctattatcca ttcctgagtt acagtgtctt 600

aatattgaaa atgacaagct ggttgagact accatggttc caagtccaga agccaaactg 660

acagaagttg acaattatca tttttactca tctataccct caatggaaaa agaagtaggt 720

aactgtagtc cacattttct taatgctttt gaggattcct tcagcagcat cctctccaca 780

gaagacccca accagttgac agtgaactca ttaaattcag atgccacagt caacacagat 840

tttggtgatg aattttattc tgctttcata gctgagccca gtatcagcaa cagcatgccc 900

tcacctgcta ctttaagcca ttcactctct gaacttctaa atgggcccat tgatgtttct 960

gatctatcac tttgcaaagc tttcaaccaa aaccaccctg aaagcacagc agaattcaat 1020

gattctgact ccggcatttc actaaacaca agtcccagtg tggcatcacc agaacactca 1080

gtggaatctt ccagctatgg agacacacta cttggcctca gtgattctga agtggaagag 1140

ctagatagtg cccctggaag tgtcaaacag aatggtccta aaacaccagt acattcttct 1200

ggggatatgg tacaaccctt gtcaccatct caggggcaga gcactcacgt gcatgatgcc 1260

caatgtgaga acacaccaga gaaagaattg cctgtaagtc ctggtcatcg gaaaacccca 1320

ttcacaaaag acaaacattc aagccgcttg gaggctcatc tcacaagaga tgaacttagg 1380

gcaaaagctc tccatatccc attccctgta gaaaaaatca ttaacctccc tgttgttgac 1440

ttcaacgaaa tgatgtccaa agagcagttc aatgaagctc aacttgcatt aattcgggat 1500

atacgtagga ggggtaagaa taaagtggct gctcagaatt gcagaaaaag aaaactggaa 1560

aatatagtag aactagagca agatttagat catttgaaag atgaaaaaga aaaattgctc 1620

aaagaaaaag gagaaaatga caaaagcctt cacctactga aaaaacaact cagcacctta 1680

tatctcgaag ttttcagcat gctacgtgat gaagatggaa aaccttattc tcctagtgaa 1740

tactccctgc agcaaacaag agatggcaat gttttccttg ttcccaaaag taagaagcca 1800

gatgttaaga aaaactag 1818

<210> 49

<211> 605

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hNRF2

<400> 49

Met Met Asp Leu Glu Leu Pro Pro Pro Gly Leu Pro Ser Gln Gln Asp

1 5 10 15

Met Asp Leu Ile Asp Ile Leu Trp Arg Gln Asp Ile Asp Leu Gly Val

20 25 30

Ser Arg Glu Val Phe Asp Phe Ser Gln Arg Arg Lys Glu Tyr Glu Leu

35 40 45

Glu Lys Gln Lys Lys Leu Glu Lys Glu Arg Gln Glu Gln Leu Gln Lys

50 55 60

Glu Gln Glu Lys Ala Phe Phe Ala Gln Leu Gln Leu Asp Glu Glu Thr

65 70 75 80

Gly Glu Phe Leu Pro Ile Gln Pro Ala Gln His Ile Gln Ser Glu Thr

85 90 95

Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Ser Gln Val Ala His Ile Pro Lys Ser Asp

100 105 110

Ala Leu Tyr Phe Asp Asp Cys Met Gln Leu Leu Ala Gln Thr Phe Pro

115 120 125

Phe Val Asp Asp Asn Glu Val Ser Ser Ala Thr Phe Gln Ser Leu Val

130 135 140

Pro Asp Ile Pro Gly His Ile Glu Ser Pro Val Phe Ile Ala Thr Asn

145 150 155 160

Gln Ala Gln Ser Pro Glu Thr Ser Val Ala Gln Val Ala Pro Val Asp

165 170 175

Leu Asp Gly Met Gln Gln Asp Ile Glu Gln Val Trp Glu Glu Leu Leu

180 185 190

Ser Ile Pro Glu Leu Gln Cys Leu Asn Ile Glu Asn Asp Lys Leu Val

195 200 205

Glu Thr Thr Met Val Pro Ser Pro Glu Ala Lys Leu Thr Glu Val Asp

210 215 220

Asn Tyr His Phe Tyr Ser Ser Ile Pro Ser Met Glu Lys Glu Val Gly

225 230 235 240

Asn Cys Ser Pro His Phe Leu Asn Ala Phe Glu Asp Ser Phe Ser Ser

245 250 255

Ile Leu Ser Thr Glu Asp Pro Asn Gln Leu Thr Val Asn Ser Leu Asn

260 265 270

Ser Asp Ala Thr Val Asn Thr Asp Phe Gly Asp Glu Phe Tyr Ser Ala

275 280 285

Phe Ile Ala Glu Pro Ser Ile Ser Asn Ser Met Pro Ser Pro Ala Thr

290 295 300

Leu Ser His Ser Leu Ser Glu Leu Leu Asn Gly Pro Ile Asp Val Ser

305 310 315 320

Asp Leu Ser Leu Cys Lys Ala Phe Asn Gln Asn His Pro Glu Ser Thr

325 330 335

Ala Glu Phe Asn Asp Ser Asp Ser Gly Ile Ser Leu Asn Thr Ser Pro

340 345 350

Ser Val Ala Ser Pro Glu His Ser Val Glu Ser Ser Ser Tyr Gly Asp

355 360 365

Thr Leu Leu Gly Leu Ser Asp Ser Glu Val Glu Glu Leu Asp Ser Ala

370 375 380

Pro Gly Ser Val Lys Gln Asn Gly Pro Lys Thr Pro Val His Ser Ser

385 390 395 400

Gly Asp Met Val Gln Pro Leu Ser Pro Ser Gln Gly Gln Ser Thr His

405 410 415

Val His Asp Ala Gln Cys Glu Asn Thr Pro Glu Lys Glu Leu Pro Val

420 425 430

Ser Pro Gly His Arg Lys Thr Pro Phe Thr Lys Asp Lys His Ser Ser

435 440 445

Arg Leu Glu Ala His Leu Thr Arg Asp Glu Leu Arg Ala Lys Ala Leu

450 455 460

His Ile Pro Phe Pro Val Glu Lys Ile Ile Asn Leu Pro Val Val Asp

465 470 475 480

Phe Asn Glu Met Met Ser Lys Glu Gln Phe Asn Glu Ala Gln Leu Ala

485 490 495

Leu Ile Arg Asp Ile Arg Arg Arg Gly Lys Asn Lys Val Ala Ala Gln

500 505 510

Asn Cys Arg Lys Arg Lys Leu Glu Asn Ile Val Glu Leu Glu Gln Asp

515 520 525

Leu Asp His Leu Lys Asp Glu Lys Glu Lys Leu Leu Lys Glu Lys Gly

530 535 540

Glu Asn Asp Lys Ser Leu His Leu Leu Lys Lys Gln Leu Ser Thr Leu

545 550 555 560

Tyr Leu Glu Val Phe Ser Met Leu Arg Asp Glu Asp Gly Lys Pro Tyr

565 570 575

Ser Pro Ser Glu Tyr Ser Leu Gln Gln Thr Arg Asp Gly Asn Val Phe

580 585 590

Leu Val Pro Lys Ser Lys Lys Pro Asp Val Lys Lys Asn

595 600 605

<210> 50

<211> 2754

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hHK1

<400> 50

atgatcgccg cgcagctcct ggcctattac ttcacggagc tgaaggatga ccaggtcaaa 60

aagattgaca agtatctcta tgccatgcgg ctctccgatg aaactctcat agatatcatg 120

actcgcttca ggaaggagat gaagaatggc ctctcccggg attttaatcc aacagccaca 180

gtcaagatgt tgccaacatt cgtaaggtcc attcctgatg gctctgaaaa gggagatttc 240

attgccctgg atcttggtgg gtcttccttt cgaattctgc gggtgcaagt gaatcatgag 300

aaaaaccaga atgttcacat ggagtccgag gtttatgaca ccccagagaa catcgtgcac 360

ggcagtggaa gccagctttt tgatcatgtt gctgagtgcc tgggagattt catggagaaa 420

aggaagatca aggacaagaa gttacctgtg ggattcacgt tttcttttcc ttgccaacaa 480

tccaaaatag atgaggccat cctgatcacc tggacaaagc gatttaaagc gagcggagtg 540

gaaggagcag atgtggtcaa actgcttaac aaagccatca aaaagcgagg ggactatgat 600

gccaacatcg tagctgtggt gaatgacaca gtgggcacca tgatgacctg tggctatgac 660

gaccagcact gtgaagtcgg cctgatcatc ggcactggca ccaatgcttg ctacatggag 720

gaactgaggc acattgatct ggtggaagga gacgagggga ggatgtgtat caatacagaa 780

tggggagcct ttggagacga tggatcatta gaagacatcc ggacagagtt tgacagggag 840

atagaccggg gatccctcaa ccctggaaaa cagctgtttg agaagatggt cagtggcatg 900

tacttgggag agctggttcg actgatccta gtcaagatgg ccaaggaggg cctcttattt 960

gaagggcgga tcaccccgga gctgctcacc cgagggaagt ttaacaccag tgatgtgtca 1020

gccatcgaaa agaataagga aggcctccac aatgccaaag aaatcctgac ccgcctggga 1080

gtggagccgt ccgatgatga ctgtgtctca gtccagcacg tttgcaccat tgtctcattt 1140

cgctcagcca acttggtggc tgccacactg ggcgccatct tgaaccgcct gcgtgataac 1200

aagggcacac ccaggctgcg gaccacggtt ggtgtcgacg gatctcttta caagacgcac 1260

ccacagtatt cccggcgttt ccacaagact ctaaggcgct tggtgccaga ctccgatgtg 1320

cgcttcctcc tctcggagag tggcagcggc aagggggctg ccatggtgac ggcggtggcc 1380

taccgcttgg ccgagcagca ccggcagata gaggagaccc tggctcattt ccacctcacc 1440

aaggacatgc tgctggaggt gaagaagagg atgcgggccg agatggagct ggggctgagg 1500

aagcagacgc acaacaatgc cgtggttaag atgctgccct ccttcgtccg gagaactccc 1560

gacgggaccg agaatggtga cttcttggcc ctggatcttg gaggaaccaa tttccgtgtg 1620

ctgctggtga aaatccgtag tgggaaaaag agaacggtgg aaatgcacaa caagatctac 1680

gccattccta ttgaaatcat gcagggcact ggggaagagc tgtttgatca cattgtctcc 1740

tgcatctctg acttcttgga ctacatgggg atcaaaggcc ccaggatgcc tctgggcttc 1800

acgttctcat ttccctgcca gcagacgagt ctggacgcgg gaatcttgat cacgtggaca 1860

aagggtttta aggcaacaga ctgcgtgggc cacgatgtag tcaccttact aagggatgcg 1920

ataaaaagga gagaggaatt tgacctggac gtggtggctg tggtcaacga cacagtgggc 1980

accatgatga cctgtgctta tgaggagccc acctgtgagg ttggactcat tgttgggacc 2040

ggcagcaatg cctgctacat ggaggagatg aagaacgtgg agatggtgga gggggaccag 2100

gggcagatgt gcatcaacat ggagtggggg gcctttgggg acaacgggtg tctggatgat 2160

atcaggacac actacgacag actggtggac gaatattccc taaatgctgg gaaacaaagg 2220

tatgagaaga tgatcagtgg tatgtacctg ggtgaaatcg tccgcaacat cttaatcgac 2280

ttcaccaaga agggattcct cttccgaggg cagatctctg agacgctgaa gacccggggc 2340

atctttgaga ccaagtttct ctctcagatc gagagtgacc gattagcact gctccaggtc 2400

cgggctatcc tccagcagct aggtctgaat agcacctgcg atgacagtat cctcgtcaag 2460

acagtgtgcg gggtggtgtc caggagggcc gcacagctgt gtggcgcagg catggctgcg 2520

gttgtggata agatccgcga gaacagagga ctggaccgtc tgaatgtgac tgtgggagtg 2580

gacgggacac tctacaagct tcatccacac ttctccagaa tcatgcacca gacggtgaag 2640

gaactgtcac caaaatgtaa cgtgtccttc ctcctgtctg aggatggcag cggcaagggg 2700

gccgccctca tcacggccgt gggcgtgcgg ttacgcacag aggcaagcag ctaa 2754

<210> 51

<211> 917

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hHK1

<400> 51

Met Ile Ala Ala Gln Leu Leu Ala Tyr Tyr Phe Thr Glu Leu Lys Asp

1 5 10 15

Asp Gln Val Lys Lys Ile Asp Lys Tyr Leu Tyr Ala Met Arg Leu Ser

20 25 30

Asp Glu Thr Leu Ile Asp Ile Met Thr Arg Phe Arg Lys Glu Met Lys

35 40 45

Asn Gly Leu Ser Arg Asp Phe Asn Pro Thr Ala Thr Val Lys Met Leu

50 55 60

Pro Thr Phe Val Arg Ser Ile Pro Asp Gly Ser Glu Lys Gly Asp Phe

65 70 75 80

Ile Ala Leu Asp Leu Gly Gly Ser Ser Phe Arg Ile Leu Arg Val Gln

85 90 95

Val Asn His Glu Lys Asn Gln Asn Val His Met Glu Ser Glu Val Tyr

100 105 110

Asp Thr Pro Glu Asn Ile Val His Gly Ser Gly Ser Gln Leu Phe Asp

115 120 125

His Val Ala Glu Cys Leu Gly Asp Phe Met Glu Lys Arg Lys Ile Lys

130 135 140

Asp Lys Lys Leu Pro Val Gly Phe Thr Phe Ser Phe Pro Cys Gln Gln

145 150 155 160

Ser Lys Ile Asp Glu Ala Ile Leu Ile Thr Trp Thr Lys Arg Phe Lys

165 170 175

Ala Ser Gly Val Glu Gly Ala Asp Val Val Lys Leu Leu Asn Lys Ala

180 185 190

Ile Lys Lys Arg Gly Asp Tyr Asp Ala Asn Ile Val Ala Val Val Asn

195 200 205

Asp Thr Val Gly Thr Met Met Thr Cys Gly Tyr Asp Asp Gln His Cys

210 215 220

Glu Val Gly Leu Ile Ile Gly Thr Gly Thr Asn Ala Cys Tyr Met Glu

225 230 235 240

Glu Leu Arg His Ile Asp Leu Val Glu Gly Asp Glu Gly Arg Met Cys

245 250 255

Ile Asn Thr Glu Trp Gly Ala Phe Gly Asp Asp Gly Ser Leu Glu Asp

260 265 270

Ile Arg Thr Glu Phe Asp Arg Glu Ile Asp Arg Gly Ser Leu Asn Pro

275 280 285

Gly Lys Gln Leu Phe Glu Lys Met Val Ser Gly Met Tyr Leu Gly Glu

290 295 300

Leu Val Arg Leu Ile Leu Val Lys Met Ala Lys Glu Gly Leu Leu Phe

305 310 315 320

Glu Gly Arg Ile Thr Pro Glu Leu Leu Thr Arg Gly Lys Phe Asn Thr

325 330 335

Ser Asp Val Ser Ala Ile Glu Lys Asn Lys Glu Gly Leu His Asn Ala

340 345 350

Lys Glu Ile Leu Thr Arg Leu Gly Val Glu Pro Ser Asp Asp Asp Cys

355 360 365

Val Ser Val Gln His Val Cys Thr Ile Val Ser Phe Arg Ser Ala Asn

370 375 380

Leu Val Ala Ala Thr Leu Gly Ala Ile Leu Asn Arg Leu Arg Asp Asn

385 390 395 400

Lys Gly Thr Pro Arg Leu Arg Thr Thr Val Gly Val Asp Gly Ser Leu

405 410 415

Tyr Lys Thr His Pro Gln Tyr Ser Arg Arg Phe His Lys Thr Leu Arg

420 425 430

Arg Leu Val Pro Asp Ser Asp Val Arg Phe Leu Leu Ser Glu Ser Gly

435 440 445

Ser Gly Lys Gly Ala Ala Met Val Thr Ala Val Ala Tyr Arg Leu Ala

450 455 460

Glu Gln His Arg Gln Ile Glu Glu Thr Leu Ala His Phe His Leu Thr

465 470 475 480

Lys Asp Met Leu Leu Glu Val Lys Lys Arg Met Arg Ala Glu Met Glu

485 490 495

Leu Gly Leu Arg Lys Gln Thr His Asn Asn Ala Val Val Lys Met Leu

500 505 510

Pro Ser Phe Val Arg Arg Thr Pro Asp Gly Thr Glu Asn Gly Asp Phe

515 520 525

Leu Ala Leu Asp Leu Gly Gly Thr Asn Phe Arg Val Leu Leu Val Lys

530 535 540

Ile Arg Ser Gly Lys Lys Arg Thr Val Glu Met His Asn Lys Ile Tyr

545 550 555 560

Ala Ile Pro Ile Glu Ile Met Gln Gly Thr Gly Glu Glu Leu Phe Asp

565 570 575

His Ile Val Ser Cys Ile Ser Asp Phe Leu Asp Tyr Met Gly Ile Lys

580 585 590

Gly Pro Arg Met Pro Leu Gly Phe Thr Phe Ser Phe Pro Cys Gln Gln

595 600 605

Thr Ser Leu Asp Ala Gly Ile Leu Ile Thr Trp Thr Lys Gly Phe Lys

610 615 620

Ala Thr Asp Cys Val Gly His Asp Val Val Thr Leu Leu Arg Asp Ala

625 630 635 640

Ile Lys Arg Arg Glu Glu Phe Asp Leu Asp Val Val Ala Val Val Asn

645 650 655

Asp Thr Val Gly Thr Met Met Thr Cys Ala Tyr Glu Glu Pro Thr Cys

660 665 670

Glu Val Gly Leu Ile Val Gly Thr Gly Ser Asn Ala Cys Tyr Met Glu

675 680 685

Glu Met Lys Asn Val Glu Met Val Glu Gly Asp Gln Gly Gln Met Cys

690 695 700

Ile Asn Met Glu Trp Gly Ala Phe Gly Asp Asn Gly Cys Leu Asp Asp

705 710 715 720

Ile Arg Thr His Tyr Asp Arg Leu Val Asp Glu Tyr Ser Leu Asn Ala

725 730 735

Gly Lys Gln Arg Tyr Glu Lys Met Ile Ser Gly Met Tyr Leu Gly Glu

740 745 750

Ile Val Arg Asn Ile Leu Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gly Phe Leu Phe

755 760 765

Arg Gly Gln Ile Ser Glu Thr Leu Lys Thr Arg Gly Ile Phe Glu Thr

770 775 780

Lys Phe Leu Ser Gln Ile Glu Ser Asp Arg Leu Ala Leu Leu Gln Val

785 790 795 800

Arg Ala Ile Leu Gln Gln Leu Gly Leu Asn Ser Thr Cys Asp Asp Ser

805 810 815

Ile Leu Val Lys Thr Val Cys Gly Val Val Ser Arg Arg Ala Ala Gln

820 825 830

Leu Cys Gly Ala Gly Met Ala Ala Val Val Asp Lys Ile Arg Glu Asn

835 840 845

Arg Gly Leu Asp Arg Leu Asn Val Thr Val Gly Val Asp Gly Thr Leu

850 855 860

Tyr Lys Leu His Pro His Phe Ser Arg Ile Met His Gln Thr Val Lys

865 870 875 880

Glu Leu Ser Pro Lys Cys Asn Val Ser Phe Leu Leu Ser Glu Asp Gly

885 890 895

Ser Gly Lys Gly Ala Ala Leu Ile Thr Ala Val Gly Val Arg Leu Arg

900 905 910

Thr Glu Ala Ser Ser

915

<210> 52

<211> 1578

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hPDI

<400> 52

atgagccgcc agcttctgcc tgtactgctg ctgctgctgc tcagggcttc gtgcccatgg 60

ggtcaggaac agggagcgag gagcccctcg gaggagcctc cagaggagga aatccccaag 120

gaggatggga tcttggtgct gagccgccac accctgggcc tggccctgcg ggagcaccct 180

gccctgctgg tggaattcta tgccccgtgg tgtgggcact gccaggccct ggcccccgag 240

tacagcaagg cagctgccgt gctcgcggcc gagtcaatgg tggtcacgct ggccaaggtg 300

gatgggcccg cgcagcgcga gctggctgag gagtttggtg tgacggagta ccctacgctc 360

aagttcttcc gcaatgggaa ccgcacgcac ccggaggagt acacaggacc acgggacgct 420

gagggcattg ccgagtggct gcgacggcgg gtggggccca gtgccatgcg gctggaggac 480

gaggcggccg cccaggcgct gatcggtggc cgggacctag tggtcattgg cttcttccag 540

gacctgcagg acgaggacgt ggccaccttc ttggccttgg cccaggacgc cctggacatg 600

acctttggcc tcacagaccg gccgcggctc tttcagcagt ttggcctcac caaggacact 660

gtggttctct tcaagaagtt tgatgagggg cgggcagact tccccgtgga cgaggagctt 720

ggcctggacc tgggggatct gtcgcgcttc ctggtcacac acagcatgcg cctggtcacg 780

gagttcaaca gccagacgtc tgccaagatc ttcgcggcca ggatcctcaa ccacctgctg 840

ctgtttgtca accagacgct ggctgcgcac cgggagctcc tagcgggctt tggggaggca 900

gctccccgct tccgggggca ggtgctgttc gtggtggtgg acgtggcggc cgacaatgag 960

cacgtgctgc agtactttgg actcaaggct gaggcagccc ccactctgcg cttggtcaac 1020

cttgaaacca ctaagaagta tgcgcctgtg gatgggggcc ctgtcaccgc agcgtccatc 1080

actgctttct gccatgcagt cctcaacggc caagtcaagc cctatctcct gagccaggag 1140

ataccccctg attgggatca gcggccagtt aagaccctcg tgggcaagaa ttttgagcag 1200

gtggcttttg acgaaaccaa gaatgtgttt gtcaagttct atgccccgtg gtgcacccac 1260

tgcaaggaga tggcccctgc ctgggaggca ttggctgaga agtaccaaga ccacgaggac 1320

atcatcattg ctgagctgga tgccacggcc aacgagctgg atgccttcgc tgtgcacggc 1380

ttccctactc tcaagtactt cccagcaggg ccaggtcgga aggtgattga atacaaaagc 1440

accagggacc tggagacttt ctccaagttc ctggacaacg ggggcgtgct gcccacggag 1500

gagcccccgg aggagccagc agccccgttc ccggagccac cggccaactc cactatgggg 1560

tccaaggagg aactgtag 1578

<210> 53

<211> 525

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hPDI

<400> 53

Met Ser Arg Gln Leu Leu Pro Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Ala

1 5 10 15

Ser Cys Pro Trp Gly Gln Glu Gln Gly Ala Arg Ser Pro Ser Glu Glu

20 25 30

Pro Pro Glu Glu Glu Ile Pro Lys Glu Asp Gly Ile Leu Val Leu Ser

35 40 45

Arg His Thr Leu Gly Leu Ala Leu Arg Glu His Pro Ala Leu Leu Val

50 55 60

Glu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His Cys Gln Ala Leu Ala Pro Glu

65 70 75 80

Tyr Ser Lys Ala Ala Ala Val Leu Ala Ala Glu Ser Met Val Val Thr

85 90 95

Leu Ala Lys Val Asp Gly Pro Ala Gln Arg Glu Leu Ala Glu Glu Phe

100 105 110

Gly Val Thr Glu Tyr Pro Thr Leu Lys Phe Phe Arg Asn Gly Asn Arg

115 120 125

Thr His Pro Glu Glu Tyr Thr Gly Pro Arg Asp Ala Glu Gly Ile Ala

130 135 140

Glu Trp Leu Arg Arg Arg Val Gly Pro Ser Ala Met Arg Leu Glu Asp

145 150 155 160

Glu Ala Ala Ala Gln Ala Leu Ile Gly Gly Arg Asp Leu Val Val Ile

165 170 175

Gly Phe Phe Gln Asp Leu Gln Asp Glu Asp Val Ala Thr Phe Leu Ala

180 185 190

Leu Ala Gln Asp Ala Leu Asp Met Thr Phe Gly Leu Thr Asp Arg Pro

195 200 205

Arg Leu Phe Gln Gln Phe Gly Leu Thr Lys Asp Thr Val Val Leu Phe

210 215 220

Lys Lys Phe Asp Glu Gly Arg Ala Asp Phe Pro Val Asp Glu Glu Leu

225 230 235 240

Gly Leu Asp Leu Gly Asp Leu Ser Arg Phe Leu Val Thr His Ser Met

245 250 255

Arg Leu Val Thr Glu Phe Asn Ser Gln Thr Ser Ala Lys Ile Phe Ala

260 265 270

Ala Arg Ile Leu Asn His Leu Leu Leu Phe Val Asn Gln Thr Leu Ala

275 280 285

Ala His Arg Glu Leu Leu Ala Gly Phe Gly Glu Ala Ala Pro Arg Phe

290 295 300

Arg Gly Gln Val Leu Phe Val Val Val Asp Val Ala Ala Asp Asn Glu

305 310 315 320

His Val Leu Gln Tyr Phe Gly Leu Lys Ala Glu Ala Ala Pro Thr Leu

325 330 335

Arg Leu Val Asn Leu Glu Thr Thr Lys Lys Tyr Ala Pro Val Asp Gly

340 345 350

Gly Pro Val Thr Ala Ala Ser Ile Thr Ala Phe Cys His Ala Val Leu

355 360 365

Asn Gly Gln Val Lys Pro Tyr Leu Leu Ser Gln Glu Ile Pro Pro Asp

370 375 380

Trp Asp Gln Arg Pro Val Lys Thr Leu Val Gly Lys Asn Phe Glu Gln

385 390 395 400

Val Ala Phe Asp Glu Thr Lys Asn Val Phe Val Lys Phe Tyr Ala Pro

405 410 415

Trp Cys Thr His Cys Lys Glu Met Ala Pro Ala Trp Glu Ala Leu Ala

420 425 430

Glu Lys Tyr Gln Asp His Glu Asp Ile Ile Ile Ala Glu Leu Asp Ala

435 440 445

Thr Ala Asn Glu Leu Asp Ala Phe Ala Val His Gly Phe Pro Thr Leu

450 455 460

Lys Tyr Phe Pro Ala Gly Pro Gly Arg Lys Val Ile Glu Tyr Lys Ser

465 470 475 480

Thr Arg Asp Leu Glu Thr Phe Ser Lys Phe Leu Asp Asn Gly Gly Val

485 490 495

Leu Pro Thr Glu Glu Pro Pro Glu Glu Pro Ala Ala Pro Phe Pro Glu

500 505 510

Pro Pro Ala Asn Ser Thr Met Gly Ser Lys Glu Glu Leu

515 520 525

<210> 54

<211> 492

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hPIN1

<400> 54

atggcggacg aggagaagct gccgcccggc tgggagaagc gcatgagccg cagctcaggc 60

cgagtgtact acttcaacca catcactaac gccagccagt gggagcggcc cagcggcaac 120

agcagcagtg gtggcaaaaa cgggcagggg gagcctgcca gggtccgctg ctcgcacctg 180

ctggtgaagc acagccagtc acggcggccc tcgtcctggc ggcaggagaa gatcacccgg 240

accaaggagg aggccctgga gctgatcaac ggctacatcc agaagatcaa gtcgggagag 300

gaggactttg agtctctggc ctcacagttc agcgactgca gctcagccaa ggccagggga 360

gacctgggtg ccttcagcag aggtcagatg cagaagccat ttgaagacgc ctcgtttgcg 420

ctgcggacgg gggagatgag cgggcccgtg ttcacggatt ccggcatcca catcatcctc 480

cgcactgagt ga 492

<210> 55

<211> 163

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hPIN1

<400> 55

Met Ala Asp Glu Glu Lys Leu Pro Pro Gly Trp Glu Lys Arg Met Ser

1 5 10 15

Arg Ser Ser Gly Arg Val Tyr Tyr Phe Asn His Ile Thr Asn Ala Ser

20 25 30

Gln Trp Glu Arg Pro Ser Gly Asn Ser Ser Ser Gly Gly Lys Asn Gly

35 40 45

Gln Gly Glu Pro Ala Arg Val Arg Cys Ser His Leu Leu Val Lys His

50 55 60

Ser Gln Ser Arg Arg Pro Ser Ser Trp Arg Gln Glu Lys Ile Thr Arg

65 70 75 80

Thr Lys Glu Glu Ala Leu Glu Leu Ile Asn Gly Tyr Ile Gln Lys Ile

85 90 95

Lys Ser Gly Glu Glu Asp Phe Glu Ser Leu Ala Ser Gln Phe Ser Asp

100 105 110

Cys Ser Ser Ala Lys Ala Arg Gly Asp Leu Gly Ala Phe Ser Arg Gly

115 120 125

Gln Met Gln Lys Pro Phe Glu Asp Ala Ser Phe Ala Leu Arg Thr Gly

130 135 140

Glu Met Ser Gly Pro Val Phe Thr Asp Ser Gly Ile His Ile Ile Leu

145 150 155 160

Arg Thr Glu

<210> 56

<211> 264

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSEPW1

<400> 56

atggctctcg ccgtccgagt cgtttattgt ggcgcttgag gctacaagtc caagtatctt 60

cagctcaaga agaagttaga agatgagttc cccggccgcc tggacatctg cggcgaggga 120

actccccagg ccaccgggtt ctttgaagtg atggtagccg ggaagttgat tcactctaag 180

aagaaaggcg atggctacgt ggacacagaa agcaagtttc tgaagttggt ggccgccatc 240

aaagccgcct tggctcaggg ctaa 264

<210> 57

<211> 87

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSEPW1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Особая аминокислота селеноцистеин (U)

<400> 57

Met Ala Leu Ala Val Arg Val Val Tyr Cys Gly Ala Xaa Gly Tyr Lys

1 5 10 15

Ser Lys Tyr Leu Gln Leu Lys Lys Lys Leu Glu Asp Glu Phe Pro Gly

20 25 30

Arg Leu Asp Ile Cys Gly Glu Gly Thr Pro Gln Ala Thr Gly Phe Phe

35 40 45

Glu Val Met Val Ala Gly Lys Leu Ile His Ser Lys Lys Lys Gly Asp

50 55 60

Gly Tyr Val Asp Thr Glu Ser Lys Phe Leu Lys Leu Val Ala Ala Ile

65 70 75 80

Lys Ala Ala Leu Ala Gln Gly

85

<210> 58

<211> 1254

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCALR

<400> 58

atgctgctat ccgtgccgct gctgctcggc ctcctcggcc tggccgtcgc cgagcctgcc 60

gtctacttca aggagcagtt tctggacgga gacgggtgga cttcccgctg gatcgaatcc 120

aaacacaagt cagattttgg caaattcgtt ctcagttccg gcaagttcta cggtgacgag 180

gagaaagata aaggtttgca gacaagccag gatgcacgct tttatgctct gtcggccagt 240

ttcgagcctt tcagcaacaa aggccagacg ctggtggtgc agttcacggt gaaacatgag 300

cagaacatcg actgtggggg cggctatgtg aagctgtttc ctaatagttt ggaccagaca 360

gacatgcacg gagactcaga atacaacatc atgtttggtc ccgacatctg tggccctggc 420

accaagaagg ttcatgtcat cttcaactac aagggcaaga acgtgctgat caacaaggac 480

atccgttgca aggatgatga gtttacacac ctgtacacac tgattgtgcg gccagacaac 540

acctatgagg tgaagattga caacagccag gtggagtccg gctccttgga agacgattgg 600

gacttcctgc cacccaagaa gataaaggat cctgatgctt caaaaccgga agactgggat 660

gagcgggcca agatcgatga tcccacagac tccaagcctg aggactggga caagcccgag 720

catatccctg accctgatgc taagaagccc gaggactggg atgaagagat ggacggagag 780

tgggaacccc cagtgattca gaaccctgag tacaagggtg agtggaagcc ccggcagatc 840

gacaacccag attacaaggg cacttggatc cacccagaaa ttgacaaccc cgagtattct 900

cccgatccca gtatctatgc ctatgataac tttggcgtgc tgggcctgga cctctggcag 960

gtcaagtctg gcaccatctt tgacaacttc ctcatcacca acgatgaggc atacgctgag 1020

gagtttggca acgagacgtg gggcgtaaca aaggcagcag agaaacaaat gaaggacaaa 1080

caggacgagg agcagaggct taaggaggag gaagaagaca agaaacgcaa agaggaggag 1140

gaggcagagg acaaggagga tgatgaggac aaagatgagg atgaggagga tgaggaggac 1200

aaggaggaag atgaggagga agatgtcccc ggccaggcca aggacgagct gtag 1254

<210> 59

<211> 417

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCALR

<400> 59

Met Leu Leu Ser Val Pro Leu Leu Leu Gly Leu Leu Gly Leu Ala Val

1 5 10 15

Ala Glu Pro Ala Val Tyr Phe Lys Glu Gln Phe Leu Asp Gly Asp Gly

20 25 30

Trp Thr Ser Arg Trp Ile Glu Ser Lys His Lys Ser Asp Phe Gly Lys

35 40 45

Phe Val Leu Ser Ser Gly Lys Phe Tyr Gly Asp Glu Glu Lys Asp Lys

50 55 60

Gly Leu Gln Thr Ser Gln Asp Ala Arg Phe Tyr Ala Leu Ser Ala Ser

65 70 75 80

Phe Glu Pro Phe Ser Asn Lys Gly Gln Thr Leu Val Val Gln Phe Thr

85 90 95

Val Lys His Glu Gln Asn Ile Asp Cys Gly Gly Gly Tyr Val Lys Leu

100 105 110

Phe Pro Asn Ser Leu Asp Gln Thr Asp Met His Gly Asp Ser Glu Tyr

115 120 125

Asn Ile Met Phe Gly Pro Asp Ile Cys Gly Pro Gly Thr Lys Lys Val

130 135 140

His Val Ile Phe Asn Tyr Lys Gly Lys Asn Val Leu Ile Asn Lys Asp

145 150 155 160

Ile Arg Cys Lys Asp Asp Glu Phe Thr His Leu Tyr Thr Leu Ile Val

165 170 175

Arg Pro Asp Asn Thr Tyr Glu Val Lys Ile Asp Asn Ser Gln Val Glu

180 185 190

Ser Gly Ser Leu Glu Asp Asp Trp Asp Phe Leu Pro Pro Lys Lys Ile

195 200 205

Lys Asp Pro Asp Ala Ser Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Arg Ala Lys

210 215 220

Ile Asp Asp Pro Thr Asp Ser Lys Pro Glu Asp Trp Asp Lys Pro Glu

225 230 235 240

His Ile Pro Asp Pro Asp Ala Lys Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Glu

245 250 255

Met Asp Gly Glu Trp Glu Pro Pro Val Ile Gln Asn Pro Glu Tyr Lys

260 265 270

Gly Glu Trp Lys Pro Arg Gln Ile Asp Asn Pro Asp Tyr Lys Gly Thr

275 280 285

Trp Ile His Pro Glu Ile Asp Asn Pro Glu Tyr Ser Pro Asp Pro Ser

290 295 300

Ile Tyr Ala Tyr Asp Asn Phe Gly Val Leu Gly Leu Asp Leu Trp Gln

305 310 315 320

Val Lys Ser Gly Thr Ile Phe Asp Asn Phe Leu Ile Thr Asn Asp Glu

325 330 335

Ala Tyr Ala Glu Glu Phe Gly Asn Glu Thr Trp Gly Val Thr Lys Ala

340 345 350

Ala Glu Lys Gln Met Lys Asp Lys Gln Asp Glu Glu Gln Arg Leu Lys

355 360 365

Glu Glu Glu Glu Asp Lys Lys Arg Lys Glu Glu Glu Glu Ala Glu Asp

370 375 380

Lys Glu Asp Asp Glu Asp Lys Asp Glu Asp Glu Glu Asp Glu Glu Asp

385 390 395 400

Lys Glu Glu Asp Glu Glu Glu Asp Val Pro Gly Gln Ala Lys Asp Glu

405 410 415

Leu

<210> 60

<211> 656

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> DroBiP

<400> 60

Met Lys Phe Pro Met Val Ala Ala Ala Leu Leu Leu Leu Cys Ala Val

1 5 10 15

Arg Ala Glu Glu Lys Lys Glu Lys Asp Lys Glu Leu Gly Thr Val Ile

20 25 30

Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser Cys Val Gly Val Tyr Lys Asn

35 40 45

Gly Arg Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp Gln Gly Asn Arg Ile Thr Pro

50 55 60

Ser Tyr Val Ala Phe Thr Ala Asp Gly Glu Arg Leu Ile Gly Asp Ala

65 70 75 80

Ala Lys Asn Gln Leu Thr Thr Asn Pro Glu Asn Thr Val Phe Asp Ala

85 90 95

Lys Arg Leu Ile Gly Arg Glu Trp Ser Asp Thr Asn Val Gln His Asp

100 105 110

Ile Lys Phe Phe Pro Phe Lys Val Val Glu Lys Asn Ser Lys Pro His

115 120 125

Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Gly Ala Lys Val Phe Ala Pro Glu Glu

130 135 140

Ile Ser Ala Met Val Leu Gly Lys Met Lys Glu Thr Ala Glu Ala Tyr

145 150 155 160

Leu Gly Lys Lys Val Thr His Ala Val Val Thr Val Pro Ala Tyr Phe

165 170 175

Asn Asp Ala Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp Ala Gly Val Ile Ala Gly

180 185 190

Leu Gln Val Met Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala Ile Ala

195 200 205

Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Glu Gly Glu Lys Asn Val Leu Val Phe Asp

210 215 220

Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Leu Leu Thr Ile Asp Asn Gly

225 230 235 240

Val Phe Glu Val Val Ala Thr Asn Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu

245 250 255

Asp Phe Asp Gln Arg Val Met Asp His Phe Ile Lys Leu Tyr Lys Lys

260 265 270

Lys Lys Gly Lys Asp Ile Arg Lys Asp Asn Arg Ala Val Gln Lys Leu

275 280 285

Arg Arg Glu Val Glu Lys Ala Lys Arg Ala Leu Ser Gly Ser His Gln

290 295 300

Val Arg Ile Glu Ile Glu Ser Phe Phe Glu Gly Asp Asp Phe Ser Glu

305 310 315 320

Thr Leu Thr Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Asn Leu Asp Leu Phe Arg

325 330 335

Ser Thr Leu Lys Pro Val Gln Lys Val Leu Glu Asp Ala Asp Met Asn

340 345 350

Lys Lys Asp Val His Glu Ile Val Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile

355 360 365

Pro Lys Val Gln Gln Leu Val Lys Asp Phe Phe Gly Gly Lys Glu Pro

370 375 380

Ser Arg Gly Ile Asn Pro Asp Glu Ala Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val

385 390 395 400

Gln Ala Gly Val Leu Ser Gly Glu Gln Asp Thr Asp Ala Ile Val Leu

405 410 415

Leu Asp Val Asn Pro Leu Thr Met Gly Ile Glu Thr Val Gly Gly Val

420 425 430

Met Thr Lys Leu Ile Pro Arg Asn Thr Val Ile Pro Thr Lys Lys Ser

435 440 445

Gln Val Phe Ser Thr Ala Ser Asp Asn Gln His Thr Val Thr Ile Gln

450 455 460

Val Tyr Glu Gly Glu Arg Pro Met Thr Lys Asp Asn His Leu Leu Gly

465 470 475 480

Lys Phe Asp Leu Thr Gly Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Ile Pro Gln

485 490 495

Ile Glu Val Ser Phe Glu Ile Asp Ala Asn Gly Ile Leu Gln Val Ser

500 505 510

Ala Glu Asp Lys Gly Thr Gly Asn Lys Glu Lys Ile Val Ile Thr Asn

515 520 525

Asp Gln Asn Arg Leu Thr Pro Glu Asp Ile Asp Arg Met Ile Arg Asp

530 535 540

Ala Glu Lys Phe Ala Asp Glu Asp Lys Lys Leu Lys Glu Arg Val Glu

545 550 555 560

Ser Arg Asn Glu Leu Glu Ser Tyr Ala Tyr Ser Leu Lys Asn Gln Ile

565 570 575

Gly Asp Lys Asp Lys Leu Gly Ala Lys Leu Ser Asp Asp Glu Lys Asn

580 585 590

Lys Leu Glu Ser Ala Ile Asp Glu Ser Ile Lys Trp Leu Glu Gln Asn

595 600 605

Pro Asp Ala Asp Pro Glu Glu Tyr Lys Lys Gln Lys Lys Asp Leu Glu

610 615 620

Ala Ile Val Gln Pro Val Ile Ala Lys Leu Tyr Gln Gly Ala Gly Gly

625 630 635 640

Ala Pro Pro Pro Glu Gly Gly Asp Asp Ala Asp Leu Lys Asp Glu Leu

645 650 655

<210> 61

<211> 1371

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hDDOST

<400> 61

atggggtact tccggtgtgc aggtgctggg tccttcggca ggaggaggaa gatggagccc 60

agcaccgcgg cccgggcttg ggccctcttt tggttgctgc tgcccttgct tggcgcggtt 120

tgcgccagcg gaccccgcac cttagtgctg ctggacaacc tcaacgtgcg ggagactcat 180

tcgcttttct tccggagcct gaaggaccgg ggctttgagc tcacattcaa gaccgctgat 240

gaccccagcc tgtctctcat aaagtatggg gaattcctct atgacaatct catcattttc 300

tccccttcgg tagaagattt tggaggcaac atcaacgtgg agaccatcag tgcctttatt 360

gacggcggag gcagtgtgct ggtagctgcc agctccgaca ttggtgaccc tcttcgagag 420

ctgggcagtg agtgcgggat tgagtttgac gaggagaaaa cggctgtcat tgaccatcac 480

aactatgaca tctcagacct tggccagcat acgctcatcg tggctgacac tgagaacctg 540

ctgaaggccc caaccatcgt tgggaaatca tctctaaatc ccatcctctt tcgaggtgtt 600

gggatggtgg ccgatcctga taaccctttg gtgctggaca tcctgacggg ctcttccacc 660

tcttactcct tcttcccgga caagcctatc acccagtatc cacatgcggt ggggaagaac 720

accctcctca ttgctgggct ccaggccagg aacaatgccc gcgtcatctt cagcggctcc 780

ctcgacttct tcagcgactc cttcttcaac tcagcagtgc agaaggcggc gcccggctcc 840

cagaggtatt cccagacagg caactatgaa ctagctgtgg ccctctcccg ctgggtgttc 900

aaggaggagg gtgtcctccg tgtggggcct gtgtcccatc atcgggtggg cgagacagcc 960

ccacccaatg cctacactgt cactgaccta gtggagtata gcatcgtgat ccagcagctc 1020

tcaaatggca aatgggtccc ctttgatggc gatgacattc agctggagtt tgtccgcatt 1080

gatccttttg tgaggacctt cctgaagaag aaaggtggca aatacagtgt tcagttcaag 1140

ttgcccgacg tgtatggtgt attccagttt aaagtggatt acaaccggct aggctacaca 1200

cacctgtact cttccactca ggtatccgtg cggccactcc agcacacgca gtatgagcgc 1260

ttcatcccct cggcctaccc ctactacgcc agcgccttct ccatgatgct ggggctcttc 1320

atcttcagca tcgtcttctt gcacatgaag gagaaggaga agtccgactg a 1371

<210> 62

<211> 456

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hDDOST

<400> 62

Met Gly Tyr Phe Arg Cys Ala Gly Ala Gly Ser Phe Gly Arg Arg Arg

1 5 10 15

Lys Met Glu Pro Ser Thr Ala Ala Arg Ala Trp Ala Leu Phe Trp Leu

20 25 30

Leu Leu Pro Leu Leu Gly Ala Val Cys Ala Ser Gly Pro Arg Thr Leu

35 40 45

Val Leu Leu Asp Asn Leu Asn Val Arg Glu Thr His Ser Leu Phe Phe

50 55 60

Arg Ser Leu Lys Asp Arg Gly Phe Glu Leu Thr Phe Lys Thr Ala Asp

65 70 75 80

Asp Pro Ser Leu Ser Leu Ile Lys Tyr Gly Glu Phe Leu Tyr Asp Asn

85 90 95

Leu Ile Ile Phe Ser Pro Ser Val Glu Asp Phe Gly Gly Asn Ile Asn

100 105 110

Val Glu Thr Ile Ser Ala Phe Ile Asp Gly Gly Gly Ser Val Leu Val

115 120 125

Ala Ala Ser Ser Asp Ile Gly Asp Pro Leu Arg Glu Leu Gly Ser Glu

130 135 140

Cys Gly Ile Glu Phe Asp Glu Glu Lys Thr Ala Val Ile Asp His His

145 150 155 160

Asn Tyr Asp Ile Ser Asp Leu Gly Gln His Thr Leu Ile Val Ala Asp

165 170 175

Thr Glu Asn Leu Leu Lys Ala Pro Thr Ile Val Gly Lys Ser Ser Leu

180 185 190

Asn Pro Ile Leu Phe Arg Gly Val Gly Met Val Ala Asp Pro Asp Asn

195 200 205

Pro Leu Val Leu Asp Ile Leu Thr Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Ser Phe

210 215 220

Phe Pro Asp Lys Pro Ile Thr Gln Tyr Pro His Ala Val Gly Lys Asn

225 230 235 240

Thr Leu Leu Ile Ala Gly Leu Gln Ala Arg Asn Asn Ala Arg Val Ile

245 250 255

Phe Ser Gly Ser Leu Asp Phe Phe Ser Asp Ser Phe Phe Asn Ser Ala

260 265 270

Val Gln Lys Ala Ala Pro Gly Ser Gln Arg Tyr Ser Gln Thr Gly Asn

275 280 285

Tyr Glu Leu Ala Val Ala Leu Ser Arg Trp Val Phe Lys Glu Glu Gly

290 295 300

Val Leu Arg Val Gly Pro Val Ser His His Arg Val Gly Glu Thr Ala

305 310 315 320

Pro Pro Asn Ala Tyr Thr Val Thr Asp Leu Val Glu Tyr Ser Ile Val

325 330 335

Ile Gln Gln Leu Ser Asn Gly Lys Trp Val Pro Phe Asp Gly Asp Asp

340 345 350

Ile Gln Leu Glu Phe Val Arg Ile Asp Pro Phe Val Arg Thr Phe Leu

355 360 365

Lys Lys Lys Gly Gly Lys Tyr Ser Val Gln Phe Lys Leu Pro Asp Val

370 375 380

Tyr Gly Val Phe Gln Phe Lys Val Asp Tyr Asn Arg Leu Gly Tyr Thr

385 390 395 400

His Leu Tyr Ser Ser Thr Gln Val Ser Val Arg Pro Leu Gln His Thr

405 410 415

Gln Tyr Glu Arg Phe Ile Pro Ser Ala Tyr Pro Tyr Tyr Ala Ser Ala

420 425 430

Phe Ser Met Met Leu Gly Leu Phe Ile Phe Ser Ile Val Phe Leu His

435 440 445

Met Lys Glu Lys Glu Lys Ser Asp

450 455

<210> 63

<211> 1023

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hHSP40

<400> 63

atgggtaaag actactacca gacgttgggc ctggcccgcg gcgcgtcgga cgaggagatc 60

aagcgggcct accgccgcca ggcgctgcgc taccacccgg acaagaacaa ggagcccggc 120

gccgaggaga agttcaagga gatcgctgag gcctacgacg tgctcagcga cccgcgcaag 180

cgcgagatct tcgaccgcta cggggaggaa ggcctaaagg ggagtggccc cagtggcggt 240

agcggcggtg gtgccaatgg tacctctttc agctacacat tccatggaga ccctcatgcc 300

atgtttgctg agttcttcgg tggcagaaat ccctttgaca ccttttttgg gcagcggaac 360

ggggaggaag gcatggacat tgatgaccca ttctctggct tccctatggg catgggtggc 420

ttcaccaacg tgaactttgg ccgctcccgc tctgcccaag agcccgcccg aaagaagcaa 480

gatcccccag tcacccacga ccttcgagtc tcccttgaag agatctacag cggctgtacc 540

aagaagatga aaatctccca caagcggcta aaccccgacg gaaagagcat tcgaaacgaa 600

gacaaaatat tgaccatcga agtgaagaag gggtggaaag aaggaaccaa aatcactttc 660

cccaaggaag gagaccagac ctccaacaac attccagctg atatcgtctt tgttttaaag 720

gacaagcccc acaatatctt taagagagat ggctctgatg tcatttatcc tgccaggatc 780

agcctccggg aggctctgtg tggctgcaca gtgaacgtcc ccactctgga cggcaggacg 840

atacccgtcg tattcaaaga tgttatcagg cctggcatgc ggcgaaaagt tcctggagaa 900

ggcctccccc tccccaaaac acccgagaaa cgtggggacc tcattattga gtttgaagtg 960

atcttccccg aaaggattcc ccagacatca agaaccgtac ttgagcaggt tcttccaata 1020

tag 1023

<210> 64

<211> 340

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hHSP40

<400> 64

Met Gly Lys Asp Tyr Tyr Gln Thr Leu Gly Leu Ala Arg Gly Ala Ser

1 5 10 15

Asp Glu Glu Ile Lys Arg Ala Tyr Arg Arg Gln Ala Leu Arg Tyr His

20 25 30

Pro Asp Lys Asn Lys Glu Pro Gly Ala Glu Glu Lys Phe Lys Glu Ile

35 40 45

Ala Glu Ala Tyr Asp Val Leu Ser Asp Pro Arg Lys Arg Glu Ile Phe

50 55 60

Asp Arg Tyr Gly Glu Glu Gly Leu Lys Gly Ser Gly Pro Ser Gly Gly

65 70 75 80

Ser Gly Gly Gly Ala Asn Gly Thr Ser Phe Ser Tyr Thr Phe His Gly

85 90 95

Asp Pro His Ala Met Phe Ala Glu Phe Phe Gly Gly Arg Asn Pro Phe

100 105 110

Asp Thr Phe Phe Gly Gln Arg Asn Gly Glu Glu Gly Met Asp Ile Asp

115 120 125

Asp Pro Phe Ser Gly Phe Pro Met Gly Met Gly Gly Phe Thr Asn Val

130 135 140

Asn Phe Gly Arg Ser Arg Ser Ala Gln Glu Pro Ala Arg Lys Lys Gln

145 150 155 160

Asp Pro Pro Val Thr His Asp Leu Arg Val Ser Leu Glu Glu Ile Tyr

165 170 175

Ser Gly Cys Thr Lys Lys Met Lys Ile Ser His Lys Arg Leu Asn Pro

180 185 190

Asp Gly Lys Ser Ile Arg Asn Glu Asp Lys Ile Leu Thr Ile Glu Val

195 200 205

Lys Lys Gly Trp Lys Glu Gly Thr Lys Ile Thr Phe Pro Lys Glu Gly

210 215 220

Asp Gln Thr Ser Asn Asn Ile Pro Ala Asp Ile Val Phe Val Leu Lys

225 230 235 240

Asp Lys Pro His Asn Ile Phe Lys Arg Asp Gly Ser Asp Val Ile Tyr

245 250 255

Pro Ala Arg Ile Ser Leu Arg Glu Ala Leu Cys Gly Cys Thr Val Asn

260 265 270

Val Pro Thr Leu Asp Gly Arg Thr Ile Pro Val Val Phe Lys Asp Val

275 280 285

Ile Arg Pro Gly Met Arg Arg Lys Val Pro Gly Glu Gly Leu Pro Leu

290 295 300

Pro Lys Thr Pro Glu Lys Arg Gly Asp Leu Ile Ile Glu Phe Glu Val

305 310 315 320

Ile Phe Pro Glu Arg Ile Pro Gln Thr Ser Arg Thr Val Leu Glu Gln

325 330 335

Val Leu Pro Ile

340

<210> 65

<211> 1662

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hATP5A1

<400> 65

atgctgtccg tgcgcgttgc tgcggccgtg gtccgcgccc ttcctcggcg ggccggactg 60

gtctccagaa atgctttggg ttcatctttc attgctgcaa ggaacttcca tgcctctaac 120

actcatcttc aaaagactgg gactgctgag atgtcctcta ttcttgaaga gcgtattctt 180

ggagctgata cctctgttga tcttgaagaa actgggcgtg tcttaagtat tggtgatggt 240

attgcccgcg tacatgggct gaggaatgtt caagcagaag aaatggtaga gttttcttca 300

ggcttaaagg gtatgtcctt gaacttggaa cctgacaatg ttggtgttgt cgtgtttgga 360

aatgataaac taattaagga aggagatata gtgaagagga caggagccat tgtggacgtt 420

ccagttggtg aggagctgtt gggtcgtgta gttgatgccc ttggtaatgc tattgatgga 480

aagggtccaa ttggttccaa gacgcgtagg cgagttggtc tgaaagcccc cggtatcatt 540

cctcgaattt cagtgcggga accaatgcag actggcatta aggctgtgga tagcttggtg 600

ccaattggtc gtggtcagcg tgaactgatt attggtgacc gacagactgg gaaaacctca 660

attgctattg acacaatcat taaccagaaa cgtttcaatg atggatctga tgaaaagaag 720

aagctgtact gtatttatgt tgctattggt caaaagagat ccactgttgc ccagttggtg 780

aagagactta cagatgcaga tgccatgaag tacaccattg tggtgtcggc tacggcctcg 840

gatgctgccc cacttcagta cctggctcct tactctggct gttccatggg agagtatttt 900

agagacaatg gcaaacatgc tttgatcatc tatgacgact tatccaaaca ggctgttgct 960

taccgtcaga tgtctctgtt gctccgccga ccccctggtc gtgaggccta tcctggtgat 1020

gtgttctacc tacactcccg gttgctggag agagcagcca aaatgaacga tgcttttggt 1080

ggtggctcct tgactgcttt gccagtcata gaaacacagg ctggtgatgt gtctgcttac 1140

attccaacaa atgtcatttc catcactgac ggacagatct tcttggaaac agaattgttc 1200

tacaaaggta tccgccctgc aattaacgtt ggtctgtctg tatctcgtgt cggatccgct 1260

gcccaaacca gggctatgaa gcaggtagca ggtaccatga agctggaatt ggctcagtat 1320

cgtgaggttg ctgcttttgc ccagttcggt tctgacctcg atgctgccac tcaacaactt 1380

ttgagtcgtg gcgtgcgtct aactgagttg ctgaagcaag gacagtattc tcccatggct 1440

attgaagaac aagtggctgt tatctatgcg ggtgtaaggg gatatcttga taaactggag 1500

cccagcaaga ttacaaagtt tgagaatgct ttcttgtctc atgtcgtcag ccagcaccaa 1560

gccttgttgg gcactatcag ggctgatgga aagatctcag aacaatcaga tgcaaagctg 1620

aaagagattg taacaaattt cttggctgga tttgaagctt aa 1662

<210> 66

<211> 553

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hATP5A1

<400> 66

Met Leu Ser Val Arg Val Ala Ala Ala Val Val Arg Ala Leu Pro Arg

1 5 10 15

Arg Ala Gly Leu Val Ser Arg Asn Ala Leu Gly Ser Ser Phe Ile Ala

20 25 30

Ala Arg Asn Phe His Ala Ser Asn Thr His Leu Gln Lys Thr Gly Thr

35 40 45

Ala Glu Met Ser Ser Ile Leu Glu Glu Arg Ile Leu Gly Ala Asp Thr

50 55 60

Ser Val Asp Leu Glu Glu Thr Gly Arg Val Leu Ser Ile Gly Asp Gly

65 70 75 80

Ile Ala Arg Val His Gly Leu Arg Asn Val Gln Ala Glu Glu Met Val

85 90 95

Glu Phe Ser Ser Gly Leu Lys Gly Met Ser Leu Asn Leu Glu Pro Asp

100 105 110

Asn Val Gly Val Val Val Phe Gly Asn Asp Lys Leu Ile Lys Glu Gly

115 120 125

Asp Ile Val Lys Arg Thr Gly Ala Ile Val Asp Val Pro Val Gly Glu

130 135 140

Glu Leu Leu Gly Arg Val Val Asp Ala Leu Gly Asn Ala Ile Asp Gly

145 150 155 160

Lys Gly Pro Ile Gly Ser Lys Thr Arg Arg Arg Val Gly Leu Lys Ala

165 170 175

Pro Gly Ile Ile Pro Arg Ile Ser Val Arg Glu Pro Met Gln Thr Gly

180 185 190

Ile Lys Ala Val Asp Ser Leu Val Pro Ile Gly Arg Gly Gln Arg Glu

195 200 205

Leu Ile Ile Gly Asp Arg Gln Thr Gly Lys Thr Ser Ile Ala Ile Asp

210 215 220

Thr Ile Ile Asn Gln Lys Arg Phe Asn Asp Gly Ser Asp Glu Lys Lys

225 230 235 240

Lys Leu Tyr Cys Ile Tyr Val Ala Ile Gly Gln Lys Arg Ser Thr Val

245 250 255

Ala Gln Leu Val Lys Arg Leu Thr Asp Ala Asp Ala Met Lys Tyr Thr

260 265 270

Ile Val Val Ser Ala Thr Ala Ser Asp Ala Ala Pro Leu Gln Tyr Leu

275 280 285

Ala Pro Tyr Ser Gly Cys Ser Met Gly Glu Tyr Phe Arg Asp Asn Gly

290 295 300

Lys His Ala Leu Ile Ile Tyr Asp Asp Leu Ser Lys Gln Ala Val Ala

305 310 315 320

Tyr Arg Gln Met Ser Leu Leu Leu Arg Arg Pro Pro Gly Arg Glu Ala

325 330 335

Tyr Pro Gly Asp Val Phe Tyr Leu His Ser Arg Leu Leu Glu Arg Ala

340 345 350

Ala Lys Met Asn Asp Ala Phe Gly Gly Gly Ser Leu Thr Ala Leu Pro

355 360 365

Val Ile Glu Thr Gln Ala Gly Asp Val Ser Ala Tyr Ile Pro Thr Asn

370 375 380

Val Ile Ser Ile Thr Asp Gly Gln Ile Phe Leu Glu Thr Glu Leu Phe

385 390 395 400

Tyr Lys Gly Ile Arg Pro Ala Ile Asn Val Gly Leu Ser Val Ser Arg

405 410 415

Val Gly Ser Ala Ala Gln Thr Arg Ala Met Lys Gln Val Ala Gly Thr

420 425 430

Met Lys Leu Glu Leu Ala Gln Tyr Arg Glu Val Ala Ala Phe Ala Gln

435 440 445

Phe Gly Ser Asp Leu Asp Ala Ala Thr Gln Gln Leu Leu Ser Arg Gly

450 455 460

Val Arg Leu Thr Glu Leu Leu Lys Gln Gly Gln Tyr Ser Pro Met Ala

465 470 475 480

Ile Glu Glu Gln Val Ala Val Ile Tyr Ala Gly Val Arg Gly Tyr Leu

485 490 495

Asp Lys Leu Glu Pro Ser Lys Ile Thr Lys Phe Glu Asn Ala Phe Leu

500 505 510

Ser His Val Val Ser Gln His Gln Ala Leu Leu Gly Thr Ile Arg Ala

515 520 525

Asp Gly Lys Ile Ser Glu Gln Ser Asp Ala Lys Leu Lys Glu Ile Val

530 535 540

Thr Asn Phe Leu Ala Gly Phe Glu Ala

545 550

<210> 67

<211> 3129

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hSERCA2

<400> 67

atggagaacg cgcacaccaa gacggtggag gaggtgctgg gccacttcgg cgtcaacgag 60

agtacggggc tgagcctgga acaggtcaag aagcttaagg agagatgggg ctccaacgag 120

ttaccggctg aagaaggaaa aaccttgctg gaacttgtga ttgagcagtt tgaagacttg 180

ctagttagga ttttattact ggcagcatgt atatcttttg ttttggcttg gtttgaagaa 240

ggtgaagaaa caattacagc ctttgtagaa ccttttgtaa ttttactcat attagtagcc 300

aatgcaattg tgggtgtatg gcaggaaaga aatgctgaaa atgccatcga agcccttaag 360

gaatatgagc ctgaaatggg caaagtgtat cgacaggaca gaaagagtgt gcagcggatt 420

aaagctaaag acatagttcc tggtgatatt gtagaaattg ctgttggtga caaagttcct 480

gctgatataa ggttaacttc catcaaatct accacactaa gagttgacca gtcaattctc 540

acaggtgaat ctgtctctgt catcaagcac actgatcccg tccctgaccc acgagctgtc 600

aaccaagata aaaagaacat gctgttttct ggtacaaaca ttgctgctgg gaaagctatg 660

ggagtggtgg tagcaactgg agttaacacc gaaattggca agatccggga tgaaatggtg 720

gcaacagaac aggagagaac accccttcag caaaaactag atgaatttgg ggaacagctt 780

tccaaagtca tctcccttat ttgcattgca gtctggatca taaatattgg gcacttcaat 840

gacccggttc atggagggtc ctggatcaga ggtgctattt actactttaa aattgcagtg 900

gccctggctg tagcagccat tcctgaaggt ctgcctgcag tcatcaccac ctgcctggct 960

cttggaactc gcagaatggc aaagaaaaat gccattgttc gaagcctccc gtctgtggaa 1020

acccttggtt gtacttctgt tatctgctca gacaagactg gtacacttac aacaaaccag 1080

atgtcagtct gcaggatgtt cattctggac agagtggaag gtgatacttg ttcccttaat 1140

gagtttacca taactggatc aacttatgca cctattggag aagtgcataa agatgataaa 1200

ccagtgaatt gtcaccagta tgatggtctg gtagaattag caacaatttg tgctctttgt 1260

aatgactctg ctttggatta caatgaggca aagggtgtgt atgaaaaagt tggagaagct 1320

acagagactg ctctcacttg cctagtagag aagatgaatg tatttgatac cgaattgaag 1380

ggtctttcta aaatagaacg tgcaaatgcc tgcaactcag tcattaaaca gctgatgaaa 1440

aaggaattca ctctagagtt ttcacgtgac agaaagtcaa tgtcggttta ctgtacacca 1500

aataaaccaa gcaggacatc aatgagcaag atgtttgtga agggtgctcc tgaaggtgtc 1560

attgacaggt gcacccacat tcgagttgga agtactaagg ttcctatgac ctctggagtc 1620

aaacagaaga tcatgtctgt cattcgagag tggggtagtg gcagcgacac actgcgatgc 1680

ctggccctgg ccactcatga caacccactg agaagagaag aaatgcacct tgaggactct 1740

gccaacttta ttaaatatga gaccaatctg accttcgttg gctgcgtggg catgctggat 1800

cctccgagaa tcgaggtggc ctcctccgtg aagctgtgcc ggcaagcagg catccgggtc 1860

atcatgatca ctggggacaa caagggcact gctgtggcca tctgtcgccg catcggcatc 1920

ttcgggcagg atgaggacgt gacgtcaaaa gctttcacag gccgggagtt tgatgaactc 1980

aacccctccg cccagcgaga cgcctgcctg aacgcccgct gttttgctcg agttgaaccc 2040

tcccacaagt ctaaaatcgt agaatttctt cagtcttttg atgagattac agctatgact 2100

ggcgatggcg tgaacgatgc tcctgctctg aagaaagccg agattggcat tgctatgggc 2160

tctggcactg cggtggctaa aaccgcctct gagatggtcc tggcggatga caacttctcc 2220

accattgtgg ctgccgttga ggaggggcgg gcaatctaca acaacatgaa acagttcatc 2280

cgctacctca tctcgtccaa cgtcggggaa gttgtctgta ttttcctgac agcagccctt 2340

ggatttcccg aggctttgat tcctgttcag ctgctctggg tcaatctggt gacagatggc 2400

ctgcctgcca ctgcactggg gttcaaccct cctgatctgg acatcatgaa taaacctccc 2460

cggaacccaa aggaaccatt gatcagcggg tggctctttt tccgttactt ggctattggc 2520

tgttacgtcg gcgctgctac cgtgggtgct gctgcatggt ggttcattgc tgctgacggt 2580

ggtccaagag tgtccttcta ccagctgagt catttcctac agtgtaaaga ggacaacccg 2640

gactttgaag gcgtggattg tgcaatcttt gaatccccat acccgatgac aatggcgctc 2700

tctgttctag taactataga aatgtgtaac gccctcaaca gcttgtccga aaaccagtcc 2760

ttgctgagga tgcccccctg ggagaacatc tggctcgtgg gctccatctg cctgtccatg 2820

tcactccact tcctgatcct ctatgtcgaa cccttgccac tcatcttcca gatcacaccg 2880

ctgaacgtga cccagtggct gatggtgctg aaaatctcct tgcccgtgat tctcatggat 2940

gagacgctca agtttgtggc ccgcaactac ctggaacctg gtaaagagtg tgtgcagcct 3000

gccaccaaat cctgctcgtt ctcggcatgc accgatggga tttcctggcc gtttgtgctg 3060

ctcataatgc ccctggtgat ctgggtctat agcacagaca ctaactttag cgatatgttc 3120

tggtcttga 3129

<210> 68

<211> 1042

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hSERCA2

<400> 68

Met Glu Asn Ala His Thr Lys Thr Val Glu Glu Val Leu Gly His Phe

1 5 10 15

Gly Val Asn Glu Ser Thr Gly Leu Ser Leu Glu Gln Val Lys Lys Leu

20 25 30

Lys Glu Arg Trp Gly Ser Asn Glu Leu Pro Ala Glu Glu Gly Lys Thr

35 40 45

Leu Leu Glu Leu Val Ile Glu Gln Phe Glu Asp Leu Leu Val Arg Ile

50 55 60

Leu Leu Leu Ala Ala Cys Ile Ser Phe Val Leu Ala Trp Phe Glu Glu

65 70 75 80

Gly Glu Glu Thr Ile Thr Ala Phe Val Glu Pro Phe Val Ile Leu Leu

85 90 95

Ile Leu Val Ala Asn Ala Ile Val Gly Val Trp Gln Glu Arg Asn Ala

100 105 110

Glu Asn Ala Ile Glu Ala Leu Lys Glu Tyr Glu Pro Glu Met Gly Lys

115 120 125

Val Tyr Arg Gln Asp Arg Lys Ser Val Gln Arg Ile Lys Ala Lys Asp

130 135 140

Ile Val Pro Gly Asp Ile Val Glu Ile Ala Val Gly Asp Lys Val Pro

145 150 155 160

Ala Asp Ile Arg Leu Thr Ser Ile Lys Ser Thr Thr Leu Arg Val Asp

165 170 175

Gln Ser Ile Leu Thr Gly Glu Ser Val Ser Val Ile Lys His Thr Asp

180 185 190

Pro Val Pro Asp Pro Arg Ala Val Asn Gln Asp Lys Lys Asn Met Leu

195 200 205

Phe Ser Gly Thr Asn Ile Ala Ala Gly Lys Ala Met Gly Val Val Val

210 215 220

Ala Thr Gly Val Asn Thr Glu Ile Gly Lys Ile Arg Asp Glu Met Val

225 230 235 240

Ala Thr Glu Gln Glu Arg Thr Pro Leu Gln Gln Lys Leu Asp Glu Phe

245 250 255

Gly Glu Gln Leu Ser Lys Val Ile Ser Leu Ile Cys Ile Ala Val Trp

260 265 270

Ile Ile Asn Ile Gly His Phe Asn Asp Pro Val His Gly Gly Ser Trp

275 280 285

Ile Arg Gly Ala Ile Tyr Tyr Phe Lys Ile Ala Val Ala Leu Ala Val

290 295 300

Ala Ala Ile Pro Glu Gly Leu Pro Ala Val Ile Thr Thr Cys Leu Ala

305 310 315 320

Leu Gly Thr Arg Arg Met Ala Lys Lys Asn Ala Ile Val Arg Ser Leu

325 330 335

Pro Ser Val Glu Thr Leu Gly Cys Thr Ser Val Ile Cys Ser Asp Lys

340 345 350

Thr Gly Thr Leu Thr Thr Asn Gln Met Ser Val Cys Arg Met Phe Ile

355 360 365

Leu Asp Arg Val Glu Gly Asp Thr Cys Ser Leu Asn Glu Phe Thr Ile

370 375 380

Thr Gly Ser Thr Tyr Ala Pro Ile Gly Glu Val His Lys Asp Asp Lys

385 390 395 400

Pro Val Asn Cys His Gln Tyr Asp Gly Leu Val Glu Leu Ala Thr Ile

405 410 415

Cys Ala Leu Cys Asn Asp Ser Ala Leu Asp Tyr Asn Glu Ala Lys Gly

420 425 430

Val Tyr Glu Lys Val Gly Glu Ala Thr Glu Thr Ala Leu Thr Cys Leu

435 440 445

Val Glu Lys Met Asn Val Phe Asp Thr Glu Leu Lys Gly Leu Ser Lys

450 455 460

Ile Glu Arg Ala Asn Ala Cys Asn Ser Val Ile Lys Gln Leu Met Lys

465 470 475 480

Lys Glu Phe Thr Leu Glu Phe Ser Arg Asp Arg Lys Ser Met Ser Val

485 490 495

Tyr Cys Thr Pro Asn Lys Pro Ser Arg Thr Ser Met Ser Lys Met Phe

500 505 510

Val Lys Gly Ala Pro Glu Gly Val Ile Asp Arg Cys Thr His Ile Arg

515 520 525

Val Gly Ser Thr Lys Val Pro Met Thr Ser Gly Val Lys Gln Lys Ile

530 535 540

Met Ser Val Ile Arg Glu Trp Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Arg Cys

545 550 555 560

Leu Ala Leu Ala Thr His Asp Asn Pro Leu Arg Arg Glu Glu Met His

565 570 575

Leu Glu Asp Ser Ala Asn Phe Ile Lys Tyr Glu Thr Asn Leu Thr Phe

580 585 590

Val Gly Cys Val Gly Met Leu Asp Pro Pro Arg Ile Glu Val Ala Ser

595 600 605

Ser Val Lys Leu Cys Arg Gln Ala Gly Ile Arg Val Ile Met Ile Thr

610 615 620

Gly Asp Asn Lys Gly Thr Ala Val Ala Ile Cys Arg Arg Ile Gly Ile

625 630 635 640

Phe Gly Gln Asp Glu Asp Val Thr Ser Lys Ala Phe Thr Gly Arg Glu

645 650 655

Phe Asp Glu Leu Asn Pro Ser Ala Gln Arg Asp Ala Cys Leu Asn Ala

660 665 670

Arg Cys Phe Ala Arg Val Glu Pro Ser His Lys Ser Lys Ile Val Glu

675 680 685

Phe Leu Gln Ser Phe Asp Glu Ile Thr Ala Met Thr Gly Asp Gly Val

690 695 700

Asn Asp Ala Pro Ala Leu Lys Lys Ala Glu Ile Gly Ile Ala Met Gly

705 710 715 720

Ser Gly Thr Ala Val Ala Lys Thr Ala Ser Glu Met Val Leu Ala Asp

725 730 735

Asp Asn Phe Ser Thr Ile Val Ala Ala Val Glu Glu Gly Arg Ala Ile

740 745 750

Tyr Asn Asn Met Lys Gln Phe Ile Arg Tyr Leu Ile Ser Ser Asn Val

755 760 765

Gly Glu Val Val Cys Ile Phe Leu Thr Ala Ala Leu Gly Phe Pro Glu

770 775 780

Ala Leu Ile Pro Val Gln Leu Leu Trp Val Asn Leu Val Thr Asp Gly

785 790 795 800

Leu Pro Ala Thr Ala Leu Gly Phe Asn Pro Pro Asp Leu Asp Ile Met

805 810 815

Asn Lys Pro Pro Arg Asn Pro Lys Glu Pro Leu Ile Ser Gly Trp Leu

820 825 830

Phe Phe Arg Tyr Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Val Gly Ala Ala Thr Val

835 840 845

Gly Ala Ala Ala Trp Trp Phe Ile Ala Ala Asp Gly Gly Pro Arg Val

850 855 860

Ser Phe Tyr Gln Leu Ser His Phe Leu Gln Cys Lys Glu Asp Asn Pro

865 870 875 880

Asp Phe Glu Gly Val Asp Cys Ala Ile Phe Glu Ser Pro Tyr Pro Met

885 890 895

Thr Met Ala Leu Ser Val Leu Val Thr Ile Glu Met Cys Asn Ala Leu

900 905 910

Asn Ser Leu Ser Glu Asn Gln Ser Leu Leu Arg Met Pro Pro Trp Glu

915 920 925

Asn Ile Trp Leu Val Gly Ser Ile Cys Leu Ser Met Ser Leu His Phe

930 935 940

Leu Ile Leu Tyr Val Glu Pro Leu Pro Leu Ile Phe Gln Ile Thr Pro

945 950 955 960

Leu Asn Val Thr Gln Trp Leu Met Val Leu Lys Ile Ser Leu Pro Val

965 970 975

Ile Leu Met Asp Glu Thr Leu Lys Phe Val Ala Arg Asn Tyr Leu Glu

980 985 990

Pro Gly Lys Glu Cys Val Gln Pro Ala Thr Lys Ser Cys Ser Phe Ser

995 1000 1005

Ala Cys Thr Asp Gly Ile Ser Trp Pro Phe Val Leu Leu Ile Met

1010 1015 1020

Pro Leu Val Ile Trp Val Tyr Ser Thr Asp Thr Asn Phe Ser Asp

1025 1030 1035

Met Phe Trp Ser

1040

<210> 69

<211> 1938

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hPDIA4

<400> 69

atgaggcccc ggaaagcctt cctgctcctg ctgctcttgg ggctggtgca gctgctggcc 60

gtggcgggtg ccgagggccc ggacgaggat tcttctaaca gagaaaatgc cattgaggat 120

gaagaggagg aggaggagga agatgatgat gaggaagaag acgacttgga agttaaggaa 180

gaaaatggag tcttggtcct aaatgatgca aactttgata attttgtggc tgacaaagac 240

acagtgctgc tggagtttta tgctccatgg tgtggacatt gcaagcagtt tgctccggaa 300

tatgaaaaaa ttgccaacat attaaaggat aaagatcctc ccattcctgt tgccaagatc 360

gatgcaacct cagcgtctgt gctggccagc aggtttgatg tgagtggcta ccccaccatc 420

aagatcctta agaaggggca ggctgtagac tacgagggct ccagaaccca ggaagaaatt 480

gttgccaagg tcagagaagt ctcccagccc gactggacgc ctccaccaga agtcacgctt 540

gtgttgacca aagagaactt tgatgaagtt gtgaatgatg cagatatcat tctggtggag 600

ttttatgccc catggtgtgg acactgcaag aaacttgccc ccgagtatga gaaggccgcc 660

aaggagctca gcaagcgttc tcctccaatt cccctggcaa aggtcgacgc caccgcagaa 720

acagacctgg ccaagaggtt tgatgtctct ggctatccca ccctgaaaat tttccgcaaa 780

ggaaggcctt atgactacaa cggcccacga gaaaaatatg gaatcgttga ttacatgatc 840

gagcagtccg ggcctccctc caaggagatt ctgaccctga agcaggtcca ggagttcctg 900

aaggatggag acgatgtcat catcatcggg gtctttaagg gggagagtga cccagcctac 960

cagcaatacc aggatgccgc taacaacctg agagaagatt acaaatttca ccacactttc 1020

agcacagaaa tagcaaagtt cttgaaagtc tcccaggggc agttggttgt aatgcagcct 1080

gagaaattcc agtccaagta tgagccccgg agccacatga tggacgtcca gggctccacc 1140

caggactcgg ccatcaagga cttcgtgctg aagtacgccc tgcccctggt tggccaccgc 1200

aaggtgtcaa acgatgctaa gcgctacacc aggcgccccc tggtggtcgt ctactacagt 1260

gtggacttca gctttgatta cagagctgca actcagtttt ggcggagcaa agtcctagag 1320

gtggccaagg acttccctga gtacaccttt gccattgcgg acgaagagga ctatgctggg 1380

gaggtgaagg acctggggct cagcgagagt ggggaggatg tcaatgccgc catcctggac 1440

gagagtggga agaagttcgc catggagcca gaggagtttg actctgacac cctccgcgag 1500

tttgtcactg ctttcaaaaa aggaaaactg aagccagtca tcaaatccca gccagtgccc 1560

aagaacaaca agggacccgt caaggtcgtg gtgggaaaga cctttgactc cattgtgatg 1620

gaccccaaga aggacgtcct catcgagttc tacgcgccat ggtgcgggca ctgcaagcag 1680

ctagagcccg tgtacaacag cctggccaag aagtacaagg gccaaaaggg cctggtcatc 1740

gccaagatgg acgccactgc caacgacgtc cccagcgacc gctataaggt ggagggcttc 1800

cccaccatct acttcgcccc cagtggggac aaaaagaacc cagttaaatt tgagggtgga 1860

gacagagatc tggagcattt gagcaagttt atagaagaac atgccacaaa actgagcagg 1920

accaaggaag agctttga 1938

<210> 70

<211> 645

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hPDIA4

<400> 70

Met Arg Pro Arg Lys Ala Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val

1 5 10 15

Gln Leu Leu Ala Val Ala Gly Ala Glu Gly Pro Asp Glu Asp Ser Ser

20 25 30

Asn Arg Glu Asn Ala Ile Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp

35 40 45

Asp Asp Glu Glu Glu Asp Asp Leu Glu Val Lys Glu Glu Asn Gly Val

50 55 60

Leu Val Leu Asn Asp Ala Asn Phe Asp Asn Phe Val Ala Asp Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Leu Leu Glu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His Cys Lys Gln

85 90 95

Phe Ala Pro Glu Tyr Glu Lys Ile Ala Asn Ile Leu Lys Asp Lys Asp

100 105 110

Pro Pro Ile Pro Val Ala Lys Ile Asp Ala Thr Ser Ala Ser Val Leu

115 120 125

Ala Ser Arg Phe Asp Val Ser Gly Tyr Pro Thr Ile Lys Ile Leu Lys

130 135 140

Lys Gly Gln Ala Val Asp Tyr Glu Gly Ser Arg Thr Gln Glu Glu Ile

145 150 155 160

Val Ala Lys Val Arg Glu Val Ser Gln Pro Asp Trp Thr Pro Pro Pro

165 170 175

Glu Val Thr Leu Val Leu Thr Lys Glu Asn Phe Asp Glu Val Val Asn

180 185 190

Asp Ala Asp Ile Ile Leu Val Glu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His

195 200 205

Cys Lys Lys Leu Ala Pro Glu Tyr Glu Lys Ala Ala Lys Glu Leu Ser

210 215 220

Lys Arg Ser Pro Pro Ile Pro Leu Ala Lys Val Asp Ala Thr Ala Glu

225 230 235 240

Thr Asp Leu Ala Lys Arg Phe Asp Val Ser Gly Tyr Pro Thr Leu Lys

245 250 255

Ile Phe Arg Lys Gly Arg Pro Tyr Asp Tyr Asn Gly Pro Arg Glu Lys

260 265 270

Tyr Gly Ile Val Asp Tyr Met Ile Glu Gln Ser Gly Pro Pro Ser Lys

275 280 285

Glu Ile Leu Thr Leu Lys Gln Val Gln Glu Phe Leu Lys Asp Gly Asp

290 295 300

Asp Val Ile Ile Ile Gly Val Phe Lys Gly Glu Ser Asp Pro Ala Tyr

305 310 315 320

Gln Gln Tyr Gln Asp Ala Ala Asn Asn Leu Arg Glu Asp Tyr Lys Phe

325 330 335

His His Thr Phe Ser Thr Glu Ile Ala Lys Phe Leu Lys Val Ser Gln

340 345 350

Gly Gln Leu Val Val Met Gln Pro Glu Lys Phe Gln Ser Lys Tyr Glu

355 360 365

Pro Arg Ser His Met Met Asp Val Gln Gly Ser Thr Gln Asp Ser Ala

370 375 380

Ile Lys Asp Phe Val Leu Lys Tyr Ala Leu Pro Leu Val Gly His Arg

385 390 395 400

Lys Val Ser Asn Asp Ala Lys Arg Tyr Thr Arg Arg Pro Leu Val Val

405 410 415

Val Tyr Tyr Ser Val Asp Phe Ser Phe Asp Tyr Arg Ala Ala Thr Gln

420 425 430

Phe Trp Arg Ser Lys Val Leu Glu Val Ala Lys Asp Phe Pro Glu Tyr

435 440 445

Thr Phe Ala Ile Ala Asp Glu Glu Asp Tyr Ala Gly Glu Val Lys Asp

450 455 460

Leu Gly Leu Ser Glu Ser Gly Glu Asp Val Asn Ala Ala Ile Leu Asp

465 470 475 480

Glu Ser Gly Lys Lys Phe Ala Met Glu Pro Glu Glu Phe Asp Ser Asp

485 490 495

Thr Leu Arg Glu Phe Val Thr Ala Phe Lys Lys Gly Lys Leu Lys Pro

500 505 510

Val Ile Lys Ser Gln Pro Val Pro Lys Asn Asn Lys Gly Pro Val Lys

515 520 525

Val Val Val Gly Lys Thr Phe Asp Ser Ile Val Met Asp Pro Lys Lys

530 535 540

Asp Val Leu Ile Glu Phe Tyr Ala Pro Trp Cys Gly His Cys Lys Gln

545 550 555 560

Leu Glu Pro Val Tyr Asn Ser Leu Ala Lys Lys Tyr Lys Gly Gln Lys

565 570 575

Gly Leu Val Ile Ala Lys Met Asp Ala Thr Ala Asn Asp Val Pro Ser

580 585 590

Asp Arg Tyr Lys Val Glu Gly Phe Pro Thr Ile Tyr Phe Ala Pro Ser

595 600 605

Gly Asp Lys Lys Asn Pro Val Lys Phe Glu Gly Gly Asp Arg Asp Leu

610 615 620

Glu His Leu Ser Lys Phe Ile Glu Glu His Ala Thr Lys Leu Ser Arg

625 630 635 640

Thr Lys Glu Glu Leu

645

<210> 71

<211> 1941

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hHSC70 /HSPA8

<400> 71

atgtccaagg gacctgcagt tggtattgat cttggcacca cctactcttg tgtgggtgtt 60

ttccagcacg gaaaagtcga gataattgcc aatgatcagg gaaaccgaac cactccaagc 120

tatgtcgcct ttacggacac tgaacggttg atcggtgatg ccgcaaagaa tcaagttgca 180

atgaacccca ccaacacagt ttttgatgcc aaacgtctga ttggacgcag atttgatgat 240

gctgttgtcc agtctgatat gaaacattgg ccctttatgg tggtgaatga tgctggcagg 300

cccaaggtcc aagtagaata caagggagag accaaaagct tctatccaga ggaggtgtct 360

tctatggttc tgacaaagat gaaggaaatt gcagaagcct accttgggaa gactgttacc 420

aatgctgtgg tcacagtgcc agcttacttt aatgactctc agcgtcaggc taccaaagat 480

gctggaacta ttgctggtct caatgtactt agaattatta atgagccaac tgctgctgct 540

attgcttacg gcttagacaa aaaggttgga gcagaaagaa acgtgctcat ctttgacctg 600

ggaggtggca cttttgatgt gtcaatcctc actattgagg atggaatctt tgaggtcaag 660

tctacagctg gagacaccca cttgggtgga gaagattttg acaaccgaat ggtcaaccat 720

tttattgctg agtttaagcg caagcataag aaggacatca gtgagaacaa gagagctgta 780

agacgcctcc gtactgcttg tgaacgtgct aagcgtaccc tctcttccag cacccaggcc 840

agtattgaga tcgattctct ctatgaagga atcgacttct atacctccat tacccgtgcc 900

cgatttgaag aactgaatgc tgacctgttc cgtggcaccc tggacccagt agagaaagcc 960

cttcgagatg ccaaactaga caagtcacag attcatgata ttgtcctggt tggtggttct 1020

actcgtatcc ccaagattca gaagcttctc caagacttct tcaatggaaa agaactgaat 1080

aagagcatca accctgatga agctgttgct tatggtgcag ctgtccaggc agccatcttg 1140

tctggagaca agtctgagaa tgttcaagat ttgctgctct tggatgtcac tcctctttcc 1200

cttggtattg aaactgctgg tggagtcatg actgtcctca tcaagcgtaa taccaccatt 1260

cctaccaagc agacacagac cttcactacc tattctgaca accagcctgg tgtgcttatt 1320

caggtttatg aaggcgagcg tgccatgaca aaggataaca acctgcttgg caagtttgaa 1380

ctcacaggca tacctcctgc accccgaggt gttcctcaga ttgaagtcac ttttgacatt 1440

gatgccaatg gtatactcaa tgtctctgct gtggacaaga gtacgggaaa agagaacaag 1500

attactatca ctaatgacaa gggccgtttg agcaaggaag acattgaacg tatggtccag 1560

gaagctgaga agtacaaagc tgaagatgag aagcagaggg acaaggtgtc atccaagaat 1620

tcacttgagt cctatgcctt caacatgaaa gcaactgttg aagatgagaa acttcaaggc 1680

aagattaacg atgaggacaa acagaagatt ctggacaagt gtaatgaaat tatcaactgg 1740

cttgataaga atcagactgc tgagaaggaa gaatttgaac atcaacagaa agagctggag 1800

aaagtttgca accccatcat caccaagctg taccagagtg caggaggcat gccaggagga 1860

atgcctgggg gatttcctgg tggtggagct cctccctctg gtggtgcttc ctcagggccc 1920

accattgaag aggttgatta a 1941

<210> 72

<211> 646

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hHSC70 /HSPA8

<400> 72

Met Ser Lys Gly Pro Ala Val Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser

1 5 10 15

Cys Val Gly Val Phe Gln His Gly Lys Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp

20 25 30

Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu

35 40 45

Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Met Asn Pro Thr

50 55 60

Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Arg Phe Asp Asp

65 70 75 80

Ala Val Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Met Val Val Asn

85 90 95

Asp Ala Gly Arg Pro Lys Val Gln Val Glu Tyr Lys Gly Glu Thr Lys

100 105 110

Ser Phe Tyr Pro Glu Glu Val Ser Ser Met Val Leu Thr Lys Met Lys

115 120 125

Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Lys Thr Val Thr Asn Ala Val Val

130 135 140

Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp

145 150 155 160

Ala Gly Thr Ile Ala Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro

165 170 175

Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Val Gly Ala Glu

180 185 190

Arg Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser

195 200 205

Ile Leu Thr Ile Glu Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ser Thr Ala Gly

210 215 220

Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Met Val Asn His

225 230 235 240

Phe Ile Ala Glu Phe Lys Arg Lys His Lys Lys Asp Ile Ser Glu Asn

245 250 255

Lys Arg Ala Val Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys Glu Arg Ala Lys Arg

260 265 270

Thr Leu Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ser Ile Glu Ile Asp Ser Leu Tyr

275 280 285

Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu

290 295 300

Leu Asn Ala Asp Leu Phe Arg Gly Thr Leu Asp Pro Val Glu Lys Ala

305 310 315 320

Leu Arg Asp Ala Lys Leu Asp Lys Ser Gln Ile His Asp Ile Val Leu

325 330 335

Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Ile Gln Lys Leu Leu Gln Asp

340 345 350

Phe Phe Asn Gly Lys Glu Leu Asn Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala

355 360 365

Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Ser Gly Asp Lys

370 375 380

Ser Glu Asn Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Thr Pro Leu Ser

385 390 395 400

Leu Gly Ile Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Val Leu Ile Lys Arg

405 410 415

Asn Thr Thr Ile Pro Thr Lys Gln Thr Gln Thr Phe Thr Thr Tyr Ser

420 425 430

Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu Arg Ala

435 440 445

Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Lys Phe Glu Leu Thr Gly Ile

450 455 460

Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile

465 470 475 480

Asp Ala Asn Gly Ile Leu Asn Val Ser Ala Val Asp Lys Ser Thr Gly

485 490 495

Lys Glu Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu Ser Lys

500 505 510

Glu Asp Ile Glu Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Lys Ala Glu

515 520 525

Asp Glu Lys Gln Arg Asp Lys Val Ser Ser Lys Asn Ser Leu Glu Ser

530 535 540

Tyr Ala Phe Asn Met Lys Ala Thr Val Glu Asp Glu Lys Leu Gln Gly

545 550 555 560

Lys Ile Asn Asp Glu Asp Lys Gln Lys Ile Leu Asp Lys Cys Asn Glu

565 570 575

Ile Ile Asn Trp Leu Asp Lys Asn Gln Thr Ala Glu Lys Glu Glu Phe

580 585 590

Glu His Gln Gln Lys Glu Leu Glu Lys Val Cys Asn Pro Ile Ile Thr

595 600 605

Lys Leu Tyr Gln Ser Ala Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Pro Gly Gly

610 615 620

Phe Pro Gly Gly Gly Ala Pro Pro Ser Gly Gly Ala Ser Ser Gly Pro

625 630 635 640

Thr Ile Glu Glu Val Asp

645

<210> 73

<211> 3000

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hHYOU1

<400> 73

atggcagaca aagttaggag gcagaggccg aggaggcgag tctgttgggc cttggtggct 60

gtgctcttgg cagacctgtt ggcactgagt gatacactgg cagtgatgtc tgtggacctg 120

ggcagtgagt ccatgaaggt ggccattgtc aaacctggag tgcccatgga aattgtcttg 180

aataaggaat ctcggaggaa aacaccggtg atcgtgaccc tgaaagaaaa tgaaagattc 240

tttggagaca gtgcagcaag catggcgatt aagaatccaa aggctacgct acgttacttc 300

cagcacctcc tggggaagca ggcagataac ccccatgtag ctctttacca ggcccgcttc 360

ccggagcacg agctgacttt cgacccacag aggcagactg tgcactttca gatcagctcg 420

cagctgcagt tctcacctga ggaagtgttg ggcatggttc tcaattattc tcgttctcta 480

gctgaagatt ttgcagagca gcccatcaag gatgcagtga tcaccgtgcc agtcttcttc 540

aaccaggccg agcgccgagc tgtgctgcag gctgctcgta tggctggcct caaagtgctg 600

cagctcatca atgacaacac cgccactgcc ctcagctatg gtgtcttccg ccggaaagat 660

attaacacca ctgcccagaa tatcatgttc tatgacatgg gctcaggcag caccgtatgc 720

accattgtga cctaccagat ggtgaagact aaggaagctg ggatgcagcc acagctgcag 780

atccggggag taggatttga ccgtaccctg gggggcctgg agatggagct ccggcttcga 840

gaacgcctgg ctgggctttt caatgagcag cgcaagggtc agagagcaaa ggatgtgcgg 900

gagaacccgc gtgccatggc caagctgctg cgtgaggcta atcggctcaa aaccgtcctc 960

agtgccaacg ctgaccacat ggcacagatt gaaggcctga tggatgatgt ggacttcaag 1020

gcaaaagtga ctcgtgtgga atttgaggag ttgtgtgcag acttgtttga gcgggtgcct 1080

gggcctgtac agcaggccct ccagagtgcc gaaatgagtc tggatgagat tgagcaggtg 1140

atcctggtgg gtggggccac tcgggtcccc agagttcagg aggtgctgct gaaggccgtg 1200

ggcaaggagg agctggggaa gaacatcaat gcagatgaag cagccgccat gggggcagtg 1260

taccaggcag ctgcgctcag caaagccttt aaagtgaagc catttgtcgt ccgagatgca 1320

gtggtctacc ccatcctggt ggagttcacg agggaggtgg aggaggagcc tgggattcac 1380

agcctgaagc acaataaacg ggtactcttc tctcggatgg ggccctaccc tcaacgcaaa 1440

gtcatcacct ttaaccgcta cagccatgat ttcaacttcc acatcaacta cggcgacctg 1500

ggcttcctgg ggcctgaaga tcttcgggta tttggctccc agaatctgac cacagtgaag 1560

ctaaaagggg tgggtgacag cttcaagaag tatcctgact acgagtccaa gggcatcaag 1620

gctcacttca acctggatga gagtggcgtg ctcagtctag acagggtgga gtctgtattt 1680

gagacactgg tagaggacag cgcagaagag gaatctactc tcaccaaact tggcaacacc 1740

atttccagcc tgtttggagg cggtaccaca ccagatgcca aggagaatgg tactgatact 1800

gtccaggagg aagaggagag ccctgcagag gggagcaagg acgagcctgg ggagcaggtg 1860

gagctcaagg aggaagctga ggccccagtg gaggatggct ctcagccccc accccctgaa 1920

cctaagggag atgcaacccc tgagggagaa aaggccacag aaaaagaaaa tggggacaag 1980

tctgaggccc agaaaccaag tgagaaggca gaggcagggc ctgagggcgt cgctccagcc 2040

ccagagggag agaagaagca gaagcccgcc aggaagcggc gaatggtaga ggagatcggg 2100

gtggagctgg ttgttctgga cctgcctgac ttgccagagg ataagctggc tcagtcggtg 2160

cagaaacttc aggacttgac actccgagac ctggagaagc aggaacggga aaaagctgcc 2220

aacagcttgg aagcattcat atttgagacc caggacaagc tgtaccagcc cgagtaccag 2280

gaagtgtcca cagaggagca gcgtgaggag atctctggga agctcagcgc cgcatccacc 2340

tggctggagg atgagggtgt tggagccacc acagtgatgt tgaaggagaa gctggctgag 2400

ctgaggaagc tgtgccaagg gctgtttttt cgggtagagg agcgcaagaa gtggcccgaa 2460

cggctgtctg ccctcgataa tctcctcaac cattccagca tgttcctcaa gggggcccgg 2520

ctcatcccag agatggacca gatcttcact gaggtggaga tgacaacgtt agagaaagtc 2580

atcaatgaga cctgggcctg gaagaatgca actctggccg agcaggctaa gctgcccgcc 2640

acagagaagc ctgtgttgct ctcaaaagac attgaagcta agatgatggc cctggaccga 2700

gaggtgcagt atctgctcaa taaggccaag tttaccaagc cccggccccg gcctaaggac 2760

aagaatggga cccgggcaga gccacccctc aatgccagtg ccagtgacca gggggagaag 2820

gtcatccctc cagcaggcca gactgaagat gcagagccca tttcagaacc tgagaaagta 2880

gagactggat ccgagccagg agacactgag cctttggagt taggaggtcc tggagcagaa 2940

cctgaacaga aagaacaatc gacaggacag aagcggcctt tgaagaacga cgaactataa 3000

<210> 74

<211> 999

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hHYOU1

<400> 74

Met Ala Asp Lys Val Arg Arg Gln Arg Pro Arg Arg Arg Val Cys Trp

1 5 10 15

Ala Leu Val Ala Val Leu Leu Ala Asp Leu Leu Ala Leu Ser Asp Thr

20 25 30

Leu Ala Val Met Ser Val Asp Leu Gly Ser Glu Ser Met Lys Val Ala

35 40 45

Ile Val Lys Pro Gly Val Pro Met Glu Ile Val Leu Asn Lys Glu Ser

50 55 60

Arg Arg Lys Thr Pro Val Ile Val Thr Leu Lys Glu Asn Glu Arg Phe

65 70 75 80

Phe Gly Asp Ser Ala Ala Ser Met Ala Ile Lys Asn Pro Lys Ala Thr

85 90 95

Leu Arg Tyr Phe Gln His Leu Leu Gly Lys Gln Ala Asp Asn Pro His

100 105 110

Val Ala Leu Tyr Gln Ala Arg Phe Pro Glu His Glu Leu Thr Phe Asp

115 120 125

Pro Gln Arg Gln Thr Val His Phe Gln Ile Ser Ser Gln Leu Gln Phe

130 135 140

Ser Pro Glu Glu Val Leu Gly Met Val Leu Asn Tyr Ser Arg Ser Leu

145 150 155 160

Ala Glu Asp Phe Ala Glu Gln Pro Ile Lys Asp Ala Val Ile Thr Val

165 170 175

Pro Val Phe Phe Asn Gln Ala Glu Arg Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala

180 185 190

Arg Met Ala Gly Leu Lys Val Leu Gln Leu Ile Asn Asp Asn Thr Ala

195 200 205

Thr Ala Leu Ser Tyr Gly Val Phe Arg Arg Lys Asp Ile Asn Thr Thr

210 215 220

Ala Gln Asn Ile Met Phe Tyr Asp Met Gly Ser Gly Ser Thr Val Cys

225 230 235 240

Thr Ile Val Thr Tyr Gln Met Val Lys Thr Lys Glu Ala Gly Met Gln

245 250 255

Pro Gln Leu Gln Ile Arg Gly Val Gly Phe Asp Arg Thr Leu Gly Gly

260 265 270

Leu Glu Met Glu Leu Arg Leu Arg Glu Arg Leu Ala Gly Leu Phe Asn

275 280 285

Glu Gln Arg Lys Gly Gln Arg Ala Lys Asp Val Arg Glu Asn Pro Arg

290 295 300

Ala Met Ala Lys Leu Leu Arg Glu Ala Asn Arg Leu Lys Thr Val Leu

305 310 315 320

Ser Ala Asn Ala Asp His Met Ala Gln Ile Glu Gly Leu Met Asp Asp

325 330 335

Val Asp Phe Lys Ala Lys Val Thr Arg Val Glu Phe Glu Glu Leu Cys

340 345 350

Ala Asp Leu Phe Glu Arg Val Pro Gly Pro Val Gln Gln Ala Leu Gln

355 360 365

Ser Ala Glu Met Ser Leu Asp Glu Ile Glu Gln Val Ile Leu Val Gly

370 375 380

Gly Ala Thr Arg Val Pro Arg Val Gln Glu Val Leu Leu Lys Ala Val

385 390 395 400

Gly Lys Glu Glu Leu Gly Lys Asn Ile Asn Ala Asp Glu Ala Ala Ala

405 410 415

Met Gly Ala Val Tyr Gln Ala Ala Ala Leu Ser Lys Ala Phe Lys Val

420 425 430

Lys Pro Phe Val Val Arg Asp Ala Val Val Tyr Pro Ile Leu Val Glu

435 440 445

Phe Thr Arg Glu Val Glu Glu Glu Pro Gly Ile His Ser Leu Lys His

450 455 460

Asn Lys Arg Val Leu Phe Ser Arg Met Gly Pro Tyr Pro Gln Arg Lys

465 470 475 480

Val Ile Thr Phe Asn Arg Tyr Ser His Asp Phe Asn Phe His Ile Asn

485 490 495

Tyr Gly Asp Leu Gly Phe Leu Gly Pro Glu Asp Leu Arg Val Phe Gly

500 505 510

Ser Gln Asn Leu Thr Thr Val Lys Leu Lys Gly Val Gly Asp Ser Phe

515 520 525

Lys Lys Tyr Pro Asp Tyr Glu Ser Lys Gly Ile Lys Ala His Phe Asn

530 535 540

Leu Asp Glu Ser Gly Val Leu Ser Leu Asp Arg Val Glu Ser Val Phe

545 550 555 560

Glu Thr Leu Val Glu Asp Ser Ala Glu Glu Glu Ser Thr Leu Thr Lys

565 570 575

Leu Gly Asn Thr Ile Ser Ser Leu Phe Gly Gly Gly Thr Thr Pro Asp

580 585 590

Ala Lys Glu Asn Gly Thr Asp Thr Val Gln Glu Glu Glu Glu Ser Pro

595 600 605

Ala Glu Gly Ser Lys Asp Glu Pro Gly Glu Gln Val Glu Leu Lys Glu

610 615 620

Glu Ala Glu Ala Pro Val Glu Asp Gly Ser Gln Pro Pro Pro Pro Glu

625 630 635 640

Pro Lys Gly Asp Ala Thr Pro Glu Gly Glu Lys Ala Thr Glu Lys Glu

645 650 655

Asn Gly Asp Lys Ser Glu Ala Gln Lys Pro Ser Glu Lys Ala Glu Ala

660 665 670

Gly Pro Glu Gly Val Ala Pro Ala Pro Glu Gly Glu Lys Lys Gln Lys

675 680 685

Pro Ala Arg Lys Arg Arg Met Val Glu Glu Ile Gly Val Glu Leu Val

690 695 700

Val Leu Asp Leu Pro Asp Leu Pro Glu Asp Lys Leu Ala Gln Ser Val

705 710 715 720

Gln Lys Leu Gln Asp Leu Thr Leu Arg Asp Leu Glu Lys Gln Glu Arg

725 730 735

Glu Lys Ala Ala Asn Ser Leu Glu Ala Phe Ile Phe Glu Thr Gln Asp

740 745 750

Lys Leu Tyr Gln Pro Glu Tyr Gln Glu Val Ser Thr Glu Glu Gln Arg

755 760 765

Glu Glu Ile Ser Gly Lys Leu Ser Ala Ala Ser Thr Trp Leu Glu Asp

770 775 780

Glu Gly Val Gly Ala Thr Thr Val Met Leu Lys Glu Lys Leu Ala Glu

785 790 795 800

Leu Arg Lys Leu Cys Gln Gly Leu Phe Phe Arg Val Glu Glu Arg Lys

805 810 815

Lys Trp Pro Glu Arg Leu Ser Ala Leu Asp Asn Leu Leu Asn His Ser

820 825 830

Ser Met Phe Leu Lys Gly Ala Arg Leu Ile Pro Glu Met Asp Gln Ile

835 840 845

Phe Thr Glu Val Glu Met Thr Thr Leu Glu Lys Val Ile Asn Glu Thr

850 855 860

Trp Ala Trp Lys Asn Ala Thr Leu Ala Glu Gln Ala Lys Leu Pro Ala

865 870 875 880

Thr Glu Lys Pro Val Leu Leu Ser Lys Asp Ile Glu Ala Lys Met Met

885 890 895

Ala Leu Asp Arg Glu Val Gln Tyr Leu Leu Asn Lys Ala Lys Phe Thr

900 905 910

Lys Pro Arg Pro Arg Pro Lys Asp Lys Asn Gly Thr Arg Ala Glu Pro

915 920 925

Pro Leu Asn Ala Ser Ala Ser Asp Gln Gly Glu Lys Val Ile Pro Pro

930 935 940

Ala Gly Gln Thr Glu Asp Ala Glu Pro Ile Ser Glu Pro Glu Lys Val

945 950 955 960

Glu Thr Gly Ser Glu Pro Gly Asp Thr Glu Pro Leu Glu Leu Gly Gly

965 970 975

Pro Gly Ala Glu Pro Glu Gln Lys Glu Gln Ser Thr Gly Gln Lys Arg

980 985 990

Pro Leu Lys Asn Asp Glu Leu

995

<210> 75

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hCMP-SAS

<400> 75

atggactcgg tggagaaggg ggccgccacc tccgtctcca acccgcgggg gcgaccgtcc 60

cggggccggc cgccgaagct gcagcgcaac tctcgcggcg gccagggccg aggtgtggag 120

aagcccccgc acctggcagc cctaattctg gcccggggag gcagcaaagg catccccctg 180

aagaacatta agcacctggc gggggtcccg ctcattggct gggtcctgcg tgcggccctg 240

gattcagggg ccttccagag tgtatgggtt tcgacagacc atgatgaaat tgagaatgtg 300

gccaaacaat ttggtgcaca agttcatcga agaagttctg aagtttcaaa agacagctct 360

acctcactag atgccatcat agaatttctt aattatcata atgaggttga cattgtagga 420

aatattcaag ctacttctcc atgtttacat cctactgatc ttcaaaaagt tgcagaaatg 480

attcgagaag aaggatatga ttctgttttc tctgttgtga gacgccatca gtttcgatgg 540

agtgaaattc agaaaggagt tcgtgaagtg accgaacctc tgaatttaaa tccagctaaa 600

cggcctcgtc gacaagactg ggatggagaa ttatatgaaa atggctcatt ttattttgct 660

aaaagacatt tgatagagat gggttacttg cagggtggaa aaatggcata ctacgaaatg 720

cgagctgaac atagtgtgga tatagatgtg gatattgatt ggcctattgc agagcaaaga 780

gtattaagat atggctattt tggcaaagag aagcttaagg aaataaaact tttggtttgc 840

aatattgatg gatgtctcac caatggccac atttatgtat caggagacca aaaagaaata 900

atatcttatg atgtaaaaga tgctattggg ataagtttat taaagaaaag tggtattgag 960

gtgaggctaa tctcagaaag ggcctgttca aagcagacgc tgtcttcttt aaaactggat 1020

tgcaaaatgg aagtcagtgt atcagacaag ctagcagttg tagatgaatg gagaaaagaa 1080

atgggcctgt gctggaaaga agtggcatat cttggaaatg aagtgtctga tgaagagtgc 1140

ttgaagagag tgggcctaag tggcgctcct gctgatgcct gttctactgc ccagaaggct 1200

gttggataca tttgcaaatg taatggtggc cgtggtgcca tccgagaatt tgcagagcac 1260

atttgcctac taatggaaaa ggttaataat tcatgccaaa aatag 1305

<210> 76

<211> 434

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hCMP-SAS

<400> 76

Met Asp Ser Val Glu Lys Gly Ala Ala Thr Ser Val Ser Asn Pro Arg

1 5 10 15

Gly Arg Pro Ser Arg Gly Arg Pro Pro Lys Leu Gln Arg Asn Ser Arg

20 25 30

Gly Gly Gln Gly Arg Gly Val Glu Lys Pro Pro His Leu Ala Ala Leu

35 40 45

Ile Leu Ala Arg Gly Gly Ser Lys Gly Ile Pro Leu Lys Asn Ile Lys

50 55 60

His Leu Ala Gly Val Pro Leu Ile Gly Trp Val Leu Arg Ala Ala Leu

65 70 75 80

Asp Ser Gly Ala Phe Gln Ser Val Trp Val Ser Thr Asp His Asp Glu

85 90 95

Ile Glu Asn Val Ala Lys Gln Phe Gly Ala Gln Val His Arg Arg Ser

100 105 110

Ser Glu Val Ser Lys Asp Ser Ser Thr Ser Leu Asp Ala Ile Ile Glu

115 120 125

Phe Leu Asn Tyr His Asn Glu Val Asp Ile Val Gly Asn Ile Gln Ala

130 135 140

Thr Ser Pro Cys Leu His Pro Thr Asp Leu Gln Lys Val Ala Glu Met

145 150 155 160

Ile Arg Glu Glu Gly Tyr Asp Ser Val Phe Ser Val Val Arg Arg His

165 170 175

Gln Phe Arg Trp Ser Glu Ile Gln Lys Gly Val Arg Glu Val Thr Glu

180 185 190

Pro Leu Asn Leu Asn Pro Ala Lys Arg Pro Arg Arg Gln Asp Trp Asp

195 200 205

Gly Glu Leu Tyr Glu Asn Gly Ser Phe Tyr Phe Ala Lys Arg His Leu

210 215 220

Ile Glu Met Gly Tyr Leu Gln Gly Gly Lys Met Ala Tyr Tyr Glu Met

225 230 235 240

Arg Ala Glu His Ser Val Asp Ile Asp Val Asp Ile Asp Trp Pro Ile

245 250 255

Ala Glu Gln Arg Val Leu Arg Tyr Gly Tyr Phe Gly Lys Glu Lys Leu

260 265 270

Lys Glu Ile Lys Leu Leu Val Cys Asn Ile Asp Gly Cys Leu Thr Asn

275 280 285

Gly His Ile Tyr Val Ser Gly Asp Gln Lys Glu Ile Ile Ser Tyr Asp

290 295 300

Val Lys Asp Ala Ile Gly Ile Ser Leu Leu Lys Lys Ser Gly Ile Glu

305 310 315 320

Val Arg Leu Ile Ser Glu Arg Ala Cys Ser Lys Gln Thr Leu Ser Ser

325 330 335

Leu Lys Leu Asp Cys Lys Met Glu Val Ser Val Ser Asp Lys Leu Ala

340 345 350

Val Val Asp Glu Trp Arg Lys Glu Met Gly Leu Cys Trp Lys Glu Val

355 360 365

Ala Tyr Leu Gly Asn Glu Val Ser Asp Glu Glu Cys Leu Lys Arg Val

370 375 380

Gly Leu Ser Gly Ala Pro Ala Asp Ala Cys Ser Thr Ala Gln Lys Ala

385 390 395 400

Val Gly Tyr Ile Cys Lys Cys Asn Gly Gly Arg Gly Ala Ile Arg Glu

405 410 415

Phe Ala Glu His Ile Cys Leu Leu Met Glu Lys Val Asn Asn Ser Cys

420 425 430

Gln Lys

<210> 77

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hбеклин-1

<400> 77

atggaagggt ctaagacgtc caacaacagc accatgcagg tgagcttcgt gtgccagcgc 60

tgcagccagc ccctgaaact ggacacgagt ttcaagatcc tggaccgtgt caccatccag 120

gaactcacag ctccattact taccacagcc caggcgaaac caggagagac ccaggaggaa 180

gagactaact caggagagga gccatttatt gaaactcctc gccaggatgg tgtctctcgc 240

agattcatcc ccccagccag gatgatgtcc acagaaagtg ccaacagctt cactctgatt 300

ggggaggcat ctgatggcgg caccatggag aacctcagcc gaagactgaa ggtcactggg 360

gacctttttg acatcatgtc gggccagaca gatgtggatc acccactctg tgaggaatgc 420

acagatactc ttttagacca gctggacact cagctcaacg tcactgaaaa tgagtgtcag 480

aactacaaac gctgtttgga gatcttagag caaatgaatg aggatgacag tgaacagtta 540

cagatggagc taaaggagct ggcactagag gaggagaggc tgatccagga gctggaagac 600

gtggaaaaga accgcaagat agtggcagaa aatctcgaga aggtccaggc tgaggctgag 660

agactggatc aggaggaagc tcagtatcag agagaataca gtgaatttaa acgacagcag 720

ctggagctgg atgatgagct gaagagtgtt gaaaaccaga tgcgttatgc ccagacgcag 780

ctggataagc tgaagaaaac caacgtcttt aatgcaacct tccacatctg gcacagtgga 840

cagtttggca caatcaataa cttcaggctg ggtcgcctgc ccagtgttcc cgtggaatgg 900

aatgagatta atgctgcttg gggccagact gtgttgctgc tccatgctct ggccaataag 960

atgggtctga aatttcagag ataccgactt gttccttacg gaaaccattc atatctggag 1020

tctctgacag acaaatctaa ggagctgccg ttatactgtt ctggggggtt gcggtttttc 1080

tgggacaaca agtttgacca tgcaatggtg gctttcctgg actgtgtgca gcagttcaaa 1140

gaagaggttg agaaaggcga gacacgtttt tgtcttccct acaggatgga tgtggagaaa 1200

ggcaagattg aagacacagg aggcagtggc ggctcctatt ccatcaaaac ccagtttaac 1260

tctgaggagc agtggacaaa agctctcaag ttcatgctga cgaatcttaa gtggggtctt 1320

gcttgggtgt cctcacaatt ttataacaaa tga 1353

<210> 78

<211> 450

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hбеклин-1

<400> 78

Met Glu Gly Ser Lys Thr Ser Asn Asn Ser Thr Met Gln Val Ser Phe

1 5 10 15

Val Cys Gln Arg Cys Ser Gln Pro Leu Lys Leu Asp Thr Ser Phe Lys

20 25 30

Ile Leu Asp Arg Val Thr Ile Gln Glu Leu Thr Ala Pro Leu Leu Thr

35 40 45

Thr Ala Gln Ala Lys Pro Gly Glu Thr Gln Glu Glu Glu Thr Asn Ser

50 55 60

Gly Glu Glu Pro Phe Ile Glu Thr Pro Arg Gln Asp Gly Val Ser Arg

65 70 75 80

Arg Phe Ile Pro Pro Ala Arg Met Met Ser Thr Glu Ser Ala Asn Ser

85 90 95

Phe Thr Leu Ile Gly Glu Ala Ser Asp Gly Gly Thr Met Glu Asn Leu

100 105 110

Ser Arg Arg Leu Lys Val Thr Gly Asp Leu Phe Asp Ile Met Ser Gly

115 120 125

Gln Thr Asp Val Asp His Pro Leu Cys Glu Glu Cys Thr Asp Thr Leu

130 135 140

Leu Asp Gln Leu Asp Thr Gln Leu Asn Val Thr Glu Asn Glu Cys Gln

145 150 155 160

Asn Tyr Lys Arg Cys Leu Glu Ile Leu Glu Gln Met Asn Glu Asp Asp

165 170 175

Ser Glu Gln Leu Gln Met Glu Leu Lys Glu Leu Ala Leu Glu Glu Glu

180 185 190

Arg Leu Ile Gln Glu Leu Glu Asp Val Glu Lys Asn Arg Lys Ile Val

195 200 205

Ala Glu Asn Leu Glu Lys Val Gln Ala Glu Ala Glu Arg Leu Asp Gln

210 215 220

Glu Glu Ala Gln Tyr Gln Arg Glu Tyr Ser Glu Phe Lys Arg Gln Gln

225 230 235 240

Leu Glu Leu Asp Asp Glu Leu Lys Ser Val Glu Asn Gln Met Arg Tyr

245 250 255

Ala Gln Thr Gln Leu Asp Lys Leu Lys Lys Thr Asn Val Phe Asn Ala

260 265 270

Thr Phe His Ile Trp His Ser Gly Gln Phe Gly Thr Ile Asn Asn Phe

275 280 285

Arg Leu Gly Arg Leu Pro Ser Val Pro Val Glu Trp Asn Glu Ile Asn

290 295 300

Ala Ala Trp Gly Gln Thr Val Leu Leu Leu His Ala Leu Ala Asn Lys

305 310 315 320

Met Gly Leu Lys Phe Gln Arg Tyr Arg Leu Val Pro Tyr Gly Asn His

325 330 335

Ser Tyr Leu Glu Ser Leu Thr Asp Lys Ser Lys Glu Leu Pro Leu Tyr

340 345 350

Cys Ser Gly Gly Leu Arg Phe Phe Trp Asp Asn Lys Phe Asp His Ala

355 360 365

Met Val Ala Phe Leu Asp Cys Val Gln Gln Phe Lys Glu Glu Val Glu

370 375 380

Lys Gly Glu Thr Arg Phe Cys Leu Pro Tyr Arg Met Asp Val Glu Lys

385 390 395 400

Gly Lys Ile Glu Asp Thr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Ile Lys

405 410 415

Thr Gln Phe Asn Ser Glu Glu Gln Trp Thr Lys Ala Leu Lys Phe Met

420 425 430

Leu Thr Asn Leu Lys Trp Gly Leu Ala Trp Val Ser Ser Gln Phe Tyr

435 440 445

Asn Lys

450

<210> 79

<211> 1077

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hERdj3

<400> 79

atggctccgc agaacctgag caccttttgc ctgttgctgc tatacctcat cggggcggtg 60

attgccggac gagatttcta taagatcttg ggggtgcctc gaagtgcctc tataaaggat 120

attaaaaagg cctataggaa actagccctg cagcttcatc ccgaccggaa ccctgatgat 180

ccacaagccc aggagaaatt ccaggatctg ggtgctgctt atgaggttct gtcagatagt 240

gagaaacgga aacagtacga tacttatggt gaagaaggat taaaagatgg tcatcagagc 300

tcccatggag acattttttc acacttcttt ggggattttg gtttcatgtt tggaggaacc 360

cctcgtcagc aagacagaaa tattccaaga ggaagtgata ttattgtaga tctagaagtc 420

actttggaag aagtatatgc aggaaatttt gtggaagtag ttagaaacaa acctgtggca 480

aggcaggctc ctggcaaacg gaagtgcaat tgtcggcaag agatgcggac cacccagctg 540

ggccctgggc gcttccaaat gacccaggag gtggtctgcg acgaatgccc taatgtcaaa 600

ctagtgaatg aagaacgaac gctggaagta gaaatagagc ctggggtgag agacggcatg 660

gagtacccct ttattggaga aggtgagcct cacgtggatg gggagcctgg agatttacgg 720

ttccgaatca aagttgtcaa gcacccaata tttgaaagga gaggagatga tttgtacaca 780

aatgtgacaa tctcattagt tgagtcactg gttggctttg agatggatat tactcacttg 840

gatggtcaca aggtacatat ttcccgggat aagatcacca ggccaggagc gaagctatgg 900

aagaaagggg aagggctccc caactttgac aacaacaata tcaagggctc tttgataatc 960

acttttgatg tggattttcc aaaagaacag ttaacagagg aagcgagaga aggtatcaaa 1020

cagctactga aacaagggtc agtgcagaag gtatacaatg gactgcaagg atattga 1077

<210> 80

<211> 358

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hERdj3

<400> 80

Met Ala Pro Gln Asn Leu Ser Thr Phe Cys Leu Leu Leu Leu Tyr Leu

1 5 10 15

Ile Gly Ala Val Ile Ala Gly Arg Asp Phe Tyr Lys Ile Leu Gly Val

20 25 30

Pro Arg Ser Ala Ser Ile Lys Asp Ile Lys Lys Ala Tyr Arg Lys Leu

35 40 45

Ala Leu Gln Leu His Pro Asp Arg Asn Pro Asp Asp Pro Gln Ala Gln

50 55 60

Glu Lys Phe Gln Asp Leu Gly Ala Ala Tyr Glu Val Leu Ser Asp Ser

65 70 75 80

Glu Lys Arg Lys Gln Tyr Asp Thr Tyr Gly Glu Glu Gly Leu Lys Asp

85 90 95

Gly His Gln Ser Ser His Gly Asp Ile Phe Ser His Phe Phe Gly Asp

100 105 110

Phe Gly Phe Met Phe Gly Gly Thr Pro Arg Gln Gln Asp Arg Asn Ile

115 120 125

Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ile Val Asp Leu Glu Val Thr Leu Glu Glu

130 135 140

Val Tyr Ala Gly Asn Phe Val Glu Val Val Arg Asn Lys Pro Val Ala

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Lys Cys Asn Cys Arg Gln Glu Met Arg

165 170 175

Thr Thr Gln Leu Gly Pro Gly Arg Phe Gln Met Thr Gln Glu Val Val

180 185 190

Cys Asp Glu Cys Pro Asn Val Lys Leu Val Asn Glu Glu Arg Thr Leu

195 200 205

Glu Val Glu Ile Glu Pro Gly Val Arg Asp Gly Met Glu Tyr Pro Phe

210 215 220

Ile Gly Glu Gly Glu Pro His Val Asp Gly Glu Pro Gly Asp Leu Arg

225 230 235 240

Phe Arg Ile Lys Val Val Lys His Pro Ile Phe Glu Arg Arg Gly Asp

245 250 255

Asp Leu Tyr Thr Asn Val Thr Ile Ser Leu Val Glu Ser Leu Val Gly

260 265 270

Phe Glu Met Asp Ile Thr His Leu Asp Gly His Lys Val His Ile Ser

275 280 285

Arg Asp Lys Ile Thr Arg Pro Gly Ala Lys Leu Trp Lys Lys Gly Glu

290 295 300

Gly Leu Pro Asn Phe Asp Asn Asn Asn Ile Lys Gly Ser Leu Ile Ile

305 310 315 320

Thr Phe Asp Val Asp Phe Pro Lys Glu Gln Leu Thr Glu Glu Ala Arg

325 330 335

Glu Gly Ile Lys Gln Leu Leu Lys Gln Gly Ser Val Gln Lys Val Tyr

340 345 350

Asn Gly Leu Gln Gly Tyr

355

<210> 81

<211> 1764

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> CHO_AGE

<400> 81

atgaaaggaa ttctgtgggg agcgttttgt gggaaagcta atgagctgag gcagcgcctg 60

gagctgaaag aaaagggcag gcacgtggtg ctggaggcca cagagaatga ggtggagggc 120

aaaggcggca tgcttctgag ctcaggacag gcctgttgtg aggagaaggg cctggatgct 180

gaggacggtg gtggggacag caatgacctc agcagcgtca gcgagaccac agacagcaca 240

gatgtcaaag acagctcaga gacctctctg actctgcctc ctagagcctc accctgccct 300

gcaggctttt ggattcttga aactggagct agccaaagac agtttcaggc ctggtttact 360

gcggaggagg gtccgctgcc accttcgcct ccttttggcc ctgaactgac ttgcagatgg 420

agcagtctag aacagctaaa ggacatcttg gcgctcggag cacagcctca ctgggtccac 480

aagctccaag gcttctggtt tgttgaggtt atcttgtcag caaaaagatt acaggacatg 540

gagaaggagc gggcttcact gcaggcctgg aaggatcgtg tggcaaagga acttgacagc 600

gtggtcgctt tctggctgca gcactcccat gatcaggaac acgggggttt cttcacatgc 660

cttgcccgca atgggcaggt ctatgatgac cttaaatata tctggctgca ggggagacag 720

gtatggatgt attgtcgctt gtaccgcaat tttgagcgct tccgccgcgc tgagcttcta 780

gatgctgcaa aagcaggtgg tgagtttttg ctgcgttttg cacgggtggc accgcctgcc 840

aagaagtgtg cctttgtgtt gactcgggac ggccgtccag tgaaggtgca gcggaccatt 900

ttcagcgagt gtttctacac cattgctatg aatgagcttt ggagagtaac aaaggaatca 960

cgttaccaga atgaagctgt ggagatgatg gaccagattg tccactgggt acgggaagac 1020

ccagctgggc taggccggcc tcagctctca gggaccccgg atgcagagtc catggcagtg 1080

cccatgatgc tgatgaatct ggtggaccag ctttccgagg aagatgaggc actgacaaag 1140

aaatatgcag agctatggga ctggtgtgcc cagaggattc ttcagcatgt gcagagggat 1200

ggaaaagcta tactagagaa tgtatctcat gatggcaagg aactcactgg ttgccttgga 1260

agacatcaga acccaggcca cgcaatagag gctggctggt tcctgctcca gtatgcccgc 1320

aagaaaggtg acgccaaact tcgtgcacac atcatcgaca agtttctctt gttgcctttc 1380

cgctctggat gggacgctga gcatgggggc ctcttctact tccaggatgt tgatggtttc 1440

tgccccaccc agctggagtg ggacatgaag ctgtggtggc cacacaatga agccatgatt 1500

tccttcctaa tgggttacag ggacagtggt gacccagcct tgctacaaat cttcaatcag 1560

gtggctgagt acaccttcaa gcattttcat gatcccgaga acggcgaatg gttcggctat 1620

ctgaaccgag agggcaaggt ggccctcaac tttaagggag gcccatttaa aggctgcttc 1680

cacgtgccgc ggtgcctggc catgtgcgag aagatgttgg gagacctgct ccaccgtggg 1740

agcgcccctg ctggctcgaa ataa 1764

<210> 82

<211> 587

<212> ПРТ

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CHO_AGE

<400> 82

Met Lys Gly Ile Leu Trp Gly Ala Phe Cys Gly Lys Ala Asn Glu Leu

1 5 10 15

Arg Gln Arg Leu Glu Leu Lys Glu Lys Gly Arg His Val Val Leu Glu

20 25 30

Ala Thr Glu Asn Glu Val Glu Gly Lys Gly Gly Met Leu Leu Ser Ser

35 40 45

Gly Gln Ala Cys Cys Glu Glu Lys Gly Leu Asp Ala Glu Asp Gly Gly

50 55 60

Gly Asp Ser Asn Asp Leu Ser Ser Val Ser Glu Thr Thr Asp Ser Thr

65 70 75 80

Asp Val Lys Asp Ser Ser Glu Thr Ser Leu Thr Leu Pro Pro Arg Ala

85 90 95

Ser Pro Cys Pro Ala Gly Phe Trp Ile Leu Glu Thr Gly Ala Ser Gln

100 105 110

Arg Gln Phe Gln Ala Trp Phe Thr Ala Glu Glu Gly Pro Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Pro Pro Phe Gly Pro Glu Leu Thr Cys Arg Trp Ser Ser Leu Glu

130 135 140

Gln Leu Lys Asp Ile Leu Ala Leu Gly Ala Gln Pro His Trp Val His

145 150 155 160

Lys Leu Gln Gly Phe Trp Phe Val Glu Val Ile Leu Ser Ala Lys Arg

165 170 175

Leu Gln Asp Met Glu Lys Glu Arg Ala Ser Leu Gln Ala Trp Lys Asp

180 185 190

Arg Val Ala Lys Glu Leu Asp Ser Val Val Ala Phe Trp Leu Gln His

195 200 205

Ser His Asp Gln Glu His Gly Gly Phe Phe Thr Cys Leu Ala Arg Asn

210 215 220

Gly Gln Val Tyr Asp Asp Leu Lys Tyr Ile Trp Leu Gln Gly Arg Gln

225 230 235 240

Val Trp Met Tyr Cys Arg Leu Tyr Arg Asn Phe Glu Arg Phe Arg Arg

245 250 255

Ala Glu Leu Leu Asp Ala Ala Lys Ala Gly Gly Glu Phe Leu Leu Arg

260 265 270

Phe Ala Arg Val Ala Pro Pro Ala Lys Lys Cys Ala Phe Val Leu Thr

275 280 285

Arg Asp Gly Arg Pro Val Lys Val Gln Arg Thr Ile Phe Ser Glu Cys

290 295 300

Phe Tyr Thr Ile Ala Met Asn Glu Leu Trp Arg Val Thr Lys Glu Ser

305 310 315 320

Arg Tyr Gln Asn Glu Ala Val Glu Met Met Asp Gln Ile Val His Trp

325 330 335

Val Arg Glu Asp Pro Ala Gly Leu Gly Arg Pro Gln Leu Ser Gly Thr

340 345 350

Pro Asp Ala Glu Ser Met Ala Val Pro Met Met Leu Met Asn Leu Val

355 360 365

Asp Gln Leu Ser Glu Glu Asp Glu Ala Leu Thr Lys Lys Tyr Ala Glu

370 375 380

Leu Trp Asp Trp Cys Ala Gln Arg Ile Leu Gln His Val Gln Arg Asp

385 390 395 400

Gly Lys Ala Ile Leu Glu Asn Val Ser His Asp Gly Lys Glu Leu Thr

405 410 415

Gly Cys Leu Gly Arg His Gln Asn Pro Gly His Ala Ile Glu Ala Gly

420 425 430

Trp Phe Leu Leu Gln Tyr Ala Arg Lys Lys Gly Asp Ala Lys Leu Arg

435 440 445

Ala His Ile Ile Asp Lys Phe Leu Leu Leu Pro Phe Arg Ser Gly Trp

450 455 460

Asp Ala Glu His Gly Gly Leu Phe Tyr Phe Gln Asp Val Asp Gly Phe

465 470 475 480

Cys Pro Thr Gln Leu Glu Trp Asp Met Lys Leu Trp Trp Pro His Asn

485 490 495

Glu Ala Met Ile Ser Phe Leu Met Gly Tyr Arg Asp Ser Gly Asp Pro

500 505 510

Ala Leu Leu Gln Ile Phe Asn Gln Val Ala Glu Tyr Thr Phe Lys His

515 520 525

Phe His Asp Pro Glu Asn Gly Glu Trp Phe Gly Tyr Leu Asn Arg Glu

530 535 540

Gly Lys Val Ala Leu Asn Phe Lys Gly Gly Pro Phe Lys Gly Cys Phe

545 550 555 560

His Val Pro Arg Cys Leu Ala Met Cys Glu Lys Met Leu Gly Asp Leu

565 570 575

Leu His Arg Gly Ser Ala Pro Ala Gly Ser Lys

580 585

<210> 83

<211> 1818

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hWip1

<400> 83

atggcggggc tgtactcgct gggagtgagc gtcttctccg accagggcgg gaggaagtac 60

atggaggacg ttactcaaat cgttgtggag cccgaaccga cggctgaaga aaagccctcg 120

ccgcggcggt cgctgtctca gccgttgcct ccgcggccgt cgccggccgc ccttcccggc 180

ggcgaagtct cggggaaagg cccagcggtg gcagcccgag aggctcgcga ccctctcccg 240

gacgccgggg cctcgccggc acctagccgc tgctgccgcc gccgttcctc cgtggccttt 300

ttcgccgtgt gcgacgggca cggcgggcgg gaggcggcac agtttgcccg ggagcacttg 360

tggggtttca tcaagaagca gaagggtttc acctcgtccg agccggctaa ggtttgcgct 420

gccatccgca aaggctttct cgcttgtcac cttgccatgt ggaagaaact ggcggaatgg 480

ccaaagacta tgacgggtct tcctagcaca tcagggacaa ctgccagtgt ggtcatcatt 540

cggggcatga agatgtatgt agctcacgta ggtgactcag gggtggttct tggaattcag 600

gatgacccga aggatgactt tgtcagagct gtggaggtga cacaggacca taagccagaa 660

cttcccaagg aaagagaacg aatcgaagga cttggtggga gtgtaatgaa caagtctggg 720

gtgaatcgtg tagtttggaa acgacctcga ctcactcaca atggacctgt tagaaggagc 780

acagttattg accagattcc ttttctggca gtagcaagag cacttggtga tttgtggagc 840

tatgatttct tcagtggtga atttgtggtg tcacctgaac cagacacaag tgtccacact 900

cttgaccctc agaagcacaa gtatattata ttggggagtg atggactttg gaatatgatt 960

ccaccacaag atgccatctc aatgtgccag gaccaagagg agaaaaaata cctgatgggt 1020

gagcatggac aatcttgtgc caaaatgctt gtgaatcgag cattgggccg ctggaggcag 1080

cgtatgctcc gagcagataa cactagtgcc atagtaatct gcatctctcc agaagtggac 1140

aatcagggaa actttaccaa tgaagatgag ttatacctga acctgactga cagcccttcc 1200

tataatagtc aagaaacctg tgtgatgact ccttccccat gttctacacc accagtcaag 1260

tcactggagg aggatccatg gccaagggtg aattctaagg accatatacc tgccctggtt 1320

cgtagcaatg ccttctcaga gaatttttta gaggtttcag ctgagatagc tcgagagaat 1380

gtccaaggtg tagtcatacc ctcaaaagat ccagaaccac ttgaagaaaa ttgcgctaaa 1440

gccctgactt taaggataca tgattctttg aataatagcc ttccaattgg ccttgtgcct 1500

actaattcaa caaacactgt catggaccaa aaaaatttga agatgtcaac tcctggccaa 1560

atgaaagccc aagaaattga aagaacccct ccaacaaact ttaaaaggac attagaagag 1620

tccaattctg gccccctgat gaagaagcat agacgaaatg gcttaagtcg aagtagtggt 1680

gctcagcctg caagtctccc cacaacctca cagcgaaaga actctgttaa actcaccatg 1740

cgacgcagac ttaggggcca gaagaaaatt ggaaatcctt tacttcatca acacaggaaa 1800

actgtttgtg tttgctga 1818

<210> 84

<211> 605

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hWip1

<400> 84

Met Ala Gly Leu Tyr Ser Leu Gly Val Ser Val Phe Ser Asp Gln Gly

1 5 10 15

Gly Arg Lys Tyr Met Glu Asp Val Thr Gln Ile Val Val Glu Pro Glu

20 25 30

Pro Thr Ala Glu Glu Lys Pro Ser Pro Arg Arg Ser Leu Ser Gln Pro

35 40 45

Leu Pro Pro Arg Pro Ser Pro Ala Ala Leu Pro Gly Gly Glu Val Ser

50 55 60

Gly Lys Gly Pro Ala Val Ala Ala Arg Glu Ala Arg Asp Pro Leu Pro

65 70 75 80

Asp Ala Gly Ala Ser Pro Ala Pro Ser Arg Cys Cys Arg Arg Arg Ser

85 90 95

Ser Val Ala Phe Phe Ala Val Cys Asp Gly His Gly Gly Arg Glu Ala

100 105 110

Ala Gln Phe Ala Arg Glu His Leu Trp Gly Phe Ile Lys Lys Gln Lys

115 120 125

Gly Phe Thr Ser Ser Glu Pro Ala Lys Val Cys Ala Ala Ile Arg Lys

130 135 140

Gly Phe Leu Ala Cys His Leu Ala Met Trp Lys Lys Leu Ala Glu Trp

145 150 155 160

Pro Lys Thr Met Thr Gly Leu Pro Ser Thr Ser Gly Thr Thr Ala Ser

165 170 175

Val Val Ile Ile Arg Gly Met Lys Met Tyr Val Ala His Val Gly Asp

180 185 190

Ser Gly Val Val Leu Gly Ile Gln Asp Asp Pro Lys Asp Asp Phe Val

195 200 205

Arg Ala Val Glu Val Thr Gln Asp His Lys Pro Glu Leu Pro Lys Glu

210 215 220

Arg Glu Arg Ile Glu Gly Leu Gly Gly Ser Val Met Asn Lys Ser Gly

225 230 235 240

Val Asn Arg Val Val Trp Lys Arg Pro Arg Leu Thr His Asn Gly Pro

245 250 255

Val Arg Arg Ser Thr Val Ile Asp Gln Ile Pro Phe Leu Ala Val Ala

260 265 270

Arg Ala Leu Gly Asp Leu Trp Ser Tyr Asp Phe Phe Ser Gly Glu Phe

275 280 285

Val Val Ser Pro Glu Pro Asp Thr Ser Val His Thr Leu Asp Pro Gln

290 295 300

Lys His Lys Tyr Ile Ile Leu Gly Ser Asp Gly Leu Trp Asn Met Ile

305 310 315 320

Pro Pro Gln Asp Ala Ile Ser Met Cys Gln Asp Gln Glu Glu Lys Lys

325 330 335

Tyr Leu Met Gly Glu His Gly Gln Ser Cys Ala Lys Met Leu Val Asn

340 345 350

Arg Ala Leu Gly Arg Trp Arg Gln Arg Met Leu Arg Ala Asp Asn Thr

355 360 365

Ser Ala Ile Val Ile Cys Ile Ser Pro Glu Val Asp Asn Gln Gly Asn

370 375 380

Phe Thr Asn Glu Asp Glu Leu Tyr Leu Asn Leu Thr Asp Ser Pro Ser

385 390 395 400

Tyr Asn Ser Gln Glu Thr Cys Val Met Thr Pro Ser Pro Cys Ser Thr

405 410 415

Pro Pro Val Lys Ser Leu Glu Glu Asp Pro Trp Pro Arg Val Asn Ser

420 425 430

Lys Asp His Ile Pro Ala Leu Val Arg Ser Asn Ala Phe Ser Glu Asn

435 440 445

Phe Leu Glu Val Ser Ala Glu Ile Ala Arg Glu Asn Val Gln Gly Val

450 455 460

Val Ile Pro Ser Lys Asp Pro Glu Pro Leu Glu Glu Asn Cys Ala Lys

465 470 475 480

Ala Leu Thr Leu Arg Ile His Asp Ser Leu Asn Asn Ser Leu Pro Ile

485 490 495

Gly Leu Val Pro Thr Asn Ser Thr Asn Thr Val Met Asp Gln Lys Asn

500 505 510

Leu Lys Met Ser Thr Pro Gly Gln Met Lys Ala Gln Glu Ile Glu Arg

515 520 525

Thr Pro Pro Thr Asn Phe Lys Arg Thr Leu Glu Glu Ser Asn Ser Gly

530 535 540

Pro Leu Met Lys Lys His Arg Arg Asn Gly Leu Ser Arg Ser Ser Gly

545 550 555 560

Ala Gln Pro Ala Ser Leu Pro Thr Thr Ser Gln Arg Lys Asn Ser Val

565 570 575

Lys Leu Thr Met Arg Arg Arg Leu Arg Gly Gln Lys Lys Ile Gly Asn

580 585 590

Pro Leu Leu His Gln His Arg Lys Thr Val Cys Val Cys

595 600 605

<210> 85

<211> 741

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hRTP4

<400> 85

atggttgtag atttctggac ttgggagcag acatttcaag aactaatcca agaggcaaaa 60

ccccgggcca catggacgct gaagttggat ggcaaccttc agctagactg cctggctcaa 120

gggtggaagc aataccaaca gagagcattt ggctggttcc ggtgttcctc ctgccagcga 180

agttgggctt ccgcccaagt gcagattctg tgccacacgt actgggagca ctggacatcc 240

cagggtcagg tgcgtatgag gctctttggc caaaggtgcc agaagtgctc ctggtcccaa 300

tatgagatgc ctgagttctc ctcggatagc accatgagga ttctgagcaa cctggtgcag 360

catatactga agaaatacta tggaaatggc acgaggaagt ctccagaaat gccagtaatc 420

ctggaagtgt ccctggaagg atcccatgac acagccaatt gtgaggcatg cactttgggc 480

atctgtggac agggcttaaa aagctgcatg acaaagccgt ccaaatccct actcccccac 540

ctaaagactg ggaattcctc acctggaatt ggtgctgtgt acctcgcaaa ccaagccaag 600

aaccagtcag ctgaggcaaa agaggctaag gggagtgggt atgagaaatt agggcccagt 660

cgagacccag atccactgaa catctgtgtc tttattttgc tgcttgtatt tattgtagtc 720

aaatgcttta catcagaatg a 741

<210> 86

<211> 246

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hRTP4

<400> 86

Met Val Val Asp Phe Trp Thr Trp Glu Gln Thr Phe Gln Glu Leu Ile

1 5 10 15

Gln Glu Ala Lys Pro Arg Ala Thr Trp Thr Leu Lys Leu Asp Gly Asn

20 25 30

Leu Gln Leu Asp Cys Leu Ala Gln Gly Trp Lys Gln Tyr Gln Gln Arg

35 40 45

Ala Phe Gly Trp Phe Arg Cys Ser Ser Cys Gln Arg Ser Trp Ala Ser

50 55 60

Ala Gln Val Gln Ile Leu Cys His Thr Tyr Trp Glu His Trp Thr Ser

65 70 75 80

Gln Gly Gln Val Arg Met Arg Leu Phe Gly Gln Arg Cys Gln Lys Cys

85 90 95

Ser Trp Ser Gln Tyr Glu Met Pro Glu Phe Ser Ser Asp Ser Thr Met

100 105 110

Arg Ile Leu Ser Asn Leu Val Gln His Ile Leu Lys Lys Tyr Tyr Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Arg Lys Ser Pro Glu Met Pro Val Ile Leu Glu Val Ser

130 135 140

Leu Glu Gly Ser His Asp Thr Ala Asn Cys Glu Ala Cys Thr Leu Gly

145 150 155 160

Ile Cys Gly Gln Gly Leu Lys Ser Cys Met Thr Lys Pro Ser Lys Ser

165 170 175

Leu Leu Pro His Leu Lys Thr Gly Asn Ser Ser Pro Gly Ile Gly Ala

180 185 190

Val Tyr Leu Ala Asn Gln Ala Lys Asn Gln Ser Ala Glu Ala Lys Glu

195 200 205

Ala Lys Gly Ser Gly Tyr Glu Lys Leu Gly Pro Ser Arg Asp Pro Asp

210 215 220

Pro Leu Asn Ile Cys Val Phe Ile Leu Leu Leu Val Phe Ile Val Val

225 230 235 240

Lys Cys Phe Thr Ser Glu

245

<210> 87

<211> 765

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hREEP2

<400> 87

atggtgtcct ggatcatctc tcgcctggtg gtgctcatct ttggcaccct gtacccagcc 60

tattcttcct acaaggccgt gaagacaaaa aacgtgaagg aatatgtgaa atggatgatg 120

tactggatcg tctttgcctt cttcaccacg gccgagacgc tcacggatat agtgctctcc 180

tggttcccct tctactttga actgaagatc gccttcgtga tatggctgct gtccccttac 240

accaagggct ccagcgtgct ctaccgcaag ttcgtgcacc caacgctgtc caacaaggag 300

aaggagatcg acgagtacat cacgcaggcc cgagacaaga gctatgagac catgatgagg 360

gtgggcaaga ggggcctgaa ccttgccgcc aatgctgcag tcacagctgc cgccaagggc 420

cagggggtgc tgtcagagaa gctccgcagc ttcagcatgc aggacctgac cctgatccgg 480

gacgaggacg cactgcccct gcagaggcct gacggccgcc tccgacccag ccctggcagc 540

ctcctggaca ccatcgagga cttaggagat gaccctgccc tgagtctaag gtccagcaca 600

aacccggcag attcccggac agaggcttct gaggatgaca tgggagacaa agctcccaag 660

agggccaaac ccatcaaaaa agcgcccaaa gctgagccac tggcttccaa gacactgaag 720

acccggccca agaagaagac ctctggcggg ggcgactcag cttga 765

<210> 88

<211> 254

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hREEP2

<400> 88

Met Val Ser Trp Ile Ile Ser Arg Leu Val Val Leu Ile Phe Gly Thr

1 5 10 15

Leu Tyr Pro Ala Tyr Ser Ser Tyr Lys Ala Val Lys Thr Lys Asn Val

20 25 30

Lys Glu Tyr Val Lys Trp Met Met Tyr Trp Ile Val Phe Ala Phe Phe

35 40 45

Thr Thr Ala Glu Thr Leu Thr Asp Ile Val Leu Ser Trp Phe Pro Phe

50 55 60

Tyr Phe Glu Leu Lys Ile Ala Phe Val Ile Trp Leu Leu Ser Pro Tyr

65 70 75 80

Thr Lys Gly Ser Ser Val Leu Tyr Arg Lys Phe Val His Pro Thr Leu

85 90 95

Ser Asn Lys Glu Lys Glu Ile Asp Glu Tyr Ile Thr Gln Ala Arg Asp

100 105 110

Lys Ser Tyr Glu Thr Met Met Arg Val Gly Lys Arg Gly Leu Asn Leu

115 120 125

Ala Ala Asn Ala Ala Val Thr Ala Ala Ala Lys Gly Gln Gly Val Leu

130 135 140

Ser Glu Lys Leu Arg Ser Phe Ser Met Gln Asp Leu Thr Leu Ile Arg

145 150 155 160

Asp Glu Asp Ala Leu Pro Leu Gln Arg Pro Asp Gly Arg Leu Arg Pro

165 170 175

Ser Pro Gly Ser Leu Leu Asp Thr Ile Glu Asp Leu Gly Asp Asp Pro

180 185 190

Ala Leu Ser Leu Arg Ser Ser Thr Asn Pro Ala Asp Ser Arg Thr Glu

195 200 205

Ala Ser Glu Asp Asp Met Gly Asp Lys Ala Pro Lys Arg Ala Lys Pro

210 215 220

Ile Lys Lys Ala Pro Lys Ala Glu Pro Leu Ala Ser Lys Thr Leu Lys

225 230 235 240

Thr Arg Pro Lys Lys Lys Thr Ser Gly Gly Gly Asp Ser Ala

245 250

<210> 89

<211> 783

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hDPM1

<400> 89

atggcctcct tggaagtcag tcgtagtcct cgcaggtctc ggcgggagct ggaagtgcgc 60

agtccacgac agaacaaata ttcggtgctt ttacctacct acaacgagcg cgagaacctg 120

ccgctcatcg tgtggctgct ggtgaaaagc ttctccgaga gtggaatcaa ctatgaaatt 180

ataatcatag atgatggaag cccagatgga acaagggatg ttgctgaaca gttggagaag 240

atctatgggt cagacagaat tcttctaaga ccacgagaga aaaagttggg actaggaact 300

gcatatattc atggaatgaa acatgccaca ggaaactaca tcattattat ggatgctgat 360

ctctcacacc atccaaaatt tattcctgaa tttattagga agcaaaagga gggtaatttt 420

gatattgtct ctggaactcg ctacaaagga aatggaggtg tatatggctg ggatttgaaa 480

agaaaaataa tcagccgtgg ggccaatttt ttaactcaga tcttgctgag accaggagca 540

tctgatttaa caggaagttt cagattatac cgaaaagaag ttctagagaa attaatagaa 600

aaatgtgttt ctaaaggcta cgtcttccag atggagatga ttgttcgggc aagacagttg 660

aattatacta ttggcgaggt tccaatatca tttgtggatc gtgtttatgg tgaatccaag 720

ttgggaggaa atgaaatagt atctttcttg aaaggattat tgactctttt tgctactaca 780

taa 783

<210> 90

<211> 260

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hDPM1

<400> 90

Met Ala Ser Leu Glu Val Ser Arg Ser Pro Arg Arg Ser Arg Arg Glu

1 5 10 15

Leu Glu Val Arg Ser Pro Arg Gln Asn Lys Tyr Ser Val Leu Leu Pro

20 25 30

Thr Tyr Asn Glu Arg Glu Asn Leu Pro Leu Ile Val Trp Leu Leu Val

35 40 45

Lys Ser Phe Ser Glu Ser Gly Ile Asn Tyr Glu Ile Ile Ile Ile Asp

50 55 60

Asp Gly Ser Pro Asp Gly Thr Arg Asp Val Ala Glu Gln Leu Glu Lys

65 70 75 80

Ile Tyr Gly Ser Asp Arg Ile Leu Leu Arg Pro Arg Glu Lys Lys Leu

85 90 95

Gly Leu Gly Thr Ala Tyr Ile His Gly Met Lys His Ala Thr Gly Asn

100 105 110

Tyr Ile Ile Ile Met Asp Ala Asp Leu Ser His His Pro Lys Phe Ile

115 120 125

Pro Glu Phe Ile Arg Lys Gln Lys Glu Gly Asn Phe Asp Ile Val Ser

130 135 140

Gly Thr Arg Tyr Lys Gly Asn Gly Gly Val Tyr Gly Trp Asp Leu Lys

145 150 155 160

Arg Lys Ile Ile Ser Arg Gly Ala Asn Phe Leu Thr Gln Ile Leu Leu

165 170 175

Arg Pro Gly Ala Ser Asp Leu Thr Gly Ser Phe Arg Leu Tyr Arg Lys

180 185 190

Glu Val Leu Glu Lys Leu Ile Glu Lys Cys Val Ser Lys Gly Tyr Val

195 200 205

Phe Gln Met Glu Met Ile Val Arg Ala Arg Gln Leu Asn Tyr Thr Ile

210 215 220

Gly Glu Val Pro Ile Ser Phe Val Asp Arg Val Tyr Gly Glu Ser Lys

225 230 235 240

Leu Gly Gly Asn Glu Ile Val Ser Phe Leu Lys Gly Leu Leu Thr Leu

245 250 255

Phe Ala Thr Thr

260

<210> 91

<211> 2109

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> hDRiP78

<400> 91

atggcccaga agcaccccgg agaaagaggg ttgtatggag cccaccacag tggtggtgcc 60

tccctcagga ctttaggacc ctccgtggac cctgaaatac cttcattctc aggactcagg 120

gactcagcag ggactgctcc taatggtacc cgctgcctca cagagcactc tggtcctaag 180

cacacacagc acccaaaccc agcccattgg ttggacccaa gccatggccc cccagggggt 240

ccaggaccac ctagagatgc agaggaccct gatcagagtg agacgtcttc agaagaagaa 300

tcaggagtgg accaggaact ctcaaaagaa aacgagactg ggaaccagaa ggatgggaac 360

tcttttcttt ccattccatc tgcttgcaac tgccagggaa cacctggaat tccagaaggg 420

ccttactctg agggaggaaa tggttcttct agcaactttt gccaccactg tacctctcca 480

gctttggggg aagatgagtt ggaagaggaa tatgatgatg aagaatctct caagttcccc 540

agtgattttt cacgtgtgtc cagcggaaag aaacccccat cccggagaca gcggcaccgc 600

tttccaacga aggaggatac tcgggagggt ggacgtaggg atcccaggtc ccctggtcga 660

catcggctgg gtcggaaacg aagtcaggca gataagcgca aaggcctggg attgtgggga 720

gccgaggaac tatgtcaact tggacaggca ggcttttggt ggctgattga actgctggta 780

ttggtgggag agtacgtaga aacttgtggc catctcatct atgcctgcag gcaactgaaa 840

agcagtgatt tggacctttt tcgagtttgg atgggagtgt ggacagggcg gttagggggc 900

tgggcccagg tcatgtttca gtttctaagc caggggtttt actgtggagt aggactgttt 960

actcgttttc ttaagctgct gggtgctttg ctgctcctgg ctctggccct ctttttgggc 1020

tttctacagt tgggatggcg gtttctggtg ggactaggtg accggttagg ctggagggat 1080

aaggctacct ggctcttctc ttggctggat tctccagcct tgcagcgttg cttgactctg 1140

ctgagagata gcaggccatg gcagcggctg gtaagaatag ttcagtgggg ctggctggag 1200

ttgccttggg tcaagcagaa tattaatagg caggggaatg cacctgtagc tagtgggcgc 1260

tactgccagc ctgaagagga agtggctcga ctcttgacca tggctggggt tcctgaggat 1320

gagctaaacc ctttccatgt actgggggtt gaggccacag catcagatgt tgaactgaag 1380

aaggcctata gacagctggc agtgatggtt catcctgaca aaaatcatca tccccgggct 1440

gaggaggcct tcaaggtttt gcgagcagct tgggacattg tcagcaatgc tgaaaagcga 1500

aaggagtatg agatgaaacg aatggcagag aatgagctga gccggtcagt aaatgagttt 1560

ctgtccaagc tgcaagatga cctcaaggag gcaatgaata ctatgatgtg tagccgatgc 1620

caaggaaagc ataggaggtt tgaaatggac cgggaaccta agagtgccag atactgtgct 1680

gagtgtaata ggctgcatcc tgctgaggaa ggagactttt gggcagagtc aagcatgttg 1740

ggcctcaaga tcacctactt tgcactgatg gatggaaagg tgtatgacat cacagagtgg 1800

gctggatgcc agcgtgtagg tatctcccca gatacccaca gagtccccta tcacatctca 1860

tttggttctc ggattccagg caccagaggg cggcagagag ccaccccaga tgcccctcct 1920

gctgatcttc aggatttctt gagtcggatc tttcaagtac ccccagggca gatgcccaat 1980

gggaacttct ttgcagctcc tcagcctgcc cctggagccg ctgcagcctc taagcccaac 2040

agcacagtac ccaagggaga agccaaacct aagcggcgga agaaagtgag gaggcccttc 2100

caacgttga 2109

<210> 92

<211> 702

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> hDRiP78

<400> 92

Met Ala Gln Lys His Pro Gly Glu Arg Gly Leu Tyr Gly Ala His His

1 5 10 15

Ser Gly Gly Ala Ser Leu Arg Thr Leu Gly Pro Ser Val Asp Pro Glu

20 25 30

Ile Pro Ser Phe Ser Gly Leu Arg Asp Ser Ala Gly Thr Ala Pro Asn

35 40 45

Gly Thr Arg Cys Leu Thr Glu His Ser Gly Pro Lys His Thr Gln His

50 55 60

Pro Asn Pro Ala His Trp Leu Asp Pro Ser His Gly Pro Pro Gly Gly

65 70 75 80

Pro Gly Pro Pro Arg Asp Ala Glu Asp Pro Asp Gln Ser Glu Thr Ser

85 90 95

Ser Glu Glu Glu Ser Gly Val Asp Gln Glu Leu Ser Lys Glu Asn Glu

100 105 110

Thr Gly Asn Gln Lys Asp Gly Asn Ser Phe Leu Ser Ile Pro Ser Ala

115 120 125

Cys Asn Cys Gln Gly Thr Pro Gly Ile Pro Glu Gly Pro Tyr Ser Glu

130 135 140

Gly Gly Asn Gly Ser Ser Ser Asn Phe Cys His His Cys Thr Ser Pro

145 150 155 160

Ala Leu Gly Glu Asp Glu Leu Glu Glu Glu Tyr Asp Asp Glu Glu Ser

165 170 175

Leu Lys Phe Pro Ser Asp Phe Ser Arg Val Ser Ser Gly Lys Lys Pro

180 185 190

Pro Ser Arg Arg Gln Arg His Arg Phe Pro Thr Lys Glu Asp Thr Arg

195 200 205

Glu Gly Gly Arg Arg Asp Pro Arg Ser Pro Gly Arg His Arg Leu Gly

210 215 220

Arg Lys Arg Ser Gln Ala Asp Lys Arg Lys Gly Leu Gly Leu Trp Gly

225 230 235 240

Ala Glu Glu Leu Cys Gln Leu Gly Gln Ala Gly Phe Trp Trp Leu Ile

245 250 255

Glu Leu Leu Val Leu Val Gly Glu Tyr Val Glu Thr Cys Gly His Leu

260 265 270

Ile Tyr Ala Cys Arg Gln Leu Lys Ser Ser Asp Leu Asp Leu Phe Arg

275 280 285

Val Trp Met Gly Val Trp Thr Gly Arg Leu Gly Gly Trp Ala Gln Val

290 295 300

Met Phe Gln Phe Leu Ser Gln Gly Phe Tyr Cys Gly Val Gly Leu Phe

305 310 315 320

Thr Arg Phe Leu Lys Leu Leu Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ala

325 330 335

Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gln Leu Gly Trp Arg Phe Leu Val Gly Leu

340 345 350

Gly Asp Arg Leu Gly Trp Arg Asp Lys Ala Thr Trp Leu Phe Ser Trp

355 360 365

Leu Asp Ser Pro Ala Leu Gln Arg Cys Leu Thr Leu Leu Arg Asp Ser

370 375 380

Arg Pro Trp Gln Arg Leu Val Arg Ile Val Gln Trp Gly Trp Leu Glu

385 390 395 400

Leu Pro Trp Val Lys Gln Asn Ile Asn Arg Gln Gly Asn Ala Pro Val

405 410 415

Ala Ser Gly Arg Tyr Cys Gln Pro Glu Glu Glu Val Ala Arg Leu Leu

420 425 430

Thr Met Ala Gly Val Pro Glu Asp Glu Leu Asn Pro Phe His Val Leu

435 440 445

Gly Val Glu Ala Thr Ala Ser Asp Val Glu Leu Lys Lys Ala Tyr Arg

450 455 460

Gln Leu Ala Val Met Val His Pro Asp Lys Asn His His Pro Arg Ala

465 470 475 480

Glu Glu Ala Phe Lys Val Leu Arg Ala Ala Trp Asp Ile Val Ser Asn

485 490 495

Ala Glu Lys Arg Lys Glu Tyr Glu Met Lys Arg Met Ala Glu Asn Glu

500 505 510

Leu Ser Arg Ser Val Asn Glu Phe Leu Ser Lys Leu Gln Asp Asp Leu

515 520 525

Lys Glu Ala Met Asn Thr Met Met Cys Ser Arg Cys Gln Gly Lys His

530 535 540

Arg Arg Phe Glu Met Asp Arg Glu Pro Lys Ser Ala Arg Tyr Cys Ala

545 550 555 560

Glu Cys Asn Arg Leu His Pro Ala Glu Glu Gly Asp Phe Trp Ala Glu

565 570 575

Ser Ser Met Leu Gly Leu Lys Ile Thr Tyr Phe Ala Leu Met Asp Gly

580 585 590

Lys Val Tyr Asp Ile Thr Glu Trp Ala Gly Cys Gln Arg Val Gly Ile

595 600 605

Ser Pro Asp Thr His Arg Val Pro Tyr His Ile Ser Phe Gly Ser Arg

610 615 620

Ile Pro Gly Thr Arg Gly Arg Gln Arg Ala Thr Pro Asp Ala Pro Pro

625 630 635 640

Ala Asp Leu Gln Asp Phe Leu Ser Arg Ile Phe Gln Val Pro Pro Gly

645 650 655

Gln Met Pro Asn Gly Asn Phe Phe Ala Ala Pro Gln Pro Ala Pro Gly

660 665 670

Ala Ala Ala Ala Ser Lys Pro Asn Ser Thr Val Pro Lys Gly Glu Ala

675 680 685

Lys Pro Lys Arg Arg Lys Lys Val Arg Arg Pro Phe Gln Arg

690 695 700

<210> 93

<211> 1020

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad51

<400> 93

atggctatgc agatgcagct tgaagcaaat gcagatactt cagtggaaga agaaagcttt 60

ggtccacaac ctatttcacg gttagagcaa tgtggcataa gtgccaatga tgtgaagaaa 120

ttagaagaag ctggtttcca tacggtggag gctgttgctt atgcaccaaa gaaggaactc 180

ataaatatta agggaattag tgaagccaaa gcagacaaaa ttctggctga ggccgctaaa 240

ttagttccaa tgggtttcac cactgcaact gaatttcacc aaaggcgttc agaaatcata 300

cagattacta ctggctccaa agagcttgac aaactgcttc aaggtggaat tgagactgga 360

tctatcacag agatgtttgg agaattccga actgggaaga cacagatctg tcatacattg 420

gctgtaacat gccagcttcc cattgatcgt ggtggaggtg aaggaaaggc catgtacatt 480

gacaccgagg gtacgtttag gccagaacgg ctgctagcag tggctgagag gtatggtctg 540

tctggcagcg atgtcctaga taatgtagca tatgctcgag ggttcaacac agaccaccaa 600

acccagctcc tttatcaagc atcagccatg atggtagaat ccagatatgc actgcttatt 660

gtagacagtg ctactgccct ctacagaaca gactactcag gtcgaggaga gctttcagcc 720

aggcaaatgc atttggccag atttctgagg atgctgctgc gacttgctga tgagtttggt 780

gtagcagtgg taatcaccaa ccaggtagta gcccaagtgg atggagcagc catgttcact 840

gcagatccca aaaaacccat tggaggaaac atcattgccc atgcatcaac aaccaggctg 900

tacctgagga aaggaagagg ggagaccaga atctgcaaag tctatgactc tccctgtctc 960

cctgaagctg aagccatgtt tgccattaat gcagatggag taggagatgc caaggactga 1020

<210> 94

<211> 1053

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad51b

<400> 94

atgagcaaca agaaactaag acgagtaggt ttatcacaag agctgtgtga ccgtttgagc 60

agacatcaga ttgttaattg tcaggacttt ttaggtcttt ccccactgga acttatgaaa 120

gtgactggcc tgagttatgg aggtgtccag gagcttctgt atatggtcag cagggcctgt 180

gccccacaga tgcaaacagc ctatgatata aagatgcgga ggtctgctga actctcccca 240

gcgttcctgt ctactaccct ttctgctttg gacaaagccc tgcatggtgg tgtggcttgt 300

ggatcgctca cagagattac aggtccgcca ggttgtggga aaactcagtt ttgtataatg 360

atgagtgttt tagctacatt gcccaccaac atgggaggat tagaagggac tgtcgtgtat 420

attgacaccg agtctgcgtt tactgctgaa agactggtcg agattgcaga atcccgtttt 480

ccactctatt ttaacacaga agaaaaactg cttttgatga gcagtaaagt tcatcttcac 540

cgggaactca gctgtgaggc agttctgcaa aggcttgaat ctttggagga agagattatt 600

tccaaaggag ttaagcttgt gattgttgac tctattgctt ctgtggtcag aaaggagttc 660

gatcctcagc ttcagggcaa catcaaagaa aggaacaagt tcttggccaa acaagcatcc 720

ttgctgaagt acctggctga ggaattttca ctcccagtta tcttgacgaa tcaaattacg 780

acccatctga gtggagccct cccttctcaa gcagacctgg tgtctccggc tgatgatttg 840

tccctgtctg aaggcacttc tggatccagc tgtgtggtag ccgcactggg aaactcatgg 900

agtcactgtg tgaacacccg gctgattctc cagtaccttg actcagagag aaggcagatt 960

ctcattgcca agtcacctct ggctgccttc acctccttca tctataccat caagggggaa 1020

ggcctagttc ttcaaggcca agaaaggcca tag 1053

<210> 95

<211> 1101

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad51c

<400> 95

atgcagcggg agctagtgag tttcccgctg tctcccacgg tgcgagtgaa gctggtggct 60

gcgggtttcc agacggccga ggacgtcctg ggggtgaagc cctctgagct cagcaaagaa 120

gttgggatat ctaaagagga agctttagaa actctacaaa ttgtaagaag agagagtctc 180

acagacaaac ccagatgtgc tggtgcatct gtggcaggca agaagtacac cgcactggaa 240

cttcttgagc aggagcacac ccagggcttc ataatcacct tctgctcagc gctagataac 300

attcttgggg gtggaatacc cctaatgaaa acaacggaag tttgtggtgt accaggtgtt 360

ggaaaaacac agttatgtat gcagttggca gtggatgtgc agattccaga gtgttttgga 420

ggagtggcag gtgaagcagt gtttattgat acggagggaa gttttatggt tgatagagtg 480

gtcacccttg caaatgcctg cattcagcac cttcacctta tagcaggaac acacaaggat 540

gaagaacacc agaaagcctt ggagggcttt actcttgaaa atattctttc tcatatttat 600

tatttccgtt gtcatgatta tactgagttg ctggcacaag tctatctcct tccagatttc 660

ctttcaaatc attcaaaggt gcagttagtg ataatagatg gcattgctct tccttttcga 720

catgaccttg atgatctatc ccttcgtact cgattactaa atggccttgc ccaacaaatg 780

atcagcctgg caaataatca cagattagct gttattttaa ctaatcagat gacaacaaag 840

attgataaaa atcaagcatt gcttgttcct gcattagggg aaagctgggg acatgctgct 900

acaataagac ttatttttca ctgggagcaa aagcaaaggt ttgcaacatt gtacaagtca 960

ccaagccaga aggagtccac aataccattt cagatcacac cacagggatt tagagatgct 1020

gctgtcactg cttcttcatc acagacagaa ggttcttcaa atctccggaa acggtcacga 1080

gaaccagagg aaggatgctg a 1101

<210> 96

<211> 1002

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad51d

<400> 96

aaacatgggc gtgctcaggg tggggctgtg cccgggcctc accgaagaga tcgtccagct 60

tctgaagggc caaaggatca agacagtggc ggacctggca gctgctaacc tggaggaggt 120

agcccagaag tgtggcttgt cctacaaggc cctggttgcc ctgaggaggg tattgctggc 180

gcagttctcg gctttcccat taaacggagc agacctatat gaggaactga agacttccac 240

tgccatcctg tccacaggca ttggaagcct ggacaaacta cttgatgctg gcctctatac 300

aggggaggtg actgaaattg taggaggtcc aggtagcgga aaaacccagg tgtgcctgtg 360

tgtggctgca aatgtggccc atagcctgca gcagaatgta ctgtatgttg attccagtgg 420

aggaatgaca gcatcccgcc tcctgcagct actacaggct agaacccaag atgaggagaa 480

acaggcaggt gctctccaga ggatacaggt ggtgcatgta tttgacatct tccagatgct 540

ggatatgcta caggaccttc ggggctccat ggcccagcag tcgacatctt cttcaggcac 600

tgtgaaggtt gtgattgtgg attctgtcac tgccgtgatt gccccacttc tgggaggtca 660

gcagagggaa ggcctggcct tgatgatgca gctggcccga gagctcaaga tcctggcccg 720

ggacctagct gtggcagtgg tggtgaccaa ccacttgacc cgagacaggg atggtaggag 780

gttcaaacct gctctgggac gctcctggag ctttgtgccc agtacccgga ttctcctgga 840

tgtcaccaaa ggggctggaa cattaggcag aggccaacgc acagtgtgtc tgaccaagtc 900

tccccgccag ccaacaggtc tacaggaggt gatagacatt gggacattgg ggactgagga 960

gcagagccca gaattgcctg ccaaacagac atgatgctgt tt 1002

<210> 97

<211> 1257

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad52

<400> 97

atggctggag ctgaggaaac agtccgtgga ggctgtgaca cccatcctcc ctttgctggt 60

gggaaatctg tgctgtgctt tgggcagagc cagtacacag cagaggaata ccaggctatc 120

cagagggctc tgaggcagcg gctgggcccg gagtacatca gcagccgcat ggctggagga 180

ggccagaagg tgtgttatat tgaaggtcat cgagtaatta acctggccaa tgagatgttt 240

ggttacaatg gctgggcaca ctccatcacc cagcagaatg tggattttgt tgacttcaac 300

aatggcaaat tctacgtggg agtctgtgca tttgtaaggg tgcagttaaa ggatggttcc 360

tatcatgagg acgtgggtta tggagttagt gagggcctaa ggtcaaaggc cttgtcactg 420

gagaaggcca ggaaggaggc tgtgactgac gggctgaagc gggcactcag gagttttgga 480

aatgcacttg gaaactgcat tctggacaaa gactatctga ggtcactaaa taagcttcca 540

cgacagctcc ctcttgaagt ggatttaact aaagcaaaga gagaagattt tgaaccatct 600

gtggaacagg caagatataa tagctgccta cagaatgaag caccgggacc cccaaaacca 660

caagaagcgg cttccccttg cagaccaagc cacccacatg attcgaacat taggctgcag 720

ggggctaagg actgcagcag ctcctgcagt ctggccgccc ccatggagag tgatgccatt 780

caccagcgca agctccggaa gctccggcag aaacagctgc agcagcagtt ccggcagcag 840

atggaggccc acctacaggg ccacacacct gccgtaaaag tgaaagccga gcgtgaggca 900

gtgcttccag accttcctcc aaaacacagt acccctgtaa ctgctgcctc agaactcctc 960

agggagaaag ccatttttcc agataaccct gaagacaacc ttgaaatgtg ggacctgact 1020

ccggatttag aggacatcat taagcccttg tctagaccag aaccacctca aacctctgcc 1080

accagagtcc aggtgatcca ggatggtgtc ctacacggcc tttgccacca gatgccacca 1140

gaaaaacatg aagctggtca cctgcaggcc cacagcactc accagcatgt attaggaaac 1200

tctgactctc ataggaagag ccaggacctg aagaaaagga aactggatcc atcctga 1257

<210> 98

<211> 2235

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Rad54

<400> 98

atgaggagga gcttagctcc cagccagttg gccaggagga aaccagaagg cagatcatct 60

gatgatgaag actggcagcc tgggacagta actcctaaga aacaaaaatc cagtaatgag 120

acccagtgct tcctgtctcc ttttcggaaa cctttgactc agttaatcaa ccgaccgcct 180

tgtctggata gcagtcaaca tgaagcgttt attcgaagca ttttgtcaaa gcctttcaag 240

gtccccattc caaattatca aggtcctctg ggctgtcgag cattgggctt gaaaaaggct 300

ggtattcgtc gtgccctcca tgaccctctg gaagaaggtg ccttggttct gtatgagcct 360

cccccactaa gcgtccatga ccaactgaag ctggacaagg agaaactccc tgtccacgtg 420

gttgttgatc ctattctcag taaggtgttg cggcctcatc agagagaggg agtgaagttc 480

ctatgggagt gtgtcaccag tcgtcgaatc cctggaagcc atggctgtat catggctgat 540

gagatgggcc tgggaaagac actacagtgc atcacattga tgtggacact tttacgccag 600

agcccagagt gcaagccaga aattgagaaa gcagtggtag tgtcaccttc cagcttggtg 660

aagaactggt acaatgaggt tggaaagtgg cttggaggca ggatccaacc tctggccatc 720

gacggaggct ctaaggacga gatagaccga aaactggaag gattcatgaa ccagcgtgga 780

gcgagagtgc cttctcctat tctcatcatt tcctatgaga cttttcgcct tcatgtcgga 840

gtccttaaaa aaggaaatgt tggactggtc atatgtgatg agggacacag gcttaaaaac 900

tctgagaatc agacttacca ggccctggac agcttgaata ccagtcgtcg ggtgctcatc 960

tctgggaccc ccatccaaaa tgacttgctt gaatatttca gcttggtgca cttcgttaat 1020

tcaggcattt tgggaactgc ccaggagttc aagaagcatt ttgagctgcc aattttgagg 1080

agtcgagatg cagctgccag cgaggcagac aggcagctag gggaggaacg tcttcgagag 1140

ctcatcagta tagtgaatag gtgcctgata cggagaacat cagatatcct ctctaaatat 1200

ctgccagtga agattgagca ggtggtttgt tgtaggctga caccccttca aactgagtta 1260

tataagagat ttctgagaca ggctaagcct gaagaagaat tgcgtgaagg caagatgagc 1320

gtgtcttccc tgtcttctat cacctctcta aagaagctat gtaaccatcc agccctaatc 1380

tatgacaagt gtgtgtcagg ggaagatggc tttgaggata ctttggatat cttcccacct 1440

ggttatactt ctaaagctgt agaaccacag ctttcaggta aaatgctggt ccttgattac 1500

attctggcca tgactcgaag ccgcagcagt gataaagttg tgctggtgtc taattatact 1560

caaacgttgg atctctttga aaagctgtgc cgagctcgaa ggtacttgta tgttcgcctg 1620

gatggtacaa tgtccattaa gaagcgagcc aaggttgtgg agcgcttcaa tagtccatcg 1680

agtcccgatt ttgtcttcat gctgagcagc aaagctgggg gctgtggact taatctcatt 1740

ggtgctaacc ggctggtcat gtttgatcct gactggaacc cagccaatga tgaacaagct 1800

atggcccgag tctggcgtga tggtcaaaag aagacctgct atatttaccg actgctatct 1860

gctggaacca tagaagagaa gatctttcag cggcagagcc ataagaaggc actgagcagc 1920

tgtgtggttg atgaggagca agatgtagag agacatttct ctcttggcga gctcaaagag 1980

ctgtttaccc tggatgaagc tagcctcagc gacacacatg acaggctgca ttgccgccgt 2040

tgtgtaaaca gacgccaggt ctggccaccc cctgacggtt ctgactgtac ttcagatctg 2100

gctcagtgga accatagcac agataaacgg ggactccagg atgaggtact ccaggctgcc 2160

tgggatgctt cacctacagc catcaccttc gtcttccatc atcgttctca tgaggagcag 2220

cggggtctcc actga 2235

<210> 99

<211> 837

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Xrcc2

<400> 99

atgtgcagcg actttcgtaa ggccgagtcc gggacggagc tccttgcccg gcttgaaggc 60

agaagctccc tgaaagaact agaacccaac ctgtttgctg atgaagattc accagtacat 120

ggtgatgttc ttgaatttca tggtccagaa ggaacaggaa aaacagaaat gctttatcat 180

ttaacagccc gatgtatact tccaaaatca gagggtggac tgcaaataga agtcttattt 240

attgacacag attaccactt tgacatgctc cggcttgtga cagtgctcga gcacagactg 300

tctcgaagct ccgaggagac catcaagctc tgcctgggaa gattgttcct ggcctactgc 360

agcagcagct tgcagctact gctcacgctg cactcactgg aagccctgtt ctgtagtcac 420

ccctctctct gccttctcat tgtggatagc ctgtcggctt tttactggac agaccgcgcc 480

agtggaggag agagtgtggc cctgcaggaa tccactctga agaagtgttc tcagctccta 540

gagaggcttg tcactgagta ccgcttggtg cttttcacaa caacacaaag tctaatgcag 600

aaagcctctg actcagcgga gcagcctgct tcctccaagc tcccaggtga cggagacaca 660

gactacagag cctatctctg caaggcctgg cagaaggtgg tgaagcacag agtcatcttc 720

tccagagagg acgaggctaa gagcagccgc ttctcattag tttcacgtca tttaaaaagt 780

aacagtttaa aaaaacatgc ttttatgatc agagaaagtg gggtggaatt ctgttga 837

<210> 100

<211> 1050

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Xrcc3

<400> 100

atggacttgg atcaactgga cctaaatccc agaattactg ctgcaattaa gaaggggaga 60

ctgaggtcag tgaaggaggt tctgtgctac tcgggaccag acctgcagag gctcaccagc 120

ctgtccaccc acgatgtgca gcacctactg agagtggccg ctctgcacct ccagggcagc 180

cgggtcctca cagcactgca gctgttccag cagagggaga gcttccccga gcagcatcaa 240

cgcctgagcc tgggctgccc ggtcttggat cagttcctgg gtggcggcct gcccctggag 300

ggcatcactg acctggctgg tcgaagctct gcagggaaga cccagctggg gctacagctc 360

tgcttgactg tgcagttccc acgacaatat ggaggcctgg aggctggggc tgtctacatc 420

tgcacagagg atgccttccc cagcaagcgg ctgtggcagc tcattgaaca gcaacagcag 480

ctgcggacgg atgttcctgg ggaggtgatc cagaagatca gattcagcaa ccacatcttc 540

atcgagcatg cggccgacgt ggacgccttg ctggagtgtg tgagcaagag ggttcccatt 600

ctgctgtcaa gggggatggc ccgcctggta gtggttgact ctgttgctgc cccattccgt 660

tgtgagtatg atgctcaggc cttggccacc agggccaagc acctgcagtc tctgggagcc 720

gcgctccgca gactgagcag taccttccgg agccctgtgc tgtgcatcaa ccaggtgatg 780

gaaacggtgg aggagcaaga gtctatgccc aggccactgg gggcctggga tgagcacctc 840

tctccagccc ttggcatcac ctgggccaac cagatcctga tgagactgat ggttgaccgg 900

gcacatgagg acgatgcctc catgggctta cccagaagcc cggcacggac catacgggtg 960

ctctctgccc cgcacctgcc cctctcctcc tgctgctaca cggtcagtgc ggaaggcatc 1020

agagggatac cgggaaccga gtcctgctaa 1050

<210> 101

<211> 5373

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Brca1

<400> 101

atggatttat ctgctgttca aatcgaagaa gtacaaaatg tccttcatgc tatgcagaaa 60

atcctggagt gtccaatctg tttggaattg atcaaagaac ccatttccac aaagtgtgac 120

cacatatttt gcaaattttg tatgctgaaa cttcttaacc agaagaaagg gccttcacaa 180

tgtcctttgt gtaagaatga gataaccaaa aggagcctgc aaggaagcac gaggtttagt 240

cagcttgttg aagagctgtt gaaaatcact gatgcttttg agcttgacac aggaatacag 300

tatgcaaacg gttacagtat ttcaaaattg aaaaattctt ctgaaccttt gaatgaggaa 360

gcttccatca tccagagtgt gggctaccga aaccgcggca aaagacttag acagattgaa 420

tctggaaatg ccaccttgaa ggacagtctc agtgtccagc tgtctaacct tggaattgtg 480

agatcaacaa agaaaaatca tcagacacag cctcgaaata aatctgtgta cattgaatta 540

gagtctgatt cttctgaaga gacagttagt aaaccagatg actgcagtgt gagagaccag 600

gaactgttac aaaccacctc tctgggagct ggagatgaag tcagtttgga ttcttcaacc 660

agagctgctt gtgagttttc tgaggacgta acaaatattg atctgcacca gtgcagtaat 720

aaagatttgg accccattga gaatcatgca actggaagat atccagaaaa atgtcaggat 780

atttctgttt caaacttaca tgtggagcca tgtggcacag atattcatgc cagctcgtta 840

cagcatgaga acagcagctt attactcact gaagacagaa tgaatgtaga aaaggctgag 900

ttctataata aaagcaaaca gtctggctta gccaggagcc aacagaacag atgggctgaa 960

agtaaagaaa catgtaatga taggcagatt cccagcactg agaaaaaggt agatccaaat 1020

actgattcct tctgtgggag aaaaaaatgg aaaaatcaga aaagtctgtg tcctgagaat 1080

tctagagcta cccaggatgt tccttggatg acactgaata gcagcattca gaaagtcaac 1140

gagtggtttt ccaaaactgg tgaaatgcta acttgtgatg gcacatctga caggaggcat 1200

gagtcaaatg ctggagcagc tgttgtgtta gaagtttcag atgaagtaga tggatgttcc 1260

agttcttcaa aagaaatgga cttagtggcc tctgatcccc ataatgcttt aaagtgtaaa 1320

agtgaaagcg acctctccaa accagtagag aacaatatcc gagataaaat atttgggaaa 1380

acgtatcaga gaaagggaag tctccctcac ttgaaccacg taactgaaat tataggcaca 1440

tttattgcag aaccacagat aacacaagaa caccccttca caaataaatt aaaacgtaaa 1500

aggagaacta catgccttca tcctgaggat tttatcaaga aagcagattt aacagttact 1560

caaaagactt ctaaaaatgt aaatcaagga actgaccaaa tggagccaga tggcctagtg 1620

atgggtatta ccagtaatgg tcaagagaat gaaacacaag gtaataatct tcagaaagag 1680

aaaaatgcta atccagtgaa gtccttggaa aaggggtctg tttccacaac taaagccaaa 1740

actataagca acagtataag tgatttggag ctagaattaa atgtccacaa ttcacaggca 1800

cctaagaaaa gtcggctgag gaggaagtct tcaaccagat gtgttcttgc actggaacca 1860

gtcagtagga atccaagccc acctgcttgt actgaatttc aaattgatag ttgtagcagc 1920

agtgaagaaa cagagaaaaa caattccaac ccaacaccag tcaagaacat tagaaagcct 1980

caactcacgg aggacacaga acctgcagca gattccaaga agaataaaga gccaaatgaa 2040

caaagaagga agagaagggc cagtgatcct ttcccagaag agaaatttat gcctggctta 2100

ttaactaact gtccaagttc tagtaaacct caaggacctg ccaatcctag ccctcagaga 2160

aaggaagtag agaaacttga aacaagccaa atgtctgaca gtaccaaaga cctgagggat 2220

ctgttgctgg atggagaaca gggtttgccc actgagaggt cggaggagag taccagtgtt 2280

tcattggtgc ctgacactga ttatgacact cagaacagtg tgtcattgct ggaagctaat 2340

gctgtcagat atgcaaaaac agtatcaagc cagtgtatga cccagtttgt agcaagtgat 2400

aaccctaacg aactggtcca tggttctaaa gatgctggaa gtggcacaga gtgcttcaag 2460

catccattga gacacgaact tagccacatt caggagacca tagaaatgga agagagtgaa 2520

cttgatactc agtatttaca gaatacattt caagcttcaa agcgtcagtc atttacttta 2580

ttttcaaaac caagagatcc ccaagaggag tgtgtaacag cttgtgcttc ctctgtgtcc 2640

ttaagggaca tgagtccaaa agtgacttct gaaggtgaac aacaagaaga aagtcgggga 2700

cacgaagagg ctgaaatcag tcacatacag gcagggcctg cgacagtggg cgtgcctctg 2760

cctcgtcagg aaggtgatcc aggcgctgat acaatgcatg ctgcagtgtg cagcctttgt 2820

ccatcatctc agtacagaag caatgaaaac tcacatccta aacaatcagc ttctcccatc 2880

atgtcttcta taaaaactgg ccatgggaaa accctgtcag aggaacaatc tgagaaacat 2940

acattgtcaa atgaaaaggc aatgggaaat gagacctttg ttcaaagcac aatgcacaca 3000

attagccaaa accacagaaa aaatggttgt caagaagcca actcaggcag tattaatgaa 3060

gtgccttcca gtggtgaaaa cttccaagga cagctaggcc gaaacagaag gactaagtta 3120

aacactgtgc ttccactagg tcttatgcaa cctggagtct gtaagcatag ttttcctgtc 3180

agtgattata aatatcttga aataaaaaag caggaaggtg agaatgttgg tgcacacttc 3240

tcttcgtgtc tgttttcaga taagctcgaa caacctgtag ggagtggtaa tgtttttcag 3300

atttgttctg agacacctga tgacctgttg gatgatgttg aaatacagga aaatactagc 3360

tttggtgaag ttgacataat ggagaagtct gctgttttta acgggagtgt ccagagacga 3420

gagctcagta ggagccctag ccctttaacc catgcatcgc tggctcggaa tctccagaga 3480

cggtctagga agttagagtc ctcagaagac agcggatctt gtgaggatga agaccttccc 3540

tgcttccaac acttacttgg ccaagtaagc aaaacacctg aacctagcag tgttgtgaca 3600

cagcctctgt cagagaaagc agaggggacc caagtgccat ggaagagtag tgttggtgac 3660

tctgataacg aggtgatctt gatagaggca tctcaggaac atcaccctag tgaggatgca 3720

aaatactctg gcagcatgtt ctcttctcag cccagtgctg tacaaggttc aactgcaaat 3780

acaagctccc aggacccctt gtttaacctt tccaaacaaa agagtcacca gtctgaggat 3840

gaggaagatt ttctaagtga caaggaattg atttcagatg atgaggaaat gggaacttgc 3900

ctagaagaag ataatgatca agaagaggat attataatcc cagattcagc tgaagcggca 3960

tctggatatg agagtgaaac aaacctttct gaagattgct cacagagtga tattttaacc 4020

actcagcaga gggccaccat gaaggataac ctgataaagc tccagcagga gatggcccac 4080

ctggaggctg tgctagaaca gcaaggggac cagccttctg tccactcctc gtctctcaca 4140

gctgaacctt gtgcccctga agacctacca aacgcagaac aaaacttatc aggaacagca 4200

attttaactt caaagaatat taatgaaaat cctgtaagcc ggaatccagc atgcgtttct 4260

gctgacaagt tccaaccaca acctccagac agttccagca gtgaaaataa agagtcaagg 4320

gaaggaaggc cttccctttt taaatctccg ttggcaggca gtaggtgctc tgcacacagc 4380

cgctctggga gtcttcaaaa cagaaactgc ccatctcaag aggagctcct ttggactgtt 4440

gaagcaggga agtcagaagg aacgccatac ctggaatctg gaatcagcct tttctctaat 4500

agagaccctg aatctgagtc ccctaaagag ccagcttatg tttgcaccac accagcttca 4560

acctctgcac ggacaatatc ccagtatcag gtttctgact ctttcgagag tccggctgct 4620

actcatgctc atactgcagt gatagaaact gtgagcaaga aaaagccaga attgacatct 4680

tcaaaaggaa gagccaataa aggaatatcc atggtggtgt caggcttgac ccccaaagaa 4740

gtaatgattg tgcaaaagtt tgctgaaaaa taccgcctca ctttaactga tgcaattact 4800

gaggagacta cccatgtcat tatgaaaaca gatgctgagc ttgtgtgtga acggacactg 4860

aaatattttc tgggaattgc aggaggaaaa tggatagtta gctattcatg ggtgattcag 4920

tctattcaag aaagaaaact tctgagtgtg catgaatttg aagtcagagg agatgttgtg 4980

actggaagaa accaccaagg tccaaagcga tccagagaat cccaggaaaa gctcttcaaa 5040

ggcctaacaa tctgttgttg tgagcccttc accaacatgc ccaaagatga gctggagaag 5100

atgctgcagc tgtgtggggc ttccgtggtg aaggagcttt cgtcactcac ccctgacacc 5160

ggtgttcatc caattgtgat tgtacagcca agtgcctgga cagaagagaa tggctgccct 5220

gagattgacc agctgtgtgg ggcgcacctg gtgatgtggg actgggtgtt ggacagtata 5280

tccgtctacc ggtgtcggga tctggacgcc tacctggtac agaatatcac ccatggccac 5340

gacagcagcg agccacagga ccccaatgat tag 5373

<210> 102

<211> 10098

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Brca2

<400> 102

atgtccaatg aatacaaaag gagaccaact ttttttgaaa tttttaaggc acgatgcagc 60

acagcagact taggacctat aagcctgaat tggtttgaag aactttcttc agaagcccca 120

ccatataatt ttgagcctcc agaagaatat gaatataaga ccaacaatta tgagccacag 180

ctgtttaaaa cgccacagag gaagctctct taccatctgt tggcttcaac tccaataata 240

ttcaatgaac aaggtcaaac tctaccagta gaccagtcgc ctttcaaaga actagggaag 300

actcttggaa atagtagaca taaaaatcac cacagaacca aggccaaaat ggactccatg 360

gttgatgttg ccagtccacc tctgaagtct tgtctcagtg aaagccctct tactctgcga 420

tgcacacagg ttgtaccaca aagagaaaag ccagtgatgt gtggaagttt attttctaca 480

ccaaaaatcg aggagggtca gacacctaaa cctatttctg aaagtctggg agttgaggtg 540

gatcctgata tgtcttggtc cagttcatta gctacaccac caacccttag ttccactgtg 600

ctcatagccc gagatgggga agcacgagga attgtgtttc ctgaagactc ccccgctgtt 660

ttgaaaagct acttttccag ccacaatgaa agtctgaaaa agagtggtat atcagttccc 720

tctgtgactg acagcgagaa caaaaaccag agggaagctt ttagtcatgg attggggaaa 780

acgttagagg attcatctgg caaaacaaac agcttcaaag attgccttag gcagtcaata 840

ccaaatgttc tagaagatgg ggagacagct gcagatactt ctgaagaaga tagtttctca 900

ttatgttttc ctaagcataa aaccagaaaa atgcaaaaaa tgagaatggg caagaccagg 960

aagaaaattt tcagtgaaat aagaactgat gaattaagtg aagaaactag aagtggagct 1020

gatggaaaac attcatttgc acttgaaatt gacccaagag atagtgatcc cttagatcca 1080

gatgtgacaa accagaaatg ctttgacaat gggaatgagg aaatctgcga ggaagttgta 1140

cagtcttcag acactcgatg gtctcagcta accctttctc gtctaactgg tacccagaag 1200

ggaaaaatac ctctacctcc tatttcttct tgtaaccaaa ataattcaga aaaagacttc 1260

atagatacga aggaagaagg tattgactct gttactttag aaaattcttt gcctcatatt 1320

tctagttttc cagaaccaga aaagatgttc tgtgagaaaa ctctggtaga taaggaacat 1380

gagggacagc atcttgaatc acatgagaac tccattgcag ggaagcaagt ggtatctgga 1440

acttgtcaag cagcttgcct attgagagag ccacttgaag agtctctggg taatctcttc 1500

tcagagagtg tgactagctc agcctttaca gaagaaccca gtgcctctgc aagtggattg 1560

ggaatatgtg ctgtgtcctc acagagagag gattctttgt gtcctagttc aggtgacact 1620

ggaaactggc catcaactct cactcacact tctgcaactg tgaacaatac aggtttaata 1680

tccagtctaa aaactaaaag aagaaagttt atttactctg tcggtgacag tgcatctcat 1740

caaggaaaaa tactacaggc agacagaaag tcagagctca ctaacacttc tgctcagttc 1800

gaaacaagtg cttttgaagc gccattcacg tttacaaatg ggaattcagg tttatcagat 1860

tcttctctcc aaagaagctg tttacagaat gatgctgaag agccatcttt gtccttatcc 1920

acctcatttg tgactgcttc caagaaagaa agtagttata gtaatgcatt gatatctcag 1980

gatctccatg acaaagaagc aatagtcagt gaagaaaaac tgcagccaca tacagccctg 2040

gaaactgatt gtctgtcgtg cttgccagaa agacaatgtg aatatgatcc aaagggtccc 2100

aaagtttcag atggaaaaga agaagtctta gtctcagcat gtcatcctgc aggacagcac 2160

acagcagcag cacagcccag cagcattagc tttgaattac aggaagaccc tgtcaatggc 2220

cacaatagta caagtcctaa agaaactcct agcttgaagg tgcttctgtc aaagccagtt 2280

gtgctttcta gaggaaaagt gtcatgtaaa atgccagaga aactgcagtg tgagagttat 2340

aaagataata ctgaattaag caaaagcatt cccttgggag gaaataaaat acacatccta 2400

agtgaaaatt ctaaacctcc tgagcttctg ccacctggaa aatatgtaac agaagcatcc 2460

cccacagtga agtctcagtt caatcagaat acaaatctag cagtcaaaaa aaatgaccaa 2520

gaagaaacgc cttttatttc agaagtaaca gtcaatgtga gttctggaga acttttccca 2580

gacaatgaga ataatttcgc ctttcaagta actcatgaaa ataataagac tgccttagga 2640

agtactgtgg aactgcagga agaagacctc cgccatgcta aagggcctaa tctcaacaac 2700

tctcccacag cagtagatgg agacataggt gatgagcaag cagctcatgc actgattatg 2760

gaagactccg attcctcagc tttagtccat gagtgtgcaa agaagagcag aaatactata 2820

gagcagcatc tgaaaggaac cacagacaaa gatttcaatt cctccttgga tgtgaaatca 2880

gatgggaaca atgactatac agacaaatgg ccaggatttt tggatccagt ttttaagcat 2940

aaatttggag gtagcttcag aacagcttcc aataaagaaa taaaactttc agaacataat 3000

gttaagaaaa gcaaaatgtt cttcaaagat attgaagagg agtatcctac tagtttaacc 3060

tgtattgaca tagttaatgc ctcaccatta gcaaaccagg agatactaag tggaccttat 3120

acatttgatt tgcagtcagt cactaccatg tctgcccatc cacagagtca ggcatctgtt 3180

tcttgtgaag atactcacac atcacttcag gtgttacctt caaagcaaga ttttcattcg 3240

aatcacaatt taacacccag ccaaaaggca gaaattacag aactttctac tatcttggaa 3300

gaatcaggaa gtcagtttga attcacacag ttcaaaaagc caagccatgt agcacagaat 3360

aatatacctg aagtgcctgg aaaacagacg gttgccataa atactacttc tgaggggtgg 3420

aaaaggattg gtcttcatct cacagtggat cctgcctctg tagctcagac agatgacagc 3480

aagaaatttg aaggttctgc tggatttaga caaagctttc cttgcctgtt gaaaagcagt 3540

tgtaacaaaa atacatctag ttttttagca aatgtaaatg aaatggagtt tcgaggattt 3600

cgttctgctc ttggcacaaa gcttagtgtg tctagtgagg ctctgcaaaa agctgtgaaa 3660

ctcttcagtg acattgaaag tggtagtgag gagacttcca caaaagtcga cccaagagct 3720

ttgtcttcag gtgctcgtca tgattctggt gcttctgtgt ttaagataag gaaacaaaac 3780

agtggtaaaa gttttgatga gaaaactagt aagtgccaag taacattaca gaataatacc 3840

gaagtgacta ctggtatttt tgttgacaga aatcctgaaa attatgcaag aaatacaaaa 3900

tgtgaagata acaactctac tggttttcaa agaagtcctt ataaattaaa aaactcggag 3960

gatagtgaat caagtacaag cggcacagtt tctgttcatc aagatgatgg tgacttacca 4020

tgtgctgctg atcactgcag caagtaccct gagtcgtgtt cccaatatgt aagggaggaa 4080

aacacacaaa ttaaggaatg tgtatcagat ttaacatgtt tggaagtcat gaaagctgag 4140

gaaacatgct atattcaacc ttcagataaa gaacaattac cttcaggtaa gatggaacaa 4200

aatagaaaag attttaatat atcctttcag actgcaagtg ggaaaaatgt cagagtctct 4260

gaggagtcat taagtaaaag tatgaatatt ttaaatcaag taacagatga atcgatcatc 4320

tcttcagatt ctttgaattc taaatttcat tgtggcacaa ataacaacaa gatgggtatt 4380

tcacatcaca aggaaactac cagtactaaa aaggtatttg aagaacgttt cccagttggg 4440

actgtcagtc aattaccaac tctccagcag catcctagat gtgaaataga aagtatcaaa 4500

gaacctgctc tgttgggttt tcataccgct agtggaaaaa aagtcaaaat tatgcagaaa 4560

tctttagaca aagtgaaaaa cctttttgat gagacacagt atgttagtca tcaagggtca 4620

aaacccttga aggacagaga gaactgcaaa gaaggacttg cattaggatg tgagacaatt 4680

gaaatacctg cctccaagtg tgaagaaatg cagaagagct ttctctctaa ggagtctgaa 4740

gtgctatcta agcaaagtga tcgtttgtat aggtcgactg aaaatctcag aacatcaaat 4800

ggtacctctt ctaaagctaa tgtacatgga aacatagaaa gtgaaataga aaaaagtcct 4860

acaacttgct gcattagtca tttatcttat tcagtcactg aagattctgc tttgacatgt 4920

gacacaggac acggtagaaa aacttgtgtc agtgagtctt ctctatccaa agacagaaaa 4980

tggcttagag accgactggg tgataagctt caaaaaagag atgctgccga aattgaatgt 5040

gtaaaagaac atactgaggg ttatgctgga gatgcctcat gtgagcatag tttagacagt 5100

atcagaaatg aagttgatat aaattgtgtc tctgaaaatc aaacttcagc cctctttagt 5160

gaccctagca tgtgtcatag ctgtccatcc cattttggtt gtcattgtga taacaagcat 5220

aatgactcag gatatttctc aaaaaataaa atttattctg atactcagcc agacacgaag 5280

aatgaagaca ctgccaattt ttccagtgta tatgctacaa aagaagtaaa tatatacccg 5340

ccaactgtaa atgaagatat ttgtgttcag aaacttgaga ctaactcttc accacataca 5400

aataaaaatg tagccattga cttggctata gcagattcaa ggaattgtaa ggtatgccca 5460

tccaagttca ttacagatca ctcacaagaa actgtgaaaa cagtaaaagc aatatttaca 5520

cataacagtg ataaaacaat taagcaaaac acaaagagta aaccagatac ttgccggaca 5580

agctgtcaga aagcattgga taattcagag gattttatat gtcctagctc tttagaagat 5640

gactatatga actcacataa gacttctgtt tatacccacg atgaacaaat attacagcat 5700

aacctaagtg tgtctggact ggagaaagct caaataccac ctgttcactt ggaaacttgg 5760

gataagtgta aatctacaag ggaacttgca caggcagcct gttcttcaca catgccgggg 5820

atttttagca cagcaagtgg aaaagctgta caggtatcag acgcttcatt agaaaaggca 5880

aggcaagtgt tttctgagat ggatggtggt gctaaacagt tactttccac attgtctctg 5940

gaaagtcatg aacaatcaga ccactctggg agaagagaaa actctgtgac acataaccct 6000

gaggatgtat tgtcactccc aaaaaccttt gcaagcaatg ccaattcatc tgtattctct 6060

ggatttagta cagcaggtgg taaacgggtc acagtttcag aaagtgcctt acacaaagtt 6120

aagggaatgt tagaggaatt tgatttgatc ggaactgaac atactctcca gtgtccacct 6180

acatctgaag gtgtatcaaa aatacttcct caatattgtg ttgaaaagag aaccccagaa 6240

taccctataa actctaaatt gcagaaaacc tatgatgata aattcagttt accaaacaac 6300

tataaagaaa gtgcttcttt ggggaatact cattctcttg aagcttctcc ccaactctct 6360

cagtttaagc aagacacacg gttggtatta ggaaccaaag tatcccttct ggaaaaagaa 6420

caaaccttcc ctcaaaatat aaaaacagaa agtggtgtaa tggaaacttg tcctgatgtc 6480

cctgtgagaa caaatgtagg agactgttct gctttcgaca aaaagccaga gaactgtttt 6540

gaaacagaag cggtggagat tgccaaagct tttatggaag atgatgagct gacggattct 6600

gaaccaagtc acgacaaata ctcattgttt acctgccccc aaaatgaggc tttgttaaat 6660

ttgagaacta gaaagagaag aggaatggct gttgatgcag ttggacaacc cccaatcaaa 6720

agaagcttat taaatgagtt tgacaggata atagaaaata aaggaaaatc cttaaagcct 6780

tcaaaaagtg ctccagatgg tacaataaaa gacagaagat tgttcacgca ccacatttct 6840

ctagagccag ttacctgtgg acccttctgc tctaccagag aaaggcaaga aatgcagagt 6900

ccacatttca ctgcacctgc tcaaggactt ctgtctaaag ggcatccttc tgtgcgttcg 6960

gctttggaaa aatcttcaag caattctaca gtttcagtcc agccgactca taaagtttct 7020

gctacaagga atgaaaggac aggatgctca gtcacaggca aatcccacaa agtcttcgtc 7080

ccacctttca aaatgaaatc acagtttcac agagataaac atttgaataa caagaatatt 7140

aattcagagg aaaagaacca aaagagcaga gatggagaca gtgaagatgt gaacgacggt 7200

gacattcgtc aatttaaaaa aggcagcttc catcaagagg ccgctagaat tgtcacagag 7260

tgtgaagaag agcctttaga tttaatgaca agccttcaga atgccagaga cctacagaat 7320

atacgaatta aaaagaaaga aaggcatcag ctctgtccac agccaggcag tctgtatctt 7380

accaagtcat ccactctgcc tcggatctct ctgcaggccg cagtaggagg ccggcttccc 7440

tctgcgtgtt ctcataagca gctctatatg tatggcgttt ctaaagagtg cataagcatt 7500

aacagcaaaa atgcggaata ttttcagttt gacattcagg attattttgg taaagaggac 7560

ctgtgtgctg gaaagggcat tcagctggct gatggtggat ggctgatccc ctccaatgaa 7620

gggaaggctg gaaaagaaga attctatagg gctctgtgtg acactccagg tgtggatcca 7680

aagcttattt ctagcctctg ggtctctaat cactaccggt ggattgtgtg gaaactggca 7740

gctatggaat ttgcttttcc taaggaattt gctaacagat gcctaacccc agaaagagtg 7800

ctgcttcaac taaaatacag atacgatgtg gaaattgaca acagcagcag atcagcccta 7860

aagaagatcc tggaaaggga tgatactgct gcaaaaacac tcgttctctg tgtttctgac 7920

gtcatgtcac taagcacaac tggatcagaa acttcaggcg gcaaaactag tggtgcagat 7980

cccaagagca tagacacgat cgaactcaca gacggatggt atgctgtcaa ggcccagcta 8040

gaccctccac ttgtggctct tgtaaagagc aggagactga ctgtgggtca gaaaatcatt 8100

acccaagggg cagaactggt gggatctcct gatgcctgcg cacctctgga agcaccagac 8160

tctcttagac tgaagatttc tgccaacagc acacggcctg ctcgctggca cagcaaactg 8220

gggttctttc atgaccccag gcctttccct ctgcccttgt cctcactgtt cggtgatgga 8280

ggaagcgttg gctgtgtgga catcattgtt cagagagtgt accctttaca gtgggtggag 8340

aagacggcat caggattgta catattccgt aatgagagag aagaggagaa ggaagcagtg 8400

agatttgcag cggcccaaca gaagaaactg gaggccttgt tcaccaaaat ccaggcagag 8460

tttaaagacc atgaagaaga ctcagcgcag cggcgcgtgc tgtcccatgc actcacaagg 8520

cagcaggtct atgctctgca agatggtgca gagctctatg cagcggtgca gagtgcattg 8580

gatccagatc accttgaggg ttgtttcagt gaagagcagc tgagagcctt gaacaaacac 8640

agacaaatgt tgaatgataa gaagcaagca cagatccaat cagaattccg gaaggccgtg 8700

gagtccgctg agcaagagga gggcttatca agggatgttt caactgtgtg gaagcttcga 8760

gttacaagct acgagagaaa agaaaagtca gctctgctga gtatctggcg tccatcatca 8820

gacttacact ccctgttaac agaaggaaag agatacagaa tctatcatct ggcagtatca 8880

aaatctagga gtacatttga acgacctagc atccagttaa cagctacgaa aagaactcag 8940

tatcagcagc taccggctgc cagtgaaacc gtattccagg tttaccagcc gagggagccg 9000

cttgacttca gcagactgtt agagacagcc tttcagcctc cttgttctga agtggacctc 9060

gtaggagctg tagtttctgt tgtaagaaca acaggtcttg ctcctttggt ctacctatca 9120

gacgaatgcc ttaatttatt agtggtaaag tttgggatag accttaatga agacataaag 9180

ccacatgtgc taattgctgc aagcaacctc cagtggcacc cagaatccag atcaggagtg 9240

ccaacgttat ttgccgggaa tctttccata gtttctgcca gtccaaagga ggtctacttc 9300

cagaagcgag tcaacagaat gaggcaaact gttgagaata tcgatacatt ttacaaggag 9360

gcagaaaaga agcttttaca tctgcttaat ggaaacagtc ccaagtggtc caccccaaat 9420

aaagactcta ctcagccggc ctacacttgc cctgcttcag agctccttgc tacaggaggt 9480

cagctaatga ggttctcacc taatagtgag caaagttatc caagtccttt atcacattgc 9540

acaccaaaag aaaagtctac acccctggct cggtcagccc agatggcatc aaagtcttgt 9600

aacagggaga gagagactga tgaccgaaaa acctgcagaa aaagaagagc cttggatttt 9660

ctgagtcggc tgcccttacc tcccccggtc agtcccattt gtacctttgt ctctccggct 9720

gcacagaagg cttttcagcc gccacggagt tgtggcacca aatatgcaac acctatgaag 9780

aaaaaagaac ccagttcccc tcagaggagg acgccatttc agaaggacag tggcatttct 9840

cttctggaac aagattcggt agctgatgaa gaacttgcct tcctcaatac ccaagctctt 9900

gtacctggct caccagaaga aaatcaacaa gtacttcctg gtgactccac aagaacctct 9960

gtgccccaca acaaaagaac ccccagccag cacagaggcc agaccagcat gtaggacccc 10020

gatccaggaa ggggagtcta tctcagggat tacagaggtg gcaagggcag tgatggaaaa 10080

ttagctgtcg agtcttag 10098

<210> 103

<211> 888

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Циклин D1

<400> 103

atggaacacc agctcctgtg ctgcgaagtg gagaccatcc gccgcgcgta ccctgacacc 60

aacctcctga acgaccgagt gctgcgagcc atgctcaaga ccgaggagac ctgcgcgccc 120

tccgtgtctt acttcaagtg cgtgcagagg gagattgtgc cgtccatgcg gaaaatcgtg 180

gccacctgga tgctggaggt ctgcgaggag cagaagtgcg aagaggaggt cttccctctg 240

gccatgaact acctggaccg tttcctgtct ctggagcccc taaaaaagag ccgcctgcag 300

ctgctagggg ccacctgcat gttcgtggcc tccaagatga aggagaccat tcctttgacc 360

gccgagaagt tgtgcatcta cactgacaac tctatccggc ccgaggagct gctgcaaatg 420

gaactccttc tggtgaacaa acttaagtgg aacctggccg ccatgactcc ccacgatttc 480

atcgaacact tcctctccaa aatgccagag gcggatgaga acaagcagat catccgcaag 540

catgcgcaga cctttgtggc cctctgtgcc acagacgtga agttcatttc caacccgccc 600

tccatggtgg ctgccgggag cgtggtggct gcaatgcaag gcctgaacct gggcagcccc 660

aacaactacc tgtcctgcta ccgcacaacg cactttcttt ccagagtaat caagtgtgac 720

ccggactgcc tccgcgcctg ccaggaacag attgaggccc ttctggagtc cagcctgcgc 780

caggcccagc agaacatcaa ccccaaggcc accgaggaag agggagaagc agagggagag 840

actgacctgg cctgcacacc caccgatgta cgagatgtgg acatctga 888

<210> 104

<211> 882

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Ercc1

<400> 104

atggaccttg ggaaagacga gggaagcctg ccgcagccca ccaggaagaa gtttgtgatc 60

ccactggaag acgaggcccc tcctgcaggg gccaagccct tattcagatc ctcacggaac 120

cccagcacca cggccccctc ggtcccagcg gcccctcaga cgtacgccga gtatgccatt 180

gcccagcctc caggaggggc tgggcccaca gggcccacag gctctgaacc tgtgaaggga 240

gagaaccccg gccagacggt gaaaacggga gcgaaatcca atagcatcct tgtgagcccc 300

cggcagaggg gcaaccctgt gttgaagttc gtgcgcaacg tgccctggga attcggcgag 360

gtgacccctg actatgtgct gggacagagc acttgcgccc ttttcctcag cctccgctac 420

cacaatctcc atccagacta catccacgaa cggctgcaga gcctggggaa gagctttgcc 480

ctgcgtgtgc tgttggtcca agtggatgtg aaagatcctc agaaggccct gaaggacctg 540

gctaaaatgt gtatcttagc ggactgcacc ctggtcctgg cctggagtgc cgaggaagca 600

ggacggtacc tggagaccta caaggcatat gagcagaagc ccgctgacct cctcatggag 660

aagctggagc agaacttcct gtcccgggcc accgagtgtc tgaccaccgt gaagtcagtc 720

aacaaaaccg acagccagac cctcctggct acatttggat cccttgaaca gctcttgacg 780

gcatcacggg aggacctagc cttgtgcccc ggcctgggcc cccagaaggc ccgcaggctc 840

tttgacgtcc tccatgaacc cttcctcaaa gtgccccgat ga 882

<210> 105

<211> 4473

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> MDC1

<400> 105

atggaaaaca cccaggttat tgactgggat gctgaagagg aggaggagac agaaataccc 60

agtgggtcct tggggtatag cttggagcct atagggcagc tgcgtctctt cagtagtact 120

catggaccag aaagagattt cccactctac cttggcaaga atgtaattgg ccgaagcccc 180

gactgctctg tggccctgcc ttttccatcc atctctaaac agcatgcagt aattgaaatc 240

tcagcttgca acaaagcccc tatcctccag gattgtggga gcctcaatgg cactcaactg 300

gtaaagcccc caaaggtcct aacccctgga gtgagccatc gtctgaagga ccaggaatta 360

attctgtttg cagactttcc ctgccagtac cgtcgcttgg atgtccctcc acctttggtc 420

tctcggggac ttctaactat agagaagacc cccagaatac agggagggtc ccaaacctcc 480

agagttttgt tggctgagga ttcggaggag gaagtagatt ttccttctgg aaggtatgtg 540

gcaaatggat caaggaatcc aacgtctcca tcagcaacag tagtaccaga aagtgatgaa 600

gaggggtctt ctccagccca aagtgtccgt gggccgtctt tgccctttga cttgggcagt 660

gacacagatg aagagctatg tccacagcca gcagttgggg agtcctcttc agttgccagg 720

gatggtgctg ctgcagaggc caagcagctg gaagctaatg gagtgacatc tggtatccag 780

ctggtactgg ctcagcctgc tgagcaaaag ctcagagatg caaaagtcaa gagtgaggct 840

ggcaatggag cggctgtggt tgggaggggc tccactgtgg gtaaggacag caacacggaa 900

atgggtgaag aacaccagcc ttccggcttt gtggacagcg atacagacgt ggaagaagac 960

aggatccctg tgaccccccc tgtagttccg gggaagaagc aagtcctgct tggagttggt 1020

aaaaaggacc ctggagcacc tgtcgtgacc catctgcagg acagcccagc tggtcgtggc 1080

acaggtgtgg aagaaggcaa gactccagtg gctggccctc cagagagaaa ccacacggcc 1140

atggtgatca gcagcgacac agatgaggaa gatggagtct cagcagcagt caccttggcc 1200

catctgaaag acagggggat ggctctgtgg agcagggagc caggcatgga agaggtcaag 1260

tcccaaccac aggtcctcgt agaacgaagc cagagtgcct ctgggaaaga cagtgacaca 1320

gacgtggagg aggaaaagag agaagtggtc cctgacagcc ccatggacac agatgaggct 1380

cttactgtcc cacattcaga gagccaagct ccccatagag ccagtgatga tgtagaccag 1440

ggtgtggata tgggctcccc tggtggtcag ctagagggaa accaggcctc ctctgccaca 1500

gtagaagaca gtagtgcaca agcagggaag gaagtcctgc ctcctgagga ggcctgggaa 1560

acagctgtgg aggaaggctc atcttcagca gcggcagatg taagacaaag caagcagcca 1620

ggagtagaag atgctgggac agagtgggct gcaactgttt gtgagcaggc gagcatgctt 1680

gaggtggggg tccaaggcag gtcacctgct acactggtag agccagtggt ggtgcctaca 1740

gctactctgg gggatcccac tcagccacag agagagggag cccagacccc cacaggaaag 1800

gagagaggag tacaaatggg caggaccaag aatgccaaag actgccgtga tgcagagtct 1860

gaagatgtgt gccttccggc tacccagtgc tttgtagaca gggagggcca gagctcagaa 1920

gctgtccaga gtttggaaga tgagcctacg caagtctttc catgcactct tccccaagag 1980

cctgggcctt cccacctcag cctgcagacg ccaggtccag gtgcccagga tgtgccttgg 2040

gaagtcttag ctacacagcc gttttgtctg agagaagctg aggcctctga actgcagctc 2100

atggacaccc accctgcagc tcatgaatcc cacccatctg tgtctagtgc atcagcagga 2160

cagcagcatc tggttcacac agagccgctg ggaattgaag gcggagagat gcaaactgtg 2220

gagaaagcca tgggccaatt gagttgcaag atggcatctg ctggagagga ctcaaggggt 2280

gatccagaac cctcggccca tcgcctgctt tctccagttc ctgaagcttc ttctccacct 2340

cagagtctgc tcacctctca gagccaaaag ccgtctacac cccagtctct gttacttacc 2400

tctccccctt ctgagctaca ccttcctgaa actcctcaca ccaagcctaa tgtcaggcct 2460

cggcggtcct ccaggatgac ctcctcccca cactcctctg ctgcccttaa gccctatact 2520

acctgcccca caaacctgcc tgctgcccct agaccaacat ctcgggctac tcggggcagg 2580

ggcagggcaa ataggtcctc taccaggacc ccggaaccag ttgtccctac agactctgag 2640

cttcaacctc ccacctccac agaacagtct gtcatcccca aacccacatc tccagtcact 2700

cagggcagca taaatggttc ctttgttaaa acgcctgaac cagttgttct cacaggtccc 2760

aaaatccagc ctcccacctc cacagaacag cctgttaccc caaaccccac acctcaggcc 2820

actcggggca ggccacatag gtcttccatc cagaccccag aaccacttac tcccactggt 2880

cctgacctcc agcctcccac ctccacagaa cagcctgtca tacctaaacc cacatctcgg 2940

gctgctcggg gcaggtcacg taagtcttct accaggaccc cagaaccagc tgtccccact 3000

ggtcctgacc tccagcctcc cacctccaca gaacagcctg tcacacctaa acccacatct 3060

cgggccactc ggggcaggtc acgtaagtct gtcagaaccc cagaaccagc tgtccccact 3120

ggtcctgacc tccagcttcc cacctccaca gctctgggca ctttgggaag ggcatgtaag 3180

tcctccattg aggattctga atcagttgga ccagtagcct ctgattttga acctcccatc 3240

tccacagacc ttgttgcccc tgaggtgaca ggtcagagca taacactaaa gtcttcacca 3300

ctaagtgctt ctccagtttc tgccacctct gaactccagc cacctgtccc cacagcccag 3360

cctgttctcc tggagcccat tcctcaagcc aaccaccgaa ggcggcggaa ggctgctggg 3420

aaacggggct cccacacagt tcccattggc caaaagcctt actctgcacc ctctgaacct 3480

ggttcccaat cttcaatcaa tcaaggcttg gcattggaag ccgctgagtc tattactgtt 3540

gctcctgagc ctgctgtttc ccaggctcca gagacctcca ctcagaatcc cgtggtgcaa 3600

aatgaagcag ctgggagatc agggctcatt cccaagcccc agcctgaggt ttctcgatcc 3660

cgcaagaagc cttctactac cacaacctca ccaattcaaa aacgtccccg aagacaaata 3720

ccccagaaga caatagtccc caaggaagaa gatcctgagg aaatgccagt gaaggaagag 3780

cctcaggaga tagcaattcc aacacccggc aaaagaaaga gggaccgtgt agaggatgag 3840

acccagggaa acccaagtcg gagccggcgg gctaaaccta accaagaagc agcagccccc 3900

aaggtactgt tcacaggagt tgtggattct cggggagagc gtgcagtcct ggctctgggt 3960

ggcagtctag ccagctcagt aaatgaggcc tcccacttgg tcactgatcg catccgaaga 4020

acggtcaagt tcttgtgtgc cctggggaag ggcatcccta tcctctccct gaactggctg 4080

tatcagtcca gaaaggctgg tcacttcctg ccacctgatg actacttggt gactgaccct 4140

gaacaagaga agaactttag cttcagcctt cgggactccc tgagccgggc tcggcaacaa 4200

aaactgctgg agggctatga gatttacgtg acccctggag tgcagccacc cccacctcag 4260

atgggcgaga tcatcagctg ctgtgggggc accaacctgc ccagcatgcc ccagtcctat 4320

aagccttacc gagttgtcat aacttgcact gaagacctac ctcgctgcgc tatcccatct 4380

cgactggggc tgcccctcct ctctcctgag ttcctcctga ctggagtgct aaagcaggaa 4440

gtcacaccag aggcctttgt cctttcaaat tag 4473

<210> 106

<211> 2412

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Bard1

<400> 106

atgcaacttt ctgagtctgt ggttggacta ctaggtaggt acacaagccc tgctcgggaa 60

cgaaacccac gaggagcccc gccccttggc gttgagggcg tggccttggg ccgcgctcct 120

ctcagaaatt cgagcgcgct ctcattgcct ctcccctccc tcttacttgc tataaaggag 180

caacccagga tggtctgctg tctgcttcgg ctcatcatca tccagagtgt cgagttcttt 240

gaaatcatca ctaatattct gaaggagcca gtatgcttag gagggtgtga gcacatcttc 300

tgtagtgtgt gtataagtga ttgcgttgga tcaggatgtc ccgtgtgtta cacaccagcc 360

tggatcctag acctcaagat aaacagacaa ttggacaaca tgattcagct ttataggaag 420

cttcaaaatt tgctacatga caataaactt tcagatccaa aagacaacac atctaggaca 480

ggttcatttg atgatgcaga aagcaagaag aattcaataa aaatgtggtt tagtcctcga 540

agtaagaagg ttagatgtgt tgtgaataaa gtatcagtgc caacccagcc tcaaaagaca 600

aaagatgaca aagcccagga agcctccata tacgaatttg tttccacaag tccccctgaa 660

gttgtttcta agagggctaa aacagcttct agaacatctg caaaaaagca gcagaagaaa 720

tctttagctg agatcaacaa gaaggggaat tcaaggccag aaacagaaga tagcaggttt 780

gattctaaag aggaactgaa agaggagagg gttgtctcct gtagccaaat accagttatg 840

gaaagtccac aggtaaatgg tgaaatagac ttgttagcta gtggttctgt tgcagaatct 900

gaatgttctg gaagattgac cgaagtttct ttaccattgg ctgagcatat agtatctcca 960

ggcactgtga gcaagagtga agagactcct gagaagaaag tctgtgtaaa agatcttctt 1020

tcagtagggc gtaatgaaaa tcacaaatac tgtagcaggc ctcctgatcc tacttctaag 1080

aattgtgaga gaagcattcc gagcaccagc agagatgtca ttaaaccaac agtgcttgca 1140

gaaaatatac tgttggttga ctgttcttca ctgccttcag accagcttca agttgatgtc 1200

acactcagga gaaagagtaa catatcagat aactccctta gcctttcacc aggcacaccc 1260

ccaccactgc tgaataattc aactcccaga caaatgatgt caaaaccctc catagtgaag 1320

ctgtcaccca gcattaccgc caggaaaaga aaccacagag gagagactct gcttcatatt 1380

gcttctatta agggcgatat accttctgtt gaatacctct tgcaaaacgg aaacgacccc 1440

aatgttaaag accatgctgg atggacacca ttgcatgaag cctgcagtca tgggcacctg 1500

aaggtagtgg aattgctgct ccagcataac gctttggtga ataccacagg ctatcagaat 1560

gacacaccac tgcacgatgc agtcaagaac ggccatgtgg atatagtcag ggtgttactg 1620

tccaatggcg cctccaggaa tgctgttaac atatttggtg tacggcctgt ggattataca 1680

gacaatgaaa atataagatc attattgctg ctaccagaga agagtgaatc atcctcaact 1740

agccagtgtg cagttgtgac tgctggacag cgaagaaatg ggcctctggt gcttataggc 1800

agtgggcttt cttcccaaca gcagaaaatg ctcagcaaac ttgagacagt tctcaaggct 1860

aaaagatgtg ctgagtttga cagtacagta actcatgtca ttgttcctga tgatgaagct 1920

caaagtactc tgaagtgtat gcttgggatt ctcaatgggt gttggatcct gaagtttgac 1980

tgggtgaaag cttgtttgca cagcaaagta cgtgaacagg aagaaaagta cgaagttcct 2040

ggaggtccgc agaagagcag gctcaacaga gagcagctgt tgccaaagct atttgatgga 2100

tgctacttct ttttgggggg aaacttcaaa catcatccaa agaatgatct ccttaagctc 2160

attactgcag caggaggcaa ggtgctcagt agaaagccca agccagacag tgacgtgact 2220

cagaccatca acactgttgc ataccatgcc aaccctgact ctgaccagcg cttctgtaca 2280

cagtacatcg tctatgaaga tctgtttaat tgtcgcccag aaagggttcg gcagggcaaa 2340

gtctggatgg ctccttccac ttggcttatc agctgtgtga tggcctttga attgcttcct 2400

cttgacagct ga 2412

<210> 107

<211> 2796

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Lig1 (лигаза 1)

<400> 107

atgagaaaaa aagaaccaga gaggaaaggg gagaactctg ctgccaccat gcagaaaagt 60

atcaggtcat ttttccaacc catgaaagag ggtaaagcac agaagccgga gaaggagaca 120

gctaacagca ccaaagagaa ggagccacct ccaaaggtgg cactgaagga gaggaatcga 180

gcagtgcctg agagtgattc tccagtgaag aggcctggaa ggaaggcagc ccaggtccta 240

agcagcgaag gggaggagga agatgaagcc cccagcaccc ctaaagtcca gaagtctgtg 300

tcagactcca aacaaagctc tcctcccagc cctgacgcat gtcctgagaa cagtcctttc 360

cacagtagcc cctccatgga gatctcccca tcaggattcc cgaagcgtcg cactgctcgg 420

aagcagctcc cgaaacggac aattgaggac actgtggagg agcagaatga ggacaaaggc 480

agagcagcca agaaaaggaa gaaggaagaa gaagcacaga ctccaatgga aagcctcaca 540

gagagtgaag atgtaaaacc caaggaagaa aaggaggagg gcaagcatgc tgaggcttcc 600

aagtcccctg agtcgggaac cttgacaaag acagagacca tcccagtgtg taaggccggc 660

gtgaaacaga agcctcagga agaggagcag agcaagcctc ctgccagagg cgccaagaca 720

ctcagcagct tcttcactcc ccggaagcca gcagagaaag ccatagtgaa acaagaagag 780

ccaggtactc cagggaagga agagaccaag ggagccctgg atccaacaaa ttacaatcct 840

tccaagagaa actaccaccc cattgaagat gcctgctgga aacatggcca gaaagtccct 900

tttctcgctg tggcccggac ctttgagaag attgaggagg tttctgctcg gctcaagatg 960

gtggagacac tgagcaactt gctgcgctcg gtggtggccc tgtcacctcc agacctgctt 1020

cctgttcttt acctcagcct caaccgcctt gggccacctc agcagggact agagctgggt 1080

gttggtgatg gtgtcctcct taaggcagtt gcccaggcca caggccgtca gctggagtcc 1140

atccgggctg aggtagctga gaagggtgac gtgggactgg tggccgagaa cagccgcagc 1200

actcagagac tcatgctgcc ccctcctccg ctcaccacct ccggggtctt taccaaattc 1260

tgtgacattg cccggctcac tggcagtgct tccatggcca agaagttgga tgtcatcaag 1320

ggcctgtttg ttgcctgccg tcactcggaa gcccggttca ttgccaggtc cctaagtgga 1380

cgcctgcgcc tcgggctggc tgagcagtcc gtcttggctg cccttgccct ggctgtgagc 1440

ctcacacccc ctggccaaga atttccccca gctgttgtgg atgctgggaa gggcaagacc 1500

acagaggcca gaaagacatg gttggaagaa caaggcatga tcttgaagca gaccttctgt 1560

gaggtacctg acctggaccg aatcatcccg gtgctgctgg aacatggcct ggaacgcctc 1620

ccagagcact gcaggctgag cccaggggtc cctcttaaac caatgctggc tcatcccact 1680

cggggtgtca gcgaggtact gaaacgcttt gaggaggtgg actttacctg cgagtacaaa 1740

tatgacgggc agcgggccca gattcatgtt ctggaaggtg gagaggtgaa gatcttcagt 1800

aggaaccagg aagacaacac aggaaagtac ccggacatca tcagccgcat ccccaagatt 1860

aaactcccct cggtcacctc ctttatcctg gacactgagg ctgtggcctg ggaccgggaa 1920

aagaagcaga tccagccatt ccaagtgctc accacacgca agcgcaagga ggttgacgcc 1980

tcggagatac aggtgcaggt gtgtctgtat gcctttgatc tcatctacct caacggagag 2040

tccctgattc gccagcccct gtctcgacgt cggcagctgc tccgggagaa ctttgtggag 2100

acagagggtg agtttgtctt cgccacctcc ctggacacca aggacatcga gcagatcgct 2160

gagttcttgg agcagtccgt gaaggactcc tgtgagggac tgatggtgaa gaccctggat 2220

gttgatgcca cctatgagat tgccaagagg tctcacaact ggctcaagct aaagaaggac 2280

taccttgacg gtgtgggcga cactctggac cttgtggtga ttggcgccta cctgggccgg 2340

gggaagcgtg ccggccggta tgggggcttc ctcttggctg cctatgatga ggagagtgaa 2400

gagctgcagg ccatatgcaa gctgggaact ggattcagtg atgaagagct ggaggagcat 2460

caccagagcc taaaggccct agtgttgccg accccacgcc cctatgtgag gatcgatggg 2520

gcagttgccc cagaccactg gctggaccca aaggtcgtat gggaggtgaa gtgtgcggat 2580

ctctccctgt cccctatcta ccctgctgcg cggggcctgg tggacaaaga gaaagggatc 2640

tcccttcgtt tccctcggtt cattcgtgtc cgtgaagaca agcagccaga gcaggccacc 2700

accagtgacc aggtggcctg tttgtaccgg aagcagagtc agatacagaa ccagcacaac 2760

tcagacttgg actccgactt tgaggactgc tattaa 2796

<210> 108

<211> 2121

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Mre11

<400> 108

atgagccctg cagatccact tgatgatgaa gacactttta aaatcctggt tgccactgat 60

attcaccttg gatttatgga gaaagatgca gttcgaggaa atgatacatt tgtgacactt 120

aatgaaattt taaaacttgc cctggaaaat gaagtggatt ttattttgtt aggtggtgat 180

cttttccatg aaaacaagcc ctcaaggaaa actcttcata gttgcttgga gttgcttagg 240

aagtactgta tgggtgatcg ccctgtgcag tttgagatca tcagtgacca gtcagtcaac 300

tttggtttta gtaggtttcc atgggtgaac tatcaggatg gcaatctcaa catttccatt 360

ccagtgttta gtatccatgg caaccatgac gatcccacag gggcagatgc cctctgtgcc 420

ctggatattt taagctgtgc tgggtttgtg aatcactttg gacggtcaat gtctgtggag 480

aagattgaca ttagtccagt tctgctgcag aaaggaagca caaaacttgc tctgtacggc 540

ctagggtcca ttcctgatga aaggctctat cggatgtttg tcaataaaaa agtaacaatg 600

ctgagaccaa aggaagatga gaactcatgg tttaacttat ttgtgattca tcagaacagg 660

agtaaacatg gaagtaccaa cttcatccca gaacagtttt tggatgactt cattgacctc 720

gttatctggg gccatgaaca cgagtgtaaa attggcccaa ccaaaaatga gcagcagctc 780

ttctatgtgt ctcagcctgg aagctcagtg gtgacttctc tttcccctgg agaagctgtt 840

aagaaacacg tgggcttgct gcgcgttaaa gggaggaaga tgaacctgca gaagctgcct 900

ctccgcacag tgcggcagtt cttcatggag gatgtggttc tcgctaacca cccaaacctg 960

ttcaaccctg acaatcctaa ggtgacccag gccatccaga gcttctgctt ggagaagatt 1020

gaagaaatgc ttgaaaatgc cgagcgcgaa cggctaggga attctcttca accagagaag 1080

cctcttatcc gactacgggt ggactacagt ggaggctttg aaccttttag tgttcttcgc 1140

tttagccaga aatttgtgga tcgggtcgct aaccccaaag atatcatcca ctttttcagg 1200

catagggagc aaaagggaaa aacaggtgaa gagatcaact ttgggaagct tgtttcaaaa 1260

tctccttcgg aaggaacgac actcagagta gaagacctgg tgaagcagta tttccagact 1320

gcggagaaga atgttcagct ctcactgctg acagaaagag ggatgggtga agccgttcaa 1380

gaatttgtgg acaaggaaga aaaagatgcc atcgaggaat tagtgaagta ccagctggag 1440

aaaacacagc ggtttcttaa ggagcgccat atcgatgctc tggaagacaa gattgacgaa 1500

gaggtccggc gtttcagaga aagcagacag agaaatacca acgaagaaga cgatgaagtg 1560

cgagaggcca tgagcagggc ccgggcgctc agatcgcagt cagagaactc tgcctcagcc 1620

ttcagtgctg acgacctgag tttcgatata gcagaacaga cagcaaatga ctctgatgac 1680

agcctgtcag cagtgcccag cagaggccgg ggccgaggcc gaggtcgaag aggaggcaga 1740

gggcagagca ccgcatcaag aggaggatct cagagaggcc gagacactgg gcaggagacg 1800

gctactcgag gcagatgctc aaaggccact acatcgacct ctagaaatat gtccattcta 1860

gacgctttca gatctactcg acagcagcct tccagaaaca ctgccactaa aaattactca 1920

gagactattg aagtggatga atctgatgaa gatgacattt ttcctaccag ttccaaggct 1980

gatcaaaggt ggccaggcac aacatctagc aaacggatgt cccagagcca gatagccaag 2040

ggggttgact ttgaatcaga tgaggacgat gacgatgacc ctttcatgag cagtagttct 2100

ctaagaagcc gaagataata a 2121

<210> 109

<211> 5973

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> 53BP1

<400> 109

atgccagggg agcagatgga ccctactgga agtcagttgg attcagattt ctctcagcaa 60

gatactcctt gcctgataat tgaagattct cagcctgaaa gccaggttct ggaagaagat 120

gcgggctctc acttcagtgt gctgtctcga caccttccca atctgcagat acacaaagag 180

aaccctgtgt tggatattgt gtccaatccg gaacaagcag ctgcagaaga gcaaggagac 240

aataatagct ccttcaatga acatctgaaa gagaacaaag ctgctgcaga tcctgtggat 300

tccactcatt tgggcacatg tgattccatc agtcaggtca tagaacagtt gcctcagcca 360

aacaggacaa gcagtgttct gggagtgaca gtggaagctg cttctcttcc agaagaggag 420

aaggaggaag agctggaaga ggagaatgaa gaggtgggag cagatgctgc tgatgccgct 480

ccgtgctccc ttggtgctga agattctgct tcatcacagt tgggctttgg ggttctggaa 540

ctgtcccaga gccaggatgt tgaagaacat acagtgccat atgatgtcaa ccaagaacat 600

atgcagttgg ttaccaccaa ctcgggttct tcccagctgt ctgacatgga tgcaaataat 660

gttaaatgtg aagaacagtc cactgaagat acctccatgg cagaacaacc taacaaagac 720

atccctgtta cagtcgagca cagtaaaggt atccctgtgg tagatgagca aaatctacca 780

ccggcaaggc cagaggatct gccttccagt cctcaagcct ctgctgcagc tgtggaaaca 840

aaggaagagg tacctgccca agagttgcca gaaggggcgc tggaggttca gatgtcctcg 900

gagcctgagg tctcgtccac tcaggaggac ttgtttgagc agagtagtaa aacagcttct 960

gatggttgtt ctactccttc aagggaggaa ggtgggtgtt ctccggtttc cacacccgcc 1020

accaccctgc aactcctgca gctgtctggt cagaggcccc ttgtccagga cagtctttcc 1080

acgaattcct cagatcttgt tgctccttcc cctgatgctt tccgacctac cccttttatc 1140

gttcctagca gtcccacaga gcaaggaggg agaaaagttg agcccttgga tatgtcagtg 1200

atgcctgaag aaggagggga gactttgcag aagcttcagg atgacgaagc agtggagata 1260

gaaaagcccc atctcccatc tcagccggct gtttccccac aagtgtcaac accagtgtct 1320

cagagcacac ctgtcttcac tccaggctct cttcccatcc cgtcccagcc tgaattttct 1380

catgacattt tcattccatc accaagtttg gaagaaccat caagtgatgg gaagaaaggt 1440

ggcgatttgc acagctcatc tttgactgtg gagtgttcta agacttcaga gagtgaacca 1500

aagaatttca ctgctgatct tgggctctcc ttgacagggg agtcttgcaa actgatgctt 1560

tcttcaagtg agtatagtca atcctcaaag atggagagct tggcttctcc caggagtgag 1620

ggagatggag agaataccca gattgaggac actgaaccgt tgtctccagt caccaattct 1680

aaacttcctg ctgaaagtga tgatgtcctg atgaatccag caccagatga ccaagtagaa 1740

atgaatcaga atgatgacaa agtaaaagag ggtgacacag agaacacagg tgaccatggt 1800

gttttagctg ctggtagtaa aggcagagaa gaaaccgttg ctgaagatgt ttgcattgat 1860

ctcacttgtg attctgggag tcaggcagtt ccgtctcccg ctactcggtc cgaggcactt 1920

tctagtgtct tagatcagga ggaagctatg gaaattaaag aacagcatcc agaggagggg 1980

ttttcgggat ctgaggtaga agaagtcccc gagactccct gtgaaagtca cagagaggag 2040

cccaaggaag aaacgatgga gagtatccca ctgcaccttt ctcttactga aacacagtcc 2100

caggcattgt gtcttcagaa ggaaatgccc aaagaagaat gcccagaggc catggaagtg 2160

gaaccctctg tgattagtgt tgactctccc cagaagctgc cggtactcga ccaggagtca 2220

gagcataagg agccagaggc ctgggaagaa gccgcgtcgg aggactcaag tgtggaggac 2280

tcaagtgtgg ttatcgttga tgtgaaggag ccctcgccaa gagttgtccc ctgcgaacct 2340

ttggagggag cagagaaatg ctcagattcc cactcctggg aggatgtggt gcccgaggtg 2400

gaaccgtgtg ctgcaaatag agtagacact ccggaggaaa agattgtaga atgtgacgga 2460

gatgtgaaag cagagaccac aagaaaggac tctgtagagg aagactcccc acagcctcct 2520

ttgccttcag tgaaagacga gcctcccaga gacgagcctc ccagacccga ccaggagatg 2580

cagcagtccc agcttcaaga gaaagagagc ccagtgacca tagatgcaaa agtggctgat 2640

gccaagcagc tggagtcaga gggagcatcc cagcagcttt cgaaagcccc tgcccgcgac 2700

tcacaaagtt tctgtgaaag ttctagtgaa accccatttc atttcacttt gcctaaagaa 2760

ggtgatatta tcccaccatt gactggtgca accccacctc acattgggca cctaaaattg 2820

gatcgcaaca gacatagtac tccaattggg attggcaact atccagaaag caccatagca 2880

accagtgatg tcatgtctga aagcatggtg gagatcaatg atcctctact tgggagtgaa 2940

aaaggagatt ctgagtctgc cccagaaatg gacggaaaac tgtatctgaa aatgaaactg 3000

gttagtcctg agacagaggc cagtgaagaa tctttgcagt ttagcctgga aaagcctgct 3060

actgctgaga gaaaaaatgg atcaactgct gttgctgagc ctgttgcaaa aaatggatca 3120

actgctgttg ctgagcctgt tgccagtccc cagaagaccg tgcctgtgtt tagctgcagg 3180

caagaggagg tttggagtga ggaccctccc tctgtaccca tcagggcaaa cttgctccat 3240

tttccaagtg ttgaagaaga ggacaaagaa aaactggatg gtaccccaaa gcttaggcag 3300

agtgaacagc ctgtgaggcc cgttgggctg gtcaaggatg ctgctacttc tgaggactct 3360

gcttcttctg ttccccagca gagagcaaca caggggtcat tcagccctca aggagaagtg 3420

atggaaacag acctgctaga aggactgagt gctaaccagg aaaaaccgtg taaggtcttg 3480

atggaaaggc ccacccagag taacatagga atccagacca tggaccattc cctgtgtgct 3540

ccagaaactg tttcagcagc aacccagact gtgaagagtg tatgtgaaca agggaccagt 3600

acagtggacc agaactctgg gaaacaagat gccactgtgc agaccgagag ggggggtgtc 3660

gagaaacagg cccctgtgga cgatacagaa tccctccaca gccagggaga agaagaattt 3720

gaaatgcccc agcctccaca tggccatgtc ttgcatcgtc acatgagaac catccgtgaa 3780

gtccggacac ttgtcacccg tgtcatcaca gatgtttact atgtggatgg gacagaagtg 3840

gaaaggaaag taactgagga gactgaagaa ccaattgtag aatgtcagga atgtgaaaca 3900

gaggtttccc cttcccagac tggaggctct tctggagacc tgggagacat cagttccttc 3960

tcctccaaag catccagctc acaccataca tcaagtggga caagtctctc agccatgcat 4020

agcagtggca gctcaggacg aggagccggg ccactcaaag ggaaaaccag cgggacagaa 4080

cctgcagatt ttgctttacc cagttcccga ggaggcccag gaaaactgag tcctagaaaa 4140

gggatcaatc agacaggggc accagtgtgt gaggaagatg gtgatgcagg ccttggcatc 4200

agacagggag ggaaggctcc tgtcacacct cgtggtcgtg gtcgaagggg ccgcccacct 4260

tctcggacca ctggaacaag agatgcagtt gtgtctggtc cgttgggcat agaagacatt 4320

tcacctagca tgtcaccaga tgacaagtcc ttcacccgaa ttgtgccccg tgtaccagac 4380

tctaccaaac gaattgatac cagttctact gttttgaggc ggagtgattc cccagagatt 4440

ccttttcagg ctgctactgg gtcttctgat ggcttggatg cctcatctcc aggaaatagc 4500

tttgtcgggc tccgtgttgt agccaagtgg tcatccaatg gctattttta ctctgggaaa 4560

atcacacggg atgttggagc tgggaagtat aagctgctct tcgatgatgg gtatgaatgt 4620

gatgtgctgg gcaaagacat tctcctgtgt gaccctatac ccctggacac tgaagtgaca 4680

gccctctcag aagatgagta tttcagtgca ggagtggtca aaggacacag aaaggagtct 4740

ggggagctgt actacagcat tgaaaaagaa ggccaaagga agtggtataa gcggatggca 4800

gtcatcctgt ccttggaaca aggaaacagg ttaagagagc aatatgggct tggcccatat 4860

gaagctgtta cacccctcac aaaggcagca gacatcagcc tagataattt ggtggaagga 4920

aagcggaaac gtcgcagtaa catcagctcc ccagccaccc ccactgcctc cagcagcagc 4980

agcagcagca gcacaacacc cacccgtaaa accacagaga gtccccgtgc ttccacggga 5040

gttccatcag gcaaaaggaa actcatcact tctgaagagg aacggtcccc agctaagcga 5100

ggccgcaagt ctgtcaccgt gaaacctggt acagtggggg caggagaatt tgtgagcccc 5160

tgcgagagtg gagacaacac aggtgaacct tctgtcctgg aagagccaag agggcctttg 5220

cccctcaaca agaccttgtt tctgggctat gcctttctcc ttaccatggc cacaaccaat 5280

gacaagctgg ccagccgctc taaactgcta gatggtccta caggaagcag tgaagaagag 5340

gaggaatttt tagaaattcc tcctttcaac aagcagtata cagaatgcca gcttcgagca 5400

ggagctgggt atatccttga agacttcaat gaagcccagt gtaacacagc ctaccagtgt 5460

ctcctaattg ctgatcagca ttgtcgaacc cggaagtact tcctgtgcct tgccagtgga 5520

attccttgtg tgtctcatgt ctgggtccat gacagctgcc atgccaacca gctccaaaac 5580

taccgtaatt atctgctgcc tgctgggtat agccttgagg agcagcgaat tctggattgg 5640

caacctcgtg aaaacccttt ccagaatctg aaggtactct tggtgtcaga tcaacaacag 5700

aacttcctgg agctctggtc tgagatcctc atgactggag gggcagcctc tgtgaagcag 5760

caccattcaa gtgcccataa caaagacatt gctttagggg tatttgatgt ggtggtgaca 5820

gacccctcat gcccagcctc ggtgctcaag tgtgctgaag ccttgcagct gcctgtggtg 5880

tcacaagagt gggtgatcca gtgcctcatt gttggggaga gaattggatt caagcagcat 5940

ccaaaatata aacatgatta tgtttctcac taa 5973

<210> 110

<211> 384

<212> ДНК

<213> Цитомегаловирус человека

<220>

<221> misc_feature

<223> Энхансер немедленно-ранних генов CMV

<400> 110

gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 60

gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 120

ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 180

ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 240

atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 300

cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 360

tattagtcat cgctattacc atgg 384

<210> 111

<211> 799

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор GAPDH человека

<400> 111

gagaagttcc ccaactttcc cgcctctcag cctttgaaag aaagaaaggg gagggggcag 60

gccgcgtgca gccgcgagcg gtgctgggct ccggctccaa ttccccatct cagtcgttcc 120

caaagtcctc ctgtttcatc caagcgtgta agggtccccg tccttgactc cctagtgtcc 180

tgctgcccac agtccagtcc tgggaaccag caccgatcac ctcccatcgg gccaatctca 240

gtcccttccc ccctacgtcg gggcccacac gctcggtgcg tgcccagttg aaccaggcgg 300

ctgcggaaaa aaaaaagcgg ggagaaagta gggcccggct actagcggtt ttacgggcgc 360

acgtagctca ggcctcaaga ccttgggctg ggactggctg agcctggcgg gaggcggggt 420

ccgagtcacc gcctgccgcc gcgcccccgg tttctataaa ttgagcccgc agcctcccgc 480

ttcgctctct gctcctcctg ttcgacagtc agccgcatct tcttttgcgt cgccaggtga 540

agacgggcgg agagaaaccc gggaggctag ggacggcctg aaggcggcag gggcgggcgc 600

aggccggatg tgttcgcgcc gctgcggggt gggcccgggc ggcctccgca ttgcaggggc 660

gggcggagga cgtgatgcgg cgcgggctgg gcatggaggc ctggtggggg aggggagggg 720

aggcgtgtgt gtcggccggg gccactaggc gctcactgtt ctctccctcc gcgcagccga 780

gccacatcgc tcagacacc 799

<210> 112

<211> 1188

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор Ef1-альфа человека

<400> 112

catgggtgag gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag 60

aagttggggg gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac 120

tgggaaagtg atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat 180

ataagtgcag tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag 240

gtaagtgccg tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta cgggttatgg cccttgcgtg 300

ccttgaatta cttccacctg gctgcagtac gtgattcttg atcccgagct tcgggttgga 360

agtgggtggg agagttcgag gccttgcgct taaggagccc cttcgcctcg tgcttgagtt 420

gaggcctggc ctgggcgctg gggccgccgc gtgcgaatct ggtggcacct tcgcgcctgt 480

ctcgctgctt tcgataagtc tctagccatt taaaattttt gatgacctgc tgcgacgctt 540

tttttctggc aagatagtct tgtaaatgcg ggccaagatc tgcacactgg tatttcggtt 600

tttggggccg cgggcggcga cggggcccgt gcgtcccagc gcacatgttc ggcgaggcgg 660

ggcctgcgag cgcggccacc gagaatcgga cgggggtagt ctcaagctgg ccggcctgct 720

ctggtgcctg gcctcgcgcc gccgtgtatc gccccgccct gggcggcaag gctggcccgg 780

tcggcaccag ttgcgtgagc ggaaagatgg ccgcttcccg gccctgctgc agggagctca 840

aaatggagga cgcggcgctc gggagagcgg gcgggtgagt cacccacaca aaggaaaagg 900

gcctttccgt cctcagccgt cgcttcatgt gactccacgg agtaccgggc gccgtccagg 960

cacctcgatt agttctcgag cttttggagt acgtcgtctt taggttgggg ggaggggttt 1020

tatgcgatgg agtttcccca cactgagtgg gtggagactg aagttaggcc agcttggcac 1080

ttgatgtaat tctccttgga atttgccctt tttgagtttg gatcttggtt cattctcaag 1140

cctcagacag tggttcaaag tttttttctt ccatttcagg tgtcgtga 1188

<210> 113

<211> 985

<212> ДНК

<213> Цитомегаловирус обезьяны

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор CMV

<400> 113

gaccatagcc aattcaatat ggcgtatatg gactcatgcc aattcaatat ggtggatctg 60

gacctgtgcc aattcaatat ggcgtatatg gactcgtgcc aattcaatat ggtggatctg 120

gaccccagcc aattcaatat ggcggacttg gcaccatgcc aattcaatat ggcggacttg 180

gcactgtgcc aactggggag gggtctactt ggcacggtgc caagtttgag gaggggtctt 240

ggccctgtgc caagtccgcc atattgaatt ggcatggtgc caataatggc ggccatattg 300

gctatatgcc aggatcaata tataggcaat atccaatatg gccctatgcc aatatggcta 360

ttggccaggt tcaatactat gtattggccc tatgccatat agtattccat atatgggttt 420

tcctattgac gtagatagcc cctcccaatg ggcggtccca tataccatat atggggcttc 480

ctaataccgc ccatagccac tcccccattg acgtcaatgg tctctatata tggtctttcc 540

tattgacgtc atatgggcgg tcctattgac gtatatggcg cctcccccat tgacgtcaat 600

tacggtaaat ggcccgcctg gctcaatgcc cattgacgtc aataggacca cccaccattg 660

acgtcaatgg gatggctcat tgcccattca tatccgttct cacgccccct attgacgtca 720

atgacggtaa atggcccact tggcagtaca tcaatatcta ttaatagtaa cttggcaagt 780

acattactat tggaaggacg ccagggtaca ttggcagtac tcccattgac gtcaatggcg 840

gtaaatggcc cgcgatggct gccaagtaca tccccattga cgtcaatggg gaggggcaat 900

gacgcaaatg ggcgttccat tgacgtaaat gggcggtagg cgtgcctaat gggaggtcta 960

tataagcaat gctcgtttag ggaac 985

<210> 114

<211> 197

<212> ДНК

<213> Вирус 40 обезьяны

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор SV40

<400> 114

tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa 60

ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atcgctgact aatttttttt atttatgcag 120

aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag 180

gcctaggctt ttgcaaa 197

<210> 115

<211> 999

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор Actb CHO

<400> 115

gggcggaggc cagtcatgca tgttcgggcc tatggggcca gcacccaacg ccaaaactct 60

ccatcctctt cctcaatctc gctttctctc tctctctctt tttttttttt tttttttttt 120

tttttttttt tttgcaaaag gaggggagag ggggtaaaaa aatgctgcac tgtgcggcta 180

ggccggtgag tgagcggcgc ggagccaatc agcgctcgcc gttccgaaag ttgcctttta 240

tggctcgagt ggccgctgtg gcgtcctata aaacccggcg gcgcaacgcg cagccactgt 300

cgagtccgcg tccacccgcg agcacaggcc tttcgcagct ctttcttcgc cgctccacac 360

ccgccaccag gtaagcaggg acaacaggcc cagccggcca cagccctccc gtgggcagtg 420

accgcgctgc agggtcgcgg gggacactcg gcgcggacac cggggaaggc tggagggtgg 480

tgccgggccg cggagcggac actttcagat ccaactttca gtccagggtg tagacccttt 540

acagccgcat tgccacggtg tagacaccgg tggacccgct ctggctcaga gcacgcggct 600

tgggggaacc cattagggtc gcagtgtggg cgctatgaga gccgatgcag ctttcgggtg 660

ttgaaccgta tctgcccacc ttggggggag gacacaaggt cgggagccaa acgccacgat 720

catgccttgg tggcccatgg gtctttgtct aaaccggttt gcccatttgg cttgccgggc 780

gggcgggcgc ggcgggcccg gctcggccgg gtgggggctg ggttgccact gcgcttgcgc 840

gctctatggc tgggtattgg ggcgcgtgca cgctggggag ggagcccttc ctcttccccc 900

tctcccaagt taaacttgcg cgtgcgtatt gagacttgga gcgcggccac cggggttggg 960

cgagggcggg gccgttgtcc ggaaggggcg gggtcgcag 999

<210> 116

<211> 683

<212> ДНК

<213> Cricetulus griseus

<220>

<221> misc_feature

<223> Промотор Hspa5 CHO

<400> 116

acccgagggg acttaggagg agaaaaggcc gcatactgct tcggggtaag ggacagaccg 60

gggaaggacc caagtcccac cgcccagagg gaactgacac gcagaccccg cagcagtccc 120

cgggggccgg gtgacgggag gacctggacg gttaccggcg gaaacggtct cgggttgaga 180

ggtcacctga gggacaggca gctgctgaac caataggacc ggcgcacagg gcggatgctg 240

cctctcattg gcggccgttg agagtaacca gtagccaatg agtcagcccg gggggcgtag 300

cggtgacgta agttgcggag gaggccgctt cgaatcggca gcggccagct tggtggcatg 360

gaccaatcag cgtcctccaa cgagaagcgc cttcaccaat cggaggcctc cacgacgggg 420

ctggggggag ggtatataag ccaagtcggc ggcggcgcgc tccacactgg ccaagacaac 480

agtgaccgga ggacctgcct ttgcggctcc gagaggtaag cgccgcggcc tgctcttgcc 540

agacctcctt tgagcctgtc tcgtggctcc tcctgacccg gggggcttct gtcgccctca 600

gatcggaacg ccgccgcgct ccgggactac agcctgttgc tggacttcga gactgcagac 660

ggaccgaccg ctgagcactg gcc 683

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной молекуле нуклеиновой кислоты для увеличения эффективности продукции трансгена, экспрессируемого в клетке млекопитающего. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению сконструирована таким образом, что включает 5’- 3’-транспозон-специфичный концевой повтор ITR, нуклеиновую кислоту, кодирующую белок трансгена TEP или РНК TEP, а также дополнена эпигенетическим регуляторным элементом. Кроме того, описаны рекомбинантный экспрессионный вектор, клетка-хозяин, способ экспрессии кодируемого ТЕР, способ трансфекции клетки и набор для осуществления трансфекции клетки. В сравнении с известными аналогами изобретение демонстрирует преимущества в отношении величины и качества экспрессии, включая высокую стабильность экспрессии трансгена и, при необходимости, транспорт экспрессированного продукта наружу из клетки. 11 н. и 53 з.п. ф-лы, 4 табл., 25 ил.

1. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты для увеличения эффективности продукции трансгена, экспрессируемого в клетке млекопитающего, содержащая:

(a) 5'- и 3'-транспозон-специфичный инвертированный концевой повтор (ITR),

(b) по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональную РНК ТЕР, расположенную между 5'- и 3'-ITR, и которая находится под контролем промотора, который обеспечивает экспрессию указанного белка экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональной РНК ТЕР в клетке млекопитающего; и

(c) по меньшей мере один эпигенетический регуляторный элемент, представляющий собой MAR (участок прикрепления к матриксу), который расположен между 5'- и 3'-ITR;

при этом указанный белок ТЕР представляет собой один или более из следующих белков пути секреции белка: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX,

или белок ТЕР соответствует одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27, и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29 и последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям;

причем указанная функциональная РНК ТЕР внутри указанной клетки включает/состоит из последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка пути рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11; и

при этом указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку грызуна.

2. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что уровень экспрессии трансгена в указанной клетке млекопитающего увеличен на по меньшей мере на 10%.

3. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный элемент MAR выбран из последовательностей SEQ ID NO: 1 (MAR 1-68), 2 (MAR 1_6), 3 (MAR X_S29), 4 (MAR S4), 5 (MAR лизоцима цыпленка), представляет собой сконструированный, в частности, перестроенный аналог и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: с 1 по 5.

4. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная функциональная РНК ТЕР представляет собой микроРНК или кшРНК.

5. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что длина указанной молекулы нуклеиновой кислоты составляет по меньшей мере 5000, 6000, 7000, 8000, 9000 или 10000 п.о.

6. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что 5'- и 3'-ITR представляют собой 5'- и 3'-ITR транспозона Спящая Красавица или предпочтительно транспозона PiggyBac.

7. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что после первой трансфекции клетки млекопитающего указанной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты и второй последующей трансфекции дополнительной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей трансген, встраивание и/или экспрессия трансгена оказываются повышенными в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой указанной первой трансфекции.

8. Вектор экспрессии для экспрессии ТЕР или функциональной РНК ТЕР, содержащий рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7.

9. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что указанный вектор дополнительно содержит единичный элемент MAR, два или более элементов MAR, при этом указанный элемент(ы) расположен между 5'- и 3'-ITR.

10. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что указанный вектор содержит два элемента MAR, при этом первый элемент MAR расположен в 3'-5' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, и второй элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, при этом указанный первый элемент MAR включает элемент MAR 1_6 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, перестроенные MAR на основе MAR 1-6, а конкретнее, элементы, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR включает элемент MAR 1-68 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.

11. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR, при этом указанный единичный элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, и при этом единичный элемент MAR представляет собой MAR 1-68, или элемент MAR Х-29, и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1–68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и предпочтительно представляет собой элемент MAR Х-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3.

12. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что указанный ТЕР или функциональная РНК ТЕР находится под контролем промотора EF1-альфа, и за ним возможно следует поли(А) сигнал BGH.

13. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что указанный вектор содержит промотор(ы) и/или энхансер(ы) или продукты их слияния, такие как GAPDH, CGAPDH, SV40p, CMVp, СНО EF1-альфа, СНО Actb и/или СНО Hspa5.

14. Способ экспрессии ТЕР или функциональной РНК ТЕР, включающий:

обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей трансген, и вектора по по любому из пп. 8-13;

осуществление трансфекции указанной клетки указанным вектором с обеспечением экспрессии указанного ТЕР или функциональной РНК ТЕР в клетке, причем указанная клетка является клеткой грызуна.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с помощью указанного вектора, повышает экспрессию трансгена в указанной клетке млекопитающего на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR Х-29 и/или последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и тем, что через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с указанного вектора, повышает экспрессию интересующего гена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

17. Рекомбинантная клетка млекопитающего для экспрессии трансгена, содержащая не более чем 20, 15, 10 или 5 рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот по пп. 2-13 или вектор по п. 15 и по меньшей мере один трансген, причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

18. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 17, отличающаяся тем, что указанные рекомбинантные молекула или вектор встроены в геном указанной клетки в виде единичных копий.

19. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 17-18, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой первичную стволовую клетку, клетку хомячка, например, СНО (клетку яичника китайского хомячка).

20. Рекомбинантная клетка млекопитающего для продукции трансгена, содержащая:

а) рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7 или вектор по п. 8; и

б) рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую по меньшей мере один представляющий интерес трансген, который находится под контролем промотора трансгена, причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

21. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 20, которая дополнительно содержит элемент MAR.

22. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 20-21, отличающаяся тем, что указанная функциональная РНК представляет собой временно трансфицированную миРНК или кшРНК, которая транскрибируется с указанной по меньшей мере одной изолированной последовательности нуклеиновой кислоты, при этом указанная миРНК или указанная процессированная кшРНК представляет собой антисмысловую РНК длиной 20, 21, 22, 23, 24 или 25 пар оснований, которая полностью комплементарна 20, 21, 22, 23, 24 или 25 последовательным нуклеотидам мРНК по меньшей мере одного целевого гена, который является частью рекомбинантного пути НГСК (негомологичного соединения концов), ГР (гомологичной рекомбинации), ОМСК (опосредованного микрогомологией соединения концов) или представляет собой белок репарации ДНК, такой как MDC1 (медиатор контрольных точек повреждения ДНК 1).

23. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 22, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один целевой ген, который является частью:

- НГСК, представляет собой 53 ВР1 (белок 1, связывающий опухолевый супрессор р53),

- ГР, представляет собой

Rad51 (белок репарации ДНК RAD51), Rad51B (гомолог 2 белка репарации ДНК RAD51), Rad51C (гомолог 3 белка репарации ДНК RAD51),

Rad51D (гомолог 4 белка репарации ДНК RAD51), Rad52 (белок репарации ДНК RAD52), Rad54 (белок репарации и рекомбинации ДНК RAD54),

Xrcc2 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, комплементирующая нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 2),

Xrcc3 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, комплементирующая нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 3),

Brca1 (рак молочной железы 1, раннее начало),

Brca2 (рак молочной железы 2, раннее начало),

Bard1 (связанный с BRCA1 домен RING 1),

- ОМСК, представляет собой

Ercc1 (эксцизионная репарация, кросс-комплементирующая нарушенную репарацию у грызунов, группа комплементации 1),

Mre11 (мейотическая рекомбинация 11)

лигазу 1 (ДНК-лигаза 1),

и/или

представляет собой белок репарации ДНК MDC1.

24. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 20, 21 или 23, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один трансген экспрессирует терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, такой как эритропоэтин, или фактор роста, и при этом необязательно встраивание и/или экспрессия трансгена повышены в рекомбинантной клетке млекопитающего по сравнению с клеткой, не содержащей указанную рекомбинантную молекулу(ы) нуклеиновой кислоты.

25. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 20, 21 или 23, отличающаяся тем, что указанная клетка содержит по меньшей мере две функциональные РНК ТЕР, при этом одна или обе РНК ТЕР представляют собой временно трансфицированные миРНК или экспрессируются с указанной изолированной последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональную РНК ТЕР.

26. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 20, 21 или 23, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная клетка млекопитающего содержит элемент MAR.

27. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты для увеличения эффективности продукции трансгена, экспрессируемого в клетке млекопитающего, содержащая:

(а) 5'- и 3'-транспозон-специфичный инвертированный концевой повтор (ITR),

(b) по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональную РНК ТЕР, расположенную между 5'- и 3'-ITR, и которая находится под контролем промотора, который обеспечивает экспрессию указанного белка экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональной РНК ТЕР в клетке млекопитающего; и

(c) по меньшей мере один эпигенетический регуляторный элемент, представляющий собой MAR (участок прикрепления к матриксу), который расположен между 5'- и 3'-ITR,

(d) по меньшей мере один трансген, также расположенный между 5'- и 3'-ITR, который находится под контролем промотора трансгена;

при этом указанный белок ТЕР представляет собой один или более из следующих белков пути секреции белка: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX, или белок ТЕР соответствует одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27, и hCANX с последовательностью SEQ ID NO: 29 и последовательностям аминокислот, идентичным более чем на 80%, 90%, 95% или 98% указанным последовательностям;

причем указанная функциональная РНК ТЕР внутри указанной клетки включает/состоит из последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка пути рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc, MDC1, Bard1, лигаза 1 или Mre11; и

при этом указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку грызуна.

28. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 27, отличающаяся тем, что указанный элемент MAR выбран из последовательностей SEQ ID NO: 1 (MAR 1-68), 2 (MAR 1_6), 3 (MAR X_S29), 4 (MAR S4), 5 (MAR лизоцима цыпленка), представляет собой сконструированный, в частности, перестроенный аналог и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: с 1 по 5.

29. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27-28, отличающаяся тем, что указанная функциональная РНК ТЕР представляет собой микроРНК или кшРНК.

30. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27-28, отличающаяся тем, что длина указанной молекулы нуклеиновой кислоты составляет по меньшей мере 5000, 6000, 7000, 8000, 90000 или 10000 п.о.

31. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27-28, отличающаяся тем, что 5'- и 3'-ITR представляют собой 5'- и 3'-ITR транспозона Спящая Красавица или предпочтительно транспозона PiggyBac.

32. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27-28, отличающаяся тем, что после первой трансфекции клетки млекопитающего указанной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты и второй последующей трансфекции дополнительной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей трансген, встраивание и/или экспрессия трансгена оказываются повышенными в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой указанной первой трансфекции.

33. Рекомбинантная молекула кислоты по п. 27, отличающаяся тем, что указанный элемент MAR расположен между 5'- и 3'-ITR и что необязательно трансген, такой как ген устойчивости к антибиотику или ген, кодирующий иммуноглобулин, возможно находящийся под контролем дополнительного промотора, расположен между 5'- и 3'-ITR, например, между 5'-ITR и MAR.

34. Способ трансфекции клетки млекопитающего, включающий:

трансфекцию указанных клеток млекопитающих

(i) по меньшей мере одной, по меньшей мере двумя, по меньшей мере тремя или по меньшей мере четырьмя рекомбинантными молекулами нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27–33, или

(ii) вектором по п. 8 и/или по меньшей мере одной, по меньшей мере двумя, по меньшей мере тремя или по меньшей мере четырьмя изолированными функциональными РНК ТЕР, экспрессируемыми рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 27-33 или вектором по п. 8, и

(iii) по меньшей мере одним трансгеном, который находится под контролем промотора трансгена,

причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что трансфекцию указанной рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты по пп. 27-33 или вектора по п. 8 осуществляют в качестве первой трансфекции, и/или трансфекцию указанного трансгена, который необязательно является частью рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты, возможно осуществляют в качестве второй, последующей трансфекции, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая распознает указанные 5'- и 3'-ITR.

36. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой клетки хомячка.

37. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанную клетку трансфицируют более чем одной рекомбинантной молекулой нуклеиновых кислот, включая по меньшей мере две, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот, кодирующих один, два или три из указанных белков ТЕР.

38. Способ по п. 34 или 35, отличающийся тем, что каждая из указанных молекул нуклеиновых кислот является частью вектора, и тем, что осуществляют котрансфекцию указанными векторами.

39. Способ по п. 38, отличающийся тем, что указанная котрансфекция, предпочтительно котрансфекция рекомбинантными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими белки SRP14, SRP9 и SRP54, повышает встраивание и/или экспрессию трансгена в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой такой котрансфекции.

40. Способ по п. 34, отличающийся тем, что множество указанных клеток млекопитающих, которые стабильно экспрессируют указанный белок ТЕР или функциональную РНК ТЕР, получают, чтобы получить рекомбинантные клетки млекопитающих, и при этом указанное множество рекомбинантных клеток млекопитающих не зависит от присутствия указанного элемента MAR.

41. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанные клетки млекопитающих трансфицируют второй раз.

42. Способ по п. 34, отличающийся тем, что по меньшей мере 30%, 40% или 45% указанных клеток млекопитающих становятся рекомбинантными клетками млекопитающих и экспрессируют указанный трансген.

43. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанная клетка млекопитающего трансфицирована указанной по меньшей мере одной изолированной функциональной РНК ТЕР и вектором, содержащим указанный по меньшей мере один трансген и необязательно 3'-ITR и 5'-ITR, фланкирующие указанный по меньшей мере один трансген, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая распознает указанные 5'- и 3'-ITR.

44. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанный трансген представляет собой терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, цитокин или фактор роста.

45. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты необязательно содержит маркер отбора и что указанный по меньшей мере один трансген экспрессируется

(a) без отбора по указанному маркеру, или

(b) с отбором по указанному маркеру, например, путем добавления селекционного агента в культуральную среду, и

(c) в отсутствие транспозазы, или

(d) в присутствии транспозазы.

46. Способ по п. 34, отличающийся тем, что встраивание и/или экспрессия трансгена повышены в такой клетке по сравнению с клеткой, не трансфицированной указанными изолированными молекулами нуклеиновых кислот и/или по меньшей мере одной из указанных изолированных функциональных РНК ТЕР.

47. Набор для осуществления трансфекции клетки, в одном контейнере содержащий по меньшей мере один вектор, содержащий любую из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот по пп. 1-7 или 27-33, или вектор по п. 8, и в дополнительном контейнере содержащий инструкцию по применению указанного вектора или векторов, причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

48. Набор по п. 47, отличающийся тем, что указанный набор дополнительно к указанным двум контейнерам содержит в еще одном дополнительном контейнере вектор, кодирующий подходящую транспозазу.

49. Набор по п. 47, отличающийся тем, что более чем один вектор предусмотрен в одном или более контейнерах, и что указанные белки ТЕР представляют собой по меньшей мере два из следующих белков: шаперон, SRP14, SRP9 или SRP54.

50. Применение рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 27-33 для повышения встраивания трансгена в геном клетки хозяина и/или экспрессии трансгена, причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

51. Применение по п. 50, отличающееся тем, что указанная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты является частью вектора экспрессии.

52. Вектор экспрессии, содержащий рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, и дополнительно содержащий:

(a) трансген, который фланкирован в 3'-5' направлении промотором и в 5'-3' направлении сигналом полиаденилирования,

(b) единичный элемент MAR в 5'-3' направлении от сигнала полиаденилирования, или

(c) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от места встраивания указанного трансгена.

53. Вектор экспрессии по п. 52, отличающийся тем, что указанный единичный или первый и второй элементы MAR выбраны из элементов MAR 1_68, 1_6, 1_6R2, 1_68R, 1_68R2, X_29R3, или X_29 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 или 10.

54. Вектор экспрессии по п. 52, отличающийся тем, что указанный единичный элемент или первый и второй элементы MAR выбран/выбраны из перестроенных элементов MAR 1_6R2, 1_68R, 1_68R2 или X_29R3 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 6, 7, 8 или 10, при этом необязательно указанный элемент(ы) MAR повышает экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70% по сравнению с их неперестроенными аналогами.

55. Вектор экспрессии по пп. 52-54, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой промотор EF1-альфа и указанный сигнал полиаденилирования представляет собой поли(А) сигнал BGH.

56. Вектор экспрессии по пп. 52-54, отличающийся тем, что указанный вектор содержит промотор(ы), и/или энхансер(ы), или продукты их слияния, такие как GAPDH, CGAPDH, CSV40p, CMVp, СНО Ef1-альфа, СНО Actb или СНО Hspa5.

57. Вектор экспрессии по п. 56, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой промотор GAPDH и содержит энхансер CMV.

58. Вектор экспрессии по пп. 52-54 или 57, отличающийся тем, что указанный один или первый и второй MAR, энхансер, промотор, интересующий трансген и сигнал полиаденилирования расположены между 5'- и 3'-ITR.

59. Вектор экспрессии по пп. 52-54 или 57, содержащий

(a) единичный элемент MAR в 5'-3' направлении от сигнала полиаденилирования, при этом указанный единичный элемент MAR предпочтительно представляет собой элемент MAR 1-68 или MARX-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или SEQ ID NO: 9, и предпочтительно представляет собой элемент MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, или

(b) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена, при этом указанный первый элемент MAR, предпочтительно включает элемент 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, идентична перестроенным MAR на основе MAR 1-6, в частности элементам, последовательности которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательности SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR, который предпочтительно включает элемент MAR 1-68, и/или последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.

60. Вектор экспрессии по п. 59, содержащий единичный элемент MAR, отличающийся тем, что указанный единичный элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от сайта полиаденилирования и представляет собой MAR 1-68 или MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, идентична перестроенным MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элементам, последовательность которых по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и предпочтительно представляет собой элемент, полученый из MAR Х-29, и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3.

61. Вектор экспрессии по п. 59, содержащий первый элемент MAR в 3'-5' направлении от трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена, отличающийся тем, что указанный первый элемент MAR включает элемент MAR 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и указанный второй элемент MAR включает элемент MAR 1_68 и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.

62. Способ экспрессии трансгена, включающий:

обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей один из векторов по пп. 52-61, содержащих указанный трансген, и экспрессирующей указанный трансген, причем указанная клетка представляет собой клетку грызуна.

63. Способ по п. 62, отличающийся тем, что указанный элемент(ы) MAR повышает экспрессию указанного трансгена предпочтительно на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.

64. Способ по п. 62, отличающийся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MARX_29 и/или нуклеиновую кислоту, последовательность которой по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и что через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования указанный элемент MAR повышает экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.