Ссылка на перечень последовательностей
Настоящая заявка подана в электронном виде через EFS-Web и содержит перечень последовательностей в электронном виде в формате.txt. Файл.txt содержит перечень последовательностей, озаглавленный “PC72283SequenceListing_ST25.txt”, созданный 17 января 2017 года и имеющий размер 58 Кбайт. Перечень последовательностей, содержащийся в этом файле.txt, является частью описания и включен в настоящий документ полностью посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым производным калихеамицина, используемым в качестве нагрузок в конъюгатах антитело-лекарственное средство (ADC), и к соединениям нагрузка-линкер, а также ADC-соединениям, содержащим вышеуказанные вещества. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим вышеуказанные нагрузки, соединения нагрузка-линкер и ADC-соединения, а также к способам применения указанных нагрузок, соединений нагрузка-линкер и ADC для лечения патологических состояний, таких как злокачественная опухоль.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Терапия антителами обеспечивает направленное терапевтическое лечение пациентов с различными расстройствами, такими как злокачественная опухоль и иммунологические заболевания, и, соответственно, играет важную роль в биологических исследованиях. Были рассмотрены различные подходы направленной терапии антителами, включая конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC). Chari, R. V., Miller, M. L., and Widdison, W. C. (2014) Antibody-drug conjugates: an emerging concept in cancer therapy. Angewandte Chemie 53, 3796-827; Senter, P. D., and Sievers, E. L. (2012). В случае ADC (также, в определенных контекстах, называемых иммуноконъюгатами), низкомолекулярные “нагрузки”, которые часто представляют собой малые цитотоксические молекулы (компоненты лекарственного средства), ковалентно связаны (конъюгированы) с антителами для направленной локальной доставки компонентов лекарственного средства к опухолям.
Конъюгирование лекарственных средств с антителами, непосредственно или через линкеры, включает определение множества факторов, включая идентичность и местоположение химической группы для конъюгирования лекарственного средства, механизм высвобождения лекарственного средства, структурные элементы, обеспечивающие высвобождение лекарственного средства, а также структурную модификацию высвобождаемого несвязанного лекарственного средства. Кроме того, если лекарственное средство должно высвобождаться после интернализации антител, механизм высвобождения лекарственного средства должен быть согласован с внутриклеточным переносом конъюгата. Свойства данного конъюгата антитело-лекарственное средство, включая его профиль высвобождения нагрузки, могут, соответственно, зависеть от таких факторов, как свойства нагрузки, ковалентного линкера, антитела и биологической системы, в которую вводится ADC.
Несмотря на то, что для доставки с помощью антител было исследовано несколько различных классов лекарственных средств, лишь несколько классов лекарственных средств доказали свою эффективность в качестве конъюгатов с антителами, хотя они и имели соответствующий профиль токсичности. Одним из таких классов являются калихеамицины, также известные как комплекс LL-E33288, которые представляют собой семейство мощных антибактериальных и противоопухолевых средств, полученных из бактерии Micromonospora enchinospora. Примеры производных калихеамцина описаны в патенте США № 4970198. MYLOTARG® (гемтузумаб озогамицин) является примером конъюгата антитело-лекарственное средство, содержащего моноклональное антитело против CD33, которое связано с калихеамицином посредством кислотогидролизуемого линкера. Коммерческий продукт продавался как первое антитело-направленное химиотерапевтическое средство, и был одобрен для лечения острого миелоидного лейкоза (AML) у пожилых пациентов. Другим примером конъюгата антитела с лекарственным средством, содержащим калихеамицин, является инотузумаб озогамицин, антитело против CD22, связанное с калихеамицином, которое в настоящее время проходит клинические испытания для лечения определенных типов злокачественной опухоли. Одним из примеров способа получения конъюгата антитела с лекарственным средством, содержащего калихеамицин, является взаимодействие метилтрисульфида калихеамицина с соответствующими тиолами с образованием дисульфидов с одновременным введением функциональной группы, такой как гидразид или аналогичный нуклеофил, см., например, патент США № 5053394.
Остается потребность в дальнейшей разработке производных калихеамицина. Такие производные могут иметь свойства, которые отличаются от свойств известных производных калихеамицина, например, альтернативные химические свойства, физические свойства, профили высвобождения нагрузки, и/или могут иметь другой профиль биологической активности.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и 
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
R4 представляет собой H;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(С0-С6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(С0-С6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, где
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
, 
и 
;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкил, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2; и
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3.
Другой аспект изобретения относится к соединению формулы (II):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и 
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из
, , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3; и
L представляет собой [ЛИНКЕР].
Другой аспект изобретения относится к соединению формулы (III),
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и 
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкил, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкил, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LRпредставляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ]; и
AB представляет собой антитело.
Другой аспект изобретения относится к соединению формулы (IV),
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и 
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii)-CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, где
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
, 
и 
;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LR представляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ];
AB представляет собой антитело; и
b представляет собой 1-20,
Другой аспект изобретения относится к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество любого из вышеуказанных соединений и/или любого из вышеуказанных конъюгатов антител с лекарственным средством и фармацевтически приемлемый носитель или носитель.
Другой аспект изобретения относится к способу применения эффективного количества любого из вышеуказанных соединений и/или любого из вышеуказанных конъюгатов антител с лекарственным средством для лечения злокачественной опухоли путем введения пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества указанного соединения и/или конъюгата.
Другой аспект изобретения относится к способу лечения злокачественной опухоли, причем указанная злокачественная опухоль включает опухоль, метастазы или другое заболевание или расстройство, характеризующееся неконтролируемым ростом клеток, где указанная злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из карциномы мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, толстой кишки, глиомы, эндометрия, почек, легких, пищевода, яичников, предстательной железы, поджелудочной железы, меланомы, желудка и яичек.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 представлен график данных из таблицы 6 ADC, содержащих калихеамицин (примеры 50, 69 и 84), вводимых в дозах 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, в сравнении с Mylotarg, вводимым в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителем.
На фиг.2 представлен график данных из таблицы 7 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), вводимого в дозе 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 86), вводимого в дозе 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.3 представлен график данных из таблицы 8 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51), вводимого в дозе 0,01, 0,03 и 0,1 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 52), вводимого в дозе 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.4 представлен график данных из таблицы 9 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), вводимого в дозе 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 71), вводимого в дозе 0,3 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.5 представлен график данных из таблицы 10 анти-CD33 калихеамициновых ADC (примеры 60, 61 и 67), вводимых в дозе 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.6 представлен график данных из таблицы 11 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51), CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), их соответствующих ADC негативного контроля (примеры 52, 71 и 86, соответственно), вводимых, каждый, в дозе 0,3 мг/кг, Mylotarg®, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.7 представлен график данных из таблицы 12 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51), вводимого в дозе 0,005, 0,01, 0,05 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.8 представлен график данных из таблицы 13 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), вводимого в дозе 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг.9 представлен график данных из таблицы 14 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), вводимого в дозе 0,005, 0,01, 0,05 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение относится к новым производным калихеамицина, используемым в качестве нагрузок в конъюгатах антитело-лекарственное средство (ADC), а также к соединениям нагрузка-линкер и соединениям ADC, содержащим указанные вещества. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим вышеуказанные нагрузки, соединения нагрузка-линкер и ADC, а также к способам применения указанных нагрузок, соединений нагрузка-линкер и ADC для лечения патологических состояний, таких как злокачественная опухоль. Изобретение также относится к способам применения таких соединений и/или конъюгатов in vitro, in situ и in vivo для обнаружения, диагностики или лечения клеток млекопитающих или ассоциированных патологических состояний.
Настоящее изобретение может быть более легко понято посредством ссылки на следующее подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения и примеров, включенных в настоящий документ. Следует понимать, что используемая в настоящем документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения. Кроме того, следует понимать, что если специально не определено в настоящем документе, термины, используемые в настоящем документе, должны иметь свои принятые значения, известные в соответствующей области техники.
Все публикации, патенты и патентные заявки, приведенные в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме для всех целей в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент и патентная заявка были специально и индивидуально указаны, как включенные посредством ссылки. В случае, если один или несколько включенных документов и аналогичных документов отличаются или противоречат настоящей заявке, включая, но ими не ограничиваясь, определенные термины, использование терминов, описанные методы и т.п., настоящая заявка является определяющей.
Определения и аббревиатура
Если не указано иное, следующие термины и фразы, используемые в настоящем документе, имеют следующие значения. При использовании в настоящем документе торговых наименований, торговое наименование включает композицию продукта, непатентованное лекарственное средство и активный фармацевтический(ие) ингредиент(ы) продукта торгового наименования, если иное не указано в контексте.
Термин “антитело” (или “AB”) используется в настоящем документе в наиболее широком смысле, и он конкретно охватывает интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, моноспецифические антитела, полиспецифичные антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, которые проявляют желаемую биологическую активность. Интактное антитело имеет главным образом две области: вариабельную область и константную область. Вариабельная область связывается и взаимодействует с антигеном-мишенью. Вариабельная область включает гипервариабельный участок (CDR), который распознает и связывается со специфическим сайтом связывания на конкретном антигене. Константная область может распознаваться и взаимодействовать с иммунной системой (см., например, Janeway et al., 2001, Immuno. Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). Антитело может быть любого типа или класса (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA) или подкласса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2). Антитело может иметь происхождение из любого подходящего вида. В некоторых вариантах осуществления, антитело имеет человеческое или мышиное происхождение. Антитело может быть, например, человеческим, гуманизированным или химерным.
Термины “специфически связывается” и “специфическое связывание” относятся к связыванию антитела с заранее установленным антигеном. Как правило, антитело связывается с аффинностью, по меньшей мере, около 1×107 М-1 и связывается с заранее установленным антигеном с аффинностью, которая, по меньшей мере, в два раза выше, чем его аффинность в отношении связывания с неспецифическим антигеном (например, бычьим сывороточным альбумином (BSA), казеином), отличным от заранее установленного антигена или близкородственного антигена.
Используемый в настоящем документе термин “моноклональное антитело” относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, то есть индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными за исключением возможных естественных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, будучи направленными против единственного антигенного сайта. Определение “моноклональное” указывает на природу антитела как получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее продуцирование антитела каким-либо конкретным способом.
Термин “моноклональные антитела” специально включает “химерные” антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, имеющих происхождение из конкретных видов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, имеющих происхождение из других видов или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагментов таких антител, при условии, что они демонстрируют желаемую биологическую активность.
Используемое в настоящем документе “H(C)-” относится к трастузумабу (товарный знак HERCEPTIN®), который относится к моноклональному антителу, препятствующему связыванию HER2/neu рецептора через один из его цистеинов с соединением по изобретению. Используемое в настоящем документе “H(K)-” относится к трастузумабу, который относится к моноклональному антителу, препятствующему связыванию HER2/neu рецептора через один из его лизинов с соединением по изобретению.
“Интактное антитело” представляет собой антитело, которое содержит антиген-связывающую вариабельную область, а также константный домен легкой цепи (CL) и константные домены тяжелой цепи, CH1, CH2, CH3 и CH4, в зависимости от класса антител. Константные домены могут быть нативными последовательностями константных доменов (например, человеческая нативная последовательность константных доменов) или их варианты аминокислотных последовательностей.
Интактное антитело может проявлять одну или несколько “эффекторных функций”, которые относятся к таким биологическим активностям, которые приписывают Fc-области (например, нативная последовательность Fc-области или аминокислотный вариант последовательности Fc-области) антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают комплемент-зависимую цитотоксичность, антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и антитело-зависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз.
“Фрагмент антитела” содержит часть интактного антитела, предпочтительно содержащую его антиген-связывающую или вариабельную область. Примеры фрагментов антитела включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv, диатела, триатела, тетратела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антитела, scFv, scFv-Fc, мультиспецифичные фрагменты антитела, образованные из фрагмента(ов) антител, фрагмент(ы), продуцируемый(ые) Fab экспрессионной библиотекой, или эпитоп-связывающие фрагменты любого из вышеуказанного, которые иммуноспецифично связываются с антигеном-мишенью (например, опухолевым клеточным антигеном, вирусным антигеном или микробным антигеном).
Термин “вариабельный” в контексте антитела относится к определенным участкам вариабельных доменов антитела, которые сильно отличаются по последовательности и используются в связывании и специфичности каждого конкретного антитела для его конкретного антигена. Эта вариабельность сконцентрирована в трех сегментах, называемых “гипервариабельными участками” в вариабельных доменах легкой и тяжелой цепи. Более высококонсервативные участки вариабельных доменов называют каркасными областями (FR). Вариабельные домены нативных тяжелой и легкой цепей каждый содержит четыре FR, соединенные тремя гипервариабельными участками.
Термин “гипервариабельный участок”, используемый в настоящем документе, относится к аминокислотным остаткам антитела, которые ответственны за связывание антигена. Гипервариабельный участок, обычно, содержит аминокислотные остатки из “участка, определяющего комплементарность” или “CDR” (например, остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 31-35 (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (L3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)), и/или те остатки из “гипервариабельной петли” (например, остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 26-32 (H1), 53-55 (142) и 96-101 (H3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Chothia и Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917). FR остатки представляют собой остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельной области, как определено в настоящем документе.
“Одноцепочечное Fv” или “scFv” фрагмент антитела содержит V.sub.H и V.sub.L домены антитела, причем эти домены присутствуют в одной полипептидной цепи. Обычно, Fv полипептид дополнительно содержит полипептидный линкер между V.sub.H и V.sub.L доменами, который дает возможность scFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена. Для обзора scFv см. Pluckthun в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg и Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
Термин “диатело” относится к небольшим фрагментам антитела с двумя антиген-связывающими сайтами, причем фрагменты содержат вариабельный тяжелый домен (VH), соединенный с вариабельным легким доменом (VL) в одной полипептидной цепи. При использовании линкера, который слишком короткий, чтобы обеспечить спаривание между двумя доменами на одной цепи, домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антиген-связывающих сайта. Диатела описаны более подробно, например, в EP 0404097; WO 93/11161; и Hollinger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448.
“Гуманизированные” антитела являются формами нечеловеческих антител (например, грызунов), которые представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулина не являющегося человеческим. В основном гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых остатки из гипервариабельной области реципиента заменены остатками из гипервариабельной области видов, не относящихся к человеку (донорное антитело), таких как мышь, крыса, кролик или не относящиеся к человеку приматы, которые обладают требуемой специфичностью, аффинностью и емкостью. В некоторых случаях, остатки каркасной области (FR) человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками, не являющимися человеческими. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаруживают в реципиентном антителе или в донорном антителе. Эти модификации создают для дополнительного улучшения эффективности антитела. В общем, гуманизированное антитело содержит по существу все из, по меньшей мере, одного и, обычно, двух вариабельных доменов, в которых все, или по существу все, гипервариабельные петли соответствуют петлям из иммуноглобулина, не являющегося человеческим, и все, или по существу все, FR-области представляют собой FR-области из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также содержит, по меньшей мере, участок константной области иммуноглобулина (Fc), обычно человеческого иммуноглобулина. Для более подробной информации см. Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-329; и Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596.
Используемый в настоящем документе термин “выделенное” означает отделенное от других компонентов (а) природного источника, такого как растительная или животная клетка или клеточная культура, или (b) синтетической органической химической реакционной смеси. Используемый в настоящем документе термин “очищенное” означает, что при выделении изолят содержит, по меньшей мере, 95%, и в другом аспекте, по меньшей мере, 98%, соединения (например, конъюгата) по массе изолята.
“Выделенное” антитело представляет собой антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или выделено из компонента его естественного окружения. Загрязняющие компоненты его естественных окружающих условий представляют собой вещества, которые препятствуют применению антитела для диагностики или лечения, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах осуществления, антитело очищают (1) до более чем 95% по массе антитела, что определяется методом Лоури, и наиболее предпочтительно более чем 99% по массе, (2) до степени, достаточной для получения, по меньшей мере, 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности, путем использования секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенности согласно электрофорезу в полиакриламидных гелях с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием кумасси голубого или, предпочтительно, окрашивания серебром. Выделенное антитело включает антитело in situ в рекомбинантных клетках, в виду того что, по меньшей мере, один компонент природного окружения антитела не будет присутствовать. Однако, обычно выделенное антитело получают, по меньшей мере, за одну стадию очистки.
Антитело, которое “индуцирует апоптоз”, представляет собой антитело, которое индуцирует программируемую гибель клеток, что определяется посредством связывания аннексина V, фрагментации ДНК, сжатия клетки, расширения эндоплазматического ретикулума, клеточной фрагментации и/или образования мембранных везикул (называемых апоптотическими тельцами). Клетка представляет собой опухолевую клетку, например, молочной железы, яичника, желудка, эндометрия, слюнной железы, легкого, почки, толстой кишки, щитовидной железы, поджелудочной железы или мочевого пузыря. Для оценки клеточных событий, ассоциированных с апоптозом, существуют различные методы. Например, перенос фосфатидилсерина (PS) может быть измерен посредством связывания аннексина; фрагментация ДНК может быть оценена посредством электрофоретического расщепления ДНК; и конденсация ядра/хроматина наряду с фрагментацией ДНК может быть оценена посредством какого-либо увеличения в гиподиплоидных клетках.
Термин “терапевтически эффективное количество” относится к количеству лекарственного средства, эффективного для лечения заболевания или расстройства у млекопитающего. В случае злокачественной опухоли, терапевтически эффективное количество лекарственного средства может снижать количество опухолевых клеток; уменьшать размеры опухоли; подавлять (то есть замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) инфильтрацию опухолевой клетки в периферические органы; подавлять (то есть замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) метастазы опухоли; ингибировать до некоторой степени рост опухоли; и/или облегчать до некоторой степени один или несколько симптомов, ассоциированных со злокачественной опухолью. До той степени, при которой лекарственное средство может ингибировать рост и/или уничтожать имеющиеся опухолевые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Для терапии злокачественной опухоли, эффективность может, например, быть измерена путем оценки времени до начала прогрессирования заболевания (TTP) и/или определения степени ответа (RR).
Термин “существенное количество” относится к большей части, то есть больше, чем 50% популяции, смеси или образца.
Термин “внутриклеточный метаболит” относится к соединению, полученному в результате метаболического процесса или реакции внутри клетки на конъюгате антитело-лекарственное средство (ADC). Метаболический процесс или реакция может представлять собой ферментативный процесс, такой как протеолитическое расщепление пептидного линкера ADC. Внутриклеточные метаболиты включают, без ограничения, антитела и свободное лекарственное средство, которые могут подвергаться внутриклеточному расщеплению после поглощения, диффузии, захвата или транспорта в клетку.
Термины “внутриклеточно расщепленный” и “внутриклеточное расщепление” относятся к метаболическому процессу или реакции внутри клетки на ADC или подобном ему, посредством которых ковалентная связь, например, линкера между лекарственной группировкой и антителом разрушается с получением свободного лекарственного средства или другого метаболита конъюгата, отделяться от антитела внутри клетки. Расщепленные группировки ADC являются, таким образом, внутриклеточными метаболитами.
Термин “биодоступность” относится к системной доступности (то есть уровни в крови/плазме) данного количества лекарственного средства, введенного пациенту. Биодоступность представляет собой абсолютный термин, который указывает меру как времени (скорость), так и общего количества (степень) лекарственного средства, которое достигает общего кровотока из введенной лекарственной формы.
Термин “цитотоксическая активность” относится к уничтожающему клетку, цитостатическому или антипролиферативному эффекту ADC или внутриклеточного метаболита указанного ADC. Цитотоксическая активность может быть выражена в виде значения IC50, которое равно концентрации (молярной или массовой) на единицу объема, при которой выживает половина клеток.
“Расстройство” представляет собой любое состояние, при котором может быть получен эффект от лечения лекарственным средством или конъюгатом антитело-лекарственное средство. Оно включает хронические и острые расстройства или заболевания, включая такие патологические состояния, которые приводят млекопитающего к рассматриваемому расстройству. Неограничивающие примеры расстройств, подлежащих лечению по настоящему изобретению, включают доброкачественные и злокачественные новообразования; лейкоз и лимфоидные новообразования, нейрональные, глиальные, астроцитальные, гипоталамические и другие эндокринные, макрофагальные, эпителиальные, стромальные и бластоцельные расстройства; а также воспалительные, ангиогенные и иммунологические расстройства.
Термины “злокачественная опухоль” и “злокачественный” относятся к или описывают физиологическое состояние или расстройство у млекопитающих, которое обычно характеризуется неконтролируемым клеточным ростом. “Опухоль” содержит одну или несколько злокачественных клеток.
Примеры “пациента” включают, без ограничения, человека, крысу, мышь, морскую свинку, обезьяну, козу, корову, лошадь, собаку, кошку, птицу и домашнюю птицу. В иллюстративном варианте осуществления пациент представляет собой человека.
Термины “лечить” или “лечение”, если иное не следует из контекста, относится к терапевтическому лечению или профилактическим мерам для предотвращения рецидива, причем задача заключается в том, чтобы подавлять или снижать (уменьшать) нежелаемое физиологическое изменение или расстройство, такое как развитие или распространение злокачественной опухоли. Для целей настоящего изобретения, благоприятные или желаемые клинические результаты включают, но ими не ограничиваются, снижение симптомов, минимизацию степени заболевания, стабилизированное (то есть не ухудшающееся) состояние заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, уменьшение интенсивности или облегчение болезненного состояния и ремиссию (частичную или полную), неважно может ли это быть обнаружено или нет. “Лечение” может также означать пролонгирование выживания по сравнению с ожидаемым выживанием без получения лечения. Субъекты, нуждающиеся в лечении, включают тех, кто уже имеет состояние или расстройство, а также тех, кто предрасположен иметь состояние или расстройство.
В контексте злокачественной опухоли, термин “лечение” включает частичное или полное ингибирование роста опухолевых клеток, злокачественных клеток или опухоли; ингибирования репликации опухолевых клеток или злокачественных клеток, уменьшения общей массы опухоли или снижения количества злокачественных клеток и улучшения одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием.
В контексте аутоиммунного заболевания термин “лечение” включает частичное или полное ингибирование репликации клеток, ассоциированных с аутоиммунным болезненным состоянием, включая, но ими не ограничиваясь, клетки, которые продуцируют аутоиммунные антитела, снижение нагрузки аутоиммунными антителами и уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов аутоиммунного заболевания.
В контексте инфекционного заболевания, термин “лечение” включает любое полное или частичное: ингибирование роста, размножения или репликации патогена, который вызывает инфекционное заболевание, и уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов инфекционного заболевания.
Термин “инструкция по применению” используют для ссылки на инструкции, включенные в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показании(ях), использовании, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
Используемые в настоящем документе термины “клетка”, “клеточная линия” и “клеточная культура” используются взаимозаменяемо, и все эти обозначения включают потомство. Слова “трансформанты” и “трансформированные клетки” включают первичную клетку-субъект и культуры или потомство, полученное от них, без учета количества переносов. Также следует понимать, что все потомство не может быть точно идентичным по содержанию ДНК вследствие преднамеренных или случайных мутаций. Мутантное потомство, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, как определено в отношении первоначально трансформированной клетки, также включено. Где предполагаются отличные обозначения, будет ясно из контекста.
Если не указано иное, термин “алкил”, сам по себе или как часть другого термина, относится к насыщенному углеводороду с прямой или разветвленной цепью, имеющему определенное количество атомов углерода (например, “C1-C8” алкил относится к алкильной группе, имеющей от 1 до 8 атомов углерода; “С0-С6” алкил относится к алкильной группе, имеющей от 0 атомов углерода, что означает, что алкильная группа отсутствует, до 6 атомов углерода). Аналогичным образом, в случае, когда количество атомов углерода не указано, алкильная группа имеет от 1 до 8 атомов углерода. Типичные C1-C8 алкилы с прямой цепью включают, но ими не ограничиваются, метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил и н-октил; тогда как разветвленные C1-C8 алкилы включают, но ими не ограничиваются, -изопропил, -втор-бутил, -изобутил, -трет-бутил, -изопентил и -2-метилбутил; ненасыщенные C2-C8 алкилы включают, но ими не ограничиваются, винил, аллил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1-бутенил, 2-метил-2-бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил и 3-метил-1-бутинил. Алкильные группы, описанные в настоящем документе, как необязательно замещенные, могут быть замещены одной или несколькими заместителями, которые выбраны независимо, если не указано иное. Общее количество групп заместителей может соответствовать общему количеству атомов водорода в алкильном фрагменте, если такое замещение имеет химический смысл. Необязательно замещенные алкильные группы обычно содержат от 1 до 6 необязательных заместителей, иногда от 1 до 5 необязательных заместителей, предпочтительно от 1 до 4 необязательных заместителей или более предпочтительно от 1 до 3 необязательных заместителей. В некоторых случаях, замещенные алкильные группы могут быть конкретно обозначены со ссылкой на группу заместителей. Например, “галогеналкил” относится к алкильной группе с определенным числом атомов углерода, которая замещена одним или несколькими галогеновыми заместителями и обычно содержит 1-6 атомов углерода и 1, 2 или 3 атома галогена (то есть “C1-C6 галогеналкил”) или иногда 1-4 атомов углерода и 1, 2 или 3 атома галогена (то есть “C1-C4 галогеналкил”). Таким образом, галогеналкильная группа C1-C4 включает трифторметил (-CF3) и дифторметил (-CF2H). Более конкретно, фторированные алкильные группы могут быть конкретно обозначены как фторалкильные группы, например, C1-C6 или C1-C4 фторалкильные группы. Аналогично, “гидроксиалкил” относится к алкильной группе с определенным числом атомов углерода, которая замещена одним или несколькими гидрокси заместителями, и обычно содержит 1-6 атомов углерода и 1, 2 или 3 гидрокси (то есть “C1-C6 гидроксиалкил”). Таким образом, C1-C6 гидроксиалкил включает гидроксиметил (-CH2OH) и 2-гидроксиэтил (-CH2CH2OH). “Алкоксиалкил” относится к алкильной группе с определенным числом атомов углерода, которая замещена одним или несколькими алкокси заместителями. Алкоксиалкильные группы обычно содержат 1-6 атомов углерода в алкильной части и замещены 1, 2 или 3 C1-C4 алкокси заместителями. Такие группы иногда описываются в настоящем документе как C1-C4 алкокси-C1-C6 алкил. “Аминоалкил” относится к алкильной группе с определенным числом атомов углерода, которая замещена одной или несколькими замещенными или незамещенными аминогруппами, и соответственно такие группы дополнительно определены в настоящем документе. Аминоалкильные группы обычно содержат 1-6 атомов углерода в алкильной части и замещены 1, 2 или 3 амино заместителями. Таким образом, C1-C6 аминоалкильная группа включает, например, аминометил (-CH2NH2), N,N-диметиламино-этил (-CH2CH2N(CH3)2), 3-(N-циклопропиламино)пропил (-CH2CH2CH2NH-cPr) и N-пирролидинилэтил (-CH2CH2-N-пирролидинил).
Если не указано иное, “алкенил”, сам по себе или как часть другого термина, относится к алкильной группе, состоящей, по меньшей мере, из одной углерод-углеродной двойной связи. Обычно алкенильные группы имеют от 2 до 20 атомов углерода (“C2-C20 алкенил”), предпочтительно от 2 до 12 атомов углерода (“C2-C12 алкенил”), более предпочтительно от 2 до 8 атомов углерода (“C2-C8 алкенил”) или от 2 до 6 атомов углерода (“C2-C6 алкенил”) или от 2 до 4 атомов углерода (“C2-C4 алкенил”). Типичные примеры включают, но ими не ограничиваются, этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-, 2-, 3-бутенил и тому подобное. Алкенильные группы могут быть незамещенными или замещенными теми же группами, которые описаны в настоящем документе как подходящие для алкила.
Термин “алкинил” относится к алкильным группам, как определено в настоящем документе, состоящим из, по меньшей мере, двух атомов углерода и, по меньшей мере, одной углерод-углерод тройной связи. Алкинильные группы имеют от 2 до 20 атомов углерода (“C2-C20алкинил”), предпочтительно от 2 до 12 атомов углерода (“C2-C12 алкинил”), более предпочтительно от 2 до 8 атомов углерода (“C2-C8алкинил”) или от 2 до 6 атомы углерода (“С2-С6алкинил”) или от 2 до 4 атомов углерода (“С2-С4алкинил”). Типичные примеры включают, но ими не ограничиваются, этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-, 2- или 3-бутинил и тому подобное. Акинильные группы могут быть незамещенными или замещенными.
“Алкокси” относится к одновалентной -О-алкильной группе, где алкильная часть имеет определенное количество атомов углерода. Алкоксигруппы обычно содержат от 1 до 8 атомов углерода (“C1-C8 алкокси”) или от 1 до 6 атомов углерода (“C1-C6 алкокси”) или от 1 до 4 атомов углерода (“C1-C4 алкокси”). Например, C1-C4 алкокси включает -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -OC(CH3)3 и тому подобное. Такие группы могут также быть указаны в настоящем документе как метокси, этокси, изопропокси, трет-бутилокси и т.д. Алкоксигруппы могут быть незамещены или замещены в алкильной части теми же группами, которые описаны в настоящем документе, как подходящие для алкила. В частности, алкоксигруппы могут быть замещены одной или несколькими галогеновыми группами до общего количества атомов водорода, присутствующих в алкильной части. Таким образом, C1-C4 алкокси включает галогенированные алкоксигруппы, например, трифторметокси и 2,2-дифторэтокси (то есть -OCF3 и -OCH2CHF2). В некоторых случаях, такие группы могут быть обозначены как “галогеналкокси” (или, если фторированы, более конкретно как “фторалкокси”) группы, имеющие определенное количество атомов углерода и замещенные одним или несколькими галогеновыми заместителями, и обычно содержат 1-6 атомов углерода и 1, 2 или 3 атома галогена (т.е. “галогеналкокси C1-C6”) или иногда 1-4 атома углерода и 1, 2 или 3 атома галогена (то есть “C1-C4 галогеналкокси”). Таким образом, C1-C4 галогеналкилоксигруппа включает трифторметокси (-OCF3) и дифторметокси (-OCF2H). Более конкретно, фторированные алкильные группы могут быть конкретно обозначены как фторалкоксигруппы, например, C1-C6 или C1-C4 фторалкоксигруппы. Аналогично, “алкилтио” относится к одновалентной -S-алкильной группе, причем алкильная часть имеет определенное количество атомов углерода и может быть необязательно замещена в алкильной части теми же группами, которые описаны в настоящем документе как подходящие для алкила. Например, C1-C4 алкилтио включает -SCH3 и -SCH2CH3.
Если не указано иное, “C3-C10 карбоциклил”, сам по себе или как часть другого термина, представляет собой 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9- или 10-членное одновалентное, замещенное или незамещенное насыщенное или частично ненасыщенное неароматическое моноциклическое бициклическое спироциклическое мостиковое конденсированное или полициклическое карбоциклическое кольцо, полученное путем удаления одного атома водорода от кольцевого атома исходной кольцевой системы. Типичный C3-C10 карбоциклил включает, но ими не ограничивается, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентадиенил, циклогексил, циклогексенил, 1,3-циклогексадиенил, 1,4-циклогексадиенил, циклогептил, 1,3-циклогептадиенил, 1,3,5-циклогептатриенил, циклооктил, циклооктадиенил, бицикло(1,1,1.)пентан и бицикло(2,2,2.)октан. Карбоциклильные группы могут быть незамещены или замещены теми же группами, которые описаны в настоящем документе как подходящие для алкила.
Если не указано иное, термин “гетероалкил”, сам по себе или в сочетании с другим термином, означает, если не указано иное, стабильный углеводород с прямой или разветвленной цепью или их сочетанием, полностью насыщенный или содержащий от 1 до 3 степеней ненасыщенности, состоящий из определенного количества атомов углерода и от одного до трех гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из O, N, Si и S, и где атомы азота и серы могут быть необязательно окисленными, а гетероатом азота необязательно может быть кватернизован. Гетероатом(ы) O, N и S могут быть размещены в любом положении гетероалкильной группы. Гетероатом Si может быть находиться в любом положении гетероалкильной группы, включая положение, в котором алкильная группа присоединена к оставшейся части молекулы. До двух гетероатомов могут быть последовательными.
Если не указано иное, термин “гетероалкилен”, сам по себе или как часть другого заместителя, означает двухвалентную группу, полученную из гетероалкила (как рассмотрено выше). В отношении гетероалкиленовых групп, гетероатомы также могут занимать одно или оба положения на конце цепи.
Если не указано иное, “гетероциклил”, сам по себе или как часть другого термина, относится к одновалентной замещенной или частично незамещенной ароматической или неароматической моноциклической бициклической или трициклической кольцевой системе, содержащей определенное количество кольцевых атомов, включая, по меньшей мере, один гетероатом, выбранный из N, O и S в качестве члена кольца, где атомы кольца S могут быть необязательно замещены одной или двумя оксогруппами (то есть, S(O)q, где q равно 0, 1 или 2) и где гетероциклическое кольцо связано с основной молекулой через кольцевой атом, который может представлять собой C или N. Гетероциклические кольца могут быть спироциклическими мостиковыми или конденсированными с одним или несколькими другими гетероциклическими или карбоциклическими кольцами, причем такие спироциклические мостиковые или конденсированные кольца сами могут быть насыщенными, частично ненасыщенными или ароматическими в той степени, в которой ненасыщенность или ароматичность имеют химический смысл, при условии, что точка присоединения к основной молекуле представляет собой атом гетероциклической части кольцевой системы. Предпочтительно гетероциклические кольца содержат от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O и S(O)q в качестве кольцевого члена, и более предпочтительно от 1 до 2 кольцевых гетероатомов, при условии, что такие гетероциклические кольца не содержат двух смежных атомов кислорода. Кольцо, которое включает гетероатом, может быть ароматическим или неароматическим. Если не указано иное, гетероциклил присоединяется к своей боковой группе на любом гетероатоме или атоме углерода, что обеспечивает стабильную структуру. Типчные примеры “гетероциклила” включают, но ими не ограничиваются, тетрагидрофуранил, оксетанил, пиранил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, бензофуранил, бензотиофен, бензотиазолил, индолил, бензопиразолил, пирролил тиофенил (тиофен), фуранил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, триазолил, хинолинил, включая фрагменты, такие как 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил, пиримидинил, пиридинил, пиридонил, пиразинил, пиридазинил, изотиазолил, изоксазолил, тетразолил, эпоксид и оксетан. Гетероциклильные группы могут быть незамещены или замещены подходящими заместителями, например, аналогичными группами, которые описаны в настоящем документе в качестве подходящих для алкила, арила или гетероарила. Такие заместители могут присутствовать на гетероциклическом кольце, присоединенном к основной молекуле, или на спироциклическом, мостиковом или конденсированном кольце, присоединенном к нему. Кроме того, атомы кольца N могут быть необязательно замещены группами, подходящими для амина, например, алкил, ацил, карбамоил, сульфонильные заместители и тому подобное.
Если не указано иное, “арил”, сам по себе или часть другого термина, означает замещенный или незамещенный одновалентный карбоциклический ароматический углеводородный радикал с 6-20, предпочтительно с 6-14, атомами углерода, полученный путем удаления одного атома водорода от одного атом углерода исходной ароматической кольцевой системы. “Арильная” группа может быть моноциклической или конденсированной. Типичные арильные группы включают, но ими не ограничиваются, радикалы, полученные из бензола, включая фенил, замещенный бензол, нафталин, антрацен, бифенил и тому подобное. “Арилен” представляет собой соответствующий двухвалентный фрагмент. Пример группы “арилен” представляет собой -C6H4-, фенилен, в котором двухвалентный фрагмент бензола образован так, что он может быть дизамещенным. Арильная группа может быть незамещенной или замещенной.
Аналогично, “гетероарил” или “гетероароматический” относятся к моноциклическим или конденсированным бициклическим или полициклическим кольцевым системам, имеющим хорошо известные характеристики ароматичности, которые содержат определенное количество атомов кольца и включают, по меньшей мере, один гетероатом, выбранный из NO и S в качестве кольцевого члена в ароматическом кольце. Включение гетероатома доаускает ароматичность в 5-членных кольцах, а также в 6-членных кольцах. Обычно, гетероарильные группы содержат от 5 до 20 кольцевых атомов (“5-20-членный гетероарил”), предпочтительно от 5 до 14 кольцевых атомов (“5-14-членный гетероарил”) и более предпочтительно от 5 до 10 кольцевых атомов (“5-10-членный гетероарил”). Гетероарильные кольца присоединяются к основной молекуле через кольцевой атом гетероароматического кольца, благодаря чему сохраняется ароматичность. Таким образом, 6-членные гетероарильные кольца могут быть присоединены к основной молекуле через атом кольца C, при этом 5-членные гетероарильные кольца могут быть присоединяться к основной молекуле через атом C или N кольца. Гетероарильные группы также могут быть конденсированы с другим арильным или гетероарильным кольцом или конденсированы с насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим или гетероциклическим кольцом, при условии, что точка присоединения к основной молекуле в таких конденсированных кольцевых системах представляет собой атом гетероароматической части кольцевой системы. Примеры незамещенных гетероарильных групп часто включают, но ими не ограничиваются, пиррол, фуран, тиофен, пиразол, имидазол, изоксазол, оксазол, изотиазол, тиазол, триазол, оксадиазол, тиадиазол, тетразол, пиридин, пиридазин, пиримидин, пиразин, бензофуран, бензотиофен, индол, бензимидазол, индазол, хинолин, изохинолин, пурин, триазин, нафтиридин и карбазол. В частых предпочтительных вариантах осуществления, 5- или 6-членные гетероарильные группы выбраны из группы, состоящей из пирролильного, фуранильного, тиофенильного, пиразолильного, имидазолильного, изоксазолильного, оксазолильного, изотиазолильного, тиазолильного, триазолильного, пиридинильного и пиримидинильного, пиразинильного или пиридазинильного колец. Гетероарильная группа может быть незамещенной или замещенной.
Если не указано иное, “аралкил”, сам по себе или часть другого термина, означает алкильную группу, как определено выше, замещенную арильной группой, как определено выше.
Если не указано иное, “гетероаралкил”, сам по себе или часть другого термина, означает алкильную группу, как определено выше, замещенную ароматической гетероциклильной группой, как определено выше. Гетероаралкил представляет собой соответствующий двухвалентный фрагмент.
Аналогично, “арилалкокси” и “гетероарилалкокси” относятся к арильным и гетероарильным группам, присоединенным к основе молекулы посредством гетероалкиленового линкера (т.е. линкера -Оалкилен-), где группы описаны в соответствии с общим количеством неводородных атомов (т.е. атомов С, N, S и О) в объединенных кольце и линкере. Таким образом, группы -О-СН2-фенил и -О-СН2- пиридинил могут иметь названия группа С8арилалкокси и группа С8гетероарилалкокси соответственно.
Если не указано иное, обычно подразумевается, что не более двух атомов N, O или S обычно связаны последовательно, за исключением случаев, когда оксогруппа присоединена к N или S с образованием нитро или сульфонильной группы, или в случае некоторых гетероароматических колец, такие как триазин, триазол, тетразол, оксадиазол, тиадиазол и тому подобное.
“Гидрокси” относится к группе -OH.
“Ацилокси” относится к одновалентной группе -ОС(О)алкил, причем алкильная часть имеет определенное количество атомов углерода (обычно C1-C8, предпочтительно C1-C6 или C1-C4) и может быть необязательно замещена группами, подходящими для алкила. Таким образом, C1-C4 ацилокси включает заместитель -ОС(О)C1-C4 алкил, например, -ОС(О)СН3.
“Ацил” относится к одновалентной группе -C(O)алкил, где алкильная часть имеет определенное количество атомов углерода (обычно C1-C8, предпочтительно C1-C6 или C1-C4) и может быть необязательно замещена группами, подходящими для алкила, например, F, OH или алкокси. Таким образом, необязательно замещенный -C(O)C1-C4 алкил включает незамещенные ацильные группы, такие как -C(O)CH3 (то есть, ацетил) и -C(O)CH2CH3 (то есть пропионил), а также замещенные ацильные группы, такие как -C(O)CF3 (трифторацетил), -C(O)CH2OH (гидроксиацетил), -C(O)CH2OCH3 (метоксиацетил), -C(O)CF2H (дифторацетил) и тому подобное.
“Ациламино” относится к одновалентной группе -NHC(O)алкил или -NRC(О)алкил, причем алкильная часть имеет определенное количество атомов углерода (обычно C1-C8, предпочтительно C1-C6 или C1-C4) и может быть необязательно замещена группами, подходящими для алкила. Таким образом, C1-C4 ациламино включает заместитель -NHC(O)C1-C4 алкил, например, -NHC(O)CH3.
“Арилокси” или “гетероарилокси” относятся к необязательно замещенной группе -О-арил или -О-гетероарил, где в каждом случае арил и гетероарил являются такими, как определено далее в настоящем документе.
“Ариламино” или “гетероариламино” относятся к необязательно замещенным группам -NH-арил, -NR-арил, -NH-гетероарил или -NR-гетероарил, где в каждом случае арил и гетероарил являются такими, как в дальнейшем определено в настоящем документе, и R представляет собой заместитель, подходящий для амина, например, алкильную, ацильную, карбамоильную или сульфонильную группу, или т.п.
“Циано” относится к группе -C≡N.
“Незамещенный амино” относится к группе -NH2.
“Галоген” или “галогено” относится к фтору, хлору, брому и йоду (F, C1, Br, I). Предпочтительно галоген относится к фтору или хлору (F или Cl).
“Необязательный” или “необязательно” означает, что событие или условие, описанные потом, не обязательно могут происходить, и описание включает случаи, когда событие или условие происходит, и случаи, когда оно не происходит. Термины “необязательно замещенный” и “замещенный или незамещенный” могут быть использованы взаимозаменяемо для указания на то, что конкретная описываемая группа может не иметь неводородные заместители (т.е. незамещенная), или эта группа может иметь один или несколько неводородных заместителей (т.е. замещенная). Если не указано иное, общее количество заместителей, которые могут присутствовать, равно количеству атомов Н, присутствующих в незамещенной форме описываемой группы. Если возможный заместитель присоединен посредством двойной связи, такой как заместитель оксо (=O), то группа занимает две доступные валентности, так что суммарное количество других заместителей, которые могут быть включены, уменьшается на два. В случае, когда возможные заместители независимо выбраны из списка альтернатив, выбранные группы могут быть одинаковыми или разными. На протяжении всего описания будет понятно, что количество и природа необязательных групп заместителей будут ограничены в той степени, в которой такие замены имеют химический смысл. Типичные заместители включают галоген, -OH, C1-C4 алкокси, -O-C6-C12 арил, -CN, -NO2, =O, -COORx, -OC(O)Rx, -C(O)NRxRy, -NRxC(O)Ry, -NRxRy, -SO3H, -S(=O)2Rx, -OS(=O)2ORx, -S(=O)2NRx, -S(=O)Rx, -OP(=O)(ORx)2, -P(=O)(ORx)2, -PO32-, PO3H2, -AsO2H2, -C(=O)Rx, C3-C8 циклоалкил, C6-C12 арил, 5-12 членный гетероарил и 3-12 членный гетероциклил; где каждый Rx и Ry независимо представляет собой H или C1-C4 алкил, или Rx и Ry могут быть взяты вместе с N, к которому они присоединены, с образованием 3-12-членного гетероциклильное или 5-12-членного гетероарильного кольца, каждое из которых необязательно содержит 1, 2 или 3 дополнительных гетероатома, выбранных из O, N и S(O)q, где q равно 0-2; где каждый указанный C3-C8 циклоалкил, C6-C12 арил, 5-12-членный гетероарил и 3-12-членный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, -OH, =O, C1-C4 алкила, C1-C4 алкокси, C1-C6 галогеналкила, C1-C6 гидроксиалкила, C1-C4 алкокси-C1-C6 алкила, -CN, -NH2, -NH(C1-C4 алкил) и -N(C1-C4 алкил)2.
Термин “хиральный” относится к молекулам, которые обладают свойством не совмещаться со своим зеркальным отражением, в то время как термин “ахиральный” относится к молекулам, которые совмещаются со своим зеркальным отражением.
Термин "стереооизомеры" относится к соединениям, которые имеют идентичный химический состав, но отличаются по расположению атомов или групп в пространстве.
Термин “диастереомер” относится к стереоизомеру с двумя или более центрами хиральности и молекулы которых не являются зеркальными отражениями друг друга. Диастереомеры имеют различные физические свойства, например, температуры плавления, температуры кипения, спектральные свойства и реакционноспособность. Смеси диастереомеров могут быть разделены посредством аналитических методов высокого разрешения, таких как электрофорез и хроматография.
Стереохимические определения и условные обозначения, использованные в настоящем документе, в общем следуют из S.P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, McGraw-Hill Book Company, New York (1984); и Eliel and Wilen, Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York (1994). Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, то есть они имеют способность вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы D и L или R и S используют для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального(ых) центра(ов). Префиксы d и I или (+) и (-) используют для обозначения знака вращения плоскополяризованного света соединением, причем (-) или I означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они являются зеркальными отображениями друг друга. Конкретный стереоизомер может также называться энантиомером, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь 50:50 энантиомеров называют рацемической смесью или рацематом, которые могут существовать, когда в химической реакции или процессе не было стереоизбирательности или стереоспецифичности. Термины “рацемическая смесь” и “рацемат” относятся к эквимолярной смеси двух энантиомеров, лишенной оптической активности.
Используемый в настоящем документе термин “аминокислота” (“AA”) относится к соединению, которое содержит центральный атом углерода, с которым связаны функциональная группа амина, функциональная группа карбоксила и боковая цепь. Термин “аминокислота” включает природные аминокислоты, неприродные аминокислоты, производные природных аминокислот или производные неприродных аминокислот.
“Природная аминокислота” относится к аминокислоте, которая кодируется непосредственно кодонами универсального генетического кода и включает аргинин, глутамин, фенилаланин, тирозин, триптофан, лизин, глицин, аланин, гистидин, серин, пролин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, треонин, цистеин, метионин, лейцин, аспарагин, изолейцин и валин, если иное не указано в контексте.
“Непродная аминокислота” относится к аминокислоте, которая не кодируется кодонами универсального генетического кода. Одним из примеров “неприродной аминокислоты” является “производное аминокислоты”.
“Производное аминокислоты” включает аминокислоту, имеющую замещения или модификации путем ковалентного присоединения исходной аминокислоты, например, путем алкилирования, гликозилирования, ацетилирования, фосфорилирования и тому подобного. Кроме того, в определение “производное” включены, например, один или несколько аналогов аминокислоты с замещенными связями, а также другие модификации, известные в данной области техники.
“Защитная группа” относится к группировке, которая при присоединении к реакционноспособной группе в молекуле маскирует, снижает или предотвращает ее реакционную способность. Примеры защитных групп можно найти в T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York, 1999, и Harrison and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996), которые включены в настоящий документ посредством ссылки полностью. Иллюстративные защитные группы для гидрокси включают ацильные группы, бензил и тритиловые эфиры, тетрагидропираниловые эфиры, триалкилсилиловые эфиры и аллиловые эфиры. Иллюстративные защитные группы для амино включают формил, ацетил, трифторацетил, бензил, бензилоксикарбонил (CBZ), трет-бутоксикарбонил (Boc), триметилсилил (TMS), 2-триметилсилил-этансульфонил (SES), группы тритил и замещенный тритил, аллилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (FMOC), нитро-вератрилоксикарбонил (NVOC) и тому подобное.
Примеры “защитной группы гидроксила” включают, но ими не ограничиваются, метоксиметиловый эфир, 2-метоксиэтоксиметиловый эфир, тетрагидропираниловый эфир, бензиловый эфир, п-метоксибензиловый эфир, триметилсилиловый эфир, триэтилсилиловый эфир, триизопропилсилиловый эфир, трет-бутилдиметил-силиловый эфир, трифенилметилсилиловый эфир, ацетатный сложный эфир, замещенные ацетатные сложные эфиры, пивалоат, бензоат, метансульфонат и п-толуолсульфонат.
“Уходящая группа” относится к функциональной группе, которая может быть замещена другой функциональной группой. Такие уходящие группы хорошо известны в данной области техники, и примеры включают, но ими не ограничиваются, галогенид (например, хлорид, бромид, йодид), метансульфонил (мезил), п-толуолсульфонил (тозил), трифторметилсульфонил (трифлат) и трифторметилсульфонат.
Используемая в настоящем документе фраза “фармацевтически приемлемая соль” относится к фармацевтически приемлемым органическим или неорганическим солям соединения. Соединение обычно содержит, по меньшей мере, одну аминогруппу, и соответственно соли присоединения кислоты могут быть образованы с этой аминогруппой. Типичные соли включают, но ими не ограничиваются, соли сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, йодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, малат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (то есть 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Фармацевтически приемлемая соль может включать другие молекулы, таких как ацетатный ион, сукцинатный ион или другой противоион. Противоион может представлять собой любую органическую или неорганическую группировку, которая стабилизирует заряд исходного соединения. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более одного заряженного атома в своей структуре. В случаях множества заряженных атомов, фармацевтически приемлемая соль может иметь множество противоинов. Следовательно, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или несколько заряженных атомов и/или один или несколько противоионов.
“Фармацевтически приемлемый сольват” или “сольват” относится к ассоциации одной или нескольких молекул растворителя и соединения или конъюгата по изобретению. Примеры растворителей, которые образуют фармацевтически приемлемые сольваты, включают, но ими не ограничиваются, воду, изопропанол, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.
Термины “нагрузка”, или “лекарственная нагрузка”, или “полезная нагрузка” представляют собой или означают среднее количество полезных нагрузок (“полезная нагрузка” и “полезные нагрузки” используются в настоящем документе взаимозаменяемо с “лекарственным средством” и “лекарственными средствами”) на антитело в ADC молекуле. Лекарственная нагрузка может находиться в диапазоне от 1 до 20 лекарственных средств на антитело. Иногда это выражают как DAR или соотношение лекарственного средства к антителу. Композиции ADC, описанные в настоящем документе, обычно имеют соотношения DAR от 1-20 и, в некоторых вариантах осуществления, от 1-8, от 2-8, от 2-6, от 2-5 и от 2-4. Типичные значения DAR составляют 2, 4, 6 и 8. Среднее количество лекарственных средств на антитело, или значение DAR, может быть определено общепринятыми средствами, такими как спектроскопия в Уф/видимой области, масс-спектроскопия, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Также может быть определен количественный показатель DAR. В некоторых случаях разделение, очистка и определение характеристик гомогенных ADC, имеющих конкретное значение DAR, могут быть достигнуты такими средствами, как ВЭЖХ с обращенной фазой или электрофорез. DAR может быть ограничен количеством сайтов присоединения на антитело. Например, когда присоединение представляет собой цистеин-тиол, антитело может иметь только одну или несколько цистеин-тиоловых групп или может иметь только одну или несколько достаточно реакционноспособных тиоловых групп, через которые может быть присоединена линкерная единица. В некоторых вариантах осуществления, цистеин-тиол представляет собой тиоловую группу цистеинового остатка, который образует внутрицепочечную дисульфидную связь. В некоторых вариантах осуществления, цистеин-тиол представляет собой тиоловую группу цистеинового остатка, который не образует внутрицепочечную дисульфидную связь. Обычно во время реакции конъюгирования меньше теоретического максимума группировок лекарственного средства конъюгируется с антителом. Антитело может содержать, например, большое количество остатков лизина, которые не взаимодействуют с линкером или промежуточным линкером. Только большая часть реакционноспособных групп лизина может взаимодействовать с реакционноспособным линкерным реагентом.
Обычно антитела не содержат большое количество, если вообще содержат, свободных и реакционноспособных цистеин-тиоловых групп, которые могут быть связаны с лекарственных средством через линкер. Большая часть цистеин-тиоловых остатков в антителах существуют в виде дисульфидных мостиков и должны восстановливаться восстановителем, таким как дитиотрейтол (DTT). Антитело может быть подвергнуто денатурации с высвобождением реакционноспособных нуклеофильных групп, таких как лизин или цистеин. Нагрузку (соотношение лекарственное средство/антитело) в ADC можно контролировать несколькими разными способами, включая: (i) ограничение молярного избытка конструкции лекарственное средство-линкер относительно антитела, (ii) ограничение времени или температуры конъюгирования, и (iii) частичные или ограничивающие условия восстановления для модификации цистеин-тиола. В случае, когда более одной нуклеофильной группы взаимодействуют с лекарственным средством-линкером, полученный продукт представляет собой смесь ADC с распределением одной или нескольких группировок лекарственных средств на антитело. Среднее количество лекарственного средства на антитело может быть определено из смеси, например, двойным ELISA анализом на антитела, специфичным для антитела и специфичным для лекарственного средства. Индивидуальные ADC могут быть идентифицированы в смеси посредством масс-спектроскопии и разделены посредством ВЭЖХ, например, хроматографии гидрофобного взаимодействия.
Ниже приведен перечень сокращений и определений, которые не могут иным образом быть определены или описаны в настоящей заявке: ДМСО (относится к диметилсульфоксиду), DMA (относится к диметилацетамиду), PBS (относится к фосфатно-солевому буферному раствору), DTT (относится к дитиотреитолу), DAD (относится к относится к детектированию с помощью диодной матрицы), MW (относится к молекулярной массе) и “т.д.” (обозначает “и так далее”), тритил (относится к 1,1',1''-этан-1,1,1-триилтрибензолу), THF (относится к тетрагидрофурану), NHS (относится к 1-гидрокси-2,5-пирролидиндиону), Cbz (относится к карбоксибензилу), экв. (относится к эквиваленту), н-BuLi (относится к н-бутиллитию), OAc (относится к ацетату), MeOH (относится к метанолу), i-Pr (относится к изопропилу или пропан-2-илу), NMM (относится к 4-метилморфолину) и “-” (в таблице, означает, что данные не доступны на данный момент времени).
СОЕДИНЕНИЯ ФОРМУЛЫ (I) И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ
Один из аспектов изобретения относится к соединению формулы (I):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и ;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
R4 представляет собой H;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2; и
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3.
В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (I) не представляет собой (2S)-2-амино-5-{[(2R)-1-[(карбоксиметил)амино]-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-1-оксопропан-2-ил]амино}-5-оксопентановую кислоту
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой I, R2 представляет собой H, R3 представляет собой CH2CH3, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой Br, R2 представляет собой , R3 представляет собой CH(CH3)2, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой I, R2 представляет собой , R3 представляет собой CH(CH3)2, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой Br, R2 представляет собой , R3 представляет собой CH2CH3, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой I, R2 представляет собой , R3 представляет собой CH2CH3, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R1 представляет собой I, R2 представляет собой , R3 представляет собой CH3, и R4 представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R3 представляет собой -CH2CH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH3, где CH3 необязательно замещен одним R10, и где CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 G. В некоторых вариантах осуществления, любые необязательные заместители на X, когда X представляет собой -CH3, выбраны таким образом, чтобы между дисульфидной связью формулы (I) и любым присутствующим гетероатомом было, по меньшей мере, два атома углерода.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH3, необязательно замещенный одним R10,
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где -C2-C8алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, например, -CH(CH3)2 или -C(CH3)3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH3)2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -OH, с образованием, например, -CH(CH3)-CH2OH.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH3)-CH2OH.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой CN, с образованием, например, -C(CH3)2-CN.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CN.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -PO3H, с образованием, например, -CH(CH3)-PO3H или -CH(CH2CH3)-PO3H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH3)-PO3H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH2CH3)-PO3H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CO2H, с образованием, например, -CH(CH3)-CO2H или -C(CH3)2-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH3)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CO2H, с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)-CO2H или -C(CH3)2-(CH2)2-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)2-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CO2H, и где -(C2-C8алкил)-R10 необязательно замещен 1 г, например, -CO2H, с образованием, например, -CH(CO2H)-CH2CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CO2H)-CH2CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CO2C1-C4алкил, с образованием, например, -CH(CH3)-CO2CH2CH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -CH(CH3)-CO2CH2CH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CO-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно 1, и AA представляет собой лизин, и R11c отсутствует с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)2-CO-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)2-CO-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H, с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)2NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2CH2NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H, и где -(C2-C8алкил)-R10 необязательно замещен 1 г, например, -CO2H, с образованием, например, -C(CH3)2-CH(CO2H)-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH(CO2H)-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)NH(C1-C4алкил), где E представляет собой, например, -CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2NH-CH2CH2CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой AAr, где r равно, например, 2, и R11c представляет собой -COC1-C4алкил, например, -COCH3, с образованием, например, 
; или где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно, например, 2, и R11c представляет собой -COC1-C4алкил, например, -COCH3, с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно, например, 1, и R11c отсутствует, с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)2NH-CO-(CH2)2-CH(NH2)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)2NH-CO-(CH2)2-CH(NH2)-CO2H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, R10 представляет собой -R10a-R10b, R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой 
, и R11c отсутствует, с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой .
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -NH-R11, где R11 представляет собой -R11d-R11e-R11f, где R11d представляет собой -(CH2)t-, где t равно, например, 2, с образованием, например, -(CH2)2-, R11e представляет собой -O-, и R11f представляет собой -фенил, с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)-NH-(CH2)2-OPh.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)-NH-(CH2)2-OPh.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CONH-R11, R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H с образованием, например, -C(CH3)2-CH2CONH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2CONH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CON(C1-C4алкил)-R11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -C1-C4алкил, например, CH3, с образованием, например, -C(CH3)2-CH2CON(CH3)2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2CON(CH3)2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CONHNH-R11, R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H, с образованием, например, -C(CH3)2-CH2CONHNH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2CONHNH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -N(R11)CO(C1-C4алкил), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -H с образованием, например, -C(CH3)2-(CH2)2-NHCOCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(CH2)2-NHCOCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CH(NH2)CO-R11, R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b, например, отсутствует, и R11c представляет собой, например, -C1-C4алкил, например, -CH3, с образованием, например, -C(CH3)2-CH(NH2)COCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH(NH2)COCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CH(CO2H)NH-R11, где, например, R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой AAr-, где r равно, например, 2, и R11c представляет собой -COC1-C4алкил, например, -COCH3, с образованием, например, 
, или где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a, например, отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно, например, 2, и R11c представляет собой -COC1-C4алкил, например, -COCH3, с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C2-C8алкил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкил, например, -CONHN=C(CH3)-C6H4-OCH3, с образованием, например, -C(CH3)2-CH2CONHN=C(CH3)-C6H4-OCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-CH2CONHN=C(CH3)-C6H4-OCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклил, необязательно замещенный одним R10, и где -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C3-C10 карбоциклил, где указанный -C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10, и -C3-C10 карбоциклил выбран из группы, состоящей из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, адамантила.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой циклопропил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой циклобутил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой циклопентил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой циклогексил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой адамантил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-C3-C10 карбоциклил, где указанный -C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2- C3-C10 карбоциклил, где указанный -C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10, и -C3-C10 карбоциклил выбран из группы, состоящей из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, адамантила.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -(C0-C6алкил)-3-10-членный гетероциклил, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G. Специалисту в данной области техники будет понятно, что для вариантов осуществления изобретения, которые включают -(C0-C6алкил)-3-10-членный гетероциклил, гетероцикл может быть связан через атом углерода или, если позволяет валентность, через гетероатом, такой как азот. Аналогичным образом, специалист в данной области техники должен понимать, что любые необязательные заместители могут быть связаны с атомом углерода или, если позволяет валентность, с гетероатомом, таким как азот, предпочтительно, чтобы между дисульфидной связью формулы (I) и любым гетероатомом в заместителе Х было, по меньшей мере, два атома углерода.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 3-10-членный гетероциклил, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, например, пиперидинил и т.п., и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиперидинил, где указанный пиперидинил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиперидинил, где указанный пиперидинил необязательно замещен 1 G, с образованием, например, 4-N-CH3 пиперидинила в 4-N-CO2C(CH3)3 пиперидиниле.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-пиперидинил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-N-CH3пиперидинил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-N-CO2C(CH3)3пиперидинил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиперидинил, где указанный пиперидинил необязательно замещен одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a, например, отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO-R11, например, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой AAr, где r равно, например, 2, и R11c представляет собой -COC1-C4алкил, например, -COCH3, с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиперидинил, где указанный пиперидинил необязательно замещен одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a, например, отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO-R11, например, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой , и R11c отсутствует, с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-3-10-членный гетероциклил, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-пиперидинил, где указанный пиперидинил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-имидазолинил, где указанный имидазолинил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-имидазолинил, где указанный X необязательно замещен 2 г, где G представляет собой, например, =O с образованием, например, 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой .
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -(C0-C6алкил)-фенил, где указанный фенил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой фенил, необязательно замещенный одним R10, где R10 представляет собой -R10a-R10b, где R10a отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO2H с образованием, например, 2-CO2H фенил, 4-CO2H фенил, or R10b представляет собой, например, -NHR11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой -H с образованием, например, 2-NH2-фенила; и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4 или 5 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой фенил, где X необязательно замещен 1 г, например, -NO2 с образованием, например, 4-NO2-фенила, или -C1-C4 галогеналкил, например, CF3, с образованием, например, 4-CF3-фенила.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-NO2-фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-CF3-фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 2-CO2H фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-CO2H фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-фенил, где указанный фенил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-фенил, где указанный фенил необязательно замещен одним R10, R10 представляет собой -R10a-R10b, R10a отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO2H с образованием, например, -C(CH3)2-(2-CO2H фенил), -C(CH3)2-(4-CO2H фенил) или -NH2 с образованием, например, -C(CH3)2-(2-NH2-фенил) или -C(CH3)2-(4-NH2-фенил); и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4 или 5 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-фенил, причем X необязательно замещен 1 G с образованием, например, -C(CH3)2-(4-NO2 фенил) или -C(CH3)2-(4-CF3-фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(4-NO2 фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(4-CF3-фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(2-CO2H фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(4-CO2H фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(2-NH2-фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-(4-NH2-фенил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -(C0-C6алкил)-5-10-членный гетероарил, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G. Специалисту в данной области техники будет понятно, что для вариантов осуществления изобретения, которые содержат -(C0-C6алкил)-5-10-членный гетероарил, гетероарил может быть связан через атом углерода, или, если валентность позволяет, через гетероатом, такой как азот. Аналогичным образом, специалист в данной области поймет, что любые необязательные заместители могут быть связаны с атомом углерода или, если позволяет валентность, с гетероатомом, таким как азот. Предпочтительно, между дисульфидной связью формулы (I) и любым гетероатомом в заместителе Х находится, по меньшей мере, два атома углерода.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиридил, где указанный пиридил необязательно замещен одним R10, R10 представляет собой -R10a-R10b, R10a отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO2H с образованием, например, 3-CO2H пиридила, или -NHR11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой -H, с образованием, например, 2-NH2пиридила; и где X необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой пиридил, где указанный пиридил необязательно замещен одним R10, и где X необязательно замещен 1 или 2 г, например, -C1-C4 алкил, например, CH3, с образованием, например, 3,5-(CH3)2 пиридила.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 2-пиридил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-пиридил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 3-CO2H пиридил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой 4-(3,5-(CH3)2 пиридил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-5-10-членный гетероарил, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, например, пиридил и т.п., и где X необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-пиридил, где пиридил необязательно замещен одним R10, R10 представляет собой -R10a-R10b, R10a отсутствует, и R10b представляет собой, например, -CO2H с образованием, например, -C(CH3)2-3-(2-CO2H пиридил) или -NHR11, где R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой -H, с образованием, например, -C(CH3)2-3-(2-NH2 пиридил); и где X необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 G.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-3-(2-NH2пиридил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), X представляет собой -C(CH3)2-3-(2-CO2H пиридил).
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R10a отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R10a представляет собой -CH2-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R10a представляет собой -(CH2)2-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R10b выбран из группы, состоящей из -OH; -CN; -PO3H; -CO2H; -CO2C1-C4алкила; -CO-R11; -NH-R11; -CONH-R11; -CON(C1-C4алкил)-R11; -CONHNH-R11; -N(R11)CO(C1-C4алкил); -CH(CO2H)NH-R11; -CH(NH2)CO-R11; и -CH(CO-R11)NH-R11; CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой -H.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой CH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b отсутствует, и R11c представляет собой -COCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно 1, и R11c отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a отсутствует, R11b представляет собой AAr, где r равно 2, и R11c представляет собой -COCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11a выбран из группы, состоящей из и .
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11a-R11b-R11c, где R11a представляет собой , R11b представляет собой AAr, где r равно 2, и R11c представляет собой -COCH3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11d-R11e-R11f.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11d-R11e-R11f, где R11d представляет собой -(CH2)t-, где t равно 2, R11e отсутствует, и R11f представляет собой фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11d-R11e-R11f, где R11d представляет собой -(CH2)t-, где t равно 2, R11e представляет собой -O- и R11f представляет собой фенил.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), R11 представляет собой -R11d-R11e-R11f, где R11d представляет собой -(CH2)t-, где t равно 2, R11e отсутствует, и R11f представляет собой 5-10-членный гетероарил, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), n равно 1.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), n равно 2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), r равно 1, 2, 3, 4 или 5.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), r равно 1, 2 или 3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (I), r равно 2.
Один из аспектов изобретения относится к соединению формулы (IA)
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
R4 представляет собой H; и
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, где
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2; и
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3.
В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (IA) не представляет собой (2S)-2-амино-5-{[(2R)-1-[(карбоксиметил)амино]-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-1-оксопропан-2-ил]амино}-5-оксопентановую кислоту
.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (I), либо индивидуально, либо, где это применимо, в сочетании, также применим к соединениям формулы (IA), в той мере, насколько они совместимы со структурой.
В определенных вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных соединений формулы (I) или формулы (IA), или его фармацевтически приемлемой соли, и связанным определениям, где соединение выбрано из группы, состоящей из:
СОЕДИНЕНИЯ ФОРМУЛЫ (II) И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (II):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и ;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii)-C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii)-(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv)-(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v)-(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi)-(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(i) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкил, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3; и
L представляет собой [ЛИНКЕР].
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (IIA)
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv)-CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix)-CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, где
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3; и
L представляет собой [ЛИНКЕР].
Соединения линкер-нагрузка формулы (II) и формулы (IIA) содержат линкерную единицу L (иногда называемую в настоящем документе “[ЛИНКЕР]”), связанную с производным калихеамицина формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью. Соединение линкер-нагрузка представляет собой бифункциональное соединение, которое можно использовать для связывания лекарственного средства и антитела с образованием конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC). Такие конъюгаты используются, например, при образовании иммуноконъюгатов, направленных против антигенов, ассоциированных с опухолью. Такие конъюгаты обеспечивают селективную доставку цитотоксических лекарственных средств к опухолевым клеткам. Специалист в данной области определит, что линкерная единица может включать любую единицу, подходящую для связывания калихеамицин-нагруженных соединений формулы (I) с антителом.
Соединения линкер-нагрузка по настоящему изобретению сконструированы так, что линкерная единица [ЛИНКЕР] L связана с калихеамициновой нагрузкой через группу аминосахара. Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что дериватизация посредством аминосахара может привести к высвобождению более эффективной формы калихеамицина из конъюгата антитела с лекарственным средством. Кроме того, не ограничиваясь какой-либо теорией, также полагают, что дериватизация посредством аминосахара может расширить терапевтическое окно для таких конъюгатов антител с лекарственным средством, поскольку, если любая преждевременная активация дисульфидной связи происходит in vivo до расщепления конъюгата антитела с лекарственным средством, образованное производное калихеамицина остается связанным с антителом и, соответственно, как ожидается, будет менее токсичным.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (I), либо сам по себе, либо, где это применимо, в сочетании, также применим к соединениям формулы (II) и формулы (IIA), в той мере, насколько они совместимы со структурой.
Широкий ряд линкерных единиц L или [ЛИНКЕР] подходит для использования в настоящем изобретении. Примеры подходящих линкерных единиц включают, но ими не ограничиваются, расщепляемые линкерные единицы, такие как протеолитически расщепляемые линкерные единицы, гидролитически расщепляемые линкерные единицы и гликолитически расщепляемые линкерные единицы; и нерасщепляемые линкерные единицы. Примеры элементов расщепляемых линкерных единиц включают, но ими не ограничиваются, химически расщепленные ацилгидразоны, такие как, например, описанные в US 5773001, ферментативно расщепленные дипептидные или дипептид-п-аминобензилкарбаматные последовательности, такие как, например, описанные в US 6214345 B1, ферментативно расщепленный глюкуронидные или гликозидные фрагменты, такие как, например, описанные в US 8039273 B2 и в US 8568728 B2, и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления изобретения, дополнительные расщепляющиеся спейсерные элементы, такие как п-аминобензилкарбаматные фрагменты, замещенные или незамещенные N,N-диаминоэтильные или N,N-диаминопропиловые фрагменты, могут быть включены в линкерную группу.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, линкерная единица может быть “нерасщепляемой”, при этом в линкере отсутствуют химически или ферментативно чувствительные связи. В этих случаях предполагается, что лекарственное средство или активное вещество высвобождается посредством ферментативного катаболизма самого антитела, тем самым высвобождая лекарственное средство с линкером и одной или несколькими аминокислотами, полученными из интактного антитела.
В одном аспекте линкерная единица L имеет реакционноспособный участок, который имеет нуклеофильную группу, которая взаимодействует с электрофильной группой, присутствующей на антительной единице, например, антителе. Электрофильная группа на антителе обеспечивает удобный участок для присоединения к линкерной единице. Подходящие электрофильные группы на антителе включают, но ими не ограничиваются, группы альдегидных и кетоновых карбонильных групп или группу карбоновых кислот, например, группу, которая была активирована. Гетероатом нуклеофильной группы линкерной единицы может взаимодействовать с электрофильной группой на антителе и образовывать ковалентную связь с антителом. Подходящие нуклеофильные группы линкерной единицы включают, но ими не ограничиваются, гидразид, оксим, амино, гидразин, тиосемикарбазон, гидразинкарбоксилат и арилгидразид. Электрофильная группа на антителе обеспечивает подходящий участок для присоединения к линкерной единице.
В другом аспекте линкерная единица L имеет реакционноспособный участок, который имеет электрофильную группу, которая взаимодействует с нуклеофильной группой, присутствующей на антительной единице, например, антителе. Электрофильная группа на линкере обеспечивает подходящий участок для присоединения линкера к единице антитела. Подходящие нуклеофильные группы на антителе включают, но ими не ограничиваются, сульфгидрильную, гидроксильную и амино группы. Гетероатом нуклеофильной группы антитела взаимодействует с электрофильной группой на линкерной единице и образует ковалентную связь с линкерной единицей. Подходящие электрофильные группы на линкерной группе включают, но ими не ограничиваются, малеимидную и галогенацетамидную группы.
Аминофункциональные группы также являются подходящими вспомогательноособными участками для линкерной единицы L, поскольку они могут взаимодействовать с карбоновой кислотой или активированными сложными эфирами соединения с образованием амидной связи. Обычно, соединения на основе пептидов по изобретению могут быть получены путем образования пептидной связи между двумя или более аминокислотными и/или пептидными фрагментами. Такие пептидные связи могут быть получены, например, в соответствии с методом жидкофазного синтеза (см., например, Schroder and Lubke, “The Peptides”, volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press), который хорошо известен в области химии пептидов.
Протеолитически расщепляемые пептидные связи, в которых используется расщепляющийся элемент пара-аминобензилоксикарбонил (PABC), широко использовались в исследованиях конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) с момента их введения в 2002 году (Dubowchik, G.M. et al. Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869). Такие связи предположительно подвергаются расщеплению при интернализации в антиген-нацеленные клетки и воздействии ADC на деструктивную протеолитическую среду, обнаруженную в эндосомальных и лизосомальных органеллах. Связанные с цистеином варианты этих дипептидных-PABC линкеров были запатентованы (US 6214345 B2) и было продемонстрировано, что аминсодержащие варианты этих и других связей являются подходящими для сайт-специфических конъюгаций с остатками глютамина с использованием ферментных конъюгаций, стимулируемых микробной трансглутаминазой, а также использование негликозилированных антител и вариантов сконструированных антител, которые подвергаются эффективным конъюгациям с использованием этого способа ферментной конъюгации (WO2012/059882 A2).
В другом варианте осуществления, линкерная группа L для использования в настоящем изобретении включает линкерные группы, подобные тем, которые описаны в международной заявке на патент № PCT/IB2011/054899, опубликованной 10 мая 2012 г. как WO 2012/059882, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки полностью. В этом варианте осуществления, линкерные группы, подходящие для использования с нагрузками по настоящему изобретению, включают описанные группы:
где каждый X, m, n, p, q и аминокислота определены так, как описано в WO 2012/059882; и Z представляет собой цитотоксический агент, в данном случае производное калихеамицина, как описано в настоящем документе.
В другом варианте осуществления, линкерная группа L для использования в настоящем изобретении включает линкерные группы, подобные тем, которые описаны в международной заявке на патент № PCT/IB2015/056211, опубликованной 3 марта 2016 г. как WO 2016/030791, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки полностью. В этом варианте осуществления, линкерные группы, подходящие для использования с нагрузками по настоящему изобретению, включают группы, которые описаны в формуле I в WO 2016/030791:
где:
М представляет собой модулятор устойчивости;
P представляет собой пептидную последовательность, которая включает один или несколько остатков глутамина;
Q представляет собой глутаминовый остаток, присутствующий в P;
каждый E независимо выбран из группы, состоящей из: -C(R1)2-,-O-C(R1)2-C(R1)2-, где r равно, по крайней мере, 2, и -C(R1)2-C(R1)2-O-, где s равно, по крайней мере, 1;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из: Н, С1-С6 алкила с прямой или разветвленной цепью, С2-С6 алкенила с прямой или разветвленной цепью и С2-С6 алкинила с прямой или разветвленной цепью;
каждый X независимо представляет собой аминокислоту, где каждая аминокислота X является аналогичной или другой;
каждый Y независимо представляет собой аминокислоту, где каждая аминокислота Y является аналогичной или другой;
каждый Z независимо представляет собой спейсерный элемент, причем каждый спейсерный элемент является аналогичным или другим;
m равно 0-5, n равно 1-5, p равно 0-2, q равно 0-10, r равно 0-2 и s равно 0-2, где q+r+s=2 или больше; и
где каждый M, P, Q, E, R1, X, Y, Z, m, n, p, q, r и s определен так, как описано в WO 2016/030791; и D представляет собой цитотоксическое средство, в данном случае производное калихеамицина, как описано в настоящем документе.
Альтернативные линкерные группы L, подходящие для использования с нагрузками по настоящему изобретению, также описаны в формуле II WO 2016/030791:
где:
M представляет собой модулятор устойчивости;
P представляет собой пептидную последовательность, которая включает один или несколько остатков глутамина;
Q представляет собой глутаминовый остаток, присутствующий в P;
каждый E независимо выбран из группы, состоящей из: -C(R1)2-, -O-C(R1)2-C(R1)2-, где r равно, по крайней мере, 2, и -C(R1)2-C(R1)2-O-, где s равно, по крайней мере, 1;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из: Н, С1-С6 алкила с прямой или разветвленной цепью, С2-С6 алкенила с прямой или разветвленной цепью и С2-С6 алкинила с прямой или разветвленной цепью;
каждый X независимо представляет собой аминокислоту, где каждая аминокислота X является аналогичной или другой;
каждый Y независимо представляет собой аминокислоту, где каждая аминокислота Y является аналогичной или другой;
каждый Z независимо представляет собой спейсерный элемент, где каждый спейсерный элемент является аналогичным или другим;
m равно 0-5, n равно 1-5, p равно 0-2, q равно 0-10, r равно 0-2, и s равно 0-2, где q+r+s=2 или больше; и
где каждый M, P, Q, E, R1, X, Y, Z, m, n, p, q, r и s определен так, как описано в WO 2016/030791; и D представляет собой цитотоксическое средство, в данном случае производное калихеамицина, как описано в настоящем документе.
Специалист поймет, что все определения, применяемые к линкерным группам, описанным в WO2016/03079, включая все предпочтительные варианты осуществления, будут применяться в равной степени, когда такие линкерные единицы связаны с нагрузкой по настоящему изобретению в виде [ЛИНКЕР] L с образованием соединения линкер-нагрузка по настоящему изобретению.
Специалист в данной области также поймет, что модификации линкерных единиц, известные в данной области техники, также используются в качестве аспектов линкеров, используемых в соединениях по настоящему изобретению.
В одном из вариантов осуществления формулы (II), [ЛИНКЕР] L представляет собой -(LC)1-3-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; 
; 
; 
; 
и 
LB выбран из группы, состоящей из -LB1-LB2-LB3 и -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
и 
;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC или отсутствует или выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -CO-, -C1-C6алкилен-, -NRC3-C8-гетероциклилNR-, -NRC3-C8-карбоциклилNR-, -NRC1-C6алкилNR-, -NRC1-C6алкилен-, -S-, -NR-, -NRNR-, -O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-, -NRC1-C6-алкиленфениленNR-, -NRC1-C6алкиленфениленSO2NR-, -OC1-C6алкилS-SC1-C6алкилC(COOR)NR-, -NRC(COOR)C1-C6алкилS-SC1-C6алкилO-,
, где
XA выбран из группы, состоящей из CR и N;
XB выбран из группы, состоящей из CH, CR(C(R)2)1-3NR, CR(C(R)2)1-3O, CR(C(R)2)1-3C(O)NR, CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR, CR(C(R)2)1-3SO2NR, CR(C(R)2)1-3NRNR, CR(C(R)2)1-3NRC(O) и N;
каждый XC представляет собой R;
каждый XD или отсутствует, или-(CH2)1-5-;
XE выбран из группы, состоящей из O, S, C(R)2, C(R)(C(R)2)1-3-NR2 и NR;
каждый XF выбран из группы, состоящей из (C(R)2)1-3-NR и C(R)2-(C(R)2)1-3-O; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, где
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; ; ; ; и
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из 
и 
;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB2-LB3, где
LB2 представляет собой 
;
LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB2-LB3, где
LB2 представляет собой ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой -NHR;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-
LB1 представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем LA представляет собой -NH2; LB представляет собой -LB1-, где LB1 представляет собой -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(CH2)3-(OCH2CH2)6-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой 
;
LB выбран из группы, состоящей из -LB1-LB2-LB3 и -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
и 
;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой 
;
LB представляет собой -LB1, где
LB1 представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой ;
LB представляет собой -LB1-, где LB1 представляет собой -C(O)C1-C6алкил-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, где
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; ; ; ; и
LB выбран из группы, состоящей из -LB1-LB2-LB3 и -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC выбран из группы, состоящей из -CO- и -C1-C6алкилена; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA представляет собой -NHR;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC выбран из группы, состоящей из -CO- и -C1-C6алкилена; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC выбран из группы, состоящей из -CO- и -C1-C6алкилена; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, где
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-, где
LB1 представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LC выбран из группы, состоящей из -CO- и -C1-C6алкилена; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-, где
LB1 представляет собой два компонента, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LC выбран из группы, состоящей из -CO- и -C1-C6алкилена; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA представляет собой -NH2;
LB представляет собой -LB1-, где LB1 представляет собой -C(O)NR-and -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-;
LC представляет собой -C1-C6алкилен; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)2-(OCH2CH2)2-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)2-(OCH2CH2)7-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем LA представляет собой -NH2; LB представляет собой -LB1-, LB1- представляет собой -C(O)C1-C6алкил; и LC представляет собой -CO-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -CO-(CH2)2-CO-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем LA представляет собой -NH2; LB представляет собой -LB1-, где LB1 представляет собой -C(O)NRC1-C6алкил- и -NRC1-C6алкилен-; LC представляет собой -C1-C6алкилен; и каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -C1-C6алкилен; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB3, где
LB1 представляет собой два компонента, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -C1-C6алкилен; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB3, где
LB1 представляет собой -C(O)NR- и -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
LC представляет собой -C1-C6алкилен.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB3, где
LB1 представляет собой -C(O)NRC1-C6алкил- и -NRC1-C6алкилен-;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
LC представляет собой -C1-C6алкилен.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой 
и;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -C1-C6алкилен; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 представляет собой два компонента, выбранных из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -C1-C6алкилен; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 представляет собой -C(O)NR- и -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
LC представляет собой -C1-C6алкилен.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA, где
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 представляет собой -C(O)NRC1-C6алкил- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -C1-C6алкилен.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, где
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; ; ; ; 
; и 
;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC или отсутствует или выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -CO-, -C1-C6алкилен-, -NRC3-C8-гетероциклилNR-, -NRC3-C8-карбоциклилNR-, -NRC1-C6алкилNR-, -NRC1-C6алкилен-, -S-, -NR-, -NRNR-, -O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-, -NRC1-C6-алкиленфениленNR-, -NRC1-C6алкиленфениленSO2NR-, -OC1-C6алкилS-SC1-C6алкилC(COOR)NR-, -NRC(COOR)C1-C6алкилS-SC1-C6алкилO-,
, где
XA выбран из группы, состоящей из CR и N;
XB выбран из группы, состоящей из CH, CR(C(R)2)1-3NR, CR(C(R)2)1-3O, CR(C(R)2)1-3C(O)NR, CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR, CR(C(R)2)1-3SO2NR, CR(C(R)2)1-3NRNR, CR(C(R)2)1-3NRC(O) и N;
каждый XC представляет собой R;
каждый XD или отсутствует или представляет собой -(CH2)1-5-;
XE выбран из группы, состоящей из O, S, C(R)2, C(R)(C(R)2)1-3-NR2 и NR;
каждый XF выбран из группы, состоящей из (C(R)2)1-3-NR и C(R)2-(C(R)2)1-3-O; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; ; ; ; ; и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -CO- и -NRC1-C6-алкиленфениленNR; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -CO- и -NRC1-C6-алкиленфениленNR; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB1-LB2-LB3, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -CO- и -NRC1-C6-алкиленфениленNR; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;
LB представляет собой -LB2-LB3, где
LB2 представляет собой ;
LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC представляет собой -CO- и -NRC1-C6-алкиленфениленNR; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из и ;;
LB представляет собой -LB2-LB3, где
LB2 представляет собой ;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
LC представляет собой -CO- и -NHC1-C6-алкиленфениленNH.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA выбран из группы, состоящей из -галогена; -NHR; -CO-H; -CO2H; -S-S-арила, необязательно замещенного -NO2; -S-S-гетероарила, необязательно замещенного -NO2; алкил-SO2-гетероарила; арилSO2-гетероарил-; ; ; ; ; и ;
LB представляет собой -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой 
;
LB представляет собой -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой ;
LB представляет собой -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой ;
LB представляет собой -LB2-LB3-LB1, где
LB1 представляет собой один компонент, выбранный из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 представляет собой ;
LB3 AA2, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA, причем
LA представляет собой ;
LB представляет собой -LB2-LB3-LB1, где LB1 представляет собой -C(O)C1-C6алкил-; LB2 представляет собой ; и LB3 AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -LB-LA.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)1-LB-LA.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), L представляет собой -(LC)2-LB-LA.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LA выбран из группы, состоящей из -NH2; ; ; ; и.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB представляет собой -LB1-LB2-LB3.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB представляет собой -LB2-LB3-LB1.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB1 отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB1 представляет собой один или два компонента, каждый из которых выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -C(O)NR-; -C(O)C1-C6алкил-; -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-; -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-; -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR; -C(O)NRC1-C6алкил-; -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR; и -NRC1-C6алкилен-.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB2 отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB2 представляет собой .
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB3 отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB3 представляет собой AA0-12, LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LB3 представляет собой AA2, LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LC отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), LC выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -C1-C6алкилена, -CO- и -NRC1-C6-алкиленфениленNR.
В некоторых вариантах осуществления формулы (II), R представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных соединений формулы (II) или формулы (IIA), или его фармацевтически приемлемой соли, и связанным определениям, причем соединение выбрано из группы, состоящей из:
Специалист в данной области техники поймет, что некоторые соединения линкер-нагрузка, такие как соединения формулы (II), или его фармацевтически приемлемая соль, или соединения формулы (IIA), или его фармацевтически приемлемая соль, сами по себе используются в качестве соединений нагрузки.
СОЕДИНЕНИЯ ФОРМУЛЫ (III) И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (III),
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и 
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(i) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvi) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , 
и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
, 
и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкил, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LR представляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ]; и
AB представляет собой антитело.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IIIA),
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X представляет собой
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, где
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, где
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LR представляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ]; и
AB представляет собой антитело.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IV),
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
R1 выбран из группы, состоящей из Br и I;
R2 выбран из группы, состоящей из H и
;
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, где
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(i) -NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, причем
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LR представляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ];
AB представляет собой антитело; и
b равно 1-20,
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IVA),
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
R3 выбран из группы, состоящей из -CH3, -CH2CH3 и -CH(CH3)2;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) -CH3, необязательно замещенного одним R10;
(ii) -C2-C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(iii) -(C0-C6алкил)-C3-C10 карбоциклила, где указанный C3-C10 карбоциклил необязательно замещен одним R10;
(iv) -(C0-C6алкил)-3-10-членного гетероциклила, где указанный 3-10-членный гетероциклил необязательно замещен одним R10, и указанный 3-10-членный гетероциклил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
(v) -(C0-C6алкил)-фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(vi) -(C0-C6алкил)-5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил необязательно замещен одним R10, и где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10 представляет собой -R10a-R10b, причем
R10a либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)n-, где R10a необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) -OH;
(ii) -CN;
(iii) -PO3H;
(iv) -CO2H;
(v) -CO2C1-C4алкила, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(vi) -CO-R11;
(vii)-NH-R11;
(viii) -N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(ix) -CONH-R11;
(x) -CON(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xi) -CONHNH-R11;
(xii) -CONHN(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiii) -CON(C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xiv) -CON(C1-C4алкил)N(C1-C4алкил)-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xv) -CON(R11)NH2;
(xvi) -CON(R11)NH(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xvii) -CON(R11)N(C1-C4алкил)2, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xviii) -CONHN=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xix) -CON(C1-C4алкил)N=C(C1-C4алкил)-C6H4-OC1-C4алкила, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xx) -N(R11)CO(C1-C4алкил), где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxi) -CH(CO2H)NH-R11;
(xxii) -CH(CO2C1-C4алкил)NH-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxiii) -CH(NH2)CO-R11;
(xxiv) -CH(NH(C1-C4алкил))CO-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxv) -CH(N(C1-C4алкил)2)CO-R11, где каждый указанный C1-C4алкил независимо необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
(xxvi) -CH(CO-R11)NH-R11; и
(xxvii) -CH(CO-R11)N(C1-C4алкил)-R11, где указанный C1-C4алкил необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5 или 6 E;
R11 выбран из группы, состоящей из -R11a-R11b-R11c и -R11d-R11e-R11f, где
R11a либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
R11b либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , и AAr, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
R11c либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -H, -C1-C4алкила и -COC1-C4алкила;
R11d либо отсутствует, либо представляет собой -(CH2)t-, и R11d, если присутствует, необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
R11e либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из -O- и -NH-;
R11f выбран из группы, состоящей из C6-C12 арила и 5-10-членного гетероарила, где указанный 5-10-членный гетероарил содержит один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и где R11f необязательно замещен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 G;
n равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
r равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
t равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NH-C1-C4алкила, -N(C1-C4алкил)2, -NO2, -CO2H, -C1-C4алкила, -C1-C4алкилOH, -C1-C4алкилNH2, -C1-C4галогеналкила, -C1-C4алкокси, =O, -CO2C1-C4алкила, -OC(O)C1-C4алкила, -NHC(O)C1-C4алкила, -C(O)NHC1-C4алкила и -C(O)N(C1-C4алкил)2;
E выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -F, -Cl, -CN, -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NO2, -CO2H, -OCH3, -OCF3 и -CF3;
LR представляет собой [ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ];
AB представляет собой антитело; и
b равно 1-20,
Конъюгаты антитела с лекарственным средством (ADC) формулы (III), формулы (IIIA), формулы (IV) и формулы (IVA), или его фармацевтически приемлемыми солями, содержат антитело (AB), связанное с радикалом линкер-нагрузка формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, или с радикалом линкер-нагрузка формулы (IIA) или его фармацевтически приемлемой соли. Радикал линкер-нагрузка формулы (II) или формулы (IIA), или его фармацевтически приемлемых солей, образуется в случае, когда линкер-нагрузка связывается через подходящую точку замещения в линкерной единице с антителом. Линкерный радикал (LR, иногда называемый в настоящем документе как “[ЛИНКЕРНЫЙ РАДИКАЛ]”) используется только для того, чтобы указать, что линкерный заместитель, в данной ситуации, действует как бифункциональный заместитель, связанный как с нагрузкой, так и с антителом. Специалист в данной области техники поймет, что радикал линкер-нагрузка формулы (II) или формулы (IIA), или его фармацевтически приемлемых солей, образуется, когда линкер в линкере-нагрузке связан с антителом через подходящую точку замещения в линкерной единице. Не желая быть связанными теорией, антитело может быть связано с линкером-нагрузкой путем перемещения линкерного заместителя LA. Это может происходить, когда, например, линкер содержит LA, который представляет собой галоген. Альтернативно, антитело может быть связано с линкером-нагрузкой путем добавления к линкерному заместителю LA. Это может произойти в случае, например, когда линкер содержит LA, который представляет собой , и антитело добавляется через двойную связь с образованием 
. Альтернативно, антитело может связываться с линкером-нагрузкой при перемещении соответствующей уходящей группы от заместителя LA. Это может происходить в случае, когда, например, линкер содержит LA, который представляет собой -NHR, с образованием -NH-AB; или линкер содержит LA, который представляет собой -CO-H, -CO2H, или , с образованием 
; или линкер содержит LA, который представляет собой -S-S-арил, необязательно замещенный -NO2, или -S-S-гетероарил, необязательно замещенный -NO2, с образованием -S-AB; или линкер содержит LA, который представляет собой алкил-SO2-гетероарил; арилSO2-гетероарил- с образованием гетероарил-AB; или линкер содержит LA, который представляет собой 
, с образованием 
; или линкер содержит LA, который представляет собой 
, с образованием 
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -(LC)1-3-LB-LAR-AB где:
LAR-AB выбран из группы, состоящей из -AB; -NH-AB; -CO-AB; -S-AB; -гетероарил-AB; 
; 
; и 
;
LB выбран из группы, состоящей из -LB1-LB2-LB3 и -LB2-LB3-LB1, где
LB1 либо отсутствует, либо один или несколько компонентов выбраны из группы, состоящей из -C(O)NR-, -C(O)C1-C6алкил-, -C(O)NRC1-C6алкил-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NR-, -C(O)C1-C6алкилNRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-C(O)-, -C1-C6алкил-S-S-C1-C6алкилNRC(O)CH2-, -C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)CH2-, -C(O)C1-C6алкил-NRC(O)C1-6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-, -N=CR-фенил-O-C1-C6алкил-C(O)-, -C(O)-C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8NRC(O)-, -C(O)C1-C6алкил-фенил(NR-C(O)C1-C6алкил)1-4-, -C(O)C1-C6алкил(OCH2CH2)1-8-NRC(O)C1-C6алкил-, -C1-C6алкил-, -S-, -C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6алкил)-C1-C6алкил-, (-CH2-CH2-O-)1-20, -C1-C6алкилен-NR- и -NRC1-C6алкилен-;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из , , и ;
LB3 представляет собой AA0-12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту или неприродную аминокислоту;
LC или отсутствует или выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из -CO-, -C1-C6алкилен-, -NRC3-C8-гетероциклилNR-, -NRC3-C8-карбоциклилNR-, -NRC1-C6алкилNR-, -NRC1-C6алкилен-, -S-, -NR-, -NRNR-, -O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-, -NRC1-C6-алкиленфениленNR-, -NRC1-C6алкиленфениленSO2NR-, -OC1-C6алкилS-SC1-C6алкилC(COOR)NR-, -NRC(COOR)C1-C6алкилS-SC1-C6алкилO-,
где
XA выбран из группы, состоящей из CR и N;
XB выбран из группы, состоящей из CH, CR(C(R)2)1-3NR, CR(C(R)2)1-3O, CR(C(R)2)1-3C(O)NR, CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR, CR(C(R)2)1-3SO2NR, CR(C(R)2)1-3NRNR, CR(C(R)2)1-3NRC(O) и N;
каждый XC представляет собой R;
каждый XD или отсутствует или представляет собой -(CH2)1-5-;
XE выбран из группы, состоящей из O, S, C(R)2, C(R)(C(R)2)1-3-NR2 и NR;
каждый XF выбран из группы, состоящей из (C(R)2)1-3-NR и C(R)2-(C(R)2)1-3-O; и
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C20 алкила, -C2-C6 алкенила, -C2-C6 алкинила, галогена, гидроксила, алкокси, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -NO2, -C6-C14 арила и -C6-C14 гетероарила, причем два или больше R необязательно соединяются с образованием кольца или колец, и где указанные -C6-C14 арил и -C6-C14 гетероарил необязательно замещены 1-5 заместителями, независимо выбранными из -C1-C10 алкила, -C1-C10 алкокси, -галогена, -C1-C10 алкилтио, -трифторметила, -NH2, -NH(C1-C8 алкил), -N(C1-C8 алкил)2, -C1-C10 алкил-N(C1-C8 алкил)2, -C1-C3 алкилтио, -NO2 или -C1-C10 гетероциклила, для каждой кольцевой системы, в которой присутствует R.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, LAR-AB выбран из группы, состоящей из -NH-AB; 
; ; и 
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -(CH2)3-(OCH2CH2)6-NH-AB.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)2-(OCH2CH2)2-NH-AB.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)2-(OCH2CH2)7-NH-AB.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -CO-(CH2)2-CO-NH-AB.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой -(CH2)-CONH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH-AB.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой
.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, -LR-AB представляет собой
.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (I), либо сам по себе, либо, где это применимо, в сочетании, также применим к соединениям формулы (III), формулы (IIIA), формулы (IV) и формулы (IVA)), в той мере, насколько они совместимы со структурой.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (II) и формулы (IIA), отдельно или в сочетании с каждым из аспектов вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (I) и формулы (IA), также применимы к соединениям формулы (III), формулы (IIIA), формулы (IV) и формулы (IVA), в той мере, насколько они совместимы со структурой.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных соединений формулы и связанным определениям, причем AB представляет собой антитело. В некоторых вариантах осуществления, антитело в ADC, как описано в настоящем документе, представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело, биспецифическое антитело, миниантитело, диатело или фрагмент антитела.
Пытаясь обнаружить эффективные клеточные мишени для диагностики и терапии злокачественной опухоли, исследователи стремились идентифицировать трансмембранные или иные опухольассоциированные полипептиды, которые специфически экспрессируются на поверхности одного или нескольких конкретных типов опухолевых клеток по сравнению с поверхностью одной или нескольких нормальных незлокачественных клеток. Обычно, такие опухольассоциированные полипептиды экспрессируются на поверхности злокачественных клеток в большей степени, чем на поверхности незлокачественных клеток. Идентификация таких опухольассоциированных поверхностных антигенных полипептидов в результате дала возможность специфично нацеливаться на злокачественные клетки для их разрушения с помощью терапевтических средств на основе антител.
Антительная единица (AB)
Как отмечено выше, термин “антитело” (или “AB”) используется в настоящем описании в наиболее широком смысле и конкретно охватывает интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, моноспецифические антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, которые проявляют желаемую биологическую активность. Кроме того, хотя определенные аспекты изобретения, описанные в настояшем документе, относятся к конъюгатам антитела с лекарственным средством, дополнительно предусматривается, что антительная часть конъюгата может быть заменена любым объектом, который специфически связывается или реактивно ассоциирует или образует комплексы с рецептором, антигеном или другой чувствительной группировкой, ассоциированной с данной клеточной популяцией-мишенью. Например, вместо содержания антитела, конъюгаты по изобретению могут содержать нацеливающую молекулу, которая связывается, образует комплекс или взаимодействует с рецептором, антигеном или другой чувствительной группировкой данной клеточной популяции для терапевтической или иной биологической модификации. Пример таких молекул включает более низкомолекулярные белки, полипептиды или пептиды, лектины, гликопротеины, не пептиды, витамины, переносящие биогенные вещества молекулы (такие как, без ограничения, трансферрин) или любые другие молекулы или вещества, связывающиеся с клеткой. В некоторых аспектах антитело или другая такая нацеливающая молекула действует для доставки лекарственного средства к конкретной клеточной популяции-мишени, с которой антитело или другая нацеливающая молекула взаимодействует.
Гетероатомы, которые могут присутствовать на антительной единице, включают серу (в одном из вариантов осуществления из сульфгидрильной группы антитела), кислород (в одном из вариантов осуществления из карбонильной, карбоксильной или гидроксильной группы антитела) и азот (в одном из вариантов осуществления, из первичной или вторичной аминогруппы антитела). Эти гетероатомы могут присутствовать на антителе в естественном состоянии этого антитела, например, существующего в природе антитела, или могут быть введены в антитело посредством генной инженерии, например, химической модификации.
В одном из вариантов осуществления, антительная единица имеет сульфгидрильную группу, и антительная единица связывается через атом серы этой сульфгидрильной группы.
В другом варианте осуществления, антитело имеет остатки лизина, которые могут взаимодействовать с активированными сложными эфирами (такие сложные эфиры включают, но ими не ограничиваясь, N-гидроксисукцинимидные, пентафторфенильные и п-нитрофенильные сложные эфиры) и образовывать, таким образом, амидную связь, состоящую из атома азота антительной единицы и карбонила.
В еще одном аспекте, антительная единица имеет один или несколько остатков лизина, которые могут быть химически модифицированы для включения одной или нескольких сульфгидрильных групп. Реагенты, которые могут быть использованы для модификации лизинов, включают, но ими не ограничиваются, N-сукцинимидил-S-ацетилтиоацетат (SATA) и гидрохлорид 2-иминотиолана (реагент Трота).
В другом варианте осуществления, антительная единица может иметь одну или несколько углеводных групп, которые могут быть химически модифицированы с получением одной или нескольких сульфгидрильных групп.
В еще одном варианте осуществления, антительная единица может иметь одну или несколько углеводных групп, которые могут быть окислены с получением альдегидной группы (см., например, Laguzza, et al., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55). Соответствующий альдегид может образовывать связь с реакционноспособным сайтом, таким как, например, гидразин и гидроксиламин. Другие протоколы для модификации белков для присоединения или ассоциирования лекарственных средств описаны в Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002) (включено в данное описание посредством ссылки).
Когда конъюгаты содержат неиммунореактивный белок, полипептидные или пептидные единицы вместо антитела, используемый неиммунореактивный белок, полипептидные или пептидные единицы включают, но ими не огарничиваются, трансферрин, эпидермальные факторы роста ("EGF"), бомбезин, гастрин, гастрин-высвобождающий пептид, фактор роста тромбоцитов, интерлейкин-2 (IL-2), IL-6, трансформирующие факторы роста ("TOP"), такие как TGF-α и TGF-β, фактор роста вируса осповакцины ("VGF"), инсулин и инсулиноподобные факторы роста I и II, соматостатин, лектины и апопротеин липопротеинов низкой плотности.
Используемые поликлональные антитела представляют собой гетерогенные популяции молекул антител, имеющих происхождение из сыворотки иммунизированных животных. Используемые моноклональные антитела представляют собой гомогенные популяции антител против конкретной антигенной детерминанты (например, антигена опухолевой клетки, вирусного антигена, микробного антигена, белка, пептида, углевода, химического вещества, нуклеиновой кислоты или их фрагментов). Моноклональное антитело (mAb) против представляющего интерес антигена может быть получено любыми способами, известными в данной области техники, которые обеспечивают продуцирование молекул антител стабильными клеточными линиями в культуре.
Используемые моноклональные антитела включают, но ими не ограничиваются, человеческие моноклональные антитела, гуманизированные моноклональные антитела, фрагменты антител или химерные моноклональные антитела. Человеческие моноклональные антитела могут быть получены любым из многих способов, известных в данной области техники (например, Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80:7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72-79; и Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92:3-16).
Антитело также может представлять собой биспецифическое антитело. Способы получения биспецифических антител известны в данной области техники и рассмотрены ниже.
Антитело может представлять собой функционально активный фрагмент, производное или аналог антитела, которые иммуноспецифически связываются с клетками-мишенями (например, антигенами злокачественной клетки, вирусными антигенами или микробными антигенами), или другими антителами, которые связываются с опухолевыми клетками или матриксом. В этом отношении, “функционально активные” означает такие фрагмент, производное или аналог, которые способны индуцировать антитела против антиидиотипических антител, которые распознают тот же самый антиген, который распознает антитело, из которого фрагмент, производное или аналог происходят. Более конкретно, в иллюстративном варианте осуществления антигенность идиотипа молекулы иммуноглобулина может быть усилена путем делеции каркасной области и CDR последовательностей, которые являются C-концевыми к CDR последовательности, которая специфически распознает антиген. Чтобы определить какие из CDR последовательностей связываются с антигеном, синтетические пептиды, содержащие CDR последовательности, могут быть использованы в анализах связывания с антигеном посредством любой методики анализа связывания, известной в данной области техники (например, анализ BIAcore) (в отношении определения положения CDR последовательностей, см., например, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md.; Kabat E et al., 1980, J. Immunology 125(3):961-969).
Другие используемые антитела включают фрагменты антител, такие как, но ими не ограничиваются, F(ab')2-фрагменты, Fab-фрагменты, Fvs, одноцепочечные антитела, диатела, триатела, тетратела, scFv, scFv-FV или любая другая молекула с такой же специфичностью, как антитело.
Кроме того, рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные моноклональные антитела, содержащие как человеческие участки, так и участки, не являющиеся человеческими, которые могут быть получены с использованием стандартных методов рекомбинантной ДНК, представляют собой используемые антитела. Химерное антитело представляет собой молекулу, в которой различные участки имеют происхождение из различных видов животных, таких как, например, которые имеют вариабельную область, имеющую происхождение из константных областей мышиного моноклонального и человеческого иммуноглобулина (см., например, патент США № 4816567 и патент США № 4816397, которые включены в настоящее описание посредством ссылки полностью). Гуманизированные антитела представляют собой молекулы антител из видов, не являющихся человеческими, имеющие один или несколько гипервариабельных участков (CDR) из видов, не являющихся человеческими, и каркасную область из молекулы человеческого иммуноглобулина (см., например, патент США № 5585089, который включен в настоящее описание посредством ссылки полностью). Такие химерные и гуманизированные моноклональные антитела могут быть получены методами рекомбинантной ДНК, известными в данной области техники, например, с использованием способов, описанных в публикации международной заявки WO 87/02671; публикациях европейских заявок № 0184187, № 0171496, № 0173494; публикации международной заявки WO 86/01533; патенте США № 4816567; публикации европейской заявки № 012023; Berter et al., 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; и Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Патент США № 5225539; Jones et al., 1986, Nature 321:552-525; Verhoeyan et al., 1988, Science 239:1534; и Beidler et al., 1988, J. Immunol. 141:4053-4060; каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки полностью.
Полностью человеческие антитела являются особенно предпочтительными и могут быть получены с использованием трансгенных мышей, которые неспособны к экспрессии генов тяжелых и легких цепей эндогенного иммуноглобулина, но которые могут экспрессировать гены тяжелой и легкой цепей человека. Трансгенных мышей иммунизируют обычным способом с помощью выбранного антигена, например, полноразмерным полипептидом по изобретению или его частью. Моноклональные антитела, направленные против антигена, могут быть получены с использованием общепринятой гибридомной технологии. Трансгены человеческого иммуноглобулина, переносимые трансгенными мышами, перегруппировываются в процессе B-клеточной дифференцировки, и затем подвергаются механизму переключения классов и соматической мутации. Так, с использованием этой технологии возможно продуцирование используемых в терапии IgG, IgA, IgM и IgE антител. Для обзора этой технологии продуцирования человеческих антител см. Lonberg и Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93. Для подробного обзора этой технологии продуцирования человеческих антител и человеческих моноклональных антител и протоколов продуцирования таких антител, см., например, патенты США № 5625126; 5633425; 5569825; 5661016; 5545806; каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки полностью. Другие человеческие антитела могут быть приобретены, например, у компании Abgenix, Inc. (в настоящее время Amgen, Freemont, Calif.) и Medarex (Princeton, N.J.).
Полностью человеческие антитела, которые распознают выбранный эпитоп, могут быть получены методом, известным как “управляемая селекция”. В таком методе выбранное моноклональное антитело, не являющееся человеческим, например, мышиное антитело, используют для управления селекцией полностью человеческого антитела, распознающего тот же самый эпитоп (см., например, Jespers et al., 1994, Biotechnology 12:899-903). Человеческие антитела могут также быть получены различными методами, известными в данной области техники, включая библиотеки фагового дисплея (см., например, Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581; Quan and Carter, 2002, The rise of monoclonal antibodies as therapeutics, In Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu and Fick, eds., Marcel Dekker, New York, N.Y., Chapter 20, pp. 427-469).
В других вариантах осуществления, антитело представляет собой слитый белок антитела или его функционально активный фрагмент, например, в котором антитело подвергается слиянию посредством ковалентной связи (например, пептидной связи) по N-концу или C-концу с аминокислотной последовательностью другого белка (или его части, предпочтительно включающей, по меньшей мере, 10, 20 или 50 аминокислот), который не происходит из антитела. Предпочтительно, антитело или его фрагмент ковалентно присоединены к другому белку по N-концу константной области.
Антитела включают аналоги и производные, которые являются либо модифицированными, то есть путем ковалентного присоединения любого типа молекулы, пока такое ковалентное присоединение дает возможность антителу сохранять его антиген-связывающую иммуноспецифичность. В качестве примера, но без какого-либо ограничения, производные и аналоги антител включают такие производные и аналоги, которые были дополнительно модифицированы, например, путем гликозилирования, ацетилирования, пегилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации с использованием известных защитных/блокирующих групп, протеолитического расщепления, связывания с клеточной антительной единицей или другим белком, и так далее. Любая из многочисленных химических модификаций может быть осуществлена известными методами, включая, но ими не ограничиваясь, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез в присутствии туникамицина, и так далее. Кроме того, аналог или производное могут содержать одну или несколько неприродных аминокислот.
Антитела могут иметь модификации (например, замены, делеции или вставки) в аминокислотных остатках, которые взаимодействуют с Fc-рецепторами. В частности, антитела могут иметь модификации в аминокислотных остатках, идентифицированных как вовлеченные во взаимодействие между анти-Fc доменом и FcRn рецептором (см., например, публикацию международной заявки WO 97/34631, которая включена в настоящее описание посредством ссылки полностью).
Антитела, иммуноспецифичные в отношении антигена злокачественной клетки, могут быть приобретены или получены любым способом, известным специалисту в данной области техники, таким как, например, химический синтез или технологии рекомбинантной экспрессии. Нуклеотидная последовательность, кодирующая антитела, иммуноспецифичные в отношении антигена злокачественной клетки, может быть получена, например, из базы данных GenBank или подобной базы данных, литературных публикаций или путем обычного клонирования и секвенирования.
В конкретном варианте осуществления, могут применяться любые известные антитела для лечения злокачественной опухоли. Антитела, иммуноспецифичные в отношении антигена злокачественной клетки, могуть быть приобретены коммерчески или получены любым способом, известным специалисту в данной области, таким как, например, методы рекомбинантной экспрессии. Нуклеотидная последовательность, кодирующая антитела, иммуноспецифичные в отношении антигена злокачественной клетки, может быть получена, например, из базы данных GenBank или подобной базы данных, литературных публикаций или путем обычного клонирования и секвенирования.
В другом варианте осуществления, антитело выбрано из группы, состоящее из мышиного антитела для лечения злокачественной опухоли яичников, такого как ореговомаб (OVAREX®); мышиного антитела IgG2a для лечения колоректального рака, такое как эдреколомаб (PANOREX®); химерного антитела против EGFR IgG для лечения видов злокачественной опухоли, положительных к эпидермальному фактору роста, таких как злокачественная опухоль головы и шеи, например, цетуксимаба (ERBITUX®); гуманизированное антитело для лечения саркомы, такое как гуманизированное моноклональное антитело против рецептора витронектина (αvβ3), такое как Vitaxin®; гуманизированное антитело IgG1 для лечения хронического лимфолейкоза (CLL), такое как алемтузумаб (CAMPATH I/H®); SMART ID10, который представляет собой гуманизированное антитело против HLA-DR для лечения неходжкинской лимфомы; 131I Lym-1 (ONCOLYM®), которое представляет собой меченное радиоактивным изотопом мышиное анти-HLA-Dr10 антитело для лечения неходжкинской лимфомы; гуманизированное анти-CD2 mAb для лечения лимфомы Ходжкина или неходжкинской лимфомы, например, ALLOMUNE®; лабетузумаба (CEACIDE®), который представляет собой гуманизированное антитело против CEA для лечения колоректального рака; бевацизумаба (AVASTIN®), который представляет собой гуманизированное анти-VEGF-A mAb для лечения рака головного мозга, толстой кишки, почек или легкого; ибритумомаба тиуксетана (ZEVALIN®), который представляет собой анти-CD20 моноклональное антитело для лечения неходжкинской лимфомы; офатумумаба (ARZERRA®), который представляет собой человеческое анти-CD20 моноклональное антитело для лечения хронического лимфолейкоза; панитумумаба (VECTIBIX®), который представляет собой человеческое анти-EGFR моноклональное антитело для лечения рака толстой кишки; ритуксимаба (RITUXAN®), который представляет собой анти-CD20 химерное моноклональное антитело для лечения хронического лимфолейкоза и неходжкинской лимфомы; тозитумомаба (BEXXAR®), который представляет собой анти-CD20 моноклональное антитело для лечения неходжкинской лимфомы; трастузумаба (HERCEPTIN®), который представляет собой моноклональное антитело против рецептора HER2 для лечения рака груди и желудка; ипилимумаба (YERVOY®), который представляет собой анти-CTLA4 человеческое моноклональное антитело для лечения меланомы; гуманизированного моноклонального антитела против CD33, например, такое, которое используется в MYLOTARG® (Wyeth/Pfizer, NY), которое представляет собой гуманизированное моноклональное антитело против CD33, конъюгированное с калихеамицином, для лечения острого миелогенного лейкоза; и гуманизированное моноклональное антитело против CD22, например, такое, которое используется в инотузумаб озотамицине (Wyeth/Pfizer, NY), которое является гуманизированным моноклональным антителом против CD22, конъюгированным с калихеамицином, для лечения острого лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы.
В другом конкретном варианте осуществления, антитело представляет собой антитело против IL13, включая антитела против IL13, используемые при лечении злокачественной опухоли, например, включая, но ими не ограничиваясь, антитела против IL-13Rα2.
В другом конкретном варианте осуществления, антитело представляет собой антитело против Notch, включая антитела против Notch, используемые при лечении злокачественной опухоли.
В некоторых вариантах осуществления, антитело АВ связано с линкером через серную связь или через связь сера-сера.
В некоторых вариантах осуществления, антитело АВ представляет собой моноклональное антитело к рецептору HER2, где HER означает рецептор эпидермального фактора роста человека.
В некоторых вариантах осуществления, антитело АВ представляет собой моноклональное антитело против рецептора CD33, рецептор CD33 также известен как сиглек-3.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных соединений формулы (III) или формулы (IIIA), или его фармацевтически приемлемой соли, и связанным определениям, причем соединение выбрано из группы, состоящей из:
и 
Другой аспект изобретения относится к конъюгату антитела с лекарственным средством, содержащему любое из вышеуказанных соединений.
Другой аспект изобретения относится к конъюгату антитела с лекарственным средством, содержащему антитело и любое из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных конъюгатов антитела с лекарственными средствами и связанных определений, где соединение ковалентно связано с антителом.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных конъюгатов антитело-лекарственное средство и связанных определений, где конъюгат антитело-лекарственное средство несет от около 1 до около 20 соединений линкер-нагрузка по изобретению. В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных конъюгатов антитела с лекарственным средством и связанных определений, причем конъюгат антитела с лекарственным средством несет примерно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 соединений линкер-нагрузка по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к любому из вышеуказанных конъюгатов антитела с лекарственным средством и связанных определений, причем конъюгат антитело-лекарственное средство несет около 3 или 4 соединений линкер-нагрузка по изобретению.
СОЕДИНЕНИЯ-ЗОНДЫ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ
Дополнительные варианты осуществления изобретения включают соединения формулы (I), формулы (IA), формулы (II), формулы (IIA), формулы (III), формулы (IIIA), формулы (IV) и формулы (IVA) или их фармацевтически приемлемые соли, причем заместитель Х выбран так, чтобы он обладал флуоресцентными свойствами. Такие соединения имеют дополнительное применение в качестве химических соединений-зондов. В одном из вариантов осуществления, заместитель X содержит ароматическую группу, которая обладает флуоресцентными свойствами, например, кумариновую группу. В одном из вариантов осуществления, заместитель X представляет собой
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, в отношении формулы (I) и формулы (IA), также применим к соединениям по изобретению, где заместитель X выбран таким образом, чтобы он обладал флуоресцентными свойствами.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, в отношении формулы (II) и формулы (IIA), отдельно или в сочетании с каждым из аспектов вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, в отношении формулы (I) и формулы (IA), также применим к соединениям по изобретению в той степени, в которой они являются совместимыми, где заместитель Х выбран таким, чтобы он обладал флуоресцентными свойствами.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (III) и формулы (IIIA), отдельно или в сочетании с каждым из аспектов вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (I), формулы (IA), формулы (II) или формулы (IIA), также применим к соединениям по изобретению в той степени, в которой они являются совместимыми, где заместитель X выбран таким образом, чтобы он обладал флуоресцентными свойствами.
Каждый из аспектов и вариантов осуществления, описанных в настоящем документе в отношении формулы (IV) и формулы (IVA), отдельно или в сочетании с каждым из аспектов вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, в отношении формулы (I), формулы (IA), формулы (II) или формулы (IIA), также применим к соединениям по изобретению в той степени, в которой они являются совместимыми, где заместитель X выбран таким образом, чтобы он обладал флуоресцентными свойствами.
Примеры таких соединений включают, но ими не ограничиваются, соединения нагрузки, такие как
;
соединения линкер-нагрузка, такие как
;
и соединения конъюгата антитела с лекарственным средством, такие как
;
и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к
и его фармацевтически приемлемым солям.
В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к
и его фармацевтически приемлемым солям.
В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к
и его фармацевтически приемлемым солям.
ВЫСВОБОЖДАЕМЫЕ ВЕЩЕСТВА ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ
Дополнительные варианты осуществления изобретения также включают химические вещества, высвобождаемые из конъюгата антитела с лекарственным средством, внутри или около злокачественной клетки или опухолевой клетки.
Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что, когда соединения по изобретению содержат расщепляемый линкер, химические частицы высвобождаются из конъюгата антитела с лекарственным действием в результате ферментативного и/или гидролитического расщепления посредством одной или нескольких ассоциированных со злокачественной клеткой или опухолевой клеткой протеаз, гликозидаз или посредством исключительно химических средств. Расщепление может происходить в одной или нескольких подходящих точках расщепления соединения по изобретению для высвобождения химических веществ. Не ограничиваясь какой-либо теорией, для настоящего изобретения предусматривается, что расщепление может происходить в одной или нескольких подходящих точках в самом антителе; в линкере и/или в заместителе X. Соответственно, предусматривается, что, когда соединение по изобретению содержит антитело, связанное через расщепляемый фрагмент, а в другом месте соединение содержит один или несколько дополнительных расщепляемых фрагментов, например, на заместителе X, тогда расщепление может происходить в одном или нескольких расщепляемых фрагментах перед высвобождением активного соединения. Таким образом, один конъюгат антитела с лекарственным средством может потенциально расщепляться в нескольких положениях in vivo, так что высвобождаемые вещества могут различаться.
Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что, когда соединения по изобретению содержат нерасщепляемый линкер, химические частицы высвобождаются из конъюгата антитела с лекарственным действием в результате ферментативного и/или гидролитического расщепления одним или несколькими злокачественной клеткой или опухолевая клетка-ассоциированные протеазы или гликозидазы, действующие на одну или несколько подходящих точек расщепления на самом антителе для высвобождения химического вещества. Кроме того, предусматривается, что, когда соединение по изобретению содержит антитело, связанное через нерасщепляемый линкер, а где-либо в другом месте соединение содержит один или несколько дополнительных расщепляемых фрагментов, например, на заместителе X, тогда расщепление может происходить в одном или нескольких расщепляемых фрагментах перед высвобождением активного соединения. Соответственно, один конъюгат антитела с лекарственным средством может потенциально расщепляться в нескольких положениях in vivo, так что высвобождаемые вещества могут различаться.
Не ограничиваясь какой-либо теорией, для соединений по настоящему изобретению подходящие точки расщепления могут включать, но ими не ограничиваясь, калихеамицин аминосахар -N(R3)-LR с высвобождением -N(R3)H; концевую аминогруппу полиэтиленгликолевого заместителя в линкерном заместителе; концевую аминогруппу полиэтиленгликоля в заместителе в X; аминогруппу полиаминовой цепи в линкерном заместителе; и аминогруппу полиаминоцепи в заместителе X.
СОЕДИНЕНИЯ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ
Соединения по изобретению включают соединения любой из формул, описанных в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Если не указано иное, соединения по изобретению включают соединения нагрузки, соединения нагрузка-линкер и соединения конъюгаты антитела с лекарственным средством, включая соединения формулы (I), формулы (IA), формулы (II), формулы (IIA), формулы (III), формулы (IIIA), формулы (IV) и формулы (IVA). Соединения по изобретению также включают соединения-зонды, описанные в настоящем документе. Соединения по изобретению также включают высвобождаемые вещества, описанные в настоящем документе.
Если не указано иное, все ссылки в настоящем документе на соединения по изобретению или их соли включают ссылки на сольваты, гидраты и их комплексы; и на сольваты, гидраты и комплексы их солей; включая ссылку на полиморфы, стереоизомеры и их меченные изотопом варианты.
Соединения по изобретению могут существовать в форме фармацевтически приемлемых солей, таких как, например, соли присоединения кислоты и соли присоединения основания для соединений одной из формул, представленных в настоящем документе. Используемый в настоящем описании термин “фармацевтически приемлемая соль” относится к таким солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства исходного соединения. Используемая в настоящем документе фраза “фармацевтически приемлемая(ые) соль(и)”, если не указано иное, включает соли кислотных или основных групп, которые могут присутствовать в соединениях формул, описанных в настоящем документе.
Например, соединения по изобретению, которые являются основными по своей природе, способны к образованию большого количества солей с различными неорганическими и органическими кислотами. Несмотря на то что такие соли должны быть фармацевтически приемлемыми для введения животным, на практике часто желательно сначала выделить соединение по настоящему изобретению из реакционной смеси в виде фармацевтически неприемлемой соли, а затем легко превратить последнюю обратно в соединение в виде свободного основания обработкой щелочным реагентом и затем превратить это свободное основание в фармацевтически приемлемую соль присоединения кислоты. Соль присоединения кислоты к основным соединениям по настоящему изобретению могут быть получены обработкой основного соединения по существу эквивалентным количеством выбранной минеральной или органической кислоты в водной среде-растворителе или в подходящем органическом растворителе, таком как метанол или этанол. После упаривания растворителя получают желаемую твердую соль. Желаемую соль кислоты также можно осадить из раствора свободного основания в органическом растворителе путем добавления к раствору подходящей минеральной или органической кислоты.
Кислоты, которые могут быть использованы для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот, таких основных соединений, которые образуют нетоксичные соли присоединения кислот, т.е. соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, такие соли как гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат, цитрат, кислый цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат [т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)].
Примеры солей включают, но ими не ограничиваются, следующие соли: ацетат, акрилат, бензолсульфонат, бензоат (такой как хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат и метоксибензоат), бикарбонат, бисульфат, бисульфит, битартрат, борат, бромид, бутин-1,4-диоат, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, капроат, каприлат, клавуланат, цитрат, деканоат, дигидрохлорид, дигидрогенфосфат, эдетат, эдизилат, эстолат, эзилат, этилсукцинат, формиат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолят, гликолиларсанилат, гептаноат, гексин-1,6-диоат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, γ-гидроксибутират, иодид, изобутират, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, малонат, манделат, мезилат, метафосфат, метан-сульфонат, метилсульфат, моногидрофосфат, мукат, напсилат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, нитрат, олеат, оксалат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, фенилацетаты, фенилбутират, фенилпропионат, фталат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, пропансульфонат, пропионат, пропиолат, пирофосфат, пиросульфат, салицилат, стеарат, субацетат, суберат, сукцинат, сульфат, сульфоната, сульфит, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтиодод и валерат.
Иллюстративные примеры подходящих солей включают органические соли, полученные из аминокислот, таких как глицин и аргинин, аммиака, первичных, вторичных и третичных аминов и циклических аминов, таких как пиперидин, морфолин и пиперазин, и неорганические соли, полученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.
Соединения по изобретению, которые включают основную группу, такую как аминогруппа, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами, помимо указанных выше кислот.
Соединения по изобретению, которые являются кислотными по своей природе, способны к образованию солей присоединения основания с различными фармакологически приемлемыми катионами. Примеры таких солей включают соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов, в частности соли натрия и калия. Все эти соли получают общепринятыми методами. Химическими основаниями, которые используют в качестве реагентов для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения основания по настоящему изобретению, являются основания, которые образуют нетоксичные соли основания с кислотными соединениями, описанными в настоящем документе. Эти соли могут быть получены любым подходящим способом, например, путем обработки свободной кислоты неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксидом щелочного металла или гидроксидом щелочноземельного металла, или тому подобное. Эти соли также могут быть получены путем обработки соответствующих кислотных соединений водным раствором, содержащим желаемые фармакологически приемлемые катионы, а затем упаривания полученного раствора досуха, предпочтительно при пониженном давлении. Альтернативно, они также могут быть получены путем смешивания вместе растворов кислотных соединений в низших спиртах и желаемого алкоксида щелочного металла, а затем упаривания полученного раствора досуха таким же способом, как описано раньше. В любом случае для обеспечения полноты реакции и максимальных выходов целевого конечного продукта предпочтительно используют стехиометрические количества реагентов.
Химические основания, которые могут быть использованы в качестве реагентов для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения оснований к соединениям по изобретению, которые являются кислотными по своей природе, представляют собой основания, которые образуют нетоксичные соли присоединения основания с такими соединениями. Такие нетоксичные соли присоединения основания включают, но ими не ограничиваются, соли, полученные из таких фармакологически приемлемых катионов, как катионы щелочных металлов (например, калия и натрия) и катионы щелочноземельных металлов (например, кальция и магния), соли аммония или водорастворимые соли присоединения амина, такого как N-метилглюкамин (меглумин), и низшего алканоламмония и другие соли присоединения фармацевтически приемлемых органических аминов.
Также могут быть образованы гемисоли кислот и оснований, например, гемисульфат и гемикальциевые соли.
Обзор подходящих солей смотри в Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002). Способы получения фармацевтически приемлемых солей соединений по изобретению известны специалисту в данной области техники.
Соли по настоящему изобретению могут быть получены способами, известными специалистам в области техники. Фармацевтически приемлемая соль соединений по изобретению может быть легко получена путем смешивания вместе растворов соединения и желаемой кислоты или желаемого основания, в зависимости от конкретного случая. Соль может осаждаться из раствора и ее можно собрать фильтрованием или можно извлечь путем упаривания растворителя. Степень ионизации в соли может изменяться от полностью ионизированной до почти неионизированной.
Специалистам в области техники будет понятно, что соединения по изобретению в форме свободного основания, имеющие основную функциональную группу, могут быть превращены в соли присоединения кислоты путем обработки стехиометрическим избытком подходящей кислоты. Соли присоединения кислоты к соединениям по изобретению можно снова превратить в соответствующее свободное основание путем обработки стехиометрическим избытком подходящего основания, такого как карбонат калия или гидроксид натрия, обычно в присутствии водного растворителя и при температуре между около 0 и 100°С. Форму свободного основания можно выделить общепринятыми способами, такими как экстракция органическим растворителем. Кроме того, соли присоединения кислоты к соединениям по изобретению можно подвергать взаимному обмену, используя эффекты, заключающиеся в разности растворимостей солей, летучестей или кислотностей кислот, или путем обработки подходящим образом нагруженной ионообменной смолой. Например, взаимный обмен можно осуществить путем взаимодействия соли соединений по изобретению с незначительным стехиометрическим избытком кислоты при более низком рК, чем у кислотного компонента исходной соли. Это превращение обычно проводят при температуре от около 0°С до точки кипения растворителя, используемого в качестве среды для осуществления процедуры. Аналогичные замены возможны для солей присоединения основания, обычно при посредничестве формы свободного основания.
Соединения по изобретению могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Когда растворитель или вода являются прочно связанными, комплекс будет иметь хорошо определенную стехиометрию, независимо от влажности. Однако когда растворитель или вода являются слабо связанными, как в канальных сольватах и гигроскопических соединениях, содержание воды/растворителя будет зависеть от влажности и условий сушки. В таких случаях нестехиометрические количества будут нормой. Термин “сольват” используется в настоящем описании для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по изобретению и одну или несколько молекулу фармацевтически приемлемого растворителя, например, этанола. Термин “гидрат” используется в случаях, когда растворителем является вода. Фармацевтически приемлемые сольваты по изобретению включают гидраты и сольваты, в которых растворитель кристаллизации может быть изотопно-замещенным, например, D2O, d6-ацетон, d6-ДМСО.
Изобретение также относится к пролекарствам соединений формул, предусмотренных в настоящем изобретении. Таким образом, некоторые производные соединений по изобретению, которые сами могут иметь небольшую фармакологическую активность или не иметь ее, могут при введении пациенту, превращаться в соединения по изобретению, например, путем гидролитического расщепления. Такие производные называют “пролекарствами”. Дополнительную информацию, касающуюся применения пролекарств, можно найти в “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”, vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and W. Stella) и “Bioreversible Carriers in Drug Design”, Pergamon Press, 1987 (ed. E.В. Roche, American Pharmaceutical Association), описания которых включены в настоящее описание посредством ссылки полностью.
Пролекарства по изобретению могут, например, быть получены путем замены подходящих функциональных групп, присутствующих в соединениях по изобретению, некоторыми группировками, которые известны специалистам в области техники в качестве “прогруппировок”, описанных, например, в “Design of Prodrugs”, H Bundgaard (Elsevier, 1985), описание которого включено в настоящее описание посредством ссылки полностью.
Наконец, некоторые соединения по изобретению сами могут действовать как пролекарства других соединений по изобретению.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (IA) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемая соль.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (IIA) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (IIIA) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (IV) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления, изобретение относится к пролекарству соединения формулы (IVA) или его фармацевтически приемлемой соли.
В объем изобретения также включены метаболиты соединений описанных в настоящем документе формул, то есть соединений, образующихся in vivo при введении лекарственного средства.
Соединения формул, представленных в настоящем документе, могут иметь асимметрические атомы углерода. Углерод-углеродные связи соединений по изобретению могут быть изображены в настоящем описании с использованием сплошной линии (
или 
), сплошной клиновидной линии (
)или штриховой клиновидной линии (
). Использование сплошной линии ( или ) для изображения связей с асимметрическими атомами углерода предназначено для обозначения того, что включены все возможные стереоизомеры (например, конкретные энантиомеры, рацемические смеси и т.д.) на таком атоме углерода. Использование или сплошной или штриховой клиновидной линии для изображения связей с асимметрическими атомами углерода предназначено для обозначения того, что только лишь указанный стереоизомер предполагается для включения. Возможно, что соединения по изобретению могут содержать более одного асимметрического атома углерода. В этих соединениях использование сплошной линии для изображения связей с асимметрическими атомами углерода предназначено для обозначения того, что все возможные стереоизомеры предполагаются для включения. Например, если не указано иное, подразумевается, что соединения по изобретению могут существовать в виде энантиомеров и диастереомеров или в виде их рацематов и смесей. Использование сплошной линии для изображения связей с одним или несколькими асимметрическими атомами углерода в соединении по изобретению и использование сплошной или штриховой клиновидной линии для изображения связей с другими асимметрическими атомами углерода в том же самом соединении предназначено для обозначения того, что присутствует смесь диастереомеров.
Соединения по изобретению, которые содержат хиральные центры, могут существовать в виде стереоизомеров, таких как рацематы, энантиомеры или диастереомеры.
Стереоизомеры соединений формул, представленных в настоящем документе, могут включать цис- и транс-изомеры, оптические изомеры, такие как (R)- и (S)-энантиомеры, диастереомеры, геометрические изомеры, поворотные изомеры, атропизомеры, конформационные изомеры и таутомеры соединений по изобретению, включая соединения, проявляющие более одного вида изомерии; и их смеси (такие как рацематы и пары диастереомеров). Также включены соли присоединения кислоты или присоединения основания, где противоион является оптически активным, например, d-лактат или l-лизин, или рацемический, например, dl-тартрат или dl-аргинин.
Если какой-либо рацемат кристаллизуется, то возможны кристаллы двух разных типов. Первым типом является вышеуказанное рацемическое соединение (истинный рацемат), где получена одна гомогенная форма кристалла, содержащая оба энантиомера в эквимолярных количествах. Вторым типом является рацемическая смесь или конгломерат, где получены две формы кристалла в эквимолярных количествах, каждая из которых содержит одиночный энантиомер.
Соединения по изобретению могут демонстрировать таутомерные эффекты и обладать структурной изомерией. Например, соединения могут существовать в нескольких таутомерных формах, включая енольную и иминную форму, и кето и енаминную форму, и геометрических изомерах и их смесях. Все такие таутомерные формы включены в объем, охватываемый соединениями по изобретению. Таутомеры существуют в виде смесей группы таутомеров в растворе. В твердой форме обычно преобладает один таутомер. Настоящее изобретение включает все таутомеры соединений формул, представленных в настоящем документе, даже если может быть описан один таутомер.
Кроме того, некоторые соединения по изобретению могут образовывать атропизомеры (например, замещенные биарилы). Атропизомеры представляют собой конформационные стереоизомеры, которые встречаются, когда не допускается вращение вокруг одинарной связи в молекуле, или оно сильно замедлено, в результате стерических взаимодействий с другими частями молекулы, и заместители на обоих концах этой одинарной связи являются несимметричными. Взаимное превращение атропизомеров является достаточно слабым для обеспечения разделения и выделения в заранее определенных условиях. Энергетический барьер термической рацемизации может быть определен по стерическому затруднению в отношении свободного вращения одной или нескольких связей, образующих хиральную ось.
Если соединение по изобретению содержит алкенильную или алкениленовую группу, то возможны геометрические цис/транс (или Z/E) изомеры. Цис/транс-изомеры могут быть разделены общепринятыми методами, хорошо известными специалистам в области техники, например, хроматографией и фракционной кристаллизацией.
Общепринятые методы получения/выделения индивидуальных энантиомеров включают хиральный синтез из подходящего оптически чистого предшественника или расщепление рацемата (или рацемата соли или производного) с использованием, например, хиральной жидкостной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ).
Альтернативно, рацемат (или предшественник рацемата) может быть подвергнут взаимодействию с подходящим оптически активным соединением, например, спиртом, или в случае, когда соединение содержит кислотную или основную группировку, с кислотой или основанием, такими как винная кислота или 1-фенилэтиламин. Полученная диастереомерная смесь может быть разделена хроматографией и/или фракционной кристаллизацией, и один или оба диастереоизомера могут быть превращены в соответствующий(е) чистый(е) энантиомер(ы) методами, хорошо известными специалисту в области техники.
Хиральные соединения по изобретению (и их хиральные предшественники) могут быть получены в энантиомерно-обогащенной форме с использованием хроматографии, обычно ВЭЖХ, на асимметричной смоле с подвижной фазой, состоящей из углеводорода, обычно гептана или гексана, содержащего от 0 до 50% изопропанола, обычно от 2 до 20%, и от 0 до 5% алкиламина, обычно 0,1% диэтиламина. Концентрирование элюата приводит к обогащенной смеси.
Стереоизомерные конгломераты могут быть разделены посредством традиционных методик, известным специалистам в области техники; см., например, “Stereochemistry of Organic Compounds” by E L Eliel (Wiley, New York, 1994), описание которого включено в настоящий документ посредством ссылки полностью.
Используемый в настоящем документе термин “энантиомерно чистое” описывает соединение, которое присутствует в виде отдельного энантиомера и которое описывается единицами энантиомерного избытка (э.и.). Предпочтительно, когда соединение присутствует в виде энантиомера, энантиомер присутствует в энантиомерном избытке более чем или равном примерно 80%; более предпочтительно в энантиомерном избытке более чем или равном примерно 90%; еще более предпочтительно в энантиомерном избытке более чем или равном примерно 95%; еще более предпочтительно в энантиомерном избытке более чем или равном примерно 98%; наиболее предпочтительно в энантиомерном избытке более чем или равном примерно 99%. Аналогичным образом, используемый в настоящем описании термин “диастереомерно чистое” описывает соединение, которое присутствует в виде диастереомера и которое охарактеризовано единицами диастереомерного избытка (д.и.). Предпочтительно, когда соединение присутствует в виде диастереомера, диастереомер присутствует в диастереомерном избытке более чем или равном примерно 80%; более предпочтительно в диастереомерном избытке более чем или равном примерно 90%; еще более предпочтительно в диастереомерном избытке более чем или равном примерно 95%; еще более предпочтительно в диастереомерном избытке более чем или равном примерно 98%; наиболее предпочтительно в диастереомерном избытке более чем или равном примерно 99%.
Настоящее изобретение также включает меченные изотопом соединения, которые идентичны соединениям, представленным в одной из предложенных формул, за исключением того, что один или несколько атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе.
Меченные изотопом соединения по изобретению обычно могут быть получены общепринятыми методами, известным специалистам в области техники, или способами, аналогичными способам, описанным в настоящем описании, с использованием подходящего меченного изотопом реагента вместо реагента, не меченного изотопом, используемого в других случаях.
Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как, но ими не ограничиваются, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 127I, 79Br и 81Br. Некоторые меченные изотопом соединения по изобретению, например, такие, в которые включены такие радиоактивные изотопы, такие как 3Н и 14С, используются в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Изотопы трития, т.е. 3Н, и углерода-14, т.е. 14С, особенно предпочтительны вследствие легкости их получения и обнаружения. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерии, т.е. 2H, может обеспечить некоторые терапевтические эффекты, получаемые вследствие более высокой метаболической стабильности, например, увеличенный период полураспада in vivo или пониженные требования к дозировкам, и, соответственно, могут быть предпочтительными в некоторых случаях. Меченные изотопом соединения по изобретению в основном могут быть получены путем выполнения процедур, представленных на Схемах и/или в Примерах и Получениях, путем замены немеченного изотопом реагента, на меченный изотопом реагент.
Соединения по изобретению, предназначенные для фармацевтического применения, можно вводить в виде кристаллических или аморфных продуктов или их смесей. Они могут быть получены, например, в виде твердых прессованных масс, порошков или пленок такими способами, как осаждение, кристаллизация, лиофильная сушка, сушка распылением или сушка выпариванием. Для этих целей могут быть использованы микроволновая или радиочастотная сушка.
Терапевтические применения соединений и их конъюгатов с антителами
Другой аспект изобретения относится к способу применения соединений по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения патологических состояний, таких как злокачественная опухоль.
Другой аспект изобретения относится к способу устранения или ингибирования пролиферации опухолевых клеток или злокачественных клеток, включающему обработку опухолевых клеток или злокачественных клеток пациента определенным количеством соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное количество эффективно для устранения или ингибирования пролиферации опухолевых клеток или злокачественных клеток.
Другой аспект изобретения относится к способу применения соединений по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения патологического роста клеток.
Другой аспект изобретения относится к способу применения соединений по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли.
Другой аспект изобретения относится к соединениям по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства.
Другой аспект изобретения относится к соединениям по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении патологических состояний, таких как злокачественная опухоль.
Другой аспект изобретения относится к соединениям по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении патологического роста клеток.
Другой аспект изобретения относится к соединениям по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении злокачественной опухоли.
Другой аспект изобретения относится к применению соединений по изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, к производству лекарственного средства для лечения патологических состояний, таких как злокачественная опухоль.
Другой аспект изобретения относится к применению соединений по изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, к производству лекарственного средства для лечения аномального клеточного роста.
Другой аспект изобретения относится к применению соединений по изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, к производству лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли.
Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения патологических состояний, таких как злокачественная опухоль, содержащей соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.
Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения патологического клеточного роста, содержащей соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.
Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли, содержащей соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.
Соединения по изобретению применяются для ингибирования размножения опухолевой клетки или злокачественной клетки, для вызывания апоптоза в опухоли или злокачественной клетке или для лечения злокачественной опухоли у пациента. Соединения по изобретению могут соответственно применяться в различных условиях для лечения злокачественной опухоли у животных. Указанные конъюгаты могут применяться для доставки соединения по изобретению в опухолевую клетку или злокачественную клетку. Не ограничиваясь какой-либо теорией, в одном из вариантов осуществления, антитело конъюгата связывается или ассоциируется с антигеном, ассоциированным со злокачественной клеткой или опухолевой клеткой, и конъюгат может быть поглощен (интернализирован) внутри опухолевой клетки или злокачественной клетки посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза или другого механизма интернализации. Антиген может быть присоединен к опухолевой клетке или злокачественной клетке или может представлять собой белок внеклеточного матрикса, ассоциированный с опухолевой клеткой или злокачественной клеткой. В некоторых случаях, при нахождении внутри клетки, одна или несколько специфических пептидных последовательностей расщепляются, например, расщепляются ферментативно или гидролитически с помощью одной или нескольких протеаз, ассоциированных с опухолевой клеткой или злокачественной клеткой, что приводит к высвобождению соединения по изобретению из конъюгата. Конъюгат может расщепляться внутриклеточной протеазой для высвобождения соединения по изобретению. Высвобождаемое соединение по изобретению затем может свободно мигрировать в клетку и индуцировать цитотоксическую или цитостатическую активность. Не ограничиваясь какой-либо теорией, высвобождаемое соединение по изобретению также может мигрировать в другую клетку, включая клетку, которая не экспрессирует подходящий антиген, и индуцирует цитотоксическую или цитостатическую активность. В альтернативном варианте осуществления, соединение по изобретению отщепляется от конъюгата вне опухолевой или злокачественной клетки, и далее соединение по изобретению проникает в клетку.
В некоторых вариантах осуществления, конъюгаты обеспечивают специфическое для конъюгата нацеливание на опухоль или злокачественную опухоль, снижая, таким образом, общую токсичность соединений.
В другом варианте осуществления, антительная единица связывается с опухолевой клеткой или злокачественной клеткой.
В другом варианте осуществления, антительная единица связывается с антигеном опухолевой клетки или злокачественной клетки, который находится на поверхности опухолевой клетки или злокачественной клетки.
В другом варианте осуществления, антительная единица связывается с антигеном опухолевой клетки или злокачественной клетки, который представляет собой белок внеклеточного матрикса, ассоциированный с опухолевой клеткой или злокачественной клеткой.
Специфичность антительной единицы в отношении определенной опухолевой или злокачественной клетки может быть важна для определения таких опухолей или злокачественных опухолей, которые наиболее эффективно лечатся.
Используемый в настоящем документе термин “терапевтически эффективное количество” относится к количеству вводимого соединения, которое ослабляет, в некоторой степени, один или несколько симптомов расстройства, которое повергают лечению. В отношении лечения злокачественной опухоли, терапевтически эффективное количество относится к такому количеству, которое имеет эффект (1) уменьшения размера опухоли, (2) ингибирования (то есть замедления, в некоторой степени, предпочтительно прекращения) метастазирования опухоли, (3) ингибирования, в некоторой степени (то есть замедление в некоторой степени, предпочтительно остановка), роста опухоли или инвазивности опухоли, и/или (4) ослабление, в некоторой степени (или, предпочтительно, устранение), одного или нескольких признаков или симптомов, ассоциированных со злокачественной опухолью.
Используемый в настоящем документе термин “субъект” относится к человеку или животному. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, субъектом является человек.
Используемый в настоящем документе термин “лечить”, если не указано иное, означает инверсию течения, облегчение, ингибирование развития или профилактику расстройства или состояния, к которому применяется такой термин, или одного или нескольких симптомов такого расстройства или состояния. Используемый в настоящем документе термин “лечение”, если не указано иное, относится к акту лечения как “процессу лечения”, как он определен непосредственно выше. Термин “лечение” также включает адъювантное и неоадъювантное лечение субъекта.
Термины “патологический клеточный рост” и “гиперпролиферативное расстройство” используются в настоящем документе взаимозаменямо.
“Патологический рост клеток”, как используется в настоящем документе, если не указано иное, относится к клеточному росту, который не зависит от нормальных регуляторных механизмов (например, утраты контактного ингибирования). Патологический рост клеток может быть доброкачественным (не злокачественным) или злокачественным (раковым).
Используемый в настоящем документе термин “злокачественная опухоль” относится к любому злокачественному и/или инвазивному росту или опухоли, вызванной патологическим ростом клеток. Используемый в настоящем документе термин “злокачественная опухоль” относится к солидным опухолям, названным по типу клеток, которые их образуют, злокачественной опухоли крови, костного мозга или лимфатической системы. Примеры солидных опухолей включают, но ими не ограничиваются, саркомы и карциномы. Примеры злокачественных опухолей крови включают, но ими не ограничиваются, лейкозы, лимфомы и миеломы. Термин “злокачественная опухоль” включает, но ими не ограничивается, первичную злокачественную опухоль, которая возникает в конкретном месте организма, метастатическую злокачественную опухоль, которая распространяется из места, в котором она возникла, в другие части организма, рецидив первоначальной первичной злокачественной опухоли после ремиссии, и вторичную злокачественную опухоль, которая соответствует новой первичной злокачественной опухоли у пациента с историей предшествующей злокачественной опухоли типа, отличного от последней злокачественной опухоли.
В некоторых вариантах осуществления способов, представленных в настоящем документе, патологический рост клеток представляет собой злокачественную опухоль, где злокачественная опухоль, выбрана из группы, состоящей из злокачественной опухоли мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, толстой кишки, простаты, легких (включая NSCLC и SCLC), пищевода, головы и шеи, плоскоклеточной карциномы, колоректального рака, злокачественной опухоли почек, почечно-клеточного рака (RCC), злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли щитовидной железы, острого миелогенного лейкоза (AML), миелодиспластического синдрома (MDS), меланомы, нейрофиброматозы и гепатоцеллюлярной карциномы, злокачественной опухоли эндометрия, злокачественной опухоли легкого, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли кожи, злокачественной опухоли желудка и злокачественной опухоли яичек; и злокачественных опухолей кроветворной системы, включая, но ими не ограничиваясь, лейкемии и лимфомы.
Лекарственные формы и способы введения
Другой аспект изобретения относится к фармацевтическим композициям, включающим эффективное количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, включая нагрузку по настоящему изобретению, соединение линкер-нагрузка по настоящему изобретению и/или их конъюгат “антитело-лекарственное средство” и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. В некоторых вариантах осуществления, композиции пригодны для введения животным или человеку.
Настоящие фармацевтические композиции могут быть в любой форме, которая позволяет вводить композицию пациенту. Например, композиция может быть в форме твердого вещества или жидкости. Введение может быть системным или местным. Типичные способы введения включают, без ограничения, пероральный, парентеральный, глазной, внутриопухолевые интрадуоденальные способы, местный и ректальый способ введения. Парентеральное введение включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные или интрастернальные инъекции или инфузии. В одном аспекте, композиции вводят парентерально. В конкретном варианте осуществления, композиции вводят внутривенно.
Фармацевтические композиции могут быть получены таким образом, чтобы обеспечить биодоступность соединения по изобретению при введении композиции пациенту. Композиции могут принимать форму одной или нескольких дозированных единиц, где, например, таблетка может представлять собой отдельную дозированную единицу, а контейнер соединения по изобретению в жидкой форме может содержать множество дозированных единиц. Альтернативно, известны различные системы доставки, например, инкапсуляция в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, капсулы и т.д., и их можно использовать для введения соединения по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, пациенту вводят более одного соединения по изобретению.
Вещества, используемые при получении фармацевтических композиций, могут быть нетоксичными в используемых количествах. Специалистам в данной области техники будет очевидно, что оптимальная дозировка активного(ых) ингредиента(ов) в фармацевтической композиции будет зависеть от множества факторов. Соответствующие факторы включают, без ограничения, вид животного (например, человек), конкретную форму соединения по изобретению, способ введения и используемую композицию.
Фармацевтически приемлемый носитель или напонитель может быть твердым или дисперсным, так что композиции находятся, например, в форме таблеток или порошка. Носитель(и) может быть жидким. Кроме того, носитель(и) может быть в виде частиц. Выбор носителя и/или вспомогательного вещества будет в значительной степени зависеть от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние вспомогательного вещества на растворимость и стабильность, и тип лекарственной формы.
Подходящие фармацевтические носители включают инертные разбавители или наполнители, воду и различные органические растворители (такие как гидраты и сольваты). Фармацевтические композиции могут, при необходимости, содержать дополнительные ингредиенты, такие как ароматизаторы, связующие вещества, вспомогательные вещества и тому подобное. Примеры, без ограничения, вспомогательных веществ включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли. Если для перорального введения требуются водные суспензии или эликсиры, активное соединение в них может объединяться с различными подсластителями или ароматизаторами, пигментами или красителями и, если желательно, эмульгирующими или суспендирующими агентами, вместе с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин или их сочетание.
Фармацевтическая композиция может, например, находиться в форме, подходящей для перорального введения, в виде таблетки, капсулы, пилюли, порошка, композиций с замедленным высвобождением, раствора, суспензии, для парентеральной инъекции в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии; для местного введения в виде мази или крема или для ректального введения в виде суппозитория.
Типичные формы для парентерального введения включают растворы или суспензии активных соединений в стерильных водных растворах, например, в водном пропиленгликолевом или декстрозном растворах. При необходимости, такие лекарственные формы могут быть подходящим образом буферизованы.
Фармацевтическая композиция может находиться в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных доз.
Фармацевтические композиции, подходящие для доставки соединений по изобретению, и способы их получения будут очевидны специалистам в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно обнаружить, например, в “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995), описание которого включено в настоящее описание посредством ссылки полностью.
Соединения по изобретению можно вводить перорально. Пероральное введение может включать глотание, в результате чего соединение попадает в желудочно-кишечный тракт, или может быть использовано трансбуккальное или подъязычное введение, посредством которых соединение попадает в кровоток непосредственно из ротовой полости.
Композиции, подходящие для перорального введения, включают твердые препараты, такие как таблетки, содержащие частицы капсулы, жидкости или порошки, леденцы (включая заполненные жидкостью), жевательные таблетки, мульти- и наночастицы, гели, твердый раствор, липосому, пленки (включая мукоадгезивные), суппозитории, спреи и жидкие композиции.
Твердые композиции для перорального введения могут быть изготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Композиции для модифицированного высвобождения включают замедленное, отсроченное, импульсное, контролируемое, нацеленное и запрограммированное высвобождение. Подходящие композиции с модифицированным высвобождением описаны в патенте США № 6106864. Детали других подходящих технологий высвобождения, таких как высокоэнергетические дисперсии и осмотические и имеющие покрытие частицы, можно найти в Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001). Использование жевательной резинки для достижения контролируемого высвобождения описано в WO 00/35298. Описания этих ссылок включены в настоящем документе посредством ссылки полностью.
Жидкие композиции включают суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и эликсиры. Такие композиции могут использоваться в качестве наполнителей в мягких или твердых капсулах и обычно включают носитель, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или несколько эмульгирующих агентов и/или суспендирующих агентов. Жидкие композиции также могут быть получены путем растворения твердого вещества, например, из саше. В композицию для введения путем инъекции также могут быть включены одно или несколько следующих веществ: поверхностно-активное вещество, консервант, смачивающее вещество, диспергирующее вещество, суспендирующее вещество, буфер, стабилизатор и вещество, придающее изотоничность.
В некоторых вариантах осуществления, фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой жидкости, такую как вода и масло, включая жидкие углеводороды животного, растительного или синтетического происхождения. масла нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения. Носители могут представлять собой солевой раствор и тому подобное. Кроме того, могут быть использованы вспомогательные, стабилизирующие и другие вещества. В одном из вариантов осуществления, при введении пациенту, соединение или конъюгат и фармацевтически приемлемые носители являются стерильными. Вода является типичным носителем, когда соединение или конъюгат вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также могут быть использованы в качестве жидких носителей, в частности для инъецируемых растворов. Композиции по настоящему изобретению, при необходимости, также могут содержать незначительные количества увлажняющих или эмульгирующих агентов или рН-буферных агентов. Другие примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в “Remington's Pharmaceutical Sciences”, E.W. Martin.
Жидкие композиции, независимо от того являются ли они растворами, суспензиями или другими подобными формами, могут также включать один или несколько из следующих компонентов: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, солевой раствор, предпочтительно физиологический солевой раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия, жирные масла, такие как синтетические моно- или диглицериды, которые могут служить в качестве растворителя или суспендирующей среды, полиэтиленгликоли, глицерин, циклодекстрин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатообразующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты, фосфаты или аминокислоты, и вещества, регулирующие тоничность, такие как хлорид натрия или декстроза. Парентеральная композиция может быть заключена в ампулу, одноразовый шприц или многодововый флакон, изготовленный из стекла, пластика или другого материала. Физиологический солевой раствор является примером адъюванта. Инъецируемая композиция предпочтительно является стерильной.
Композиции для парентерального введения могут быть изготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Композиции с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, импульсное, контролируемое, целевое и запрограммированное высвобождение. Таким образом, соединения по изобретению могут быть изготовлены в виде твердого, полутвердого или тиксотропного жидкого препарата для введения в виде имплантируемого депонированного препарата, обеспечивающего модифицированное высвобождение активного соединения. Примеры таких композиций включают покрытые лекарственным средством стенты и микросферы из сополимера молочной и гликолевой кислот (PGLA).
В одном из вариантов осуществления, соединение по изобретению получено в соответствии с общепринятыми процедурами в виде фармацевтической композиции, предназначенной для внутривенного введения животным, в частности человеку. Обычно, носители или наполнители для внутривенного введения представляют собой стерильные изотонические водные буферные растворы. При необходимости композиции также могут включать солюбилизирующее вещество. Композиции для внутривенного введения могут необязательно содержать местный анестетик, такой как лигнокаин, для облегчения боли на участке инъекции. Обычно, ингредиенты поставляются либо по отдельности, либо в смешанном виде в стандартной лекарственной форме, например, в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметически закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного вещества. В случае если соединение по изобретению должно вводиться путем инфузии, оно может быть распределено, например, в инфузионный флакон, содержащий стерильную воду или физиологический раствор фармацевтической степени чистоты. В случае если соединение по изобретению должно вводиться путем инъекции, может быть предоставлена ампула со стерильной водой для инъекций или физиологическим раствором с тем, чтобы ингредиенты могли быть смешаны перед введением.
В некоторых вариантах осуществления, может быть желательно введение одного или нескольких соединений по изобретению локально на участок, требующий лечения. Это может быть достигнуто, например, без ограничения, местным вливанием во время хирургической операции; наружным нанесением, например, в сочетании с повязкой на рану после операции; путем инъекции; посредством катетера; или посредством имплантата, причем указанный имплантат выполнен из пористого, непористого или желатинового материала, включая мембраны, например, из сиаластина или волокна. В другом варианте осуществления, введение может осуществляться путем прямой инъекции на участке (или прежнем участке) локализации злокачественной опухоли, опухоли или опухолевой или предопухолевой ткани. В другом варианте осуществления, введение может осуществляться путем прямой инъекции на участке (или прежнем участке) проявления аутоиммунного заболевания.
Соединения по изобретению также можно использовать в быстрорастворимых, быстро распадающихся лекарственных формах, например, в формах, описанных в Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986 by Liang and Chen (2001), описание которого включено в настоящее описание посредством ссылки полностью.
В еще одном варианте осуществления, соединение по изобретению можно доставляться в системе с контролируемым высвобождением, например, без ограничения, могут быть использованы насос или различные полимерные материалы. В еще одном варианте осуществления, система с контролируемым высвобождением может размещаться в непосредственной близости от мишени соединения по изобретению, например, печени, в следствие чего требуется только часть системной дозы. (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Могут использоваться другие системы с контролируемым высвобождением, описанные в статье Langer (Science 249:1527-1533 (1990)).
Композиция также может включать различные вещества, которые модифицируют физическую форму твердой или жидкой дозированной единицы. Например, композиция может включать вещества, которые образуют покрывающую оболочку вокруг активных ингредиентов. Вещества, которые образуют покрывающую оболочку, обычно являются инертными и могут быть выбраны, например, из сахара, шеллака и других веществ, образующих энтеросолюбильные покрытия. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть заключены в желатиновую капсулу.
Количество соединения по изобретению, которое является эффективным при лечении конкретного расстройства или состояния, будет зависеть от природы расстройства или состояния и может быть определено стандартными клиническими методами. Кроме того, для определения оптимальных диапазонов доз можно необязательно использовать анализы in vitro или in vivo. Точная доза, применяемая в композициях, также будет зависеть от способа введения и тяжести заболевания или расстройства, и ее следует выбирать в соответствии с мнением практикующего врача и состоянием конкретного пациента. Режимы дозирования могут корректироваться с обеспечением оптимального желаемого ответа. Например, может быть введен один болюс, несколько разделенных доз могут быть введены с течением времени, или доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена в зависимости от требований терапевтической ситуации. Особенно предпочтительным является получение парентеральных композиций в виде единичной дозированной формы для облегчения введения и единообразия дозирования. Термин “единичная дозированная форма”, используемый в настоящем документе, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для субъектов-млекопитающих, подлежащих лечению; при этом рассчитывают каждую единицу, содержащую предварительно определенное количество активного соединения, чтобы получить требуемый терапевтический эффект, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем.
Таким образом, специалисту в данной области техники должно быть понятно, исходя из описания, приведенного в настоящем документе, что доза и режим дозирования корректируются в соответствии со способами, хорошо известными в области терапии. То есть максимально допустимая доза может быть легко установлена, а также может быть определено эффективное количество, обеспечивающее обнаруживаемый терапевтический эффект для пациента, а также временные требования введения каждого средства, чтобы обеспечить обнаруживаемый терапевтический эффект для пациента. Соответственно, хотя определенные схемы дозирования и введения приведены в настоящем документе в качестве примеров, эти примеры не ограничивают каким-либо образом дозу и режим введения, которые могут быть предоставлены пациенту при осуществлении настоящего изобретения.
Следует отметить, что величины доз могут изменяться в зависимости от типа и тяжести состояния, которое должно быть облегчено, и могут включать однократную или множественные дозы. Кроме того, следует понимать, что для любого конкретного субъекта конкретные режимы дозирования должны корректироваться с течением времени в соответствии с индивидуальной потребностью и профессиональным суждением лица, вводящего или контролирующего введение композиций, и что диапазоны доз, описанные в настоящем документе, являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения объема или практики заявленной композиции. Например, дозы могут корректироваться с учетом фармакокинетических или фармакодинамических параметров, которые могут включать клинические эффекты, такие как токсические эффекты и/или лабораторные показатели. Таким образом, настоящее изобретение охватывает индивидуальное увеличение дозы, определяемое специалистом в данной области. Определение соответствующих доз и режимов введения химиотерапевтического средства хорошо известно в соответствующей области и должно быть понятно специалисту в данной области техники, после предоставления идей настоящего изобретения.
Количество вводимого соединения по изобретению будет зависеть от подлежащего лечению субъекта, тяжести расстройства или состояния, скорости введения, распределения соединения и мнения лечащего врача. В общем случае, доза соединения по изобретению, вводимого пациенту, типично составляет от около 0,001 мг/кг до около 20 мг/кг массы тела пациента. В одном из аспектов, доза, вводимая пациенту, составляет от около 0,001 мг/кг до около 10 мг/кг массы тела пациента. В другом аспекте доза, вводимая пациенту, составляет от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг массы тела пациента. В еще одном аспекте, доза, вводимая пациенту, составляет от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг массы тела пациента. В еще одном аспекте, вводимая доза составляет от около 0,01 мг/кг до около 3 мг/кг массы тела пациента. В еще одном аспекте, вводимая доза составляет от около 0,1 мг/кг до около 3 мг/кг массы тела пациента.
Для внутривенного введения, композиция может содержать от около 0,001 до около 100 мг соединения по изобретению на кг массы тела пациента. В одном из аспектов, композиция может включать от около 0,01 до около 100 мг соединения по настоящему изобретению на кг массы тела пациента. В другом аспекте, вводимое количество будет находиться в диапазоне от около 0,01 до около 25 мг/кг массы тела соединения по изобретению.
Композиции содержат эффективное количество соединения по изобретению с тем, чтобы получить подходящую дозировку. В общем случае, это количество составляет, по меньшей мере, около 0,001% соединения по изобретению от массы композиции. В иллюстративном варианте осуществления, фармацевтические композиции получают так, чтобы парентеральная дозированная единица содержала от около 0,001% до около 2% по массе количества соединения по изобретению.
Независимо от того, в какой форме находятся, твердой или жидкой, настоящие композиции могут включать второй активный фармацевтический ингредиент, включая, например, фармакологическое средство, применяемое в лечении злокачественной опухоли.
В одном из аспектов, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения по изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого разбавителя, носителя или вспомогательного вещества, и дополнительно содержащей терапевтически эффективное количество другого фармацевтически активного ингредиента. В одном из вариантов осуществления, дополнительный фармацевтически активный ингредиент представляет собой противоопухолевое средство. В одном из вариантов осуществления, дополнительный фармацевтически активный ингредиент представляет собой химиотерапевтическое средство. В одном из вариантов осуществления, дополнительный фармацевтически активный ингредиент представляет собой иммуноонкологическое средство.
Набор компонентов
Ввиду того, что может оказаться желательным введение сочетания активных соединений, например, с целью лечения конкретного заболевания или состояния, в объем настоящего изобретения включены две или более фармацевтические композиции, по меньшей мере одна из которых содержит соединение в соответствии с изобретением, которые могут быть легко объединены в форме набора, подходящего для совместного введения композиций. Таким образом, набор по изобретению включает две или более отдельных фармацевтических композиций, по меньшей мере, одна из которых содержит соединение по изобретению, и средства для отдельного хранения указанных композиций, такие как контейнер, разделенный сосуд или пакет из фольги. Примером такого набора является обычная блистерная упаковка, используемая для упаковки таблеток, капсул и тому подобного.
Набор по настоящему изобретению, в частности, подходит для введения различных лекарственных форм, например, пероральной и парентеральной, для введения отдельных композиций с различными интервалами между введениями или для титрования отдельных композиций друг другом. Для соблюдения режима терапии, данный набор обычно включает инструкции по применению и может быть снабжен памяткой.
Комбинированная терапия
Злокачественные опухоли, включая, но ими не ограничиваясь, опухоль, метастазы, или другие заболевания или расстройства, характеризующиеся неконтролируемым клеточным ростом, можно лечить или ингибировать путем введения соединения по изобретению.
В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к комбинации соединения по изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, и другого фармацевтически активного ингредиента. В одном из вариантов осуществления, дополнительный фармацевтически активный ингредиент представляет собой противоопухолевое средство.
Используемый в настоящем документе термин “комбинированная терапия” относится к введению соединения по изобретению вместе с, по меньшей мере, одним дополнительным фармацевтическим или лекарственным средством (например, противоопухолевым средством), либо последовательно, либо одновременно.
Как указано выше, соединения по изобретению могут быть использованы в комбинации с одним или несколькими дополнительными противоопухолевыми средствами. При использовании комбинированной терапии, одно или несколько дополнительных противоопухолевых средств могут вводиться последовательно или одновременно с соединением по изобретению. В одном из вариантов осуществления, дополнительное противоопухолевое средство вводят млекопитающему (например, человеку) до введения соединения по изобретению. В другом варианте осуществления, дополнительное противоопухолевое средство вводят млекопитающему после введения соединения по изобретению. В другом варианте осуществления, дополнительное противоопухолевое средство вводят млекопитающему (например, человеку) одновременно с введением соединения по изобретению.
В других вариантах осуществления, предлагаются способы злокачественной опухоли, включающие введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по изобретению и противоопухолевого средства. В одном из вариантов осуществления, противоопухолевое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. В одном из вариантов осуществления, химиотерапевтическое средство представляет собой средство, с которым злокачественная опухоль не признается невосприимчивой к лечению. В другом варианте осуществления, химиотерапевтическое средство является средством, с которым злокачественная опухоль признается невосприимчивой к лечению. Соединение по изобретению можно вводить пациенту, который также перенес хирургическое вмешательство в качестве лечения злокачественной опухоли.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, противоопухолевое средство, используемое в комбинации с соединением по изобретению и фармацевтическими композициями, описанными в настоящем документе, представляет собой антиангиогенные средства (например, средство, которое останавливает развитие новых кровеносных сосудов в опухолях). Примеры антиангиогенных средств включают, например, ингибиторы VEGF (фактора роста эндотелия сосудов), ингибиторы VEGFR (рецепторов фактора роста эндотелия сосудов), ингибиторы TIE-2, ингибиторы PDGFR (рецепторов фактора роста тромбоцитов), ингибиторы ангиопоетина, ингибиторы PKCβ, ингибиторы СОХ-2 (циклооксигеназы II), интегрины (альфа-v/бета-3), ингибиторы ММР-2 (матриксной металлопротеиназы 2) и ингибиторы ММР-9 (матриксной металлопротеиназы 9).
Предпочтительные антиангиогенные средства включают сунитиниб (Sutent™), бевацизумаб (Avastin™), акситиниб (AG 13736), SU 14813 (Pfizer) и AG 13958 (Pfizer).
Дополнительные антиангиогенные агенты включают ваталаниб (CGP 79787), Сорафениб (Nexavar™), пегаптаниб октанатрия (Macugen™), вандетаниб (Zactima™), PF-0337210 (Pfizer), SU 14843 (Pfizer), AZD 2171 (AstraZeneca), ранибизумаб (Lucentis™), Neovastat™ (AE 941), тетратиомолибдат (Coprexa™), AMG 706 (Amgen), "ловушку VEGF" (AVE 0005), CEP 7055 (Sanofi-Aventis), XL 880 (Exelixis), телатиниб (BAY 57-9352) и CP-868,596 (Pfizer).
Другие антиангиогенные агенты включают энзастаурин (LY 317615), мидостаурин (CGP 41251), перифозин (KRX 0401), тепренон (Selbex™) и UCN 01 (Kyowa Hakko).
Другие примеры антиангиогенных средств, которые могут быть использованы совместно с соединением по изобретению и фармацевтическими композициями, описанными в настоящем документе, включают целекоксиб (Celebrex™), парекоксиб (Dynastat™), деракоксиб (SC 59046), лумиракоксиб (Preige™), валдекоксиб (Bextra™), рофекоксиб (Vioxx™), игуратимод (Careram™), IP 751 (Invedus), SC-58125 (Pharmacia) и эторикоксиб (Arcoxia™).
Другие антиангиогенные средства включают экзисулинд (Aptosyn™), салсалат (Amigesic™), дифлунизал (Dolobid™), ибупрофен (Motrin™), кетопрофен (Orudis™), набуметон (Relafen™), пироксикам (Feldene™), напроксен (Aleve™, Naprosyn™), диклофенак (Voltaren™), индометацин (Indocin™), сулиндак (Clinoril™), толметин (Tolectin™), этодолак (Lodine™), кеторолак (Toradol™) и оксапрозин (Daypro™).
Другие антиангиогенные средства включают АВТ 510 (Abbott), апратастат (TMI 005), AZD 8955 (AstraZeneca), инциклинид (Metastat™) и PCK 3145 (Procyon).
Другие антиангиогенные средства включают ацитретин (Neotigason™), плитидепсин (aplidine™), циленгитид (EMD 121974), комбретастатин А4 (CA4Р), фенретинид (4 HPR), галофугинон (Tempostatin™), Panzem™ (2-метоксиэстрадиол), PF-03446962 (Pfizer), ребимастат (BMS 275291), катумаксомаб (Removab™), леналидомид (Revlimid™), скваламин (EVIZON™), талидомид (Thalomid™), Ukrain™ (NSC 631570), Vitaxin™ (MEDI 522) и золендроновую кислоту (Zometa™).
В другом варианте осуществления, противоопухолевое средство представляет собой так называемый ингибитор сигнальной трансдукции (например, ингибирующие средства посредством которых регуляторные молекулы, управляющие фундаментальными процессами клеточного роста, дифференциации и выживания, обмениваются информацией в клетке). Ингибиторы сигнальной трансдукции включают небольшие молекулы, антитела и антисмысловые молекулы. Ингибиторы сигнальной трансдукции включают, например, ингибиторы киназ (например, ингибиторы тирозинкиназы или ингибиторы серин/треонин-киназы) и ингибиторы клеточного цикла. Более конкретно, ингибиторы сигнальной трансдукции включают, например, ингибиторы фарнезилпротеинтрансферазы, EGF-ингибитор, ErbB-1 (EGFR), ErbB-2, pan erb, IGF1R ингибиторы, МЕК, c-Kit ингибиторы, ингибиторы FLT-3, ингибиторы K-Ras, ингибиторы PI3 киназы, ингибиторы JAK, ингибиторы STAT, ингибиторы Raf киназы, ингибиторы Akt, ингибитор mTOR, ингибиторы P70S6 киназы, ингибиторы WNT пути и так называемые мультикиназные ингибиторы.
Предпочтительные ингибиторы сигнальной трансдукции включают гефитиниб (Iressa™), цетуксимаб (Erbitux™), эрлотиниб (Tarceva ™), трастузумаб (Herceptin™), сунитиниб (Sutent™), иматиниб (Gleevec™) и PD325901 (Pfizer).
Дополнительные примеры ингибиторов сигнальной трансдукции, которые могут быть использованы совместно с соединением по изобретению и фармацевтическими композициями, описанными в настоящем локументе, включают BMS 214662 (Bristol-Myers Squibb), лонафарниб (Sarasar™), пелитрексол (AG 2037), матузумаб (EMD 7200), нимотузумаб (TheraCIM h-R3™), панитумумаб (Vectibix™), Вандетаниб (Zactima™), пазопаниб (SB 786034), ALT 110 (Alteris Therapeutics), BffiW 2992 (Boehringer Ingelheim) и Cervene™ (TP 38).
Другие примеры ингибиторов сигнальной трансдукции включают PF-2341066 (Pfizer), PF-299804 (Pfizer), канертиниб (CI 1033), пертузумаб (Omnitarg™), Лапатиниб (Tycerb™), пелитиниб (EKB 569), милтефозин (Miltefosin™), BMS 599626 (Bristol-Myers Squibb), Лапулейцел-Т (Neuvenge™), NeuVax™ (E75 противораковая вакцина), Osidem™ (IDM 1), мубритиниб (TAK-165), CP-724,714 (Pfizer), панитумумаб (Vectibix™), лапатиниб (Tycerb™), PF-299804 (Pfizer), пелитиниб (EKB 569) и пертузумаб (Omnitarg™).
Другие примеры ингибиторов сигнальной трансдукции включают ARRY 142886 (Array Biopharm), эверолимус (Certican™), зотаролимус (Endeavor™), темзиролимус (Torisel™), АР 23573 (ARIAD) и VX 680 (Vertex).
Кроме того, другие ингибиторы сигнальной трансдукции включают XL 647 (Exelixis), сорафениб (Nexavar™), LE-AON (Georgetown University) и GI-4000 (Globelmmune).
Другие ингибиторы сигнальной трансдукции включают АВТ 751 (Abbott), алвоцидиб (флавопиридол), BMS 387032 (Bristol Myers), EM 1421 (Erimos), индисулан (E 7070), селициклиб (CYC 200), BIO 112 (One Bio), BMS 387032 (Bristol-Myers Squibb), PD 0332991 (Pfizer) и AG 024322 (Pfizer).
В настоящем изобретении предусмотрено применение соединений по изобретению вместе с классическими антинеопластическими средствами. Классические антинеопластические средства включают, но ими не ограничиваются, гормональные модуляторы, такие как гормональные, антигормональные, андрогенные агонисты, андрогенные антагонисты и антиэстрогеновые терапевтические средства, ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC), подавляющие генную экспрессию средства или активирующие гены средства, рибонуклеазы, протеосомные, ингибиторы топоизомеразы I, производные камптотецина, ингибиторы топоизомеразы II, алкилирующие агенты, антиметаболиты, ингибиторы поли(АОР-рибоза)-полимеразы-1 (PARP-1), ингибиторы микротубулина, антибиотики, ингибиторы веретена растительного происхождения, координационные соединения платины, ген-терапевтические агенты, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на сосуды средства (VTA) и статины.
Примеры классических антинеопластических средств, применяемых в комбинированной терапии с соединением по изобретению, необязательно с одним или несколькими другими средствами, включают, но ими не ограничиваются, глюкокортикоиды, такие как дексаметазон, преднизон, преднизолон, метилпреднизолон, гидрокортизон и прогестины, такие как медроксипрогестерон, мегестролацетат (Мегейс), мифепристон (RU-486), селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (SERM; такие как тамоксифен, ралоксифен, лазофоксифен, афимоксифен, арзоксифен, базедоксифен, фиспемифен, ормелоксифен, оспемифен, тесмилифен, торемифен, трилостан и CHF 4227 (Cheisi)), селективные негативные регуляторы эстрогеновых рецепторов (SERD; такие как фулвестрант), экземестан (Аромазин), анастрозол (Аримидекс), атаместан, фадрозол, летрозол (Фемара), агонисты гонадотропин-высвобождающего гормона (GnRH; также известного как лютеинизирующий гормон высвобождающий гормон [LHRH]), такой как бусерелин (Супрефакт), гозерелин (Золадекс), лейпрорелин (Лупрон) и трипторелин (Трелстар), абареликс (Пленаксис), бикалутамид (Касодекс), ципротерон, флутамид (Эулексин), мегестрол, нилутамид (Ниландрон) и осатерон, дутастерид, эпристерид, финастерид, Serenoa repens (сереноя ползучая), PHL 00801, абареликс, гозерелин, лейпрорелин, трипторелин, бикалутамид, тамоксифен, экземестан, анастрозол, фадрозол, форместан, летрозол и их сочетаня.
Другие примеры классических антинеопластических средств, используемых в комбинации с соединениями по изобретению, включают, но ими не ограничиваются, субероланилид гидроксамовую кислоту (SAHA, Merck Inc./Aton Pharmaceuticals), депсипептид (FR901228 или FK228), G2M-777, МС-275, пивалоилоксиметилбутират и PXD-101; Онкопаз (ранпирназ), PS-341 (MLN-341), Велкад (бортезомиб), 9-аминокамптотецин, белотекан, BN-80915 (Roche), камптотецин, дифломотекан, эдотекарин, экзатекан (Daiichi), гиматекан, 10-гидроксикамптотецин, иринотекан HCl (Камптосар), луртотекан, Оратецин (рубитекан, Supergen), SN-38, топопекан, камптотецин, 10-гидроксикамптотецин, 9-аминокамптотецин, иринотекан, SN-38, эдотекарин, топотекан, акларубицин, адриамицин, амонафид, амрубицин, аннамицин, даунорубицин, доксорубицин, элсамитруцин, эпирубицин, этопозид, идарубицин, галарубицин, гидроксикарбамид, неморубицин, новантрон (митоксантрон), пирарубицин, пиксантрон, прокарбазин, ребеккамицин, собузоксан, тафлупозид, валрубицин, Зинекард (дексразоксан), N-оксид азотистого иприта, циклофосфамид, AMD-473, алтретамин, АР-5280, апазиквон, бросталлицин, бендамустин, бусульфан, карбоквон, кармустин, хлорамбуцил, дакарбазин, эстрамустин, фотемустин, глюфосфамид, ифосфамид, KW-2170, ломустин, мафосфамид, мехлоретамин, мелфалан, митобронитол, митолактол, митомицин С, митоксатрон, нимустин, ранимустин, темозоломид, тиотепа и платина-координационные алкилирующие соединения, такие как цисплатин, Параплатин (карбоплатин), эптаплатин, лобаплатин, недаплатин, Элоксатин (оксалиплатин, Sanofi), стрептозоцин, сатрплатин и их комбинацию.
В изобретении также предусмотрено применение соединения по изобретению вместе с ингибиторамии дигидрофолатредуктазы (такими как метотрексат и НьюТрексин NeuTrexin (триметресатглюкуронат)), пуриновыми антагонистами (такими как 6-меркаптопуринрибозид, меркаптопурин, 6-тиогуанин, кладрибин, клофарабин (Clolar), флударабин, неларабин и ралтитрексед), пиримидиновыми антагонистами (такими как 5-фторурацил (5-FU), Алимта (преметрексед динатрия, LY231514, МТА), капецитабин (Xeloda™), цитозинарабинозид, Gemzar™ (гемцитабин, Eli Lilly), Тегафур (UFT Orzel или Uforal и включая TS-1 комбинацию тегафура, гиместата и отостата), доксифлуридин, кармофур, цитарабин (включая окфосфат, фосфат стеарат, формы замедленного высвобождения и липосомальные формы), эноцитабин, 5-азацитидин (Видаза), децитабин и этинилцитидин) и другими антиметаболитами, такими как эфлорнитин, гидроксимочевина, лейковорин, нолатрексед (Тимитак), триапин, триметрексат, N-(5-[N-(3,4-дигидро-2-метил-4-оксохиназолин-6-илметил)-N-метиламино]-2-теноил)-L-глутаминовая кислота, AG-014699 (Pfizer Inc.), ABT-472 (Abbott Laboratories), INO-1001 (Inotek Pharmaceuticals), KU-0687 (KuDOS Pharmaceuticals) и GPI 18180 (Guilford Pharm Inc) и их комбинации.
Другие примеры классических антинеопластических цитотоксических средств, применяемых в комбинированной терапии с соединением по изобретению, необязательно с одним или несколькими другими средствами, включают, но ими не ограничиваются, Абраксан (Abraxis BioScience, Inc.), Батабулин (Amgen), EPO 906 (Novartis), Винфлунин (Bristol-Myers Squibb Company), актиномицин D, блеомицин, митомицин С, неокарзиностатин (Зиностатин), винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин (Навелбин), доцетаксел (Таксотер), Ортатаксел, паклитаксел (включая конъюгат Таксопрексин DHA/паклитаксел), цисплатин, карбоплатин, Недаплатин, оксалиплатин (Элоксатин), Сатраплатин, Камптосар, капецитабин (Кселода), оксалиплатин (Элоксатин), Таксотер алитретиноин, Канфосфамид (Telcyta™), DMXAA (Антисома), ибандроновую кислоту, L-аспарагиназу, пегаспаргазу (Oncaspar™), Эфапроксирал (Efaproxyn™ радиотерапия)), бексаротен (Targretin™), Тесмилифен (DPPE - улучшает эффективность цитотоксических агентов)), Theratope™ (Biomira), Третиноин (Vesanoid™), тирапазамин (Trizaone™), мотексафин гадолиния (Xcytrin™) Cotara™ (mAb), и NB1-3001 (Protox Therapeutics), полиглутамат-паклитаксел (Xyotax™) и их комбинации.
Дополнительные примеры классических антинеопластических средств, применяемых в комбинированной терапии с соединением по изобретению, необязательно с одним или несколькими другими средствами, включают, но ими не ограничиваются, Адвексин (ING 201), TNFerade (GeneVec, соединение, которое экспрессирует TNF-альфа в ответ на радиотерапию), RB94 (Baylor College of Medicine), Генасенс (Облимерсен, Genta), Комбрестатин А4Р (CA4Р), Oxi-4503, AVE-8062, ZD-6126, TZT-1027, Аторвастатин (Липитор, Pfizer Inc.), Провастатин (Правахол, Bristol-Myers Squibb), Ловастатин (Мевакор, Merck Inc.), Симвастатин (Зокор, Merck Inc.), Флувастатин (Лескол, Novartis), Церивастатин (Байкол, Bayer), Розувастатин (Крестор, AstraZeneca), Ловостатин, Ниацин (Адвикор, Kos Pharmaceuticals), Кадует, Липитор, торцетрапиб и их комбинацию.
Изобретение также предусматривает использование соединений по изобретению вместе с иммуномодулирующим средством, например, иммунодепрессантом или иммуностимулятором. Примеры таких средств включают, но ими не ограничиваются, антагонист или ингибитор PD-L1, такие как антитело против PD-1. Примеры таких антител против PD-L1 могут включать, например, авелумаб (ранее MSB0010718C, Merck/Pfizer) или антитела, описанные в WO 2013/079174A1 и US 2014/0241917, которые включены посредством ссылки (Merck), или MEDI4736 (AstraZeneca) [описано в WO 2011/066389 и US2013/034559] или ламбролизумаб. Примеры таких средств могут также включать антитело против CTLA-4, антитела, направленные против рецепторов фактора некроза опухоли (TNF) 4-1BB и Ox40 (например, антитело против OX-40 или антитело против 4-1BB), противоопухолевая вакцина на основе антигенов, P-кадгерин LP - с двойной аффинностью переориентирующийся белок или другой конъюгат антитела с лекарственным средством. В одном из вариантов осуществления, иммуномодулирующим средством является антитело против CTLA4, например, тремелимумаб (ранее CP-675,206, полностью человеческие Mab IgG2); ипилимумаб (MDX-0120; Medarex; Bristol-Myers Squibb. В другом аспекте вторым активным средством является противоопухолевая вакцина р53, эпитопная вакцина р53 и другие противоопухолевые вакцины (например, для активации дендритных клеток).
В некоторых вариантах осуществления, пациент также получает дополнительное лечение, такое как лучевая терапия. В конкретном варианте осуществления, соединение по изобретению вводят одновременно с химиотерапевтическим средством или с лучевой терапией. В другом конкретном варианте осуществления, введение химиотерапевтического средства или радиотерапию осуществляют до или после введения соединения по изобретению.
Химиотерапевтическое средство можно вводить в течение серии процедур. Может вводиться любое химиотерапевтическое средство или их комбинация, например, стандартное химиотерапевтическое(ие) средство(а).
Кроме того, способы лечения злокачественной опухоли с помощью соединения по изобретению предусмотрены в качестве альтернативы химиотерапии или лучевой терапии, когда химиотерапия или лучевая терапия признаются или могут оказаться слишком токсичными, например, приводят к неприемлемым или непереносимым побочным эффектам у подлежащего лечению пациента. Подлежащий лечению пациента, может, необязательно, подвергаться другой противоопухолевой терапии, такой как хирургическое вмешательство, лучевая терапия или химиотерапия, в зависимости от того, какое лечение считается приемлемым или переносимым.
Соединения по изобретению также могут быть использованы in vitro или ex vivo, например, для лечения некоторых видов злокачественных опухолей, включая, но ими не ограничиваясь, лейкемии и лимфомы, такого как лечение с использованием трансплантатов аутологичных стволовых клеток. Это лечение может включать многостадийный процесса, при котором аутологичные гемопоэтические стволовые клетки животного собирают и очищают от всех злокачественных клеток, затем оставшуюся популяцию клеток костного мозга животного уничтожают путем введения высокой дозы соединения по изобретению с или без сопутствующей высокодозной лучевой терапии, и трансплантат стволовых клеток инфузируют обратно в животное. Далее обеспечивают поддерживающую терапию до восстановления функции костного мозга и выздоровления пациента.
Синтез соединений по изобретению и их конъюгаты “антитело-лекарственное средство”
Соединения и конъюгаты по изобретению могут быть получены с использованием методов синтеза, описанных ниже в Экспериментальной части.
Как более подробно описано ниже, соединения и конъюгаты по настоящему изобретению могут быть получены с использованием части линкерной группы, имеющей реакционноспособный участок для связывания с соединением.
Обычные способы конъюгирования для получения ADC включают химическую модификацию либо с помощью аминов боковой цепи лизина, либо с помощью цистеиновых сульфгидрильных групп, активированных путем восстановления межцепочечных дисульфидных связей. Милотарг, брентуксимаб ведотин и KADCYLA® (адотрастузумаб эмтанзин) являются примерами ADC, полученных с использованием этих обычных способов.
Недавно были также исследованы ферментативные способы получения ADC с использованием трансглутаминазы и/или сортазы. Трансглутаминазы принадлежат к семейству ферментов, которые катализируют присоединение ацила к первичному амину. Конъюгирование с использованием трансглутаминазы обеспечивает преимущества высокой селективности, упрощенных процедур взаимодействия и мягких условий взаимодействия. См., например, Strop et al., Chemistry & Biology, 20:161-167 (2013); и Farias et al., Bioconj. Chem. 25(2):240-250 (2014). В US 2013/0230543 и US 2013/0122020 описано опосредованное трансглутаминазой сайт-специфичное конъюгирование антител и малых молекул.
Конъюгирование с трансглутаминазой
В некоторых вариантах осуществления, соединение по изобретению может быть ковалентно сшито с Fc-содержащим или Fab-содержащим полипептидом, сконструированным с ацил-донорной глутамин-содержащей меткой (например, Gln-содержащими пептидными метками или Q-метками), либо эндогенным глутамином, который стал реакционноспособным (то есть, способность образовывать ковалентную связь в качестве ацил-донора в присутствии амина и трансглутаминазы) посредством полипептидной инженерии (например, посредством делеции, вставки, замены, мутации аминокислот или любого их сочетания на полипептиде), в присутствии трансглутаминазы, при условии, что соединение по изобретению содержит аминодонорный агент (например, небольшую молекулу, содержащую или присоединенную к реакционноспособному амину), тем самым образуя стабильную и гомогенную популяцию сконструированного Fc-содержащего полипептидного конъюгата, причем аминодонорный агент сайт-специфическим образом конъюгирован с Fc-содержащим или Fab-содержащим полипептидом через ацил-донорную глутамин-содержащую метку или экспонированный/доступный/реакционноспособный эндогенный глутамин. Например, соединения по изобретению могут быть конъюгированы способом, описанным в публикации международной заявки № PCT/IB2011/054899, содержание которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления, для облегчения конъюгирования соединения по изобретению с Fc-содержащим или Fab-содержащим полипептидом, сконструированным с ацил-донорной глутамин-содержащей меткой или эндогенным глутамином, сделанным реакционноспособным посредством полипептидной инженерии или другими способами, известными специалистам в данной области, такими как дегликозирование, в присутствии трансглутаминазы, Z представляет собой NH2.
Конъюгирование с константной областью каппа домена легкой цепи человека
В некоторых воплощениях соединение по изобретению может быть ковалентно присоединено к боковой цепи K188 константной области каппа домена легкой цепи человека (CLк) (нумерация полноразмерной легкой цепи согласно Kabat). Например, соединения по изобретению могут быть конъюгированы способом, описанным в заявке на патент США №13/180204 или WO 2012/007896, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления, для облегчения конъюгирования с K188 CLк (CLк-K80), Z представляет собой 
; R7 независимо выбран в каждом случае из группы, состоящей из F, Cl, I, Br, NO2, CN и CF3; и h равно 1, 2, 3, 4 или 5. В некоторых вариантах осуществления, для облегчения конъюгирования с K188 CLκ (CLκ-K80), Z представляет собой 
;
Конъюгирование с линкерами, содержащими сукцинимиды, включая варианты с открытым кольцом.
В альтернативном варианте осуществления соединение по изобретению может быть конъюгировано через линкер на основе сукцинимида или линкер на основе сукцинимида с открытым кольцом.
Изобретение далее описано в следующих примерах, которые не ограничивают объем настоящего изобретения.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Эксперименты обычно проводили в инертной атмосфере (атмосфере азота или аргона), в частности в тех случаях, когда использовали реагенты или промежуточные соединения, чувствительные к кислороду или влаге. Имеющиеся в продаже растворители и реагенты обычно использовали без дополнительной очистки, включая безводные растворители в подходящих случаях (обычно продукты Sure-Seal™ от Aldrich Chemical Company, Milwaukee, Wisconsin). Продукты обычно сушили в вакууме, после чего подвергали последующим взаимодействиям или биологическим исследованиям. Данные масс-спектрометрии получали либо с помощью прибора для жидкостной хромато-масс-спектрометрии (ЖХМС или ЖХ-МС), химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) или газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХМС). Химические сдвиги для данных ядерного магнитного резонанса (ЯМР) выражены в частях на миллион (м.д., δ) относительно остаточных пиков от используемых дейтерированных растворителей.
Для процедур, описанных в синтезах в других Примерах или Методах, протокол реакции (продолжительность реакции и температура) может изменяться. Обычно взаимодействия сопровождали тонкослойная хроматография (ТСХ) или масс-спектрометрия и/или ЖХМС, и реакционные смеси, при необходимости, подвергали обработке. Степень очистки может изменяться в зависимости от эксперимента: обычно, растворители и соотношения растворителей, используемые для элюентов/градиентов, выбирали для получения соответствующих Rfs или времени удерживания.
Названия соединений генерировали с помощью программного обеспечения ACD Labs.
Условия ЖХ-МС, ВЭЖХ и ГХ, используемые для анализов:
Условия ЖХ-МС-анализа:
Метод 1: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: от 20% до 100% B в течение 5 мин, затем 100% B в течение 0,5 мин, затем градиент: от 100% до 20% B в течение 0,5 мин; Расход: 1,5 мл/мин. Температура: не контролируется; Обнаружение: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-2000 дальтон; Объем впрыска: 10 мкл; Инструмент: Agilent 1100 HPLC.
Метод 2: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: от 20% до 100% B в течение 5 мин, затем градиент: от 100% до 20% B в течение 0,5 мин; Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-2000 дальтон; Вводимый объем: 10 мкл; Прибор: Agilent 1100 HPLC.
Метод 3: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% - 95% B в течение 8 мин, затем 100% B в течение 2 мин; Скорость потока: 1 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-2000 дальтон; Вводимый объем: 10 мкл; Прибор: Agilent 1100 HPLC.
Метод 4: Waters Acquity УВЭЖХ HSS T3, C18, 2,1 × 50 мм, 1,7 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% B в течение 0,1 мин, 5% - 95% B в течение 2,5 мин, 95% B в течение 0,35 мин; Скорость потока: 1,25 мл/мин. Температура: 60°C; Детектирование: 200-450 нм; MS (+) диапазон 100-2000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Waters Acquity.
Метод 5: Waters Acquity УВЭЖХ BEH, 2,1 мм × 50 мм, C18, 1,7 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% B в течение 0,1 мин, 5% - 95% B в течение 0,7 мин, 95% B в течение 0,1 мин; Скорость потока: 1,25 мл/мин. Температура: 60°C; Детектирование: 200-450 нм; MS (+) диапазон 100-1200 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Waters Acquity.
Метод 6: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% до 100% B в течение 3 мин, затем 100% в течение 0,25 мин; Скорость потока: 2,0 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-3000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Agilent 1260 HPLC.
Метод 7: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% до 100% B в течение 8 мин, затем 100% в течение 2 мин; Скорость потока: 2,0 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-3000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Agilent 1260 HPLC.
Метод 8: Колонка Waters УВЭЖХ BEH C18, 2,1 × 150 мм, 1,7 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% - 95% B в течение 11,5 мин; Скорость потока: 0,25 мл/мин. Температура: 40C; Детектирование: Waters SYNAPT G2 масс-спектрометр в сочетании с ACQUITY УВЭЖХ; Вводимый объем: 2 мкл
Метод 9: Колонка Chromolith RP-18e, 25 × 2 мм; Подвижная фаза A: 0,038% трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,016% трифторуксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% - 95% B в течение 0,7 мин с последующим изократическим элюированием с использованием 95% B в течение 0,4 мин; Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура: 50 C; Детектирование: DAD 220 нм; MS (+) диапазон 0-1000; Вводимый объем: 3 мкл; Прибор: Shimadzu LC-2010,
Метод 10: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 4,6 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 10 мМ фосфатный буфер, pH7; Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% - 95% B в течение 10 мин; Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-3000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Agilent 1260 HPLC.
Метод 11: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% до 100% B в течение 5 мин, затем градиент: 100% - 20% B в течение 0,5 мин; Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-3000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Agilent 1260 HPLC
Метод 12: Waters Acquity УВЭЖХ HSS T3, C18, 2,1 × 50 мм, 1,7 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% B в течение 0,1 мин, 5% - 95% B в течение 1,0 мин, 95% B в течение 0,35 мин; Скорость потока: 1,25 мл/мин. Температура: 60°C; Детектирование: 200-450 нм; MS (+) диапазон 100-2000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Waters Acquity.
Метод 13: колонка: Chromolith Flash RP-18e 25-2 мм; Подвижная фаза A: 0,04 трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% трифторуксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% - 95% B в течение 0,7 мин, 95% B в течение 0,4 мин; Скорость потока: 1,5 мл/мин; Температура: 50°C; Детектирование: ESI, UV 220нм; MS(+) range: 0-1000 дальтон: Вводимый объем: 0,5-2 мкл; Прибор: SHIMADZU 2010,
Метод 14: колонка: Xbridge Shield RP 18 5 мкм, 2,1 × 50 мм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле; Градиент: 0% - 95% растворитель B в течение 3 мин, 95% B в течение 1 мин; Скорость потока: 1 мл/мин; Источник ионов: ESI; Режим ионизации: положительный; Распыляемый газ: азот; Газ-осушитель: азот; Расход: 5 л/мин; Давление распылителя: 30 фунтов на квадратный дюйм (0,21 мПа); Температура газа: 325°C; Напряжение на капиляре: 3,5 кВ; Напряжение на фрагменторе: 50 В; Прибор: Agilent G1969A.
Метод 18: Колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150 × 3,0 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% муравьиная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об./об.); 10% B в течение 0,5 мин, затем градиент: от 10% до 100% B в течение 4 мин, затем 100% B в течение 0,25 мин; Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; MS (+) диапазон 200-3000 дальтон; Вводимый объем: 5 мкл; Прибор: Agilent 1260 HPLC
Условия аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ):
Метод 15: колонка: YMC-pack ODS-A 150 × 4,6 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% трифторуксусная кислота в воде; Подвижная фаза B: 0,1% трифторуксусная кислота в ацетонитриле; Градиент 0% - 95% растворитель B в течение 10 мин, 95% over 5 мин; Скорость потока: 1,0 мл/мин; Температура: 30°C; Прибор: Agilent 1100 HPLC-BG
Метод 16: колонка: Atlantis HILIC Silica150 × 4,6 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% трифторуксусная кислота в воде; Подвижная фаза B: 0,1% трифторуксусная кислота в ацетонитриле; Градиент 100% - 70% растворитель B в течение 10 мин, 70% over 5 мин; Скорость потока: 1,0 мл/мин; Температура: 30°C; Прибор: Agilent 1100 HPLC-BG
Условия аналитической газовой хроматографии (ГХ):
Метод 17: колонка: HP-5 30 м × 0,32 мм × 0,25 мкм FILM; Газ-носитель: азот; Суммарный расход: 153,3/мин; Разделение: 1:100; Дозатор: 250°C; Детектор (FID): 300°C; Температура колонки: 40°C (2 мин) - 250°C (2 мин), Скорость=15°C/мин; Вводимый объем: 2-3 мкл; Прибор: Shimadzu GC-2010 GC-C
Условия препаративной ВЭЖХ, используемые для очищения:
Метод A: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% - 90% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод B: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% - 95% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод C: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 10% - 90% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод D: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% до 100% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод E: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 10% - 80% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод F: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% - 80% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод G: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота и 2,5% ацетонитрил в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 10% - 95% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод H: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 15% - 95% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод I: колонка Phenomenex Luna C18, 150 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% до 100% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод J: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 5% - 60% B в течение 12 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод K: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 25% до 100% B в течение 12 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод L: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 20% до 100% B в течение 12 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод M: колонка Phenomenex Luna C18, 100 × 30 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,02% уксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,02% уксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 30% до 100% B в течение 20 мин; Скорость потока: 20 мл/мин. Температура: не контролируется; Детектирование: DAD 210, 254 нм; Вводимый объем: до 5 мл. Прибор: Gilson 215.
Метод N: колонка Waters Xbridge Prep OBD C18, 100 × 19 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,1% трифторуксусная кислота в воде (об./об.); Подвижная фаза B: 0,1% трифторуксусная кислота в ацетонитриле (об./об.); Градиент: 23% - 43% B в течение 10 мин; Скорость потока: 25 мл/мин. Температура: не контролируется.
Метод O: колонка Durashell C18, 150 × 25 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,05% водный гидроксид аммония в воде(об./об.); Подвижная фаза B: ацетонитрил; Градиент: 5% - 35% B в течение 10 мин, 35% B в течение 2 мин; Скорость потока: 25 мл/мин. Температура: не контролируется.
Метод P: колонка Durashell C18, 150 × 25 мм, 5 мкм; Подвижная фаза A: 0,05% водный гидроксид аммония в воде(об./об.); Подвижная фаза B: ацетонитрил; Градиент: 51% - 71% B в течение 10 мин, 71% B в течение 2 мин; Скорость потока: 30 мл/мин. Температура: не контролируется.
Получение линкеров, тиолов и основных промежуточных соединений:
Получение N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (L1).
Стадия 1: Синтез N-(трет-бутоксикарбонил)-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина
Раствор 2,5-диоксопирролидин-1-ил N-(трет-бутоксикарбонил)-L-валината (1,0 г, 3,18 ммоль) в диметоксиэтане (8 мл) добавляли к раствору N5-карбамоил-L-орнитина в тетрагидрофуране (2 мл). Затем добавляли водный бикарбонат натрия (282 мг, 3,34 ммоль) в воде (8 мл) и полученную суспензию перемешивали в течение четырех дней при комнатной температуре. Потом добавляли водную лимонную кислоту (15% раствор, 100 мл) и смесь экстрагировали смесью этилацетата и 2-пропанола (10:1, 2 × 100 мл). Объединенные экстракты промывали водой (2 × 100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением вязкого бесцветного масла. Далее это масло растирали с диэтиловым эфиром с получением 1,1 г (92%) желаемого продукта в виде белого твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z 373,5 [M-H+]; время удерживания=1,89 мин (Метод 1)
Стадия 2: Синтез L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина
К перемешиваемой суспензии N-(трет-бутоксикарбонил)-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (1 г, 2,67 ммоль) в сухом дихлорметане (10 мл) при 5°C добавляли трифторуксусную кислоту (6 мл). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 3 ч. Смесь далее концентрировали, и полученный остаток промывали трет-бутилметиловым эфиром и фильтровали с получением 1,15 г желаемого неочищенного продукта в виде белого твердого вещества, который использовали непосредственно без дополнительной очистки.
Стадия 3: Синтез N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (L1)
К перемешиваемому раствору L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (200 мг, 0,515 ммоль) и 2,5-диоксопирролидин-1-ил N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизината (261 мг, 0,515 ммоль) в смеси диметоксиэтан-вода-тетрагидрофуран (1:1:2, 40 мл) добавляли бикарбонат натрия (108 мг, 1,29 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ~20 ч. Смесь затем подкисляли до значения рН 2 добавлением водного раствора соляной кислоты (индикаторная рН-бумага) и экстрагировали смесью эфир-2-пропанол (10:1, 3 × 50 мл). Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и полученный остаток очищали хроматографией с обращенной фазой (метод N). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 44 мг (13%) желаемого продукта (L1) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z 667,1 [M-H+]; время удерживания=0,752 мин (Метод 9).
Получение N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (L2).
Стадия 1: Синтез N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамида
К раствору N2-ацетил-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамида (см. Международную патентную заявку PCT/IB2013/059553, опубликованную как WO 2014/068443 8 мая 2014 г., содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылок полностью) (370,0 мг, 0,557 ммоль) в N,N-диметилформамиде (8 мл) добавляли 9-флуоренилметилхлороформат (173 мг, 0,669 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (216 мг, 1,67 ммоль, 0,291 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. В реакционную смесь вводили диэтиловый эфир (10 мл) и белое твердое вещество собирали фильтрованием с получением 410 мг (95%) желаемого продукта в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z 772,5 [M-H+]; время удерживания=1,42 мин (Метод 4).
Стадия 2: Синтез N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида
К раствору N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамида (349 мг, 0,491 ммоль) в N,N-диметилформамиде (10 мл) добавляли бис(пентафторфенил)карбонат (387 мг, 0,982 ммоль) и затем N,N-диизопропилэтиламин (0,342 мл, 0,96 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод Н). Фракции, содержащие продукт, сразу же лиофилизировали с получением 132 мг (27%) желаемого продукта (L2) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z 982,6 [M-H+]; время удерживания=2,10 мин (Метод 4).
Получение 9H-флуорен-9-илметил (21-оксо-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата (L3)
Стадия 1: Синтез 9H-флуорен-9-илметил (21-гидрокси-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата
2,0 М раствор борандиметилсульфидного комплекса в тетрагидрофуране (188 мкл, 0,375 ммоль) добавляют к раствору 1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,7,10,13,16,19,22-гептаокса-4-азапентакозан-25-овой кислоты (108 мг, 0,188 ммоль) в тетрагидрофуране при 0°C. Через три часа к реакционной смеси добавляли метанол (2 мл), затем насыщенный водный раствор хлорида аммония (1 мл), чтобы погасить избыток реагента. Через один час, реакционную смесь разбавляли этилацетатом (75 мл) и промывали водой (25 мл) и насыщенным солевым раствором (25 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 110 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 562,3 [M+H+]; время удерживания=1,02 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез 9H-флуорен-9-илметил (21-оксо-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата
Смесь пиридиния хлорхромата (87 мг, 0,39 ммоль) и силикагеля (82 мг) добавляли к раствору 9H-флуорен-9-илметил (21-гидрокси-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата (110 мг, 0,16 ммоль) в дихлорметане. Через 6 часов реакционную смесь фильтровали и промывали 1 н водным раствором соляной кислоты. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (0-10% метанол в дихлорметане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением 61 мг желаемого продукта (L3). ЖХ-МС m/z 560,3 [M+H+]; время удерживания=1,12 мин (Метод 5).
Получение 9H-флуорен-9-илметил [2-(2-{2[(иодацетил)амино]этокси}этокси)этил]-карбамата (L4)
Иодацетилхлорид (744 мг, 3,64 ммоль) добавляли к раствору 9H-флуорен-9-илметил {2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}карбамата (674 мг, 1,82 ммоль) и триметиламина (1840 мг, 18,2 ммоль, 2,48 мл) в тетрагидрофуране (20 мл) и дихлорметане (8 мл) на ледяной бане. Содержимое перемешивали в течение 2 часов, затем упаривали при пониженном давлении, повторно растворяли в этилацетате (40 мл) и экстрагировали соляной кислотой (0,5 М, 2 × 20 мл), насыщенным водным бикарбонатом натрия (2 × 20 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. Неочищенную смесь очищали нормально-фазовой хроматографией на силикагеле, элюируя 10% - 100% этилацетатом в гептане объемом 20 объемов колонки. Фракции, содержащие продукт, упаривали при пониженном давлении с получением 370 мг (38%) желаемого продукта (L4). ЖХ-МС m/z 539,0 [M+H+]; время удерживания=0,88 мин (Метод 5).
Получение 9H-флуорен-9-илметил (3-аминопропил)(4-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил](3-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино}бутил)карбамата (L5)
Стадия 1: Синтез трет-бутил [3-({4-[(3-аминопропил)амино]бутил}амино)пропил]карбамата
Беспримесный трет-бутил фенил карбонат (284 мг, 271 мкл, 1,46 ммоль) добавляли к раствору N,N'-бис(3-аминопропил)бутан-1,4-диамин (296,0 мг, 1,46 ммоль) в этаноле (2,0 мл) и содержимое нагревали с обратным холодильником при перемешивании в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали до бледно-желтого бесцветного масла в вакууме и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод J). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 221 мг (23%) желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 303,3 [M+H+]; время удерживания=0,26 мин (Метод 5). Также получали 73 мг (8%) трет-бутил (2,2-диметил-4-оксо-3-окса-5,9,14-триазагептадекан-17-ил)карбамата; ЖХ-МС m/z 403,4 [M+H+]; время удерживания=0,47 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез 9H-флуорен-9-илметил {9,14-бис[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-2,2-диметил-4-оксо-3-окса-5,9,14-триазагептадекан-17-ил}карбамата
К перемешиваемому раствору трет-бутил [3-({4-[(3-аминопропил)амино]бутил}амино)пропил]карбамата (47 мг, 0,073 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (56,5 мг, 0,438 ммоль, 76,1 мкл) в N,N-диметилацетамиде (500,0 мкл) добавляли 9-Флуоренилметоксикарбонил хлорид (66,0 мг, 0,255 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 66 мг (93%) желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 991,6 [M+Na+]; время удерживания=1,33 мин (Метод 5).
Стадия 3: Синтез 9H-флуорен-9-илметил (3-аминопропил)(4-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил](3-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино}бутил)карбамата
9H-Флуорен-9-илметил {9,14-бис[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-2,2-диметил-4-оксо-3-окса-5,9,14-триазагептадекан-17-ил}карбамат (65 мг, 0,067 ммоль) растворяли в перемешиваемом растворе дихлорметана (2,5 мл), содержащем трифторуксусную кислоту (0,5 мл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 64 мг (97%) желаемого продукта (L5). ЖХ-МС m/z 869,5 [M+H+]; время удерживания=0,99 мин (Метод 5).
Получение N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)-N5-карбамоил-L-орнитинамида (L6)
Стадия 1: Синтез бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис({3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пропил}карбамат)
9-Флуоренилметоксикарбонил хлорид (62,0 мг, 0,24 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору трет-бутил (2,2-диметил-4-оксо-3-окса-5,9,14-триазагептадекан-17-ил)карбамата (72 мг, 0,11 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (148 мг, 1,14 ммоль, 199 мкл) в N,N-диметилацетамиде (1000 мкл). Через 3 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, упаривали при пониженном давлении с получением желаемого продукта (96 мг, 99%). ЖХ-МС m/z 869,5 [M+Na+]; время удерживания=1,23 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис[(3-аминопропил)карбамат]
9 бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис({3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пропил}карбамат) (90 мг, 0,11 ммоль) растворяли в перемешиваемом растворе дихлорметана (4 мл) и трифторуксусной кислоты (1 мл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, упаривали при пониженном давлении с получением желаемого продукта (79 мг, 86%). ЖХ-МС m/z 647,5 [M+H+]; время удерживания=0,69 мин (Метод 5).
Стадия 3: Синтез N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)-N5-карбамоил-L-орнитинамида
Раствор бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис[(3-аминопропил)карбамат] (37,8 мг, 0,0432 ммоль) добавляли в предварительно активированный раствор N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (7,2 мг, 0,011 ммоль), N,N,N',N'-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)урония гексафторфосфата (4,10 мг, 0,0108 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (5,58 мг, 0,0432 ммоль, 7,51 мкл) в N,N-диметилацетамиде (1,0 мл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод L). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 9,1 мг (60%) желаемого продукта (L6). ЖХ-МС m/z 1295,8 [M+H+]; время удерживания=0,94 мин (Метод 5).
Получение N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-[({4-[(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино]бензил}окси)карбонил]-N5-карбамоил-L-орнитинамида (L7)
Стадия 1: Синтез бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис({3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пропил}карбамат)
9-Флуоренилметоксикарбонил хлорид (62,0 мг, 0,24 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору трет-бутил (2,2-диметил-4-оксо-3-окса-5,9,14-триазагептадекан-17-ил)карбамата (72 мг, 0,11 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (148 мг, 1,14 ммоль, 199 мкл) в N,N-диметилацетамиде (1000 мкл). Через 3 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, упаривали при пониженном давлении с получением желаемого продукта (96 мг, 99%). ЖХ-МС m/z 869,5 [M+Na+]; время удерживания=1,23 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис[(3-аминопропил)карбамат]
9 бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис({3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пропил}карбамат) (90 мг, 0,11 ммоль) растворяли в перемешиваемом растворе дихлорметана (4 мл) и трифторуксусной кислоты (1 мл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод K). Фракции, содержащие продукт, упаривали при пониженном давлении с получением желаемого продукта (79 мг, 86%). ЖХ-МС m/z 647,5 [M+H+]; время удерживания=0,69 мин (Метод 5).
Стадия 3: Синтез N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-[({4-[(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино]бензил}окси)карбонил]-N5-карбамоил-L-орнитинамида
N 2-Ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (L2, 7,5 мг, 0,0076 ммоль) добавляли к раствору бис(9H-флуорен-9-илметил) бутан-1,4-диилбис[(3-аминопропил)карбамат] (26,7 мг, 0,0306 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,95 мг, 0,0306 ммоль, 5,31 мкл) в N,N-диметилацетамиде (1,0 мл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод L). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 9,0 мг (76%) желаемого продукта (L7). ЖХ-МС m/z 1444,9[M+H+]; время удерживания=0,95 мин (Метод 5).
Получение 2-[4-(трифторметил)фенил]пропан-2-тиола (T1)
Раствор метилмагния хлорида (4,0 мл, 12,0 ммоль, 3,0 M) в тетрагидрофуране добавляли к раствору метил-4-(трифторметил)бензоата (612 мг, 3,00 ммоль) в тетрагидрофуране (3,0 мл) и нагревали до 50°C. Через 3 ч реакционную смесь гасили 1M HCl и значение pH доводили до 5, затем экстрагировали диэтиловым эфиром (3 × 20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Затем сырое масло обрабатывали раствором тиомочевины (685 мг, 9,00 ммоль) в трифторуксусной кислоте (5 мл). Через 3 ч летучие вещества отгоняли, и неочищенный остаток обрабатывали водным гидроксидом калия (10 мл, 3,0 М). Через 1 ч рН раствора доводили до значения, равного 5, экстрагировали диэтиловым эфиром (2 × 15 мл), сушили над безводным сульфатом натрия. Полученный продукт (Т1) использовали без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z 221,1 [M+H+]; время удерживания=1,16 мин (Метод 12).
Следующие соединения получали с использованием процедуры, описанной выше для получения Т1, посредством реакции соответствующего сложного эфира:
T2: 2-(2-Аминопиридин-3-ил)пропан-2-тиол. ЖХ-МС m/z 169,2 [M+H+]; время удерживания=0,44 мин (Метод 12).
T3: 4-(2-Сульфанилпропан-2-ил)бензойная кислота. ЖХ-МС m/z 197,2 [M+H+]; время удерживания=0,80 мин (Метод 12).
T4: 2-(4-Аминофенил)пропан-2-тиол.
Получение 2-(2-аминофенил)пропан-2-тиола (T5)
Раствор хлорида метилмагния (4,0 мл, 12,0 ммоль, 3,0 M) в тетрагидрофуране добавляли к раствору метил-2-аминобензоата (453 мг, 3,0 ммоль) в тетрагидрофуране (3,0 мл) и нагревали до 50C. Через 3 ч реакционную смесь гасили 1M HCl и значение pH доводили до 5, затем экстрагировали диэтиловым эфиром (3 × 20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Затем сырое масло обрабатывали раствором серы (770 мг, 24,0 ммоль) в трифторуксусной кислоте (2,0 мл) при перемешивании. Через 3 ч летучие вещества отгоняли, и неочищенный остаток обрабатывали алюмогидридом лития (569 мг, 15,0 ммоль, 15,0 мл, 1,0 M) в тетрагидрофуране. После перемешивания в течение 12 ч раствор обрабатывали лимонной кислотой при pH 5 и экстрагировали диэтиловым эфиром (3 × 50 мл), сушили над безводным сульфатом натрия. Полученный продукт (T5) использовали непосредственно без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z 168,2 [M+H+]; время удерживания=0,72 мин (Метод 12).
Получение N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида
Стадия 1: Синтез N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамида
К раствору N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (300,0 мг, 0,948 ммоль), 4-аминобензилового спирта (0,140 г, 1,14 ммоль) в дихлорметане (10,0 мл) и метаноле (5 мл) добавляли 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (0,296 г, 1,14 ммоль). После перемешивания в течение 24 ч, добавляли дополнительную часть 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина (0,148 г, 0,57 ммоль). Через 18 ч к смеси добавляли силикагель и растворитель удаляли в вакууме; сырую смесь очищали нормально-фазовой хроматографией, элюируя смесью дихлорметан/метанол, с получением 75 мг (19%) продукта. ЖХ-МС m/z 422,5 [M+H+]; время удерживания=0,51 мин (Метод 12).
Стадия 2: Синтез N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида
Раствор бис(4-нитрофенил)карбоната (108 мг, 0,356 ммоль), триметиламина (54,0 мг, 0,53 ммоль, 74 мкл) в N,N-диметилацетамиде (3,0 мл) добавляли к N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамиду (75,0 мг, 0,18 ммоль). Через 24 ч, добавляли силикагель, и смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали нормально-фазовая хроматография, элюируя смесью дихлорметан/метанол, с получением 63 мг (63%) продукта. ЖХ-МС m/z 587,4 [M+H+]; время удерживания=0,78 мин (Метод 12).
Получение N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(3-метил-3-сульфанилбутил)карбамоил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (T6)
Твердый 4-амино-2-метилбутан-2-тиол гидрохлорид (5,97 мг, 0,0384 ммоль) добавляли к суспензии N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (15 мг, 0,026 ммоль), N,N-диизопропилэтиламина (9,91 мг, 0,0767 ммоль, 13,3 мкл) в ацетонитриле (2,0 мл). Через 24 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод L). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 9,7 мг (67%) желаемого продукта (T6) ЖХ-МС m/z 567,5 [M+H+]; время удерживания=0,73 мин (Метод 12).
Следующие соединения получали с использованием процедуры, описанной выше, для получения T6 посредством взаимодействия соответствующего амино-тиола с N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамидом:
T7: N-Ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-сульфанилпиперидин-1-ил)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид. ЖХ-МС m/z 565,7 [M+H+]; время удерживания=0,65 мин (Метод 12).
T8: N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-{4-[({[(1R)-1-карбокси-2-метил-2-сульфанилпропил]карбамоил}окси)метил]фенил}-L-орнитинамид. ЖХ-МС m/z 597,7 [M+H+]; время удерживания=0,66 мин (Метод 12).
Получение N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-N-(3-метил-3-сульфанилбутил)-L-орнитинамида (T9).
Раствор 4-амино-2-метилбутан-2-тиол гидрохлорида (11,9 мг, 0,0765 ммоль) добавляли к предварительно активированному раствору N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (22 мг, 0,070 ммоль), N,N,N',N'-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)урония гексафторфосфата (26,4 мг, 0,0695 ммоль), N,N-диизопропилэтиламина (36,0 мг, 0,278 ммоль, 48,4 мкл) в N,N-диметилацетамиде (400 мкл). Через 30 мин реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод L). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 10,6 мг (37%) желаемого продукта (P9). ЖХ-МС m/z 418,5 [M+H+]; время удерживания=0,60 мин (Метод 12).
Следующее соединение получали с использованием процедуры, описанной выше для получения T9, посредством взаимодействия соответствующего амино-тиола с N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитином:
T10: N-ацетил-L-валил-N5-карбамоил-`L-орнитил-3-сульфанил-L-валин. ЖХ-МС m/z 448,5 [M+H+]; время удерживания=0,56 мин (Метод 12).
Получение метил 4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопираносидуроната.
Стадия 1: Синтез 4-формилфенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната.
К раствору метил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопиранозилуроната бромида (1,06 г, 2,5 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) в сосуде, обернутом в фольгу, добавляли 4-гидроксибензальдегид (940 мг, 7,69 ммоль) затем оксид серебра (2,82 г, 12,2 ммоль). После перемешивания в темноте в течение 4 ч раствор фильтровали через целит, концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате (140 мл) и дихлорметане (70 мл) и промывали насыщенным бикарбонатом натрия (5 × 100 мл), затем насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушили над сульфатом магния. Летучие вещества отгоняли с получением 1,01 г (92%) продукта. ЖХ-МС m/z 456,3 [M+H2O+]; время удерживания=0,76 мин (Метод 12).
Стадия 2: Синтез 4-(гидроксиметил)фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната.
К раствору 4-формилфенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (1,0 г, 2,3 ммоль) в хлороформе (20 мл) и изопропанола (5 мл) при °C добавляли силикагель (500 мг) и борогидрид натрия (94,9 мг, 2,51 ммоль). Через 30 мин раствор выливали в ледяную воду, органический слой собирали, затем фильтровали через целит и потом промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Остаток растирали с диэтиловым эфиром с получением 885 мг (97%) продукта. ЖХ-МС m/z 458,3 [M+H2O+]; время удерживания=0,74 мин (Метод 12).
Стадия 3: Синтез метил 4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопираносидуроната
К раствору 4-(гидроксиметил)фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (885,0 мг, 2,01 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) и N,N-диизопропилэтиламина (398 мг, 3,01 ммоль, 530 мкл) добавляли бис(4-нитрофенил) карбонат (1260 мг, 4,02 ммоль). Через 48 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме, повторно растворяли в этилацетате (50 мл), промывали раствором с 10% бисульфатом натрия (4 × 30 мл), насыщенным солевым раствором (30 мл) и потом сушили над сульфатом магния и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/гептан, с получением 1186 мг (98%) желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 623,4 [M+H2O+]; время удерживания=0,94 мин (Метод 12).
Получение 4-({[(3-метил-3-сульфанилбутил)карбамоил]окси}метил)фенил бета-D-глюкопираносидуроновой кислоты (T11)
К раствору метил 4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопираносидуроната (188 мг, 0,310 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (81,9 мг, 0,621 ммоль, 109 мкл) в тетрагидрофуране (2,0 мл) и N,N-диметилацетамиде (1,0 мл) добавляли 4-амино-2-метилбутан-2-тиол гидрохлорид (58,0 мг, 0,373 ммоль). После нагревания до 60°C в течение 18 ч, содержимое экстрагировали 5% лимонной кислотой (2 × 25 мл) и диэтиловым эфиром и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в тетрагидрофуране (5 мл) охлаждали до °C и добавляли гидроксид лития (59,5 мг, 2,48 ммоль, 2,48 мл, 1,0 M). Через 1 ч при 0°C взаимодействие завершалось, и добавляли уксусную кислоту (150 мкл, 8 экв.), содержимое концентрировали и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 40,4 мг (29%) желаемого продукта (T11). ЖХ-МС m/z 444,4 [M-H-]; время удерживания=0,65 мин (Метод 12).
Следующее соединение получали с использованием процедуры, описанной выше для получения T11, посредством взаимодействия соответствующего амино-тиола с метил 4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопираносидуронатом:
T12: 4-({[(4-сульфанилпиперидин-1-ил)карбонил]окси}метил)фенил бета-D-глюкопираносидуроновая кислота. ЖХ-МС m/z 442,4 [M-H-]; время удерживания=0,64 мин (Метод 12).
Получение (1-сульфанилпропил)фосфоновой кислоты (T13)
Стадия 1: Синтез дипропан-2-ил (1-гидроксипропил)фосфоната
Раствор н-бутиллития в гексане (2,5 M, 2,89 мл, 7,22 ммоль) добавляли по каплям в течение 5 мин к перемешиваемому раствору дипропан-2-ил фосфоната (6,0 г, 36,11 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (60 мл) при -72°C в атмосфере азота. Через 30 мин к реакционной смеси добавляли раствор пропаналя (2,88 мл, 39,7 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) в течение 10 мин. Через один час к реакционной смеси по каплям добавляли концентрированную серную кислоту (779 мг, 7,94 ммоль) и смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали и остаток выливали в воду (100 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3 × 100 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением 7 г продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2: Синтез дипропан-2-ил (1-гидроксипропил)фосфоната
N,N-диметилпиридин-4-амин (46,3 мг, 0,379 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору дипропан-2-ил (1-гидроксипропил)фосфоната (850 мг, 3,79 ммоль) в сухом дихлорметане (17 мл) и триэтиламина (1,32 мл, 9,48 ммоль). Полученную смесь охлаждали до 0°C и добавляли 4-нитрофенилсульфонил хлорид (1,01 г, 4,55 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 18 ч смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток (1,7 г) очищали хроматографией на колонке с силикагелем (этилацетат/петролейный эфир 1:4-1:2) с получением 830 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 432,0 [M+Na+]; время удерживания=0,854 мин (Метод 13).
Стадия 3: Синтез дипропан-2-ил (1-тиоцианатопропил)фосфоната
Смесь дипропан-2-ил (1-гидроксипропил)фосфоната (7,7 г, 18,81 ммоль), тиоцианата калия (7,31 г, 75,2 ммоль) и 18-крон-6 (1,99 г, 7,52 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 26 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и фильтровали. Остаток промывали ацетонитрилом, затем растворяли в этилацетате (200 мл). Раствор промывали водой (3 × 100 мл) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 4,57 г сырого продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4: Синтез дипропан-2-ил (1-сульфанилпропил)фосфоната
Борогидрид натрия (2,71 г, 71,6 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору дипропан-2-ил (1-тиоцианатопропил)фосфоната (3,6 г, 14,33 ммоль) в этаноле (95%, 80 мл) при 5°C. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 72 ч смесь разбавляли водой (100 мл), охлаждали до 5°C, и избыток основания гасили водным раствором соляной кислоты (4M, 40 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3 × 100 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (этилацетат/петролейный эфир 1:4-1:2) с получением 3,0 г желаемого продукта.
Стадия 5: Синтез (1-сульфанилпропил)фосфоновой кислоты
Бром(триметил)силан (11,5 мл, 87,4 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору дипропан-2-ил (1-сульфанилпропил)фосфоната (300 мг, 12,5 ммоль) в безводном дихлорметане (45 мл) при 0°C. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 20 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси дихлорметан/метанол (45 мл/15 мл) и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением 1,94 г желаемого продукта (T13). ЖХ-МС m/z 157,0 [M+H+] (Метод 14); ВЭЖХ время удерживания=4,30 мин (Метод 15).
Следующее соединение получали с использованием процедуры, описанной выше для получения T13, путем взаимодействия соответствующего альдегида с дипропан-2-ил фосфонатом:
(1-сульфанилэтил)фосфоновая кислота (T14)
ЖХ-МС m/z 143,0 [M+H+] (Метод 14); ВЭЖХ время удерживания=4,64 мин (Метод 16).
Получение N,N,3-триметил-3-сульфанилбутанамида (T15)
Стадия 1: Синтез 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутановой кислоты
3-Метилбут-2-еновую кислоту (179 г, 1,78 моль) добавляли к пиперидину (276 г, 3,24 моль), затем (4-метоксифенил)метантиол (250 г, 1,62 моль) поддерживая температуру на уровне 35°C. Реакционную смесь нагревали до 80°C. Через 20 ч, к смеси добавляли трет-бутилметиловый эфир (1,0 L), и реакционную смесь фильтровали. Остаток распределяли между двухфазной смесью этилацетата (1,5 л) и водным раствором соляной кислоты (1,0 л, 3 M). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 338 г продукта, который использовали непосредственно на следующей стадии без очистки. ЖХ-МС m/z 275,9 [M+Na+]; время удерживания=0,783 мин (Метод 13).
Стадия 2: Синтез 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-N,N,3-триметилбутанамида
К раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутановой кислоты (3,5 г, 13,76 ммоль) в дихлорметане (40 мл) добавляли несколько капель N,N-диметилформамида. Раствор охлаждали до 5°C, и к реакционной смеси добавляли оксалилхлорид (2620 мг, 20,6 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь концентрировали досуха с получением сырого хлорангидрида (4,3 г). Раствор N,N-диметиламина в тетрагидрофуране (2M, 20 мл, 40 ммоль) добавляли к раствору хлорангидрида (2,3 г, 8,431 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) при 5°C. Через 3 ч к реакционной смеси добавляли этилацетат (60 мл), органический слой отделяли и концентрировали. Полученный остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (дихлорметан/метанол 20/1) с получением 1,55 г желаемого продукта в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z 303,9 [M+Na+]; время удерживания=0,777 мин (Метод 13).
Стадия 3: Синтез N,N,3-триметил-3-сульфанилбутанамида
Трифторуксусную кислоту (7,5 мл) добавляли к раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-N,N,3-триметилбутанамида (1,5 г, 5,33 ммоль) в метоксибензоле (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в атмосфере азота. Через 20 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (петролейный эфир/этилацетат 1:0-1:1) с получением 310 мг желаемого продукта (T15). ЖХ-МС m/z 162,1 [M+H] (Метод 14); GC время удерживания=10,2 мин (Метод 17).
Следующее соединение получали с использованием процедуры, описанной выше для получения T15, путем взаимодействия гидроксида аммония с 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутановой кислотой:
3-метил-3-сульфанилбутанамид (T16) ЖХ-МС m/z 134,1 [M+H+] (Метод 14); GC время удерживания=9,66 мин (Метод 17).
Получение 4-амино-2-метилбутан-2-тиола (T17)
Стадия 1: Синтез 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутан-1-ола
К перемешиваемой смеси 3-метил-3-сульфанилбутан-1-ола (54 г, 0,449 моль) и карбоната цезия (146 г, 0,449 моль) в ацетонитриле (500 мл) при 10°C добавляли 1-(хлорметил)-4-метоксибензол (71,8 г, 0,458 моль). Через 2 ч смесь фильтровали и фильтровальную лепешку промывали дихлорметаном (200 мл). Остаток растворяли в этилацетате (600 мл), и раствор промывали водным гидроксидом калия (2M, 2 × 250 мл), насыщенным солевым раствором (250 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 103 г желаемого неочищенного продукта, который использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
Стадия 2: Синтез 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутил метансульфоната
Метансульфонилхлорид (54 г, 0,47 моль) добавляли по каплям к раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутан-1-ола (103 г, 0,478 моль) и триэтиламина (65 г, 0,64 моль) в сухом дихлорметане (700 мл) при 10°C в атмосфере азота. Через час, реакционную смесь промывали водой (250 мл), водным насыщенным бикарбонатом натрия и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 135 г желаемого продукта, которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3: Синтез 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутан-1-амина
Азид натрия (28,1 г, 0,432 моль) добавляли частями к перемешиваемому раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутил метансульфоната (135 г, 423 ммоль) в N,N-диметилформамиде (600 мл). Реакционную смесь нагревали до 50°C. Через 18 ч смесь выливали в воду (300 мл) и экстрагировали смесью этилацетат/гексан (1:1 3 × 500 мл). Объединенные экстракты промывали водой (3 × 500 мл), насыщенным солевым раствором (200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением неочищенного азида в виде желтого масла. Трифенилфосфин (221 г, 0,844 моль) добавляли к раствору указанного неочищенного азида в смеси вода/тетрагидрофуран (200 мл/1400 мл). Реакционную смесь нагревали до 30°C. Через 20 ч смесь концентрировали, и остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (этилацетат/петролейный эфир 2:1, затем метанол/дихлорметан 1:8) с получением 84 г желаемого продукта в виде масла желтого цвета. ЖХ-МС m/z 239,9 [M+Na+]; время удерживания=0,669 мин (Метод 13).
Стадия 4: Синтез 4-амино-2-метилбутан-2-тиола
К раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутан-1-амина (84 г, 304 ммоль) в метоксибензоле (160 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (400 мл). Реакционную смесь нагревали до 50°C. Через 20 ч смесь концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде (600 мл) и экстрагировали петролейным эфиром (300 мл). Водный слой разбавляли метанолом (400 мл). Добавляли карбонат калия (84,1 г, 609 ммоль), затем ди-трет-бутил дикарбонат (73,1 г, 335 ммоль) при 10°C. Через 1 ч реакционную смесь фильтровали, и фильтрат экстрагировали этилацетатом (3 × 300 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (этилацетат/петролейный эфир 1:20-1:10) с получением 59 г неочищенного Вос-защищенного амина. Раствор соляной кислоты в этилацетате (4 M, 500 мл) добавляли к раствору этого Вос-защищенный амин (59 г, 268 ммоль) в безводном трет-бутилметиловом эфире (300 мл) при 10°C. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 3 ч смесь фильтровали и фильтровальную лепешку промывали смеью этилацетат/трет-бутилметиловый эфир (1:1, 200 мл) с получением 32,4 г желаемого продукта (T17) в виде белого твердого вещества (в виде гидрохлоридной соли). ЖХ-МС m/z 120,1 [M+H+] (Метод 14); ВЭЖХ время удерживания=5,22 мин (Метод 15).
Получение N-(3-метил-3-сульфанилбутил)ацетамида (T18)
Стадия 1: Синтез N-{3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутил}ацетамида
Ацетилхлорид (0,317 мл, 4,46 ммоль) добавляли к раствору 3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутан-1-амина (970 мг, 4,05 ммоль) и триэтиламина (0,843 мл, 6,08 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при 0°C. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 1 ч раствор промывали насыщенным водным раствором лимонной кислоты (20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением 1,1 г сырого продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2: Синтез N-(3-метил-3-сульфанилбутил)ацетамида
N-{3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутил}ацетамид (1 г, 4 ммоль) растворяли в метоксибензоле (3 мл) и к раствору добавляли трифторуксусную кислоту (7,5 мл). Реакционную смесь нагревали до 50°C. Через 20 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали хроматографией на силикагеле (дихлорметан/метанол 1:0-15:1) с получением 550 мг желаемого продукта (T18). ЖХ-МС m/z 162,1 [M+H+] (Метод 14); GC время удерживания=11,3 мин (Метод 17).
Получение N-метил-N-(3-метил-3-сульфанилбутил)ацетамида (T19)
Стадия 1: Синтез N-метил-N-(3-метил-3-сульфанилбутил)ацетамида
Раствор N-{3-[(4-метоксибензил)сульфанил]-3-метилбутил}ацетамида (500 мг, 1,78 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (8,88 мл) добавляли по каплям к перемешиваемой суспензии гидрида натрия (85,3 мг 60% дисперсии в минеральном иасле) при 0°C в атмосфере азота. Через 40 мин, к реакционной смеси добавляли иодметан (265 мг, 1,87 ммоль). Через 16 ч, добавляли еще одну порцию гидрида натрия (85,3 мг 60% дисперсии в минеральном масле). Через 24 ч, избыток гидридного реагента гасили водой (20 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (3 × 20 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией на колонке с силикагелем (дихлорметан/метанол 9:1) с получением неочищенного метилированного продукта. Это вещество растворяли в метоксибензоле (3 мл), и к реакционной смеси добавляли трифторуксусную кислоту (7,5 мл) и реакционную смесь нагревали до 50°C. Через 20 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали хроматографией на силикагеле (дихлорметан/метанол 1:0-15:1) с получением 410 мг желаемого продукта (T19). ЖХ-МС m/z 176,2 [M+H+] (Метод 14); GC время удерживания=11,6 мин (Метод 17).
Получение 3-метил-3-(метилдисульфанил)бутановой кислоты
Стадия 1: Синтез 3-метил-3-(метилдисульфанил)бутановой кислоты
Карбонат натрия (1480 мг, 13,9 ммоль) добавляли к раствору 3-метил-3-сульфанилбутановой кислоты (1700 мг, 12,67 ммоль) в воде (15 мл). Реакционную смесь охлаждали до 5°C и добавляли раствор S-метил метансульфонотиоата (1760 мг, 13,9 ммоль) в этаноле (8 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 18 ч к реакционной смеси добавляли раствор насыщенного водного бикарбоната натрия (8 мл) и воду (15 мл). Смесь концентрировали в вакууме с удалением этанола. Оставшийся водный раствор подкисляли до значения pH 2 водным раствором соляной кислоты (1 M) и экстрагировали этилацетатом (2 × 30 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (дихлорметан/метанол 1:0-10:1) с получением 1700 мг желаемого продукта. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ = 2,73 (с, 2H), 2,47 (с, 3H), 1,50 (с, 6H).
Получение 4-{[(этил{[метил(3-метил-сульфанилбутаноил)амино]метил}карбамоил)окси]метил}фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (T20)
Стадия 1: Синтез 4-{[(этилкарбамоил)окси]метил}фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната
Этиламингидрохлоридную соль (1640 мг, 20,1 ммоль) добавляли к беспримесному метил 4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил 2,3,4-три-O-ацетил-D-глюкопираносидуронату (6090 мг, 10,06 ммоль) при 0-10°C. Через три часа реакционную смесь выливали в воду (450 мл) и водный слой экстрагировали этилацетатом (2 × 200 мл). Объединенные органические слои промывали водным раствором соляной кислоты (1M) и насыщенным солевым раствороми сушили над безводным сульфатом натрия. Раствор концентрировали, и остаток очищали хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 1:0-0:1) с получением 3,5 г желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 534,1 [M+Na+]; время удерживания=0,781 мин (Метод 13).
Стадия 2: Синтез 4-(9-этил-4,4,7-триметил-6,10-диоксо-11-окса-2,3-дитиа-7,9-диазадодекан-12-ил)фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната
К раствору 4-{[(этилкарбамоил)окси]метил}фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (1288 мг, 2,18 ммоль) в дихлорметане (25 мл) при 0°C добавляли параформальдегид (1932 мг), затем раствор хлортриметилсилана (821 мг, 7,55 ммоль) в дихлорметане (7,5 мл). Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через час реакционную смесь фильтровали. Фильтрат добавляли по каплям к раствору метиламина (3,90 мл, 2M в тетрагидрофуране) в тетрагидрофуране (25 мл) при -30°C. Через один час, реакционную смесь нагревали до 0°C и добавляли триэтиламин (1,41 мл, 10,1 ммоль). В отдельном реакционном сосуде, к раствору 3-метил-3-(метилдисульфанил)бутановой кислоты (960 мг, 5,32 ммоль) и микроколичества диметилформамида (6 капель) в дихлорметане (20 мл) при 0°C добавляли раствор оксалилхлорида (843,7 мг, 6,51 ммоль) в дихлорметане (6,5 мл). Раствор оставляли нагреваться до температуры окружающей среды и через один час концентрировали. Неочищенный хлорангидрид растворяли в дихлорметане (10 мл) и добавляли к реакционной смеси. Через 16 ч реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод O). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 347 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 739,2 [M+Na+]; время удерживания=0,896 мин (Метод 13).
Стадия 3: Синтез 4-{[(этил{[метил(3-метил-сульфанилбутаноил)амино]метил}карбамоил)окси]метил}фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (T20)
(2S,3S)-1,4-Дисульфанилбутан-2,3-диол (68,8 мг, 0,447 ммоль) и триэтиламин (0,62 мл, 4,47 ммоль) добавляли к раствору 4-(9-этил-4,4,7-триметил-6,10-диоксо-11-окса-2,3-дитиа-7,9-диазадодекан-12-ил)фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (160 мг, 0,223 ммоль) в метаноле (16 мл). Через 4 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод P). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 40 мг желаемого продукта (T20). ЖХ-МС m/z 692,8 [M+Na+]; время удерживания=0,751 мин (Метод 13).
Получение калихеамициновых нагрузок:
Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P1)
Пропан-2-тиол (14,6, 0,186 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-(метилтрисульфанил)этилиден]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата [калихеамицин-γ1I] (102 мг, 0,0745 ммоль), N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид гидрохлорида (15 мг, 0,0745 ммоль) и триэтиламина (52 мкл, 0,373 ммоль) в ацетонитриле (3 мл) при -20°C. Через 24 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 60 мг желаемого продукта (P1). ЖХ-МС m/z 1364,5 [M+H+]; время удерживания=3,99 мин (Метод 1).
Следующие соединения получали с использованием процедуры, описанной выше, для получения P1 посредством взаимодействия соответствующего тиола с S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-(метилтрисульфанил)этилиден]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоатом [калихеамицин-γ1I]:
P2: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(Трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1378,2 [M+H+]; время удерживания=3,07 мин (Метод 3).
P3: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-Дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойная кислота. ЖХ-МС m/z 1442,3 [M+H+]; время удерживания=3,78 мин (Метод 1).
P4: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]-тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1441,6 [M+H+]; время удерживания=3,75 мин (Метод 1).
Получение 4-{[(2E)-2-{(1R,4Z,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-4-метилпентановой кислоты (P5)
К раствору 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (6,5 мг, 0,0043 ммоль) и триэтиламина (3,0 мкл, 2,2 мг, 0,022 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (300 мкл) добавляли 4-метил-4-сульфанилпентановую кислоту (6,4 мг, 0,043 ммоль). Через 24 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 6,0 мг желаемого продукта (P5). ЖХ-МС m/z 1436,6 [M+H+]; время удерживания=3,92 мин (Метод 1).
Получение 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бутендикислоты (P6)
2-Сульфанилбутендикислоту (1,0 мг, 0,0063 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (6,1 мг, 0,0042 ммоль) и триэтиламина (1,2 мкл, 0,85 мг, 0,0084 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (209 мкл). Через 4 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 4,3 мг желаемого продукта (P6). ЖХ-МС m/z 1438,5 [M+H+]; время удерживания=3,71 мин (Метод 1).
Следующие соединения получали в соответствии с процедурой, аналогичной описанной выше для получения P5 или P6, путем взаимодействия соответствующего тиола и 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (P3) и/или S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]-тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P4):
P7: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-{2-[(4-гидразинил-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1436,5 [M+H+]; время удерживания=2,26 мин (Метод 6).
P8: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-амино-2-метилбутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1407,4 [M+H+]; время удерживания=1,94 мин (Метод 6).
P9: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-Дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропионовая кислота. ЖХ-МС m/z 1394,5 [M+H+]; время удерживания=3,55 мин (Метод 2).
P10: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(фенилдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1398,5 [M+H+]; время удерживания=4,94 мин (Метод 2).
P11: этил 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропаноат. ЖХ-МС m/z 1422,6 [M+H+]; время удерживания=3,92 мин (Метод 3).
P12: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-Дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-2-метилпропионовая кислота. ЖХ-МС m/z 1408,6 [M+H+]; время удерживания=4,79 мин (Метод 3).
P13: 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-Дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойная кислота. ЖХ-МС m/z 1442,5 [M+H+]; время удерживания=3,74 мин (Метод 2).
P14: (2S)-2-амино-5-{[(2R)-1-[(карбоксиметил)амино]-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-1-оксопропан-2-ил]амино}-5-оксопентановая кислота. ЖХ-МС m/z 1595,6 [M+H+]; время удерживания=2,87 мин (Метод 2).
P15: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(1-метилпиперидин-4-ил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1419,3 [M+H+]; время удерживания=2,70 мин (Метод 3).
P16: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S) 5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9 гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиперидин-4-ил дисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1405,4 [M+H+]; время удерживания=1,91 мин (Метод 6).
P17: трет-бутил 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11 оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пиперидин-1-карбоксилат. ЖХ-МС m/z 1505,5 [M+H+]; время удерживания=2,48 мин (Метод 6).
P18: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(циклопропилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1362,3 [M+H+]; время удерживания=5,81 мин (Метод 7).
P19: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(циклобутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1376,3 [M+H+]; время удерживания=6,04 мин (Метод 7).
P20: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(циклопентилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1390,4 [M+H+]; время удерживания=6,08 мин (Метод 7).
P21: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(циклогексилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1404,4 [M+H+]; время удерживания=6,34 мин (Метод 7).
P22: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(трицикло[3.3.1.1~3,7~]дец-1-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1456,5 [M+H+]; время удерживания=6,71 мин (Метод 7).
P23: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(2-цианопропан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1389,4 [M+H+]; время удерживания=5,79 мин (Метод 7).
P24: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-{2-[(2-фенилпропан-2-ил)дисульфанил]этилиден}бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1440,4 [M+H+]; время удерживания=1,92 мин (Метод 6).
P25: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[2-(2-аминофенил)пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1455,5 [M+H+]; время удерживания=2,43 мин (Метод 6).
P26: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[2-(2-аминопиридин-3-ил)пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1456,4 [M+H+]; время удерживания=1,96 мин (Метод 6).
P27: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[2-(4-аминофенил)пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1455,5 [M+H+]; время удерживания=2,17 мин (Метод 6).
P28: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-({2-[4-(трифторметил)фенил]пропан-2-ил}дисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1508,4 [M+H+]; время удерживания=2,60 мин (Метод 6).
P29: 4-(2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропан-2-ил)бензойная кислота. ЖХ-МС m/z 1484,4 [M+H+]; время удерживания=2,33 мин (Метод 6).
P30: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-амино-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1421,4 [M+H+]; время удерживания=2,11 мин (Метод 6).
P31: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[4-(диметиламино)-2-метил-4-оксобутан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1449,4 [M+H+]; время удерживания=2,18 мин (Метод 6).
P32: 3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-3-метилбутановая кислота. ЖХ-МС m/z 1422,4 [M+H+]; время удерживания=2,17 мин (Метод 6).
P33: (2R)-2-амино-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-3-метилбутановая кислота. ЖХ-МС m/z 1437,4 [M+H+]; время удерживания=2,03 мин (Метод 6).
P34: (10S,13S,16S,19R)-10-(ацетиламино)-16-[3-(карбамоиламино)пропил]-19-(2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропан-2-ил)-2,2-диметил-4,11,14,17-тетраоксо-13-(пропан-2-ил)-3-окса-5,12,15,18-тетраазаикозан-20-овая кислота. ЖХ-МС m/z 1964,0 [M+H+]; время удерживания=3,10 мин (Метод 11).
P35: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[(10S,13S)-10-[3-(карбамоиламино)пропил]-5,5-диметил-9,12,15-триоксо-13-(пропан-2-ил)-3,4-дитиа-8,11,14-триазагексадец-1-илиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1705,6 [M+H+]; время удерживания=2,15 мин (Метод 6).
P36: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-({2-метил-1-[(2-феноксиэтил)амино]пропан-2-ил}дисульфанил)этилиден]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1513,5 [M+H+]; время удерживания=2,20 мин (Метод 11).
P37: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(1-амино-2-метилпропан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1393,4 [M+H+]; время удерживания=2,07 мин (Метод 11).
P38: 3-[(2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-2-метилпропил)амино]пропионовая кислота. ЖХ-МС m/z 1465,4 [M+H+]; время удерживания=2,15 мин (Метод 11).
P39: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[2-(2,5-диоксоимидазолидин-4-ил)пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12), 5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1462,3 [M+H+]; время удерживания=2,35 мин (Метод 11).
P40: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(3,5-диметилпиридин-4-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1427,3 [M+H+]; время удерживания=2,11 мин (Метод 6).
P41:S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-{2-[(3R)-пирролидин-3-илдисульфанил]этилиден}бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1391,4 [M+H+]; время удерживания=2,07 мин (Метод 6).
P42: (2R)-2-амино-5-[(3-{[(2E)-2-{(1R,4Z,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-3-метилбутил)амино]-5-оксопентановая кислота. ЖХ-МС m/z 1536 [M+H+]; время удерживания=4,18 мин (Метод 3).
P43: (2S)-2-амино-6-[(4-{[(2E)-2-{(1R,4Z,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-4-метилпентаноил)амино]капроновая кислота. ЖХ-МС m/z 1565 [M+H+]; время удерживания=4,05 мин (Метод 3).
P44: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-4-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1399,1 [M+H+]; время удерживания=4,44 мин (Метод 3).
P45: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(4-нитрофенил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1443,5 [M+H+]; время удерживания=3,08 мин (Метод 3).
P46: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пиридин-3-карбоновая кислота. ЖХ-МС m/z 1443,4 [M+H+]; время удерживания=4,52 мин (Метод 3).
P47: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-13-(2-{[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1380,5 [M+H+]; время удерживания=3,01 мин (Метод 1).
P48: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(4-{(2E)-2-[1-(4-метоксифенил)этилиден]гидразинил}-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1568,4 [M+H+]; время удерживания=2,39 мин (Метод 6).
Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этил{[4-({[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}метил)фенил]карбамоил}амино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P49)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этил{[4-({[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}метил)фенил]карбамоил}амино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
N,N-Диизопропилэтиламин (22 мкл, 16 мг, 0,12 ммоль) добавляли к раствору 9H-флуорен-9-илметил (4-аминобензил)карбамата (26,2 мг, 0,0761 ммоль) и бис(пентафторфенил)карбоната (29,5 мг, 0,0734 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (250 мкл) при -30°C. Через один час, S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (P2) (8,8 мг, 0,0061 ммоль) добавляли к реакционной смеси и реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 4 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод M). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 6,1 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 1748,6 [M+H+]; время удерживания=1,07 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этил{[4-({[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}метил)фенил]карбамоил}амино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P50)
Пиперидин (3,4 мкл, 3,0 мг, 0,035 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этил{[4-({[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}метил)фенил]карбамоил}амино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (6,1 мг, 0,0035 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (400 мкл) при 0°C. Через 3,5 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 3,1 мг желаемого продукта (P49). ЖХ-МС m/z 1526,6 [M+H+]; время удерживания=4,61 мин (Метод 3).
Получение {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислоты (P50)
Стадия 1: Синтез фенил {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}ацетата.
Фенил бромацетат (149 мг, 0,695 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-ил дисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P1) (99,0 мг, 0,070 ммоль), N,N-диизопропилэтиламина (89,8 мг, 0,695 ммоль, 124 мкл) в N,N-диметилацетамиде (3000 мкл) и перемешивали при 35°C. Через 3 дня реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (76,9 мг, 71%). ЖХ-МС m/z 1498,4 [M+H+]; время удерживания=4,71 мин (Метод 1).
Стадия 2: Синтез {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислоты
Водный раствор гидроксида лития (1,51 мг, 62,9 мкмоль, 62,9 мкл, 1,0 M) добавляли к раствору фенил {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}ацетата (24,5 мг, 15,7 мкмоль) в диметилсульфоксиде (1000 мкл) и воде (300 мкл). Через 30 мин реакционную смесь гасили уксусной кислотой (4,72 мг, 78,6 мкмоль, 4,50 мкл), затем очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 4,9 мг (22%) желаемого продукта (P50). ЖХ-МС m/z 1422,30 [M+H+]; время удерживания=2,69 мин (Метод 6).
Получение метил {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикл[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}ацетата (P51)
Метилбромацетат (41 мг, 0,267 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-ил дисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P1) (19 мг, 0,013 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (69 мг, 0,534 ммоль, 95 мкл) в N,N-диметилацетамиде (600 мкл) и смесь перемешивали при 35°C. Через 24 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 76,9 мг (71%) желаемого продукта (P51). ЖХ-МС m/z 1436,5 [M+H+]; время удерживания=0,88 мин (Метод 12).
Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P52)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-(метилтрисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Раствор борогидрид натрия (2,76 мг, 0,0693 ммоль) и церия (III) хлорида гептагидрата (51,6 мг, 0,139 ммоль) в метаноле (400,0 мкл) добавляли к S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-(метилтрисульфанил)этилиден]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоату [калихеамицин-γ1I] (50,5 мг, 0,0370 ммоль). Через 2 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод F). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 18,8 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 1370,3 [M+H+]; время удерживания=5,5 мин (Метод 7).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-сульфанилэтилиден)бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Раствор трис(2-карбоксиэтил)фосфина в воде (30 мг, 100 мкмоль, 200 мкл, 0,5 M) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-[2-(метилтрисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (18,8 мг, 13,1 мкмоль) в N,N-диметилацетамиде (400 мкл) и фосфатном буферном растворе с pH 7,4 (200 мкл). Через 15 мин, реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод F). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 11,1 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 1292,3 [M+H+]; время удерживания=2,2 мин (Метод 8).
Стадия 3: Синтез (2R)-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил (4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамата
N,N'-Диизопропилэтиламин (114 мг, 150 мкл, 0,863 ммоль) добавляли к раствору бис(трихлорметил)карбоната (128 мг, 0,432 ммоль) и 7-амино-4-метилкумарина (75,6 мг, 0,432 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,0 мл) при температуре окружающей среды. Через 1 ч, эту смесь добавляли в сосуд, содержащий (R)-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропан-1-ол (43,6 мг, 0,217 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод M). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 16,9 мг (2R)-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил (4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамата
Стадия 4: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
(2R)-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил (4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамат (1,98 мг, 0,00492 ммоль) растворяли в N,N-диметилацетамиде (100 мкл) и N,N'-диизопропилэтиламин (0,927 мг, 1,24 мкл, 0,00703 ммоль) и S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-сульфанилэтилиден )бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (1,9 мг, 0,0014 ммоль). Через 72 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 1 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 1583,4 [M+H+]; время удерживания=2,4 мин (Метод 8).
Стадия 5: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
1-Гидрокси-1,2-бензиодоксол-3(H)-он 1-оксид (1,36 мг, 2,43 мкмоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,11S,13E)-9,11-дигидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (непредпочтительное название) (1,0 мг, 0,6 мкмоль) в диметилсульфоксиде (200,0 мкл). Через 6 дней, реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 0,1 мг желаемого продукта (P52). ЖХ-МС m/z 1581,4 [M+H+]; время удерживания=5,8 мин (Метод 7).
Получение соединений линкер-нагрузка, содержащих калихеамицин:
Пример 1: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)-амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло-[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP1)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
N,N-Диизопропилэтиламин (17,6 мкл, 13,2 мг, 0,100 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2Hпиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P1) (35,7 мг, 0,0251 ммоль), N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (32,0 мг, 0,0326 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (1,22 мг, 0,00877 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (251 мкл). Через 3 ч к реакционной смеси добавляли еще одну часть 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (1,22 мг, 0,00877 ммоль). Через 24 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (37,8 мг). ЖХ-МС m/z 2161,7 [M+H+]; время удерживания=5,57 мин (Метод 1).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Пиперидин (16,8 мкл, 14,5 мг, 0,170 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (37,8, 0,0170 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (500 мкл) при 0°C. Через 2 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 30,1 мг желаемого продукта (LP1). ЖХ-МС m/z 1939,8 [M+H+]; время удерживания=3,99 мин (Метод 1).
Пример 2: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-5-(карбамоиламино)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP2)
2,6-Лутидин (9 мкл, 8,41 мг, 0,076 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (P1) (35,7 мг, 0,0251 ммоль), N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (14,2 мг, 0,0192 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (2,67 мг, 0,0192 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (300 мкл). Через 24 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод I). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 7,6 мг желаемого продукта (LP2). ЖХ-МС m/z 1964 [M+H+]; время удерживания=1,8 мин (Метод 5).
Пример 3: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(21-амино-4,7,10,13,16,19-гексаоксагеникоз-1-ил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP3).
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,7,10,13,16,19,22-гептаокса-4-азапентакозан-25-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Уксусную кислоту (0,9 мкл, 1 мг, 0,02 ммоль) добавляли к раствору 9H-флуорен-9-илметил (21-оксо-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата (8,7 мг, 0,016 ммоль) и S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P2) (5,5 мг, 0,0040 ммоль) в смеси метанол:ацетонитрил (1:2). Через 2 ч к реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (2,6 мг, 0,040 ммоль). Через 20 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,6 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 1921,6 [M+H+]; время удерживания=5,79 мин (Метод 3).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(21-амино-4,7,10,13,16,19-гексаоксагеникоз-1-ил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Пиперидин (2,0 мкл, 1,7 мг, 0,020 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,7,10,13,16,19,22-гептаокса-4-азапентакозан-25-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (2,6 мг, 0,0014 ммоль) в N,N-диметилформамиде при 0°C. Через 3 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод F). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,6 мг желаемого продукта (LP3). ЖХ-МС m/z 1699,6 [M+H+]; время удерживания=1,37 мин (Метод 4).
Пример 4: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP4
).
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
N,N-Диизопропилэтиламин (13,1 мкл, 9,83 мг, 0,0746 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (27,2 мг, 0,0186 ммоль), N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (23,8 мг, 0,0242 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (0,78 мг, 0,0056 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (186 мкл). Через 2 ч к реакционной смеси добавляли еще одну часть 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (0,8 мг, 0,006 ммоль). Через 24 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (42,1 мг). ЖХ-МС m/z 2196,8 [M+H+]; время удерживания=5,30 мин (Метод 1).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Пиперидин (1,8 мкл, 1,55 мг, 0,018 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (8,2 мг, 0,0036 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (200 мкл). Через 1 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,4 мг желаемого продукта (LP4). ЖХ-МС m/z 1974 [M+H+]; время удерживания=4,7 мин (Метод 3).
Пример 5: Получение 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (LP5).
Стадия 1: Синтез 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты.
N,N-Диизопропилэтиламин (10,1 мкл, 7,55 мг, 0,0572 ммоль) добавляли к раствору N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (18,3 мг, 0,0186 ммоль), 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (P3) (21,5 мг, 0,0143 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (0,7 мг, 0,005 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (143 мкл). Через 3 ч к реакционной смеси добавляли еще одну часть 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (0,7 мг, 0,005 ммоль). Через 24 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (25,8 мг). ЖХ-МС m/z 2239,8 [M+H+]; время удерживания=5,26 мин (Метод 1).
Стадия 2: Синтез 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты.
Пиперидин (3,86 мкл, 3,33 мг, 0,0391 ммоль) добавляли к раствору 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9R,12R,15R)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (9 мг, 0,004 мг) в N,N-диметилацетамиде при 0°C. Через 2 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 7,9 мг желаемого продукта (LP5). ЖХ-МС m/z 2017,8 [M+H+]; время удерживания=3,55 мин (Метод 1).
Пример 6: Получение 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-3-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-2-метилпропионовой кислоты (LP6).
2-Метил-2-сульфанилпропановую кислоту (7,89 мг, 0,0591 ммоль) добавляли к раствору 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (LP5) (12,3, 0,00592 ммоль) и триэтиламина (4,12 мкл, 2,99 мг, 0,0296 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (592 мкл). Через 3 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 10,3 мг желаемого продукта (LP6). ЖХ-МС m/z 1983,8 [M+H+]; время удерживания=5,15 мин (Метод 3).
Пример 7: Получение (2S)-5-({(2R)-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-1-[(карбоксиметил)амино]-1-оксопропан-2-ил}амино)-2-амино-5-оксопентановой кислоты (LP7).
Раствор глутатиона (6,0 мг, 0,019 ммоль) в забуференном фосфатом водно-солевом растворе (pH 7,4, 50 мкл) добавляли к раствору 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты (LP5) (4,0 мг, 0,002 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (400 мкл) и воде (200 мкл) при 40°C. Через 1 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод E). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 3,1 мг желаемого продукта (LP7). ЖХ-МС m/z 2171,0 [M+H+]; время удерживания=3,37 мин (Метод 1).
Пример 8: Получение 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоты
4-Сульфанилбензойную кислоту (0,7 мг, 0,004 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (I22) (8,1 мг, 0,0036 ммоль) и триэтиламина (2,5 мкл, 1,8 мг, 0,018 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (179 мкл). Через 20 мин, реакционную смесь охлаждали до 0°C, и к реакционной смеси добавляли пиперидин (3,5 мкл, 3,1 мг, 0,036 ммоль). Через 1,5 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 4,1 мг желаемого продукта (LP8). ЖХ-МС m/z 2017,8 [M+H+]; время удерживания=3,86 мин (Метод 1).
Пример 9: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(фенилдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP9)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(фенилдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Раствор бензолтиола (0,17 мг, 0,0015 ммоль) в N,N-диметилацетамиде добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (I22) (5 мг, 0,002 ммоль) и триэтиламина (0,62 мкл, 0,45 мг, 0,004 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (100 мкл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод D). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 1,8 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 2196,0 [M+H+]; время удерживания=5,69 мин (Метод 2).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(фенилдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Пиперидин (0,8 мкл, 0,7 мг, 0,008 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(фенилдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (1,8 мг, 0,0008 ммоль) в N,N-диметилацетамиде при 0°C. Через 2 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 1,2 мг желаемого продукта (LP9). ЖХ-МС m/z 1973,9 [M+H+]; время удерживания=4,01 мин (Метод 2).
Пример 10: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[({4-[({[(4-{[(2R)-2-{[(2R)-2-{[(2R)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси ]карбонил}амино)метил]фенил}карбамоил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP10).
N,N-Диизопропилэтиламин (1,0 мкл, 0,77 мг, 0,0059 ммоль) и 2,6-лутидин (1,4 мкл, 1,3 мг, 0,012 ммоль) добавляли к раствору N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (7,3 мг, 0,0078 ммоль), S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этил{[4-({[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}метил)фенил]карбамоил}амино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P49) (3,1 мг, 0,0020 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (0,5 мг, 0,004 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (400 мкл). Через 2 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод D). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением защищенного продукта. Твердый остаток растворяли в N,N-диметилформамиде (500 мкл). Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли пиперидин (3,4 мкл, 3,0 мг, 0,035 ммоль). Через 2 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод C). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 3,0 мг желаемого продукта (LP10). ЖХ-МС m/z 2101,7 [M+H+]; время удерживания=4,65 мин (Метод 3).
Следующие соединения получали в соответствии с процедурой примера 6 путем взаимодействия соответствующих тиолов с 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислотой (LP5), и/или альтернативно в соответствии с процедурами примера 8 путем взаимодействия соответствующего тиола с S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоатом (I22) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 11: LP11: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропионовая кислота. ЖХ-МС m/z 1969,7 [M+H+]; время удерживания=4,81 мин (Метод 3).
Пример 12: LP12: 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бутендикислота. ЖХ-МС m/z 2013,9 [M+H+]; время удерживания=3,45 мин (Метод 1).
Пример 13: LP13: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-гидразинил-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1] тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2011,9 [M+H+]; время удерживания=3,57 мин (Метод 2)
Пример 14: LP14: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(1-метилпиперидин-4-ил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1995 [M+H+]; время удерживания=3,30 мин (Метод 3).
Пример 15: LP15: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-амино-2-метилбутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1984 [M+H+]; время удерживания=4,1 мин (Метод 3).
Пример 16: LP16: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-5-(Карбамоиламино)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2112 [M+H+]; время удерживания=5,3 мин (Метод 8).
Пример 17: LP17: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(Ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1953,5 [M+H+]; время удерживания=3,14 мин (Метод 3).
Пример 18: LP18: Этил 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропаноат. ЖХ-МС m/z 1997,8 [M+H+]; время удерживания=3,79 мин (Метод 1).
Пример 19: LP19: 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]car bonyl}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-1 3-илиден}этил]дисульфанил}-4-метилпентановая кислота. ЖХ-МС m/z 2011,9 [M+H+]; время удерживания=3,02 мин (Метод 2).
Пример 20: LP20: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[2-(циклогексилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1979,7 [M+H+]; время удерживания=2,43 мин (Метод 6).
Пример 21: LP21: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиперидин-4-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1980,7 [M+H+]; время удерживания=1,99 мин (Метод 6).
Пример 22: LP22: Трет-бутил 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пиперидин-1-карбоксилат. ЖХ-МС m/z 2080,7 [M+H+]; время удерживания=2,42 мин (Метод 6).
Пример 23: LP23: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(трицикло[3.3.1.1~3,7~]дец-1-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2031,8 [M+H+]; время удерживания=2,55 мин (Метод 6).
Пример 24: LP24: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-{2-[(2-фенилпропан-2-ил)дисульфанил]этилиден}бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2015,7 [M+H+]; время удерживания=2,44 мин (Метод 6).
Пример 25: LP25: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[2-(2-аминопиридин-3-ил)пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2031,7 [M+H+]; время удерживания=2,04 мин (Метод 6).
Пример 26: LP26: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-[(10S,13S)-10-[3-(карбамоиламино)пропил]-5,5-диметил-9,12,15-триоксо-13-(пропан-2-ил)-3,4-дитиа-8,11,14-триазагексадец-1-илиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2280,9 [M+H+]; время удерживания=2,43 мин (Метод 11).
Пример 27: LP27: (2R)-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}-3-метилбутановая кислота. ЖХ-МС m/z 2310,9 [M+H+]; время удерживания=2,42 мин (Метод 11).
Пример 28: LP28: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[4-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}амино)-2-метилбутан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2431 [M+H+]; время удерживания=2,53 мин (Метод 11).
Пример 29: LP29: (2R)-3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-2-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}амино)-3-метилбутановая кислота. ЖХ-МС m/z 2461 [M+H+]; время удерживания=2,45 мин (Метод 11).
Пример 30: LP30: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил 4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пиперидин-1-карбоксилат. ЖХ-МС m/z 2428 [M+H+]; время удерживания=2,52 мин (Метод 11).
Пример 31: LP31: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-({[(4-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пиперидин-1-ил)карбонил]окси}метил)фенокси]-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2H-пиран-2-карбоновая кислота. ЖХ-МС m/z 2306,8 [M+H+]; время удерживания=2,52 мин (Метод 11).
Пример 32: LP32: (2S,3S,4S,5R)-6-[4-({[(3-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}-3-метилбутил)карбамоил]окси}метил)фенокси]-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2H-пиран-2-карбоновая кислота. ЖХ-МС m/z 2308,8 [M+H+]; время удерживания=2,54 мин (Метод 11).
Пример 33: LP33: (1-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}пропил)фосфоновая кислота. ЖХ-МС m/z 2019,6 [M+H+]; время удерживания=2,20 мин (Метод 6).
Пример 34: LP34: (1-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}этил)фосфоновая кислота. ЖХ-МС m/z 2005,7 [M+H+]; время удерживания=2,2 мин (Метод 6).
Пример 35: LP35: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-амино-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1996,7 [M+H+]; время удерживания=2,43 мин (Метод 11).
Пример 36: LP36: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[4-(диметиламино)-2-метил-4-оксобутан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2024,8 [M+H+]; время удерживания=2,49 мин (Метод 11).
Пример 37: LP37: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-6-{[(2S,9R,13E)-13-(2-{[4-(ацетиламино)-2-метилбутан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 2024,7[M+H+]; время удерживания=2,47 мин (Метод 11).
Следующее соединение получали в соответствии с процедурой примера 3 путем взаимодействия 9H-флуорен-9-илметил (21-оксо-3,6,9,12,15,18-гексаоксагеникоз-1-ил)карбамата с S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(1-метилпиперидин-4-ил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоатом (P15) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 38: LP38: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(21-амино-4,7,10,13,16,19-гексаоксагеникоз-1-ил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-{2-[(1-метилпиперидин-4-ил)дисульфанил]этилиден}-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1740,6 [M+H+]; время удерживания=0,61 мин (Метод 5).
Пример 39: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[2-({2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}амино)-2-оксоэтил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-гидразинил-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP39).
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3,14-диоксо-2,7,10-триокса-4,13-диазапентадекан-15-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата.
9H-Флуорен-9-илметил [2-(2-{2-[(иодацетил)амино]этокси}этокси)этил]карбамат (82,0 мг, 0,15 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P4) (20 мг, 0,014 ммоль), N,N-диизопропилэтиламина (8,86 мг, 0,0685 ммоль, 12,0 мкл) в N,N-диметилацетамиде (500 мкл) и содержимое нагревали до 45°C. Через 3 дня реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (7,0 мг). ЖХ-МС m/z 1809,668 [M+H+]; время удерживания=1,32 мин (Метод 5).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[2-({2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}амино)-2-оксоэтил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-6-{[(2S,9R,13E)-13-{2-[(4-гидразинил-2-метил-4-оксобутан-2-ил)дисульфанил]этилиден}-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP39).
3-Метил-3-сульфанилбутангидразид (1,34 мг, 0,00727 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3,14-диоксо-2,7,10-триокса-4,13-диазапентадекан-15-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (6,8 мг, 0,0036 ммоль) и триэтиламина (1,10 мг, 0,0109 ммоль, 1,49 мкл) в N,N-диметилацетамиде (0,9 мл). Через 3 часа, в чистом виде добавляли пиперидин (6,19 мг, 0,0727 ммоль, 7,18 мкл) и перемешивали в течение еще 1 часа. Реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,8 мг желаемого продукта (LP39). ЖХ-МС m/z 1624,7 [M+H+]; время удерживания=3,38 мин (Метод 1).
Пример 40: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[2-({2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}амино)-2-оксоэтил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP40)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3,14-диоксо-2,7,10-триокса-4,13-диазапентадекан-15-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата.
9H-Флуорен-9-илметил [2-(2-{2-[(иодацетил)амино]этокси}этокси)этил]карбамат (83,2 мг, 0,154 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-ил дисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P1) (22,0 мг, 0,015 ммоль), N,N-диизопропилэтиламина (20,0 мг, 0,154 ммоль, 26,9 мкл) в N,N-диметилацетамиде (0,5 мл) и нагревали до 45°C. Через 5 дней реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением желаемого продукта (11,4 мг). ЖХ-МС m/z 1624,7 [M+H+]; время удерживания=3,38 мин (Метод 1).
Стадия 2: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{этил[1-(9H-флуорен-9-ил)-3,14-диоксо-2,7,10-триокса-4,13-диазапентадекан-15-ил]амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил].
4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-Дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (11,4 мг, 0,00621 ммоль) обрабатывали раствором N,N-диметилацетамида (0,5 мл) и пиперидина (10,6 мг, 0,124 ммоль, 12,3 мкл). После перемешивания в течение 4 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 6,8 мг (40%) желаемого продукта (LP40). ЖХ-МС m/z 1552,7 [M+H+]; время удерживания=3,69 мин (Метод 1).
Пример 41: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(26-амино-2-оксо-6,9,12,15,18,21,24-гептаокса-3-азагексакоз-1-ил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метил тетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP41).
9H-Флуорен-9-илметил (23-амино-3,6,9,12,15,18,21-гептаоксотрикоз-1-ил)карбамат (1,92 мг, 2,72 мкмоль) добавляли к раствору {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислоты (P50) (3,1 мг, 2,1 мкмоль), N,N,N',N'-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)урония гексафторфосфата (0,872 мг, 2,30 мкмоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,35 мг, 10,5 мкмоль, 1,82 мкл) в N,N-диметилацетамиде (500 мкл). Через 15 мин пиперидин (7,12 мг, 83,6 мкмоль, 8,26 мкл) добавляли в чистом виде и пермешивали в течение еще 30 мин. Реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,4 мг (61%) желаемого продукта (LP41). ЖХ-МС m/z 1772,87 [M+H+]; время удерживания=0,75 мин (Метод 5).
Пример 42: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[(14S,17S,20S)-20-(4-аминобутил)-14-[3-(карбамоиламино)пропил]-2,13,16,19,22-пентаоксо-17-(пропан-2-ил)-6,9-диокса-3,12,15,18,21-пентаазатрикоз-1-ил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP42)
S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[2-({2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}амино)-2-оксоэтил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (LP40) (1,8 мг, 1,1 мкмоль) добавляли к предварительно активированному раствору N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (L1) (0,933 мг, 1,40 мкмоль), N,N,N',N'-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)урония гексафторфосфата (0,531 мг, 1,40 мкмоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,695 мг, 5,38 мкмоль, 0,936 мкл) в N,N-диметилацетамиде (200 мкл). Через 1 ч пиперидин (2,75 мг, 32,3 мкмоль, 3,19 мкл) добавляли к реакционной смеси в чистом виде и оставляли отстаиваться в течение дополнительных 45 мин. Реакционную смесь затем очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 1,1 мг (49%) желаемого продукта (LP42). ЖХ-МС m/z 1979,92 [M+H+]; время удерживания=0,72 мин (Метод 5).
Пример 43: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[1-(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}фенил)-3,14-диоксо-2,7,10-триокса-4,13-диазапентадекан-15-ил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP43)
N 2-Ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(пентафторфенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (L2) (1,37 мг, 1,40 мкмоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[2-({2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этил}амино)-2-оксоэтил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP40) (1,8 мг, 1,1 мкмоль), N,N-диизопропилэтиламина (0,695 мг, 5,38 мкмоль, 0,936 мкл) в N,N-диметилацетамиде (200 мкл). Через 1 ч пиперидин (2,75 мг, 32,3 мкмоль, 3,19 мкл) добавляли к реакционной смеси в чистом виде и оставляли отстаиваться в течение 45 мин. Реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 1,0 мг (41%) желаемого продукта (LP43). ЖХ-МС m/z 1064,569 [M+2H2+]; время удерживания=0,74 мин (Метод 5).
Следующее соединение получали в соответствии с процедурой примера 41 путем взаимодействия 9H-флуорен-9-илметил (3-аминопропил)(4-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил](3-{[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино}бутил)карбамата (L5) с {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислотой (P50) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 44: LP44: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(2-{[3-({4-[(3-аминопропил)амино]бутил}амино)пропил]амино}-2-оксоэтил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси- 2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1606,67 [M+H+]; время удерживания=0,70 мин (Метод 5).
Следующее соединение получали в соответствии с процедурой примера 41 путем взаимодействия N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)-N5-карбамоил-L-орнитинамида (L6) с {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислотой (P50) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 45: LP45: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[(4S,7S,10S)-4-(4-аминобутил)-10-[3-(карбамоиламино)пропил]-2,5,8,11,26-пентаоксо-7-(пропан-2-ил)-3,6,9,12,16,21,25-гептаазагептакозан-27-ил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1017,11 [M+2H2+]; время удерживания=0,68 мин (Метод 5).
Следующее соединение получали в соответствии с процедурой примера 41 путем взаимодействия N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N-[({4-[(3-{(4-{(3-аминопропил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутил)[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}пропил)амино]бензил}окси)карбонил]-N5-карбамоил-L-орнитинамида (L7) с {[(3S,4S,6S)-6-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-2-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-6-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]окси}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-3-ил](этил)амино}уксусной кислотой (P50) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 46: LP46: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[1-(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}фенил)-3,18-диоксо-2-окса-4,8,13,17-тетраазанонадекан-19-ил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1091,79 [M+2H2+]; время удерживания=0,72 мин (Метод 5).
Следующее соединение получали в соответствии с процедурой примера 41 путем взаимодействия N2-ацетил-N6-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-лизил-L-валил-N5-карбамоил-L-орнитина (L1) с -S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[(26-амино-2-оксо-6,9,12,15,18,21,24-гептаокса-3-азагексакоз-1-ил)(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоатом (LP41) с последующим удалением Fmoc-защитной группы:
Пример 47: LP47: S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-{[(2S,4S,5S)-5-{[(29S,32S,35S)-35-(4-аминобутил)-29-[3-(карбамоиламино)пропил]-2,28,31,34,37-пентаоксо-32-(пропан-2-ил)-6,9,12,15,18,21,24-гептаокса-3,27,30,33,36-пентаазаоктатриаконт-1-ил](этил)амино}-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пропан-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат. ЖХ-МС m/z 1100,438 [M+2H2+]; время удерживания=0,80 мин (Метод 5).
Пример 48: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-5-(карбамоиламино)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP48).
2,6-Лутидин (4,8 мкл, 4,4 мг, 0,040 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-6-{[(2S,5Z,9R,13E)-13-[2-(трет-бутилдисульфанил)этилиден]-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-5-{[(2S,4S,5S)-5-(этиламино)-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (P2) (14 мг, 0,010 ммоль), N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N5-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (7,4 мг, 0,010 ммоль) и 3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ола (1,407 мг, 0,0102 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (250 мкл). Через 18 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод I). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 4,5 мг желаемого продукта (LP48). ЖХ-МС m/z 1998 [M+Na+]; время удерживания=6,19 мин (Метод 10).
Пример 49: Получение S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (LP49)
Стадия 1: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триаза гексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-13-(2-{[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-12-[(метокси карбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
(2R)-2-(2-пиридинилдитио)-1-пропанол (4,5 мг, 0,022 ммоль) добавляли к раствору 1,4-дитиотреитола (2,5 мг, 0,106 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (380 мкл). Через 3 ч к реакционной смеси добавляли S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триазагексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксо-13-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этилиден]бицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоат (17,2 мг, 0,0072 ммоль). Через 2 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 10 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 2176,7 [M+H+]; время удерживания=7,74 мин (Метод 7).
Стадия 2: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триаза гексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
N,N'-Диизопропилэтиламин (114 мг, 150 мкл, 0,863 ммоль) добавляли к раствору бис(трихлорметил)карбоната (128 мг, 0,432 ммоль) и 7-амино-4-метилкумарина (75,6 мг, 0,432 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,0 мл) при температуре окружающей среды. Через 1 ч, удаляли аликвоту 1 мл реакционной смеси и добавляли к S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триаза гексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-13-(2-{[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-12-[(метокси карбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоату (6,1 мг, 0,0027 ммоль). К реакционной смеси добавляли N,N'-диизопропилэтиламин (10,8 мг, 14,4 мкл, 0,0818 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод B). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,3 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 2378,7 [M+H+]; время удерживания=3,31 мин (Метод 6).
Стадия 3: Синтез S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата
Пиперидин (5 мкл, 4 мг, 0,05 ммоль) добавляли к раствору S-[(2R,3S,4S,6S)-6-({[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(9S,12S,15S)-9-(ацетиламино)-15-[3-(карбамоиламино)пропил]-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,10,13,16-тетраоксо-12-(пропан-2-ил)-2-окса-4,11,14-триаза гексадекан-16-ил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-4-гидрокси-6-{[(2S,9R,13E)-9-гидрокси-12-[(метоксикарбонил)амино]-13-(2-{[(2R)-1-{[(4-метил-2-оксо-2H-хромен-7-ил)карбамоил]окси}пропан-2-ил]дисульфанил}этилиден)-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-1(12),5-диен-3,7-диин-2-ил]окси}-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил]амино}окси)-4-гидрокси-2-метилтетрагидро-2H-пиран-3-ил] 4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензолкарботиоата (2,4 мг, 0,010 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (300 мкл). Через 1 ч реакционную смесь очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,4 мг желаемого продукта (LP49). ЖХ-МС m/z 2156,8 [M+H+]; время удерживания=5,8 мин (Метод 7).
Пример 50: Получение (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[(13E)-13-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}-4-этил-6,9,9-триметил-3,7-диоксо-2-окса-10,11-дитиа-4,6-диазатридец-1-ил]фенокси}-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2H-пиран-2-карбоновой кислоты (LP50)
Стадия 1: Синтез метил (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[(13E)-13-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1] тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}-4-этил-6,9,9-триметил-3,7-диоксо-2-окса-10,11-дитиа-4,6-диазатридец-1-ил]фенокси}-3,4,5-трис(ацетилокси)тетрагидро-2H-пиран-2-карбоксилата
Раствор 4-{[(этил{[метил(3-метил-сульфанилбутаноил)амино]метил}карбамоил)окси]метил}фенил метил 2,3,4-три-O-ацетил-бета-D-глюкопираносидуроната (T20) (11,3 мг, 0,0168 ммоль) и триэтиламина (3,35 мкл, 2,43 мг, 0,0240 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (120 мкл) добавляли к 2-{[(2E)-2-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}этил]дисульфанил}бензойной кислоте (LP5) (5 мг, 0,002 ммоль). Через 5 ч реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 3 мг желаемого продукта. ЖХ-МС m/z 2534,0 [M+H+]; время удерживания=2,77 мин (Метод 18).
Стадия 2: Синтез 2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[(13E)-13-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}-4-этил-6,9,9-триметил-3,7-диоксо-2-окса-10,11-дитиа-4,6-диазатридец-1-ил]фенокси}-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2H-пиран-2-карбоновой кислоты (LP50)
Раствор гидроксида лития (0,249 мг, 0,0104 ммоль) в воде (10 мкл) добавляли к раствору метил (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[(13E)-13-{(1R,8S)-8-({(2R,3R,4S,5S,6R)-3-({(2S,4S,5S)-5-[{[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(ацетиламино)-6-аминогексаноил]амино}-3-метилбутаноил]амино}-5-(карбамоиламино)пентаноил]амино}бензил)окси]карбонил}(этил)амино]-4-метокситетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-5-[({(2S,4S,5S,6R)-5-[(4-{[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-дигидрокси-4-метокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси}-3-иод-5,6-диметокси-2-метилбензоил)сульфанил]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)амино]-4-гидрокси-6-метилтетрагидро-2H-пиран-2-ил}окси)-1-гидрокси-10-[(метоксикарбонил)амино]-11-оксобицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диин-13-илиден}-4-этил-6,9,9-триметил-3,7-диоксо-2-окса-10,11-дитиа-4,6-диазатридец-1-ил]фенокси}-3,4,5-трис(ацетилокси)тетрагидро-2H-пиран-2-карбоксилата (3 мг, 0,001 ммоль) в метаноле (400 мкл) и воде (400 мкл). Через 40 мин, реакционную смесь очищали непосредственно обращенно-фазовой ВЭЖХ (Метод A). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 2,2 мг желаемого продукта (LP50). ЖХ-МС m/z 2393,9 [M+H+]; время удерживания=2,55 мин (Метод 18).
Общие процедуры конъюгирования калихеамициновых LP
Общая процедура A: Реакцию конъюгации проводили в 25-50 мМ трис(гидроксиметил)аминоэтан (трис) буфере (рН 8), содержащем 150 мм хлорид натрия (NaCl) и 12% диметилсульфоксид (ДМСО) с концентрацией белка около 5 мг/мл. Антитело буферизовали в воде или разбавляли забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) перед применением и обрабатывали последовательно соответствующими объемами 1М Трис (рН 8), 5М NaCl и ДМСО для достижения вышеуказанных концентраций. Добавляли соответствующее соединение линкер-нагрузка (15-20 эквивалентов моль/моль) в виде 30 мм исходного раствора в ДМСО, и затем порошок трансглутаминазы (Ajinomoto Activa, 2-кратный экв. массы относительно массы антитела). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Нагрузку контролировали ЖХМС или хроматографией гидрофобного взаимодействия (HIC). Если реакция была неполной, добавляли дополнительную аликвоту трансглутаминазы и/или линкер-нагрузки и перемешивание продолжали в течение дополнительных 3-6 ч.
Реакционная обработка обычно включала буферизацию в PBS с последующей очисткой посредством эксклюзионной хроматографии по размеру (GE Superdex 200 10/300 GL). Полученный конъюгат антитела с лекарственным средством (ADC) анализировали аналитической HIC, эксклюзионной хроматографией (SEC) и ЖХМС в соответствии с методами, описанными ниже.
Общая процедура B: Реакцию конъюгации проводили в 25-50 мМ трис-буфере (рН 7,5), содержащем 150 мМ NaCl и 5-7% ДМСО при концентрации белка около 5 мг/мл. Перед использованием антитело буферизовали в воде или разбавленном PBS и обрабатывали последовательно соответствующими объемами 1М Трис (рН 7,5), 5М NaCl и ДМСО для достижения вышеуказанных концентраций. Соответствующее соединение нагрузка-линкер (15-20 экв. моль/моль) добавляли в качестве 30 мМ исходного раствора в ДМСО, а затем порошок трансглутаминазы (Ajinomoto Activa, 2-кратный экв.массы относительно массы антител). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Нагрузку контролировали ЖХМС или хроматографией гидрофобного взаимодействия (HIC). Если реакция была неполной, добавляли дополнительную аликвоту трансглутаминазы и/или линкер-нагрузки и перемешивание продолжали в течение дополнительных 3-6 ч.
Реакционная обработка обычно включала буферизацию в PBS с последующей очисткой посредством эксклюзионной хроматографии по размеру (GE Superdex 200 10/300 GL). Полученный конъюгат антитела с лекарственным средством (ADC) анализировали аналитической HIC, эксклюзионной хроматографией (SEC) и ЖХМС в соответствии с методами, описанными ниже.
Общая процедура C: Восстановление/повторное окисление сконструированного цистеинового мутанта проводили методом, описанным в WO2013093809. Полученное антитело (в PBS, pH 7,4) обрабатывали PBS и DMA с получением ~5 мг/мл исходного раствора антител в 20% DMA (об./об.). Полученный раствор обрабатывали 6 эквивалентами (моль/моль) соответствующего соединения малеимидый линкер-нагрузка и после интенсивного перемешивания оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 2 часов. В случае, если реакция была неполной, температуру повышали до 37°С в течение ~1 часа. Неочищенную реакцию буферизовали в PBS и очищали SEC (GE Superdex200, PBS в качестве элюента) и мономерные фракции объединяли для анализа.
Общие аналитические методы для примеров конъюгирования:
ЖХМС: Колонка=Waters BEH300-C4, 2,1 × 100 мм (P/N=186004496); Прибор=Acquity УВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором SQD2; Скорость потока=0,7 мл/мин; Температура=80°C; Буфер A=вода+0,1% муравьиная кислота; Буфер B=ацетонитрил+0,1% муравьиная кислота. Использовали градиент от 3% до 95% B в течение 2 мин, поддерживали при 95% B в течение 0,75 мин, а затем повторно уравновешивали при 3% B. Образец восстанавливали с помощью ДTT сразу же перед введением. Элюат контролировали посредством ЖХМС (400-2000 дальтон), а протеиновый пик деконволютировали с помощью MaxEnt1. Количество молекул лекарственного препарата, конъюгированных с антителом (DAR), представляли в виде средневзвешенной нагрузки, как было описано ранее.
Альтернативно, анализ ЖХМС в невосстанавливающих условиях выполняли с использованием системы Aquity H-class UPLC, присоединенной к масс-спектрометру Xevo G2-XS TOF. Разделение осуществляли с использованием колонки BEH-C18 (2,1 мкм × 50 мм, номер по каталогу 186002350) при 80°C. Использовали градиент от 10% до 95% ацетонитрил в воде (+0,1% муравьиная кислота). Данные масс-спектрометрии (МС) получали исходя из 1500-3000 m/z (положительный режим). Весь протеиновый пик выбирали на основе деконволюции с использованием программного обеспечения MaxEnt. Типичный размер инъекции составляет 0,1 мкг.
SEC: колонка: Superdex200 (5/150 GL); Подвижная фаза: Забуференный фосфатом физиологический раствор, содержащий 2% ацетонитрил, pH 7,4; Скорость потока=0,25 мл/мин; Температура=температура окружающей среды; Прибор: Agilent 1100 HPLC.
HIC: колонка : TSKGel Butyl NPR, 4,6 мм × 3,5 см (P/N=S0557-835); Буфер A=1,5 M сульфат аммония, содержащий 10 мМ фосфат, pH 7; Буфер B=10 мМ фосфат, pH 7+20% изопропиловый спирт; Скорость потока=0,8 мл/мин; Температура=температура окружающей среды; Градиент=0% B - 100% B в течение 12 мин, поддерживали при 100% B в течение 2 мин, затем уравновешивали при 100% A; Прибор: Agilent 1100 HPLC.
Антитела, используемые для конъюгирования:
CD33-11A1-v1417-H16-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYIFT DYVTHWVRQA PGKGLEWIAY INPYNDGTKY NERFKGRFTI SSDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDY RYEIYGMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDRTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPRELLQG STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASSSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT SQLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCQLW NSNPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC
CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYIFT DYVTHWVRQA PGKGLEWIAY INPYNAGTKY NERFKGRFTI SSDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDY RYEIYGMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDRTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPRELLQG STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASSSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT SQLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCQLW SSNPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC
Neg-8-8-H16-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDL NSRGTIIHYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPRELLQG STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIVMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SYSTPLTFGG GTKVEIKGTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
CD33-11A1-v1417-LCQ05-H16-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYIFT DYVTHWVRQA PGKGLEWIAY INPYNDGTKY NERFKGRFTI SSDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDY RYEIYGMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDRTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPRELLQG STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASSSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT SQLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCQLW NSNPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GECGGLLQGP P
Her2-PT-H16-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDRTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPRELLQG STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
CD33-11A1-v1417-H7C-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYIFT DYVTHWVRQA PGKGLEWIAY INPYNDGTKY NERFKGRFTI SSDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDY RYEIYGMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTLL QGSGGTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV LQSSGLYSLS SVVTVPSSSL GTQTYICNVN HKPSNTKVDK KVEPKSCDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPG
Легкая цепь: DIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASSSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT SQLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCQLW NSNPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC
Her2-PT-H7C-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTLL QGSGGTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV LQSSGLYSLS SVVTVPSSSL GTQTYICNVN HKPSNTKVDK KVEPKSCDRT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPG
Легкая цепь: DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
Her2-PT-LCQ05-K222R-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDRTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
Легкая цепь: DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGECGGLLQG PP
CD33-11A1-v1417-kK183C-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYIFT DYVTHWVRQA PGKGLEWIAY INPYNDGTKY NERFKGRFTI SSDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDY RYEIYGMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
Легкая цепь: DIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASSSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT SQLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCQLW NSNPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SCADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC
Her2-PT-A114C-hG1
Тяжелая цепь: EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS CSTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
Легкая цепь: DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
Таблица 1. Таблица данных конъюгирования
Таблица 2. Таблица биоаналитических данных:
Процедура клеточного анализа in vitro
Экспрессирующие Her2 (BT474 (злокачественная опухоль молочной железы), N87 (злокачественная опухоль желудка), MDA-MB-361-DYT2 (злокачественная опухоль молочной железы)) или неэкспрессирующие Her2 клетки-мишени (MDA-MB-468, HT29) или CD33-экспрессирующие HL60, HEL92.1.7, NB4, TF-1 или неэкспрессирующие CD33 (Raji) клетки-мишени высевали в 96-луночные планшеты для культивирования клеток в течение 24 ч перед обработкой. Клетки обрабатывали 3-кратно последовательно разведенными конъюгатами антитело-лекарственное средство или свободными соединениями (то есть антитело не конъюгировано с лекарственным средством) в двух повторностях при 10 концентрациях. Жизнеспособность клеток определяли посредством анализа CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation MTS Assay (Promega, Madison WI) через 96 ч после обработки. Относительную жизнеспособность клеток определяли в виде процентного количества от необработанного контроля. Значения IC50 вычисляли с использованием четырехпараметрической логистической модели #203 с XLfit v4.2 (IDBS, Guildford, Surry, UK). Результаты приведены ниже в таблице 3 (для нагрузок), в таблице 4 (для герцептиновых конъюгатов) и в таблице 5 (для CD33-конъюгатов).
Таблица 3: Данные цитотоксичности in vitro (нМ) для калихеамициновых нагрузок
Таблица 4: Данные цитотоксичности in vitro (нг/мл) для конъюгатов, содержащих герцептин
Таблица 5: Данные анализа цитотоксичности in vitro (нг/мл) для CD33-конъюгатов
Оценка активности ADC в моделях AML человека in vivo
Химерное анти-CD33 антитело на основе антител яванского макака и человека, 11А1, конъюгировали с различными соединениями линкер-нагрузка (в соответствии с CD33-конъюгатами в примерах 50-110) и исследовали на моделях ксенотрансплантата острого миелоидного лейкоза (ОМЛ). Для каждой модели, описанной ниже, первую дозу вводили в день 0. Опухоли измеряли, по меньшей мере, один раз в неделю, и их объем вычисляли по формуле: объем опухоли (мм3) = 0,5 × (ширина опухоли2) (длина опухоли). Средние объемы опухолей (±стандартная ошибка среднего) для каждой обрабатываемой группы вычисляли, имея максимум 10 животных и минимум 4 животных. Все эксперименты на животных проводили в учреждении, аккредитованном “Международной ассоциацией по аттестации содержания лабораторных животных” в соответствии с руководящими указаниями “Институционального комитета по уходу за животными и их использованию” и соответствующим разрешением для проведения исследований на животных.
A. Ксенотрансплантаты AML HL60
Эффекты анти-CD33 ADC в отношении роста опухолей человека in vivo исследовали на мышах с иммунодефицитом. Для подкожных моделей AML 10 × 106 клеток HL60 имплантировали подкожно в подвздошную область самок NOD-SCID мышей. Когда средний объем опухолей достигал 200 мм3, животных распределяли, чтобы обеспечить однородность размера опухоли среди различных обрабатываемых групп. Модель подкожного ксенотрансплантата HL60 AML дозировали внутривенно, один раз каждые четыре дня в течение четырех циклов (Q4d×4), PBS-наполнителем, ADC, содержащим гуманизированное анти-CD33 антитело, и, в некоторых случаях, контрольным ADC Neg-8.8 и/или Mylotarg, в дозах, представленных в таблицах 6-10.
На фиг. 1 представлен график данных из таблицы 6 ADC, содержащих калихеамицин (примеры 50, 69 и 84), вводимых в дозах 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, в сравнении с Mylotarg, вводимым в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителем.
На фиг. 2 представлен график данных из таблицы 7 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), вводимого в дозе 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 86), вводимого в дозе 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 3 представлен график данных из таблицы 8 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51) вводимого в дозе 0,01, 0,03 и 0,1 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 52), вводимого в дозе 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 4 представлен график данных из таблицы 9 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), вводимого в дозе 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, контроля Neg-8.8 ADC, несущего аналогичное соединение линкер-нагрузка (пример 71), вводимого в дозе 0,3 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 5 представлен график данных из таблицы 10 анти-CD33 ADC, содержащих калихеамицин (примеры 60, 61 и 67), вводимых в дозе 0,01, 0,05 и 0,1 мг/кг, Mylotarg, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
Эти данные демонстрируют, что ADC, содержащие анти-CD33 антитело/калихеамицин, ингибируют рост AML-опухолей ксенотрансплантата HL60 дозозависимым образом, причем несколько примеров обеспечивали полную и устойчивую ремиссию роста опухоли при фракции эффективной дозы Mylotarg®. Особенно эффективные примеры включают CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1, который обеспечил 10/10 полных и длительных ответов к 14 дню исследования при дозе 0,1 мг/кг, и CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP6, который обеспечил 9/9 полных и длительных ответов к 18 дню исследования при дозе 0,1 мг/кг. Кроме того, эти данные показывают, что ADC, содержащие анти-CD33 антитело/калихеамицин, были гораздо более эффективными, чем их соответствующие контрольные Neg8.8 ADC (которые не распознают антиген CD33) при аналогичной дозе.
Таблица 6
Таблица 7
Таблица 8
Таблица 9
Таблица 10
B. Ксенотрансплантаты линии клеток TF-1 AML
Эффекты анти-CD33 ADC в отношении роста опухолей человека in vivo исследовали на мышах с иммунодефицитом. Для подкожных (sc) моделей AML 10 × 106 клеток TF-1 имплантировали подкожно в подвздошную область самок мышей Athymic nu/nu. Когда средний объем опухолей достиг 300 мм3, животных распределяли, чтобы обеспечить однородность размера опухоли среди различных обрабатываемых групп. Модель подкожного ксенотрансплантата TF-1 AML дозировали внутривенно, один раз каждые четыре дня в течение четырех циклов (Q4d×4), PBS наполнителем или гуманизированным анти-CD33 ADC в дозах, представленных в таблицах 11-13.
На фиг.6 представлен график данных из таблицы 11 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51), CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), их соответствующих ADC негативного контроля (примеры 52, 71 и 86, соответственно), вводимых, каждый, в дозе 0,3 мг/кг, Mylotarg®, вводимого в дозе 1 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 7 представлен график данных из таблицы 12 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 (пример 51), вводимого в дозе 0,005, 0,01, 0,05 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 8 представлен график данных из таблицы 13 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19 (пример 85), вводимого в дозе 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
На фиг. 9 представлен график данных из таблицы 14 анти-CD33 ADC CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 (пример 70), вводимого в дозе 0,005, 0,01, 0,05 и 0,3 мг/кг, и PBS-носителя.
Эти данные демонстрируют, что ADC, содержащие анти-CD33 антитело/калихеамицин, ингибируют рост опухолей ксенотрансплантата TL-1 AML дозазависимым образом. Все три анализируемых ADC, содержащие анти-CD33 антитело/калихеамицин, CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1, CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13 и CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP19, обеспечивали сильные ответы при анализе при 0,3 мг/кг. Два примера, CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP1 и CD33-11A1-v1417-kN92S-H16-D55A-K222R-hG1-LP13, обеспечивали длительные и полные ответы у 10/10 животных при анализе при 0,3 мг/кг в этих исследованиях, тогда как Mylotarg® неэффективен в этом исследовании. Кроме того, эти данные показывают, что ADC, содержащие анти-CD33 антитело/калихеамицин, были гораздо более эффективными, чем их соответствующие контрольные Neg8.8 ADC (которые не распознают антиген CD33) при аналогичной дозе.
Таблица 11
Таблица 12
Таблица 13
Таблица 14
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Pfizer Inc.
Ahmad, Omar K
Brown, Stephen P
Chakrapani, Subramanyam
DiRico, Kenneth J
Dushin, Russell G
Puthenveetil, Sujiet
Tumey, Lawrence N
<120> ПРОИЗВОДНЫЕ КАЛИХЕАМИЦИНА И ИХ КОНЪЮГАТЫ С АНТИТЕЛАМИ
<130> PC72283
<160> 20
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Ile Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 2
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 2
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Gln Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asn Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 3
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Ala Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Ile Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 4
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 4
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Gln Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 5
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 5
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Asn Ser Arg Gly Thr Ile Ile His Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 6
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 6
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 7
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Ile Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 8
<211> 221
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 8
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Gln Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asn Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Leu Leu Gln Gly Pro Pro
210 215 220
<210> 9
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 10
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 11
<211> 453
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Ile Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Leu Leu Gln Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 12
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 12
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Gln Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asn Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 13
<211> 463
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 13
His Glu Ala Val Tyr Cys His Ala Ile Asn Glu Val Gln Leu Val Glu
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
20 25 30
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
35 40 45
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
50 55 60
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
85 90 95
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
100 105 110
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140
Ser Lys Ser Thr Leu Leu Gln Gly Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Arg Thr
225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
<210> 14
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 15
<211> 450
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 16
<211> 222
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Leu Leu Gln Gly Pro Pro
210 215 220
<210> 17
<211> 449
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Ile Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 18
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 18
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Gln Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asn Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Cys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 19
<211> 450
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 20
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| АНТИТЕЛА К В7-Н3 И КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА | 2017 |
|
RU2764651C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ 3-(5-ГИДРОКСИ-1-ОКСОИЗОИНДОЛИН-2-ИЛ) ПИПЕРИДИН-2,6-ДИОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С БЕЛКОМ С "ЦИНКОВЫМИ ПАЛЬЦАМИ" 2 (IKZF2) СЕМЕЙСТВА IKAROS | 2019 |
|
RU2797559C2 |
| КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, СОДЕРЖАЩИЕ МОДУЛЯТОР СПЛАЙСИНГА НА ОСНОВЕ ГЕРБОКСИДИЕНА, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2820607C2 |
| АНТИТЕЛА И ФРАГМЕНТЫ АНТИТЕЛ ДЛЯ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОГО КОНЪЮГИРОВАНИЯ | 2016 |
|
RU2757815C2 |
| КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ РАЗРУШЕНИЯ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК | 2017 |
|
RU2781444C2 |
| КОНЪЮГАТ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ ДЛЯ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2800137C1 |
| АНТИТЕЛА И КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА-ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, СПЕЦИФИЧНЫЕ К CD123, И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2789150C2 |
| КОНЪЮГАТ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, НАЦЕЛИВАЮЩИЙСЯ НА TROP2, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2822663C1 |
| ПИРИМИДИНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ ИЛИ ЕГО СОЛЬ | 2020 |
|
RU2787992C1 |
| КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА, ЭКСПРЕССИРУЮЩЕГО IGF-1R | 2016 |
|
RU2728568C2 |
Настоящее изобретение относится к применимым в медицине новым производным калихеамицина формул (IIA), (IIIA) и (IVA), содержащим их фармацевтическим композициям и комбинациям, способам их применения в лечении лейкоза и ингибировании пролиферации клеток лейкоза:
или их фармацевтически приемлемым солям, где R3 представляет собой –CH2CH3; X выбран из –C2–C8алкила, необязательно замещенного одним R10; –(C0–C6алкил)–C3–C10 карбоциклила; –(C0–C6алкил)–6–членного гетероциклила, где указанный 6–членный гетероциклил необязательно замещен одним R10 и указанный 6–членный гетероциклил содержит один гетероатом азота; –(C0–C6алкил)–фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и –(C0–C6алкил)–6–членного гетероарила, где указанный 6–членный гетероарил необязательно замещен одним R10 и где указанный 6–членный гетероарил содержит один гетероатом азота; где Х необязательно дополнительно замещен 1 G; R10 представляет собой –R10a–R10b, причем R10a отсутствует; R10b выбран из –CO2H; –CO2C1–C4алкила; –NH–R11; –CONH–R11; –CON(C1–C4алкил)–R11; –CONHNH–R11; R11 представляет собой –R11a–R11b–R11c, где R11a и R11b отсутствуют; R11c выбран из группы, состоящей из –H и –C1–C4алкила; G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –NH2, –CO2H, –C1–C4алкила, =O и –CO2C1–C4алкила; L и LR представляют собой линкерные фрагменты, AB представляет собой антитело, которое иммуноспецифично связывается с одним или несколькими антигенами злокачественной клетки, b равно 1–20. Предложены новые производные калихеамицина, фармацевтическая композиция и комбинации на их основе, эффективные для лечения лейкоза. 7 н. и 21 з.п. ф-лы, 50 пр., 14 табл., 9 ил.
1. Соединение формулы (IIA)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где R3 представляет собой –CH2CH3;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) –C2–C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(ii) –(C0–C6алкил)–C3–C10 карбоциклила;
(iii) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероциклила, где указанный 6–членный гетероциклил необязательно замещен одним R10 и указанный 6–членный гетероциклил содержит один гетероатом азота;
(iv) –(C0–C6алкил)–фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(v) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероарила, где указанный 6–членный гетероарил необязательно замещен одним R10 и где указанный 6–членный гетероарил содержит один гетероатом азота;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1 G;
R10 представляет собой –R10a–R10b, причем
R10a отсутствует;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) –CO2H;
(ii) –CO2C1–C4алкила;
(iii) –NH–R11;
(iv) –CONH–R11;
(v) –CON(C1–C4алкил)–R11;
(vi) –CONHNH–R11;
R11 представляет собой –R11a–R11b–R11c,
где R11a и R11b отсутствуют;
R11c выбран из группы, состоящей из –H и –C1–C4алкила;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –NH2,–CO2H, –C1–C4алкила, =O и –CO2C1–C4алкила;
L представляет собой –(LC)0–3–LB–LA,
где LA выбран из группы, состоящей из–NHR;–CO2H; 
;
LB выбран из группы, состоящей из –LB1–LB2–LB3– и –LB2–LB3–LB1–,
где LB1 либо отсутствует, либо представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из –C1–C6алкил(OCH2CH2)1–8–,–C1–C6алкилен–NR– и –NRC1–C6алкилен–;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
и 
;
LB3 представляет собой AA0–12, где AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту;
LC выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –CO– и –C1–C6алкилен–;
R представляет собой H;
или L представляет собой группу, выбранную из:
,
,
,
,
,
,
и
;
или соединение выбрано из:
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
,
, 
.
2. Соединение формулы (IIA) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где L представляет собой –LB–LA.
3. Соединение формулы (IIA) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где L представляет собой –(LC)1–LB–LA.
4. Соединение формулы (IIA) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где L представляет собой –(LC)2–LB–LA.
5. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.1–4 или его фармацевтически приемлемая соль, где LA выбран из группы, состоящей из –NH2 и 
.
6. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.1–5 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB представляет собой –LB1–LB2–LB3–.
7. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.1–5 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB представляет собой –LB2–LB3–LB1–.
8. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.6 или 7 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB1 отсутствует.
9. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.6 или 7 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB1 представляет собой один или два компонента, каждый из которых выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –C1–C6алкил(OCH2CH2)1–8–; и –NRC1–C6алкилен–.
10. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.6–9 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB2 отсутствует.
11. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.6–9 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB2 представляет собой
.
12. Соединение формулы (IIA) по любому из пп.6–11 или его фармацевтически приемлемая соль, где LB3 представляет собой AA2, где AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту.
13. Соединение формулы (IIA) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором L представляет собой
.
14. Соединение формулы (IIA) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое выбрано из группы, состоящей из:
,
и 
15. Соединение формулы (IIIA)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где R3 представляет собой –CH2CH3;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) –C2–C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(ii) –(C0–C6алкил)–C3–C10 карбоциклила;
(iii) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероциклила, где указанный 6–членный гетероциклил необязательно замещен одним R10 и указанный 6–членный гетероциклил содержит один гетероатом азота;
(iv) –(C0–C6алкил)–фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(v) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероарила, где указанный 6–членный гетероарил необязательно замещен одним R10 и где указанный 6–членный гетероарил содержит один гетероатом азота;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1 G;
R10 представляет собой –R10a–R10b,
где R10a отсутствует;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) –CO2H;
(ii) –CO2C1–C4алкила;
(iii) –NH–R11;
(iv) –CONH–R11;
(v) –CON(C1–C4алкил)–R11;
(vi) –CONHNH–R11;
R11 представляет собой –R11a–R11b–R11c, причем
R11a и R11b отсутствуют;
R11c выбран из группы, состоящей из –H и –C1–C4алкила;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –NH2, –CO2H, –C1–C4алкила, =O и –CO2C1–C4алкила;
–LR–AB представляет собой –(LC)0–3–LB–LAR–AB,
где LAR–AB выбран из группы, состоящей из –AB; –NH–AB; –CO–AB; –S–AB; 
;
LB выбран из группы, состоящей из –LB1–LB2–LB3– и –LB2–LB3–LB1–,
где LB1 либо отсутствует, либо представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из –C1–C6алкил(OCH2CH2)1–8–,–C1–C6алкилен–NR– и –NRC1–C6алкилен–;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
и 
;
LB3 представляет собой AA0–12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту;
LC выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –CO– и –C1–C6алкилен–;
R представляет собой H;
или –LR–AB представляет собой группу, выбранную из:
,
,
,
,
,
,
,
;
AB представляет собой антитело, которое иммуноспецифично связывается с одним или несколькими антигенами злокачественной клетки.
16. Соединение формулы (IVA)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где R3 представляет собой –CH2CH3;
X выбран из группы, состоящей из:
(i) –C2–C8алкила, необязательно замещенного одним R10;
(ii) –(C0–C6алкил)–C3–C10 карбоциклила;
(iii) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероциклила, где указанный 6–членный гетероциклил необязательно замещен одним R10 и указанный 6–членный гетероциклил содержит один гетероатом азота;
(iv) –(C0–C6алкил)–фенила, где указанный фенил необязательно замещен одним R10; и
(v) –(C0–C6алкил)–6–членного гетероарила, где указанный 6–членный гетероарил необязательно замещен одним R10 и где указанный 6–членный гетероарил содержит один гетероатом азота;
и где Х необязательно дополнительно замещен 1 G;
R10 представляет собой –R10a–R10b,
где R10a отсутствует;
R10b выбран из группы, состоящей из:
(i) –CO2H;
(ii) –CO2C1–C4алкила;
(iii) –NH–R11;
(iv) –CONH–R11;
(v) –CON(C1–C4алкил)–R11;
(vi) –CONHNH–R11;
R11 представляет собой –R11a–R11b–R11c,
где R11a и R11b отсутствуют;
R11c выбран из группы, состоящей из –H и –C1–C4алкила;
G выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –NH2, –CO2H, –C1–C4алкила, =O и –CO2C1–C4алкила;
–LR–AB представляет собой –(LC)0–3–LB–LAR–AB,
где LAR–AB выбран из группы, состоящей из –AB; –NH–AB; –CO–AB; –S–AB; и
;
LB выбран из группы, состоящей из –LB1–LB2–LB3– и –LB2–LB3–LB1–,
где LB1 либо отсутствует, либо представляет собой один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из –C1–C6алкил(OCH2CH2)1–8–,–C1–C6алкилен–NR– и –NRC1–C6алкилен–;
LB2 либо отсутствует, либо выбран из группы, состоящей из 
и 
;
LB3 представляет собой AA0–12, причем AA, в каждом случае независимо, представляет собой природную аминокислоту;
LC выбран, независимо для каждого случая, из группы, состоящей из –CO– и –C1–C6алкилен–; и
R представляет собой H;
или –LR–AB представляет собой группу, выбранную из:
,
,
,
,
,
,
,
;
AB представляет собой антитело, которое иммуноспецифично связывается с одним или несколькими антигенами злокачественной клетки; и
b равно 1–20.
17. Соединение по п.16 или его фармацевтически приемлемая соль, где LR–AB представляет собой
.
18. Соединение по любому из пп.15–17 или его фармацевтически приемлемая соль, где АВ представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, биспецифическое антитело или фрагмент антитела.
19. Соединение по любому из пп.15–18 или его фармацевтически приемлемая соль, где AB выбрано из группы, состоящей из трастузумаба, трастузумаба мутантов, ореговомаба, эдреколомаба, цетуксимаба, гуманизированного моноклонального антитела к рецептору витронектина (αvβ3), алемтузумаба, гуманизированного анти–HLA–DR–антитела для лечения неходжкинской лимфомы, 131I Lym–1, мышиного анти–HLA–Dr10 антитела для лечения неходжкинской лимфомы, гуманизированного анти–CD2 моноклонального антитела для лечения болезни Ходжкина или неходжкинской лимфомы, лабетузумаба, бевацизумаба, ибритумомаба тиуксетана, офатумумаба, панитумумаба, ритуксимаба, тозитумомаба, ипилимумаба, гемтузумаба, гуманизированного моноклонального антитела к онкофетальному белковому рецепторному 5T4 и M1/70 (антитело к рецептору CD11b).
20. Соединение по любому из пп.15–19 или его фармацевтически приемлемая соль, где АВ связано посредством Fc–содержащего или Fab–содержащего полипептида, сконструированного с ацил–донорной глутаминсодержащей меткой или эндогенным глютамином, который стал реакционноспособным посредством полипептидной инженерии в присутствии трансглутаминазы.
21. Соединение формулы (IIIA) по п.15 или его фармацевтически приемлемая соль, которое выбрано из группы, состоящей из:
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
и 
22. Фармацевтическая композиция для лечения лейкоза, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1–21 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.
23. Фармацевтическая композиция по п.22, причем лейкоз представляет собой острый лимфоцитарный лейкоз (ALL) или острый миелоидный лейкоз (AML).
24. Способ устранения или ингибирования пролиферации клеток лейкоза, включающий обработку клеток лейкоза пациента количеством соединения по любому из пп.1–21 или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное количество эффективно для устранения или ингибирования пролиферации клеток лейкоза.
25. Способ лечения лейкоза, включающий введение пациенту количества соединения по любому из пп.1–21 или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное количество эффективно для лечения лейкоза.
26. Способ по п.24 или 25, где лейкоз представляет собой острый лимфоцитарный лейкоз (ALL) или острый миелоидный лейкоз (AML).
27. Комбинация для лечения лейкоза, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1–21 или его фармацевтически приемлемой соли и другого средства против лейкоза.
28. Комбинация по п.27, где лейкоз представляет собой острый лимфоцитарный лейкоз (ALL) или острый миелоидный лейкоз (AML).
| Charles E | |||
| Melancon et al., ACS Chemical Biology, 2006, vol | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| US 5606040 A, 25.02.1997 | |||
| HINMAN L.M | |||
| et al., Cancer Research, AACR-American Association for cancer research, 1993, vol | |||
| Веникодробильный станок | 1921 |
|
SU53A1 |
| IRWIN HOLLANDER et al., Bioconjugate Chemistry, 2008, vol | |||
| Способ изготовления электрических сопротивлений посредством осаждения слоя проводника на поверхности изолятора | 1921 |
|
SU19A1 |
| EP 689845 A2, 03.01.1996 | |||
| СПОСОБ ТЕРМОМЕХАНИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ МАРТЕНСИТНО- | 0 |
|
SU313873A1 |
