Способ идентификации личности и установления родства с помощью InDel полиморфизмов и набор синтетических олигонуклеотидов для их генотипирования Российский патент 2020 года по МПК C12Q1/00 C12Q1/68 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области молекулярной генетики, биотехнологии, молекулярной биологии, судебной медицины и криминалистики, относится к набору синтетических олигонуклеотидных праймеров для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также синтетических олигонуклеотидных ДНК-зондов для последующей гибридизации. Изобретение может быть использовано для идентификации личности и определения кровного родства путем генотипирования 162 инсерционно-делеционных (InDel) полиморфизмов в образцах ДНК человека.

Уровень техники

Актуальной проблемой криминалистики и судебно-медицинской экспертизы является идентификация личности (преступника, жертв преступлений, катастроф, обнаруженных останков, и т.д.). Учитывая достижения пластической хирургии, визуальная идентификация уже не является полностью надежной. Наиболее достоверным способом идентификации личности в современной судебно-медицинской практике является сравнительный анализ ДНК исследуемых биологических образцов. Полное сравнение генетического материала является избыточным, поэтому для исследования используются отдельные полиморфные локусы ДНК, отличающиеся у разных людей в популяции. Подавляющее большинство существующих в настоящее время способов генетической идентификации личности используют индивидуальные различия людей по трем типам маркеров:

STR (англ. short tandem repeat, короткий тандемный повтор), представляющим собой участки ДНК, содержащие небольшие мотивы, повторяющиеся различное число раз (например TAAG-TAAG-TAAG-…);

SNP (англ. single nucleotide polymorphism, однонуклеотидный полиморфизм), представляющим собой вариации одного нуклеотида;

InDel (сокр. от англ. Insertion/Deletion, инсерционно-делеционный полиморфизм) - биаллельный маркер, представляющий собой наличие (инсерция), либо отсутствие (делеция) одного или более нуклеотидов.

Наиболее старый и широко применяемый метод генетической идентификации использует индивидуальные различия людей в длине STR-локусов. Число повторов в одном локусе представляет собой определенный аллель, вариантов которого в популяции несколько. К примеру, каждый из 15 локусов, входящих в коммерческий набор PowerPlex® 16 (Promega Corporation, USA), имеет от 8 до 20 аллелей в российской популяции [1]. И, хотя, отдельный аллель не является строго индивидуальной характеристикой, сочетание 15 аллелей таких полиморфных локусов создает генетический профиль, являющийся высокоспецифичной характеристикой человека. Мерой уникальности генетического профиля принято считать показатель MP (англ. match probability - вероятность случайного совпадения): чем меньше его значение, тем выше идентифицирующий потенциал. МР современных коммерческих наборов для идентификации по STR-локусам составляет от 1⋅10^-14 до 1⋅10^-17.

Метод генетической идентификации по STR-локусам хорошо себя зарекомендовал, однако, есть несколько проблем, снижающих его ценность, и решение которых является актуальной задачей. Во-первых, известные нам наборы для идентификации по STR-локусам обеспечивают недостаточное значение МР при установлении кровного родства и исследовании сложных образцов (деградированная ДНК, малые количества ДНК) [2,3].

Второй недостаток связан с большой длиной локусов, подвергающихся генотипированию. В судебной экспертной практике ДНК большинства исследуемых биологических объектов фрагментирована, вследствие воздействия биологических и физических факторов среды. Особенно это актуально при исследовании останков, долгое время находившихся в земле. Вероятность успешного анализа такой деградированной ДНК зависит от длины исследуемых локусов, входящих в конкретный набор для идентификации: чем сильнее фрагментирована ДНК, тем короче должны быть таргетные локусы, использующиеся для идентификации. К примеру, длины STR-локусов российского набора для генотипирования COrDIS, находятся в диапазоне от 66 нуклеотидов (локус TPOX) до 450 нуклеотидов (локус D22S1045). И, если, 66 нуклеотидов - это вполне достаточный размер для анализа деградированных образцов, то вероятность успешного исследования локуса, размером в 450 нуклеотидов, резко снижается, что приведет к выпадению аллели, либо всего локуса. Понимание этой проблемы стимулировало разработку наборов, основанных на мини-STR или микросаттелитах, с размерами целевых локусов 70-280 нуклеотидов [4]. Однако, фундаментальным решением этой проблемы является переход к самому короткому типу маркеров - к однонуклеотидным (SNP) и коротким инсерционно-делеционным (InDel) полиморфизмам.

Третья проблема, связана с самой методикой электрофоретической регистрации результатов STR-анализа. При превышении определенной концентрации исследуемой ДНК, возникает т.н. перегруженность: расширяется детектируемый пик длины продукта и становится невозможно точно определить аллель. Ограничение по максимальному количеству исследуемой ДНК требует предварительного измерения и нормализации ее концентрации, что дополнительно усложняет эту рутинную методику, призванную быть максимально простой. Также, ограничением методики является высокая частота мутирования STR-маркеров (10^-3 - 10^-4 на поколение[5]), что может приводить к неверной интерпретации экспертиз кровного родства.

Как уже было выше сказано, применение коротких маркеров существенно повышает шансы при экспертизах деградированной ДНК. Кроме того, частота мутирования SNP-маркеров в 10 000 - 1 000 000 раз ниже, чем у STR-маркеров [6], что нивелирует риск ошибок при интерпретации экспертиз родства. И финальным аргументом в пользу применения SNP- и InDel-маркеров для генетической идентификации личности, является большое разнообразие методов их генотипирования с помощью гибридизации. Эти методы проще в применении, более производительны, не требуют нормализации концентрации ДНК, что существенно сокращает время и затраты на проведение экспертиз.

Следует также отметить ограничения, которые препятствовали внедрению SNP- и InDel-маркеров в судебно-медицинскую экспертизу. Во-первых, аллели SNP-маркеров представляют собой вариации всего одного нуклеотида. Детектирование гибридизационным методом такого малого различия требует очень точного подбора длины и структуры аллель-специфичных зондов, и это составляет проблему. Для InDel-маркеров такой проблемы не существует, они отлично генотипируются гибридизационными методами, т.к. менее требовательны к точности подбора аллель-специфичных зондов. При этом они сохраняют все достоинства (частоте мутирования, размерам), присущие SNP. Второй недостаток, в сравнении с мультиаллельными STR, - это биаллельная природа, как SNP-, так и InDel-маркеров. Это означает, что для получения столь же уникального генетического профиля, биаллельных маркеров потребуется в 3 раза больше. И здесь возникает новая проблема: увеличение количества маркеров требует соответствующего роста мультиплексности ПЦР. Известно, что увеличение мультиплексности ПЦР повышает конкуренцию между праймерами, что приводит к нестабильности результатов. Нам удалось решить проблему подбора праймеров для ПЦР с очень высокой мультиплексностью. Решение этой проблемы лежит в области точного подбора ПЦР-праймеров для одновременной амплификации нескольких сотен локусов и определяет высокий уровень техники настоящего изобретения.

Настоящее изобретение основано на применении InDel-маркеров, и далее приведен ряд известных решений, использующих InDel-маркеры для идентификации личности.

1. Набор для генотипирования InDel- полиморфизмов на человеческих эухромосомах и Y-хромосоме [7]. Изобретение раскрывает набор для амплификации 47 InDel локусов в аутосомах человека и 2 локусов Y-хромосомы для идентификации половой принадлежности. Набор, раскрываемый в данном изобретении, по заявлению самих авторов, подходит для проведения идентификации среди китайцев. Т.е. маркеры подобраны исходя из частот аллелей в китайской популяции. Протяженность амплифицируемых фрагментов составляет до 200 нуклеотидов, что будет препятствовать успешному анализу деградированной ДНК: учитывая малый размер самих маркеров (от одного до нескольких нуклеотидов), авторы могли бы подобрать праймеры для амплификации более коротких фрагментов, в среднем менее 100 нуклеотидов, если бы использовали для детекции результатов электрофоретическую подвижность, а гибридизационный метод. В связи с трудностью достижения высокой мультиплексности ПЦР, амплификация 49 локусов одного исследуемого образца ДНК происходит в пяти полимеразных цепных реакциях.

Таким образом, к недостаткам данного изобретения следует отнести этническую специфичность панели маркеров, большую длину амплифицируемых фрагментов, необходимость постановки пяти мультиплексных ПЦР (что увеличивает не только стоимость и трудоемкость анализа, но и порой делает экспертизу невозможной, вследствие малого количества ДНК, обнаруживаемого на месте преступления), необходимость измерения и нормализации концентрации исследуемой ДНК.

2. Автоматическое генотипирование высокоинформативной панели из 40 инсерционно-делеционных полиморфизмов [8].

В данной работе авторы предлагают панель для анализа 40 InDel маркеров. Локусы маркеров амплифицируются в четырех мультиплексных ПЦР и имеют длину 78-326 нуклеотидов (средняя длина 154,2 нуклеотида). Панель разрабатывалась для европейской популяции, и имеет величину МР 7.09⋅10^-17 для европейцев. Для африканской популяции величина МР уже 1.2⋅10^-12, что уже ниже принимаемой судом в качестве доказательной.

Как и в предыдущем изобретении, к недостаткам следует отнести этническую специфичность панели маркеров, большую протяженность амплифицируемых фрагментов, необходимость постановки четырех ПЦР для одного образца.

3. Известен также набор реагентов «Qiagen Investigator DIPplex reagent», выпускаемый компанией Qiagen (Hilden, Germany), набор не запатентован. «Qiagen Investigator DIPplex reagent» рассчитан на исследование 30 InDel маркеров. Локусы маркеров амплифицируются в одной мультиплексной ПЦР и имеют длину до 160 нуклеотидов. МР составляет от 5⋅10^-11 для азиатской популяции, до 2⋅10^-13 для европейской [9]. Несмотря на то, что характеристики длины амплифицируемых локусов и мультиплексность ПЦР в коммерческом наборе «Qiagen Investigator DIPplex reagent» превосходят аналогичные качества предыдущих двух изобретений, существенным его недостатком является малое количество анализируемых маркеров. Этим обусловлено недостаточное значение МР в целом, и для азиатской популяции, в особенности.

Как видно из описания, все три вышеприведенных аналога схожи между собой по используемому подходу, отличаясь лишь набором маркеров, длинами локусов и мультиплексностью ПЦР. Наиболее близким к заявляемому техническому решению по технической сущности и достигаемому техническому результату является набор DIPplex. Описанный способ принят за прототип изобретения. Основной недостаток прототипа - недостаточное количество маркеров. Особенностью судебно-генетической экспертизы является низкое качество биологических образцов, что зачастую приводит к спорадическим выпадениям результатов по части локусов. Идентифицирующая ценность таких неполных результатов снижается. В связи с этим, необходимо иметь многократный запас по числу исследуемых маркеров, что обеспечит полноценный идентифицирующий профиль даже при выпадении большей части результатов. Увеличение числа анализируемых маркеров связано с фундаментальными методическими проблемами, главная из которых - это выбранный способ регистрации результатов генотипирования по электрофоретической подвижности амплифицированных локусов в геле, т.е. по их длине. Используемый подход всегда будет требовать компромисса между количеством маркеров и их максимальной длиной. Увеличение достоверности результата идентификации требует увеличения числа маркеров, что в свою очередь, будет повышать среднюю длину амплифицируемого локуса (т.к. каждая длина продукта «зарезервирована» за одним аллелем одного маркера), ограничивая возможности анализа деградированной ДНК.

Для устранения указанных недостатков необходимо существенно увеличить число анализируемых маркеров и обеспечить минимально возможную длину амплифицируемых локусов. Это позволит повысить идентифицирующий потенциал и чувствительность метода, как для качественных образцов ДНК, так и для деградировавших. Решение этих задач требует увеличения мультиплексности ПЦР без увеличения числа реакций, т.е. в одной смеси праймеров. Для минимизации длины локусов необходимо уйти от электрофоретического способа регистрации результатов генотипирования, т.к. он связан с длиной ПЦР-продукта. Оптимальным является гибридизационный анализ. При его применении размер амплифицируемого фрагмента каждого локуса будет определяться исключительно качеством зон отжига праймеров на флангах самого маркера. Учитывая, что в геноме человека число таких маркеров-кандидатов избыточно, из них можно выбрать те, для которых можно подобрать праймеры, отжигающиеся достаточно близко к маркеру, и обеспечивающие минимальную длину амплифицируемого фрагмента.

Раскрытие сущности изобретения

Задачей настоящего изобретения является:

- создание универсальной межпопуляционной панели, состоящей из маркеров, обладающих близким по значению дискриминирующим потенциалом в каждой из пяти основных мировых популяций (европейской, африканской, южноазиатской, восточноазиатской и американской);

- улучшение характеристики МР до 1.52⋅10^-65 за счет увеличения количества InDel-маркеров, определяющих идентифицирующий профиль;

- сокращение средней длины амплифицируемых локусов до 72,8 п.н. и максимальной до 97 нуклеотидов;

- подбор структур олигонуклеотидных праймеров, обеспечивающих проведение ПЦР в одной реакции для всех локусов;

- подбор структур олигонуклеотидных ДНК-зондов, обеспечивающих достоверное генотипирование методом гибридизации.

Поставленная задача технически решена следующим образом. Для преодоления присущих прототипу недостатков, и достижения идентифицирующих и эксплуатационных характеристик, в большей мере удовлетворяющих потребностям судебно-медицинской экспертизы, в заявляемом техническом решении были введены следующие усовершенствования. Выбраны 162 InDel маркеров, имеющих равномерное распределение частот аллелей в основных мировых популяциях. Для них были подобран набор синтетических праймеров, эффективно амплифицирующих в ходе одной мультиплексной ПЦР локусы всех, входящих в набор маркеров, причем обратный праймер каждого локуса имеет универсальную вставку по 3'-концу. В качестве способа генотипирования (определения присутствующих в образце аллелей всех маркеров) был выбран гибридизационный анализ. Принцип гибридизационного анализа состоит в проведении реакции комплементарного взаимодействия между исследуемым продуктом мультиплексной ПЦР и набором олигонуклеотидных зондов (предварительно закрепленным на поверхности подложки, в микрокаплях геля, на микросферах и т.д.), каждый из которых соответствует определенной аллели маркера. Для детекции результата гибридизации могут быть использованы любые подходящие метки (флуоресцентные, радиоактивные, ферментативные и проч.), предварительно введенные в ПЦР-продукт посредством меченых дезоксинуклеотидтрифосфатов в ходе элонгации, либо путем использования предварительно меченого праймера, или иным способом. В приведенных далее примерах для введения метки мы использовали ПЦР с флуоресцентно-меченым праймером.

Таким образом, заявляемым техническим решением устранены следующие недостатки прототипа:

- Недостаточно низкая вероятность случайного совпадения генотипов, МР, составляющая у прототипа от 5⋅10^-11 для азиатской популяции, до 2⋅10^-13 для европейской, в заявляемом техническом решении достигает 1.52⋅10^-65, что повышает идентифицирующий потенциал метода в 10⁵² - 10⁵⁴ раз;

- Панель InDel-маркеров, предложенная в заявляемом техническом решении, является универсальной вне зависимости от популяции. Средние значения частоты минорной аллели (которые в конечном итоге определяют ключевую величину - MP), рассчитанные исходя их данных исследования «1000 Genome Project» [10], практически не отличаются, и составляют для европейской популяции 39,8%, африканской - 39,4%, южноазиатской - 39,9%, восточноазиатской - 39,8% и американской - 39,6%. Это свидетельствует об универсальности выбранной панели маркеров, учитывая крайнюю полярность африканского, азиатского и европейского генофонда.

- Протяженность амплифицируемых фрагментов прототипа составляет от 70 до 160 нуклеотидов [11], среднее значение длины 115 нуклеотидов, медиана 115 нуклеотидов. В заявляемом техническом решении протяженность амплифицируемых фрагментов прототипа составляет от 55 до 97 нуклеотидов, среднее значение длины 72,8 нуклеотида, медиана 72 нуклеотида.

Выбор праймеров, входящих в предмет настоящего изобретения, характеризуется тем, что праймеры подбирали таким образом, чтобы они обеспечивали равномерную амплификацию всех целевых локусов.

Основными аспектами данного изобретения являются синтетические олигонуклеотиды, приведенные в Таблицах 1 и 2, а также Перечне последовательностей (SEQ ID N0: 1-SEQ ID N0: 648).

Предлагаемый набор синтетических олигонуклеотидов для амплификации целевых локусов, содержащих генотипируемые InDel-маркеры, характеризуется тем, что содержит 1) локус-специфичные праймеры следующего нуклеотидного состава (SEQ ID N0: 1-SEQ ID N0: 324):

Таблица 1. ПЦР-праймеры для амплификации локусов, содержащих InDel полиморфизмы.

SEQ ID NO: Номер полиморфизма Название Последовательность 5’-3’ 1 rs3059749 01_007_F TGGACTTTATTATTATGGTCTGGAGCAGCA 2 rs3059749 01_007_R TGCATGAGTGATTCCTTAAAACCAGACAC 3 rs34338895 01_031_F AGCCATGTAGATGCTRTCATCAACAGCT 4 rs34338895 01_031_R TGCAATTTTGGATACCAATGACCACAAGA 5 rs67091803 01_041_F ACTTTGTGACCGTCTTCTCTCTTGG 6 rs67091803 01_041_R CCAAGAGGGGTGCACTGCTCC 7 rs5774423 01_059_F GCACAGAATCCAGCAGGTAGTAAGGG 8 rs5774423 01_059_R CACAATGTTAAATCTGTTTGTTAAGGGGAG 9 rs113565562 01_083_F TGATCACTGTATTCCTGACCCAGTTTCA 10 rs113565562 01_083_R CACTTTAACTTCTGTTTAGAACACATAGT 11 rs111706466 01_101_F AGTGTAAAAAYGACTGCTTAGACATTTCT 12 rs111706466 01_101_R TCATTTGACAGATATTGAATCAAATTGGATTCTGA 13 rs11394524 01_119_F AGCAGCAGGTAAAACAACTATCGTTC 14 rs11394524 01_119_R CTAGGGGAGCCAGAGAGCCTTTTC 15 rs72082809 01_154_F ACAGATTCCTTTGATTGCCTGATGAG 16 rs72082809 01_154_R GCCGGTGCATTCTCCCCTTCAG 17 rs35379245 01_170_F CTTGTTTCAGATATGCAGGCTGAGA 18 rs35379245 01_170_R TGCTrGCAAACTTAGGCAATTAAGTTAACATC 19 rs71107464 01_192_F TCTAGTTGAGTCACTTGAGCTCTATTAGAC 20 rs71107464 01_192_R AACTCCTAACTGCTTAATGTAGCAGG 21 rs66944170 01_208_F TGGTCACTCCTCTTTGCACTGCG 22 rs66944170 01_208_R CCCATCCTCCCGAAGCACATCTAC 23 rs35126101 01_223_F GGAGAGGGGTGTCCGACTCAGG 24 rs35126101 01_223_R CCTTCCTGAGACAGCTGAAATGT 25 rs35994297 01_233_F CAACATTGCAAAAATGAACGCTGACTAC 26 rs35994297 01_233_R CTCTATACTTAGTCATTTGTTGCATTTCTGG 27 rs34450453 01_240_F CTTCAATGAAGAACTGTTAAGAATTAAAGGC 28 rs34450453 01_240_R CTTAAAATATGTAGTGTGTACCCAATCATTTGC 29 rs10693974 02_011_F CACGTGGGTGGTCACTCACACC 30 rs10693974 02_011_R CTTATCTCCAATAGATCAGTGAAGAAACAGG 31 rs66610049 02_036_F GCCATAGAATTTCTCTCATGGCTCTAC 32 rs66610049 02_036_R GTGAAATTCAGCTATAAGGAGATGAAGCC 33 rs68130608 02_042_F AGAGGAGAATGAATGTTGGAGTAAGC 34 rs68130608 02_042_R CAGAGTGACAGGTCAACACTTACCC 35 rs11424237 02_061_F AGGCCTGTAATGGATTACAAAATGGCCACA 36 rs11424237 02_061_R AGCAAAGTCACATTGCAAATTCTTGTACATATAATGATGG 37 rs72339906 02_080_F CAGCTCTAAGACCACACATTCTGC 38 rs72339906 02_080_R ACTGGCCATGCAGGTATTCTAGG 39 rs5832955 02_101_F TCAGGGTTGACCAGCAGTTTAAGTG 40 rs5832955 02_101_R GAATTCAGTTTTCACTCATGAGTTTAGCTG 41 rs5833488 02_113_F AGGCGGAAATAAGTGACCCAGAGAAAAACGCT 42 rs5833488 02_113_R TGCCGCCTCCTGCAACTCCTTCA 43 rs77093320 02_150_F AGGCACCTTGTGAGAAAAGATTGG 44 rs77093320 02_150_R CCTAGGCTTGCTGGGAAGTCCTC 45 rs111665673 02_215_F ACCCAAGAATATGAAGGACCAACTG 46 rs111665673 02_215_R TCATCACATTCTGCACTCATAATCAGC 47 rs57993635 02_231_F AGGAGACCACTCAAAGAATCCTACTC 48 rs57993635 02_231_R TCAGTTTAGGTGCACAGAATAAGTCAC 49 rs35926392 03_016_F AGGACCAAGGCTGCAGAGAAAGG 50 rs35926392 03_016_R CGGCTCTCCTTCCAAGTCAGGAC 51 rs139738417 03_030_F TGATGTAATTTAAAGTGAGCCAGCCAGACRTA 52 rs139738417 03_030_R TGACTCTTCTCCCACCTAACTCAAGTTTGA 53 rs66976303 03_063_F GTTAGGAAATRATCCCAGGAAATAGGAATG 54 rs66976303 03_063_R CTACTCCATCATAGGCTCTTGTATTGG 55 rs57495895 03_082_F CTGTGTTGTATTCTGTTATTGCTACTTGC 56 rs57495895 03_082_R TTGCCATTCTAAGATTTCTCTCTTCCTG 57 rs35291341 03_100_F CGTTCACATGTCAGGTACTAACTCTC 58 rs35291341 03_100_R TGGTGGGGATGAGGTACAGACTG 59 rs35464243 03_107_F CAATCTAAGTTGTCTTACCCTGTGGC 60 rs35464243 03_107_R TTTCTAGTTCTCATATTCCATGATTGTATTTTGAG 61 rs10540628 03_124_F AGGAATGACAGGAAAGTCTTAATGAGC 62 rs10540628 03_124_R ACATCATGCATTGTTTGAATCATCTCTG 63 rs35588182 03_162_F CTCTGTCACCTAGGCTGGAGTGC 64 rs35588182 03_162_R AGAATCACTTGAACCCGGGAGGCAGTG 65 rs150470881 03_182_F GAGTCCCTCTCTTTCTACTGTWTGGAATAGT 66 rs150470881 03_182_R AGAGGTACAAAGAGAAGCTGGTACCA 67 rs75445531 03_194_F TTCCTGGACGTGTGAATTGATGC 68 rs75445531 03_194_R GAAGACAGACAGAACACTCCTGC 69 rs3834231 04_008_F AGGATCTGGACTTGCTCTGGGGCAG 70 rs3834231 04_008_R GCAGGGCTCTGGGAAATTTGGGTGC 71 rs59170274 04_027_F TATTCACTATGGTTACCATGCAGTACAAG 72 rs59170274 04_027_R TGTTGAACAAACAGTACAAAGTTTCAGAC 73 rs34184705 04_045_F CAGATCGCTGGGCTATTAGGTG 74 rs34184705 04_045_R TACTGGCCAGCTGCAGCCTCTAC 75 rs56281469 04_056_F GCTGTGGAGTATAATTTGTAGGGAGAC 76 rs56281469 04_056_R CATACTGTATCTTACTTGAGTGTTTCATCTC 77 rs10707593 04_065_F TGGGAATACTAGGGAAGCATTGGGAAGTGACT 78 rs10707593 04_065_R RGCTATTGGTACCAGACATAAACRTATATGCA 79 rs35932180 04_085_F GTTCAAGCAATAATCATTGATCTGTGCC 80 rs35932180 04_085_R GTGAGTCTTATTTTTTCCCTGTGTCTGT 81 rs72273695 04_112_F AGTAACTTCTCCATGCATCACATTATTC 82 rs72273695 04_112_R CACAAACAGAGGCCAGGTAA 83 rs70938781 04_137_F ACCTGCCCTGACTATATCTGTA 84 rs70938781 04_137_R CATATCAGCTTTTTCCTCCTCCTTCA 85 rs34581182 04_154_F TCTCACAAAATATACATGTAGCAGTGGATA 86 rs34581182 04_154_R GTTACTGAAGGTAGTATAGCTCTAGGCA 87 rs3067059 04_177_F CCTTCCCTTCCATTTTGTATATCTG 88 rs3067059 04_177_R CCTAGTCAGAGGAACATTTTGAAG 89 rs61235135 05_003_F CTCTGTTCCTTTGCTGAAAAATGAC 90 rs61235135 05_003_R AGATGTTTTCAGGTGGGAGGAATA 91 rs113132739 05_013_F GGAAGATGATGTGAATGTACACAAG 92 rs113132739 05_013_R TGTGGCAGTCCTAGTCCAGTCTC 93 rs142490175 05_065_F CCCATATATTTTCCTTCCTGGTGCA 94 rs142490175 05_065_R CCCTACCCTGACAAATACATGAACTA 95 rs572636473 05_074_F TGTTCCTTATTTCTGGAAGAGCCC 96 rs572636473 05_074_R TGCCAGACCTATGCATAAAAAAGG 97 rs138124389 05_087_F GCTAAACATTGAGCACACATGGA 98 rs138124389 05_087_R GATTGTTTTTTAACCCATGCCCTTTC 99 rs34990478 05_096_F CTAGCAAGGGTGAGAATTAGTGACT 100 rs34990478 05_096_R GAACACATCTTGGTAAGCAGCACT 101 rs6149192 05_115_F TGCAGTTCAGCTGACTTCAC 102 rs6149192 05_115_R GGGGTTAAGAGTTTCAGCATG 103 rs145918302 05_119_F CCTAACTACCTGTTTACAAGGCAATTCA 104 rs145918302 05_119_R CACAGTTTGGAAATGGTTAATTGTATTCT 105 rs66881681 05_132_F GGAACTCCAGGACCCAACAGA 106 rs66881681 05_132_R AGCCATGTTTCTGTCTCAGCA 107 rs10701589 05_141_F AGGCTTCTAATTGGTTTCCGCA 108 rs10701589 05_141_R CAAGATATAATAACAAATCAGAGTGGA 109 rs3832355 05_151_F TGCTGCTGTGAAGATGAGAAGG 110 rs3832355 05_151_R GTAGGGGCTTTGGTAAATATAGTCA 111 rs10560231 05_180_F AGCCATGCGTTGCTTTAAGCCA 112 rs10560231 05_180_R CCCAGCCTGTAGTATGTTTCAATATCAT 113 rs35948562 06_007_F CTCACTACCAAGTCAAACCCA 114 rs35948562 06_007_R TGAGGGAATAGGCGCAGTATA 115 rs56071028 06_016_F CATGGTCCCAAAGCCATCACAGC 116 rs56071028 06_016_R ACACATTGCTCCTTCTTCATCATC 117 rs10529292 06_031_F AGCCTCTTTGCRTGGCTCTTTCTGGC 118 rs10529292 06_031_R AGTGTGTACGATTTCATTTCTGATGTCTCT 119 rs376539574 06_057_F AGATCCTCGCTAATCAATTAGAGCACA 120 rs376539574 06_057_R AGTATTCACATATTTGCAATTAGGATATATTCCT 121 rs68133212 06_071_F CCAAGGTAAACATCGTTAGTTTCTCCA 122 rs68133212 06_071_R GAAGCCCAAACAGAAAAGCAAG 123 rs139823267 06_077_F TTCTCAATGAATACAGCCTGTGACT 124 rs139823267 06_077_R CTTAGTAAATAGCCTAAGCGATTTTGTCA 125 rs144273778 06_087_F CAGTTCCCACCTGTATGCTGTG 126 rs144273778 06_087_R AGGAGGGAGGTGGATCTCAGC 127 rs56343259 06_096_F TTGCCTCCAAAGTCTCTGACAC 128 rs56343259 06_096_R ACAAATGACTCTGGCAGAGGTG 129 rs573860910 06_113_F ACTTTTTAATGATCACCATTCTAACTGGTG 130 rs573860910 06_113_R TCAGAGAAATGCAAATCAAAACCACAATG 131 rs141141409 06_125_F ATAGGCAGCTGTGGTATGGGA 132 rs141141409 06_125_R GTACCTGGCTCCCCTGCTGT 133 rs71675135 06_135_F AGGGAAATGAAAGACAATTAGAGAAGT 134 rs71675135 06_135_R TGTCCCTGATCTGTGTTCACAC 135 rs140327598 06_143_F ATCTTAAAATGCTAGACACTGTTTTAGAG 136 rs140327598 06_143_R TTTCTTCCACTAGAATGTAAGCC 137 rs68078431 06_153_F GTGCACATGCATGTTTGAATAG 138 rs68078431 06_153_R GTATATTCAAAACAAGAGTCGAAGCCA 139 rs11278298 06_158_F GTGTGACGTTTCAGTTAATAGTGGTGG 140 rs11278298 06_158_R TCTCCTGCATAAAGTATGAATTTTCGT 141 rs566489451 06_167_F CCTTGAGCCTGGCTGTAATC 142 rs566489451 06_167_R CATGGTAGGCCCACAGGAAATA 143 rs35345873 07_010_F AGAAGAGAAAAGTGAGGTAGTTGCTA 144 rs35345873 07_010_R ATGGTTGCATATTAATGCCTAAGCTTG 145 rs71552214 07_023_F CCCAAGCACTTTTCTATATTCTATCACCTCTG 146 rs71552214 07_023_R TTGGGTTAATGTGTGTTGTATTCAGC 147 rs34786735 07_040_F GCATAATTGATAGATCAGCTCTAGAAGAATYAC 148 rs34786735 07_040_R ACTGCTTTCCTCACAGATTTGTACATTCA 149 rs377131771 07_062_F GGATGATTCCACTTGAATCCATTCAAAGA 150 rs377131771 07_062_R CCTTTGGAACCATTGAATAGAAAGGAATG 151 rs1610906 07_082_F CCAGTAGACACAATGATATTGACAAATAG 152 rs1610906 07_082_R GCAGGATATTTTGATATTGAGAGTTTG 153 rs112677752 07_097_F CAGAGACTATCTTAAATATGCATTTCTATG 154 rs112677752 07_097_R CCTAACAGCTCGACAAATATTGCAG 155 rs35830730 07_112_F CTGTAATCCCAGCTACTCAGGAGGCTG 156 rs35830730 07_112_R TCTGCTTCCCGGGTTCAAGTGATTC 157 rs3216282 07_126_F CCAAGTTCATACAAAGTTCACAACCA 158 rs3216282 07_126_R CAACAATGAAAAAAACATCTATAGTAGCACT 159 rs35575707 07_140_F TTCCACATTGTGCTGGTGGTTCT 160 rs35575707 07_140_R CTCAACACTGGCAGGTATAGCA 161 rs71520104 07_153_F TGCGGTTCCATCAAAGCCACARCCCTG 162 rs71520104 07_153_R AACAAGACATAGGGTGACCGTAGTG 163 rs35146459 08_002_F GACTGTCCATTGTTTGCTGCACTTGTC 164 rs35146459 08_002_R AGGGAATGACGCTCATGGGAGG 165 rs36048750 08_013_F TCCATGAGAATAACTATAGTATGCTAAGTAATACAT 166 rs36048750 08_013_R TCCACTGAGAATACATGATCTATTAAGTAAAATG 167 rs34168882 08_033_F TGGACCCAATAAAACTTGGTGAAATAAAATG 168 rs34168882 08_033_R TCAAGTCTTGTCCTATCATGTTTCTGATGA 169 rs35604660 08_058_F TGCTCTCTGAACAGACGTCATGG 170 rs35604660 08_058_R GCTATACAGTGCTGGAGAAATACTCTG 171 rs34067160 08_064_F ACCCCTCACCCTTTACTTTGTAGG 172 rs34067160 08_064_R CAAAGAGGCATATTTTGGGGTGG 173 rs138172268 08_082_F CAGGGTTTGTGAATGCACCAATC 174 rs138172268 08_082_R TTTCCAAGTCCCCACCAGAGGAG 175 rs35679778 08_103_F TAAGCTCAGGGAAGCACTGCCTGACA 176 rs35679778 08_103_R AGAGCAACCATCCCCCACCCCC 177 rs11323264 08_125_F TCCACGGCACCACATTCAAGGCCTCTG 178 rs11323264 08_125_R AGCAGAGGCGAAGTGTGAGACCTGT 179 rs6150855 08_139_F GGAGTAAAAACTTCCTGAGGCCTC 180 rs6150855 08_139_R GCAAACCATTCAGGAAGCGTGGA 181 rs147918543 09_000_F ACACTCACTGATCAAGGATTTCTAAAACCA 182 rs147918543 09_000_R AGCCTATAAGACATTCCTTTATGAGTGATACAAAGTC 183 rs66509579 09_021_F GGGTTATTTCTATATAAAAACGAGCATAAAATTATAGCAG 184 rs66509579 09_021_R TAACACCATGTTTTTTCTTCAAAAATGTGCATC 185 rs371766957 09_064_F GTACTGACAGAAGGCTCATGAGTTA 186 rs371766957 09_064_R ATTACCACACCACTCTTTACTACAG 187 rs71493646 09_072_F ATTCCTCTTGACATCCAGCCACCC 188 rs71493646 09_072_R CTAGCAAGACAGACATACAAGCTG 189 rs34499887 09_084_F CCTCGAGGTGGCTTGTTTGRGTGC 190 rs34499887 09_084_R ACCTGCCCACCAACCTGACCCA 191 rs59923204 09_109_F AGACCAGAAATTGGAAAATGTTACAGTGGTC 192 rs59923204 09_109_R ACCAAGGACACATAGCTGACAAATGGA 193 rs55952736 09_117_F AATTTATTTTCTCCATAAACTACCTAGTCTCA 194 rs55952736 09_117_R GCAATGTTATTGTTCCATTGTGTCTTAGTCT 195 rs71953876 09_132_F TTACTGAGATGCCCAACCTGCGT 196 rs71953876 09_132_R CCGTTTCCTCCGCACTTATGCTGC 197 rs368278029 10_001_F GCTATACCATTTCTCCTATTGTATA 198 rs368278029 10_001_R AGGTAGCRTAGAGTAGAAGAAACAGTGTAAC 199 rs71281575 10_026_F CCAGGCTGGTCTCAAACTCCTGGGC 200 rs71281575 10_026_R TAGGAGGCCGAAGCGGGAGG 201 rs202245860 10_035_F TACTCAGGAGGCTGAGGCAGGAG 202 rs202245860 10_035_R TGCGGTGGCACGATCTGGGCTC 203 rs34948479 10_047_F GAGTCATGATTCACRAGCAGTTGTAAGCAATG 204 rs34948479 10_047_R TGGGGAAAACTGGGTACAGGGTACAGT 205 rs10552811 10_071_F GAGTCACCCAGAGGGATTTTGACAAT 206 rs10552811 10_071_R CCCACTTAGAAAAATCCAATGAGAATCTCA 207 rs10555357 10_085_F TCAGCCACAGAGGAACAGCCAG 208 rs10555357 10_085_R GCTTTGCCCAACTCACAGAATTAC 209 rs140576359 10_117_F AGGAATTCATGGCTTAGGTTGGAAC 210 rs140576359 10_117_R CCGATCTATATTCCTGTTCTGATGTC 211 rs10544160 10_128_F CAGCACTGAAATTTAAAATCCTGGTCCT 212 rs10544160 10_128_R CCGCCAGGGAAAACAAGCCACATG 213 rs10583916 11_006_F ACTTCCTGTATCATTAATTCCACCTAG 214 rs10583916 11_006_R GCAGCACTCTGAACTTTTTATTGTCTC 215 rs113764748 11_020_F TAGGAGTTCTGACTCAGTTCTGGTG 216 rs113764748 11_020_R CTGACCAAAACTCAATGGCCTTTC 217 rs57958958 11_034_F ATGGGCGTATAAATATTGCCTTTCTCA 218 rs57958958 11_034_R AGACACACTCCCTAAGGTGTTATATG 219 rs138278630 11_059_F TGGTGGGAGTGTAAATTAGTTCAACCA 220 rs138278630 11_059_R TGGTTCTAGATCCTTGAGGAATCACCAC 221 rs74933486 11_084_F CTACCAGCTCTTTGTGTGTCCTAGA 222 rs74933486 11_084_R TTCTTAGAACTTTCCATATGGCCATTG 223 rs35847449 11_094_F TTATGCTATAAATTAGCAAACCCAACACATC 224 rs35847449 11_094_R GCAGTTCACCCTCTAAAACCATTCACTC 225 rs143339028 11_111_F AGAGGGAGGAGTCGTGATTGTCT 226 rs143339028 11_111_R CTGAGCAGGCTGCCGGAAAC 227 rs11394480 11_135_F AAGCCCTTGGCCATACATAAGGCTC 228 rs11394480 11_135_R GGGAGTGGGAGAATGAGCTCTCC 229 rs10533848 12_013_F GCCTTCTCTGCTCTCTTTTGTG 230 rs10533848 12_013_R GCTATTATCCACTCTTGCAGATGAAG 231 rs35955982 12_024_F TTCACTGCTTGTGTGGTCTTATATAATCAAAAC 232 rs35955982 12_024_R AGTGTAGTCTACTCTGTTCATTTTACACC 233 rs10571534 12_074_F TCAAGAGGTAATCTGAARACAGGTCTTTC 234 rs10571534 12_074_R ACTCAGYAGGCCTAGGTTGCTC 235 rs10689649 12_090_F CCCATTTATAAGCCAATGTTTCATTGTC 236 rs10689649 12_090_R ACATCATTTAAATGGAGAGAGTAGCTG 237 rs150767158 12_100_F ATTGCTTTTTATGACACTACYCCTCATGC 238 rs150767158 12_100_R TGGGTCCAGACAAATCACAAGGGTTC 239 rs10706208 12_128_F ACCTGAAATTGATTCAAATGTGTCATGTGATCTTTCAAAC 240 rs10706208 12_128_R TGTCATATAACAGAATGTGACTTTGAC 241 rs142669819 13_039_F GGACTTCCTAAGATACACTTCGATTG 242 rs142669819 13_039_R ACTGGGTTGGAACATCCAAAACAATC 243 rs5803618 13_053_F TCAGATATATGGCTCGGTAGCCTCCCYGA 244 rs5803618 13_053_R TCAAACCTAATGCCTGTCTAAGTAGAC 245 rs371764729 13_069_F ACCATCTCAYCCCADTTAGAATGGCGATC 246 rs371764729 13_069_R TTCCTATTTCTCCACATCCTCTCCAG 247 rs67650090 13_087_F GTGACATTTCCTTGTCAAAAGAACATTATAG 248 rs67650090 13_087_R CATTAGGTCATGGTAATTTTCCCTGAG 249 rs55812371 14_056_F ACCTAGGGATGGAACTTTGGCTTATG 250 rs55812371 14_056_R CACTATAGAAAACAGGCTTGTGGTTC 251 rs141061555 14_091_F GGAATTACAATTTATAAATGTAGGTCCACATG 252 rs141061555 14_091_R CCACACTCATTTGTGTATTTCTACACTG 253 rs144457716 15_046_F TAYTGTGAAATTGAAGTTTAGAGTCAGTTTCVAAG 254 rs144457716 15_046_R TCTGCTTGATAACTGTACAACTTTATAGTAAAATGTGAAC 255 rs112548522 15_067_F TCATCTCCTTGGGAAATGGCC 256 rs112548522 15_067_R GCACCAGGCTCATCCTATTCTTATTAC 257 rs112792286 15_087_F GCAGCACCAGTTCTGTCTCCTACTAGTACCTTCAG 258 rs112792286 15_087_R TTTGCACCAGCCTAATAGTTGGTCTTACAG 259 rs112880243 15_097_F AGAACACCATGCTTTCTGACAGC 260 rs112880243 15_097_R CCAGCTATGAAAAGCCAATTGCTG 261 rs35379530 16_000_F ACTATGGGTTTATCAAGAATTCCAAGTTG 262 rs35379530 16_000_R GTCAAAGGAAGTTTCACTGTAGGG 263 rs34436424 16_012 _F CTTAGAGTCATAGTTTACAAACATAAAACCATG 264 rs34436424 16_012 _R GGCTTAGATATCTCAGACCTACCAATATC 265 rs3841767 16_024_F CCTTAGCTTGTATCACCCTTTATCATCTG 266 rs3841767 16_024_R AGAAAGAAGAAAGGAAGTCACACAG 267 rs35709162 16_064_F AGTGACSKACATTTGGCAAGAAGCCATG 268 rs35709162 16_064_R AGAGAATTTATTGTCAyGCTTGTGCCAAAGC 269 rs34816330 16_076_F AGTGAGTCTGTTCAGGGTGCTACATTGCTG 270 rs34816330 16_076_R GCATACAGAAGCCACTCrGAATACAATTTCAAG 271 rs11330085 17_001_F GTACCCCACATAGATAGCCGGAAGG 272 rs11330085 17_001_R TCCTTCCAGCGGTCTCTGTGG 273 rs5821134 17_057_F TCCCAAAGGAACCCCTATGACT 274 rs5821134 17_057_R CTCAGGAGCTAGCAGTGGGAG 275 rs141730340 17_083_F CTCCACTTTCCACTGATGCAG 276 rs141730340 17_083_R GGGAGGGAGGGGTGCTCGGGAT 277 rs35023498 18_001_F CTTCATGAATGGTTTGGCACCHGTTCCTTG 278 rs35023498 18_001_R ACACACTTTTAAACAACAGATCTTGTGATAAC 279 rs35452393 18_030_F AGCTTGACTAAAGTTTAGTCAACACAGCAAAG 280 rs35452393 18_030_R TTGTGATTGbCCAAGTGTTCACAACT 281 rs33990768 18_051_F ACATTCCTCCTGTGGRCTCTGCTGCATC 282 rs33990768 18_051_R AATTGTGATAGACAAATGCCTGGC 283 rs66933419 18_065_F GCCACTCAATTTCTAGCCATTGCCTTAGG 284 rs66933419 18_065_R CCTGAGACATTTGGGTGAAGGTTTGTGTCTAC 285 rs66502030 18_075_F ACAGCAAAGAGGAGAGAAAGAGCTGAAC 286 rs66502030 18_075_R AACTACCCTGTTCTAGTCCCGCATCC 287 rs60503836 19_002_F GGCTCTGTCABCAGGCTGGAGTGCAATGG 288 rs60503836 19_002_R CTTGAACCCTGGAGACAGAGGTCGCAG 289 rs112906660 19_015_F GATTTTGTTATATGCAGGGTGTCCTGAAACCA 290 rs112906660 19_015_R CTCTCACTTTTCTTCTTTATAGTAAGTCATTC 291 rs112877961 19_029_F CTACHGCAGGGAAAAGGGACTTAGCCGTAGG 292 rs112877961 19_029_R AGACATCTGCAAGAAMTTTCCAGCAGGC 293 rs34242584 19_044_F GTAGTGGCTATTTYGTCYGTCAGCTCCTGT 294 rs34242584 19_044_R ACATTGAAACCCAATCCAAAGAAGCTAAGAATC 295 rs79282333 20_005_F AAGACACAAAGTKTGGCTTCAGATAAAGAGCA 296 rs79282333 20_005_R TGCCAAGCTATCTTGTAAGAAATAACTACAC 297 rs35894782 20_020_F GGATTTTATTGTCTCATATTCTTGAAGTG 298 rs35894782 20_020_R CAGTAGACAATGCCGAGAAAGAATAG 299 rs73622051 20_039_F TCTGATTCCAATCTAATACCATAGGGCT 300 rs73622051 20_039_R GGACTAAGCTTCTCATTGTTGCAGAG 301 rs66555516 20_058_F TATTATGCCTTTTGTACCCGATGTTTG 302 rs66555516 20_058_R CCAGTTGGCAGCTGGGAGAGCAAAG 303 rs138066060 21_010_F TGGGGTGGAGGTGGGGCACAGCCTTGTTAC 304 rs138066060 21_010_R AGGCCTACTATGAAACTGGAATCTTCACATAC 305 rs10583984 21_038_F GCTGAATCTACTGTTTGGAGCTTACAATAAG 306 rs10583984 21_038_R ACCATGTTATTCCAGCTACAATTCTGTG 307 rs112408318 21_042_F CAGAAATGCATGCACAAGGCACTC 308 rs112408318 21_042_R TTGCTATTGTAACTAATGTTGCTGAGGAC 309 rs60228580 22_033_F TTCCTCTTCCGTAGATGGGGATAAGAAGATCTAC 310 rs60228580 22_033_R TTAAATCTGTGTCTTCATATAATCCTGTTGA 311 rs67057410 22_046_F TTTGAGACAGAGTCTTGCTCTGTCACA 312 rs67057410 22_046_R TGCACTGAGATTGCACCACTACAC 313 rs35997669 X_004_F GCCATAAAAAAGAAAGAAATGCTGCCA 314 rs35997669 X_004_R CTTAGTCCAGTGTTCTCTAGGTTCACG 315 rs57522085 X_029_F GGAAGTTGTCATTGGAACTTCTGCTG 316 rs57522085 X_029_R GGGTTGAGAGTAAGGTATGAAAATTCTGG 317 rs202172626 X_083_F GCAATTTCCAATGTCAAATTAAAATTCTTCTAAC 318 rs202172626 X_083_R CTGTAAATAAGGAGTTTCATTATTTAGTGG 319 rs34991528 X_095_F AGTATGTTTTCAAATCAGGAATTGTGATGT 320 rs34991528 X_095_R GCACAAAAGACCTGGTCAAGACAAAC 321 rs35020323 X_138_F GAGTTTTGCAGAAGGTACAGCAACT 322 rs35020323 X_138_R TCAGTCTTGCATTTGAGAGACAATC 323 rs10689407 X_141_F GACCAAATTCAGTATGCTGGGAGT 324 rs10689407 X_141_R GTAGCCTCCATTTTACCCTGTTCC

2) дополнительно, каждый обратный праймер с четным номером «Seq ID» (Seq ID NO:2, Seq ID NO:4… Seq ID NO:324), имеет со стороны 5'-конца универсальную олигонуклеотидную вставку, например 5'-TCATTGGATCTCATTA-3', или любую иную. Таким образом, каждый локус-специфичный обратный праймер имеет следующую последовательность: 5'-TCATTGGATCTCATTANNN…..NNN-3' , где “NNN…NNN” - его специфичная составляющая, а “TCATTGGATCTCATTA” - универсальная.

Локус-специфичные праймеры добавляют в количестве, обеспечивающем их конечную концентрацию от 1 нМ до 0,5 мкМ. Помимо приведенных праймеров, в реакционную смесь для амплификации вносят универсальный праймер, имеющий последовательность, идентичную универсальной вставке обратных праймеров, например, 5'-TCATTGGATCTCATTA-3'. В случае применения флуоресцентного маркирования, используют универсальный праймер с флуорофором (например Су5 или Су7) по 5'-концу. Концентрация универсального праймера должна составлять от 0,1 мкМ до 100 мкМ. Также, в реакционную смесь для амплификации входят следующие компоненты:

- смесь дезоксирибонуклеотидтрифосфатов четырех типов (dATP, dTTP, dGTP, dCTP);

- полимераза (Taq-, HotTaq-, или иная);

- реакционный буфер, оптимизированный для работы соответствующей полимеразы, например: 70 mM Tris-HCl (pH 8.8 при 25°C); 17 mM (NH₄)₂SO₄; 0.01% Tween-20. 2 ммоль MgCl₂;

- для флуоресцентного маркирования посредством встраивания флуоресцентно-меченых дезоксинуклеотидтрифосфатов в растущую цепь ПЦР-продукта, в реакционную смесь вносят соответствующий меченый дезоксинуклеотидтрифосфат в концентрации, обеспечивающей эффективное мечение (например, 0,05 мМ дУТФ-Су5). Флуоресцентное маркирование может осуществляться как одним из способов, так и их сочетанием.

Подготовленная смесь для амплификации также должна содержать исследуемую ДНК в количестве не менее 1 пкг. В качестве исследуемого образца могут быть использованы образцы ДНК, выделенные из любого биологического материала, содержащего геномную ДНК (кровь, слюна, волосяная луковица, потожировые следы, сперма, мазки со слизистой и бругие). Максимальное количество вносимой ДНК регламентируется лишь вязкостью ее раствора: при очень высоких концентрациях (более 1 мкг/мкл) возрастает вязкость раствора, что затрудняет его перенесение микродозатором. В этом случае рекомендуется разбавить раствор. Внесение компонентов в смесь для амплификации может происходить в любом порядке.

Амплификацию следует проводить в пробирках, стрипах, планшетах или иных емкостях, предназначенных для этой цели. После приготовления, смесь для амплификации помещают в прибор (амплификатор), обеспечивающий циклическую смену температур по заданной программе, например:

№ Температура Время Количество циклов 1 95°С 1 мин 1 2 95°С 30 сек 50 3 64°С 60 сек 4 72°С 20 сек 5 95°С 20 сек 50 6 50°С 10 сек 7 72°С 30 сек 8 72°С 5 мин 1

Амплификатор должен быть снабжен крышкой, нагреваемой до температуры, исключающей скопление конденсата в верхней части пробирки (стрипа, планшета), обычно 100-110°С. Если используется прибор, не имеющий нагревающейся крышки, то при приготовлении смеси реагентов, в нее необходимо добавить минеральное масло для исключения испарения водной части смеси.

В ходе температурного циклирования на первом этапе (№2-4) происходит симметричная амплификация всех входящих в набор локусов. Универсальный праймер имеет меньшую температуру отжига, чем локус-специфичные праймеры, поэтому на этой стадии он не участвует в реакции. Задача первой стадии - максимально эффективно амплифицировать локус в виде двуцепочечного фрагмента. Т.к. гибридизационный анализ требует присутствия одной цепи, комплементарной иммобилизованному ДНК-зонду (а в результате симметричной ПЦР первого этапа обе цепи связаны друг с другом), требуется стадия асимметричной амплификации. Это происходит на втором этапе: вследствие понижения температуры отжига, в реакцию вступает универсальный праймер. Т.к. он берется в существенно большей концентрации, чем локус-специфичные праймеры, на второй стадии происходит асимметричный синтез той цепи, которая комплементарна соответствующему ДНК-зонду. В итоге такой амплификации образуется смесь преимущественно одноцепочечных меченых ампликонов.

Разработанные нами зонды для генотипирования предлагаемой в данном изобретении панели InDel-маркеров приведены в Таблице 2 и перечне SEQ ID N0: 325-SEQ ID N0: 648.

Таблица 2. Аллель-специфичные ДНК-зонды для гибридизации

SEQ ID NO: Номер полиморфизма Название Последовательность 5’-3’ 325 rs3059749 01_007_I CAAAACTAAATGAAAGATAATC 326 rs3059749 01_007_D GCAAAACTAAAAAAGATAATCT 327 rs34338895 01_031_I GTTAGGACGTGTGRTCTTG 328 rs34338895 01_031_D GTTAGGACTGTGRTCTTGTG 329 rs67091803 01_041_I CCTTCATTTCCTCAACTGTG 330 rs67091803 01_041_D CCTTCATTTCAACTGTGCA 331 rs5774423 01_059_I CTAAGCAAATACTTAGTTCCC 332 rs5774423 01_059_D ACTAAGCAAATAGTTCCCTTC 333 rs113565562 01_083_I TCACTTGTCACACTATGTG 334 rs113565562 01_083_D TTTCACTTGTCACTATGTG 335 rs111706466 01_101_I CATTTCTCTAAGTAATCAG 336 rs111706466 01_101_D GACATTTCTCTAATCAGAA 337 rs11394524 01_119_I TCAATCATGGGGTAAATGGA 338 rs11394524 01_119_D ATCAATCATGGGTAAATGGA 339 rs72082809 01_154_I GTGGGATTGTAAGTAAGAGC 340 rs72082809 01_154_D AGTGGGATTGTAAGAGCTG 341 rs35379245 01_170_I GAGACTCAGAGATGTTA 342 rs35379245 01_170_D CTGAGACTCAGATGTTAA 343 rs71107464 01_192_I GTGGTTCAAATAATCTATTCC 344 rs71107464 01_192_D GTGGTTCAAATCTATTCCTG 345 rs66944170 01_208_I ATTTCAGTTTTCTTCGAGATC 346 rs66944170 01_208_D TTTTCCTCTTATCAAATCTGG 347 rs35126101 01_223_I GAAAGACACTGTGAAGGAG 348 rs35126101 01_223_D GGAAAGACACTGAAGGAGG 349 rs35994297 01_233_I ATTGTACTTCTTTATTTCCAG 350 rs35994297 01_233_D GAAATTGTACTTATTTCCAGA 351 rs34450453 01_240_I CATATTTAAATTGGTTGGTTAAG 352 rs34450453 01_240_D GCATATTTAAATTGGTTAAGAGC 353 rs10693974 02_011_I ACCAGGAACTCTGGCCCT 354 rs10693974 02_011_D CACCAGGATGGCCCTGTT 355 rs66610049 02_036_I TTCAGAACTGTCTCTGGCA 356 rs66610049 02_036_D CTTTCAGAACTCTGGCAAT 357 rs68130608 02_042_I ACACATGCATAATAACCCT 358 rs68130608 02_042_D CAACACATGCATAACCCTT 359 rs11424237 02_061_I CAAATTCCTCCCCATCA 360 rs11424237 02_061_D CAAATTCCTCCCATCAT 361 rs72339906 02_080_I CTGCAGACAGAGCATGTC 362 rs72339906 02_080_D CTGCAGACAGCATGTCCT 363 rs5832955 02_101_I GCTAATTAGGGAACCTTGC 364 rs5832955 02_101_D AGCTAATTAGGAACCTTGC 365 rs5833488 02_113_I TATGAAGTAGGTGAAGGA 366 rs5833488 02_113_D CTATGAAGTAGTGAAGGAG 367 rs77093320 02_150_I AAGCACCGCCAGAGCTCT 368 rs77093320 02_150_D GATTGGAAGTCTGAGGACT 369 rs111665673 02_215_I GTATCATAAAGAGAAAGGGC 370 rs111665673 02_215_D TGTATCATAAAAAGGGCATG 371 rs57993635 02_231_I CAAAGAAAGCCTGTTCCTA 372 rs57993635 02_231_D ACAAAGAAAGCTGTTCCTAG 373 rs35926392 03_016_I TGAGTCTTGCGCTGACC 374 rs35926392 03_016_D GTGAGTCTTGCTGACCC 375 rs139738417 03_030_I CTGCACATAAGCCATAAT 376 rs139738417 03_030_D TACCTGCACATAATTTCA 377 rs66976303 03_063_I GAACCAGCGTGATGTAATAG 378 rs66976303 03_063_D GAATGAAGAAAGGGAATGAG 379 rs57495895 03_082_I ATAGGTACTGGATTCACAGC 380 rs57495895 03_082_D CATAGGTACTGATTCACAGC 381 rs35291341 03_100_I AGATCCCCCTGTTTTCAG 382 rs35291341 03_100_D AGATCCCCGTTTTCAGTC 383 rs35464243 03_107_I TAAACTTCACCAAGTACTCTT 384 rs35464243 03_107_D CATAAACTTCAAGTACTCTTTC 385 rs10540628 03_124_I CTGTGGAAACACAGAGTAA 386 rs10540628 03_124_D TCTGTGGAAACAGAGTAAT 387 rs35588182 03_162_I TGGTGTGATCTCGGCTCA 388 rs35588182 03_162_D TGGTGTGATCGGCTCACT 389 rs150470881 03_182_I AGTTTCAGACAGGAATGGT 390 rs150470881 03_182_D TAGTTTCAGAAGGAATGGT 391 rs75445531 03_194_I ATGCCTCCTTCTTCTGTAAC 392 rs75445531 03_194_D GATGCCTCCTTCTGTAACA 393 rs3834231 04_008_I CCCCAGCTAGGTAGGACT 394 rs3834231 04_008_D CCCAGCTAGGACTAGCAC 395 rs59170274 04_027_I TCACTAAAACTTATTCTTG 396 rs59170274 04_027_D TCACTAAAATTATTCTTGC 397 rs34184705 04_045_I GGCCATGGGGCATTCTT 398 rs34184705 04_045_D GGCCATGGGCATTCTTG 399 rs56281469 04_056_I ATTGCACACTCTGGGTAAG 400 rs56281469 04_056_D ATTGCACACTGGGTAAGAG 401 rs10707593 04_065_I TGACTACTCAATTGCAT 402 rs10707593 04_065_D GTGACTACTAATTGCAT 403 rs35932180 04_085_I CCAGTCACTCTGTACCAG 404 rs35932180 04_085_D CCCAGTCACTGTACCAGG 405 rs72273695 04_112_I TATACATCTGCATTGATTGGA 406 rs72273695 04_112_D GCACAAATATACATTGGATATTC 407 rs70938781 04_137_I CCCTACCTTGTAGCTGAC 408 rs70938781 04_137_D GTACCTATCCGACAACCTG 409 rs34581182 04_154_I GTGACTTCCTATAAAAACT 410 rs34581182 04_154_D AGTGACTTCCTAAAAACTC 411 rs3067059 04_177_I TTCAACTTGACTTGTGTAAC 412 rs3067059 04_177_D GAATTTCAACTTGTGTAACTT 413 rs61235135 05_003_I TCTTGCCTCCTTTATTTCC 414 rs61235135 05_003_D GTCTTGCCTCTTTATTTCCT 415 rs113132739 05_013_I CATATCTTCACAAGACAAAGG 416 rs113132739 05_013_D GAAAATCATATCAAAGGGAGA 417 rs142490175 05_065_I CATGTAATGAAAGGAATAAATCC 418 rs142490175 05_065_D AAAACATGTAATGAATAAATCCAT 419 rs572636473 05_074_I CCACCTTCCCCTCCCCT 420 rs572636473 05_074_D TTTCCACCTTCCCCTTTTTT 421 rs138124389 05_087_I ATAGACACTGCAGACTACTAG 422 rs138124389 05_087_D GAAAAAAATAGAGAGGGGAGA 423 rs34990478 05_096_I CAGCAGCATCATGAGATTT 424 rs34990478 05_096_D GCAGCAGCATGAGATTTC 425 rs6149192 05_115_I TGAGACCCTAAACAGAGGA 426 rs6149192 05_115_D CTTGTGAGACCCAGTTAAG 427 rs145918302 05_119_I ATAGGGGAACATCTAGATAAC 428 rs145918302 05_119_D GCTCATAGGGGATCTAGATAACA 429 rs66881681 05_132_I AGCAGAACAGGAGACTAGG 430 rs66881681 05_132_D AGCAGAACAGACTAGGTTG 431 rs10701589 05_141_I CCACTCTGATTGGTTTCCG 432 rs10701589 05_141_D CTTCCACTCTGGTTTCCG 433 rs3832355 05_151_I GTGCTCTTACTCAGTTAATGA 434 rs3832355 05_151_D AGGTGCTCTTAGTTAATGATG 435 rs10560231 05_180_I CACTAGGTCAATGATAACTTAG 436 rs10560231 05_180_D CACTAGGTCAATAACTTAGTAC 437 rs35948562 06_007_I CATTGTAACTCAGTTTTCCC 438 rs35948562 06_007_D CATTGTAACTGTTTTCCCTC 439 rs56071028 06_016_I TCAGGTAGCAGAGAAGGG 440 rs56071028 06_016_D TTCAGGTAGAGAGAAGGGA 441 rs10529292 06_031_I TCRAAAGCACAGCCAGAGA 442 rs10529292 06_031_D TTTCRAAAGCGCCAGAGAC 443 rs376539574 06_057_I TATAAATCATTATTTTAACAGG 444 rs376539574 06_057_D GATTATAAATCATTTAACAGG 445 rs68133212 06_071_I GTTCCTCATCTTTCATGGT 446 rs68133212 06_071_D CTGTTCCTCATTCATGGTT 447 rs139823267 06_077_I CAGACTCAGTTCATGAACTC 448 rs139823267 06_077_D TCAGTTCAGACTCCACTGAC 449 rs144273778 06_087_I GCAGTTAGAAGGAACACTC 450 rs144273778 06_087_D TGCTGTATGCTGCTATTTG 451 rs56343259 06_096_I TGAATGCCCGCCCACTC 452 rs56343259 06_096_D CACTGAATGCCCACTCA 453 rs573860910 06_113_I GTGTGAGATGGGTATCTCA 454 rs573860910 06_113_D GTGTGAGATGGTATCTCAT 455 rs141141409 06_125_I ACATGTCAGTTGTTTCTTAAAT 456 rs141141409 06_125_D ATTACATGTCAGTTTCTTAAATAA 457 rs71675135 06_135_I CAGGGGAATGAATGATTTTG 458 rs71675135 06_135_D GTCAGGGGAATGATTTTGA 459 rs140327598 06_143_I CAACATTGAACAAAGTCCTTG 460 rs140327598 06_143_D TATACAACATTGTCCTCATGG 461 rs68078431 06_153_I ATTTCCCCAATTTGATAATTTTT 462 rs68078431 06_153_D TTGAATATTTCTTTTTTGTTCAG 463 rs11278298 06_158_I GCTTTCATTCAGTCAGTCTC 464 rs11278298 06_158_D AACTATGCTTTCAGTCTCTG 465 rs566489451 06_167_I GCTGATAACATTCATTCATTC 466 rs566489451 06_167_D GGCTGATAACATATTCATTCA 467 rs35345873 07_010_I CAATCAATGGGTGGAACTG 468 rs35345873 07_010_D CAATCAATGGTGGAACTGG 469 rs71552214 07_023_I GATTTTGCCTGATAACCTTC 470 rs71552214 07_023_D TGCTGCTGATTTCTTCTCTT 471 rs34786735 07_040_I TGAGAAAAGCCCGTGAATG 472 rs34786735 07_040_D TGAGAAAAGCCGTGAATGT 473 rs377131771 07_062_I CCATTCGATGACGATTCCA 474 rs377131771 07_062_D CATTCAATTCCATCCGATAATA 475 rs1610906 07_082_I CATGATGGTATTATGATCTAGT 476 rs1610906 07_082_D CATGATGGTATGATCTAGTATG 477 rs112677752 07_097_I CAGTTAATGTATTTGGTTTCAC 478 rs112677752 07_097_D CAGTTAATGTTTCACCTGC 479 rs35830730 07_112_I CTGAGGCAGGAGAATCAC 480 rs35830730 07_112_D GCTGAGGCAGAGAATCAC 481 rs3216282 07_126_I ATTAACTCAGATAGCCCTAAG 482 rs3216282 07_126_D ATTAACTCAGCCCTAAGAAG 483 rs35575707 07_140_I TATTTGGCAGAGTCTTTTGT 484 rs35575707 07_140_D ATATTTGGCAGTCTTTTGTTT 485 rs71520104 07_153_I CTTATTTTCTGTACAGTGTTTTCAC 486 rs71520104 07_153_D CTTATTTTCACTACGGTCAC 487 rs35146459 08_002_I TGTCTTTGAGGTTTCCTCC 488 rs35146459 08_002_D TGTCTTTGAGTTTCCTCCC 489 rs36048750 08_013_I CATTAGTTTTCCCCATTTTACT 490 rs36048750 08_013_D ACATTAGTTTTCCCATTTTACTT 491 rs34168882 08_033_I AGCTTCCTCAGGTAAAATATTT 492 rs34168882 08_033_D GGAAAGCTTCCTCAGTAAAATATT 493 rs35604660 08_058_I TCGTACAAAGTGTCTACACTACA 494 rs35604660 08_058_D TCTCGTACAAAGTCTACACTACA 495 rs34067160 08_064_I GCTAAACCCAAAATATGAGTG 496 rs34067160 08_064_D GCTAAACCCAATATGAGTGT 497 rs138172268 08_082_I GACACTCTGTGTATCTAGCT 498 rs138172268 08_082_D CGACACTCTGTATCTAGCT 499 rs35679778 08_103_I ACAGTGGACTGTGGGGGT 500 rs35679778 08_103_D ACAGTGGATGTGGGGGTG 501 rs11323264 08_125_I CTCTGTGCAGGCACAGGT 502 rs11323264 08_125_D CCTCTGTGCAGCACAGGT 503 rs6150855 08_139_I CAAAGGCTGAGCAGATGC 504 rs6150855 08_139_D CCTCGCAAATGCCGGCT 505 rs147918543 09_000_I ACTTTTCTTTTCTCTGAATTTATATAG 506 rs147918543 09_000_D CACTTTTCTTTTCTTGAATTTATATAG 507 rs66509579 09_021_I CAGAAAATGATCATGATGCACA 508 rs66509579 09_021_D TAGCAGAAAATGATGCACATTT 509 rs371766957 09_064_I AGTCTATTGGAAATGTGCTAC 510 rs371766957 09_064_D CTAAGTCTATTCTGTGCTACTG 511 rs71493646 09_072_I ATGTGCTCCTCTCAACATC 512 rs71493646 09_072_D CATCTATGTGCTCAACATCC 513 rs34499887 09_084_I CAAAAATGGCAGTAGTGGGTCA 514 rs34499887 09_084_D AAAATGGCATAGTGGGTCAGG 515 rs59923204 09_109_I GTCTCAGCTCCTCCATTTGT 516 rs59923204 09_109_D GTCTCAGCTCTCCATTTGT 517 rs55952736 09_117_I ATTCAGTTATAGCAACAGAAA 518 rs55952736 09_117_D TATTCAGTTAAACAGAAAACAG 519 rs71953876 09_132_I AAGCCTCCACCCACCTTG 520 rs71953876 09_132_D AAAGCCTCCACCTTGCAG 521 rs368278029 10_001_I ACTATACTATATAATGTTACAC 522 rs368278029 10_001_D ACTATACTATATGTTACACTG 523 rs71281575 10_026_I GGGCTCAAGTGATCCTCCC 524 rs71281575 10_026_D GGGCTCAAGTATCCTCCCG 525 rs202245860 10_035_I TGCTTGAACCTGGGAGGTT 526 rs202245860 10_035_D TGCTTGAACTGGGAGGTTG 527 rs34948479 10_047_I ATGATACAGAGAGGCCCACT 528 rs34948479 10_047_D AATGATACAGAGGCCCACTG 529 rs10552811 10_071_I TGCCCAGGCTACACCCT 530 rs10552811 10_071_D GATGCCCAGTACACCCTG 531 rs10555357 10_085_I TGGCTCTTATGCCTTGCC 532 rs10555357 10_085_D TGGCTCTTGCCTTGCCTA 533 rs140576359 10_117_I GTTGCCGATATTCCAGGA 534 rs140576359 10_117_D AAATGTTGCCAGGAGGTG 535 rs10544160 10_128_I TTCAATGTTATACTCGTCCAT 536 rs10544160 10_128_D TTCAATGTTACTCGTCCATG 537 rs10583916 11_006_I GGGAATAACTGAGCATTCTG 538 rs10583916 11_006_D TGGGAATAACAGCATTCTG 539 rs113764748 11_020_I CATTAGCATAGCTGGATTTC 540 rs113764748 11_020_D GCATTAGCATGGATTTCCT 541 rs57958958 11_034_I GGGGAGCAAATGAATTACCAT 542 rs57958958 11_034_D TTATGGGGATACCATATAAC 543 rs138278630 11_059_I CATTGTGGAAGACTATGTG 544 rs138278630 11_059_D CATTGTGGAAACTATGTGG 545 rs74933486 11_084_I ATGAGTCTCAGTTTCTTCAT 546 rs74933486 11_084_D AAATGAGTCTGTTTCTTCATT 547 rs35847449 11_094_I ATCCAGAGTCCATAGAGTGA 548 rs35847449 11_094_D CATCCAGAGTCATAGAGTGA 549 rs143339028 11_111_I CTAACAAAAAGAAGACCATCT 550 rs143339028 11_111_D TCTAACAAAAAGACCATCTGT 551 rs11394480 11_135_I TCCGCAGTGGCAGGAGAG 552 rs11394480 11_135_D TTCCGCAGTGCAGGAGAGC 553 rs10533848 12_013_I ACACTCAGTTCTCTATTTCAG 554 rs10533848 12_013_D ACACTCAGTTCTATTTCAGAG 555 rs35955982 12_024_I TGCMTCCTATATATTTTCAGG 556 rs35955982 12_024_D TTGCMTCCTATATTTTCAGGTG 557 rs10571534 12_074_I AATGTGCAGAGTTTGAGCA 558 rs10571534 12_074_D GAAATGTGCAGTTTGAGCAA 559 rs10689649 12_090_I GTTTCCAAAACTCTTAGTATCA 560 rs10689649 12_090_D AGTTTCCAAATTAGTATCAAAC 561 rs150767158 12_100_I GCCTTCTTCTCATAAGAACCC 562 rs150767158 12_100_D CATGCCTTCTTAAGAACCCT 563 rs10706208 12_128_I TCAAACTCTTTTGGAAACGTCAAAG 564 rs10706208 12_128_D TCAAACTCTTTTGAAACGTCAAAGTCA 565 rs142669819 13_039_I AGGCAAATGCAATTGATTTC 566 rs142669819 13_039_D CCCTAGGCAAATTGATTTCA 567 rs5803618 13_053_I AAGCATTAGCTTTGTCTACT 568 rs5803618 13_053_D AAGCATTAGTTTGTCTACTT 569 rs371764729 13_069_I AGTCAGCAAACAACAGATGCTGG 570 rs371764729 13_069_D AGTCAGCAAACAGATGCTGGAGA 571 rs67650090 13_087_I CATTATCATTGTCTGCATAATCTG 572 rs67650090 13_087_D GTCATTATCATTGCATAATCTGC 573 rs55812371 14_056_I GAATATATACATGTTCCATTTTAC 574 rs55812371 14_056_D GGAATATATTTTTACTAGGAACC 575 rs141061555 14_091_I TAATAAGTAGTGAGTGAAATACC 576 rs141061555 14_091_D CTTAATAAGTAGTGAAATACCAG 577 rs144457716 15_046_I GTTGGAGGACTGACAGTTCACA 578 rs144457716 15_046_D AAGTTGGAGGACAGTTCACATT 579 rs112548522 15_067_I CTCAGTAAGAGTTTGTCAAATG 580 rs112548522 15_067_D GAACTCAGTAAGTCAAATGGG 581 rs112792286 15_087_I AGTTATTAAAACATTATTTTCTGTAAGA 582 rs112792286 15_087_D CAGTTATTAAAACATTTTCTGTAAGACC 583 rs112880243 15_097_I CCTAGCTTTTACTTAAGTGCAG 584 rs112880243 15_097_D AGCCTAGCTTTTAAGTGCAG 585 rs35379530 16_000_I TGCATCCTATGAAAATACCC 586 rs35379530 16_000_D GTGCATCCTATAAAATACCCT 587 rs34436424 16_012 _I AATGATTAGCGCAATGTGAT 588 rs34436424 16_012 _D TTAATGATTAGCAATGTGATAT 589 rs3841767 16_024_I CATCTGGCCCTTGTTCTC 590 rs3841767 16_024_D ATCATCTGGCTTGTTCTCT 591 rs35709162 16_064_I GTTGTATAGGGACAGGAGC 592 rs35709162 16_064_D TGTTGTATAGGACAGGAGCT 593 rs34816330 16_076_I GACTTCATGTCCCTCTTGAAA 594 rs34816330 16_076_D TGACTTCATGTCCTCTTGAAA 595 rs11330085 17_001_I GGACTCTGAGCCAGTACCCC 596 rs11330085 17_001_D GGACTCTGAGCAGTACCCC 597 rs5821134 17_057_I TGACTGTTACTCAGGAGAGT 598 rs5821134 17_057_D CTATGACTGTTAGGAGAGTAAT 599 rs141730340 17_083_I ACACCTGTGCAGCGCCT 600 rs141730340 17_083_D AGCACACCTTCCATGAGA 601 rs35023498 18_001_I GGTGCTGTTCTCGAGATAGT 602 rs35023498 18_001_D TGGTGCTGTTCGAGATAGT 603 rs35452393 18_030_I AGGGGAAACATGAGCAGTTG 604 rs35452393 18_030_D AAGGGGAAACGAGCAGTTGTG 605 rs33990768 18_051_I TCACTCAATGGTGCCAGGCA 606 rs33990768 18_051_D CATCACTCAATGTGCCAGGCA 607 rs66933419 18_065_I AGTGATGGCCCCCACACTTG 608 rs66933419 18_065_D ACAGTGATGGCCCACACTTG 609 rs66502030 18_075_I CTGAGACMCTGTGGCTCCTC 610 rs66502030 18_075_D GAACTGAGACMCTGGCTCCTC 611 rs60503836 19_002_I TGATCTCGGCTAACTGCGAC 612 rs60503836 19_002_D TGATCTCGGTAACTGCGACC 613 rs112906660 19_015_I CCCCTGCAAATAATAAGGA 614 rs112906660 19_015_D ATCCCCTGCAAATAAGGAATG 615 rs112877961 19_029_I GAAGCCAGCAGCCTGCTG 616 rs112877961 19_029_D GGAAGCCAGAGCCTGCTG 617 rs34242584 19_044_I ATCATTTTATTGTGATTCTTAGC 618 rs34242584 19_044_D GTATCATTTTATTGATTCTTAGCT 619 rs79282333 20_005_I TATCTACTCATGTGTGTAGTTA 620 rs79282333 20_005_D TTATCTACTCGTGTGTAGTTAT 621 rs35894782 20_020_I CACAAAATAGAATAGGGTTTTC 622 rs35894782 20_020_D GGCCACAAAATAGGGTTTTCC 623 rs73622051 20_039_I GCCTTTCTTTATTTATAACTTCTC 624 rs73622051 20_039_D GAGCCTTTCTTTATAACTTCTCT 625 rs66555516 20_058_I TTTCCATGTGGTGGACAGG 626 rs66555516 20_058_D ATTTCCATGTGGACAGGTG 627 rs138066060 21_010_I ACTACTCCCAGGTGTATGT 628 rs138066060 21_010_D TACTACTCCAGGTGTATGTG 629 rs10583984 21_038_I AATATGCAGAGACTCTGAAA 630 rs10583984 21_038_D GAAATATGCAGACTCTGAAAT 631 rs112408318 21_042_I AAGACACATACAAGAACGTC 632 rs112408318 21_042_D CAAAGACACAAGAACGTCC 633 rs60228580 22_033_I TACTCACATGGTTGTCAACA 634 rs60228580 22_033_D CTACTCACATGTTGTCAACA 635 rs67057410 22_046_I ACACAGGCTGGGAGTGTAGT 636 rs67057410 22_046_D CACACAGGCTGGAGTGTAGTG 637 rs35997669 X_004_I CATCTTCAACAACATGCG 638 rs35997669 X_004_D CCATCTTCAAAACATGCG 639 rs57522085 X_029_I TTCCTACTTCCTAGGGAAC 640 rs57522085 X_029_D TTCCTACTTCTAGGGAACC 641 rs202172626 X_083_I CTTTCATCTTAACTTAAGTTACTG 642 rs202172626 X_083_D ACACTTTCATCTTAAGTTACTG 643 rs34991528 X_095_I GTGATGTTGCCATCCTTG 644 rs34991528 X_095_D GTGATGTTGCATCCTTGAT 645 rs35020323 X_138_I CAGCAACTCTATTTAAATAAATG 646 rs35020323 X_138_D CAGCAACTCTAAATAAATGGA 647 rs10689407 X_141_I AAATTATTTCACATGAGTGCT 648 rs10689407 X_141_D GAAATTATTTCACGAGTGCT

Для генотипирования с помощью гибридизации, аллель-специфичные ДНК-зонды закрепляются любым известным способом на подложке. Для этого наиболее применима технология биочипов, как двумерных, с креплением зондов к плоскости, так и трехмерных, с иммобилизацией в массе пористого полимерного носителя. Для закрепления ДНК-зондов, к ним может быть привита соответствующая химическая группа, или любое иное соединение, способствующее реализации данной цели. ДНК-зонды располагают на подложке согласно заданной схемы. Схема расположения ячеек может быть произвольной, мы использовали схему, приведенную на Фиг. 1. Для проведения гибридизации ПЦР-продукт обычно смешивают с буферным раствором, который также может содержать денатурирующие агенты (формамид, диметилсульфоксид, гуанидин и другие), и наносят на биочип. Условия гибридизации подбираются таким образом, чтобы флуоресцентно-меченные одноцепочечные фрагменты ДНК специфично связывались с полностью комплементарными им ДНК-зондами, локально иммобилизованными на биочипе. Для того, чтобы определить генотип образца, необходимо зарегистрировать флуоресцентное изображение биочипа. ДНК-зонды, образовавшие совершенные дуплексы с исследуемым фрагментом ДНК, будут флуоресцировать в соответствующем флуорофору диапазоне длин волн. Для регистрации флуоресцентного изображения могут быть использованы сканеры, широкопольные микроскопы, или иные подходящие для этого средства. Флуоресцентное изображение анализируется и обсчитывается с помощью программного обеспечения. Пример такого изображения приведен на Фиг. 2. На Фиг. 3 приведены варианты гибридизационного изображения в зависимости от аллельного состояния маркера в образце. Интерпретация результатов генотипирования проводится экспертом исходя из общеизвестных генетических принципов наследования биаллельных маркеров.

Список литературы:

1. Степанов B.A., Балановский О.П., Мельников А.В., Лаш-Завада А.Ю., Харьков В.Н., Тяжелова Т.В., Ахметова В.Л., Жукова О.В., Шнейдер Ю.В., Шильникова Н.Н., Боринская С.А., Марусин А.В., Спиридонова М.Г., Симонова К.В., Хитринская И.Ю., Раджабов М.О., Романов А.Г., Штыгашева О.В., Кошель СМ., Балановская Е.В., Рыбакова А.В., Хуснутдинова Э.К., Пузырев В.П., Янковский Н.К. Характеристика популяций Российской Федерации по панели пятнадцати локусов, используемых для ДНК-идентификации и в судебно-медицинской экспертизе.// Acta Naturae. 2011. Т.3. №2. С.59-71.

2. Ковтун П.А. Куклев М.Ю. Лапенков М.И. Плахина И.В. Недостаточность аутосомных STR-маркеров для достоверного установления родства в дуэтах родитель - ребенок // Судебно-медицинская экспертиза. М., 2013. №6. С. 17-22.

3. Ефремов И.А. Носиков В.В. Скоблилов Е.Ю. Законова А.Ф. Иванов П.Л. О возможных затруднениях молекулярно-генетической экспертизы при недостаточно высокой индивидуализирующей значимости результатов (на примере сложного случая оспариваемого материнства). // Судебно-медицинская экспертиза. М., 2001. №1. С. 11.

4. Alonso A, Martin P, C, Garcia P, Fernandez de Simon L, Iturralde M, A, Atienza I, Capilla J, J, Martinez P, Vallejo G, O, E, Real P, Alvarez D, A, Sancho M. Challenges of DNA profiling in mass disaster investigations. // Croatian medical journal, 2005. Vol. 46(4): P. 540-548.

5. Burgarella C, M. Mutation rate estimates for 110 Y-chromosome STRs combining population and father-son pair data. // Eur. J. Hum. Genet. 2011. №19, P.70-75.

6. Balanovsky,O. Toward a consensus on SNP and STR mutation rates on the human Y-chromosome Hum Genet. 2017. Vol.136, P. 575

7. A kind of mankind's autosome and Y chromosome InDel genetic polymorphisms site composite amplification reagent kit and its application. Патент №CN106868150A.

8. Pena HB, Pena SD. Automated Genotyping of a Highly Informative Panel of 40 Short Insertion-Deletion Polymorphisms Resolved in Polyacrylamide Gels for Forensic Identification and Kinship Analysis. Transfus Med Hemother. // 2012. Vol. 39. №3. P.211-216.

9. Bobby L, La Rue, Ge J, King JL, Budowle B. A validation study of the Qiagen Investigator DIPplex® kit; an INDEL-based assay for human identification . Int J Legal Med // 2012. Vol.126 P.725-737

10. Fairley S, Lowy-Gallego E, Perry E, Flicek P. The International Genome Sample Resource (IGSR) collection of open human genomic variation resources. Nucleic Acids Research.// 2020. Vol. 48. P.941-947.

11. Du W, Peng Z, Feng C, Zhu B, Wang B, Wang Y, Chao L, Chen L. Forensic efficiency and genetic variation of 30 InDels in Vietnamese and Nigerian populations. Oncotarget.// 2017; №8 P.88934-88940

Описание чертежей

На Фигуре 1 приведен один из множества возможных вариантов схемы расположения ячеек с олигонуклеотидными ДНК-зондами, который мы использовали для иллюстрации осуществления данного изобретения. Номера на схеме соответствуют номерам олигонуклеотидов в Перечне последовательностей (SEQ ID NO: 325-648)Данная схема не является принципиальной и дизайн ее может быть произвольным.

На Фигуре 2 приведено флуоресцентное изображение биочипа после проведения гибридизации.

На Фигуре 3 приведены флуоресцентные изображения трех вариантов аллельного состояния любого из используемых в данном изобретении маркера: гомозигота по инсерции (In/In, Фиг. 3А), гетерозигота (In/Del, Фиг.3Б) и гомозигота по делеции (Del/Del, Фиг. 3В).

Осуществление изобретения

Пример 1. Олигонуклеотидный биочип для генотипирования 162 инсерционно-делеционных полиморфизмов.

Олигонуклеотидные ДНК-зонды синтезировалит согласно перечню SEQ ID N0: 325-SEQ ID N0: 648 (Таблица №2) таким образом, что 3’-конец олигонуклеотидов содержит спейсер со свободной аминогруппой. Биочип изготавливали методом сополимеризации олигонуклеотида в акриламидном геле аналогично описаному ранее (Патент на изобретение N 2175972 «Способ иммобилизации олигонуклеотидов, содержащих непредельные группы, в полимерных гидрогелях при формировании микрочипа» Мирзабеков А.Д., Рубина А.Ю., Паньков С.В., Чернов Б.К. Приоритет от 28.12.1999), а именно, готовили полимеризационную смесь, соответствующую 5% полиакриламидному гелю: 5% акриламид-бисакриламид (19:1), 40% глицерин, 2% ацетон, 1,2% ТЕМЕД, 0,1 М натрий фосфатный буфер, pH 7,0. Концентрация ДНК-зондов составляла 200 мкМ. Капли наносили с помощью роботизированной станции QArray 2 (Genetix Ltd, New Milton, Hampshire, UK) на пластиковую подложку. Ячейки наносили рядами, согласно схеме на Фиг. 1. Верхние ячейки в каждом ряду соответствуют инсерционным аллелям, а нижние - делеционным. Диаметр капли 50-100 мкм. Полимеризацию проводили под УФ лампой в атмосфере азота. Время экспозиции 40 мин при длине волны 254 нм. После проведения сополимеризации проводили отмывку от непрореагировавших реагентов в дистиллированой воде. Биочип высушивали при комнатной температуре и помещали на хранение в темное сухое место.

Пример 2. Мультиплексная амплификация 162 локусов, содержащих генотипируемые инсерционно-делеционные полиморфизмы методом ПЦР с целью наработки одноцепочечных флуоресцентно меченых фрагментов.

Из слюны испытуемых выделяли ДНК набором Lumipure (ООО «Биотех-индустрия», Москва). Для мультиплексной наработки всех анализируемых генов использовали ПЦР-праймеры SEQ ID NO: 1-324 в концентрации от 1 нМ до 0,5 мкМ, отличающиеся тем, что каждый обратный праймер с четным номером «Seq ID» (Seq ID NO:2, Seq ID NO:4… Seq ID NO:324), имел со стороны 5'-конца универсальную олигонуклеотидную вставку, с последовательностью 5'-TCATTGGATCTCATTA-3'. Флуоресцентно меченый (Су5-, возб./исп.: 640/657 нм) универсальный праймер Су5-TCATTGGATCTCATTA-3'добавляли в конечной концентрации 6 мкМ. ПЦР проводили на амплификаторе T-100 (Bio-Rad laboratories, США) в объеме 25 мкл реакционной смеси, составом: 1× буфер (67 мМ Трис-HCl, pH 8,6, 166 мМ (NH₄)₂SO₄, 0,01% Тритон Х-100), 2,0 мМ MgCl₂, 0,2 мМ каждого из dNTP («Силекс», Россия), ПЦР-праймеры (SEQ ID NO: 1-324) в концентрации от 1 нМ до 0,5 мкМ, 1 мкл геномной ДНК и 2,5 ед. акт. HotTaq-полимеразы («Сибэнзим», Россия). Амплификацию проводили по программе:

№ Температура Время Количество циклов 1 95°С 1 мин 1 2 95°С 30 сек 50 3 64°С 60 сек 4 72°С 20 сек 5 95°С 20 сек 50 6 50°С 10 сек 7 72°С 30 сек 8 72°С 5 мин 1

Пример 3. Гибридизация флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта на биочипе и регистрация результатов.

ПЦР-продукт, полученный в Примере 2 использовали для гибридизации на биочипе, полученном в Примере 1, в буфере следующего состава: 25% формамид (Gibco BRL), 5хSSPE. 30 мкл смеси вносили в гибридизационную камеру биочипа. Гибридизацию проводили в течение 5 ч при температуре 37°С. Отмывку выполняли в буфере 1х SSPE при комнатной температуре в течение 10 мин.

Регистрацию гибридизационной картины производили с помощью универсального аппаратно-программного комплекса (УАПК), производства ООО «БИОЧИП-ИМБ» (Москва). На Фиг.2 приведено флуоресцентное изображение биочипа после гибридизации и отмывки. Описание алгоритма автоматического анализа изображения с помощью программного обеспечения выходит за рамки настоящего изобретения.

--->

SEQUENCE LISTING

<110> Fesenko, Denis O

Ivanovskii, Ivan D

<120> Способ идентификации личности и установления родства с помощью InDel полиморфизмов и набор синтетических олигонуклеотидов для их генотипирования

<130> CID 1.6

<160> 648

<170> PatentIn version 3.1

<210> 1

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_007_F

<400> 1

tggactttat tattatggtc tggagcagca 30

<210> 2

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_007_R

<400> 2

tgcatgagtg attccttaaa accagacac 29

<210> 3

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_031_F

<400> 3

agccatgtag atgctrtcat caacagct 28

<210> 4

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_031_R

<400> 4

tgcaattttg gataccaatg accacaaga 29

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_041_F

<400> 5

actttgtgac cgtcttctct cttgg 25

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_041_R

<400> 6

ccaagagggg tgcactgctc c 21

<210> 7

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_059_F

<400> 7

gcacagaatc cagcaggtag taaggg 26

<210> 8

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_059_R

<400> 8

cacaatgtta aatctgtttg ttaaggggag 30

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_083_F

<400> 9

tgatcactgt attcctgacc cagtttca 28

<210> 10

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_083_R

<400> 10

cactttaact tctgtttaga acacatagt 29

<210> 11

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_101_F

<400> 11

agtgtaaaaa ygactgctta gacatttct 29

<210> 12

<211> 35

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_101_R

<400> 12

tcatttgaca gatattgaat caaattggat tctga 35

<210> 13

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_119_F

<400> 13

agcagcaggt aaaacaacta tcgttc 26

<210> 14

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_119_R

<400> 14

ctaggggagc cagagagcct tttc 24

<210> 15

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_154_F

<400> 15

acagattcct ttgattgcct gatgag 26

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_154_R

<400> 16

gccggtgcat tctccccttc ag 22

<210> 17

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_170_F

<400> 17

cttgtttcag atatgcaggc tgaga 25

<210> 18

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_170_R

<400> 18

tgctrgcaaa cttaggcaat taagttaaca tc 32

<210> 19

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_192_F

<400> 19

tctagttgag tcacttgagc tctattagac 30

<210> 20

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_192_R

<400> 20

aactcctaac tgcttaatgt agcagg 26

<210> 21

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_208_F

<400> 21

tggtcactcc tctttgcact gcg 23

<210> 22

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_208_R

<400> 22

cccatcctcc cgaagcacat ctac 24

<210> 23

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_223_F

<400> 23

ggagaggggt gtccgactca gg 22

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_223_R

<400> 24

ccttcctgag acagctgaaa tgt 23

<210> 25

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_233_F

<400> 25

caacattgca aaaatgaacg ctgactac 28

<210> 26

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_233_R

<400> 26

ctctatactt agtcatttgt tgcatttctg g 31

<210> 27

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_240_F

<400> 27

cttcaatgaa gaactgttaa gaattaaagg c 31

<210> 28

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_240_R

<400> 28

cttaaaatat gtagtgtgta cccaatcatt tgc 33

<210> 29

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_011_F

<400> 29

cacgtgggtg gtcactcaca cc 22

<210> 30

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_011_R

<400> 30

cttatctcca atagatcagt gaagaaacag g 31

<210> 31

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_036_F

<400> 31

gccatagaat ttctctcatg gctctac 27

<210> 32

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_036_R

<400> 32

gtgaaattca gctataagga gatgaagcc 29

<210> 33

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_042_F

<400> 33

agaggagaat gaatgttgga gtaagc 26

<210> 34

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_042_R

<400> 34

cagagtgaca ggtcaacact taccc 25

<210> 35

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_061_F

<400> 35

aggcctgtaa tggattacaa aatggccaca 30

<210> 36

<211> 40

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_061_R

<400> 36

agcaaagtca cattgcaaat tcttgtacat ataatgatgg 40

<210> 37

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_080_F

<400> 37

cagctctaag accacacatt ctgc 24

<210> 38

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_080_R

<400> 38

actggccatg caggtattct agg 23

<210> 39

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_101_F

<400> 39

tcagggttga ccagcagttt aagtg 25

<210> 40

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_101_R

<400> 40

gaattcagtt ttcactcatg agtttagctg 30

<210> 41

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_113_F

<400> 41

aggcggaaat aagtgaccca gagaaaaacg ct 32

<210> 42

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_113_R

<400> 42

tgccgcctcc tgcaactcct tca 23

<210> 43

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_150_F

<400> 43

aggcaccttg tgagaaaaga ttgg 24

<210> 44

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_150_R

<400> 44

cctaggcttg ctgggaagtc ctc 23

<210> 45

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_215_F

<400> 45

acccaagaat atgaaggacc aactg 25

<210> 46

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_215_R

<400> 46

tcatcacatt ctgcactcat aatcagc 27

<210> 47

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_231_F

<400> 47

aggagaccac tcaaagaatc ctactc 26

<210> 48

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_231_R

<400> 48

tcagtttagg tgcacagaat aagtcac 27

<210> 49

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_016_F

<400> 49

aggaccaagg ctgcagagaa agg 23

<210> 50

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_016_R

<400> 50

cggctctcct tccaagtcag gac 23

<210> 51

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_030_F

<400> 51

tgatgtaatt taaagtgagc cagccagacr ta 32

<210> 52

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_030_R

<400> 52

tgactcttct cccacctaac tcaagtttga 30

<210> 53

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_063_F

<400> 53

gttaggaaat ratcccagga aataggaatg 30

<210> 54

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_063_R

<400> 54

ctactccatc ataggctctt gtattgg 27

<210> 55

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_082_F

<400> 55

ctgtgttgta ttctgttatt gctacttgc 29

<210> 56

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_082_R

<400> 56

ttgccattct aagatttctc tcttcctg 28

<210> 57

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_100_F

<400> 57

cgttcacatg tcaggtacta actctc 26

<210> 58

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_100_R

<400> 58

tggtggggat gaggtacaga ctg 23

<210> 59

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_107_F

<400> 59

caatctaagt tgtcttaccc tgtggc 26

<210> 60

<211> 35

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_107_R

<400> 60

tttctagttc tcatattcca tgattgtatt ttgag 35

<210> 61

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_124_F

<400> 61

aggaatgaca ggaaagtctt aatgagc 27

<210> 62

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_124_R

<400> 62

acatcatgca ttgtttgaat catctctg 28

<210> 63

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_162_F

<400> 63

ctctgtcacc taggctggag tgc 23

<210> 64

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_162_R

<400> 64

agaatcactt gaacccggga ggcagtg 27

<210> 65

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_182_F

<400> 65

gagtccctct ctttctactg twtggaatag t 31

<210> 66

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_182_R

<400> 66

agaggtacaa agagaagctg gtacca 26

<210> 67

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_194_F

<400> 67

ttcctggacg tgtgaattga tgc 23

<210> 68

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_194_R

<400> 68

gaagacagac agaacactcc tgc 23

<210> 69

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_008_F

<400> 69

aggatctgga cttgctctgg ggcag 25

<210> 70

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_008_R

<400> 70

gcagggctct gggaaatttg ggtgc 25

<210> 71

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_027_F

<400> 71

tattcactat ggttaccatg cagtacaag 29

<210> 72

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_027_R

<400> 72

tgttgaacaa acagtacaaa gtttcagac 29

<210> 73

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_045_F

<400> 73

cagatcgctg ggctattagg tg 22

<210> 74

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_045_R

<400> 74

tactggccag ctgcagcctc tac 23

<210> 75

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_056_F

<400> 75

gctgtggagt ataatttgta gggagac 27

<210> 76

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_056_R

<400> 76

catactgtat cttacttgag tgtttcatct c 31

<210> 77

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_065_F

<400> 77

tgggaatact agggaagcat tgggaagtga ct 32

<210> 78

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_065_R

<400> 78

rgctattggt accagacata aacrtatatg ca 32

<210> 79

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_085_F

<400> 79

gttcaagcaa taatcattga tctgtgcc 28

<210> 80

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_085_R

<400> 80

gtgagtctta ttttttccct gtgtctgt 28

<210> 81

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_112_F

<400> 81

agtaacttct ccatgcatca cattattc 28

<210> 82

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_112_R

<400> 82

cacaaacaga ggccaggtaa 20

<210> 83

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_137_F

<400> 83

acctgccctg actatatctg ta 22

<210> 84

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_137_R

<400> 84

catatcagct ttttcctcct ccttca 26

<210> 85

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_154_F

<400> 85

tctcacaaaa tatacatgta gcagtggata 30

<210> 86

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_154_R

<400> 86

gttactgaag gtagtatagc tctaggca 28

<210> 87

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_177_F

<400> 87

ccttcccttc cattttgtat atctg 25

<210> 88

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_177_R

<400> 88

cctagtcaga ggaacatttt gaag 24

<210> 89

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_003_F

<400> 89

ctctgttcct ttgctgaaaa atgac 25

<210> 90

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_003_R

<400> 90

agatgttttc aggtgggagg aata 24

<210> 91

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_013_F

<400> 91

ggaagatgat gtgaatgtac acaag 25

<210> 92

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_013_R

<400> 92

tgtggcagtc ctagtccagt ctc 23

<210> 93

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_065_F

<400> 93

cccatatatt ttccttcctg gtgca 25

<210> 94

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_065_R

<400> 94

ccctaccctg acaaatacat gaacta 26

<210> 95

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_074_F

<400> 95

tgttccttat ttctggaaga gccc 24

<210> 96

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_074_R

<400> 96

tgccagacct atgcataaaa aagg 24

<210> 97

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_087_F

<400> 97

gctaaacatt gagcacacat gga 23

<210> 98

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_087_R

<400> 98

gattgttttt taacccatgc cctttc 26

<210> 99

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_096_F

<400> 99

ctagcaaggg tgagaattag tgact 25

<210> 100

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_096_R

<400> 100

gaacacatct tggtaagcag cact 24

<210> 101

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_115_F

<400> 101

tgcagttcag ctgacttcac 20

<210> 102

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_115_R

<400> 102

ggggttaaga gtttcagcat g 21

<210> 103

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_119_F

<400> 103

cctaactacc tgtttacaag gcaattca 28

<210> 104

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_119_R

<400> 104

cacagtttgg aaatggttaa ttgtattct 29

<210> 105

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_132_F

<400> 105

ggaactccag gacccaacag a 21

<210> 106

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_132_R

<400> 106

agccatgttt ctgtctcagc a 21

<210> 107

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_141_F

<400> 107

aggcttctaa ttggtttccg ca 22

<210> 108

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_141_R

<400> 108

caagatataa taacaaatca gagtgga 27

<210> 109

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_151_F

<400> 109

tgctgctgtg aagatgagaa gg 22

<210> 110

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_151_R

<400> 110

gtaggggctt tggtaaatat agtca 25

<210> 111

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_180_F

<400> 111

agccatgcgt tgctttaagc ca 22

<210> 112

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_180_R

<400> 112

cccagcctgt agtatgtttc aatatcat 28

<210> 113

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_007_F

<400> 113

ctcactacca agtcaaaccc a 21

<210> 114

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_007_R

<400> 114

tgagggaata ggcgcagtat a 21

<210> 115

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_016_F

<400> 115

catggtccca aagccatcac agc 23

<210> 116

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_016_R

<400> 116

acacattgct ccttcttcat catc 24

<210> 117

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_031_F

<400> 117

agcctctttg crtggctctt tctggc 26

<210> 118

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_031_R

<400> 118

agtgtgtacg atttcatttc tgatgtctct 30

<210> 119

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_057_F

<400> 119

agatcctcgc taatcaatta gagcaca 27

<210> 120

<211> 34

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_057_R

<400> 120

agtattcaca tatttgcaat taggatatat tcct 34

<210> 121

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_071_F

<400> 121

ccaaggtaaa catcgttagt ttctcca 27

<210> 122

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_071_R

<400> 122

gaagcccaaa cagaaaagca ag 22

<210> 123

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_077_F

<400> 123

ttctcaatga atacagcctg tgact 25

<210> 124

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_077_R

<400> 124

cttagtaaat agcctaagcg attttgtca 29

<210> 125

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_087_F

<400> 125

cagttcccac ctgtatgctg tg 22

<210> 126

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_087_R

<400> 126

aggagggagg tggatctcag c 21

<210> 127

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_096_F

<400> 127

ttgcctccaa agtctctgac ac 22

<210> 128

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_096_R

<400> 128

acaaatgact ctggcagagg tg 22

<210> 129

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_113_F

<400> 129

actttttaat gatcaccatt ctaactggtg 30

<210> 130

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_113_R

<400> 130

tcagagaaat gcaaatcaaa accacaatg 29

<210> 131

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_125_F

<400> 131

ataggcagct gtggtatggg a 21

<210> 132

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_125_R

<400> 132

gtacctggct cccctgctgt 20

<210> 133

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_135_F

<400> 133

agggaaatga aagacaatta gagaagt 27

<210> 134

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_135_R

<400> 134

tgtccctgat ctgtgttcac ac 22

<210> 135

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_143_F

<400> 135

atcttaaaat gctagacact gttttagag 29

<210> 136

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_143_R

<400> 136

tttcttccac tagaatgtaa gcc 23

<210> 137

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_153_F

<400> 137

gtgcacatgc atgtttgaat ag 22

<210> 138

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_153_R

<400> 138

gtatattcaa aacaagagtc gaagcca 27

<210> 139

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_158_F

<400> 139

gtgtgacgtt tcagttaata gtggtgg 27

<210> 140

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_158_R

<400> 140

tctcctgcat aaagtatgaa ttttcgt 27

<210> 141

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_167_F

<400> 141

ccttgagcct ggctgtaatc 20

<210> 142

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_167_R

<400> 142

catggtaggc ccacaggaaa ta 22

<210> 143

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_010_F

<400> 143

agaagagaaa agtgaggtag ttgcta 26

<210> 144

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_010_R

<400> 144

atggttgcat attaatgcct aagcttg 27

<210> 145

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_023_F

<400> 145

cccaagcact tttctatatt ctatcacctc tg 32

<210> 146

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_023_R

<400> 146

ttgggttaat gtgtgttgta ttcagc 26

<210> 147

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_040_F

<400> 147

gcataattga tagatcagct ctagaagaat yac 33

<210> 148

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_040_R

<400> 148

actgctttcc tcacagattt gtacattca 29

<210> 149

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_062_F

<400> 149

ggatgattcc acttgaatcc attcaaaga 29

<210> 150

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_062_R

<400> 150

cctttggaac cattgaatag aaaggaatg 29

<210> 151

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_082_F

<400> 151

ccagtagaca caatgatatt gacaaatag 29

<210> 152

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_082_R

<400> 152

gcaggatatt ttgatattga gagtttg 27

<210> 153

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_097_F

<400> 153

cagagactat cttaaatatg catttctatg 30

<210> 154

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_097_R

<400> 154

cctaacagct cgacaaatat tgcag 25

<210> 155

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_112_F

<400> 155

ctgtaatccc agctactcag gaggctg 27

<210> 156

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_112_R

<400> 156

tctgcttccc gggttcaagt gattc 25

<210> 157

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_126_F

<400> 157

ccaagttcat acaaagttca caacca 26

<210> 158

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_126_R

<400> 158

caacaatgaa aaaaacatct atagtagcac t 31

<210> 159

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_140_F

<400> 159

ttccacattg tgctggtggt tct 23

<210> 160

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_140_R

<400> 160

ctcaacactg gcaggtatag ca 22

<210> 161

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_153_F

<400> 161

tgcggttcca tcaaagccac arccctg 27

<210> 162

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_153_R

<400> 162

aacaagacat agggtgaccg tagtg 25

<210> 163

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_002_F

<400> 163

gactgtccat tgtttgctgc acttgtc 27

<210> 164

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_002_R

<400> 164

agggaatgac gctcatggga gg 22

<210> 165

<211> 36

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_013_F

<400> 165

tccatgagaa taactatagt atgctaagta atacat 36

<210> 166

<211> 34

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_013_R

<400> 166

tccactgaga atacatgatc tattaagtaa aatg 34

<210> 167

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_033_F

<400> 167

tggacccaat aaaacttggt gaaataaaat g 31

<210> 168

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_033_R

<400> 168

tcaagtcttg tcctatcatg tttctgatga 30

<210> 169

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_058_F

<400> 169

tgctctctga acagacgtca tgg 23

<210> 170

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_058_R

<400> 170

gctatacagt gctggagaaa tactctg 27

<210> 171

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_064_F

<400> 171

acccctcacc ctttactttg tagg 24

<210> 172

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_064_R

<400> 172

caaagaggca tattttgggg tgg 23

<210> 173

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_082_F

<400> 173

cagggtttgt gaatgcacca atc 23

<210> 174

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_082_R

<400> 174

tttccaagtc cccaccagag gag 23

<210> 175

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_103_F

<400> 175

taagctcagg gaagcactgc ctgaca 26

<210> 176

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_103_R

<400> 176

agagcaacca tcccccaccc cc 22

<210> 177

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_125_F

<400> 177

tccacggcac cacattcaag gcctctg 27

<210> 178

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_125_R

<400> 178

agcagaggcg aagtgtgaga cctgt 25

<210> 179

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_139_F

<400> 179

ggagtaaaaa cttcctgagg cctc 24

<210> 180

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_139_R

<400> 180

gcaaaccatt caggaagcgt gga 23

<210> 181

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_000_F

<400> 181

acactcactg atcaaggatt tctaaaacca 30

<210> 182

<211> 37

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_000_R

<400> 182

agcctataag acattccttt atgagtgata caaagtc 37

<210> 183

<211> 40

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_021_F

<400> 183

gggttatttc tatataaaaa cgagcataaa attatagcag 40

<210> 184

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_021_R

<400> 184

taacaccatg ttttttcttc aaaaatgtgc atc 33

<210> 185

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_064_F

<400> 185

gtactgacag aaggctcatg agtta 25

<210> 186

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_064_R

<400> 186

attaccacac cactctttac tacag 25

<210> 187

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_072_F

<400> 187

attcctcttg acatccagcc accc 24

<210> 188

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_072_R

<400> 188

ctagcaagac agacatacaa gctg 24

<210> 189

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_084_F

<400> 189

cctcgaggtg gcttgtttgr gtgc 24

<210> 190

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_084_R

<400> 190

acctgcccac caacctgacc ca 22

<210> 191

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_109_F

<400> 191

agaccagaaa ttggaaaatg ttacagtggt c 31

<210> 192

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_109_R

<400> 192

accaaggaca catagctgac aaatgga 27

<210> 193

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_117_F

<400> 193

aatttatttt ctccataaac tacctagtct ca 32

<210> 194

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_117_R

<400> 194

gcaatgttat tgttccattg tgtcttagtc t 31

<210> 195

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_132_F

<400> 195

ttactgagat gcccaacctg cgt 23

<210> 196

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_132_R

<400> 196

ccgtttcctc cgcacttatg ctgc 24

<210> 197

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_001_F

<400> 197

gctataccat ttctcctatt gtata 25

<210> 198

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_001_R

<400> 198

aggtagcrta gagtagaaga aacagtgtaa c 31

<210> 199

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_026_F

<400> 199

ccaggctggt ctcaaactcc tgggc 25

<210> 200

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_026_R

<400> 200

taggaggccg aagcgggagg 20

<210> 201

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_035_F

<400> 201

tactcaggag gctgaggcag gag 23

<210> 202

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_035_R

<400> 202

tgcggtggca cgatctgggc tc 22

<210> 203

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_047_F

<400> 203

gagtcatgat tcacragcag ttgtaagcaa tg 32

<210> 204

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_047_R

<400> 204

tggggaaaac tgggtacagg gtacagt 27

<210> 205

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_071_F

<400> 205

gagtcaccca gagggatttt gacaat 26

<210> 206

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_071_R

<400> 206

cccacttaga aaaatccaat gagaatctca 30

<210> 207

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_085_F

<400> 207

tcagccacag aggaacagcc ag 22

<210> 208

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_085_R

<400> 208

gctttgccca actcacagaa ttac 24

<210> 209

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_117_F

<400> 209

aggaattcat ggcttaggtt ggaac 25

<210> 210

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_117_R

<400> 210

ccgatctata ttcctgttct gatgtc 26

<210> 211

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_128_F

<400> 211

cagcactgaa atttaaaatc ctggtcct 28

<210> 212

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_128_R

<400> 212

ccgccaggga aaacaagcca catg 24

<210> 213

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_006_F

<400> 213

acttcctgta tcattaattc cacctag 27

<210> 214

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_006_R

<400> 214

gcagcactct gaacttttta ttgtctc 27

<210> 215

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_020_F

<400> 215

taggagttct gactcagttc tggtg 25

<210> 216

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_020_R

<400> 216

ctgaccaaaa ctcaatggcc tttc 24

<210> 217

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_034_F

<400> 217

atgggcgtat aaatattgcc tttctca 27

<210> 218

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_034_R

<400> 218

agacacactc cctaaggtgt tatatg 26

<210> 219

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_059_F

<400> 219

tggtgggagt gtaaattagt tcaacca 27

<210> 220

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_059_R

<400> 220

tggttctaga tccttgagga atcaccac 28

<210> 221

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_084_F

<400> 221

ctaccagctc tttgtgtgtc ctaga 25

<210> 222

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_084_R

<400> 222

ttcttagaac tttccatatg gccattg 27

<210> 223

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_094_F

<400> 223

ttatgctata aattagcaaa cccaacacat c 31

<210> 224

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_094_R

<400> 224

gcagttcacc ctctaaaacc attcactc 28

<210> 225

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_111_F

<400> 225

agagggagga gtcgtgattg tct 23

<210> 226

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_111_R

<400> 226

ctgagcaggc tgccggaaac 20

<210> 227

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_135_F

<400> 227

aagcccttgg ccatacataa ggctc 25

<210> 228

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_135_R

<400> 228

gggagtggga gaatgagctc tcc 23

<210> 229

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_013_F

<400> 229

gccttctctg ctctcttttg tg 22

<210> 230

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_013_R

<400> 230

gctattatcc actcttgcag atgaag 26

<210> 231

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_024_F

<400> 231

ttcactgctt gtgtggtctt atataatcaa aac 33

<210> 232

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_024_R

<400> 232

agtgtagtct actctgttca ttttacacc 29

<210> 233

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_074_F

<400> 233

tcaagaggta atctgaarac aggtctttc 29

<210> 234

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_074_R

<400> 234

actcagyagg cctaggttgc tc 22

<210> 235

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_090_F

<400> 235

cccatttata agccaatgtt tcattgtc 28

<210> 236

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_090_R

<400> 236

acatcattta aatggagaga gtagctg 27

<210> 237

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_100_F

<400> 237

attgcttttt atgacactac ycctcatgc 29

<210> 238

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_100_R

<400> 238

tgggtccaga caaatcacaa gggttc 26

<210> 239

<211> 40

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_128_F

<400> 239

acctgaaatt gattcaaatg tgtcatgtga tctttcaaac 40

<210> 240

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_128_R

<400> 240

tgtcatataa cagaatgtga ctttgac 27

<210> 241

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_039_F

<400> 241

ggacttccta agatacactt cgattg 26

<210> 242

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_039_R

<400> 242

actgggttgg aacatccaaa acaatc 26

<210> 243

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_053_F

<400> 243

tcagatatat ggctcggtag cctcccyga 29

<210> 244

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_053_R

<400> 244

tcaaacctaa tgcctgtcta agtagac 27

<210> 245

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_069_F

<400> 245

accatctcay cccadttaga atggcgatc 29

<210> 246

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_069_R

<400> 246

ttcctatttc tccacatcct ctccag 26

<210> 247

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_087_F

<400> 247

gtgacatttc cttgtcaaaa gaacattata g 31

<210> 248

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 13_087_R

<400> 248

cattaggtca tggtaatttt ccctgag 27

<210> 249

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 14_056_F

<400> 249

acctagggat ggaactttgg cttatg 26

<210> 250

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 14_056_R

<400> 250

cactatagaa aacaggcttg tggttc 26

<210> 251

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 14_091_F

<400> 251

ggaattacaa tttataaatg taggtccaca tg 32

<210> 252

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 14_091_R

<400> 252

ccacactcat ttgtgtattt ctacactg 28

<210> 253

<211> 35

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_046_F

<400> 253

taytgtgaaa ttgaagttta gagtcagttt cvaag 35

<210> 254

<211> 40

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_046_R

<400> 254

tctgcttgat aactgtacaa ctttatagta aaatgtgaac 40

<210> 255

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_067_F

<400> 255

tcatctcctt gggaaatggc c 21

<210> 256

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_067_R

<400> 256

gcaccaggct catcctattc ttattac 27

<210> 257

<211> 35

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_087_F

<400> 257

gcagcaccag ttctgtctcc tactagtacc ttcag 35

<210> 258

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_087_R

<400> 258

tttgcaccag cctaatagtt ggtcttacag 30

<210> 259

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_097_F

<400> 259

agaacaccat gctttctgac agc 23

<210> 260

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 15_097_R

<400> 260

ccagctatga aaagccaatt gctg 24

<210> 261

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_000_F

<400> 261

actatgggtt tatcaagaat tccaagttg 29

<210> 262

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_000_R

<400> 262

gtcaaaggaa gtttcactgt aggg 24

<210> 263

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_012_F

<400> 263

cttagagtca tagtttacaa acataaaacc atg 33

<210> 264

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_012_R

<400> 264

ggcttagata tctcagacct accaatatc 29

<210> 265

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_024_F

<400> 265

ccttagcttg tatcaccctt tatcatctg 29

<210> 266

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_024_R

<400> 266

agaaagaaga aaggaagtca cacag 25

<210> 267

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_064_F

<400> 267

agtgacskac atttggcaag aagccatg 28

<210> 268

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_064_R

<400> 268

agagaattta ttgtcaygct tgtgccaaag c 31

<210> 269

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_076_F

<400> 269

agtgagtctg ttcagggtgc tacattgctg 30

<210> 270

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 16_076_R

<400> 270

gcatacagaa gccactcrga atacaatttc aag 33

<210> 271

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_001_F

<400> 271

gtaccccaca tagatagccg gaagg 25

<210> 272

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_001_R

<400> 272

tccttccagc ggtctctgtg g 21

<210> 273

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_057_F

<400> 273

tcccaaagga acccctatga ct 22

<210> 274

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_057_R

<400> 274

ctcaggagct agcagtggga g 21

<210> 275

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_083_F

<400> 275

ctccactttc cactgatgca g 21

<210> 276

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 17_083_R

<400> 276

gggagggagg ggtgctcggg at 22

<210> 277

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_001_F

<400> 277

cttcatgaat ggtttggcac chgttccttg 30

<210> 278

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_001_R

<400> 278

acacactttt aaacaacaga tcttgtgata ac 32

<210> 279

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_030_F

<400> 279

agcttgacta aagtttagtc aacacagcaa ag 32

<210> 280

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_030_R

<400> 280

ttgtgattgb ccaagtgttc acaact 26

<210> 281

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_051_F

<400> 281

acattcctcc tgtggrctct gctgcatc 28

<210> 282

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_051_R

<400> 282

aattgtgata gacaaatgcc tggc 24

<210> 283

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_065_F

<400> 283

gccactcaat ttctagccat tgccttagg 29

<210> 284

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_065_R

<400> 284

cctgagacat ttgggtgaag gtttgtgtct ac 32

<210> 285

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_075_F

<400> 285

acagcaaaga ggagagaaag agctgaac 28

<210> 286

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 18_075_R

<400> 286

aactaccctg ttctagtccc gcatcc 26

<210> 287

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_002_F

<400> 287

ggctctgtca bcaggctgga gtgcaatgg 29

<210> 288

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_002_R

<400> 288

cttgaaccct ggagacagag gtcgcag 27

<210> 289

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_015_F

<400> 289

gattttgtta tatgcagggt gtcctgaaac ca 32

<210> 290

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_015_R

<400> 290

ctctcacttt tcttctttat agtaagtcat tc 32

<210> 291

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_029_F

<400> 291

ctachgcagg gaaaagggac ttagccgtag g 31

<210> 292

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_029_R

<400> 292

agacatctgc aagaamtttc cagcaggc 28

<210> 293

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_044_F

<400> 293

gtagtggcta tttygtcygt cagctcctgt 30

<210> 294

<211> 33

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 19_044_R

<400> 294

acattgaaac ccaatccaaa gaagctaaga atc 33

<210> 295

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_005_F

<400> 295

aagacacaaa gtktggcttc agataaagag ca 32

<210> 296

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_005_R

<400> 296

tgccaagcta tcttgtaaga aataactaca c 31

<210> 297

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_020_F

<400> 297

ggattttatt gtctcatatt cttgaagtg 29

<210> 298

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_020_R

<400> 298

cagtagacaa tgccgagaaa gaatag 26

<210> 299

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_039_F

<400> 299

tctgattcca atctaatacc atagggct 28

<210> 300

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_039_R

<400> 300

ggactaagct tctcattgtt gcagag 26

<210> 301

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_058_F

<400> 301

tattatgcct tttgtacccg atgtttg 27

<210> 302

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 20_058_R

<400> 302

ccagttggca gctgggagag caaag 25

<210> 303

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_010_F

<400> 303

tggggtggag gtggggcaca gccttgttac 30

<210> 304

<211> 32

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_010_R

<400> 304

aggcctacta tgaaactgga atcttcacat ac 32

<210> 305

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_038_F

<400> 305

gctgaatcta ctgtttggag cttacaataa g 31

<210> 306

<211> 28

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_038_R

<400> 306

accatgttat tccagctaca attctgtg 28

<210> 307

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_042_F

<400> 307

cagaaatgca tgcacaaggc actc 24

<210> 308

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 21_042_R

<400> 308

ttgctattgt aactaatgtt gctgaggac 29

<210> 309

<211> 34

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 22_033_F

<400> 309

ttcctcttcc gtagatgggg ataagaagat ctac 34

<210> 310

<211> 31

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 22_033_R

<400> 310

ttaaatctgt gtcttcatat aatcctgttg a 31

<210> 311

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 22_046_F

<400> 311

tttgagacag agtcttgctc tgtcaca 27

<210> 312

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 22_046_R

<400> 312

tgcactgaga ttgcaccact acac 24

<210> 313

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_004_F

<400> 313

gccataaaaa agaaagaaat gctgcca 27

<210> 314

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_004_R

<400> 314

cttagtccag tgttctctag gttcacg 27

<210> 315

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_029_F

<400> 315

ggaagttgtc attggaactt ctgctg 26

<210> 316

<211> 29

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_029_R

<400> 316

gggttgagag taaggtatga aaattctgg 29

<210> 317

<211> 34

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_083_F

<400> 317

gcaatttcca atgtcaaatt aaaattcttc taac 34

<210> 318

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_083_R

<400> 318

ctgtaaataa ggagtttcat tatttagtgg 30

<210> 319

<211> 30

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_095_F

<400> 319

agtatgtttt caaatcagga attgtgatgt 30

<210> 320

<211> 26

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_095_R

<400> 320

gcacaaaaga cctggtcaag acaaac 26

<210> 321

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_138_F

<400> 321

gagttttgca gaaggtacag caact 25

<210> 322

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_138_R

<400> 322

tcagtcttgc atttgagaga caatc 25

<210> 323

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_141_F

<400> 323

gaccaaattc agtatgctgg gagt 24

<210> 324

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> X_141_R

<400> 324

gtagcctcca ttttaccctg ttcc 24

<210> 325

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_007_I

<400> 325

caaaactaaa tgaaagataa tc 22

<210> 326

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_007_D

<400> 326

gcaaaactaa aaaagataat ct 22

<210> 327

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_031_I

<400> 327

gttaggacgt gtgrtcttg 19

<210> 328

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_031_D

<400> 328

gttaggactg tgrtcttgtg 20

<210> 329

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_041_I

<400> 329

ccttcatttc ctcaactgtg 20

<210> 330

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_041_D

<400> 330

ccttcatttc aactgtgca 19

<210> 331

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_059_I

<400> 331

ctaagcaaat acttagttcc c 21

<210> 332

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_059_D

<400> 332

actaagcaaa tagttccctt c 21

<210> 333

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_083_I

<400> 333

tcacttgtca cactatgtg 19

<210> 334

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_083_D

<400> 334

tttcacttgt cactatgtg 19

<210> 335

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_101_I

<400> 335

catttctcta agtaatcag 19

<210> 336

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_101_D

<400> 336

gacatttctc taatcagaa 19

<210> 337

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_119_I

<400> 337

tcaatcatgg ggtaaatgga 20

<210> 338

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_119_D

<400> 338

atcaatcatg ggtaaatgga 20

<210> 339

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_154_I

<400> 339

gtgggattgt aagtaagagc 20

<210> 340

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_154_D

<400> 340

agtgggattg taagagctg 19

<210> 341

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_170_I

<400> 341

gagactcaga gatgtta 17

<210> 342

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_170_D

<400> 342

ctgagactca gatgttaa 18

<210> 343

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_192_I

<400> 343

gtggttcaaa taatctattc c 21

<210> 344

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_192_D

<400> 344

gtggttcaaa tctattcctg 20

<210> 345

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_208_I

<400> 345

atttcagttt tcttcgagat c 21

<210> 346

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_208_D

<400> 346

ttttcctctt atcaaatctg g 21

<210> 347

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_223_I

<400> 347

gaaagacact gtgaaggag 19

<210> 348

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_223_D

<400> 348

ggaaagacac tgaaggagg 19

<210> 349

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_233_I

<400> 349

attgtacttc tttatttcca g 21

<210> 350

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_233_D

<400> 350

gaaattgtac ttatttccag a 21

<210> 351

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_240_I

<400> 351

catatttaaa ttggttggtt aag 23

<210> 352

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 01_240_D

<400> 352

gcatatttaa attggttaag agc 23

<210> 353

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_011_I

<400> 353

accaggaact ctggccct 18

<210> 354

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_011_D

<400> 354

caccaggatg gccctgtt 18

<210> 355

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_036_I

<400> 355

ttcagaactg tctctggca 19

<210> 356

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_036_D

<400> 356

ctttcagaac tctggcaat 19

<210> 357

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_042_I

<400> 357

acacatgcat aataaccct 19

<210> 358

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_042_D

<400> 358

caacacatgc ataaccctt 19

<210> 359

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_061_I

<400> 359

caaattcctc cccatca 17

<210> 360

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_061_D

<400> 360

caaattcctc ccatcat 17

<210> 361

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_080_I

<400> 361

ctgcagacag agcatgtc 18

<210> 362

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_080_D

<400> 362

ctgcagacag catgtcct 18

<210> 363

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_101_I

<400> 363

gctaattagg gaaccttgc 19

<210> 364

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_101_D

<400> 364

agctaattag gaaccttgc 19

<210> 365

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_113_I

<400> 365

tatgaagtag gtgaagga 18

<210> 366

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_113_D

<400> 366

ctatgaagta gtgaaggag 19

<210> 367

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_150_I

<400> 367

aagcaccgcc agagctct 18

<210> 368

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_150_D

<400> 368

gattggaagt ctgaggact 19

<210> 369

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_215_I

<400> 369

gtatcataaa gagaaagggc 20

<210> 370

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_215_D

<400> 370

tgtatcataa aaagggcatg 20

<210> 371

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_231_I

<400> 371

caaagaaagc ctgttccta 19

<210> 372

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 02_231_D

<400> 372

acaaagaaag ctgttcctag 20

<210> 373

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_016_I

<400> 373

tgagtcttgc gctgacc 17

<210> 374

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_016_D

<400> 374

gtgagtcttg ctgaccc 17

<210> 375

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_030_I

<400> 375

ctgcacataa gccataat 18

<210> 376

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_030_D

<400> 376

tacctgcaca taatttca 18

<210> 377

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_063_I

<400> 377

gaaccagcgt gatgtaatag 20

<210> 378

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_063_D

<400> 378

gaatgaagaa agggaatgag 20

<210> 379

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_082_I

<400> 379

ataggtactg gattcacagc 20

<210> 380

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_082_D

<400> 380

cataggtact gattcacagc 20

<210> 381

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_100_I

<400> 381

agatccccct gttttcag 18

<210> 382

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_100_D

<400> 382

agatccccgt tttcagtc 18

<210> 383

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_107_I

<400> 383

taaacttcac caagtactct t 21

<210> 384

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_107_D

<400> 384

cataaacttc aagtactctt tc 22

<210> 385

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_124_I

<400> 385

ctgtggaaac acagagtaa 19

<210> 386

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_124_D

<400> 386

tctgtggaaa cagagtaat 19

<210> 387

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_162_I

<400> 387

tggtgtgatc tcggctca 18

<210> 388

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_162_D

<400> 388

tggtgtgatc ggctcact 18

<210> 389

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_182_I

<400> 389

agtttcagac aggaatggt 19

<210> 390

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_182_D

<400> 390

tagtttcaga aggaatggt 19

<210> 391

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_194_I

<400> 391

atgcctcctt cttctgtaac 20

<210> 392

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 03_194_D

<400> 392

gatgcctcct tctgtaaca 19

<210> 393

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_008_I

<400> 393

ccccagctag gtaggact 18

<210> 394

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_008_D

<400> 394

cccagctagg actagcac 18

<210> 395

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_027_I

<400> 395

tcactaaaac ttattcttg 19

<210> 396

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_027_D

<400> 396

tcactaaaat tattcttgc 19

<210> 397

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_045_I

<400> 397

ggccatgggg cattctt 17

<210> 398

<211> 17

<212> DNA

<213> 04_045_D

<400> 398

ggccatgggc attcttg 17

<210> 399

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_056_I

<400> 399

attgcacact ctgggtaag 19

<210> 400

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_056_D

<400> 400

attgcacact gggtaagag 19

<210> 401

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_065_I

<400> 401

tgactactca attgcat 17

<210> 402

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_065_D

<400> 402

gtgactacta attgcat 17

<210> 403

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_085_I

<400> 403

ccagtcactc tgtaccag 18

<210> 404

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_085_D

<400> 404

cccagtcact gtaccagg 18

<210> 405

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_112_I

<400> 405

tatacatctg cattgattgg a 21

<210> 406

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_112_D

<400> 406

gcacaaatat acattggata ttc 23

<210> 407

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_137_I

<400> 407

ccctaccttg tagctgac 18

<210> 408

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_137_D

<400> 408

gtacctatcc gacaacctg 19

<210> 409

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_154_I

<400> 409

gtgacttcct ataaaaact 19

<210> 410

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_154_D

<400> 410

agtgacttcc taaaaactc 19

<210> 411

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_177_I

<400> 411

ttcaacttga cttgtgtaac 20

<210> 412

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 04_177_D

<400> 412

gaatttcaac ttgtgtaact t 21

<210> 413

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_003_I

<400> 413

tcttgcctcc tttatttcc 19

<210> 414

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_003_D

<400> 414

gtcttgcctc tttatttcct 20

<210> 415

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_013_I

<400> 415

catatcttca caagacaaag g 21

<210> 416

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_013_D

<400> 416

gaaaatcata tcaaagggag a 21

<210> 417

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_065_I

<400> 417

catgtaatga aaggaataaa tcc 23

<210> 418

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_065_D

<400> 418

aaaacatgta atgaataaat ccat 24

<210> 419

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_074_I

<400> 419

ccaccttccc ctcccct 17

<210> 420

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_074_D

<400> 420

tttccacctt cccctttttt 20

<210> 421

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_087_I

<400> 421

atagacactg cagactacta g 21

<210> 422

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_087_D

<400> 422

gaaaaaaata gagaggggag a 21

<210> 423

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_096_I

<400> 423

cagcagcatc atgagattt 19

<210> 424

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_096_D

<400> 424

gcagcagcat gagatttc 18

<210> 425

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_115_I

<400> 425

tgagacccta aacagagga 19

<210> 426

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_115_D

<400> 426

cttgtgagac ccagttaag 19

<210> 427

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_119_I

<400> 427

ataggggaac atctagataa c 21

<210> 428

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_119_D

<400> 428

gctcataggg gatctagata aca 23

<210> 429

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_132_I

<400> 429

agcagaacag gagactagg 19

<210> 430

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_132_D

<400> 430

agcagaacag actaggttg 19

<210> 431

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_141_I

<400> 431

ccactctgat tggtttccg 19

<210> 432

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_141_D

<400> 432

cttccactct ggtttccg 18

<210> 433

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_151_I

<400> 433

gtgctcttac tcagttaatg a 21

<210> 434

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_151_D

<400> 434

aggtgctctt agttaatgat g 21

<210> 435

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_180_I

<400> 435

cactaggtca atgataactt ag 22

<210> 436

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 05_180_D

<400> 436

cactaggtca ataacttagt ac 22

<210> 437

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_007_I

<400> 437

cattgtaact cagttttccc 20

<210> 438

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_007_D

<400> 438

cattgtaact gttttccctc 20

<210> 439

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_016_I

<400> 439

tcaggtagca gagaaggg 18

<210> 440

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_016_D

<400> 440

ttcaggtaga gagaaggga 19

<210> 441

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_031_I

<400> 441

tcraaagcac agccagaga 19

<210> 442

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_031_D

<400> 442

tttcraaagc gccagagac 19

<210> 443

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_057_I

<400> 443

tataaatcat tattttaaca gg 22

<210> 444

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_057_D

<400> 444

gattataaat catttaacag g 21

<210> 445

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_071_I

<400> 445

gttcctcatc tttcatggt 19

<210> 446

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_071_D

<400> 446

ctgttcctca ttcatggtt 19

<210> 447

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_077_I

<400> 447

cagactcagt tcatgaactc 20

<210> 448

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_077_D

<400> 448

tcagttcaga ctccactgac 20

<210> 449

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_087_I

<400> 449

gcagttagaa ggaacactc 19

<210> 450

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_087_D

<400> 450

tgctgtatgc tgctatttg 19

<210> 451

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_096_I

<400> 451

tgaatgcccg cccactc 17

<210> 452

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_096_D

<400> 452

cactgaatgc ccactca 17

<210> 453

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_113_I

<400> 453

gtgtgagatg ggtatctca 19

<210> 454

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_113_D

<400> 454

gtgtgagatg gtatctcat 19

<210> 455

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_125_I

<400> 455

acatgtcagt tgtttcttaa at 22

<210> 456

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_125_D

<400> 456

attacatgtc agtttcttaa ataa 24

<210> 457

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_135_I

<400> 457

caggggaatg aatgattttg 20

<210> 458

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_135_D

<400> 458

gtcaggggaa tgattttga 19

<210> 459

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_143_I

<400> 459

caacattgaa caaagtcctt g 21

<210> 460

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_143_D

<400> 460

tatacaacat tgtcctcatg g 21

<210> 461

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_153_I

<400> 461

atttccccaa tttgataatt ttt 23

<210> 462

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_153_D

<400> 462

ttgaatattt cttttttgtt cag 23

<210> 463

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_158_I

<400> 463

gctttcattc agtcagtctc 20

<210> 464

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_158_D

<400> 464

aactatgctt tcagtctctg 20

<210> 465

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_167_I

<400> 465

gctgataaca ttcattcatt c 21

<210> 466

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 06_167_D

<400> 466

ggctgataac atattcattc a 21

<210> 467

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_010_I

<400> 467

caatcaatgg gtggaactg 19

<210> 468

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_010_D

<400> 468

caatcaatgg tggaactgg 19

<210> 469

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_023_I

<400> 469

gattttgcct gataaccttc 20

<210> 470

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_023_D

<400> 470

tgctgctgat ttcttctctt 20

<210> 471

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_040_I

<400> 471

tgagaaaagc ccgtgaatg 19

<210> 472

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_040_D

<400> 472

tgagaaaagc cgtgaatgt 19

<210> 473

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_062_I

<400> 473

ccattcgatg acgattcca 19

<210> 474

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_062_D

<400> 474

cattcaattc catccgataa ta 22

<210> 475

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_082_I

<400> 475

catgatggta ttatgatcta gt 22

<210> 476

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_082_D

<400> 476

catgatggta tgatctagta tg 22

<210> 477

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_097_I

<400> 477

cagttaatgt atttggtttc ac 22

<210> 478

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_097_D

<400> 478

cagttaatgt ttcacctgc 19

<210> 479

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_112_I

<400> 479

ctgaggcagg agaatcac 18

<210> 480

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_112_D

<400> 480

gctgaggcag agaatcac 18

<210> 481

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_126_I

<400> 481

attaactcag atagccctaa g 21

<210> 482

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_126_D

<400> 482

attaactcag ccctaagaag 20

<210> 483

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_140_I

<400> 483

tatttggcag agtcttttgt 20

<210> 484

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_140_D

<400> 484

atatttggca gtcttttgtt t 21

<210> 485

<211> 25

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_153_I

<400> 485

cttattttct gtacagtgtt ttcac 25

<210> 486

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 07_153_D

<400> 486

cttattttca ctacggtcac 20

<210> 487

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_002_I

<400> 487

tgtctttgag gtttcctcc 19

<210> 488

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_002_D

<400> 488

tgtctttgag tttcctccc 19

<210> 489

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_013_I

<400> 489

cattagtttt ccccatttta ct 22

<210> 490

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_013_D

<400> 490

acattagttt tcccatttta ctt 23

<210> 491

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_033_I

<400> 491

agcttcctca ggtaaaatat tt 22

<210> 492

<211> 24

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_033_D

<400> 492

ggaaagcttc ctcagtaaaa tatt 24

<210> 493

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_058_I

<400> 493

tcgtacaaag tgtctacact aca 23

<210> 494

<211> 23

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_058_D

<400> 494

tctcgtacaa agtctacact aca 23

<210> 495

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_064_I

<400> 495

gctaaaccca aaatatgagt g 21

<210> 496

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_064_D

<400> 496

gctaaaccca atatgagtgt 20

<210> 497

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_082_I

<400> 497

gacactctgt gtatctagct 20

<210> 498

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_082_D

<400> 498

cgacactctg tatctagct 19

<210> 499

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_103_I

<400> 499

acagtggact gtgggggt 18

<210> 500

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_103_D

<400> 500

acagtggatg tgggggtg 18

<210> 501

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_125_I

<400> 501

ctctgtgcag gcacaggt 18

<210> 502

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_125_D

<400> 502

cctctgtgca gcacaggt 18

<210> 503

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_139_I

<400> 503

caaaggctga gcagatgc 18

<210> 504

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 08_139_D

<400> 504

cctcgcaaat gccggct 17

<210> 505

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_000_I

<400> 505

acttttcttt tctctgaatt tatatag 27

<210> 506

<211> 27

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_000_D

<400> 506

cacttttctt ttcttgaatt tatatag 27

<210> 507

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_021_I

<400> 507

cagaaaatga tcatgatgca ca 22

<210> 508

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_021_D

<400> 508

tagcagaaaa tgatgcacat tt 22

<210> 509

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_064_I

<400> 509

agtctattgg aaatgtgcta c 21

<210> 510

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_064_D

<400> 510

ctaagtctat tctgtgctac tg 22

<210> 511

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_072_I

<400> 511

atgtgctcct ctcaacatc 19

<210> 512

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_072_D

<400> 512

catctatgtg ctcaacatcc 20

<210> 513

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_084_I

<400> 513

caaaaatggc agtagtgggt ca 22

<210> 514

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_084_D

<400> 514

aaaatggcat agtgggtcag g 21

<210> 515

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_109_I

<400> 515

gtctcagctc ctccatttgt 20

<210> 516

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_109_D

<400> 516

gtctcagctc tccatttgt 19

<210> 517

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_117_I

<400> 517

attcagttat agcaacagaa a 21

<210> 518

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_117_D

<400> 518

tattcagtta aacagaaaac ag 22

<210> 519

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_132_I

<400> 519

aagcctccac ccaccttg 18

<210> 520

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 09_132_D

<400> 520

aaagcctcca ccttgcag 18

<210> 521

<211> 22

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_001_I

<400> 521

actatactat ataatgttac ac 22

<210> 522

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_001_D

<400> 522

actatactat atgttacact g 21

<210> 523

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_026_I

<400> 523

gggctcaagt gatcctccc 19

<210> 524

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_026_D

<400> 524

gggctcaagt atcctcccg 19

<210> 525

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_035_I

<400> 525

tgcttgaacc tgggaggtt 19

<210> 526

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_035_D

<400> 526

tgcttgaact gggaggttg 19

<210> 527

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_047_I

<400> 527

atgatacaga gaggcccact 20

<210> 528

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_047_D

<400> 528

aatgatacag aggcccactg 20

<210> 529

<211> 17

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_071_I

<400> 529

tgcccaggct acaccct 17

<210> 530

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_071_D

<400> 530

gatgcccagt acaccctg 18

<210> 531

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_085_I

<400> 531

tggctcttat gccttgcc 18

<210> 532

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_085_D

<400> 532

tggctcttgc cttgccta 18

<210> 533

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_117_I

<400> 533

gttgccgata ttccagga 18

<210> 534

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_117_D

<400> 534

aaatgttgcc aggaggtg 18

<210> 535

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_128_I

<400> 535

ttcaatgtta tactcgtcca t 21

<210> 536

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 10_128_D

<400> 536

ttcaatgtta ctcgtccatg 20

<210> 537

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_006_I

<400> 537

gggaataact gagcattctg 20

<210> 538

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_006_D

<400> 538

tgggaataac agcattctg 19

<210> 539

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_020_I

<400> 539

cattagcata gctggatttc 20

<210> 540

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_020_D

<400> 540

gcattagcat ggatttcct 19

<210> 541

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_034_I

<400> 541

ggggagcaaa tgaattacca t 21

<210> 542

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_034_D

<400> 542

ttatggggat accatataac 20

<210> 543

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_059_I

<400> 543

cattgtggaa gactatgtg 19

<210> 544

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_059_D

<400> 544

cattgtggaa actatgtgg 19

<210> 545

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_084_I

<400> 545

atgagtctca gtttcttcat 20

<210> 546

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_084_D

<400> 546

aaatgagtct gtttcttcat t 21

<210> 547

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_094_I

<400> 547

atccagagtc catagagtga 20

<210> 548

<211> 20

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_094_D

<400> 548

catccagagt catagagtga 20

<210> 549

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_111_I

<400> 549

ctaacaaaaa gaagaccatc t 21

<210> 550

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_111_D

<400> 550

tctaacaaaa agaccatctg t 21

<210> 551

<211> 18

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_135_I

<400> 551

tccgcagtgg caggagag 18

<210> 552

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 11_135_D

<400> 552

ttccgcagtg caggagagc 19

<210> 553

<211> 21

<212> DNA

<213> artificial sequence

<220>

<223> 12_013_I

<400> 553

acactcagtt ctctatttca g 21