Новый полипептид с аффинностью к PD-L1 Российский патент 2021 года по МПК C07K14/00 C07K19/00 C07K16/00 C12N15/09 A61K38/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к классу сконструированных полипептидов, обладающих аффинностью связывания с лигандом программируемой смерти 1 (далее упоминаемым как PD-L1). Настоящее изобретение также относится к применению такого PD-L1-связывающего полипептида в качестве терапевтического, прогностического и/или диагностического агента.

Предшествующий уровень техники

В нормальных физиологических условиях иммунные контрольные точки имеют решающее значение для поддержания аутотолерантности (то есть для предупреждения аутоиммунных нарушений) и для модулирования иммунного ответа для защиты от повреждений тканей, когда иммунная система реагирует на патогенные инфекции. Иногда опухолевые клетки могут кооптировать некоторые пути иммунного контроля, чтобы избежать механизмов иммунного надзора. Поэтому ингибирование иммунных контрольных точек стало перспективным подходом к иммунотерапии рака. Двумя иммунными контрольными рецепторами, наиболее активно изучаемыми в данном контексте, являются антиген цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA-4; также известный как CD152) и белок запрограммированной клеточной смерти 1 (PD-1; также известный как CD279), которые регулируют иммунный ответ на разных уровнях. Если CTLA4 главным образом регулирует иммунные ответы на ранних стадиях активации Т-клеток, то PD-1 главным образом ограничивает активность Т-клеток в эффекторной фазе в тканях и опухолях (Pardoll, 2012, Nat. Rev. Cancer, 12:252-64).

PD-1 имеет два известных лиганда: лиганд программируемой смерти 1 (PD-L1; также известный как человеческий гомолог В7 1, В7-Н1, или кластер дифференцировки 274, CD274) и лиганд программируемой смерти 2 (PD-L2; также известный как B7-DC и CD273). Оба лиганда относятся к суперсемейству иммуноглобулина В7 и представляют собой трансмембранные гликопротеины типа I, состоящие из внеклеточных доменов IgC-и IgV-типа. Однако недавно сообщалось, что PD-L1 и PD-L2, а также PD-1, также существуют в растворимых формах, в дополнение к связанной с мембраной. PD-L1 и PD-L2 обладают примерно 40% идентичностью аминокислотных остатков. В то время как экспрессия PD-L2 в основном ограничена антигенпредставляющими клетками, PD-L1 экспрессируется как в гемопоэтических, так и в негемопоэтических клетках. Высокая экспрессия PD-L1 в опухоли ассоциируется с повышенной агрессивностью и худшим прогнозом (Dai et al., 2014, Cellular Immunology, 290:72-79).

Клиническая значимость направленных путей иммунного контроля была продемонстрирована с несколькими моноклональными антителами, ингибирующими CTLA-4, PD-1 и PD-L1, которые работают путем восстановления защитных иммунных реакций на опухолевые клетки. Анти-CTLA-4 антитело ипилимумаб (Yervoy®, Bristol Myers Squibb) было одобрено FDA в 2011 для лечения пациентов с метастатической меланомой, где продолжительный ответ наблюдался у 10-15% пациентов. Однако ипилимумаб ассоциирован с токсичностями, связанными с иммунитетом, возможно из-за его роли в начальной фазе иммунного ответа, посредством чего также оказывается воздействие на нормальные ткани. Более безопасный подход может заключаться в нацеливании PD-1/PD-L1 пути на селективное восстановление противоопухолевого иммунитета в микроокружении опухоли. Ингибирование пути PD-1/PD-L1 продемонстрировало продолжительный ответ у 30-35% пациентов с меланомой на поздней стадии, что привело в 2014 году к одобрению FDA анти-PD-1 антител пембролизумаб (ранее ламбролизумаб; Keytruda®, Merck) и ниволумаб (Bristol Myers Squibb and Ono Pharmaceutical) (Shin and Ribas, 2015, Curr. Opin. Immunol., 33:23-35; Philips and Atkins, 2015, International Immunology, 27:39-46). Первым антителом, направленным на PD-L1, прошедшим клинические испытания, было MDX-1105, которое оценивали в Фазе I исследования у пациентов с солидными опухолями на поздней стадии, включающими меланому, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), колоректальный рак, рак почек, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак желудка и рак молочной железы (Momtaz and Postow, 2014, Pharmgenomics Pers Med. 7:357-65). Результаты продемонстрировали потенциальные преимущества блокады PD-L1. Другие антитела против PD-L1, которые в настоящее время находятся в Фазе III клинических испытаний, включают атезолизумаб (MDPL3280A, Genentech), дурвалумаб (MEDI4736, Medlmmune/Astra Zeneca, Celgene) и авелумаб (MSB0010718C, EMD Serono, Pfizer).

Для повышения эффективности и увеличения числа пациентов, которые отвечают на иммунотерапию, может быть полезным нацелить противоопухолевый иммунный ответ на несколько уровней. Это может быть достигнуто с помощью синергических комбинаций. Например, доклинические исследования комбинирования антител, блокирующих CTLA-4 и PD-1 (ипилимумаб и ниволумаб), продемонстрировали превосходную противоопухолевую активность, но с токсичностью, аналогичной анти-CTLA-4 монотерапии (Shin and Ribas, 2015, выше). Кроме того, предполагается, что PD-L1 является потенциальным биомаркером из-за его обилия в микроокружении опухоли и потому что опухолевая экспрессия PD-L1 имеет сильную взаимосвязь с ответом на анти-PD-1/PD-L1 терапию.

Высокая распространенность рака и инфекционных заболеваний, вместе с высокой неудовлетворенной потребностью в медицине, требует разработки новых способов лечения. Поскольку уровень проникновения в ткани отрицательно связан с размером молекулы, то относительно большая молекула антитела по своей природе имеет плохое распределение в тканях и плохую проникающую способность.

Таким образом, использование моноклональных антител не всегда оптимально для терапии и существует постоянная потребность в предложении агентов с высокой аффинностью к PD-L1. Также большой интерес представляет предложение применения таких молекул в лечении, диагностике и прогнозировании PD-L1-ассоциированных расстройств.

Краткое изложение сущности изобретения

Задачей настоящего изобретения является предложение новых PD-L1-связывающих агентов, которые можно, например, использовать для терапевтического, прогностического и диагностического применений.

Задачей настоящего изобретения является предложение нового мультиспецифического агента, такого как биспецифический агент, который обладает аффинностью к PD-L1 и по меньшей мере к одному дополнительному антигену.

Задачей настоящего изобретения является предложение молекулы, обеспечивающей эффективную терапию, например, различных форм рака и инфекционных заболеваний, при уменьшении вышеупомянутых и других недостатков современных препаратов.

Задачей настоящего изобретения является предложение молекулы, пригодной для прогностических и диагностических применений, например прогностического и диагностического применения в отношении различных форм рака и инфекционных заболеваний.

Эти и другие задачи, которые очевидны специалисту из настоящего изобретения, решают разные аспекты изобретения, как заявлено в прилагаемой формуле изобретения и как в общем виде раскрыто в данном описании изобретения.

Таким образом, в первом аспекте изобретения предложен PD-L1-связывающий полипептид, содержащий PD-L1-связывающий мотив ВМ, где мотив состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из:

1) ERNX₄AAX₇EIL X₁₁LPNLX₁₆X₁₇X₁₈QX₂₀ WAFIWX₂₆LX₂₈D

где, независимо друг от друга,

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из А, Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

X₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, N, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е;

и

2) аминокислотной последовательности, которая обладает по меньшей мере 96% идентичностью с последовательностью, определенной в (1).

Приведенное выше определение класса последовательностей, родственных PD-L1-связывающим полипептидами, основано на статистическом анализе случайных полипептидных вариантов родительского каркаса, которые были выбраны для их взаимодействия с PD-L1 в экспериментах по выбору. Идентифицированный PD-L1-связывающий мотив или “ВМ" соответствует целевой связывающей области родительского каркаса, причем эта область представляет собой две альфа-спирали в трехспиральном комплексе белкового домена. В родительском каркасе разные аминокислотные остатки двух спиралей ВМ образуют связывающую поверхность для взаимодействия с константной Fc-частью антител. В настоящем изобретении случайные вариации остатков поверхности связывания и последующий выбор вариантов заменил способность Fc-взаимодействия способностью взаимодействовать с PD-L1.

Как понятно специалисту, функция любого полипептида, такая как PD-L1-связывающая способность полипептида по настоящему изобретению, зависит от третичной структуры этого полипептида. Поэтому можно внести незначительные изменения в последовательность аминокислот в полипептиде, не влияя на его функцию. Таким образом, изобретение охватывает модифицированные варианты PD-L1-связывающего полипептида, которые сохранили характеристики связывания с PD-L1.

Таким образом, настоящее изобретение включает PD-L1-связывающий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность с 96% или более идентичностью с полипептидом, как определено в 1). Например, возможно, что аминокислотный остаток, относящийся к определенной функциональной группе аминокислотных остатков (например гидрофобный, гидрофильный, полярный и т.д.), может быть заменен другим аминокислотным остатком из той же функциональной группы.

В некоторых воплощениях такие изменения могут быть сделаны в любом положении последовательности PD-L1-связывающего полипептида, как описано здесь. В других воплощениях такие изменения могут быть сделаны в невариабельных положениях, а также обозначенных каркасных аминокислотных остатках. В таких случаях изменения не допускаются в вариабельных положениях. В других воплощениях такие изменения могут быть сделаны только в вариабельных положениях. Согласно одному определению таких "вариабельных положений", они представляют собой положения, обозначенные как "X" в последовательности (1), как определено выше. Согласно другому определению "вариабельные положения" представляют собой такие положения, которые рандомизированы в библиотеке выбора Z-вариантов до отбора и могут, таким образом, представлять собой положения 2, 3, 4, 6, 7, 10, 11, 17, 18, 20, 21, 25 и 28 в последовательности (1), как показано в примере 1.

Термин "% идентичности", используемый в описании, может быть, например, рассчитан следующим образом. Искомую последовательность выравнивают с целевой последовательностью с использованием алгоритма CLUSTAL W (Thompson et al., (1994) Nucleic Acids Research, 22: 4673-4680). Сравнение производят в окне, соответствующем самой короткой из выровненных последовательностей. Самая короткая из выровненных последовательностей может в некоторых случаях быть целевой последовательностью. В других случаях искомая последовательность может составлять кратчайшую из выровненных последовательностей. Сравнивают аминокислотные остатки в каждом положении и процент положений в искомой последовательности, имеющих идентичные соответствия в целевой последовательности, указывают как % идентичности.

В другом воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

X₁₁ выбран из A, D, Н, L, Q, R, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и T;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

Х₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е.

В другом воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из А, Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

X₁₁ выбран из A, D, Е, F, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

X₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, N, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е.

В еще одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т и V;

Х₇ выбран из F, Н, Q и Y;

X₁₁ выбран из Н, Q, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q и S;

Х₁₈ выбран из А, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, Q, R и V;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из А и D.

При использовании здесь "X_n" и "X_m" применяют для указания аминокислот в положениях n и m в последовательности (1), как определено выше, где n и m представляют собой целые числа, которые указывают положение аминокислоты в указанной последовательности, при подсчете от N-конца указанной последовательности. Например, Х₃ и Х₇ указывают аминокислоту в положении три и семь соответственно, от N-конца последовательности (1).

В воплощениях в соответствии с первым аспектом предложены полипептиды, где X_n в последовательности (1) независимо выбран из группы возможных остатков в соответствии с Таблицей 1. Специалисту в данной области понятно, что X_n может быть выбран из любой из перечисленных групп возможных остатков и что этот выбор не зависит от выбора аминокислот в X_m, где n≠m. Таким образом, любой из перечисленных возможных остатков в положении X_n в Таблице 1 может быть независимо объединен с любым из перечисленных возможных остатков в любом другом вариабельном положении в Таблице 1.

Специалисту в данной области будет понятно, что таблицу 1 следует читать следующим образом:

В одном воплощении согласно первому аспекту предложен полипептид, где аминокислотный остаток "X_n" в последовательности (1) выбран из "Возможных остатков". Таким образом, в таблице 1 раскрыто несколько специфических и конкретных воплощений первого аспекта настоящего изобретения. Например, в одном воплощении согласно первому аспекту предложен полипептид, где Х₄ в последовательности (1) выбран из A, D, Е, I, K, L, N, Q, S и Т, и в другом воплощении согласно первому аспекту предложен полипептид, где Х₄ в последовательности (1) выбран из A, D, Е, I, K, Q, S и Т. Во избежание сомнений перечисленные воплощения могут быть еще свободно объединены в других воплощениях. Например, одно такое комбинированное воплощение представляет собой полипептид, в котором Х₄ выбран из A, D, Е, I, K, Q, S и Т, в то время как Х₇ выбран из F, Н, Q и Y, a X₁₈ выбран из A, L, K и S.

В одном конкретном воплощении согласно первому аспекту предложен полипептид, где в последовательности (1) выполнено по крайней мере четыре из семи условий I-VII:

I. X₇ выбран из F, H, Q и Y;

II. X₁₁ выбран из H и Y;

III X₁₆ представляет собой Т;

IV. X₁₇ выбран из N, Q и S;

V. Х₂₀ выбран из Н, I, K и R;

VI. Х₂₆ представляет собой K; и

VII. Х₂₈ представляет собой А или D.

В одном воплощении в последовательности (1) выполнено по меньшей мере пять из семи условий I-VII, например по меньшей мере шесть из семи условий I-VII. В одном конкретном воплощении в последовательности (1) выполнены все семь условий I-VII.

В некоторых воплощениях PD-L1-связывающего полипептида согласно первому аспекту Х₇Х₁₁Х₂₀ выбран из FYK и YYK. В некоторых воплощениях X₁₁X₁₇X₂₀ выбран из YNK и YQK. В некоторых воплощениях X₁₁X₁₈X₂₀ представляет собой YAK.

Как подробно описано в следующем ниже экспериментальном разделе, выбор вариантов PD-L1-связывающего полипептида привел к идентификации ряда отдельных последовательностей PD-L1-связывающего мотива (ВМ). Эти последовательности составляют отдельные воплощения последовательности (1) согласно данному аспекту. Последовательности отдельных PD-L1-связывающих мотивов соответствуют аминокислотным положениям 8-36 в SEQ ID NO: 1-808, представленным на Фиг. 1. Следовательно, в одном воплощении PD-L1-связывающего полипептида в соответствии с этим аспектом, последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-796, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 774-787. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781 и 784-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784 и 786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781 и 784, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 784, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 776, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 781, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 784. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775 и 780-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 775, 780, 781, 784 и 786. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 776. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 776. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3-8, 11, 13, 16, 18, 20, 22, 23, 43 и 73. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24. Например, в одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-16, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 7, 9 и 10. В другом воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3-6, 9-10, 12-21, 23 и 24, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 4-6, 9, 14 и 18-21. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14 и 17-21. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 17. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14 и 18-21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5 и 21. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1 и 2. В одном воплощении последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO: 21.

В некоторых воплощениях настоящего изобретения, ВМ, как определено выше, "образует часть" трехспирального комплекса белкового домена. Под этим следует понимать, что последовательность ВМ "встроена в" или "привита на" последовательность исходного трехспирального комплекса домена, так что ВМ заменяет аналогичный структурный мотив в исходном домене. Например, без ограничения какой-либо теорией, считается, что ВМ образует две из трех спиралей трехспирального комплекса и может, следовательно, заменять такой двухспиральный мотив в любом трехспиральном комплексе. Как понятно специалисту, замена двух спиралей трехспирального комплекса домена двумя спиралями ВМ должна быть осуществлена так, чтобы не влиять на основную структуру полипептида. То есть общая укладка Сα остова полипептида согласно этому воплощению изобретения по существу такая же, что и у трехспирального комплекса белкового домена, часть которого он образует, например часть, имеющую такие же элементы вторичной структуры в том же порядке и т.д. Таким образом, ВМ по настоящему изобретению "образует часть" трехспирального комплекса домена, если полипептид согласно этому воплощению имеет такую же укладку, что и исходный домен, что подразумевает, что основные структурные свойства являются общими, что приводит к аналогичному спектру CD (спектру кругового дихроизма). Специалист имеет представление о других параметрах, которые являются релевантными.

В конкретных воплощениях PD-L1-связывающий мотив {ВМ), таким образом, образует часть трехспирального комплекса белкового домена. Например, ВМ может по существу составлять две альфа-спирали с соединительной петлей в пределах указанного трехспирального комплекса белкового домена. В конкретных воплощениях указанный трехспиральный комплекс белкового домена выбран из доменов бактериальных рецепторных белков. Неограничивающие примеры таких доменов представляют собой пять разных трехспиральных доменов белка А из Staphylococcus aureus, такие как домен В и его производные. В некоторых воплощениях трехспиральный комплекс белкового домена представляет собой вариант белка Z, который происходит от домена В стафилококкового белка A (Wahlberg Е et al., 2003, PNAS 100(6):3185-3190).

В некоторых воплощениях, где PD-L1-связывающий полипептид, как описано здесь, образует часть трехспирального комплекса белкового домена, PD-L1-связывающий полипептид может содержать модуль связывания (BMod), аминокислотная последовательность которого выбрана из:

3)

где

[BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в данном описании;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

Х_с выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S; и

X_f выбран из А и S; и

4) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 93% идентичность последовательности, определенной в (3).

В некоторых воплощениях указанный полипептид может проявлять полезную высокую структурную стабильность, такую как устойчивость к химическим модификациям, к изменениям физических условий и к протеолизу во время получения и хранения, а также in vivo.

Как обсуждалось выше, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с вышеуказанными аминокислотными последовательностями, которые существенно не влияют на третичную структуру и функцию полипептида, также входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях последовательность (4) имеет по меньшей мере 93%, например по меньшей мере 95%, например по меньшей мере 97% идентичность последовательности, определенной в (3).

В одном воплощении, Х_а в последовательности (3) представляет собой А.

В одном воплощении, Х_а в последовательности (3) представляет собой S.

В одном воплощении, X_b в последовательности (3) представляет собой N.

В одном воплощении, X_b в последовательности (3) представляет собой Е.

В одном воплощении, Х_с в последовательности (3) представляет собой А.

В одном воплощении, Х_с в последовательности (3) представляет собой S.

В одном воплощении, Х_с в последовательности (3) представляет собой С.

В одном воплощении, X_d в последовательности (3) представляет собой Е.

В одном воплощении, X_d в последовательности (3) представляет собой N.

В одном воплощении, X_d в последовательности (3) представляет собой S.

В одном воплощении, Х_е в последовательности (3) представляет собой D.

В одном воплощении, Х_е в последовательности (3) представляет собой Е.

В одном воплощении, Х_е в последовательности (3) представляет собой S.

В одном воплощении, X_dX_e в последовательности (3) выбран из ЕЕ, ES, SD, SE и SS.

В одном воплощении, X_dX_e в последовательности (3) представляет собой ES.

В одном воплощении, X_dX_e в последовательности (3) представляет собой SE.

В одном воплощении, X_dX_e в последовательности (3) представляет собой SD.

В одном воплощении, X_f в последовательности (3) представляет собой А.

В одном воплощении X_f в последовательности (3) представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой А и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой А и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой С и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой S и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой С и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой A; X_dX_e представляет собой ND и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой А; X_dX_e представляет собой ND и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой S; X_dX_e представляет собой ND и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой А; X_dX_e представляет собой SE и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой А; X_dX_e представляет собой SE и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой S; X_dX_e представляет собой SE и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой А; X_dX_e представляет собой SD и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD и X_f представляет собой А.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой S; X_dX_e представляет собой SD и X_f представляет собой S.

В одном воплощении в последовательности (3) Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; Х_с представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD и X_f представляет собой S.

В еще одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808, представленных на Фиг. 1. Следовательно, в одном воплощении PD-L1-связывающего полипептида согласно данному аспекту последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-796, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 774-787. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781 и 784-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784 и 786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781 и 784, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 784, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 776, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 781, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 784. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775 и 780-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 775, 780, 781, 784 и 786. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1,2, 17, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 776. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 776. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3-8, 11, 13, 16, 18, 20, 22, 23, 43 и 73. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24. Например, в одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-16, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 7, 9 и 10. В другом воплощении, последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1,3-6, 9-10, 12-21, 23 и 24, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 4-6, 9, 14 и 18-21. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14 и 17-21. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 17. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14 и 18-21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO:4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5 и 21. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1 и 2. В одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO: 21.

Также, в другом воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

5)

где [BMod] представляет собой PD-L1-связывающий модуль, как определено здесь; и

6) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (5).

В качестве альтернативы в изобретении предложен PD-L1-связывающий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

7)

где [BMod] представляет собой PD-L1-связывающий модуль, как определено здесь; и

8) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (7).

Например, в одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, выбранный из группы, состоящей из

9)

где [BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено выше, и Х_с выбран из А и С; и

10) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (9).

В другом воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, выбранный из группы, состоящей из

11)

где [BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено выше, и Х_с выбран из A, S и С; и

12) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (11).

В другом воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, выбранный из группы, состоящей из

13)

где [BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено выше, и Х_с выбран из A, S и С;

14) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (13).

В еще одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, выбранный из группы, состоящей из

15)

где [BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено выше, и Х_с выбран из A, S и С;

16) и аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (15).

Как обсуждалось выше, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с вышеуказанными аминокислотными последовательностями, которые не влияют значительно на третичную структуру и функцию полипептида, также входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях последовательность (6), (8), (10), (12), (14) или (16) может, например, быть по меньшей мере на 90%, например по меньшей мере на 92%, например по меньшей мере на 94%, например по меньшей мере на 96%, например по меньшей мере на 98% идентичной последовательности, определенной в (5), (7), (9), (11), (13) и (15) соответственно.

В некоторых воплощениях PD-L1-связывающий мотив может образовывать часть полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено здесь.

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

17)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено здесь; и

18) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (17).

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

19)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено здесь; и

20) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (19).

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

21)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено здесь; и

22) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (21).

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

23)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено здесь; и

24) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (23).

Аналогично вышеуказанному, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с вышеупомянутыми аминокислотными последовательностями, которые не влияют значительно на третичную структуру и функцию полипептида, также входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях последовательность (18), (20), (22) или (24) может, например, быть по меньшей мере на 89%, например по меньшей мере на 91%, например по меньшей мере на 93%, например по меньшей мере на 94%, например по меньшей мере на 96%, например по меньшей мере на 98% идентична последовательности, определенной в (17), (19), (21) и (23) соответственно.

Последовательность (17) или (21) в таком полипептиде может быть выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-814, представленных на Фиг. 1. В одном воплощении PD-L1-связывающего полипептида согласно этому аспекту, последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774-796 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 774-787 и 809-814. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781, 784-786 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784, 786 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781, 784 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 784, 809 и 811-814, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781, 809 и 811-814. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776, 809 и 811-814, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 781, 809 и 811-814, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 784 и 811-814. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775, 780-786 и 810-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 775, 780, 781, 784, 786 и 810-814. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781 и 809-813, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 781 и 810-813. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 776, 781, 809-812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 776, 809, 811 и 812. В одном воплощении последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 781. В одном воплощении последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 776. В одном воплощении последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 776. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 811-813. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3-8, 11, 13, 16, 18, 22, 23, 43, 73 и 811-813. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24 и 811-813. Например, в одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-16 и 811-813, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 7, 9, 10, 811 и 812. В другом воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3-6, 9-10, 12-21, 23, 24, 811 и 812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 4-6, 9, 14, 18-21, 811 и 812. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14, 17-21 и 811-812. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 17, 811 и 812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5, 17, 811 и 812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 811 и 812. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14, 18, 19, 20, 21 и 811, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO:4, 5 и 21. В одном воплощении последовательность (17)) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1 и 2. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 1 или 811. В одном воплощении последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 2 или 812. В одном воплощении последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO: 21.

Термины "связывание с PD-L1" и "аффинность связывания с PD-L1", при использовании в данном описании изобретения, относятся к свойству полипептида, которое может быть протестировано, например, с помощью ELISA или путем использования технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR).

Например, как описано в приведенных примерах, аффинность связывания с PD-L1 может быть определена в эксперименте, в котором образцы полипептида захватывают на покрытые антителом ELISA планшеты и добавляют биотинилированный PD-L1 с последующим добавлением стрептавидин-конъюгированной HRP (пероксидаза хрена). Добавляют субстрат ТМВ (тетраметилбензидин) и измеряют поглощение при 450 нм с использованием ридера для многолуночных планшетов, такого как Victor³ (Perkin Elmer). Специалист в данной области затем может интерпретировать результаты, полученные в результате таких экспериментов, чтобы дать по меньшей мере качественную оценку аффинности связывания полипептида с PD-L1. Если требуется количественное определение, например для определения значения ЕС50 (половина максимальной эффективной концентрации) для взаимодействия, также можно использовать ELISA. Ответ полипептида на серийное разбавление биотинилированного PD-L1 измеряют с использованием ELISA, как описано выше. Затем специалист может интерпретировать результаты, полученные в этих экспериментах, и рассчитать значения ЕС50 на основе этих результатов, используя, например, GraphPad Prism 5 и нелинейную регрессию.

Аффинность связывания с PD-L1 также может быть определена в эксперименте, в котором PD-L1 или его фрагмент иммобилизован на сенсорном чипе прибора поверхностного плазмонного резонанса (SPR), и пробу, содержащую тестируемый полипептид, пропускают над чипом. Альтернативно, тестируемый полипептид иммобилизуют на сенсорном чипе прибора и образец, содержащий PD-L1 или его фрагмент, пропускают над чипом. Специалист в данной области затем может интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, чтобы дать по меньшей мере качественную оценку аффинности связывания полипептида с PD-L1. Если требуется количественное определение, например для определения значения K_D взаимодействия, также можно использовать методы поверхностного плазмонного резонанса. Величины связывания могут быть, например, определены с помощью прибора Biacore (GE Healthcare) или ProteOn XPR 36 (Bio-Rad). PD-L1 подходящим образом иммобилизируют на сенсорном чипе прибора и образцы полипептида, аффинность которого следует определить, готовят посредством серийного разведения и вводят в случайном порядке. Значения K_D затем могут быть рассчитаны из этих результатов с использованием, например модели связывания 1:1 Ленгмюра программы BIAevaluation 4.1 или другого подходящего программы, предлагаемого изготовителем прибора.

Термины "связывание альбумина" и "аффинность связывания с альбумином", при использовании в данном описании изобретения, относятся к свойству полипептида, которое может быть протестировано, например, посредством использования технологии SPR на приборе Biacore или приборе ProteOn XPR36, аналогично вышеописанному примеру для PD-L1.

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид способен связываться с PD-L1 так, что значение K_D взаимодействия с PD-L1 составляет не более 2×10^-8 М, например не более 1×10^-8 М, например не более 1×10^-9 М, например не более 5×10^-10 М, например не более 3×10^-10 М.

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид способен связываться с PD-L1 так, что значение k_d взаимодействия с PD-L1 составляет не более 1×10^-3 с^-1, например не более 6×10^-4 с^-1.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, который, в соответствии с любым предшествующим аспектом, способен связываться с PD-L1 так, что значение ЕС50 взаимодействия составляет не более 1×10^-9 М, например не более 1×10^-10 М, например не более 7×10^-11 М.

Связывание полипептида, как определено здесь, с PD-L1 может препятствовать передаче сигнала через PD-L1 in vivo или in vitro. Когда PD-L1 связывается с PD-1, взаимодействие лиганд/рецептор уменьшает ответ Т-лимфоцитов посредством, например, ингибирования киназ, вовлеченных в активацию Т-лимфоцитов. Таким образом, блокирование связывания PD-L1 с PD-1 восстанавливает ответ Т-лимфоцитов. Активность блокирования, например, может быть количественно определена как концентрация, вызывающая половину максимального ингибирования (IC50), которая является мерой эффективности вещества в ингибировании конкретной биологической или биохимической функции. Эта количественная мера указывает, сколько конкретного вещества необходимо для ингибирования данного биологического процесса наполовину, и обычно используется в данной области.

Таким образом, в одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, как определено здесь, который способен блокировать PD-L1-зависимую передачу сигнала. В одном воплощении концентрация, вызывающая половину максимального ингибирования (IC50) блокирования, составляет не более 5×10^-8 М, например не более 1×10^-8 М, например не более 5×10^-9 М, например не более 3,5×10^-9 М, например не более 1×10^-9 М, например не более 5×10^-10 М, например не более 1×10^-10 М. В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид способен блокировать взаимодействие PD-L1 c PD-1.

В одном воплощении указанный PD-L1 представляет собой человеческий PD-L1. В другом воплощении указанный PD-L1 представляет собой PD-L1 макаки-резус.

Специалист в данной области понимает, что могут быть произведены различные модификации и/или добавления в PD-L1-связывающий полипептид в соответствии с любым аспектом, раскрытым здесь, чтобы адаптировать полипептид в соответствие с конкретным применением, не отступая от объема настоящего изобретения. Например, в одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, как описано здесь, который удлинен и/или содержит дополнительные аминокислоты на С-конце и/или N-конце. Такой полипептид следует понимать как полипептид, имеющий один или более дополнительных аминокислотных остатков в самом первом и/или в самом последнем положении в полипептидной цепи. Таким образом, PD-L1-связывающий полипептид может содержать любое подходящее количество дополнительных аминокислотных остатков, например по меньшей мере один дополнительный аминокислотный остаток. Каждый дополнительный аминокислотный остаток может быть добавлен отдельно или в совокупности для того чтобы, например, улучшить и/или упростить получение, очистку, стабилизацию in vivo или in vitro, связывание или детектирование полипептида. Такие дополнительные аминокислотные остатки могут содержать один или несколько аминокислотных остатков, добавленных для химического связывания. Одним из примеров этого является добавление цистеинового остатка. Дополнительные аминокислотные остатки также могут обеспечивать "тег" для очистки или обнаружения полипептида, например тег His₆, тег (HisGlu)₃ ("тег НЕНЕНЕ") или тег "myc" (с-myc) или тег "FLAG" для взаимодействия с антителами, специфичными к тегу или для аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (IMAC) в случае His₆-тега.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, как описано здесь, который содержит дополнительные аминокислоты на С-конце и/или на N-конце. Например, в одном воплощении PD-L1-связывающего полипептида, как описано здесь, он состоит из любой описанных здесь последовательностей, имеющей от 0 до 15 дополнительных С-концевых и/или N-концевых остатков, например от 0 до 7 дополнительных С-концевых и/или N-концевых остатков. В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид состоит из любой из описанных здесь последовательностей, имеющей от 0 до 15, например от 0 до 4, например 3 дополнительных С-концевых остатков. В одном конкретном воплощении PD-L1-связывающий полипептид, как описано здесь, содержит дополнительные С-концевые остатки VDC или VEC.

Дополнительные аминокислоты, как обсуждалось выше, могут быть соединены с PD-L1-связывающим полипептидом посредством химического конъюгирования (с использованием известных методов органической химии) или любыми другими способами, такими как экспрессия PD-L1-связывающего полипептида в виде слитого белка, или присоединены любым другим способом, либо непосредственно, либо через линкер, например аминокислотный линкер.

Другой полипептидный домен может, кроме того, обеспечивать другой PD-L1-связывающий фрагмент. Таким образом, в еще одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид в мультимерной форме. Подразумевается, что указанный мультимер содержит по меньшей мере два PD-L1-связывающих полипептида, как раскрыто здесь, в качестве мономерных единиц, аминокислотные последовательности которых могут быть одинаковыми или разными. Мультимерные формы полипептидов могут содержать подходящее количество доменов, каждый из которых имеет PD-L1-связывающий мотив и каждый из которых образует мономер в рамках мультимера. Эти домены могут иметь одну и ту же аминокислотную последовательность, но, альтернативно, они могут иметь разные аминокислотные последовательности. Другими словами, PD-L1-связывающий полипептид по изобретению может образовывать гомо- или гетеромультимеры, например гомо- или гетеродимеры. В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, где указанные мономерные единицы ковалентно связаны друг с другом. В другом воплощении указанные мономерные единицы PD-L1-связывающего полипептида экспрессируются в виде слитого белка. В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид в димерной форме. В одном конкретном воплощении указанная димерная форма представляет собой гомодимерную форму. В другом воплощении указанная димерная форма представляет собой гетеродимерную форму. Для ясности, в данном описании изобретения термин "PD-L1-связывающий полипептид" используют как включающий PD-L1-связывающие полипептиды во всех формах, то есть в мономерной и мультимерной формах.

Другие аминокислоты, как обсуждалось выше, могут, например, содержать один или более дополнительных полипептидных доменов. Дополнительный полипептидный домен может обеспечить PD-L1-связывающий димер с другой функцией, такой как, например, другая функция связывания, или ферментативная функция, или токсическая функция, или флуоресцентная сигнальная функция, или их комбинация.

Кроме того, может быть полезным, что PD-L1-связывающий полипептид, как определено здесь, является частью слитого белка или конъюгата, содержащего второй или дополнительный фрагмент(ы). Второй и дополнительные фрагмент/фрагменты слитого полипептида или конъюгата в таком белке может подходящим образом иметь нужную биологическую активность.

Таким образом, во втором аспекте настоящего изобретения предложен слитый белок или конъюгат, содержащий первый фрагмент, состоящий из PD-L1-связывающего полипептида согласно первому аспекту, и второй фрагмент, состоящий из полипептида, имеющего нужную биологическую активность. В другом воплощении указанный слитый белок или конъюгат может дополнительно содержать дополнительные фрагменты, содержащие нужные биологические активности, которые могут быть такими же или отличными от биологической активности второго фрагмента.

Неограничивающие примеры нужной биологической активности включают терапевтическую активность, связывающую активность и ферментативную активность. В одном воплощении второй фрагмент, имеющий нужную биологическую активность, является терапевтически активным полипептидом. В одном воплощении указанный второй фрагмент является агентом, модифицирующим иммунный ответ. В другом воплощении указанный второй фрагмент является противораковым агентом.

В одном воплощении либо первого, либо второго аспекта настоящего изобретения предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат, который содержит агент, модифицирующий иммунный ответ. Неограничивающие примеры дополнительных модификаторов иммунного ответа включают иммуномодулирующие агенты или другие противовоспалительные средства.

В одном воплощении либо первого, либо второго аспекта настоящего изобретения предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат, который содержит противораковый агент. Неограничивающие примеры противораковых агентов включают агенты, выбранные из группы, состоящей из ауристатина, антрациклина, калихеамицина, комбретастатина, доксорубицина, дуокармицина, противоопухолевого антибиотика СС-1065, эктеинасцидина, гелданамицина, майтансиноида, метотрексата, микотоксина, таксола, рицина, буганина, гелонина, экзотоксина 38 Pseudomonas (РЕ38), дифтерийного токсина (DT) и их аналогов, их производных и их комбинаций. Специалисту в данной области понятно, что неограничивающие примеры противораковых агентов включают все возможные варианты указанных агентов, например подразумевается, что агент ауристатин включает, например, ауристатин Е, ауристатин F, ауристатин РЕ и их производные.

Неограничивающими примерами терапевтически активных полипептидов являются биомолекулы, такие как молекулы, выбранные из группы, состоящей из эндогенных энзимов, гормонов, факторов роста, хемокинов, цитокинов и лимфокинов человека.

Неограничивающие примеры активностей связывания представляют собой активности связывания, которые увеличивают время полужизни слитого белка или конъюгата in vivo, и активности связывания, которые действуют в отношении блокирования биологической активности. Одним из примеров такой активности связывания является активность связывания, которая увеличивает время полужизни слитого белка или конъюгата in vivo. В одном воплощении указанного слитого белка или конъюгата время полужизни указанного белка или конъюгата in vivo дольше, чем время полужизни in vivo полипептида, имеющего нужную биологическую активность, самого по себе. В одном воплощении указанное время полужизни in vivo увеличено по меньшей мере в 10 раз, например по меньшей мере в 25 раз, например по меньшей мере в 50 раз, например по меньшей мере в 75 раз, например по меньшей мере в 100 раз, по сравнению со временем полужизни in vivo слитого белка или конъюгата самого по себе.

Слитый белок или конъюгат может содержать по меньшей мере один дополнительный фрагмент. В одном конкретном воплощении указанной мишенью является альбумин, связывание с которым увеличивает время полужизни in vivo указанного слитого белка или конъюгата. В одном воплощении указанную активность связывания альбумина обеспечивает альбумин-связывающий домен (ABD) стрептококкового белка G или его производное. Таким образом, указанный слитый белок может, например, содержать PD-L1-связывающий полипептид в мономерной или мультимерной форме (например в гомодимерной или гетеродимерной форме), как определено здесь, и альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G или его производное.

В другом воплощении предложен слитый белок или конъюгат, где второй фрагмент, имеющий нужную активность связывания, представляет собой белок на основе белка Z, полученного из домена В белка A Staphylococcus aureus, который имеет аффинность связывания к мишени, отличной от PD-L1.

Например, указанный слитый белок или конъюгат, содержащий по меньшей мере один дополнительный фрагмент, может содержать [PD-L1-связывающий полипептид]-[альбумин-связывающий фрагмент]-[фрагмент с аффинностью к выбранной мишени]. Следует понимать, что эти три фрагмента в этом примере могут быть расположены в любом порядке от N- к С-концу полипептида.

Специалисту известно, что конструкция слитого белка часто включает использование линкеров между функциональными фрагментами, которые должны быть слиты, и существуют разные типы линкеров с разными свойствами, такие как гибкие аминокислотные линкеры, жесткие аминокислотные линкеры и расщепляемые аминокислотные линкеры. Линкеры используют, например, для повышения стабильности или улучшения фолдинга слитых белков, для увеличения экспрессии, улучшения биологической активности, обеспечения направленной доставки и изменения фармакокинетики слитых белков. Таким образом, в одном воплощении полипептид в соответствии с любым аспектом, раскрытым здесь, дополнительно включает по меньшей мере один линкер, например по крайней мере один линкер, выбранный из гибких аминокислотных линкеров, жестких аминокислотных линкеров и расщепляемых аминокислотных линкеров. В одном воплощении указанный линкер расположен между указанным PD-L1-связывающим полипептидом и дополнительным полипептидным доменом, например между PD-L1-связывающим доменом, описанным здесь, и антителом или его антигенсвязывающим фрагментом (как описано более подробно ниже). Гибкие линкеры часто используют в данной области, когда соединяемые домены требуют определенной степени подвижности или взаимодействия, и могут быть особенно полезными в некоторых воплощениях комплекса. Такие линкеры обычно состоят из небольших неполярных (например G) или полярных (например S или Т) аминокислот. Некоторые гибкие линкеры в основном состоят из участков, состоящих из остатков G и S, например (GGGGS)_p. Корректировка числа копий "р" позволяет оптимизировать линкер, чтобы обеспечить подходящее разделение функциональных фрагментов или поддержать необходимое взаимодействие между фрагментами. Помимо G- и S-линкеров, в данной области техники известны другие гибкие линкеры, такие как G- и S-линкеры, содержащие дополнительные аминокислотные остатки, такие как Т и А, для поддержания гибкости, а также полярные аминокислотные остатки для улучшения растворимости. Дополнительные неограничивающие примеры линкеров включают и , соответствующие SEQ ID NO: 820-836 соответственно, и GT. Опытному специалисту известны другие подходящие линкеры.

В одном воплощении указанный линкер представляет собой гибкий линкер, содержащий остатки глицина (G), серина (S) и/или треонина (Т). В одном воплощении указанный линкер имеет общую формулу, выбранную из (G_nS_m)_p и (S_nG_m)_p, где, независимо, n представляет собой 1-7, m представляет собой 0-7, n+m не более 8, и р представляет собой 1-7. В одном воплощении n представляет собой 1-5. В одном воплощении m представляет собой 0-5. В одном воплощении р представляет собой 1-5. В более конкретном воплощении n представляет собой 4, m представляет собой 1 и р представляет собой 1-4. В одном воплощении указанный линкер выбран из группы, состоящей из S₄G, (S₄G)₃ и (S₄G)₄. В одном воплощении указанный линкер выбран из группы, состоящей из G₄S и (G₄S)₃. В одном конкретном воплощении указанный линкер представляет собой G₄S, и в другом воплощении указанный линкер представляет собой (G₄S)₃.

Что касается вышеописанных слитых белков или конъюгатов, включающих PD-L1-связывающий полипептид согласно описанию, следует отметить, что обозначение первый, второй и далее фрагмент сделано для ясности, чтобы различать PD-L1-связывающий полипептид или полипептиды по изобретению с одной стороны и фрагменты, имеющие другие функции, с другой стороны. Эти обозначения не предназначены обозначать фактический порядок разных доменов в полипептидной цепи слитого белка или конъюгата. Аналогично, обозначения первая и вторая мономерная единица сделаны для ясности, чтобы различать указанные единицы. Таким образом, например, указанный первый фрагмент (или мономерная единица) может без ограничения находиться на N-конце, в середине, или на С-конце слитого белка или конъюгата.

В последнее время был достигнут значительный прогресс в разработке мультиспецифических агентов, таких как антитела, обладающие способностью связываться с более чем одним антигеном, например путем конструирования областей, определяющих комплементарность (CDR), нацеленных на два антигена в одном паратопе (Bostrom et al., 2009, Science 323(5921):1610-1614; Schaefer et al., 2011, Cancer Cell 20(4):472-486), путем конструирования гетеродимерных антител с использованием сконструированных Fc-единиц (Carter, 2001, J Immunol Methods 248(l-2):7-15; Schaefer et al, 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108(27): 111 87-11192) и путем генетического слияния вспомогательных единиц распознавания с N- или С-концами легких или тяжелых цепей полноразмерных антител (Kanakaraj et al., 2012, MAbs 4(5):600-613; LaFleur et al, 2013, MAbs 5(2):208-218). Таким образом, может быть полезно для молекулы, имеющей аффинность к PD-L1, как раскрыто здесь, также проявлять аффинность к другому фактору, такому как фактор, ассоциированный с раком или фактор, ассоциированный с иммунным ответом.

Таким образом, в третьем аспекте настоящего изобретения предложен комплекс, содержащий по меньшей мере один PD-L1-связывающий полипептид и по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где PD-L1-связывающий полипептид является таким, как описано здесь.

При использовании здесь предполагается, что термин "комплекс" относится к двум или более ассоциированным полипептидным цепям, по меньшей мере одна из которых имеет аффинность к PD-L1 и по меньшей мере одна является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Каждая из этих полипептидных цепей может содержать разные белковые домены, и итоговый мультипротеиновый комплекс может иметь несколько функций. Предполагается, что "комплекс" относится к двум или более полипептидам, как определено здесь, связанным ковалентными связями, например к двум или более полипептидным цепям, связанным ковалентными цепями, посредством их экспрессии как рекомбинантного слитого белка, или ассоциированных посредством химической конъюгирования.

Хорошо известно, что антитела представляют собой молекулы иммуноглобулина, способные специфически связываться с мишенью (антигеном), такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид или другой, посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена, расположенного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. При использовании здесь, термин "антитело или его антигенсвязывающий фрагмент" охватывает не только полноразмерные или интактные поликлональные или моноклональные антитела, но и их антигенсвязывающие фрагменты, такие как Fab, Fab', F(ab')₂, Fab₃, Fv или их варианты, слитые белки, содержащие один или более участков антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, миниантитела, диатела, триатела, тетратела, линейные антитела, одноцепочечные антитела, мультиспецифические антитела (например биспецифические антитела) и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит сайт распознавания антигена нужной специфичности, включая варианты гликозилирования антител, аминокислотные последовательности вариантов антител и ковалентно модифицированные антитела. Дополнительные примеры модифицированных антител и их антигенсвязывающих фрагментов включают нанотела, AlbudAb, DART (переориентирующееся антитело с двойной аффинностью), BiTE (биспецифический активатор, привлекающий Т-клетки), TandAb (тандемные диатела), DAF (Fab двойного действия), антитела два-в-одном, SMIP (иммунофармацевтическое средство на основе модульного белка малого размера), FynomAb (финомеры, слитые с антителами), DVD-Ig (иммуноглобулин с двойным вариабельным доменом), CovX-тела (пептид-модифицированные антитела), дуотела и триом-Ab. Этот перечень вариантов антител и их антигенсвязывающих фрагментов не следует рассматривать как ограничивающий, и квалифицированному специалисту известны другие подходящие варианты.

Полноразмерное антитело содержит две тяжелые цепи и две легкие цепи. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и первую, вторую и третью константные области (C_H1, C_H2 и C_H3). Каждая легкая цепь содержит вариабельный участок легкой цепи (V_L) и константную область легкой цепи (C_L). В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей, антитела относят к разным классам. Существует шесть основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM и IgY, и некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl и IgA2. Термин "полноразмерное антитело" при использовании здесь относится к антителу любого класса, такому как IgD, IgE, IgG, IgA, IgM или IgY (или любому его подклассу). Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации разных классов антител хорошо известны.

"Антигенсвязывающий фрагмент" представляет собой часть или область молекулы антитела или ее производное, которые сохраняют всю или значительную часть связывания антигена соответствующего полноразмерного антитела. Антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельную область тяжелой цепи (V_H), вариабельную область легкой цепи (V_L) или и то, и другое. Каждый из V_H и V_L обычно содержит три области, определяющие комплементарность, CDR1, CDR2 и CDR3. Три CDR в V_H или V_L окружены каркасными областями (FR1, FR2, FR3 и FR4). Как кратко указано выше, примеры антигенсвязывающих фрагментов включают, без ограничения ими: (1) Fab-фрагмент, который является моновалентным фрагментом, имеющим цепь V_L-C_L и цепь V_H-C_H1; (2) фрагмент Fab', который представляет собой Fab-фрагмент с шарнирной областью тяжелой цепи, (3) фрагмент F(ab')₂, который представляет собой димер фрагментов Fab', соединенных шарнирной областью тяжелой цепи, например связанный дисульфидным мостиком в шарнирной области; (4) фрагмент Fc; (5) фрагмент Fv, который является минимальным фрагментом антитела, имеющим V_L и V_H-домены одного плеча антитела; (6) одноцепочечный фрагмент Fv (scFv), который представляет собой одиночную полипептидную цепь, в которой домены V_H и V_L в scFv соединены пептидным линкером; (7) (scFv)₂, который содержит два домена V_H и два домена V_L, которые связаны через два домена V_H посредством дисульфидных мостиков и (8) доменные антитела, которые могут быть полипептидами одного вариабельного домена (V_H или V_L), специфично связывающими антигены.

Антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены с помощью обычных методов. Например, фрагменты F(ab')₂ могут быть получены путем расщепления пепсином молекулы полноразмерного антитела, и фрагменты Fab могут быть образованы путем восстановления дисульфидных мостиков фрагментов F(ab')₂. Альтернативно, фрагменты могут быть получены с помощью рекомбинантной технологии путем экспрессии фрагментов тяжелой и легкой цепей в подходящих клетках-хозяевах (например в клетках E.coli, дрожжей, млекопитающих, растений или насекомых) и их сборки с образованием нужных антигенсвязывающих фрагментов либо in vivo, либо in vitro. Одноцепочечное антитело может быть получено с помощью рекомбинантной технологии путем соединения нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельный участок тяжелой цепи, и нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельный участок легкой цепи. Например, между двумя вариабельными областями может быть включен гибкий линкер. Квалифицированному специалисту известны способы получения как полноразмерных антител, так и их антигенсвязывающих фрагментов.

Таким образом, в одном воплощении в данном аспекте изобретения предложен комплекс, как он определен здесь, где по меньшей мере одно указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, фрагментов Fab, фрагментов Fab', фрагментов F(ab')₂, фрагментов Fc, фрагментов Fv, одноцепочечных фрагментов Fv, (scFv)₂ и доменных антител. В одном воплощении по меньшей мере одно указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из полноразмерных антител, фрагментов Fab и фрагментов scFv. В одном конкретном воплощении, по меньшей мере одно указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полноразмерное антитело.

В одном воплощении указанного комплекса, как определено здесь, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из моноклональных антител, человеческих антител, гуманизированных антител, химерных антител, и их антигенсвязывающих фрагментов.

При использовании здесь термин "моноклональные антитела" относится к антителам, имеющим моновалентную аффинность, что означает, что каждая молекула антитела в образце моноклонального антитела связывается с одним и тем же эпитопом антигена, в то время как используемый здесь термин "поликлональные антитела" относится к совокупности антител, которые взаимодействуют с определенным антигеном, но в этой совокупности могут быть молекулы разных антител, например идентифицирующие разные эпитопы на антигене. Поликлональные антитела обычно получают путем инокуляции подходящего млекопитающего и очищают из сыворотки млекопитающего. Моноклональные антитела получают с помощью идентичных иммунных клеток, которые являются клонами уникальной родительской клетки (например линии клеток гибридомы). При использовании здесь термин "человеческое антитело" относится к антителам, имеющим вариабельные и константные участки, по существу соответствующие антителам или происходящие от антител, полученных из людей. Используемый здесь термин "химерные антитела" относится к рекомбинантным или генетически сконструированным антителам, таким как, например, мышиные моноклональные антитела, которые содержат полипептиды или домены из разных видов, например человеческие, введенные для снижения иммуногенности антител. Термин "гуманизированные антитела" относится к антителам из видов, не являющихся человеком, чьи последовательности белка модифицированы для увеличения их сходства с вариантами антител, продуцируемыми естественным образом у людей, с целью снижения иммуногенности.

Комплекс, описанный здесь, может, например, присутствовать в виде слитого белка или конъюгата. Таким образом, по меньшей мере один указанный PD-L1-связывающий полипептид и указанное по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть соединены посредством химической конъюгирования (с использованием методов органической химии) или любыми другими способами, такими как экспрессия комплекса в виде слитого белка или соединенного любым другим способом, либо непосредственно, либо посредством линкера, например аминокислотного линкера. Специалисту в данной области понятно, что приведенное выше описание линкерных последовательностей в отношении слитых полипептидов в равной степени релевантно в отношении комплекса, как описано здесь.

Таким образом, в одном воплощении предложен комплекс, как определено здесь, где указанный комплекс представляет собой слитый белок или конъюгат. В одном воплощении указанный комплекс представляет собой слитый белок. В другом воплощении указанный комплекс представляет собой конъюгат. В одном воплощении указанного комплекса указанный PD-L1-связывающий полипептид присоединен к N-концу или к С-концу тяжелой цепи указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В другом воплощении указанный PD-L1-связывающий полипептид присоединен к N-концу или С-концу легкой цепи указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В одном воплощении указанный PD-L1-связывающий полипептид присоединен к N-концу и/или С-концу легкой цепи и тяжелой цепи указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Например, PD-L1-связывающий полипептид может быть присоединен только к N-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только к N-концу легкой(их) цепи(ей), только к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только С-концу легкой(их) цепи(ей), как к N-концу, так и к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей), как к N-концу, так и к С-концу легкой(их) цепи(ей), только к С-концу легкой(их) цепи(ей) и к N-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей) и к N-концу легкой(их) цепи(ей) указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В одном воплощении предложен комплекс, где указанный PD-L1-связывающий полипептид присоединен либо к С-концу, либо к N-концу тяжелой цепи или легкой цепи указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В одном конкретном воплощении предложен комплекс по любому из предшествующих аспектов, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент обладает аффинностью к антигену, например к антигену, ассоциированному с инфекционным заболеванием, или к антигену, ассоциированному с раком. Например, указанный антиген может представлять собой PD-1 или CTLA-4.

В одном воплощении предложен слитый белок, конъюгат или комплекс, как описано здесь, где указанный второй или другой фрагмент/фрагменты, или антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор, выбранный из группы, состоящей из ингибиторов: PD-1, CTLA-4, Т-клеточного иммуноглобулина и муцинсодержащего белка-3 (TIM-3), галектина-9 (GAL-9), гена активации лимфоцитов-3 (LAG-3), PD-L2, B7 гомолога 3 (В7-Н3), В7 гомолога 4 (В7-Н4), V-доменного Ig-супрессора активации Т-клеток (VISTA), молекулы клеточной адгезии 1 карциноэмбрионального антигена (СЕАСАМ1), аттенюатора В- и Т-лимфоцитов (BTLA), рецептора колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R), медиатора проникновения вируса герпеса (HVEM), киллерных иммуноглобулиновых рецепторов (KIR), аденозина, рецептора аденозина А2а (A2aR), CD200-CD200R и Т-клеточного Ig и домена ITIM (иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив).

В одном воплощении указанный второй фрагмент, или антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор PD-1, такой как ингибитор, выбранный из группы, состоящей из ниволумаба, пидилизумаба, BMS 936559, MPDL328OA (Roche) и пембролизумаба. В конкретном воплощении ингибитор представляет собой пембролизумаб.

В одном воплощении указанный второй фрагмент, или антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор CTLA-4, такой как ингибитор, выбранный из группы, состоящей из белатацепта, абатацепта, тремелимумаба и ипилимумаба. В конкретном воплощении ингибитор представляет собой ипилимумаб.

В одном воплощении предложен слитый белок, конъюгат или комплекс, как описано здесь, где указанный второй фрагмент, или антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой агонист, выбранный из группы, состоящей из агонистов CD134, CD40, 4-1ВВ и индуцированного глюкокортикоидами TNFR-родственного белка (GITR).

Кроме того, указанные выше аспекты охватывают полипептиды, в которых PD-L1-связывающий полипептид согласно первому аспекту, PD-L1-связывающий полипептид, содержащийся в слитом белке или конъюгате согласно второму аспекту или в комплексе согласно третьему аспекту, дополнительно содержит метку, такую как метка, выбранная из группы, состоящей из флуоресцентных красителей и металлов, хромофорных красителей, хемилюминесцентных соединений, биолюминесцентных белков, ферментов, радионуклидов, радиоактивных частиц и меток распознавания при предварительном нацеливании. Такие метки могут, например, быть использованы для обнаружения полипептида. Например, в некоторых воплощениях, такой меченый полипептид можно, например, использовать для мечения опухолей или нацеливания на опухоли, которые имеют высокую экспрессию PD-L1.

Недавно было продемонстрировано непрямое мечение Z-варианта полипептида с использованием меток распознавания при предварительном нацеливании (Westerlund et al., (2015), Bioconjugate Chem 26:1724-1736). Аналогично, в изобретении предложен PD-L1-связывающий полипептид, как описано здесь, меченный предварительно нацеленным фрагментом, который можно затем использовать для непрямого мечения фрагментом, комплементарным предварительно нацеленному фрагменту. Когда он содержит предварительно нацеленный фрагмент, PD-L1-связывающий агент по настоящему изобретению способен ассоциировать с комплементарным предварительно нацеленным фрагментом, и такой комплементарный предварительно нацеленный фрагмент может затем содержать подходящий радионуклид или присоединяться к подходящему радионуклиду. Специалисту в данной области известны подходящие радионуклиды для терапевтических, диагностических и/или прогностических целей. Такой радионуклид может быть хелатирован с указанным комплементарным предварительно нацеленным фрагментом посредством хелатирующего окружения, как в общем случае описано для PD-L1-связывающего агента ниже.

В одном воплощении комплементарная пара предварительно нацеленных фрагментов содержит стрепт(авидин)/биотин, олигонуклеотид/комплементарный олигонуклеотид, например ДНК/комплементарную ДНК, РНК/комплементарную РНК, фосфоротиоатную нуклеиновую кислоту/комплементарную фосфоротиоатную нуклеиновую кислоту и пептидо-нуклеиновую кислоту (ПНК)/комплементарную пептидо-нуклеиновую кислоту (кПНК) и морфолиновый олигонуклеотид/комплементарный морфолиновый олигонуклеотид. В одном конкретном воплощении указанный предварительно нацеленный фрагмент представляет собой ПНК-олигонуклеотид, например 10-20-мерную последовательность ПНК, например 15-мерную последовательность ПНК.

В воплощениях, в которых полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс являются мечеными, непосредственно или опосредованно (например посредством предварительного нацеливания, как описано выше), с помощью агента визуализации (например радиоактивного агента), измерение количества меченого полипептида, присутствующего в опухоли, может быть выполнено с использованием оборудования для визуализации, например путем получения количества радиоактивных импульсов или изображений плотности излучения, или их производных, например концентрации излучения. Неограничивающие примеры радионуклидов, подходящих либо для прямого мечения PD-L1-связывающего агента в соответствии с любым аспектом, раскрытым в настоящем описании, либо для опосредованного мечения путем мечения комплементарного предварительно нацеленного фрагмента, включают ⁶⁸Ga, ^110mIn, ¹⁸F, ⁴⁵Ti, ⁴⁴Sc, ⁶¹Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁴Cu, ⁵⁵Co, ⁷²As, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ¹²⁴I, ⁷⁶Br, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹²³I, ¹³¹I и ⁶⁷Ga.

В одном воплощении оборудованием для визуализации, используемым в таких измерениях, является позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), в этом случае радионуклид выбирают таким образом, чтобы он был пригодным для ПЭТ. Специалисту в данной области известны радионуклиды, пригодные для использования с ПЭТ. Например, радионуклид для ПЭТ выбирают из группы, состоящей из ⁶⁸Ga, ^110mIn, ¹⁸F, ⁴⁵Ti, ⁴⁴Sc, ⁶¹Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁴Cu, ⁵⁵Co, ⁷²As, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ¹²⁴I и ⁷⁶Br.

В другом воплощении используемым оборудованием для визуализации является однофотонная эмиссионная компьютерная томография (SPECT), в этом случае радионуклид выбирают таким образом, чтобы он подходил для SPECT. Специалисту в данной области известны радионуклиды, пригодные для использования с SPECT. Например, SPECT радионуклид выбран из группы, состоящей из ¹¹¹In, ^99mTc, ¹²³I, ¹³¹I и ⁶⁷Ga.

Таким образом, в одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок или комплекс, как описано здесь, который включает прямую или непрямую радионуклидную метку, такую как радионуклид, выбранный из группы, состоящей из ⁶⁸Ga, ^110mIn, ¹⁸F, ⁴⁵Ti, ⁴⁴Sc, ⁶¹Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁴Cu, ⁵⁵Co, ⁷²As, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ¹²⁴I, ⁷⁶Br, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹²³I, ¹³¹I и ⁶⁷Ga, такой как группа, состоящая из ⁶⁸Ga, ^110mIn, ¹⁸F, ⁴⁵Ti, ⁴⁴Sc, ⁶¹Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁴Cu, ⁵⁵Co, ⁷²As, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ¹²⁴I и ⁷⁶Br, такой как ¹⁸F.

В некоторых воплощениях меченый PD-L1-связывающий полипептид присутствует в виде фрагмента в слитом белке, конъюгате или комплексе, также содержащем второй фрагмент, имеющий нужную биологическую активность. Метка в некоторых случаях может быть соединена только с PD-L1-связывающим полипептидом, а в некоторых случаях как с PD-L1-связывающим полипептидом, так и со вторым фрагментом слитого белка, или конъюгата, и/или антитела или его антигенсвязывающего фрагмента комплекса. Кроме того, также возможно, что метка может быть соединена со вторым фрагментом, или антителом или антигенсвязывающим фрагментом, а не с PD-L1-связывающим фрагментом. Соответственно, в еще одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, содержащий второй фрагмент, где указанная метка соединена только со вторым фрагментом. В другом воплощении предложен комплекс, как определено здесь, где указанная метка соединена только с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.

Когда сделана ссылка на меченый полипептид, это следует понимать как ссылку на все аспекты полипептидов, как описано здесь, включая PD-L1-связывающие полипептиды, слитые белки, конъюгаты и комплексы, содержащие PD-L1-связывающий полипептид. Таким образом, меченый полипептид может содержать только PD-L1-связывающий полипептид и, например, терапевтический радионуклид, который может быть хелатированным или ковалентно связанным с PD-L1-связывающим полипептидом или содержит PD-L1-связывающий полипептид, терапевтический радионуклид и второй фрагмент, такой как малая молекула, имеющая нужную биологическую активность, например терапевтическую эффективность. Меченый полипептид может содержать PD-L1-связывающий полипептид в гетеродимерной форме и, например, терапевтический радионуклид, который может быть хелатированным или ковалентно связанным с PD-L1-связывающим полипептидом или содержит PD-L1-связывающий полипептид в гетеродимерной форме, терапевтический радионуклид и второй фрагмент, такой как малая молекула, имеющая нужную биологическую активность, например, терапевтическую эффективность. Также предложен комплекс, содержащий PD-L1-связывающий полипептид, как определено здесь, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и, например, терапевтический радионуклид, который может быть хелатированным или ковалентно связанным с PD-L1-связывающим полипептидом, или с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Специалисту известны другие возможные варианты.

В воплощениях, где PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс является радиоактивно меченым, такой радиоактивно меченый полипептид может содержать радионуклид. Большинство радионуклидов имеют металлическую природу и металлы обычно неспособны образовывать стабильные ковалентные связи с элементами, присутствующими в белках и пептидах. По этой причине мечение белков и пептидов радиоактивными металлами осуществляют с использованием хелаторов, то есть полидентатных лигандов, которые образуют нековалентные соединения, называемые хелатами, с ионами металлов. В одном воплощении PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса, включение радионуклида происходит через создание хелатирующего окружения, посредством которого радионуклид может быть скоординирован, хелатирован или образовать комплекс с полипептидом. Одним примером хелатора является полиаминополикарбоксилатный тип хелатора. Можно выделить два класса таких полиаминополикарбоксилатных хелаторов: макроциклические и ациклические хелаторы.

В одном воплощении PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс содержит хелатирующее окружение, обеспечиваемое полиаминокарбоксилатным хелатором, конъюгированным с PD-L1-связывающим полипептидом через тиольную группу остатка цистеина или эпсилон-аминогруппу остатка лизина.

Наиболее часто используемыми макроциклическими хелаторами для радиоизотопов индия, галлия, иттрия, висмута, радиоактинидов и радиолантанидов являются разные производные DOTA (1,4,7,10-тетраазациклодо декан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота). В одном воплощении хедатирующее окружение PD-L1-связывающего полипептида, PD-L1-связывающего полипептида в гетеродимерной форме, слитого белка, конъюгата или комплекса обеспечено DOTA или ее производным. Более конкретно, в одном воплощении хелатирующий полипептид, охватываемый настоящим изобретением, получают путем взаимодействия производного DOTA 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-трис-уксусная кислота-10-малеимидоэтилацетамида (малеимидомоамид-DOTA) с указанным полипептидом. В одном воплощении хелатирующий полипептид, охватываемый настоящим изобретением, получают путем взаимодействия производного DOTA DOTAGA (2,2',2''-(10-(2,6-диоксотетрагидро-2Н-пиран-3-ил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триацетокси) с указанным полипептидом. Кроме того, в качестве хелаторов можно использовать 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту (NOTA) и ее производные. Следовательно, в одном воплощении хелатирующее окружение PD-L1-связывающего полипептида, PD-L1-связывающего полипептида в гетеродимерной форме, слитого белка, конъюгата или комплекса обеспечено NOTA или ее производным. В одном воплощении хелатирующий полипептид, охватываемый настоящим изобретением, получают путем взаимодействия производного NOTA NODAGA (2,2'-(7-(1-карбокси-4-((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил) диуксусной кислоты) с указанным полипептидом. Наиболее часто используемыми ациклическими полиаминокарбоксилатными хелаторами являются разные производные DTPA (диэтилентриамин-пентауксусная кислота). Следовательно, полипептиды, имеющие хелатирующее окружение, обеспечиваемое диэтилентриаминпентауксусной кислотой или ее производными, также охвачены настоящим изобретением.

В других аспектах настоящего изобретения предложены полинуклеотид, кодирующий PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок или комплекс, как описано в данном описании изобретения; экспрессионный вектор, содержащий указанный полинуклеотид; и клетка-хозяин, содержащая указанный экспрессионный вектор.

Кроме того, в данном описании изобретения предложен способ получения PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка или комплекса, как описано выше, включающий культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, разрешающих экспрессию указанного полипептида с этого экспрессирующего вектора, и выделение полипептида.

Альтернативно, PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок или комплекс по настоящему изобретению может быть получен посредством небиологического пептидного синтеза с использованием аминокислот и/или производных аминокислот, имеющих защищенные реакционноспособные боковые цепи, небиологического пептидного синтеза, включающего

- последовательное присоединение аминокислот и/или производных аминокислот с образованием полипептида, слитого белка или комплекса, как описано здесь, имеющего защищенные реакционноспособные боковые цепи,

- удаление защитных групп с реакционноспособных боковых цепей полипептида, слитого белка или комплекса, и

- фолдинг полипептида в водном растворе.

Комплекс, раскрытый здесь, также может быть получен посредством конъюгирования по меньшей мере одного PD-L1-связывающего полипептида или слитого белка, описанных здесь, по меньшей мере с одним антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Специалисту в данной области известны способы конъюгирования, такие как обычные способы химического конъюгирования, например с использованием заряженных сукцинимидиловых сложных эфиров или карбодиимидов.

Следует понимать, что PD-L1-связывающий полипептид по настоящему изобретению может быть полезен в качестве терапевтического, диагностического и/или прогностического агента сам по себе или в качестве средства нацеливания других терапевтических или диагностических агентов, например с прямыми или косвенными воздействиями на PD-L1. Прямой терапевтический эффект может быть, например, осуществлен путем ингибирования передачи сигналов через PD-L1. Непрямой терапевтический эффект может быть, например, осуществлен путем предварительного нацеливания с использованием PD-L1-связывающих полипептидов, как описано выше.

Таким образом, в еще одном аспекте предложена композиция, содержащая PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, как описано здесь, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. В одном воплощении указанная композиция, кроме того, содержит по меньшей мере один дополнительный активный агент, например по меньшей мере два дополнительных активных агента, например по меньшей мере три дополнительных активных агента. Неограничивающими примерами дополнительных активных агентов, которые могут оказаться полезными в такой комбинации, являются модификаторы иммунного ответа и противораковые агенты, как описано здесь.

Небольшой размер и устойчивость PD-L1-связывающих полипептидов по настоящему изобретению обеспечивают некоторые преимущества по сравнению с традиционной терапией на основе моноклональных антител. Такие преимущества включают преимущества в составе, способах введения, таких как альтернативные пути введения, введении в более высоких дозах, чем дозы антител, и отсутствие Fc-опосредованных побочных эффектов. Агенты по настоящему изобретению предназначены для перорального, местного, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, легочного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, буккального, сублингвального или суппозиторного введения, например для местного введения. Кроме того, многие болезни и расстройства, такие как рак и инфекционное заболевание, ассоциированы с более чем одним фактором. Таким образом, комплекс, как он определено здесь, обеспечивает преимущество нацеливания на дополнительный антиген вместе с PD-L1.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен описанный здесь PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для использования в качестве лекарственного средства, прогностического агента и/или диагностического агента. В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения в лечении, диагностике или прогнозировании расстройства, связанного с PD-L1.

В одном воплощении указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция предназначены для применения в качестве лекарственного средства. В более конкретном воплощении предложены описанные здесь PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения в качестве лекарственного средства для модулирования функции PD-L1 in vivo. При использовании здесь, термин "модулировать" относится к изменению активности, такому как приведение функции PD-L1 в гипоморфное состояние, частичное ингибирование или полное ингибирование функции PD-L1.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения в лечении PD-L1 -ассоциированных расстройств.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для использования в диагностике PD-L1-ассоциированных расстройств.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для использования в прогнозировании PD-L1-ассоциированных расстройств.

При использовании здесь термин "PD-L1-ассоциированное расстройство" относится к любому расстройству, заболеванию или состоянию, в котором PD-L1-опосредованная передача сигнала играет регуляторную роль. Примеры таких PD-L1-ассоциированных расстройств включают инфекционные и раковые заболевания.

Следует понимать, что указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция можно использовать в качестве единственного диагностического или прогностического агента или в качестве сопутствующего диагностического и/или прогностического агента.

В одном воплощении указанное PD-L1-ассоциированное расстройство выбрано из группы, состоящей из инфекционных и раковых заболевания. Неограничивающие примеры инфекционных заболеваний включают хроническую вирусную инфекцию, например выбранную из группы, состоящей из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита С (HCV). Специалисту в данной области понятно, что рак, подходящий для лечения, диагностики и/или прогнозирования с использованием PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, может представлять собой солидный опухолевый рак или несолидный опухолевый рак, характеризуемый повышенной экспрессией PD-L1. Неограничивающие примеры таких раковых заболеваний включают рак кожи, такой как меланома и немеланомный рак кожи (NMSC); рак легкого, такой как мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC); рак головы и шеи, почечно-клеточная карцинома (RCC), рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, глиому, глиобластому, карциному печени, рак желчного пузыря, рак щитовидной железы, рак кости, рак шейки матки, рак матки, рак вульвы, рак эндометрия, рак яичка, рак почки, карцинома пищевода, рак мозга/ЦНС, нейрональные раковые заболевания, мезотелиому, саркомы, аденокарциному тонкой кишеки и детские злокачественные опухоли; лейкоз, острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз и множественную миелому.

В одном конкретном воплощении указанный рак выбран из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колотектального рака, рака желудка, рака яичника, рака поджелудочной железы и рака простаты, например рака, выбранного из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC и рака мочевого пузыря.

В одном воплощении может быть полезно вводить терапевтически эффективное количество PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, как описано здесь, вместе с по меньшей мере одним вторым лекарственным веществом, таким как противораковый агент или агент, модифицирующий иммунный ответ.

В одном воплощении предложен PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для использования в прогнозировании и/или диагностике вместе с по меньшей мере одним маркером клеточной пролиферации. Неограничивающими примерами предполагаемых маркеров пролиферации клеток являются маркеры, выбранные из группы, состоящей из Ki-67, AgNOR, холина, класпина, циклина A, CYR61, Cdk1, гистона Н3, HsMCM2, IL-2, Ki-S1, Ki-S2, LigI, MCM2, MCM6, MCM7, митозина, p120, PCNA, PDPK, PLK, STK1, TK-1, топоизомеразы II-альфа и TPS.

В родственном аспекте предложен способ лечения PD-L1-ассоциированного расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, как описано здесь. В более конкретном воплощении указанного способа описанный здесь PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция модулируют функцию PD-L1 in vivo. Специалисту в данной области понятно, что любое описание, относящееся к использованию описанного здесь PD-L1 связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции для лечения заболевания или расстройства, одинаково важно для соответствующего терапевтического метода. Для краткости, такое описание не будет здесь повторяться.

В одном конкретном воплощении указанный способ лечения, особенно релевантный для лечения PD-L1-ассоциированных раковых заболеваний, включает в себя стадии:

- приведения субъекта в контакт с описанным здесь PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом или комплексом, содержащим предварительно нацеленный фрагмент, или с композицией, содержащей указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, содержащий предварительно нацеленный фрагмент, и

- приведения субъекта в контакт с комплементарным предварительно нацеленным фрагментом, содержащим радионуклид.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ обнаружения PD-L1, включающий предоставления образца, предположительно содержащего PD-L1, приведение указанного образца в контакт с PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом, комплексом или композицией, как описано здесь, и обнаружение связывания PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, указывающего на присутствие PD-L1 в образце.

В одном воплощении указанный способ дополнительно содержит промежуточную стадию промывки для удаления несвязанного полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции после контакта с образцом.

В другом воплощении указанный способ является диагностическим или прогностическим способом определения присутствия PD-L1 у субъекта, где способ включает следующие стадии:

а) приведение субъекта или образца, выделенного из субъекта, в контакт с PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом, комплексом или композицией, описанными здесь, и

б) получение значения, соответствующего количеству PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, связанному в указанном субъекте или с указанным образцом.

В одном воплощении указанный способ дополнительно включает промежуточную стадию промывки для удаления несвязанного полипептида, слитого белка, конъюгата или композиции после контакта с субъектом или образцом и до получения значения.

В одном воплощении этого диагностического или прогностического способа указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс содержит предварительно нацеленный фрагмент, как описано здесь, и стадия приведения в контакт (а) способа дополнительно включает приведение субъекта в контакт с комплементарным предварительно нацеленным фрагментом, меченным детектируемой меткой, такой как радионуклидная метка.

В одном воплощении указанный способ дополнительно включает стадию сравнения указанного значения с эталоном. Указанный эталон может быть числовым значением, пороговым значением или визуальным индикатором, например основанным на цветной реакции. Специалисту в данной области техники понятно, что в данной области известны и могут быть пригодными для использования разные способы сравнения с эталоном.

В одном воплощении такого способа указанным субъектом является млекопитающее, такое как человек. В одном воплощении указанный способ осуществляют in vivo. В другом воплощении указанный способ осуществляют in vitro.

В одном воплощении диагностический или прогностический способ представляет собой способ медицинской визуализации in vivo, как обсуждалось выше. Такой способ включает системное введение млекопитающему PD-L1-связывающего компонента, как раскрыто здесь (то есть полипептида самого по себе, или слитого белка, конъюгата, комплекса, или композиции, содержащего его). PD-L1-связывающий компонент прямо или опосредовано метят меткой, содержащей радионуклид, подходящей для медицинской визуализации (см. выше список предполагаемых радионуклидов). Кроме того, способ медицинской визуализации включает получение одного или более изображений по меньшей мере части организма субъекта с использованием прибора для медицинской визуализации, где указанное(ые) изображение(я) указывает(ют) на присутствие радионуклида в организме.

Хотя изобретение описано со ссылкой на различные типичные аспекты и воплощения, специалистам в данной области техники понятно, что могут быть сделаны различные изменения, и его элементы могут быть заменены эквивалентами, не выходя за пределы объема изобретения. Кроме того, может быть сделано множество модификаций для адаптации конкретной ситуации или молекулы к принципам изобретения без отклонения от ее существенного объема. Следовательно, предполагается, что изобретение не ограничено каким-либо конкретным воплощением, но что изобретение включает все воплощения, входящие в объем прилагаемой формулы изобретения.

Краткое описание графических материалов

На Фиг. 1 представлен перечень аминокислотных последовательностей для примеров PD-L1 -связывающих полипептидов по настоящему изобретению (SEQ ID NO: 1-814), а также тяжелой цепи (HC_Lam; SEQ ID NO: 815) и легкой цепи (LC_Lam; SEQ ID NO: 816) PD-1-связывающего моноклонального антитела Lam и тяжелой цепи (HC_Ipi; SEQ ID NO: 817) и легкой цепи (LC_Ipi; SEQ ID NO: 818) CTLA-4-связывающего моноклонального антитела Ipi. В PD-L1-связывающих полипептидах по настоящему изобретению идентифицированные PD-L1-связывающие мотивы (ВМ) занимают положения от остатка 8 до остатка 36 в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков (BMod), которые, как предполагается, образуют трехспиральный пучок в каждом из этих Z-вариантов, занимают положения от остатка 7 до остатка 55.

На Фиг. 2 показано связывание двух полипептидов первого поколения с человеческим PD-L1, при анализе с помощью Biacore, как описано в Примере 3. Z-варианты (A) Z13091 (SEQ ID NO: 776) и (В) Z13156 (SEQ ID NO: 781 вводили в концентрациях 50 нМ (черный), 5 нМ (темно-серый) и 0,5 нМ (светло-серый) над чипом СМ5 с иммобилизованным hPD-L1.

На Фиг. 3 показано отсутствие ответа SPR (поверхностного плазмонного резонанса) на (A) hPD-L2, (В) hB7-Н3 и (С) hB7-H4, что проиллюстрировано здесь с PD-L1-связывающими полипептидами Z13091 (SEQ ID NO: 776) и Z13156 (SEQ ID NO: 781), введенными в концентрациях 50 нМ, 5 нМ и 0,5 нМ.

На Фиг. 4 показаны спектры кругового дихроизма (CD) двух первых поколений PD-L1-связывающих полипептидов. Спектры CD при длинах волн от 250 до 195 нМ, полученные при 20°C до (пунктирная линия) и после (сплошная линия) измерения переменной температуры (VTM), показаны для (A) Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809) и (В) Z15169-Cys (SEQ ID NO: 810).

На Фиг. 5 показано связывание двух полипептидов второго поколения с человеческим PD-L1 при анализе с помощью Biacore, как описано в Примере 7. Z-варианты (A) Z17964 (SEQ ID NO: 2) и (В) Z18064 (SEQ ID NO: 1) вводили в концентрациях 135 нМ (черные), 45 нМ (темно-серые) и 15 нМ (светло-серые) над чипом СМ5 с иммобилизованным hPD-L1.

На Фиг. 6 показаны спектры кругового дихроизма (CD) для двух PD-L1-связывающих полипептидов второго поколения. Спектры CD при длинах волн от 250 до 195 нМ, собранные при 20°C до (пунктирная линия) и после (сплошная линия) измерения переменной температуры (VTM), показаны для (A) Z18064 (SEQ ID NO: 1) и (В) Z18090 (SEQ ID NO: 17).

На Фиг. 7 представлено схематическое изображение конструкции комплексов в соответствии с описанием, полученных, как описано в Примере 8. "Z" обозначает PD-L1-нацеленный Z-вариант Z15170 (SEQ ID NO: 814), который генетически слит с N-концом (7А и 7В) или С-концом (7С и 7D) тяжелой (7А и 7D) или легкой (7В и 7С) цепей анти-PD-1 моноклонального антитела Lam или анти-CTLA-4 моноклонального антитела Ipi посредством линкера из 15 остатков (GGGGS)₃.

На Фиг. 8 показана двойная специфичность связывания комплексов, проанализированная с помощью анализа захвата в системе Biacore, как описано в Примере 8. (A) Z15170-HC_Lam и (В) Z15170-LC_Lam пропускали в течение 5 минут над поверхностями чипа с иммобилизованным PD-1, с последующим введением PD-L1 в концентрации 100 и/или 500 нМ соответственно. (С) Z15170-HC_Ipi; и (D) Z15170-LC_Ipi пропускали в течение 5 минут над поверхностью чипа с иммобилизованным CTLA-4, с последующим введением PD-L1 в концентрации 100 и 500 нМ соответственно.

На Фиг. 9 показан результат ингибирования PD-L1 и CTLA-4 посредством комплексов на основе Ipi, проанализированного в анализе смешанной культуры лимфоцитов, как описано в Примере 8. (А) Уменьшение количества клеток MDA-MB231 и (В) увеличение количества CD3+ Т-клеток при увеличении концентраций комплексов на основе Ipi: HC_Ipi-Z15170, LC_Ipi-Z15170, Z15170-HC_Ipi и Z15170-LC_Ipi.

На Фиг. 10 показаны ПЭТ-изображения проекции максимальной интенсивности (MIP) для ксенотрансплантатных мышей. (A) MIP мышей с ксенотрансплантатом опухоли LOX (слева) и ксенотрансплантатами опухоли SUDHL6 (справа) через 30-90 минут после введения [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168. (В) MIP мышей с ксенотрансплантатами опухоли LOX через 30-90 минут после введения [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168 (слева) на исходном уровне и (справа) после предварительного блокирования с помощью 400 мкг NOTA-Z15168.

На Фиг. 11 показаны результаты биораспределения ex vivo для мышиных моделей ксенотрансплантатов LOX и SUDHL6, которые анализировали непосредственно после сбора данных ПЭТ. Результаты отображаются в единицах (А) стандартизованного уровня накопления (SUV) и (В) соотношения опухоль:кровь. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение.

На Фиг. 12 показан результат сканирования всего тела макак-резусов. MIP (просуммировано за 90-180 минут; цветные инвертированные изображения) макак-резусов, которым вводили с (A) [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168 и (В) [¹⁸F]AlF-NOTA-Z18609. (С) Среднее накопление изотопов за ≈120-180 минут в разных органах, выраженное в единицах SUV. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение.

Примеры

Краткое изложение

В следующих ниже примерах описана разработка новых молекул Z-вариантов, нацеленных на человеческий лиганд программируемой смерти 1 (PD-L1), также известный как человеческий В7-гомолог 1 (В7-Н1) и кластер дифференцировки 274 (CD274), на основе технологии фагового дисплея. Описанные здесь PD-L1-связывающие полипептиды были секвенированы и их аминокислотные последовательности указаны на Фиг. 1 с идентификаторами последовательности SEQ ID NO: 1-808. В Примерах также описана характеристика PD-L1-связывающих полипептидов и продемонстрирована функциональность указанных полипептидов in vitro.

Пример 1

Отбор и скрининг PD-L1-связывающих Z-вариантов

В этом Примере используют человеческий PD-L1 (hPD-L1) в качестве мишени в отборе с помощью фагового дисплея с использованием фаговой библиотеки Z-вариантов. В отобранных клонах секвенировали ДНК, полученную в периплазматических фракциях Е. coli, и анализировали против PD-L1 в ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ).

Материалы и методы

Биотинилирование целевого белка: hPD-L1 (человеческий PD-L1 Fc Chimera, R&D Systems, каталожный номер 156-В7-100) биотинилировали с использованием No-Weigh EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Биотина (Thermo Scentific, каталожный номер 21327) при 10-кратном молярном избытке, в соответствии с рекомендациями производителя. Реакцию проводили при комнатной температуре (RT) в течение 40 минут. Последующую замену буферам на PBS (10 мМ фосфат, 137 мМ NaCl, 2,68 мМ KCl, рН 7,4) выполняли с использованием диализной кассеты Slide-a-lyzer (10000 MWCO, Thermo Scientific, каталожный номер 66383) в соответствии с рекомендациями изготовителя.

Отбор PD-L1-связывающих Z-вариантов с использованием фагового дисплея: Для отбора PD-L1-связывающих Z-вариантов использовали библиотеку случайных вариантов белка Z, представленного на бактериофаге, которую конструировали в фагмиде pAY02592, по существу как описано в et al. (2007) J Biotechnol, 128:162-183. В этой библиотеке альбумин-связывающий домен (ABD, GA3 белка G из штамма Streptococcus G148) используют в качестве партнера слияния с Z-вариантами. Библиотека обозначена как Zlib006Naive.II и имеет размер 1,5×1010 представителей библиотеки (Z-вариантов). Клетки RRIΔM15 E.coli ( et al., (1982) Nucleic Acids Res 10:5765-5772) из глицериновой популяции, содержащей фагмидную библиотеку Zlib006Naive.II, инокулировали в 20 л определенной среды, не содержащей пролина [3 г/л KH₂PO₄, 2 г/л K₂HPO₄, 0,02 г/л урацила, 6,7 г/л YNB (Difco™ Yeast Nitrogen Base без аминокислот, Becton Dickinson), 5,5 г/л моногидрата глюкозы, 0,3 г/л L-аланина, 0,24 г/л L-аргинина моногидрохлорида, 0,11 г/л L-аспарагина моногидрата, 0,1 г/л L-цистеина, 0,3 г/л L-глутаминовой кислоты, 0,1 г/л L-глутамина, 0.2 г/л глицина, 0.05 г/л L-гистидина, 0,1 г/л L-изолейцина, 0,1 г/л L-лейцина, 0,25 г/л L-лизина моногидрохлорида, 0,1 г/л L-метионина, 0,2 г/л L-фенилаланина, 0,3 г/л L-серина, 0,2 г/л L-треонина, 0,1 г/л L-триптофана, 0,05 г/л L-тирозина, 0,1 г/л L-валина], с добавлением 100 мкг/мл ампициллина. Культуры выращивали при 37°C в ферментере (Belach Bioteknik, BR20). Когда клетки достигали оптической плотности при 600 нм (OD₆₀₀) равной 0,75, примерно 2,6 л культуры инфицировали с использованием 10-кратного молярного избытка фага-помощника M13K07 (New England Biolabs, каталожный номер N0315S). Клетки инкубировали в течение 30 мин, после чего ферментер заполняли до 20 л культуральной средой (2,5 г/л (NH₄)₂SO₄; 5,0 г/л дрожжевого экстракта (Merck 1.03753.0500); 25 г/л пептона (Scharlau 07-119); 2 г/л K₂HPO₄; 3 г/л KH₂PO₄; 1,25 г/л Na₃C₆H₅O₇⋅2H₂O; 0,1 мл/л пеногасителя Breox FMT30) с добавлением 100 мкМ изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG) для индукции экспрессии и 50 мкг/мл ампициллина, 12,5 мкг/мл карбенициллина, 25 мкг/мл канамицина, 35 мл/л 1,217 М MgSO₄ и 10 мл раствора микроэлементов [129 мМ FeCl₃; 36,7 мМ ZnSO₄; 10,6 мМ CuSO₄; 78,1 мМ MnSO₄; 94,1 мМ CaCl₂, растворенные в 1,2 М HCl]. Культивирование с ограничением по глюкозе начали с добавления 600 г/л раствора глюкозы в реактор (15 г/ч в начале, 40 г/ч в конце ферментации через 17 часов). Величину pH поддерживали при 7 посредством автоматического добавления 25% NH₄OH, добавляли воздух (10 л/мин) и мешалку устанавливали для поддержания уровня растворенного кислорода выше 30%. Культивируемые клетки удаляли фильтрацией в тангенциальном потоке.

Частицы фага осаждали из супернатанта да раза в ПЭГ/NaCl (полиэтиленгликоль/хлорид натрия), фильтровали и растворяли в PBS и глицерине, как описано в et al., см. выше. Фаговые концентраты хранили при -80°C до использования.

Отборы с использованием биотинилированного hPD-L1 выполняли за 4 цикла, исходно разделенных на два разных трека (1 и 2). По мере продолжения отбора треки были дополнительно разделены в соответствии с целевой концентрацией и количеством и/или временем промывок с конечным получением девяти треков в цикле 4. Точнее, первый трек (1) был разделен во втором-четвертом циклах, в результате чего получилось в общей сложности два трека (от 1-1 до 1-2) в цикле 2, четыре трека (от 1-1-1 до 1-2-2) в цикле 3 и шесть треков (от 1-1-1-1 до 1-2-2-1) в цикле 4. Второй трек (2) был разделен в третьем-четвертом циклах, в результате чего получили в общей сложности два трека (от 2-1-1 до 2-1-2) в цикле 3, три трека (от 2-1-1-1 до 2-1-2-1) в цикле 4. В треке 1 с потомством использовали Dynabeads® М-280 стрептавидин (SA-гранулы, Invitrogen, каталожный номер 11206D) для захвата комплексов hPD-L1:Z-вариант. В треке 2 вместо них использовали Dynabeads® Protein A (SPA-beads, Invitrogen, каталожный номер 10002D) для захвата комплексов hPD-L1:Z-вариант путем связывания с Fc-частью химерного белка hPD-L1 Fc.

Получение фаговых концентратов, процедуру отбора и амплификацию фага между циклами отбора проводили по существу так, как описано для отбора с использованием другой биотинилированной мишени в WO 2009/077175 со следующим исключением: буфер для отбора состоял из PBS с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS, Gibco, каталожный номер 10108-165) и 0,1% Tween20 (Acros Organics, каталожный номер 233362500).

Чтобы уменьшить количество фоновых связывающих агентов, в каждом цикле выполняли предварительный отбор. При предварительном отборе использовали те же типы гранул, что и при отборе, то есть SA-гранулы в треке 1 и SPA-гранулы в треке 2. Во всех треках цикла 1-4, предварительный отбор выполняли с использованием SA- или SPA-гранул, покрытых биотинилированным человеческим IgG-Fc (Jackson ImmunoResearch Lab, каталожный номер 009-060-008). Кроме того, в цикле 1, трек 1, предварительный отбор выполняли с использованием SA-гранул, покрытых смесью hPD-L2 (человеческий PD-L2 Fc Chimera; R&D Systems, каталожный номер 1224-PL-100), hB7-H3 (человеческий B7-H3 Fc Chimera; R&D Systems, каталожный номер 1027-B3-100), hB7-H4 (человеческий B7-H4; R&D Systems, каталожный номер 6576-B7-50), предварительно биотинилированных, как описано для hPD-L1. В цикле 1, трек 2, предварительный отбор выполняли с использованием SPA-гранул, покрытых смесью биотинилированного PD-L2 и биотинилированного В7-Н3. Во время предварительной отбора фаговый концентрат инкубировали с покрытыми гранулами с опрокидыванием в течение 30-90 мин при комнатной температуре. Все пробирки и гранулы, используемые в предварительном отборе или отборе, предварительно блокировали PBS с добавлением 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA, Sigma A3059-100G) и 0,1% Tween20. Отбор выполняли в растворе при комнатной температуре и время отбора составляло примерно 120 мин, с последующей промывкой PBS + 0,1% Tween20 и захватом комплексов мишень-фаг SA-гранулами или SPA-гранулами с использованием 1 мг гранул на 1,6 или 8,5 мкг биотинилированного hPD-L1 соответственно.

Для амплификации фаговых частиц между циклом отбора 1 и 2, клетки штамма E. coli ER2738 (Lucigen, Middleton, WI, USA) использовали для инфицирования и выращивали в среде с добавлением 20 мкг/мл тетрациклина. Допускали 5-кратный избыток фага-помощника M13K07 по сравнению с бактериями для инфицирования бактерий в логарифмической фазе.

Амплификацию фаговых частиц между циклами отбора 2 и 4 осуществляли путем инфицирования бактерий в растворе следующим образом. После инфицирования Е. coli ER2738 в логарифмической фазе фаговыми частицами, добавляли TSB с добавлением 2% глюкозы, 10 мкг/мл тетрациклина и 100 мкг/мл ампициллина, с последующей инкубацией с вращением в течение 30 мин при 37°C. После этого бактерии инфицировали фагом-помощником M13K07 в 5-кратном избытке. Инфицированные бактерии осаждали центрифугированием, ресуспендировали в среде TSB-YE с добавлением 100 мкМ IPTG, 25 мкг/мл канамицина и 100 мкг/мл ампициллина и выращивали в течение ночи при 30°C. Ночные культуры центрифугировали, и фаговые частицы в супернатанте дважды осаждали буфером ПЭГ/NaCl. Наконец фаговые частицы ресуспендировали в буфере для отбора перед внесением в следующий цикл отбора.

В заключительном цикле отбора бактерии в логарифмической фазе инфицировали элюатом и разбавляли перед распределением на планшеты ТВАВ (30 г/л триптозный кровяной агар, Oxoid, каталожный номер CMO233B) с добавлением 0,2 г/л ампициллина для образования отдельных колоний для использования в скрининге с помощью ELISA.

Обзор стратегии выбора, описывающий повышенную жесткость в последующих циклах, с использованием пониженной концентрации мишени и увеличенного количества промывок, показан в Таблице 2. Промывки проводили в течение 1 мин, если иное не указано в Таблице 2, с использованием PBST 0,1% (PBS с добавлением 0,1% Tween-20), и элюирование проводили, как описано в WO 2009/077175.

Получение Z-вариантов для ELISA: Z-варианты получали путем инокуляции отдельных колоний, полученных в отборах в 1 мл среды TSB-YE с добавлением 100 мкг/мл ампициллина и 1 мМ IPTG в планшетах с глубокими лунками (Nunc, каталожный номер 278752). Планшеты инкубировали с вращением в течение 24 ч при 37°C. Клетки осаждали путем центрифугирования, ресуспендировали в 200 мкл PBST 0,05% и замораживали при -80°C для высвобождения периплазматической фракции клеток. Замороженные образцы оттаивали на водяной бане, и процедуру замораживания-оттаивания повторяли восемь раз. 600 мкл 0,05% PBST добавляли к оттаявшим образцам и клетки осаждали путем центрифугирования.

Конечный супернатант периплазматического экстракта содержал Z-варианты в виде слияния с ABD, экспрессированные как AQHDEALE-[Z#####]-VDYV-[ABD]-YVPG ( et al., см. выше). Z##### относится к отдельным Z-вариантам из 58 аминокислотных остатков.

ELISA-скриниг Z-вариантов: Связывание Z-вариантов с hPD-L1 анализировали с помощью ELISA. 96-луночные ELISA планшеты с половинным объемом лунок (Costar, каталожный номер 3690) покрывали при 4°C в течение ночи 2 мкг/мл анти-ABD козлиного антитела (произведенного в лаборатории), разбавленного в покрывающем буфере (50 мМ карбонат натрия, рН 9,6; Sigma, каталожный номер С3041). Раствор антител сливали и лунки промывали водой и блокировали 100 мкл PBSC (PBS с добавлением 0,5% казеина; Sigma, каталожный номер С8654) в течение 1-3 ч при к.т. Удаляли блокирующий раствор и 50 мкл периплазматических растворов, разбавленных 1:1 PBST 0,05%, добавляли в лунки и инкубировали в течение 1,5-2,5 ч при к.т. при медленном перемешивании. В качестве пустой пробы вместо периплазматического образца добавляли 0,05% PBST. Супернатанты сливали и лунки промывали 4 раза 0,05% PBST. Затем в каждую лунку добавляли 50 мкл биотинилированного hPD-L1 в концентрации 0,32 нМ в PBSC. Планшеты инкубировали в течение 1 часа при к.т., а затем промывали, как описано выше. Стрептавидин-конъюгированную HRP (Thermo Scientific, каталожный номер N100), разведенную 1:30000 в PBSC, добавляли в лунки, и планшеты инкубировали в течение примерно 1 часа. После промывки, как описано выше, 50 мкл субстрата ImmunoPure ТМВ (Thermo Scientific, каталожный номер 34021) добавляли в лунки и планшеты обрабатывали в соответствии с рекомендациями изготовителя. Поглощение при 450 нм измеряли с использованием ридера для многолуночных планшетов, Victor³ (Perkin Elmer).

Секвенирование: Параллельно со скринингом ELISA все клоны секвенировали. ПЦР-фрагменты амплифицировали из одиночных колоний, секвенировали и анализировали, по существу как описано в WO 2009/077175.

ЕС50 анализ Z-вариантов: При выборе PD-L1-связывающих Z-вариантов анализировали ответ на серию разбавлений биотинилированного hPD-L1 после процедуры, описанной выше. Z-варианты разбавляли 1:1 в 0,05% PBST. Биотинилированный hPD-L1 добавляли в концентрации 40 нМ и последовательно разводили 1:4 вплоть до 32 пМ. В качестве фонового контроля все Z-варианты также анализировали без добавления целевого белка. Образцы периплазмы, содержащие PD-L1-связывающий Z-вариант Z13112 (SEQ ID.NO: 777), вносили на каждый планшет и анализировали в качестве положительного контроля. Пераплазму, содержащую только фрагмент ABD, использовали в качестве отрицательного контроля. В том же анализе тестировали специфичность Z-вариантов путем инкубирования образцов периплазмы с четырьмя разными биотинилированными контрольными белками hPD-L2, hB7-H3, hB7-Н4 и IgGFc соответственно, добавленными в концентрации 8 нМ. Данные анализировали с использованием GraphPad Prism 5 и нелинейной регрессии и рассчитывали значения ЕС50 (половина максимальной эффективной концентрации).

Результаты

Отбор PD-L1-связывающих Z-вариантов с использованием фагового дисплея: Отдельные клоны были получены после четырех циклов отбора с использованием фагового дисплея и биотинилированного hPD-L1.

ELISA-скриниг Z-вариантов: Клоны, полученные после четырех циклов отбора, получали в 96-луночных планшетах и подвергали скринингу в отношении hPD-L1-связывающей активности в ELISA. Было обнаружено, что несколько уникальных Z-вариантов дают ответ 0,3 AU (антительных единиц) или выше (соответствующий по меньшей мере 3-кратной пустой пробе) против hPD-L1 в концентрации 0,32 нМ. Средний ответ пустых проб составлял 0,067 AU.

Секвенирование: Секвенирование выполняли для клонов, полученных после четырех циклов отбора. Каждому варианту присваивали уникальный идентификационный номер ###, а отдельные варианты называли Z#####. Аминокислотные последовательности Z-вариантов длиной 58 аминокислотных остатков представлены на Фиг. 1 и в списке последовательностей как SEQ ID NO: 774-808. Установленные PD-L1-связывающие мотивы занимают положения от остатка 8 до остатка 36 в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков, которые, как предполагается, образуют полный трехспиральный пучок в каждом из этих Z-вариантов, занимают положения от остатка 7 до остатка 55.

Анализ ЕС50 Z-вариантов: Подмножество Z-вариантов, имеющих самые высокие значения ELISA в ELISA-скрининге, описанном выше, было выбрано и подвергнуто целевому титрованию в формате ELISA. Образцы периплазмы инкубировали с серийным разведением биотинилированного hPD-L1. Образец периплазмы, содержащий Z13112 (SEQ ID NO: 777), подтвердивший связывание PD-L1 в анализе ELISA, был выбран в качестве положительного контроля и его использовали для нормализации разных планшетов относительно друг друга. Полученные значения анализировали и рассчитывали их соответствующие значения ЕС50 (Таблица 3).

Никакого существенного связывания не было обнаружено ни с одним из включенных контрольных белков семейства В7 (hPD-L2, hB7-H3 и hB7-H4), ни с контрольным белком IgGFc (включенным сюда, поскольку химерные Fc-белки использовали в отборе и скрининге). Эти результаты показывают, что выбранные Z-варианты специфичны в отношении PD-L1.

Пример 2

Субклонирование и получение подмножества первичных PD-L1-связывающих Z-вариантов

Материалы и методы

Субклонирование Z-вариантов с His₆-тегом: ДНК 14-ти PD-L1-связывающих Z-вариантов, Z13080 (SEQ ID NO: 774), Z13088 (SEQ ID NO: 775), Z13091 (SEQ ID NO: 776), Z13112 (SEQ ID NO: 777), Z13120 (SEQ ID NO: 778), Z13147 (SEQ ID NO: 779), Z13154 (SEQ ID NO: 780), Z13156 (SEQ ID NO: 781), Z13158 (SEQ ID NO: 782), Z13164 (SEQ ID NO: 783), Z13165 (SEQ ID NO: 784), Z13169 (SEQ ID NO: 785), Z13198 (SEQ ID NO: 786) и Z13304 (SEQ ID NO: 787) амплифицировали из вектора pAY02592 библиотеки. Применяли стратегию субклонирования для конструирования молекул мономерного Z-варианта с N-концевым His₆-тегом с использованием стандартных методов молекулярной биологии (по существу как подробно описано в WO 2009/077175 для Z-вариантов, связывающих другую мишень). Фрагменты Z-гена субклонировали в экспрессионный вектор pAY01448, что привело к кодируемой последовательности MGSSHHHHHHLQ-[Z#####]-VD.

Субклонирование Z-вариантов с С-концевым Cys: Два Z-варианта, Z13091 (SEQ ID NO: 776) и Z13156 (SEQ ID NO: 781), подвергли мутации так, чтобы N-конец начинался с аминокислот АЕ вместо VD, и затем субклонировали с С-концевым добавлением аминокислот VDC (вводящих уникальный цистеин в полипептид) с использованием стандартных методов молекулярной биологии. Полученные кодирующие последовательности упоминаются как Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809) и Z15169-Cys (SEQ ID NO: 810) соответственно.

Культивирование: клетки E. coli T7E2 (GeneBridges) трансформировали плазмидами, содержащими фрагменты гена каждого соответствующего PD-L1-связывающего Z-варианта, и культивировали при 37°C в 940 мл среды TSB-YE с добавлением камимицина 50 мкг/мл. Чтобы индуцировать экспрессию белка, добавляли IPTG до конечной концентрации 0,2 мМ при OD₆₀₀ равном 2, и культивирование инкубировали при 37°C в течение еще 5 часов. Клетки собирали центрифугированием.

Очистка PD-L1-связывающих Z-вариантов с Hisfi-тегом: примерно 1-2 г каждого клеточного осадка ресуспендировали в 30 мл буфера для связывания (20 мМ фосфат натрия, 0,5 М NaCl, 20 мМ имидазол, рН 7,4) с добавлением Benzonase® (Merck, каталожный номер 1.01654.0001) до концентрации 15 Ед/мл. После разрушения клеток путем обработки ультразвуком, клеточный дебрис удаляли центрифугированием и каждый супернатант наносили на 1 мл колонку His GraviTrap IMAC (GE Healthcare, каталожный номер 11-0033-99). Загрязняющие вещества удаляли промывкой промывочным буфером (20 мМ фосфат натрия, 0,5 М NaCl, 60 мМ имидазол, рН 7,4), и PD-L1-связывающие Z-варианты затем элюировали элюирующим буфером (20 мМ фосфат натрия, 0,5 М NaCl, 500 мМ имидазол, рН 7,4). После очистки посредством IMAC белковый буфер меняли на PBS с использованием колонок PD-10 (GE Healthcare, каталожный номер 17-0851-01).

Очистка PD-L1-связывающих Z-вариантов с С-концевым Cys: Соответствующий клеточный осадок ресуспендировали в 20 мМ Tris-HCl, рН 8 (10 мл буфера/г клеточного осадка) и лизировали посредством термообработки в водяной бане при 90°C в течение 10 мин, с последующим охлаждением на льду примерно до 20°C. Добавляли Benzonase® (1 мкл/г клеточного осадка) и каждый клеточный лизат инкубировали при к.т. в течение 30 мин, затем центрифугированием удаляли клеточный дебрис. Для восстановления дисульфидов добавляли дитиотреитол (DTT; Acros organics, каталожный номер 165680250) до конечной концентрации 20 мМ с последующей инкубацией при к.т. в течение 1 часа. Очистку проводили с помощью анионного обмена с последующей хроматографией на обращенной фазе (RPC). Замену буфера на 20 мМ HEPES, 1 мМ EDTA, рН 7,2 выполняли с использованием колонок HiPrep 26/10 (GE Healthcare, каталожный номер 17-5087-01). Наконец, каждый Z-вариант очищали на колонках EndoTrap® red (Hyglos, каталожный номер 321063) для обеспечения низкого содержания эндотоксина.

Концентрацию каждого белка, очищенного любым описанным выше способом, определяли путем измерения поглощения при 280 нм с использованием спектрофотометра NanoDrop® ND-1000 и коэффициента экстинкции белка. Чистоту анализировали с помощью SDS-PAGE, окрашенного Coomassie Blue, и идентичность каждого очищенного Z-варианта подтверждали с использованием ВЭЖХ-МС-анализа (HPLC-MS 1100; Agilent Technologies).

Результаты

Культивирование и очистка: PD-L1-связывающие Z-варианты с His₆-тегом или С-концевым Cys экспрессировались в виде растворимых генных продуктов в Е. coli. SDS-PAGE анализ каждого конечного белкового препарата показал, что они преимущественно содержали PD-L1-связывающий Z-вариант. Правильную идентичность и молекулярную массу каждого Z-варианта подтверждали анализом ВЭЖХ-МС.

Пример 3

Характеристика первичных PD-L1-связывающих Z-вариантов

В этом примере подмножество Z-вариантов было охарактеризовано с точки зрения стабильности и свойств связывания in vitro. Специфичность и аффинность к человеческому PD-L1 Z-вариантов анализировали с помощью SPR и связывание с клетками, экспрессирующими PD-L1, анализировали с использованием флуоресцентно активированной сортировки клеток (FACS). Кроме того, способность Z-вариантов блокировать связывание PD-L1 с его рецептором PD1 исследовали с использованием AlphaLISA.

Материалы и методы

Кинетика и специфичность анализа Biacore: Кинетические константы (k_a и k_d) и аффинности (K_D) для hPD-L1 были определены для 14-ти His₆-меченых Z-вариантов с использованием прибора Biacore 2000 (GE Healthcare). Некоторые Z-варианты также были протестированы в отношении связывания с использованием белков с родственными последовательностями hPD-L2, hB7-H3, hB7-H4 и mPD-L1 (химера мышиный PD-L1 Fc, R&D Systems, каталожный номер 1019-В7).

HPD-L1, hPD-L2, hB7-H3, hB7-H4 и mPD-L1 иммобилизовали в отдельных проточных ячейках на карбоксилированном декстрановом слое различных поверхностей чипов СМ5 (GE Healthcare, каталожный номер BR100012). Иммобилизацию проводили с использованием химии аминного сочетания в соответствии с протоколом изготовителя и с использованием HBS-EP в качестве электродного буфера (0,01 М HEPES рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% об./об. Surfactant Р20, GE Healthcare, каталожный номер BR100188). Уровни иммобилизации лигандов на поверхности составляли 468-894 RU (резонансная единица) для hPD-L1, 537-742 RU для hPD-L2, 383 RU для hB7-H3, 538-659 RU для hB7-H4 и 482 RU для mPD-L1. Одну поверхность проточной ячейки на каждом чипе активировали и дезактивировали для использования в качестве пустого контроля во время введения аналита. В кинетическом эксперименте использовали HBS-EP в качестве электродного буфера, и скорость потока составляла 50 мкл/мин. Аналиты, то есть Z-варианты, каждый разводили в буфере HBS-EP в диапазоне концентраций от 1000 до 0,01 нМ и вводили в течение 5 мин с последующей диссоциацией в электродном буфере в течение 15-25 мин. После диссоциации поверхности регенерировали одним или двумя введениями 0,1% SDS. Кинетические константы вычисляли по сенсограммам с использованием модели Ленгмюра 1 : 1 программы BiaEvaluation 4.1 (GE Healthcare).

Анализ блокирования AlphaLISA: Способность Z-вариантов ингибировать связывание PD-L1 с PD-1 анализировали с помощью AlphaLISA и записи данных в многопланшетном ридере EnSpire 2300 (Perkin Elmer). hPD-1 (химера человеческий PD-1 Fc; R&D Systems, каталожный номер 1086-PD-050) был иммобилизован на акцепторных гранулах AlphaLISA (Perkin Elmer, каталожный номер 6772002) согласно рекомендациям изготовителя. Последовательные серийные разведения 1:3 His₆-меченых Z-вариантов до конечных концентраций 250 нМ - 12 пМ производили в 384-луночном планшете (Perkin Elmer, каталожный номер 6005350) и инкубировали в течение 1 часа с 10 нМ биотинилированным hPD-L1 в буфере AlphaLISA (Perkin Elmer, каталожный номер AL000F). hPD-1-покрытые акцепторные гранулы добавили до конечной концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 1 часа. Наконец, покрытые стрептавидином донорные гранулы (Perkin Elmer, каталожный номер 6772002) добавляли до конечной концентрации 40 мкг/мл и инкубировали в течение 30 мин. Все инкубации проводили при комнатной температуре в темноте. Планшет анализировали на приборе EnSpire, а значения IC₅₀ рассчитывали с использованием GraphPad Prism 5.

Анализ клеточного связывания посредством FACS: Способность Z-вариантов связывать PD-L1-экспрессирующие клетки исследовали с использованием сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS). Клетки ТНР-1, культивированные в RPMI (Lonza, каталожный номер BE12-702F), содержащей 10% FBS, стимулировали 10 нг/мл IFNg (R&D Systems, каталожный номер 285-IF-100) в течение ночи, что приводило к стимуляции PD-L1. 150000 стимулированных и нестимулированных клеток пипетировали на лунку 96-луночного планшета с v-образным дном (Nunc, каталожный номер 277143) и клетки в планшете затем осаждали при 400 g в течение 3 минут при к.т. Супернатанты удаляли и клетки ресуспендировали в 100 мкл PBS вместе с 2,5% FBS (окрашивающий буфер), содержащим 10 мкг/мл разных His-меченых Z-вариантов. Мышиное анти-PD-L1 антитело (R&D Systems, каталожный номер МАВ1561) в количестве 1 мкг/мл использовали в качестве положительного контроля. Клетки, инкубированные с одним буфером, использовали в качестве отрицательного контроля. Клетки инкубировали в течение 1 часа при 8°C в темноте, два раза промывали 100 мкл окрашивающего буфера и ресуспендировали в 100 мкл окрашивающего буфера, содержащего козлиное анти-Z антитело (полученное в лаборатории) в концентрации 5 мкг/мл. Клетки, окрашенные положительным контролем, обрабатывали только буфером. Клетки инкубировали в течение 1 часа при 8°C в темноте, два раза промывали 100 мкл окрашивающего буфера и ресуспендировали в 100 мкл окрашивающего буфера, содержащего Alexa Fluor 647 куриное антитело против козлиного IgG (Life technologies, каталожный номер А21469) или Alexa Fluor 647 козлиное антитело против мышиного IgG (Life technologies каталожный номер А21236). Клетки еще раз инкубировали в течение 1 ч при 8°C в темноте, два раза промывали 100 мкл окрашивающего буфера и ресуспендировали в 200 мкл окрашивающего буфера. Данные для 10000 клеток были получены с использованием FACS Calibur (Beckman Coulter), и данные проанализировали с использованием программы Flowing 2.5.0 (Университет Турку). Среднюю интенсивность флуоресценции (MF1) использовали в качестве показателя связывающей способности.

Анализ спектроскопии кругового дихроизма (CD): Два очищенных Z-варианта с С-концевым цистеином Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809) и Z15169-Cys (SEQ ID NO: 810), разбавляли до 0,5 мг/мл в 20 мМ HEPES, 1 мМ EDTA, pH 7,2. Для каждого разбавленного Z-варианта был получен спектр CD при 250-195 нм при 20°C. Кроме того, для определения температуры плавления (Tm) проводили измерение с переменной температурой (VTM). В случае VTM, поглощение измеряли при 221 нм, при этом температура повышалась от 20 до 90°C с угловым коэффициентом для температуры 5°C/мин. Новый спектр CD получали при 20°C после процедуры нагрева, чтобы изучить способность к рефолдингу Z-вариантов. Измерения CD проводили на спектрополяриметре Jasco J-810 (Jasco Scandinavia АВ) с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 мм.

Результаты

Анализ кинетики и специфичности посредством Biacore: Взаимодействия 14 His₆-меченых PD-L1-связывающих Z-вариантов с hPD-L1 анализировали на приборе Biacore путем введения различных концентраций Z-вариантов над поверхностью, содержащей иммобилизованный hPD-L1. Все протестированные Z-варианты продемонстрировали связывание с hPD-L1. Сводка кинетических параметров (K_D, ka и kd) связывания Z-вариантов с hPD-L1, полученных с использованием модели взаимодействия 1:1, приведена в таблице 4. Типичные полученные кривые, где были вычтены ответы от пустых поверхностей, показаны на Фиг. 2 для двух выбранных Z-вариантов, Z13091 (SEQ ID NO: 776) и Z13156 (SEQ ID NO: 781).

Подмножество Z-вариантов также тестировали в отношении связывания с четырьмя иммобилизованными белками с родственными последовательностями: hPD-L2, hB7-H3, hB7-H4 и mPD-L1. Никакого связывания не было выявлено с hPD-L2, hB7-H3, hB7-H4 или mPD-L1 при концентрациях Z-вариантов вплоть до 50 нМ. При введении 1000 нМ нескольких выбранных Z-вариантов (Z13088, Z13091, Z13112, Z13147, Z13154, Z13156, Z13165, Z13169, Z13198) наблюдался некоторый ответ на В7-Н4 для Z13156 и Z13165. Результаты анализа специфичности связывания обобщены в таблице 5. Типичные следы отсутствия взаимодействия из анализа SPR с использованием hPD-L2, hB7-H3 и hB7-H4 показаны на Фиг. 3.

n.а. не анализировали; n.d. не выявлено связывания.

Анализ блокирования AlphaLISA: Способность 14 His₆-меченых Z-вариантов ингибировать связывание hPD-L1 с hPD-1 тестировали в анализе блокирования AlphaLISA. Серийные разведения Z-вариантов инкубировали с биотинилированным hPD-L1 и измеряли блокирующую способность каждого соответствующего варианта после добавления hPD-1-покрытых акцепторных гранул и затем стрептавидин-покрытых донорных гранул. Ингибирование можно измерить, как уменьшение значений AlphaLISA для положительных Z-вариантов. Рассчитанные значения IC50 для 14 вариантов, все из которых, как было показано, блокируют связывание PD-L1 с PD-1 в данном анализе, показаны в Таблице 6.

Анализ клеточного связывания с помощью FACS: Этот эксперимент подтвердил связывание PD-L1-специфичных Z-вариантов с PD-L1-экспрессирующими клетками. Клетки ТНР-1, стимулированные IFNγ в течение ночи, что увеличило экспрессию PD-L1, окрашивали 10 мкг/мл каждого из His₆-меченных Z-вариантов. Анализы проводили в двух разных случаях, и значения MFI, нормализованные по Z13091, включенном в оба анализа, представлены в Таблице 7.

CD-анализ: Спектры CD, определенные для двух выбранных PD-L1-связывающих Z-вариантов с С-концевым цистеином, Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809) и Z15169-Cys (SEQ ID NO: 810), показали, что оба варианта имеют α-спиральную структуру при 20°C на основе типичных минимумов при 208 и 222 нм. Обратимый фолдинг наблюдался для обоих Z-вариантов при наложении спектров, полученных до и после нагревания до 90°C (Фиг. 4). Предполагается, что шумовой сигнал, наблюдаемый в дальней УФ-области, вызван эффектами буфера (HEPES, который использовали в качестве аналитического буфера, сильно поглощает при 200 нМ и ниже). Температуры плавления (Tm) были как 50°C и 58°C для Z15168-Cys и Z15169-Cys соответственно (Таблица 8).

Пример 4

Дизайн и конструирование зрелой библиотеки PD-L1-связывающих Z-вариантов

В данном примере была сконструирована зрелая библиотека. Эту библиотеку использовали для отборов PD-L1-связывающих Z-вариантов. Отборы из зрелых библиотек могут привести к связывающим агентам с повышенной аффинностью (Orlova et al., (2006) Cancer Res 66(8):4339-48). В этом исследовании получают рандомизированные одноцепочечные олигонуклеотиды, используя синтез ДНК на основе расщепления-объединения (split-pool), позволяющий включать определенные кодоны в нужные положения при синтезе.

Материалы и методы

Дизайн библиотеки: Библиотека была основана на последовательностях PD-L1-связывающих Z-вариантов, идентифицированных и охарактеризованных, как описано в Примере 1 и Примере 3. В новой библиотеке 13 вариабельных положений в каркасе Z-молекулы были смещены в отношении определенных аминокислотных остатков в соответствии со стратегией, основанной на последовательностях Z-вариантов, определенных в SEQ ID NO: 774-808. Два олигонуклеотида, один прямой и один обратный комплементарный с комплементарными 3'-концами были получены с использованием синтеза на основе расщепления-объединения. Эти два олигонуклеотида отжигали и удлиняли с помощью ПЦР, используя внешние праймеры, с получением одного фрагмента гена, охватывающего 147 п.о., соответствующего частично рандомизированной спирали 1 и 2 аминокислотной последовательности:

; рандомизированные кодоны показаны как NNN), фланкированной сайтами рестрикции XhoI и SacI. Олигонуклеотиды были заказаны в Ella Biotech GmbH (Martinsried Germany).

Теоретические распределения аминокислотных остатков в новой библиотеке, включающей 7 вариабельных положений (11, 14, 18, 24, 25, 27 и 35) в каркасе молекулы Z приведены в Таблице 9. Полученный теоретический размер библиотеки составляет 5,3×10⁷ вариантов.

Создание библиотеки: Библиотеку амплифицировали с использованием полимеразы AmpliTaq Gold (Life Technologies, каталожный номер 4311816) в течение 12 циклов ПЦР, и объединенные продукты очищали с помощью набора для очистки QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN, каталожный номер 28106) в соответствии с рекомендациями поставщика. Очищенный пул рандомизированных фрагментов библиотеки расщепляли рестрикционными ферментами XhoI и SacI-HF (New England Biolabs, каталожный номер R0146L и каталожный номер R3156M соответственно) и концентрировали с использованием набора для очистки продуктов ПЦР. Затем продукт разделяли с помощью препаративного гель-электрофореза на 2,5% агарозе (NuSieve GTG® Agarose, Lonza, каталожный номер 50080) и очищали, используя набор QIAGEN Gel Extraction Kit (QIAGEN, каталожный номер 28706) в соответствии с рекомендациями поставщика.

Фагмидный вектор pAY02592 (по существу такой же, как pAffi1, описанный в et al., выше) рестрицировали с помощъю тех же самых ферментов и очищали с использованием фенол/хлороформной экстракции и осаждения этанолом. Рестрицированные фрагменты и рестрицированный вектор лигировали в молярном соотношении 5:1 с ДНК-лигазой Т4 (Thermo Scientific, каталожный номер EL0011) в течение 2 часов при к.т., затем инкубировали в течение ночи при 4°C. Лигированную ДНК выделяли при помощи фенол/хлороформной экстракции и осаждения этанолом с последующим растворением в 10 мМ Трис-HCl, рН 8,5. Таким образом, полученная библиотека в векторе pAY02592 кодировала Z-варианты, каждый из которых был слит с альбуминсвязывающим доменом (ABD), полученным из стрептококкового белка G.

Реакционную смесь лигирования (приблизительно 160 нг ДНК/трансформация) вводили посредством электропорации в электрокомпетентные клетки Е. coli ER2738 (Lucigen, Middleton, WI, USA, 50 мкл). Сразу после электропорации добавляли примерно 1 мл регенерирующей среды (поставляемой с клетками Е. coli ER2738). Трансформированные клетки инкубировали при 37°C в течение 60 минут. Отбирали образцы для титрования и для определения количества трансформантов. Затем клетки объединяли и культивировали в течение ночи при 37°C в 1 л среды TSB-YE с добавлением 2% глюкозы, 10 мкг/мл тетрациклина и 100 мкг/мл ампициллина. Клетки осаждали в течение 15 минут при 4000g и ресуспендировали в растворе PBS/глицерин (приблизительно 40% глицерина). Клетки аликвотировали и хранили при -80°C. Клоны из библиотеки Z-вариантов секвенировали для подтверждения содержимого и оценки результатов созданной библиотеки в отношении дизайна библиотеки. Секвенирование выполняли, как описано в Примере 1, и подтверждали распределение аминокислот.

Получение фагового концентрата: Клетки из глицеринового концентрата, содержащие фагмидную библиотеку, инокулировали в 3,5 л TSB-YE с добавлением 1 г/л глюкозы, 100 мг/л ампициллина и 10 мг/л тетрациклина. Клетки культивировали при 37°С с орбитальным встряхиванием (100 об/мин). Когда клетки достигали оптической плотности при 600 нм (OD600), равной 0,59, примерно 620 мл культуры инфицировали с использованием 5-молярного избытка фага-помощника M13K07. Клетки инкубировали в течение 30 минут, после чего клетки осаждали центрифугированием при 3000g и ресуспендировали в 3 л свежей TSB-YE с добавлением 100 мг/л ампициллина, 25 мг/л канамицина и 0,1 мМ IPTG. Культуру разделяли в 6×5 л шейкерных колб и инкубировали при 30°C с орбитальным встряхиванием и через ~18 ч клетки осаждали центрифугированием при 4700 g. Фаговые частицы осаждали из супернатанта дважды в ПЭГ/NaCl, фильтровали и растворяли в PBS и глицерине, как описано в примере 1. Фаговые концентраты хранили при -80°C до использования в отборе.

Результаты

Конструирование библиотеки: Новую библиотеку проектировали на основе совокупности PD-L1-связывающих Z-вариантов с подтвержденными связывающими свойствами (Пример 1 и 3). Теоретический размер спроектированной библиотеки составлял 5,3×10⁷ Z-вариантов. Фактический размер библиотеки, определенный титрованием после трансформации в клетки Е. coli ER2738, составлял 2,8×10⁹ трансформантов.

Качество библиотеки было проверено путем секвенирования 116 трансформантов и сравнения их реальных последовательностей с теоретическим проектом. Было показано, что содержание фактической библиотеки по сравнению с проектируемой библиотекой было удовлетворительным. Таким образом, была успешно создана зрелая библиотека потенциальных агентов связывания с PD-L1.

Пример 5

Отбор, скрининг и характеристика Z-вариантов из зрелой библиотеки Материалы и методы

Отбор PD-L1-связывающих Z-вариантов с использованием фагового дисплея: Целевой белок PD-L1 был биотинилирован, как описано в Примере 1. Отбор с помощью фагового дисплея с использованием новой библиотеки молекул Z-вариантов, сконструированных, как описано в Примере 4, выполняли в четырех циклах с использованием hPD-L1, по существу как описано в Примере 1, со следующими исключениями: Исключение 1: SA-гранулы использовали для захвата комплексов PD-L1:Z-вариант во всех треках отбора. Исключение 2: предварительный отбор выполняли с использованием SA-гранул, покрытых только биотинилированным человеческим IgG-Fc перед циклом 1 и 2. Кроме того, в цикле 1 выполняли другой предварительный отбор с использованием SA-гранул, покрытых смесью PD-L2, В7-Н3 и В7-Н4, как описано выше в Примере 1. Исключение 3: отбор с использованием биотинилированного человеческого PD-L1 выполняли в четырех циклах, первоначально разделенных на два разных трека (1 и 2). По мере проведения отбора треки дополнительно разделяли в соответствии с целевой концентрацией и количеством и/или временем промывок с получением в конце концов 11 треков в четвертом цикле. Более конкретно, первый трек (1) был разделен во втором-четвертом цикле с получением в цикле 2 всего 2 треков (от 1-1 до 1-2), в цикле 3 четырех треков (от 1-1-1 до 1-2-2) и в цикле 4 семи треков (от 1-1-1-1 до 1-2-2-2). Второй трек (2) был разделен во втором - четвертом цикле с получением в цикле 2 всего 2 треков (от 2-1 до 2-2), в цикле 3 четырех треков (от 2-1-1 до 2-2-2) и в цикле 4 четырех треков (от 2-1-1-1 до 2-2-2-1). Исключение 4: в течение 19 часов стадии промывки в цикле отбора 1-1-2-3 к промывочному буферу добавляли 20-кратный молекулярный избыток небиотинилированного hPD-L1. Обзор стратегии отбора, описывающий повышенную жесткость в следующих циклах, полученной путем использования пониженной целевой концентрации и увеличенного количества промывок, показан в Таблице 10.

Получение Z-вариантов для ELISA: Z-Варианты были получены путем инокуляции отдельных отобранных колоний в 1,2 мл среды TSB-YE с добавлением 100 мкг/мл ампициллина и 1 мМ IPTG в планшеты с глубокими лунками (Nunc, каталожный номер 278752). Планшеты инкубировали с вращением в течение 24 ч при 37°C. Клетки осаждали центрифугированием при 3300g и ресуспендировали в 150 мкл PBST 0,05% и замораживали при -80°C для высвобождения периплазматической фракции клеток. Замороженные образцы оттаивали на водяной бане и процедуру замораживания-оттаивания повторяли восемь раз до выделения периплазматической фракции в планшетах с глубокими лунками (Axygen, каталожный номер 391-01-101) посредством фильтрования с использованием фильтровальных планшетов (EMD Millipore, каталожный номер MSNANLY50). Конечный супернатант периплазматического экстракта содержал Z-варианты в виде слияний с ABD, экспрессируемые как AQHDEALE-[Z#####]-VDYV-[ABD]-YVPG ( Gronwall et al., выше). Z##### относится к отдельному, 58 аминокислотному остатку Z-вариантов.

ELISA-анализ Z-вариантов: Связывание Z-вариантов с человеческим PD-L1 анализировали с помощью анализов ELISA, как описано выше в Примере 1, со следующими исключениями. Исключение 1: Периплазматическую фракцию разбавляли 1:8 с помощью 0,05% PBST перед добавлением в лунки и инкубировали в течение 1,7 часа. Исключение 2: вместо пустой пробы использовали отрицательный контроль периплазматической фракции, содержащей слитый белок ABD без Z-партнера слияния. Исключение 3: образцы периплазмы, содержащие первичный PD-L1-связывающий Z-вариант Z13091 (SEQ ID.NO: 776) включали в параллели на каждый планшет и анализировали как положительные контроли. Исключение 4: 50 мкл биотинилированного hPD-L1 в концентрации 40 пМ в PBSC добавляли в каждую лунку, и планшеты инкубировали в течение 1,8 часа при к.т.

Секвенирование: Параллельно с ELISA-скринингом все клоны секвенировали, как описано в Примере 1.

Анализ ЕС₅₀ посредством ELISA: Отбор PD-L1-связывающих Z-вариантов анализировали в отношении ответа на серийное разведение биотинилированного человеческого PD-L1, как описано в Примере 1, со следующими исключениями. Исключение 1: Z-варианты разбавляли 1:8 в 0,05% PBST перед добавлением в лунки. Исключение 2: биотинилированный человеческий PD-L1 добавляли в концентрации 15 нМ и разбавляли последовательно 1:3 до 0,25 пМ. Исключение 3: периплазматический образец, содержащий первичный PD-L1-связывающий Z-вариант Z13091 (SEQ ID.NO: 776) был включен для сравнения и проанализирован вместе с зрелыми Z-вариантами.

Результаты

Отбор PD-L1-связывающих Z-вариантов с помощью фагового дисплея: Отдельные клоны были получены после четырех циклов отбора с помощью фагового дисплея с использованием биотинилированного hPD-L1.

ELISA-Скрининг Z-вариантов: Клоны, полученные после четырех циклов отбора, были получены в 96-луночных планшетах и подвергнуты скринингу в отношении hPD-L1-связывающей активности в ELISA. Было обнаружено, что большинство индивидуальных Z-вариантов имеют более высокий ответ, чем средний ответ положительного контроля Z13091 (в среднем 0,264 AU) с использованием hPD-L1 в концентрации 40 пМ. Средний ответ отрицательных контролей составлял 0,051 AU.

Секвенирование: Секвенирование выполняли для клонов, полученных после четырех циклов отбора. Каждому варианту был присвоен уникальный идентификационный номер Z#####, как описано в Примере 1. Аминокислотные последовательности Z-вариантов длиной 58 аминокислотных остатков представлены на Фиг. 1 и в перечне последовательностей как SEQ ID NO: 1-773. Установленные PD-L1-связывающие мотивы занимают положения от положения 8 до положения 36 в каждой последовательности. Прогнозируют, что аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков, занимающих положения от 7 остатка до 55 остатка, оставляют полный трехспиральный пучок в каждом из этих Z-вариантов.

Анализ ЕС₅₀ Z-вариантов: Подмножество Z-вариантов, имеющих самые высокие значения ELISA в эксперименте со скринингом посредством ELISA, описанном выше, было отобрано и подвергнуто целевому титрованию в формате ELISA. Образцы периплазмы инкубировали с серийным разведением биотинилированного hPD-L1. Образец периплазмы, содержащий Z13091 (SEQ ID NO: 776), выделенный первичный Z-вариант, который показал наивысшую связывающую аффинность с hPD-L1, был включен в качестве положительного контроля. Полученные значения были проанализированы и их соответствующие значения ЕС₅₀ были рассчитаны с использованием GraphPad Prism 5 (Таблица 11). Все зрелые Z-варианты показали более низкие значения ЕС₅₀, чем занимающий первое место первичный Z-вариант Z13091.

Пример 6

Субклонирование и получение подмножества зрелых PD-L1-связывающих Z-вариантов

Материалы и методы

Субклонирование Z-вариантов с His₆-тегом: ДНК 24 зрелых PD-L1-связывающих Z-вариантов, (Z17746 (SEQ ID NO: 8), Z17748 (SEQ ID NO: 11), Z17756 (SEQ ID NO: 7), Z17825 (SEQ ID NO:5), Z17911 (SEQ ID NO:3), Z17964 (SEQ ID NO: 2), Z17972 (SEQ ID NO: 19), Z17978 (SEQ ID NO: 13), Z18022 (SEQ ID NO: 9), Z18039 (SEQ ID NO: 20), Z18048 (SEQ ID NO: 4), Z18052 (SEQ ID NO: 14), Z18054 (SEQ ID NO: 22), Z18064 (SEQ ID NO: 1), Z18066 (SEQ ID NO: 12), Z18070 (SEQ ID NO: 10), Z18074 (SEQ ID NO: 6), Z18090 (SEQ ID NO: 17), Z18101 (SEQ ID NO: 23), Z18129 (SEQ ID NO: 16), Z18149 (SEQ ID NO: 18), Z18233 (SEQ ID NO: 21), Z18353 (SEQ ID NO: 15) и Z18418 (SEQ ID NO: 24)) амплифицировали из библиотечного вектора pAY02592 и субклонировали с His₆-тегом, как описано в Примере 2 выше.

Субклонирование Z-вариантов с С-концевым Cvs: Три Z-варианта, Z18064 (SEQ ID NO: 1), Z17964 (SEQ ID NO: 2) и Z18090 (SEQ ID NO: 17), подвергли мутации так, чтобы они начинались с N-концевых аминокислот АЕ вместо VD, и затем субклонировали с С-концевым добавлением аминокислот VDC (вводящих индивидуальный цистеин в полипептид), используя стандартные методики молекулярной биологии. Полученные последовательности упоминаются как Z18608-Cys (SEQ ID NO: 811), Z18609-Cys (SEQ ID NO: 812) и Z18610-Cys (SEQ ID NO: 813) соответственно.

Культивирование: В общем случае клетки Е. coli Т7Е2 (GeneB ridges) трансформировали плазмидами, содержащими фрагменты генов каждого соответствующего PD-L1-связывающего Z-варианта, и культивировали при 37°C в примерно 940 мл среды TSB-YE с добавлением 50 мкг/мл канамицина. Чтобы индуцировать экспрессию белка, добавляли IPTG до конечной концентрации 0,2 мМ при OD₆₀₀, равной 2, и культуру инкубировали при 37°C в течение еще 5 часов. Клетки собирали центрифугированием. Конкретно, Z18608-Cys и Z18609-Cys культивировали с подпиткой при 37°C примерно в 700 мл определенной минеральной среды с добавлением 50 мкг/мл канамицина. Чтобы индуцировать экспрессию белка, добавляли IPTG до конечной концентрации 0,5 мМ при OD₆₀₀, равной 75, и культуру инкубировали в течение еще 7 часов. Клетки собирали центрифугированием.

Очистка PD-L1-связывающих Z-вариантов с His₆-тегом: IMAC очистки, обмен буфера на PBS и определения концентрации выполняли по существу как описано в Примере 2.

Очистка PD-L1-связывающих Z-вариантов с С-концевым Cys: Соответствующий клеточный осадок ресуспендировали в 20 мМ Tris-HCl, 0,5 мМ EDTA, 0,1% Tween 80, рН 7,5 (10 мл буфера/г клеточного осадка) и лизировали посредством термообработки в водяной бане при 80°C в течение 10 минут, затем охлаждали на льду до примерно 20°C. Добавляли Benzonase® (1 мкл/г клеточного осадка) и каждый клеточный лизат инкубировали при к.т. в течение 30 минут, затем удаляли дебрис центрифугированием. Для восстановления дисульфидов добавляли дитиотреитол (DTT, Acros Organics, каталожный номер 165680250) до конечной концентрации 10 мМ с последующей инкубацией при к.т. в течение 20 мин. После этого лизат фильтровали через 0,45 мкм шприцевой фильтр (Millipore). Очистку выполняли посредством анионообменной хроматографии на обращенной фазе (RPC). Замену буфера на 20 мМ HEPES, 1 мМ EDTA, рН 7,2 выполняли, используя среду Sephadex G-25 (GE Healthcare), упакованной в колонку XK-50.

Для любого белка, очищенного с помощью любого из способов, описанных выше, концентрацию определяли путем измерения поглощения при 280 нм с использованием спектрофотометра NanoDrop® ND-1000 и коэффициента экстинкции белка. Чистоту анализировали с помощью SDS-PAGE, окрашенного Coomassie Blue, и идентичность каждого очищенного Z-варианта была подтверждена с использованием ВЭЖХ-МС анализа (HPLC-MS 1100; Agilent Technologies).

Результаты

Культивирование и очистка: PD-L1-связывающие Z-варианты экспрессировались в виде растворимых генных продуктов в Е. coli. Количество очищенного белка из примерно 2,0-2,4 г бактериального осадка определяли спектрофотометрически путем измерения поглощения при 280 нм и устанавливали диапазон от примерно 18 мг до 29 мг для разных His₆-меченых PD-L1-связывающих Z-вариантов. Анализ SDS-PAGE каждого конечного белкового препарата показал, что они преимущественно содержат PD-L1-связывающий Z-вариант. Правильная идентичность и молекулярная масса каждого Z-варианта были подтверждены посредством анализа ВЭЖХ-МС.

Пример 7

Дополнительные характеристики подмножества первичных PD-L1-связывающих Z-вариантов

В этом примере подмножество Z-вариантов было охарактеризовано с точки зрения стабильности и различных связывающих свойств. Специфичность и аффинность Z-вариантов в отношении PD-L1 анализировали с помощью Biacore, и способность Z-вариантов блокировать связывание PD-L1 с его рецептором PD-1 исследовали с помощью AlphaLISA.

Материалы и методы

Анализ кинетики и специфичности посредством Biacore: Кинетические константы (k_a и k_d) и аффинности (K_D) для человеческого PD-L1 и PD-L1 резус-обезьяны (RhPD-L1; резус PD-L1/Fc химера, Sino Biological Inc., каталожный номер 90251-С02Н) определяли для 24 зрелых His₆-меченых Z-вариантов (указанных в Примере 6). Z-варианты также тестировали на связывание с белками hPD-L2, hB7-Н3 и hB7-Н4 с родственной последовательностью. Анализы Biacore выполняли по существу как описано в Примере 3, однако использовали скорость потока 30 мкл/мин. Уровни иммобилизации лигандов на поверхностях составляли 1030 RU для hPD-L1, 1060 RU для RhPD-L1, 1070 RU для hPD-L2, 1090 RU для hB7-Н3 и 770 RU для hB7-Н4. В первом кинетическом анализе связывания 24 Z-варианта вводили в концентрации 5 и 50 нМ над чипами с иммобилизованными hPD-L1 и RhPD-L1 соответственно. 12 зрелых PD-L1-связывающих Z-вариантов, которые показали самую высокую аффинность к hPD-L1 в первом эксперименте, анализировали более тщательно и вводили в концентрациях 135, 45, 15, 5 и 1,67 нМ над иммобилизованными hPD-L1 и RhPD-L1. В тесте специфичности, то есть анализе связывания с hPD-L2, hB7-H3 и hB7-H4, 24 Z-варианта вводили в концентрации 500 нМ.

Анализ блокирования AlphaLISA: Способность Z-вариантов ингибировать связывание PD-L1 с его природным лигандом PD-1 определяли в анализе AlphaLISA, как описано в Примере 3, со следующими исключениями: Исключение 1: последовательные серийные разведения 1:3 His₆-меченых Z-вариантов до конечных концентраций от 250 нМ до 4 пМ делали в 384SW-планшете (Perkin Elmer, каталожный номер 6008350) и инкубировали в течение 45 минут с 8 нМ биотинилированным hPD-L1 (R&D Systems) в буфере AlphaLISA (Perkin Elmer, каталожный номер AL000F). Исключение 2: hPD-1-покрытые акцепторные гранулы добавляли до конечной концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 50 минут.

Анализ посредством спектроскопии кругового дихроизма (CD): Подмножество очищенных His₆-меченых Z-вариантов анализировали посредством CD-спектроскопии, как описано в Примере 3, но с тем исключением, что буфером для анализа являлся PBS и, что температуру повышали до 80°С в VTM.

Результаты

Biacore-анализ кинетики и специфичности: Взаимодействия 24 зрелых His₆-меченых Z-вариантов с PD-L1 человека и резус-обезьян анализировали на приборе Biacore путем введения различных концентраций Z-вариантов над поверхностями, содержащими hPD-L1 и RhPD-L1 соответственно. Первый кинетический анализ выполняли для ранжирования Z-вариантов с точки зрения их аффинности к hPD-L1 и RhPD-L1, а также сравнения их кинетики связывания с первичным PD-L1-связывающим Z-вариантом, Z13091. Сводка приблизительных констант аффинности из эксперимента по ранжированию, полученных с использованием модели взаимодействия 1:1, представлена в Таблице 12.

12 зрелых Z-вариантов, которые показали наивысшую аффинность связывания с hPD-L1, анализировали дополнительно, и более точно определенные кинетические параметры для этих 12 Z-вариантов приведены в Таблице 13. Типичные полученные кривые, где вычтены ответы от пустой контрольной поверхности, представлены для двух выбранных вариантов на Фиг. 5.

Кроме того, все 24 зрелые His₆-меченые Z-варианта также тестировали в отношении связывания с тремя белками с родственными последовательностями, hPD-L2, hB7-Н3 и hB7-Н4. В соответствии с результатами в Примере 3, не было обнаружено связывания ни с одним из контрольных белков при концентрации Z-варианта 500 нМ.

Анализ блокирования AlphaLISA: Способность 24 зрелых His₆-меченых мономерных Z-вариантов ингибировать hPD-L1-связывание с hPD-1 тестировали в анализе блокирования AlphaLISA. Первичный Z-вариант Z13091 был включен в качестве эталона. Серийные разведения Z-вариантов инкубировали с биотинилированным hPD-L1, и блокирующую способность каждого соответствующего варианта измеряли после добавления покрытых hPD-1 акцепторных гранул и затем покрытых стрептавидином донорных гранул. Ингибирование можно измерить, как уменьшение значений AlphaLISA для положительных Z-вариантов. Рассчитанные значения IC50 для 25 вариантов, которые, как было показано, блокируют связывание PD-L1 с PD-1 в данном анализе, показаны в Таблице 14.

Анализ посредством CD: Спектры CD, определенные для 24 зрелых PD-L1-связывающих Z-вариантов с His₆-тегом, показали, что каждый из них имеет α-спиральную структуру при 20°С. Температуру плавления (Tm) определяли с использованием измерений при переменной температуре (Таблица 15). Обратимый фолдинг наблюдался для всех PD-L1-связывающих Z-вариантов при перекрывании спектров, измеренных при 20°С до и после нагревания до 80°С, как показано для двух выбранных Z-вариантов на Фиг. 6.

Пример 8

Характеристика анти-PD-L1/PD-1 и анти-PD-L1/CTLA-4 комплексов

Материалы и методы

Получение комплексов и контрольных антител: Были сконструированы четыре разных комплекса, нацеленных на PD-L1 и PD-1, и четыре разных комплекса, нацеленных на PD-L1 и CTLA-4, а также контрольное антитело, нацеленное на PD-1. Антитело, обозначенное как "Lam", имеющее те же последовательности CDR и специфичность, что и имеющееся в продаже, PD-1-нацеленное моноклональное антитело пембролизумаб (ранее ламбролизумаб), было сконструировано с использованием последовательностей тяжелой цепи (НС) и легкой цепи (LC) HC_Lam (SEQ ID NO: 815) и LC_Lam (SEQ ID NO: 816). Антитело, обозначенное как "Ipi", имеющее те же последовательности CDR и специфичность, что и имеющееся в продаже, CTLA-4 нацеленное моноклональное антитело ипилимумаб, было сконструировано с использованием последовательностей тяжелой цепи (НС) и легкой цепи (LC) HC_Ipi (SEQ ID NO: 817) и LC_Ipi (SEQ ID NO: 818). PD-L1-нацеленный Z-вариант Z15170 (SEQ ID NO: 814; идентичный Z13165 (SEQ ID NO: 784), но начинающийся с аминокислотных остатков АЕ вместо VD) с С-концевой последовательностью VD был генетически слит, через гибкий линкер из 15 остатков (GGGGS)₃, с N-концами HC_Lam, LC_Lam, HC_Ipi и LC_Ipi; соответственно, в результате чего получили комплексы Z15170-HC_Lam, Z15170-LC_Lam, Z15170-HC_Ipi и Z15170-LC_Ipi соответственно; или с С-концами тех же цепей, в результате чего получили комплексы HC_Lam-Z15170, LC_Lam-Z15170, HC_Ipi-Z15170 и LC_Ipi-Z15170 соответственно. Генный синтез, клонирование, получение посредством временной экспрессии гена в клетках СНО, а также очистку с помощью хроматографии с белком А и подтверждение конструкций посредством гель-электрофореза выполняли посредством Evitria AG (Switzerland).

Кинетические анализы Biacore: Кинетические константы (k_a и k_d) и аффинности (K_D) в отношении hPD-L1, человеческого PD-1 (hPD-1; R&D Systems каталожный номер 1086-PD-050) и человеческого CTLA-4 (hCTLA-4; R&D Systems каталожный номер 325-СТ-200) определяли для всех восьми полученных комплексов, и использовали прибор Biacore 2000 (GE Healthcare). Контрольное антитело Lam также анализировали в отношении связывания с PD-1. Растворы (5 мкг/мл) каждого из белков hPD-L1, hPD-1 и hCTLA-4 были получены в 10 мМ буфере NaAc (рН 5,0 для PD-L1, и рН 4,5 для PD-1 и CTLA-4) и их использовали для иммобилизации в отдельных проточных ячейках на слое карбоксилированного декстрана разных поверхностей чипа СМ5 (GE Healthcare, каталожный номер BR100012). Иммобилизацию осуществляли с использованием химии аминного сочетания в соответствии с протоколом изготовителя и с использованием HBS-ЕР с 500 мМ NaCl в виде электродного буфера. Полученные уровни иммобилизации составляли примерно 110-140 RU. Вводили серию концентраций 3,33, 10, 30, 90, 270 нМ соответствующего комплекса и Lam и регистрировали ответы, за исключением анализа связывания с PD-L1 для конструкций с Z15170, расположенных на С-конце соответствующего антитела, для которых использовали серию концентраций 30, 90, 270 и 900 нМ.

В отдельном эксперименте двойную специфичность связывания оценивали с помощью анализа захвата с использованием прибора Biacore 2000. Комплексы Z15170-HC_Lam, Z15170-LC_Lam, Z15170-HC_Ipi и Z15170-LC_Ipi, Lam и ипилимумаб (Yervoy®, Bristol-Myers Squibb/Astra Zeneca via Apoteket AB, каталожный номер 065544, серия номер 4А85968) в концентрации 300 нМ вводили над поверхностями чипа с иммобилизованным PD-1 или CTLA-4, как описано выше. Во всех случаях продолжительность введения составляла 5 минут при скорости потока 30 мкл/мин со стадией ожидания/диссоциации, составляющей 5 минут перед тем, как было сделано второе введение (5 мин) 100 или 500 нМ PD-L1. HBS-EP с 500 мМ NaCl использовали в качестве электродного буфера и для разведения белка.

Анализ клеточного связывания посредством FACS: Способность комплексов связываться с PD-L1-экспрессирующими клетками исследовали, используя FACS. 150000 клеточной линии рака молочной железы MDA-MB-231 культивировали в DMEM (АТСС каталожный номер 30-2002), содержащей 10% FBS, пипетировали в лунку 96-луночного планшета с v-образным дном (Nunc, каталожный номер 277143), и клетки в планшете затем осаждали при 400 g в течение 3 минут при к.т. Супернатанты удаляли и клетки ресуспендировали в 100 мкл PBS с 2,5% FBS (окрашивающий буфер), содержащем 0,625 мкг/мл комплексов Z15170-HC_Lam, Z15170-LC_Lam, HC_Lam-Z15170, LC_Lam-Z15170, Z15170-HC_Ipi, Z15170-LC_Ipi, HC_Ipi-Z15170 и LC_Ipi-Z15170 соответственно, или 0,625 мкг/мл антител Lam или ипилимумаба. Мышиное анти-PD-L1 антитело (RnD Systems, каталожный номер МАВ1561) в концентрации 1 мкг/мл использовали в качестве положительного контроля. Клетки, инкубированные только с буфером, использовали в качестве отрицательных контролей. Клетки инкубировали в течение 1 часа при 8°С в темноте, два раза промывали 100 мкл окрашивающего буфера и ресуспендировали в 100 мкл окрашивающего буфера, содержащего 2,5 мкг/мл антитела козы к человеческому IgG - Alexa488 (Molecular Probes, каталожный номер А11013), или, для клеток, окрашенных антителом положительного контроля, антитела козы к мышиному IgG - Alexa647 (Life Technologies, каталожный номер А21236). Клетки инкубировали в течение 1 часа при 8°С в темноте, два раза промывали 100 мкл окрашивающего буфера и ресуспендировали в 300 мкл окрашивающего буфера. Данные по 10,000 клеткам получали, используя FACS Calibur (Beckman Coulter), и эти данные анализировали с использованием программы Flowing 2.5.0 (Университет Турку). Среднюю интенсивность флуоресценции (MF1) использовали в качестве показателя связывающей способности.

Сокультивирование MDA-MB-231 и РВМС: Анализ смешанной культуры лимфоцитов использовали, чтобы проанализировать, могут ли комплексы, основанные на Ipi, влиять на пролиферацию или цитотоксический эффект Т-клеток и тем самым повышать элиминацию раковых клеток. В этом случае мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и MDA-MB-231 совместно культивировали в течение шести суток и оценивали количество Т-клеток и раковых клеток. 20000 клеток MDA-MB-231, культивированных в DMEM, содержащей 10% FBS, пипетировали в лунку 96-луночного планшета с плоским дном и оставляли для прилипания ко дну лунки путем инкубации при 37°С в увлажненной атмосфере 5% CO₂. На 2 сутки эксперимента серийные разведения (200-0,064 нМ) комплексов на основе Ipi готовили в отдельном планшете с использованием RPMI1640 с L-glut (Lonza) с добавлением 10% FCS и 1% Pen-Strep (Lonza, каталожный номер DE17-603E). Среду DMEM отделяли от клеток MDA-MB-231 и добавляли 100 мкл разбавленных комплексов. РВМС готовили из лейкоцитарной пленки с использованием Ficoll Paque PLUS (GE Healthcare, каталожный номер 17-1440-02). В кратком изложении, лейкоцитарную пленку разбавляли 2Х в PBS. 10 мл разбавленной лейкоцитарной пленки наслаивали поверх 5 мл Фиколла в 15 мл пробирках фирмы Falcon и центрифугировали при к.т. в течение 30 минут при 400 g. Собирали лимфоцитарную пленку и клетки два раза промывали в среде RPMI1640 с добавками, описанной выше. Клетки подсчитывали и доводили до 1 миллиона клеток на мл в среде RPMI с добавками. К планшету добавляли 100 мкл клеточной суспензии с клетками MDA-МВ-231. Планшеты инкубировали в течение 6 суток при 37°С в увлажненной 5% СО₂ атмосфере. На 7-е сутки эксперимента количество клеток MDA-MD-231 и CD3 + Т-клеток подсчитывали с помощью FACS. Клетки РВМС переносили в планшет с v-образным дном, два раза промывали PBS, содержащим 2% FBS (также используемым в качестве окрашивающего буфера) и окрашивали мышиным анти-CD3 антителом (EXBIO Praha, каталожный номер 12-631-М001) в концентрации 2 мкг/мл в течение 1 часа при 4°С. Клетки MDA-MB231 трипсинизировали (20 мкл/лунка) и переносили в другой планшет с v-образным дном, два раза промывали PBS, содержащим 2% FBS, и окрашивали кроличьим анти-EGFR антителом (Abcam, каталожный номер ab2430-1) в концентрации 2 мкг/мл в течение 1 часа при 4°С. Клетки два раза промывали PBS, содержащим 2% FBS, и Alexa-fluor 488 антитело козы-против-кролика (Invitrogen, каталожный номер А11008) и Alexa-fluor 647 антитело козы-против-мыши (Life technologies, каталожный номер А21236) использовали для обнаружения антител в концентрации 1 мкг/мл и инкубировали в течение 1 часа при 4°С.

Результаты

Получение конструкций комплекса: Схематическое изображение дизайна каждого из четырех типов полученных комплексов, представлено на Фиг. 7.

Кинетические анализы посредством Biacore: Аффинность к целевым белкам PD-L1, PD-1 и CTLA-4 соответственно, определяли для каждого релевантного комплекса. Контрольное антитело Lam также анализировали в отношении его целевого PD-1. Кинетические параметры взаимодействия с PD-L1 обобщены в Таблице 16. Способность Z-фрагмента комплекса взаимодействовать с PD-L1 была сохранена, хотя аффинность была снижена, а также зависела от положения Z-фрагмента в антителе. Для сравнения, K_D взаимодействия His₆-Z13165 с PD-L1 составляла 0,64 нМ (как представлено в Примере 3), в то время как K_D для комплексов с Z-фрагментами, расположенными в N-концах, составляла 1,5-2,6 нМ и K_D для Z-фрагментов, расположенных в С-концах, составляла 12-41 нМ. Таким образом, N-концевое расположение Z-фрагмента превосходило С-концевое расположение с примерно 10-кратным увеличением аффинности. Этот эффект был очевиден для конструкций как на основе Lam, так и на основе Ipi. Слияние с тяжелыми или легкими цепями антител было менее важным для N-концевого расположения Z-фрагментов, но оказывало существенное влияние на С-концевое расположение Z-фрагмента, где слияния с легкой цепью имели K_D 12-18 нМ по сравнению с K_D 29-41 нМ для слияний с тяжелой цепью.

Взаимодействия комплексов с PD-1 и CTLA-4, соответственно, подчиняются двухвалентной модели. K_D1, K_D2, k_a1, k_a2, k_d1 и k_d2 обобщены в Таблице 17 и Таблице 18 для PD-1 и CTLA-4 соответственно. Константа аффинности K_D1 для взаимодействия PD-1 с полученным контрольным антителом Lam была определена равной 18,6 нМ. Аффинность была сильнее для всех комплексов на основе Lam с диапазоном K_D1 0,8-2,7 нМ. Немного более медленная ассоциация и скорость k_a1 наблюдались для Z15170-HC_Lam, но, как правило, различия между комплексами были небольшими, то есть расположение Z-фрагмента на антитело, по-видимому, незначительно влияло на взаимодействие антитела и PD-1.

Константа аффинности K_D1 для взаимодействия комплексов с CTLA-4 находилась в диапазоне 8-10 нМ, что соответствует K_D, полученному для ипилимумаба (5,25±3,62 нМ; оценочный доклад Европейского агентства по лекарственным средствам 2011 года: ЕМА/СНМР/557664/2011). Кинетические профили были одинаковыми для всех конструкций на основе Ipi, но с несколько меньшими скоростями ассоциации и диссоциации для Z15170-HC_Ipi.

Biacore-анализ захвата подтвердил двойную связывающую специфичность всех комплексов, включенных в анализ, то есть Z15170-HC_Lam, Z15170-LC_Lam, Z15170-HC_Ipi и Z15170-LC_Ipi. На Фиг. 8 показано, что ферменты сначала связываются с иммобилизованным PD-1 или CTLA-4, и что PD-L1 затем связывается с соответствующим захваченным комплексом. В отдельных контрольных экспериментах было показано, что PD-L1 не связывается с CTLA-4 или Ipi и что никакого дополнительного связывания PD-L1 не наблюдалось после введения PD-L1 к Lam, захваченному на PD-1.

FACS-анализ клеточного связывания: Этот эксперимент был проведен, чтобы проанализировать, могут ли комплексы связываться с клетками, экспрессирующими PD-L1. Клетки MDA-MB-231, которые в естественных условиях экспрессируют PD-L1, окрашивали 0,625 мкг/мл соответствующего комплекса. Значения MFI представлены в Таблице 19 и показывают, что комплексы обладали способностью связываться с клетками, экспрессирующими PD-L1. Для комплексов как на основе Ipi, так и на основе Lam, наивысшие значения MFI были получены для N-концевого положения Z-фрагмента на легкой цепи антитела.

Сокультивирование MDA-MB-231 и РВМС: Чтобы определить, могут ли комплексы на основе Ipi влиять на ингибиторные механизмы, вызванные CTLA-4 и PD-L1, использовали анализ смешанной культуры лимфоцитов. Клетки рака молочной железы MDA-MB-231 сокультивировали с РВМС в течение шести суток и оценивали количество раковых клеток и Т-клеток. Анализ выявил зависимый от концентрации эффект комплексов, с увеличенным количеством Т-клеток и уменьшенным количеством раковых клеток. На Фиг. 9А показано уменьшение количества клеток MDA-MB231 с увеличением концентрации комплексов. Это снижение было очевидным для всех комплексов с наилучшим эффектом, достигнутым для конструкции, в которой Z-фрагмент располагается в N-конце легкой цепи антитела. Напротив, контрольное антитело ипилимумаб не вызывало зависимого от концентрации уменьшения раковых клеток. Таким образом, блокирование взаимодействия PD-1/PD-L1 представляется существенным для уменьшения количества раковых клеток. На Фиг. 9В показано увеличение числа Т-клеток с увеличением концентрации комплексов. Опять же, эффект наиболее заметен с конструкцией, в которой Z-фрагмент расположен на N-конце легкой цепи антитела.

Пример 9

Конъюгирование и радиоактивное мечение PD-L1-связывающих Z-вариантов

В этом примере описано конъюгирование и радиоактивное мечение Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809), Z18608-Cys (SEQ ID NO: 811), Z18609-Cys (SEQ ID NO: 812) и Z18610-Cys (SEQ ID NO: 813), клонированных и продуцированных, как описано в Примере 2 и Примере 6, а также используемых для исследований с визуализацией in vivo, описанных в Примере 10 и 11.

Материалы и методы

Восстановление и NOTA-конъюгирование: К 5 мг Z-варианта в [20 мМ HEPES, 1 мМ EDTA, рН 7,2] добавляли три молярных эквивалента трис(2-карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) в 0,5 мл дегазированного 0,2 М аммиачно-ацетатного буфера (рН 7,0). Реакционную смесь выдерживали при к.т. в течение 60 минут, затем переносили на центрифужный фильтр Ultracel 3K Centrifugal Filter и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 90 минут. Проточную фракцию удаляли, добавляли дополнительно 1 мл 0,2 М аммиачно-ацетатного буфера, и процесс повторяли. Восстановленный Z-вариант затем переносили во второй реакционный сосуд в 2 мл не содержащего кислорода 0,2 М аммиачно-ацетатного буфера (рН 7,0). Затем добавляли 4 мг NOTA-малеимида (макроциклический) в 0,5 мл 0,2 М аммиачно-ацетатного буфера (рН 7,0) и реакционный сосуд продували аргоном, затем нагревали до 40°С в течение 3 часов, после чего реакционную смесь переносили в центрифужный фильтр Ultracel 3K и центрифугировали в течение 90 мин при 4000 об/мин. Проточную фракцию удаляли и добавляли 2 мл воды Milli-Q. Центрифугирование проводили в течение еще 90 минут и проточную фракцию удаляли. Очищенный NOTA-конъюгированный Z-вариант собирали в 1 мл воды Milli-Q, лиофилизировали и хранили при -70°С до использования. Чистоту конечного продукта определяли с помощью ЖХ/МС (сочетание жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией).

Радиоактивное мечение: Картридж, содержащий [¹⁸F]-фторид, сначала промывали 1,5 мл сверхчистой воды, затем [¹⁸F]-фторид элюировали 1,0 мл 0,4 М KHCO₃. Добавляли 100 мкл элюированного раствора [¹⁸F]-фторида во флакон на ножке, заполненному 10 мкл уксусной кислоты, 50 мкл AlCl₃ (2 мМ в 0,1 М NaOAc буфере, рН 4) и 125 мкл 0,1 М NaOAc рН 4. Раствор инкубировали в течение 2 минут при к.т., затем добавляли 1 мг NOTA-конъюгированного Z-варианта в 400 мкл 1:1 раствора ацетонитрила и 0,1 М NaOAc рН 4, затем нагревали до 100°С в течение 15 минут. После завершения нагревания образец переносили во флакон, содержащий 0,7 мл 0,1% муравьиной кислоты, смешивали и очищали с помощью ВЭЖХ [Waters Xselect CSH C18 колонка (250×10 мм, 130 мкм)] с использованием градиента 10-30% MeCN в течение 15 мин при скорости потока 5 мл/мин, уравновешивая 0,1% муравьиной кислотой. Собирали пик, соответствующий [18F] AlF-NOTA-Z#####, MeCN удаляли в вакууме и переносили в стерильный флакон, используя физиологический солевой раствор в качестве промывки с получения [18F] AlF-NOTA-Z#####. Специфическую активность и радиохимическую чистоту определяли с помощью системы Waters Acquity LC/MS (Milford, MA, USA) и детектора β-RAM Model 4 Radio-HPLC (IN/US Systems, Brandon, FL, USA).

Результаты

PD-L1-связывающие Z-варианты, Z15168-Cys (SEQ ID NO: 809), Z18608-Cys (SEQ ID NO: 811), Z18609-Cys (SEQ ID NO: 812) и Z18610-Cys (SEQ ID NO: 813), были сайт-специфически конъюгированы с NOTA на их соответствующем уникальном С-концевом остатке цистеина. Последующее радиоактивное мечение [¹⁸F]AlF, как правило, приводило к значениям радиохимической чистоты 97-100% и удельным активностям 14,6±6,5 ГБк/ммоль. Меченные радиоизотопами Z-варианты упоминаются как [¹⁸F] AlF-NOTA-Z[#####].

Пример 10

Визуализация и биораспределение in vivo у опухоленесущих мышей.

Материалы и методы

Животные модели: Самок мышей SCID Beige (возраст 6-8 недель, Charles River Laboratories) размещали в помещении с контролируемой температурой и влажностью и содержали на обычной диете. Клетки LOXIMVI (клеточная линия человеческой меланомы; PD-L1-положительная) или SUDHL-6 (PD-L1 отрицательные) культивировали в полной ростовой среде, содержащей среду RPMI 1640 с 10% фетальной бычьей сывороткой при 37°C с 5% СО₂. Ростовую среду заменяли 2 или 3 раза в неделю и клетки субкультивировали в соотношении 1:10 при необходимости. Опухоли имплантировали в правое плечо путем подкожной инъекции 1×10⁶ клеток LOXIMVI в 100 мкл PBS или 10×10⁶ SUDHL-6 клеток в 100 мкл PBS + матригель с уменьшенным фактором роста (1:1). Мышей использовали для микро-ПЭТ и ex vivo исследований через примерно 5-7 суток и 3 недель после инъекции клеток LOXIMVI и SUDHL-6 соответственно, когда опухоли достигали массы 100-400 мг.

Сбор данных PET (позитронно-эмиссионная томография): Мышей анестезировали изофлураном (4-5% вводный наркоз, 1-3% поддержание), вставляли катетеры в хвостовую вену и помещали животных в специализированный небольшой ПЭТ-сканер для животных (microPET Focus220, Siemens Preclinical Solutions). Была получена 20-минутная трансмиссионная сканограмма с ⁵⁷Со для коррекции затухания и рассеивания фотонов. Затем 0,2-0,6 МБк соответствующего [¹⁸F]-меченого Z-варианта вводили через катетеры хвостовой вены, и данные ПЭТ собирали в течение 90 мин. В отдельном эксперименте по предварительному блокирорванию вводили 400 мкг немеченого NOTA-конъюгированного Z15168-Cys перед введением [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168.

Измерения биораспределения ex vivo: Сразу после получения данных ПЭТ мышей подвергали эвтаназии. Собирали опухоль, сердце, легкие, селезенку, печень, почки, кровь, плазму и мышцы и измеряли с помощью гамма-счетчика (PerkinElmer). Для каждой мыши измерения биораспределения были преобразованы в единицы стандартного показателя накопления (SUV). Области интереса (RO1) были изображены на всех опухолях, которые можно было идентифицировать на ПЭТ-изображениях, и были рассчитаны кривые активность-время (ТАС).

Результаты

Типичные ПЭТ-изображения после инъекции [¹⁸F]-меченых Z-вариантов опухоленесущим мышам показали самое большой поглощение в почках и мочевом пузыре. PD-L1-положительные опухоли LOX можно было четко видеть на изображениях, в то время как PD-L1-негативные опухоли SUDHL6 не были видны. Типичные ПЭТ-изображения показаны на Фиг. 10А для [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168. Измерения биораспределения ex vivo через 90 минут после инъекции согласовывались с ПЭТ-изображениями. Захват [¹⁸F]-меченных Z-вариантов 15168-Cys (SEQ ID NO: 809), Z18608-Cys (SEQ ID NO: 811), Z18609-Cys (SEQ ID NO: 812) и Z18610-Cys (SEQ ID NO: 813) было значительно выше в опухолях LOX, чем в опухолях SUDHL6, и захват в опухолях увеличивался с увеличением PD-L1-связывающей аффинности Z-вариантов (Фиг. 11А-В). Специфичность к мишени была подтверждена в эксперименте с предварительным блокированием, в котором предварительное введение 400 мкг NOTA-Z15168 вызывало уменьшение захвата [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168 в опухолях LOX (Фиг. 10В). Также наблюдалось изменение распределения, включающее более быстрый клиренс, на что указывало пониженное поглощение в крови в 90 минут. Согранение метки в почках (среднее значение SUV варьировалось от 57 до 84 в ксенографах опухоли LOX), по-видимому, связано с канальцевым повторным захватом белков, где метка [¹⁸F]AlF захватывается после расщепления Z-вариантов. Подводя итоги, можно сказать, что лиганды в виде Z-вариантов эффективны в нацеливании на PD-L1-положительные опухоли in vivo, проявляя специфичное связывание и быстрый клиренс.

Пример 11

Визуализация in vivo у макаки-резус

Материалы и методы

Макак-резус натощах усыпляли кетамином (10 мг/кг, внутримышечно). В правые и левые подкожные вены вводили внутривенный катетер, и животных поддерживали на анестезии пропофолом (5 мг/кг для вводного наркоза и 0,45 мг/кг/мин в течение процедуры сканирования). После первоначального вводного наркоза пропофолом животное интубировали и поддерживали на вентилируемой кислородно-воздушной газовой смеси при примерно 10 см³/кг/дыхание и 23 дыхательных движения в минуту. Животные были оснащены датчиком температуры, пульсоксиметром и монитором СО₂ в конце споскойного выдоха. Температуру тела поддерживали с использованием грелок K-module. Общую инфузионная терапия поддерживали с помощью раствора Рингера-лактата (10 мл/кг/ч внутривенно) во время процедуры сканирования. 84-138 МБк [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168 и 147-227 МБк [¹⁸F]AlF-NOTA-Z18609 соответственно, вводили в виде 2-минутной инфузии. Динамическое сканирование всего организма было начато с началом введения меток и происходило в течение 180 минут с использованием сканера Siemens Biograph 64 TPTV РЕТ/СТ. Реконструкцию всего организма выполняли, используя программу, поставляемую поставщиком для ПЭТ/КТ сканера. Анализ ПЭТ-изображений выполняли с использованием оптимизированной программы на основе Matlab.

Результаты

Типичные проекцонные изображения максимальной интенсивности для макак-резус, которым вводили [¹⁸F]AlF-NOTA-Z15168 и [¹⁸F]AlF-NOTA-Z18609 соответственно, показаны на Фиг. 12А-В, и графики среднего захвата метки (~120-180 мин) показаны на Фиг. 12С. У мышей наибольший захват наблюдался в почках (SUV ≈100-112) и мочевом пузыре, но также наблюдалось нацеливание на лимфатические узлы и селезенку, что согласовалось с экспрессией PD-L1.

ДЕТАЛИЗИРОВАННЫЙ ПЕРЕЧЕНЬ ВОПЛОЩЕНИЙ

1. PD-L1-связывающий полипептид, содержащий PD-L1-связывающий мотив ВМ, где мотив состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из:

1) ERNX₄AAX₇EIL X₁₁LPNLX₁₆X₁₇X₁₈QX₂₀ WAFIWX₂₆LX₂₈D

где независимо друг от друга,

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из А, Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

X₁₁ выбран из A, D, Е, F, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

X₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, N, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е; и

2) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 96% идентичность последовательности, определенной в (1).

2. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 1, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

X₁₁ выбран из A, D, Н, L, Q, R, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

X₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е.

3. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 1, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₇ выбран из А, Е, F, Н, N, Q, S, Т, V, W и Y;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q, R и S;

X₁₈ выбран из A, D, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, L, N, Q, R, Т, V и Y;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из A, D и Е.

4. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 2 или 3, где в последовательности (1)

Х₄ выбран из A, D, Е, F, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т и V;

Х₇ выбран из F, Н, Q и Y;

Х₁₁ выбран из Н, Q, W и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из А, Н, K, N, Q и S;

X₁₈ выбран из А, Е, G, Н, K, L, N, Q, R, S, Т, V и Y;

Х₂₀ выбран из Н, I, K, Q, R и V;

Х₂₆ выбран из K и S; и

Х₂₈ выбран из А и D.

5. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-4, где в последовательности (1) выполняется по меньшей мере четыре из семи условий I-VII:

I. Х₇ выбран из F, Н, Q и Y;

II. Х₁₁ выбран из Н и Y;

III. X₁₆ представляет собой Т;

IV. Х₁₇ выбран из N, Q и S;

V. Х₂₀ выбран из Н, I, K и R;

VI. Х₂₆ представляет собой K; и

VII. Х₂₈ представляет собой А или D.

6. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 5, где в последовательности (1) выполняется по меньшей мере пять из семи условий I-VII.

7. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 6, где в последовательности (1) выполняется по меньшей мере шесть из семи условий I-VII.

8. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 7, где в последовательности (1) выполняются все семь условий I-VII.

9. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-8, где Х₇Х₁₁Х₂₀ выбраны из FYK и YYK.

10. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-9, где Х₁₁Х₁₇Х₂₀ выбраны из YNK и YQK.

11. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-10, где Х₁₁Х₁₈Х₂₀ представляет собой YAK.

12. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-12, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808.

13. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 12, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-796.

14. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 13, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-787.

15. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 14, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781 и 784-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784 и 786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781 и 784, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 784, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 781, например группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 776, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 781, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 784.

16. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 15, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775, 780-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 775, 780, 781, 784 и 786.

17. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 14-16, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93.

18. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 17, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24.

19. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 18, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14 и 17-21.

20. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 19, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 17.

21. PD-L1 -связывающий полипептид согласно аспекту 19, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14 и 18-21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5 и 21.

22. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 20 или 21, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 1.

23. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 20 или 21, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 4.

24. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 20 или 21, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 5.

25. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 21, где последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 21.

26. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-25, где указанный PD-L1-связывающий мотив образует часть трехспирального комплекса белкового домена.

27. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 26, где указанный PD-L1-связывающий мотив по существу образует часть двух спиралей с соединительной петлей в указанном трехспиральном комплексе белкового домена.

28. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 27, где указанный трехспиральный комплекс белкового домена выбран из доменов бактериальных рецепторов.

29. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 28, где указанный трехспиральный комплекс белкового домена выбран из доменов протеина А из Staphylococcus aureus или их производных.

30. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-29, который содержит связывающий модуль BMod, аминокислотная последовательность которого выбрана из:

3)

где

[BM] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

Х_с выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S; и

X_f выбран из А и S; и

4) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 93% идентичность последовательности, определенной в (3).

31. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-30, где последовательности (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-808.

32. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 31, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-796.

33. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 32, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 774-787.

34. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 33, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781 и 784-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784 и 786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781 и 784, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 784, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776 и 781, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 776, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 781, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93 и 784.

35. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 33, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775 и 780-786, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 775, 780, 781, 784 и 786.

36. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 33-35, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93.

37. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 36, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24.

38. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 37, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14 и 17-21.

39. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 38, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5 и 17, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2 и 17.

40. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 38, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14 и 18-21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5 и 21.

41. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 40 или 41, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 1.

42. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 40 или 41, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 4.

43. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 40 или 41, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 5.

44. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 41, где последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 21.

45. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-44, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

5)

где [BMod] представляет собой PD-L1-связывающий модуль, как определено в любом из аспектов 30-44; и

6) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (5).

46. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-44, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

7)

где [BMod] представляет собой PD-L1-связывающий модуль, как определено в любом из аспектов 30-44; и

8) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности, определенной в (7).

47. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-46, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25.

48. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-47, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

17)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25; и

18) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (17).

49. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-47, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

19)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25; и

20) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (19).

50. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-47, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

21)

где [ВМ] представляет собой а PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25; и

22) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (21).

51. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-47, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

23)

где [ВМ] представляет собой PD-L1-связывающий мотив, как определено в любом из аспектов 1-25; и

24) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (23).

52. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-51, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-814.

53. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 52, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774-796 и 809-814.

54. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 53, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774-787 и 809-814.

55. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 54, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 775, 776, 779-781, 784-786 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 780, 781, 784, 786 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781, 784 и 809-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 784, 809 и 811-814, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 781, 809 и 811-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 776, 809 и 811-814, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 781, 809 и 811-814, или группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, 784 и 811-814.

56. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 55, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93, 774, 775, 780-786 и 810-814, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-93, SEQ ID NO: 775, 780, 781, 784, 786 и 810-814.

57. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 54-56, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-93 и 811-813.

58. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 57, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24 и 811-813.

59. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 58, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 14, 17-21 и SEQ ID NO: 811-812.

60. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 59, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-12, 17, 811 и 812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1-5, 17, 811 и 812, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 811 и 812.

61. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 58, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 4, 5, 6, 9, 14, 18, 19, 20, 21 и 811, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5, 18 и 21, такой как группа, состоящая из SEQ ID NO: 4, 5 и 21.

62. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 60 или 61, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 1 или 811.

63. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 60, где последовательность (17) или (21) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 2 или 812.

64. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 60 или 61, где последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 4.

65. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 60 или 61, где последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 5.

66. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 61, где последовательность (17) соответствует последовательности от положения 1 до положения 58 в SEQ ID NO: 21.

67. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-66, который способен блокировать PD-L1-зависимую передачу сигнала.

68. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 67, где концентрация, вызывающая половину максимального ингибирования (IC50) блокирования, составляет не более 5×10^-8 М, например не более 1×10^-8 М, например не более 5×10^-9 М, например не более 3,5×10^-9 М, например не более 1×10^-9 М, например не более 5×10^-10 М, например не более 1×10^-10 М.

69. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-68, который способен блокировать взаимодействие PD-L1 с PD-1.

70. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-69, который способен связываться с PD-L1 так, что значение K_D взаимодействия составляет не более 2×10^-8 М, например не более 1×10^-8 М, например не более 1×10^-9 М, например не более 5×10^-10 М, например не более 3×10^-10 М.

71. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-70, который способен связываться с PD-L1 так, что значение k_d взаимодействия составляет не более 1×10^-3 с^-1, например не более 6×10^-4 с^-1.

72. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-71, который способен связываться с PD-L1 так, что значение ЕС50 взаимодействия составляет не более 1×10^-9 М, например не более 1×10^-10 М, например не более 7×10^-11 М.

73. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-72, где указанный PD-L1 представляет собой человеческий PD-L1.

74. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-73, который содержит дополнительные аминокислоты на С-конце и/или N-конце.

75. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 74, где указанные(ая) дополнительные(ая) аминокислоты(а) улучшают(ет) получение, очистку, стабилизацию in vivo или in vitro, сочетание или обнаружение полипептида.

76. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-75 в мультимерной форме, содержащий по меньшей мере две мономерные единицы PD-L1-связывающего полипептида, аминокислотные последовательности которых могут быть одинаковыми или разными.

77. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 76, где указанные мономерные единицы PD-L1-связывающего полипептида ковалентно соединены.

78. PD-L1-связывающий полипептид согласно аспекту 77, где мономерные единицы PD-L1-связывающего полипептида экспрессируются в виде слитого белка.

79. PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 76-78 в димерной форме.

80. Слитый белок или конъюгат, содержащий

- первый фрагмент, состоящий из PD-L1-связывающего полипептида по любому из аспектов 1-79; и

- второй фрагмент, состоящий из полипептида, имеющего нужную биологическую активность.

81. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 80, где указанная нужная биологическая активность представляет собой терапевтическую активность.

82. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 80, где указанная нужная биологическая активность представляет собой связывающую активность.

83. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 80, где указанная нужная биологическая активность представляет собой ферментативную активность.

84. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 82, где указанная связывающая активность представляет собой альбумин-связывающую активность, что увеличивает время полужизни слитого белка или конъюгата in vivo.

85. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 84, где указанный второй фрагмент содержит альбуминсвязывающий домен стрептококкового белка G или его производное.

86. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 82, где действие указанной связывающей активности блокирует биологическую активность.

87. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 81, где второй фрагмент представляет собой терапевтически активный полипептид.

88. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 87, где второй фрагмент представляет собой агент, модифицирующий иммунный агент.

89. Слитый белок или конъюгат согласно аспекту 87, где второй фрагмент представляет собой противораковый агент.

90. Слитый белок или конъюгат по любому из аспектов 80-83 и 86-89, где второй фрагмент выбран из группы, состоящей из человеческих эндогенных ферментов, гормонов, факторов роста, хемокинов, цитокинов и лимфокинов.

91. Слитый белок по любому из аспектов 80-91, где второй фрагмент дополнительно содержит линкер.

92. Комплекс, содержащий по меньшей мере один PD-L1-связывающий полипептид по любому из аспектов 1-91 и по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

93. Комплекс согласно аспекту 92, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, Fab-фрагментов, Fab'-фрагментов, F(ab')₂-фрагментов, Fc-фрагментов, Fv-фрагментов, одноцепочечных Fv-фрагментов (scFv), (scFv)₂ и доменных антител.

94. Комплекс согласно аспекту 93, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, Fab-фрагментов и scFv-фрагментов.

95. Комплекс согласно аспекту 94, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полноразмерное антитело.

96. Комплекс по любому из аспектов 92-95, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

97. Комплекс по любому из аспектов 92-96, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из человеческих антител, гуманизированных антител, химерных антител, и их антигенсвязывающих фрагментов.

98. Комплекс согласно аспекту 97, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой человеческое или гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

99. Комплекс по любому из аспектов 92-98, где указанный PD-L1-связывающий полипептид присоединен к С-концу или N-концу тяжелой цепи или легкой цепи указанного антитела или его антигенсвязывающий фрагмента.

100. Комплекс по любому из аспектов 92-99, дополнительно содержащий линкер.

101. Комплекс по любому из аспектов 92-100, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент обладает аффинностью в отношении антигена, например антигена, ассоциированного с инфекционным заболеванием, или антигена, ассоциированного с раком.

102. Слитый белок или конъюгат по любому из аспектов 79-90 или комплекс по любому из аспектов 92-101, где указанный второй фрагмент или указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор, выбранный из группы, состоящей из ингибиторов: PD-1, CTLA-4, Т-клеточного иммуноглобулина и муцин-содержащего белка-3 (TIM-3), галектина-9 (GAL-9), гена активации лимфоцитов-3 (LAG-3), PD-L2, гомолога В7 3 (В7-Н3), гомолога В7 4 (В7-Н4), V-доменного Ig супрессора активации Т-клеток (VISTA), молекулы клеточной адгезии 1 карциноэмбрионального антигена (СЕАСАМ1), аттенюатора В- и Т-лимфоцитов (BTLA), рецептора колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R), медиатора проникновения вируса герпеса (HVEM), киллерных иммуноглобулиновых рецепторов (KIR), аденозина, рецептора аденозина А2а (A2aR), CD200-CD200R и Т-клеточного Ig и домена ITIM (иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив).

103. Слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 102, где указанный второй фрагмент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор PD-1, такой как ингибитор, выбранный из группы, состоящей из ниволумаба, пидилизумаба, BMS 936559, MPDL328OA и пембролизумаба, такой как пембролизумаб.

104. Слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 102, где указанный второй фрагмент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой ингибитор CTLA-4, такой как ингибитор, выбранный из группы, состоящей из белатацепта, абатацепта и ипилимумаба, например ипилимумаб.

105. Слитый белок или конъюгат по любому из аспектов 80-91 или комплекс по любому из аспектов 92-101, где указанный второй фрагмент, или антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой агонист, выбранный из группы, состоящей из агонистов CD134, CD40, 4-1ВВ и индуцированного глюкокортикоидами TNFR-родственного белка (GITR).

106. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из аспектов 1-105, дополнительно содержащий метку.

107. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 106, где указанная метка выбрана из группы, состоящей из флуоресцентных красителей и металлов, хромофорных красителей, хемилюминесцентных соединений и биолюминесцентных белков, ферментов, радионуклидов, радиоактивных частиц и меток предварительного нацеливания.

108. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 107, содержащий хелатирующее окружение, обеспечиваемое полиаминокарбоксилатным хелатором, конъюгированным с PD-L1-связывающим полипептидом через тиольную группу остатка цистеина или аминную группу остатка лизина.

109. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 106, который содержит метку предварительного нацеливания, образующую часть комплементарной пары фрагментов предварительного нацеливания, например выбранных из стрепт(авидин)а/биотина, олигонуклеотида/комплементарного олигонуклеотида, такого как ДНК/комплементарная ДНК, РНК/комплементарная РНК, фосфоротиоатная нуклеиновая кислота/комплементарная фосфоротиоатная нуклеиновая кислота, пептидо-нуклеиновая кислота (ПНК)/комплементарная пептидо-нуклеиновая кислота (кПНК) и морфолиновый олигонуклеотид/комплементарный морфолиновый олигонуклеотид.

110. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс согласно аспекту 109, где указанная метка предварительного нацеливания представляет собой метку из пептидо-нуклеиновой кислоты.

111. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат or комплекс по аспекту 110, где указанный метка предварительного нацеливания представляет собой 10-20-мерную последовательность пептидо-нуклеиновой кислоты, например 15-мерную последовательность пептидо-нуклеиновой кислоты.

112. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из аспектов 1-105.

113. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид согласно аспекту 112.

114. Клетка-хозяина, содержащая экспрессионный вектор согласно аспекту 113.

115. Способ получения полипептида по любому из аспектов 1-105, включающий

- культивирование клетки-хозяина согласно аспекту 114 в условиях, подходящих для экспрессии указанного полипептида с указанного экспрессирующего вектора, и

- выделение указанного полипептида.

116. Композиция, содержащая PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из аспектов 1-111 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель.

117. Композиция согласно аспекту 116, дополнительно содержащая по меньшей мере один дополнительный активный агент, например агент, выбранный из агента, модулирующего иммунный ответ, и противоракового агента.

118. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из аспектов 1-111 или композиция по любому из аспектов 116-117 для перорального, местного, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, легочного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, буккального, сублингвального или суппозиторного введения, например для местного введения.

119. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из аспектов 1-111 или композиция по любому из аспектов 116-117 для применения в качестве лекарственного средства, диагностического агента и/или прогностического агента.

120. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 119 в качестве лекарственного средства.

121. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 119 в качестве диагностического агента и/или прогностического агента.

122. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения в качестве лекарственного средства согласно аспекту 120, где указанный полипептид, слитый белок, конъюгат или композиция модулирует функцию PD-L1 in vivo.

123. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по любому из аспектов 119-121 в лечении, прогнозировании или диагностике PD-L1-ассоциированного расстройства.

124. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 122, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство выбрано из группы, состоящей из инфекционных заболеваний и раковых заболеваний.

125. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 124, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство представляет собой инфекционное заболевание, такое как хроническая вирусная инфекция, например выбранная из группы, состоящей из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита С (HCV).

126. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 124, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство представляет собой рак, такой как рак, выбранный из группы, состоящей из:

- раковых заболеваний, обнаруживающих солидные опухоли, например выбранных из группы, состоящей из рака кожи, такого как меланома и немеланомный рак кожи (NMSC); раковых заболеваний легкого, такого как мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC); рака головы и шеи, почечно-клеточной карциномы (RCC), рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака желудка, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, глиомы, глиобластомы, карциномы печени, рака желчного пузыря, рака щитовидной железы, рака кости, рака шейки матки, рака матки, рака вульвы, рака эндометрия, рака яичка, рака почки, карциномы пищевода, раковых заболеваний мозга/ЦНС, нейрональных раковых заболеваний, мезотелиомы, саркомы, аденокарциномы тонкой кишки и детских злокачественных опухолей; и

- раковых заболеваний, необнаруживающих солидные опухоли, например лейкоза, острого миелоидного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза и множественной миеломы.

127. PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения согласно аспекту 126, где указанный рак выбран из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака желудка, рака яичника, рака поджелудочной железы и рака простаты, например выбран из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC и рака мочевого пузыря.

128. Способ лечения PD-L1-ассоциированного расстройства, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса по любому из аспектов 1-111 или композиции по любому из аспектов 116-117.

129. Способ согласно аспекту 128, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство выбрано из группы, состоящей из инфекционного заболевания и рака.

130. Способ согласно аспекту 129, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство представляет собой инфекционное заболевание, такое как хроническая вирусная инфекция, например выбранная из группы, состоящей из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита С (HCV).

131. Способ согласно аспекту 129, где указанное PD-L1-ассоциированное расстройство представляет собой рак, например рак, выбранный из группы, состоящей из:

- раковых заболеваний, обнаруживающих солидные опухоли, например выбранных из группы, состоящей из рака кожи, такого как меланома и немеланомный рак кожи (NMSC); раковых заболеваний легкого, такого как мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC); рака головы и шеи, почечно-клеточной карциномы (RCC), рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака желудка, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, глиомы, глиобластомы, карциномы печени, рака желчного пузыря, рака щитовидной железы, рака кости, рака шейки матки, рака матки, рака вульвы, рака эндометрия, рака яичка, рака почки, карциномы пищевода, раковых заболеваний мозга/ЦНС, нейрональных раковых заболеваний, мезотелиомы, саркомы, аденокарциномы тонкой кишки и детских злокачественных опухолей; и

- раковых заболеваний, необнаруживающих солидные опухоли, например лейкоза, острого миелоидного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза и множественной миеломы.

132. Способ согласно аспекту 131, где указанный рак выбран из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака желудка, рака яичника, рака поджелудочной железы и рака простаты, например выбран из группы, состоящей из меланомы, NSCLC, рака головы и шеи, RCC и рака мочевого пузыря.

133. Способ по любому из аспектов 131-132, включающий стадии:

а) приведение субъекта в контакт с PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом или комплексом по любому из аспектов 109-111, содержащим метку предварительного нацеливания, или с композицией, содержащей такой PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, и

б) приведение субъекта в контакт с комплементарным предварительно нацеленным фрагментом, содержащим радионуклид.

134. Способ обнаружения PD-L1, включающий предоставление образца, предположительно содержащего PD-L1, приведение указанного образца в контакт с PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белок, конъюгатом или комплексом по любому из аспектов 1-111 или с композицией по любому из аспектов 116-117, и обнаружение связывания PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, указывающее на присутствие PD-L1 в образце.

135. Способ обнаружения присутствия PD-L1 у субъекта, включающий стадии:

а) приведение субъекта или образца, выделенного из субъекта, в контакт с PD-L1-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом или комплексом по любому из аспектов 1-111 или с композицией по любому из аспектов 116-117, и

б) получение значения, соответствующего количеству PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или композиции, который связался у указанного субъекта или с указанным образцом.

136. Способ согласно аспекту 135, в котором указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из аспектов 109-111 или указанная композиция содержит такой PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, и стадия (а) дополнительно включает приведение субъекта в контакт с комплементарным предварительно нацеленным фрагментом, меченным обнаруживаемой меткой, такой как радионуклидная метка.

137. Способ согласно аспекту 135 или 136, дополнительно содержащий стадию сравнения указанного значения с эталоном.

138. Способ по любому из аспектов 134-137, где указанный субъект представляет собой млекопитающее, например человека.

139. Способ по любому из аспектов 134-138, где способ выполняют in vivo.

140. Способ согласно аспекту 139, который является способом медицинской визуализации, в котором

- стадия (а) включает системное введение указанного PD-L1-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции млекопитающему;

- указанный PD-L1-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс, композиция или предварительно нацеленный фрагмент содержит радионуклидную метку, подходящую для медицинской визуализации; и

- стадия (б) включает получение одного или нескольких изображений по меньшей мере части организма субъекта с использованием медицинского инструмента для визуализации, где указанное(ые) изображение(я) указывает(ют) на присутствие радионуклида в организме.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> AFFIBODY AB

<120> NEW POLYPEPTIDE

<130> 21084269

<150> EP15192364.6

<151> 2015-10-30

<150> EP16157154.2

<151> 2016-02-24

<160> 836

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 1

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 2

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 2

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 3

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 3

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 4

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 4

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 5

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 5

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 6

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 6

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 7

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 7

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 8

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 8

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 9

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 9

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 10

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 10

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 11

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 11

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 12

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 12

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 13

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 13

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 14

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 14

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 15

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 15

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 16

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 16

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 17

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 17

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 18

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 18

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 19

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 19

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 20

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 20

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 21

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 21

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 22

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 22

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 23

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 23

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 24

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 24

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Ser Tyr Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 25

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 25

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 26

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 26

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 27

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 27

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 28

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 28

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 29

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 29

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 30

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 30

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 31

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 31

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 32

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 32

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 33

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 33

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 34

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 34

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 35

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 35

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 36

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 36

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 37

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 37

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Val Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 38

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 38

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 39

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 39

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 40

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 40

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 41

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 41

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 42

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 42

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 43

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 43

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 44

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 44

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 45

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 45

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 46

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 46

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 47

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 47

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 48

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 48

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 49

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 49

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 50

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 50

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 51

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 51

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 52

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 52

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 53

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 53

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 54

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 54

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 55

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 55

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 56

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 56

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 57

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 57

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 58

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 58

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 59

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 59

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 60

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 60

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 61

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 61

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 62

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 62

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 63

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 63

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 64

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 64

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 65

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 65

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 66

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 66

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 67

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 67

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 68

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 68

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 69

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 69

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 70

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 70

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 71

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 71

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 72

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 72

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 73

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 73

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 74

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 74

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 75

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 75

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 76

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 76

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 77

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 77

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 78

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 78

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 79

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 79

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 80

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 80

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 81

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 81

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 82

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 82

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 83

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 83

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 84

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 84

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 85

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 85

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 86

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 86

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 87

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 87

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 88

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 88

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 89

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 89

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 90

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 90

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 91

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 91

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 92

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 92

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 93

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 93

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Thr Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 94

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 94

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 95

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 95

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 96

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 96

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Tyr Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 97

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 97

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 98

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 98

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Glu Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 99

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 99

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 100

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 100

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 101

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 101

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 102

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 102

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ser Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 103

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 103

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 104

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 104

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 105

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 105

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 106

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 106

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asp Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 107

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 107

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 108

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 108

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Ala His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 109

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 109

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Glu Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 110

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 110

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Asp Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asp Gln Asn Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 111

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 111

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 112

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 112

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ile Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 113

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 113

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 114

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 114

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 115

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 115

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 116

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 116

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 117

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 117

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 118

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 118

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 119

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 119

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 120

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 120

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 121

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 121

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 122

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 122

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 123

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 123

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Trp Ala Ala Ala Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 124

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 124

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asp Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 125

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 125

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 126

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 126

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Glu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 127

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 127

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Gln Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 128

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 128

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 129

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 129

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 130

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 130

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 131

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 131

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 132

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 132

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Ala Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Lys Lys Gln Asn Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 133

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 133

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 134

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 134

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 135

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 135

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 136

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 136

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 137

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 137

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 138

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 138

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 139

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 139

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Leu Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 140

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 140

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 141

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 141

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asp Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 142

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 142

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 143

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 143

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 144

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 144

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 145

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 145

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 146

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 146

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Thr Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 147

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 147

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 148

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 148

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 149

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 149

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 150

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 150

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Trp Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Glu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 151

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 151

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 152

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 152

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Ala Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 153

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 153

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 154

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 154

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 155

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 155

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Trp Glu Gln Asn Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 156

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 156

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Gln Leu Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 157

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 157

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 158

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 158

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 159

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 159

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 160

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 160

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 161

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 161

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 162

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 162

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asn Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 163

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 163

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 164

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 164

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Glu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 165

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 165

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Gln Arg Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 166

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 166

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 167

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 167

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 168

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 168

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Ser Leu Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 169

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 169

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 170

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 170

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 171

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 171

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Thr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 172

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 172

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 173

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 173

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 174

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 174

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Phe Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 175

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 175

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 176

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 176

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 177

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 177

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 178

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 178

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gly Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 179

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 179

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 180

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 180

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 181

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 181

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 182

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 182

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 183

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 183

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 184

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 184

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 185

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 185

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 186

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 186

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Lys Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 187

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 187

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asp Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 188

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 188

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 189

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 189

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 190

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 190

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 191

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 191

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Arg His Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 192

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 192

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Asn Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 193

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 193

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 194

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 194

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 195

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 195

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 196

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 196

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 197

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 197

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 198

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 198

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 199

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 199

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Lys Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 200

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 200

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 201

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 201

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 202

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 202

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 203

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 203

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 204

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 204

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 205

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 205

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 206

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 206

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 207

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 207

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 208

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 208

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Phe Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 209

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 209

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 210

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 210

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 211

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 211

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 212

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 212

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Trp Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 213

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 213

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 214

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 214

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 215

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 215

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 216

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 216

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 217

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 217

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 218

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 218

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ile Leu Pro Asn Leu Thr Arg Ala Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 219

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 219

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 220

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 220

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 221

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 221

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 222

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 222

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 223

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 223

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ala Arg Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 224

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 224

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Gln Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 225

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 225

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 226

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 226

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 227

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 227

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 228

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 228

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 229

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 229

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 230

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 230

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 231

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 231

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Arg Glu Gln Glu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 232

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 232

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asp Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 233

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 233

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 234

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 234

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ile Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 235

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 235

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 236

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 236

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 237

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 237

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 238

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 238

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 239

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 239

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 240

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 240

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 241

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 241

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 242

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 242

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 243

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 243

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 244

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 244

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Trp Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 245

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 245

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Trp Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 246

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 246

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 247

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 247

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 248

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 248

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 249

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 249

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 250

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 250

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Arg Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 251

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 251

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Asp Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 252

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 252

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Lys Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 253

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 253

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 254

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 254

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asp Glu Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 255

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 255

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Glu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 256

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 256

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 257

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 257

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 258

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 258

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 259

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 259

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Phe Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 260

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 260

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 261

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 261

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 262

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 262

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Arg Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 263

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 263

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Ala Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 264

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 264

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 265

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 265

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 266

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 266

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 267

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 267

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 268

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 268

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Lys Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 269

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 269

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Thr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ala Lys Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 270

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 270

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asp Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 271

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 271

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 272

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 272

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 273

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 273

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Gln Tyr Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 274

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 274

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 275

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 275

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 276

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 276

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 277

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 277

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 278

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 278

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Thr Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 279

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 279

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 280

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 280

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 281

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 281

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asp Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 282

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 282

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 283

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 283

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 284

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 284

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 285

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 285

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 286

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 286

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 287

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 287

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 288

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 288

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 289

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 289

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asp Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 290

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 290

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 291

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 291

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 292

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 292

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 293

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 293

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 294

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 294

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Lys Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 295

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 295

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 296

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 296

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 297

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 297

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 298

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 298

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 299

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 299

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 300

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 300

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 301

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 301

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 302

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 302

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Asn Asp Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 303

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 303

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 304

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 304

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 305

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 305

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 306

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 306

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 307

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 307

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 308

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 308

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ile Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 309

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 309

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Trp Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Leu Pro Asn Leu Thr Thr Leu Gln Asn Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 310

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 310

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asp Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 311

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 311

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 312

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 312

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Arg Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 313

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 313

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 314

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 314

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 315

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 315

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asp Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 316

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 316

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 317

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 317

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 318

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 318

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 319

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 319

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Leu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 320

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 320

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asp Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 321

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 321

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Leu Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 322

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 322

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 323

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 323

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 324

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 324

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 325

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 325

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 326

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 326

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 327

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 327

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 328

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 328

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 329

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 329

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 330

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 330

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 331

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 331

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 332

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 332

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 333

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 333

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asp Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 334

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 334

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Glu Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 335

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 335

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 336

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 336

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 337

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 337

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 338

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 338

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asp Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 339

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 339

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asp Leu Pro Asn Leu Thr Gln Glu Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 340

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 340

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 341

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 341

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 342

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 342

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 343

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 343

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Phe Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 344

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 344

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Phe Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 345

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 345

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 346

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 346

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Glu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 347

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 347

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 348

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 348

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 349

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 349

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 350

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 350

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 351

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 351

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 352

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 352

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 353

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 353

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 354

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 354

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Val Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 355

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 355

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 356

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 356

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 357

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 357

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 358

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 358

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 359

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 359

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr His Asn Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 360

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 360

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Val Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 361

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 361

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Ala Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 362

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 362

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asn Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 363

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 363

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 364

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 364

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 365

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 365

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 366

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 366

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Val Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 367

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 367

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 368

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 368

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 369

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 369

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 370

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 370

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 371

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 371

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Lys Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 372

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 372

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Gln Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 373

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 373

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 374

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 374

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 375

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 375

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Glu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 376

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 376

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 377

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 377

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 378

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 378

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Ser Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 379

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 379

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 380

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 380

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 381

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 381

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 382

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 382

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Gly Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 383

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 383

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 384

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 384

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Tyr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 385

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 385

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Asp Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 386

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 386

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 387

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 387

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 388

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 388

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Arg Tyr Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 389

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 389

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 390

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 390

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asn Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 391

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 391

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Asn Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 392

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 392

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Lys Lys Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 393

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 393

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 394

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 394

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 395

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 395

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Ala Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 396

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 396

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 397

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 397

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 398

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 398

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 399

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 399

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Ala Gln Gln Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 400

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 400

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Leu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Lys Asp Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 401

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 401

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 402

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 402

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 403

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 403

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 404

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 404

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 405

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 405

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 406

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 406

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Trp Leu Pro Asn Leu Thr Ala Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 407

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 407

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asp Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 408

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 408

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Pro Asn Leu Thr Gln Ser Gln Leu Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 409

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 409

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Arg Asn Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 410

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 410

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln His Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 411

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 411

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Asn Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ser Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 412

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 412

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Gln Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 413

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 413

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 414

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 414

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Thr Asp Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 415

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 415

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ser Glu Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 416

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 416

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Leu Lys Leu Pro Asn Leu Thr Lys Glu Gln Trp Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 417

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 417

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 418

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 418

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 419

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 419

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Lys Ser Gln Val Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 420

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 420

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ser Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Asn Tyr Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 421

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 421

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Asn Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Glu Gln Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 422

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 422

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 423

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 423

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ala Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 424

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 424

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Val Ala Ala Ser Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 425

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 425

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Phe Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 426

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 426

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Lys Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 427

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 427

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Glu Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Phe Leu Pro Asn Leu Thr Ala Ala Gln His Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 428

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 428

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Ile Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Glu Leu Pro Asn Leu Thr Ser Ala Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 429

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 429

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Lys Gln Gln Thr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 430

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 430

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Gln Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asn Gln Arg Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 431

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 431

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn His Ala Ala His Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Asn Gln Ile Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 432

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 432

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Thr Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 433

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 433

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Arg Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Leu Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Gln Lys Gln Lys Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 434

<211> 58

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Сконструированный PD-L1-связывающий полипептид

<400> 434

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Arg Asn Gln Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Leu Asn Leu Pro Asn Leu Thr Asn Glu Gln Tyr Trp Ala Phe Ile Trp

20 25 30

Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala