ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Данная заявка содержит ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ, который был подан в электронном виде в формате ASCII и таким образом включен в данный документ посредством ссылки. Указанная копия ASCII, созданная 5 декабря 2017 года, называется JBI5112WOPCT_SL.txt и имеет размер 266978 байт.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится к доменам типа III (FN3) фибронектина, которые специфически связываются с кластером дифференциации 8a (CD8a). Такие домены FN3 могут быть использованы, например, для терапевтической визуализации, диагностики и фармацевтической терапии. Предложены способы получения таких молекул и содержащие их диагностические агенты.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Стремительно развивающиеся области иммунотерапии рака недавно привели к одобрению FDA нескольких новых способов иммунотерапии, и в данное время многие другие терапии проходят клинические испытания по различным видам рака. Кроме того, тщательно тестируются иммунотерапии на основе клеток, малых молекул, антител, и их комбинаций, в доклинических исследованиях для перехода к клиническому применению. Динамическое микроокружение опухоли и гетерогенность опухоли стали важными темами как в доклинических, так и в клинических исследованиях (Hanahan D, Weinberg RA. Cell 2011;144:646-74; M antovani A, Allavena P, Sica A, Balkwill F. Nature 2008; 454:436-44; Schreiber RD, Old LJ, Smyth MJ. Science 2011; 331:1565-70.), но способность наблюдать за изменениями иммунного статуса первичных поражений и метастатического рака является ограниченной. Современные способы мониторинга лимфоцитов из цельной крови или биопсий из гетерогенных опухолей не отображают динамическую и пространственную информацию, которая, вероятно, необходима для наблюдения за иммунными реакциями на терапевтическое вмешательство, многие из которых вызывают изменения количества и локализации иммунных клеток во всем теле. Таким образом, способы молекулярной визуализации, которые могут неинвазивно отслеживать как системные, так и внутриопухолевые изменения в количестве или локализации иммунных клеток во время экспериментальных терапий, способны улучшить понимание динамики иммунотерапевтического механизма с потенциалом для предоставления осуществляемых способов для прогнозирования и/или оценки иммунотерапевтических реакций.

Анализ инфильтрирующих в опухоль лимфоцитов (TIL - tumor-infiltrating lymphocytes) продемонстрировал важность иммунного микроокружения опухоли, и того, что наличие цитотоксичних CD8⁺ T-лимфоцитов может предсказать общую выживаемость при раке молочной железы, легких, яичников, меланоме и колоректальном раке (рассмотрено в источниках Pages F, et. al. Oncogene 2010;29:1093-102. и Gooden MJ, et al. Br J Cancer 2011;105:93-103.). Учитывая недавние клинические успехи иммунотерапий, которые изменяют иммунное микроокружение опухоли, включая адоптивный клеточный перенос (ACT - adoptive cell transfer) цитотоксических T-лимфоцитов с трансдуцированным Т-клеточным рецептором (ТКР) или рецептором химерного антигена, (Johnson LA, et al. Blood 2009;114:535-46; Rosenberg SA. Sci Transl Med 2012;4:127ps8.), агонистические антитела, нацеленные на CD137 (4-1BB) и CD40 (Melero I, et al. Clin Cancer Res 2013;19:997-1008; Melero I, et al. Nat Rev Cancer 2007;7:95-106; Vinay DS, и Kwon BS. Mol Cancer Ther 2012;11:1062-70.), и блокирование антителами ингибиторов контрольной точки CTLA-4, PD-1, и PD-L1 (Callahan MK, и Wolchok JD. J Leukoc Biol 2013;94:41-53; Shin DS, и Ribas A. Curr Opin Immunol 2015;33C:23-35; Topalian SL, et al. Cancer Cell 2015;27:450-61.), способность неинвазивного наблюдения за иммунной реакцией опухоли на терапию приобрела первостепенное значение.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение включает в себя CD8A-связывающие домены типа III (FN3) фибронектина. Также описаны родственные полинуклеотиды, способные кодировать предложенные домены FN3, клетки, экспрессирующие предложенные домены FN3, а также ассоциированные векторы. Кроме того, описаны способы применения предложенных доменов FN3. Например, домены FN3 согласно данному изобретению могут быть применены для неинвазивного и количественного мониторинга наличия и количества CD8+ T-лимфоцитов.

В некоторых вариантах осуществления, данное изобретение включает в себя выделенные домены FN3, причем домены FN3 связываются с человеческим CD8A, содержащим SEQ ID NO: 35. В других вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 связываются с CD8A человека и CD8A яванского макака. В еще других вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 основаны на последовательности Tencon SEQ ID NO: 1. В дополнительных вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 основаны на последовательности Tencon27 SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, альбумин-специфичные домены FN3 выделяют из библиотеки, содержащей последовательность SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 7 или 8. В некоторых вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 не активируют CD8+ T-лимфоциты in vitro, как определено с помощью метода иммуноферментных пятен (ELISPOT). В некоторых вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 связываются с человеческим CD8A с аффинностью (K_от) от около 0,02 до около 6,6 нМ, как измерено с помощью поверхностного плазмонного резонанса. В других вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 имеют замену на цистеин в позиции остатка 54 SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68. В других вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40-269. В других вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 конъюгированы с меткой пригодной для обнаружения.

В дополнение к описанным CD8A-специфичным доменам FN3 также предложены полинуклеотидные последовательности, способные кодировать описанные домены FN3. Также в данном документе предложены векторы, содержащие описанные полинуклеотиды, а также клетки, экспрессирующие CD8A-специфичные домены FN3. Также описаны клетки, способные экспрессировать раскрытые векторы. Такие клетки могут представлять собой клетки млекопитающих (например, клетки 293F, клетки CHO), клетки насекомых (например, клетки Sf7), клетки дрожжей, клетки растений или клетки бактерий (например, E. coli). Также предложен способ получения описанных доменов FN3.

Данное изобретение также включает в себя способы конъюгирования или иного связывания описанных CD8A-специфичных доменов FN3 с различными молекулами для диагностических целей. Например, Zr-89 или I-124 являются идеальными партнерами по слиянию для создания диагностических агентов, способных обнаруживать присутствие CD8+ Т-лимфоцитов. Таким образом, CD8A-специфичные домены FN3 полезны в диагностике рака с использованием CD8A в качестве биомаркера.

Другой вариант осуществления изобретения представляет собой способ обнаружения CD8A-экспрессирующих клеток в биологическом образце, включающий в себя обработку биологического образца диагностическим агентом, содержащим описанные CD8A-специфичные домены FN3. Эти способы представлены в ПРИМЕРАХ.

В объем изобретения входят наборы, содержащие раскрытые CD8A-специфичные домены FN3. Наборы могут применяться для осуществления способов использования CD8A-специфичных доменов FN3, предложенных в данном документе, или других способов, известных специалистам в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления, описанные наборы могут содержать домены FN3, описанные в данном документе, и реагенты для использования в обнаружении присутствия человеческого CD8A в биологическом образце. Описанные наборы могут содержать один или большее количество доменов FN3, описанных в данном документе, и емкость для хранения доменов FN3, когда они не используются, инструкции по использованию доменов FN3, прикрепленные к твердой подложке, и/или меченные для обнаружения формы доменов FN3, как описано в данном документе.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1A-1D. Конъюгат CD8S365-DFO не активирует Т-лимфоциты de novo и не модулирует антиген-зависимую активацию Т-лимфоцитов в 24 часовом анализе ИНФ^γ EliSpot. ЦМВ-реактивные Т-лимфоциты обрабатывали 365-DFO в отсутствие (А) или в присутствии (В) пептидов ЦМВ. Второй реактивный донор M1 также тестировали в отсутствие (C) или в присутствии (D) пептидов M1.

Фиг. 2A и 2B. Конъюгат CD8S365-DFO не активирует Т-лимфоциты de novo и не модулирует антиген-зависимую активацию Т-лимфоцитов в 6 дневном анализе ИНФ^γ MSD. ЦМВ-реактивные Т-лимфоциты обрабатывали 365-DFO в отсутствие (А) или в присутствии (В) пептидов ЦМВ.

Фиг. 3. Сырьевая подготовительная ВЭЖХ малых количеств [¹²⁴I]-IPEM. Подготовительную ВЭЖХ проводили с использованием бинарного ВЭЖХ-насоса Waters 1525, двухволнового детектора Waters 2489 УФ/видимого света (λ=214 и 254 нм), радиодетектора Bioscan Flow Count (B-FC-2000) и Atlantis T3, 100 , 5 мкм, колонки 150 × 4,6 мм ВЭЖХ. Используемый профиль элюирования был следующим: растворитель A=H₂O (0,1% AcOH (об./об.)), растворитель B=MeCN (0,1% AcOH (об./об.)), скорость потока=1,5 мл/мин; начальное=80% A, 20 мин=0% A (линейный градиент). Поглощение множества малых молекул на записях УФ-видимого излучения при 254 нм (верхний график) и 214 нм (средний график) указывает на присутствие примесей и побочных продуктов в неочищенной реакционной смеси. Радиодетектирование (нижний график) также показывает ожидаемые пики исходного уровня из-за радиоактивно меченных примесей.

Фиг. 4. Аналитическая ВЭЖХ малых количеств [¹²⁴I]-IPEM. Аналитическую ВЭЖХ проводили с использованием бинарного ВЭЖХ-насоса Waters 1525, автосамплера Waters 2707, двухволнового детектора Waters 2489 УФ/видимого света (λ=214 и 280 нм), радиодетектора Bioscan Flow Count (B-FC-2000) и колонки ВЭЖХ Phenomenex Kinetex 5 мкм XB-C18 100 , 150 × 4,6 мм. Используемый профиль элюирования был следующим: растворитель A=H₂O (0,1% TFA (об./об.)), растворитель B=MeCN (0,1% TFA (об./об.)), скорость потока=1 мл/мин; начальное=90% A, 15 мин=0% A (линейный градиент). Аналитически чистый [I-124] IPEM демонстрирует один радиоактивный пик (нижний график) с плавным исходным уровнем, подтверждающим успешную очистку. Обратите внимание, что [I-124] IPEM - это органическая малая молекула; следовательно, отсутствует поглощения при 280 нм (верхний график) и 214 нм (средний график).

Фиг. 5. Радиохроматография тонкого слоя (РХТС) [¹²⁴I]-IPEM CD8S365. Плашку iTLC-SG (Agilent, кат. № SGI0001) считывали на сканере визуализации РХТС Bioscan AR-2000. В плашку для РХТС (Фиг. 3) совместно наносили 1 мкл NaI (0,1 М) и проявляли, используя в качестве элюента лимонную кислоту (0,5 мМ, рН=5). Начало=20 мм, а фронт растворителя=100 мм. Элюент РХТС готовили путем растворения 96 мг лимонной кислоты (кат. № CI131 Spectrum) в 25 мл H₂O Trace Select и затем добавляли Na₂CO₃ (245 мкл, 2 М); рН проверяли лакмусовой полоской (рН=5).

Фиг. 6. Аналитическая ВЭЖХ малых количеств очищенного [¹²⁴I]-IPEM CD8S 365. Аналитическую ВЭЖХ проводили с использованием бинарного ВЭЖХ-насоса Waters 1525, автосамплера Waters 2707, двухволнового детектора Waters 2489 УФ/видимого света (λ=214 и 280 нм), радиодетектора Bioscan Flow Count (B-FC-2000) и колонки ВЭЖХ Phenomenex Kinetex 5 мкм XB-C18 100 , 150 × 4,6 мм. Используемый профиль элюирования был следующим: растворитель A=H₂O (0,1% TFA (об./об.)), растворитель B=MeCN (0,1% TFA (об./об.)), скорость потока=1 мл/мин; начальное=90% A, 15 мин=0% A (линейный градиент). Показатель поглощения биомолекул (CD8S) при 280 нм (верхний график) и показатель поглощения малых молекул (I124-IPEM) при 214 нм (средний график) подтверждает успешную реакцию конъюгации. УФ и малые количества радиоактивной метки (нижний график) указывают на аналитически чистый образец.

Фиг. 7. МАЛДИ-МС IPEM CD8S365 (теоретическая ММ=10786,12). Анализ МАЛДИ-МС был выполнен в Институте биоинтерфейсов с использованием Bruker UltrafleXtreme МАЛДИ ВП/ВП в режиме положительных ионов (линейный детектор). Насыщенный раствор синапиновой кислоты готовили в растворителе TA30 (30:70 (об./об.) MeCN:0,1% TFA в воде). Образец (с=0,397 мг/мл) смешивали в соотношении 1:1 с раствором матрицы и в плашку вносили 1 мкл. Раствор белка использовали в качестве внешнего стандарта.

Фиг. 8. Ко-инъекция [¹²⁴I]-IPEM CD8S365 с холодным стандартом. Аналитическую ВЭЖХ проводили с использованием бинарного ВЭЖХ-насоса Waters 1525, автосамплера Waters 2707, двухволнового детектора Waters 2489 УФ/видимого света (λ=214 и 280 нм), радиодетектора Bioscan Flow Count (B-FC-2000) и колонки ВЭЖХ Phenomenex Kinetex 5 мкм XB-C18 100 , 150 × 4,6 мм. Используемый профиль элюирования был следующим: растворитель A=H₂O (0,1% TFA (об./об.)), растворитель B=MeCN (0,1% TFA (об./об.)), скорость потока=1 мл/мин; начальное=90% A, 15 мин=0% A (линейный градиент). Ко-инъекция с холодным образцом приводит к полному совпадению пиков УФ (верхний и средний графики), подтверждая молекулярную идентичность продукта (т. е. холодные и радиоактивно меченые конъюгаты идентичны, за исключением замены иода на иод-124).

Фиг. 9. Репрезентативное ПЭТ-изображение, показывающее CD8S365-IPEM5, меченный радиоактивным изотопом I-124, полученное через 2 ч после инъекции. Изображение представляет собой проекцию максимальной интенсивности (передне-заднее), с селезенкой, центрированной на визире. Органы под селезенкой - это почки, а изображение ориентировано так, чтобы показать голову сверху. Поглощение в щитовидной железе является свидетельством некоторого де-иодирования белка.

Фиг. 10. Кривые зависимости активности от времени для радиоактивности в крови, у отличных от человека приматов, каждого анти-CD8A домена FN3, меченного либо Zr-89, либо I-124.

Фиг. 11A и 11B. Кривые зависимости активности от времени для радиоактивности в органах, у ОЧП, каждого центирина, меченного либо Zr-89, либо I-124. Фиг. 11A включает в себя почки, печень и селезенку, тогда как Фиг. 11B сфокусирована на селезенке. Момент времени - 24-й час для [¹²⁴I]-IPEM CD8S365 отсутствует из-за технической проблемы. Высокое поглощение Zr-89 в почках из-за остаточного присутствия изотопа в значительной степени отсутствует исходя из данных I-124.

Фиг. 12А-12С. Подтверждение деплетирования CD8 Т-лимфоцитов к 3-му дню в крови, взятой у отличного от человека примата (12А). Также показаны изменения по CD4 (12B) и CD3 T-лимфоцитов (12C).

Фиг. 13. Репрезентативное изображение ПЭТ, показывающее 365 анти-CD8A домен FN3, меченный радиоактивным изотопом I-124, полученное через 2 ч после инъекции у CD8-деплетированного животного. Изображение представляет собой проекцию максимальной интенсивности (передне-заднее). Его следует сравнить с недеплетированным животным на Фиг. 9, где селезенка хорошо видна над почкой.

Фиг. 14. Кривые зависимости активность от времени для радиоактивности в крови у яванских макак, как для деплетированных, так и недеплетированных животных, после введения [¹²⁴I]-IPEM CD8S365.

Фиг. 15A и 15B. Кривые зависимости активность от времени для радиоактивности в органах у яванских макак, как для деплетированных, так и недеплетированных животных. 15А включает в себя почки, печень и селезенку, в то время как 15В сфокусирована на селезенке.

Фиг. 16. Репрезентативное ПЭТ-изображение двух идентично обработанных мышей, показывающее CD8S365-IPEM, меченный радиоактивным изотопом I-124, полученное через 3 ч после инъекции. Изображение представляет собой трехмерную проекцию максимальной интенсивности, наложенную на скан из компьютерной томографии. Опухоль (образованная из HEK-293-luc, трансфицированных для сверхэкспресии huCD8+) и другие органы указаны стрелками. Поглощение в щитовидной железе является свидетельством некоторого де-иодирования белка.

Фиг. 17. Кривая зависимости активность от времени для радиоактивности в крови у мышей, имеющих опухоли из исходных либо CD8+ HEK-293-luc, либо HEK-293.

Фиг. 18. Кривая зависимости активность от времени для радиоактивности в опухоли у мышей, имеющих опухоли из исходных либо CD8+ HEK-293-luc, либо HEK-293.

Фиг. 19. Поглощение I-124 меченого CD8S365 в сверхэкспрессирующих клетках CD8 HEK293 как функция количества имплантированных клеток.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Определения

В описании и формуле изобретения используются различные термины, относящиеся к аспектам раскрытия изобретения. Такие термины должны иметь свое обычное значение в данной области техники, если не указано иное. Другие специально определенные термины должны толковаться таким образом, чтобы соответствовать определениям, приведенным в данном документе.

Как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, единственное число существительного включает в себя его множественное число до тех пор, пока содержание явно не указывает на иное. Таким образом, например, отсылка к «клетке» включает в себя комбинацию двух или большего количества клеток и тому подобное.

Термин «около», как применяется в данном документе, когда он относится к измеримому значению, такому как величина, промежуток времени и тому подобное, предназначен для охвата вариаций вплоть до ± 10% от указанного значения, поскольку такие вариации являются подходящими для осуществления раскрытых способов. Если не указано иное, все числа, выражающие количества ингредиентов, свойства, такие как молекулярная масса, условия реакции и т.д., используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать, как модифицированные во всех случаях термином «около». Соответственно, если не указано иное, числовые параметры, изложенные в нижеследующем описании и прилагаемой формуле изобретения, являются примерными значениями, которые могут варьироваться в зависимости от желаемых свойств, которые должны быть получены с помощью данного изобретения. По меньшей мере, и не как попытка ограничить применение теории эквивалентов к объему формулы изобретения, каждый числовой параметр должен, по меньшей мере, истолковываться с учетом числа сообщаемых значащих цифр и путем применения обычных методов округления.

Несмотря на то, что числовые диапазоны и параметры, определяющие широкий объем изобретения, являются примерными, числовые значения, приведенные в конкретных примерах, сообщаются настолько точно, насколько это возможно. Однако любое числовое значение по своей природе содержит определенные ошибки, неизбежно возникающие в результате стандартного отклонения, обнаруженного в их соответствующих тестовых измерениях.

«Выделенный» означает, что биологический компонент (такой как нуклеиновая кислота, пептид или белок) в значительной степени отделен, произведен отдельно или очищен от других биологических компонентов организма, в котором данный компонент встречается в природе, то есть других хромосомных и внехромосомных ДНК и РНК, и белков. Таким образом, нуклеиновые кислоты, пептиды и белки, которые были «выделены», включают в себя нуклеиновые кислоты и белки, очищенные стандартными способами очистки. «Выделенные» нуклеиновые кислоты, пептиды и белки могут быть частью композиции и все же быть выделенными, если такая композиция не является частью естественной среды нуклеиновой кислоты, пептида или белка. Термин также охватывает нуклеиновые кислоты, пептиды и белки, полученные путем рекомбинантной экспрессии в клетке-хозяине, а также химически синтезированные нуклеиновые кислоты. «Выделенный» домен FN3, как применяется в данном документе, предназначен для обозначения домена FN3, который по существу не содержит других доменов FN3, имеющих различные антигенные специфичности (например, выделенный домен FN3, который специфически связывается с сывороточным альбумином человека, по существу не содержит домены FN3, которые специфически связывают антигены, отличные от сывороточного альбумина человека). Однако выделенный домен FN3, который специфически связывается с эпитопом, изоформой или вариантом сывороточного альбумина человека, может иметь перекрестную реактивность с другими родственными антигенами, например, из других видов (такими как гомологи видов сывороточного альбумина).

Как применяется в данном документе термин «домен типа III (FN3) фибронектина» (домен FN3) относится к домену, часто встречающемуся в белках, включающих в себя фибронектины, тенасцин, внутриклеточные цитоскелетные белки, рецепторы цитокинов и прокариотические ферменты (Bork and Doolittle, Proc Nat Acad Sci USA 89:8990-8994, 1992; Meinke et al., J Bacteriol 175:1910-1918, 1993; Watanabe et al., J Biol Chem 265:15659-15665, 1990). Иллюстративные домены FN3 представляют собой 15 различных доменов FN3, присутствующих в человеческом тенасцине C, 15 различных доменов FN3, присутствующих в человеческом фибронектине (FN), и неприродные синтетические домены FN3, как описано, например, в патенте США № 8278419. Отдельные домены FN3 обозначаются с помощью номера домена и названия белка, например, 3-й домен FN3 тенасцина (TN3) или 10-й домен FN3 фибронектина (FN10).

Как применяется в данном документе, термин «центирин» (centyrin) относится к домену FN3, который основан на консенсусной последовательности 15 различных доменов FN3, присутствующих в тенасцине С человека.

Термин «захватывающий агент» относится к веществам, которые связываются с определенным типом клеток и позволяют отделить такую клетку от других клеток. Примеры захватывающих агентов включают в себя, но не ограничиваются лишь этими: магнитные граннулы, феррожидкости, инкапсулирующие реагенты и тому подобное.

Термин «биологический образец» относится к крови, ткани, костному мозгу, мокроте и тому подобному.

Термин «диагностический реагент» относится к любому веществу, которое может использоваться для анализа биологического образца, независимо от того, поставляется ли такое вещество в виде отдельного вещества или в комбинации с другими веществами в диагностическом наборе.

Как применяется в данном документе, термин «замещающий» или «замещенный», или «мутирующий» или «мутированный» относится к изменению, удалению или вставке одной или большего количества аминокислот или нуклеотидов в полипептидной или полинуклеотидной последовательности для создания варианта данной последовательности.

Термин «рандомизирование» или «рандомизированный» или «диверсифицированный» или «диверсифицификация», как применяется в данном документе, относится к выполнению по меньшей мере одной замены, вставки или делеции в полинуклеотидной или полипептидной последовательности.

«Вариант» в данном документе относится к полипептиду или полинуклеотиду, который отличается от исходного полипептида или исходного полинуклеотида одной или большим количеством модификаций, например заменами, вставками или делециями.

Термин «специфически связывается с» или «специфическое связывание» в данном документе относится к способности домена FN3 согласно данному изобретению связываться с заранее определенным антигеном с константой диссоциации (K_Д) около 1×10^-6 М или меньше, например, около 1×10^-7 М или меньше, около 1×10^-8 М или меньше, около 1×10^-9 М или меньше, около 1×10^-10 М или меньше, около 1×10^-11 M или меньше, около 1×10^-12 М или меньше, или около 1×10^-13 М или меньше. Обычно домен FN3 согласно данному изобретению связывается с заранее определенным антигеном (то есть CD8A человека) с K_Д, которая по меньшей мере в десять раз меньше, чем его K_Д для неспецифического антигена (например, BSA или казеина), как измерено поверхностным плазмонным резонансом, например, с использованием Proteon Instrument (BioRad). Однако выделенный домен FN3 согласно данному изобретению, который специфически связывается с CD8A человека, может иметь перекрестную реактивность с другими родственными антигенами, например, с тем же самым заранее определенным антигеном из других видов (ортологами), таких как Macaca Fascicularis (яванский макак) или Pan troglodytes (шимпанзе).

Термин «библиотека» относится к коллекции вариантов. Библиотека может состоять из полипептидных или полинуклеотидных вариантов.

Как применяется в данном документе, термины «CD8A» или «CD8», в частности, включают в себя белок CD8-альфа человека, например, как описано в аннотированной последовательности NCBI: NP_001139345.1, NP_0011759.3 и NP_741969.1. CD8A также известен в научной литературе как молекула CD8a, MAL, p32, Leu2, гликопротеин поверхности T-лимфоцитов, альфа-цепь CD8, антиген CD8, альфа-полипептид (p32), антиген Leu2 T-лимфоцитов, антиген OKT8 Т-лимфоцитов, T-лимфоцитарный антиген Leu2, антиген T8/Leu-2 дифференцировки Т-лимфоцитов и антиген Т8 Т-лимфоцитов.

Термин «Tencon», как применяется в данном документе, относится к синтетическому домену типа III (FN3) фибронектина, имеющему последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1 и описанную в публикации патента США № US2010/0216708.

Термин «вектор» обозначает полинуклеотид, способный копироваться в биологической системе или который может перемещаться между такими системами. Векторные полинуклеотиды, как правило, содержат элементы, такие как точка начала репликации, сигнал полиаденилирования или маркеры отбора, которые функционируют для облегчения копирования или поддержания таких полинуклеотидов в биологической системе. Примеры таких биологических систем могут включать в себя клеточные, вирусные, животные, растительные и восстановленные биологические системы, использующие биологические компоненты, способные копировать вектор. Полинуклеотид, содержащий вектор, может представлять собой молекулу ДНК или РНК, или их гибрид.

Термин «вектор экспрессии» обозначает вектор, который может быть использован в биологической системе или в восстановленной биологической системе для управления трансляцией полипептида, кодируемого полинуклеотидной последовательностью, присутствующей в векторе экспрессии.

Термин «полинуклеотид» обозначает молекулу, содержащую цепь нуклеотидов, ковалентно соединенных с помощью сахарофосфатного остова или другой эквивалентной ковалентной химической структуры. Двух- и одноцепочечные ДНК и РНК являются типичными примерами полинуклеотидов.

Термин «полипептид» или «белок» обозначает молекулу, которая содержит, по меньшей мере, два аминокислотных остатка, соединенных пептидной связью с образованием полипептида. Небольшие полипептиды, содержащие меньше чем 50 аминокислот, могут называться «пептидами».

Как применяется в данном документе, термин «в комбинации с» означает, что два или большее количество терапевтических агентов могут быть введены субъекту вместе в смеси, одновременно в виде отдельных агентов или последовательно в виде отдельных агентов в любом порядке.

Композиция

Согласно данному изобретению предложены домены FN3, связывающиеся с CD8A человека, и домены FN3, связывающиеся с CD8A, конъюгированные с детектируемыми метками. Согласно данному изобретению предложены полинуклеотиды, кодирующие домены FN3 согласно данному изобретению или их комплементарные нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяева и способы их получения и применения.

CD8A-связывающие молекулы

Согласно данному изобретению предложены домены типа III (FN3) фибронектина, которые специфически связываются с CD8A, необязательно конъюгированные с детектируемой меткой. Данные молекулы могут широко использоваться в доклинических применениях и в диагностике рака с использованием CD8A в качестве биомаркера. Согласно данному изобретению предложены полинуклеотиды, кодирующие домены FN3 согласно данному изобретению или их комплементарные нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяева и способы их получения и применения.

Домены FN3 согласно данному изобретению связываются с CD8A с высокой аффинностью и могут локализовать клетки, экспрессирующие CD8, обеспечивая тем самым эффективный способ доставки диагностических реагентов в микроокружение опухоли.

В одном варианте осуществления изобретения, выделен домен FN3, который специфически связывается с CD8A человека, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных в данном документе, домен FN3 согласно данному изобретению перекрестно реагирует с CD8A яванского макака, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 271.

Домен FN3 согласно данному изобретению может связываться с CD8A человека, Macaca Fascicularis и/или Pan troglodytes с константой диссоциации (K_Д) меньшей чем около 1×10^-7 M, например, меньшей чем около 1×10^-8 M, меньшей чем около 1×10^-9 M, меньшей чем около 1×10^-10 M, меньшей чем около 1×10^-11 M, меньшей чем около 1×10^-12 M, или меньшей чем около 1×10^-13 M, как определено поверхностным плазмонным резонансом, как это практикуется специалистами в данной области техники. Измеренная аффинность взаимодействия конкретного домена FN3 с антигеном может варьировать, при измерениях в различных условиях (например, осмолярности, pH). Таким образом, измерения аффинности и других антиген-связывающих параметров (например, K_Д, K_с, K_от) проводят с использованием стандартизованных растворов белкового каркаса и антигена, и стандартизированного буфера, такого как буфер, описанный в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления, CD8A-связывающие домены FN3 содержат инициирующий метионин (Met), соединенный с N-концом молекулы.

В некоторых вариантах осуществления, CD8A-связывающие домены FN3 содержат цистеин (Cys), соединенный с доменом FN3.

Добавление N-концевого Met и/или Cys может облегчать экспрессию и/или конъюгацию других молекул.

Другим вариантом осуществления изобретения является выделенный домен FN3, который специфически связывается с CD8A человека и при этом CD8A-специфичный домен FN3 не активирует CD8+ T-лимфоциты in vitro. Активация CD8+ Т-лимфоцитов может быть измерена с использованием стандартных способов. Например, может быть использован метод иммуноферментных пятен (ELISPOT). В анализе ELISPOT используется метод сэндвич иммуноферментного анализа (ИФА). Антитело к гамма-интерферону предварительно наносят на микроплашку с PVDF (поливинилидендифторидом). Клетки, стимулированные соответствующим образом (клетки+пептиды, домены FN3 и т. д.), пипетируют в лунки и микроплашку помещают в увлажненный инкубатор с CO₂ при 37°C на определенный период времени. В течение данного инкубационного периода иммобилизованное антитело к гамма-интерферону в непосредственной близости от секретирующих клеток связывается с секретируемым интерфероном гамма. После вымывания любых клеток и несвязанных веществ в лунки добавляют второе биотинилированное антитело к гамма-интерферону. После промывки для удаления любого несвязанного биотинилированного антитела добавляют щелочную фосфатазу, конъюгированную с стрептавидином. Несвязанный фермент затем удаляют промывкой и добавляют раствор субстрата (BCIP/NBT). Образуется сине-черный осадок, который проявляется в виде пятен на участках интерферон-гамма-локализации, причем каждое отдельное пятно представляет отдельную секретирующую гамма-интерферон клетку. Пятна могут быть подсчитаны с помощью автоматической системы считывания ELISpot или вручную, используя стереомикроскоп. Выделенные CD8A-связывающие домены FN3 согласно данному изобретению не активируют CD8+ T-лимфоциты in vitro при тестировании в концентрациях 1 мкМ, как описано в Примерах.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных в данном документе, выделенный домен FN3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40-269.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных в данном документе, CD8A-специфичный домен FN3 имеет замену на цистеин в позиции остатка 54 SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68.

Замены, приводящие к введению цистеина в последовательность белка, могут быть использованы для химического конъюгирования малых молекул, таких как цитотоксические агенты, детектируемые метки, молекулы продления периода полужизни, хелаторы, полиэтиленгликоль и/или нуклеиновые кислоты, с доменом FN3 с использованием обычной химии.

В некоторых вариантах осуществления, домен FN3, специфически связывающийся с CD8A человека, конкурирует за связывание с CD8A человека с доменом FN3 SEQ ID NO: 229-234. Домены FN3 могут быть оценены на предмет конкуренции с референтной молекулой за связывания с CD8A человека с использованием хорошо известных способов in vitro. В одном иллюстративном способе, клетки HEK, рекомбинантно экспрессирующие CD8A человека, можно инкубировать с немеченой референтной молекулой в течение 15 минут при 4°C с последующей инкубацией с избытком флуоресцентно меченного тестового домена FN3 в течение 45 минут при 4°C. После промывки в ФСБ/БСА флуоресценция может быть измерена с помощью проточной цитометрии с использованием стандартных способов. В другом иллюстративном способе, внеклеточная часть CD8A человека может быть нанесена на поверхность плашки для ИФА. Избыток немеченой референтной молекулы может быть добавлен в течение примерно 15 минут, и затем могут быть добавлены биотинилированные тестируемые домены FN3. После промывок в ФСБ/Tween связывание тестируемого биотинилированного домена FN3 может быть обнаружено с использованием стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP), а сигнал обнаружен с использованием стандартных способов. Очевидно, что в конкурентных анализах референтная молекула может быть мечена, а тестируемый домен FN3 не мечен. Тестируемый домен FN3 может конкурировать с референтной молекулой, когда референтная молекула ингибирует связывание тестируемого домена FN3, или тестируемый домен FN3 ингибирует связывание референтной молекулы на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

В некоторых вариантах осуществления, выделенный домен FN3, который специфически связывается с CD8A человека согласно данному изобретению, конъюгирован с хелатором, который может связываться с радиоактивным металлом, и может использоваться в качестве визуализирующего агента для оценки распространения опухоли, диагностики наличия CD8-T-лимфоцитов внутри опухолей и/или эффективности лечения рака.

В некоторых вариантах осуществления, CD8A-специфичные домены FN3 удаляются из крови почечным и/или печеночным клиренсом.

Выделение CD8A-связывающих доменов FN3 из библиотеки на основе последовательности Tencon

Tencon (SEQ ID NO: 1) представляет собой не встречающийся в природе домен типа III (FN3) фибронектина, сконструированный из консенсусной последовательности пятнадцати доменов FN3 из человеческого тенасцина-C (Jacobs et al., Protein Engineering, Design and Selection, 25:107-117, 2012; публикация патента США № 2010/0216708). Кристаллическая структура Tencon демонстрирует шесть экспонированных на поверхности петель, которые соединяют семь бета-листов, что характерно для доменов FN3, бета-листы обозначаются как A, B, C, D, E, F и G, и петли обозначаются как AB, BC, CD, DE, EF и FG (Bork and Doolittle, Proc Natl Acad Sci USA 89:8990-8992, 1992; патент США № 6673901). Данные петли или выбранные остатки в каждой петле могут быть рандомизированы для конструирования библиотек доменов типа III (FN3) фибронектина, которые могут быть использованы для отбора новых молекул, которые связываются с CD8A. В Таблице 1 показаны позиции и последовательности каждой петли и бета-листа в Tencon (SEQ ID NO: 1).

Библиотека, спроектированная на основе последовательности Tencon, может, таким образом, иметь рандомизированную петлю FG или рандомизированные петли BC и FG, например, как библиотеки TCL1 или TCL2, как описано ниже. Петля Tencon BC имеет длину 7 аминокислот, таким образом, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 аминокислот могут быть рандомизированы в библиотеке, модифицированной по петле BC и спроектированной на основе последовательности Tencon. Петля Tencon FG имеет длину 7 аминокислот, таким образом, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 аминокислот могут быть рандомизированы в библиотеке, модифицированной по петле FG и спроектированной на основе последовательности Tencon. Дополнительное разнообразие в петлях в библиотеках Tencon может быть достигнуто путем вставки и/или делеции остатков в петлях. Например, петли FG и/или BC могут быть удлинены на 1-22 аминокислоты или укорочены на 1-3 аминокислоты. Петля FG в Tencon имеет длину 7 аминокислот, тогда как соответствующая петля в тяжелых цепях антител варьирует от 4-28 остатков. Чтобы обеспечить максимальное разнообразие, петля FG может быть модифицирована по последовательности, а также по длине, чтобы соответствовать диапазону длин CDR3 антитела, который составляет 4-28 остатков. Например, петля FG может быть дополнительно модифицирована по длине путем удлинения петли на дополнительные 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот.

Библиотека, спроектировання на основе последовательности Tencon, также может иметь рандомизированные альтернативные поверхности, которые образуются на боковой поверхности домена FN3 и содержат два или больше количество бета-листов и, по меньшей мере, одну петлю. Одна такая альтернативная поверхность сформирована аминокислотами в бета-листах C и F, и в петлях CD и FG (поверхность C-CD-F-FG). Дизайн библиотеки на основе альтернативной поверхности C-CD-F-FG Tencon описан в публикации патента США № US2013/0226834. Библиотека, спроектированная на основе последовательности Tencon, также включает в себя библиотеки, спроектированные на основе вариантов Tencon, таких как варианты Tencon, имеющие замены в аминокислотных позициях 11, 14, 17, 37, 46, 73 или 86 (нумерация остатков, соответствующая SEQ ID NO: 1), и варианты которых показывают улучшение термостабильности. Иллюстративные варианты Tencon описаны в публикации патента США № 2011/0274623 и включают в себя Tencon27 (SEQ ID NO: 4), имеющий замены E11R, L17A, N46V и E86I по сравнению с Tencon SEQ ID NO: 1.

Таблица 1. Топология Tencon

Домен FN3 Tencon (SEQ ID NO: 1) Цепь A 1-12 Петля AB 13-16 Цепь B 17-21 Петля BC 22-28 Цепь C 29-37 Петля CD 38-43 Цепь D 44-50 Петля DE 51-54 Цепь E 55-59 Петля EF 60-64 Цепь F 65-74 Петля FG 75-81 Цепь G 82-89

Tencon и другие библиотеки на основе последовательности FN3 могут быть рандомизированы по выбранных аминокислотных позициях с использованием случайного или определенного набора аминокислот. Например, варианты в библиотеке, имеющие случайные замены, могут быть созданы с использованием кодонов NNK, которые кодируют все 20 встречающихся в природе аминокислот. В других схемах увеличения разнообразия, могут использоваться кодоны DVK для кодирования аминокислот Ala, Trp, Tyr, Lys, Thr, Asn, Lys, Ser, Arg, Asp, Glu, Gly и Cys. В альтернативном варианте, могут быть использованы кодоны NNS для получения всех 20 аминокислотных остатков и одновременного снижения частоты стоп-кодонов. Библиотеки доменов FN3 с смещенным распределением аминокислот в позициях, подлежащих увеличению разнообразия, могут быть синтезированы, например, с использованием технологии Slonomics® (http:_//www_sloning_com). Данная технология использует библиотеку предварительно подготовленных двухцепочечных триплетов, которые действуют как универсальные строительные блоки в достаточном количестве для тысяч процессов синтеза генов. Библиотека триплетов представляет все возможные комбинации последовательностей, необходимые для построения любой желаемой молекулы ДНК. Обозначения кодонов соответствуют хорошо известному коду IUB.

Домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, могут быть выделены путем создания библиотеки FN3, такой как библиотека Tencon, с использованием cis-дисплея для лигирования фрагментов ДНК, кодирующих каркасные белки, с фрагментом ДНК, кодирующим RepA, для создания пула комплексов белок-ДНК, сформированных после трансляции in vitro, причем каждый белок стабильно связан с ДНК, кодирующей его (патент США № 7842476; Odegrip et al., Proc Natl Acad Sci U S A 101, 2806-2810, 2004), и анализируя библиотеку на специфическое связывание с CD8A любым способом, известным в данной области техники и описанным в Примере. Примерами хорошо известных способов, которые могут быть использованы, являются ИФА, сэндвич-иммуноанализ, и конкурентные и неконкурентные анализы (смотрите, например, Ausubel et al., eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York). Идентифицированные домены FN3, специфически связывающие CD8A, дополнительно характеризуются их ингибированием активности CD8A, интернализацией, стабильностью и другими желаемыми характеристиками.

Домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, могут быть получены с использованием любого домена FN3 в качестве матрицы для создания библиотеки и скрининга библиотеки на предмет молекул, специфически связывающих CD8A человека, с использованием способов, предусмотренных в нем. Примерами доменов FN3, которые могут быть использованы, являются 3-й домен FN3 тенасцина C (TN3) (SEQ ID NO: 145), Фибкон (SEQ ID NO: 146) и 10-й домен FN3 фибронектина (FN10) (SEQ ID NO: 147). Применяют стандартные методы клонирования и экспрессии для клонирования библиотек в вектор или для синтеза двухцепочечных кассет кДНК библиотеки, для экспрессии или трансляции библиотек in vitro. Например, может быть использован рибосомный дисплей (Hanes and Pluckthun, Proc Natl Acad Sci USA, 94, 4937-4942, 1997), мРНК дисплей (Roberts and Szostak, Proc Natl Acad Sci USA, 94, 12297-12302, 1997), или другие бесклеточные системы (патент США № 5643768). Библиотеки вариантов домена FN3 могут быть экспрессированны в виде гибридных белков, экспонируемых на поверхности, например, любого подходящего бактериофага. Способы экспонирования гибридных полипептидов на поверхности бактериофага хорошо известны (публикация патента США № 2011/0118144; публикация международного патента № WO2009/085462; патент США № 6969108; патент США № 6172197; патент США № 5223409; патент США № 6582915; патент США № 6472147).

В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных в данном документе, домен FN3, специфически связывающий CD8A человека, основан на последовательности Tencon SEQ ID NO: 1 или последовательности Tencon27 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 4, необязательно имеющий «замены» в аминокислотных позициях 11, 14, 17, 37, 46, 73 и/или 86.

Домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, могут быть модифицированы для улучшения их свойств, таких как улучшение термостабильности и обратимости термического свертывания и развертывания. Были применены несколько способов для увеличения наблюдаемой термостабильности белков и ферментов, включающие в себя: рациональный дизайн, основанный на сравнении с очень похожими термостабильными последовательностями, конструирование стабилизирующих дисульфидных мостиков, мутации для увеличения склонности к формированию альфа-спирали, конструирование солевых мостиков, изменение поверхностного заряда белка, направленную эволюцию, и компоновку консенсусных последовательностей (Lehmann and Wyss, Curr Opin Biotechnol, 12, 371-375, 2001). Высокая термостабильность может увеличивать выход экспрессированного белка, улучшать растворимость или активность, снижать иммуногенность и минимизировать потребность в холодильной цепи в производстве. Остатки, которые могут быть замещены для улучшения термической стабильности Tencon (SEQ ID NO: 1), представляют собой остатки в позициях 11, 14, 17, 37, 46, 73 или 86, и описаны в публикации патента США № 2011/0274623. Замены, соответствующие таким остаткам, могут быть включены в домен FN3, содержащий молекулы согласно данному изобретению.

Измерение стабильности белка и лабильности белка можно рассматривать как одинаковые или разные аспекты целостности белка. Белки чувствительны или «лабильны» к денатурации, вызванной теплом, ультрафиолетовым или ионизирующим излучением, изменениями осмолярности окружающей среды и pH в жидком растворе, силой механического сдвига, создаваемой фильтрацией через поры небольших размеров, ультрафиолетовым излучением, ионизирующим излучением, таким как гамма-излучением, химическим или тепловым обезвоживанием, или любым другим действием или силой, которые могут вызвать нарушение структуры белка. Стабильность молекулы можно определить с помощью стандартных способов. Например, стабильность молекулы может быть определена путем измерения температуры термического плавления («T_m»), температуры в ° Цельсия (°C), при которой половина молекул разворачивается, с использованием стандартных способов. Как правило, чем выше T_m, тем стабильнее молекула. Помимо тепла, химическая среда также изменяет способность белка поддерживать определенную трехмерную структуру.

В одном варианте осуществления, домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, могут проявлять увеличенную стабильность по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% или больше по сравнению с тем же доменом до конструирования, как измерено по увеличению T_m.

Химическая денатурация также может быть измерена различными способами. Химические денатурирующие вещества включают в себя: гуанидина гидрохлорид, гуадинина тиоцианат, мочевину, ацетон, органические растворители (ДМФ, бензол, ацетонитрил), соли (сульфат аммония, бромид лития, хлорид лития, бромид натрия, хлорид кальция, хлорид натрия); восстановители (например, дитиотрейтол, бета-меркаптоэтанол, динитротиобензол и гидриды, такие как борогидрид натрия), неионные и ионные детергенты, кислоты (например, соляную кислоту (HCl), уксусную кислоту (CH3COOH), галогенированные уксусные кислоты), гидрофобные молекулы (например, фософолипиды) и целевые денатураторы. Количественная оценка степени денатурации может основываться на потере функциональных свойств, таких как способность связывать молекулу-мишень, или на физико-химических свойствах, таких как склонность к агрегации, экспонирование ранее недоступных для растворителя остатков, или разрушение или образование дисульфидных связей.

Домены FN3 согласно данному изобретению могут получать в виде мономеров, димеров или мультимеров, например, в качестве способа увеличения валентности и, следовательно, авидности связывания молекулы-мишени, или для создания би- или мультиспецифических каркасов, одновременно связывающих две или большее количество различных молекул-мишеней. Димеры и мультимеры могут быть получены путем соединения моноспецифических, би- или мультиспецифических белковых каркасов, например, путем включения аминокислотного линкера, например, линкера, содержащего полиглицин, глицин и серин, или аланин и пролин. Иллюстративный линкер включает в себя (GS)₂, (SEQ ID NO: 148), (GGGS)₂ (SEQ ID NO: 149), (GGGGS)₅ (SEQ ID NO: 150), (AP)₂(SEQ ID NO: 151), (AP)₅(SEQ ID NO: 152), (AP)₁₀(SEQ ID NO: 153), (AP)₂₀(SEQ ID NO: 154) и A(EAAAK)₅AAA (SEQ ID NO: 142). Димеры и мультимеры могут быть соединены друг с другом в направлении от N- до C-конца. Использование природных, а также искусственных пептидных линкеров для соединения полипептидов в нове соединенные гибридные полипептиды хорошо известно в литературе (Hallewell et al., J Biol Chem 264, 5260-5268, 1989; Alfthan et al., Protein Eng. 8, 725-731, 1995; Robinson & Sauer, Biochemistry 35, 109-116, 1996; патент США № 5856456).

Диагностические агенты

Согласно изобретению, CD8A-специфичный домен FN3 согласно данному изобретению может содержать метку пригодную для обнаружения. В одном варианте осуществления, метка пригодная для обнаружения может образовывать комплекс с хелатирующим агентом, который конъюгирован с доменом FN3. В другом варианте осуществления, метка пригодная для обнаружения может образовывать комплекс с хелатирующим агентом, который конъюгирован с линкером, который конъюгирован с доменом FN3. В еще одном варианте осуществления, метка пригодная для обнаружения может быть соединена с линкером, который конъюгирован с доменом FN3. В еще одном варианте осуществления, метка пригодная для обнаружения может быть не прямо присоединена к пептиду согласно данному изобретению из-за способности метки специфически связываться со второй молекулой. Одним из примеров такого типа не прямо прикрепленной метки является биотиновая метка, которая может быть специфически связана с второй молекулой, стрептавидином. Одинарное, двойное или множественное мечение может быть выгодным. Как применяется в данном документе, термин «метка пригодная для обнаружения» представляет собой метку любого типа, которая, будучи присоединенной к домену FN3 согласно данному изобретению, делает пригодным для обнаружения домен FN3. Обнаруживаемая метка также может быть токсичной для клеток или цитотоксичной. В целом, как правило, метки пригодные для обнаружения могут включать в себя люминесцентные молекулы, хемилюминесцентные молекулы, флуорохромы, флуорофоры, гасящие флуоресценцию агенты, цветные молекулы, радиоизотопы, радионуклиды, цинтиллянты, массивные метки, такие как атом металла (для обнаружения через изменения массы), биотин, авидин, стрептавидин, белок A, белок G, антитела или их фрагменты, Grb2, полигистидин, Ni²⁺, тэги Flag, тэги myc, тяжелые металлы, ферменты, щелочную фосфатазу, пероксидазу, люциферазу, доноры/акцепторы электронов, эфиры акридиния и колориметрические субстраты. В конкретном варианте осуществления, метка пригодная для обнаружения представляет собой радионуклид. Специалист в данной области техники легко распознает другие полезные метки, которые не упомянуты выше, которые могут быть использованы в осуществление данного изобретения.

Обнаруживаемая метка испускает сигнал, который может быть обнаружен машиной для преобразования сигнала. В некоторых случаях, метка пригодная для обнаружения может испускать сигнал самопроизвольно, например, когда метка пригодная для обнаружения представляет собой радионуклид. В других случаях, метка пригодная для обнаружения испускает сигнал в результате стимуляции внешним полем, например, когда метка пригодная для обнаружения представляет собой металл, способствующий релаксации. Примеры сигналов включают в себя, без ограничения, гамма-лучи, рентгеновские лучи, видимый свет, инфракрасную энергию и радиоволны. Примеры машин для преобразования сигнала включают в себя, без ограничения, гамма-камеры, включающие в себя устройства ОФЭКТ-КТ, ПЭТ-сканеры, флуориметры и машины для магнитно-резонансной томографии (MRI). По существу, метка пригодная для обнаружения содержит метку, которая может быть обнаружена с использованием магнитно-резонансной томографии, сцинтиграфической визуализации, ультразвука или флуоресценции. Подходящие флуорофоры включают в себя, но не ограничиваются лишь этими: флуоресцеин изотиоцианат (FITC), флуоресцеин тиосемикарбазид, родамин, Texas Red, CyDyes (например, Cy3, Cy5, Cy5.5), Alexa Fluors (например, Alexa488, Alexa555, Alexa594; Alexa647), флуоресцентные красители ближнего инфракрасного (NIR) (700-900 нм), и карбоцианиновый и аминостириловый красители. Домен FN3 согласно данному изобретению может быть помечен для обнаружения флуоресценции, путем мечения агента флуорофором, используя методы, хорошо известные в данной области техники (смотрите, например, Lohse et al., Bioconj Chem 8:503-509 (1997)). Например, многие известные красители способны связываться с NH₂-концевыми аминокислотными остатками. В альтернативном варианте, флуорохром, такой как флуоресцеин, может быть соединен с остатком лизина пептидного линкера.

Радионуклид может представлять собой γ-излучающий радионуклид, Оже-излучающий радионуклид, β-излучающий радионуклид, альфа-излучающий радионуклид или позитрон-излучающий радионуклид. Радионуклид может быть меткой пригодной для обнаружения и/или цитотоксическим агентом. Неограничивающие примеры подходящих радионуклидов могут включать в себя: углерод-11, азот-13, кислород-15, фтор-18, фтордезоксиглюкозу-18, фосфор-32, скандий-47, медь-64, 65 и 67, галлий-67 и 68, бром-75, 77 и 80м, рубидий-82, стронций-89, цирконий-89, иттрий-86 и 90, рутений-95, 97, 103 и 105, рений-99м, 101, 105, 186 и 188, технеций-99м, родий-105, ртуть-107, палладий-109, индий-111, серебро-111, индий-113м, лантанид-114м, олово-117м, теллур-121м, 122м и 125м, иод-122, 123, 124, 125, 126, 131 и 133, празеодим-142, прометий-149, самарий-153, гадолиний-159, тулий-165, 167 и 168, диспрозий-165, гольмий-166, лютеций-177, рений-186 и 188, иридий-192, платина-193 и 195м, золото-199, таллий-201, титан-201, астат-21 1, висмут-212 и 213, свинец-212, радий-223, актиний-225, и нитридные или оксидные формы полученные из них. В конкретном варианте осуществления, радионуклид выбирают из группы, состоящей из меди-64, циркония-89, иттрия-90, индия-111 и лютеция-177. В другом конкретном варианте осуществления, радионуклид выбирают из группы, состоящей из иттрия-90, индия-111 и лютеция-177. В иллюстративном варианте осуществления, радионуклид представляет собой цирконий-89.

В качестве метки пригодной для обнаружения могут быть использованы различные атомы металла. Атом металла в целом, как правило, может быть выбран из группы атомов металла, состоящей из металлов с атомным номером двадцать или больше. Например, атомами металла могут быть атомы кальция, атомы скандия, атомы титана, атомы ванадия, атомы хрома, атомы марганца, атомы железа, атомы кобальта, атомы никеля, атомы меди, атомы цинка, атомы галлия, атомы германия, атомы мышьяка, атомы селена, атомы брома, атомы криптона, атомы рубидия, атомы стронция, атомы иттрия, атомы циркония, атомы ниобия, атомы молибдена, атомы технеция, атомы рутения, атомы родия, атомы палладия, атомы серебра, атомы кадмия, атомы индия, атомы олова, атомы сурьмы, атомы теллура, атомы иода, атомы ксенона, атомы цезия, атомы бария, атомы лантана, атомы гафния, атомы тантала, атомы вольфрама, атомы рения, атомы осмия, атомы иридия, атомы платины, атомы золота, атомы ртути, атомы таллия, атомы свинца, атомы висмута, атомы франция, атомы радия, атомы актиния, атомы церия, атомы празеодима, атомы неодима, атомы прометия, атомы самария, атомы европия, атомы гадолиния, атомы тербия, атомы диспрозия, атомы гольмия, атомы эрбия, атомы тулия, атомы иттербия, атомы лютеция, атомы тория, атомы протактиния, атомы урана, атомы нептуния, атомы плутония, атомы америция, атомы кюрия, атомы берклия, атомы калифорния, атомы эйнштейния, атомы фермия, атомы менделевия, атомы нобелия или атомы лоренция. В некоторых вариантах осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы, включающей в себя щелочные металлы с атомным номером больше чем двадцать. В других вариантах осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы, включающей в себя щелочноземельные металлы с атомным номером больше чем двадцать. В одном варианте осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы металлов, включающей в себя лантаноиды. В другом варианте осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы металлов, включающей в себя актиниды. В еще одном варианте осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы металлов, включающей в себя переходные металлы. В еще одном варианте осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы металлов, включающей в себя легкие металлы. В других вариантах осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы, включающей в себя атомы золота, атомы висмута, атомы тантала и атомы гадолиния. В предпочтительных вариантах осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы, включающей в себя металлы с атомным номером от 53 (то есть, иод) до 83 (то есть, висмут). В альтернативном варианте осуществления, атомы металлов могут быть атомами, подходящими для магнитно-резонансной томографии. В другом альтернативном варианте осуществления, атомы металлов могут быть выбраны из группы, состоящей из металлов, которые имеют K-край в рентгеновской энергетической полосе КТ. Предпочтительные атомы металлов включают в себя, но не ограничиваются лишь этими: марганец, железо, гадолиний, золото и иод.

Атомы металла могут быть ионами металла в форме +1, +2 или +3 степени окисления. Например, неограничивающие примеры включают в себя Ba²⁺, Bi³⁺, Cs⁺, Ca²⁺, Cr²⁺, Cr³⁺, Cr⁶⁺, Co²⁺, Co³⁺, Cu⁺, Cu²⁺, Cu³⁺, Ga³⁺, Gd³⁺, Au⁺, Au³⁺, Fe²⁺, Fe³⁺, F³⁺, Pb²⁺, Mn²⁺, Mn³⁺, Mn⁴⁺, Mn⁷⁺, Hg²⁺, Ni²⁺, Ni³⁺, Ag⁺, Sr²⁺, Sn²⁺, Sn⁴⁺, и Zn²⁺. Атомы металла могут включать в себя оксид металла. Например, неограничивающие примеры оксидов металлов могут включать в себя оксид железа, оксид марганца или оксид гадолиния. Дополнительные примеры могут включать магнетит, маггемит или их комбинацию.

Согласно изобретению домен FN3, содержащий хелатирующий агент, может содержать радионуклид или атом металла. Включение радионуклида или атома металла в комплекс домен FN3-хелатирующий агент может быть достигнуто различными способами, общепринятыми в области координационной химии.

Фрагменты, продлевающие период полужизни.

Домен FN3, специфически связывающий CD8A человека согласно данному изобретению, может соединятся с другими субъединицами, например, посредством ковалентного взаимодействия. В одном аспекте изобретения, домен FN3 согласно данному изобретению дополнительно содержит фрагмент, увеличивающий время полужизни. Иллюстративными фрагментами, увеличивающими время полужизни, являются альбумин, варианты альбумина, альбумин-связывающие белки и/или домены, трансферрин и его фрагменты и их аналоги, а также области Fc.

В домен FN3 согласно данному изобретению могут быть включены дополнительные фрагменты, такие как молекулы полиэтиленгликоля (ПЭГ), такие как ПЭГ 5000 или ПЭГ 20000, жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот с различной длиной цепи, например лаурат, миристат, стеарат, арахидат, бегенат, олеат, арахидонат, октандиоевая кислота, тетрадекандиоевая кислота, октадекандиоевая кислота, докозандиоевая кислота и тому подобное, полилизин, октан, углеводы (декстран, целлюлоза, олиго- или полисахариды) для желаемых свойств. Такие фрагменты могут быть прямыми гибридами с последовательностями, кодирующими белковый каркас, и могут быть получены стандартными методами клонирования и экспрессии. В альтернативном варианте, хорошо известные способы химического соединения могут быть использованы для присоединения фрагментов к рекомбинантно полученным молекулам согласно данному изобретению.

ПЭГ-льный фрагмент может, например, быть добавлен к домену FN3 согласно данному изобретению путем включения остатка цистеина в С-конец молекулы, или путем конструирования цистеинов в позициях остатков, которые обращены от поверхности молекулы, связывающей CD8A человека, и присоединения ПЭГ-льной группы к цистеину с использованием хорошо известных способов. Домен FN3 согласно данному изобретению, включающий в себя дополнительные фрагменты, можно сравнить по функциональности несколькими хорошо известными анализами. Например, измененные свойства вследствие внесения доменов Fc и/или вариантов доменов Fc могут быть проанализированы в анализах связывания рецептором Fc с использованием растворимых форм рецепторов, таких как рецепторы FcγRI, FcγRII, FcγRIII или FcRn, или с использованием хорошо известных клеточных анализов, измеряющих, например, АЗКЦ или КЗЦ (комплемент зависимую цитотоксичность), или оценивающих фармакокинетические свойства молекул согласно данному изобретению на моделях in vivo.

Полинуклеотиды, векторы, клетки-хозяева

Согласно данному изобретению предложены нуклеиновые кислоты, кодирующие домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, в виде выделенных полинуклеотидов или в виде частей векторов экспрессии, или в виде частей линейных последовательностей ДНК, включая линейные последовательности ДНК, используемые для транскрипции/трансляции in vitro, векторы, совместимые по экспрессии с прокариотами, эукариотами или нитевидными фагами, секреция и/или представление композиций или их прямых мутантов. В данном документе раскрыты некоторые иллюстративные полинуклеотиды, однако другие полинуклеотиды, которые, учитывая вырожденность генетического кода или предпочтения кодонов в данной системе экспрессии, кодируют домены FN3 согласно данному изобретению, также входят в объем изобретения.

Одним вариантом осуществления изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий домен FN3, специфически связывающий CD8A человека, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40-269.

Полинуклеотиды согласно данному изобретению могут быть получены химическим синтезом, таким как твердофазный синтез полинуклеотидов, на автоматическом синтезаторе полинуклеотидов, и собраны в полные одноцепочечные или двухцепочечные молекулы. В альтернативном варианте, полинуклеотиды согласно данному изобретению могут быть получены другими способами, такими как ПЦР, с последующим обычным клонированием. Методы продуцирования или получения полинуклеотидов заданной известной последовательности хорошо известны в данной области техники.

Полинуклеотиды согласно данному изобретению могут содержать по меньшей мере одну некодирующую последовательность, такую как последовательность промотора или энхансера, интрон, сигнал полиаденилирования, cis-последовательность, облегчающую связывание RepA, и тому подобное. Полинуклеотидные последовательности также могут содержать дополнительные последовательности, кодирующие дополнительные аминокислоты, которые кодируют, например, последовательность маркера или тэга, такого как гистидиновый тэг или тэг HA, для облегчения очистки или обнаружения белка, сигнальную последовательность, партнера гибридного белка, такого как RepA, Fc, или белок оболочки бактериофага, такой как pIX или pIII.

Другим вариантом осуществления изобретения является вектор, содержащий по меньшей мере один полинуклеотид согласно данному изобретению. Такими векторами могут быть плазмидные векторы, вирусные векторы, векторы для бакуловирусной экспрессии, векторы на основе транспозонов или любой другой вектор, подходящий для введения полинуклеотидов согласно данному изобретению в данный организм или генотип любым способом. Такие векторы могут быть векторами экспрессии, содержащими элементы последовательности нуклеиновой кислоты, которые могут контролировать, регулировать, вызывать или разрешать экспрессию полипептида, кодируемого таким вектором. Такие элементы могут содержать сайты связывания энхансера транскрипции, сайты инициации РНК-полимеразы, сайты связывания рибосом и другие сайты, которые облегчают экспрессию кодируемых полипептидов в данной системе экспрессии. Такие системы экспрессии могут быть клеточными или бесклеточными системами, хорошо известными в данной области техники.

Другим вариантом осуществления изобретения, является клетка-хозяин, содержащая вектор согласно данному изобретению. Домен FN3, специфически связывающий человеческий CD8A согласно данному изобретению, может быть необязательно продуцирован клеточной линией, смешанной клеточной линией, иммортализованной клеткой или клональной популяцией иммортализованных клеток, как это хорошо известно в данной области техники. Смотрите, например, Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2^nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).

Клетка-хозяин, выбранная для экспрессии, может происходить из млекопитающего, или может быть выбрана из COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, He G2, SP2/0, HeLa, миеломы, лимфомы, дрожжей, насекомых или клетки растений, или любых их производных, иммортализованных или трансформированных клеток. В альтернативном варианте, клетка-хозяин может быть выбрана из вида или организма, неспособных к гликозилированию полипептидов, например, прокариотической клетки или организма, таких как BL21, BL21 (DE3), BL21-GOLD (DE3), XL1-Blue, JM109, HMS174, HMS174 (DE3) и любых природных или сконструированных штаммов E. coli spp, Klebsiella spp., или Pseudomonas spp.

Другой вариант осуществления изобретения представляет собой способ получения выделенного домена FN3, специфически связывающего CD8A человека согласно данному изобретению, включающий в себя культивирование выделенной клетки-хозяина согласно данному изобретению в условиях, при которых экспрессируется выделенный домен FN3, специфически связывающий CD8A человека, и очистку домена FN3.

Домен FN3, специфически связывающий CD8A человека, может быть очищен из рекомбинантных клеточных культур хорошо известными способами, например, очисткой белком A, осаждением сульфатом аммония или этанолом, кислотной экстракцией, анионообменной или катионообменной хроматографией, фосфоцеллюлозной хроматографией, хроматографией гидрофобного взаимодействия, аффинной хроматографией, гидроксилапатитной хроматографией и лектиновой хроматографией, или высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ).

Наборы для обнаружения CD8A человека

В данном документе предложены наборы для обнаружения CD8A в биологическом образце. Данные наборы содержат один или большее количество CD8A-специфичных доменов FN3, описанных в данном документе, и инструкции по применению набора.

Предложенный CD8A-специфичный домен FN3 может быть в растворе; лиофилизированным; нанесенным на подложку, носитель или плашку; или меченым для обнаружения.

Описанные наборы также могут содержать дополнительные компоненты, полезные для выполнения способов, описанных в данном документе. Например, наборы могут содержать средства для получения образца из субъекта, контрольного или референтного образца, например, образца из субъекта с медленно прогрессирующим раком и/или субъекта, не имеющего рак, один или несколько отсеков для образца, и/или инструкцию, которая описывает выполнение способа согласно данному изобретению, и специфические тканевые контроли или стандарты.

Средства для определения уровня CD8A могут дополнительно включать в себя, например, буферы или другие реагенты для использования в анализе для определения уровня CD8A. Инструкции могут быть, например, печатными инструкциями для проведения анализа и/или инструкциями по оценке уровня CD8A.

Описанные наборы могут также содержать средства для выделения образца из субъекта. Такие средства могут включать в себя один или большее количество элементов оборудования или реагентов, которые можно использовать для получения жидкости или ткани из субъекта. Средства для получения образца из субъекта также могут включать в себя средства для выделения компонентов крови, таких как сыворотка, из образца крови. Предпочтительно набор предназначен для использования человеком.

Применение человеческих CD8A-связывающих доменов FN3 согласно данному изобретению

Домены FN3, специфически связывающие CD8A человека согласно данному изобретению, могут быть использованы для диагностики заболеваний человека или специфических патологий в клетках, тканях, органах, жидкости или, как правило, у хозяина, используя CD8A в качестве биомаркера. Способы согласно данному изобретению могут быть использованы на животных, принадлежащих к любой классификации. Примеры таких животных включают в себя млекопитающих, таких как люди, грызуны, собаки, кошки и сельскохозяйственные животные.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Согласно данному изобретению также предложены следующие неограничивающие варианты осуществления.

1) Выделенный домен FN3, который специфически связывает белок CD8A человека, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

2) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 1, причем домен FN3 перекрестно реагирует с белком CD8A яванского макака, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 271.

3) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 2, причем

домен FN3 основан на последовательности Tencon SEQ ID NO: 1;

домен FN3 основан на последовательности Tencon27 SEQ ID NO: 4; и/или

домен FN3 выделен из библиотеки, содержащей последовательность SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 7 или 8.

4) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 конъюгирован с второй молекулой.

5) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 4, причем вторая молекула представляет собой детектируемую метку.

6) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 5, причем метка пригодная для обнаружения представляет собой радиоактивный изотоп, магнитные гранулы, металлические гранулы, коллоидные частицы, флуоресцентный краситель, электронно-плотный реагент, фермент, биотин, дигоксигенин или гаптен.

7) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 имеет замену на цистеин в позиции остатка 54 SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68.

8) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 не активирует CD8+ T-лимфоциты in vitro, как измерено с помощью метода иммуноферментных пятен (ELISPOT).

9) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 конкурирует за связывание с белком CD8A человека с доменом FN3, содержащим аминокислотную последовательность одной из SEQ ID NO: 229-234.

10) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 связывает белок CD8A человека с аффинностью (K_Д) от около 0,02 до около 6,6 нМ, как измерено с помощью поверхностного плазмонного резонанса, выполненного в соответствии с условиями, описанными в Примере 3.

11) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 содержит любую одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 40-269.

12) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 11, дополнительно содержащий метионин на N-конце домена FN3.

13) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 3, причем домен FN3 соединен с фрагментом, увеличивающий время полужизни.

14) Выделенный домен FN3 по варианту осуществления 13, причем фрагмент, увеличивающий время полужизни представляет собой молекулу, связывающую CD8, полиэтиленгликоль (PEG), CD8, вариант CD8 или, по меньшей мере, часть области Fc иммуноглобулина.

15) Выделенный полинуклеотид, кодирующий домен FN3 по варианту осуществления 3.

16) Вектор, содержащий полинуклеотид по варианту осуществления 15.

17) Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по варианту осуществления 16.

18) Способ получения домена FN3, который специфически связывает белок CD8A человека, включающий в себя культивирование выделенной клетки-хозяина по варианту осуществления 17 в условиях, в которых экспрессируется домен FN3, и очистку домена FN3.

19) Диагностический набор, содержащий домен FN3 по варианту осуществления 3.

20) Диагностический или захватывающий агент, содержащий домен FN3 по варианту осуществления 3.

21) Диагностический или захватывающий агент по варианту осуществления 20, причем домен FN3 имеет замену на цистеин в позиции остатка 54 SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и/или 68.

22) Диагностический агент по варианту осуществления 21, причем замещающий цистеин конъюгирован с Zr-89 или I-124.

23) Способ обнаружения CD8-экспрессирующих клеток в биологическом образце, включающий в себя обработку биологического образца диагностическим реагентом по варианту осуществления 20, и оценивание связывания биологического образца с доменом FN3 такого диагностического агента.

24) Способ по варианту осуществления 23, причем диагностический агент имеет замену на цистеин в позиции остатка 54 SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и/или 68, и замещающий цистеин конъюгирован с Zr-89 или I-124.

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры предложены для дополнения предшествующего раскрытия изобретения и для лучшего понимания объекта изобретения, описанного в данном документе. Данные примеры не должны рассматриваться как ограничивающие описанный объект изобретения. Понятно, что примеры и варианты осуществления, описанные в данном документе, предназначены только для иллюстративных целей, и что их различные модификации или изменения будут очевидны для специалистов в данной области техники и должны быть включены в данное раскрытие, и могут быть выполнены без отступления от истинного объем изобретения.

ПРИМЕР 1. Конструирование библиотек Tencon с рандомизированными петлями

Tencon (SEQ ID NO: 1) представляет собой иммуноглобулиноподобный каркас, домен типа III (FN3) фибронектина, сконструированный из консенсусной последовательности пятнадцати доменов FN3 из человеческого тенасцина-C (Jacobs et al., Protein Engineering, Design, and Selection, 25: 107-117, 2012; патент США № 8278419). Кристаллическая структура Tencon демонстрирует шесть экспонированных на поверхности петель, которые соединяют семь бета-листов. Данные петли или выбранные остатки в каждой петле могут быть рандомизированы для конструирования библиотек доменов типа III (FN3) фибронектина, которые могут быть использованы для отбора новых молекул, которые связываются с конкретными мишенями.

Tencon:

Lpapknlvvsevtedslrlswtapdaafdsfliqyqesekvgeainltvpgsersydltglkpgteytvsiygvkgghrsnplsaeftt (SEQ ID NO: 1):

Были созданы различные библиотеки с использованием каркаса tencon и различных стратегий проектирования. В целом как правило, библиотеки TCL1 и TCL2 производят хорошие связыватели. Создание библиотек TCL1 и TCL2 подробно описано в публикации международной заявки № WO2014081944A2.

Конструирование библиотеки TCL1

Библиотека, спроектированная для рандомизации только петли FG Tencon (SEQ ID NO: 1), TCL1, была сконструирована для использования с системой cis-дисплея (Jacobs et al., Protein Engineering, Design, and Selection, 25:107-117, 2012). В данное системе получают двухцепочечную ДНК, внося последовательности промотора Tac, кодирующую последовательность библиотеки Tencon, кодирующую последовательность RepA, cis-элемент и элемент ori (точка начала репликации). При экспрессии в системе транскрипции/трансляции in vitro образуется комплекс гибридного белка Tencon-RepA, связанного в cis-положении с ДНК, из которой он кодируется. Комплексы, которые связываются с молекулой-мишенью, затем выделяют и амплифицируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), как описано ниже.

Создание библиотеки TCL1 для использования в cis-дисплее было выполнено последовательными раундами ПЦР для получения конечных линейных двухцепочечных молекул ДНК из двух частей: 5'-фрагмент содержит промотор и последовательности Tencon, а 3'-фрагмент содержит ген repA и элементы cis- и ori. Данные две части объединяли ограниченным расщеплением рестриктазами для получения полной конструкции. Библиотека TCL1 была спроектирована для включения случайных аминокислот только в петлю FG Tencon, KGGHRSN (SEQ ID NO: 32). Кодоны NNS были использованы при конструировании данной библиотеки, что дало возможность внести все 20 аминокислот и один стоп-кодон в петлю FG. Библиотека TCL1 содержит шесть отдельных суб-библиотек, каждая из которых имеет различную рандомизированную длину петли FG, от 7 до 12 остатков, для дальнейшего увеличения разнообразия.

Библиотека TCL1 (SEQ ID NO: 2)

LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVX₇-₁₂PLSAEFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₇ представляет собой любую аминокислоту; и

X₈, X₉, X₁₀, X₁₁ и X₁₂являются любой аминокислотой или удалены

Конструирование библиотеки TCL2

Была создана библиотека TCL2, в которой петли BC и FG Tencon были рандомизированы, а распределение аминокислот в каждой позиции строго контролировали. В Таблице 2 показано распределение аминокислот в желаемых позициях петли в библиотеке TCL2. Разработанное распределение аминокислот имело две цели. Во-первых, библиотека была смещена в сторону остатков, которые, как было предсказано, являются структурно важными для свертывания Тенкон и стабильности, основываясь на анализе кристаллической структуры Тенкона и/или на основе гомологичном моделировании. Например, было установлено, что позиция 29 принадлежит только к подмножеству гидрофобных аминокислот, поскольку данный остаток был погружен в гидрофобное ядро свернутого Tencon. Второй уровень проектирования включал в себя смещение распределения аминокислот к распределению остатков, преимущественно обнаруживаемых в HCDR3 тяжелой цепи антител, для эффективного продуцирования высокоаффинных связывателей (Birtalan et al., J Mol Biol 377:1518-28, 2008; Olson et al., Protein Sci 16:476-84, 2007). Для достижения данной цели «спроектированное распределение» в Таблице 1 относится к такому распределению: 6% аланина, 6% аргинина, 3,9% аспарагина, 7,5% аспарагиновой кислоты, 2,5% глутаминовой кислоты, 1,5% глютамина, 15% глицина, 2,3% гистидина, 2,5% изолейцина, 5% лейцина, 1,5% лизина, 2,5% фенилаланина, 4% пролина, 10% серина, 4,5% треонина, 4% триптофана, 17,3% тирозина и 4% валина. Данное распределение лишено метионина, цистеина и стоп-кодонов.

Библиотека TCL2 (SEQ ID NO: 3)

LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈SFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVX₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃SX₁₄X₁₅LSAEFTT; причем

X₁представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₂представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₃ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₄ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₅представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₆представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₇представляет собой Phe, Ile, Leu, Val или Tyr;

X₈ представляет собой Asp, Glu или Thr;

X₉представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₀ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₁ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₂ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₃ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₄представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и

X₁₅ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val.

Таблица 1.

Позиция остатка* остатки ДТ Распределение в библиотеке TCL2 22 T спроектированное распределение 23 A спроектированное распределение 24 P 50% P+спроектированное распределение 25 D спроектированное распределение 26 A 20% A+20% G+спроектированное распределение 27 A спроектированное распределение 28 F 20% F, 20% I, 20% L, 20% V, 20% Y 29 D 33% D, 33% E, 33% T 75 K спроектированное распределение 76 G спроектированное распределение 77 G спроектированное распределение 78 H спроектированное распределение 79 R спроектированное распределение 80 S 100% S 81 N спроектированное распределение 82 P 50% P+спроектированное распределение

* нумерация остатков основана на последовательности Tencon SEQ ID NO: 1

Впоследствии, данные библиотеки были улучшены различными способами, включая создание библиотек на основе стабилизированной структуры Tencon (патент США № 8569227), которая включает в себя замены E11R/L17A/N46V/E86I (Tencon27; SEQ ID NO: 4) по сравнению с Tencon дикого типа, а также изменение позиций, рандомизированных в петлях BC и FG. Tencon27 описан в международной патентной заявке № WO2013049275. Исходя из этого были спроектированы новые библиотеки для рандомизации только петли FG Tencon (библиотека TCL9), или комбинации петель BC и FG (библиотека TCL7). Данные библиотеки были сконструированы для использования с системой cis-дисплея (Odegrip et al., Proc Natl Acad Sci U S A 101: 2806-2810, 2004). Детали данного проектирования показаны ниже:

Стабилизированный Tencon (Tencon27) (SEQ ID NO: 4)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAIFTT

TCL7 (рандомизированные петли FG и BC) (SEQ ID NO: 5)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉FDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉SNPLSAIFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂, X_13,X_14,X₁₅ иX₁₆ представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W или Y; и

X₇, X₈, X₉, X₁₇, X₁₈ и X₁₉, представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y или удален.

TCL9 (рандомизированная петля FG) (SEQ ID NO: 6)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGV X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉ X₁₀X₁₁X₁₂SNPLSAIFTT;

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆ и X₇, представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W или Y; и

X_8,X_9, X_10,X₁₁и X₁₂ представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y или удален.

Для конструирования библиотеки, фрагменты ДНК, кодирующие рандомизированные петли BC (длина 6-9 позиций) или петли FG (длина 7-12 позиций), были синтезированы с использованием технологии Slonomics (Sloning Biotechnology GmbH), чтобы контролировать распределение аминокислот в библиотеке и устранить стоп-кодоны. Два разных набора молекул ДНК, рандомизирующих либо петлю BC, либо петли FG, были синтезированы независимо и позднее объединены с использованием ПЦР для получения полного библиотечного продукта.

Конструирование библиотек петель FG (TCL9)

Был получен набор синтетических молекул ДНК, состоящий из 5'-Tac-промотора, за которым следует полная последовательность гена Tencon, за исключением рандомизированных кодонов в петле FG (SEQ ID NO: 26-31). Для рандомизации петли FG все аминокислоты, кроме цистеина и метионина, кодировались в равных долях. Длины диверсифицированной части такова, что они кодируют 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислот в петле FG. Суб-библиотеки каждого варианта длины синтезировали индивидуально в масштабе 2 мкг и затем амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидов Sloning-FOR (SEQ ID NO: 9) и Sloning-Rev (SEQ ID NO: 10).

3'-фрагмент библиотеки представляет собой константную последовательность ДНК, содержащую элементы для дисплея, включая сайт рестрикции PspOMI, кодирующую область гена repA, и элементы cis и ori. Реакции ПЦР проводили для амплификации данного фрагмента с использованием плазмиды (pCR4Blunt) (Invitrogen) в качестве матрицы с праймерами M13 Forward и M13 Reverse. Полученные продукты ПЦР расщепляли PspOMI в течение ночи и очищали прогонкой в геле. Для лигирования 5'-части библиотечной ДНК с 3'-ДНК, содержащей ген repA, 2 пмоль (от примерно от 540 нг до 560 нг) 5'-ДНК лигировали с равным молярным количеством (примерно 1,25 мкг) 3'-ДНК repA в присутствии фермента NotI и PspOMI и лигазы Т4 при 37°C в течение ночи. Лигированный библиотечный продукт амплифицировали с использованием 12 циклов ПЦР с олиго POP2250 (SEQ ID NO: 11) и DigLigRev (SEQ ID NO: 12). Для каждой суб-библиотеки полученную ДНК из 12 реакций ПЦР объединяли и очищали с помощью спин-колонки Qiagen. Выход для каждой суб-библиотеки TCL9 составлял от 32 до 34 мкг.

Конструирование библиотек петель FG/BC (TCL7)

Библиотека TCL7 предоставляет библиотеку с рандомизированными петлями BC и FG Tencon. В данной библиотеке петли BC длиной 6-9 аминокислот смешивали комбинаторно с рандомизированными петлями FG длиной 7-12 аминокислот. Были получены синтетические фрагменты Tencon BC6, BC7, BC8 и BC9 (SEQ ID NO: 13-16) для внесения гена Tencon, кодирующего N-концевую часть белка, вплоть до и включающую в себя остаток VX, так что петля BC заменяется на 6, 7, 8 или 9 рандомизированных аминокислот. Данные фрагменты были синтезированы до открытия мутаций L17A, N46V и E83I (CEN5243), но эти мутации были внесены на молекулярно биологических этапах, описанных ниже. Чтобы объединить данный фрагмент с фрагментами, кодирующими рандомизированные петли FG, были предприняты следующие шаги.

Сначала фрагмент ДНК, кодирующий промотор Tac и 5'-последовательность Tencon вплоть до нуклеотида, кодирующего аминокислоту A17 (130мер-L17A, SEQ ID NO: 17), был получен с помощью ПЦР с использованием олиго POP2222ext (SEQ ID NO: 18) и LS1114 (SEQ ID NO: 19). Это было сделано для включения мутации L17A в библиотеку (CEN5243). Затем, фрагменты ДНК, кодирующие остатки Tencon R18-V75, включая рандомизированные петли BC, амплифицировали с помощью ПЦР с использованием BC6, BC7, BC8 или BC9 в качестве матриц и олиго LS1115 (SEQ ID NO: 20) и LS1117 (SEQ ID NO: 21). Данный шаг ПЦР вносил сайт BsaI в 3'-конц. Данные фрагменты ДНК были впоследствии объединены путем перекрывающейся ПЦР с использованием олиго POP2222ext и LS1117 в качестве праймеров. Полученный продукт ПЦР размером 240 п.н. объединяли и очищали с помощью набора для очистки ПЦР Qiagen. Очищенную ДНК расщепляли BsaI-HF и очищали прогонкой в геле

Фрагменты, кодирующие петлю FG, амплифицировали с помощью ПЦР с использованием FG7 (SEQ ID NO: 31), FG8 (SEQ ID NO: 30), FG9 (SEQ ID NO: 29), FG10 (SEQ ID NO: 28), FG11 (SEQ ID NO: 27) и FG12 (SEQ ID NO: 26) в качестве матриц с олигонуклеотидами SDG10 (SEQ ID NO: 22) и SDG24 (SEQ ID NO: 23) для внесения сайта рестрикции BsaI и вариаций N46V и E86I (CEN5243).

Расщепленные фрагменты BC и фрагменты FG лигировали вместе за один этап с использованием трехнаправленного лигирования. Были поставлены четыре реакции лигирования в 16 возможных комбинациях, причем каждая реакция лигирования объединяла два варианта длины петли BC и 2 варианта длины петли FG. Каждая реакция лигирования содержала примерно 300 нг всего фрагмента BC и 300 нг фрагмента FG. Данные 4 пула лигирования затем амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олиго POP2222 (SEQ ID NO: 24) и SDG28 (SEQ ID NO: 25). 7,5 мкг каждого продукта реакции затем расщепляли с помощью Not1 и очищали с помощью колонки для очистки ПЦР Qiagen. 5,2 мкг этой ДНК лигировали с равным молярным количеством фрагмента ДНК RepA (примерно 14 мкг), расщепленного с помощью PspOMI, и продукт амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олиго POP2222.

ПРИМЕР 2. Создание библиотек Tencon, имеющих альтернативные поверхности связывания

Выбор остатков, которые должны быть рандомизированы в конкретном проекте библиотеки, определяет общую форму создаваемой поверхности взаимодействия. Рентгенокристалографический анализ домена FN3, содержащего каркасный белок, выбранный для связывания мальтозосвязывающего белка (MBP) из библиотеки, в которой были рандомизированы петли BC, DE и FG, показал в значительной степени изогнутый интерфейс, который укладывается в активный сайт MBP (Koide et al., Proc Natl Acad Sci U S A 104: 6632-6637, 2007). Напротив, было обнаружено, что каркасный белок с анкириновыми повторами, который был выбран для связывания с MBP, имеет гораздо более плоскую поверхность взаимодействия и связывается с наружной поверхностью MBP, отдаленной от активного (Binz et al., Nat Biotechnol 22: 575-582, 2004). Данные результаты предполагают, что форма поверхности связывания каркасной молекулы (изогнутая или плоская) может диктовать, какие белки-мишени или специфические эпитопы на таких белках-мишенях могут эффективно связываться каркасом. Опубликованные усилия по конструированию белковых каркасов, содержащих домены FN3 для связывания белка, основаны на конструировании смежных петель для связывания с мишенью, таким образом, создавая кривые поверхности связывания. Данный подход может ограничить число мишеней и эпитопов, доступных для таких каркасов.

Tencon и другие домены FN3 содержат два набора CDR-подобных петель, лежащих на противоположных поверхностях молекулы, первый набор образован петлями BC, DE и FG, и второй набор образован петлями AB, CD и EF. Два набора петель разделены бета-листами, которые образуют центр структуры FN3. Если изображение Tencon повернуто на 90 градусов, можно визуализировать альтернативную поверхность. Данная слегка вогнутая поверхность сформирована петлями CD и FG и двумя антипараллельными бета-листами, бета-листами C и F, и в данном документе называется поверхностью C-CD-F-FG. Поверхность C-CD-F-FG может использоваться в качестве шаблона для проектирования библиотек поверхностей взаимодействия белковых каркасов путем рандомизации подмножества остатков, которые образуют поверхность. Бета-листы имеют повторяющуюся структуру с боковой цепью каждого второго остатка, выставленной на поверхность белка. Таким образом, библиотека может быть получена путем рандомизации некоторых или всех экспонированных на поверхности остатков в бета-листах. Выбирая соответствующие остатки в бета-листах, присущая Tencon стабильность каркасов должна быть нарушена минимально, обеспечивая уникальную поверхность каркаса для взаимодействия с другими белками.

Библиотека TCL14 (SEQ ID NO: 7) была сконструирована в каркасе Tencon27 (SEQ ID NO: 4).

Полное описание способов, использованных для создания данной библиотеки, описано в публикации патента США № 2013/0226834.

Библиотека TCL14 (SEQ ID NO: 7)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFX₁IX₂YX₃EX₄X₅X₆X₇GEAIVLTVPG SERSYDLTGLKPGTEYX₈VX₉IX₁₀GVKGGX₁₁X₁₂SX₁₃PLSAIFTT;

Причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂ и X₁₃представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y, или M.

Два бета-листа, образующие поверхность C-CD-F-FG в Tencon27, имеют в общей сложности 9 экспонированных на поверхности остатков, которые могут быть рандомизированы; С-лист: S30, L32, Q34, Q36; F-лист: E66, T68, S70, Y72, и V74, в то время как петля CD имеет 6 потенциальных остатков: S38, E39, K40, V41, G42 и E43, и петля FG имеет 7 потенциальных остатков: K75, G76, G77, H78, R79, S80, и N81. Отобранные остатки были выбраны для включения в конструкцию TCL14 из-за большего теоретического размера библиотеки, в случае, когда все 22 остатка были бы рандомизированы.

Для рандомизации были выбраны тринадцать позиций в Tencon: L32, Q34 и Q36 в C-листе, S38, E39, K40 и V41 в CD-петле, T68, S70 и Y72 в F-листе, H78, R79 и N81 в FG-петле. В C и F листах S30 и E66 не были рандомизированы, поскольку они лежат сразу за пределами петель CD и FG и, по-видимому, не являются частью поверхности C-CD-F-FG. Для петли CD, G42 и E43 не были рандомизированы, так как глицин, обеспечивающий гибкость, может быть значимым в областях петли, а E43 лежит на стыке поверхности. Петля FG имела исключенные K75, G76, G77 и S80. Глицины были исключены по вышеуказанным причинам, в то время как тщательный осмотр кристаллических структур показал, что S80 создает ключевые контакты с ядром, чтобы помочь сформировать стабильную петлю FG. K75 размещался в сторону от поверхности C-CD-F-FG и был менее привлекательным кандидатом для рандомизации. Хотя вышеупомянутые остатки не были рандомизированы в исходной конструкции TCL14, они могли быть включены в последующие дизайны библиотек для обеспечения дополнительного разнообразия для отбора de novo или, например, для библиотеки созревания аффинности на выбранной специфической совпадающей мишени TCL14.

После получения TCL14 было создано 3 дополнительные библиотеки Tencon аналогичного дизайна. Данные две библиотеки, TCL19, TCL21 и TCL23, рандомизировали по тем же позициям, что и TCL14 (смотрите выше), однако распределение аминокислот, встречающихся в данных позициях было изменено (Таблица 2). TCL19 и TCL21 были спроектированы таким образом, чтобы включать в себя равное распределение 18 природных аминокислот в каждой позиции (5,55% каждая), исключая только цистеин и метионин. TCL23 была спроектирована таким образом, что каждая рандомизированная позиция примерно соответствует распределению аминокислот, обнаруженному в петлях HCDR3 функциональных антител (Birtalan et al., J Mol Biol 377: 1518-1528, 2008) как описано в Таблице 2. Как и в случае библиотеки TCL21, цистеин и метионин были исключены.

Была построена третья дополнительная библиотека для расширения потенциальной целевой поверхности связывания библиотеки других библиотек. В данной библиотеке TCL24 было рандомизировано 4 дополнительных позиции Tencon по сравнению с библиотеками TCL14, TCL19, TCL21 и TCL23. Данные позиции включают в себя N46 и T48 из листа D и S84 и I86 из листа G. В частности, были выбраны позиции 46, 48, 84 и 86, так как боковые цепи этих остатков экспонированы из бета-листов D и G на поверхность, и лежат структурно рядом с рандомизированными частями листов C и F, таким образом увеличивая площадь поверхности, доступной для связывания с белками-мишенями. Распределение аминокислот, используемое в каждой позиции для TCL24, идентично распределению, описанному для TCL19 и TCL21 в Таблице 2.

Библиотека TCL24 (SEQ ID NO: 8)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFX₁IX₂YX₃EX₄X₅X₆X₇GEAIX₈LX₉VP GSERSYDLTGLKPGTEYX₁₀VX₁₁IX₁₂GVKGGX₁₃X₁₄SX₁₅PLX₁₆AX₁₇FTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂ и X₁₃представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V или W.

Таблица 2. Частота аминокислот (%) в каждой рандомизированной позиции для TCL21, TCL23 и TCL24.

Аминокислота TCL19 TCL21 TCL23 TCL24 Ala 5,6 5,6 6,0 5,6 Arg 5,6 5,6 6,0 5,6 Asn 5,6 5,6 3,9 5,6 Asp 5,6 5,6 7,5 5,6 Cys 0,0 0,0 0,0 0,0 Gln 5,6 5,6 1,5 5,6 Glu 5,6 5,6 2,5 5,6 Gly 5,6 5,6 15,0 5,6 His 5,6 5,6 2,3 5,6 Ile 5,6 5,6 2,5 5,6 Leu 5,6 5,6 5,0 5,6 Lys 5,6 5,6 1,5 5,6 Met 0,0 0,0 0,0 0,0 Phe 5,6 5,6 2,5 5,6 Pro 5,6 5,6 4,0 5,6 Ser 5,6 5,6 10,0 5,6 Thr 5,6 5,6 4,5 5,6 Trp 5,6 5,6 4,0 5,6 Tyr 5,6 5,6 17,3 5,6 Val 5,6 5,6 4,0 5,6

Создание библиотек TCL21, TCL23 и TCL24

Библиотека TCL21 была создана с использованием технологии библиотек Colibra (Isogenica) для контроля распределения аминокислот. Фрагменты генов TCL19, TCL23 и TCL24 были получены с использованием технологии Slonomics (Morphosys) для контроля распределения аминокислот. ПЦР использовали для амплификации каждой библиотеки после первоначального синтеза с последующим лигированием с геном RepA, чтобы использовать его в отборах с использованием системы CIS-дисплея (Odegrip et al., Proc Natl Acad Sci U S A 101: 2806-2810, 2004) как описано выше для библиотек петель.

ПРИМЕР 3. Отбор доменов типа III (FN3) фибронектина, которые связывают CD8a

Разработка и продуцирование антигенов CD8-альфа человека:

Две конструкции CD8-альфа человека (Swiss Prot P01732) экспрессировали и очищали от клеток HEK для получения рекомбинантного белка для пэннинг cis-дисплея (Таблица 3).

Таблица 3. Конструкции CD8A, созданные для использования в качестве антигенов

Конструкция SEQ ID NO: Описание CD8W7 35 Остатки 22-167 CD8-альфа человека, слитые с Fc-фрагментом IgG1 человека CD8W13 36 Остатки 22-182 CD8-альфа человека, слитые с Fc-фрагментом IgG1 человека

Каждая конструкция была разработана чтобы включать в себя сигнала секреции мышиного каппа-IgG (SEQ ID NO: 3) и была слита с фрагментом Fc человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 4). Последовательности CD8-альфа и фрагмента Fc были соединены линкером, содержащим flag и последовательность полигистидинового тэга (SEQ ID NO: 5).

Плазмиды, кодирующие эти белки, трансфицировали в клетки HEK 293-Expi путем временной трансфекции, а культуральные супернатанты собирали центрифугированием при 6000 × g и очищали с помощью фильтра 0,2 микрометра. Супернатанты загружали в колонку HiTrap Mabsure Select (GE Healthcare) и белки CD8A элюировали в 0,1 М Na-ацетате, рН 3,5 и нейтрализовали добавлением 2М Трис, рН 7. Затем каждый образец диализовали в ФСБ 7,4 для биотинилирования с помощью набора для биотинилирования No Weigh EZ-Link-Sulfo-NHS-LC-Biotin (Thermo Scientific).

Скрининг библиотеки

Cis-дисплей использовали для отбора связывающих доменов CD8-альфа человека из библиотек TCL18, TCL19, TCL21, TCL23 и TCL24. Биотинилированные CD8W7 и CD8W13 были использованы для пэннинга. Для транскрипции и трансляции in vitro (ITT) 3 мкг библиотечной ДНК инкубировали с 0,1 мМ всех аминокислот, 1X компонентами премикса S30 и 15 мкл экстракта S30 (Promega) в общем объеме 50 мкл, и инкубировали при 30°C. Через 1 час добавляли 375 мкл блокирующего раствора ((0,1% казеина (Thermo Fisher, Рокфорд, Иллинойс)), 100 мг/мл ДНК спермы сельди (Promega, Мэдисон, Висконсин), 1 мг/мл гепарина (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури), и реакционную смесь инкубировали на льду в течение 15 минут. Для отбора добавляли биотинилированный антиген в концентрациях 400 нМ (раунд 1), 200 нМ (раунды 2 и 3) и 100 нМ (раунды 4 и 5). Связанные члены библиотеки были извлечены с использованием магнитных гранул нейтравидина (Thermo Fisher, Рокфорд, Иллинойс) (раунды 1, 3 и 5) или магнитных гранул стрептавидина (Promega, Madison, WI) (раунды 2 и 4), и несвязанные члены библиотеки были удалены промыванием гранул 5-14 раз 500 мкл PBST и 2 раза 500 мкл ФСБ. Были выполнены дополнительные раунды отбора, чтобы идентифицировать каркасные молекулы с улучшенным сродством. Вкратце, результирующие продукты из раунда 5 были подготовлены, как описано выше, и подвергнуты дополнительным итеративным раундам отбора со следующими изменениями: концентрацию биотинилированной мишени снизили до 25 нМ (раунды 6 и 7) или до 2,5 нМ (раунды 8 и 9) и выполняли дополнительную 1-часовую промывку в присутствии избытка небиотинилированного белка мишени. Цель данных изменений состояла в том, чтобы одновременно выбрать связыватели с потенциально более высокой скоростью соединения и более медленной скоростью отсоединения, обеспечивающие существенно более низкую K_Д.

После пэннинга отобранные домены FN3 амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олиго Tcon6 (SEQ ID NO: 33) и Tcon5shortE86I (SEQ ID NO:: 34), субклонировали путем отжига в pET15-LIC и трансформировали в клетки BL21-GOLD (DE3) (Agilent, Santa Clara, CA) для растворимой экспрессии в E. coli с использованием стандартных методов молекулярной биологии. Отдельные клоны отбирали и выращивали до насыщения в 1 мл LB c ампициллином в 96-луночных плашках при 37°С. На следующий день 25 мкл переносили в 1 мл свежей среды LB-Amp в 96-луночных плашках и выращивали при 37°С в течение 2 часов. IPTG добавляли при конечной концентрации 1 мМ и экспрессию белка индуцировали при 30°C в течение 16 часов. Клетки собирали центрифугированием и затем лизировали с помощью Bugbuster HT (EMD Chemicals, Гиббстаун, Нью-Джерси) с добавлением конечной концентрации лизоцима белка куриного яйца 0,2 мг/мл (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури). Клетки собирали примерно через 16 часов центрифугированием и замораживали при -20°C. Клеточный лизис был достигнут путем инкубации каждого осадка в 0,6 мл буфера для лизиса BugBuster® HT (Novagen EMD Biosciences) при встряхивании при комнатной температуре в течение 45 минут.

Отбор доменов FN3, которые связывают CD8A

Плашки, покрытые нейтравидином, блокировали в течение 1 часа в Starting Block T20 (Pierce) и затем покрывали биотинилированным CD8W7 или CD8W13 (тем же антигеном, что и при пэннинге) или отрицательным контролем (Fc человека) в течение 1 часа. Плашки промывали TBST и добавляли к плашкам разбавленный лизат на 1 час. После дополнительных промывок лунки обрабатывали конъюгированным с HRP антителом против FN3-домена (PAB25) в течение 1 часа и затем анализировали с помощью POD (Roche). Молекулы домена FN3 с сигналами, по крайней мере, в 10 раз превышающими фон, были отобраны для дальнейшего анализа.

Экспрессия в малом масштабе и очистка идентифицированных доменов FN3, связывающих CD8A

Выделенные клоны из уникальных совпадений, идентифицированных с помощью биохимического связывания ИФА, объединяли в одну плашку для выращивания в 96-луночных блочных плашках; клоны выращивали в культурах объемом 1 мл (среда LB, дополненная канамицином для отбора) при 37°С в течение ночи при встряхивании. Для экспрессии белка в 96-блочных плашках, 1 мл среды TB с добавлением канамицина инокулировали 50 мкл ночной культуры и выращивали при 37°C с постоянным встряхиванием при 300 об/мин до OD₆₀₀=0,6-1. Как только была достигнута целевая OD, экспрессию белка индуцировали добавлением IPTG до 1 мМ; плашки переносили в 30°С (300 об/мин) для роста в течение ночи. Ночные культуры центрифугировали для сбора клеток; бактериальные осадки хранили при -80°С до использования. Осадки лизировали с помощью буфера для лизиса BugBuster® HT (Novagen EMD Biosciences) и His-тэгированные центирины выделяли из очищенных лизатов с помощью плашек His MultiTrap™ HP (GE Healthcare) и элюировали в буфер, содержащий 20 мМ фосфата натрия, 500 мМ хлорида натрия и 250 мМ имидазола при рН 7,4. Очищенные образцы замещали в ФСБ pH 7,4 для анализа с использованием плашек PD MultiTrap™ G-25 (GE Healthcare).

Анализ эксклюзионной хроматографией

Эксклюзионную хроматографию использовали для определения состояния агрегации молекул домена FN3 против CD8-альфа. Аликвоты (10 мкл) каждого очищенного домена FN3 вводили в колонку Superdex 75 5/150 (GE Healthcare) со скоростью потока 0,3 мл/мин в подвижной фазе ФСБ, pH 7,4. Элюирование из колонки контролировали по абсорбции при 280 нм. Tencon дикого типа был включен в каждый прогон в качестве контроля. Для анализа профилей элюирования использовали программное обеспечение Agilent ChemStation. Только те белки с профилями элюирования, сходными с таковыми у консенсусного белка тенасцина в том же эксперименте, были рассмотрены для дополнительного охарактеризования. После пэннинга, скрининга ИФА и эксклюзионной хроматографии (SEC) было выделено в общей сложности 190 уникальных анти-CD8-альфа человека доменов FN3, которые связывались с рекомбинантным CD8-альфа человека более чем в 10 раз сильнее по сравнению с фоном, и не содержали агрегатов согласно SEC (Таблица 4, SEQ ID NO: 40-228 и 70).

Таблица 4. Обобщенные данные по CD8A-связывающих доменах FN3, идентифицированных с помощью скринингов ИФА

Идентификатор клона SEQ ID NO: Связывание Т-лимфоцитов человека 2 мкМ (МИФ) Связывание Т-лимфоцитов человека 0,2 мкМ (МИФ) k_д (1/с) Связывание Т-лимфоцитов яванского макак 2 мкМ (МИФ) Связывание Т-лимфоцитов яванского макак 0,2 мкМ (МИФ) P282AR9P1356_A10 40 4258 2093 2,91E-04 10584 3122 P282AR9P1356_A4 41 16674 4380 8,61E-05 26447 8632 P282AR9P1356_A6 42 10835 3441 9,73E-05 31432 5783 P282AR9P1356_B9 43 17158 3670 2,95E-04 36397 5437 P282AR9P1356_D3 44 5963 2403 1,58E-04 13852 3365 P282AR9P1356_H1 45 14696 3234 1,14E-04 46317 5699 P282AR9P1356_H6 46 6646 2642 8,08E-05 14393 3205 P282BR9P1357_A9 47 3117 1074 5,90E-04 7281 1940 P282BR9P1357_B2 48 5931 2875 1,00E-04 17974 3841 P282BR9P1357_C10 49 9779 2901 4,58E-04 24476 5110 P282BR9P1357_C4 50 16809 4224 1,27E-04 41586 7064 P282BR9P1357_D12 51 15269 3899 8,76E-05 40450 7364 P282BR9P1357_D2 52 9606 1568 1,05E-03 25843 2525 P282BR9P1357_E5 53 6726 2587 2,10E-04 10563 4101 P282BR9P1357_G9 54 12733 2803 3,04E-04 41492 4635 P282BR9P1357_H3 55 11142 3033 2,85E-04 27090 5701 P282CR9P1358_C2 56 10086 1059 1,13E-03 55786 7047 P282CR9P1358_C5 57 2706 511 9,99E-04 25688 1831 P282CR9P1358_D10 58 28650 2764 3,11E-04 74051 4072 P282CR9P1358_F11 59 6420 749 1,35E-03 62412 6585 P282CR9P1358_F5 60 24427 3072 6,37E-04 85691 13667 P282DR9P1359_A12 61 32222 5952 8,12E-05 88032 15491 P282DR9P1359_A7 62 38382 8764 7,54E-04 83943 22803 P282DR9P1359_A8 63 21124 2113 6,38E-04 70263 7766 P282DR9P1359_B2 64 22228 2726 6,38E-04 60866 4472 P282DR9P1359_C10 65 27822 2879 9,91E-04 98481 15134 P282DR9P1359_C11 66 18176 1288 2,16E-03 19916 457 P282DR9P1359_C12 67 15106 944 9,78E-04 66538 3636 P282DR9P1359_C5 68 31017 5551 1,74E-04 95679 14183 P282DR9P1359_D12 69 4540 542 1,93E-03 37139 1746 P282DR9P1359_E11 70 40607 7578 2,65E-04 104291 33144 P282DR9P1359_E2 71 28491 4824 2,06E-03 77725 10939 P282DR9P1359_E3 72 4307 349 2,63E-03 52426 1625 P282DR9P1359_E5 73 24100 1954 1,01E-03 81183 13601 P282DR9P1359_E6 74 20507 1262 1,71E-03 61734 5065 P282DR9P1359_E8 75 26074 2919 1,19E-03 80973 16948 P282DR9P1359_F11 76 35639 6592 5,54E-04 86740 16146 P282DR9P1359_F2 77 18415 3047 7,22E-04 38228 4031 P282DR9P1359_F3 78 6343 646 1,06E-03 48861 3084 P282DR9P1359_F5 79 48931 8483 9,02E-05 113733 34709 P282DR9P1359_F6 80 19937 3782 3,89E-04 73219 10680 P282DR9P1359_F7 81 38323 6932 3,65E-04 96456 26331 P282DR9P1359_G4 82 26568 2670 5,17E-04 78619 6006 P282DR9P1359_G7 83 37626 6129 1,14E-04 69085 8769 P282DR9P1359_H5 84 919 278 4,49E-03 2252 500 P282ER9P1360_A9 85 23379 5344 1,33E-04 64694 8732 P282ER9P1360_C1 86 25874 6291 1,81E-04 64813 9679 P282ER9P1360_C4 87 19202 3459 1,07E-03 33427 3896 P282ER9P1360_C6 88 25942 5079 1,75E-04 52783 7579 P282ER9P1360_C8 89 30578 6013 1,56E-04 66829 10220 P282ER9P1360_D11 90 36755 3210 1,42E-04 76564 1937 P282ER9P1360_E4 91 26889 5030 1,91E-04 60757 6867 P282ER9P1360_F11 92 22442 3863 2,25E-04 48653 4407 P282ER9P1360_G10 93 26951 7046 2,07E-03 62701 22641 P282ER9P1360_G7 94 25438 5869 2,21E-04 69709 9921 P282ER9P1360_H10 95 2513 506 1,04E-03 27063 1887 P282ER9P1360_H2 96 15165 3479 2,69E-04 44563 4535 P282ER9P1360_H3 97 19992 4271 2,42E-04 65994 6441 P282FR9P1361_A3 98 7670 1661 7,57E-04 8476 740 P282FR9P1361_A5 99 32752 5213 1,92E-04 63541 8108 P282FR9P1361_C7 100 8538 1575 2,24E-03 11639 896 P282FR9P1361_D3 101 6881 1028 5,02E-03 14762 764 P282FR9P1361_E12 102 15794 1130 1,09E-03 63536 15052 P282FR9P1361_F1 103 5498 801 1,26E-03 9869 1392 P282FR9P1361_F11 104 2189 382 2,13E-03 2289 384 P282FR9P1361_F2 105 4610 498 4,96E-03 10883 462 P282FR9P1361_F3 106 5157 674 1,07E-02 9709 513 P282FR9P1361_F7 107 7001 1107 1,14E-03 1705 353 P282FR9P1361_G9 108 859 297 6,53E-03 3746 666 P282FR9P1361_H4 109 13056 3736 3,17E-04 26273 2504 P282FR9P1361_H5 110 5730 698 5,77E-03 11794 637 P283AR9P1362_A3 111 5535 1400 1,53E-03 17345 3533 P283AR9P1362_A4 112 6314 2539 3,02E-04 21218 4402 P283AR9P1362_B10 113 15380 3703 1,39E-04 35686 8380 P283AR9P1362_B2 114 13649 3505 1,60E-04 38828 6479 P283AR9P1362_B8 115 5737 1576 6,48E-04 12886 2271 P283AR9P1362_C12 116 7064 2616 9,94E-05 14808 3832 P283AR9P1362_C6 117 15955 4147 1,09E-03 17494 5690 P283AR9P1362_C7 118 10957 2792 1,86E-04 19690 5515 P283AR9P1362_D2 119 8650 2758 2,53E-04 17182 5333 P283AR9P1362_D3 120 9498 3484 1,25E-04 34619 6052 P283AR9P1362_D4 121 9832 2977 9,72E-05 25671 4101 P283AR9P1362_D6 122 13686 3664 2,64E-05 33547 7721 P283AR9P1362_D7 123 17327 3354 1,18E-04 27491 4849 P283AR9P1362_E9 124 6178 2010 3,27E-04 15869 2837 P283AR9P1362_F12 125 8970 2623 7,28E-05 26333 3794 P283AR9P1362_F2 126 9619 1366 2,11E-03 26443 5518 P283AR9P1362_F8 127 9195 3167 1,12E-04 23735 4571 P283AR9P1362_G11 128 12690 3531 1,02E-04 32484 6826 P283AR9P1362_G3 129 18512 4307 9,45E-05 35268 9198 P283AR9P1362_H11 130 5734 2268 1,80E-04 11588 3655 P283BR9P1363_A10 131 7886 2753 3,60E-04 27790 4105 P283BR9P1363_A8 132 11285 2536 3,53E-04 24234 3453 P283BR9P1363_B2 133 8358 2399 2,08E-04 14846 2819 P283BR9P1363_B6 134 14534 3453 2,69E-04 37691 6839 P283BR9P1363_C4 135 9073 2247 4,09E-04 23387 3266 P283BR9P1363_C8 136 16541 3739 3,35E-04 37175 9082 P283BR9P1363_D11 137 8692 2890 4,95E-04 20572 11630 P283BR9P1363_E4 138 10790 2498 3,29E-04 17702 2469 P283BR9P1363_E6 139 8239 2079 1,36E-03 16784 3715 P283BR9P1363_F2 140 14473 3274 2,88E-04 33286 5278 P283BR9P1363_F4 141 11933 2963 1,55E-04 20245 4479 P283BR9P1363_F6 142 10632 3229 8,21E-05 31568 4571 P283BR9P1363_G2 143 9640 3226 1,22E-04 15899 5383 P283BR9P1363_G5 144 14798 3307 1,40E-04 24945 4430 P283BR9P1363_G7 145 4639 2340 4,01E-05 7212 3022 P283DR9P1364_A4 146 9491 1024 1,09E-03 48337 6653 P283DR9P1364_A7 147 8985 435 1,97E-03 39870 2641 P283DR9P1364_B1 148 1477 666 1,56E-03 8617 746 P283DR9P1364_B11 149 4255 451 1,30E-03 22852 1590 P283DR9P1364_B4 150 45452 6062 1,09E-04 96492 20238 P283DR9P1364_C10 151 4936 649 1,29E-03 34234 2713 P283DR9P1364_D11 152 32293 4223 5,14E-04 70431 16240 P283DR9P1364_D8 153 656 244 6,61E-03 2484 365 P283DR9P1364_D9 154 42285 5245 4,30E-04 88300 19979 P283DR9P1364_E3 155 1285 317 2,53E-03 9128 887 P283DR9P1364_E5 156 17625 1269 8,25E-04 55654 5091 P283DR9P1364_E7 157 5394 442 2,43E-03 28732 2241 P283DR9P1364_E8 158 14321 1181 7,56E-04 59328 5510 P283DR9P1364_E9 159 4295 548 1,90E-03 19688 2096 P283DR9P1364_F2 160 39164 6252 1,61E-04 91474 16946 P283DR9P1364_F6 161 17215 1831 1,00E-03 33767 3161 P283DR9P1364_F8 162 6305 458 1,74E-03 36659 1302 P283DR9P1364_G10 163 6291 409 2,53E-03 10920 769 P283DR9P1364_G9 164 9892 401 7,79E-03 47097 2796 P283DR9P1364_H1 165 29248 3033 6,13E-04 54014 10610 P283DR9P1364_H11 166 11479 834 9,64E-04 60609 9459 P283DR9P1364_H6 167 2623 268 2,30E-03 6002 418 P283DR9P1364_H9 168 32763 4057 2,71E-04 54593 4556 P283ER9P1365_A1 169 25512 3862 4,67E-04 9676 1365 P283ER9P1365_A7 170 18513 1315 7,86E-04 36568 2960 P283ER9P1365_B6 171 22998 3397 2,88E-04 30081 2692 P283ER9P1365_C1 172 8004 644 1,15E-03 23975 1884 P283ER9P1365_E2 173 20011 2867 3,11E-04 17177 1905 P283ER9P1365_F4 174 24065 2596 2,16E-04 43243 2038 P283ER9P1365_G1 175 1280 318 3,67E-03 489 383 P283ER9P1365_G3 176 12481 2916 2,50E-03 3480 1470 P283ER9P1365_H3 177 17965 953 3,75E-04 19560 436 P283FR9P1366_A1 178 8782 516 2,26E-03 39384 1650 P283FR9P1366_A5 179 27649 3598 5,85E-04 67839 10945 P283FR9P1366_A9 180 1717 252 3,94E-03 8809 580 P283FR9P1366_B7 181 11365 899 1,15E-03 51186 4668 P283FR9P1366_C2 182 40957 4319 4,91E-04 89242 19288 P283FR9P1366_C3 183 1823 407 2,07E-03 4628 1044 P283FR9P1366_C4 184 33821 3754 5,36E-04 63373 10200 P283FR9P1366_C6 185 4541 483 1,43E-03 26242 1675 P283FR9P1366_D12 186 27793 1528 1,76E-03 87643 8143 P283FR9P1366_D6 187 32924 4554 5,09E-04 79621 10399 P283FR9P1366_D7 188 7517 566 3,54E-04 41434 2581 P283FR9P1366_D8 189 3394 413 1,34E-03 28181 2296 P283FR9P1366_E11 190 4594 567 1,41E-03 14194 1469 P283FR9P1366_F5 191 6880 720 1,04E-03 46414 4695 P283FR9P1366_F8 192 3970 369 4,03E-03 26970 2269 P283FR9P1366_F9 193 33559 6295 4,94E-04 84279 24622 P283FR9P1366_G1 194 3605 650 8,72E-04 39796 4981 P283FR9P1366_G5 195 8450 261 7,05E-04 36380 369 P283FR9P1366_G8 196 6857 574 1,08E-03 37144 3126 P283FR9P1366_H10 197 25020 2414 6,30E-04 75192 13854 P283FR9P1366_H11 198 18896 2331 1,39E-03 37386 3659 P283FR9P1366_H3 199 7671 632 1,21E-03 40770 3173 P283FR9P1366_H5 200 3137 252 3,18E-03 5091 477 P283FR9P1366_H6 201 43937 7129 2,05E-04 81542 18993 P283FR9P1366_H7 202 13778 567 1,77E-03 24435 1238 P283FR9P1366_H8 203 24942 4544 1,75E-04 61256 17144 P283FR9P1366_H9 204 8570 693 1,98E-03 36501 2877 P283GR7P1367_A11 205 11326 1029 6,35E-04 66691 5666 P283GR7P1367_B4 206 8302 446 5,18E-03 396 367 P283GR7P1367_B7 207 10865 739 1,27E-03 37518 3134 P283GR7P1367_B9 208 11242 1092 1,16E-03 2924 442 P283GR7P1367_C9 209 10989 896 2,21E-03 66977 5553 P283GR7P1367_E5 210 10014 1333 1,24E-03 3189 533 P283GR7P1367_F5 211 4565 601 1,08E-03 28950 2051 P283GR7P1367_G8 212 1463 450 3,85E-03 21031 1421 P283GR7P1367_H2 213 1621 390 2,35E-03 4207 864 P283GR7P1367_H8 214 5269 303 9,74E-03 20918 930 P283GR7P1367_H9 215 1714 434 1,47E-03 6121 918 P283HR7P1368_A10 216 13632 3233 5,13E-04 42326 4772 P283HR7P1368_B12 217 13399 1538 4,53E-05 18650 826 P283HR7P1368_C3 218 12727 2215 3,49E-04 13326 1306 P283HR7P1368_D1 219 14077 2312 1,66E-03 7850 1408 P283HR7P1368_D2 220 15246 1907 1,30E-03 11132 950 P283HR7P1368_D4 221 28979 6850 2,35E-04 52999 23549 P283HR7P1368_F10 222 18836 2661 1,65E-04 16121 1019 P283HR7P1368_F6 223 14325 3510 1,80E-04 20580 3541 P283HR7P1368_G1 224 31276 4940 2,15E-03 69817 11559 P283HR7P1368_G10 225 8122 753 1,45E-03 23790 2660 P283HR7P1368_G11 226 19305 2647 3,73E-04 14857 1343 P283HR7P1368_H1 227 15389 2460 5,52E-04 17285 1974 P283HR7P1368_H8 228 22758 1612 7,63E-04 35932 4888 Tencon25-His 270 341 219 337 336

Скрининг на связывание с Т-лимфоцитов доноров - человека и яванского макака

Связывание 190 ИФА совпадений с первичными CD8 Т-лимфоцитами человека и яванского макака оценивали с помощью проточной цитометрии. Молекулы домена FN3 разбавляли до 2 мкМ и 0,2 мкМ в ФСБ, и инкубировали с CD8+ Т-лимфоцитами человека или яванского макак в 96-луночном формате. Через 1 час при 4°С клетки один раз промывали ФСБ и затем ресуспендировали в растворе антитела против домена FN3 (PAB25). После данной инкубации клетки дважды промывали ФСБ и добавляли PE-конъюгированное (PE - фикоэритрин) вторичное антитело и краситель для определения жизнеспособности. Наконец, клетки промывали и ресуспендировали в ФСБ для анализа с помощью проточной цитометрии с использованием инструмента BD Canto. Ворота настраивали на пропускание живых клеток, и медианную интенсивность флуоресценции связанных центиринов (PE-канал) рассчитывали с использованием программного обеспечения Cytobank. Результаты подытожены в Таблице 4.

Анализ скорости отсоединения центиринов против CD8-альфа человека

Очищенные анти-CD8A домены FN3 подвергали анализу скорости отсоединения с использованием прибора поверхностного плазмонного резонанса Proteon для отбора клонов с самыми медленными скоростями отсоединения для дополнительного охарактеризования. Измеренные скорости отсоединения варьировали от 2,64E-5 до 1,07E-2 с-¹, как показано в Таблице 4.

Козий анти-Fc человека IgG (Jackson immunoresearch, кат. № 109-005-098) прямо иммобилизовали на сенсорном чипе GLC при 10 мкг/мл, pH 5,0, посредством аминного связывания (pH 5,0) во всех 6 лигандных каналах в вертикальной ориентации на чипе, со скоростью потока 30 мкл/мин в PBST (ФСБ, 0,005% Tween). Плотности иммобилизованного GAH-Fc IgG составляли в среднем около 6000 единиц ответа (Ru) с вариацией меньше чем 1% между различными каналами. CD8A-Fc человека по собственной методике захватывали в вертикальной ориентации при 3 различных плотностях лигандов, 10, 5, 2,5 мкг/мл в течение 5 минут при скорости потока 30 мкл/мин. Все домены FN3 были нормализованы до концентрации 3 мкМ и протестированы на связывание в горизонтальной ориентации. Все 6 аналитических каналов были использованы для доменов FN3, чтобы максимизировать пропускную способность скрининга. Фазу диссоциации контролировали в течение 15 минут при скорости потока 100 мкл/мин, используя PBST в качестве рабочего буфера. Регенерация поверхности достигалась коротким промыванием 0,85% фосфорной кислоты (время контакта 18 с при 100 мкл/мин). Анализ данных проводили с использованием программного обеспечения Bio-Rad ProteOn Manager (версия 3.1.0.6). Необработанные данные были проанализированы с учетом контроля в виде пустого буфера (double reference, blank buffer reference), путем вычитания из сигналов точек взаимодействия (пустая поверхность чипа, без иммобилизованного или захваченного белка) для коррекции неспецифического связывания домена FN3 с предварительно покрытой GAH-Fc IgG поверхностью с последующей двойной коррекцией с использованием пустого канала L6, в котором не был захвачен hCD8A-Fc. Обработанные данные связывания локально подгоняли к простой модели связывания Ленгмюра 1:1, чтобы получить k_от для каждого связывания домена FN3 с захваченным hCD8A-Fc.

ПРИМЕР 4. Конструирование анти-CD8A доменов FN3

Был спроектирован ряд мутаций в лучших кандидатах анти-CD8A, чтобы исключить риски посттрансляционных модификаций (ПТМ): окисления (метионин или триптофан), дезамидирования (NS), изомеризации (DG) и отсечения (DP). Остатки пролина, обнаруженные в бета-листах, также подвергали мутированию, поскольку пролин обладает потенциалом дестабилизации бета-листов (Chiba T., et al. J Biol Chem. 2003;278:47016-24). Только остатки, полученные из библиотеки доменов FN3 с спроектированными позициями, рассматривались на предмет мутации. Вариантные последовательности были выбраны либо для имитации сходных химических свойств исходной молекулы (например, триптофан на тирозин), либо для замены аминокислоты с рисковой ПТМ, обнаруженной в других доменах FN3 CD8A в этой позиции. Полный список сконструированных последовательностей приведен в Таблице 5. Скорость диссоциации для каждого мутанта и рекомбинантного CD8-альфа измеряли с помощью поверхностного плазмонного резонанса для оценки относительной силы связывания.

Таблица 5. Скорости диссоциации CD8A центириновых мутантов. Мутанты сгруппированы по исходной молекуле.

Образец k_от (1/с) Мутации SEQ ID NO: P282DR9P1359_C5 1,47E-04 Исходная 68 CD8S402 4,84E-05 D40P 266 CD8S396 1,52E-04 W32Y 260 CD8S398 4,43E-04 W32S 262 CD8S397 6,60E-04 W32Q 261 CD8S399 1,34E-03 W38Y 263 CD8S401 1,27E-02 W38I 265 CD8S400 2,26E-02 W38L 264 CD8S404 3,09E-02 P36A 268 P282DR9P1359_F5 5,78E-05 Исходная 79 CD8S371 1,94E-04 W48Y 235 CD8S377 4,00E-04 W81E 241 CD8S374 4,03E-04 W81Y 238 CD8S372 5,71E-04 W48L 236 CD8S375 8,30E-04 W81L 239 CD8S376 8,46E-04 W81S 240 CD8S373 4,03E-03 W48I 237 P282DR9P1359_G7 1,06E-05 83 CD8S379 4,97E-05 D43S 243 CD8S378 5,80E-05 D43E 242 CD8S388 7,54E-05 N81Q 252 CD8S387 1,25E-04 W83E 251 CD8S381 2,00E-04 W70F 245 CD8S383 7,47E-04 W74Y 247 CD8S380 1,21E-03 W70Y 244 CD8S382 2,47E-01 W70S 246 P282ER9P1360_C8 1,79E-04 Исходная 89 CD8S390 1,52E-04 W68Y 254 CD8S389 1,84E-04 W68F 253 CD8S391 3,20E-04 W68H 255 CD8S405 1,14E-03 P48T 269 P282DR9P1359_F7 3,39E-04 Исходная 81 CD8S403 1,33E-04 P36A 267 CD8S392 1,55E-03 W38Y 256 CD8S395 1,89E-03 W38H 259 CD8S393 2,55E-03 W38L 257 CD8S394 3,55E-03 W38I 258

Из данных, представленных в Таблице 5, очевидно, что ряд мутаций, которые снижают риски при разработке, поддерживают скорости диссоциации, сходные с таковыми у исходной молекулы. Мутанты CD8S402 (удаление сайта DP), CD8S390 (удаление остатка Trp) и CD8S403 (удаление Pro из бета-листа) давали более медленные скорости диссоциации, чем соответствующая исходная молекула, что свидетельствует о более тесном связывании. Ряд других мутаций поддерживает связывание, подобное исходной молекуле, и, следовательно, могут быть предпочтительнее исходных, поскольку данные молекулы имеют меньший риск, связанный с CMC, во время разработки.

ПРИМЕР 5. ИЗМЕРЕНИЕ АФФИННОСТИ CD8A-СВЯЗЫВАЮЩИХ ДОМЕНОВ FN3.

Девятнадцать анти-CD8A кандидатов были отобраны для полного кинетического анализа связывания с рекомбинантным CD8-альфа человека. Данные кандидаты были выбраны из указанных выше положительных совпадений (Таблица 4) с использованием критериев: 1) сильное относительное связывание с Т-лимфоцитами человека, 2) сильное относительное связывание с Т-лимфоцитами яванского макака, 3) минимальное снижение связывания клеток при 0,2 мкМ по сравнению до 2 мкМ, 4) без агрегатов при SEC, 5) скорости отсоединения медленнее, чем 2,07E-3 с-1, 6) разнообразие последовательностей в соответстви с семействами последовательностей, и 7) относительная склонность последовательностей к потенциальным проблемами разработки (окисление, дезамидирование, отсечение и гидрофобность).

Аффинности 19 лучших кандидатов, и затем повторно 6 лучших кандидатов, связывающихся с hCD8A-Fc, измеряли на приборе ProteOn XPR36 (Bio-Rad) с использованием сенсорных чипов GLC в условиях, аналогичных условиям для скрининга k_от. Козье анти-Fc человека антитело прямо иммобилизировали на чипе стандартным аминным связыванием при 10 мкг/мл, pH 5,0 на всех 6 лигандных каналах в вертикальной ориентации, на чипе, со скоростью потока 30 мкл/мин в PBST (ФСБ, 0,005% Tween), достигая в среднем 6200 ЕО на каждом канале лиганда. Затем CD8A-Fc человека захватывали при пяти плотностях поверхности в диапазоне от 200 до 1200 единиц ответа, оставляя 6-й канал в качестве пустого канала контроля для поверхности GAH-Fc IgG. Связывание измеряли, пропуская пять различных концентраций анти-CD8A доменов FN3 (1 мкМ, разведенных в 3-кратной серии разведений) в качестве аналитов одновременно в горизонтальной ориентации над поверхностями с захваченными hCD8A-Fc, с шестым каналом аналита, содержащим только рабочий буфер PBST. Все взаимодействия измеряли при скорости потока 100 мкл/мин, при этом время соединение и отсоединение составляло 4, 30 минут соответственно. Восстановление поверхности лиганда достигали за 1 короткую промывку 0,85% фосфорной кислотой (время контакта 18 с при 100 мкл/мин). Анализ данных проводили с использованием программного обеспечения Bio-Rad ProteOn Manager (версия 3.1.0.6). Необработанные данные были проанализированы с учетом контроля в виде пустого буфера (double reference, blank buffer reference), путем вычитания из сигналов точек взаимодействия (пустая поверхность чипа, без иммобилизованного или захваченного белка) для коррекции неспецифического связывания домена FN3 с предварительно покрытой GAH-Fc IgG поверхностью, с последующим использованием пустого буфера в качестве контроля (для коррекции какого-либо базового отклонения возникающего при отсоединении лиганда с течением времени). В многочисленных анализах неизменно наблюдали, что данные связывания анти-CD8A-домена FN3 не соответствуют в полной мере простой модели связывания Ленгмюра 1:1, что подразумевает проблемы с реагентами и/или внутренние сложные механизмы связывания, которые нельзя объяснить для использования простой модели связывания 1:1. Учитывая, что захват GAH-Fc формы hCD8A-Fc является наименее разрушительным по сравнению с другими формами относительно внесения возможных экспериментальных артефактов (таких как потеря активности лиганда и/или искусственная популяция эптиопов/гетерогенных лигандов из-за присоединения амина), считается, что результаты экспериментов по захвату с GAH-Fc, представленные в данном документе, представляют собой наиболее надежные данные ProteOn SPR, несмотря на несовпадающие 1:1 кривые по Ленгмюру, что наблюдается во многих случаях. Модель гетерогенного лиганда была выбрана, чтобы соответствовать данным, предполагающим наличие двух разных видов лигандов, либо из-за гетерогенности в популяции белка-лиганда, либо из-за возможных различных механизмов связывания каждого домена FN3 с 2 мономерами hCD8A в гибридном белке Fc. В данном случае, поскольку каждый анти-CD8A домен FN3 будет иметь различные аффинности, результирующая сенсограмма отражает сумму двух независимых реакций с двумя наборами констант скорости, которые были зарегистрированы для каждого связывания домена FN3.

Таблица 6. Обобщенные данные кинетики аффинностей для шести лучших анти-CD8A доменов-кандидатов FN3. Примечание: Аффинность, K_Д=k_д/k_а

Образец
(SEQ ID NO:) Популяция с более низкой аффинностью Популяция с более высокой аффинностью k_а(1/
Mс) k_д (1/с) K_Д (нM) k_а(1/
Mс) k_д (1/с) K_Д (нM) P282DR9P1359_F5
79 3,48E+04 6,60E-05 6,6 3,80E+05 1,42E-05 0,04 P282DR9P1359_F7
(81) 4,03E+04 3,65E-04 12 4,04E+05 7,99E-05 0,5 P282DR9P1359_G7
(83) 6,84E+04 5,51E-05 2,1 2,76E+05 1,49E-05 0,05 P282ER9P1360_C8
(89) 3,09E+04 9,52E-05 4,1 2,18E+05 4,71E-05 0,2 P283AR9P1362_D6
(122) 5,62E+04 3,12E-05 0,98 1,55E+05 1,00E-06 0,03 P282DR9P1359_C5
(68) 1,92E+04 1,27E-04 6,5 3,00E+05 5,79E-06 0,02

ПРИМЕР 6. Мечение анти-CD8A доменов FN3 с помощью DFO и 89Zr

Анти-CD8A домены FN3 были модифицированы для включения в себя одного остатка цистеина для конъюгации хелаторов, содержащих малеимид, или ПЭТ-меток. Синтетическая плазмидная ДНК, кодирующая клоны P282DR9P1359_F5, P282DR9P1359_F7, P282DR9P1359_G7, P282ER9P1360_C8, P283AR9P1362_D6, и P282DR9P1359_C5 с мутацией остатка E54 на цистеин, была синтезирована в DNA2.0 (Таблица 7). E54 был выбран в качестве позиции для мутации на основе более ранних исследований, которые продемонстрировали поддержание аффинности связывания, стабильности и уровней экспрессии других доменов FN3, мутированных по этому остатку (Goldberg S. et al. Protein Engineering Design and Selection 2016 Epub ahead of print).

Таблица 7. Модифицированные молекулы анти-CD8A домена FN3

Исходный клон SEQ ID NO: Клон с E54C SEQ ID NO: P282DR9P1359_F5 79 CD8S368 229 P282DR9P1359_F7 81 CD8S367 230 P282DR9P1359_G7 83 CD8S370 231 P282ER9P1360_C8 89 CD8S365 232 P283AR9P1362_D6 122 CD8S369 233 P282DR9P1359_C5 68 CD8S366 234

Домены анти-CD8A FN3, модифицированные свободным цистеином, конъюгировали с дефероксамином (DFO) для хелатирования радиометаллов. 0,5 мл 100-500 мкМ раствора анти-CD8A домена FN3 объединяли с 10 мкл 500 мМ TCEP (Sigma, cat. # 646547), осторожно продували азотом и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. 1,0 мл насыщенного сульфата аммония (4,02 М) добавляли в каждую пробирку для достижения конечной концентрации 3,2 М перед инкубацией на льду в течение 10 минут и центрифугированием при 16000 × g или выше для осаждения белка. Полученный осадок ресуспендировали и промывали в 1,0 мл 3,2 М сульфата аммония с добавлением 100 мМ фосфата натрия, рН 7,2 и 1 мМ ЭДТК перед повторным центрифугированием. После второго этапа центрифугирования полученный осадок растворяли в 100 мМ фосфате натрия 7,0, 1 мМ ЭДТК и объединяли с 10 мкл 50 мМ раствора DFO, чтобы получить конечное молярное отношение 5:1 DFO к анти-CD8A. Данной реакции позволяли проходить при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем гасили 5,0 микролитрами бета-меркаптоэтанола. Избыток DFO окончательно удаляли различными способами, включая второй раунд осаждения сульфатом аммония, как описано выше, пропусканием через обессоливающую колонку, такую как колонка Zeba 7k (Pierce кат. № 89889), или путем очистки смолой Nickle-NTA (Qiagen кат. № 30450). Конъюгаты анти-CD8A домен FN3-DFO готовили в 1X ФСБ для дополнительного анализа.

После конъюгирования с DFO связывание каждого анти-CD8A домена FN3 с рекомбинантным человеческим CD8-альфа оценивали с помощью поверхностного плазмонного резонанса, как описано ранее. Все образцы сохраняли тесное связывание с CD8A человека после мутации E54 на Cys и конъюгации с DFO (Таблица 8).

Таблица 8. Аффинность связывания после конъюгации ДФО

Образец Популяция с более низкой аффинностью Популяция с более высокой аффинностью k_с (1/Mс) k_от (1/с) K_Д (нM) k_с (1/Mс) k_от (1/с) K_Д (нM) CD8S365-DFO 4,41E+03 4,29E-05 9,73 6,80E+04 4,18E-05 0,6 CD8S366-DFO 5,85E+03 1,06E-04 18,2 7,95E+04 7,01E-05 0,9 CD8S367-DFO 1,09E+04 9,75E-04 89,1 8,45E+04 1,31E-04 1,55 CD8S368-DFO 7,32E+03 9,98E-05 13,6 1,08E+05 2,53E-05 0,23 CD8S369-DFO 2,87E+03 ≤ 1 E-05 ≤ 3,4 3,73E+04 ≤ 1 E-05 ≤ 0,3 CD8S370-DFO 5,91E+03 7,65E-05 13 4,64E+04 ≤ 2E-05 ≤ 0,3

ПРИМЕР 7. Связывание анти-CD8a доменов FN3 с Т-лимфоцитами человека и яванского макака.

Кривая связывания ответа на полную дозу была получена для девятнадцати выбранных анти-CD8A доменов FN3. Каждого кандидата разводили до 20 мкМ в ФСБ с помощью ряда разведений 1:3, чтобы получить либо кривую зависимости от дозы из 11 или 18 точек. CD8+ Т-лимфоциты человека и яванского макака инкубировали с разведенным доменом FN3 в течение 1 часа при 4°С. Клетки промывали один раз ФСБ и инкубировали с анти-центирин антителом (PAB25) в течение 1 часа при 4°C. Клетки дважды промывали ФСБ с последующей инкубацией с PE-вторичным анти-CD3-PacB, анти-CD4-APC и красителем жизнеспособности. Наконец, клетки промывали и ресуспендировали в ФСБ для анализа с помощью проточной цитометрии с использованием инструмента BD Canto. CD8 Т-лимфоциты определяли, как живые CD3+CD4- клетки. Медианная интенсивность флуоресценции связанных центиринов (PE-канал) и % клеток, демонстрирующих положительное окрашивание, рассчитывали с использованием программного обеспечения Cytobank. Результаты были нанесены на график с использованием Prism, а значения EC₅₀ были рассчитаны с использованием 4-рех параметрического уравнения кривой зависимости от дозы с вариабельным угловым коефициентом.

Для определения аффинности шести лучших анти-CD8A кандидатов, связывающихся с поверхностными рецепторами CD8A цитотоксического Т-лимфоцита человека, выполняли анализ равновесного связывания клеток на основе технологии MesoScale Discovery-Cell Affinity (MSD-CAT). Каждый анти-CD8A домен FN3 при неизменной концентрации 50 пМ предварительно инкубировали с 10 различными концентрациями первичных цитотоксических CD8 Т-лимфоцитов (столбцы 2-11 подряд). Жизнеспособность клеток проверяли перед измерениями связывания, и для достоверного анализа требовалась жизнеспособность >85%. Поскольку данные клетки были от разных доноров, в случае вариаций в зависимости от донора, только клетки тех же доноров объединяли вместе. Связывание каждого отдельного анти-CD8A домена FN3 измеряли в повторностях с использованием клеток от тех же доноров. Клетки и домены FN3 инкубировали в течение ночи при 4°С в встряхиватиле для достижения равновесия. После инкубации клетки центрифугировали вместе со связанными с клетками анти-CD8A доменами FN3, а несвязанные (свободные) анти-CD8A домены FN3 в супернатантах количественно определяли с использованием анализов MSD, где биотинилированный рекомбинантный белок hCD8A-Fc захватывался при 0,6 мкг/мл в аналитическом буфере в стрептавидиновой плашке MSD в течение ночи, примерно 16 часов при 4°С. После блокирования плашки, в плашку добавляли супернатант с свободными анти-CD8A доменами FN3 и инкубировали в течение 1 часа, а затем проводили детекцию с помощью SulfoTag pAb139 (собственная методика) при 1,6 мкг/мл. Был включен контроль в виде буфера без какого-либо домена FN3 и hCD8A (контроль базового связывания с плашкой) в колонке 1, а также контроль только для домена FN3 без hCD8A (100% свободный/несвязанный) в колонке 12. Мышиное анти-hCD8A мАт (mIgG1k, BD Biosciences, кат. № 555364, клон RPA-T8) было включено в качестве положительного контроля. Tencon27 был включен в первоначальную валидацию анализа в качестве отрицательного контроля и не наблюдалось значительное связывание, и поэтому, он не был включен в последующее связывание клеток из-за доступности клеток. Плашки сразу считывали на MSD Sector Imager 6000 Reader для определения уровней люминесценции после добавления буфера MSD Read путем разбавления исходного раствора 1:4 H2O.

Необработанные данные MSD экспортировали и анализировали в Prism с использованием нелинейной подгонки с функцией с переменным коэффициентом наклона для получения значений Bmax и Hillslope. Только те, у которых сходились значения Bmax и hillslope в диапазоне от -1,5 до -0,5 (идеально -1,0), учитывали в дальнейшем анализе. Затем данные по связыванию были нормализованы с использованием значений Bmax для расчета нормализованного % свободных доменов FN3. Для расчета концентрации рецепторов была использована поверхность CD8 с плотностью, составляющей 50000 рецепторов/клетка. Критерий насыщения <20% свободного центирина при самых высоких концентрациях клеток CD8 требовался для определения аффинности с использованием «Уравнения аффинности растворов для нормализованных данных» для модели связывания 1:1.

Анти-CD8A домены FN3 связываются с первичными клетками с аффинностями в диапазоне от 0,167 до 2,81 нМ (Таблица 9).

Таблица 9. Обобщенные данные по значениям EC₅₀ для шести лучших кандидатов анти-CD8A доменов FN3.

Идентификатор клона
(SEQ ID NO:) Связывание EC50 для человеческих Т-лимфоцитов согласно проточной цитометрии (нМ) Связывание EC50 для Т-лимфоцитов яванского макака согласно проточной цитометрии (нМ) Аффинность для Т-лимфоцитов человека согласно MSD-CAT (нМ) CD8S365
(232) 556,0 123,6 0,167 CD8S366
(234) 162,7 69,5 0,123 CD8S367
(230) 194,5 50,8 0,225 CD8S368
(229) 154,7 70,0 0,459 CD8S369
(233) 124,2 72,3 2,81 CD8S370
(231) 208,7 67,6 0,869

ПРИМЕР 8. Активация Т-лимфоцитов человека

Активация de novo

Чтобы определить, активируют ли анти-CD8A домены FN3 Т-лимфоциты, был проведен анализ проточной цитометрии для наблюдения изменений маркеров активации Т-лимфоцитов. Шесть анти-CD8A доменов FN3 были проверены на активацию Т-лимфоцитов. Активацию de novo оценивали путем инкубации доменов FN3 при концентрации 1 мкМ или 10 нМ в двух повторностях с pan-Т-лимфоцитами человека в среде в течение 4 дней. Были протестированы два независимых донора. Связанный с плашкой анти-CD3 использовали в качестве положительного контроля в 2 дозах, 0,1 мкг/мл и 0,01 мкг/мл. ФСБ использовали в качестве отрицательного контроля. Затем клетки окрашивали красителем жизнеспособности и следующей панелью антител: CD4-FITC, CD3-PerCP-Cy5.5, CD69-PacB, CD45RA-BV605, CD25-BV650, CD127-PE и CD137-PE-Cy7. CD8+ лимфоциты определяли, как живые CD3+CD4-клетки и они были профилированы для каждого маркера активации Т-лимфоцитов. Медианные значения интенсивности флуоресценции рассчитывали с использованием программного обеспечения FlowJo, а значения повторностей усредняли. Результаты подытожены в Таблице 10А (донор 022) и 10В (донор 146). Для 365, 366, 367, 368 и 370 наблюдали небольшие изменения маркеров активации Т-лимфоцитов только у 1 из 2 доноров, протестированных при самом высоком уровне дозы, составляющем 1 мкМ. Такие изменения отсутствовали у обоих доноров при дозе 10 нМ, что свидетельствует о том, что молекулы не активируют Т-лимфоциты de novo при соответствующих концентрациях. Молекула 369, по-видимому, значительно активирует экспрессию CD137 у обоих доноров при самом высоком уровне дозы.

Таблица 10. Медианные значения интенсивности флуоресценции (МИФ) для различных маркеров активации Т-лимфоцитов на CD8+ Т-лимфоцитах для донора 022 (A) и донора 146 (B)

A

Донор Образец
(SEQ ID NO:) Конц. анти-CD8A FN3 мкM Анти-CD3 мкг/
мл CD45RA МИФ CD25 МИФ CD69 МИФ CD127 МИФ CD137 МИФ 022 Контроль ФСБ 0 0 12856 571 223 651 296 022 Контроль ФСБ 0 0,01 13133 707 403 517 343 022 Контроль ФСБ 0 0,1 11394 1333 1694 158 529 022 CD8S366
(234) 1 0 15054 949 477 425 310 022 CD8S366
(234) 0,01 0 13336 814 230 586 301 022 CD8S368
(229) 1 0 12992 858 698 367 329 022 CD8S368
(229) 0,01 0 15262 677 276 489 306 022 CD8S367
(230) 1 0 15409 796 401 511 297 022 CD8S367
(230) 0,01 0 13666 723 261 502 312 022 CD8S370
(231) 1 0 12946 916 572 376 353 022 CD8S370
(231) 0,01 0 14973 776 353 435 331 022 CD8S365
(232) 1 0 13935 904 562 367 328 022 CD8S365
(232) 0,01 0 15156 697 243 504 323 022 CD8S369
(233) 1 0 13661 783 440 441 5122 022 CD8S369
(233) 0,01 0 16513 717 251 596 416 022 TenCon 1 0 14920 702 284 447 334

B

Донор Образец
(SEQ ID NO:) Конц. анти-CD8A FN3 мкM Анти-CD3 мкг/
мл CD45RA МИФ CD25 МИФ CD69 МИФ CD127 МИФ CD137 МИФ 146 ФСБ 0 0 7172 627 61 1313 500 146 ФСБ 0 0,01 8076 681 153 1296 617 146 ФСБ 0 0,1 5171 1462 1100 139 798 146 CD8S366
(234) 1 0 8531 673 95 1368 589 146 CD8S366
(234) 0,01 0 9414 623 74 1615 559 146 CD8S368
(229) 1 0 8386 691 96 1301 561 146 CD8S368
(229) 0,01 0 9147 628 82 1424 586 146 CD8S367
(230) 1 0 8167 660 95 1322 581 146 CD8S367
(230) 0,01 0 8734 586 77 1479 571 146 CD8S370
(231) 1 0 8590 737 86 1362 583 146 CD8S370
(231) 0,01 0 7934 635 71 1526 559 146 CD8S365
(232) 1 0 8344 813 85 1238 586 146 CD8S365
(232) 0,01 0 8460 628 80 1355 605 146 CD8S369
(233) 1 0 8778 681 92 1369 5690 146 CD8S369
(233) 0,01 0 7862 591 74 1498 784 146 TenCon 1 0 7325 609 78 1198 574 146 TenCon 0,01 0 7764 596 66 1281 530

Активация pan-Т-лимфоцитов

Чтобы определить, могут ли анти-CD8A домены FN3 влиять на маркеры активации Т-лимфоцитов в pan-активных Т-лимфоцитах, анти-CD8A домены FN3 также оценивали в комбинации с низкой дозой CD3, связанного с плашкой. В данном анализе была использована субоптимальная концентрация (0,01 мкг/мл) связанного с плашкой анти-CD3 для активации Т-лимфоцитов в присутствии 1 мкМ или 10 нМ анти-CD8A. Через 4 дня клетки оценивали с использованием той же панели и стратегии пропускания через ворота, как описано выше. Были протестированы два независимых донора. Медианные значения интенсивности флуоресценции рассчитывали с использованием программного обеспечения FlowJo, а значения повторностей усредняли. Результаты подытожены в Таблице 11А (донор 022) и 11В (донор 146).

Таблицы 11А и В: Медианные значения интенсивности флуоресценции (МИФ) для различных маркеров активации Т-лимфоцитов на CD8+ Т-лимфоцитах для донора 022 (A) и донора 146 (B) в присутствии связанного с плашкой CD3.

A

Донор Образец
(SEQ ID NO:) Конц. анти-CD8A FN3 мкM Анти-CD3 мкг/
мл CD45RA МИФ CD25 МИФ CD69 МИФ CD127 МИФ CD137 МИФ 022 Контроль ФСБ 0 0 12856 571 223 651 296 022 Контроль ФСБ 0 0,01 13133 707 403 517 343 022 Контроль ФСБ 0 0,1 11394 1333 1694 158 529 022 CD8S366
(234) 1 0,01 11918 892 1005 369 376 022 CD8S366
(234) 0,01 0,01 13417 1068 848 384 399 022 CD8S368
(229) 1 0,01 11311 1147 1279 260 428 022 CD8S368
(229) 0,01 0,01 13441 760 599 499 348 022 CD8S367
(230) 1 0,01 13271 1135 1127 367 385 022 CD8S367
(230) 0,01 0,01 14521 960 636 483 362 022 CD8S370
(231) 1 0,01 15138 1103 890 407 378 022 CD8S370
(231) 0,01 0,01 14230 875 612 431 355 022 CD8S365
(232) 1 0,01 14395 1112 907 380 407 022 CD8S365
(232) 0,01 0,01 14006 1175 1063 297 430 022 CD8S369
(233) 1 0,01 13735 877 759 464 5457 022 CD8S369
(233) 0,01 0,01 13864 842 617 450 498 022 TenCon 1 0,01 14687 791 553 408 358 022 TenCon 0,01 0,01 13090 759 630 464 368

B

Донор Образец
(SEQ ID NO:) Конц. анти-CD8A FN3 мкM Анти-CD3 мкг/
мл CD45RA МИФ CD25 МИФ CD69 МИФ CD127 МИФ CD137 МИФ 146 Контроль ФСБ 0 0 12856 571 223 651 296 146 Контроль ФСБ 0 0,01 13133 707 403 517 343 146 Контроль ФСБ 0 0,1 11394 1333 1694 158 529 146 CD8S366
(234) 1 0,01 6798 876 163 1095 632 146 CD8S366
(234) 0,01 0,01 8589 775 158 1077 637 146 CD8S368
(229) 1 0,01 6576 945 175 1105 662 146 CD8S368
(229) 0,01 0,01 7608 843 200 950 678 146 CD8S367
(230) 1 0,01 6447 897 173 1088 672 146 CD8S367
(230) 0,01 0,01 7899 801 175 1031 655 146 CD8S370
(231) 1 0,01 7327 992 169 1055 687 146 CD8S370
(231) 0,01 0,01 8676 790 183 946 675 146 CD8S365
(232) 1 0,01 6624 977 172 1059 670 146 CD8S365
(232) 0,01 0,01 7902 843 193 985 659 146 CD8S369
(233) 1 0,01 7660 933 165 1149 7114 146 CD8S369
(233) 0,01 0,01 7892 854 187 989 842 146 TenCon 1 0,01 8352 829 170 1026 658 146 TenCon 0,01 0,01 7627 761 185 1043 673

Цитокиновый ответ

Чтобы определить, наблюдаются ли какие-либо изменения в маркерах активации, приводящих к изменениям в продуцировании цитокинов, выполняли анализы зависимой от антигена активации Т-лимфоцитов с использованием двух анти-CD8A доменов FN3. В одном наборе анализов размораживали либо ЦМВ-реактивные, либо М1 реактивные МКПК человека, и оставляли на ночь при 37°C в 6-луночных плашках. На следующий день МКПК собирали пипеткой, подсчитывали и высевали в плашки гамма-ИНФ Mabtech ELISpot в присутствии или в отсутствие 10 мкг/мл пептида. В лунки добавляли 1 мкМ конъюгата анти-CD8A-FN3-DFO, и плашки инкубировали при 37°С в течение примерно 24 часов не трогая. Клетки удаляли и плашки 5 раз промывали ФСБ. Добавляли детектирующее антитело и плашки инкубировали в течение 2 часов. Плашки снова промывали и в каждую лунку добавляли субстрат набора. Плашки выдерживали в течение примерно 5 минут, прежде чем останавливали реакцию, помещая плашку в воду. Плашки сушили вверх дном в темноте. Плашки считывали с помощью AID EliSpot Reader и подсчитывали пятна с использованием программного обеспечения AID EliSpot. Результаты были представлены в виде графике в Prism. Результаты подытожены в Фиг. 1. В данном анализе 365-DFO не увеличивает количество пятен гамма-ИНФ по сравнению с только средой (питательной) или контролем TenCon, не связывающимся с CD8A, в отсутствие пептида (Фиг. 1A, 1C). Пептид и CD3 включены в качестве положительных контролей. В присутствии пептида 365-DFO не изменяет количество пятен гамма-ИНФ по сравнению с только пептидом или пептидом с TenCon, не связывающимся с CD8A (Фиг. 1B, 1D). Среда включен в качестве отрицательного контроля, а CD3 включен в качестве положительного контроля. Данные результаты показывают, что центирин не влияет на активацию Т-лимфоцитов.

Чтобы подтвердить данные результаты в более длительном анализе, уровни гамма-ИНФ также измеряли в 6-дневном анализе активации. Для данного исследования ЦМВ-реактивные МКПК инкубировали в трех повторностях с анти-CD8A доменами FN3 при 1 мкМ в присутствии или в отсутствие 0,25 мкг/мл пептида pp65. Клетки инкубировали в течение 6 дней при 37°С. В каждый момент времени клетки центрифугировали и собирали супернатант. Образцы хранили при -80°С до анализа. Размороженные образцы были проанализированы на гамма-ИНФ с использованием ИФА на основе single-plex Meso Scale Discovery (MSD). Для данного анализа была подготовлена стандартная кривая согласно инструкциям производителя. Образцы и стандарты добавляли в предварительно покрытые 96-луночные плашки MSD. После 2-часовой инкубации добавляли детектирующее антитело набора. После еще двух часов инкубации плашки промывали трижды с последующим добавлением поставляемого буфера для считывания. Плашки считывали считыватели плашек MSD Sector Imager 6000. Файлы необработанных данных MSD были проанализированы в сравнении с стандартными кривыми, сгенерированным с использованием программного обеспечения MSD Discovery Workbench. Проанализированные данные были получены с помощью программы Tibco Spotfire. Результаты подытожены в Фиг. 2. В данном анализе 365-DFO не увеличивает секрецию гамма-ИНФ в питательной среде по сравнению с только питательной средой в отсутствие пептида (Фиг. 2A). Пептид ЦМВ включен в качестве положительного контроля. В присутствии пептида 365-DFO также не изменяет уровень секреции гамма-ИНФ по сравнению с только пептидом (Фиг. 2B). Питательная среда включена в качестве негативного контроля. Данные результаты показывают, что центирин не влияет на активацию Т-лимфоцитов.

ПРИМЕР 9. Мечение анти-CD8A доменов FN3 I124/I125

Текущий способ радиоактивного мечения CD8S365 иодом-124 для получения [¹²⁴I]-IPEM CD8S 365 (схема 1) был адаптирован из литературных методик (Bioconjugate Chem. 1991, 2, 435-440; ChemistryOpen 2015, 4, 174-182).

Схема 1: Синтез [¹²⁴I]-IPEM CD8S 365

В 1,5 мл эппендорф-пробирку добавляли по порядку: раствор Na¹²⁴I (≤13 мкл, ≤2,5 мКи), AcOH (5 мкл для подкисления раствора), 1-(4-(трибутилстаннил)фенетил)-1Н-пиррол-2,5-дион (75 мкл, 1,00 мг/мл в MeCN) и раствор иодогена (5 мкл, 1,00 мг/мл в MeCN). Реакционную смесь оставляли на 5 мин при комнатной температуре.

Неочищенную реакционную смесь разбавляли 0,5 мл 20% EtOH/H₂O и очищали непосредственно в препаративной ВЭЖХ, время удержания=14,4 мин (Фиг. 3). [¹²⁴I]-IPEM собирали в флакон (1 драм), который был предварительно обработан Sigma-Cote™ (затем промыт 3 мл 70% EtOH, а затем 3 мл H₂O); общий объем собранного продукта препаративной ВЭЖХ <750 мкл.

Аликвоту (примерно 5-25 мкКи) очищенной фракции затем применяли в аналитической ВЭЖХ (Фиг.4, время удержания=11,7 мин).

Очищенный [¹²⁴I]-IPEM затем концентрировали в вакууме при температуре окружающей среды до объема <100 мкл.

Добавляли натрий-фосфатный буфер (1,0 М фосфат натрия, 1 мМ ЭДТК, pH=6,86) (≥25 мкл), чтобы довести pH до примерно 6,5-7 (проверено лакмусовой полоской). В конце добавляли свежеприготовленный CD8S 365 (концентрация примерно 4,57 мг/мл в 100 мМ натрий-фосфатном буфере, 1 мМ ЭДТК, pH=6,86) в соответствующем количестве для достижения целевой удельной активности (то есть, если целевая удельная активность 25 мКи/мг и собрали 2,0 мКи [¹²⁴I]-IPEM, то добавляли 17,5 мкл центирина в концентрации примерно 4,57 мг/мл). Реакцию конъюгирования оставляли на 60 мин при температуре окружающей среды, и ход реакции проверяли с помощью iTLC, чтобы убедиться, что конверсия превысила 90%.

Очистка состояла из разбавления реакционного раствора ФСБ/10% EtOH (1 мл, pH=7), переноса реакционного раствора из флакона (1 драм) в центробежный фильтр Mivo Vivaspin 6 5 кДа (смотрите дополнение к документу для предварительного кондиционирования). После переноса реакционный эппендорф промывали ФСБ/10% EtOH (2 × 1 мл, pH=7) и промывки добавляли на фильтр. Неочищенную реакционную смесь центрифугировали при 4000 об/мин, при 20°С в течение 30 минут. После центрифугирования оставалось <500 мкл раствора, и с помощью радио-ТСХ было обнаружено, что он обладает радиохимической чистотой (RCP)> 95% (Фиг. 5). Очищенный [¹²⁴I]-IPEM CD8S 365 разбавляли до объема 500 мкл ФСБ/10% EtOH, если объем составлял <500 мкл, а затем фильтровали через 0,22 мкм гидрофильную мембрану Durapore (PVDF) Millex-GV.

Радиохимический выход по протоколу составляет примерно 50% с радиохимической чистотой ≥95% RCP согласно радио-ТСХ). Аналитическую обращенно-фазовую ВЭЖХ использовали для определения концентрации белка и удельной активности конечного продукта. Среднее интегрирование пика при времени удержания=7,3 мин в УФ при λ=280 нм было использовано для экстраполяции концентрации белка из калибровочной кривой (на Фиг. 6 в качестве типичного примера). Также была проведена ко-инъекция с нерадиоактивным холодным стандартом IPEM CD8S 365 (анализ MALDI, показанный на Фис. 7) (смотрите Фиг. 8). Концентрацию бактериального эндотоксина измеряли с использованием портативной тест-системы Endosafe^®, используя 10-кратное разбавление водой с реагентом LAL.

Пример 10. Обнаружение экспрессии CD8 у яванских макак

Две молекулы анти-CD8A FN3 (CD8S365 и CD8S368) были отобраны для получения изображений PET у отличных от человека приматов (ОЧП). Молекулы анти-CD8A были радиоактивно мечены либо Zr-89 (Zevacor, Сомерсет, штат Нью-Джерси), либо I-124 (CPDC, Гамильтон, Канада и Zevacor, Сомерсет, штат Нью-Джерси). Примерно 1-2 мКи радиоактивно меченных молекул анти-CD8A вводили в подкожную вену самки ОЧП (яванский макак), одновременно анестезируя изофлураном в кислороде. Каждое животное сканировали с помощью сканера microPET Focus 220 PET с большим отверстием (Siemens, Ноксвилл, Теннесси), при этом кровать перемещали для размещения всего тела животного (от головы до нижней части живота). Каждое сканирование длилось примерно 1 час, и сканирования были получены через 15 минут, 2 часа и 24 часа после инъекции. ПЭТ-изображения были реконструированы с использованием алгоритма 2D максимизации максимального правдоподобия (ML-EM) в трехмерные изображения с размерами вокселей 1,898×1,898×0,796 мм, с размерами 128×128×475. Образцы крови отбирали несколько раз в разные моменты времени из подкожной вены лапы, противоположной инъецированной лапе, и радиоактивность крови была подсчитана на счетчике излучения с колодцем.

Изображения ПЭТ анализировали с использованием программного обеспечения PMOD v3.7 (PMOD, Цюрих, Швейцария). Области интереса были нарисованы вручную вокруг таких органов, как селезенка, почки и печень. Подсчеты были переведены в единицы процента инъецированной дозы на грамм ткани (% ИД/г), в то время как радиоактивность крови была представлена как % ИД. Репрезентативное изображение ПЭТ показано на Фиг. 9.

Кинетика в крови для каждого ОЧП и каждой молекулы анти-CD8A домена FN3 (меченной либо Zr-89, либо I-124) показана в Таблице 11 и подытожена на Фиг. 10. Для тех же животных и молекул анти-CD8A биораспределение в органах показано в Таблице 12 (единицы измерения % ИД/г) и подытожено на Фиг. 11. Молекулы, меченные Zr-89, демонстрировали остаточное присутствие радиоизотопа в выделительных органах, что вызывало сильный фоновый сигнал в почках, потенциально затемняя другие близлежащие ткани. Подобное в значительной степени отсутствовало в меченных I-124 молекулах. Поглощение селезенкой было очень сходным для двух разных молекул и двух разных радиоизотопов для всех моментов времени.

Таблица 11. Кинетика в крови для каждого центирина, меченного радиоактивным изотопом - либо Zr-89, либо I-124 (табличные данные представляют собой % ИД (инъецированная доза)).

Время (ч) 365 Zr-89 Время (ч) 368 Zr-89 Время (ч) 365 I-124 Время (ч) 368 I-124 0,38 32,49 0,25 75,64 0,40 73,53 0,33 50,56 0,62 17,62 0,50 44,01 0,65 44,59 0,57 37,07 1,18 9,03 0,75 32,06 0,92 29,79 0,87 19,33 2,00 6,12 1,00 24,20 1,13 24,51 1,17 16,01 3,70 3,77 1,50 18,82 2,00 17,14 1,37 12,84 24,00 1,36 2,00 14,22 3,33 10,92 2,07 12,18 3,33 8,40 3,88 8,20 24,00 1,94 23,03 1,24

Для тех же животных и молекул анти-CD8A биораспределение в органах показано в Таблице 12 (единицы измерения % ИД/г) и подытожено на Фиг. 11.

Таблица 12. Накопление в органах различных центиринов, меченных либо Zr-89, либо I-124 (табличные данные представляют собой %ИД/г).

365 Zr-89 Время (ч) Почка Селезенка Печень 0,25 ч 0,641 0,0386 0,0620 2 ч 0,624 0,0218 0,0513 24 ч 0,633 0,0136 0,0354 368 Zr-89 Время (ч) Почка Селезенка Печень 0,25 ч 0,575 0,0345 0,0740 2 ч 0,664 0,0307 0,0688 24 ч 0,931 0,0294 0,0508 365 I-124 Время (ч) Почка Селезенка Печень 0,25 ч 0,104 0,0324 0,0291 2 ч 0,065 0,0222 0,0142 24 ч Не собраны из-за технических проблем 368 I-124 Время (ч) Почка Селезенка Печень 0,25 ч 0,292 0,0357 0,0439 2 ч 0,140 0,0271 0,0241 24 ч 0,0089 0,0022 0,0029

Пример 11. Специфичность анти-CD8A доменов FN3 у яванских макак

Для того чтобы проверить специфичность молекул анти-CD8A, тех же обезьян обрабатывали химерным CD8-деплетирующим антителом (CM-T807 мышиное V/человеческое Fc анти-CD8 антитело) для уменьшения количества CD8+ T-лимфоцитов перед визуализацией. Животным вводили п/к 10 мг/кг CD8-деплетирующих антител за 3 дня до визуализации. Деплетирование CD8 было подтверждено путем измерения процентного содержания CD8 T-лимфоцитов в образцах крови, взятых у каждого животного до и после истощения (Фиг. 12).

Примерно 1-2 мКи радиоактивно меченых [I-124]CD8S365 молекул анти-CD8 домена FN3 вводили в подкожную вену самки ОЧП (яванский макак), одновременно анестезируя изофлураном в кислороде. Каждое животное сканировали с помощью сканера microPET Focus 220 PET с большим отверстием (Siemens, Ноксвилл, Теннесси), при этом кровать перемещали для размещения всего тела животного (от головы до нижней части живота). Каждое сканирование длилось примерно 1 час, и сканирования были получены через 15 минут, 2 часа и 24 часа после инъекции. ПЭТ-изображения были реконструированы с использованием алгоритма 2D максимизации максимального правдоподобия (ML-EM) в трехмерные изображения с размерами вокселей 1,898×1,898×0,796 мм, с размерами 128×128×475. Образцы крови отбирали несколько раз в разные моменты времени из подкожной вены лапы, противоположной инъецированной лапе, и радиоактивность крови была подсчитана на счетчике излучения с колодцем.

Изображения ПЭТ анализировали с использованием программного обеспечения PMOD v3.7 (PMOD, Цюрих, Швейцария). Области интереса были нарисованы вручную вокруг таких органов, как селезенка, почки и печень. Подсчеты были переведены в единицы процента инъецированной дозы на грамм ткани (% ИД/г), в то время как радиоактивность крови была представлена как % ИД. Репрезентативное изображение ПЭТ показано на Фиг. 13 для деплетированного животного, показывая полное отсутствие сигнала селезенки, наблюдаемого у не деплетированного животного на Фиг. 9.

Кинетика в крови для каждого ОЧП, как деплетированного, так и не деплетированного, показана на Фиг. 14, а поглощение органами показано на Фиг. 15. Существует небольшая разница в кинетике в крови у деплетированных и не деплетированных животных. Поглощение селезенкой в самый ранний момент времени похоже между деплетированными и не деплетированными, поскольку это вызвано преобладанием в кровотоке. Однако в более поздние моменты времени (2 часа) поглощение селезенкой у деплетированных животных составляет меньше чем половину от того, что наблюдается у не деплетированных животных, и по существу находится на фоновых уровнях, демонстрируя специфичность к CD8A радиоактивно меченного центирина.

Пример 12. Чувствительность и специфичность ПЭТ-визуализации в опухолях, сверхэкспрессирующих CD8

Чтобы определить наименьшее количество клеток, которое можно обнаружить с помощью молекул анти-CD8A домена FN3 и ПЭТ, было проведено исследование на мышах с использованием различного количества клеток, сверхэкспрессирующих CD8. Использовали и акклиматизировали в течение 7-10 дней сорок 4-5-недельных мышиных самок NOD-scid IL2rγ^null (NSG) (JAX Laboratory). Мышей размещали группами в клетках IVC при 12-часовом цикле свет:тьма (свет включается в 06:30 ч) при температуре от 19 до 22°C. Мышей кормили стандартным автоклавированным лабораторным кормом и водой ad libitum. Уши мышей метили, а хвосты татуировали за 5-7 дней до начала исследования для идентификации каждого животного.

Клеточные линии исходной HEK-293 и сверхэкспрессирующей CD8+ HEK-293-luc поддерживали в виде 2D-культур. Мышам имплантировали подкожно в общей сложности 10⁶ опухолевых клеток в соотношении 1:1 среды к смеси культур, содержащей различные соотношения экспрессирующих CD8+ HEK-293-Luc клеток и исходных клеток HEK-293. После того, как опухоли начинали прощупываться, примерно через 10-14 дней и достижении размера 200-300 мм³, человеческие CD8+ клетки визуализировали с использованием [I-124]CD8-S365.

Экспрессию люциферазы клеток CD8+ HEK-293-Luc вычисляли in vivo с использованием биолюминесцентной визуализации в оптическом томографе IVIS Spectrum (Perkin Elmer). Динамическую оптическую визуализацию выполняли сразу после инъецирования 150 мг/кг D-люциферина для определения пика оптического излучения.

Примерно 0,2-0,5 мКи радиоактивно меченных молекул анти-CD8A домена FN3 инъецировали в хвостовую вену при анестезии изофлураном в кислороде. Каждое животное сканировали на сканере Inveon microPET-CT (Siemens, Ноксвилл, Теннесси) в течение 20 минут статического сканирования. Сканы были получены через 2-3 ч после инъекции меченого вещества. ПЭТ-изображения были реконструированы с использованием алгоритма 2D максимизации максимального правдоподобия (ML-EM) в трехмерные изображения с размерами вокселей 0,776×0,776×0,796 мм, с размерами 128×128×159.

Изображения ПЭТ анализировали с использованием программного обеспечения PMOD v3.7 (PMOD, Цюрих, Швейцария). Области интереса были нарисованы вручную вокруг опухоли и других органов, таких как селезенка, почки и печень. Подсчеты были переведены в единицы процента инъецированной дозы на грамм ткани (% ИД/г). Репрезентативное изображение ПЭТ показано на Фиг. 16. Экспрессию люциферазы определяли количественно, используя области интереса в программном обеспечении Living Image v4.4 (Perkin Elmer). Оптическое излучение измеряли в единицах фотоны/сек/см²/стерадиан.

Кривые время-активность радиоактивно меченных молекул анти-CD8A домена FN3 в крови и опухоли как для клеток CD8+ HEK293, так и для исходных клеток показаны на Фиг. 17 и Фиг. 18. Наблюдается значительное увеличение связывания анти-CD8A FN3 в клетках, экспрессирующих CD8, по сравнению с исходными, в то время как активность в крови одинакова для обеих. Поглощение анти-CD8A FN3 клетками CD8+ HEK293 показано на Фиг. 19 как функция числа имплантированных клеток. На основании этих данных оценено, что самый низкий уровень обнаружения составляет примерно 7,5×10⁶ клеток.

Перечень последовательностей

SEQ ID NO: 1=Исходная последовательность Tencon

LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT

SEQ ID NO: 2=библиотека TCL1

LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSY DLTGLKPGTEYTVSIYGV(X)₇-₁₂PLSAEFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₇ представляет собой любую аминокислоту; и

X₈, X₉, X₁₀, X₁₁ и X₁₂являются любой аминокислотой или удалены

SEQ ID NO: 3=библиотека TCL2

LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈SFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVX₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃SX₁₄X₁₅LSAEFTT;

причем

X₁представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₂представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₃ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₄ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₅представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₆представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₇представляет собой Phe, Ile, Leu, Val или Tyr;

X₈ представляет собой Asp, Glu или Thr;

X₉представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₀ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₁ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₂ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₃ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;

X₁₄представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и

X₁₅ представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val.

SEQ ID NO: 4=стабилизированный Tencon (Tencon 27)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAIFTT

SEQ ID NO: 5=TCL7 (петли FG и BC)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉FDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉SNPLSAIFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂, X_13,X_14,X₁₅иX₁₆ представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W или Y; и

X₇, X₈, X₉, X₁₇, X₁₈ и X₁₉, представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y или удалены

SEQ ID NO: 6=TCL9 (петля FG)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGV X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉ X₁₀X₁₁X₁₂SNPLSAIFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆ и X₇, представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W или Y; и

X_8,X_9, X_10,X₁₁и X₁₂ представляет собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y или удален.

SEQ ID NO: 7=библиотека TCL14

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFX₁IX₂YX₃EX₄X₅X₆X₇GEAIVLTVPG SERSYDLTGLKPGTEYX₈VX₉IX₁₀GVKGGX₁₁X₁₂SX₁₃PLSAIFTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂ и X₁₃представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y, или M.

SEQ ID NO: 8=библиотека TCL24

Библиотека TCL24 (SEQ ID NO: 8)

LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFX₁IX₂YX₃EX₄X₅X₆X₇GEAIX₈LX₉VP GSERSYDLTGLKPGTEYX₁₀VX₁₁IX₁₂GVKGGX₁₃X₁₄SX₁₅PLX₁₆AX₁₇FTT;

причем

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆, X₁₀, X₁₁, X₁₂ и X₁₃представляют собой A, D, E, F, G, H, I, K, L, N, P, Q, R, S, T, V или W.

SEQ ID NO: 9=Sloning-FOR

GTGACACGGCGGTTAGAAC

SEQ ID NO: 10=Sloning-REV

GCCTTTGGGAAGCTTCTAAG

SEQ ID NO: 11=POP2250

CGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATAC

SEQ ID NO: 12=DigLigRev

CATGATTACGCCAAGCTCAGAA

SEQ ID NO: 13=BC9

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTGAAGTTACCGAAGACTCTCTGCGTCTGTCTTGGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTYGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCAACCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTCTTAGAAGCTTCCCAAAGGC

SEQ ID NO: 14=BC8

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTGAAGTTACCGAAGACTCTCTGCGTCTGTCTTGGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTYGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCAACCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTCTTAGAAGCTTCCCAAAGGC

SEQ ID NO: 15=BC7

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTGAAGTTACCGAAGACTCTCTGCGTCTGTCTTGGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTYGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCAACCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTCTTAGAAGCTTCCCAAAGGC

SEQ ID NO: 16=BC6

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTGAAGTTACCGAAGACTCTCTGCGTCTGTCTTGGNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTYGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCAACCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTCTTAGAAGCTTCCCAAAGGC

SEQ ID NO: 17=130мер-L17A

CGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTG

SEQ ID NO: 18=POP222ext

CGG CGG TTA GAA CGC GGC TAC AAT TAA TAC

SEQ ID NO: 19=LS1114

CCA AGA CAG ACG GGC AGA GTC TTC GGT AAC GCG AGA AAC AAC CAG GTT TTT CGG CGC CGG CAG CAT GGT AGA TCC TGT TTC

SEQ ID NO: 20=LS1115

CCG AAG ACT CTG CCC GTC TGT CTT GG

SEQ ID NO: 21=LS1117

CAG TGG TCT CAC GGA TTC CTG GTA CTG GAT CAG GAA AGA GTC GAA

SEQ ID NO: 22=SDG10

CATGCGGTCTCTTCCGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTCCTGACCGTTCCGGGT

SEQ ID NO: 23=SDG24

GGTGGTGAAGATCGCAGACAGCGGGTTAG

SEQ ID NO: 24=POP2222

CGGCGGTTAGAACGCGGCTAC

SEQ ID NO: 25=SDG28

AAGATCAGTTGCGGCCGCTAGACTAGAACCGCTGCCACCGCCGGTGGTGAAGATCGCAGAC

SEQ ID NO: 26=FG12

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: 27=FG11

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: 28=FG10

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: 29=FG9

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: 30=FG8

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: 31=FG7

GTGACACGGCGGTTAGAACGCGGCTACAATTAATACATAACCCCATCCCCCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGATCTACCATGCTGCCGGCGCCGAAAAACCTGGTTGTTTCTCGCGTTACCGAAGACTCTGCGCGTCTGTCTTGGACCGCGCCGGACGCGGCGTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCAGGAATCTGAAAAAGTTGGTGAAGCGATCGTGCTGACCGTTCCGGGTTCTGAACGTTCTTACGACCTGACCGGTCTGAAACCGGGTACCGAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTAACCCGCTGTCTGCGATCTTCACCACCGGCGGTCACCATCACCATCACCATGGCAGCGGTTCTAGTCTAGCGGCCGCAACTGATCTTGGC

SEQ ID NO: петля 32 FG Tencon

KGGHRSN

SEQ ID NO: 33=Tcon 6

AAGAAGGAGAACCGGTATGCTGCCGGCGCCGAAAAAC

SEQ ID NO: 34=Tcon5E86Ishort

GAG CCG CCG CCA CCG GTT TAA TGG TGA TGG TGA

TGG TGA CCA CCG GTG GTG AAG ATC GCA GAC AG

> SEQ ID NO: 35: CD8W7

SQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAGSGSGSDYKDDDDKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>SEQ ID NO: 36: CD8W13

SQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDGGGGSDYKDDDDKGGGGSHHHHHHDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>SEQ ID NO: 37: сигнальный пептид mIgGK

Metdtlllwvlllwvpgstg

>SEQ ID NO: 38: Fc человека

Dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

>SEQ ID NO: 39: линкерная последовательность

Ggggsdykddddkggggshhhhhh

Идентификатор клона SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность P282AR9P1356_A10 40 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWHTATNSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVDYNPTGRPVSSNPLSAIFTT P282AR9P1356_A4 41 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVKRPNSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVDYEGRPRWSNPLSAIFTT P282AR9P1356_A6 42 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWSKTDSSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVYIEGNPVFSNPLSAIFTT P282AR9P1356_B9 43 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPEGDRPFFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P282AR9P1356_D3 44 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTRHETSFDSFLIQYRESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVVVEYDAAGNPKYSNPLSAIFTT P282AR9P1356_H1 45 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWIPNPSSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVFDPVGFPSHSNPLSAIFTT P282AR9P1356_H6 46 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWRKRANSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVHVEYDQHGRPRWSNPLSAIFTT P282BR9P1357_A9 47 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWKANRTTDLHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVQYDGQQPLYSNPLSAIFTT P282BR9P1357_B2 48 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWNPSEDPQRFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P282BR9P1357_C10 49 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWWSNDNRPIFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P282BR9P1357_C4 50 LPAPNNLVVSRVTEDSARLSWPFVSQNKPHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P282BR9P1357_D12 51 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWGQYITAFSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVAWFQGKPTWSNPLSAIFTT P282BR9P1357_D2 52 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWIKDGHPRHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVYDRGQLISSNPLSAIFTT P282BR9P1357_E5 53 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWWPRKYQRPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDIEWIGNRPIASNPLSAIFTT P282BR9P1357_G9 54 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPIASQIHSPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P282BR9P1357_H3 55 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWKKREYQDPGFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P282CR9P1358_C2 56 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFKIAYPEWPSNGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWGVKGGAFSNPLSAIFTT P282CR9P1358_C5 57 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIAYPEWPDSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWGVKGGPLSHPLSAIFTT P282CR9P1358_D10 58 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLISYPEYPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIFGVKGGDTSWPLSAIFTT P282CR9P1358_F11 59 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIAYPEWPIFEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEQSSPLSAIFTT P282CR9P1358_F5 60 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWISYPEWPPDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIWGVKGGETSAPLSAIFTT P282DR9P1359_A12 61 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPEAAFDSFQIAYPEWPPPREAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIQGVKGGEISWPLSAIFTT P282DR9P1359_A7 62 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFRIGYPELEKLGYGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIWGVKGGENSWPLSAIFTT P282DR9P1359_A8 63 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFRIAYPEWPVQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGELSPPLSAIFTT P282DR9P1359_B2 64 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWIAYTEWPIPYEEAGQEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVSIYGVKGGPNSQPLSAIFTT P282DR9P1359_C10 65 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIVYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWGVKGGNQSWPLSAIFTT P282DR9P1359_C11 66 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFKIAYPEFPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYYVIIIGVKGGTDSWPLSAIFTT P282DR9P1359_C12 67 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYISYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIYGVKGGALSVPLSAIFTT P282DR9P1359_C5 68 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEWPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT P282DR9P1359_D12 69 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFRIAYPETATWGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGFESAPLSAIFTT P282DR9P1359_E11 70 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYISYPEWPPVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIYGVKGGAISTPLSAIFTT P282DR9P1359_E2 71 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIFYPEIVTWGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVNIVGVKGGDNSWPLSAIFTT P282DR9P1359_E3 72 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPELPLGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGVESFPLSAIFTT P282DR9P1359_E5 73 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAISYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGLYSAPLSAIFTT P282DR9P1359_E6 74 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWIAYPEWPVQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIQGVKGGTPSWPLSAIFTT P282DR9P1359_E8 75 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPVIGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIQGVKGGYTSWPLSAIFTT P282DR9P1359_F11 76 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIFYPELPIHGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVNITGVKGGDFSWPLSAIFTT P282DR9P1359_F2 77 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYPEALHPGYGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIGGVKGGQKSWPLSAIFTTGGHHHDHH P282DR9P1359_F3 78 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYITYPEWPVQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIYGVKGGTESEPLSAIFTT P282DR9P1359_F5 79 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESWPLSAIFTT P282DR9P1359_F6 80 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTTGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIWGVKGGDHSAPLSAIFTT P282DR9P1359_F7 81 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEWPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT P282DR9P1359_G4 82 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGPEYFVVIQGVKGGDPSFPLSAIFTTGGNHHHHH P282DR9P1359_G7 83 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT P282DR9P1359_H5 84 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYPEALHPGYGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGTNSEPLSAIFTT P282ER9P1360_A9 85 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPIPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282ER9P1360_C1 86 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTTPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282ER9P1360_C4 87 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGITYYEPNHGGEAISLSVPGSERSYDPTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282ER9P1360_C6 88 LSAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPIPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282ER9P1360_C8 89 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT P282ER9P1360_D11 90 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIVGVKGGYPSIPLGAAFTT P282ER9P1360_E4 91 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVLGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282ER9P1360_F11 92 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWIAPDAAFDSFSIAYVEAELVGEAIQLVVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVILGVKGGNPSNPLGASFTT P282ER9P1360_G10 93 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIWYVEQHPFGEAIPLFVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVGIRGVKGGNFSTPLIAHFTT P282ER9P1360_G7 94 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAILTT P282ER9P1360_H10 95 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIYYPEWPFAGEAIGLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGELSEPLTAQFTT P282ER9P1360_H2 96 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYVEAELVGEAIQLVVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVILGVKGGNPSNPLGASFTTT P282ER9P1360_H3 97 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYVEAELVGEAIQLVVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVILGVKGGNPSNPLGASFTT P282FR9P1361_A3 98 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIWYAEYGYPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAIVGVKGGNRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_A5 99 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGAIFTT P282FR9P1361_C7 100 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIWYHEYGGDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAIWGVKGGDVSYPLSAIFTT P282FR9P1361_D3 101 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIWYAEYGYPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLNPGTEYDVAISGVKGGPRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_E12 102 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSLGITYWESPYAGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYGVFILGVKGGYPSAPLSAIFTT P282FR9P1361_F1 103 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIWYAEYGYSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAIWGVKGGVRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_F11 104 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIWYREYGGSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAIWGVKGGVRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_F2 105 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIWYAEYGYPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAISGIKGGPRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_F3 106 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIWYAEYGYPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAISGAKGGPRSYPLSAIFTT P282FR9P1361_F7 107 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFPIWYREYATGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVVITGVKGGYPSYPLSAIFTT P282FR9P1361_G9 108 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGITYWESPYAGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYGVFILGVKGGYPSAPLSAIFTT P282FR9P1361_H4 109 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIWYAEYGYSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAIYGVKGGSPSYPLSAIFTT P282FR9P1361_H5 110 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIWYAEYGYPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVAISGVKGGPRSYPLSAIFTT P283AR9P1362_A3 111 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWKRIDSPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_A4 112 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWIGHDSGFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_B10 113 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWKRRWDSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVEWFNGLPHHSNPLSAIFTT P283AR9P1362_B2 114 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWAKHPNSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVVNELNNPLFSNPLSAIFTT P283AR9P1362_B8 115 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWWTSPLPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_C12 116 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWAKNLHSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_C6 117 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWYPSDPPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVPNYHSRRSYYYSNPLSAIFTT P283AR9P1362_C7 118 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVKRATSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVRYNEGQPIWSNPLSAIFTT P283AR9P1362_D2 119 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWQRPKSGFFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_D3 120 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPVESNAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVEYDQHGRPRWSNPLSAIFTT P283AR9P1362_D4 121 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVREHDSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_D6 122 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWAKRPGAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_D7 123 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVKRATSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_E9 124 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVPSPWGFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_F12 125 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWARNITSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_F2 126 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWRKKDHPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_F8 127 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWGYYHGHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283AR9P1362_G11 128 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWRKEATSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283AR9P1362_G3 129 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVKRATSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283AR9P1362_H11 130 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPKIQGQHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283BR9P1363_A10 131 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWQRADDILPYFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283BR9P1363_A8 132 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWVRSDTARFFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283BR9P1363_B2 133 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWASTVDPHPRFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283BR9P1363_B6 134 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWQRHSDAHPLFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_C4 135 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPIVNTPLHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVQYTATGQPERSNPLSAIFTT P283BR9P1363_C8 136 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWAKTSDLHPLFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_D11 137 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWNKKHDGQPTFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVVYEGSYPASSNPLSAIFTT P283BR9P1363_E4 138 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWIKSETSQPAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_E6 139 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWYARKFISPFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_F2 140 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWYRPDNRAGAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT P283BR9P1363_F4 141 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWERIVQTPHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_F6 142 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPEEAVTATSFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_G2 143 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWPKNQTNRHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_G5 144 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWYRATTPAPHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283BR9P1363_G7 145 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWSAKKFPRHFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKWEGNRPVASNPLSAIFTT P283DR9P1364_A4 146 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIAYPEWPVQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGDWSEPLSAIFTT P283DR9P1364_A7 147 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFRIAYPEWPVRGDAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIQGVKGGTDSFPLSAIFTT P283DR9P1364_B1 148 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYITYPEIPLGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGLLSSPLSAIFTT P283DR9P1364_B11 149 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYISYPEWEQLGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGALSAPLSAIFTT P283DR9P1364_B4 150 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAISYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIILGVKGGDQSWPLSAIFTT P283DR9P1364_C10 151 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPKDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWGVKGGVYSNPLSAIFTT P283DR9P1364_D11 152 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPPKGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGIHSAPLSAIFTT P283DR9P1364_D8 153 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPETPIQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIHGVKGGITSFPLSAIFTT P283DR9P1364_D9 154 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGISYPEWPPLGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIFGVKGGERSWPLSAIFTT P283DR9P1364_E3 155 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIAYPELPIGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIRGVKGGTLSPPLSAIFTT P283DR9P1364_E5 156 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWISYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIQGVKGGKLSWPLSAIFTT P283DR9P1364_E7 157 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYPEWPVRGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIYGVKGGDRSNPLSAIFTT P283DR9P1364_E8 158 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYPEWPVHGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGVLSEPLSAIFTT P283DR9P1364_E9 159 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTKGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVINGVKGGWRSFPLSAIFTT P283DR9P1364_F2 160 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWIAYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGFGSFPLSAIFTT P283DR9P1364_F6 161 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFTIAYPEREQDKWGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIQGVKGGRPSTPLSAILTT P283DR9P1364_F8 162 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEWPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGWTSPPLSAIFTT P283DR9P1364_G10 163 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYPEWPGSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIFGVKGGSQSWPLSAIFTT P283DR9P1364_G9 164 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIWYPEWPVGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVNISGVKGGEYSFPLSAIFTT P283DR9P1364_H1 165 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQISYPEWPVHGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIWGVKGGRQSWPLSAIFTT P283DR9P1364_H11 166 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPELPLGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIWGVKGGDRSEPLSAIFTT P283DR9P1364_H6 167 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFIIAYPETPVRGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIIGVKGGQESFPLSAIFTT P283DR9P1364_H9 168 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSISYIEYPEIPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGIQSWPLSAIFTT P283ER9P1365_A1 169 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIAYVEWWHRGEAISLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVIITGVKGGIPSHPLGAIFTT P283ER9P1365_A7 170 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYWESEVYGEAIALPVPGSERSYDLTGLKPGTEYQVSIIGVKGGVYSQPLAAIFTT P283ER9P1365_B6 171 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIGYAEPVVTGEAISLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIIGVKGGINSYPLGAIFTT P283ER9P1365_C1 172 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYWESEVYGEAIALPVTGSERSYDLTGLKPGTEYQVSIIGVKGGVYSQPLAAIFTT P283ER9P1365_E2 173 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYRESEFRGEAIALPVPGSERSYDLTGLKPGTKYRVIIIGVKGGEFSQPLAAIFTT P283ER9P1365_F4 174 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYRESEFRGEAIALPVPGSERSYDLTGLKPGTKYSVIIIGVKGGEFSQPLGAIFTT P283ER9P1365_G1 175 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYRESEFRGEAIALSVPGSERSYDLTGLKPGTKYRVIIIGVKGGEFSQPLGAIFTT P283ER9P1365_G3 176 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGISYYEWAPNGEAIQLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYHVVIIGVKGGEPSHPLGAIFTT P283ER9P1365_H3 177 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYRESEFRGEAIALPVPGSERSYDLTGLKPGTKYRVIIIGVKGGEFSQPLSAIFTT P283FR9P1366_A1 178 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWGVKGGDASEPLSAIFTT P283FR9P1366_A5 179 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWIAYPEWPTRGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSPSPPLSAIFTT P283FR9P1366_A9 180 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYGEYPGPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGELSEPLSAIFTT P283FR9P1366_B7 181 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEWPVNGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIWGVKGGVESPPLSAIFTT P283FR9P1366_C2 182 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFKISYPEWPPEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWCVKGGEHSWPLSAIFTT P283FR9P1366_C3 183 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFKIAYPEWPDGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGILSPPLSAIFTT P283FR9P1366_C4 184 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYPEWPVRGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIIGVKGGEDSWPLSAIFTT P283FR9P1366_C6 185 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYPEWPVYGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGNYSDPLSAIFTT P283FR9P1366_D12 186 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPLGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIILGVKGGDQSWPLSAIFTT P283FR9P1366_D6 187 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIFYPELVFPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVNISGVKGGEHSWPLSAIFTT P283FR9P1366_D7 188 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSIAYPELPVKGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIWGVKGGTYSGPLSAIFTT P283FR9P1366_D8 189 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIAYPEIPIAGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGDWSDPLSAIFTT P283FR9P1366_E11 190 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPVPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIKGVKGGNISWPLSAIFTT P283FR9P1366_F5 191 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIGYPEWPIKGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIWGVKGGDRSEPLSAIFTT P283FR9P1366_F8 192 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEIAKWGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGVHSFPLSAIFTT P283FR9P1366_F9 193 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFHIFYPELPIAGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVNISGVKGGYESWPLSAIFTT P283FR9P1366_G1 194 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYISYPELPVEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIWGVKGGATSEPLSAIFTT P283FR9P1366_G5 195 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEYPALGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIIGVKGGDESFPLSAIFTT P283FR9P1366_G8 196 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPELPIGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGIHSAPLSAIFTT P283FR9P1366_H10 197 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYPEWPPEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGHLSDPLSAIFTT P283FR9P1366_H11 198 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIQYLETAPDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYYVWIPGVKGGAFSPLSAIFTT P283FR9P1366_H3 199 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEWPIKGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIYGVKGGVFSEPLSAIFTT P283FR9P1366_H5 200 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFIYIENKVNGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYHVTIGGVKGGTESNTLSAIFTT P283FR9P1366_H6 201 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPVTGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIFGVKGGERSWPLSAIFTT P283FR9P1366_H7 202 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEYPALGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIAGVKGGIQSWPLSAIFTT P283FR9P1366_H8 203 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYISYPEWPGSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVFIWCVKGGWLSDPLSAIFTT P283FR9P1366_H9 204 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIAYPEWPVNGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIWGVKGGVNSYPLSAIFTT P283GR7P1367_A11 205 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGSYSEPLSAIFTT P283GR7P1367_B4 206 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSILYYELPPSGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIFGVKGGDNSFPLSAIFTT P283GR7P1367_B7 207 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGHWSYPLSAIFTT P283GR7P1367_B9 208 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIWYHEYHPRGEAIVLTVPSSERSYDLTGLKPGTEYDVVISGVKGGHWSYPLSAIFTT P283GR7P1367_C9 209 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIGYPEWPLGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVIIYGVKGGEYSDPLSAIFTT P283GR7P1367_E5 210 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIWYHEYHPRGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYDVVISGVKGGHWSYPLSAIFTT P283GR7P1367_F5 211 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIYGVKGGALSRPLSAIFTT P283GR7P1367_G8 212 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIAYPEYVWGGEATSLGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVITGVKGGLGSYPLSAIFTT P283GR7P1367_H2 213 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGGRSYPLSAIFTT P283GR7P1367_H8 214 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSINYWEEDPAGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYRVLIGGVKGGHGSLPLSAIFTT P283GR7P1367_H9 215 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIAYPEWPTDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGGRSAPLSAIFTT P283HR7P1368_A10 216 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWIFYLEPFPRGEAIPLEVPGSERSYDLTGLKPGTEYSVDIRGVKGGDHSDPLWAYFTT P283HR7P1368_B12 217 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIGYVEFTRAGEAISLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYHVVIIGVKGGEPSHPLGAPFTT P283HR7P1368_C3 218 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIGYAEPAVTGEAISLSVPGSKRSYDLTGLKPGTEYWVVIIGVKGGINSYPLGASFTT P283HR7P1368_D1 219 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGISYYEWAPNGEAIQLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYHVVIIGVKGGEPSHPLGAPFTT P283HR7P1368_D2 220 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFNSFGIGYAEPAVTGEAISLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIIGVKGGINSYPLGASFTT P283HR7P1368_D4 221 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIWCVEPIPEGEAIPLFVPGSERSYDLTGLKPGTEYRVGIRGVKGGTFSSPLAAPFTT P283HR7P1368_F10 222 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIPYRESEFRGEAIALPVPGSERSYDLTGLKPGTKYRVIIIGVKGGEFSQPLGAIFTT P283HR7P1368_F6 223 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIGYIEWVHRGEAISLHVPGSERSYDLTGLKPGTEYVVAIVGVKGGEPSTPLGAPFTT P283HR7P1368_G1 224 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLITYWEIEPEGEAIFLGVPGSERSYDLTGLKPGTEYRVQINGVKGGTISYPLFAGFTT P283HR7P1368_G10 225 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIAYVEWWHRGEAISLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVTILGVKGGIISTPLGASFTT P283HR7P1368_G11 226 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIGYAEPAVTGEAISLSVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIIGVKGGINSYPLGASFTT P283HR7P1368_H1 227 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGIAYIETARWGEAISLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVVIIGVKGGTPSHPLGAPFTT P283HR7P1368_H8 228 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGITYLDPRNGEAISLNVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVIIGVKGGINSYPLGASFTT CD8S368 229 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSCRSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESWPLSAIFTT CD8S367 230 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEWPPQGEAIVLTVPGSCRSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S370 231 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSCRSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S365 232 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSCRSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT CD8S369 233 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWAKRPGAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSCRSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVDVKYDIDSRPISSNPLSAIFTT CD8S366 234 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEWPDPGGEAIVLTVPGSCRSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT

Клон SEQ ID NO: Исходная Последовательность CD8S371 235 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEYPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESWPLSAIFTT CD8S372 236 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPELPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESWPLSAIFTT CD8S373 237 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEIPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESWPLSAIFTT CD8S374 238 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESYPLSAIFTT CD8S375 239 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESLPLSAIFTT CD8S376 240 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESSPLSAIFTT CD8S377 241 P282DR9P1359_F5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQIAYPEWPPPGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVIIQGVKGGVESEPLSAIFTT CD8S378 242 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEEGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S379 243 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIESGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S380 244 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYYVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S381 245 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S382 246 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYSVPIWGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S383 247 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIYGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S384 248 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIFGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S385 249 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPISGVKGGANSWPLSAIFTT CD8S386 250 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSYPLSAIFTT CD8S387 251 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGANSEPLSAIFTT CD8S388 252 P282DR9P1359_G7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAITYIEKEHIEDGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVPIWGVKGGAQSWPLSAIFTT CD8S389 253 P282ER9P1360_C8 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT CD8S390 254 P282ER9P1360_C8 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYYVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT CD8S391 255 P282ER9P1360_C8 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLPVPGSERSYDLTGLKPGTEYHVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT CD8S392 256 P282DR9P1359_F7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEYPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S393 257 P282DR9P1359_F7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPELPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S394 258 P282DR9P1359_F7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEIPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S395 259 P282DR9P1359_F7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYPEHPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S396 260 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYITYPEWPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S397 261 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFQITYPEWPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S398 262 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFSITYPEWPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S399 263 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEYPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S400 264 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPELPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S401 265 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEIPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S402 266 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYPEWPPPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S403 267 P282DR9P1359_F7 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYAEWPPQGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGSYSAPLSAIFTT CD8S404 268 P282DR9P1359_C5 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFWITYAEWPDPGGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYFVVIYGVKGGEIYSPLSAIFTT CD8S405 269 P282ER9P1360_C8 LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFGILYYEPVDSGEAITLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVVITGVKGGAPSTPLGTIFTT

SEQ ID. No. 270 Tencon25

lpapknlvvsevtedsarlswtapdaafdsfliqyqesekvgeaivltvpgsersydltglkpgteytvsiygvkgghrsnplsaiftt

SEQ ID. NO: 271 CD8-альфа яванского макака

MRNQAPGRPKGATSPPPLPTGSRAPPVAPELRAEPRPGERVMAPPVTALLLPLVLLLHAARPNQFRVSPLGRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGTAARPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLRDFRQENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTTASQPLSLRPEACRPAAGGSVNTRGLDFACDIYIWAPLAGACGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGGKPSLSDRYV

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> JANSSEN BIOTECH, INC.

HAWKINS, REBECCA

JACOBS, STEVEN

SEPULVEDA, MANUEL

<120> CD8A-СВЯЗЫВАЮЩИЕ ДОМЕНЫ ТИПА III ФИБРОНЕКТИНА

<130> JBI5112WOPCT

<140> БУДЕТ ПРИСВОЕНО

<141> 2017-12-13

<150> 62/434,017

<151> 2016-12-14

<160> 281

<170> Версия PatentIn 3.5

<210> 1

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 1

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Glu Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Leu Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Asn Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly His Arg Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Glu Phe Thr Thr

85

<210> 2

<211> 94

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (75)..(81)

<223> Любая аминокислота

<220>

<221> MOD_RES

<222> (82)..(86)

<223> Любая аминокислота или отсутствует

<400> 2

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Glu Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Leu Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Asn Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

65 70 75 80

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Leu Ser Ala Glu Phe Thr Thr

85 90

<210> 3

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (22)..(22)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (23)..(23)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (24)..(24)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (25)..(25)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (26)..(26)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Phe, Ile, Leu, Val или Tyr

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Asp, Glu или Thr

<220>

<221> MOD_RES

<222> (75)..(75)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (76)..(76)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (77)..(77)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (78)..(78)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (79)..(79)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (81)..(81)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<220>

<221> MOD_RES

<222> (82)..(82)

<223> Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu,

Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val

<400> 3

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Glu Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Leu Arg Leu Ser Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Asn Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser

65 70 75 80

Xaa Xaa Leu Ser Ala Glu Phe Thr Thr

85

<210> 4

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 4

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly His Arg Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 5

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (22)..(27)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(30)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или отсутствует

<220>

<221> MOD_RES

<222> (78)..(84)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr

<220>

<221> MOD_RES

<222> (85)..(87)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или отсутствует

<400> 5

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Xaa Xaa Xaa

65 70 75 80

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 6

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (75)..(81)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr

<220>

<221> MOD_RES

<222> (82)..(86)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или отсутствует

<400> 6

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

65 70 75 80

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 7

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (36)..(36)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (38)..(41)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (72)..(72)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (78)..(79)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<220>

<221> MOD_RES

<222> (81)..(81)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr, или Met

<400> 7

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Xaa

20 25 30

Ile Xaa Tyr Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Xaa Val Xaa Ile Xaa Gly Val Lys Gly Gly Xaa Xaa Ser

65 70 75 80

Xaa Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 8

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (34)..(34)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (36)..(36)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (38)..(41)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (46)..(46)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (48)..(48)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (72)..(72)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (78)..(79)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (81)..(81)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (84)..(84)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (86)..(86)

<223> Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu,

Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, или Trp

<400> 8

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Xaa

20 25 30

Ile Xaa Tyr Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Glu Ala Ile Xaa Leu Xaa

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Xaa Val Xaa Ile Xaa Gly Val Lys Gly Gly Xaa Xaa Ser

65 70 75 80

Xaa Pro Leu Xaa Ala Xaa Phe Thr Thr

85

<210> 9

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 9

gtgacacggc ggttagaac 19

<210> 10

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 10

gcctttggga agcttctaag 20

<210> 11

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 11

cggcggttag aacgcggcta caattaatac 30

<210> 12

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 12

catgattacg ccaagctcag aa 22

<210> 13

<211> 385

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (198)..(224)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 13

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctgaagtt accgaagact 180

ctctgcgtct gtcttggnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnttygac tctttcctga 240

tccagtacca ggaatctgaa aaagttggtg aagcgatcaa cctgaccgtt ccgggttctg 300

aacgttctta cgacctgacc ggtctgaaac cgggtaccga atacaccgtt tctatctacg 360

gtgttcttag aagcttccca aaggc 385

<210> 14

<211> 382

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (198)..(221)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 14

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctgaagtt accgaagact 180

ctctgcgtct gtcttggnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nttygactct ttcctgatcc 240

agtaccagga atctgaaaaa gttggtgaag cgatcaacct gaccgttccg ggttctgaac 300

gttcttacga cctgaccggt ctgaaaccgg gtaccgaata caccgtttct atctacggtg 360

ttcttagaag cttcccaaag gc 382

<210> 15

<211> 379

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (198)..(218)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 15

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctgaagtt accgaagact 180

ctctgcgtct gtcttggnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnntt ygactctttc ctgatccagt 240

accaggaatc tgaaaaagtt ggtgaagcga tcaacctgac cgttccgggt tctgaacgtt 300

cttacgacct gaccggtctg aaaccgggta ccgaatacac cgtttctatc tacggtgttc 360

ttagaagctt cccaaaggc 379

<210> 16

<211> 376

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (198)..(215)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 16

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctgaagtt accgaagact 180

ctctgcgtct gtcttggnnn nnnnnnnnnn nnnnnttyga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatca acctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttctta 360

gaagcttccc aaaggc 376

<210> 17

<211> 131

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<400> 17

cggcggttag aacgcggcta caattaatac ataaccccat ccccctgttg acaattaatc 60

atcggctcgt ataatgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacaggat 120

ctaccatgct g 131

<210> 18

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 18

cggcggttag aacgcggcta caattaatac 30

<210> 19

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 19

ccaagacaga cgggcagagt cttcggtaac gcgagaaaca accaggtttt tcggcgccgg 60

cagcatggta gatcctgttt c 81

<210> 20

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 20

ccgaagactc tgcccgtctg tcttgg 26

<210> 21

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 21

cagtggtctc acggattcct ggtactggat caggaaagag tcgaa 45

<210> 22

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 22

catgcggtct cttccgaaaa agttggtgaa gcgatcgtcc tgaccgttcc gggt 54

<210> 23

<211> 29

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 23

ggtggtgaag atcgcagaca gcgggttag 29

<210> 24

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 24

cggcggttag aacgcggcta c 21

<210> 25

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 25

aagatcagtt gcggccgcta gactagaacc gctgccaccg ccggtggtga agatcgcaga 60

c 61

<210> 26

<211> 485

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(392)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 26

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nntctaaccc gctgtctgcg atcttcacca 420

ccggcggtca ccatcaccat caccatggca gcggttctag tctagcggcc gcaactgatc 480

ttggc 485

<210> 27

<211> 482

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(389)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 27

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnt ctaacccgct gtctgcgatc ttcaccaccg 420

gcggtcacca tcaccatcac catggcagcg gttctagtct agcggccgca actgatcttg 480

gc 482

<210> 28

<211> 479

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(386)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 28

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnntcta acccgctgtc tgcgatcttc accaccggcg 420

gtcaccatca ccatcaccat ggcagcggtt ctagtctagc ggccgcaact gatcttggc 479

<210> 29

<211> 476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(383)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 29

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnntctaacc cgctgtctgc gatcttcacc accggcggtc 420

accatcacca tcaccatggc agcggttcta gtctagcggc cgcaactgat cttggc 476

<210> 30

<211> 473

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(380)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 30

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tctaacccgc tgtctgcgat cttcaccacc ggcggtcacc 420

atcaccatca ccatggcagc ggttctagtc tagcggccgc aactgatctt ggc 473

<210> 31

<211> 470

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> модифицированное_основание

<222> (357)..(377)

<223> a, c, t, g, неизвестный или другой

<400> 31

gtgacacggc ggttagaacg cggctacaat taatacataa ccccatcccc ctgttgacaa 60

ttaatcatcg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 120

caggatctac catgctgccg gcgccgaaaa acctggttgt ttctcgcgtt accgaagact 180

ctgcgcgtct gtcttggacc gcgccggacg cggcgttcga ctctttcctg atccagtacc 240

aggaatctga aaaagttggt gaagcgatcg tgctgaccgt tccgggttct gaacgttctt 300

acgacctgac cggtctgaaa ccgggtaccg aatacaccgt ttctatctac ggtgttnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnntct aacccgctgt ctgcgatctt caccaccggc ggtcaccatc 420

accatcacca tggcagcggt tctagtctag cggccgcaac tgatcttggc 470

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 32

Lys Gly Gly His Arg Ser Asn

1 5

<210> 33

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 33

aagaaggaga accggtatgc tgccggcgcc gaaaaac 37

<210> 34

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 34

gagccgccgc caccggttta atggtgatgg tgatggtgac caccggtggt gaagatcgca 60

gacag 65

<210> 35

<211> 387

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 35

Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly

20 25 30

Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser Pro Thr Phe

35 40 45

Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp

50 55 60

Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr

65 70 75 80

Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala

85 90 95

Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu

100 105 110

Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

115 120 125

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

130 135 140

Pro Ala Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

145 150 155 160

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

165 170 175

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

180 185 190

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

195 200 205

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

210 215 220

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

225 230 235 240

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

245 250 255

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

260 265 270

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

275 280 285

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

290 295 300

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

305 310 315 320

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

325 330 335

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

340 345 350

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

355 360 365

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

370 375 380

Pro Gly Lys

385

<210> 36

<211> 412

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 36

Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly

20 25 30

Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser Pro Thr Phe

35 40 45

Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp

50 55 60

Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr

65 70 75 80

Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala

85 90 95

Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu

100 105 110

Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

115 120 125

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

130 135 140

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

145 150 155 160

Asp Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly

165 170 175

Gly Gly Ser His His His His His His Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

195 200 205

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

210 215 220

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

225 230 235 240

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

245 250 255

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

260 265 270

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

275 280 285

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

290 295 300

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

305 310 315 320

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

325 330 335

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

340 345 350

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

355 360 365

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

370 375 380

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

385 390 395 400

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405 410

<210> 37

<211> 20

<212> PRT

<213> Неизвестная

<220>

<223> Описание неизвестной:

сигнальный пептид mIgGK

<400> 37

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly

20

<210> 38

<211> 227

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 38

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 39

<211> 24

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 39

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly

1 5 10 15

Gly Ser His His His His His His

20

<210> 40

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 40

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp His Thr Ala Thr Asn Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Asp Tyr Asn Pro

65 70 75 80

Thr Gly Arg Pro Val Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 41

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 41

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Lys Arg Pro Asn Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Gly Arg Pro Arg Trp Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 42

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 42

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ser Lys Thr Asp Ser Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val Tyr Ile Glu

65 70 75 80

Gly Asn Pro Val Phe Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 43

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 43

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Glu Gly Asp Arg Pro Phe Phe Asp Ser Phe

20 25 30

Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp Glu

65 70 75 80

Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 44

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 44

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg His Glu Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Arg Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Val Val Glu Tyr Asp Ala

65 70 75 80

Ala Gly Asn Pro Lys Tyr Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 45

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 45

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ile Pro Asn Pro Ser Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val Phe Asp Pro

65 70 75 80

Val Gly Phe Pro Ser His Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 46

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 46

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Arg Lys Arg Ala Asn Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val His Val Glu Tyr Asp Gln

65 70 75 80

His Gly Arg Pro Arg Trp Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 47

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 47

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Lys Ala Asn Arg Thr Thr Asp Leu His Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Gln

65 70 75 80

Tyr Asp Gly Gln Gln Pro Leu Tyr Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 48

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 48

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Asn Pro Ser Glu Asp Pro Gln Arg Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 49

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 49

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Trp Ser Asn Asp Asn Arg Pro Ile Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 50

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 50

Leu Pro Ala Pro Asn Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Phe Val Ser Gln Asn Lys Pro His Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 51

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 51

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Gly Gln Tyr Ile Thr Ala Phe Ser Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Ala Trp

65 70 75 80

Phe Gln Gly Lys Pro Thr Trp Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 52

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 52

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ile Lys Asp Gly His Pro Arg His Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val Tyr

65 70 75 80

Asp Arg Gly Gln Leu Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 53

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 53

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Trp Pro Arg Lys Tyr Gln Arg Pro Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Ile Glu Trp

65 70 75 80

Ile Gly Asn Arg Pro Ile Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 54

<211> 99

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 54

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Ile Ala Ser Gln Ile His Ser Pro Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Tyr Asp Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile

85 90 95

Phe Thr Thr

<210> 55

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 55

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Lys Lys Arg Glu Tyr Gln Asp Pro Gly Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 56

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 56

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Lys

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Ser Asn Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala Phe Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 57

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 57

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Pro Leu Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 58

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 58

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Tyr Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Asp Thr Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 59

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 59

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Ile Phe Glu Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Gln

65 70 75 80

Ser Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 60

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 60

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Glu Thr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 61

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 61

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Arg Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 62

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 62

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Arg

20 25 30

Ile Gly Tyr Pro Glu Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Glu

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 63

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 63

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Arg

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Leu Ser

65 70 75 80

Pro Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 64

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 64

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ala Tyr Thr Glu Trp Pro Ile Pro Tyr Glu Glu Ala Gly Gln Glu

35 40 45

Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp

50 55 60

Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Ser Ile Tyr Gly

65 70 75 80

Val Lys Gly Gly Pro Asn Ser Gln Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 65

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 65

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Val Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asn Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 66

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 66

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Lys

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Phe Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Tyr Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Thr Asp Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 67

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 67

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ala Leu Ser

65 70 75 80

Val Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 68

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 68

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 69

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 69

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Arg

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Thr Ala Thr Trp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Phe Glu Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 70

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 70

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ala Ile Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 71

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 71

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Phe Tyr Pro Glu Ile Val Thr Trp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Asn Ile Val Gly Val Lys Gly Gly Asp Asn Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 72

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 72

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Leu Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 73

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 73

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Leu Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 74

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 74

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Thr Pro Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 75

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 75

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Ile Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Tyr Thr Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 76

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 76

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Phe Tyr Pro Glu Leu Pro Ile His Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Asn Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Asp Phe Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 77

<211> 99

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 77

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ala Leu His Pro Gly Tyr Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Gly Gly Val Lys Gly Gly Gln

65 70 75 80

Lys Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr Gly Gly His His His

85 90 95

Asp His His

<210> 78

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 78

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Val Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Thr Glu Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 79

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 79

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 80

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 80

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Thr Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asp His Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 81

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 81

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 82

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 82

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Pro Glu Tyr Phe Val Val Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Asp Pro Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr Gly Gly Asn His His His His

85 90 95

His

<210> 83

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 83

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 84

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 84

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ala Leu His Pro Gly Tyr Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Thr

65 70 75 80

Asn Ser Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 85

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 85

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Ile Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 86

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 86

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Thr Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 87

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 87

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Thr Tyr Tyr Glu Pro Asn His Gly Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Pro Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 88

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 88

Leu Ser Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Ile Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 89

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 89

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 90

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 90

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Val Gly Val Lys Gly Gly Tyr Pro Ser

65 70 75 80

Ile Pro Leu Gly Ala Ala Phe Thr Thr

85

<210> 91

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 91

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Leu Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 92

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 92

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ile Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Val Glu Ala Glu Leu Val Gly Glu Ala Ile Gln Leu Val

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Asn Pro Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 93

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 93

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Trp Tyr Val Glu Gln His Pro Phe Gly Glu Ala Ile Pro Leu Phe

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Gly Ile Arg Gly Val Lys Gly Gly Asn Phe Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Ile Ala His Phe Thr Thr

85

<210> 94

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 94

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Leu Thr Thr

85

<210> 95

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 95

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Tyr Tyr Pro Glu Trp Pro Phe Ala Gly Glu Ala Ile Gly Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Leu Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Thr Ala Gln Phe Thr Thr

85

<210> 96

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 96

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Val Glu Ala Glu Leu Val Gly Glu Ala Ile Gln Leu Val

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Asn Pro Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr Thr

85 90

<210> 97

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 97

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Val Glu Ala Glu Leu Val Gly Glu Ala Ile Gln Leu Val

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Asn Pro Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 98

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 98

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Val Gly Val Lys Gly Gly Asn Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 99

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 99

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 100

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 100

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Trp Tyr His Glu Tyr Gly Gly Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asp Val Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 101

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 101

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Asn Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Pro Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 102

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 102

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Leu Gly

20 25 30

Ile Thr Tyr Trp Glu Ser Pro Tyr Ala Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Gly Val Phe Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Tyr Pro Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 103

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 103

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Val Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 104

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 104

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Trp Tyr Arg Glu Tyr Gly Gly Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Val Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 105

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 105

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Ser Gly Ile Lys Gly Gly Pro Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 106

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 106

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Ser Gly Ala Lys Gly Gly Pro Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 107

<211> 88

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 107

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Pro

20 25 30

Ile Trp Tyr Arg Glu Tyr Ala Thr Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr Val

35 40 45

Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr

50 55 60

Glu Tyr Asp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Tyr Pro Ser Tyr

65 70 75 80

Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 108

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 108

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Thr Tyr Trp Glu Ser Pro Tyr Ala Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Gly Val Phe Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Tyr Pro Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 109

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 109

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Pro Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 110

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 110

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Trp Tyr Ala Glu Tyr Gly Tyr Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Ala Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Pro Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 111

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 111

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Lys Arg Ile Asp Ser Pro Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 112

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 112

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ile Gly His Asp Ser Gly Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 113

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 113

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Lys Arg Arg Trp Asp Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Glu Trp Phe Asn

65 70 75 80

Gly Leu Pro His His Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 114

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 114

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Lys His Pro Asn Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val Val Asn Glu

65 70 75 80

Leu Asn Asn Pro Leu Phe Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 115

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 115

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Trp Thr Ser Pro Leu Pro Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 116

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 116

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Lys Asn Leu His Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 117

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 117

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Tyr Pro Ser Asp Pro Pro Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Pro Asn Tyr His Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Tyr Tyr Tyr Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 118

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 118

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Lys Arg Ala Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Arg Tyr Asn Glu

65 70 75 80

Gly Gln Pro Ile Trp Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 119

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 119

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Gln Arg Pro Lys Ser Gly Phe Phe Asp Ser Phe

20 25 30

Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp

65 70 75 80

Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 120

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 120

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Val Glu Ser Asn Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Glu Tyr Asp Gln

65 70 75 80

His Gly Arg Pro Arg Trp Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 121

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 121

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Arg Glu His Asp Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 122

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 122

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Lys Arg Pro Gly Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 123

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 123

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Lys Arg Ala Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 124

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 124

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Pro Ser Pro Trp Gly Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 125

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 125

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Arg Asn Ile Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 126

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 126

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Arg Lys Lys Asp His Pro Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 127

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 127

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Gly Tyr Tyr His Gly His Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp Glu Gly

65 70 75 80

Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 128

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 128

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Arg Lys Glu Ala Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 129

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 129

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Lys Arg Ala Thr Ser Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp Glu Gly

65 70 75 80

Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 130

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 130

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Lys Ile Gln Gly Gln His Phe Asp Ser Phe

20 25 30

Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp

65 70 75 80

Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 131

<211> 99

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 131

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Gln Arg Ala Asp Asp Ile Leu Pro Tyr Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Tyr Asp Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile

85 90 95

Phe Thr Thr

<210> 132

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 132

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Val Arg Ser Asp Thr Ala Arg Phe Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr

65 70 75 80

Asp Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 133

<211> 99

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 133

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Ser Thr Val Asp Pro His Pro Arg Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Tyr Asp Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile

85 90 95

Phe Thr Thr

<210> 134

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 134

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Gln Arg His Ser Asp Ala His Pro Leu Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 135

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 135

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Ile Val Asn Thr Pro Leu His Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Gln Tyr

65 70 75 80

Thr Ala Thr Gly Gln Pro Glu Arg Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 136

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 136

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Lys Thr Ser Asp Leu His Pro Leu Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 137

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 137

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Asn Lys Lys His Asp Gly Gln Pro Thr Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Val

65 70 75 80

Tyr Glu Gly Ser Tyr Pro Ala Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 138

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 138

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ile Lys Ser Glu Thr Ser Gln Pro Ala Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 139

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 139

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Tyr Ala Arg Lys Phe Ile Ser Pro Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 140

<211> 99

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 140

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Tyr Arg Pro Asp Asn Arg Ala Gly Ala Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Tyr Asp Ile Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile

85 90 95

Phe Thr Thr

<210> 141

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 141

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Glu Arg Ile Val Gln Thr Pro His Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 142

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 142

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Glu Glu Ala Val Thr Ala Thr Ser Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 143

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 143

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Pro Lys Asn Gln Thr Asn Arg His Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 144

<211> 98

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 144

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Tyr Arg Ala Thr Thr Pro Ala Pro His Phe Asp

20 25 30

Ser Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile

35 40 45

Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys

65 70 75 80

Trp Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe

85 90 95

Thr Thr

<210> 145

<211> 97

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 145

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ser Ala Lys Lys Phe Pro Arg His Phe Asp Ser

20 25 30

Phe Leu Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Trp

65 70 75 80

Glu Gly Asn Arg Pro Val Ala Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr

85 90 95

Thr

<210> 146

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 146

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Asp Trp Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 147

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 147

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Arg

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Arg Gly Asp Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Thr Asp Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 148

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 148

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Ile Pro Leu Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Leu Leu Ser

65 70 75 80

Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 149

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 149

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Glu Gln Leu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ala Leu Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 150

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 150

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Asp Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 151

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 151

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Lys Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Val Tyr Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 152

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 152

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Lys Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ile His Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 153

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 153

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Thr Pro Ile Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile His Gly Val Lys Gly Gly Ile Thr Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 154

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 154

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Leu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Glu Arg Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 155

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 155

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Ile Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Arg Gly Val Lys Gly Gly Thr Leu Ser

65 70 75 80

Pro Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 156

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 156

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Lys Leu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 157

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 157

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Asp Arg Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 158

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 158

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val His Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Val Leu Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 159

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 159

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Lys Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Asn Gly Val Lys Gly Gly Trp Arg Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 160

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 160

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Phe Gly Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 161

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 161

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Thr

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Arg Glu Gln Asp Lys Trp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Arg

65 70 75 80

Pro Ser Thr Pro Leu Ser Ala Ile Leu Thr Thr

85 90

<210> 162

<211> 88

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 162

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr Val

35 40 45

Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr

50 55 60

Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Trp Thr Ser Pro

65 70 75 80

Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 163

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 163

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Ser Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 164

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 164

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Trp Tyr Pro Glu Trp Pro Val Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Asn Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Glu Tyr Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 165

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 165

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Val His Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Arg Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 166

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 166

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Leu Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asp Arg Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 167

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 167

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ile

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Thr Pro Val Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Gln Glu Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 168

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 168

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ser Tyr Ile Glu Tyr Pro Glu Ile Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ile

65 70 75 80

Gln Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 169

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 169

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ala Tyr Val Glu Trp Trp His Arg Gly Glu Ala Ile Ser Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asn Val Ile Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 170

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 170

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Trp Glu Ser Glu Val Tyr Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Gln Val Ser Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Val Tyr Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Ala Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 171

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 171

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Ala Glu Pro Val Val Thr Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Ile Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 172

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 172

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Trp Glu Ser Glu Val Tyr Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Thr Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Gln Val Ser Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Val Tyr Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Ala Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 173

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 173

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Arg Glu Ser Glu Phe Arg Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Lys Tyr Arg Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Phe Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Ala Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 174

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 174

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Arg Glu Ser Glu Phe Arg Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Lys Tyr Ser Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Phe Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 175

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 175

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Arg Glu Ser Glu Phe Arg Gly Glu Ala Ile Ala Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Lys Tyr Arg Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Phe Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 176

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 176

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ser Tyr Tyr Glu Trp Ala Pro Asn Gly Glu Ala Ile Gln Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr His Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Pro Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 177

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 177

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Arg Glu Ser Glu Phe Arg Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Lys Tyr Arg Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Phe Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 178

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 178

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asp Ala Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 179

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 179

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Pro Ser

65 70 75 80

Pro Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 180

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 180

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Gly Glu Tyr Pro Gly Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Glu Leu Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 181

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 181

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Val Asn Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Pro Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 182

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 182

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Lys

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Glu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Cys Val Lys Gly Gly Glu His Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 183

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 183

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Lys

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ile Leu Ser

65 70 75 80

Pro Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 184

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 184

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Asp Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 185

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 185

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Tyr Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Asn Tyr Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 186

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 186

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Leu Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Asp Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 187

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 187

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Phe Tyr Pro Glu Leu Val Phe Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Asn Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Glu His Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 188

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 188

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Val Lys Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Thr Tyr Ser

65 70 75 80

Gly Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 189

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 189

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ile Pro Ile Ala Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Asp Trp Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 190

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 190

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Lys Gly Val Lys Gly Gly Asn Ile Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 191

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 191

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Gly Tyr Pro Glu Trp Pro Ile Lys Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Asp Arg Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 192

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 192

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ile Ala Lys Trp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Val His Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 193

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 193

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe His

20 25 30

Ile Phe Tyr Pro Glu Leu Pro Ile Ala Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Asn Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Tyr Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 194

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 194

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Leu Pro Val Glu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala Thr Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 195

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 195

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Tyr Pro Ala Leu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Asp Glu Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 196

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 196

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Ile Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ile His Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 197

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 197

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asn

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Glu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly His Leu Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 198

<211> 88

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 198

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Gln Tyr Leu Glu Thr Ala Pro Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Tyr Val Trp Ile Pro Gly Val Lys Gly Gly Ala Phe Ser

65 70 75 80

Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 199

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 199

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Ile Lys Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Val Phe Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 200

<211> 87

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 200

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ile

20 25 30

Tyr Ile Glu Asn Lys Val Asn Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr Val Pro

35 40 45

Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr Glu

50 55 60

Tyr His Val Thr Ile Gly Gly Val Lys Gly Gly Thr Glu Ser Asn Thr

65 70 75 80

Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 201

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 201

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Thr Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Glu Arg Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 202

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 202

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Tyr Pro Ala Leu Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Ala Gly Val Lys Gly Gly Ile Gln Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 203

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 203

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ser Tyr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ala Val Phe Ile Trp Cys Val Lys Gly Gly Trp Leu Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 204

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 204

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Val Asn Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Val Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 205

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 205

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 206

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 206

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Leu Pro Pro Ser Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Asp Asn Ser

65 70 75 80

Phe Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 207

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 207

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly His Trp Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 208

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 208

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Trp Tyr His Glu Tyr His Pro Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Ser Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Val Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly His Trp Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 209

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 209

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gly Tyr Pro Glu Trp Pro Leu Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Tyr Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 210

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 210

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Glu

20 25 30

Ile Trp Tyr His Glu Tyr His Pro Arg Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asp Val Val Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly His Trp Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 211

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 211

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ala Leu Ser

65 70 75 80

Arg Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 212

<211> 95

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 212

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Tyr Val Trp Gly Gly Glu Ala Thr Ser Leu Gly

35 40 45

Glu Ala Ile Val Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu

50 55 60

Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Thr Gly Val

65 70 75 80

Lys Gly Gly Leu Gly Ser Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 213

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 213

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Gly Arg Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 214

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 214

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Asn Tyr Trp Glu Glu Asp Pro Ala Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Arg Val Leu Ile Gly Gly Val Lys Gly Gly His Gly Ser

65 70 75 80

Leu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 215

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 215

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Asp

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Thr Asp Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Gly Arg Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 216

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 216

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Phe Tyr Leu Glu Pro Phe Pro Arg Gly Glu Ala Ile Pro Leu Glu

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Ser Val Asp Ile Arg Gly Val Lys Gly Gly Asp His Ser

65 70 75 80

Asp Pro Leu Trp Ala Tyr Phe Thr Thr

85

<210> 217

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 217

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Val Glu Phe Thr Arg Ala Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr His Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Pro Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Gly Ala Pro Phe Thr Thr

85

<210> 218

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 218

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Ala Glu Pro Ala Val Thr Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Lys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Ile Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 219

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 219

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ser Tyr Tyr Glu Trp Ala Pro Asn Gly Glu Ala Ile Gln Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr His Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Pro Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Gly Ala Pro Phe Thr Thr

85

<210> 220

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 220

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asn Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Ala Glu Pro Ala Val Thr Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Ile Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 221

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 221

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Trp Cys Val Glu Pro Ile Pro Glu Gly Glu Ala Ile Pro Leu Phe

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Arg Val Gly Ile Arg Gly Val Lys Gly Gly Thr Phe Ser

65 70 75 80

Ser Pro Leu Ala Ala Pro Phe Thr Thr

85

<210> 222

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 222

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Pro Tyr Arg Glu Ser Glu Phe Arg Gly Glu Ala Ile Ala Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Lys Tyr Arg Val Ile Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Glu Phe Ser

65 70 75 80

Gln Pro Leu Gly Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 223

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 223

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Ile Glu Trp Val His Arg Gly Glu Ala Ile Ser Leu His

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Val Val Ala Ile Val Gly Val Lys Gly Gly Glu Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Pro Phe Thr Thr

85

<210> 224

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 224

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Thr Tyr Trp Glu Ile Glu Pro Glu Gly Glu Ala Ile Phe Leu Gly

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Arg Val Gln Ile Asn Gly Val Lys Gly Gly Thr Ile Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Phe Ala Gly Phe Thr Thr

85

<210> 225

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 225

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ala Tyr Val Glu Trp Trp His Arg Gly Glu Ala Ile Ser Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Thr Ile Leu Gly Val Lys Gly Gly Ile Ile Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 226

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 226

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Gly Tyr Ala Glu Pro Ala Val Thr Gly Glu Ala Ile Ser Leu Ser

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Ile Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 227

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 227

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Ala Tyr Ile Glu Thr Ala Arg Trp Gly Glu Ala Ile Ser Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Asn Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Thr Pro Ser

65 70 75 80

His Pro Leu Gly Ala Pro Phe Thr Thr

85

<210> 228

<211> 88

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 228

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Thr Tyr Leu Asp Pro Arg Asn Gly Glu Ala Ile Ser Leu Asn Val

35 40 45

Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr

50 55 60

Glu Tyr Trp Val Val Ile Ile Gly Val Lys Gly Gly Ile Asn Ser Tyr

65 70 75 80

Pro Leu Gly Ala Ser Phe Thr Thr

85

<210> 229

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 229

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 230

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 230

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 231

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 231

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 232

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 232

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 233

<211> 96

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 233

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Ala Lys Arg Pro Gly Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Asp Val Lys Tyr Asp Ile

65 70 75 80

Asp Ser Arg Pro Ile Ser Ser Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90 95

<210> 234

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 234

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Cys Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 235

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 235

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Tyr Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 236

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 236

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 237

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 237

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ile Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 238

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 238

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 239

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 239

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Leu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 240

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 240

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 241

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 241

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Ile Ile Gln Gly Val Lys Gly Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 242

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 242

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Glu Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 243

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 243

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Ser Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 244

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 244

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Tyr Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 245

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 245

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Phe Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 246

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 246

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Ser Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 247

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 247

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 248

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 248

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Phe Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 249

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 249

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Ser Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 250

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 250

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Tyr Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 251

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 251

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Asn Ser Glu Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 252

<211> 91

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 252

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Thr Tyr Ile Glu Lys Glu His Ile Glu Asp Gly Glu Ala Ile Val

35 40 45

Leu Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys

50 55 60

Pro Gly Thr Glu Tyr Trp Val Pro Ile Trp Gly Val Lys Gly Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ser Trp Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 253

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 253

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 254

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 254

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Tyr Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 255

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 255

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Pro

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr His Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 256

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 256

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Tyr Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 257

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 257

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Leu Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 258

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 258

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu Ile Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 259

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 259

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Pro Glu His Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 260

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 260

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Tyr

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 261

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 261

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gln

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 262

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 262

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ser

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 263

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 263

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Tyr Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 264

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 264

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Leu Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 265

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 265

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Ile Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 266

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 266

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Pro Glu Trp Pro Pro Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 267

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 267

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Ala

20 25 30

Ile Ala Tyr Ala Glu Trp Pro Pro Gln Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Ser Tyr Ser

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 268

<211> 90

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 268

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Trp

20 25 30

Ile Thr Tyr Ala Glu Trp Pro Asp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Val Leu

35 40 45

Thr Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Phe Val Val Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly Glu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85 90

<210> 269

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 269

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Arg Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Gly

20 25 30

Ile Leu Tyr Tyr Glu Pro Val Asp Ser Gly Glu Ala Ile Thr Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Trp Val Val Ile Thr Gly Val Lys Gly Gly Ala Pro Ser

65 70 75 80

Thr Pro Leu Gly Thr Ile Phe Thr Thr

85

<210> 270

<211> 89

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 270

Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser Glu Val Thr Glu Asp Ser

1 5 10 15

Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp Ser Phe Leu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gln Glu Ser Glu Lys Val Gly Glu Ala Ile Val Leu Thr

35 40 45

Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly

50 55 60

Thr Glu Tyr Thr Val Ser Ile Tyr Gly Val Lys Gly Gly His Arg Ser

65 70 75 80

Asn Pro Leu Ser Ala Ile Phe Thr Thr

85

<210> 271

<211> 276

<212> PRT

<213> Macaca fascicularis

<400> 271

Met Arg Asn Gln Ala Pro Gly Arg Pro Lys Gly Ala Thr Ser Pro Pro

1 5 10 15

Pro Leu Pro Thr Gly Ser Arg Ala Pro Pro Val Ala Pro Glu Leu Arg

20 25 30

Ala Glu Pro Arg Pro Gly Glu Arg Val Met Ala Pro Pro Val Thr Ala

35 40 45

Leu Leu Leu Pro Leu Val Leu Leu Leu His Ala Ala Arg Pro Asn Gln

50 55 60

Phe Arg Val Ser Pro Leu Gly Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val

65 70 75 80

Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser

85 90 95

Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Thr Ala Ala Arg Pro Thr Phe Leu Leu

100 105 110

Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln

115 120 125

Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr Leu Arg

130 135 140

Asp Phe Arg Gln Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser

145 150 155 160

Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala

165 170 175

Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr

180 185 190

Thr Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala

195 200 205

Ala Gly Gly Ser Val Asn Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile

210 215 220

Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ala Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser

225 230 235 240

Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys

245 250 255

Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser Gly Gly Lys Pro Ser Leu Ser

260 265 270

Asp Arg Tyr Val

275

<210> 272

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 272

Gly Ser Gly Ser

1

<210> 273

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 273

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 274

<211> 25

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 274

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25

<210> 275

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 275

Ala Pro Ala Pro

1

<210> 276

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 276

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro

1 5 10

<210> 277

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 277

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro

1 5 10 15

Ala Pro Ala Pro

20

<210> 278

<211> 40

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 278

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro

1 5 10 15

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro

20 25 30

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro

35 40

<210> 279

<211> 29

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 279

Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys

1 5 10 15

Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala

20 25

<210> 280

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 280

Thr Ala Pro Asp Ala Ala Phe Asp

1 5

<210> 281

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

пептид

<400> 281

Lys Gly Gly His Arg Ser Asn Pro

1 5

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к выделенному домену FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, и может быть использовано в медицине. Выделенный домен FN3 содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 40-269 и может быть использован для обнаружения CD8–экспрессирующих клеток в биологическом образце. 10 н. и 7 з.п. ф-лы, 19 ил., 14 табл., 12 пр.

1. Выделенный домен FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, где указанный выделенный домен FN3 содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 40-269 и где в указанной аминокислотной последовательности необязательно может быть замещен цистеином остаток в положении, соответствующем остатку 54 в последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68.

2. Выделенный домен FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, где указанный выделенный домен FN3 содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 40-269 и где в указанной аминокислотной последовательности необязательно может быть замещен цистеином остаток в положении, соответствующем остатку 54 в последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68, где указанный домен FN3 конъюгирован со второй молекулой.

3. Выделенный домен FN3 по п. 2, отличающийся тем, что указанная вторая молекула представляет собой метку, пригодную для обнаружения.

4. Выделенный домен FN3 по п. 3, отличающийся тем, что указанная метка, пригодная для обнаружения, представляет собой радиоактивный изотоп, магнитные гранулы, металлические гранулы, коллоидные частицы, флуоресцентный краситель, электронно–плотный реагент, фермент, биотин, дигоксигенин или гаптен.

5. Выделенный домен FN3 по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен FN3 не активирует CD8⁺ T–лимфоциты in vitro, как измерено с помощью метода иммуноферментных пятен (ELISPOT).

6. Выделенный домен FN3 по п. 1, дополнительно содержащий метионин на N–конце домена FN3.

7. Выделенный домен FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, где указанный выделенный домен FN3 содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 40-269 и где в указанной аминокислотной последовательности необязательно может быть замещен цистеином остаток в положении, соответствующем остатку 54 в последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и 68, где указанный домен FN3 соединен с фрагментом, продлевающим время полужизни.

8. Выделенный домен FN3 по п. 7, отличающийся тем, что фрагмент, продлевающий время полужизни, представляет собой CD8–связывающую молекулу, альбумин, вариант альбумина, альбуминсвязывающую молекулу, полиэтиленгликоль (ПЭГ), CD8, вариант CD8 или, по меньшей мере, часть Fc–области иммуноглобулина.

9. Выделенный полинуклеотид, кодирующий домен FN3 по п. 1.

10. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п. 9.

11. Выделенная клетка–хозяин для получения домена FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, содержащая экспрессионный вектор по п. 10, где указанная клетка не является эмбриональной клеткой человека.

12. Способ получения домена FN3, который специфически связывается с белком CD8A человека, включающий в себя культивирование выделенной клетки–хозяина по п. 11 в условиях, в которых экспрессируется домен FN3, и очистку домена FN3.

13. Диагностический набор для обнаружения CD8A в биологическом образце, содержащий домен FN3 по п. 1 и инструкции по оценке уровня CD8A в указанном биологическом образце.

14. Диагностический агент, способный обнаруживать присутствие CD8⁺ T–клеток, содержащий домен FN3 по п. 1.

15. Диагностический агент по п. 14, отличающийся тем, что замещающий цистеин конъюгирован с Zr–89 или I–124.

16. Способ обнаружения CD8–экспрессирующих клеток в биологическом образце, включающий в себя обработку указанного биологического образца диагностическим реагентом по п. 14 и оценивание связывания указанного биологического образца с доменом FN3 такого диагностического агента.

17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что указанный диагностический агент имеет замену на цистеин в позиции остатка 54 из SEQ ID NO: 79, 81, 83, 89, 122 и/или 68 и замещающий цистеин конъюгирован с Zr–89 или I–124.

название	год	авторы	номер документа
АНТИТЕЛА К ТАУ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2018	Робертс, Малколм Ян Стаддон, Джеймс Мартин Де Силва, Хеттихевейдж Алфред Роан Спайдел, Джаред Аойаги, Хирофуми Акасофу, Шигеру Хашизуме, Ютака Агарвала, Кишан	RU2787779C2
АМАТОКСИНОВЫЕ КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА С ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВОМ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ	2020	Макдонах, Шарлотт Фентон Панвар, Раджив Хехлер, Торстен Кульке, Михаэль Сарма, Ганапати Н. Паль, Андреас Мюллер, Кристоф Симон, Вернер Лутц, Кристиан Галло, Франческа	RU2826004C2
МУЛЬТИВАЛЕНТНЫЕ И МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ 41BB-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ	2017	Экельман Брендан П. Тиммер Джон К. Хата Челси Джонс Кайл С. Хуссейн Абрахим Разаи Амир С. Беклунд Брайан Пандит Раджай Каплан Майк Рэскон Лукас Деверо Куинн	RU2789648C2
МУЛЬТИВАЛЕНТНЫЕ И МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С DR5	2016	Тиммер Джон К. Джонс Кайл С. Разаи Амир С. Хуссейн Абрахим Виллис Кетлин М. Деверо Куинн Экельман Брендан П.	RU2748620C2
РЕКОМБИНАНТНЫЕ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ФАКТОРЫ РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ	2018	Эвелет, Дэвид Джэнкинс-Эвелет, Дженнифер Субраманиам, Амутаканнан Брэдшоу, Ральф	RU2811435C2
АФФИМЕРЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С НЕОНАТАЛЬНЫМ FC РЕЦЕПТОРОМ	2020	Ким Ли Чжехён Чон Сайем Ли Чжун Хи Пак Кён Хе На Кюбон Мэттью Винсент Эмрик Басран Эмма Стэнли Эмма Дженкинс Эстелль Адам	RU2817008C1
ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, НАЦЕЛИВАЮЩИЕСЯ НА ВАРИАНТ III РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА	2017	Вонг Ой Кван Чоу Джойс Чинг Дуссеаукс Матильде Бруннхильде Смит Джулианн Сасу Барбара Джонсон	RU2751662C2
ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ПРОТИВОРАКОВАЯ НЕОЭПИТОПНАЯ ВАКЦИНА	2017	Гранум Стайн Стубсруд Элизабет Фредриксен Агнете Брунсвик	RU2782422C2
ПОЛИПЕПТИД, ВКЛЮЧАЮЩИЙ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН И ТРАНСПОРТИРУЮЩИЙ СЕГМЕНТ	2018	Игава Томоюки Исикава Хироюки Хиронива Наока Кава Тацуя	RU2815452C2
ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГУМАНИЗИРОВАННОГО ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА ПРОТИВ ВСМА	2015	Брогдон Дженнифер Чой Юджин Эберсбах Хилмар Гласс Дэвид Хют Хитер Джун Карл Х. Манник Джоан Майлон Майкл С. Мерфи Леон Плиса Габриэла Ричардсон Селеста Руелла Марко Сингх Решма Ван Юнцян У Цилун	RU2751660C2

RU 2012151366 A, 10.06.2014
KOIDE A
et al., The fibronectin type III domain as a scaffold for novel binding proteins, Journal of molecular biology, 1998, V
СЧЕТНЫЙ ДИСК ДЛЯ РАСЧЕТА СОСТАВНЫХ ЧАСТЕЙ ПИЩИ	1919	Бечин М.И.	SU284A1
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды	1921	Богач Б.И.	SU4A1
TEPLYAKOV A
et al., Antibody modeling assessment II
Structures and models, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 2014, V
Машина для разделения сыпучих материалов и размещения их в приемники	0	Печеркин Е.Ф.	SU82A1
Топка с несколькими решетками для твердого топлива	1918	Арбатский И.В.	SU8A1
SHEN

CD8A-СВЯЗЫВАЮЩИЕ ДОМЕНЫ ТИПА III ФИБРОНЕКТИНА Российский патент 2021 года по МПК C07K14/78 C07K19/00 C12N15/09 A61K49/14 A61K51/08 G01N33/534

Описание патента на изобретение RU2759952C2

Похожие патенты RU2759952C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 759 952 C2

Реферат патента 2021 года CD8A-СВЯЗЫВАЮЩИЕ ДОМЕНЫ ТИПА III ФИБРОНЕКТИНА

Формула изобретения RU 2 759 952 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2021 года RU2759952C2

RU 2 759 952 C2