ПРОИЗВОДСТВО ОЛИГОСАХАРИДОВ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО МОЛОКА В МИКРООРГАНИЗМАХ-ХОЗЯЕВАХ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ИМПОРТОМ/ЭКСПОРТОМ Российский патент 2021 года по МПК C12N15/67 C12N15/70 C12N9/10 C12P19/18 

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Человеческое молоко считается лучшим питанием для развития детей грудного возраста. Оно состоит из жиров, белков, витаминов, минералов, микроэлементов и сложной смеси углеводов, которая включает лактозу и приблизительно 150 олигосахаридов различной структуры (олигосахариды человеческого молока, ОЧМ).

Попытки произвести ОЧМ химическим или биотехнологическим путем привлекали всеобщее внимание в основном благодаря их благотворному влиянию на развитие желудочно-кишечной флоры детей грудного возраста, таким образом, оправдывая их применение в качестве питательных добавок. Помимо указанных пребиотических свойств ОЧМ обладают множеством других положительных эффектов, что расширяет область их применения.

Однако, проведение глубоких научных исследований требует получения отдельных чистых соединений, что трудно достижимо. Это особенно справедливо для сложных свободных нейтральных и кислых олигосахаридов, для которых по-прежнему не существует конкурентоспособных крупномасштабных производственных процессов (например, для лакто-N-тетраозы (Gal(β1-3)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc), лакто-N-неотетраозы (Gal(β1-4)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc), лакто-N-фукопентаозы I (Fuc(α1-2) Gal(β1-3)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc) лакто-N-неофукопентаозы I (Fuc(α1-2) Gal(β1-4)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc) (лакто-N-сиалилпентаозы a (LST-a; Neu5Ac(α2-3)Gal(β1-3)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc)). Метаболическая инженерия микроорганизма является наиболее перспективным подходом к получению указанных соединений, поскольку химические способы являются довольно неэффективными для производства указанных молекул в многотонном масштабе.

Для ОЧМ с более простой структурой, таких как 2'-фукозиллактоза, 3-фукозиллактоза или 3'-сиалиллактоза, уже разработано несколько ферментативных подходов, в которых в основном применяют штаммы Escherichia coli, полученные при помощи метаболической инженерии.

Однако, в крупном масштабе их можно получить только в результате усиления экспорта олигосахаридов из бактериальной клетки, таким образом, (i) увеличивая продуктивность и (и) обеспечивая выделение целевого олигосахарида из культуральной среды. Необходимость разрешения проблемы экспорта возрастает по мере увеличения размера продуцируемого сахара. Кроме того, при продукции более сложных олигосахаридов с применением существующих ферментативных процессов возникает проблема нежелательного экспорта предшественников олигосахаридов из клетки-продуцента, что приводит к нежелательному смешиванию продукта и предшественников олигосахаридов в ферментируемой среде. Хотя известно множество транспортных белков, переносящих моно- или дисахариды через мембрану, транспорт более крупных олигосахаридов (например, трисахаридов и более крупных олигосахаридов) остается неизученным.

Например, геном часто используемого для ферментации модельного организма Е. coli кодирует более 500 различных транспортных белков (Busch and Saier, Crit Rev Biochem Mol Biol. 2002; 37(5):287-337). По классификации эти белки, осуществляющие транспорт через мембрану, достаточно разнообразны, и их подгруппы могут различаться по механизму переноса, структуре белка или эволюционному происхождению.

Согласно классическим представлениям, активные переносчики Осуществляют перенос субстрата с затратами энергии против градиента его концентрации или электрохимического градиента, тогда как движение и направление перемещения субстрата через каналы преимущественно происходит по градиенту. В зависимости от источника энергии, используемого для транслокации, насосы можно подразделить на первичные и вторичные активные переносчики, использующие метаболическую энергию в виде АТФ или электрохимический потенциал, соответственно (Davidson and Maloney, Trends Microbiol. 2007 Oct;15(10):448-55; Forrest et al, Biochim Biophys Acta. 2011 Feb; 1807(2): 167-88). Хотя несколько мембранных белков, обеспечивающих выработку энергии, импорт углеводов и отток белков и антибактериальных веществ, хорошо изучены, глубокое понимание механизмов процессов или информация о естественных или возможных субстратах на данный момент имеются только для небольшой части аннотированных бактериальных переносчиков.

Лактозопермеаза LacY Е. coli возможно представляет наиболее подробно описанный переносчик растворенных веществ (Guan and Kaback, Annu Rev Biophys Biomol Struct. 2006; 35:67-91) и является представителем большого и чрезвычайно разнообразного суперсемейства основных посредников (MFS, от англ. major facilitator superfamily), относящегося к классу вторичных активных переносчиков, осуществляющих транспорт сахаров, лекарств, гидрофобных молекул, пептидов, органических ионов и т.д. по принципу унипорта, симпорта или антипорта (Saier et al., J Mol Microbiol Biotechnol. 1999 Nov; 1(2):257-79). За несколькими исключениями, общей структурной характеристикой переносчиков MFS являются два шестиспиральных субдомена, пронизывающие цитоплазматическую мембрану. Существование функционально гомологичных аминокислотных позиций у родственных Н⁺-сопряженных симпортеров MFS позволяет предположить существование механизма переноса, схожего с лактозопермеазой (Madej and Kaback, Proc Natl Acad Sci USA. 2013 Dec 10; 110(50): E4831-8).

За десятилетия мог быть накоплен огромный объем информации об импорте углеводов в бактерии. Однако, существует весьма ограниченная информация, касающаяся экспорта углеводов, особенно молекул, которые не связаны с поверхностью. Это не удивительно, поскольку сахара фактически представляют удобный источник углерода и энергии, поэтому, оказавшись в клетке, они не должны высвобождаться в конкурентную среду.

Однако, естественное функционирование экспортеров сахаров, возможно, задействовано в уменьшении осмотического стресса или стресса в результате внутриклеточного накопления фосфорилированных углеводов, что может указывать на адаптируемость субстратного спектра. Любопытно, что экспорт различных галактозидов, таких как ИПТГ (изопропил-В-0-1-тиогалактопиранозид), ТМГ (тиометилгалактозид) и лактоза, был показан для представителей так называемого семейства эффлюксных переносчиков сахаров (SET, от англ. sugar efflux transporter), относящегося к группе переносчиков MFS (Liu et al., J Biol Chem. 1999 Aug 13;274(33):22977-84; Liu etal., Mol Microbiol. 1999 Mar; 31 (6): 1845-51).

Опубликованы данные, что транспортный белок SetA Е. coli осуществляет перенос олигосахарида человеческого молока 3-фукозиллактозы, что приводит к улучшенной продукции указанного соединения в процессе ферментации рекомбинантным штаммом Е. coli со сверхэкспрессией setA (см. заявку авторов изобретения на международный патент WO 2010/142305). Аналогично, было показано, что экспрессия эффлюксного переносчика сахаров Yersinia позволяет осуществлять экспорт олигосахарида человеческого молока 2'-фукозиллактозы модифицированным штаммом-продуцентом Е. coli. Кроме того, с механистической и энергетической точки зрения, только транспортные системы, управляемые ионным градиентом, обладают потенциалом переносить через мембрану растворенные вещества в обоих направлениях. Это, например, справедливо для упомянутого выше LacY, симпортера галактозид/Н⁺, который является частью бактериального /ас оперона, позволяющего Е. coli осуществлять метаболизм лактозы. Данная пермеаза преимущественно импортирует лактозу в клетку, однако она также способна переносить свой субстрат в противоположном направлении.

Помимо суперсемейства основных посредников, представляющего наибольшую группу переносчиков, бактерии обладают другим механизмом экскреции растворенных веществ - зачастую объединяемого в классы эффлюксных насосов, обеспечивающих множественную лекарственную устойчивость. Как и в случае MFS, активность суперсемейства малых белков, обеспечивающих множественную лекарственную устойчивость (SMR, от англ. small multidrug resistance superfamily), суперсемейства белков множественной лекарственной устойчивости и выведения токсинов (МАТЕ, от англ. multidrug and toxic compound extrusion superfamily) и суперсемейства устойчивости-узлообразования-клеточного деления (RND, от англ. resistance-nodulation-cell division superfamily) зависит от электрохимического градиента. Пятый класс представляет собой суперсемейство переносчиков аденозинтрифосфат (АТФ)-связывающей кассеты (ABC, от англ. adenosine triphosphate binding cassette), которое в качестве источника энергии для перемещения молекул из клетки использует энергию АТФ. Как и в случае MFS, представители SMR, MATE, RND и ABC переносят структурно разнородные молекулы. Кроме того, большинство из их субстратов, идентифицированных на данный момент, не являются природными, и поэтому, их предпочтения трудно предсказать.

Несмотря на то, что на уровне техники известны процессы химического синтеза олигосахаридов человеческого молока, они являются очень затратными и не обеспечивают удовлетворительных количеств. С другой стороны, недостатком процессов ферментации, в которых применяют генетически модифицированные микроорганизмы, по-прежнему является то, что экспорт более крупных олигосахаридов (тетра-, пента, гексасахаридов) представляет собой основное препятствие для налаживания рентабельного производственного процесса. Таким образом, по-прежнему существует потребность в улучшенных процессах производства человеческих олигосахаридов в крупном масштабе.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В изобретении предложены способы и клетки микроорганизмов-хозяев для решения этой и других задач, описанные в прилагающейся формуле изобретения.

Способы и клетки-хозяева по изобретению позволяют произвести целевой олигосахарид, предпочтительно, олигосахарид, который не производится немодифицированной клеткой-хозяином, и предпочтительно, олигосахарид, относящийся к олигосахаридам человеческого молока, который можно получать из среды в больших количествах. Таким образом, олигосахарид, так сказать получают из среды в свободной форме; он не связан с поверхностным белком или мембранным белком или иным белком поверхности клетки-хозяина.

Согласно изобретению, способ производства целевого олигосахарида генетически модифицированной клеткой микроорганизма-хозяина включает стадии, при которых: а) получают генетически модифицированную клетку микроорганизма-хозяина, которая содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гликозилтрансферазу, и в которой экспрессия или активность по меньшей мере одного эндогенного белка, экспортирующего сахар, модифицирована таким образом, что экспрессия или активность белка, экспортирующего сахар, либо (i) повышена, либо (ii) понижена или инактивирована по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином, так что (i) экспорт предшественника олигосахарида в среду либо снижен, либо отсутствует или (ii) транспорт целевого олигосахарида усилен, соответственно, по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином, б) культивируют клетку-хозяина в среде в условиях, обеспечивающих производство целевого олигосахарида, благодаря чему целевой олигосахарид транспортируется в среду. Способ может дополнительно включать стадию в), при которой целевой олигосахарид получают из среды.

В способе по изобретению предпочтительно, чтобы целевой олигосахарид представлял собой олигосахарид человеческого молока, содержащий в качестве основного трисахарида лакто-N-триозу II (LNT-II; GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Gluc). Так, олигосахарид, имеющий «основной трисахарид», содержит определенный трисахарид, представляющий восстанавливающий конец целевого олигосахарида, и в соответствующих случаях содержит дополнительные сахаридные группировки, при этом определенный трисахарид является преобладающей группировкой.

Соответственно, в воплощении способа и клетки-хозяина по изобретению, целевой олигосахарид выбран из группы, состоящей из: лакто-N-триозы II, лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-фукопентаозы I, лакто-N-фукопентаозы II, лакто-N-фукопентаозы III, лакто-N-фукопентаозы V, лакто-N-дифукозилгексаозы I, лакто-N-дифукозилгексаозы II, лакто-N-сиалилпентаозы LSTa, LSTb, LSTc, дисиалиллакто-N-тетраозы, дисиалиллакто-N-неотетраозы.

Для преодоления упомянутых выше недостатков, связанных с ограниченным экспортом олигосахаридов, для решения задачи также предложен способ по изобретению, где клетка-хозяин содержит: по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида в культуральную среду, где указанная клетка-хозяин была модифицирована таким образом, что гомологичная или гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность сверхэкспрессируется или находится под контролем промотора, обеспечивающего сверхэкспрессию нуклеиновокислотной последовательности; и/или имеет делецию, разрушение, уменьшение экспрессии или инактивацию по меньшей мере одной последовательности эндогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей белок экспортер, который осуществляет экспорт предшественников целевого олигосахарида из клетки-хозяина; и/или по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, опосредующий импорт предшественника целевого олигосахарида в указанную клетку-хозяина, где нуклеиновокислотная последовательность предпочтительно сверхэкспрессируется и где предшественник предпочтительно крупнее дисахарида.

Генетически модифицированные клетки микроорганизма-хозяина, обладающие указанными характеристиками, культивируют в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина или их комбинации, указанные субстраты служат в качестве источников углерода и энергии, а также в присутствии лактозы или олигосахаридов, крупнее дисахаридов, например, LNT-II.

В предпочтительном воплощении указанного способа и клетки-хозяина указанный белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, относится к классу вторичных активных переносчиков, и более предпочтительно, осуществляет экспорт олигосахарида, содержащего по меньшей мере три группировки.

Согласно предпочтительным воплощениям, помимо генов, отвечающих за внутриклеточный биосинтез олигосахарида, для экспорта целевых олигосахаридов экспрессируется подходящий экспортер.

Согласно одному аспекту способа и клетки-хозяина по изобретению, по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой эндогенную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту.

Согласно предпочтительному воплощению способа и клетки-хозяина по изобретению, нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, происходит из бактерии, архебактерии, растения, дрожжей или животного; предпочтительно, по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой ген, выбранный из группы, состоящей из yebQ и yjhB из Escherichia coli, proP из Mannheimia succiniciproducens и setA из Cedecea neteri или их функциональных фрагментов.

Предпочтительно, экспортер олигосахарида представляет собой белок, выбранный из по меньшей мере одного из следующего: SetA, SetB, SetC, YdeA, Cmr, YnfM, MdtD, YfcJ, YhhS, EmrD, YdhC, YbdA, YdeE, MhpT, YebQ, YjhB, Bcr и YdeA из E. coli, или ProP из Mannheimia succiniciproducens и SetA из Cedecea neteri или их варианты или гомологи.

В еще одном предпочтительном воплощении рекомбинантная гликозилтрансфераза выбрана из по меньшей мере одного из следующего: галактозилтрансферазы, сиалилтрансферазы, N-ацетилглюкозаминилтрансферазы и фукозилтрансферазы, и предпочтительно выбрана из по меньшей мере одного из следующего: β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, β-1,3-галактозилтрансферазы, β-1,4-галактозилтрансферазы, β-1,6-галактозилтрансферазы, α-2,3-сиалилтрансферазы, α-2,6-сиалилтрансферазы, α-1,2-фукозилтрансферазы или α-1,3-фукозилтрансферазы.

Предпочтительное воплощение способа и клетки-хозяина по изобретению касается клетки-хозяина или ее обеспечения, где клетка-хозяин содержит в качестве гликозилтрансфераз (i) β-1,3-N-ацетилглкжозаминилтрансферазу и (ii) β-1,3-галактозилтрансферазу или β-1,4-галактозилтрансферазу. В этой связи предпочтительно, чтобы указанная β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза обладала активностью, обеспечивающей лигирование N-ацетилглюкозамина с лактозой с образованием лакто-N-триозы II, и чтобы указанная β-1,3-галактозилтрансфераза или указанная β-1,4-галактозилтрансфераза, соответственно, обладали активностью, обеспечивающей галактозилирование лакто-N-триозы II с образованием лакто-N-тетраозы или лакто-N-неотетраозы, соответственно. Разработанную систему легко адаптировать для еще более сложных олигосахаридов за счет экспрессии дополнительных гликозилтрансфераз.

Благодаря клетке микроорганизма и способу, предложенным в изобретении, посредством ферментации возможно получать целевой олигосахарид в больших количествах, в частности, олигосахарид, содержащий в качестве основной структуры LNT-II, и выделять его из культуральной жидкости.

В предпочтительном воплощении указанная β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза относится к классу IgtA из Neisseria meningitides или PmnagT из Pasteurella multocida, или их вариантам.

Предпочтительно, гликозилтрансфераза выбрана из галактозилтрансферазы, сиалилтрансферазы, N-ацетилглюкозаминилтрансферазы и фукозилтрансферазы.

В еще одном предпочтительном воплощении 6-1,3-галактозилтрансфераза, образующая лакто-N-тетраозу, представляет собой WbdO или ее функциональный вариант.Согласно аспекту изобретения β-1,3-галактозилтрансфераза представляет собой β-1,3-галактозилтрансферазу, происходящую из Salmonella enterica (wbdO, номер доступа AY730594) и предпочтительно кодируется геном, выбранным из группы, состоящей из wbgO из Escherichia coli 055:Н7 или furA из Lutiella nitroferrum или их функциональных фрагментов.

Изобретение также касается генетически модифицированной клетки микроорганизма-хозяина, предпочтительно, бактериальной клетки-хозяина, согласно описанию выше, в которой осуществлена инактивация или делеция эндогенного гена β-галактозидазы и в которой присутствует функциональный ген лактозопермеазы.

Соответственно, в предпочтительном воплощении способа и клетки-хозяина по изобретению предложена генетически модифицированная клетка-хозяин, в которой, где применимо, осуществлена инактивация или делеция эндогенного гена β-галактозидазы и гена глюкозамин-6-фосфат-дезаминазы, и где указанная генетически модифицированная клетка-хозяин содержит нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую функциональный белок лактозопермеазы, предпочтительно LacY.

В предпочтительном воплощении генетически модифицированная клетка-хозяин обладает повышенной способностью продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу, ГДФ-фукозу или ЦМФ-N-ацетилнейраминовую кислоту по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином.

В усовершенствованном воплощении способа и клетки-хозяина по изобретению указанная повышенная способность продуцировать УДФ-N-ацетилгпюкозамин и УДФ-галактозу включает сверхэкспрессию одного или более чем одного гена, кодирующего белки, обладающие следующей активностью: L-глутамин: D-фруктозо-6-фосфат-аминотрансферазы, N-ацетилглюкозамин-1-фосфатуридилтрансферазы/глюкозамин-1-фосфатацетилтрансферазы, фосфоглюкозаминмутазы, UDP-галактозо-4-эпимеразы, фосфоглюкомутазы, глюкозо-1-фосфатуридилилтрансферазы.

Для синтеза, например, LNT, необходимы УДФ-галактоза и УДФ-N-ацетилглюкозамин. УДФ-галактоза может быть получена путем подачи галактозы бактериальной клетке-хозяину, продуцирующей ОЧМ, в ферментируемую среду. Затем галактоза поступает в клетку, фосфорилируется до галактозо-1-фосфата и затем конвертируется в УДФ-галактозу. Гены, кодирующие указанную ферментативную активность, хорошо известны в литературе (Grossiord et al., J. Bacterid 2003 185(3) 870-878). Клетка может получать УДФ-галактозу также в результате собственного метаболизма, а метаболизм может улучшать дополнительная генетическая модификация, такая как сверхэкспрессия УДФ-галактозо-4'-эпимеразы или УДФ-галактозо-4'-эпимеразы в комбинации с глюкозо-1-фосфат-уридинилтрансферазой. УДФ-N-ацетилглюкозамин также может быть получен в результате собственного метаболизма УДФ-N-ацетилглюкозамина в бактериальной клетке-хозяине. Улучшить обеспеченность УДФ-N-ацетилгпюкозамином для синтеза олигосахаридов, содержащих N-ацетилглюкозамин, возможно путем инактивации катаболизма N-ацетилглюкозамина в клетке-продуценте.

Согласно одному аспекту изобретения генетически модифицированную клетку-хозяина культивируют в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина или их комбинации, но не при добавлении или не в присутствии N-ацетилглюкозамина или галактозы или их комбинации.

В предпочтительном воплощении способа и клетки-хозяина по изобретению целевой олигосахарид представляет собой лакто-N-триозу II, которая образуется из простого источника углерода в результате полной ферментации в клетке-хозяине под действием экспрессируемых гетерологичных гликозилтрансфераз 6-1,4-галактозилтрансферазы и β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы.

Данное изобретение, как уже упоминалось выше, также касается генетически модифицированной клетки-хозяина для производства целевого олигосахарида, который содержит в качестве основного трисахарида лакто-N-триозу II (LNT-II; GlcNAc(β1-3)Gal(p1-4)Gluc), где клетка-хозяин содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гликозилтрансферазу, которая предпочтительно выбрана из галактозилтрансферазы, сиалилтрансферазы и N-

ацетилглюкозаминилтрансферазы, и имеет модифицированную экспрессию или активность по меньшей мере одного эндогенного белка, транспортирующего сахар, так что эндогенный белок, транспортирующий сахар, функционально инактивирован в плане экспорта предшественника целевого олигосахарида.

Предпочтительное воплощение касается описанной выше клетки-хозяина, содержащей в качестве гликозилтрансфераз (i) экспрессируемую гетерологичную β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу и (ii) экспрессируемую гетерологичную β-1,3-галактозилтрансферазу или экспрессируемую гетерологичную β-1,4-галактозилтрансферазу, где клетка-хозяин предпочтительно дополнительно содержит по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий экспорт олигосахарида в культуральную среду, в которой культивируют клетку-хозяина, где указанный белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, относится к классу вторичных активных переносчиков, где указанная клетка-хозяин была модифицирована таким образом, что гомологичная или гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность сверхэкспрессируется или находится под контролем промотора, обеспечивающего сверхэкспрессию нуклеиновокислотной последовательности. В предпочтительном воплощении клетки-хозяина указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой эндогенную или рекомбинантную нуклеиновокислотную последовательность.

Как уже упоминалось в отношении способа по изобретению, для клетки-хозяина также предпочтительно, чтобы указанная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, происходила из бактерии, архебактерии, растения, дрожжей или животного.

Согласно другому аспекту изобретения, клетка-хозяин, описанная выше, дополнительно имеет: делецию, разрушение, уменьшение экспрессии или инактивацию по меньшей мере одной эндогенной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок экспортер, который осуществляет экспорт предшественников целевого олигосахарида из клетки-хозяина; и/или по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий импорт предшественника целевого олигосахарида в указанную клетку-хозяина, где предпочтительно нуклеиновокислотная последовательность сверхэкспрессируется и где предпочтительно предшественник крупнее дисахарида.

При сверхэкспрессии по меньшей мере одной гомологичной или гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок, обеспечивающий импорт предшественника целевого олигосахарида в указанную клетку-хозяина, возможно осуществлять в культуральную среду подачу предшественников целевого олигосахарида, которые будут импортироваться в клетку-хозяина, например, как LNT-II.

Согласно одному аспекту изобретения в клетке-хозяине указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой ген, выбранный из группы, состоящей из yebQ и yjhB из Escherichia coli, proP из Mannheimia succiniciproducens и setA из Cedecea neteri или их функциональных фрагментов.

Согласно другому предпочтительному воплощению целевой олигосахарид представляет собой лакто-N-триозу II, а белок, обеспечивающий экспорт олигосахарида в культуральную среду, в которой культивируют клетку-хозяина, представляет собой YjhB из Escherichia coli, ProP из Mannheimia succiniciproducens и SetA из Cedecea neteri или их функциональные фрагменты.

Согласно предпочтительному воплощению микроорганизм-хозяин согласно изобретению дополнительно модифицирован, чтобы не экспрессировать белки, осуществляющие экспорт предшественников целевого олигосахарида.

В предпочтительном воплощении клетки-хозяина целевой олигосахарид представляет собой лакто-N-тетраозу, предшественник представляет собой лакто-N-триозу II, а клетка-хозяин имеет делецию, разрушение или инактивацию по меньшей мере одной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок экспортер, способный осуществлять экспорт лакто-N-триозы II из клетки-хозяина.

В этой связи предпочтительно, если белок, обеспечивающий экспорт лакто-N-тетраозы выбран из YebQ из Escherichia coli BL21(DE3), SpoVB из Bacillus amyloliquefaciens, YabM из Erwinia pyrilfolia, Bcr из E. coli MG1655, YdeA из E. coli MG1655, РгоР2 из Haemophilus parainfluenzae, SetA из Pectobacterium carotovorum, FucP из E. coli MG1655, MdeA из Staphylococcus aureus Bmb9393, ImrA из Lactococcus lactis, SetA из Pseudomonas sp. MT-1 и SetA из Beauveria bassiana D1-5.

Предпочтительно, экспортер олигосахарида представляет собой белок, выбранный из по меньшей мере одного из следующего: SetA, SetB, SetC, YdeA, Cmr, YnfM, MdtD, YfcJ, YhhS, EmrD, YdhC, YbdA, YdeE, MhpT, YebQ, YjhB, Bcr и YdeA из E. coli, или ProP из Mannheimia succiniciproducens и SetA из Cedecea neteri или их вариантов или гомологов.

В данном описании термин «нуклеиновая кислота» относится к одноцепочечной или двуцепочечной макромолекуле, состоящей из дезоксирибонуклеотидов или рибонуклеотидов, и охватывает известные аналоги нуклеотидов естественного или искусственного происхождения, которые гибридизуются с желаемой нуклеиновой кислотой и кодируют некоторый полипептид.

Термин «рекомбинантный» или «генетически модифицированный», используемый в данном описании применительно к клетке микроорганизма-хозяина, указывает, что клетка микроорганизма-хозяина реплицирует гетерологичную нуклеиновую кислоту или экспрессирует пептид или белок, кодируемый гетерологичной нуклеиновой кислотой (т.е. последовательность «чужеродную для указанной клетки»). Рекомбинантные клетки могут содержать гены, которые не встречаются в нативных (не рекомбинантных) формах клетки. Рекомбинантные клетки могут также содержать гены, которые встречаются в нативной форме клетки, где гены модифицированы и возвращены обратно в клетку искусственными способами. Термин также охватывает клетки, которые содержат эндогенную нуклеиновую кислоту клетки, которая была модифицирована без удаления нуклеиновой кислоты из клетки; указанные модификации включают модификации, полученные посредством замещения гена, сайт-специфической мутации и подобных способов. Соответственно, «рекомбинантный полипептид» представляет собой полипептид, произведенный рекомбинантной клеткой. «Гетерологичная последовательность» или «гетерологичная нуклеиновая кислота» в данном описании представляет собой происходящую из источника, чужеродного для конкретной клетки-хозяина (например, из другого биологического вида), или модифицированную по сравнению с ее исходной формой, в случае происхождения из того же самого источника. Так, гетерологичная нуклеиновая кислота, функционально связанная с промотором, происходит из источника, отличного от источника, из которого происходит промотор, или модифицирована по сравнению с ее исходной формой, в случае происхождения из того же самого источника. Гетерологичная последовательность может быть стабильно встроена, например, путем трансфекции, трансформации, конъюгации или трансдукции в геном клетки микроорганизма-хозяина, которая таким образом представляет генетически модифицированную клетку-хозяина. Применяемые при этом способы будут зависеть от клетки-хозяина, в которую встраивают последовательность. Специалистам в области техники известны различные методики, которые описаны, например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989).

Соответственно, «клетка микроорганизма-хозяина» в данном описании означает микробную, предпочтительно, бактериальную клетку, которая трансформирована или трансфицирована или способна быть трансформирована или трансфицирована экзогенной полинуклеотидной последовательностью.

Так, последовательности нуклеиновых кислот по изобретению могут, например, входить в состав вектора для стабильной трансформации/трансфекции или внедрения иным способом в клетку микроорганизма-хозяина.

В данном описании термин «функционально связанный» означает функциональную связь между последовательностью, контролирующей экспрессию нуклеиновой кислоты (такой как промотор, сигнальная последовательность или ряд сайтов связывания факторов транскрипции), и второй нуклеиновокислотной последовательностью, где экспрессия контрольной последовательности влияет на транскрипцию и/или трансляцию нуклеиновой кислоты, соответствующей второй последовательности. Соответственно, термин «промотор» обозначает последовательности ДНК, которые обычно располагаются перед геном в ДНК-полимере и представляют сайт, обеспечивающий инициацию транскрипции в мРНК. «Регуляторные» последовательности ДНК также обычно располагаются в направлении «-» (т.е. располагаются перед) геном в заданном ДНК-полимере, связывают белки, определяющие частоту инициации транскрипции. Обозначаемые вместе «промотор/регулятор» или «контрольная» последовательность ДНК, эти последовательности, расположенные перед выбранным геном (или набором генов) в функциональном ДНК-полимере, совместно определяют, будет ли происходить транскрипция (и, следовательно, экспрессия) гена. Последовательности ДНК, которые обычно располагаются после гена в ДНК-полимере и обеспечивают сигнал для терминации транскрипции в мРНК, обозначают последовательностями «терминаторами» транскрипции.

Для производства полипептидов по изобретению можно использовать множество разнообразных систем экспрессии. Такие векторы включают, помимо прочих, хромосомные векторы, эписомные векторы и векторы на основе вирусов, например, векторы на основе бактериальных плазмид, бактериофагов, транспозонов, эписом дрожжей, встраиваемых элементов, элементов хромосом дрожжей, вирусов, а также векторы на основе их комбинаций, такие как на основе плазмид и генетических элементов бактериофагов, таких как космиды и фагмиды. Конструкции систем экспрессии могут содержать контролирующие участки, которые регулируют, а также запускают экспрессию. Как правило, для экспрессии можно применять любую систему или вектор, подходящие для того, чтобы поддерживать, репродуцировать или экспрессировать полинуклеотиды и синтезировать полипептид в клетке-хозяине. Соответствующую последовательность ДНК можно встроить в систему экспрессии посредством любого из многочисленных известных и рутинных способов, например, таких, которые описаны Sambrook et al., см. выше.

В области техники существует множество патентов и публикаций, относящихся к технологии «рекомбинантной ДНК» для выделения, синтеза, очистки и амплификации генетического материала для применения в трансформации выбранных организмов-хозяев. Так, общеизвестной является трансформация организма-хозяина «гибридной» вирусной или кольцевой плазмидной ДНК, которая включает выбранные экзогенные (т.е. чужеродные или «гетерологичные») последовательности ДНК. Процедуры, известные в области техники, прежде всего включают создание трансформирующего вектора посредством ферментативного расщепления кольцевой вирусной или плазмидной ДНК с образованием линейных цепочек ДНК. Выбранные цепочки чужеродной ДНК, которые обычно включают последовательности, кодирующие целевой белковый продукт, получают в линейной форме с применением тех же/аналогичных ферментов. Линейную вирусную или плазмидную ДНК инкубируют с чужеродной ДНК в присутствии лигирующих ферментов, способных осуществлять процесс восстановления, и образуются «гибридные» векторы, которые включают выбранный экзогенный сегмент ДНК «сплайсированный» в вирусную или кольцевую плазмидную ДНК.

В данном описании термин «культивирование» означает выращивание бактериальной клетки в среде в условиях, обеспечивающих и подходящих для производства целевого(ых) олигосахарида(ов). По прочтении данного описания изобретения и основываясь на сведениях, известных из уровня техники, специалист в области техники будет иметь своем в распоряжении пару подходящих бактериальных клеток-хозяев, а также сред и условий их культивирования.

В данном описании термин «выделение» или «получение» означает изолирование, сбор, очистку, собирание или иной способ отделения олигосахарида, произведенного клеткой-хозяином согласно изобретению, от культуры клетки-хозяина.

Клетка «микроорганизма-хозяина» по изобретению, как и общепринятое значение данного термина означает любой микроорганизм, включая бактерии, дрожжи и архебактерии, который обычно подходит для культивирования в больших количествах, и который может быть генетически модифицирован согласно изобретению для производства целевого олигосахарида. Предпочтительными микроорганизмами являются бактерии, например, Escherichia coli, Corynebacterium glutamicum и дрожжи Saccharomyces sp., преимущество которых состоит в том, что указанные микроорганизмы можно легко и без особых затрат культивировать в лабораторных условиях, и бактерии и дрожжи интенсивно изучали на протяжении многих лет.

В области техники и в описании данного изобретения термин «гликозилтрансферазная активность» или «гликозилтрансфераза» обозначает и охватывает ферменты, которые отвечают за биосинтез дисахаридов, олигосахаридов и полисахаридов и катализируют перенос моносахаридных группировок от активированного нуклеотид-моносахарида/сахара («гликозильного донора») на молекулу гликозильного акцептора.

В области техники и в описании данного изобретения термины «экспортер» или «белок экспортер» или «белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида» используются как синонимы и обозначают один или более чем один полилептид, которые самостоятельно или будучи частью комплекса нескольких белков переносят олигосахарид из внутриклеточной среды бактериальной клетки в периплазму указанной клетки или в культуральную надосадочную жидкость, таким образом обеспечивая прохождение олигосахарида через клеточную мембрану и/или клеточную стенку указанной клетки.

В рамках данного изобретения указанные термины также охватывают полиморфные варианты, аллели, мутанты и межвидовые гомологи нуклеиновых кислот/полинуклеотидов и полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, которая идентична более чем на 60%, на 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, предпочтительно на 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или более, предпочтительно на участке протяженностью по меньшей мере приблизительно 25, 50, 100, 200, 500 или 1000 или более аминокислот, с полипептидом, кодируемым геном дикого типа, или с белком дикого типа, демонстрирующим гликозилтрансферазную активность или экспортирующим олигосахарид.

«Вариант(ы)» в данном описании представляет собой полинуклеотид или полипептид, который отличается от референтного полинуклеотида или полипептида, соответственно, но сохраняет существенные свойства. Типичный вариант полинуклеотида отличается нуклеиновокислотной последовательностью от другого референтного полинуклеотида. Изменения нуклеиновокислотной последовательности варианта могут изменять или не изменять аминокислотную последовательность полипептида, кодируемого референтным полинуклеотидом. Нуклеотидные замены могут приводить к заменам, вставкам, делециям аминокислот, слияниям и укорочениям полипептида, кодируемого референтной последовательностью, как будет обсуждаться далее. Типичный вариант полипептида отличается аминокислотной последовательностью от другого референтного полипептида. Как правило, различия ограничены так, что последовательности референтного полипептида и варианта очень схожи в целом и идентичны во многих участках. Аминокислотная последовательность варианта полипептида и референтного полипептида могут различаться одной или более чем одной заменами, вставками, делециями в любой их комбинации. Замещенный или встроенный аминокислотный остаток может являться или не являться остатком, кодируемым генетическим кодом. Вариант полинуклеотида или полипептида может представлять собой вариант естественного происхождения, такой как аллельный вариант, или он может представлять собой вариант, который, как известно, не образуется в естественных условиях. Варианты полинуклеотидов и полипептидов, не имеющие естественного происхождения, могут быть получены посредством мутагенеза, непосредственного синтеза или другими рекомбинантными способами, известными специалистам в области техники.

Соответственно, «функциональный фрагмент» любого из генов/белков, описанных в данном документе, обозначает варианты последовательности генов/белков, по-прежнему сохраняющих такую же или в некоторой степени меньшую активность гена или белка, из которого происходит соответствующий фрагмент.

В этой связи термин «последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая» обычно относится к любому полирибонуклеотиду или полидезоксирибонуклеотиду, который может быть немодифицированной РНК или ДНК или модифицированной РНК или ДНК и обычно представляет ген, который кодирует определенный полипептид или белок.

В данном контексте термин «полипептид(ы)» относится к любому пептиду или белку, содержащему две или более аминокислот, соединенных друг с другом пептидными связями или модифицированными пептидными связями. «Полипептид(ы)» относятся как к коротким цепям, обычно обозначаемым пептидами, олигопептидами и олигомерами, так и к более длинным цепям, обычно обозначаемым «белками». Полипептиды могут содержать аминокислоты, которые не относятся к 20 аминокислотам, кодируемым генами. «Полипептид(ы)» включают те, которые модифицированы естественным путем, таким как процессинг и другие пост-трансляционные модификации, а также при помощи химической модификации. Следует принимать во внимание, что один и тот же тип модификации одинаковой или разной степени выраженности может встречаться в нескольких сайтах заданного полипептида, без существенного изменения активности полипептида. Также, заданный полипептид может содержать несколько типов модификаций. Модификации могут возникать в любом участке полипептида, включая полипептидный остов, боковые цепи аминокислот, а также амино- или карбокси-концы.

Далее, выражение «предшественник» охватывает соединения, задействованные в биосинтетических процессах, в которых образуется олигосахарид по изобретению, или которые образуются и естественным образом присутствуют в клетке-хозяине.

«Предшественник, более крупный, чем дисахарид» в данном описании обозначает углеводную группировку, которая содержит более двух моносахаридных остатков.

Термин «целевой олигосахарид» относится к углеводному полимеру, состоящему по меньшей мере из трех группировок, таким образом, охватывает трисахариды, тетрасахариды, пентасахариды и т.д., предпочтительно олигосахарид, выбранный из по меньшей мере одного из следующего: лакто-N-триозы II, лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-фукопентаозы I, лакто-N-фукопентаозы II, лакто-N-фукопентаозы III, лакто-N-фукопентаозы V, лакто-N-дифукозилгексаозы I, лакто-N-дифукозилгексаозы II, лакто-N-сиалилпентаозы LSTa, LSTb, LSTc, дисиалиллакто-N-тетраозы, дисиалиллакто-N-неотетраозы.

В настоящее время, в соответствии с общепринятым в области техники пониманием, выражение «гомологичный» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует определенный продукт или продукты и ведет происхождение от тех же биологических видов, в которые встроена указанная нуклеиновая кислота. Соответственно, термин «гетерологичный» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует определенный продукт или продукты и ведет происхождение от иных биологических видов, нежели те, в которые встроена указанная нуклеиновая кислота.

Термин «эндогенный» в данном документе и в области техники означает, что нуклеиновая кислота, кодирующая фермент, представляющий интерес, ведет свое происхождение от бактериальной клетки-хозяина, и не была встроена в указанную клетку-хозяина, тогда как «рекомбинантный» означает, что нуклеиновая кислота была встроена в указанную клетку-хозяина и не ведет свое происхождение от указанной клетки-хозяина.

Выражение «сверхэкспрессия» или «сверхэкспрессируемый» или «находящийся под контролем последовательности промотора, обеспечивающего сверхэкспрессию указанной нуклеиновокислотной последовательности» в настоящее время, в соответствии с общепринятым в области техники пониманием означает экспрессию гена в количестве, превосходящем нормальное, т.е. в увеличенном количестве, что приводит к увеличению количества белка, кодируемого нуклеиновокислотной последовательностью.

В некоторых воплощениях нуклеиновокислотная последовательность находится под контролем индуцибельного промотора, который представляет собой промотор, направляющий экспрессию гена, где уровень экспрессии меняется под воздействием факторов окружающей среды или факторов, связанных с развитием, например, таких как температура, рН, анаэробные или аэробные условия, освещение, факторы транскрипции и химические вещества. Такие промоторы обозначаются в данном документе «индуцибельными» промоторами, позволяющими контролировать время экспрессии белков, применяемых в данном изобретении. Индуцибельные промоторы для Е. coli и других клеток микроорганизмов-хозяев хорошо известны специалистам в области техники.

Следующие преимущества будут очевидны исходя из описания и приведенных графических материалов.

Не требует доказательств, что характеристики, упомянутые выше, а также характеристики, которые объясняются ниже, могут применяться не только в соответствующих приведенных комбинациях, но также и в других комбинациях или сами по себе, при этом оставаясь в рамках данного изобретения.

Примеры и графические материалы приведены в целях более подробного объяснения сути изобретения.

На Фиг. 1 приведено схематическое изображение производства лакто-N-триозы II или лакто-N-тетраозы в клетке-хозяине, культивируемой в среде;

На Фиг. 2 показаны результаты анализа методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-триозу II (LNT II), сверхэкспрессирующих ген 6-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы PmnagT(13, 14);

На Фиг. 3 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу (LNT), сверхэкспрессирующих гены Bfgal72 (1), Pmgal77 (3), MsgalT8 (6), gatD (7), Iex1 (9), IgtB (11) или IsgD (13), кодирующие 6-1,4-галактозилтрансферазу;

На Фиг. 4 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу (LNT), сверхэкспрессирующих гены KdgalTW (1), cpsl14J (7), cpslaJ (8, 9), HpgaI (12), кодирующие 6-1,4-галактозилтрансферазу;

На Фиг. 5 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу, сверхэкспрессирующих ген waaX (5), кодирующий 6-1,4-галактозилтрансферазу;

На Фиг. 6 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу, сверхэкспрессирующих гены wbdO или furA, кодирующие 6-1,3-галактозилтрансферазу;

На Фиг. 7 показаны результаты анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) культуральной надосадочной жидкости штамма Е. coli BL21(DE3), продуцирующего лакто-N-тетраозу. (А) надосадочная жидкость Е. coli BL21(DE3) 1353 и 1431, культивируемых в присутствии глюкозы и лактозы через 24 ч инкубации. (Б) надосадочная жидкость Е. coli BL21(DE3) 1353 и 1431, культивируемых в присутствии глюкозы и лактозы через 48 ч инкубации.

На Фиг. 8 приведена диаграмма, отображающая относительную концентрацию лакто-N-тетраозы в надосадочной жидкости штаммов Е. coli BL21 (DE3), сверхэкспрессирующих эффлюксные переносчика сахаров по сравнению с контрольным штаммом 1353; и

На Фиг. 9 приведена диаграмма, отображающая концентрацию лакто-N-триозы II в надосадочной жидкости штаммов Е. coli BL21 (DE3), сверхэкспрессирующих эффлюксные переносчика сахаров ТР11 (2), YjhB (3) или ТР70 (4).

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

На Фиг. 1 показано схематическое изображение приведенной в качестве примера клетки-хозяина 10 по изобретению, импортирующей лактозу и синтезирующей лакто-N-триозу II (LNT II) и лакто-N-тетраозу (LNT). Лактоза импортируется в клетку из среды, в которой культивируют клетку-хозяина, с помощью переносчика 1. Фермент N-ацетилглюкозаминилтрансфераза NacGlcT лигирует N-ацетилглюкозамин с акцепторным субстратом лактозой с образованием LNT-II. LNT-II экспортируется из клетки через белок экспортер 20. Поскольку LNT-II является предшественником LNT или LNT, экспортер, экспортирующий LNT-II, представляет белок экспортер, экспортирующий предшественники упомянутых олигосахаридов. Как изображено на Фиг. 1, клетка содержит белок, обладающий 8-1,3-галактозилтрансферазной активностью, обеспечивающей галактозилирование LNT-II для внутриклеточного образования LNT; клетка может также и/или альтернативно обладать β-1,4-галактозилтрансферазной активностью, позволяющей галактозилировать LNT-II для внутриклеточного образования лакто-N-неотетраозы LNnt. Затем LNT, или в ряде случаев LNnt, экспортируется с помощью экспортера олигосахаридов из клетки в культуральную среду, в которой культивируют клетку.

Экспортеры являются мембрано-связанными и их экспрессия может быть повышена, в случае сверхэкспрессии экспортера LNT-II происходит усиление экспорта LNT-II и снижение экспорта LNT, тогда как при делеции или иной инактивации белка экспортера, осуществляющего экспорт LNT-II, происходит улучшение экспорта LNT. Предпочтительно, экспортер LNT-II представляет собой эндогенный белок экспортер, тогда как белок экспортер LNT предпочтительно представляет собой гетерологичный белок экспортер.

Пример 1.

Создание штамма Е. coli, продуцирующего лакто-N-триозу II

Для конструирования штамма, продуцирующего лакто-N-триозу II (LNT-2) использовали Escherichia coli BL21(DE3). Метаболическая инженерия включала мутагенез и делеции определенных генов, соответственно, и интеграцию в геном гетерологичных генов. Гены lacZ и агаА инактивировали с помощью мутагенеза с использованием некомплементарных олигонуклеотидов, как описано Ellis et al., "High efficiency mutagenesis, repair, and engineering of chromosomal DNA using single-stranded oligonucleotides", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 6742-6746 (2001).

Делеции в геноме осуществляли согласно способу, предложенному Datsenko and Warner (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:6640-6645 (2000)). В геноме штамма E. coli BL21 (DE3) осуществляли делецию генов, кодирующих N-ацетилглюкозамин-6-фосфатдеацетилазу (nagA) и глюкозамин-6-фосфатдезаминазу (nagB), для предупреждения внутриклеточной деградации N-ацетилглюкозамина. Также осуществляли делецию генов wzxC-wcaJ. WcaJ кодирует УДФ-глюкозо:ундекапренилфосфатглюкозо-1-фосфаттрансферазу, катализирующую первую стадию синтеза колановой кислоты (Stevenson et al., J. Bacteriol. 1996, 178:4885-4893). Кроме того, удаляли гены fuel и fucK, кодирующие L-фукозоизомеразу и L-фукулозокиназу, соответственно.

Интеграцию в геном гетерологичных генов осуществляли путем транспозиции. Для интеграции линейных фрагментов ДНК использовали транспозазу EZ-Tn5™ (Epicentre, USA) или для транспозиции использовали гиперактивный С9-мутант транспозазы mariner Himarl (Lampe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1999, USA 96:11428-11433). Для получения транспозонов EZ-Tn5 ген, представляющий интерес, вместе с маркером устойчивости к антибиотику, фланкированному FRT-сайтами, амплифицировали с использованием праймеров 1119 и 1120 (все использованные праймеры указаны в Таблице 3 ниже); полученный ПЦР-продукт имел на обоих концах 19-пн сайты распознавания Mosaic End для транспозазы EZ-Tn5. Для интеграции с использованием транспозазы Himarl экспрессируемые конструкции (опероны), представляющие интерес, аналогичным образом клонировали вместе с маркером устойчивости к антибиотику, фланкированному FRT-сайтами, в вектор pEcomar. Вектор pEcomar кодирует гиперактивный мутант С9 транспозазы mariner Himarl, находящийся под контролем индуцируемого арабинозой промотора P_araв. Экспрессируемый фрагмент<P_tet-lacY-FRT-aadA-FRT> (SeqIDI) интегрировали с использованием транспозазы EZ-Tn5. После успешной интеграции гена импортера лактозы LacY из Е. coli К12 TG1 (номер доступа ABN72583) ген устойчивости удаляли из устойчивых к стрептомицину клонов при помощи FLP рекомбиназы, кодируемой плазмидой рСР20 (Datsenko and Warner, Proc. Natl. Acad. Sci. 2000, USA 97:6640-6645). Ген N-ацетилглюкозаминилтрансферазы IgtA из Neisseria meningitidis MC58 (номер доступа NP_274923) оптимизировали по кодонам для экспрессии в E. coli и искусственно синтезировали посредством генного синтеза. Наряду с геном galT, кодирующим галактозо-1-фосфатуридилтрансферазу из Е. coli K-12 подштамма MG1655 (номер доступа NP_415279), полученным аналогично путем генного синтеза, IgtA встраивали посредством транспозиции (SeqlD2) с использованием плазмиды pEcomar-lgtA-galT. Для усиления синтеза de novo УДФ-N-ацетилглюкозамина гены, кодирующие 1-глутамин:0-фруктозо-6-фосфатаминотрансферазу (glmS), фосфоглюкозаминмутазу из Е. coli K-12 подштамма MG1655 (glmM) и N-ацетилглюкозамин-1-фосфатуридилтрансферазу/гюкозамин-1-фосфатацетилтрансферазу (glmU) из Е. coli K-12 подштамма MG1655 (номера доступа NP_418185, NP_417643, NP_418186, соответственно) оптимизировали по кодонам и получали путем генного синтеза. Оперон glmUM клонировали под контролем конститутивного тетрациклинового промотора P_tet, a glmS клонировали под контролем конститутивного промотора Р_Т5-Транспозон, включающий в себя кассету <P_tet-glmUM-P_T5-glmS-FRT-dnfr-FRT> (SeqID3), фланкированный инвертированными концевыми повторами, специфически распознаваемыми mariner-подобным элементом транспозазой Himar1, встраивали из pEcomar-glmUM-glmS с получением штамма, продуцирующего лакто-N-триозу II. Кроме того, экспрессируемый фрагмент <P_tet-lacY(6HIS)-FRT-aadA-FRT>(SeqID4) интегрировали с использованием транспозазы EZ-Tn5.

Амплифицировали gal-оперон (galETKM) из E. coli K12 TG1 (SeqID6) с использованием праймеров 605 и 606 и встраивали в локус galM ybhJ штамма Е. coli BL21 (DE3) путем гомологичной рекомбинации, с использованием хелперной плазмиды pKD46, кодирующей рекомбиназу red (Datsenko and Warner, Proc. Natl. Acad. Sci. 2000, USA 97:6640-6645). Последовательности гетерологичных генов и кластеров генов приведены в Приложении 1.

Пример 2.

Культивирование Е. coli BL21 (DE3) 707 периодическим способом скрининг различных 6-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераз

Ген 6-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы PmnagT из Pasteurella multocida subsp.multocida штамма HN06 (номер доступа PMCN06_0022) оптимизировали по кодонам и искусственно синтезировали в компании GenScript (Пискатауэй, США). Клонирование гена осуществляли посредством независимого от последовательности и лигирования клонирования в плазмиду pET-DUET (Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Все праймеры, использованные для клонирования, приведены в Таблице 3 ниже.

Штамм Е. coli BL21(DE3) 707 (Таблица 2 ниже), несущий плазмиду рЕТ-PrrmagT, кодирующую β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et al., J. Biotech. 1999, 72:33-47) с добавлением 2% (мас./об.) глюкозы и 100 мкг/мл ампициллина. Когда культуры достигали оптической плотности 0,1 при 660 нм, экспрессию генов индуцировали добавлением 0,3 мМ ИПТГ. Через 4 часа инкубации добавляли 1,5 мМ лактозы. После дополнительной инкубации в течение 24 часов при 30°С во встряхиваемых колбах собирали клетки. Для детекции LNT-2 использовали тонкослойную хроматографию. Для этого клетки механически разрушали в определенном объеме с использованием стеклянных шариков. Затем для проведения ТСХ образцы наносили на пластины из силикагеля TLC Silica Gel 60 F₂₅₄ (Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Подвижная фаза состояла из ацетона:бутанола:уксусной кислоты:воды (35:35:7:23).

Результаты анализа при помощи ТСХ приведены на Фиг. 2. Образование соединения, мигрирующего с такой же скоростью, как стандартный трисахарид LNT-II, наблюдалось при сверхэкспрессии гена PmnagT. Штамм 724, продуцирующий LNT-II использовали в качестве контроля (19). Приведены стандарты для лактозы (1) и LNT-II (2). Образование продукта LNT-II в образцах помечено звездочками.

Пример 3.

Создание штамма Е. coli, продуцирующего лакто-N-триозу II, сверхэкспрессирующего гомологичный эффлюксный переносчик сахаров

Доказано, что экспорт олигосахаридов, произведенных в Е. coli, является лимитирующим фактором в процессе ферментации. Однако, трисахариды, такие как 2'-фукозиллактоза и LNT-2 в некоторой степени переходят в культуральную надосадочную жидкость, таким образом, вероятно, имеет место кодирование функционирующего эффлюксного переносчика сахаров. Для улучшения оттока лакто-N-триозы II (LNT-II; GluNAc(p1-3)Gal(p1-4)Glc) штамм Е. coli BL21(DE3) 1326 (Таблица 2 ниже) использовали для скрининга библиотеки эффлюксных переносчиков сахаров (SET). Возможные белки SET из Е. coli амплифицировали из геномной ДНК Е. coli BL21 (DE3) и интегрировали в вектор pINT посредством клонирования, независимого от последовательности и лигирования. При применении, например, гена yjhB, использовали праймер 2567, 2568, 2526 и 2443 с получением плазмиды pINJ-yjhB. Последовательности праймеров, использованных для клонирования, приведены в Таблице 3 ниже.

Штамм Е. coli BL21(DE3) 1326, несущий плазмиды, кодирующие 20 различных переносчиков Е. coli, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et al., J. Biotech. 1999, 72:33-47) с добавлением 2% (мас./об.) глюкозы, 100 мкг/мл ампициллина и 40 мкг/мл зеоцина. Когда культуры достигали оптической плотности 0,1 при 660 нм, экспрессию генов индуцировали добавлением 200 нг/мл ангидротетрациклина. Через 4 часа инкубации добавляли 2,5 мМ лактозы. После дополнительной инкубации в течение 24 часов и 48 часов при 30°С во встряхиваемых колбах определяли концентрацию LNT-II в надосадочной жидкости.

Анализ по массе проводили путем детектирования характерных осколочных (фрагментных) ионов с использованием тройной квадрупольной масс-спектрометрический системы детекции для жидкостной хроматографии. Ионы-предшественники отбирали и анализировали в квадруполе 1, фрагментацию осуществляли в ячейке соударений, используя азот в качестве газа для диссоциации, индуцированной соударениями, отбор фрагментных (осколочных) ионов осуществляли в квадруполе 3.

Лакто-N-тетраозу (LNT (Gal(β1-3)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Glc)), LNT-II и мальтотриозу (внутренний стандарт для количественного определения) анализировали в режиме положительной ионизации электрораспылением. LNT образует ион с m/z 708.3 М+Н⁺], LNT-II - ион с m/z 546.1 [М+Н⁺], а мальтотриоза - ион с m/z 522.0 [M+NH₄⁺]. Происходит образование аддуктов этого углевода [m/z 504.0] с ионом аммония (NH4⁺), что приводит к сдвигу масс+18. Таким образом был выделен ион-предшественник мальтозы m/z 522.0. В ячейке соударений происходила дальнейшая фрагментация иона-предшественника с образованием характерных осколочных ионов с m/z 487.1, m/z 325.0 и m/z 163.2. Молекулярный ион LNT (m/z 708.3) образовывал фрагменты с m/z 546.3, m/z 528.3, m/z 366.2 и m/z 204.0. LNT-II (m/z 546.1) образовывал фрагменты с m/z 204.2, m/z 186.0, 138.0 и m/z 126.0 (см. описание способа).

Хроматографическое разделение LNT и LNT-II осуществляли на колонке для ВЭЖХ Luna NH₂ HPLC (Phenomenex, Ашаффенбург, Германия). Это было необходимо вследствие частичной фрагментации LNT во время ионизации, в результате чего сигналы, обусловленные LNT-II, влияли на результаты количественного определения отдельных углеводов.

Повышенное количество LNT-2 в культуральной надосадочной жидкости наблюдалось только для штамма, экспрессирующего ген yjhB (см. Таблицу 1 ниже).

Пример 4.

Культивирование Е. coli BL21 (DE3) 724 периодическим способом, скрининг различных 8-1,4-галактозилтрансфераз

Гены 6-1,4-галактозилтрансфераз 1ех1 из Aggregatibacter aphrophilus NJ8700 (номер доступа YP_003008647), PmgalT7 из Pasteurella multocida subsp.multocida штамма HN06 (номер доступа PMCN06_0021), MsgalT8 из Myxococcus stipitatus DSM14675 (номер доступа MYSTI_04346), KdgalTW из Kingella denitrificans ATCC 33394 (номер доступа HMPREF9098_2407), gatD из Pasteurella multocida M1404 (номер доступа GQ444331), BfgalT2 из Bacterioidis fragilis NCTC9343 (номер доступа BF9343_0585), IsgD из Haemophilus influenza (номер доступа AAA24981) и HpgalT из Helicobacter pylori (номер доступа AB035971) оптимизировали по кодонам и искусственно синтезировали в компании GenScript Cooperation (Пискатауэй, США). Клонирование генов осуществляли посредством независимого от последовательности и лигирования клонирования (Li and Elledge, Nat Methods. 2007 Mar;4(3):251-6.). Таким образом, использовали плазмиду pINT, несущую ген malE, находящийся под контролем ангидротетрациклин-активируемого промотора, что позволило осуществить N-концевое слияние генов 6-1,4-галактозилтрансферазы и malE. Ген waaX из Pectobacterium atrosepticum JG10-08 (номер доступа ЕСА0154), кодирующий β-1,4-галактозилтрансферазу, клонировали в плазмиду pACYC-Duet (Merck KGaA, Дармштадт, Германия) в отдельности. Все праймеры, использованные для клонирования, приведены в Таблице 3 ниже.

Штамм Е. coli BL21(DE3) 724 (Таблица 2 ниже), несущий плазмиду pCDF-galE и плазмиду, кодирующую слитый ген malE и β-1,4-галактозилтрансферазы, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et al., J. Biotech. 1999, 72:33-47) с добавлением 2% (мас./об.) глюкозы, 100 мкг/мл ампициллина и 40 мкг/мл зеоцина. Когда культуры достигали оптической плотности 0,1 при 660 нм, экспрессию гена galE и β-1,4-галактозилтрансферазы индуцировали добавлением 0,3 мМ ИПТГ и 200 нг/мл ангидротетрациклина. Штамм Е. coli BL21(DE3) 534 (Таблица 2 ниже), несущий плазмиды pET-/gfA, pCOLA-glmUM-glmS, pCDF-galT-galE и pACYC-waaX, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями с добавлением 2% (мас./об.) глюкозы, 100 мкг/мл ампициллина, 34 мкг/мл хлорамфеникола, 50 мкг/мл стрептомицина и 30 мкг/мл канамицина. Когда культуры достигали оптической плотности 0,1 при 660 нм, экспрессию генов индуцировали добавлением 0,3 мМ ИПТГ. Через 4 часа после индукции экспрессии генов добавляли 2 мМ лактозы. После дополнительной инкубации в течение 48 часов при 30°С во встряхиваемых колбах собирали клетки и механически разрушали. Лакто-N-неотетраозу (LNnT (Gal(β1-4)GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Glc)) определяли посредством тонкослойной хроматографии. Для этого клетки механически разрушали в определенном объеме с использованием стеклянных шариков. Затем для проведения ТСХ образцы наносили на пластины из силикагеля TLC Silica Gel 60 F₂₅4 (Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Подвижная фаза состояла из ацетона:бутанола:уксусной кислотькводы (35:35:7:23).

Результаты анализа методом ТСХ приведены на Фиг. 3-5. На Фиг. 3 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу (LNT), сверхэкспрессирующих гены Bfgal72 (1), Pmgal77 (3), MsgalT8 (6), gatD (7), Iex1 (9), IgtB (11) или IsgD (13), кодирующие P-1,4-галактозилтрансферазу. Показаны стандарты для лактозы (15), LNT-II (16) и LNNТ (17). Образование продукта LNnT в образцах помечено звездочками.

На Фиг. 4 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу (LNT), сверхэкспрессирующих гены KdgalT10 (1), cpsl14J (7), cpslaJ (8, 9), Hpgal7 (12), кодирующие 6-1,4-галактозилтрансферазу. Показаны стандарты для лактозы (3), LNT-II (4, 16) и LNnT (5, 17). Образование продукта LNnT в образцах помечено звездочками.

На Фиг. 5 показаны результаты анализа методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу, сверхэкспрессирующих ген waaX (5), кодирующий 6-1,4-галактозилтрансферазу. Показаны стандарты для лактозы (1) LNT-II и LNnT (2). Образование продукта LNnT в образцах также помечено звездочками.

Образование соединения, мигрирующего с такой же скоростью, как стандартный тетрасахарид LNnT, наблюдалось при сверхэкспрессии следующих генов: Iex1, PmgalT, MsgalT8, BfgalT2, gatD, IsgD, KdgalT10, Hpgal7, waaX.

6-1,4-галактозилтрансферазы cpslaJ и cpsl14J, которые как известно из литературы, продуцируют LNnT (Watanabe et al., J Biochem. 2002 Feb; 131 (2): 183-91; Kolkman et al., J Bacteriol. 1996 Jul; 178(13):3736-41), также были включены в скрининг активности и служили положительным контролем. При использовании описанной в данном документе экспрессионной системы образование LNnT наблюдалось в случае CpslaJ и Cpsl14J (Фиг. 3). Всего 11 из 30 протестированных генов обеспечивали продукцию LNnT из LNT-II и УДФ-галактозы.

Пример 5.

Культивирование Е. coli BL21 (DE3) 534 периодическим способом, скрининг различных 6-1,3-галактозилтрансфераз

Используя геномную ДНК Е. coli К12 DH5α в качестве матрицы, амплифицировали galE с использованием праймеров 1163 и 1162. ПЦР продукт очищали, проводили рестрикцию рестрикционными эндонуклеазами NdeI и XnoI и лигировали во второй сайт множественного клонирования вектора pCDFDuet (Merck KGaA, Дармштадт, Германия), который разрезали теми же ферментами. GalE экспрессировали под контролем индуцируемого ИПТГ промотора Т7. Ген Е. coli К12 да/7 амплифицировали из геномной ДНК и встраивали в плазмиду pCDF-galE при помощи клонирования, независимого от последовательности и лигирования, с использованием праймеров 991-994, с получением плазмиды pCDF-gal7-galE.

Используя в качестве матрицы кодон-оптимизированный ген IgtA, осуществляли амплификацию с использованием праймеров 688 и 689. ПЦР продукт очищали, проводили рестрикцию рестрикционными эндонуклеазами Ndel и AatII и лигировали в сайт множественного клонирования вектора pETDuet (Merck KGaA, Дармштадт, Германия), который разрезали теми же ферментами, с получением плазмиды pET-IgtA.

Клонирование кодон-оптимизированной генной конструкции glmUM осуществляли посредством независимого от последовательности и лигирования клонирования в плазмиду pCOLA-Duet (Merck KGaA, Дармштадт, Германия) с использованием праймеров 848-851. Кодон-оптимизированную форму glmS амплифицировали с использованием праймеров 852 и 853. ПЦР продукт очищали, проводили рестрикцию рестрикционными эндонуклеазами Ndel и ЛагИ и лигировали во второй сайт множественного клонирования вектора pCOLA-glmUM, который разрезали теми же ферментами, с получением плазмиды pCOLA-glmUM-glmS.

Гены β-1,3-галактозилтрансфераз wbdO из Salmonella entehca subsp.salamae серовар Greenside (номер доступа AY730594) и furA из Lutiella nitroferrum 2002 (FuraDRAFT_0419) также были кодон-оптимизированы и искусственно синтезированы в компании GenScript Cooperation (Пискатауэй, США). Клонирование генов осуществляли посредством независимого от последовательности и лигирования клонирования в плазмиду pACYC-Duet (Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Все праймеры, использованные для клонирования, приведены в Таблице 3 ниже.

Штамм Е. coli BL21(DE3) 534, несущий плазмиды pET-lgtA, pCOLA-glmUM-glmS, pCDF-galT-galE и кодирующую β-1,3-галактозилтрансферазу плазмиду pACYC-furA или pACYC-wbdO, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et al., J. Biotech. 1999, 72:33-47) с добавлением 2% (мас./об.) глюкозы, 100 мкг/мл ампициллина, 34 мкг/мл хлорамфеникола, 50 мкг/мл стрептомицина и 30 мкг/мл канамицина. Когда культуры достигали оптической плотности 0,1 при 660 нм, экспрессию генов индуцировали добавлением 0,3 мМ ИПТГ. Через 4 часа инкубации добавляли 2 мМ лактозы. После дополнительной инкубации в течение 48 часов при 30°С во встряхиваемых колбах собирали клетки. LNT определяли посредством тонкослойной хроматографии. Для этого клетки механически разрушали в определенном объеме с использованием стеклянных шариков. Затем для проведения ТСХ образцы наносили на пластины из силикагеля TLC Silica Gel 60 F₂₅₄ (Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Подвижная фаза состояла из ацетона:бутанола:уксусной кислоты:воды (35:35:7:23).

На Фиг. 6 показаны результаты анализов методом ТСХ культуральных экстрактов штаммов Е. coli BL21(DE3), продуцирующих лакто-N-тетраозу, сверхэкспрессирующих гены wbdO или furA, кодирующие 3-1,3-галактозилтрансферазу. Образование продукта LNT в образцах помечено. Среди 12 протестированных возможных β-1,3-галактозилтрансфераз образование соединения, мигрирующего с такой же скоростью, как стандарт тетрасахарида LNT, наблюдалось только при сверхэкспрессии генов wbdO и furA.

Пример 6.

Создание улучшенного штамма Е. coli, продуцирующего лакто-N-тетраозу

Для конструирования штамма, продуцирующего лакто-N-тетраозу (LNT), использовали штамм Escherichia coli BL21(DE3) 724. Метаболическая инженерия включала интегрирование в геном транспозона, включающего в себя кассету<P_ter wbo^,0-P_T5-galE-FRT-caf-FRT>(SeqlD5), фланкированного инвертированными концевыми повторами, специфически распознаваемыми mariner-подобным элементом транспозазой Himarl, который встраивали из pEcomar-wbofO-galE. Полученный штамм 1353 подвергали дальнейшей метаболической инженерии для увеличения внутриклеточного пула LNT-II, что приводило к повышенной продукции LNT. Таким образом, в геноме штамма Е. coli осуществили делецию переносчика суперсемейства основных посредников yjhB (номер доступа YP_003001824) с получением штамма 1431 (Таблица 2 ниже).

Е. coli BL21(DE3) штаммов 1353 и 1431 культивировали периодическим способом в течение 48 ч при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et а/., J. Biotech. 1999, 72:33-47), содержащей 2% (мас./об.) глюкозы в качестве источника углерода и энергии. Когда культуры достигали оптической плотности 0,5 при 660 нм, добавляли 2,5 мМ лактозы. Присутствие LNT-II и LNT в культуральной надосадочной жидкости определяли посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Анализ методом ВЭЖХ проводили с использованием детектора показателя преломления (RID-10A) (Shimadzu, Duisburg, Германия) и колонки ReproSil Carbohydrate, 5 мкм (250 мм * 4,6 мм) (Dr. Maisch GmbH, Германия) соединенных с системой ВЭЖХ (Shimadzu, Duisburg, Германия). Проводили элюирование в изократическом режиме при 35°С с использованием в качестве элюента смеси ацетонитрил: H₂O (68/32 (об./об.)) при скорости потока 1,4 мл/мин, на колонку наносили 40 мкл образца. Образцы фильтровали (размер пор 0,22 мкм) и просветляли посредством твердофазной экстракции на ионообменном матриксе (Strata ABW, Phenomenex, Ашаффенбург, Германия).

На Фиг. 7 показаны результаты анализа методом ВЭЖХ культуральной надосадочной жидкости штамма Е. coli BL21(DE3), продуцирующего лакто-N-тетраозу. (А) надосадочная жидкость штаммов Е. coli BL21(DE3) 1353 (черный график) и 1431 (розовый график), культивируемых в присутствии глюкозы и лактозы, через 24 ч инкубации. (Б) надосадочная жидкость штаммов Е. coli BL21(DE3) 1353 (синий график) и 1431 (коричневый график), культивируемых в присутствии глюкозы и лактозы, через 48 ч инкубации. Как показывает анализ методом ВЭЖХ, делеция yjhB в штамме, продуцирующем LNT, повышала накопление LNT в культуральной надосадочной жидкости.

Пример 7.

Создание продуцирующего лакто-N-тетраозу штамма Е. coli, сверхэкспрессирующего эффлюксный переносчик сахаров

Поскольку экспорт лакто-N-тетраозы в среду у продуцирующих штаммов всего лишь умеренный, проводили скрининг библиотеки эффлюксных переносчиков сахаров. Согласно Примеру 3, возможные белки SET либо амплифицировали из геномной ДНК Е. coli, либо оптимизировали по кодонам и искусственно синтезировали в компании GenScript Cooperation (Пискатауэй, США). После амплификации гены встраивали в вектор pINT посредством клонирования, независимого от последовательности и лигирования. Праймеры для клонирования генов Е. coli создавали в соответствии с Примером 3. Полученные методом синтеза гены синтезировали со стандартными нуклеотидными липкими концами и аналогичным образом встраивали в экспрессирующий вектор с использованием праймеров 2527, 2444, 2526 и 2443. Последовательности праймеров, использованных для клонирования, приведены в Таблице 3 ниже.

Штамм Е. coli BL21(DE3) 1353 (Таблица 2 ниже), несущий плазмиды, кодирующие 66 различных переносчиков, культивировали при 30°С в среде с неорганическими солями (Samain et al., J. Biotech. 1999, 72:33-47) с добавлением 3% (мас./об.) глюкозы, 5 г/л NH₄CI₂,100 мкг/мл ампициллина и 15 мкг/мл канамицина. Предварительное культивирование осуществляли в 96-луночных планшетах, содержащих общий объем 200 мкл. Через 24 ч инкубации при 30°С при непрерывном встряхивании переносили 50 мкл из каждой лунки в 96-луночные планшеты с глубокими лунками, в которых находилось 400 мкл среды с неорганическими солями с добавлением 200 нг/мл ангидротетрациклина и 10 мМ лактозы. После инкубации, длившейся от 24 ч до 48 ч, определяли концентрации LNT в надосадочной жидкости посредством ЖХ-МС.Анализ по массе проводили, как описано в Примере 3.

На Фиг. 8 показана относительная концентрация лакто-N-тетраозы в надосадочной жидкости штаммов Е. coli BL21 (DE3), сверхэкспрессирующих эффлюксные переносчика сахаров, по сравнению с контрольным штаммом 1353. Титр LNT штамма 1353 принимали за 100%. Как показано на Фиг. 8, сверхэкспрессия 11 из 66 генов приводила к удвоению производства LNT. Показали, что в их числе белок, кодируемый геномом Е. coli BL21 (DE3), усиливал экспорт LNT (ТР37, yebQ, номер доступа NC_012971). YebQ является предполагаемым переносчиком MFS, возможно опосредующим отток множества лекарственных средств, который может представлять собой белок-переносчик, отвечающий за осуществление основного оттока LNT, наблюдаемого в ходе ферментации штаммом 1353.

Кроме того, экспортеры, кодируемые генами spoVB из Bacillus amyloliquefaciens (ТР1, номер доступа AFJ60154), yabM из Erwinia pyrilfoliae (ТР2, номер доступа CAY73138), Ьсг из Е. coli MG1655 (ТР18, номер доступа ААС75243), ydeA из Е. coli MG1655 (ТР20, номер доступа ААС74601), ргоР2 из Haemophilus parainfluenzae (ТР54, номер доступа EGC72107), setA из Pectobacterium carotovorum (ТР55, номер доступа ZP_03829909), fucP из Е. coli MG1655 (ТР59, номер доступа AIZ90162), mdeA из Staphylococcus aureus Bmb9393 (ТР61, номер доступа SABB_01261), ImrA из Lactococcus lactis (TP62, номер доступа L116532), setA из Pseudomonas sp.MT-1 (TP72, номер доступа ВАР78849) и setA из Beauveria bassiana D1-5 (ТР73, номер доступа KGQ13398) увеличивали производство LNT при сверхэкспрессии в продуцирующем штамме Е. coli 1353.

Пример 8.

Создание производящего лакто-N-триозу II штамма Е. coli, посредством сверхэкспрессии гетерологичных эффлюксных переносчиков сахаров

Любопытно, что скрининг экспортеров LNT, описанный в Примере 6, выявил два белка: ТР11 из Mannheimia succiniciproducens MBEL55E (proP, номер доступа AAU37785) и ТР70 из Cedecea neteri М006 (setA, номер доступа WP_039290253), чья сверхэкспрессия приводила к существенному повышению производства LNT-II и соответственно, снижению производства LNT (результаты не приведены). Данное наблюдение подтвердилось в эксперименте, описанном в Примере 3. Сверхэкспрессия эффлюксного переносчика сахаров YjhB служила положительным контролем. Сверхэкспрессия ТР11, а также ТР70 приводила к приблизительно 4-кратному увеличению производства LNT-II, которое даже несколько превосходило таковое в случае YjhB: на Фиг. 9 приведена диаграмма, на которой показаны концентрации лакто-N-триозы II в надосадочной жидкости штаммов Е. coli BL21 (DE3), сверхэкспрессирующих эффлюксные переносчики сахаров ТР11 (2), YjhB (3) или ТР70 (4). Штамм 1326, несущий пустую контрольную плазмиду, служил в качестве контроля (1). Таким образом, идентифицировали 3 эффлюксных переносчика сахаров, которые осуществляют экспорт LNT-II, сверхэкспрессия которых может оказаться эффективной при инженерии штамма, продуцирующего LNT-II.

--->

SEQUENCE LISTING

<110> ЙЕННЕВАЙН БИОТЕХНОЛОГИ ГМБХ

<120> ПРОИЗВОДСТВО ОЛИГОСАХАРИДОВ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО МОЛОКА

В МИКРООРГАНИЗМАХ-ХОЗЯЕВАХ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ИМПОРТОМ/ЭКСПОРТОМ

<130> 2827P111EP

<160> 102

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция Ptet-lacY-FRT-add1-FRT

<400> 1

tggccagatg attaattcct aatttttgtt gacactctat cattgataga gttattttac 60

cactccctat cagtgataga gaaaagtgaa atgaatagtt cgacaaaaat ctagaaataa 120

ttttgtttaa ctttaagaag gagatataca aatgtactat ttaaaaaaca caaacttttg 180

gatgttcggt ttattctttt tcttttactt ttttatcatg ggagcctact tcccgttttt 240

cccgatttgg ctacatgaca tcaaccatat cagcaaaagt gatacgggta ttatttttgc 300

cgctatttct ctgttctcgc tattattcca accgctgttt ggtctgcttt ctgacaaact 360

cgggctgcgc aaatacctgc tgtggattat taccggcatg ttagtgatgt ttgcgccgtt 420

ctttattttt atcttcgggc cactgttaca atacaacatt ttagtaggat cgattgttgg 480

tggtatttat ctaggctttt gttttaacgc cggtgcgcca gcagtagagg catttattga 540

gaaagtcagc cgtcgcagta atttcgaatt tggtcgcgcg cggatgtttg gctgtgttgg 600

ctgggcgctg tgtgcctcga ttgtcggcat catgttcacc atcaataatc agtttgtttt 660

ctggctgggc tctggctgtg cactcatcct cgccgtttta ctctttttcg ccaaaacgga 720

tgcgccctct tctgccacgg ttgccaatgc ggtaggtgcc aaccattcgg catttagcct 780

taagctggca ctggaactgt tcagacagcc aaaactgtgg tttttgtcac tgtatgttat 840

tggcgtttcc tgcacctacg atgtttttga ccaacagttt gctaatttct ttacttcgtt 900

ctttgctacc ggtgaacagg gtacgcgggt atttggctac gtaacgacaa tgggcgaatt 960

acttaacgcc tcgattatgt tctttgcgcc actgatcatt aatcgcatcg gtgggaaaaa 1020

cgccctgctg ctggctggca ctattatgtc tgtacgtatt attggctcat cgttcgccac 1080

ctcagcgctg gaagtggtta ttctgaaaac gctgcatatg tttgaagtac cgttcctgct 1140

ggtgggctgc tttaaatata ttaccagcca gtttgaagtg cgtttttcag cgacgattta 1200

tctggtctgt ttctgcttct ttaagcaact ggcgatgatt tttatgtctg tactggcggg 1260

caatatgtat gaaagcatcg gtttccaggg cgcttatctg gtgctgggtc tggtggcgct 1320

gggcttcacc ttaatttccg tgttcacgct tagcggcccc ggcccgcttt ccctgctgcg 1380

tcgtcaggtg aatgaagtcg ctgggagcta agcggccgcg tcgacacgca aaaaggccat 1440

ccgtcaggat ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc 1500

gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac 1560

tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag 1620

cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta 1680

ccatcatgta tgaatatcct ccttagttcc tattccgaag ttcctattct ctagaaagta 1740

taggaacttc ggcgcgtcct acctgtgaca cgcgtgccgc agtctcacgc ccggagcgta 1800

gcgaccgagt gagctagcta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct 1860

catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgaggga 1920

agcggtgatc gccgaagtat cgactcaact atcagaggta gttggcgtca tcgagcgcca 1980

tctcgaaccg acgttgctgg ccgtacattt gtacggctcc gcagtggatg gcggcctgaa 2040

gccacacagt gatattgatt tgctggttac ggtgaccgta aggcttgatg aaacaacgcg 2100

gcgagctttg atcaacgacc ttttggaaac ttcggcttcc cctggagaga gcgagattct 2160

ccgcgctgta gaagtcacca ttgttgtgca cgacgacatc attccgtggc gttatccagc 2220

taagcgcgaa ctgcaatttg gagaatggca gcgcaatgac attcttgcag gtatcttcga 2280

gccagccacg atcgacattg atctggctat cttgctgaca aaagcaagag aacatagcgt 2340

tgccttggta ggtccagcgg cggaggaact ctttgatccg gttcctgaac aggatctatt 2400

tgaggcgcta aatgaaacct taacgctatg gaactcgccg cccgactggg ctggcgatga 2460

gcgaaatgta gtgcttacgt tgtcccgcat ttggtacagc gcagtaaccg gcaaaatcgc 2520

gccgaaggat gtcgctgccg actgggcaat ggagcgcctg ccggcccagt atcagcccgt 2580

catacttgaa gctagacagg cttatcttgg acaagaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc 2640

agatcagttg gaagaatttg tccactacgt gaaaggcgag atcaccaagg tagtcggcaa 2700

ataatgtcta acaattcgtt caagccgagg ggccgcaaga tccggccacg atgacccggt 2760

cgtcgggtac cggcagggcg gggcgtaagg cgcgccattt aaatgaagtt cctattccga 2820

agttcctatt ctctagaaag tataggaact t 2851

<210> 2

<211> 4568

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция Ptet-lgtA-PT5-galT-FRT-kanR-FRT

<400> 2

acaggttggc tgataagtcc ccggtctagc ttgcatgcag attgcagcat tacacgtctt 60

gagcgattgt gtaggctgga gctgcttcga agttcctata ctttctagag aataggaact 120

tcggaatagg aacttcattt aaatggcgcg ccttacgccc cgccctgccg gtaccgagag 180

cgcttttgaa gctggggtgg gcgaagaact ccagcatgag atccccgcgc tggaggatca 240

tccagccggc gtcccggaaa acgattccga agcccaacct ttcatagaag gcggcggtgg 300

aatcgaaatc tcgtgatggc aggttgggcg tcgcttggtc ggtcatttcg aaccccagag 360

tcccgctcag aagaactcgt caagaaggcg atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc 420

ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat 480

atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc 540

gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac catgatattc ggcaagcagg catcgccatg 600

ggtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc 660

tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag atcatcctga tcgacaagac cggcttccat 720

ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg 780

atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc agccatgatg gatactttct cggcaggagc 840

aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc 900

cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga 960

tagccgcgct gcctcgtcct gcagttcatt cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa 1020

aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt 1080

ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg 1140

caatccatct tgttcaatca tgcgaaacga tcctcatcct gtctcttgat cagatcttga 1200

tcccctgcgc catcagatcc ttggcggcaa gaaagccatc cagtttactt tgcagggctt 1260

cccaacctta ccagagggcg ccccagctgg caattccggt tcgcttgctg tccataaaac 1320

cgcccagtct agctatcgcc atgtaagccc actgcaagct acctgctttc tctttgcgct 1380

tgcgttttcc cttgtccaga tagcccagta gctgacattc atccggggtc agcaccgttt 1440

ctgcggactg gctttctacg tgttccgctt cctttagcag cccttgcgcc ctgagtgctt 1500

gcggcagcgt gaggggatct tgacgcgtgt cacaggtagg acgcgccgaa gttcctatac 1560

tttctagaga ataggaactt cggaatagga actaaggagg atattcatac atgatggtag 1620

tgttcgaaat taatacgact cactataggg gaattgattc tggtaccaaa tgagtcgacc 1680

ggccagatga ttaattccta atttttgttg acactctatc attgatagag ttattttacc 1740

actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa tgaatagttc gacaaaaatc tagaaataat 1800

tttgtttaac tttaagaagg agatatacaa atgccgtccg aagcattccg tcgtcaccgt 1860

gcttatcgcg aaaacaaact gcagccactg gtctctgtcc tgatctgcgc atacaacgtt 1920

gagaaatact tcgcacagtc tctggcagct gtagttaacc agacctggcg taacctggat 1980

atcctgatcg tagatgacgg ctctacggat ggtacgctgg cgatcgcaca gcgtttccag 2040

gaacaggacg gtcgtatccg cattctcgct cagccgcgta actctggtct gatcccgtct 2100

ctgaacatcg gtctggacga actggccaaa tctggtggtg gtggcgaata catcgcccgt 2160

actgacgccg acgacattgc ggccccggat tggatcgaaa aaatcgtagg tgaaatggag 2220

aaagaccgct ctatcatcgc gatgggtgct tggctggaag ttctgtccga agagaaagac 2280

ggtaaccgtc tggcccgtca ccatgaacac ggcaaaatct ggaaaaaacc gacccgtcac 2340

gaagatatcg cggacttctt cccgttcggt aacccgatcc ataacaacac catgatcatg 2400

cgtcgtagcg taatcgacgg tggtctgcgt tacaacaccg aacgtgattg ggcagaagac 2460

taccagtttt ggtatgacgt gtctaaactg ggtcgtctgg cttactaccc agaagcgctg 2520

gttaaatacc gtctgcacgc caaccaggtt agctccaaat actccatccg tcagcacgaa 2580

atcgcacagg gtatccagaa aacggctcgt aacgacttcc tgcagtccat gggtttcaaa 2640

acccgtttcg actctctgga gtaccgtcag atcaaagcgg ttgcgtatga gctgctggag 2700

aaacacctgc cggaagagga ctttgaacgt gcgcgtcgtt tcctgtacca gtgcttcaaa 2760

cgtaccgaca ctctgccggc gggtgcatgg ctcgactttg cagcggatgg tcgtatgcgt 2820

cgtctgttta ccctgcgtca gtacttcggt atcctgcatc gtctcctgaa aaaccgctaa 2880

tgatttcgtc gacacacagg aaacatatta aaaattaaaa cctgcaggag tttaaacgcg 2940

gccgcgatat cgttgtaaaa cgacggccag tgcaagaatc ataaaaaatt tatttgcttt 3000

caggaaaatt tttctgtata atagattcat aaatttgaga gaggagtttt tgtgagcgga 3060

taacaattcc ccatcttagt atattagtta agtataaata cacaaggaga tataccatga 3120

cgcaatttaa tcccgttgat catccacatc gccgctacaa cccgctcacc gggcaatgga 3180

ttctggtttc accgcaccgc gctaagcgcc cctggcaggg ggcgcaggaa acgccagcca 3240

aacaggtgtt acctgcgcac gatccagatt gcttcctctg cgcaggtaat gtgcgggtga 3300

caggcgataa aaaccccgat tacaccggga cttacgtttt cactaatgac tttgcggctt 3360

tgatgtctga cacgccagat gcgccagaaa gtcacgatcc gctgatgcgt tgccagagcg 3420

cgcgcggcac cagccgggtg atctgctttt caccggatca cagtaaaacg ctgccagagc 3480

tcagcgttgc agcattgacg gaaatcgtca aaacctggca ggagcaaacc gcagaactgg 3540

ggaaaacgta cccatgggtg caggtttttg aaaacaaagg cgcggcgatg ggctgctcta 3600

acccgcatcc gcacggtcag atttgggcaa atagcttcct gcctaacgaa gctgagcgcg 3660

aagaccgcct gcaaaaagaa tattttgccg aacagaaatc accaatgctg gtggattatg 3720

ttcagcgcga gctggcagac ggtagccgta ccgttgtcga aaccgaacac tggttagccg 3780

tcgtgcctta ctgggctgcc tggccgttcg aaacgctact gctgcccaaa gcccacgttt 3840

tacggatcac cgatttgacc gacgcccagc gcagcgatct ggcgctggcg ttgaaaaagc 3900

tgaccagtcg ttatgacaac ctcttccagt gctccttccc ctactctatg ggctggcacg 3960

gcgcgccatt taatggcgaa gagaatcaac actggcagct gcacgcgcac ttttatccgc 4020

ctctgctgcg ctccgccacc gtacgtaaat ttatggttgg ttatgaaatg ctggcagaga 4080

cccagcgaga cctgaccgca gaacaggcag cagagcgttt gcgcgcagtc agcgatatcc 4140

attttcgcga atccggagtg taacgcggag gcgcgccatt taaatcaacc tcagcggtca 4200

tagctgtttc ctgtgactga gcaataacta gcataacccc ttggggcctc taaacgggtc 4260

ttgaggggtt ttttgctgaa accaatttgc ctggcggcag tagcgcggtg gtcccacctg 4320

accccatgcc gaactcagaa gtgaaacgcc gtagcgccga tggtagtgtg gggtctcccc 4380

atgcgagagt agggaactgc caggcatcaa ataaaacgaa aggctcagtc gaaagactgg 4440

gcctttcggg atccaggccg gcctgttaac gaattaatct tccgcggcaa caaaaattag 4500

gaattaatca tctggccaat ttcaggtggc acttttcggg cagaccgggg acttatcagc 4560

caacctgt 4568

<210> 3

<211> 6521

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция Ptet-glmUM-PT5-glmS-FRT-dhfr-FRT

<400> 3

acaggttggc tgataagtcc ccggtctagc ttgcatgcag attgcagcat tacacgtctt 60

gagcgattgt gtaggctgga gctgcttcga aattaatacg actcactata ggggaattga 120

ttctggtacc aaatgagtcg accggccaga tgattaattc ctaatttttg ttgacactct 180

atcattgata gagttatttt accactccct atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag 240

ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt aactttaaga aggagatata caaatgctga 300

acaacgcgat gtctgttgtt atcctggcgg cgggtaaagg tacccgtatg tactctgacc 360

tgccgaaagt tctgcacacc ctggcgggta aagcgatggt tcagcacgtt atcgacgcgg 420

cgaacgaact gggtgcggcg cacgttcacc tggtttacgg tcacggtggt gacctgctga 480

aacaggcgct gaaagacgac aacctgaact gggttctgca ggcggaacag ctgggtaccg 540

gtcacgcgat gcagcaggcg gcgccgttct tcgcggacga cgaagacatc ctgatgctgt 600

acggtgacgt tccgctgatc tctgttgaaa ccctgcagcg tctgcgtgac gcgaaaccgc 660

agggtggtat cggtctgctg accgttaaac tggacgaccc gaccggttac ggtcgtatca 720

cccgtgaaaa cggtaaagta accggtatcg ttgaacacaa agacgcgacc gacgaacagc 780

gtcagatcca ggagatcaac accggtatcc tgatcgcgaa cggtgcagac atgaaacgtt 840

ggctggcgaa actgaccaac aacaacgcgc agggtgaata ctacatcacc gacatcatcg 900

cgctggcgta ccaggaaggt cgtgaaatcg ttgcggttca cccgcagcgt ctgtctgaag 960

ttgaaggtgt taacaaccgt ctgcagctgt ctcgtctgga acgtgtttac cagtctgaac 1020

aggcggaaaa actgctgctg gcgggtgtta tgctgcgtga cccggcgcgt ttcgacctgc 1080

gtggtaccct gacccacggt cgtgacgttg aaatcgacac caacgttatc atcgaaggta 1140

acgttaccct gggtcaccgt gtaaaaatcg gcaccggttg cgttatcaaa aactctgtta 1200

tcggtgacga ctgcgaaatc tctccgtaca ccgttgttga agacgcgaac ctggcggcgg 1260

cgtgcaccat cggtccgttc gcgcgtctgc gtccgggtgc ggaactgctg gaaggtgcgc 1320

acgttggtaa cttcgttgaa atgaaaaaag cgcgtctggg taaaggttct aaagcgggtc 1380

acctgaccta cctgggtgac gcggaaatcg gtgacaacgt taacatcggt gcgggtacca 1440

tcacctgcaa ctacgacggt gcgaacaaat tcaaaaccat catcggtgac gacgttttcg 1500

ttggttctga cacccagctg gttgcgccgg ttaccgttgg taaaggtgcg accatcgcgg 1560

cgggtaccac cgttacccgt aacgttggtg aaaacgcgct ggcgatctct cgtgttccgc 1620

agacccagaa agaaggttgg cgtcgtccgg ttaaaaaaaa ataacgaagg agatagaacc 1680

atgtccaacc gtaaatactt cggtacggac ggtatccgtg gtcgtgtagg tgatgctccg 1740

attacgccgg atttcgtcct gaaactcggt tgggcagcgg gtaaagttct cgcacgtcac 1800

ggctctcgta aaatcatcat cggtaaagac acccgtatct ctggttacat gctcgaatct 1860

gcactggaag cgggtctggc tgcagctggt ctgtctgcac tgttcacggg tccgatgcca 1920

accccagctg tagcgtacct gactcgcact ttccgtgcag aagcaggtat cgtgatctct 1980

gcctctcaca acccgttcta cgacaacggt atcaaattct tcagcatcga tggtaccaaa 2040

ctcccagacg cggttgaaga ggctatcgaa gcggaaatgg agaaagaaat ctcttgtgta 2100

gactctgccg aactcggtaa agcgtctcgt atcgttgatg cagcgggtcg ttacatcgag 2160

ttctgcaaag ccacctttcc gaacgaactg agcctgtctg agctgaaaat cgtcgtagac 2220

tgtgccaacg gtgcgactta ccacattgcc ccaaacgtac tgcgtgagct gggtgctaac 2280

gtcatcgcga tcggttgtga accgaacggt gtcaacatca acgcggaagt aggtgcgacc 2340

gatgttcgtg cactgcaggc tcgtgtactc gcggagaaag cggatctcgg tatcgccttt 2400

gacggtgatg gtgaccgtgt tatcatggtt gaccacgaag gtaacaaagt ggatggtgac 2460

cagatcatgt acatcattgc ccgtgaaggt ctgcgtcagg gtcagctgcg tggtggtgca 2520

gtaggtaccc tcatgagcaa catgggtctg gaactggccc tgaaacagct gggtatccca 2580

ttcgctcgtg ctaaagtagg cgaccgttac gttctggaga aaatgcagga gaaaggttgg 2640

cgtatcggtg ccgaaaactc tggtcacgtc atcctgctgg acaaaaccac taccggtgac 2700

ggtatcgtag caggtctgca ggtactcgcc gctatggccc gtaaccacat gtccctccat 2760

gacctctgct ctggtatgaa aatgttcccg cagatcctgg ttaacgttcg ttacaccgca 2820

ggttctggtg atccgctgga acacgagtct gtgaaagccg ttaccgcaga agtggaagcg 2880

gccctgggta accgtggtcg tgtactgctg cgtaaatccg gtactgagcc actgatccgt 2940

gttatggttg agggcgaaga tgaagcccag gtcaccgaat ttgcgcaccg tattgccgac 3000

gcagtcaaag cggtttaatt tcgtcgacac acaggaaaca tattaaaaat taaaacctgc 3060

aggagtttaa acgcggccgc gatatcgttg taaaacgacg gccagtgcaa gaatcataaa 3120

aaatttattt gctttcagga aaatttttct gtataataga ttcataaatt tgagagagga 3180

gtttttgtga gcggataaca attccccatc ttagtatatt agttaagtat aaatacacaa 3240

ggagatatac atatgtgcgg tatcgttggt gctatcgcac agcgtgatgt agcggagatc 3300

ctcctggaag gtctgcgtcg tctcgaatac cgtggttacg actctgccgg tctggcagta 3360

gtggatgcag aaggtcacat gactcgtctg cgtcgtctgg gtaaagtgca gatgctcgcg 3420

caggcggcgg aagaacaccc actccacggt ggtacgggta tcgcacacac tcgttgggca 3480

acccacggtg aaccgtctga ggtcaacgca cacccgcatg ttagcgagca catcgtagtc 3540

gttcacaacg gtatcatcga gaaccacgaa ccactccgtg aggaactcaa agcccgtggt 3600

tacaccttcg taagcgaaac cgacacggaa gttatcgccc acctcgttaa ctgggaactc 3660

aaacagggtg gtactctgcg tgaagcagtt ctgcgtgcca ttccacagct gcgtggtgca 3720

tacggtaccg tgatcatgga ctctcgtcat ccggataccc tgctcgccgc acgttctggt 3780

tctccactcg ttatcggtct gggtatgggt gagaacttca tcgcctctga tcagctggcc 3840

ctgctcccag ttacccgtcg cttcatcttc ctggaagagg gtgacatcgc cgaaatcacc 3900

cgtcgttccg ttaacatctt cgacaaaacg ggtgcggaag ttaaacgtca ggacatcgag 3960

tctaacctgc agtatgacgc tggtgacaaa ggcatctacc gtcactacat gcagaaagag 4020

atctacgaac agccgaacgc gatcaaaaac accctgaccg gtcgtatctc tcacggtcag 4080

gttgacctgt ctgagctggg tccaaacgcg gacgaactcc tgtccaaagt cgagcacatc 4140

cagatcctgg cttgtggtac ctcttacaac tccggtatgg tttctcgtta ctggttcgaa 4200

tctctggcag gtatcccatg cgacgttgaa atcgcctccg aattccgtta tcgtaaatct 4260

gcggtacgtc gtaactccct catgatcacc ctgtctcagt ctggtgaaac cgctgatact 4320

ctggcaggtc tgcgtctcag caaagaactg ggttacctgg gttctctggc catctgcaac 4380

gttccgggtt ctagcctggt tcgtgagtct gacctggctc tgatgaccaa cgcgggtacg 4440

gagatcggtg ttgcctctac caaagcgttc actacccagc tcactgtcct gctgatgctg 4500

gttgccaaac tgtctcgtct caaaggcctc gacgctagca tcgaacacga catcgtacac 4560

ggtctgcagg ccctcccatc tcgtatcgag cagatgctgt ctcaggacaa acgtatcgaa 4620

gcactggcag aagacttcag cgacaaacac cacgcgctgt ttctgggtcg tggtgaccag 4680

tacccaattg cgctggaagg tgccctgaaa ctgaaagaga tcagctacat ccatgcagag 4740

gcatacgcag cgggtgagct gaaacatggt ccactggccc tgatcgacgc agatatgccg 4800

gttattgtgg ttgctccgaa caacgaactg ctggagaaac tgaaatccaa catcgaggaa 4860

gtacgtgcgc gtggtggtca gctgtacgtg tttgctgacc aggacgcggg tttcgtttcc 4920

agcgacaaca tgcacatcat cgaaatgccg catgttgaag aggtaatcgc gccaatcttc 4980

tacaccgtac cgctgcagct gctggcgtac catgtagccc tgatcaaagg tacggacgtt 5040

gaccagccgc gtaacctggc gaaatccgtg accgtggaat aacgcggagg cgcgccattt 5100

aaatcaacct cagcggtcat agctgtttcc tgtgactgag caataactag cataacccct 5160

tggggcctct aaacgggtct tgaggggttt tttgctgaaa ccaatttgcc tggcggcagt 5220

agcgcggtgg tcccacctga ccccatgccg aactcagaag tgaaacgccg tagcgccgat 5280

ggtagtgtgg ggtctcccca tgcgagagta gggaactgcc aggcatcaaa taaaacgaaa 5340

ggctcagtcg aaagactggg cctttcggga tccaggccgg cctgttaacg aattaatctt 5400

ccgcggcggt atcgataagc ttgatatcga attccgaagt tcctattctc tagaaagtat 5460

aggaacttca ggtctgaaga ggagtttacg tccagccaag ctagcttggc tgcaggtcgt 5520

cgaaattcta ccgggtaggg gaggcgcttt tcccaaggca gtctggagca tgcgctttag 5580

cagccccgct gggcacttgg cgctacacaa gtggcctctg gcctcgcaca cattccacat 5640

ccaccggtag gcgccaaccg gctccgttct ttggtggccc cttcgcgcca ccttctactc 5700

ctcccctagt caggaagttc ccccccgccc cgcagctcgc gtcgtgcagg acgtgacaaa 5760

tggaagtagc acgtctcact agtctcgtgc agatggacag caccgctgag caatggaagc 5820

gggtaggcct ttggggcagc ggccaatagc agctttgctc cttcgctttc tgggctcaga 5880

ggctgggaag gggtgggtcc gggggcgggc tcaggggcgg gctcaggggc ggggcgggcg 5940

cccgaaggtc ctccggaggc ccggcattct gcacgcttca aaagcgcacg tctgccgcgc 6000

tgttctcctc ttcctcatct ccgggccttt cgacctgcag cctgttgaca attaatcatc 6060

ggcatagtat atcggcatag tataatacga caaggtgagg aactaaacca tgggtcaaag 6120

tagcgatgaa gccaacgctc ccgttgcagg gcagtttgcg cttcccctga gtgccacctt 6180

tggcttaggg gatcgcgtac gcaagaaatc tggtgccgct tggcagggtc aagtcgtcgg 6240

ttggtattgc acaaaactca ctcctgaagg ctatgcggtc gagtccgaat cccacccagg 6300

ctcagtgcaa atttatcctg tggctgcact tgaacgtgtg gcctaatgag gggatcaatt 6360

ctctagagct cgctgatcag aagttcctat tctctagaaa gtataggaac ttcgatggcg 6420

cctcatccct gaagccaata caacaaaaat taggaattaa tcatctggcc aatttcaggt 6480

ggcacttttc gggcagaccg gggacttatc agccaacctg t 6521

<210> 4

<211> 2937

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция <Ptet-lacY(6HIS)-FRT-aadA-FRT>

<400> 4

ggccagatga ttaattccta atttttgttg acactctatc attgatagag ttattttacc 60

actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa tgaatagttc gacaaaaatc tagaaataat 120

tttgtttaac tttaagaagg agatatacaa atgggctact atttaaaaaa cacaaacttt 180

tggatgttcg gtttattctt tttcttttac ttttttatca tgggagccta cttcccgttt 240

ttcccgattt ggctacatga catcaaccat atcagcaaaa gtgatacggg tattattttt 300

gccgctattt ctctgttctc gctattattc caaccgctgt ttggtctgct ttctgacaaa 360

ctcgggctgc gcaaatacct gctgtggatt attaccggca tgttagtgat gtttgcgccg 420

ttctttattt ttatcttcgg gccactgtta caatacaaca ttttagtagg atcgattgtt 480

ggtggtattt atctaggctt ttgttttaac gccggtgcgc cagcagtaga ggcatttatt 540

gagaaagtca gccgtcgcag taatttcgaa tttggtcgcg cgcggatgtt tggctgtgtt 600

ggctgggcgc tgtgtgcctc gattgtcggc atcatgttca ccatcaataa tcagtttgtt 660

ttctggctgg gctctggctg tgcactcatc ctcgccgttt tactcttttt cgccaaaacg 720

gatgcgccct cttctcatca ccatcaccat cacgccacgg ttgccaatgc ggtaggtgcc 780

aaccattcgg catttagcct taagctggca ctggaactgt tcagacagcc aaaactgtgg 840

tttttgtcac tgtatgttat tggcgtttcc tgcacctacg atgtttttga ccaacagttt 900

gctaatttct ttacttcgtt ctttgctacc ggtgaacagg gtacgcgggt atttggctac 960

gtaacgacaa tgggcgaatt acttaacgcc tcgattatgt tctttgcgcc actgatcatt 1020

aatcgcatcg gtgggaaaaa cgccctgctg ctggctggca ctattatgtc tgtacgtatt 1080

attggctcat cgttcgccac ctcagcgctg gaagtggtta ttctgaaaac gctgcatatg 1140

tttgaagtac cgttcctgct ggtgggctgc tttaaatata ttaccagcca gtttgaagtg 1200

cgtttttcag cgacgattta tctggtctgt ttctgcttct ttaagcaact ggcgatgatt 1260

tttatgtctg tactggcggg caatatgtat gaaagcatcg gtttccaggg cgcttatctg 1320

gtgctgggtc tggtggcgct gggcttcacc ttaatttccg tgttcacgct tagcggcccc 1380

ggcccgcttt ccctgctgcg tcgtcaggtg aatgaagtcg cttaagcggc cgcgtcgaca 1440

cgcaaaaagg ccatccgtca ggatggcctt ctgcttaatt tgatgcctgg cagtttatgg 1500

cgggcgtcct gcccgccacc ctccgggccg ttgcttcgca acgttcaaat ccgctcccgg 1560

cggatttgtc ctactcagga gagcgttcac cgacaaacaa cagataaaac gaaaggccca 1620

gtctttcgac tgagcctttc gttttatttg atgcctggca gttccctact ctcgcatggg 1680

gagaccccac actaccatca tgtatgaata tcctccttag ttcctattcc gaagttccta 1740

ttctctagaa agtataggaa cttcggcgcg tcctacctgt gacacgcgtg ccgcagtctc 1800

acgcccggag cgtagcgacc gagtgagcta gctatttgtt tatttttcta aatacattca 1860

aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg 1920

aagagtatga gggaagcggt gatcgccgaa gtatcgactc aactatcaga ggtagttggc 1980

gtcatcgagc gccatctcga accgacgttg ctggccgtac atttgtacgg ctccgcagtg 2040

gatggcggcc tgaagccaca cagtgatatt gatttgctgg ttacggtgac cgtaaggctt 2100

gatgaaacaa cgcggcgagc tttgatcaac gaccttttgg aaacttcggc ttcccctgga 2160

gagagcgaga ttctccgcgc tgtagaagtc accattgttg tgcacgacga catcattccg 2220

tggcgttatc cagctaagcg cgaactgcaa tttggagaat ggcagcgcaa tgacattctt 2280

gcaggtatct tcgagccagc cacgatcgac attgatctgg ctatcttgct gacaaaagca 2340

agagaacata gcgttgcctt ggtaggtcca gcggcggagg aactctttga tccggttcct 2400

gaacaggatc tatttgaggc gctaaatgaa accttaacgc tatggaactc gccgcccgac 2460

tgggctggcg atgagcgaaa tgtagtgctt acgttgtccc gcatttggta cagcgcagta 2520

accggcaaaa tcgcgccgaa ggatgtcgct gccgactggg caatggagcg cctgccggcc 2580

cagtatcagc ccgtcatact tgaagctaga caggcttatc ttggacaaga agaagatcgc 2640

ttggcctcgc gcgcagatca gttggaagaa tttgtccact acgtgaaagg cgagatcacc 2700

aaggtagtcg gcaaataatg tctaacaatt cgttcaagcc gaggggccgc aagatccggc 2760

cacgatgacc cggtcgtcgg gtaccggcag ggcggggcgt aaggcgcgcc atttaaatga 2820

agttcctatt ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg aacttcgaag cagctccagc 2880

ctacacaatc gctcaagacg tgtaatgctg caatctgcat gcaagcttgg cactggc 2937

<210> 5

<211> 3856

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция <Ptet-wbdO-PT5-galE-FRT-cat-FRT>

<400> 5

acaggttggc tgataagtcc ccggtctgcc cgaaaagtgc cacctgaaat tggccagatg 60

attaattcct aatttttgtt gattctggta ccaaatgagt cgaccggcca gatgattaat 120

tcctaatttt tgttgacact ctatcattga tagagttatt ttaccactcc ctatcagtga 180

tagagaaaag tgaaatgaat agttcgacaa aaatctagaa ataattttgt ttaactttaa 240

gaaggagata tacaaatgct gacggaagtg cgcccggtct ctacgacgaa accgctggtg 300

tctgtgattc tgccggtgaa caaattcaac ccgtatctgg atcgtgcaat tcattcaatc 360

ctgagtcagt cctatccgtc gattgaactg attatcattg caaacaattg caccaatgac 420

tttttcgatg ctctgaaaaa acgtgaatgt gaaaccatta aagtgctgcg cacgaacatc 480

gcgtatctgc cgtactgcct gaataaaggc ctggatctgt gtaacggtga ctttgttgcc 540

cgcatggatt cagatgacat ttcgcacccg gaacgtatcg atcgccaggt cgacttcctg 600

attaacaatc cggacatcga tgtggttggc accaatgcag tctatattga tgaagatgac 660

atcgaactgg aaaaaagcaa cctgccggtg aacaataacg ctattcgtaa aatgctgccg 720

tataaatgct gtctggtgca tccgtctgtt atgtttcgca aaaatgtcgt gatcaccagc 780

ggcggttaca tgttcgcgaa ttattctgaa gattacgaac tgtggaaccg tctggccgtt 840

gaaggccgca atttttataa cctgagcgaa tacctgctgt attaccgtct gcacaataac 900

caatcaacgt cgaaaaataa cctgtttatg gtgatggcga acgatgtcgc cattaaagtg 960

aaatatttcc tgctgaccaa gaaaattagc tacctgctgg gtatcattcg cacggtcttt 1020

tctgtgttct attgcaaata catcaaatga tttcgtcgac acacaggaaa catattaaaa 1080

attaaaacct gcaggagttt aaacgcggcc gcgatatcgt tgtaaaacga cggccagtgc 1140

aagaatcata aaaaatttat ttgctttcag gaaaattttt ctgtataata gattcataaa 1200

tttgagagag gagtttttgt gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt 1260

ataaatacac cgcggaggcg tcgaaggaga tacaaccatg agagttctgg ttaccggtgg 1320

tagcggttac attggaagtc atacctgtgt gcaattactg caaaacggtc atgatgtcat 1380

cattcttgat aacctctgta acagtaagcg cagcgtactg cctgttatcg agcgtttagg 1440

cggcaaacat ccaacgtttg ttgaaggcga tattcgtaac gaagcgttga tgaccgagat 1500

cctgcacgat cacgctatcg acaccgtgat ccacttcgcc gggctgaaag ccgtgggcga 1560

atcggtacaa aaaccgctgg aatattacga caacaatgtc aacggcactc tgcgcctgat 1620

tagcgccatg cgcgccgcta acgtcaaaaa ctttattttt agctcctccg ccaccgttta 1680

tggcgatcag cccaaaattc catacgttga aagcttcccg accggcacac cgcaaagccc 1740

ttacggcaaa agcaagctga tggtggaaca gatcctcacc gatctgcaaa aagcccagcc 1800

ggactggagc attgccctgc tgcgctactt caacccggtt ggcgcgcatc cgtcgggcga 1860

tatgggcgaa gatccgcaag gcattccgaa taacctgatg ccatacatcg cccaggttgc 1920

tgtaggccgt cgcgactcgc tggcgatttt tggtaacgat tatccgaccg aagatggtac 1980

tggcgtacgc gattacatcc acgtaatgga tctggcggac ggtcacgtcg tggcgatgga 2040

aaaactggcg aacaagccag gcgtacacat ctacaacctc ggcgctggcg taggcaacag 2100

cgtgctggac gtggttaatg ccttcagcaa agcctgcggc aaaccggtta attatcattt 2160

tgcaccgcgt cgcgagggcg accttccggc ctactgggcg gacgccagca aagccgaccg 2220

tgaactgaac tggcgcgtaa cgcgcacact cgatgaaatg gcgcaggaca cctggcactg 2280

gcagtcacgc catccacagg gatatcccga ttaacgccat ttaaatcaac ctcagcggtc 2340

atagctgttt cctgtgactg agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt 2400

cttgaggggt tttttgctga aaccaatttg cctggcggca gtagcgcggt ggtcccacct 2460

gaccccatgc cgaactcaga agtgaaacgc cgtagcgccg atggtagtgt ggggtctccc 2520

catgcgagag tagggaactg ccaggcatca aataaaacga aaggctcagt cgaaagactg 2580

ggcctttcgg gatccaggcc ggcctgttaa cgaattaatc ttccgcggcg gtatcgataa 2640

gcttgatatc gaggctgaca tgggaattag ccatggtcca tatgaatatc ctccttagtt 2700

cctattccga agttcctatt ctctagaaag tataggaact tcggcgcgcc tacctgtgac 2760

ggaagatcac ttcgcagaat aaataaatcc tggtgtccct gttgataccg ggaagccctg 2820

ggccaacttt tggcgaaaat gagacgttga tcggcacgta agaggttcca actttcacca 2880

taatgaaata agatcactac cgggcgtatt ttttgagttg tcgagatttt caggagctaa 2940

ggaagctaaa atggagaaaa aaatcactgg atataccacc gttgatatat cccaatggca 3000

tcgtaaagaa cattttgagg catttcagtc agttgctcaa tgtacctata accagaccgt 3060

tcagctggat attacggcct ttttaaagac cgtaaagaaa aataagcaca agttttatcc 3120

ggcctttatt cacattcttg cccgcctgat gaatgctcat ccggaattac gtatggcaat 3180

gaaagacggt gagctggtga tatgggatag tgttcaccct tgttacaccg ttttccatga 3240

gcaaactgaa acgttttcat cgctctggag tgaataccac gacgatttcc ggcagtttct 3300

acacatatat tcgcaagatg tggcgtgtta cggtgaaaac ctggcctatt tccctaaagg 3360

gtttattgag aatatgtttt tcgtctcagc caatccctgg gtgagtttca ccagttttga 3420

tttaaacgtg gccaatatgg acaacttctt cgcccccgtt ttcaccatgg gcaaatatta 3480

tacgcaaggc gacaaggtgc tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg ccgtttgtga 3540

tggcttccat gtcggcagat gcttaatgaa tacaacagta ctgcgatgag tggcagggcg 3600

gggcgtaagg cgcgccattt aaatgaagtt cctattccga agttcctatt ctctagaaag 3660

tataggaact tcgaagcagc tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta atgctgcaat 3720

ctgcatgcaa gcttggcact ggcgatggcg cctcatccct gaagccaata agcagctcca 3780

gcctacacaa tcgctcaaga cgtgtaatgc tgcaatctgc atgcaagcta gaccggggac 3840

ttatcagcca acctgt 3856

<210> 6

<211> 4259

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция galMKTE

<400> 6

ttactcagca ataaactgat attccgtcag gctggaatac tcttcgccag gacgcaggaa 60

gcagtccggt tgcggccatt cagggtggtt cgggctgtcc ggtagaaact cgctttccag 120

agccagccct tgccagtcgg cgtaaggttc ggttccccgc gacggtgtgc cgccgaggaa 180

gttgccggag tagaattgca gagccggagc ggtggtgtag accttcagct gcaatttttc 240

atctgctgac cagacatgcg ccgccacttt cttgccatcg cctttggcct gtaacaagaa 300

tgcgtgatcg taacctttca ctttgcgctg atcgtcgtcg gcaagaaact cactggcgat 360

gattttggcg ctgcggaaat caaaagacgt tccggcgaca gatttcaggc cgtcgtgcgg 420

aatgccgcct tcatcaaccg gcagatattc gtccgccaga atctgcaact tgtgattgcg 480

cacgtcagac tgctcgccgt caagattgaa atagacgtga ttagtcatat tcaccgggca 540

aggtttatca actgtggcgc gataagtaat ggagatacgg ttatcgtcgg tcagacgata 600

ttgcaccgtc gcgccgagat tacccgggaa gccctgatca ccatcatctg aactcagggc 660

aaacagcacc tgacgatcgt tctggttcac aatctgccag cgacgtttgt cgaacccttc 720

cggcccgccg tgcagctggt taacgccctg acttggcgaa agcgtcacgg tttcaccgtc 780

aaaggtataa cggctattgg cgatacggtt ggcataacga ccaatagagg cccccagaaa 840

cgcggcctga tcctgatagc attccgggct ggcacagccg agcagcgcct cgcggacgct 900

gccatcggaa agcggaatac gggcggaaag taaagtcgca ccccagtcca tcagcgtgac 960

taccatccct gcgttgttac gcaaagttaa cagtcggtac ggctgaccat cgggtgccag 1020

tgcgggagtt tcgttcagca ctgtcctgct ccttgtgatg gtttacaaac gtaaaaagtc 1080

tctttaatac ctgtttttgc ttcatattgt tcagcgacag cttgctgtac ggcaggcacc 1140

agctcttccg ggatcagcgc gacgatacag ccgccaaatc cgccgccggt catgcgtacg 1200

ccacctttgt cgccaatcac agctttgacg atttctacca gagtgtcaat ttgcggcacg 1260

gtgatttcga aatcatcgcg catagaggca tgagactccg ccatcaactc gcccatacgt 1320

ttcaggtcgc cttgctccag cgcgctggca gcttcaacgg tgcgggcgtt ttcagtcagt 1380

atatgacgca cgcgttttgc cacgatcggg tccagttcat gcgcaacagc gttgaactct 1440

tcaatggtga catcacgcag ggctggctgc tggaagaaac gcgcaccggt ttcgcactgt 1500

tcacgacggg tgttgtattc gctgccaacc agggtacgtt tgaagttact gttgatgatg 1560

acgacagcca cacctttggg catggaaact gctttggtcc ccagtgagcg gcaatcgatc 1620

agcaaggcat gatctttctt gccgagcgcg gaaattagct gatccatgat cccgcagtta 1680

cagcctacaa actggttttc tgcttcctga ccgttaagcg cgatttgtgc gccgtccagc 1740

ggcagatgat aaagctgctg caatacggtt ccgaccgcga cttccagtga agcggaagaa 1800

cttaacccgg caccctgcgg cacattgccg ctgatcacca tgtccacgcc gccgaagctg 1860

ttgttacgca gttgcagatg tttcaccacg ccacgaacgt agttagccca ttgatagttt 1920

tcatgtgcga caatgggcgc atcgagggaa aactcgtcga gctgattttc ataatcggct 1980

gccatcacgc gaactttacg gtcatcgcgt ggtgcacaac tgatcacggt ttgataatca 2040

atcgcgcagg gcagaacgaa accgtcgttg tagtcggtgt gttcaccaat caaattcacg 2100

cggccaggcg cctgaatggt gtgagtggca gggtagccaa atgcgttggc aaacagagat 2160

tgtgtttttt ctttcagact catttcttac actccggatt cgcgaaaatg gatatcgctg 2220

actgcgcgca aacgctctgc tgcctgttct gcggtcaggt ctcgctgggt ctctgccagc 2280

atttcataac caaccataaa tttacgtacg gtggcggagc gcagcagagg cggataaaag 2340

tgcgcgtgca gctgccagtg ttgattctct tcgccattaa atggcgcgcc gtgccagccc 2400

atagagtagg ggaaggagca ctggaagagg ttgtcataac gactggtcag ctttttcaac 2460

gccagcgcca gatcgctgcg ctgggcgtcg gtcaaatcgg tgatccgtaa aacgtgggct 2520

ttgggcagca gtagcgtttc gaacggccag gcagcccagt aaggcacgac ggctaaccag 2580

tgttcggttt cgacaacggt acggctaccg tctgccagct cgcgctgaac ataatccacc 2640

agcattggtg atttctgttc ggcaaaatat tctttttgca ggcggtcttc gcgctcagct 2700

tcgttaggca ggaagctatt tgcccaaatc tgaccgtgcg gatgcgggtt agagcagccc 2760

atcgccgcgc ctttgttttc aaaaacctgc acccatgggt acgttttccc cagttctgcg 2820

gtttgctcct gccaggtttt gacgatttcc gtcaatgctg caacgctgag ctctggcagc 2880

gttttactgt gatccggtga aaagcagatc acccggctgg tgccgcgcgc gctctggcaa 2940

cgcatcagcg gatcgtgact ttctggcgca tctggcgtgt cagacatcaa agccgcaaag 3000

tcattagtga aaacgtaagt cccggtgtaa tcggggtttt tatcgcctgt cacccgcaca 3060

ttacctgcgc agaggaagca atctggatcg tgcgcaggta acacctgttt ggctggcgtt 3120

tcctgcgccc cctgccaggg gcgcttagcg cggtgcggtg aaaccagaat ccattgcccg 3180

gtgagcgggt tgtagcggcg atgtggatga tcaacgggat taaattgcgt catggtcgtt 3240

ccttaatcgg gatatccctg tggatggcgt gactgccagt gccaggtgtc ctgcgccatt 3300

tcatcgagtg tgcgcgttac gcgccagttc agttcacggt cggctttgct ggcgtccgcc 3360

cagtaggccg gaaggtcgcc ctcgcgacgc ggtgcaaaat gataattaac cggtttgccg 3420

caggctttgc tgaaggcatt aaccacgtcc agcacgctgt tgcctacgcc agcgccgagg 3480

ttgtagatgt gtacgcctgg cttgttcgcc agtttttcca tcgccacgac gtgaccgtcc 3540

gccagatcca ttacgtggat gtaatcgcgt acgccagtac catcttcggt cggataatcg 3600

ttaccaaaaa tcgccagcga gtcgcgacgg cctacagcaa cctgggcgat gtatggcatc 3660

aggttattcg gaatgccttg cggatcttcg cccatatcgc ccgacggatg cgcgccaacc 3720

gggttgaagt agcgcagcag ggcaatgctc cagtccggct gggctttttg cagatcggtg 3780

aggatctgtt ccaccatcag cttgcttttg ccgtaagggc tttgcggtgt gccggtcggg 3840

aagctttcaa cgtatggaat tttgggctga tcgccataaa cggtggcgga ggagctaaaa 3900

ataaagtttt tgacgttagc ggcgcgcatg gcgctaatca ggcgcagagt gccgttgaca 3960

ttgttgtcgt aatattccag cggtttttgt accgattcgc ccacggcttt cagcccggcg 4020

aagtggatca cggtgtcgat agcgtgatcg tgcaggatct cggtcatcaa cgcttcgtta 4080

cgaatatcgc cttcaacaaa cgttggatgt ttgccgccta aacgctcgat aacaggcagt 4140

acgctgcgct tactgttaca gaggttatca agaatgatga catcatgacc gttttgcagt 4200

aattgcacac aggtatgact tccaatgtaa ccgctaccac cggtaaccag aactctcat 4259

<210> 7

<211> 6431

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pET-lgtA

<400> 7

ggggaattgt gagcggataa caattcccct ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag 60

gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcgag 120

ctcggcgcgc ctgcaggtcg acaagcttgc ggccgcataa tgcttaagtc gaacagaaag 180

taatcgtatt gtacacggcc gcataatcga aattaatacg actcactata ggggaattgt 240

gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt ataagaagga gatatacata 300

tgccgtccga agcattccgt cgtcaccgtg cttatcgcga aaacaaactg cagccactgg 360

tctctgtcct gatctgcgca tacaacgttg agaaatactt cgcacagtct ctggcagctg 420

tagttaacca gacctggcgt aacctggata tcctgatcgt agatgacggc tctacggatg 480

gtacgctggc gatcgcacag cgtttccagg aacaggacgg tcgtatccgc attctcgctc 540

agccgcgtaa ctctggtctg atcccgtctc tgaacatcgg tctggacgaa ctggccaaat 600

ctggtggtgg tggcgaatac atcgcccgta ctgacgccga cgacattgcg gccccggatt 660

ggatcgaaaa aatcgtaggt gaaatggaga aagaccgctc tatcatcgcg atgggtgctt 720

ggctggaagt tctgtccgaa gagaaagacg gtaaccgtct ggcccgtcac catgaacacg 780

gcaaaatctg gaaaaaaccg acccgtcacg aagatatcgc ggacttcttc ccgttcggta 840

acccgatcca taacaacacc atgatcatgc gtcgtagcgt aatcgacggt ggtctgcgtt 900

acaacaccga acgtgattgg gcagaagact accagttttg gtatgacgtg tctaaactgg 960

gtcgtctggc ttactaccca gaagcgctgg ttaaataccg tctgcacgcc aaccaggtta 1020

gctccaaata ctccatccgt cagcacgaaa tcgcacaggg tatccagaaa acggctcgta 1080

acgacttcct gcagtccatg ggtttcaaaa cccgtttcga ctctctggag taccgtcaga 1140

tcaaagcggt tgcgtatgag ctgctggaga aacacctgcc ggaagaggac tttgaacgtg 1200

cgcgtcgttt cctgtaccag tgcttcaaac gtaccgacac tctgccggcg ggtgcatggc 1260

tcgactttgc agcggatggt cgtatgcgtc gtctgtttac cctgcgtcag tacttcggta 1320

tcctgcatcg tctcctgaaa aaccgctaat gagacgtcgg taccctcgag tctggtaaag 1380

aaaccgctgc tgcgaaattt gaacgccagc acatggactc gtctactagc gcagcttaat 1440

taacctaggc tgctgccacc gctgagcaat aactagcata accccttggg gcctctaaac 1500

gggtcttgag gggttttttg ctgaaaggag gaactatatc cggattggcg aatgggacgc 1560

gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac 1620

acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt 1680

cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc 1740

tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc 1800

gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact 1860

cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg 1920

gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc 1980

gaattttaac aaaatattaa cgtttacaat ttctggcggc acgatggcat gagattatca 2040

aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt 2100

atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca 2160

gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg 2220

atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca 2280

ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt 2340

cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt 2400

agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca 2460

cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca 2520

tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga 2580

agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact 2640

gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga 2700

gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg 2760

ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc 2820

tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga 2880

tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat 2940

gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt 3000

caatcatgat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg 3060

tatttagaaa aataaacaaa taggtcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 3120

actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc 3180

gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg 3240

atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa 3300

atactgtcct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc 3360

ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt 3420

gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa 3480

cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc 3540

tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc 3600

cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct 3660

ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat 3720

gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 3780

tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 3840

ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 3900

gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc 3960

atctgtgcgg tatttcacac cgcatatatg gtgcactctc agtacaatct gctctgatgc 4020

cgcatagtta agccagtata cactccgcta tcgctacgtg actgggtcat ggctgcgccc 4080

cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct 4140

tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca 4200

ccgaaacgcg cgaggcagct gcggtaaagc tcatcagcgt ggtcgtgaag cgattcacag 4260

atgtctgcct gttcatccgc gtccagctcg ttgagtttct ccagaagcgt taatgtctgg 4320

cttctgataa agcgggccat gttaagggcg gttttttcct gtttggtcac tgatgcctcc 4380

gtgtaagggg gatttctgtt catgggggta atgataccga tgaaacgaga gaggatgctc 4440

acgatacggg ttactgatga tgaacatgcc cggttactgg aacgttgtga gggtaaacaa 4500

ctggcggtat ggatgcggcg ggaccagaga aaaatcactc agggtcaatg ccagcgcttc 4560

gttaatacag atgtaggtgt tccacagggt agccagcagc atcctgcgat gcagatccgg 4620

aacataatgg tgcagggcgc tgacttccgc gtttccagac tttacgaaac acggaaaccg 4680

aagaccattc atgttgttgc tcaggtcgca gacgttttgc agcagcagtc gcttcacgtt 4740

cgctcgcgta tcggtgattc attctgctaa ccagtaaggc aaccccgcca gcctagccgg 4800

gtcctcaacg acaggagcac gatcatgcta gtcatgcccc gcgcccaccg gaaggagctg 4860

actgggttga aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg gtgcctaatg agtgagctaa 4920

cttacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag 4980

ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgccagggt 5040

ggtttttctt ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg cccttcaccg cctggccctg 5100

agagagttgc agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc aggcgaaaat cctgtttgat 5160

ggtggttaac ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta tcgtcgtatc ccactaccga 5220

gatgtccgca ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg cgcattgcgc ccagcgccat 5280

ctgatcgttg gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc tcattcagca tttgcatggt 5340

ttgttgaaaa ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt tccgctatcg gctgaatttg 5400

attgcgagtg agatatttat gccagccagc cagacgcaga cgcgccgaga cagaacttaa 5460

tgggcccgct aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg accagatgct ccacgcccag 5520

tcgcgtaccg tcttcatggg agaaaataat actgttgatg ggtgtctggt cagagacatc 5580

aagaaataac gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca gcaatggcat cctggtcatc 5640

cagcggatag ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg agaagattgt gcaccgccgc 5700

tttacaggct tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc accacgctgg cacccagttg 5760

atcggcgcga gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc gcgtgcaggg ccagactgga 5820

ggtggcaacg ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt tgttgtgcca cgcggttggg 5880

aatgtaattc agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc cgcgttttcg cagaaacgtg 5940

gctggcctgg ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag acaccggcat actctgcgac 6000

atcgtataac gttactggtt tcacattcac caccctgaat tgactctctt ccgggcgcta 6060

tcatgccata ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg tccgggatct cgacgctctc 6120

ccttatgcga ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag gttgaggccg ttgagcaccg 6180

ccgccgcaag gaatggtgca tgcaaggaga tggcgcccaa cagtcccccg gccacggggc 6240

ctgccaccat acccacgccg aaacaagcgc tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt 6300

ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc 6360

cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg agatcgatct cgatcccgcg aaattaatac 6420

gactcactat a 6431

<210> 8

<211> 5739

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pCDF-galT-galE

<400> 8

ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag 60

gagatatacc atgacgcaat ttaatcccgt tgatcatcca catcgccgct acaacccgct 120

caccgggcaa tggattctgg tttcaccgca ccgcgctaag cgcccctggc agggggcgca 180

ggaaacgcca gccaaacagg tgttacctgc gcacgatcca gattgcttcc tctgcgcagg 240

taatgtgcgg gtgacaggcg ataaaaaccc cgattacacc gggacttacg ttttcactaa 300

tgactttgcg gctttgatgt ctgacacgcc agatgcgcca gaaagtcacg atccgctgat 360

gcgttgccag agcgcgcgcg gcaccagccg ggtgatctgc ttttcaccgg atcacagtaa 420

aacgctgcca gagctcagcg ttgcagcatt gacggaaatc gtcaaaacct ggcaggagca 480

aaccgcagaa ctggggaaaa cgtacccatg ggtgcaggtt tttgaaaaca aaggcgcggc 540

gatgggctgc tctaacccgc atccgcacgg tcagatttgg gcaaatagct tcctgcctaa 600

cgaagctgag cgcgaagacc gcctgcaaaa agaatatttt gccgaacaga aatcaccaat 660

gctggtggat tatgttcagc gcgagctggc agacggtagc cgtaccgttg tcgaaaccga 720

acactggtta gccgtcgtgc cttactgggc tgcctggccg ttcgaaacgc tactgctgcc 780

caaagcccac gttttacgga tcaccgattt gaccgacgcc cagcgcagcg atctggcgct 840

ggcgttgaaa aagctgacca gtcgttatga caacctcttc cagtgctcct tcccctactc 900

tatgggctgg cacggcgcgc catttaatgg cgaagagaat caacactggc agctgcacgc 960

gcacttttat ccgcctctgc tgcgctccgc caccgtacgt aaatttatgg ttggttatga 1020

aatgctggca gagacccagc gagacctgac cgcagaacag gcagcagagc gtttgcgcgc 1080

agtcagcgat atccattttc gcgaatccgg agtgtaaaag cttgcggccg cataatgctt 1140

aagtcgaaca gaaagtaatc gtattgtaca cggccgcata atcgaaatta atacgactca 1200

ctatagggga attgtgagcg gataacaatt ccccatctta gtatattagt taagtataag 1260

aaggagatat acagatcaca tatgagagtt ctggttaccg gtggtagcgg ttacattgga 1320

agtcatacct gtgtgcaatt actgcaaaac ggtcatgatg tcatcattct tgataacctc 1380

tgtaacagta agcgcagcgt actgcctgtt atcgagcgtt taggcggcaa acatccaacg 1440

tttgttgaag gcgatattcg taacgaagcg ttgatgaccg agatcctgca cgatcacgct 1500

atcgacaccg tgatccactt cgccgggctg aaagccgtgg gcgaatcggt acaaaaaccg 1560

ctggaatatt acgacaacaa tgtcaacggc actctgcgcc tgattagcgc catgcgcgcc 1620

gctaacgtca aaaactttat ttttagctcc tccgccaccg tttatggcga tcagcccaaa 1680

attccatacg ttgaaagctt cccgaccggc acaccgcaaa gcccttacgg caaaagcaag 1740

ctgatggtgg aacagatcct caccgatctg caaaaagccc agccggactg gagcattgcc 1800

ctgctgcgct acttcaaccc ggttggcgcg catccgtcgg gcgatatggg cgaagatccg 1860

caaggcattc cgaataacct gatgccatac atcgcccagg ttgctgtagg ccgtcgcgac 1920

tcgctggcga tttttggtaa cgattatccg accgaagatg gtactggcgt acgcgattac 1980

atccacgtaa tggatctggc ggacggtcac gtcgtggcga tggaaaaact ggcgaacaag 2040

ccaggcgtac acatctacaa cctcggcgct ggcgtaggca acagcgtgct ggacgtggtt 2100

aatgccttca gcaaagcctg cggcaaaccg gttaattatc attttgcacc gcgtcgcgag 2160

ggcgaccttc cggcctactg ggcggacgcc agcaaagccg accgtgaact gaactggcgc 2220

gtaacgcgca cactcgatga aatggcgcag gacacctggc actggcagtc acgccatcca 2280

cagggatatc ccgattaatg actcgagtga tctcgagtct ggtaaagaaa ccgctgctgc 2340

gaaatttgaa cgccagcaca tggactcgtc tactagcgca gcttaattaa cctaggctgc 2400

tgccaccgct gagcaataac tagcataacc ccttggggcc tctaaacggg tcttgagggg 2460

ttttttgctg aaacctcagg catttgagaa gcacacggtc acactgcttc cggtagtcaa 2520

taaaccggta aaccagcaat agacataagc ggctatttaa cgaccctgcc ctgaaccgac 2580

gaccgggtca tcgtggccgg atcttgcggc ccctcggctt gaacgaattg ttagacatta 2640

tttgccgact accttggtga tctcgccttt cacgtagtgg acaaattctt ccaactgatc 2700

tgcgcgcgag gccaagcgat cttcttcttg tccaagataa gcctgtctag cttcaagtat 2760

gacgggctga tactgggccg gcaggcgctc cattgcccag tcggcagcga catccttcgg 2820

cgcgattttg ccggttactg cgctgtacca aatgcgggac aacgtaagca ctacatttcg 2880

ctcatcgcca gcccagtcgg gcggcgagtt ccatagcgtt aaggtttcat ttagcgcctc 2940

aaatagatcc tgttcaggaa ccggatcaaa gagttcctcc gccgctggac ctaccaaggc 3000

aacgctatgt tctcttgctt ttgtcagcaa gatagccaga tcaatgtcga tcgtggctgg 3060

ctcgaagata cctgcaagaa tgtcattgcg ctgccattct ccaaattgca gttcgcgctt 3120

agctggataa cgccacggaa tgatgtcgtc gtgcacaaca atggtgactt ctacagcgcg 3180

gagaatctcg ctctctccag gggaagccga agtttccaaa aggtcgttga tcaaagctcg 3240

ccgcgttgtt tcatcaagcc ttacggtcac cgtaaccagc aaatcaatat cactgtgtgg 3300

cttcaggccg ccatccactg cggagccgta caaatgtacg gccagcaacg tcggttcgag 3360

atggcgctcg atgacgccaa ctacctctga tagttgagtc gatacttcgg cgatcaccgc 3420

ttccctcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 3480

gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa atagctagct cactcggtcg 3540

ctacgctccg ggcgtgagac tgcggcgggc gctgcggaca catacaaagt tacccacaga 3600

ttccgtggat aagcagggga ctaacatgtg aggcaaaaca gcagggccgc gccggtggcg 3660

tttttccata ggctccgccc tcctgccaga gttcacataa acagacgctt ttccggtgca 3720

tctgtgggag ccgtgaggct caaccatgaa tctgacagta cgggcgaaac ccgacaggac 3780

ttaaagatcc ccaccgtttc cggcgggtcg ctccctcttg cgctctcctg ttccgaccct 3840

gccgtttacc ggatacctgt tccgcctttc tcccttacgg gaagtgtggc gctttctcat 3900

agctcacaca ctggtatctc ggctcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtaagc 3960

aagaactccc cgttcagccc gactgctgcg ccttatccgg taactgttca cttgagtcca 4020

acccggaaaa gcacggtaaa acgccactgg cagcagccat tggtaactgg gagttcgcag 4080

aggatttgtt tagctaaaca cgcggttgct cttgaagtgt gcgccaaagt ccggctacac 4140

tggaaggaca gatttggttg ctgtgctctg cgaaagccag ttaccacggt taagcagttc 4200

cccaactgac ttaaccttcg atcaaaccac ctccccaggt ggttttttcg tttacagggc 4260

aaaagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctactgaac 4320

cgctctagat ttcagtgcaa tttatctctt caaatgtagc acctgaagtc agccccatac 4380

gatataagtt gtaattctca tgttagtcat gccccgcgcc caccggaagg agctgactgg 4440

gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc taatgagtga gctaacttac 4500

attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca 4560

ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgcc agggtggttt 4620

ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt caccgcctgg ccctgagaga 4680

gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg aaaatcctgt ttgatggtgg 4740

ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc gtatcccact accgagatgt 4800

ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat tgcgcccagc gccatctgat 4860

cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt cagcatttgc atggtttgtt 4920

gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc tatcggctga atttgattgc 4980

gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc cgagacagaa cttaatgggc 5040

ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag atgctccacg cccagtcgcg 5100

taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt ctggtcagag acatcaagaa 5160

ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat ggcatcctgg tcatccagcg 5220

gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag attgtgcacc gccgctttac 5280

aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac gctggcaccc agttgatcgg 5340

cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg cagggccaga ctggaggtgg 5400

caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg tgccacgcgg ttgggaatgt 5460

aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt tttcgcagaa acgtggctgg 5520

cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc ggcatactct gcgacatcgt 5580

ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact ctcttccggg cgctatcatg 5640

ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg ctctccctta 5700

tgcgactcct gcattaggaa attaatacga ctcactata 5739

<210> 9

<211> 8232

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pCOLA-glmUM-glmS

<400> 9

cagcccactg acgcgttgcg cgagaagatt gtgcaccgcc gctttacagg cttcgacgcc 60

gcttcgttct accatcgaca ccaccacgct ggcacccagt tgatcggcgc gagatttaat 120

cgccgcgaca atttgcgacg gcgcgtgcag ggccagactg gaggtggcaa cgccaatcag 180

caacgactgt ttgcccgcca gttgttgtgc cacgcggttg ggaatgtaat tcagctccgc 240

catcgccgct tccacttttt cccgcgtttt cgcagaaacg tggctggcct ggttcaccac 300

gcgggaaacg gtctgataag agacaccggc atactctgcg acatcgtata acgttactgg 360

tttcacattc accaccctga attgactctc ttccgggcgc tatcatgcca taccgcgaaa 420

ggttttgcgc cattcgatgg tgtccgggat ctcgacgctc tcccttatgc gactcctgca 480

ttaggaaatt aatacgactc actatagggg aattgtgagc ggataacaat tcccctgtag 540

aaataatttt gtttaacttt aataaggaga tataccatgc tgaacaacgc gatgtctgtt 600

gttatcctgg cggcgggtaa aggtacccgt atgtactctg acctgccgaa agttctgcac 660

accctggcgg gtaaagcgat ggttcagcac gttatcgacg cggcgaacga actgggtgcg 720

gcgcacgttc acctggttta cggtcacggt ggtgacctgc tgaaacaggc gctgaaagac 780

gacaacctga actgggttct gcaggcggaa cagctgggta ccggtcacgc gatgcagcag 840

gcggcgccgt tcttcgcgga cgacgaagac atcctgatgc tgtacggtga cgttccgctg 900

atctctgttg aaaccctgca gcgtctgcgt gacgcgaaac cgcagggtgg tatcggtctg 960

ctgaccgtta aactggacga cccgaccggt tacggtcgta tcacccgtga aaacggtaaa 1020

gtaaccggta tcgttgaaca caaagacgcg accgacgaac agcgtcagat ccaggagatc 1080

aacaccggta tcctgatcgc gaacggtgca gacatgaaac gttggctggc gaaactgacc 1140

aacaacaacg cgcagggtga atactacatc accgacatca tcgcgctggc gtaccaggaa 1200

ggtcgtgaaa tcgttgcggt tcacccgcag cgtctgtctg aagttgaagg tgttaacaac 1260

cgtctgcagc tgtctcgtct ggaacgtgtt taccagtctg aacaggcgga aaaactgctg 1320

ctggcgggtg ttatgctgcg tgacccggcg cgtttcgacc tgcgtggtac cctgacccac 1380

ggtcgtgacg ttgaaatcga caccaacgtt atcatcgaag gtaacgttac cctgggtcac 1440

cgtgtaaaaa tcggcaccgg ttgcgttatc aaaaactctg ttatcggtga cgactgcgaa 1500

atctctccgt acaccgttgt tgaagacgcg aacctggcgg cggcgtgcac catcggtccg 1560

ttcgcgcgtc tgcgtccggg tgcggaactg ctggaaggtg cgcacgttgg taacttcgtt 1620

gaaatgaaaa aagcgcgtct gggtaaaggt tctaaagcgg gtcacctgac ctacctgggt 1680

gacgcggaaa tcggtgacaa cgttaacatc ggtgcgggta ccatcacctg caactacgac 1740

ggtgcgaaca aattcaaaac catcatcggt gacgacgttt tcgttggttc tgacacccag 1800

ctggttgcgc cggttaccgt tggtaaaggt gcgaccatcg cggcgggtac caccgttacc 1860

cgtaacgttg gtgaaaacgc gctggcgatc tctcgtgttc cgcagaccca gaaagaaggt 1920

tggcgtcgtc cggttaaaaa aaaataacga aggagataga accatgtcca accgtaaata 1980

cttcggtacg gacggtatcc gtggtcgtgt aggtgatgct ccgattacgc cggatttcgt 2040

cctgaaactc ggttgggcag cgggtaaagt tctcgcacgt cacggctctc gtaaaatcat 2100

catcggtaaa gacacccgta tctctggtta catgctcgaa tctgcactgg aagcgggtct 2160

ggctgcagct ggtctgtctg cactgttcac gggtccgatg ccaaccccag ctgtagcgta 2220

cctgactcgc actttccgtg cagaagcagg tatcgtgatc tctgcctctc acaacccgtt 2280

ctacgacaac ggtatcaaat tcttcagcat cgatggtacc aaactcccag acgcggttga 2340

agaggctatc gaagcggaaa tggagaaaga aatctcttgt gtagactctg ccgaactcgg 2400

taaagcgtct cgtatcgttg atgcagcggg tcgttacatc gagttctgca aagccacctt 2460

tccgaacgaa ctgagcctgt ctgagctgaa aatcgtcgta gactgtgcca acggtgcgac 2520

ttaccacatt gccccaaacg tactgcgtga gctgggtgct aacgtcatcg cgatcggttg 2580

tgaaccgaac ggtgtcaaca tcaacgcgga agtaggtgcg accgatgttc gtgcactgca 2640

ggctcgtgta ctcgcggaga aagcggatct cggtatcgcc tttgacggtg atggtgaccg 2700

tgttatcatg gttgaccacg aaggtaacaa agtggatggt gaccagatca tgtacatcat 2760

tgcccgtgaa ggtctgcgtc agggtcagct gcgtggtggt gcagtaggta ccctcatgag 2820

caacatgggt ctggaactgg ccctgaaaca gctgggtatc ccattcgctc gtgctaaagt 2880

aggcgaccgt tacgttctgg agaaaatgca ggagaaaggt tggcgtatcg gtgccgaaaa 2940

ctctggtcac gtcatcctgc tggacaaaac cactaccggt gacggtatcg tagcaggtct 3000

gcaggtactc gccgctatgg cccgtaacca catgtccctc catgacctct gctctggtat 3060

gaaaatgttc ccgcagatcc tggttaacgt tcgttacacc gcaggttctg gtgatccgct 3120

ggaacacgag tctgtgaaag ccgttaccgc agaagtggaa gcggccctgg gtaaccgtgg 3180

tcgtgtactg ctgcgtaaat ccggtactga gccactgatc cgtgttatgg ttgagggcga 3240

agatgaagcc caggtcaccg aatttgcgca ccgtattgcc gacgcagtca aagcggttta 3300

aatgggcagc agccatcacc atcatcacca cagccaggat ccgaattcga gctcggcgcg 3360

cctgcaggtc gacaagcttg cggccgcata atgcttaagt cgaacagaaa gtaatcgtat 3420

tgtacacggc cgcataatcg aaattaatac gactcactat aggggaattg tgagcggata 3480

acaattcccc atcttagtat attagttaag tataagaagg agatatacat atgtgcggta 3540

tcgttggtgc tatcgcacag cgtgatgtag cggagatcct cctggaaggt ctgcgtcgtc 3600

tcgaataccg tggttacgac tctgccggtc tggcagtagt ggatgcagaa ggtcacatga 3660

ctcgtctgcg tcgtctgggt aaagtgcaga tgctcgcgca ggcggcggaa gaacacccac 3720

tccacggtgg tacgggtatc gcacacactc gttgggcaac ccacggtgaa ccgtctgagg 3780

tcaacgcaca cccgcatgtt agcgagcaca tcgtagtcgt tcacaacggt atcatcgaga 3840

accacgaacc actccgtgag gaactcaaag cccgtggtta caccttcgta agcgaaaccg 3900

acacggaagt tatcgcccac ctcgttaact gggaactcaa acagggtggt actctgcgtg 3960

aagcagttct gcgtgccatt ccacagctgc gtggtgcata cggtaccgtg atcatggact 4020

ctcgtcatcc ggataccctg ctcgccgcac gttctggttc tccactcgtt atcggtctgg 4080

gtatgggtga gaacttcatc gcctctgatc agctggccct gctcccagtt acccgtcgct 4140

tcatcttcct ggaagagggt gacatcgccg aaatcacccg tcgttccgtt aacatcttcg 4200

acaaaacggg tgcggaagtt aaacgtcagg acatcgagtc taacctgcag tatgacgctg 4260

gtgacaaagg catctaccgt cactacatgc agaaagagat ctacgaacag ccgaacgcga 4320

tcaaaaacac cctgaccggt cgtatctctc acggtcaggt tgacctgtct gagctgggtc 4380

caaacgcgga cgaactcctg tccaaagtcg agcacatcca gatcctggct tgtggtacct 4440

cttacaactc cggtatggtt tctcgttact ggttcgaatc tctggcaggt atcccatgcg 4500

acgttgaaat cgcctccgaa ttccgttatc gtaaatctgc ggtacgtcgt aactccctca 4560

tgatcaccct gtctcagtct ggtgaaaccg ctgatactct ggcaggtctg cgtctcagca 4620

aagaactggg ttacctgggt tctctggcca tctgcaacgt tccgggttct agcctggttc 4680

gtgagtctga cctggctctg atgaccaacg cgggtacgga gatcggtgtt gcctctacca 4740

aagcgttcac tacccagctc actgtcctgc tgatgctggt tgccaaactg tctcgtctca 4800

aaggcctcga cgctagcatc gaacacgaca tcgtacacgg tctgcaggcc ctcccatctc 4860

gtatcgagca gatgctgtct caggacaaac gtatcgaagc actggcagaa gacttcagcg 4920

acaaacacca cgcgctgttt ctgggtcgtg gtgaccagta cccaattgcg ctggaaggtg 4980

ccctgaaact gaaagagatc agctacatcc atgcagaggc atacgcagcg ggtgagctga 5040

aacatggtcc actggccctg atcgacgcag atatgccggt tattgtggtt gctccgaaca 5100

acgaactgct ggagaaactg aaatccaaca tcgaggaagt acgtgcgcgt ggtggtcagc 5160

tgtacgtgtt tgctgaccag gacgcgggtt tcgtttccag cgacaacatg cacatcatcg 5220

aaatgccgca tgttgaagag gtaatcgcgc caatcttcta caccgtaccg ctgcagctgc 5280

tggcgtacca tgtagccctg atcaaaggta cggacgttga ccagccgcgt aacctggcga 5340

aatccgtgac cgtggaataa gacgtcggta ccctcgagtc tggtaaagaa accgctgctg 5400

cgaaatttga acgccagcac atggactcgt ctactagcgc agcttaatta acctaggctg 5460

ctgccaccgc tgagcaataa ctagcataac cccttggggc ctctaaacgg gtcttgaggg 5520

gttttttgct gaaacctcag gcatttgaga agcacacggt cacactgctt ccggtagtca 5580

ataaaccggt aaaccagcaa tagacataag cggctattta acgaccctgc cctgaaccga 5640

cgacaagctg acgaccgggt ctccgcaagt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc 5700

cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgaa ttaattctta 5760

gaaaaactca tcgagcatca aatgaaactg caatttattc atatcaggat tatcaatacc 5820

atatttttga aaaagccgtt tctgtaatga aggagaaaac tcaccgaggc agttccatag 5880

gatggcaaga tcctggtatc ggtctgcgat tccgactcgt ccaacatcaa tacaacctat 5940

taatttcccc tcgtcaaaaa taaggttatc aagtgagaaa tcaccatgag tgacgactga 6000

atccggtgag aatggcaaaa gtttatgcat ttctttccag acttgttcaa caggccagcc 6060

attacgctcg tcatcaaaat cactcgcatc aaccaaaccg ttattcattc gtgattgcgc 6120

ctgagcgaga cgaaatacgc ggtcgctgtt aaaaggacaa ttacaaacag gaatcgaatg 6180

caaccggcgc aggaacactg ccagcgcatc aacaatattt tcacctgaat caggatattc 6240

ttctaatacc tggaatgctg ttttcccggg gatcgcagtg gtgagtaacc atgcatcatc 6300

aggagtacgg ataaaatgct tgatggtcgg aagaggcata aattccgtca gccagtttag 6360

tctgaccatc tcatctgtaa catcattggc aacgctacct ttgccatgtt tcagaaacaa 6420

ctctggcgca tcgggcttcc catacaatcg atagattgtc gcacctgatt gcccgacatt 6480

atcgcgagcc catttatacc catataaatc agcatccatg ttggaattta atcgcggcct 6540

agagcaagac gtttcccgtt gaatatggct catactcttc ctttttcaat attattgaag 6600

catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa 6660

acaaataggc atgctagcgc agaaacgtcc tagaagatgc caggaggata cttagcagag 6720

agacaataag gccggagcga agccgttttt ccataggctc cgcccccctg acgaacatca 6780

cgaaatctga cgctcaaatc agtggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 6840

gtttccccct gatggctccc tcttgcgctc tcctgttccc gtcctgcggc gtccgtgttg 6900

tggtggaggc tttacccaaa tcaccacgtc ccgttccgtg tagacagttc gctccaagct 6960

gggctgtgtg caagaacccc ccgttcagcc cgactgctgc gccttatccg gtaactatca 7020

tcttgagtcc aacccggaaa gacacgacaa aacgccactg gcagcagcca ttggtaactg 7080

agaattagtg gatttagata tcgagagtct tgaagtggtg gcctaacaga ggctacactg 7140

aaaggacagt atttggtatc tgcgctccac taaagccagt taccaggtta agcagttccc 7200

caactgactt aaccttcgat caaaccgcct ccccaggcgg ttttttcgtt tacagagcag 7260

gagattacga cgatcgtaaa aggatctcaa gaagatcctt tacggattcc cgacaccatc 7320

actctagatt tcagtgcaat ttatctcttc aaatgtagca cctgaagtca gccccatacg 7380

atataagttg taattctcat gttagtcatg ccccgcgccc accggaagga gctgactggg 7440

ttgaaggctc tcaagggcat cggtcgagat cccggtgcct aatgagtgag ctaacttaca 7500

ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat 7560

taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgcca gggtggtttt 7620

tcttttcacc agtgagacgg gcaacagctg attgcccttc accgcctggc cctgagagag 7680

ttgcagcaag cggtccacgc tggtttgccc cagcaggcga aaatcctgtt tgatggtggt 7740

taacggcggg atataacatg agctgtcttc ggtatcgtcg tatcccacta ccgagatgtc 7800

cgcaccaacg cgcagcccgg actcggtaat ggcgcgcatt gcgcccagcg ccatctgatc 7860

gttggcaacc agcatcgcag tgggaacgat gccctcattc agcatttgca tggtttgttg 7920

aaaaccggac atggcactcc agtcgccttc ccgttccgct atcggctgaa tttgattgcg 7980

agtgagatat ttatgccagc cagccagacg cagacgcgcc gagacagaac ttaatgggcc 8040

cgctaacagc gcgatttgct ggtgacccaa tgcgaccaga tgctccacgc ccagtcgcgt 8100

accgtcttca tgggagaaaa taatactgtt gatgggtgtc tggtcagaga catcaagaaa 8160

taacgccgga acattagtgc aggcagcttc cacagcaatg gcatcctggt catccagcgg 8220

atagttaatg at 8232

<210> 10

<211> 6792

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-PmgalT7

<400> 10

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatgagc ggtgaacact 2580

atgtcattag cctgtcgtcg gcagttgaac gtcgccagca cattcgtaac cagttttcgc 2640

agaagaacat cccgtttcag tttttcgatg caatttcacc gtcgccgctg ctggaccagc 2700

tggtgctgca atttttcccg cgtctggcgg atagctctct gaccggcggt gaaaaagcct 2760

gctttatgag ccatctgtct ctgtggcaca aatgtgtgga agaaaacctg ccgtatattg 2820

tggtttttga agatgacatc gttctgggca aagatgcgga caagttcctg attggtgatg 2880

aatggctgtt ttctcgtttc gacccggaag aaatctttat tatccgcctg gaaaccttcc 2940

tgcagaaagt cgtgtgcgaa agcacccata ttgccccgta tacgcaccgc gattttctga 3000

gtctgaaatc cgcacatttc ggcacggctg gttacgtcat cagtcagggc gcggccaaat 3060

ttctgctgga tattttcaag aacatctcca atgaacacat tgcgccgatc gacgaactga 3120

tttttaacca gttcctggtt aagaactcat tcaacgtcta ccaactgtcg ccggcaatct 3180

gtgttcagga actgcaactg aacaatgaaa gttccgctct gcagagccaa ctggaactgg 3240

aacgtaacaa attccgcaat aaaaagtctg aagaactgaa gcgtaaccgc aagaacttca 3300

tcgaaaagtt catctacatc ctgaaaaagc cgaagcgtat gctggataac aataagcgta 3360

agcgcgaaga gagtaagatc gaaaacgaca agatgatcat cgaatttaaa tgagcggccg 3420

cgtcgacacg caaaaaggcc atccgtcagg atggccttct gcttaattat ctagatgcct 3480

ggcagtttat ggcgggcgtc ctgcccgcca ccctccgggc cgttgcttcg caacgttcaa 3540

atccgctccc ggcggatttg tcctactcag gagagcgttc accgacaaac aacagataaa 3600

acgaaaggcc cagtctttcg actgagcctt tcgttttatt tgatgcctgg cagttcccta 3660

ctctcgcatg gggagacccc acactaccat catgtatgaa tatcctcctt agttcctatt 3720

ccgaagggta atggcatcag ggaatggcga acgcgctccc cacactacca tcatgtatga 3780

atatcctcct tagttcctat tccgaagttc ctattctcta gaaagtatag gaacttcggt 3840

ggaacgacgc gtaactcacg ttaagggatt ttggtcatga tcagcacgtg ttgacaatta 3900

atcatcggca tagtatatcg gcatagtata atacgacaag gtgaggaact aaaccatggc 3960

caagttgacc agtgccgttc cggtgctcac cgcgcgcgac gtcgccggag cggtcgagtt 4020

ctggaccgac cggctcgggt tctcccggga cttcgtggag gacgacttcg ccggtgtggt 4080

ccgggacgac gtgaccctgt tcatcagcgc ggtccaggac caggtggtgc cggacaacac 4140

cctggcctgg gtgtgggtgc gcggcctgga cgagctgtac gccgagtggt cggaggtcgt 4200

gtccacgaac ttccgggacg cctccgggcc ggccatgacc gagatcggcg agcagccgtg 4260

ggggcgggag ttcgccctgc gcgacccggc cggcaactgc gtgcacttcg tggccgagga 4320

gcaggactga gtggcagggc ggggcgtaag gcgcgccatt taaatgaagt tcctattccg 4380

aagttcctat tctctagaaa gtataggaac ttcgaagcag ctccagccta cacaatcgct 4440

caagacggaa cccgcgcttg gcaggaaagt aatagggata gcagctccag cctacacaat 4500

cgctcaagac gtgtaatgct gcacaataac cctgctgcag aggcctgcat gcaagcttgg 4560

cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca 4620

acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca 4680

cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc 4740

attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt 4800

cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact 4860

caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag 4920

caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata 4980

ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc 5040

cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg 5100

ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc 5160

tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg 5220

gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc 5280

ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga 5340

ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg 5400

gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa 5460

aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg 5520

tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt 5580

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 5640

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct 5700

aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta 5760

tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa 5820

ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac 5880

gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa 5940

gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag 6000

taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg 6060

tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag 6120

ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg 6180

tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc 6240

ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat 6300

tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata 6360

ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa 6420

aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca 6480

actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc 6540

aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc 6600

tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg 6660

aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac 6720

ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga 6780

ggccctttcg tc 6792

<210> 11

<211> 6702

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-MsgalT8

<400> 11

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatggat gaaatcaaac 2580

tgtcggtggt tatgccgtat tacaaacgtc tgcgtgaatt tatgcgtgtc ctgccgctga 2640

atgcccgctt ctttagccgt catgaatatg aagtggttct gagtctggac gaaccgtccg 2700

aagaagccga tctgctgcgt gtcctgcgcg acttcccgtc tattcgttgg cgcgttctgg 2760

tcaatgacct ggatcacccg tggcgtccgc cgtgccgtgc actgaacgtt ggcatccgta 2820

atgctctggg tgaaaacgtc ctggtcgtga gcccggaatc tgcgtttgtg accgatgttc 2880

cggcacgcgc tctggatcat attgcagcaa acccgggtac cgcagctctg ggtcacgttt 2940

gttttgcaac gttcgatgcg ctggaagccc gtcagggcag cctggaaaaa acgtgcgctc 3000

cgccgtggaa tctgtatggt tctatctgtg tcccgcgtga acgtctggca cgtgtgcatg 3060

gctacgacga aagcttcgat cgctggggcg gtgatgacga taacctgcgt attcgcctga 3120

tgcagaccga aacgtatctg catccgctgg acgatatgcg catcctgcac ctgagttttg 3180

aagcccgtaa agtgcgtcaa gcagcagaac cgccgtcccc ggaatacgca gaacgtattt 3240

tccagccggt gtcaccgcaa gcaaatccgg gcggttgggg tgaatcgttt cagcgcgttg 3300

cgttcgattg gcgtcgccaa tgagcggccg cgtcgacacg caaaaaggcc atccgtcagg 3360

atggccttct gcttaattat ctagatgcct ggcagtttat ggcgggcgtc ctgcccgcca 3420

ccctccgggc cgttgcttcg caacgttcaa atccgctccc ggcggatttg tcctactcag 3480

gagagcgttc accgacaaac aacagataaa acgaaaggcc cagtctttcg actgagcctt 3540

tcgttttatt tgatgcctgg cagttcccta ctctcgcatg gggagacccc acactaccat 3600

catgtatgaa tatcctcctt agttcctatt ccgaagggta atggcatcag ggaatggcga 3660

acgcgctccc cacactacca tcatgtatga atatcctcct tagttcctat tccgaagttc 3720

ctattctcta gaaagtatag gaacttcggt ggaacgacgc gtaactcacg ttaagggatt 3780

ttggtcatga tcagcacgtg ttgacaatta atcatcggca tagtatatcg gcatagtata 3840

atacgacaag gtgaggaact aaaccatggc caagttgacc agtgccgttc cggtgctcac 3900

cgcgcgcgac gtcgccggag cggtcgagtt ctggaccgac cggctcgggt tctcccggga 3960

cttcgtggag gacgacttcg ccggtgtggt ccgggacgac gtgaccctgt tcatcagcgc 4020

ggtccaggac caggtggtgc cggacaacac cctggcctgg gtgtgggtgc gcggcctgga 4080

cgagctgtac gccgagtggt cggaggtcgt gtccacgaac ttccgggacg cctccgggcc 4140

ggccatgacc gagatcggcg agcagccgtg ggggcgggag ttcgccctgc gcgacccggc 4200

cggcaactgc gtgcacttcg tggccgagga gcaggactga gtggcagggc ggggcgtaag 4260

gcgcgccatt taaatgaagt tcctattccg aagttcctat tctctagaaa gtataggaac 4320

ttcgaagcag ctccagccta cacaatcgct caagacggaa cccgcgcttg gcaggaaagt 4380

aatagggata gcagctccag cctacacaat cgctcaagac gtgtaatgct gcacaataac 4440

cctgctgcag aggcctgcat gcaagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt 4500

gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag 4560

cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt 4620

tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag 4680

gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg 4740

ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat 4800

caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta 4860

aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa 4920

atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 4980

cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt 5040

ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca 5100

gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg 5160

accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat 5220

cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta 5280

cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct 5340

gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac 5400

aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa 5460

aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa 5520

actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt 5580

taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca 5640

gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca 5700

tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc 5760

ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa 5820

accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc 5880

agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca 5940

acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat 6000

tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag 6060

cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac 6120

tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt 6180

ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt 6240

gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc 6300

tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat 6360

ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca 6420

gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga 6480

cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg 6540

gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg 6600

ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga 6660

cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc 6702

<210> 12

<211> 6777

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-KdgalT10

<400> 12

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatggaa aactatgtcg 2580

tctctatccg caccgcagcc caacgccgcc agcatgtcgc cgccgaattc aataagcacc 2640

aaatcgcctt tcatttcttt gatgcggtga ccccggaaac gctggcggaa agcatcgcag 2700

aacactgccc gaacctggca gacgcctttc tgaccggcgg tgaaaagggc tgtttcatgt 2760

ctcatgtctg cctgtgggca aaatgtgtgg ctgatgacct gccgtatatt ggcatctttg 2820

aagatgacgt tattttcggt cagaacagct ctcgttttct gaatgatacc aaatggctgg 2880

acgaacgttt tcagaaccaa tcattcatta tccgcatgga aacgtttctg aaggcgaacc 2940

cggttgccct gagcaaatct ggcgtccgtc cgttcaatgg tcgtaagatc ctgcgcctgc 3000

agagttttgg cttcggtacc gcggcctatc tgatttccca gcaaaccgca atcacgctgc 3060

tgaattggat tcgcgaagtc gctccggaaa aactggaacc gattgataac atgctgttta 3120

atgcagcttc agaaattccg gaaatccaga tgtaccaaat ctcgccggcc ctgtgcattc 3180

aggaactgca actgaaccgc gcagatagtt ccctgtcatc gaccctggaa gacggtcgtc 3240

tggcacgtca ccagcaactg gatggcggta aaacccagcc ggaacagacg caagaaaacc 3300

gtaacatctt cgcatgggct aagaacaaga tcgtgaagga atacaagcgc gttaaacgtc 3360

gctggacgga tgacaaaaag attgttccgt tcaaatgagc ggccgcgtcg acacgcaaaa 3420

aggccatccg tcaggatggc cttctgctta attatctaga tgcctggcag tttatggcgg 3480

gcgtcctgcc cgccaccctc cgggccgttg cttcgcaacg ttcaaatccg ctcccggcgg 3540

atttgtccta ctcaggagag cgttcaccga caaacaacag ataaaacgaa aggcccagtc 3600

tttcgactga gcctttcgtt ttatttgatg cctggcagtt ccctactctc gcatggggag 3660

accccacact accatcatgt atgaatatcc tccttagttc ctattccgaa gggtaatggc 3720

atcagggaat ggcgaacgcg ctccccacac taccatcatg tatgaatatc ctccttagtt 3780

cctattccga agttcctatt ctctagaaag tataggaact tcggtggaac gacgcgtaac 3840

tcacgttaag ggattttggt catgatcagc acgtgttgac aattaatcat cggcatagta 3900

tatcggcata gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc atggccaagt tgaccagtgc 3960

cgttccggtg ctcaccgcgc gcgacgtcgc cggagcggtc gagttctgga ccgaccggct 4020

cgggttctcc cgggacttcg tggaggacga cttcgccggt gtggtccggg acgacgtgac 4080

cctgttcatc agcgcggtcc aggaccaggt ggtgccggac aacaccctgg cctgggtgtg 4140

ggtgcgcggc ctggacgagc tgtacgccga gtggtcggag gtcgtgtcca cgaacttccg 4200

ggacgcctcc gggccggcca tgaccgagat cggcgagcag ccgtgggggc gggagttcgc 4260

cctgcgcgac ccggccggca actgcgtgca cttcgtggcc gaggagcagg actgagtggc 4320

agggcggggc gtaaggcgcg ccatttaaat gaagttccta ttccgaagtt cctattctct 4380

agaaagtata ggaacttcga agcagctcca gcctacacaa tcgctcaaga cggaacccgc 4440

gcttggcagg aaagtaatag ggatagcagc tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta 4500

atgctgcaca ataaccctgc tgcagaggcc tgcatgcaag cttggcgtaa tcatggtcat 4560

agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa 4620

gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc 4680

gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc 4740

aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact 4800

cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac 4860

ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa 4920

aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg 4980

acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa 5040

gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc 5100

ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac 5160

gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac 5220

cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg 5280

taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt 5340

atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa 5400

cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct 5460

cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga 5520

ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg 5580

ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct 5640

tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt 5700

aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc 5760

tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg 5820

gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag 5880

atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt 5940

tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag 6000

ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt 6060

ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca 6120

tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg 6180

ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat 6240

ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta 6300

tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca 6360

gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct 6420

taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat 6480

cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa 6540

agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt 6600

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 6660

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa 6720

ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtc 6777

<210> 13

<211> 6786

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-gatD

<400> 13

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatgtcc tcagctttcc 2580

attacgtcat tagcctggca tcggcagttg aacgccgtca gcacattagc gaacagtttt 2640

cccaatacga cattccgttt cagtttttcg atgcgatcag tccgtccccg ctgctgaacc 2700

agctggtgtc tcaatttttc ccgtccctgg ccgatagctc tctgaccgac ggcgaaaaag 2760

gttgctttat ttcacatctg tcgctgtggc acaagtgtgt tgaaaagaac ctgccgtata 2820

ttgtggtttt tgaagatgac atcctgctgg gcaagaatgc agataaattc ctgattgaag 2880

acgaatggtt tttctctcgt tttaacacga atgatgtctt catcgtgcgc ctggaaacct 2940

ttctgcagaa agtgtattgc caaccgagct acatcaagtc ttactacaac cgtgaactgc 3000

tgaccctgaa aagcacgcat ttcggcaccg caggttatat tatcagtctg ggtgcggcca 3060

agtttctgct gtccctgttc aacaaaatgc acattgaaga agttgctccg atcgatgaac 3120

tgctgtttaa taagttcctg gaacgcaaag actttacggt ctaccagttc agtccggcac 3180

tgtgcattca ggaactgcaa ctgaacaaat cagatgctgt cctgctgtcg caactggaac 3240

tggaacgtag caaatgtcgc attatgaccg aatctcgtat cggccgcgaa aagaaaaaac 3300

tgaaggataa gatcatccat gttctgacga agccgaaacg tatgctggaa aagaaacgtc 3360

agcgcaatga agacaagaaa atcaccatga ttatcgaatt tgaatgagcg gccgcgtcga 3420

cacgcaaaaa ggccatccgt caggatggcc ttctgcttaa ttatctagat gcctggcagt 3480

ttatggcggg cgtcctgccc gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc 3540

tcccggcgga tttgtcctac tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa 3600

ggcccagtct ttcgactgag cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg 3660

catggggaga ccccacacta ccatcatgta tgaatatcct ccttagttcc tattccgaag 3720

ggtaatggca tcagggaatg gcgaacgcgc tccccacact accatcatgt atgaatatcc 3780

tccttagttc ctattccgaa gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cggtggaacg 3840

acgcgtaact cacgttaagg gattttggtc atgatcagca cgtgttgaca attaatcatc 3900

ggcatagtat atcggcatag tataatacga caaggtgagg aactaaacca tggccaagtt 3960

gaccagtgcc gttccggtgc tcaccgcgcg cgacgtcgcc ggagcggtcg agttctggac 4020

cgaccggctc gggttctccc gggacttcgt ggaggacgac ttcgccggtg tggtccggga 4080

cgacgtgacc ctgttcatca gcgcggtcca ggaccaggtg gtgccggaca acaccctggc 4140

ctgggtgtgg gtgcgcggcc tggacgagct gtacgccgag tggtcggagg tcgtgtccac 4200

gaacttccgg gacgcctccg ggccggccat gaccgagatc ggcgagcagc cgtgggggcg 4260

ggagttcgcc ctgcgcgacc cggccggcaa ctgcgtgcac ttcgtggccg aggagcagga 4320

ctgagtggca gggcggggcg taaggcgcgc catttaaatg aagttcctat tccgaagttc 4380

ctattctcta gaaagtatag gaacttcgaa gcagctccag cctacacaat cgctcaagac 4440

ggaacccgcg cttggcagga aagtaatagg gatagcagct ccagcctaca caatcgctca 4500

agacgtgtaa tgctgcacaa taaccctgct gcagaggcct gcatgcaagc ttggcgtaat 4560

catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac 4620

gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa 4680

ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat 4740

gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc 4800

tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg 4860

cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag 4920

gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc 4980

gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag 5040

gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga 5100

ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc 5160

atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg 5220

tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt 5280

ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca 5340

gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca 5400

ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag 5460

ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca 5520

agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg 5580

ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa 5640

aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta 5700

tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag 5760

cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga 5820

tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac 5880

cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc 5940

ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta 6000

gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac 6060

gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat 6120

gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa 6180

gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg 6240

tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag 6300

aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc 6360

cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct 6420

caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat 6480

cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg 6540

ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc 6600

aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta 6660

tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg 6720

tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct 6780

ttcgtc 6786

<210> 14

<211> 7506

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-BFgalT2

<400> 14

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatgaac gtgaataagc 2580

cgaccaccga aaagaaactg attgacctga acaacgacat tatccataac tttgatgtga 2640

gcattgtgat gagcttctat aagcgttaca ccgaatttcg caaagtgctg ccgcataacg 2700

cgccgtatct gcagcgtaat ggcattgaag tcattatcgt gctggatgac ccggatgaaa 2760

aaagcgaact gctgatgctg ctgcaaaact atccgttcat caattggaag ctgattatca 2820

acgaacgtaa acatgcaccg cgcaaccacg cttctgttct gaatgtcggt ctgaaacatg 2880

cgaccaaaaa gtatattctg cagatcgatc cggaagttga atttctgacg gatattatct 2940

ggcaaatgcg tgacgccatt gaaaaatatc cgatgcacta catcctggcg atgatggcct 3000

atgtcccgta cgaacaggaa ctgaccgaaa acaacatcaa ggaactggat ttcatcccgt 3060

ggggcaacct gatggtggaa cgcaatcatc tgtataaact gcacggttac gatgaaacct 3120

tcattacgtg gggcggtgaa gataacaata tgcgtgcgcg cctggacatg tcaggcatta 3180

aaaagtttat cctgccggaa gccaagacca tccatcgtga aaagaactat gatccgaatg 3240

aacgttcgaa gcgcattaat aaacacagta tctccgactg gcgcaaaatg aactacccgt 3300

cagaagcaat tgctaataag gatatctggg gctcggaatt caacaaagtt atttatgatt 3360

ggcaggacaa tcaatacgcc aaagatctgt gctataccta cctgcagcaa tttattggtt 3420

tcgaaatccg tcatccggcg gcctttcgta aacgccacaa aaagattgtc ctgtgtcagg 3480

catataacga agaaaaactg atcgaaggct tcctgacgaa catggctaat tactttgatg 3540

gtattatcct gctggatgac gaaagtaccg atcgcacgtg ggacctggca atccatgata 3600

agatcatcct gaaggtgaaa aagaaacgtt ccggttttaa tgatctggaa aaccgcaata 3660

ttctgctgga cctgtcagcg tttttccagt cggaatggtt ttgcttcatg gatatcgacg 3720

aacgtttcga tgaacgcttt accaacttca gcgaattcga aaacaacaag gaaatccacg 3780

tggtttcttt tcgtggcgtg tatctgtgga atgatgaaca gagctacaag ggcgacattc 3840

cgaactctaa taaaggtatc ctgaccgttt atcgtatgtt ccgcccgatt ggtcataccc 3900

acatcaacac gcataagaaa ctgcacttca ttgcgacgcc gtattttacc aacacgtggc 3960

agagtaatat cctgtttaag gattacggct ccatgaaaga aaatgaccgt attcgcaagt 4020

atgaacgcta catccaggaa gatcagcaaa aagacatgag ctctggttat gattacctgc 4080

tgaacagcga aaatctgtat caactggaca aaattgaaga atactgagcg gccgcgtcga 4140

cacgcaaaaa ggccatccgt caggatggcc ttctgcttaa ttatctagat gcctggcagt 4200

ttatggcggg cgtcctgccc gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc 4260

tcccggcgga tttgtcctac tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa 4320

ggcccagtct ttcgactgag cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg 4380

catggggaga ccccacacta ccatcatgta tgaatatcct ccttagttcc tattccgaag 4440

ggtaatggca tcagggaatg gcgaacgcgc tccccacact accatcatgt atgaatatcc 4500

tccttagttc ctattccgaa gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cggtggaacg 4560

acgcgtaact cacgttaagg gattttggtc atgatcagca cgtgttgaca attaatcatc 4620

ggcatagtat atcggcatag tataatacga caaggtgagg aactaaacca tggccaagtt 4680

gaccagtgcc gttccggtgc tcaccgcgcg cgacgtcgcc ggagcggtcg agttctggac 4740

cgaccggctc gggttctccc gggacttcgt ggaggacgac ttcgccggtg tggtccggga 4800

cgacgtgacc ctgttcatca gcgcggtcca ggaccaggtg gtgccggaca acaccctggc 4860

ctgggtgtgg gtgcgcggcc tggacgagct gtacgccgag tggtcggagg tcgtgtccac 4920

gaacttccgg gacgcctccg ggccggccat gaccgagatc ggcgagcagc cgtgggggcg 4980

ggagttcgcc ctgcgcgacc cggccggcaa ctgcgtgcac ttcgtggccg aggagcagga 5040

ctgagtggca gggcggggcg taaggcgcgc catttaaatg aagttcctat tccgaagttc 5100

ctattctcta gaaagtatag gaacttcgaa gcagctccag cctacacaat cgctcaagac 5160

ggaacccgcg cttggcagga aagtaatagg gatagcagct ccagcctaca caatcgctca 5220

agacgtgtaa tgctgcacaa taaccctgct gcagaggcct gcatgcaagc ttggcgtaat 5280

catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac 5340

gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa 5400

ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat 5460

gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc 5520

tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg 5580

cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag 5640

gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc 5700

gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag 5760

gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga 5820

ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc 5880

atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg 5940

tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt 6000

ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca 6060

gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca 6120

ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag 6180

ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca 6240

agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg 6300

ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa 6360

aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta 6420

tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag 6480

cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga 6540

tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac 6600

cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc 6660

ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta 6720

gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac 6780

gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat 6840

gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa 6900

gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg 6960

tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag 7020

aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc 7080

cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct 7140

caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat 7200

cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg 7260

ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc 7320

aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta 7380

tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg 7440

tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct 7500

ttcgtc 7506

<210> 15

<211> 6717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-lsgD

<400> 15

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatgctg aagaagtacc 2580

tgattagcct ggataaggac attcaacgcc gcaagctgtt tttctcgcag aagaacacgg 2640

aagattttca aattttctca gcgatcaaca ccatgcagaa agattgggac gaactggcat 2700

cgatcttcaa catcgaacaa ttcaaggctc attacttccg taacgtcacc aagggcgaaa 2760

ttggttgcac gctgagtcac ctgtccgtct atcagaaaat tgtggaagat aacgacatcg 2820

cagaagattc atacgctctg gtttgtgaag atgacgccct gtttcatctg gatttccagc 2880

aaaatctgac cgcactgctg agtgaaaaac tggaagctga aattatcctg ctgggccagt 2940

ccaacattaa caattttaat gatacggacc tggaaatcaa ttacccgacc acgtttagct 3000

tcctgtgcaa aaagaccggt aacgtgaatt atgcgttccc gtataaatct tactttgccg 3060

gcacggttgg ttacctgatt aaaaagagcg cggcccgtcg cttcattcag caaatctctc 3120

agaacaaacc gttttggctg gcggatgact ttctgctgtt cgaacaaaac ttcaatatcc 3180

gtaataaggt ggttcgcccg ctgatggtta ttgaaaaccc ggtcctgatc tcaaatctgg 3240

aatcggtgcg cggcagcctg tctaacaatc tgctgaaaaa gctgatgaaa tatccgctga 3300

aaaagatttt tgcgatcaaa aagaacctgg ccaattaagc ggccgcgtcg acacgcaaaa 3360

aggccatccg tcaggatggc cttctgctta attatctaga tgcctggcag tttatggcgg 3420

gcgtcctgcc cgccaccctc cgggccgttg cttcgcaacg ttcaaatccg ctcccggcgg 3480

atttgtccta ctcaggagag cgttcaccga caaacaacag ataaaacgaa aggcccagtc 3540

tttcgactga gcctttcgtt ttatttgatg cctggcagtt ccctactctc gcatggggag 3600

accccacact accatcatgt atgaatatcc tccttagttc ctattccgaa gggtaatggc 3660

atcagggaat ggcgaacgcg ctccccacac taccatcatg tatgaatatc ctccttagtt 3720

cctattccga agttcctatt ctctagaaag tataggaact tcggtggaac gacgcgtaac 3780

tcacgttaag ggattttggt catgatcagc acgtgttgac aattaatcat cggcatagta 3840

tatcggcata gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc atggccaagt tgaccagtgc 3900

cgttccggtg ctcaccgcgc gcgacgtcgc cggagcggtc gagttctgga ccgaccggct 3960

cgggttctcc cgggacttcg tggaggacga cttcgccggt gtggtccggg acgacgtgac 4020

cctgttcatc agcgcggtcc aggaccaggt ggtgccggac aacaccctgg cctgggtgtg 4080

ggtgcgcggc ctggacgagc tgtacgccga gtggtcggag gtcgtgtcca cgaacttccg 4140

ggacgcctcc gggccggcca tgaccgagat cggcgagcag ccgtgggggc gggagttcgc 4200

cctgcgcgac ccggccggca actgcgtgca cttcgtggcc gaggagcagg actgagtggc 4260

agggcggggc gtaaggcgcg ccatttaaat gaagttccta ttccgaagtt cctattctct 4320

agaaagtata ggaacttcga agcagctcca gcctacacaa tcgctcaaga cggaacccgc 4380

gcttggcagg aaagtaatag ggatagcagc tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta 4440

atgctgcaca ataaccctgc tgcagaggcc tgcatgcaag cttggcgtaa tcatggtcat 4500

agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa 4560

gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc 4620

gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc 4680

aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact 4740

cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac 4800

ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa 4860

aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg 4920

acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa 4980

gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc 5040

ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac 5100

gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac 5160

cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg 5220

taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt 5280

atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa 5340

cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct 5400

cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga 5460

ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg 5520

ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct 5580

tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt 5640

aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc 5700

tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg 5760

gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag 5820

atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt 5880

tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag 5940

ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt 6000

ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca 6060

tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg 6120

ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat 6180

ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta 6240

tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca 6300

gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct 6360

taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat 6420

cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa 6480

agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt 6540

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 6600

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa 6660

ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtc 6717

<210> 16

<211> 6769

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-malE-HPgalT

<400> 16

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caaatgaaaa tcgaagaagg taaactggta atctggatta 1500

acggcgataa aggctataac ggtctcgctg aagtcggtaa gaaattcgag aaagataccg 1560

gaattaaagt caccgttgag catccggata aactggaaga gaaattccca caggttgcgg 1620

caactggcga tggccctgac attatcttct gggcacacga ccgctttggt ggctacgctc 1680

aatctggcct gttggctgaa atcaccccgg acaaagcgtt ccaggacaag ctgtatccgt 1740

ttacctggga tgccgtacgt tacaacggca agctgattgc ttacccgatc gctgttgaag 1800

cgttatcgct gatttataac aaagatctgc tgccgaaccc gccaaaaacc tgggaagaga 1860

tcccggcgct ggataaagaa ctgaaagcga aaggtaagag cgcgctgatg ttcaacctgc 1920

aagaaccgta cttcacctgg ccgctgattg ctgctgacgg gggttatgcg ttcaagtatg 1980

aaaacggcaa gtacgacatt aaagacgtgg gcgtggataa cgctggcgcg aaagcgggtc 2040

tgaccttcct ggttgacctg attaaaaaca aacacatgaa tgcagacacc gattactcca 2100

tcgcagaagc tgcctttaat aaaggcgaaa cagcgatgac catcaacggc ccgtgggcat 2160

ggtccaacat cgacaccagc aaagtgaatt atggtgtaac ggtactgccg accttcaagg 2220

gtcaaccatc caaaccgttc gttggcgtgc tgagcgcagg tattaacgcc gccagtccga 2280

acaaagagct ggcaaaagag ttcctcgaaa actatctgct gactgatgaa ggtctggaag 2340

cggttaataa agacaaaccg ctgggtgccg tagcgctgaa gtcttacgag gaagagttgg 2400

cgaaagatcc acgtattgcc gccaccatgg aaaacgccca gaaaggtgaa atcatgccga 2460

acatcccgca gatgtccgct ttctggtatg ccgtgcgtac tgcggtgatc aacgccgcca 2520

gcggtcgtca gactgtcgat gaagccctga aagacgcgca gactatgcgt gtgtttatta 2580

tttccctgaa tcaaaaagtg tgtgatacct tcggtctggt gttccgtgat acgacgaccc 2640

tgctgaacaa cattaacgcg acccatcacc aggcccaaat ttttgatgca atctactcca 2700

aaacgttcga aggcggtctg catccgctgg ttaaaaaaca tctgcacccg tactttatta 2760

cccagaacat caaagacatg ggcattacca cgaatctgat cagcgaagtc tctaaattct 2820

actacgctct gaaataccat gcgaaattca tgagcctggg cgaactgggt tgctatgcta 2880

gtcactactc cctgtgggaa aaatgcattg aactgaacga agcgatttgt atcctggaag 2940

atgacatcac gctgaaagaa gattttaaag aaggcctgga cttcctggaa aaacatattc 3000

aggaactggg ttatgtgcgt ctgatgcacc tgctgtacga tccgaatgtt aaaagcgaac 3060

cgctgaacca taaaaatcac gaaatccagg aacgcgtggg cattatcaaa gcctattctc 3120

atggcgttgg cacccaaggt tacgtcatta cgccgaaaat cgcaaaagtc ttcaaaaaac 3180

atagtcgtaa atgggtggtt ccggtggata ccattatgga cgcgacgttt atccacggtg 3240

tcaaaaatct ggtgctgcaa ccgttcgtta ttgccgatga cgaacaaatt tcaaccatcg 3300

cacgcaaaga agaaccgtat tcgccgaaaa tcgccctgat gcgtgaactg cacttcaaat 3360

acctgaaata ctggcaattc gtctaagcgg ccgcgtcgac acgcaaaaag gccatccatc 3420

cgtcaggatg gccttctgct taattatcta gatgcctggc agtttatggc gggcgtcctg 3480

cccgccaccc tccgggccgt tgcttcgcaa cgttcaaatc cgctcccggc ggatttgtcc 3540

tactcaggag agcgttcacc gacaaacaac agataaaacg aaaggcccag tctttcgact 3600

gagcctttcg ttttatttga tgcctggcag ttccctactc tcgcatgggg agaccccaca 3660

ctaccatcat gtatgaatat cctccttagt tcctattccg aagggtaatg gcatcaggga 3720

atggcgaacg cgctccccac actaccatca tgtatgaata tcctccttag ttcctattcc 3780

gaagttccta ttctctagaa agtataggaa cttcggtgga acgacgcgta actcacgtta 3840

agggattttg gtcatgatca gcacgtgttg acaattaatc atcggcatag tatatcggca 3900

tagtataata cgacaaggtg aggaactaaa ccatggccaa gttgaccagt gccgttccgg 3960

tgctcaccgc gcgcgacgtc gccggagcgg tcgagttctg gaccgaccgg ctcgggttct 4020

cccgggactt cgtggaggac gacttcgccg gtgtggtccg ggacgacgtg accctgttca 4080

tcagcgcggt ccaggaccag gtggtgccgg acaacaccct ggcctgggtg tgggtgcgcg 4140

gcctggacga gctgtacgcc gagtggtcgg aggtcgtgtc cacgaacttc cgggacgcct 4200

ccgggccggc catgaccgag atcggcgagc agccgtgggg gcgggagttc gccctgcgcg 4260

acccggccgg caactgcgtg cacttcgtgg ccgaggagca ggactgagtg gcagggcggg 4320

gcgtaaggcg cgccatttaa atgaagttcc tattccgaag ttcctattct ctagaaagta 4380

taggaacttc gaagcagctc cagcctacac aatcgctcaa gacggaaccc gcgcttggca 4440

ggaaagtaat agggatagca gctccagcct acacaatcgc tcaagacgtg taatgctgca 4500

caataaccct gctgcagagg cctgcatgca agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt 4560

cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag 4620

tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg 4680

cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg 4740

gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc 4800

tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc 4860

acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg 4920

aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat 4980

cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag 5040

gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga 5100

tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg 5160

tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt 5220

cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac 5280

gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc 5340

ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt 5400

ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc 5460

ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc 5520

agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg 5580

aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag 5640

atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg 5700

tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt 5760

tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca 5820

tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca 5880

gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc 5940

tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt 6000

ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg 6060

gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc 6120

aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg 6180

ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga 6240

tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga 6300

ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta 6360

aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg 6420

ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact 6480

ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata 6540

agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt 6600

tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa 6660

ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt 6720

atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtc 6769

<210> 17

<211> 4714

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pACYC-waaX

<400> 17

ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag 60

gagatatacc atgaaagtgt ttgtggtcaa cctggataag gataaggata aaaaagaaaa 120

aatcaagaat gaatgccgca acgcagaact ggactatgaa attatctcag cagttgatgg 180

ccgtgaactg agctacaacg aactgaaatc taaggtccat ccggtgtcac tgaattatct 240

gtcgaaaggc gaaattggtt gcgtcctgtc ccaccagcgt atttacaaac gcatcctgga 300

tgacgatatt gactatgctc tgatcctgga agacgatgtg gaactgagtc aagatatcaa 360

ggtttttctg aaggaattcc tgtccgtcaa agacaagaac aaaggcgatg tgtttctgct 420

gtacccgtca ggtctgcgtt tcctgaaccg tcgcatcaac gtgtcgcatg attatttctt 480

ttatgaagcg tacaacagct cttgtgccca cggttatatt atcagcaaca aagcggccaa 540

aaagctgatt cgcatcaata ccccgattat cctggttgca gatgcttggc tgtggtttta 600

ccagatttct ctgctgaaag tgtatgttct gaacaaagaa ctggttcgtg catatgacgt 660

cgataaaagt ctgtccacca tcgaaacgga acgcagcctg ctgctggacg aaaaggaaaa 720

gcatcagatg caaatcatca aaaagcaacc gctgtactac ctgatcaagt actaccacaa 780

gtacatccgt cgcctgttca tcaataagga taaataagaa ttcgagctcg gcgcgcctgc 840

aggtcgacaa gcttgcggcc gcataatgct taagtcgaac agaaagtaat cgtattgtac 900

acggccgcat aatcgaaatt aatacgactc actatagggg aattgtgagc ggataacaat 960

tccccatctt agtatattag ttaagtataa gaaggagata tacatatggc agatctcaat 1020

tggatatcgg ccggccacgc gatcgctgac gtcggtaccc tcgagtctgg taaagaaacc 1080

gctgctgcga aatttgaacg ccagcacatg gactcgtcta ctagcgcagc ttaattaacc 1140

taggctgctg ccaccgctga gcaataacta gcataacccc ttggggcctc taaacgggtc 1200

ttgaggggtt ttttgctgaa acctcaggca tttgagaagc acacggtcac actgcttccg 1260

gtagtcaata aaccggtaaa ccagcaatag acataagcgg ctatttaacg accctgccct 1320

gaaccgacga ccgggtcgaa tttgctttcg aatttctgcc attcatccgc ttattatcac 1380

ttattcaggc gtagcaccag gcgtttaagg gcaccaataa ctgccttaaa aaaattacgc 1440

cccgccctgc cactcatcgc agtactgttg taattcatta agcattctgc cgacatggaa 1500

gccatcacag acggcatgat gaacctgaat cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg 1560

cgtataatat ttgcccatag tgaaaacggg ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt 1620

taaatcaaaa ctggtgaaac tcacccaggg attggctgag acgaaaaaca tattctcaat 1680

aaacccttta gggaaatagg ccaggttttc accgtaacac gccacatctt gcgaatatat 1740

gtgtagaaac tgccggaaat cgtcgtggta ttcactccag agcgatgaaa acgtttcagt 1800

ttgctcatgg aaaacggtgt aacaagggtg aacactatcc catatcacca gctcaccgtc 1860

tttcattgcc atacggaact ccggatgagc attcatcagg cgggcaagaa tgtgaataaa 1920

ggccggataa aacttgtgct tatttttctt tacggtcttt aaaaaggccg taatatccag 1980

ctgaacggtc tggttatagg tacattgagc aactgactga aatgcctcaa aatgttcttt 2040

acgatgccat tgggatatat caacggtggt atatccagtg atttttttct ccattttagc 2100

ttccttagct cctgaaaatc tcgataactc aaaaaatacg cccggtagtg atcttatttc 2160

attatggtga aagttggaac ctcttacgtg ccgatcaacg tctcattttc gccaaaagtt 2220

ggcccagggc ttcccggtat caacagggac accaggattt atttattctg cgaagtgatc 2280

ttccgtcaca ggtatttatt cggcgcaaag tgcgtcgggt gatgctgcca acttactgat 2340

ttagtgtatg atggtgtttt tgaggtgctc cagtggcttc tgtttctatc agctgtccct 2400

cctgttcagc tactgacggg gtggtgcgta acggcaaaag caccgccgga catcagcgct 2460

agcggagtgt atactggctt actatgttgg cactgatgag ggtgtcagtg aagtgcttca 2520

tgtggcagga gaaaaaaggc tgcaccggtg cgtcagcaga atatgtgata caggatatat 2580

tccgcttcct cgctcactga ctcgctacgc tcggtcgttc gactgcggcg agcggaaatg 2640

gcttacgaac ggggcggaga tttcctggaa gatgccagga agatacttaa cagggaagtg 2700

agagggccgc ggcaaagccg tttttccata ggctccgccc ccctgacaag catcacgaaa 2760

tctgacgctc aaatcagtgg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 2820

ccctggcggc tccctcgtgc gctctcctgt tcctgccttt cggtttaccg gtgtcattcc 2880

gctgttatgg ccgcgtttgt ctcattccac gcctgacact cagttccggg taggcagttc 2940

gctccaagct ggactgtatg cacgaacccc ccgttcagtc cgaccgctgc gccttatccg 3000

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggaaa gacatgcaaa agcaccactg gcagcagcca 3060

ctggtaattg atttagagga gttagtcttg aagtcatgcg ccggttaagg ctaaactgaa 3120

aggacaagtt ttggtgactg cgctcctcca agccagttac ctcggttcaa agagttggta 3180

gctcagagaa ccttcgaaaa accgccctgc aaggcggttt tttcgttttc agagcaagag 3240

attacgcgca gaccaaaacg atctcaagaa gatcatctta ttaatcagat aaaatatttc 3300

tagatttcag tgcaatttat ctcttcaaat gtagcacctg aagtcagccc catacgatat 3360

aagttgtaat tctcatgtta gtcatgcccc gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga 3420

aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa 3480

ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat 3540

gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt 3600

ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg cccttcaccg cctggccctg agagagttgc 3660

agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac 3720

ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta tcgtcgtatc ccactaccga gatgtccgca 3780

ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg 3840

gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa 3900

ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg 3960

agatatttat gccagccagc cagacgcaga cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct 4020

aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg 4080

tcttcatggg agaaaataat actgttgatg ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac 4140

gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag 4200

ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct 4260

tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc accacgctgg cacccagttg atcggcgcga 4320

gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg 4380

ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc 4440

agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg 4500

ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag acaccggcat actctgcgac atcgtataac 4560

gttactggtt tcacattcac caccctgaat tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata 4620

ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga 4680

ctcctgcatt aggaaattaa tacgactcac tata 4714

<210> 18

<211> 4760

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pACYC-wbdO

<400> 18

ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag 60

gagatatacc atgctgacgg aagtgcgccc ggtctctacg acgaaaccgc tggtgtctgt 120

gattctgccg gtgaacaaat tcaacccgta tctggatcgt gcaattcatt caatcctgag 180

tcagtcctat ccgtcgattg aactgattat cattgcaaac aattgcacca atgacttttt 240

cgatgctctg aaaaaacgtg aatgtgaaac cattaaagtg ctgcgcacga acatcgcgta 300

tctgccgtac tgcctgaata aaggcctgga tctgtgtaac ggtgactttg ttgcccgcat 360

ggattcagat gacatttcgc acccggaacg tatcgatcgc caggtcgact tcctgattaa 420

caatccggac atcgatgtgg ttggcaccaa tgcagtctat attgatgaag atgacatcga 480

actggaaaaa agcaacctgc cggtgaacaa taacgctatt cgtaaaatgc tgccgtataa 540

atgctgtctg gtgcatccgt ctgttatgtt tcgcaaaaat gtcgtgatca ccagcggcgg 600

ttacatgttc gcgaattatt ctgaagatta cgaactgtgg aaccgtctgg ccgttgaagg 660

ccgcaatttt tataacctga gcgaatacct gctgtattac cgtctgcaca ataaccaatc 720

aacgtcgaaa aataacctgt ttatggtgat ggcgaacgat gtcgccatta aagtgaaata 780

tttcctgctg accaagaaaa ttagctacct gctgggtatc attcgcacgg tcttttctgt 840

gttctattgc aaatacatca aatgaattcg agctcggcgc gcctgcaggt cgacaagctt 900

gcggccgcat aatgcttaag tcgaacagaa agtaatcgta ttgtacacgg ccgcataatc 960

gaaattaata cgactcacta taggggaatt gtgagcggat aacaattccc catcttagta 1020

tattagttaa gtataagaag gagatataca tatggcagat ctcaattgga tatcggccgg 1080

ccacgcgatc gctgacgtcg gtaccctcga gtctggtaaa gaaaccgctg ctgcgaaatt 1140

tgaacgccag cacatggact cgtctactag cgcagcttaa ttaacctagg ctgctgccac 1200

cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga ggggtttttt 1260

gctgaaacct caggcatttg agaagcacac ggtcacactg cttccggtag tcaataaacc 1320

ggtaaaccag caatagacat aagcggctat ttaacgaccc tgccctgaac cgacgaccgg 1380

gtcgaatttg ctttcgaatt tctgccattc atccgcttat tatcacttat tcaggcgtag 1440

caccaggcgt ttaagggcac caataactgc cttaaaaaaa ttacgccccg ccctgccact 1500

catcgcagta ctgttgtaat tcattaagca ttctgccgac atggaagcca tcacagacgg 1560

catgatgaac ctgaatcgcc agcggcatca gcaccttgtc gccttgcgta taatatttgc 1620

ccatagtgaa aacgggggcg aagaagttgt ccatattggc cacgtttaaa tcaaaactgg 1680

tgaaactcac ccagggattg gctgagacga aaaacatatt ctcaataaac cctttaggga 1740

aataggccag gttttcaccg taacacgcca catcttgcga atatatgtgt agaaactgcc 1800

ggaaatcgtc gtggtattca ctccagagcg atgaaaacgt ttcagtttgc tcatggaaaa 1860

cggtgtaaca agggtgaaca ctatcccata tcaccagctc accgtctttc attgccatac 1920

ggaactccgg atgagcattc atcaggcggg caagaatgtg aataaaggcc ggataaaact 1980

tgtgcttatt tttctttacg gtctttaaaa aggccgtaat atccagctga acggtctggt 2040

tataggtaca ttgagcaact gactgaaatg cctcaaaatg ttctttacga tgccattggg 2100

atatatcaac ggtggtatat ccagtgattt ttttctccat tttagcttcc ttagctcctg 2160

aaaatctcga taactcaaaa aatacgcccg gtagtgatct tatttcatta tggtgaaagt 2220

tggaacctct tacgtgccga tcaacgtctc attttcgcca aaagttggcc cagggcttcc 2280

cggtatcaac agggacacca ggatttattt attctgcgaa gtgatcttcc gtcacaggta 2340

tttattcggc gcaaagtgcg tcgggtgatg ctgccaactt actgatttag tgtatgatgg 2400

tgtttttgag gtgctccagt ggcttctgtt tctatcagct gtccctcctg ttcagctact 2460

gacggggtgg tgcgtaacgg caaaagcacc gccggacatc agcgctagcg gagtgtatac 2520

tggcttacta tgttggcact gatgagggtg tcagtgaagt gcttcatgtg gcaggagaaa 2580

aaaggctgca ccggtgcgtc agcagaatat gtgatacagg atatattccg cttcctcgct 2640

cactgactcg ctacgctcgg tcgttcgact gcggcgagcg gaaatggctt acgaacgggg 2700

cggagatttc ctggaagatg ccaggaagat acttaacagg gaagtgagag ggccgcggca 2760

aagccgtttt tccataggct ccgcccccct gacaagcatc acgaaatctg acgctcaaat 2820

cagtggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttcccct ggcggctccc 2880

tcgtgcgctc tcctgttcct gcctttcggt ttaccggtgt cattccgctg ttatggccgc 2940

gtttgtctca ttccacgcct gacactcagt tccgggtagg cagttcgctc caagctggac 3000

tgtatgcacg aaccccccgt tcagtccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt 3060

gagtccaacc cggaaagaca tgcaaaagca ccactggcag cagccactgg taattgattt 3120

agaggagtta gtcttgaagt catgcgccgg ttaaggctaa actgaaagga caagttttgg 3180

tgactgcgct cctccaagcc agttacctcg gttcaaagag ttggtagctc agagaacctt 3240

cgaaaaaccg ccctgcaagg cggttttttc gttttcagag caagagatta cgcgcagacc 3300

aaaacgatct caagaagatc atcttattaa tcagataaaa tatttctaga tttcagtgca 3360

atttatctct tcaaatgtag cacctgaagt cagccccata cgatataagt tgtaattctc 3420

atgttagtca tgccccgcgc ccaccggaag gagctgactg ggttgaaggc tctcaagggc 3480

atcggtcgag atcccggtgc ctaatgagtg agctaactta cattaattgc gttgcgctca 3540

ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc 3600

gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc cagggtggtt tttcttttca ccagtgagac 3660

gggcaacagc tgattgccct tcaccgcctg gccctgagag agttgcagca agcggtccac 3720

gctggtttgc cccagcaggc gaaaatcctg tttgatggtg gttaacggcg ggatataaca 3780

tgagctgtct tcggtatcgt cgtatcccac taccgagatg tccgcaccaa cgcgcagccc 3840

ggactcggta atggcgcgca ttgcgcccag cgccatctga tcgttggcaa ccagcatcgc 3900

agtgggaacg atgccctcat tcagcatttg catggtttgt tgaaaaccgg acatggcact 3960

ccagtcgcct tcccgttccg ctatcggctg aatttgattg cgagtgagat atttatgcca 4020

gccagccaga cgcagacgcg ccgagacaga acttaatggg cccgctaaca gcgcgatttg 4080

ctggtgaccc aatgcgacca gatgctccac gcccagtcgc gtaccgtctt catgggagaa 4140

aataatactg ttgatgggtg tctggtcaga gacatcaaga aataacgccg gaacattagt 4200

gcaggcagct tccacagcaa tggcatcctg gtcatccagc ggatagttaa tgatcagccc 4260

actgacgcgt tgcgcgagaa gattgtgcac cgccgcttta caggcttcga cgccgcttcg 4320

ttctaccatc gacaccacca cgctggcacc cagttgatcg gcgcgagatt taatcgccgc 4380

gacaatttgc gacggcgcgt gcagggccag actggaggtg gcaacgccaa tcagcaacga 4440

ctgtttgccc gccagttgtt gtgccacgcg gttgggaatg taattcagct ccgccatcgc 4500

cgcttccact ttttcccgcg ttttcgcaga aacgtggctg gcctggttca ccacgcggga 4560

aacggtctga taagagacac cggcatactc tgcgacatcg tataacgtta ctggtttcac 4620

attcaccacc ctgaattgac tctcttccgg gcgctatcat gccataccgc gaaaggtttt 4680

gcgccattcg atggtgtccg ggatctcgac gctctccctt atgcgactcc tgcattagga 4740

aattaatacg actcactata 4760

<210> 19

<211> 4795

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pACYC-furA

<400> 19

ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag 60

gagatatacc atggataaaa tcaaacaggg cagcgcctct ctggttgtcg gtgaccagca 120

agaaaaacat ccggtggttt cagtgctgct gccggttaat cgtgtcgatc gctttttcat 180

tccggcagtt gaatcgatcc tgacccaaac gctgcaggat tttgaactga tcattatcgc 240

taatggctgt agcaccgaac atctgaacaa aattcgtctg acgtatggtg atcacaatcg 300

tgttcgcatt ctgaacaccg aaatcaaagg cctgccgttt gcgctgaatc tgggcgtgca 360

caacgcccgt ggtctgtata ttgcacgcat ggatgctgat gacatttcta tcccggaacg 420

cctggaaaaa caactgaata cgctggaaca gaacaagaaa attggcgtcg tgagctctgg 480

tgtggacttt attgatgaaa atgaccaggc gatccgtgag ggtaaattcc cggaactgac 540

cgacaaagat catcgtcgcc tgctgccgct gatttgctgt atcgcccacc cgacggttat 600

ggtccgcaaa gaaattatca acaaactggg cggttatagt tttggtagtt tctccgaaga 660

ctacgatctg tggctgcgta ttatgcgcga actgccggaa gttgaatttt atcgtatccc 720

ggaatccctg ctgaaatacc gtcgccatgg caatcaggcc accagttcca aaaacattaa 780

gaaaattcgc gcgtacaact cagccctgaa aattcgtgaa ctgtttctgt cgcgcaaact 840

gaaattcatt atcggtatta tcctgccggc acgtatggtg accctgtggc gcaaatgaga 900

attcgagctc ggcgcgcctg caggtcgaca agcttgcggc cgcataatgc ttaagtcgaa 960

cagaaagtaa tcgtattgta cacggccgca taatcgaaat taatacgact cactataggg 1020

gaattgtgag cggataacaa ttccccatct tagtatatta gttaagtata agaaggagat 1080

atacatatgg cagatctcaa ttggatatcg gccggccacg cgatcgctga cgtcggtacc 1140

ctcgagtctg gtaaagaaac cgctgctgcg aaatttgaac gccagcacat ggactcgtct 1200

actagcgcag cttaattaac ctaggctgct gccaccgctg agcaataact agcataaccc 1260

cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga aacctcaggc atttgagaag 1320

cacacggtca cactgcttcc ggtagtcaat aaaccggtaa accagcaata gacataagcg 1380

gctatttaac gaccctgccc tgaaccgacg accgggtcga atttgctttc gaatttctgc 1440

cattcatccg cttattatca cttattcagg cgtagcacca ggcgtttaag ggcaccaata 1500

actgccttaa aaaaattacg ccccgccctg ccactcatcg cagtactgtt gtaattcatt 1560

aagcattctg ccgacatgga agccatcaca gacggcatga tgaacctgaa tcgccagcgg 1620

catcagcacc ttgtcgcctt gcgtataata tttgcccata gtgaaaacgg gggcgaagaa 1680

gttgtccata ttggccacgt ttaaatcaaa actggtgaaa ctcacccagg gattggctga 1740

gacgaaaaac atattctcaa taaacccttt agggaaatag gccaggtttt caccgtaaca 1800

cgccacatct tgcgaatata tgtgtagaaa ctgccggaaa tcgtcgtggt attcactcca 1860

gagcgatgaa aacgtttcag tttgctcatg gaaaacggtg taacaagggt gaacactatc 1920

ccatatcacc agctcaccgt ctttcattgc catacggaac tccggatgag cattcatcag 1980

gcgggcaaga atgtgaataa aggccggata aaacttgtgc ttatttttct ttacggtctt 2040

taaaaaggcc gtaatatcca gctgaacggt ctggttatag gtacattgag caactgactg 2100

aaatgcctca aaatgttctt tacgatgcca ttgggatata tcaacggtgg tatatccagt 2160

gatttttttc tccattttag cttccttagc tcctgaaaat ctcgataact caaaaaatac 2220

gcccggtagt gatcttattt cattatggtg aaagttggaa cctcttacgt gccgatcaac 2280

gtctcatttt cgccaaaagt tggcccaggg cttcccggta tcaacaggga caccaggatt 2340

tatttattct gcgaagtgat cttccgtcac aggtatttat tcggcgcaaa gtgcgtcggg 2400

tgatgctgcc aacttactga tttagtgtat gatggtgttt ttgaggtgct ccagtggctt 2460

ctgtttctat cagctgtccc tcctgttcag ctactgacgg ggtggtgcgt aacggcaaaa 2520

gcaccgccgg acatcagcgc tagcggagtg tatactggct tactatgttg gcactgatga 2580

gggtgtcagt gaagtgcttc atgtggcagg agaaaaaagg ctgcaccggt gcgtcagcag 2640

aatatgtgat acaggatata ttccgcttcc tcgctcactg actcgctacg ctcggtcgtt 2700

cgactgcggc gagcggaaat ggcttacgaa cggggcggag atttcctgga agatgccagg 2760

aagatactta acagggaagt gagagggccg cggcaaagcc gtttttccat aggctccgcc 2820

cccctgacaa gcatcacgaa atctgacgct caaatcagtg gtggcgaaac ccgacaggac 2880

tataaagata ccaggcgttt cccctggcgg ctccctcgtg cgctctcctg ttcctgcctt 2940

tcggtttacc ggtgtcattc cgctgttatg gccgcgtttg tctcattcca cgcctgacac 3000

tcagttccgg gtaggcagtt cgctccaagc tggactgtat gcacgaaccc cccgttcagt 3060

ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggaa agacatgcaa 3120

aagcaccact ggcagcagcc actggtaatt gatttagagg agttagtctt gaagtcatgc 3180

gccggttaag gctaaactga aaggacaagt tttggtgact gcgctcctcc aagccagtta 3240

cctcggttca aagagttggt agctcagaga accttcgaaa aaccgccctg caaggcggtt 3300

ttttcgtttt cagagcaaga gattacgcgc agaccaaaac gatctcaaga agatcatctt 3360

attaatcaga taaaatattt ctagatttca gtgcaattta tctcttcaaa tgtagcacct 3420

gaagtcagcc ccatacgata taagttgtaa ttctcatgtt agtcatgccc cgcgcccacc 3480

ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgagatccc ggtgcctaat 3540

gagtgagcta acttacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc 3600

tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg 3660

ggcgccaggg tggtttttct tttcaccagt gagacgggca acagctgatt gcccttcacc 3720

gcctggccct gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg tttgccccag caggcgaaaa 3780

tcctgtttga tggtggttaa cggcgggata taacatgagc tgtcttcggt atcgtcgtat 3840

cccactaccg agatgtccgc accaacgcgc agcccggact cggtaatggc gcgcattgcg 3900

cccagcgcca tctgatcgtt ggcaaccagc atcgcagtgg gaacgatgcc ctcattcagc 3960

atttgcatgg tttgttgaaa accggacatg gcactccagt cgccttcccg ttccgctatc 4020

ggctgaattt gattgcgagt gagatattta tgccagccag ccagacgcag acgcgccgag 4080

acagaactta atgggcccgc taacagcgcg atttgctggt gacccaatgc gaccagatgc 4140

tccacgccca gtcgcgtacc gtcttcatgg gagaaaataa tactgttgat gggtgtctgg 4200

tcagagacat caagaaataa cgccggaaca ttagtgcagg cagcttccac agcaatggca 4260

tcctggtcat ccagcggata gttaatgatc agcccactga cgcgttgcgc gagaagattg 4320

tgcaccgccg ctttacaggc ttcgacgccg cttcgttcta ccatcgacac caccacgctg 4380

gcacccagtt gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa tttgcgacgg cgcgtgcagg 4440

gccagactgg aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt tgcccgccag ttgttgtgcc 4500

acgcggttgg gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt ccactttttc ccgcgttttc 4560

gcagaaacgt ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg tctgataaga gacaccggca 4620

tactctgcga catcgtataa cgttactggt ttcacattca ccaccctgaa ttgactctct 4680

tccgggcgct atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc attcgatggt gtccgggatc 4740

tcgacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaaatta atacgactca ctata 4795

<210> 20

<211> 6383

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pET-PmnagT

<400> 20

ggggaattgt gagcggataa caattcccct ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag 60

gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcgag 120

ctcggcgcgc ctgcaggtcg acaagcttgc ggccgcataa tgcttaagtc gaacagaaag 180

taatcgtatt gtacacggcc gcataatcga aattaatacg actcactata ggggaattgt 240

gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt ataagaagga gatatacata 300

tggaaaataa acctttagtt tcagttttga tttgtgctta taatgtcgag aaatatattg 360

aagaatgtat taatgcagtg attaatcaga catataagaa cttagaaatt attattgtga 420

atgatggttc ttctgataat acttattttc ttttaaaaaa gttagctgaa aaagataatc 480

gtataaaaat attaaatttc aataatcata ttggaataat ttctgcttta aatgaaggtt 540

taaaagagat agctggagaa tatattgctc gaacagattc tgatgatata actaagccag 600

attggattga gaaaatatta acttgtatgc aaaatgatcc taaaatcatc gctatgggat 660

cttatcttac tgtcttgtca gaagaaaata atggtagtgt gcttgctaat catcataaaa 720

ataaagttga atggaaaaat ccattagagc acaaagatat tgttgagaaa atgttatttg 780

gtaatcctat tcataataat tcaatggtta tgagaagtga gatatataca aagtatcact 840

taatttatga tccagattat cattatgctg aagattataa attttggctg gaagttagtc 900

gaattgggaa attagcaaat tatcctgagt cactcgtata ttatagactt caccgaaatc 960

aaacatcttc tattcataat agccaacaag aaataaatgg taaaaaatta cgtttacaag 1020

ctcttaatta ttatttaaaa gatcttggta ttgattatca gttacctgaa aaatttttat 1080

tcaaagatat agcgttattg caagaaatat tttatgaacg aggtatgttt agagaaaata 1140

taataaggcg tatcatctac gaatgttatc tttccttggg agagtataat tataaagata 1200

tttattattt tttaataaat aaaaataact ttctttctat aaaagacaaa tttaaaataa 1260

taaaaaaata tcttcgtcct gataaatatt catctactta ttaggacgtc ggtaccctcg 1320

agtctggtaa agaaaccgct gctgcgaaat ttgaacgcca gcacatggac tcgtctacta 1380

gcgcagctta attaacctag gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg 1440

gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaagg aggaactata tccggattgg 1500

cgaatgggac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag 1560

cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt 1620

tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt 1680

ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg 1740

tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt 1800

taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt 1860

tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca 1920

aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgtttaca atttctggcg gcacgatggc 1980

atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 2040

tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 2100

gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 2160

tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 2220

gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 2280

cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 2340

gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 2400

atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca 2460

aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 2520

atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 2580

aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 2640

aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 2700

gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 2760

gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 2820

gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 2880

ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 2940

ctcttccttt ttcaatcatg attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata 3000

catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggtcat gaccaaaatc ccttaacgtg 3060

agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc 3120

ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg 3180

tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag 3240

cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact 3300

ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg 3360

gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc 3420

ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg 3480

aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg 3540

cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag 3600

ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc 3660

gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct 3720

ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc 3780

ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc 3840

gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg atgcggtatt 3900

ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata tggtgcactc tcagtacaat 3960

ctgctctgat gccgcatagt taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc 4020

atggctgcgc cccgacaccc gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc 4080

ccggcatccg cttacagaca agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt 4140

tcaccgtcat caccgaaacg cgcgaggcag ctgcggtaaa gctcatcagc gtggtcgtga 4200

agcgattcac agatgtctgc ctgttcatcc gcgtccagct cgttgagttt ctccagaagc 4260

gttaatgtct ggcttctgat aaagcgggcc atgttaaggg cggttttttc ctgtttggtc 4320

actgatgcct ccgtgtaagg gggatttctg ttcatggggg taatgatacc gatgaaacga 4380

gagaggatgc tcacgatacg ggttactgat gatgaacatg cccggttact ggaacgttgt 4440

gagggtaaac aactggcggt atggatgcgg cgggaccaga gaaaaatcac tcagggtcaa 4500

tgccagcgct tcgttaatac agatgtaggt gttccacagg gtagccagca gcatcctgcg 4560

atgcagatcc ggaacataat ggtgcagggc gctgacttcc gcgtttccag actttacgaa 4620

acacggaaac cgaagaccat tcatgttgtt gctcaggtcg cagacgtttt gcagcagcag 4680

tcgcttcacg ttcgctcgcg tatcggtgat tcattctgct aaccagtaag gcaaccccgc 4740

cagcctagcc gggtcctcaa cgacaggagc acgatcatgc tagtcatgcc ccgcgcccac 4800

cggaaggagc tgactgggtt gaaggctctc aagggcatcg gtcgagatcc cggtgcctaa 4860

tgagtgagct aacttacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac 4920

ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt 4980

gggcgccagg gtggtttttc ttttcaccag tgagacgggc aacagctgat tgcccttcac 5040

cgcctggccc tgagagagtt gcagcaagcg gtccacgctg gtttgcccca gcaggcgaaa 5100

atcctgtttg atggtggtta acggcgggat ataacatgag ctgtcttcgg tatcgtcgta 5160

tcccactacc gagatgtccg caccaacgcg cagcccggac tcggtaatgg cgcgcattgc 5220

gcccagcgcc atctgatcgt tggcaaccag catcgcagtg ggaacgatgc cctcattcag 5280

catttgcatg gtttgttgaa aaccggacat ggcactccag tcgccttccc gttccgctat 5340

cggctgaatt tgattgcgag tgagatattt atgccagcca gccagacgca gacgcgccga 5400

gacagaactt aatgggcccg ctaacagcgc gatttgctgg tgacccaatg cgaccagatg 5460

ctccacgccc agtcgcgtac cgtcttcatg ggagaaaata atactgttga tgggtgtctg 5520

gtcagagaca tcaagaaata acgccggaac attagtgcag gcagcttcca cagcaatggc 5580

atcctggtca tccagcggat agttaatgat cagcccactg acgcgttgcg cgagaagatt 5640

gtgcaccgcc gctttacagg cttcgacgcc gcttcgttct accatcgaca ccaccacgct 5700

ggcacccagt tgatcggcgc gagatttaat cgccgcgaca atttgcgacg gcgcgtgcag 5760

ggccagactg gaggtggcaa cgccaatcag caacgactgt ttgcccgcca gttgttgtgc 5820

cacgcggttg ggaatgtaat tcagctccgc catcgccgct tccacttttt cccgcgtttt 5880

cgcagaaacg tggctggcct ggttcaccac gcgggaaacg gtctgataag agacaccggc 5940

atactctgcg acatcgtata acgttactgg tttcacattc accaccctga attgactctc 6000

ttccgggcgc tatcatgcca taccgcgaaa ggttttgcgc cattcgatgg tgtccgggat 6060

ctcgacgctc tcccttatgc gactcctgca ttaggaagca gcccagtagt aggttgaggc 6120

cgttgagcac cgccgccgca aggaatggtg catgcaagga gatggcgccc aacagtcccc 6180

cggccacggg gcctgccacc atacccacgc cgaaacaagc gctcatgagc ccgaagtggc 6240

gagcccgatc ttccccatcg gtgatgtcgg cgatataggc gccagcaacc gcacctgtgg 6300

cgccggtgat gccggccacg atgcgtccgg cgtagaggat cgagatcgat ctcgatcccg 6360

cgaaattaat acgactcact ata 6383

<210> 21

<211> 6711

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-yjhB

<400> 21

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tggcaacagc 1500

atggtataaa caagttaatc caccacaacg gaaagctctt ttttccgcat ggcttggata 1560

tgtatttgat ggctttgatt ttatgatgat attttacatt cttcatatta taaaagcaga 1620

tcttggcatt acggatattc aggctacttt aatagggaca gtggccttca tagccagacc 1680

tattggaggt ggtttttttg gtgccatggc tgataaatat ggtcgtaagc caatgatgat 1740

gtgggcaatt ttcatttact cagtcggaac aggccttagc ggtattgcta caaacttata 1800

tatgctcgca gtttgccgtt ttattgttgg cttagggatg tctggtgaat atgcatgtgc 1860

ttcaacttat gcggtagaaa gttggcctaa aaatcttcaa tctaaagcta gtgctttttt 1920

ggtaagtggt ttttctgttg gaaatattat tgcggcacaa ataatccctc agtttgctga 1980

agtatatgga tggagaaact ctttttttat aggcctgtta ccagttttac tagttctttg 2040

gatcagaaaa agtgctccag aaagtcagga gtggattgaa gataaatata aggataaatc 2100

aacatttttg tctgtcttca gaaaaccaca tctttcaatc tctatgatcg ttttcctcgt 2160

ctgtttttgt ctatttggtg caaactggcc gataaacgga ctacttcctt cctacctggc 2220

agataatgga gttaatacag tggtcatttc aactctgatg acaatagcag gtttaggaac 2280

actgacaggt acaatatttt ttggttttgt tggtgataag attggtgtaa aaaaagcctt 2340

tgtagtcggt ctaataactt catttatttt cctttgtcct ctttttttta tttctgtgaa 2400

aaactcttct cttataggat tatgtctctt tggattaatg tttacaaatt taggtattgc 2460

agggttggtt ccaaaattta tatatgatta ctttccaaca aaattaagag gattagggac 2520

cggtcttatt tataacttag gggcaactgg aggaatggcc gcacctgtat tagctacata 2580

catttcagga tattatggct taggtgtttc attattcatt gttacggttg cattctctgc 2640

cttattaatt ttgttagttg gttttgatat tccaggtaaa atttataaac tatccgtggc 2700

taaatgataa atcgatacta gcataacccc ttggggcctc taaacgcgtc gacacgcaaa 2760

aaggccatcc gtcaggatgg ccttctgctt aatttgatgc ctggcagttt atggcgggcg 2820

tcctgcccgc caccctccgg gccgttgctt cgcaacgttc aaatccgctc ccggcggatt 2880

tgtcctactc aggagagcgt tcaccgacaa acaacagata aaacgaaagg cccagtcttt 2940

cgactgagcc tttcgtttta tttgatgcct ggcagttccc tactctcgca tggggagacc 3000

ccacactacc atcatgtatg aatatcctcc ttagttccta ttccgaagtt cctattctct 3060

agaaagtata ggaacttcgg cgcgtcctac ctgtgacgga agatcacttc gcagaataaa 3120

taaatcctgg tgtccctgtt gataccggga agccctgggc caacttttgg cgaaaatgag 3180

acgttgatcg gcacgtaaga ggttccaact ttcaccataa tgaaataaga tcactaccgg 3240

gcgtattttt tgagttgtcg agattttcag gagctaagga agctaaaatg gagaaaaaaa 3300

tcactggata taccaccgtt gatatatccc aatggcatcg taaagaacat tttgaggcat 3360

ttcagtcagt tgctcaatgt acctataacc agaccgttca gctggatatt acggcctttt 3420

taaagaccgt aaagaaaaat aagcacaagt tttatccggc ctttattcac attcttgccc 3480

gcctgatgaa tgctcatccg gaattacgta tggcaatgaa agacggtgag ctggtgatat 3540

gggatagtgt tcacccttgt tacaccgttt tccatgagca aactgaaacg ttttcatcgc 3600

tctggagtga ataccacgac gatttccggc agtttctaca catatattcg caagatgtgg 3660

cgtgttacgg tgaaaacctg gcctatttcc ctaaagggtt tattgagaat atgtttttcg 3720

tctcagccaa tccctgggtg agtttcacca gttttgattt aaacgtggcc aatatggaca 3780

acttcttcgc ccccgttttc accatgggca aatattatac gcaaggcgac aaggtgctga 3840

tgccgctggc gattcaggtt catcatgccg tttgtgatgg cttccatgtc ggcagatgct 3900

taatgaatac aacagtactg cgatgagtgg cagggcgggg cgtaaggcgc gccatttaaa 3960

tgaagttcct attccgaagt tcctattctc tagaaagtat aggaacttcg aagcagctcc 4020

agcctacaca atcgctcaag acgtgtaatg ctgcaatctg catgcaagct tggcactggc 4080

cacgcaaaaa ggccatccgt caggatggcc ttctgcttaa tttgatgcct ggcagtttat 4140

ggcgggcgtc ctgcccgcca ccctccgggc cgttgcttcg caacgttcaa atccgctccc 4200

ggcggatttg tcctactcag gagagcgttc accgacaaac aacagataaa acgaaaggcc 4260

cagtctttcg actgagcctt tcgttttatt tgatgcctgg cagttcccta ctctcgcatg 4320

gggagacccc acactaccat cggggggcca tcgatgcagg tggcactttt cggggaaatg 4380

tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga 4440

gacaataacc ctgctgcaga ggcctgcatg caagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt 4500

ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa 4560

agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac 4620

tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg 4680

cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc 4740

gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat 4800

ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca 4860

ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc 4920

atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc 4980

aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg 5040

gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta 5100

ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg 5160

ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac 5220

acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag 5280

gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat 5340

ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat 5400

ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc 5460

gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt 5520

ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct 5580

agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt 5640

ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc 5700

gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac 5760

catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat 5820

cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg 5880

cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata 5940

gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta 6000

tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt 6060

gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag 6120

tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa 6180

gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc 6240

gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt 6300

taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc 6360

tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta 6420

ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa 6480

taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca 6540

tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac 6600

aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtctaa gaaaccatta 6660

ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag gccctttcgt c 6711

<210> 22

<211> 6867

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-yebQ

<400> 22

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgccaaaagt 1500

tcaggccgac ggcctgccat tgccccagcg atacggtgcg atattaacca ttgtgattgg 1560

tatttcgatg gccgtccttg acggcgcaat cgccaacgtc gccctgccaa caatcgccac 1620

ggaccttcat gccacgccag ccagttccat ctgggtagtg aacgcctatc aaatcgccat 1680

tgtcatctcc ctgctctcgt tttcgtttct gggcgatatg tttggctatc gacgtattta 1740

taaatgcggt ctggtcgttt ttctgttgtc ttcactgttc tgcgcccttt ctgattcgct 1800

gcaaatgctc acccttgcgc gtgtcataca aggtttcggc ggtgcagcgt tgatgagcgt 1860

taataccgca cttatccgcc tgatctatcc acaacgtttt ctgggtagag ggatgggcat 1920

aaactcgttt attgttgccg tctcttctgc tgccgggccg acaattgctg cagcaatcct 1980

ctccatcgca tcctggaaat ggttattttt aatcaacgta ccgttaggta ttatcgccct 2040

gcttctggcg atgcgttttc tgccacccaa tggttctcgc gccagtaaac cccgtttcga 2100

cctgcccagc gccgtgatga acgcgttaac cttcggcctg cttatcactg cgttgagtgg 2160

tttcgctcag gggcaatcgc tgacgttaat tgctgcggaa ctggtggtaa tggttgttgt 2220

tggtattttc tttattcgcc gccagctttc tcttcccgta ccgctgctac cggtggattt 2280

actgcgtatc ccgctgtttt cactttctat ttgcacatct gtttgctctt tctgcgcaca 2340

aatgctggca atggtttccc tgccctttta cctgcaaacc gtgctcgggc gtagtgaagt 2400

cgaaacaggt ttacttctga caccgtggcc gttagcaacg atggtgatgg ctccgctggc 2460

aggctatttg attgaacgcg tacatgcagg attgctgggg gctttagggt tgttcatcat 2520

ggctgcgggg cttttttccc tggttctgct gcccgcgtca cctgcggata tcaatattat 2580

ctggccgatg atcttatgtg gtgctggatt tggcttattc cagtcaccca ataaccacac 2640

cattattacc tccgcgcctc gcgaacgtag cggtggagcc agtggcatgt taggaacggc 2700

tcgtctactg ggtcagagta gcggcgcggc gctggtggcg ctgatgctaa atcagtttgg 2760

agataatggt acacacgtct cgctgatggc tgcggctatt ctggcagtga ttgctgcctg 2820

tgtcagtggt ttacgtatca ctcagccacg atccagggca taataaatcg atactagcat 2880

aaccccttgg ggcctctaaa cgcgtcgaca cgcaaaaagg ccatccgtca ggatggcctt 2940

ctgcttaatt tgatgcctgg cagtttatgg cgggcgtcct gcccgccacc ctccgggccg 3000

ttgcttcgca acgttcaaat ccgctcccgg cggatttgtc ctactcagga gagcgttcac 3060

cgacaaacaa cagataaaac gaaaggccca gtctttcgac tgagcctttc gttttatttg 3120

atgcctggca gttccctact ctcgcatggg gagaccccac actaccatca tgtatgaata 3180

tcctccttag ttcctattcc gaagttccta ttctctagaa agtataggaa cttcggcgcg 3240

tcctacctgt gacggaagat cacttcgcag aataaataaa tcctggtgtc cctgttgata 3300

ccgggaagcc ctgggccaac ttttggcgaa aatgagacgt tgatcggcac gtaagaggtt 3360

ccaactttca ccataatgaa ataagatcac taccgggcgt attttttgag ttgtcgagat 3420

tttcaggagc taaggaagct aaaatggaga aaaaaatcac tggatatacc accgttgata 3480

tatcccaatg gcatcgtaaa gaacattttg aggcatttca gtcagttgct caatgtacct 3540

ataaccagac cgttcagctg gatattacgg cctttttaaa gaccgtaaag aaaaataagc 3600

acaagtttta tccggccttt attcacattc ttgcccgcct gatgaatgct catccggaat 3660

tacgtatggc aatgaaagac ggtgagctgg tgatatggga tagtgttcac ccttgttaca 3720

ccgttttcca tgagcaaact gaaacgtttt catcgctctg gagtgaatac cacgacgatt 3780

tccggcagtt tctacacata tattcgcaag atgtggcgtg ttacggtgaa aacctggcct 3840

atttccctaa agggtttatt gagaatatgt ttttcgtctc agccaatccc tgggtgagtt 3900

tcaccagttt tgatttaaac gtggccaata tggacaactt cttcgccccc gttttcacca 3960

tgggcaaata ttatacgcaa ggcgacaagg tgctgatgcc gctggcgatt caggttcatc 4020

atgccgtttg tgatggcttc catgtcggca gatgcttaat gaatacaaca gtactgcgat 4080

gagtggcagg gcggggcgta aggcgcgcca tttaaatgaa gttcctattc cgaagttcct 4140

attctctaga aagtatagga acttcgaagc agctccagcc tacacaatcg ctcaagacgt 4200

gtaatgctgc aatctgcatg caagcttggc actggccacg caaaaaggcc atccgtcagg 4260

atggccttct gcttaatttg atgcctggca gtttatggcg ggcgtcctgc ccgccaccct 4320

ccgggccgtt gcttcgcaac gttcaaatcc gctcccggcg gatttgtcct actcaggaga 4380

gcgttcaccg acaaacaaca gataaaacga aaggcccagt ctttcgactg agcctttcgt 4440

tttatttgat gcctggcagt tccctactct cgcatgggga gaccccacac taccatcggg 4500

gggccatcga tgcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat 4560

ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctgc tgcagaggcc 4620

tgcatgcaag cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc 4680

tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat 4740

gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc 4800

tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg 4860

ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag 4920

cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag 4980

gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 5040

tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 5100

agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 5160

tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 5220

cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 5280

ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 5340

ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 5400

ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 5460

ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 5520

cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 5580

gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 5640

atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 5700

ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 5760

gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 5820

tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 5880

ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 5940

taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 6000

gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 6060

gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 6120

ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 6180

aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 6240

gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 6300

cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt 6360

actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt 6420

caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac 6480

gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac 6540

ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag 6600

caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa 6660

tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga 6720

gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc 6780

cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa 6840

ataggcgtat cacgaggccc tttcgtc 6867

<210> 23

<211> 6768

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-proP

<400> 23

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgccgaacaa 1500

agctgaaacc tccccggcga aactgcgtct gaaagccttc ctgaaacgta tcaagattat 1560

gaacaccacc gaaaacagca aacagaagcc ggttaacgtg gttgcatttg ctttcctgct 1620

gaccgcgttt ctgacgggta tcgccagctc tttccaaacc ccgacgctga gcctgtttct 1680

ggcgcaggaa attcaagtct ctccgtttat ggtgggcatg ttctatacct caaatgcagt 1740

gctgggcatc gttctgtcgc agattctggc taaatacagt gattcccaag atgaccgtcg 1800

caagattatc attttctgca gtctgctggc gatcggcggt tgtatcacct tcgcctacaa 1860

ccgtaactac tacgtgctga tgtttttcgc gacgttcctg ctgtccctgg gtagttccgc 1920

aaacccgcag gcatttgcac tggcacgtga atatgcagac tacaccaaac gcgaagctat 1980

catgtttacc acgattatgc gcacgcagat cagcctggca tggattgttg gcccgccgct 2040

gtcattctcg attgcgctgg gctggggttt tgaatatatg tacatggtcg cggcctcagc 2100

atttctgctg tgcgctatca ttgctaaagc gctgctgccg tatgtgccgc gtaaagccgt 2160

cgtgccgctg accaagccgg atgaagttgc gggtctgccg gccaaaaata aaaagcagag 2220

tgacaagcaa tccatccgcc tgctgtttat tacgtgcttc ctgatgtgga gttgtaacgg 2280

catgtatctg atctccatgc cgctgcatgt tattaatgaa ctgcacctga gtgaacgtct 2340

ggcgggcatt ctgatgggta ccgcagctgg cctggaaatc ccggtgatgc tgattgccgg 2400

ctatctgacc aaatacctga cgaaaaagtc tctgatcctg accgccctgt tcatgggtct 2460

gtttttctat attggcatgc tgtttgcaga acagacgtgg caactggtcg ccctgcaggc 2520

atttaacgct atcttcattg gtatcattgc gaccctgggc atggtgtact ttcaagatct 2580

gatgccgggc aaaatgggtt cagccaccac gctgttctcg aacgcggcca aatcatcgtg 2640

gatcgttgca ggtccgtttg tcggcatcat tgctcagatt tggaattata gctctgtgtt 2700

ctacatcagc attgttctgg tcgcggtgtc tctgtttagc atgtctaaag ttaagagcgt 2760

ctaataaatc gatactagca taaccccttg gggcctctaa acgcgtcgac acgcaaaaag 2820

gccatccgtc aggatggcct tctgcttaat ttgatgcctg gcagtttatg gcgggcgtcc 2880

tgcccgccac cctccgggcc gttgcttcgc aacgttcaaa tccgctcccg gcggatttgt 2940

cctactcagg agagcgttca ccgacaaaca acagataaaa cgaaaggccc agtctttcga 3000

ctgagccttt cgttttattt gatgcctggc agttccctac tctcgcatgg ggagacccca 3060

cactaccatc atgtatgaat atcctcctta gttcctattc cgaagttcct attctctaga 3120

aagtatagga acttcggcgc gtcctacctg tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa 3180

atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg 3240

ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc accataatga aataagatca ctaccgggcg 3300

tattttttga gttgtcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca 3360

ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc 3420

agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa 3480

agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc 3540

tgatgaatgc tcatccggaa ttacgtatgg caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg 3600

atagtgttca cccttgttac accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct 3660

ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt 3720

gttacggtga aaacctggcc tatttcccta aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct 3780

cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact 3840

tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc 3900

cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc agatgcttaa 3960

tgaatacaac agtactgcga tgagtggcag ggcggggcgt aaggcgcgcc atttaaatga 4020

agttcctatt ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg aacttcgaag cagctccagc 4080

ctacacaatc gctcaagacg tgtaatgctg caatctgcat gcaagcttgg cactggccac 4140

gcaaaaaggc catccgtcag gatggccttc tgcttaattt gatgcctggc agtttatggc 4200

gggcgtcctg cccgccaccc tccgggccgt tgcttcgcaa cgttcaaatc cgctcccggc 4260

ggatttgtcc tactcaggag agcgttcacc gacaaacaac agataaaacg aaaggcccag 4320

tctttcgact gagcctttcg ttttatttga tgcctggcag ttccctactc tcgcatgggg 4380

agaccccaca ctaccatcgg ggggccatcg atgcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc 4440

gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac 4500

aataaccctg ctgcagaggc ctgcatgcaa gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc 4560

ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt 4620

gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc 4680

ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg 4740

ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct 4800

cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca 4860

cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga 4920

accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc 4980

acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg 5040

cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat 5100

acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt 5160

atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc 5220

agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg 5280

acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg 5340

gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg 5400

gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg 5460

gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca 5520

gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga 5580

acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga 5640

tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt 5700

ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt 5760

catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat 5820

ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag 5880

caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct 5940

ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt 6000

tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg 6060

cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca 6120

aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt 6180

tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat 6240

gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac 6300

cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa 6360

aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt 6420

tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt 6480

tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa 6540

gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt 6600

atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa 6660

taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta 6720

tcatgacatt aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtc 6768

<210> 24

<211> 6672

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-Cn-setA

<400> 24

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgctgtggtt 1500

tctgacccgt gctcgtcgct tcaatccggt ttatgcggcc tttatggccg tcagcttcat 1560

gattggtgtg gccggtgcac tgcaggcacc gaccctgtct ctgtttctga cgcgtgaagt 1620

tgaagtccgc ccgttttggg ttggtctgtt ctacacggtc aacgcaattg ctggcatcgg 1680

tgtgagtctg ctgctggcca aacgtagtga ttcccaaggc gaccgtcgca aactgattat 1740

ggtgtgctgt gttatggcgg tcgccaactg cgtcctgttt gcattcaatc gccattatct 1800

gaccctgatc acgctgggtg tgatgtttgc aagcattgct aataccgcga tgccgcagat 1860

cttcgcactg gctcgtgaat acgccgatcg ttctgcacgc gaagtggtta tgtttagctc 1920

tattatgcgc gcccaactga gtctggcatg ggttattggc ccgccgctgt ccttcatgct 1980

ggccctgaaa tatggtttta ccacgatgtt cctgattgca gctggcattt ttgtgatctc 2040

actggctctg attatcttcg cgctgccgtc ggtgccgcgt gttgaacagc cggccgaagt 2100

ggcaattacc caagttagcg gttggaaaga ttctaacgtt cgcatgctgt ttatcgcctc 2160

aatgctgatg tggacctgta atacgatgta tattatcgac atgccgctgt ggatttcgca 2220

ggatctgggt ctgccggatg aactggccgg tctgctgatg ggtaccgccg caggcattga 2280

aatcccggct atgatcctgg cgggttatta cgtgaaacgt tttggcaaac gcaacatgat 2340

ggtcgcagct gtggcggccg gtattctgtt ttacgttggc ctgatcctgt tccatagcaa 2400

aacggcgctg gtcgtgctgc agctgtttaa tgccgtcttc attggtatta tcgcaggcat 2460

cggtatgctg tggtttcaag atctgatgcc gggtcgtccg ggtagcgcaa ccaccctgtt 2520

caccaactca atttcgacgg gcgtgattct ggccggtatt ctgcagggtg ccctggcaga 2580

aggttttggt cactatagtg tgtactggct gatggcagct ctggctgtta tcgcgctgtt 2640

cctgaccagc cgcgttaaaa acgtctaata aatcgatact agcataaccc cttggggcct 2700

ctaaacgcgt cgacacgcaa aaaggccatc cgtcaggatg gccttctgct taatttgatg 2760

cctggcagtt tatggcgggc gtcctgcccg ccaccctccg ggccgttgct tcgcaacgtt 2820

caaatccgct cccggcggat ttgtcctact caggagagcg ttcaccgaca aacaacagat 2880

aaaacgaaag gcccagtctt tcgactgagc ctttcgtttt atttgatgcc tggcagttcc 2940

ctactctcgc atggggagac cccacactac catcatgtat gaatatcctc cttagttcct 3000

attccgaagt tcctattctc tagaaagtat aggaacttcg gcgcgtccta cctgtgacgg 3060

aagatcactt cgcagaataa ataaatcctg gtgtccctgt tgataccggg aagccctggg 3120

ccaacttttg gcgaaaatga gacgttgatc ggcacgtaag aggttccaac tttcaccata 3180

atgaaataag atcactaccg ggcgtatttt ttgagttgtc gagattttca ggagctaagg 3240

aagctaaaat ggagaaaaaa atcactggat ataccaccgt tgatatatcc caatggcatc 3300

gtaaagaaca ttttgaggca tttcagtcag ttgctcaatg tacctataac cagaccgttc 3360

agctggatat tacggccttt ttaaagaccg taaagaaaaa taagcacaag ttttatccgg 3420

cctttattca cattcttgcc cgcctgatga atgctcatcc ggaattacgt atggcaatga 3480

aagacggtga gctggtgata tgggatagtg ttcacccttg ttacaccgtt ttccatgagc 3540

aaactgaaac gttttcatcg ctctggagtg aataccacga cgatttccgg cagtttctac 3600

acatatattc gcaagatgtg gcgtgttacg gtgaaaacct ggcctatttc cctaaagggt 3660

ttattgagaa tatgtttttc gtctcagcca atccctgggt gagtttcacc agttttgatt 3720

taaacgtggc caatatggac aacttcttcg cccccgtttt caccatgggc aaatattata 3780

cgcaaggcga caaggtgctg atgccgctgg cgattcaggt tcatcatgcc gtttgtgatg 3840

gcttccatgt cggcagatgc ttaatgaata caacagtact gcgatgagtg gcagggcggg 3900

gcgtaaggcg cgccatttaa atgaagttcc tattccgaag ttcctattct ctagaaagta 3960

taggaacttc gaagcagctc cagcctacac aatcgctcaa gacgtgtaat gctgcaatct 4020

gcatgcaagc ttggcactgg ccacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta 4080

atttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc 4140

gcaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa 4200

caacagataa aacgaaaggc ccagtctttc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg 4260

gcagttccct actctcgcat ggggagaccc cacactacca tcggggggcc atcgatgcag 4320

gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt 4380

caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgctgcag aggcctgcat gcaagcttgg 4440

cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca 4500

acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca 4560

cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc 4620

attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt 4680

cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact 4740

caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag 4800

caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata 4860

ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc 4920

cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg 4980

ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc 5040

tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg 5100

gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc 5160

ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga 5220

ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg 5280

gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa 5340

aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg 5400

tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt 5460

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 5520

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct 5580

aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta 5640

tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa 5700

ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac 5760

gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa 5820

gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag 5880

taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg 5940

tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag 6000

ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg 6060

tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc 6120

ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat 6180

tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata 6240

ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa 6300

aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca 6360

actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc 6420

aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc 6480

tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg 6540

aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac 6600

ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga 6660

ggccctttcg tc 6672

<210> 25

<211> 7074

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-spoVB

<400> 25

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgaatgactc 1500

ggtcggtgct aagcgtcaaa gtgcgtggaa gggtgcgttc gtcctggtcg ttgcgggcat 1560

cgttaccaag atcctgtctg ccgtgtatcg tgttccgttt cagaacattg tcggcgatgt 1620

gggtttctat atctaccagc aagtttaccc gtttctgggc attgcggtca tgctgagtac 1680

ctccggtttt ccggtgatca tctcgaagct gatgaacgat tacagcgacc ataaacagaa 1740

gattatgaag atcagtgcac tgtatgtgac ggcagcaggt ctggttctgt ttgccctgat 1800

gtacgcaggt gcagctccgc tggcgggctt catgggtgat gaccgtctgg tcatgctgat 1860

tcgcgtggcg gcctttgctt tcatcctgtt tccgttcacc gcggtttttc gcggctattt 1920

ccagggtgtg cacgacatga tgccgtctgc tctgagtcag attacggaac aactgctgcg 1980

tgtggcagtt ctgctgggcc tgtctttttg gctgctgaaa tccggtcgtt cactgtacgc 2040

agctggtgca ggtgcagcat caggttcgat tgcaggtagt ctggcagctc tgtgcgttct 2100

ggcagtcttc tggtataaac gtgaagaaac caaaaaggat ggcggtcata tcgaaacggc 2160

ggttattatc aaaaagctgc tgctgtactc cgtgaccatt tgtatcagct ctgttctgat 2220

gctgctgctg cagctggttg atgcgctgaa cctgtattcg ctgctgagcg acggcaccga 2280

atcacatgcg gccaaacaac tgaagggcat ttacgaccgt ggtcagccgc tgctgcaact 2340

gggtacggtg tttgcggttt ccattgcagc ttcactggtc ccgagcatct ctaaagccgt 2400

gcacgaaaat aagccgttca ttatcaaaga aaaggctacc tctgcggtca aactgtgcct 2460

ggcggtgggc attggtgcta gtgcgggcct gttttgtatt ctggaaccgg ttaacatcat 2520

gctgttccag aattccgaag gtacccagac gctgcaaatc tttagtctgt ccattttctt 2580

tgcctcaatc gcactgaccg cagcagcaat cctgcaaggt gcaggtcata cggtgttccc 2640

ggcagtcagc gtgctggctg gcggtgcgct gaaatgggtc ctgaacgtgt ggctggttcc 2700

gggttggggt attaccggtg ctgcactggc tacggttctg gcatttgcag cagtcgcatg 2760

cctgaacctg cgtcgcatct ggtcgaaagg ttggctgacc aatattggcg gtgtgatcgc 2820

acgtctgtgc tggtgtagcc tgctgatggt gtttttcctg ctggtctata tgaaactgtg 2880

gcagctgttt gttccggtca gccgtgccgg cgcagtttgc gaatcactgt cggccagcgt 2940

gattggcggt ctgctgttca tctactgtat gatccgcatg aagatcttca ccgatgaaga 3000

actgagcggc ctgccgttcg gttctgcgct gagtaaactg aaaaagcgtc gcgaaaagca 3060

cggtcgctaa taaatcgata ctagcataac cccttggggc ctctaaacgc gtcgacacgc 3120

aaaaaggcca tccgtcagga tggccttctg cttaatttga tgcctggcag tttatggcgg 3180

gcgtcctgcc cgccaccctc cgggccgttg cttcgcaacg ttcaaatccg ctcccggcgg 3240

atttgtccta ctcaggagag cgttcaccga caaacaacag ataaaacgaa aggcccagtc 3300

tttcgactga gcctttcgtt ttatttgatg cctggcagtt ccctactctc gcatggggag 3360

accccacact accatcatgt atgaatatcc tccttagttc ctattccgaa gttcctattc 3420

tctagaaagt ataggaactt cggcgcgtcc tacctgtgac ggaagatcac ttcgcagaat 3480

aaataaatcc tggtgtccct gttgataccg ggaagccctg ggccaacttt tggcgaaaat 3540

gagacgttga tcggcacgta agaggttcca actttcacca taatgaaata agatcactac 3600

cgggcgtatt ttttgagttg tcgagatttt caggagctaa ggaagctaaa atggagaaaa 3660

aaatcactgg atataccacc gttgatatat cccaatggca tcgtaaagaa cattttgagg 3720

catttcagtc agttgctcaa tgtacctata accagaccgt tcagctggat attacggcct 3780

ttttaaagac cgtaaagaaa aataagcaca agttttatcc ggcctttatt cacattcttg 3840

cccgcctgat gaatgctcat ccggaattac gtatggcaat gaaagacggt gagctggtga 3900

tatgggatag tgttcaccct tgttacaccg ttttccatga gcaaactgaa acgttttcat 3960

cgctctggag tgaataccac gacgatttcc ggcagtttct acacatatat tcgcaagatg 4020

tggcgtgtta cggtgaaaac ctggcctatt tccctaaagg gtttattgag aatatgtttt 4080

tcgtctcagc caatccctgg gtgagtttca ccagttttga tttaaacgtg gccaatatgg 4140

acaacttctt cgcccccgtt ttcaccatgg gcaaatatta tacgcaaggc gacaaggtgc 4200

tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg ccgtttgtga tggcttccat gtcggcagat 4260

gcttaatgaa tacaacagta ctgcgatgag tggcagggcg gggcgtaagg cgcgccattt 4320

aaatgaagtt cctattccga agttcctatt ctctagaaag tataggaact tcgaagcagc 4380

tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta atgctgcaat ctgcatgcaa gcttggcact 4440

ggccacgcaa aaaggccatc cgtcaggatg gccttctgct taatttgatg cctggcagtt 4500

tatggcgggc gtcctgcccg ccaccctccg ggccgttgct tcgcaacgtt caaatccgct 4560

cccggcggat ttgtcctact caggagagcg ttcaccgaca aacaacagat aaaacgaaag 4620

gcccagtctt tcgactgagc ctttcgtttt atttgatgcc tggcagttcc ctactctcgc 4680

atggggagac cccacactac catcgggggg ccatcgatgc aggtggcact tttcggggaa 4740

atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca 4800

tgagacaata accctgctgc agaggcctgc atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc 4860

tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca 4920

taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct 4980

cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac 5040

gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc 5100

tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt 5160

tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg 5220

ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg 5280

agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat 5340

accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta 5400

ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct 5460

gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc 5520

ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa 5580

gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg 5640

taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag 5700

tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt 5760

gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta 5820

cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc 5880

agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca 5940

cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa 6000

cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat 6060

ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct 6120

taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt 6180

tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat 6240

ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta 6300

atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg 6360

gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt 6420

tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg 6480

cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg 6540

taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc 6600

ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca catagcagaa 6660

ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac 6720

cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt 6780

ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg 6840

gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa 6900

gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata 6960

aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca 7020

ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt cgtc 7074

<210> 26

<211> 6699

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-yabM

<400> 26

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgaaggctct 1500

gtggtcgcgt cgccgtcgta tccacccggt ctatctggct tttatggcag tttcgtttat 1560

ggttggcatc gcaggtgcgc tgcagtcacc gaccctgtcg ctgtttctga gccgtgaagt 1620

gggtgttcgc ccgttttggg tgggcctgtt ctatacggtt aacgcagtcg ctggtattat 1680

cgtttccctg ctgctggcca aacgttcaga taatcagggc gaccgtcgca tgctgattct 1740

gttctgctgt gttatggcga tcgccaacgc agtcctgttt gccttcaatc gccattatct 1800

gaccctggtc attgcaggtg tgctgctgag ctctatcgct agcgtggcga tgccgcagat 1860

ttttgctctg gcgcgtgaat acgcagatag ttccgcccgc gaagcagtca tgttctcatc 1920

ggtgatgcgt gcccaactgt cgctggcatg ggttatcggt ccgccgctga gctttgccat 1980

tgcactgaac tacggcttta ccgcgatgtt cctggtggcg gccctgctgt ttttcgtctg 2040

cgtggctctg atttggttca ccctgccgag cgttccgcgt gcagaaaaca cggcagctga 2100

accgctgagt gatatctccg gttggaaaca ccgtgacgtg cgcatgctgt ttattgcctc 2160

tgttttcatg tggacctgta atacgatgta tgttatcgat atgccgctgt acattagtat 2220

cgtcctgggt ctgccggaca agctggcagg tctgctgatg ggtaccgcag caggcctgga 2280

aattccggtc atgctgctgg ctggtcatta tgtgaaacgt tttggcaagc gcccgatgat 2340

gctgctggcg gttggctgcg gtgtcctgtt ttacctgggt ctggtgctgt tccacggccg 2400

tacggaactg atgctgctgc agctgctgaa cgctctgttt atcggcatta tcgcgggcat 2460

tggtatgatc tggttccaag atctgatgcc gggtcgtccg ggttctgcaa ccacgctgtt 2520

taccaatagc atttctacgg gtgtgatcct ggcaggtgtg ctgcagggcg ttatggccga 2580

aacctttggc catcacgcag tctattggct ggcttccctg ctggcgctga tttctttcgc 2640

tctgagttgg caagttcgtg aagcgcgcac ggtgaagagt gttccgctgg cctaataaat 2700

cgatactagc ataacccctt ggggcctcta aacgcgtcga cacgcaaaaa ggccatccgt 2760

caggatggcc ttctgcttaa tttgatgcct ggcagtttat ggcgggcgtc ctgcccgcca 2820

ccctccgggc cgttgcttcg caacgttcaa atccgctccc ggcggatttg tcctactcag 2880

gagagcgttc accgacaaac aacagataaa acgaaaggcc cagtctttcg actgagcctt 2940

tcgttttatt tgatgcctgg cagttcccta ctctcgcatg gggagacccc acactaccat 3000

catgtatgaa tatcctcctt agttcctatt ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg 3060

aacttcggcg cgtcctacct gtgacggaag atcacttcgc agaataaata aatcctggtg 3120

tccctgttga taccgggaag ccctgggcca acttttggcg aaaatgagac gttgatcggc 3180

acgtaagagg ttccaacttt caccataatg aaataagatc actaccgggc gtattttttg 3240

agttgtcgag attttcagga gctaaggaag ctaaaatgga gaaaaaaatc actggatata 3300

ccaccgttga tatatcccaa tggcatcgta aagaacattt tgaggcattt cagtcagttg 3360

ctcaatgtac ctataaccag accgttcagc tggatattac ggccttttta aagaccgtaa 3420

agaaaaataa gcacaagttt tatccggcct ttattcacat tcttgcccgc ctgatgaatg 3480

ctcatccgga attacgtatg gcaatgaaag acggtgagct ggtgatatgg gatagtgttc 3540

acccttgtta caccgttttc catgagcaaa ctgaaacgtt ttcatcgctc tggagtgaat 3600

accacgacga tttccggcag tttctacaca tatattcgca agatgtggcg tgttacggtg 3660

aaaacctggc ctatttccct aaagggttta ttgagaatat gtttttcgtc tcagccaatc 3720

cctgggtgag tttcaccagt tttgatttaa acgtggccaa tatggacaac ttcttcgccc 3780

ccgttttcac catgggcaaa tattatacgc aaggcgacaa ggtgctgatg ccgctggcga 3840

ttcaggttca tcatgccgtt tgtgatggct tccatgtcgg cagatgctta atgaatacaa 3900

cagtactgcg atgagtggca gggcggggcg taaggcgcgc catttaaatg aagttcctat 3960

tccgaagttc ctattctcta gaaagtatag gaacttcgaa gcagctccag cctacacaat 4020

cgctcaagac gtgtaatgct gcaatctgca tgcaagcttg gcactggcca cgcaaaaagg 4080

ccatccgtca ggatggcctt ctgcttaatt tgatgcctgg cagtttatgg cgggcgtcct 4140

gcccgccacc ctccgggccg ttgcttcgca acgttcaaat ccgctcccgg cggatttgtc 4200

ctactcagga gagcgttcac cgacaaacaa cagataaaac gaaaggccca gtctttcgac 4260

tgagcctttc gttttatttg atgcctggca gttccctact ctcgcatggg gagaccccac 4320

actaccatcg gggggccatc gatgcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc 4380

ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct 4440

gctgcagagg cctgcatgca agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa 4500

attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct 4560

ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc 4620

agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg 4680

gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc 4740

ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag 4800

gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa 4860

aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc 4920

gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc 4980

ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg 5040

cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt 5100

cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc 5160

gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc 5220

cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag 5280

agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg 5340

ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa 5400

ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag 5460

gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact 5520

cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa 5580

attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt 5640

accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag 5700

ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca 5760

gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc 5820

agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt 5880

ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg 5940

ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca 6000

gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg 6060

ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca 6120

tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg 6180

tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct 6240

cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca 6300

tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca 6360

gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg 6420

tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac 6480

ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt 6540

attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc 6600

cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat 6660

taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtc 6699

<210> 27

<211> 6684

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-ydeA

<400> 27

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgacaacaaa 1500

cactgtttcc cgcaaagtgg cgtggctacg ggtcgttacg ctggcagtcg ccgccttcat 1560

cttcaacacc accgaatttg tccctgttgg cctgctctct gacattgcgc aaagttttca 1620

catgcaaacc gctcaggtcg gcatcatgtt gaccatttac gcatgggtag tagcgctaat 1680

gtcattgcct tttatgttaa tgaccagtca ggttgaacgg cgcaaattac tgatctgcct 1740

gtttgtggtg tttattgcca gccacgtact gtcgtttttg tcgtggagct ttaccgttct 1800

ggtgatcagt cgcattggtg tggcttttgc acatgcgatt ttctggtcga ttacggcgtc 1860

tctggcgatc cgtatggctc cggccgggaa gcgagcacag gcattgagtt taattgccac 1920

cggtacagca ctggcgatgg tcttaggttt acctctcggg cgcattgtgg gccagtattt 1980

cggttggcga atgaccttct tcgcgattgg tattggggcg cttatcaccc ttttgtgcct 2040

gattaagtta cttcccttac tgcccagtga gcattccggt tcactgaaaa gcctcccgct 2100

attgttccgc cgcccggcat tgatgagcat ttatttgtta actgtggtgg ttgtcaccgc 2160

ccattacacg gcatacagct atatcgagcc ttttgtacaa aacattgcgg gattcagcgc 2220

caactttgcc acggcattac tgttattact cggtggtgcg ggcattattg gcagcgtgat 2280

tttcggtaaa ctgggtaatc agtatgcgtc tgcgttggtg agtacggcga ttgcgctgtt 2340

gctggtgtgc ctggcattgc tgttacctgc ggcgaacagt gaaatacacc tcggggtgct 2400

gagtattttc tgggggatcg cgatgatgat catcgggctt ggtatgcagg ttaaagtgct 2460

ggcgctggca ccagatgcta ccgacgtcgc gatggcgcta ttctccggca tatttaatat 2520

tggaatcggg gcgggtgcgt tggtaggtaa tcaggtgagt ttgcactggt caatgtcgat 2580

gattggttat gtgggcgcgg tgcctgcttt tgccgcgtta atttggtcaa tcattatatt 2640

tcgccgctgg ccagtgacac tcgaagaaca gacgcaatag taaatcgata ctagcataac 2700

cccttggggc ctctaaacgc gtcgacacgc aaaaaggcca tccgtcagga tggccttctg 2760

cttaatttga tgcctggcag tttatggcgg gcgtcctgcc cgccaccctc cgggccgttg 2820

cttcgcaacg ttcaaatccg ctcccggcgg atttgtccta ctcaggagag cgttcaccga 2880

caaacaacag ataaaacgaa aggcccagtc tttcgactga gcctttcgtt ttatttgatg 2940

cctggcagtt ccctactctc gcatggggag accccacact accatcatgt atgaatatcc 3000

tccttagttc ctattccgaa gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cggcgcgtcc 3060

tacctgtgac ggaagatcac ttcgcagaat aaataaatcc tggtgtccct gttgataccg 3120

ggaagccctg ggccaacttt tggcgaaaat gagacgttga tcggcacgta agaggttcca 3180

actttcacca taatgaaata agatcactac cgggcgtatt ttttgagttg tcgagatttt 3240

caggagctaa ggaagctaaa atggagaaaa aaatcactgg atataccacc gttgatatat 3300

cccaatggca tcgtaaagaa cattttgagg catttcagtc agttgctcaa tgtacctata 3360

accagaccgt tcagctggat attacggcct ttttaaagac cgtaaagaaa aataagcaca 3420

agttttatcc ggcctttatt cacattcttg cccgcctgat gaatgctcat ccggaattac 3480

gtatggcaat gaaagacggt gagctggtga tatgggatag tgttcaccct tgttacaccg 3540

ttttccatga gcaaactgaa acgttttcat cgctctggag tgaataccac gacgatttcc 3600

ggcagtttct acacatatat tcgcaagatg tggcgtgtta cggtgaaaac ctggcctatt 3660

tccctaaagg gtttattgag aatatgtttt tcgtctcagc caatccctgg gtgagtttca 3720

ccagttttga tttaaacgtg gccaatatgg acaacttctt cgcccccgtt ttcaccatgg 3780

gcaaatatta tacgcaaggc gacaaggtgc tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg 3840

ccgtttgtga tggcttccat gtcggcagat gcttaatgaa tacaacagta ctgcgatgag 3900

tggcagggcg gggcgtaagg cgcgccattt aaatgaagtt cctattccga agttcctatt 3960

ctctagaaag tataggaact tcgaagcagc tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta 4020

atgctgcaat ctgcatgcaa gcttggcact ggccacgcaa aaaggccatc cgtcaggatg 4080

gccttctgct taatttgatg cctggcagtt tatggcgggc gtcctgcccg ccaccctccg 4140

ggccgttgct tcgcaacgtt caaatccgct cccggcggat ttgtcctact caggagagcg 4200

ttcaccgaca aacaacagat aaaacgaaag gcccagtctt tcgactgagc ctttcgtttt 4260

atttgatgcc tggcagttcc ctactctcgc atggggagac cccacactac catcgggggg 4320

ccatcgatgc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 4380

tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgctgc agaggcctgc 4440

atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca 4500

caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag 4560

tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt 4620

cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc 4680

gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 4740

tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 4800

agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 4860

cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 4920

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 4980

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 5040

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 5100

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 5160

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 5220

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 5280

ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 5340

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 5400

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc 5460

ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt 5520

tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt 5580

ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca 5640

gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg 5700

tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac 5760

cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg 5820

ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc 5880

gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta 5940

caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac 6000

gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc 6060

ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac 6120

tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact 6180

caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa 6240

tacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt 6300

cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca 6360

ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa 6420

aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac 6480

tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg 6540

gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc 6600

gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata 6660

ggcgtatcac gaggcccttt cgtc 6684

<210> 28

<211> 6738

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-propP2

<400> 28

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgaatgaatc 1500

cgccgtgaaa atcaaccgca cctttatctc ccactatgct ctgctgctga aactgatgac 1560

catgttcgtc caacaacaga acagtacccc gtccaatatt gtggcgttta acttcctgct 1620

gatcgccttt ctgacgggta ttgcgagcgc cttccagacc ccgacgctgt cactgtatct 1680

gtcgcaagaa atcaatgtta gtccgttttt cgttggtctg ttttactccg ttaacgcgat 1740

tatcggcatt atcctgagcc agattctggc caaatattct gataagcaag atgaccgtcg 1800

caaagtcatg attgtgtgct gtctgatcgc agtgctgggt tgcctgatct ttgcttacag 1860

ccgtaattat tacgttctga ttatcattgg caccacgctg ctgggcctgg gtagctctgc 1920

aaacccgcag tcatttgcac tggctcgtga atatgcagaa agttcccatc gcgaagctgt 1980

tatgttcacc acgattatgc gcacccagat cagtctggca tggattgtcg gtccgccgct 2040

gtcctttttc attgctctga attggggctt tgattatatg tacctggtcg caggttcagc 2100

tttcctgctg tgcgccggcg tgtcgaaact gctgccgaag atcccgcgtc agtctgcagt 2160

caaaaatcaa gaaattctgg acaacacccc gccgcgtcgc agtgtgattt acctgtttat 2220

cgccaatctg ctgctgtgga cgtgtaattc catgtacctg atcaacatgc cgctgttcgt 2280

gattaacgaa ctgcacctgg gtaaagaact ggcaggtacc ctgatgggta cggcagcagg 2340

cctggaaatt ccggtgatga tctttgccgg ctatctgacc aaatacttct caaaaaagcg 2400

cctgatgatg attgcactgg tttcgggtct ggctttttat tcatcgctgc tgttcagcga 2460

tcagacctgg caactgatcg gcctgcagat gctgaacgcg atctttattg gtatcaccgc 2520

cacgattggc atggtttatt tccaagacct gatgccgacc aaaatgggta cggcgaccac 2580

gctgtttagt aatgcagcta agagctcttg gatcattggc ggtccgatcg cgggcatcat 2640

tgccgaaatc tggcattaca actctgtgtt ttatgtggcg gttgccctga ttttcatcag 2700

cgtcggctgt atgtggaagg ttaagtctgt ctaataaatc gatactagca taaccccttg 2760

gggcctctaa acgcgtcgac acgcaaaaag gccatccgtc aggatggcct tctgcttaat 2820

ttgatgcctg gcagtttatg gcgggcgtcc tgcccgccac cctccgggcc gttgcttcgc 2880

aacgttcaaa tccgctcccg gcggatttgt cctactcagg agagcgttca ccgacaaaca 2940

acagataaaa cgaaaggccc agtctttcga ctgagccttt cgttttattt gatgcctggc 3000

agttccctac tctcgcatgg ggagacccca cactaccatc atgtatgaat atcctcctta 3060

gttcctattc cgaagttcct attctctaga aagtatagga acttcggcgc gtcctacctg 3120

tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc 3180

cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc 3240

accataatga aataagatca ctaccgggcg tattttttga gttgtcgaga ttttcaggag 3300

ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat 3360

ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga 3420

ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt 3480

atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttacgtatgg 3540

caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg atagtgttca cccttgttac accgttttcc 3600

atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt 3660

ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc tatttcccta 3720

aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt 3780

ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat 3840

attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt 3900

gtgatggctt ccatgtcggc agatgcttaa tgaatacaac agtactgcga tgagtggcag 3960

ggcggggcgt aaggcgcgcc atttaaatga agttcctatt ccgaagttcc tattctctag 4020

aaagtatagg aacttcgaag cagctccagc ctacacaatc gctcaagacg tgtaatgctg 4080

caatctgcat gcaagcttgg cactggccac gcaaaaaggc catccgtcag gatggccttc 4140

tgcttaattt gatgcctggc agtttatggc gggcgtcctg cccgccaccc tccgggccgt 4200

tgcttcgcaa cgttcaaatc cgctcccggc ggatttgtcc tactcaggag agcgttcacc 4260

gacaaacaac agataaaacg aaaggcccag tctttcgact gagcctttcg ttttatttga 4320

tgcctggcag ttccctactc tcgcatgggg agaccccaca ctaccatcgg ggggccatcg 4380

atgcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa 4440

tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ctgcagaggc ctgcatgcaa 4500

gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc 4560

cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct 4620

aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc 4680

agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt 4740

ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag 4800

ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca 4860

tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt 4920

tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc 4980

gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct 5040

ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg 5100

tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca 5160

agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact 5220

atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta 5280

acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta 5340

actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct 5400

tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt 5460

tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga 5520

tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca 5580

tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat 5640

caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg 5700

cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt 5760

agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag 5820

acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc 5880

gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag 5940

ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca 6000

tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa 6060

ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga 6120

tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata 6180

attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca 6240

agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg 6300

ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg 6360

ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg 6420

cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag 6480

gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac 6540

tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca 6600

tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag 6660

tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt aacctataaa aataggcgta 6720

tcacgaggcc ctttcgtc 6738

<210> 29

<211> 6513

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-Pc-setA

<400> 29

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgttctacac 1500

gggctcggca gttattggta tcgtcgtctc gcagatgctg gctacgcgct cggatcgtca 1560

gggtgaccgc aagtcgctga tcttcgtttg ctgtctgctg ggtgcgctgg cctgcatgct 1620

gtttgcgtgg aaccgcaatt atttcatcct gctgtttatt ggtgtgctgc tgagctcttt 1680

cggcagtacc gccaacccgc agctgtttgc actggctcgc gaacatgcag ataaaacggg 1740

tcgtgaagcg gccatgttca gttccatcct gcgtgcccaa atttccctgg catgggtggt 1800

tggtccgccg attgcgtttg ccctggcact gggcttcggt tttaccacga tgtacctgac 1860

cgcagctgtc gtgttcatcc tgtgtggtat tctggtgaag ctgtttctgc cgagcatgcc 1920

gaaagccgtt gaaaagacca cgagcaccct ggaatctccg cgtcgcaatc gtcgcgacac 1980

gctgctgctg tttgttgcgt gcaccctgat gtggacgtgt aacggcatct atctgattaa 2040

tatgccgctg tacctggttc atgaactgca cctgccggaa aaactggcag gtatcatgat 2100

gggtgtcgca gcaggtctgg aaatcccggt tatgctgatt gccggttatg tcgcaaaacg 2160

tttcggcaag cgctttctga tgcgtctggc tgtcgcgagc ggtctgctgt ttttcggcgg 2220

tctgctggtg ctggatggcg aaatcgccct gctggcactg caggctctga acgcgatttt 2280

catcggcatt ctggctggca ttggtatgct gtactttcag gacctgatgc cgggccaagc 2340

aggtgcagct accacgctgt ttaccaacac cacgcgcgtg ggttggatta tctcaggttc 2400

gctggctggc atcgtggcgg aaatttggaa ttatcacgct gtgtttttct ttgcgctgct 2460

gatgatcgtc ggctctattt actgcatgtg gcgtattaaa gatgcgtaat aaatcgatac 2520

tagcataacc ccttggggcc tctaaacgcg tcgacacgca aaaaggccat ccgtcaggat 2580

ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc gccaccctcc 2640

gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac tcaggagagc 2700

gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag cctttcgttt 2760

tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta ccatcatgta 2820

tgaatatcct ccttagttcc tattccgaag ttcctattct ctagaaagta taggaacttc 2880

ggcgcgtcct acctgtgacg gaagatcact tcgcagaata aataaatcct ggtgtccctg 2940

ttgataccgg gaagccctgg gccaactttt ggcgaaaatg agacgttgat cggcacgtaa 3000

gaggttccaa ctttcaccat aatgaaataa gatcactacc gggcgtattt tttgagttgt 3060

cgagattttc aggagctaag gaagctaaaa tggagaaaaa aatcactgga tataccaccg 3120

ttgatatatc ccaatggcat cgtaaagaac attttgaggc atttcagtca gttgctcaat 3180

gtacctataa ccagaccgtt cagctggata ttacggcctt tttaaagacc gtaaagaaaa 3240

ataagcacaa gttttatccg gcctttattc acattcttgc ccgcctgatg aatgctcatc 3300

cggaattacg tatggcaatg aaagacggtg agctggtgat atgggatagt gttcaccctt 3360

gttacaccgt tttccatgag caaactgaaa cgttttcatc gctctggagt gaataccacg 3420

acgatttccg gcagtttcta cacatatatt cgcaagatgt ggcgtgttac ggtgaaaacc 3480

tggcctattt ccctaaaggg tttattgaga atatgttttt cgtctcagcc aatccctggg 3540

tgagtttcac cagttttgat ttaaacgtgg ccaatatgga caacttcttc gcccccgttt 3600

tcaccatggg caaatattat acgcaaggcg acaaggtgct gatgccgctg gcgattcagg 3660

ttcatcatgc cgtttgtgat ggcttccatg tcggcagatg cttaatgaat acaacagtac 3720

tgcgatgagt ggcagggcgg ggcgtaaggc gcgccattta aatgaagttc ctattccgaa 3780

gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cgaagcagct ccagcctaca caatcgctca 3840

agacgtgtaa tgctgcaatc tgcatgcaag cttggcactg gccacgcaaa aaggccatcc 3900

gtcaggatgg ccttctgctt aatttgatgc ctggcagttt atggcgggcg tcctgcccgc 3960

caccctccgg gccgttgctt cgcaacgttc aaatccgctc ccggcggatt tgtcctactc 4020

aggagagcgt tcaccgacaa acaacagata aaacgaaagg cccagtcttt cgactgagcc 4080

tttcgtttta tttgatgcct ggcagttccc tactctcgca tggggagacc ccacactacc 4140

atcggggggc catcgatgca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 4200

gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgctgca 4260

gaggcctgca tgcaagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt 4320

atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg 4380

cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg 4440

gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc 4500

gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc 4560

ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata 4620

acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg 4680

cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct 4740

caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa 4800

gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc 4860

tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt 4920

aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg 4980

ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg 5040

cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct 5100

tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc 5160

tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg 5220

ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc 5280

aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt 5340

aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa 5400

aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat 5460

gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct 5520

gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg 5580

caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag 5640

ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta 5700

attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg 5760

ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg 5820

gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct 5880

ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta 5940

tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg 6000

gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc 6060

cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg 6120

gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga 6180

tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg 6240

ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat 6300

gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc 6360

tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca 6420

catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct 6480

ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtc 6513

<210> 30

<211> 6810

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-fucP

<400> 30

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgggaaacac 1500

atcaatacaa acgcagagtt accgtgcggt agataaagat gcagggcaaa gcagaagtta 1560

cattattcca ttcgcgctgc tgtgctcact gttttttctt tgggcggtag ccaataacct 1620

taacgacatt ttattacctc aattccagca ggcttttacg ctgacaaatt tccaggctgg 1680

cctgatccaa tcggcctttt actttggtta tttcattatc ccaatccctg ctgggatatt 1740

gatgaaaaaa ctcagttata aagcagggat tattaccggg ttatttttat atgccttggg 1800

tgctgcatta ttctggcccg ccgcagaaat aatgaactac accttgtttt tagttggcct 1860

atttattatt gcagccggat taggttgtct ggaaactgcc gcaaaccctt ttgttacggt 1920

attagggccg gaaagtagtg gtcacttccg cttaaatctt gcgcaaacat ttaactcgtt 1980

tggcgcaatt atcgcggttg tctttgggca aagtcttatt ttgtctaacg tgccacatca 2040

atcgcaagac gttctcgata aaatgtctcc agagcaattg agtgcgtata aacacagcct 2100

ggtattatcg gtacagacac cttatatgat catcgtggct atcgtgttac tggtcgccct 2160

gctgatcatg ctgacgaaat tcccggcatt gcagagtgat aatcacagtg acgccaaaca 2220

aggatcgttc tccgcatcgc tttctcgcct ggcgcgtatt cgccactggc gctgggcggt 2280

attagcgcaa ttctgctatg tcggcgcaca aacggcctgc tggagctatt tgattcgcta 2340

cgctgtagaa gaaattccag gtatgactgc aggctttgcc gctaactatt taaccggaac 2400

catggtgtgc ttctttattg gtcgtttcac cggtacctgg ctcatcagtc gcttcgcacc 2460

acacaaagtc ctggccgcct acgcattaat cgctatggca ctgtgcctga tctcagcctt 2520

cgctggcggt catgtgggct taatagccct gactttatgc agcgccttta tgtcgattca 2580

gtacccaaca atcttctcgc tgggcattaa gaatctcggc caggacacca aatatggttc 2640

gtccttcatc gttatgacca ttattggcgg cggtattgtc actccggtca tgggttttgt 2700

cagtgacgcg gcgggcaaca tccccactgc tgaactgatc cccgcactct gcttcgcggt 2760

catctttatc tttgcccgtt tccgttctca aacggcaact aactgataaa tcgatactag 2820

cataacccct tggggcctct aaacgcgtcg acacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc 2880

cttctgctta atttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg 2940

ccgttgcttc gcaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt 3000

caccgacaaa caacagataa aacgaaaggc ccagtctttc gactgagcct ttcgttttat 3060

ttgatgcctg gcagttccct actctcgcat ggggagaccc cacactacca tcatgtatga 3120

atatcctcct tagttcctat tccgaagttc ctattctcta gaaagtatag gaacttcggc 3180

gcgtcctacc tgtgacggaa gatcacttcg cagaataaat aaatcctggt gtccctgttg 3240

ataccgggaa gccctgggcc aacttttggc gaaaatgaga cgttgatcgg cacgtaagag 3300

gttccaactt tcaccataat gaaataagat cactaccggg cgtatttttt gagttgtcga 3360

gattttcagg agctaaggaa gctaaaatgg agaaaaaaat cactggatat accaccgttg 3420

atatatccca atggcatcgt aaagaacatt ttgaggcatt tcagtcagtt gctcaatgta 3480

cctataacca gaccgttcag ctggatatta cggccttttt aaagaccgta aagaaaaata 3540

agcacaagtt ttatccggcc tttattcaca ttcttgcccg cctgatgaat gctcatccgg 3600

aattacgtat ggcaatgaaa gacggtgagc tggtgatatg ggatagtgtt cacccttgtt 3660

acaccgtttt ccatgagcaa actgaaacgt tttcatcgct ctggagtgaa taccacgacg 3720

atttccggca gtttctacac atatattcgc aagatgtggc gtgttacggt gaaaacctgg 3780

cctatttccc taaagggttt attgagaata tgtttttcgt ctcagccaat ccctgggtga 3840

gtttcaccag ttttgattta aacgtggcca atatggacaa cttcttcgcc cccgttttca 3900

ccatgggcaa atattatacg caaggcgaca aggtgctgat gccgctggcg attcaggttc 3960

atcatgccgt ttgtgatggc ttccatgtcg gcagatgctt aatgaataca acagtactgc 4020

gatgagtggc agggcggggc gtaaggcgcg ccatttaaat gaagttccta ttccgaagtt 4080

cctattctct agaaagtata ggaacttcga agcagctcca gcctacacaa tcgctcaaga 4140

cgtgtaatgc tgcaatctgc atgcaagctt ggcactggcc acgcaaaaag gccatccgtc 4200

aggatggcct tctgcttaat ttgatgcctg gcagtttatg gcgggcgtcc tgcccgccac 4260

cctccgggcc gttgcttcgc aacgttcaaa tccgctcccg gcggatttgt cctactcagg 4320

agagcgttca ccgacaaaca acagataaaa cgaaaggccc agtctttcga ctgagccttt 4380

cgttttattt gatgcctggc agttccctac tctcgcatgg ggagacccca cactaccatc 4440

ggggggccat cgatgcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt 4500

tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgctgcagag 4560

gcctgcatgc aagcttggcg taatcatggt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc 4620

cgctcacaat tccacacaac atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct 4680

aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa 4740

acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta 4800

ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc 4860

gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg 4920

caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt 4980

tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa 5040

gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct 5100

ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc 5160

cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg 5220

tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct 5280

tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag 5340

cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga 5400

agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga 5460

agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg 5520

gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag 5580

aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag 5640

ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat 5700

gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct 5760

taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac 5820

tccccgtcgt gtagataact acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa 5880

tgataccgcg agacccacgc tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg 5940

gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc ctccatccag tctattaatt 6000

gttgccggga agctagagta agtagttcgc cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca 6060

ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt 6120

cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct 6180

tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg 6240

cagcactgca taattctctt actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg 6300

agtactcaac caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg 6360

cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa 6420

aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt 6480

aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt 6540

gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt 6600

gaatactcat actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca 6660

tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat 6720

ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca ttaacctata 6780

aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc 6810

<210> 31

<211> 6933

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-mdeA

<400> 31

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgtccaaaaa 1500

acaaaaactg acgatgatta ttacgatgct gatgggtggc ttcttcggtc tgctgaatga 1560

aacgctgctg gtgacggcac tgccgagcat catgaaagac ttcgaaattt cttatacgca 1620

ggttcaatgg ctgaccacgg catttctgct gaccaacggc atcgttattc cgctgtcagc 1680

tctggtcatt cagcgttaca ccacgcgcca agttttcctg gtcggtatct ctattttctt 1740

tctgggcacg ctgctgtcag gtctgtcgcc gcattttgcg accctgctgg ttgcgcgtat 1800

tatccaggca ctgggcgctg gtatcatgat gccgctgatg atgaccacga ttctggatgt 1860

cttccaaccg cacgaacgcg gcaaatatat gggcattttt ggtctggtga tcggtctggc 1920

accggcaatc ggtccgaccc tgagtggtta tctggttgaa tacttcaact ggcgttccct 1980

gtttcatgtg gttgcgccga tcgcggccgt tacctttctg attggcttca aaacgatcaa 2040

aaatgtgggt accacgatta aagttccgat cgactttatt tcagtcatct tctcggtgct 2100

gggctttggc ggtctgctgt atggtaccag ctctatttca gaaaaaggct tcgataatcc 2160

gatcgtcctg gtgtcgatga ttggcggtgt cgtgctggtt gcactgtttg tcctgcgtca 2220

gtaccgcctg agcaccccgc tgctgaactt cgctgtgttc aaaaacaaac aattcaccgt 2280

tggcattatc attatgggtg tgacgatggt tagcatgatc ggctctgaaa ccattctgcc 2340

gatctttgtt cagaacctgc tgcatcgtag tgcactggac tccggtctga cgctgctgcc 2400

gggtgcaatt gtgatggcct tcatgagcat gacctctggc gccctgtatg aaaaatttgg 2460

tccgcgcaat ctggcactgg tgggtatggc tattgttgtc atcaccacgg catattttgt 2520

ggttatggat gaacagacca gtacgattat gctggcaacc gtctacgcta ttcgcatggt 2580

gggcatcgcg ctgggtctga ttccggttat gacccatacg atgaaccagc tgaaaccgga 2640

aatgaatgcg cacggcagtt ccatgaccaa cacggtgcag caaattgccg gcagcatcgg 2700

taccgcagct ctgatcacga ttctgagtca cgcctccaaa aacttttcac cgaccatgtc 2760

ggattacaac ggtatgaaca aaatcgacat gatgaaccag atcaaagtcg ataccatgct 2820

gcatggctac cacgcgggtt ttctgttcgc cctgctgatt accgtggtgt cgttcttctg 2880

ttcatttatg ctgcaaggca aaaagaaaga agtggattcc cgccagtaat aaatcgatac 2940

tagcataacc ccttggggcc tctaaacgcg tcgacacgca aaaaggccat ccgtcaggat 3000

ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc gccaccctcc 3060

gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac tcaggagagc 3120

gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag cctttcgttt 3180

tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta ccatcatgta 3240

tgaatatcct ccttagttcc tattccgaag ttcctattct ctagaaagta taggaacttc 3300

ggcgcgtcct acctgtgacg gaagatcact tcgcagaata aataaatcct ggtgtccctg 3360

ttgataccgg gaagccctgg gccaactttt ggcgaaaatg agacgttgat cggcacgtaa 3420

gaggttccaa ctttcaccat aatgaaataa gatcactacc gggcgtattt tttgagttgt 3480

cgagattttc aggagctaag gaagctaaaa tggagaaaaa aatcactgga tataccaccg 3540

ttgatatatc ccaatggcat cgtaaagaac attttgaggc atttcagtca gttgctcaat 3600

gtacctataa ccagaccgtt cagctggata ttacggcctt tttaaagacc gtaaagaaaa 3660

ataagcacaa gttttatccg gcctttattc acattcttgc ccgcctgatg aatgctcatc 3720

cggaattacg tatggcaatg aaagacggtg agctggtgat atgggatagt gttcaccctt 3780

gttacaccgt tttccatgag caaactgaaa cgttttcatc gctctggagt gaataccacg 3840

acgatttccg gcagtttcta cacatatatt cgcaagatgt ggcgtgttac ggtgaaaacc 3900

tggcctattt ccctaaaggg tttattgaga atatgttttt cgtctcagcc aatccctggg 3960

tgagtttcac cagttttgat ttaaacgtgg ccaatatgga caacttcttc gcccccgttt 4020

tcaccatggg caaatattat acgcaaggcg acaaggtgct gatgccgctg gcgattcagg 4080

ttcatcatgc cgtttgtgat ggcttccatg tcggcagatg cttaatgaat acaacagtac 4140

tgcgatgagt ggcagggcgg ggcgtaaggc gcgccattta aatgaagttc ctattccgaa 4200

gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cgaagcagct ccagcctaca caatcgctca 4260

agacgtgtaa tgctgcaatc tgcatgcaag cttggcactg gccacgcaaa aaggccatcc 4320

gtcaggatgg ccttctgctt aatttgatgc ctggcagttt atggcgggcg tcctgcccgc 4380

caccctccgg gccgttgctt cgcaacgttc aaatccgctc ccggcggatt tgtcctactc 4440

aggagagcgt tcaccgacaa acaacagata aaacgaaagg cccagtcttt cgactgagcc 4500

tttcgtttta tttgatgcct ggcagttccc tactctcgca tggggagacc ccacactacc 4560

atcggggggc catcgatgca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 4620

gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgctgca 4680

gaggcctgca tgcaagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt 4740

atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg 4800

cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg 4860

gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc 4920

gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc 4980

ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata 5040

acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg 5100

cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct 5160

caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa 5220

gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc 5280

tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt 5340

aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg 5400

ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg 5460

cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct 5520

tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc 5580

tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg 5640

ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc 5700

aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt 5760

aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa 5820

aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat 5880

gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct 5940

gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg 6000

caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag 6060

ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta 6120

attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg 6180

ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg 6240

gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct 6300

ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta 6360

tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg 6420

gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc 6480

cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg 6540

gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga 6600

tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg 6660

ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat 6720

gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc 6780

tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca 6840

catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct 6900

ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtc 6933

<210> 32

<211> 7248

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-lmrA

<400> 32

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tggcgaaccg 1500

tatcgaaggc aaagctgtgg acaaaacctc aatcaaacat ttcattaaac tgatccgtgc 1560

cgcaaaaccg cgttacctgt ttttcattat cggtattctg gcgggtatcg tgggcaccct 1620

gattcagctg caagtcccga aaatggtgca gccgctggtt aactcttttg gtcatggcgt 1680

taatggcggt aaagttgccc tggtcattgc actgtatatc ggtagtgcag cagtctccgc 1740

aattgcagct atcgtgctgg gtatctttgg cgaaagcgtg gttaaaaacc tgcgtacgcg 1800

cgtttgggat aaaatgattc acctgccggt gaaatacttc gacgaagtta aaaccggtga 1860

aatgagctct cgtctggcga atgataccac gcaagtgaaa aacctgattg caaatagcat 1920

cccgcaggct tttacgtcta ttctgctgct ggtcggcagt atcgtgttca tgctgcagat 1980

gcaatggcgc ctgaccctgg ctatgattat cgcggttccg gtcgtgatgc tgattatgtt 2040

tccgatcatg acgttcggtc agaaaattgg ccgtacccgc caagatagcc tggcgaactt 2100

tcagggtatt gcctcagaat cgctgagcga aatccgtctg gtgaaaagtt ccaatgccga 2160

aaaacaggca tccaaaaaag ctgaaaacga cgttaatgca ctgtataaaa ttggtgtcaa 2220

agaagcgatc tttgatggcc tgatgagtcc ggtcatgatg ctgtccatga tgctgatgat 2280

cttcggtctg ctggcctatg gcatttacct gatcagcacg ggtgtgatgt ctctgggtac 2340

cctgctgggc atgatgatgt acctgatgaa cctgattggc gcggtgccga ccgttgccac 2400

gtttttcacc gaactggcga aagcctctgg tagtacgggc cgtctgaccg aactgctgga 2460

tgaagaacag gaagttctgc atcagggtga atcgctggat ctggaaggca aaaccctgag 2520

cgcacgtcac gtcgactttg cttatgatga ctctgaacaa attctgcgcg atatctcctt 2580

tgaagcgcag ccgaattcaa ttatcgcatt cgctggcccg agtggcggtg gcaaatcaac 2640

catcttttcg ctgctggaac gcttctacca accgacggcc ggtgaaatta ccatcgatgg 2700

ccagccgatt gacaacatct cactggaaaa ttggcgttcg cagattggtt tcgttagcca 2760

agactctgct attatggcgg gcacgatccg cgaaaacctg acctatggtc tggaaggcga 2820

ttacacggat gaagacctgt ggcaggtcct ggacctggcg tttgcccgtt cattcgtgga 2880

aaacatgccg gatcagctga ataccgaagt tggtgaacgc ggcgtcaaaa tttcgggtgg 2940

ccagcgtcaa cgcctggcaa tcgctcgtgc gtttctgcgc aatccgaaaa ttctgatgct 3000

ggatgaagcc accgcatctc tggactccga atcagaatcg atggtgcaga aagcgctgga 3060

tagtctgatg aaaggtcgta ccacgctggt gattgcccat cgcctgtcca cgatcgttga 3120

tgcagacaaa atctacttca tcgaaaaagg ccagatcacc ggtagcggca aacacaacga 3180

actggtcgca acccacccgc tgtacgcaaa atatgtctcg gaacaactga cggtcggcca 3240

ataataaatc gatactagca taaccccttg gggcctctaa acgcgtcgac acgcaaaaag 3300

gccatccgtc aggatggcct tctgcttaat ttgatgcctg gcagtttatg gcgggcgtcc 3360

tgcccgccac cctccgggcc gttgcttcgc aacgttcaaa tccgctcccg gcggatttgt 3420

cctactcagg agagcgttca ccgacaaaca acagataaaa cgaaaggccc agtctttcga 3480

ctgagccttt cgttttattt gatgcctggc agttccctac tctcgcatgg ggagacccca 3540

cactaccatc atgtatgaat atcctcctta gttcctattc cgaagttcct attctctaga 3600

aagtatagga acttcggcgc gtcctacctg tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa 3660

atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg 3720

ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc accataatga aataagatca ctaccgggcg 3780

tattttttga gttgtcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca 3840

ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc 3900

agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa 3960

agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc 4020

tgatgaatgc tcatccggaa ttacgtatgg caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg 4080

atagtgttca cccttgttac accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct 4140

ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt 4200

gttacggtga aaacctggcc tatttcccta aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct 4260

cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact 4320

tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc 4380

cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc agatgcttaa 4440

tgaatacaac agtactgcga tgagtggcag ggcggggcgt aaggcgcgcc atttaaatga 4500

agttcctatt ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg aacttcgaag cagctccagc 4560

ctacacaatc gctcaagacg tgtaatgctg caatctgcat gcaagcttgg cactggccac 4620

gcaaaaaggc catccgtcag gatggccttc tgcttaattt gatgcctggc agtttatggc 4680

gggcgtcctg cccgccaccc tccgggccgt tgcttcgcaa cgttcaaatc cgctcccggc 4740

ggatttgtcc tactcaggag agcgttcacc gacaaacaac agataaaacg aaaggcccag 4800

tctttcgact gagcctttcg ttttatttga tgcctggcag ttccctactc tcgcatgggg 4860

agaccccaca ctaccatcgg ggggccatcg atgcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc 4920

gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac 4980

aataaccctg ctgcagaggc ctgcatgcaa gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc 5040

ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt 5100

gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc 5160

ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg 5220

ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct 5280

cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca 5340

cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga 5400

accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc 5460

acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg 5520

cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat 5580

acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt 5640

atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc 5700

agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg 5760

acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg 5820

gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg 5880

gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg 5940

gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca 6000

gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga 6060

acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga 6120

tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt 6180

ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt 6240

catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat 6300

ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag 6360

caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct 6420

ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt 6480

tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg 6540

cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca 6600

aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt 6660

tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat 6720

gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac 6780

cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa 6840

aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt 6900

tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt 6960

tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa 7020

gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt 7080

atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa 7140

taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta 7200

tcatgacatt aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtc 7248

<210> 33

<211> 6684

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-Ps-setA

<400> 33

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgaacgaaag 1500

ccagagctct catggcggtt catggctgtc ggttattgcg ctggccctgg cggcctttat 1560

cttcaatacc acggaattcg ttccggtcgc gctgctgtca gatattggcc gttcgtttga 1620

catgccgcca tcacaagtgg gtctgatgct gaccatctat gcgtgggtgg ttgccctgat 1680

gtcgctgccg atgatgctgc tgacccgcaa cgtcgaacgt cgcacgctgc tgatttttgt 1740

gttcgtcgtg ttcatcggca gtcatctggt gagttccgtg gcgtcatcgt ttagcatgct 1800

gatgatttct cgtattggta tcgcactgtc ccacgctgtg ttttggagta tcaccgcatc 1860

cctggctgtg cgtgttgcac cggctggtaa acaggcccag gcactgggtc tgctggcaac 1920

cggttcagca ctggctatgg tcctgggtat tccgctgggc cgtgttgtcg gtgaactgct 1980

ggattggcgc accacgttcc tgagcattgc catcgtggca gctctggtgg ttctgtgtct 2040

ggcacgtacc ctgccgctgc tgccgagtca gaatagtggt tccctgcgtt ccctgccgat 2100

gctgtttaaa cgtccggcgc tggttgcggc atatgttctg accgccctgg ttattacggc 2160

gcagtttacc gcctatacgt acattgaacc gttcgcacaa accatcgctc atctgtctgg 2220

caacatgacc acggcactgc tgctgctgtt tggcggtgct ggtattctgg gcacggtgct 2280

gttcagccgt tattctaatc gctacccgaa aggttttctg atcgcagcta ttagtatcat 2340

ggcaatgtgt ctgctgctgc tgctgccggc ctcccgcgat agctctctgc tggccgccct 2400

ggtcgtggtt tggggtattg cgggcatgtg tttcggcctg gcgctgcagg ccaaagttct 2460

gaacctggca agcgatgcta ccgacgtcgc gatggccctg ttttctggca tttataatgt 2520

tggtatcggc ggtggcgccc tgctgggttc actggttacg gcacacctgg gcctgtcgga 2580

cgttggtatt gtcggtggcc tgctggccct gagcggcgtc gtgctgtgct gttttgccac 2640

ctatcgcttt gcacgtccgg tgggttctgc agctctgtaa taaatcgata ctagcataac 2700

cccttggggc ctctaaacgc gtcgacacgc aaaaaggcca tccgtcagga tggccttctg 2760

cttaatttga tgcctggcag tttatggcgg gcgtcctgcc cgccaccctc cgggccgttg 2820

cttcgcaacg ttcaaatccg ctcccggcgg atttgtccta ctcaggagag cgttcaccga 2880

caaacaacag ataaaacgaa aggcccagtc tttcgactga gcctttcgtt ttatttgatg 2940

cctggcagtt ccctactctc gcatggggag accccacact accatcatgt atgaatatcc 3000

tccttagttc ctattccgaa gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cggcgcgtcc 3060

tacctgtgac ggaagatcac ttcgcagaat aaataaatcc tggtgtccct gttgataccg 3120

ggaagccctg ggccaacttt tggcgaaaat gagacgttga tcggcacgta agaggttcca 3180

actttcacca taatgaaata agatcactac cgggcgtatt ttttgagttg tcgagatttt 3240

caggagctaa ggaagctaaa atggagaaaa aaatcactgg atataccacc gttgatatat 3300

cccaatggca tcgtaaagaa cattttgagg catttcagtc agttgctcaa tgtacctata 3360

accagaccgt tcagctggat attacggcct ttttaaagac cgtaaagaaa aataagcaca 3420

agttttatcc ggcctttatt cacattcttg cccgcctgat gaatgctcat ccggaattac 3480

gtatggcaat gaaagacggt gagctggtga tatgggatag tgttcaccct tgttacaccg 3540

ttttccatga gcaaactgaa acgttttcat cgctctggag tgaataccac gacgatttcc 3600

ggcagtttct acacatatat tcgcaagatg tggcgtgtta cggtgaaaac ctggcctatt 3660

tccctaaagg gtttattgag aatatgtttt tcgtctcagc caatccctgg gtgagtttca 3720

ccagttttga tttaaacgtg gccaatatgg acaacttctt cgcccccgtt ttcaccatgg 3780

gcaaatatta tacgcaaggc gacaaggtgc tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg 3840

ccgtttgtga tggcttccat gtcggcagat gcttaatgaa tacaacagta ctgcgatgag 3900

tggcagggcg gggcgtaagg cgcgccattt aaatgaagtt cctattccga agttcctatt 3960

ctctagaaag tataggaact tcgaagcagc tccagcctac acaatcgctc aagacgtgta 4020

atgctgcaat ctgcatgcaa gcttggcact ggccacgcaa aaaggccatc cgtcaggatg 4080

gccttctgct taatttgatg cctggcagtt tatggcgggc gtcctgcccg ccaccctccg 4140

ggccgttgct tcgcaacgtt caaatccgct cccggcggat ttgtcctact caggagagcg 4200

ttcaccgaca aacaacagat aaaacgaaag gcccagtctt tcgactgagc ctttcgtttt 4260

atttgatgcc tggcagttcc ctactctcgc atggggagac cccacactac catcgggggg 4320

ccatcgatgc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 4380

tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgctgc agaggcctgc 4440

atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca 4500

caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag 4560

tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt 4620

cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc 4680

gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 4740

tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 4800

agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 4860

cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 4920

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 4980

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 5040

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 5100

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 5160

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 5220

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 5280

ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 5340

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 5400

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc 5460

ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt 5520

tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt 5580

ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca 5640

gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg 5700

tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac 5760

cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg 5820

ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc 5880

gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta 5940

caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac 6000

gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc 6060

ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac 6120

tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact 6180

caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa 6240

tacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt 6300

cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca 6360

ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa 6420

aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac 6480

tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg 6540

gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc 6600

gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata 6660

ggcgtatcac gaggcccttt cgtc 6684

<210> 34

<211> 6692

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> конструкция pINT-Bb-setA

<400> 34

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgaagatcct ttgatctttt 420

ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 480

tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaactagtg aagttaccat cacggaaaaa 540

ggttatgctg cttttaagac ccactttcac atttaagttg tttttctaat ccgcatatga 600

tcaattcaag gccgaataag aaggctggct ctgcaccttg gtgatcaaat aattcgatag 660

cttgtcgtaa taatggcggc atactatcag tagtaggtgt ttccctttct tctttagcga 720

cttgatgctc ttgatcttcc aatacgcaac ctaaagtaaa atgccccact gcgctgagtg 780

catataatgc attctctagt gaaaaacctt gttggcataa aaaggctaat tgattttcga 840

gagtttcata ctgtttttct gtaggccgtg tacctaaatg tacttttgct ccatcgcgat 900

gacttagtaa agcacatcta aaacttttag cgttattacg taaaaaatct tgccagcttt 960

ccccttctaa agggcaaaag tgagtatggt gcctatctaa catctcaatg gctaaggcgt 1020

cgagcaaagc ccgcttattt tttacatgcc aatacaatgt aggctgctct acacctagct 1080

tctgggcgag tttacgggtt gttaaacctt cgattccgac ctcattaagc agctctaatg 1140

cgctgttaat cactttactt ttatctaaac gagacatact cttccttttt caatattatt 1200

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa 1260

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgaa attggccaga 1320

tgattaattc ctaatttttg ttgacactct atcattgata gagttatttt accactccct 1380

atcagtgata gagaaaagtg aaatgaatag ttcgacaaaa atctagaaat aattttgttt 1440

aactttaaga aggagatata caagagctcg agtcgaagga gatagaacca tgaccattgc 1500

aacggtttcc cgcaaaaccg cttggctgcg tgtggttacc ctggccgttg ccgcctttat 1560

cttcaacacc acggaatttg tcccggtggg cctgctgagt gatattgcgc agtccttcgg 1620

catggaaacc gcccaagtgg gtattatgct gacgatctat gcctgggttg tggcactgat 1680

gagcctgccg tttatgctga tgacctctca ggtggaacgt cgccgtctgc tgattagcat 1740

ctttctgctg ttcatcgcaa gtcatgttct gtcctttctg gcgtggaatt tcaccgttct 1800

ggtcatttct cgcattggta tcgcgtttgc ccacgcaatt ttctggtcaa tcacggcttc 1860

gctggcgatt cgtatggctc cggcgggcaa gaaagcgcag gcactgagtc tgctggcgac 1920

cggtacggct ctggcgatgg ttctgggtct gccgatcggc cgcattgtcg gtcaatactt 1980

tggctggcgt accacgtttt tcgtgattgg cgttgtcgca gctatcaccc tgttctgcct 2040

gattaaactg ctgccgaaac tgccgagcga acatagtggt tccctgagct ctgtgccgaa 2100

actgtttcgc cgtccggcgc tggttaacat ctatgccctg attgcaatcg tggttaccgc 2160

acactacacg gcttatagtt acatcgaacc gttcgtgcag caaattgccg gcctgtccgc 2220

taactttgcg accctgctgc tgctgctgtt tggcggtgcg ggtattatcg gctctgttct 2280

gtttggtaaa tggggcaata aacatgccag cggtctggtc tctggcgcca ttgcactgat 2340

ggccgcatgt ctggtgctgc tgctgccggc agctcagggt gaactgaccc tggccggcct 2400

gtcactgttt tggggtattt cgatcatgat tgtcgcactg ggtatgcaag tgaaagttct 2460

ggctctggcc ccggatgcca ccgatgttgc catgagcctg ttttctggca tcttcaacat 2520

cggcattggt gccggcgcac tgctgggtaa tcaggtgtca ctgcacattt caatgtcgga 2580

catcggtttt attggcgcca tcccggcaat tatcgctctg gtctggtcga ttctggtgtc 2640

cgccgttggc cggttgccct ggaagaacat ccgcaggcaa cccactaata aatcgatact 2700

agcataaccc cttggggcct ctaaacgcgt cgacacgcaa aaaggccatc cgtcaggatg 2760

gccttctgct taatttgatg cctggcagtt tatggcgggc gtcctgcccg ccaccctccg 2820

ggccgttgct tcgcaacgtt caaatccgct cccggcggat ttgtcctact caggagagcg 2880

ttcaccgaca aacaacagat aaaacgaaag gcccagtctt tcgactgagc ctttcgtttt 2940

atttgatgcc tggcagttcc ctactctcgc atggggagac cccacactac catcatgtat 3000

gaatatcctc cttagttcct attccgaagt tcctattctc tagaaagtat aggaacttcg 3060

gcgcgtccta cctgtgacgg aagatcactt cgcagaataa ataaatcctg gtgtccctgt 3120

tgataccggg aagccctggg ccaacttttg gcgaaaatga gacgttgatc ggcacgtaag 3180

aggttccaac tttcaccata atgaaataag atcactaccg ggcgtatttt ttgagttgtc 3240

gagattttca ggagctaagg aagctaaaat ggagaaaaaa atcactggat ataccaccgt 3300

tgatatatcc caatggcatc gtaaagaaca ttttgaggca tttcagtcag ttgctcaatg 3360

tacctataac cagaccgttc agctggatat tacggccttt ttaaagaccg taaagaaaaa 3420

taagcacaag ttttatccgg cctttattca cattcttgcc cgcctgatga atgctcatcc 3480

ggaattacgt atggcaatga aagacggtga gctggtgata tgggatagtg ttcacccttg 3540

ttacaccgtt ttccatgagc aaactgaaac gttttcatcg ctctggagtg aataccacga 3600

cgatttccgg cagtttctac acatatattc gcaagatgtg gcgtgttacg gtgaaaacct 3660

ggcctatttc cctaaagggt ttattgagaa tatgtttttc gtctcagcca atccctgggt 3720

gagtttcacc agttttgatt taaacgtggc caatatggac aacttcttcg cccccgtttt 3780

caccatgggc aaatattata cgcaaggcga caaggtgctg atgccgctgg cgattcaggt 3840

tcatcatgcc gtttgtgatg gcttccatgt cggcagatgc ttaatgaata caacagtact 3900

gcgatgagtg gcagggcggg gcgtaaggcg cgccatttaa atgaagttcc tattccgaag 3960

ttcctattct ctagaaagta taggaacttc gaagcagctc cagcctacac aatcgctcaa 4020

gacgtgtaat gctgcaatct gcatgcaagc ttggcactgg ccacgcaaaa aggccatccg 4080

tcaggatggc cttctgctta atttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc 4140

accctccggg ccgttgcttc gcaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca 4200

ggagagcgtt caccgacaaa caacagataa aacgaaaggc ccagtctttc gactgagcct 4260

ttcgttttat ttgatgcctg gcagttccct actctcgcat ggggagaccc cacactacca 4320

tcggggggcc atcgatgcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg 4380

tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgctgcag 4440

aggcctgcat gcaagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta 4500

tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc 4560

ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg 4620

aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg 4680

tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg 4740

gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa 4800

cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc 4860

gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc 4920

aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag 4980

ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct 5040

cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta 5100

ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc 5160

cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc 5220

agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt 5280

gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct 5340

gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc 5400

tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca 5460

agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta 5520

agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa 5580

atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg 5640

cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg 5700

actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc 5760

aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc 5820

cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa 5880

ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc 5940

cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg 6000

ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc 6060

cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat 6120

ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg 6180

tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc 6240

ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg 6300

aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat 6360

gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg 6420

gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg 6480

ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct 6540

catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac 6600

atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta 6660

taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc 6692

<210> 35

<211> 35

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 35

ttactcagca ataaactgat attccgtcag gctgg 35

<210> 36

<211> 83

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 36

ttgtaatctc gcgctcttca catcagactt tccatataga gcgtaatttc cgttaacgtc 60

ggtagtgctg accttgccgg agg 83

<210> 37

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 37

ctgtctctta tcacatctcc tgaaatggcc agatgtaatt cctaattttt gtt 53

<210> 38

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 38

ctgtctctta tcacatctca cattacatct gagcgattgt tagg 44

<210> 39

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 39

gatcacatat gagagttctg gttaccggtg 30

<210> 40

<211> 40

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 40

gatcactcga gtcattaatc gggatatccc tgtggatggc 40

<210> 41

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 41

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atgcacttca ttgaaaacaa aaacttcgtc 60

<210> 42

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 42

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc ctagataaac aggatgatat ttttgccttg 60

<210> 43

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 43

caaggcaaaa atatcatcct gtttatctag gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 44

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 44

gacgaagttt ttgttttcaa tgaagtgcat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 45

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 45

atggcctttt tgcgtgtcga cgcggccgct taattcgagc gggtaaagat cttcatcagg 60

<210> 46

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 46

atggcctttt tgcgtgtcga cgcggccgct taattcgagc gggtaaagat cttcatcagg 60

<210> 47

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 47

ctgatgaaga tctttacccg ctcgaattaa gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 48

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 48

cggggtacgc ttaatcaggt tatcaatcat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 49

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 49

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atgagcggtg aacactatgt cattagcctg 60

<210> 50

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 50

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc tcatttaaat tcgatgatca tcttgtcgtt 60

<210> 51

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 51

aacgacaaga tgatcatcga atttaaatga gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 52

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 52

caggctaatg acatagtgtt caccgctcat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 53

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 53

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atggatgaaa tcaaactgtc ggtggttatg 60

<210> 54

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 54

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc tcattggcga cgccaatcga acgcaacgcg 60

<210> 55

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 55

cgcgttgcgt tcgattggcg tcgccaatga gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 56

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 56

cataaccacc gacagtttga tttcatccat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 57

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 57

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atggaaaact atgtcgtctc tatccgcacc 60

<210> 58

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 58

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc tcatttgaac ggaacaatct ttttgtcatc 60

<210> 59

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 59

gatgacaaaa agattgttcc gttcaaatga gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 60

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 60

ggtgcggata gagacgacat agttttccat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 61

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 61

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atgtcctcag ctttccatta cgtcattagc 60

<210> 62

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 62

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc tcattcaaat tcgataatca tggtgatttt 60

<210> 63

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 63

aaaatcacca tgattatcga atttgaatga gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 64

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 64

gctaatgacg taatggaaag ctgaggacat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 65

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 65

gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact atgaacgtga ataagccgac caccgaaaag 60

<210> 66

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 66

gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc tcagtattct tcaattttgt ccagttgata 60

<210> 67

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 67

tatcaactgg acaaaattga agaatactga gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc 60

<210> 68

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 68

cttttcggtg gtcggcttat tcacgttcat agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac 60

<210> 69

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 69

gtgatcaacg ccgccagcgg tcgtcagact gtcgatgaag ccctgaaaga cgcgcagact 60

<210> 70

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 70

gcggccgcgt cgacacgcaa aaaggccatc catccgtcag gatggccttc tgcttaattt 60

<210> 71

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 71

aaattaagca gaaggccatc ctgacggatg gatggccttt ttgcgtgtcg acgcggccgc 60

<210> 72

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 72

agtctgcgcg tctttcaggg cttcatcgac agtctgacga ccgctggcgg cgttgatcac 60

<210> 73

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 73

gtttaacttt aataaggaga tataccatgc tgacggaagt gcgcccggtc tctacgacga 60

aaccgc 66

<210> 74

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 74

cgacctgcag gcgcgccgag ctcgaattca tttgatgtat ttgcaataga acacagaaaa 60

gaccgt 66

<210> 75

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 75

gtgttctatt gcaaatacat caaatgaatt cgagctcggc gcgcctgcag gtcgacaagc 60

ttgcgg 66

<210> 76

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 76

gagaccgggc gcacttccgt cagcatggta tatctcctta ttaaagttaa acaaaattat 60

ttctacagg 69

<210> 77

<211> 62

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 77

gtatggtgac cctgtggcgc aaatgagaat tcgagctcgg cgcgcctgca ggtcgacaag 60

ct 62

<210> 78

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 78

gcgctgccct gtttgatttt atccatggta tatctcctta ttaaagttaa acaaaattat 60

ttct 64

<210> 79

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 79

cctgcaggcg cgccgagctc gaattctcat ttgcgccaca gggtcaccat acgtgccggc 60

agg 63

<210> 80

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 80

gtttaacttt aataaggaga tataccatgg ataaaatcaa acagggcagc gcctctctgg 60

ttgtcg 66

<210> 81

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 81

cagactcgag ggtaccgacg tcctaataag tagatgaata tttatcagga cgaagat 57

<210> 82

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 82

aactaaaggt ttattttcca tatgtatatc tccttcttat acttaactaa tatac 55

<210> 83

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 83

taaatattca tctacttatt aggacgtcgg taccctcgag tctggtaaag aaaccgctgc 60

tgcg 64

<210> 84

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 84

gtataagaag gagatataca tatggaaaat aaacctttag tttcagtttt gatttgtgc 59

<210> 85

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 85

taactttaag aaggagatat acaagagctc gagtcgaagg agatagaacc atggcaacag 60

catggtataa acaag 75

<210> 86

<211> 82

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 86

gcgtgtcgac gcgtttagag gccccaaggg gttatgctag tatcgattta tcatttagcc 60

acggatagtt tataaatttt ac 82

<210> 87

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 87

ggttctatct ccttcgactc gagctcttgt atatctcctt cttaaagtta aacaaaatta 60

tttctagatt tttgtcgaac 80

<210> 88

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 88

taaatcgata ctagcataac cccttggggc ctctaaacgc gtcgacacgc aaaaaggcca 60

tcc 63

<210> 89

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 89

gttcgacaaa aatctagaaa taattttgtt taactttaag aaggagatat acaagagctc 60

gagtcgaagg agatagaacc 80

<210> 90

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 90

ggatggcctt tttgcgtgtc gacgcgttta gaggccccaa ggggttatgc tagtatcgat 60

tta 63

<210> 91

<211> 34

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 91

atatgacgtc tcattagcgg tttttcagga gacg 34

<210> 92

<211> 35

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 92

atatcatatg ccgtccgaag cattccgtcg tcacc 35

<210> 93

<211> 62

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 93

taactttaat aaggagatat accatgacgc aatttaatcc cgttgatcat ccacatcgcc 60

gc 62

<210> 94

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 94

attttcgcga atccggagtg taaaagcttg cggccgcata atgcttaagt cgaacagaaa 60

gtaatcg 67

<210> 95

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 95

aagcattatg cggccgcaag cttttacact ccggattcgc gaaaatggat atcgctgact 60

gcgcgcaaac gc 72

<210> 96

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 96

tcaacgggat taaattgcgt catggtatat ctccttatta aagttaaaca aaattatttc 60

tacagggg 68

<210> 97

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 97

atggtgatgg ctgctgccca tttaaaccgc tttgactgcg tcggcaatac ggtgcgc 57

<210> 98

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 98

gtttaacttt aataaggaga tataccatgc tgaacaacgc gatgtctgtt gttatcctgg 60

<210> 99

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 99

cgcagtcaaa gcggtttaaa tgggcagcag ccatcaccat catcaccaca gcc 53

<210> 100

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 100

tcgcgttgtt cagcatggta tatctcctta ttaaagttaa acaaaattat ttctacagg 59

<210> 101

<211> 35

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 101

atatatcata tgtgcggtat cgttggtgct atcgc 35

<210> 102

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 102

atatatgacg tcttattcca cggtcacgga tttcgc 36

<---

Изобретение относится к способу производства целевого олигосахарида генетически модифицированной клеткой микроорганизма-хозяина, а также к генетически модифицированной клетке микроорганизма-хозяину, применяемой в способе. Предложенная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина предназначена для производства целевого олигосахарида, где указанный целевой олигосахарид выбран из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы и лакто-N-неотетраозы. При этом клетка-хозяин содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гликозилтрансферазу и имеет экспрессию или активность по меньшей мере одного эндогенного белка, транспортирующего сахар, модифицированную таким образом, что экспрессия или активность эндогенного белка, осуществляющего экспорт сахара, функционально инактивирована в отношении экспорта лакто-N-триозы II. Также клетка содержит по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида в культуральную среду, в которой культивируют клетку-хозяина. Предложенная клетка используется в способе производства целевого олигосахарида генетически модифицированной клеткой микроорганизма-хозяина, где указанный целевой олигосахарид выбран из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы и лакто-N-неотетраозы. Изобретение обеспечивает улучшенный экспорт и получение больших количеств целевого олигосахарида. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 9 ил., 3 табл., 8 пр.

1. Способ производства целевого олигосахарида генетически модифицированной клеткой микроорганизма-хозяина, где указанный целевой олигосахарид выбран из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы и лакто-N-неотетраозы, включающий стадии, при которых

- получают генетически модифицированную клетку микроорганизма-хозяина, которая:

- содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гликозилтрансферазу,

- имеет экспрессию или активность по меньшей мере одного эндогенного белка, осуществляющего экспорт сахара, модифицированную таким образом, что экспрессия или активность белка, осуществляющего экспорт сахара, функционально инактивирована в отношении экспорта лакто-N-триозы II, и

- содержит по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида в культуральную среду, в которой культивируют клетку-хозяина,

- где белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, относится к классу вторичных активных переносчиков, и

- где указанная гомологичная или гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, сверхэкспрессируется или находится под контролем последовательности промотора, обеспечивающей сверхэкспрессию указанной нуклеиновокислотной последовательности, и

- где указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой ген, выбранный из группы, состоящей из yebQ, ydeA, fucP и bcr из Escherichia coli, spoVB из Bacillus amyloliquefaciens, yabM из Erwinia pyrilfolia, proP2 из Haemophilus parainfluenzae, setA из Pectobacterium carotovorum, Pseudomonas sp. или Beauveria bassiana, mdeA из Staphylococcus aureus и imrA из Lactococcus lactis, или их функциональных фрагментов;

- культивируют клетку-хозяина в среде в условиях, обеспечивающих производство целевого олигосахарида, где целевой олигосахарид транспортируется в среду, и

- получают целевой олигосахарид из среды.

2. Способ по п. 1, где клетка-хозяин имеет сверхэкспрессию по меньшей мере одной гомологичной или гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок, опосредующий импорт предшественника целевого олигосахарида в указанную клетку-хозяина, где предшественник крупнее дисахарида.

3. Способ по п. 1 или 2, где указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой эндогенную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где указанная рекомбинантная гликозилтрансфераза выбрана из по меньшей мере одного из следующего: галактозилтрансферазы и N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, и предпочтительно выбрана из по меньшей мере одного из следующего: β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, β-1,3-галактозилтрансферазы, β-1,4-галактозилтрансферазы, β-1,6-галактозилтрансферазы.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где клетка-хозяин содержит в качестве гликозилтрансфераз: (i) β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу и (ii) β-1,3-галактозилтрансферазу или β-1,4-галактозилтрансферазу.

6. Способ по любому из пп. 4 или 5, где указанная β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза относится к классу lgtA из Neisseria meningitides или PmnagT из Pasteurella multocida.

7. Способ по любому из пп. 5 или 6, где β-1,3-галактозилтрансфераза, образующая лакто-N-тетраозу, представляет собой WbdO.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором, где применимо, в генетически модифицированной клетке-хозяине осуществлена инактивация или делеция эндогенных генов β-галактозидазы и глюкозамин-6-фосфат-дезаминазы и где указанная генетически модифицированная клетка-хозяин содержит нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую функциональный белок лактозопермеазы.

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором генетически модифицированная клетка-хозяин обладает повышенной способностью продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу или ГДФ-фукозу или ЦМФ-N-ацетилнейраминовую кислоту по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином, где предпочтительно указанная повышенная способность продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу включает сверхэкспрессию одного или более чем одного гена, кодирующего белки, обладающие активностью: L-глутамин:D-фруктозо-6-фосфат-аминотрансферазы, N-ацетилглюкозамин-1-фосфатуридилтрансферазы/глюкозамин-1-фосфатацетилтрансферазы, фосфоглюкозаминмутазы, УДФ-галактозо-4-эпимеразы, фосфоглюкомутазы, глюкозо-1-фосфатуридилилтрансферазы.

10. Способ по любому из пп. 8 или 9, где указанную генетически модифицированную клетку-хозяина культивируют в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина или их комбинации, но не при добавлении и не в присутствии N-ацетилглюкозамина, галактозы или их комбинации.

11. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина для производства целевого олигосахарида, где указанный целевой олигосахарид выбран из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы и лакто-N-неотетраозы, где клетка-хозяин:

- содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гликозилтрансферазу, и

- имеет экспрессию или активность по меньшей мере одного эндогенного белка, транспортирующего сахар, модифицированная таким образом, что экспрессия или активность эндогенного белка, осуществляющего экспорт сахара, функционально инактивирована в отношении экспорта лакто-N-триозы II, и

- содержит по меньшей мере одну гомологичную или гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида в культуральную среду, в которой культивируют клетку-хозяина,

- где указанный белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, относится к классу вторичных активных переносчиков, и

- где указанная гомологичная или гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, сверхэкспрессируется или находится под контролем последовательности промотора, обеспечивающей сверхэкспрессию указанной нуклеиновокислотной последовательности, и

- где указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой ген, выбранный из группы, состоящей из yebQ, ydeA, fucP и bcr из Escherichia coli, spoVB из Bacillus amyloliquefaciens, yabM из Erwinia pyrilfolia, proP2 из Haemophilus parainfluenzae, setA из Pectobacterium carotovorum, Pseudomonas sp. или Beauveria bassiana, mdeA из Staphylococcus aureus и imrA из Lactococcus lactis, или их функциональных фрагментов.

12. Клетка микроорганизма-хозяина по п. 11, содержащая в качестве гликозилтрансфераз (i) гетерологичную экспрессируемую β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу и (ii) гетерологичную экспрессируемую β-1,3-галактозилтрансферазу или гетерологичную экспрессируемую β-1,4-галактозилтрансферазу.

13. Клетка микроорганизма-хозяина по п. 11 или 12, дополнительно имеющая сверхэкспрессию по меньшей мере одной гомологичной или гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок, опосредующий импорт предшественника целевого олигосахарида в указанную клетку-хозяина, где предшественник крупнее дисахарида.

14. Клетка микроорганизма-хозяина по п. 12 или 13, где указанная по меньшей мере одна нуклеиновокислотная последовательность, кодирующая белок, обеспечивающий экспорт целевого олигосахарида, представляет собой эндогенную или рекомбинантную нуклеиновокислотную последовательность.

15. Клетка микроорганизма-хозяина по любому из пп. 13 или 14, где целевой олигосахарид представляет собой лакто-N-тетраозу, предшественник представляет собой лакто-N-триозу II и где у клетки-хозяина осуществлена делеция, разрушение или инактивация по меньшей мере одной нуклеиновокислотной последовательности, кодирующей белок экспортер, способный осуществлять экспорт лакто-N-триозы II из клетки-хозяина, где белок, обеспечивающий экспорт лакто-N-тетраозы, выбран из YebQ из Escherichia coli BL21(DE3), SpoVB из Bacillus amyloliquefaciens, YabM из Erwinia pyrilfolia, Bcr из E. coli MG1655, YdeA из E. coli MG1655, ProP2 из Haemophilus parainfluenzae, SetA из Pectobacterium carotovorum, FucP из E. coli MG1655, MdeA из Staphylococcus aureus Bmb9393, ImrA из Lactococcus lactis, SetA из Pseudomonas sp. MT-1 и SetA из Beauveria bassiana D1-5.