Перекрестные ссылки на родственные заявки

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет Временной заявки на патент США № 62/492947, поданной 1 мая 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/538670, поданной 29 июля 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL ТЕРАПИ AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/549390, поданной 23 августа 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL ТЕРАПИ AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/580433, поданной 1 ноября 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, и Временной заявки на патент США № 62/596753, поданной 8 декабря 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, содержание которых включаются в качестве ссылок во всей своей полноте.

Включение в качестве ссылки Списка последовательностей

[0002] Настоящая заявка подается вместе со Списком последовательностей в электронном формате. Список последовательностей предлагается как файл, озаглавленный 735042009640SeqList.TXT, созданный 30 апреля 2018 года, который имеет размер 328355 бит. Информация в электронном формате Списка последовательностей включается в качестве ссылки во всей своей полноте.

Область техники, к которой относится изобретение

[0003] Настоящее изобретение в некоторых аспектах относится к способам, композициям и к применению, включающему иммунотерапию, такую как адоптивная клеточная терапия, например, Т-клеточная терапия, и к иммуномодуляторному соединению, такому как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитора E3-убиквитинлигазы. Предлагаемые способы, композиции и применения включают способы, композиции и применения для сочетанной терапии, включающей введение или нанесение одного или нескольких иммуномодуляторных соединений в сочетании с Т-клеточной терапией, такой как терапия с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, включая клетки с рекомбинантными рецепторами, например, с помощью Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы антигенов (CAR). Также предлагаются композиции, способы введения субъектам, промышленные изделия и наборы для использования в способах. В некоторых аспектах, особенности способов и клеток обеспечивают повышенную или улучшенную активность, эффективность, персистентность, размножение и/или пролиферацию Т-лимфоцитов для адоптивной клеточной терапии или эндогенных Т-лимфоцитов, рекрутированных с помощью иммунотерапевтических агентов.

Уровень техники

[0004] Доступны различные стратегии иммунотерапии, например, введение генно-инженерных Т-лимфоцитов для адоптивной терапии. Например, доступны стратегии для генной инженерии Т-лимфоцитов, экспрессирующих генно-инженерные рецепторы антигенов, такие как CAR, и введение композиций, содержащих такие клетки, субъектам. Требуются улучшенные стратегии для улучшения эффективности клеток, например, для улучшения персистентности, активности и/или пролиферации клеток при введении субъектам. Предлагаются способы, композиции, наборы и системы, которые удовлетворяют такие потребности.

Сущность изобретения

[0005] В настоящем документе предлагается сочетанная терапия, включающая введение иммунотерапии, включающей функционирование или активность Т-лимфоцитов, такая как Т-клеточная терапия, и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитора E3-убиквитинлигазы. В некоторых аспектах, предлагаемые способы улучшают или модулируют пролиферацию и/или активность или активности Т-лимфоцитов, связанные с введением иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, такого как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты). В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, как правило, включает введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог талидомида и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы (например, леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион)), и введение Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты).

[0006] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают: (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения.

[0007] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят иммуномодуляторное соединение и/или он подвергается лечению с его помощью, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.

[0008] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже ранее вводилась Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, способ тем самым предотвращает, уменьшает или облегчает один или несколько симптомов или результатов заболеваний или состояний.

[0009] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, (a) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или результата; и/или (b) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или симптома или результата; и/или (c) тем самым способ уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до степени, которая больше сочетания (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении одного только иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения этого показателя для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения этого показателя для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние; и/или (d) количество вводимого иммуномодуляторного соединения в способе, или соединения, вводимого одной или несколькими дозами, представляет собой поддерживающую дозу соединения или соответствует дозе соединения, вводимой субъектам, демонстрирующим реакцию, необязательно, полную реакцию, после введения соединения для лечения.

[0010] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, заболевание или состояние не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению и/или становится не поддающимся лечению или резистентным к нему после лечения иммуномодуляторным соединением; и/или субъект или заболевание или состояние, как определено, имеет мутацию или фактор, придающий заболеванию или состоянию резистентность к лечению иммуномодуляторным соединением.

[0011] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение выбирается из: иммуномодуляторных лекарственных средств (IMiD), аналогов талидомида, производных талидомида, соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или из одного или нескольких элементов комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы, ингибиторов Ikaros (IKZF1), ингибиторов Aiolos (IKZF3), соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).

[0012] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.

[0013] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят иммуномодуляторное соединение и/или он подвергается лечению с его помощью, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.

[0014] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже вводилась ранее Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.

[0015] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того, или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментов времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0016] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят, Т-клеточную терапия для лечения заболевания или состояния, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0017] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0018] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и (b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.

[0019] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение в течение не более 14 последовательных дней.

[0020] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, где субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0021] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения включает: (i) по меньшей мере, один цикл больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения, где цикл включает введение соединения, необязательно, ежедневно или, по меньшей мере, ежедневно, в течение до 21 дня, последовательно, и/или где последнее введение соединения в цикле соответствует 21 дню или меньше после первого введения соединения в цикле; и/или (ii) по меньшей мере, два цикла, каждые, по меньшей мере, два цикла включают введение соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение, необязательно, ежедневное или, по меньшей мере, ежедневное, в течение не более 14 последовательных дней.

[0022] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день или в последовательные дни, необязательно, одновременно; и/или, по меньшей мере, одна доза иммуномодуляторного соединения вводится в один и тот же день, в пределах одного или двух дней, до или после введения дозы Т-клеточной терапии.

[0023] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии.

[0024] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где цикл включает: (i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение в течение не более 14 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 14 дней до начала Т-клеточной терапии.

[0025] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: аналогов талидомида; производных талидомида; соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или с одним или несколькими элементами комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы; ингибиторов Ikaros (IKZF1); ингибиторов Aiolos (IKZF3) и соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).

[0026] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения начинается до введения Т-клеточной терапии, оно начинается: (i) через неделю или в пределах одной недели до или после отбора у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны обрабатываться и/или подвергаться генной инженерии для получения терапии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или (ii) в пределах 14 дней до начала введения Т-клеточной терапии.

[0027] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные клетки для экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, генная инженерия включает одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo, необязательно выбранных из: (1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза; (2) выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; (3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; (4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования; (5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или (6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.

[0028] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает осуществление способа приготовления и/или дополнительно включает генную инженерию Т-лимфоцитов для экспрессирования рекомбинантного рецептора, тем самым генерируя Т-клеточную терапию. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает приведение в контакт клеток с иммуномодуляторным соединением в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo.

[0029] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные Т-лимфоциты, полученные с помощью способа приготовления, включающего инкубирование клеток ex vivo в присутствии иммуномодуляторного соединения.

[0030] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает инкубирование клеток в присутствии одного или нескольких условий стимулирования, которое осуществляют в присутствии иммуномодуляторного соединения.

[0031] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии.

[0032] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, где субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0033] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой такую терапию, при которой пиковое количество популяции клеток от терапии, которые необязательно представляют собой клетки CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, и/или, необязательно представляют собой Т-лимфоциты CAR+, в крови представляет собой ((a) среднее значение для множества субъектов, леченых с помощью Т-клеточной терапии без введения иммуномодуляторного соединения, или (b) субъектам после введения Т-клеточной терапии) составляет меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0034] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, необязательно, CAR. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, рекомбинантный рецептор содержит антиген-связывающий домен специфичный к B-клеточному антигену созревания (BCMA).

[0035] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле осуществляют после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии.

[0036] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (a) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (b) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0037] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (a) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (b) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0038] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который примерно больше 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.

[0039] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, до начала введения иммуномодуляторного соединения, выбирают субъекта, у которого: (i) в крови детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0040] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0041] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и (b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно, необязательно, один раз в день.

[0042] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем введение ежедневно в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых вариантах осуществления, период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.

[0043] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, цикл введения иммуномодуляторного соединения повторяют, по меньшей мере, один раз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов, или, по меньшей мере, 12 циклов.

[0044] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения продолжается, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока: количество клеток от введенной Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.

[0045] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует транскрипционный ростовой фактор Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).

[0046] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0047] В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе предлагаются, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид(4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомид(3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, или стереоизомер их, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, или стереоизомер их, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.

[0049] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.

[0050] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в количестве от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.

[0051] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.

[0052] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг; или иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше, чем 25 мг в день.

[0053] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение размножения Т-лимфоцитов, связанных с Т-клеточной терапией, по сравнению с размножением после введения Т-клеточной терапии без иммуномодуляторного соединения.

[0054] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение медиируемой Т-лимфоцитами цитолитической активности, связанной с Т-клеточной терапией, по сравнению с цитолитической активностью после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.

[0055] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с продуцированием цитокинов после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, это увеличение более или примерно более 1,5-кратного, 2,0-кратного, 3,0-кратного, 4,0-кратного, 5,0-кратного, 10,0-кратного или более.

[0056] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или его антиген-связывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).

[0057] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор антигена, который содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых вариантах осуществления, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген.

[0058] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии клеток L1, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше антигенов; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает антиген, ассоциированный с множественной миеломой, необязательно, BCMA, необязательно, BCMA человека.

[0059] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит scFv.

[0060] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор, который дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или его сигнальную часть.

[0061] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен, необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно включает костимуляторную сигнальную область. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

[0062] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит:

Т-лимфоциты, выбранные из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.

[0063] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит клетки, которые являются аутологичными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые являются аллогенными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, субъект является человеком.

[0064] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает введение в целом, от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.

[0065] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

[0066] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, количество клеток, вводимых при Т-клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т-клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения, необязательно, этот другой способ дает в результате сходную или более низкую степень облегчения или уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их тяжести, по сравнению с результатом настоящего способа. В некоторых вариантах осуществления, количество вводимых клеток является 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе.

[0067] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

[0068] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии.

[0069] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

[0070] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения.

[0071] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ понижает массу опухоли до большей степени и/или в течение большего периода времени по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения и/или, в котором иммуномодуляторное соединение вводится без Т-клеточной терапии, необязательно, при такой же дозе или временном графике дозирования.

[0072] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включая введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0073] Также, в настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в соответствии с циклом введения, включающим введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0074] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в один и тот же день, необязательно, одновременно, как начало введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения до начала введения Т-клеточной терапии.

[0075] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения за неделю или в пределах недели перед отбором у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны подвергаться генной инженерии, необязательно, когда образец представляет собой образец от афереза; и/или в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo для получения терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов; и/или в пределах 14 дней до введения Т-клеточной терапии.

[0076] В некоторых вариантах осуществления, одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo выбирают из выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза; выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования; приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.

[0077] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых примерах, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии.

[0078] Также, в настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0079] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0080] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения через промежуток времени, который более или примерно более 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют выбор субъекта для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, после введения Т-клеточной терапии, в которой: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0081] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния, количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0082] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния, количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0083] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включающему: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0084] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и (b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения согласно циклу введения, включающему: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.

[0085] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0086] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ила)-пиперидин-2,6-дион), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа; и (b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0087] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0088] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа; и (b) инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

[0089] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве для ежедневного введения и/или инструкции конкретизируют ежедневное введение иммуномодуляторного соединения. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней.

[0090] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в цикле введения, включая ежедневное введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых примерах, инструкции конкретизируют период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют цикл введения иммуномодуляторного соединения, который повторяют, по меньшей мере, один раз.

[0091] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют продолжение введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока количество клеток от введенной Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; пока количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; пока количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или пока субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или пока субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.

[0092] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3). В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0093] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают для введения перорально, подкожно или внутривенно. В некоторых примерах, иммуномодуляторное соединение приготавливают для перорального введения. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в капсулах или таблетках.

[0094] В некоторых таких вариантах осуществления, каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг. В некоторых таких вариантах осуществления, одна или несколько единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше 25 мг.

[0095] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

[0096] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.

[0097] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых случаях, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.

[0098] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы клеточной адгезии L1, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому объекту из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает BCMA, необязательно, BCMA человека.

[0099] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых случаях, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.

[0100] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых примерах, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

[0101] В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.

[0102] В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область. В некоторых случаях, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых примерах, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

[0103] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, множество составляет, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.

[0104] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия является аутологичной для субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная является аллогенной для субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, субъект является человеком.

[0105] В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

[0106] В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

[0107] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции дополнительно конкретизируют введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых таких вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). В некоторых случаях, раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

[0108] В настоящем документе предлагается промышленное изделие, содержащее любой из наборов, описанных в настоящем документе.

[0109] Также, в настоящем документе предлагается фармацевтическая композиция, содержащая Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточную терапию приготавливают в количестве стандартной единичной дозы. В некоторых случаях, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.

[0110] В настоящем документе предлагаются фармацевтические композиции, которые включают Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.

[0111] В некоторых вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

[0112] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3). В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0113] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве стандартной единичной дозы. В некоторых таких вариантах осуществления, количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг. В некоторых таких вариантах осуществления, количество иммуномодуляторного соединения в композиции больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.

[0114] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).

[0115] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых случаях, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание или опухоль, или раковое заболевание.

[0116] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, фетального AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека.

[0117] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых примерах, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит scFv. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.

[0118] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых примерах, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых случаях, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть.

[0119] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8, CD28, CTLA-4, или PD-1. В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.

[0120] В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых примерах, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит химерный рецептор антигена, содержащий антиген-связывающий домен, спейсер, трансмембранный домен от CD28, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий цепь CD3-зета (CD3ζ), и внутриклеточный сигнальный домен от 4-1BB.

[0121] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, множество составляет по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+. В некоторых примерах, отношение Т-лимфоцитов CD4+ к Т-лимфоцитам CD8+ составляет от или примерно от 1:3 до 3:1, необязательно, 1:1.

[0122] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых случаях, субъект является человеком.

[0123] В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция содержит объем от или примерно от 1 мл до 100 мл, от 1 мл до 75 мл, от 1 мл до 50 мл, от 1 мл до 25 мл, от 1 мл до 10 мл, от 1 мл до 5 моет 5 мл до 100 мл, от 5 мл до 75 мл, от 5 мл до 50 мл, от 5 мл до 25 моет 5 мл до 10 мл, от 10 мл до 100 мл, от 10 мл до 75 мл, от 10 мл до 50 мл, от 10 мл до 25 мл, от 25 мл до 100 мл, от 25 мл до 75 мл, от 25 мл до 50 мл, от 50 мл до 100 мл, от 50 мл до 75 мл или от 75 мл до 100 мл. В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция содержит объем, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, или примерно 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл, 25 мл, 30 мл, 40 мл, 50 мл, 60 мл, 70 мл, 80 мл, 90 мл или 100 мл.

[0124] В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция дополнительно содержит криопротектор. В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция является стерильной.

[0125] В настоящем документе предлагается промышленное изделие, содержащее любую из фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе.

[0126] Также предлагается способ лечения, включающий введение любой из фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, субъекту для лечения заболевания или состояния. В некоторых случаях, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых случаях, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLB) или фолликулярную лимфому (FL).

Краткое описание чертежей

[0127] Фиг.1A показывает поверхностное экспрессирование BCMA линиями клеток множественной миеломы (RPMI-8226, MM1.S и OPM-2). Штриховая линия показывает фон анализа и BCMA-отрицательные линии клеток окрашены антителом анти-BCMA. MFI - медианная интенсивность флуоресценции.

[0128] Фиг.1B показывает процент уменьшения количества BCMA-экспрессирующих целевых клеток (RPMI-8226) под действием Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии и в отсутствие леналидомида (10 мкМ) после 6 дней сокультивирования. Фиг.1C показывает воздействие леналидомида на цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток RPMI-8226.

[0129] Фигуры 2A-2C показывают количество IL-2 (Фиг.2A), IFNγ (Фиг.2B) и TNF-α (Фиг.2C), наблюдаемое в супернатантах после инкубирования целевых клеток RPMI-8226 с Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие.

[0130] Фиг.3A показывает воздействие повышения концентраций леналидомида на цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток OPM2.

[0131] Фигуры 3B-D показывает количество IFNγ (Фиг.3B), IL-2 (Фиг.3C) и TNF-α (Фиг.3D), наблюдаемое в супернатантах после инкубирования целевых клеток OPM2 с Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA в присутствии повышенных концентраций леналидомида, или в отсутствие леналидомида.

[0132] Фиг.3E показывает антиген-специфичную цитолитическую активность CAR-T анти-BCMA и продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученными от репрезентативных здоровых доноров и пациентов с множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.

[0133] Фиг.3F показывает антиген-специфичную цитолитическую активность CAR-T анти-BCMA Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 и RPMI-8226 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Фиг.3G показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Фиг.3H показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток RPMI-8226 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.

[0134] Фиг.4A показывает размножение Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA после повторного стимулирования в присутствии различных концентраций леналидомида.

[0135] Фиг.4B показывает размножение Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA после повторного стимулирования как в присутствии, так и в отсутствии леналидомида.

[0136] Фиг.5A показывает отсчеты клеток (проективные удвоения популяции) Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от трех доноров в каждый момент времени при анализе повторного стимулирования, в присутствии несущей среды или 0,1 мкМ леналидомида. “×” показывает недостаточность клеток для реинокуляции при анализе. Фиг.5B показывает CD25 медианную интенсивность флуоресценции (MFI) (настроенную на живых CD3+ CAR+). Фиг.5C показывает продуцирование цитокинов, нормированное на количество инокулированных клеток (верхняя и левая нижняя панели) и медианную интенсивность флуоресценции (MFI) CD25 (настроенную на живых CD3+ CAR+) (правая нижняя панель).

[0137] Фиг.6A показывает общее количество клеток CD3+ в культуре в дни 2 и 7 после инкубирования T-лимфоцитов CAR анти-BCMA или Т-лимфоцитов, которые не экспрессируют CAR (имитационные), в присутствии или в отсутствие леналидомида. Фигуры 6B и 6C показывают экспрессирование CD25+ в Т-лимфоцитах CD4+ (Фиг.6B) и CD8+ (Фиг.6C) в культуре в дни 2 и 7 после инкубирования T-лимфоцитов CAR анти-BCMA или Т-лимфоцитов, которые не экспрессируют CAR (имитационные) в присутствии или в отсутствие леналидомида.

[0138] Фиг.7A показывает объем опухоли у мышей в зависимости от времени после введения низкой дозы Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие.

[0139] Фиг.7B показывает процент выживаемости мышей, которым вводят низкую дозу Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие. Для контрольных групп вводят Т-лимфоциты, которые не экспрессируют CAR (имитационные), в присутствии в присутствии и в отсутствие, и также вводят леналидомид без Т-лимфоцитов.

[0140] Фиг.8A показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8B показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36. Фиг.8C показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8D показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36.

[0141] Фиг.8E показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7, и 14. Фиг.8F показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36. Фиг.8G показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8H показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36.

[0142] Фигуры 9A и 9B показывают результаты относительно массы опухоли у мышей, леченых согласно режиму A (LenA), при котором мышам вводят леналидомид за один день перед приемом Т-лимфоцитов CAR+.

[0143] Фиг.9C показывает массу опухоли отдельной мыши как функцию времени до дня 53.

[0144] Фиг.9D показывает результаты как изображения опухоли в день 46 после введения клеток CAR+ для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 10⁶), с леналидомидом в день -1 (Len A). Фиг.9E показывает результаты как изображения опухоли в день 46 после введения клеток CAR+ для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 10⁶), без леналидомида в день -1 (Len A).

[0145] Фигуры 9F и 9G показывают результаты относительно массы опухоли мыши, леченых согласно режиму B (LenB), при котором введение леналидомида начинается в день 14 после введения CAR+ T.

[0146] Фиг.9H показывает массу опухоли отдельной мыши со временем до дня 53.

[0147] Фиг.9I показывает результаты как изображение опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 10⁶), с леналидомидом в день -1 (Len A). Фиг.9J показывает результаты как изображение опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 10⁶), без леналидомида в день -1 (Len A).

[0148] Фигуры 10A-10D показывают выживаемость мышей в присутствии или в отсутствие леналидомида. Леналидомид вводят посредством Режима A (Len A; введение леналидомида начинается в день -1) или Режима B (Len B; введение леналидомида начинается в день 14) в сочетании с низкими (5 × 10⁵ или 5e⁵) или высокими (1 × 10⁶ или 1e⁶) дозами Т-лимфоцитов CAR+. Для контрольных групп, Т-лимфоциты, которые не экспрессируют CAR (имитационные) вводятся в присутствии в присутствии и в отсутствие как в Режиме A, так и в Режиме B, и леналидомид без Т-лимфоцитов также вводится посредством как Режима A, так и Режима B.

[0149] Фиг.10E показывает результаты оценок массы опухоли для мышей, принимающих более высокую дозу CAR+ (1 × 10⁶) и получающих ежедневное внутрибрюшинное введение 10 мг/кг леналидомида или контрольной несущей среды, либо начинающееся в день -1 (за день до введения CAR-T) (одновременно с леналидомидом (леналидомид (C), либо несущей среды (несущая среда (C)) в день 14 после введения T-лимфоцитов CAR (или имитационных клеток) (отсроченный леналидомид (D)). Результаты показаны до дня 60, как анализируется по биолюминесценции, измеренной посредством проточной цитометрии. Фиг.10F показывает процент выживаемости мышей в присутствии или в отсутствие леналидомида. Фигуры 10G и 10H показывают проточный цитометрический анализ контрольных имитационных клеток и Т-лимфоцитов CAR в крови мышей в дни 8, 14, 22 и 28 после инъекции Т-лимфоцитов CAR от двух доноров.

[0150] Фиг.11 показывает количество Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ в культурах Т-лимфоцитов CAR анти-CD19, стимулируемых субоптимальной концентрацией анти-CD3, в присутствии в присутствии и в отсутствие леналидомида.

[0151] Фиг.12A показывает количество Т-лимфоцитов CD3+/ CAR+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени после вливания, для субъектов, сгруппированных по наилучшей общей реакции.

[0152] Фиг.12B показывает количество Т-лимфоцитов CD3+/CAR+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени, после вливания субъектам, которые достигают реакции, сгруппированным по непрерывной реакции через 3 месяца.

[0153] Фигуры 12C-12D показывают уровни T-лимфоцитов CD4+/CAR⁺ и CD8+/CAR+ в периферической крови, измеренные в определенные моменты времени, после вливания субъектам, которые достигают реакции, сгруппированным по непрерывной реакции через 3 месяца.

[0154] Фиг.13A показывает количество T-лимфоцитов CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ в периферической крови субъекта с превращенной в неподдающуюся химиотерапии DLBCL, измеренное в определенные моменты времени. Фиг.13B показывает изображение аксиальной ПЭТ-КТ до лечения, показывающие интракраниальную аномалию в правой средней черепной ямке и обширную аномалию в подкожных тканях в правой задней аурикулярной области. Фиг.13C представляет собой изображение ПЭТ-КТ после лечения, показывающее разрешение аномалии на Фиг.13B после лечения Т-лимфоцитами CAR+ анти-CD19. Фиг.13D представляет собой изображение МРТ головного мозга до лечения (T₁-взвешенное изображение высокого разрешения с использованием контрастного материала; аксиальный вид), показывающий однородное увеличение массы в правой средней черепной ямке. Фиг.13E представляет собой изображение МРТ после лечения, показывающее почти полное разрешение увеличения массы. Фиг.13F представляет собой аксиальное изображение ПЭТ-КТ при возобновлении заболевания, показывающее повторное появление правой задней аурикулярной опухоли, связанное с интенсивным потреблением ¹⁸F-фтордеоксигликозы (стрелка). Фиг.13G представляет собой изображение ПЭТ-КТ, показывающее разрешение задней аурикулярной опухоли после инцизионной биопсии и повторного размножения Т-лимфоцитов CAR+.

[0155] Фиг.14 показывает уровень жизнеспособных целевых клеток в течение периода приблизительно 120 часов, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 5:1 в присутствии или в отсутствие 1 нМ, 5 нМ, 60 нМ, 550 нМ или 5000 нМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контроль).

[0156] Фиг.15A показывает уровни экспрессирования CD25+ в Т-лимфоцитах как CD4+, так и в CD8+, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии леналидомида или альтернативного соединения, нацеленного на киназу.

[0157] Фиг.15B показывает уровни экспрессирования CD25+ в Т-лимфоцитах, как CD4+, так и CD8+, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками PD-1 в присутствии леналидомида или альтернативного соединения, нацеленного на киназу.

[0158] Фиг.16 показывает количество IL-10 в супернатантах культур после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 3:1 или 9:1, в присутствии или в отсутствие различных концентраций леналидомида.

[0159] Фиг.17A показывает кратное увеличение количества клеток после стимулирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 от двух доноров (pt 1 и pt 2) эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу. Фиг.17B показывает количество удвоений клеток по сравнению с начальным количеством после 2-ого и 4-ого стимулирования.

[0160] Фиг.18A показывает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 от двух донорных клеток (pt 1 и pt 2), повторно стимулируемых клетками K562-CD19 (мечеными NucLight Red (NLR)) и в присутствии 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу.

[0161] Фиг.18B показывает процент уничтожения целевых клеток Т-лимфоцитами CAR+ анти-CD19 от двух донорных клеток (1 или 2), повторно стимулируемыми с помощью клеток K562-CD19, по сравнению с контролем - только несущая среда (установленным при 100%).

[0162] Фиг.19A показывает гистограмму окрашивания CTV клеток, в целом, в композиции T-лимфоциттов CAR+ анти-BCMA после инкубирования с шариками (200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированные шарики) при отношении Т-лимфоцитов к шарикам 1:1 и в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида.

[0163] Фиг.19B и Фиг.19C показывают гистограммы проточной цитометрии для CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ (левая панель) или в Т-лимфоцитах CD8+ (правая панель), присутствующего в композиции T-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA? после инкубирования с шариками (200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированные шарики) при отношении Т-лимфоцитов к шарикам или иммобилизованным анти-CD3 1:1, соответственно, в присутствии или в отсутствие леналидомида.

[0164] Фигуры 20A-20I показывают графики, изображающие уровни факторов транскрипции и маркеров активирования в Т-лимфоцитах CD4+ (левые панели) или Т-лимфоцитах CD8+ (правые панели)? присутствующих в композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA или на них, после инкубирования без стимулирования или при различных количествах BCMA-конъюгированных шариков или конъюгированных шариков анти-CD3 и анти-CD28 и в присутствии 0 мкМ, 0,5 мкМ или 50 мкМ леналидомида. Показаны уровни Blimp1 (Фиг.20A), CD25 (Фиг.20B), CD31 (Фиг.20C), PD-1 (Фиг.20D), Tbet (Фиг.20E), EOMES (Фиг.20F), GATA3 (Фиг.20G), Helios (Фиг.20H) и Ikaros (Фиг.20I). 200 BCMA, 50 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками в количестве 200, 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0165] Фиг.21A-C показывают графики, изображающие уровни внеклеточного IFN-гамма (Фиг.21A), IL-2 (Фиг.21B) и TNF альфа (Фиг.21C) от культур после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с двумя различными количествами BCMA-конъюгированных шариков? в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. 50 мкг BCMA и 5 мкг BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками в количестве 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0166] Фиг.21D показывает график, изображающий уровни внеклеточного IL-2 от культур после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от двух разных доноров с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков, в присутствии 0 мкМ, 1 мкМ, или 5 мкМ леналидомида. 200 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками, в количестве 200 мкг и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0167] Фиг.21E и Фиг.21F показывают общие отсчеты клеток после культивирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после инкубирования в течение 4 дней (Фиг.21E) или 7 дней (Фиг.21F) с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков в присутствии 5 мкМ леналидомида. 50 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования антигена BCMA с шариками в количестве 50 мкг и 5 мкг BCMA, приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0168] Фиг.21G показывает гистограммы окрашивания CTV Т-лимфоцитов CD4+ или Т-лимфоцитов CD8+ в композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после инкубирования в течение 4 или 7 дней с BCMA-конъюгированными шариками в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда).

[0169] Фиг.21H и 21I показывают графики, изображающие процент клеток положительных по суррогатному маркеру EGFRt, как определено с помощью антитела анти-EGFR, после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в течение 4 дней (Фиг.21H) или 7 дней (Фиг.21I) с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда). “50” и “5” показывают шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками, в количестве 50 мкг и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0170] Фиг.21J показывает процент уничтожения клеток для целевых клеток RPMI-8226 с помощью эффекторных Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, которые инкубируют с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков, в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда). Показана цитолитическая активность композиций, содержащих отношение эффекторных клеток к целевым клеткам 3:1 или 1:1 и в присутствии или в отсутствие, в будущем, леналидомида. “50” и “5” показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA, с шариками в количестве 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 10⁸ шариков, соответственно.

[0171] Фиг.22A показывает проточный цитометрический анализ фосфорилированных STAT5 после 2 часов стимулирования CAR (stim) с 50 мкг шариков BCMA. Отсутствие контрольного стимулирования показано точечной линией. Фиг.22B показывает проточный цитометрический анализ внутриклеточных уровней цитокинов на репрезентативном доноре нормальных T CAR после 24 часов стимулирования шариками BCMA (настроенного на трансдуцированных живых CD3+).

[0172] Фиг.23A-23B показывает результаты анализа последовательного повторного стимулирования композиций T-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые инкубируют в течение семи дней с BCMA-конъюгированными шариками (50 мкг/мл). Показаны результаты композиций от трех разных доноров. Фиг.23A и Фиг.23B показывают цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в каждый из моментов времени для двух разных доноров.

[0173] Фиг.24A показывает результаты антиген-специфичной цитолитической активности CAR, и Фиг.24B показывает результаты для продуцирования цитокинов для Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые предварительно стимулируют шариками с BCMA (по сравнению с свежеоттаявшими (не стимулируемыми предварительно) Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA) в сокультурах, сравнивая клетки, культивируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида. Фиг.24C показывает общую жизнеспособность и отсчеты клеток, оцениваемые для трех доноров T CAR анти-BCMA. Фиг.24D показывает результаты проточного цитометрического анализа поверхностной экспрессии CD25 и PD-1 (средняя интенсивность флуоресценции (MFI), для T-лимфоцитов CD4+ или CD8+ CAR анти-BCMA после стимулирования (предварительной обработки) с BCMA шариками в течение 7 дней, в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида. Фиг.24E показывает проточный цитометрический анализ среди доноров CAR T относительно медианной интенсивности флуоресценции (MFI; CD25 и Tim3) или процент положительных маркеров PD-1 и Lag3 на поверхности T-лимфоцитов в подмножествах CD4+ CAR+ и CD8+ CAR+ (настроенных на живых клетках CD3+). Показанные значения представляют собой фоновый процент (Veh) MFI, жизнеспособность или отсчеты.

[0174] Фиг.25A показывает анализ продуцирования эффекторных цитокинов после CAR-специфичного стимулирования 50 мкг шариков BCMA в течение 24 часов в присутствии 1 мкМ леналидомида по сравнению с фоновой (от несущей среды) реакцией для каждого из трех доноров.

[0175] Фиг.25B показывает воздействия Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, активированных на различных концентрациях шариков BCMA (то есть, 5 мкг, 50 мкг и 200 мкг), в присутствии или в отсутствие леналидомида (0,1 мкМ или 1 мкМ) на продуцирование эффекторных цитокинов CAR T.

[0176] Фиг.25C показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA, полученными от репрезентативных здоровых доноров и от пациентов с множественной миеломой, стимулируемых шариками BCMA с добавлением PD-L1 на шарики или без него, в присутствии 1 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.

[0177] Фигуры 26A и 26B показывают результаты анализа главных компонентов (PCA) для экспрессирования генов (на основе результатов RNA-seq; Фиг.26A) и доступности хроматина (на основе результатов ATAC-seq; Фиг.26B), в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-BCMA, генерируемых 4 разными донорами (Доноры 1-4), стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками в течение 24 часов (24 час+stim) или 7 дней (d7+stim), или культивируемых без стимулирования в течение 24 часов (24 час), в присутствии или в отсутствие леналидомида.

[0178] Фигуры 27A и 27B показывают вулканные диаграммы, изображающие статистическую значимость выражения (log₁₀ установленной p-величины) с log₂-кратным изменением экспрессии генов, включая гены или пики, которые показывают повышенную (правая сторона) или пониженную (левая сторона) экспрессию в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.27A) или 7 дней (d7+stim, Фиг.27B), в присутствии или в отсутствие леналидомида. Таблицы показывают количество генов или пиков, которые показывают статистически значимое увеличение (up) или уменьшение (down) экспрессирования.

[0179] Фигуры 27C и 27D показывают вулканные диаграммы, изображающие статистическую значимость выражения (установленной log₁₀ p-величины) с log₂-кратным изменением доступности хроматина G, включая гены или пики, которые показывают повышенную (правая сторона) или пониженную (левая сторона) доступность, в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.27C) или 7 дней (d7+stim, Фиг.27D). Таблицы показывают количество генов или пиков, которые показывают статистически значимое увеличение (up) или уменьшение (down) доступности.

[0180] Фигуры 28A и 28B показывают направленность и значимость экспрессирования для генов на биологических сигнальных путях, которые являются обогащенными в наборах генов, для которых экспрессирование является статистически значимо повышенным или пониженным в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.28A) или 7 дней (d7+stim, Фиг.28B).

[0181] Фиг.29 показывает график, сравнивающий пики индивидуальной доступности хроматина (ромбики) и изменения средней доступности хроматина для каждого гена (кружочки), при изменении экспрессии генов, выбранные гены вовлечены в активацию Т-лимфоцитов и передачу сигналов.

[0182] Фиг.30 показывает анализ обогащения мотивов, log p-значения обогащения, распространенность и факторы транскрипции, которые, как предсказано, связывают мотивы для пиков с повышенной доступностью в присутствии леналидомида в культурах дня 7.

[0183] Фиг.31 показывает проточный цитометрический анализ внутриклеточного экспрессирования Ikaros, как в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19, так и в CAR- экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты стимулируются анти-идиотипическим антителом CAR-T (5 мкг/мл), обработанным в некотором диапазоне концентраций леналидомида или Соединения 1. Значения медианной интенсивности флуоресценции (MFI) для Ikaros нормируют и вычисляют как процент по отношению к контрольной несущей среде.

[0184] Фигуры 32A и 32B показывают анализ продуцирования цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.32A) или леналидомида (Фиг.32B) после инкубирования с целевыми клетками. Мультиплексный анализ цитокинов супернатантов, осуществляемый через 24 часа из тройных лунок CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 сокультивируемых с целевыми клетками K562.CD19 в присутствии нескольких концентраций Соединения 1 или леналидомида. Определяют концентрации IFN-γ, IL-2 и TNF-α для CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов от трех разных доноров для двух отношений E:T. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. (среднеквадратичное отклонение) по 3 экспериментам.

[0185] Фиг.33 показывает анализ цитолитической функции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в присутствии Соединения 1 или леналидомида после инкубирования с целевыми клетками. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров сокультивируют с целевыми клетками K562.CD19 в трех повторностях для двух отношений E:T в присутствии Соединения 1 или леналидомида в течение 5 дней. Результаты вычисляются как нормированный коэффициент гибели. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. по 3 экспериментам.

[0186] Фигуры 34A и 34B показывают анализ продуцирования цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.34A) или леналидомида (Фиг.34B) стимулирования анти-идиотипическими антителами. Мультиплексный анализ цитокинов супернатантов осуществляют через 24 часа из тройных лунок CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, сокультивируемых с агонистом анти-идиотипического антитела в присутствии 100 или 1000 нМ Соединения 1 (Фиг.34A), или 500 или 5000 нМ леналидомида (Фиг.34B). Определяют концентрации IFN-γ, IL-2 и TNF-α для CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов от трех разных доноров. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. по 3 экспериментам.

[0187] Фигуры 35A и 35B показывают анализ поверхностного экспрессирования маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19 (Фиг.35A) и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19, (Фиг.35B) в присутствии Соединения 1 стимулирования анти-идиотипическими антителами. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют анти-идиотипическим антителом при 0, 0,3, 3, или 30 мкг/мл в присутствии 100 или 1000 нМ Соединения 1. Клетки анализируют с помощью проточной цитометрии в день 4. Вычисляют абсолютное изменение медианной интенсивности флуоресценции по отношению к контрольной несущей среде для каждой концентрации анти-идиотипического антитела. Данные представлены по 3 экспериментам.

[0188] Фигуры 36A и 36B показывают анализ поверхностного экспрессирования маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19 (Фиг.36A) и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19 (Фиг.36B) в присутствии леналидомида после стимулирования анти-идиотипическими антителами. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют анти-идиотипическим антителом при 0, 0,3, 3 или 30 мкг/мл в присутствии 500 или 5000 нМ леналидомида. Клетки анализируют с помощью проточной цитометрии в день 4. Вычисляют абсолютное изменение медианной интенсивности флуоресценции по отношению к контрольной несущей среде для каждой концентрации анти-идиотипического антитела. Данные представляют по 3 экспериментам.

[0189] Фигуры 37A и 37B показывают анализ поверхностного экспрессирования CD28 на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.37A) или леналидомида (Фиг.37B) после последовательного стимулирования. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 каждые 3-4 дня в присутствии Соединения 1 (Фиг.37A) или леналидомида (Фиг.37B). Процент клеток положительных по CD28 измеряют с помощью проточной цитометрии в день 28.

[0190] Фиг.38 показывает анализ цитолитической функции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в присутствии Соединения 1 или леналидомида после последовательного стимулирования. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров после 24 дней последовательного стимулирования сокультивируются с облучаемыми целевыми клетками K562.CD19 в трех повторностях при двух отношениях E:T в присутствии Соединения 1 или леналидомида. Результаты вычисляются как нормированный коэффициент гибели.

[0191] Фигуры 39A и 39B показывают анализ удвоений популяции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в течение 28-дневнего периода последовательного стимулирования в присутствии или в отсутствие Соединения 1. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 или 10:1 каждые 3-4 дня в присутствии 500 нМ Соединения 1 в течение 28 дней (представлены с помощью оси х). Клетки считают после каждого стимулирования и вычисляют удвоение клеток. (Фиг.39A) Процентное изменение удвоений клеток в день 24 последовательного стимулирования в присутствии 10 нМ, 100 нМ или 500 нМ Соединения 1 показано на Фиг.39B. Данные представляют среднее значение +/-S.E.M (стандартная ошибка среднего) обработок с тройной повторностью от 3 доноров. Каждая стрелка представляет момент времени повторного стимулирования.

[0192] Фигуры 40A и 40B показывают анализ удвоений популяции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в течение 28-дневного периода последовательного стимулирования в присутствии или в отсутствие леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 или 10:1 каждые 3-4 дня в присутствии 1000 нМ леналидомида в течение 28 дней (представлено на оси х). Клетки считают после каждого стимулирования и вычисляют удвоение клеток. (Фиг.40A) Процентное изменение удвоений клеток в день 24 последовательного стимулирования в присутствии 100 нМ или 1000 нМ леналидомида показано на Фиг.40B. Данные представляют среднее значение +/-S.E.M обработок с тройной повторностью от трех доноров. Каждая стрелка представляет момент времени повторного стимулирования.

Подробное описание

[0193] В настоящем документе предлагается сочетанная терапия, включающая введение иммунотерапии, включающей функционирование или активность T-лимфоцитов, такой как Т-клеточная терапия, и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида, и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы. В некоторых аспектах, предлагаемые способы усиливают или модулируют пролиферацию и/или активность T-лимфоцитов, связанную с введением иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, такого как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такой, например, как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). В некоторых таких вариантах осуществления, сочетанная терапия включает введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог талидомида и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы, и введение Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов).

[0194] Терапия на основе T-лимфоцитов, такая как адоптивная T-клеточная терапия (включая терапию, включающую введение клеток, экспрессирующих химерные рецепторы специфичные для заболевания или расстройства, представляющего интерес, такие как химерные рецепторы антигенов (CAR) и/или другие рекомбинантные рецепторы антигенов, а также другие виды адоптивной иммунноклеточной и адоптивной T-клеточной терапии) могут быть эффективными при лечении ракового заболевания и других заболеваний и расстройств. Сконструированное экспрессирование рекомбинантных рецепторов, таких как химерные рецепторы антигенов (CAR), на поверхности Т-лимфоцитов делает возможным перенаправление специфичности T-лимфоцитов. В клинических исследованиях, Т-лимфоциты CAR, например, Т-лимфоциты CAR анти-CD19, продуцируют стойкие полные реакции у пациентов, как с лейкозом, так и с лимфомой (Porter et al. (2015) Sci Transl Med., 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33: 540-9; Lee et al. (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al. (2014) N Engl J Med, 371:1507-17).

[0195] В определенном контексте, доступные подходы к адоптивной клеточной терапии не всегда могут быть полностью удовлетворительными. В некотором контексте, оптимальная эффективность может зависеть от способности вводимых клеток распознавать и связывать мишень, например, целевой антиген, к нахождению локализации и успешному проникновению в соответствующие центры у субъекта, в опухоли и в их окружение. В некотором контексте, оптимальная эффективность может зависеть от способности вводимых клеток активироваться, размножаться, осуществлять различные эффекторные функции, включая цитотоксическое уничтожение и секрецию различных факторов, таких как цитокины, к персистентности, включая долговременную, к дифференциации, к переходу или вступлению при перепрограммировании в определенные фенотипические состояния (такие как состояние с долгоживущей памятью, менее дифференцированные и эффекторные состояния), чтобы исключить или уменьшить иммуносупрессивные состояния в локальном микроокружении заболевания, к обеспечению эффективных и устойчивых повторных реакций после перерыва и повторного экспонирования для целевого лиганда или антигена и для предотвращения или уменьшения истощения, слабости, периферической толерантности, конечной дифференциации и/или дифференциации в супрессивное состояние.

[0196] В некоторых вариантах осуществления, экспонирование и персистентность генно-инженерных клеток уменьшаются или падают после введения субъекту. Кроме того, наблюдение показывает, что, в некоторых случаях, повышенное экспонирование субъекта для вводимых клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, (например, увеличение количества клеток или продолжительности по времени) может улучшить эффективность и терапевтические результаты адоптивной клеточной терапии. Предварительный анализ, осуществляемый после введения различных нацеленных на CD19 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов субъектам с различными CD19-экспрессирующими раковыми заболеваниями, во множестве клинических исследований, доказывает корреляцию между большей и/или более продолжительной степенью экспонирования для CAR-экспрессирующих клеток и результатами лечения. Такие результаты включают выживаемость и ремиссию у пациента, даже у индивидуумов с острой стадией или значительной массой опухоли.

[0197] В некоторых аспектах, предлагаемые способы и применения обеспечивают или достигают улучшенных или более стойких реакций или эффективности по сравнению с определенными альтернативными способами, например, в конкретных группах леченых субъектов. В некоторых вариантах осуществления, способы являются преимущественными, благодаря введению Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такой, например, как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида.

[0198] Предлагаемые способы основаны на тех наблюдениях, что иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, улучшает функционирование T-лимфоцитов, включая функции, относящиеся к размножению, пролиферации и персистентности Т-лимфоцитов. Леналидомид представляет собой иммуномодуляторное лекарственное средство, одобренное в настоящее время для лечения множественной миеломы (MM) и мантийноклеточной лимфомы (MCL) и клинически исследованное при терапии диффузной В-крупноклеточной лимфомы, иммунофенотипа с активированными B-лимфоцитами. В некоторых случаях, леналидомид повышает противоопухолевые иммунные реакции, по меньшей мере, частично, посредством модулирования активности комплекса E3 убиквитинлигазы и цереблона (CRBN), что приводит к повышению убиквитинилирования факторов транскрипции Ikaros и Aiolos, что в свою очередь дает в результате изменение экспрессирования различных рецепторов на поверхности опухолевых клеток (смотри, например, et al. (2016) Oncoimmunology, April; 5(4): e1115940).

[0199] Предлагаемые данные показывают, что сочетанная терапия с иммуномодуляторным соединением, таким как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, в способах, включающих Т-лимфоциты, например, включающих введение адоптивной Т-клеточной терапии, достигает улучшения функции Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, сочетание клеточной терапии (например, введение генно-инженерных Т-лимфоцитов) с иммуномодуляторным соединением, например, леналидомидом, улучшает или усиливает одну или несколько функций и/или воздействий Т-клеточной терапии, такую как персистентность, размножение, цитотоксичность, и/или терапевтические результаты, например, способность уничтожать или уменьшать массу опухоли или другой болезненной или целевой клетки.

[0200] В конкретных аспектах, в настоящем документе, обнаружено, что иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, способствует непрерывному функционированию и/или выживанию клеток от Т-клеточной терапии (например, Т-лимфоцитов CAR) после активирования, в том числе после встречи с антигеном. В некоторых аспектах, леналидомид повышает способность таких Т-лимфоцитов к персистентности или долговременному функционированию, например, посредством предотвращения истощения или гибели клеток. В некоторых вариантах осуществления, такие улучшения могут давать в результате сочетанную терапию, демонстрирующую улучшенные общие реакции, например, уменьшение массы опухоли, и/или улучшенную выживаемость по сравнению с субъектами, лечеными с помощью монотерапии, включающей введение одной только Т-клеточной терапии (например, T-лимфоцитов CAR) или иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида). В некоторых аспектах, предлагаемые способы повышают общую реакцию и/или выживаемость более чем 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более, по сравнению с альтернативным лечением, например, по сравнению с монотерапией, включающей введение одной только Т-клеточной терапии (например, T-лимфоцитов CAR) или иммуномодуляторного соединения (например, леналидомид).

[0201] В некоторых вариантах осуществления, сочетание с иммуномодуляторным соединением, хотя улучшает один или несколько результатов или функциональных атрибутов, не влияет на одно или несколько побочных воздействий или нежелательных изменений в Т-лимфоцитах, например, не уменьшает способности клеток к активированию, секретированию одного или нескольких желательных цитокинов, размножению и/или персистентности, например, как измерено при анализе in vitro, по сравнению с такими клетками, культивируемыми при условиях во всем остальном таких же, но в отсутствие иммуномодуляторного соединения. Таким образом в некоторых вариантах осуществления, предлагаются способы и сочетания, которые дают в результате улучшение функции или фенотипа T-лимфоцитов, например, собственной функциональности T-лимфоцитов и/или собственного фенотипа T-лимфоцитов, как правило, без ослабления одного или нескольких других желаемых свойств или функциональности, например, функциональности T-лимфоцитов CAR.

[0202] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы могут усиливать Т-клеточную терапию, например, терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR, что, в некоторых аспектах, может улучшить результаты лечения. В некоторых вариантах осуществления, эти способы являются особенно преимущественными для субъектов, у которых клетки от Т-клеточной терапии демонстрируют слабое размножение, истощаются, демонстрирует уменьшенную или пониженную персистентность у субъекта и/или субъектов, которые имеют раковое заболевание, которое является стойким или не поддающимся лечению при других видах терапии, представляет собой агрессивный рак или рак с высокой степенью риска и/или который демонстрирует или, вероятно, демонстрирует относительно более низкую долю реакции на терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR, вводимую без иммуномодуляторного соединения, по сравнению с другим типом ракового заболевания или по сравнению с введением другой терапии с помощью Т-лимфоцитов CAR.

[0203] В некоторых аспектах, предлагаемые способы могут улучшить, увеличить или усилить Т-клеточную терапию таким образом, чтобы преодолеть отсутствие персистентности и/или истощение Т-лимфоцитов, например, у субъектов, которые соответствуют или примерно соответствуют дню 12-15 после начала введения Т-клеточной терапии, в крови детектируется меньше 10 мкл, например, меньше 5 мкл или меньше 1 мкл таких клеток, или их подмножества CD8+ или CD3+. В некоторых вариантах осуществления, субъект, получающий введение Т-клеточной терапии, например, Т-лимфоцитов CAR, отслеживается относительно присутствия, отсутствия или уровня Т-лимфоцитов от терапии у субъекта, например, в биологическом образце от субъекта, например, в крови субъекта. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится субъекту, получающему Т-клеточную терапию (например, Т-лимфоциты CAR), но у него такие клетки слабо размножаются и/или находятся на пороговом уровне или ниже его в образце от субъекта, например, в образце крови, в то время когда сильное или устойчивое размножение Т-лимфоцитов CAR у субъекта, как правило, наблюдается у множества субъектов, получающих Т-клеточную терапию (например, CAR-T), в некоторых случаях, такую же Т-клеточную терапию (например, такие же Т-лимфоциты CAR). В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится, если в день 12-15 или примерно в этот день после начала введения Т-клеточной терапии в крови детектируются меньше 10 мкл, например, меньше 5 мкл или меньше 1 мкл таких клеток, или их подмножества CD8+ или CD3+.

[0204] В определенных аспектах, предлагаемые способы могут улучшить, увеличить или усиливать Т-клеточную терапию у субъектов, у которых наблюдается пиковая реакция на Т-клеточную терапию, но, у которых реакция, например, присутствие Т-лимфоцитов и/или уменьшение массы опухоли, уменьшается или больше не детектируется. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится субъекту в пределах одной недели, например, в пределах, 1, 2 или 3 дней после того как: (i) пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии детектируется в крови субъекта; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0205] В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения заболевания или состояния, например, рака В-лимфоцитов или гематологического злокачественного новообразования, и в частности, заболеваний, состояний или злокачественных новообразований, при которых реакции, например, полная реакция, на лечение с помощью одной только Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такая например как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), является относительно низкой по сравнению с лечением с помощью других видов T-клеточной терапии или лечением других заболеваний или злокачественных новообразований (например, CR у менее чем или у менее примерно 60%, у менее примерно 50% или у менее примерно 45% субъектов, леченых таким образом) и/или, при котором субъект не реагирует на лечение иммуномодуляторным соединением, таким как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, само по себе.

[0206] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, предложенная в настоящем документе, предназначена для применения к субъекта, имеющего раковое заболевание, у которого после начала введения Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, у субъекта возобновляется заболевание после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, субъектам, которые имеют рецидив после такой ремиссии, вводится иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид. В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, предложенная в настоящем документе, предназначается для применения у субъекта, имеющего заболевание или состояние, например, раковое заболевание, у которого количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их результата, например, является недостаточным для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или симптома или результата. В некоторых вариантах осуществления, способ тем самым уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до степени, которая больше, чем сочетание (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении только одного иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние. В некоторых вариантах осуществления, способ уменьшает или облегчает такие симптомы, результаты лечения или тяжести заболевания, например, по сравнению со средним значением для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, больше, чем или больше примерно, чем 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 6,0-кратно, 7,0-кратно, 8,0-кратно, 9,0-кратно, 10,0-кратно, 20,0-кратно, 30,0-кратно, 40,0-кратно, 50,0-кратно или больше.

[0207] В некоторых вариантах осуществления, предложенная сочетанная терапия используется в сочетании с лечением определенных заболеваний или состояний, например, ракового заболевания, при котором оптимальное стимулирование рекомбинантного рецептора антигена, например, Т-лимфоцитов CAR, является сложным для достижения и/или не наблюдается постоянно. В некоторых вариантах осуществления, стимулирование меньше оптимального может представлять собой результат низких или недоступных уровней болезненного антигена in vivo, например, в опухоли или на ней. В некоторых вариантах осуществления, определенные виды рака, такие как NHL, например, NHL с высоким риском или агрессивная NHL, такая как DLBCL, и/или хронический лимфолейкоз (CLL), могут быть связаны с дефектами или уменьшением собственной функциональности Т-лимфоцитов, на которые, в некоторых случаях, влияет само заболевание. Например, патогенез многих раковых заболеваний, таких как CLL и NHL, например, DLBCL, может быть связан с иммунодефицитом, приводящим к облегчению роста опухоли и к иммунному уклонению, например, вызываемому иммуносупрессией Т-лимфоцитов, например, запускаемому одним или несколькими факторами в микроокружении опухоли. В некоторых случаях, облегчение собственных дефектов Т-лимфоцитов, полученных от раковых заболеваний таких пациентов, для применения в сочетании с адоптивной клеточной терапией могло бы обеспечить более сильные реакции на адоптивную Т-клеточную терапию, например, терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR. В некоторых случаях, стимулирование меньше оптимального может вызываться различиями в уровне экспрессирования CAR на Генно-инженерных Т-лимфоцитах, вводимых субъекту. В любом из таких вариантов осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, может улучшить стимулирование или активность таких Т-лимфоцитов in vivo у субъекта.

[0208] В некоторых вариантах осуществления предлагаемых способов, одно или несколько свойств вводимых генно-инженерных клеток можно улучшить или увеличить или сделать больше по сравнению с вводимыми клетками эталонной композиции, например, увеличить или продлить размножение и/или персистентность таких вводимых клеток у субъекта или увеличить или сделать больше вызванную реакцию при повторном стимулировании с помощью антигена. В некоторых вариантах осуществления, повышение может представлять собой, по меньшей мере, 1,2-кратное, по меньшей мере, 1,5-кратнео, по меньшей мере, 2-кратное, по меньшей мере, 3-кратнео, по меньшей мере, 4-кратное, по меньшей мере, 5-кратное, по меньшей мере, 6-кратное, по меньшей мере, 7-кратное, по меньшей мере, 8-кратное, по меньшей мере, 9-кратное, или, по меньшей мере, 10-кратное увеличение такого свойства или особенности по сравнению с таким же свойством или особенностью при введении эталонной композиции клеток. В некоторых вариантах осуществления, увеличение одного или нескольких таких свойств или особенностей можно наблюдать или оно присутствует в пределах 7 дней, 14 дней, 21 дней, в пределах одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев, пяти месяцев, шести месяцев или 12 месяцев после введения генно-инженерных клеток и начала введения иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид.

[0209] В некоторых вариантах осуществления, эталонная композиция клеток может представлять собой композицию Т-лимфоцитов из крови субъекта, не имеющего или, как ожидается, не имеющего ракового заболевания, или представляет собой популяцию Т-лимфоцитов, полученных, выделенных, генерируемых, продуцируемых, инкубируемых и/или вводимых при таких же или, по существу, при таких же условиях, за исключением того, что они не инкубируются или не вводятся в присутствии иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, эталонная композиция клеток содержит генно-инженерные клетки, которые являются по существу таким же, включая экспрессирование такого же рекомбинантного рецептора, например, CAR. В некоторых аспектах, такие Т-лимфоциты обрабатываются идентично или, по существу, идентично, например, производятся сходным образом, приготавливаются сходным образом, вводятся при такой же или примерно при такой же величине дозы и при других сходных факторах.

[0210] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы дают в результате генно-инженерные клетки с улучшенной персистентностью и/или с большей потенцией у субъекта, которому их вводят. В некоторых вариантах осуществления, персистентность генно-инженерных клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, у субъекта больше по сравнению с тем, чего можно было бы достигнуть с помощью альтернативных способов, таких как способы, включающие введение эталонной композиции клеток, например, введение Т-клеточной терапии, но без введения иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, персистентность увеличивается, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно, 6-кратно, 7-кратно, 8-кратно, 9-кратно, 10-кратно, 20-кратно, 30-кратно, 50-кратно, 60-кратно, 70-кратно, 80-кратно, 90-кратно, 100-кратно или больше.

[0211] В некоторых вариантах осуществления, степень или уровень персистентности вводимых клеток можно детектировать или определять количественно после введения субъекту. Например, в некоторых аспектах, используют количественную PCR (qPCR) для оценки количества клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток) в крови или сыворотке или органе или ткани (например, болезненном центре) субъекта. В некоторых аспектах, персистентность количествеено определяется как количество копий ДНК или плазмиды, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, или как количество рецептор-экспрессирующих, например, CAR-экспрессирующих клеток на микролитр образца, например, крови или сыворотки, или относительно общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) или лейкоцитов или T-лимфоцитов на микролитр образца. В некоторых вариантах осуществления, можно также осуществлять проточный цитометрический анализ для детектирования клеток, экспрессирующих рецептор, как правило, с использованием антител специфичных к этим рецепторам. Анализы на основе клеток также можно использовать для детектирования количества или процента функциональных клеток, таких как клетки способные к связыванию и/или нейтрализации и/или индуцированию реакций, например, цитотоксических реакций, против клеток заболевания или состояния или экспрессирующих антиген, распознаваемый рецептором. В любом из таких вариантов осуществления, степень или уровень экспрессирования другого маркера, связанного с рекомбинантным рецептором (например, CAR-экспрессирующих клеток), можно использовать, чтобы отличить введенные клетки из эндогенных клеток у субъекта.

[0212] Также предлагаются способы генной инженерии, приготовления и продуцирования клеток, композиции, содержащие клетки и/или иммуномодуляторное соединение и наборы, и устройства, содержащие клетки и/или иммуномодуляторные соединения и предназначенные для использования, продуцирования и введения клеток и/или иммуномодуляторного соединения, например, вместе с предлагаемыми способами сочетанной терапии.

[0213] Все публикации, включая патентные документы, научные статьи и базы данных, упоминаемые в настоящей заявке, включаются в качестве ссылок во всей их полноте для всех целей до такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация отдельно включалась как ссылка. Если определение, приведенное в настоящем документе, противоречит или иным образом не совпадает с определением, приведенным в патентах, заявках, опубликованных заявках и других публикациях, которые включаются в настоящий документ в качестве ссылок, определение, приведенное в настоящем документе, преобладает над определением, которое включается в настоящий документ в качестве ссылки.

[0214] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для целей организации и не рассматриваются как ограничивающие описанный предмет изобретения.

I. Cочетанная терапия

[0215] В настоящем документе предлагаются способы сочетанной терапии для лечения заболевания или расстройства, например, ракового или пролиферативного заболевания, которые включают введение субъекту сочетанной терапии из 1) иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида, и 2) Т-клеточной терапии, например, CAR-экспрессирующих клеток, например, Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой адоптивную иммуноклеточную терапию, включающую Т-лимфоциты, которые специфично распознают антиген, связанный с заболеванием или расстройством, например, раковым или пролиферативным заболеванием, и/или нацелены на него. Также предлагаются сочетания и промышленные изделия, такие как наборы, которые содержат композицию, содержащую Т-клеточную терапию, и/или композицию, содержащую иммуномодуляторное соединение, и применения таких композиций и сочетаний для лечения или предотвращения заболеваний, состояний и расстройств, включая раковые заболевания.

[0216] В некоторых вариантах осуществления, такие способы могут включать введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида, до, одновременно, в ходе, в течение курса (включая однократно и/или периодически в течение курса), и/или после введения (например, начала введения) Т-клеточной терапии (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). В некоторых вариантах осуществления, введение может включать последовательное или чередующееся введение иммуномодуляторного соединения и Т-клеточной терапии.

[0217] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия представляет собой адоптивную клеточную терапию. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия представляет собой или включает проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию, трансгенную TCR терапию или терапию с помощью клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (необязательно, Т-клеточную терапию), который необязательно представляет собой терапию с помощью клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, терапия представляет собой терапию, нацеленную на B-лимфоциты. В некоторых вариантах осуществления, терапия нацелена на антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA). В некоторых вариантах осуществления, терапия нацелена на CD19. В некоторых вариантах осуществления, клетки и режимы дозирования для введения клеток могут включать любые клетки и режимы дозирования, как описано в следующем далее подразделе A под заглавием “Введение Т-клеточной терапии”.

[0218] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает функциональность T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приводит в действие анти-миеломную активность. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение изменяет супрессивное микроокружение. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный или функциональный аналог или производное талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид или соединение с такими же свойствами как у леналидомида или со сходными свойствами, включая аналоги или производные, стереоизомер леналидомида или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, режимы дозирования для введения иммуномодуляторного соединения могут включать любой режим, как описано в следующем далее подразделе B под заглавием “Введение иммуномодуляторного соединения”.

[0219] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) и иммуномодуляторное соединение предлагаются как фармацевтические композиции для введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат терапевтически эффективные количества одного или обоих агентов для сочетанной терапии, например, Т-лимфоциты для адоптивной клеточной терапии и иммуномодуляторное соединение, как описано. В некоторых вариантах осуществления, агенты приготавливают для введения в отдельных фармацевтических композициях. В некоторых вариантах осуществления, любые фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем документе, могут приготавливаться в воде дозированных форм, соответствующих каждому способу введения.

[0220] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, которая включает введение Т-клеточной терапии, включая генно-инженерные клетки, например, терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR, и иммуномодуляторного соединения, вводится субъекту или пациенту, имеющему заболевание или состояние, которое должно лечиться (например, раковое заболевание), или имеет риск возникновения заболевания или состояния (например, ракового заболевания). В некоторых аспектах, способы лечат, например, облегчают один или несколько симптом заболевания или состояния, например, посредством уменьшения массы опухоли при раковом заболевании, экспрессирующем антиген, распознаваемый с помощью иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, например, распознаваемый с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.

[0221] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние, которое лечат, может представлять собой любое заболевание или состояние, при котором экспрессирование антигена связано с этиологией болезненного состояния или расстройства и/или вовлечено в него, например, вызывает, обостряет или иным образом вовлечено в такое заболевание, состояние или расстройство. Иллюстративные заболевания и состояния могут включать заболевания или состояния, связанные со злокачественным новообразованием или с трансформацией клеток (например, с раковым заболеванием), аутоиммунным или воспалительным заболеванием, или с инфекционным заболеванием, например, вызываемым бактериальными, вирусными или другими патогенами. Иллюстративные антигены, которые включают антигены, связанные с различными заболеваниями и состояниями, которые могут лечиться, включают любые антигены, описанные в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, экспрессируемый на генно-инженерных клетках от сочетанной терапии, включая химерные рецепторы антигена или трансгенный TCR, специфично связывается с антигеном, связанным с заболеванием или состоянием.

[0222] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой опухоль, такую как плотная опухоль, лимфома, лейкоз, кровяная опухоль, метастатическая опухоль или другой тип ракового заболевания или опухоли.

[0223] В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов или гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой лимфоцитарный лейкоз (ALL), неходжкинскую лимфому (NHL) или хронический лимфолейкоз (CLL). В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой CLL. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения миеломы, лимфомы или лейкоза. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения неходжкинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфолейкоза (CLL), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (DLBCL), острого миелолейкоза (AML) или миеломы, например, множественной миеломы (MM). В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения MM или DBCBL.

[0224] В некоторых вариантах осуществления, антиген, связанный с заболеванием или расстройством, выбирается из группы, состоящей из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, или 4, димеров erbB, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, kdr, легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 рецептора a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена и антигена, связанного с универсальной меткой, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, MUC1, MUC16, PSCA, лигандов NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), специфичного антигена предстательной железы, PSMA, Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138 и патоген-специфичного антигена. В некоторых вариантах осуществления, антиген связан с универсальной меткой или представляет собой ее.

[0225] В некоторых вариантах осуществления раковое заболевание или пролиферативное заболевание экспрессирует BCMA. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы используют Т-лимфоцит, экспрессирующий рекомбинантный рецептор (например, Т-лимфоциты CAR), который нацелен на BCMA.

[0226] В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения не-гематологического ракового заболевания, такого как плотная опухоль. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения рака мочевого пузыря, легких, головного мозга, меланомы (например, мелкоклеточной меланомы легких), рака молочной железы, рака шейки матки, яичников, ободочной и прямой кишки, поджелудочной железы, эндометрия, пищевода, почек, печени, предстательной железы, кожи, щитовидной железы или матки. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой рак поджелудочной железы, рак мочевого пузыря, рак ободочной и прямой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак почек, гепатоцеллюлярный рак, рак легких, рак яичников, рак шейки матки, рак поджелудочной железы, ректальный рак, рак щитовидной железы, рак матки, рак ЖКТ, рак пищевода, рак головы и шеи, меланому, нейроэндокринные раковые заболевания, раковые заболевания ЦНС, опухоли мозга, рак костей или саркому мягких тканей.

[0227] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой инфекционное заболевание или состояние, такое как, но, не ограничиваясь этим, вирусную, ретровирусную, бактериальную и протозойную инфекцию, иммунодефицит, цитомегаловирус (CMV), вирус Эпштейна-Барра (EBV), аденовирус, BK полиомавирусы. В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой аутоиммунное или воспалительное заболевание или состояние, такое как артрит, например, ревматоидный артрит (RA), диабет Типа I, системную красную волчанку (SLE), воспалительное заболевание пищеварительного тракта, псориаз, склеродермию, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, болезнь Грейвса, болезнь Крона, множественный склероз, астму и/или заболевание или состояние, связанное с трансплантантом.

[0228] Для предотвращения или лечения заболевания, соответствующая доза иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида) и/или иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов), может зависеть от типа заболевания, которое должно лечиться, конкретного иммуномодуляторного соединения, клеток и/или рекомбинантных рецепторов, экспрессируемых на клетках, тяжести и хода заболевания, способа введения, от того вводится ли иммуномодуляторное соединение и/или Т-клеточная терапия для превентивных или терапевтических целей, от предыдущей терапии, частоты введения, истории болезни субъекта и реакции на клетки, и от суждения лечащего врача. Композиции и клетки в некоторых вариантах осуществления вводятся соответствующим образом субъекту за один раз или в ходе ряда сеансов лечения. Описываются иллюстративные режимы дозирования и временные графики предлагаемой сочетанной терапии.

[0229] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия и иммуномодуляторное соединение вводятся как часть дополнительного сочетанного лечения, которое может вводиться одновременно или последовательно с другим терапевтическим вмешательством, в любом порядке. В некотором контексте, Т-клеточная терапия, например, генно-инженерные Т-лимфоциты, такие как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, вводятся совместно с другой терапией, достаточно близко по времени, так что Т-клеточная терапия усиливает воздействие одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов, или наоборот. В некоторых вариантах осуществления, клетки вводятся до одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия, например, генно-инженерные Т-лимфоциты, такие как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, вводятся после одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления, способы сочетанной терапии дополнительно включают противолимфоцитарную терапию, такую как введение химиотерапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия дополнительно включает введение другого терапевтического агента, такого как противораковый агент, ингибитор контрольных точек или другой иммуномодулирующий агент. Использование включает применение сочетанной терапии в таких способах и видах лечения и применение таких композиций при приготовлении медикаментов для осуществления таких способов сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, способы и применение тем самым излечивают заболевание или состояние, или расстройство, такое как раковое заболевание или пролиферативное заболевание, у субъекта.

[0230] До, в ходе или после введения иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) и/или иммуномодуляторного соединения, измеряется биологическая активность Т-клеточной терапии, например, биологическая активность популяций генно-инженерных клеток, в некоторых вариантах осуществления, например, с помощью любого количества, известных способов. Параметры оценки включают способность генно-инженерных клеток, к разрушению целевых клеток, персистентность и другие меры активности T-лимфоцитов, например, как измеряется с использованием любого пригодного для использования способа известного в данной области, такого как анализы, дополнительно описанные ниже в Разделе III. В некоторых вариантах осуществления, биологическую активность клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе T-лимфоцитов, измеряют посредством анализа цитотоксического уничтожения клеток, экспрессирования и/или секретирования одного или нескольких цитокинов, пролиферации или размножения, например, при повторном стимулировании антигеном. В некоторых аспектах биологическая активность измеряется посредством оценки тяжести заболевания и/или клинического результата, такого как уменьшение массы или нагрузки опухоли. В некоторых вариантах осуществления, введение одного или обоих агентов сочетанной терапии и/или многократное введение терапии, может определяться на основе результатов анализов до, во время, в ходе курса или после введения одного или обоих агентов сочетанной терапии.

[0231] В некоторых вариантах осуществления, объединенное воздействие иммуномодуляторного соединения в сочетании с клеточной терапией может быть синергическим по сравнению с лечением, включающем только иммуномодуляторное соединение или монотерапию с помощью клеточной терапии. Например, в некоторых вариантах осуществления, способы, предлагаемые в настоящем документе, приводят в результате к увеличению или улучшению желаемого терапевтического воздействия, такому как повышение или улучшение уменьшения или замедления одного или нескольких симптомов, связанных с раковым заболеванием.

[0232] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение увеличивает размножение или пролиферацию генно-инженерных Т-лимфоцитов таких как T-лимфоцитов CAR. В некоторых вариантах осуществления, увеличение размножения или пролиферации наблюдается in vivo при введении субъекту. В некоторых вариантах осуществления, количество генно-инженерных Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов CAR, увеличивается больше или больше примерно, чем 1,2-кратно, 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 6,0-кратно, 7,0-кратно, 8,0-кратно, 9,0-кратно, 10,0-кратно или больше.

A. Введение Т-клеточной терапии

[0233] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений, предлагаемых в настоящем документе, сочетанная терапия включает введение субъекту иммунноклеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). Введение такой терапии может начинаться до, после или одновременно с введением одного или нескольких иммуномодуляторных соединений, как описано.

[0234] В некоторых вариантах осуществления, терапия на клеточной основе представляет собой или включает введение клеток, таких как иммунные клетки, например, T-лимфоциты или NK-клетки, которые нацелены на молекулу, экспрессируемую на поверхности повреждения, такого как опухоль или рак. В некоторых вариантах осуществления, иммунные клетки экспрессируют рецептор Т-лимфоцитов (TCR) или другой антиген-связывающий рецептор. В некоторых вариантах осуществления, иммунные клетки экспрессируют рекомбинантный рецептор, такой как трансгенный TCR или химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, клетки являются аутологичными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, клетки являются аллогенными для субъекта.

[0235] В некоторых аспектах, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию, трансгенную TCR-терапию или Т-клеточную терапию, включающую генно-инженерные клетки, такую как терапия с помощью клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор специфично связывается с лигандом, таким как лиганд, связанный с заболеванием или состоянием, например, связанный с клетками опухоли или рака или экспрессируемый ею. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия включает введение генно-инженерных Т-лимфоцитов для экспрессирования химерного рецептора антигена (CAR).

[0236] В некоторых вариантах осуществления, предложенные клетки экспрессируются и/или получаются с помощью генной инженерии для экспрессирования рецепторов, таких как рекомбинантные рецепторы, включая рецепторы, содержащие лиганд-связывающие домены или их связывающие фрагменты, и рецепторы Т-лимфоцитов (TCR) и их компоненты, и/или функциональные рецепторы антигена, отличные от TCR, такие как химерные рецепторы антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой CAR, который содержит внеклеточный антиген-распознающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, лиганд, такой как антиген, представляет собой белок, экспрессируемый на поверхности клеток. В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой TCR-подобный CAR и антиген представляет собой процессированный пептидный антиген, такой как пептидный антиген внутриклеточного белка, который, подобно TCR, распознается на поверхности клетки в контексте молекулы главного комплекса гистосовместимости (MHC).

[0237] Генно-инженерные клетки, включая генно-инженерные клетки, содержащие рекомбинантные рецепторы, описаны в Разделе II, ниже. Иллюстративные рекомбинантные рецепторы, включая CAR и рекомбинантный TCR, а также способы генной инженерии и введения рецепторов в клетки, включают способы, описанные, например, в публикациях Международных заявок на патент номера WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, в публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995, 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342, и в заявках на Европейский патент номер EP2537416, и/или те, которые описаны Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ОДН 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). В некоторых аспектах генно-инженерные рецепторы антигена включают CAR, как описано в патенте США №: 7446190, и они описаны в публикации Международной заявки на патент №: WO/2014055668 A1.

[0238] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает интегрин αvβ6 (интегрин avb6), антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), B7-H3, B7-H6, угольную ангидразу 9 (CA9 известную также как CAIX или G250), антиген рака яичек, антиген рака яичек 1B (CTAG, также известный как NY-ESO-1 и LAGE-2), канцероэмбриональный антиген (CEA), циклин, A2 циклин, лиганд 1 C-C мотива хемокинов (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, хондроитинсульфат протеогликан 4 (CSPG4), белок эпидермального фактора роста (EGFR), усеченный белок эпидермального фактора роста (tEGFR), мутацию рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFR vIII), эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), эфрин B2, рецептор эфрина A2 (EPHa2), рецептор эстрогенов, Fc-рецептор подобный 5 (FCRL5; также известный как гомолог 5 Fc-рецептора или FCRH5), рецептор фетального ацетилхолина (фетальный AchR), фолат-связывающий белок (FBP), рецептор фолата альфа, ганглиозид GD2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), ганглиозид GD3, гликопротеин 100 (gp100), глипикан-3 (GPC3), рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), димеры erbB, высокомолекулярный антиген, ассоциированный с меланомой человека, (HMW-MAA), поверхностный антиген гепатита B, антиген лейкоцита A1 человека (HLA-A1), антиген лейкоцита A2 человека (HLA-A2), рецептор альфа IL-22 (IL-22Rα), рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Rα2), рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, молекулу адгезии клетки L1 (L1-CAM), CE7 эпитоп L1-CAM, обогащенную лейцином вставку, содержащую элемент A семейства 8 (LRRC8A), антиген Ley, антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, мезотелин (MSLN), c-Met, мышиный цитомегаловирус (CMV), муцин 1 (MUC1), MUC16, лиганды элемента D группы 2 природных киллеров (NKG2D), мелан A (MART-1), молекулу адгезии нервных клеток (NCAM), онкофетальный антиген, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), рецептор прогестерона, простата-специфичый антиген, антиген стволовых клеток простаты (PSCA), простата-специфичный мембранный антиген (PSMA), рецептор тирозинкиназы подобный орфанному рецептору 1 (ROR1), сурвивин, гликопротеин трофобластов (TPBG также известный как 5T4), гликопротеин 72, ассоциированный с опухолью (TAG72), белок 1 родственный тирозиназе (TRP1, также известный как TYRP1 или gp75), белок 2 родственный тирозиназе (TRP2, также известный как допахромтаутомераза, допахром дельта-изомераза или DCT), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов (VEGFR), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов 2 (VEGFR2), опухоль Вильмса 1 (WT-1), патоген-специфичый или экспрессируемый патогеном антиген, или антиген, ассоциированный с универсальной меткой, и/или биотинилированные молекулы, и/или молекулы, экспрессируемые ВИЧ, ВГС, ВГВ или другими патогенами. Антигены, на которые нацелены рецепторы в некоторых вариантах осуществления, включают антигены, ассоцированные с раком В-лимфоцитов, такие как любой из ряда известных маркеров B-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig каппа, Ig лямбда, CD79a, CD79b или CD30.

[0239] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает патоген-специфичый или экспрессируемый патогеном антиген. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой вирусный антиген, (такой как вирусный антиген от ВИЧ, ВГС, ВГВ, и тому подобное), бактериальные антигены и/или паразитарные антигены.

[0240] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия включает введение субъекту клеток, например, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, который специфически распознает антиген, связанный с раковым заболеванием и/или присутствующий на универсальной метке, и/или нацелен на него. В некоторых вариантах осуществления, антиген, распознаваемый Т-лимфоцитами или на который они нацелены, представляют собой ROR1, антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), угольную ангидразу 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелин, CEA и поверхностный антиген гепатита B, рецептор анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеры erbB, EGFR vIII, фолат-связывающий белок (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептор фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, антиген Ley, молекулу адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), сурвивин, TAG72, B7-H6, рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, PSCA, рецептор-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрин avb6, 8H9, NCAM, рецепторы VEGF, 5T4, Foetal AchR, лиганды NKG2D, CD44v6, двойной антиген, раково-тестикулярный антиген, мезотелин, мышиный CMV, муцин 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), онкофетальный антиген, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбриональный антиген (CEA), Her2/neu, рецептор эстрогенов, рецептор прогестерона, эфрин B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), CE7, опухоль Вильмса 1 (WT-1), циклин, A2 циклин, CCL-1, CD138, необязательно, антиген человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена.

[0241] Способы введения генно-инженерных клеток для адоптивной клеточной терапии известны и могут использоваться в сочетании с предлагаемыми способами и композициями. Например, способы адоптивной Т-клеточной терапии описаны, например, в публикации заявки на патент США № 2003/0170238, Gruenberg et al; патент США № 4690915, Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). Смотри, например, Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338.

[0242] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия, например, адоптивная Т-клеточная терапия, осуществляется с помощью аутологичного переноса, при котором клетки выделяются и/или иным образом приготавливаются от субъекта, который должен получать клеточную терапию, или из образца, полученного у такого субъекта. Таким образом, в некоторых аспектах, клетки получают у субъекта, например, пациента, нуждающегося в лечении, и клетки после выделения и обработки вводятся этому же субъекту.

[0243] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия, например, адоптивная Т-клеточная терапия, осуществляется с помощью аллогенного переноса, при котором клетки выделяются и/или иным образом приготавливаются от субъекта иного, чем субъект, который должен принимать или который в конечном счете получает клеточную терапию, например, первый субъект. В таких вариантах осуществления, клетки затем вводят другому субъекту, например, второму субъекту, того же вида. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй субъекты являются генетически идентичными. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй субъекты являются генетически сходными. В некоторых вариантах осуществления, второй субъект экспрессирует такой же класс или супертип HLA, как и первый субъект.

[0244] В определенных вариантах осуществления, клетки или отдельные популяции субтипов клеток, вводятся субъекту в диапазоне примерно от одного миллионов примерно до 100 миллиардов клеток и/или в количестве клеток на килограмм массы тела, например, от 1 миллионов примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиардов клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или это количество в диапазоне, определенном любыми двумя рассмотренными выше значениями), например, примерно 10 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток (например, примерно 20 миллионов клеток, примерно 30 миллионов клеток, примерно 40 миллионов клеток, примерно 60 миллионов клеток, примерно 70 миллионов клеток, примерно 80 миллионов клеток, примерно 90 миллионов клеток, примерно 10 миллиардов клеток, примерно 25 миллиардов клеток, примерно 50 миллиардов клеток, примерно 75 миллиардов клеток, примерно 90 миллиардов клеток, или это количество в диапазоне, определенном любыми двумя рассмотренными выше значениями), и в некоторых случаях примерно от 100 миллионов клеток примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 120 миллионов клеток, примерно 250 миллионов клеток, примерно 350 миллионов клеток, примерно 450 миллионов клеток, примерно 650 миллионов клеток, примерно 800 миллионов клеток, примерно 900 миллионов клеток, примерно 3 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 45 миллиардов клеток) или это любое значение в этих диапазонах и/или на килограмм массы тела. Дозы могут изменяться в зависимости от конкретных параметров заболевания или расстройства и/или пациента и/или других видов лечения.

[0245] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза содержит меньше примерно, чем 1 × 10⁸ клеток, в целом, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC), например, в диапазоне примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁸ таких клеток, например, 2 × 10⁶, 5 × 10⁶, 1 × 10⁷, 5 × 10⁷, или 1 × 10⁸ или таких клеток, в целом, или количество в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений.

[0246] Клетки могут вводиться с помощью любых соответствующих средств. Клетки вводятся в режиме дозирования для достижения терапевтического воздействия, такого как уменьшение массы опухоли. Дозирование и введение могут частично зависеть от временного графика введения иммуномодуляторного соединения, которое может вводиться до, после и/или одновременно с началом введения Т-клеточной терапии. Различные временные графики дозирования Т-клеточной терапии включают, но, не ограничиваясь этим, однократные или многократные введения в различные моменты времени, введение болюса и импульсное вливание.

1. Композиции и препараты

[0247] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток от Т-клеточной терапии, такой Т-клеточная терапия, содержащая генно-инженерные клетки, с рекомбинантным рецептором антигена, например, CAR или TCR, предлагается как композиция или препарат, такой как фармацевтическая композиция или препарат. Такие композиции можно использовать согласно предлагаемым способам, например, при предотвращении или лечении заболеваний, состояний и расстройств.

[0248] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия, такая как генно-инженерные Т-лимфоциты (например, Т-лимфоциты CAR), приготавливают вместе с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых аспектах, выбор носителя определяется отчасти конкретной клеткой или агентом и/или способом введения. Соответственно, имеется множество соответствующих препаратов. Например, фармацевтическая композиция может содержать консерванты. Пригодные для использования консерванты могут включать, например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия и бензалконийхлорид. В некоторых аспектах используют смесь двух или более консервантов. Консервант или их смеси, как правило, присутствуют в количестве примерно от 0,0001% примерно до 2% масс композиции в целом. Носители описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980). Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для тех, кто их принимает, при используемых дозировках и концентрациях, и включают, но, не ограничиваясь этим: буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие буферы на основе органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глютамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; противоионы, образующие соль, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG).

[0249] Буферные агенты в некоторых аспектах включаются в композиции. Пригодные для использования буферные агенты включают, например, лимонную кислоту, цитрат натрия, фосфорную кислоту, фосфат калия и различные другие кислоты и соли. В некоторых аспектах используют смесь двух или более буферных агентов. Буферный агент или их смеси, как правило, присутствуют в количестве примерно от 0,001% примерно до 4% масс от композиции в целом. Способы приготовления пригодных для введения фармацевтических композиций известны. Иллюстративные способы описываются более подробно, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005).

[0250] Препараты могут содержать водные растворы. Препарат или композиция может также содержать несколько активных ингредиентов полезных для конкретного показания, заболевания или состояния, которое предотвращается или лечится с помощью клеток или агентов, где соответствующие активности не влияют отрицательно друг на друга. Такие активные ингредиенты удобным образом присутствуют в сочетаниях, в количествах, которые являются эффективными для предполагаемой цели. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция дополнительно содержит другие фармацевтически активные агенты или лекарственные средства, такие как химиотерапевтические агенты, например, аспарагиназу, бусульфан, карбоплатин, цисплатин, даунорубицин, доксорубицин, фторурацилы, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат, паклитаксел, ритуксимаб, винбластин, винкристин, и тому подобное.

[0251] Фармацевтическая композиция в некоторых вариантах осуществления содержит клетки в количестве эффективном для лечения или предотвращения заболевания или состояния, в таком как терапевтически эффективное или профилактически эффективное количество. Терапевтическая или профилактическая эффективность в некоторых вариантах осуществления отслеживается с помощью периодической оценки леченых субъектов. Для многократного введения в течение нескольких дней или больше, в зависимости от состояния, лечение повторяют до тех пор, пока не произойдет желаемое подавление симптомов заболевания. Однако и другие режимы дозирования могут быть полезными и могут определяться. Желаемая доза может доставляться с помощью отдельного введения болюса композиции, с помощью множества введений болюса композиции или посредством непрерывного введения композиции посредством вливания.

[0252] Клетки могут вводиться с использованием стандартных методик введения, препаратов и/или устройств. Предлагаются препараты и устройства, такие как шприцы и флаконы, для хранения и введения композиций. Относительно клеток, введение может быть аутологичным или гетерологичным. Например, иммунореактивные клетки или прогениторы можно получить от одного субъекта и ввести этому же субъекту или другому совместимому субъекту. Иммунореактивные клетки, полученные из периферической крови, или их потомство (например, полученное in vivo, ex vivo или in vitro) можно вводить посредством местной инъекции, включая катетерное введение, системную инъекцию, местную инъекцию, внутривенную инъекцию или парентеральное введение. При введении терапевтической композиции (например, фармацевтической композиции, содержащей генетически модифицированные иммунореактивные клетки), она, как правило, будет приготавливаться в форме стандартной единичной дозы для инъекций (раствора, суспензии, эмульсии).

[0253] Препараты включают препараты для перорального, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, пульмонарного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, буккального, сублингвального или суппозиторного введения. В некоторых вариантах осуществления, агент или популяции клеток вводятся парентерально. Термин “парентеральный”, как используется в настоящем документе, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное и внутрибрюшинное введение. В некоторых вариантах осуществления, агент или популяции клеток вводятся субъекту с использованием периферической системной доставки с помощью внутривенной, внутрибрюшинной или подкожной инъекции.

[0254] В некоторых вариантах осуществления композиции предлагаются как стерильные жидкие препараты, например, изотонические водные растворы, суспензии, эмульсии, дисперсии или вязкие композиции, которые могут в некоторых аспектах доводиться до выбранного pH с помощью буфера. Жидкие препараты обычно легче приготовить чем гели, другие вязкие композиции и твердые композиции. В дополнение к этому, жидкие композиции немного удобнее вводить, в особенности, с помощью инъекции. С другой стороны, вязкие композиции можно приготовить в соответствующем диапазоне вязкости для обеспечения более продолжительных периодов контакта с конкретными тканями. Жидкие или вязкие композиции могут содержать носители, которые могут представлять собой растворитель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, солевой раствор, фосфатный буферный солевой раствор, полиол (например, глицерол, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и соответствующие их смеси.

[0255] Стерильные растворы для инъекций можно приготовить посредством введения клеток в растворителе, таком как смесь соответствующего носителя, разбавителя или наполнителя, таких как стерильная вода, физиологический солевой раствор, глюкоза, декстроза, или что-либо подобное. Композиции могут также лиофилизироваться. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие, диспергирующие или эмульгирующие агенты (например, метилцеллюлозу), буферные агенты для регулировки pH, гелеобразующие или повышающие вязкость добавки, консерванты, ароматизирующие агенты, красители, и тому подобное, в зависимости от способа введения и желаемого препарата. В некоторых аспектах можно проконсультироваться со стандартными текстами относительно приготовления соответствующих препаратов.

[0256] Могут добавляться различные добавки, которые повышают стабильность и стерильность композиций, включая антимикробные консерванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и буферы. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, и тому подобное. Пролонгированное поглощение фармацевтической формы для инъекций может быть получено при использовании агентов, замедляющих поглощение, например, моностеарата алюминия и желатина.

[0257] Препараты для использования при введении in vivo, как правило, являются стерильными. Стерильность можно легко получить, например, посредством фильтрования через стерильные фильтровальные мембраны.

[0258] Для предотвращения или лечения заболевания, соответствующая доза может зависеть от типа заболевания, которое должно лечиться, от типа агента или агентов, типа клеток или рекомбинантных рецепторов, тяжести и хода заболевания, от того, вводится ли агент или клетки для превентивных или терапевтических целей, от предыдущей терапии, от истории болезни субъекта и его реакции на агент или клетки и от суждения лечащего врача. Композиции в некоторых вариантах осуществления вводятся соответствующим образом субъекту за один раз или как ряд сеансов лечения.

[0259] В некоторых случаях, клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки. В некоторых вариантах осуществления, данная доза вводится посредством введения отдельного болюса клеток или агентов. В некоторых вариантах осуществления, она вводится с помощью многократного введения болюса клеток или агента, например, в течение периода не более 3 дней, или посредством непрерывного введения вливанием клеток или агента.

2. Временной график дозирования и введения

[0260] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток вводится субъектам согласно предлагаемым способам сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, размер или распределение по времени доз определяется в зависимости от конкретного заболевания или от состояния субъекта. Можно эмпирически определить размер или распределение по времени доз для конкретного заболевания с учетом предлагаемого описания.

[0261] В определенных вариантах осуществления, клетки или отдельные популяции субтипов клеток вводят субъекту в диапазоне примерно от 0,1 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток и/или такого же количества клеток на килограмм массы тела субъекта, например, от 0,1 миллионов примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиардов клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), от 1 миллиона примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиард клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), например, примерно от 10 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток (например, примерно 20 миллионов клеток, примерно 30 миллионов клеток, примерно 40 миллионов клеток, примерно 60 миллионов клеток, примерно 70 миллионов клеток, примерно 80 миллионов клеток, примерно 90 миллионов клеток, примерно 10 миллиардов клеток, примерно 25 миллиардов клеток, примерно 50 миллиардов клеток, примерно 75 миллиардов клеток, примерно 90 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), и в некоторых случаях примерно от 100 миллионов клеток примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 120 миллионов клеток, примерно 250 миллионов клеток, примерно 350 миллионов клеток, примерно 450 миллионов клеток, примерно 650 миллионов клеток, примерно 800 миллионов клеток, примерно 900 миллионов клеток, примерно 3 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 45 миллиардов клеток) или любого количества в этих диапазонах и/или на килограмм массы тела субъекта. Дозы могут изменяться в зависимости от конкретных параметров заболевания или расстройства и/или пациента и/или от других видов лечения. В некоторых вариантах осуществления, такие значения относятся к количеству клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор; в других вариантах осуществления, они относятся к количеству Т-лимфоцитов или PBMC или к вводимым клеткам, в целом.

[0262] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы клеток, содержащих количество клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁵ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, 1 × 10⁶, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁷, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁸ таких клеток.

[0263] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза содержит меньше примерно, чем 5 × 10⁸ клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, в диапазоне примерно от 1 × 10⁶ до 5 × 10⁸ таких клеток, например, 2 × 10⁶, 5 × 10⁶, 1 × 10⁷, 5 × 10⁷, 1 × 10⁸, или 5 × 10⁸ таких клеток, в целом, или количества в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений.

[0264] В некоторых вариантах осуществления, количество относится к общему количеству CD3+ или CD8+, в некоторых случаях, также клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR+). В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, каждое значение включительно.

[0265] В некоторых вариантах осуществления, доза генно-инженерных клеток содержит от или примерно от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 2,5 × 10⁸ , CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 2,5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁶ до 2,5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 1 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁶ до 5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁶ до 1 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁷ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁷ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁷ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁷ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁷ до 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁷ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁷ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁷ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 10⁷ до 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁷ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁷ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 10⁷ до 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁸ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 10⁸ до 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, или от 2,5 × 10⁸ до 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом.

[0266] В некоторых вариантах осуществления, доза генно-инженерных клеток содержит, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁵ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2,5 × 10⁵ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 5 × 10⁵ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁶ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 10⁶ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁷ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 10⁷ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁸ CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих клеток, или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 10⁸ CAR-экспрессирующих клеток.

[0267] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы клеток, содержащей количество клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁵ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, 1 × 10⁶, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁷, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁸ таких клеток. В некоторых вариантах осуществления, это количество относится к общему количеству CD3+ или CD8+, в некоторых случаях, также и к клеткам, экспрессирующим рекомбинантный рецептор (например, CAR+). В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁸ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 10⁵ до 5 × 10⁸, в целом, CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+ клетки, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, в целом, каждое значение включительно.

[0268] В некоторых вариантах осуществления, дозы Т-лимфоцитов содержат Т-лимфоциты CD4+, Т-лимфоциты CD8+ или CD4+ и Т-лимфоциты CD8+.

[0269] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза Т-лимфоцитов CD8+, включая дозу, содержащую Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, содержит в пределах примерно между 1 × 10⁶ и 5 × 10⁸ клеток CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), в целом, например, в диапазоне примерно от 5 × 10⁶ до 1 × 10⁸ таких клеток, например, 1 × 10⁷, 2,5 × 10⁷, 5 × 10⁷, 7,5 × 10⁷, 1 × 10⁸ или 5 × 10⁸ таких клеток, в целом, или их количество в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, пациенту вводят множество доз, и каждая из доз или доза в целом может находиться в пределах любых рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток включает введение от или примерно от 1 × 10⁷ до 0,75 × 10⁸ Т-лимфоцитов CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, в целом, от 1 × 10⁷ до 2,5 × 10⁷ Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом, от или примерно от 1 × 10⁷ до 0,75 × 10⁸ Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток включает введение 1 × 10⁷, 2,5 × 10⁷, 5 × 10⁷ 7,5 × 10⁷, 1 × 10⁸ или 5 × 10⁸или примерно 1 × 10⁷, 2,5 × 10⁷, 5 × 10⁷ 7,5 × 10⁷, 1 × 10⁸ или 5 × 10⁸Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом.

[0270] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, например, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту как отдельная доза, или она вводится только один раз в пределах периода двух недель, одного месяца, трех месяцев, шесть месяцев, 1 года или более.

[0271] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток, которое составляет, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно или составляет примерно 0,1 × 10⁶ клеток/кг массы тела субъекта, 0,2 × 10⁶ клеток/кг, 0,3 × 10⁶ клеток/кг, 0,4 × 10⁶ клеток/кг, 0,5 × 10⁶ клеток/кг, 1 × 10⁶ клеток/кг, 2,0 × 10⁶ клеток/кг, 3 × 10⁶ клеток/кг или 5 × 10⁶ клеток/кг.

[0272] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток находящееся в пределах между или примерно между 0,1 × 10⁶ клеток/кг массы тела субъекта и 1,0 × 10⁷ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 10⁶ клеток/кг и 5 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 10⁶ клеток/кг и 3 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 10⁶ клеток/кг и 2 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 10⁶ клеток/кг и 1 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 10⁶ клеток/кг масса тела субъекта и 5 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 10⁶ клеток/кг и 3 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 10⁶ клеток/кг и 2 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 2,0 × 10⁶ клеток/кг массы тела субъекта и 5 × 10⁶ клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 2,0 × 10⁶ клеток/кг и 3 × 10⁶ клеток/кг, или находящееся в пределах между или примерно между 3,0 × 10⁶ клеток/кг массы тела субъекта и 5 × 10⁶ клеток/кг, каждое значение включительно.

[0273] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит в пределах между 2 × 10⁵ или примерно 2 × 10⁵ клеток/кг и 2 × 10⁶ или примерно 2 × 10⁶ клеток/кг, например в пределах между 4 × 10⁵или примерно 4 × 10⁵клеток/кг и 1 × 10⁶ или примерно 1 × 10⁶ клеток/кг или в пределах между 6 × 10⁵ или примерно 6 × 10⁵ клеток/кг и 8 × 10⁵ или примерно 8 × 10⁵ клеток/кг. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит не более 2 × 10⁵ клеток (например, антиген-экспрессирующих, таких как CAR-экспрессирующие клетки) на килограмм массы тела субъекта (клеток/кг), например, не более (или примерно) 3 × 10⁵клеток/кг, не более (или примерно) 4 × 10⁵ клеток/кг, не более (или примерно) 5 × 10⁵ клеток/кг, не более (или примерно) 6 × 10⁵клеток/кг, не более (или примерно) 7 × 10⁵ клеток/кг, не более (или примерно) 8 × 10⁵ клеток/кг, не более (или примерно) 9 × 10⁵ клеток/кг, не более (или примерно) 1 × 10⁶ клеток/кг, или не более (или примерно) 2 × 10⁶ клеток/кг. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2 × 10⁵ клеток (например, антиген-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие клетки) на килограмм массы тела субъекта (клеток/кг), например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 3 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 4 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей примерно 5 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 6 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 7 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 8 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 9 × 10⁵ клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁶ клеток/кг, или, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2 × 10⁶ клеток/кг.

[0274] В контексте адоптивной клеточной терапии, введение данной “дозы” клеток охватывает введение данного количества или количества клеток как отдельной композиции и/или в виде отдельного непрерывного введения, например, как отдельной инъекции или непрерывного вливания, а также охватывает введение данного количества или количества числа клеток как разделенной дозы, предлагаемой во множестве отдельных композиций или вливаний, в течение указанного периода времени, который не превышает 3 дней. Таким образом, в некотором контексте, доза представляет собой отдельное или непрерывное введение заданного количества клеток, осуществленного или начатого в один момент времени. В некотором контексте, однако, дозу вводят во множестве инъекций или вливаний за период не более трех дней, например, раз в день в течение трех дней или двух дней, или как множество вливаний за однодневный период.

[0275] Таким образом, в некоторых аспектах, клетки дозы вводятся в отдельной фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления, клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих клетки дозы.

[0276] Термин “разделенная доза” относится к дозе, которая разделена таким образом, что она вводится в течение нескольких дней. Такой тип дозирования охватывается настоящими способами и считается отдельной дозой. В некоторых вариантах осуществления, клетки разделенной дозы вводят во множестве композиций, коллективно содержащих клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

[0277] Таким образом, доза клеток может вводиться как разделенная доза. Например, в некоторых вариантах осуществления, доза может вводиться субъекту в течение 2 дней или в течение 3 дней. Иллюстративные способы разделенного дозирования включают введение 25% дозы в первый день и введение остальных 75% дозы во второй день. В других вариантах осуществления, 33% дозы может вводиться в первый день, а остальные 67% вводиться во второй день. В некоторых аспектах, 10% дозы вводится в первый день, 30% дозы вводится во второй день, а 60% дозы вводится в третий день. В некоторых вариантах осуществления, разделенная доза не распределяется более чем на 3 дня.

[0278] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, как правило, является достаточно большой, чтобы быть эффективной при уменьшении и тяжести заболевания.

[0279] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при желаемой дозе, которая в некоторых аспектах содержит желаемую дозу или количество клеток или типа (типов) клеток и/или желаемое отношение типов клеток. Таким образом, дозирование клеток в некоторых вариантах осуществления относится к общему количеству клеток (или к количеству на кг массы тела) и к желаемому отношению отдельных популяций или субтипов, таких как отношение CD4+ к CD8+. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток относится к желаемому общему количеству (или к количеству на кг массы тела) клеток в отдельных популяциях или в отдельных типах клеток. В некоторых вариантах осуществления, дозирование относится к сочетанию таких особенностей, таких как желаемое количество клеток, в целом, желаемое отношение и желаемое общее количество клеток в отдельных популяциях.

[0280] В некоторых вариантах осуществления, популяции или субтипы клеток, таких как Т-лимфоциты CD8+ и CD4+, вводятся при допустимой разнице (или в пределах) желаемой дозы клеток, в целом, такой как желаемая доза Т-лимфоцитов. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой желаемое количество клеток или желаемое количество клеток на единицу массы тела субъекта, которому вводят клетки, например, клетки/кг. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой минимальное количество (или выше) клеток или минимальное количество клеток на единицу массы тела. В некоторых аспектах, из клеток, в целом, вводимых при желаемой дозе, отдельные популяции или субтипы присутствуют при (или около) желаемом выходном отношении (таком как отношение CD4+ к CD8+), например, в пределах определенной допустимой разницы или ошибки такого отношение.

[0281] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при (или в пределах) допустимой разнице желаемой дозы для одной или нескольких отдельных популяций или субтипов клеток, таких как желаемая доза клеток CD4+ и/или желаемая доза клеток CD8+. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой желаемое количество клеток данного субтипа или популяции, или желаемое количество таких клеток на единицу массы тела субъекта, которому вводят клетки, например, клетки/кг. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой минимальное количество (или выше) клеток в популяции или субтипе, или минимальное количество клеток в популяции или субтипе на единицу массы тела.

[0282] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, доза относится к желаемой фиксированной дозе клеток, в целом, и к желаемому отношению, и/или относится к желаемой фиксированной дозе одного или нескольких, например, каждого, отдельных субтипов или субпопуляций. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, доза относится к желаемой фиксированной или минимальной дозе Т-лимфоцитов и к желаемому отношению клеток CD4+ и CD8+ и/или относится к желаемой фиксированной или минимальной дозе клеток CD4+ и/или CD8+.

[0283] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при (или в допустимых пределах) желаемом выходном отношении множества популяций или субтипов клеток, таких как клетки или субтипы CD4+ и CD8+. В некоторых аспектах, желаемое отношение может представлять собой конкретное отношение или может представлять собой диапазон отношений, например, в некоторых вариантах осуществления, желаемое отношение (например, отношение клеток CD4+ и CD8+) находится в пределах между (или примерно) 1:5 и (или примерно) 5:1 (или больше примерно, чем 1:5 и меньше примерно 5:1) или находится в пределах между (или примерно) 1:3 и (или примерно) 3:1 (или больше примерно, чем 1:3 и меньше примерно, чем 3:1), например, в пределах между (или примерно) 2:1 и (или примерно) 1:5 (или больше примерно, чем 1:5 и меньше примерно, чем 2:1, например, (или примерно) 5:1, 4,5:1, 4:1, 3,5:1, 3:1, 2,5:1, 2:1, 1,9:1, 1,8:1, 1,7:1, 1,6:1, 1,5:1, 1,4:1, 1,3:1, 1,2:1, 1,1:1, 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,5, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,8, 1:1,9: 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 или 1:5. В некоторых аспектах, допустимая разница находится в пределах примерно 1%, примерно 2%, примерно 3%, примерно 4% примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50% от желаемого отношения, включая любое значение в этих диапазонах.

[0284] В конкретных вариантах осуществления, количества и/или концентрации клеток относятся к количеству клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR). В других вариантах осуществления, количества и/или концентрации клеток относятся к количеству или концентрации всех вводимых клеток, Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC).

[0285] В некоторых аспектах, размер дозы определяется по отношению одного или нескольких критериев, таких как реакция субъекта на предыдущее лечение, например, на химиотерапию, тяжесть заболевания субъекта, например, нагрузка, объем, размер опухоли или степень, распространение или тип метастаз, стадия и/или вероятность или частота развития токсических результатов лечения у субъекта, например, CRS, синдрома активирования макрогфагов, синдрома лизиса опухоли, нейротоксичности и/или иммунной реакции хозяина против вводимых клеток и/или рекомбинантных рецепторов.

[0286] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения в сочетании с клетками может значительно увеличить размножение или пролиферацию клеток и, таким образом, понизить дозу клеток, которые можно вводить субъекту. В некоторых случаях, предлагаемые способы делают возможным введение меньшей дозы таких клеток для достижения такой же или лучшей эффективности лечения, как для дозы в способе, в котором клеточную терапию вводят без введения иммуномодуляторного соединения, например, по меньшей мере, 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшей, чем доза в способе, в котором клеточную терапию вводят без введения иммуномодуляторное соединение, например, леналидомида.

[0287] В некоторых вариантах осуществления, доза, например, содержит в пределах между или примерно между 5,0 × 10⁶и 2,25 × 10⁷, 5,0 × 10⁶и 2,0 × 10⁷, 5,0 × 10⁶и 1,5 × 10⁷, 5,0 × 10⁶и 1,0 × 10⁷, 5,0 × 10⁶и 7,5 × 10⁶, 7,5 × 10⁶ и 2,25 × 10⁷, 7,5 × 10⁶и 2,0 × 10⁷, 7,5 × 10⁶и 1,5 × 10⁷, 7,5 × 10⁶и 1,0 × 10⁷, 1,0 × 10⁷и 2,25 × 10⁷, 1,0 × 10⁷и 2,0 × 10⁷, 1,0 × 10⁷и 1,5 × 10⁷, 1,5 × 10⁷и 2,25 × 10⁷, 1,5 × 10⁷и 2,0 × 10⁷, 2,0 × 10⁷ и 2,25 × 10⁷. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит количество клеток, которое находится в пределах между, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 5 × 10⁶, 6 × 10⁶, 7 × 10⁶, 8 × 10⁶, 9 × 10⁶, 10 × 10⁶и примерно 15 × 10⁶ клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, таких как клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, которые представляют собой CD8+. В некоторых вариантах осуществления, такая доза, например, такое целевое количество клеток, относится к клеткам, экспрессирующим рекомбинантный рецептор, в целом, во вводимой композиции.

[0288] В некоторых вариантах осуществления, например, более низкая доза содержит меньше примерно 5 × 10⁶ клеток, клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов и/или PBMC на килограмм массы тела субъекта, например, меньше примерно 4,5 × 10⁶, 4 × 10⁶, 3,5 × 10⁶, 3 × 10⁶, 2,5 × 10⁶, 2 × 10⁶, 1,5 × 10⁶, 1 × 10⁶, 5 × 10⁵, 2,5 × 10⁵ или 1 × 10⁵ таких клеток на килограмм массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления, более низкая доза содержит меньше примерно 1 × 10⁵, 2 × 10⁵, 5 × 10⁵ или 1 × 10⁶ таких клеток на килограмм массы тела субъекта или имеет величину в пределах между любыми двумя из рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, такие значения относятся к количествам клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор; в других вариантах осуществления, они относятся к количеству Т-лимфоцитов или PBMC или к введенным клеткам в целом.

[0289] В некоторых вариантах осуществления, субъект получает множество доз, например, две или более дозы, или множество последовательных доз клеток. В некоторых вариантах субъекту осуществления вводят две дозы. В некоторых вариантах осуществления, субъект получает последовательную дозу, например, вторая доза вводится приблизительно через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 день после первой дозы. В некоторых вариантах осуществления, множество последовательных доз вводятся после первой дозы, так что дополнительная доза или дозы вводятся после введения последовательной дозы. В некоторых аспектах, количество клеток, вводимых субъекту в дополнительной дозе, является таким же или сходным с первой дозой и/или последовательной дозой. В некоторых вариантах осуществления, дополнительная доза или дозы больше, чем предыдущие дозы. В некоторых вариантах осуществления, субъекту могут вводиться одна или несколько последовательных доз клеток. В некоторых вариантах осуществления, последовательная доза клеток вводится больше или больше примерно, чем через 7 дней, 14 дней, 21 дней, 28 дней или 35 дней после начала введения первой дозы клеток. Последовательная доза клеток может быть больше, приблизительно такой же или меньше, чем первая доза. В некоторых вариантах осуществления, введение Т-клеточной терапии, такой как введение первой и/или второй дозы клеток, может повторяться.

[0290] В некоторых вариантах осуществления, начало введения клеточной терапии, например, дозы клеток или первой дозы из разделенной дозы клеток, осуществляется до (перед), одновременно или после (последовательно или серийно) введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0291] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, или последовательная доза клеток, вводится одновременно с началом введения иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, или последовательная доза клеток, вводится в тот же день, когда начинают введение иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток или последовательная доза клеток, вводится в пределах 1 дня, в пределах 2 дней, в пределах 3 дней, в пределах 4 дней, в пределах 5 дней, в пределах 6 дней, или в пределах 7 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии.

[0292] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток или последовательная доза клеток вводится до старта или начала введения иммуномодуляторного соединения в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток вводится, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 1 час, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 2 часа, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 3 часа, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 6 часов, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 12 часов, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 1 день, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 2 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 3 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 4 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 5 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 6 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 7 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 12 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 14 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 15 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 21 день, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 28 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 30 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 35 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 42 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 60 дней или, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 90 дней до введения иммуномодуляторного соединения в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией.

[0293] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида) в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией происходит в момент времени, в который предыдущее введение иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) связано или вероятно должно быть связано с уменьшением функциональности Т-лимфоцитов по сравнению с функциональностью Т-лимфоцитов в момент времени непосредственно перед началом иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) или в предыдущий момент времени после начала Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, способ включает, после введения дозы клеток от Т-клеточной терапии, например, адоптивной Т-клеточной терапии, но до введения иммуномодуляторного соединения, оценку образца от субъекта относительно одной или нескольких функций Т-лимфоцитов, таких как размножение или персистентность клеток, например, как определяется по их уровню или количеству в крови, или других фенотипов или желаемых результатов лечения, как описано в настоящем документе, например, как те, что описаны в Разделе III. Различные параметры для определения или оценки режима сочетанной терапии описаны в Разделе III.

B. Введение иммуномодуляторного соединения

[0294] Предлагаемые способы сочетанной терапии, композиции, сочетания, наборы и применения включают введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, которые могут вводиться до, после, в ходе, одновременно или почти одновременно, последовательно и/или поочередно с введением Т-клеточной терапии, например, с введением Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор антигена (CAR).

[0295] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение из класса иммуномодуляторных соединений, которое представляет собой структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы.

[0296] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с CRBN и с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение ап-регулирует экспрессирование белка или гена CRBN. В некоторых аспектах, CRBN представляет собой адаптор субстрата для CRL4CRBN и E3 убиквитинлигазы и модулирует специфичность фермента. В некоторых вариантах осуществления, связывание с CRB или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы ингибирует активность E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение индуцирует убиквитинирование KZF1 (Ikaros) и IKZF3 (Aiolos) и/или индуцирует деградацию IKZF1 (Ikaros) и IKZF3 (Aiolos). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение индуцирует убиквитинирование казеинкиназы 1A1 (CK1α) посредством CRL4CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, убиквитинирование CK1α дает в результате в деградацию CK1α.

[0297] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор фактора транскрипции Ikaros (IKZF1). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение даун-регулирует экспрессирование белка или гена Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает уменьшение уровня белков Ikaros.

[0298] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор фактора транскрипции Aiolos (IKZF3). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение даун-регулирует экспрессирование белка или гена Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает понижение уровня белка Aiolos.

[0299] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор факторов транскрипции, как Ikaros (IKZF1), так и Aiolos (IKZF3). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование и деградацию как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает понижение уровней как белков Aiolos, так и уровни белков Ikaros.

[0300] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой селективное цитокин-ингибиторное лекарственное средство (SelCID). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение ингибирует активность фосфодиэстеразы-4 (PDE4). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение подавляет ферментативную активность CDC25 фосфатаз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение изменяет внутриклеточную направленную миграцию CDC25 фосфатаз.

[0301] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение при сочетанной терапии представляет собой талидомид (2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1H-изоиндол-1,3(2H)-дион) или аналог или производное талидомида. В определенных вариантах осуществления, производное талидомида включает структурные варианты талидомида, которые имеют сходную биологическую активность. Иллюстративное производное талидомида включают, но, не ограничиваясь этим, леналидомид (REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), помалидомид (также известный как ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ или POMALYST™ (Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501, и CDC-801, и соединения, описанные в патентах США №№ 5712291; 7320991; и 8716315; в заявке на патент США № 2016/0313300; и публикации PCT №№ WO 2002/068414 и WO 2008/154252.

[0302] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо- и 1,3- диоксо-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолины, замещенные амино в бензо-кольце, как описано в патенте США № 5635517, который включается в настоящий документ в качестве ссылки.

[0303] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:

где один из X и Y представляет собой -C(O)-, а другой из X и Y представляет собой -C(O)- или -CH₂-, и R⁵ представляет собой водород или низший алкил, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления, X представляет сбой -C(O)- и Y представляет собой -CH₂-. В некоторых вариантах осуществления как X, так и Y представляют собой -C(O)-. В некоторых вариантах осуществления, R⁵ представляет собой водород. В других вариантах осуществления, R⁵ представляет собой метил.

[0304] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу замещенных 2-(2, 6-диоксопиперидин-3-ил)фтальиммуномодуляторных соединений и замещенных 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксоизоиндолов, таких как те, которые описаны в патентах США №№ 6281230; 6316471; 6335349 и 6476052, и в Международной заявке на патент № PCT/US97/13375 (Международная публикация № WO 98/03502), каждая из них включается в настоящий документ в качестве ссылки.

[0305] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:

где

один из X и Y представляет собой -C(O)-, а другой из X и Y представляет собой -C(O)- или -CH₂-;

(1) каждый из R¹, R², R³ и R⁴ независимо представляет собой галоген, алкил с 1-4 атомами углерода или алкокси из 1-4 атомов углерода, или

(2) один из R¹, R³, R⁴ и R⁵представляет собой -NHR^aи остальные R¹, R², R³ и R⁴представляют собойводород, где R^aпредставляет собой водород или алкил с 1-8 атомами углерода;

R⁵ представляет собой водород или алкил с 1-8 атомами углерода, бензил или галоген;

при условии, что R⁵ не является водородом, если X и Y представляют собой -C(O)- и (i) каждый из R¹, R², R³ и R⁴представляет собой фтор или (ii) один из R¹, R², R³ и R⁴представляет собой амино;

или их фармацевтически приемлемую соль.

[0306] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу изоиндол-иммуномодуляторных соединений, описанных в патенте США № 7091353, в публикации патента США № 2003/0045552 и в Международной заявке № PCT/USOI/50401 (Международная публикация № WO02/059106), каждая из них включается в настоящий документ в качестве ссылки. Например, в некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой [2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил]амид; сложный трет-бутиловый эфир (2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил)карабаминовой кислоты; 4-(аминометил)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион; N-(2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил)-ацетамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил)-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}циклопропил-карбоксамид; 2-хлор-N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}ацетамид; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)-3-пиридилкарбоксамид; 3-{1-оксо-4-(бензиламино)изоиндолин-2-ил}пиперидин-2,6-дион; 2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-4-(бензиламино)изоиндолин-1,3-дион; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}пропанамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}-3-пиридилкарбоксамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}гептанамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}-2-фурилкарбоксамид; {N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)карбамоил}метилацетат; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)пентанамид; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)-2-тиенилкарбоксамид; N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}-(бутиламино)карбоксамид; N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}(октиламино)карбоксамид; или N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}(бензиламино)карбоксамид.

[0307] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу изоиндол-иммуномодуляторных соединений, описанных в публикации заявки на патент США № 2002/0045643, в Международной публикации № WO 98/54170 и в патенте США № 6395754, каждый из которых включается в настоящий документ в качестве ссылок. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой тетразамещенные 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксоизоиндолины, описанные в патенте США № 5798368, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо и 1,3-диоксо-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолины, описанные в патенте США № 6403613, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо или 1,3-диоксоизоиндолин, замещенный в 4- или 5-положении индолинового кольца, как описано в патенте США № 6380239 и в патенте США № 7244759, оба они включаются в настоящий документ в качестве ссылок.

[0308] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 2-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)-4-карбамоил-масляную кислоту или 4-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)-4-карбамоил-масляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 4-карбамоил-4-{4-[(фуран-2-ил-метил)амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}масляную кислоту, 4-карбамоил-2-{4-[(фуран-2-ил-метил)-амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}-масляную кислоту, 2-{4-[(фуран-2-ил-метил)-амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}-4-фенилкарбамоил-масляную кислоту или 2-{4-[(фуран-2-ил-метил)амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}глутаровую кислоту.

[0309] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой изоиндолин-1-он или изоиндолин-1,3-дион, замещенный в 2-положении 2,6-диоксо-3-гидроксипиперидин-5-илом, как описано в патенте США № 6458810, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, или энантиомер или смесь его энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-[4-(4-морфолин-4-илметил-бензилокси)-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил]-пиперидин-2,6-дион.

[0310] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение является таким, как описано в Oshima, K. et al., Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. et al., Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); и Collins, et al., Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017).

[0311] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой производное талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный и/или функциональный аналог талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль.

[0312] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомида, авадомида или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, стереоизомер леналидомида или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0313] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой авадомид, которое также известно как 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, имеющее следующую структуру (Формула I), или представляет собой их энантиомер или смесь энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф (ниже Соединение 1).

[0314] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой полиморф 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы I.

[0315] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, оно также известно как 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, или представляет собой энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, леналидомид представляет собой 2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1,3-дигидро-1-оксо-2H-изоиндол-2-ил)-, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)-2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)-2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, все их можно использовать взаимозаменяемо, или представляет собой энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

[0316] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой смесь (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона.

[0317] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула II), или энантиомер или смесь энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат, или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула IIA), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула IIB), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В определенных вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение содержит смесь (Формула IIA) и (Формула IIB), или их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, гидраты, сокристаллы, клатраты или полиморфы.

[0318] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона, или фармацевтическую приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат (RS)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-Амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы II. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы IIA или Формулы IIB или представляет собой их смесь.

[0319] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид, который также известен как 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион, или представляет собой энантиомер или смесь его энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула III) или энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула IIIA), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (Формула IIIB) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В определенных вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение содержит смесь (Формула IIIA) и (Формула IIIB), или их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, гидраты, сокристаллы, клатраты или полиморфы.

[0320] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона, или фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-изоиндолин-1,3-дион и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион, (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион или их смесь при любом отношении. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы III. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы IIIA или Формулы IIIB или представляет собой их смесь.

[0321] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой или содержит леналидомид. Леналидомид одобрен FDA для лечения множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, связанного с делецией 5q, а чаще всего, при повторной/не поддающейся лечению мантийноклеточной лимфоме (MCL). Леналидомид представляет собой синтетическое производное талидомида, и как понимается в настоящее время, имеет множество иммуномодуляторных воздействий, включая усиление образования иммунных синапсов между Т-лимфоцитом и антиген-презентирующими клетками (APC). Например, в некоторых случаях, леналидомид модулирует реакции и результаты Т-лимфоцитов при повышенном продуцировании интерлейкина (IL)-2 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+, индуцирует сдвиг реакций T-хелперов (Th) от Th2 до Th1, ингибирует размножение регуляторного подмножества Т-лимфоцитов (Treg), и улучшает функционирование иммунологических синапсов при фолликулярной лимфоме (FL) и хроническом лимфолейкозе (CLL) (Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). Леналидомид также имеет непосредственную тумороцидную активность у пациентов с множественной миеломой (MM) и прямо и косвенно модулирует выживаемость клеток опухоли CLL посредством влияния поддерживающих клеток, таких как стромальные клетки, находящиеся в микроокружении лимфоидных тканей.

1. Композиции и препараты

[0322] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений сочетанной терапии, предлагаемых в настоящем документе, сочетанная терапия может вводиться в одной или нескольких композициях, например, в фармацевтической композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид.

[0323] В некоторых вариантах осуществления, композиция, например, фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может включать носители, такие как разбавитель, вспомогательное вещество, наполнитель, или несущую среду, вместе с которыми вводят иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, и/или клетки. Примеры пригодных для использования фармацевтических носителей описаны в “Remington’s Pharmaceutical Sciences” by E. W. Martin. Такие композиции будут содержать терапевтически эффективное количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, как правило, в очищенной форме, вместе с соответствующим количеством носителя, с тем чтобы обеспечить форму для правильного введения пациенту. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и кунжутное масло. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерола также можно использовать в качестве жидких носителей, в частности, для растворов для инъекций. Фармацевтические композиции могут содержать любой один или несколько компонентов из разбавителей, вспомогательных веществ, антиадгезивов, связующих, покрытий, заполнителей, ароматизаторов, красителей, смазывающих веществ, глидантов, консервантов, детергентов, сорбентов, эмульгирующих агентов, фармацевтических наполнителей, буферных агентов для регулировки pH или подсластителей и их сочетания. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может представлять собой жидкость, твердый продукт, лиофилизированный порошок, иметь форму геля и/или представлять собой их сочетание. В некоторых аспектах, выбор носителя частично определяется конкретным ингибитором и/или способом введения.

[0324] Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для пациентов при используемых дозах и концентрациях и включают, но, не ограничиваясь этим: буферы, такие как фосфатный, цитратный, и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глютамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; противоионы, образующие соли, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG), стабилизаторы и/или консерванты. Композиции, содержащие иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, могут также лиофилизироваться.

[0325] В некоторых вариантах осуществления, фармацевтические композиции можно приготавливать для введения с помощью любого известного способа, включая внутримышечную, внутривенную, интрадермальную, вводимую внутрь пораженных тканей, внутрибрюшинную инъекцию, подкожное, внутриопухолевое, эпидуральное, назальное, пероральное, вагинальное, ректальное, местное, наружное, внутриушное, ингаляционное, буккальное (например, сублингвальное) и трансдермальное введение или любой другой способ. В некоторых вариантах осуществления, предполагаются также другие способы введения. В некоторых вариантах осуществления, введение осуществляют посредством вливания болюса, посредством инъекции, например, внутривенных или подкожных инъекций, интраокулярной инъекции, периокулярной инъекции, субретинальной инъекции, интравитреальной инъекции, трнасептальной инъекции, субсклеральной инъекции, интрахориоидальной инъекции, интракамеральной инъекции, подконъюктивальной инъекции, подконъюктивальной инъекции, инъекции в теноновую капсулу, ретробульбарной инъекции, перибульбарной инъекции или постериорной джукстасклерной доставки. В некоторых вариантах осуществления, введение осуществляют посредством парентерального, внутрилегочного и интраназального, и, при желании, местного лечения, вводимого внутрь пораженных тканей. Парентеральные вливания включают внутримышечное, внутривенное, интраартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления, назначенная доза вводится посредством одного введения болюса. В некоторых вариантах осуществления, она вводится посредством множества введений болюса, например, за период не более чем 3 дней, или посредством непрерывного введения вливанием.

[0326] В некоторых вариантах осуществления, введение может быть местным, наружным или системным, в зависимости от локуса лечения. В некоторых вариантах осуществления местное введение в область, нуждающуюся в лечении, может достигаться, например, но, не ограничиваясь этим, посредством местного вливания в ходе хирургической операции, наружного нанесения, например, в сочетании с повязкой на раны после хирургической операции, посредством инъекции, посредством катетера, посредством суппозитория, или посредством импланта. В некоторых вариантах осуществления, композиции также можно вводить вместе с другими биологически активными агентами, либо последовательно, поочередно, либо в одной и той же композиции. В некоторых вариантах осуществления, введение также может включать системы с контролируемым высвобождением, включая препараты с контролируемым высвобождением и устройства с контролируемым высвобождением, например, посредством насоса. В некоторых вариантах осуществления, введение является пероральным.

[0327] В некоторых вариантах осуществления, фармацевтически и терапевтически активные соединения и их производные, как правило, приготавливаются и вводятся в отдельных стандартных дозированных формах или во множестве стандартных дозированных форм. Каждая стандартная единичная доза содержит заданное количество терапевтически активного соединения достаточное для оказания желаемого терапевтического воздействия в ассоциации с необходимым фармацевтическим носителем, несущей средой или разбавителем. В некоторых вариантах осуществления, стандартные единичные дозы включают, но, не ограничиваясь этим, таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парентеральные растворы или суспензии и пероральные растворы или суспензии, и эмульсии типа масло в воде, содержащие соответствующие количества соединений или их фармацевтически приемлемых производных. Единичные стандартные дозы могут содержаться в ампулах и шприцах или в отдельно упакованных таблетках или капсулах. Единичные стандартные дозы могут вводиться частями или во множестве их. В некоторых вариантах осуществления, множество единичных стандартных доз представляет собой множество идентичных единичных стандартных доз, упакованных в один контейнер для введения в форме разделенных единичных стандартных доз. Примеры множества единичных стандартных доз включают флаконы, бутылки с таблетками или капсулами или бутылки объемом в пинты или галлоны.

[0328] Активные ингредиенты могут упаковываться в микрокапсулы, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. В определенных вариантах осуществления, фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, приготавливается как комплекс включения, такой как циклодекстриновый комплекс включения, или как липосома. Липосомы могут служить для нацеливания клеток-хозяев (например, T-лимфоцитов или NK-клеток) на конкретную ткань. Для приготовления липосом доступно множество способов, такие как те, которые описаны, например, в Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980), и в патентах США №№ 4235871, 4501728, 4837028 и 5019369.

[0329] Фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, в некоторых аспектах может использовать системы доставки с высвобождением в заданное время, с замедленным высвобождением и распределенным по времени высвобождением, так что доставка композиции происходит до сенсибилизации того места, которое должно лечиться, и за время до этого достаточное, чтобы вызвать сенсибилизацию. Доступно и известно множество типов систем доставки и высвобождения. Такие системы могут устранить многократные введения композиции, тем самым повышая удобство для субъекта и врача.

[0330] Композиции, содержащие иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, могут также лиофилизироваться. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие, диспергирующие или эмульгирующие агенты (например, метилцеллюлозу), буферные агенты для регулировки pH, гелеобразующие или увеличивающие вязкость добавки, консерванты, ароматизирующие агенты, красители, и тому подобное, в зависимости от способа введения и желаемого препарата. В некоторых аспектах можно проконсультироваться со стандартными текстами для приготовления соответствующих препаратов.

[0331] Могут добавляться различные добавки, которые повышают стабильность и стерильность композиций, включая антимикробные консерванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и буферы. Предотвращение действия микроорганизмов может обеспечиваться с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, и тому подобное. Пролонгированное поглощение фармацевтической формы для инъекций можно получить при использовании агентов, замедляющих поглощение, например, алюминия моностеарата и желатина.

[0332] Можно приготовить препараты с длительным высвобождение. Соответствующие примеры препаратов с длительным высвобождением включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, эти матрицы имеют форму формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.

[0333] В некоторых вариантах осуществления, композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в форме соли, например, фармацевтически приемлемой соли. Соответствующие фармацевтически приемлемые соли добавления кислот включают соли, полученные из минеральных кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, фосфорная, метафосфорная, азотная и серная кислота, и из органических кислот, таких как винная, уксусная, лимонная, яблочная, молочная, фумаровая, бензойная, гликолевая, глюконовая, янтарная и арилсульфоновая кислота, например, п-толуолсульфоновая кислота.

2. Временной график дозирования иммуномодуляторного соединения

[0334] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемый способ сочетанной терапии включает введение субъекту терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного лекарственного средства (иммуномодуляторного соединения), например, леналидомида, и клеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов).

[0335] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, начинается до, после, в ходе, в течение курса, одновременно или почти одновременно, последовательно и/или поочередно с введением клеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты). В некоторых вариантах осуществления, способ включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, до введения Т-клеточной терапии. В других вариантах осуществления, способ включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, после введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, временной график дозирования включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, одновременно или синхронно с введением Т-клеточной терапии.

[0336] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле. В некоторых вариантах осуществления, цикл включает период введения, при котором иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, не вводится. В некоторых вариантах осуществления, общее количество дней цикла, например, от начала старта введения иммуномодуляторного соединения, более или примерно более, чем, или составляет примерно 21 день, 28 дней, 30 дней, 40 дней, 50 дней, 60 дней или больше.

[0337] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день, необязательно, одновременно. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомид, по меньшей мере, в одном цикле происходит одновременно или в один и тот же день, что и начало введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится от или примерно от 0 до 30 дней, например, от 0 до 15 дней, от 0 до 6 дней, от 0 до 96 часов, от 0 до 24 часов, от 0 до 12 часов, от 0 до 6 часов или от 0 до 2 часов, от 2 часов до 15 дней, от 2 часов до 6 дней, от 2 часов до 96 часов, от 2 часов до 24 часов, от 2 часов до 12 часов, от 2 часов до 6 часов, от 6 часов до 30 дней, от 6 часов до 15 дней, от 6 часов до 6 дней, от 6 часов до 96 часов, от 6 часов до 24 часов, от 6 часов до 12 часов, от 12 часов до 30 дней, от 12 часов до 15 дней, от 12 часов до 6 дней, от 12 часов до 96 часов, от 12 часов до 24 часов, от 24 часов до 30 дней, от 24 часов до 15 дней, от 24 часов до 6 дней, от 24 часов до 96 часов, от 96 часов до 30 дней, от 96 часов до 15 дней, от 96 часов до 6 дней, от 6 дней до 30 дней, от 6 дней до 15 дней или от 15 дней до 30 дней до начала Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится примерно не более, чем за 96 часов, 72 часов, 48 часов, 24 часов, 12 часов, 6 часов, 2 часов или за 1 час до начала Т-клеточной терапии.

[0338] В некоторых таких вариантов осуществления, в которых иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, назначают до клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR), введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, продолжается через регулярные интервалы до начала клеточной терапии и/или в течение некоторого времени после начал клеточной терапии.

[0339] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится или продолжает вводиться после введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в пределах или примерно в пределах 1 часа, 2 часов, 6 часов, 12 часов, 24 часов, 48 часов, 96 часов, 4 дней, 5 дней, 6 дней или 7 дней, 14 дней, 15 дней, 21 дней, 24 дней, 28 дней, 30 дней, 36 дней, 42 дней, 60 дней, 72 дней или 90 дней после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии,). В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы включают непрерывное введение, например, через регулярные интервалы, иммуномодуляторного соединения после начала введения клеточной терапии.

[0340] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до или примерно до 1 дня, до или примерно до 2 дней, до или примерно до 3 дней, до или примерно до 4 дней, до или примерно до 5 дней, до или примерно до 6 дней, до или примерно до 7 дней, до или примерно до 12 дней, до или примерно до 14 дней, до или примерно до 21 дней, до или примерно до 24 дней, до или примерно до 28 дней, до или примерно до 30 дней, до или примерно до 35 дней, до или примерно до 42 дней, до или примерно до 60 дней или до или примерно до 90 дней, до или примерно до 120 дней, до или примерно до 180 дней, до или примерно до 240 дней, до или примерно до 360 дней, или до или примерно до 720 дней или более после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR).

[0341] В некоторых таких приведенных выше вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до и после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR).

[0342] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0343] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, происходит, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, через 1 день, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 3 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 4 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 6 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 7 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 8 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 9 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 10 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 12 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 14 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 15 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 21 день, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 24 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 28 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 30 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 35 дней или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 42 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 60 дней, или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, через 90 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют в момент времени, который наступает более или примерно более, чем через 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится несколько раз в день, дважды день, ежедневно, через день, три раза в неделю, дважды в неделю, или один раз в неделю после начала клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно. В некоторых вариантах осуществления иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится дважды в день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится три раза день. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится через день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение множества последовательных дней, например, примерно до 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более 30 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение до 21 дня, последовательно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения.

[0344] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение не более примерно, чем 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или не более чем 30 последовательных дней. В определенных вариантах осуществления, леналидомид вводится один раз в день в течение 14 дней в течение 21-дневного цикла лечения. В определенных вариантах осуществления, леналидомид вводится один раз в день в течение 21 дня в течение 28-дневного цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение не более 14 последовательных дней.

[0345] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле, где цикл включает введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше примерно, чем 1 день, больше примерно, чем 3 последовательных дня, больше примерно, чем 5 последовательных дней, больше примерно, чем 7 последовательных дней, больше примерно, чем 8 последовательных дней, больше примерно, чем 9 последовательных дней, больше примерно, чем 10 последовательных дней, больше примерно, чем 11 последовательных дней, больше примерно, чем 12 последовательных дней, больше примерно, чем 13 последовательных дней, больше примерно, чем 14 последовательных дней, больше примерно, чем 15 последовательных дней, больше примерно, чем 16 последовательных дней, больше примерно, чем 17 последовательных дней, больше примерно, чем 18 последовательных дней, больше примерно, чем 19 последовательных дней, больше примерно, чем 20 последовательных дней, или больше примерно, чем 21 или более последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше примерно, чем 14 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, цикл введения иммуномодуляторного соединения не включает периода покоя.

[0346] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле, где цикл повторяют, по меньшей мере, один раз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов, или, по меньшей мере, 12 циклов. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 циклов.

[0347] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится шесть раз в день, пять раз в день, четыре раза в день, три раза в день, два раза в день, один раз в день, через день, каждые три дня, дважды в неделю, один раз в неделю или только один раз до или после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится во множестве доз через регулярные интервалы до, в ходе, в течение курса и/или после периода введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в одной или нескольких дозах через регулярные интервалы до введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в одной или нескольких дозах через регулярные интервалы после введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько дозирований иммуномодуляторного соединения, например, леналидомид, могут осуществляться одновременно с введением дозы Т-клеточной терапии.

[0348] В некоторых вариантах осуществления, доза, частота, продолжительность, распределение по времени и/или порядок введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, определяется, на основе конкретных порогов или критериев, результатов стадии скрининга и/или оценки результатов лечения, описанных в настоящем документе, например, описанных в Разделе III настоящего документа.

[0349] В некоторых вариантах осуществления, способ включает введение клеточной терапии субъекту, которому ранее вводили терапевтически эффективное количество иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится субъекту до введения дозы клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, лечение иммуномодуляторным соединением происходит в тот же момент времени, что и введение дозы клеток. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится после введения дозы клеток.

[0350] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится дважды в день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится три раза день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится через день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более.

[0351] В некоторых вариантах осуществления способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, и Т-клеточная терапия вводятся одновременно или почти одновременно.

[0352] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при дозе от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, это количество представляет собой ежедневно вводимое количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0353] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при дозе примерно от 1 мг примерно до 20 мг, например, примерно от 1 мг примерно до 10 мг, примерно от 2,5 мг примерно до 7,5 мг, примерно от 5 мг примерно до 15 мг, например, примерно 5 мг, 10 мг, 15 мг или 20 мг. В некоторых вариантах осуществления, леналидомид вводится при дозе примерно от 10 мкг/кг до 5 мг/кг, например, примерно 100 мкг/кг примерно до 2 мг/кг, примерно 200 мкг/кг примерно до 1 мг/кг, примерно 400 мкг/кг примерно до 600 мкг/кг, например, примерно 500 мкг/кг. В некоторых вариантах осуществления, это количество представляет собой ежедневно вводимое количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0354] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день. В некоторых вариантах осуществления, доза леналидомида составляет или примерно составляет 25 мг в день. В конкретных вариантах осуществления, доза леналидомида составляет или примерно составляет 10 мг в день.

[0355] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше 25 мг. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше 25 мг в день.

[0356] В любом из рассмотренных выше вариантов осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может вводиться перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в виде таблетки или капсулы.

[0357] В некоторых вариантах осуществления, дозировки, такие как ежедневная дозировка, вводятся в одной или нескольких разделенных дозах, например, в 2, 3 или 4 дозах, или в одном препарате. Иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может вводиться отдельно в присутствии фармацевтически приемлемого носителя или в присутствии других терапевтических агентов.

[0358] Понятно, что можно использовать более высокие или более низкие дозы иммуномодуляторного соединения, например, в зависимости от конкретного агента и способа введения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение может вводиться отдельно или в форме фармацевтической композиции, где соединение присутствует в добавке или смеси с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение может вводиться либо системно, либо местным образом в орган или ткань, которая должна лечиться. Иллюстративные способы введения включают, но, не ограничиваясь этим, наружный, инъекцию (такую как подкожная, внутримышечная, интрадермальная, внутрибрюшинная, внутриопухолевая и внутривенная), пероральный, сублингвальный, ректальный, трансдермальный, интраназальный, вагинальный и ингаляционный способы. В некоторых вариантах осуществления, способ введения представляет собой пероральный, парентеральный, ректальный, назальный, наружный или окулярный способ, или ингаляцию. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально в твердых дозированных формах, таких как капсулы, таблетки и порошки, или в жидких дозированных формах, таких как эликсиры, сиропы и суспензии.

[0359] После улучшения состояния пациента доза может регулироваться для превентивного или поддерживающего лечения. Например, доза или частота введения, или как то, так и другое, могут уменьшаться в зависимости от симптомов, до уровня, при котором поддерживается желаемое терапевтическое или профилактическое воздействие. Если симптомы облегчаются до соответствующего уровня, лечение может прекратиться. Однако пациенты могут требовать периодического лечения на долговременной основе при любом возобновлении симптомов. Пациенты могут также потребовать хронического лечения на долговременной основе.

C. Противолимфоцитарное лечение

[0360] В некоторых аспектах, предлагаемые способы могут дополнительно включать введение одного или нескольких видов противолимфоцитарной терапии, например, до или одновременно с началом введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия включает введение фосфамида, такого как циклофосфамид. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия может включать введение флударабина.

[0361] В некоторых аспектах, предварительная подготовка субъектов с помощью с иммунодеплеционной (например, противолимфоцитарной) терапии может улучшить воздействия адоптивной клеточной терапии (ACT). Предварительная подготовка с помощью противолимфоцитарных агентов, включающая сочетания циклоспорина и флударабина, является эффективной при улучшении эффективности переносимых противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL) при клеточной терапии, включая улучшение реакции и/или персистентности переносимых клеток. Смотри, например, Dudley et al., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17(13):4550-4557 (2011). Подобным же образом, в контексте Т-лимфоцитов CAR+, несколько исследований включали противолимфоцитарные агенты, чаще всего, циклофосфамид, флударабин, бендамустин или их сочетания, иногда сопровождавшиеся низкими дозами облучения. Смотри Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Transl Med, 3(95):95ra73 (2011); Clinical Trial Study Record Nos.: NCT02315612; NCT01822652.

[0362] Такая предварительная подготовка может осуществляться с целью уменьшения риска появления одного или нескольких из различных результатов, которые могли бы уменьшить эффективность терапии. Они включают явление известное как “сток цитокинов”, при котором Т-лимфоциты, B-лимфоциты, NK-клетки конкурируют с TIL за гомеостатические и активирующие цитокины, такие как IL-2, IL-7 и/или IL-15; подавление TIL регуляторными Т-лимфоцитами, NK-клетками или другими клетками иммунной системы; воздействие отрицательных регуляторов на микроокружение опухоли. Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. December; 3(12): 668-681 (2006).

[0363] Таким образом в некоторых вариантах осуществления, предлагаемый способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной терапии субъекту. В некоторых вариантах осуществления, способ включает введение противолимфоцитарной терапии субъекту до введения дозы клеток. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия включает химиотерапевтический агент, такой как флударабин и/или циклофосфамид. В некоторых вариантах осуществления, введение клеток и/или противолимфоцитарной терапии осуществляют посредством экстракорпоральной доставки.

[0364] В некоторых вариантах осуществления, способы включают введение агента для предварительной подготовки, такого как противолимфоцитарный или химиотерапевтический агент, такой как циклофосфамид, флударабин или их сочетания, субъекту до введения дозы клеток. Например, субъекту можно вводить агент для предварительной подготовки, по меньшей мере, за 2 дня, например, по меньшей мере, за 3, 4, 5, 6, или 7 дней до первого или последующего дозирования. В некоторых вариантах осуществления, субъекту вводят агент для предварительной подготовки не более чем за 7 дней, например, не более чем 6, 5, 4, 3 или 2 дня до введения дозы клеток.

[0365] В некоторых вариантах осуществления, субъект предварительно подготавливается с помощью циклофосфамида при дозе, находящейся в пределах между или примерно между 20 мг/кг и 100 мг/кг, например, находящейся в пределах между или примерно между 40 мг/кг и 80 мг/кг. В некоторых аспектах, субъект предварительно подготавливается с помощью (или примерно) 60 мг/кг циклофосфамида. В некоторых вариантах осуществления, флударабин может вводиться в одной дозе или может вводиться во множестве доз, например, получаемых ежедневно, через день или каждые три дня. В некоторых вариантах осуществления, циклофосфамид вводится один раз в день в течение одного или двух дней.

[0366] В некоторых вариантах осуществления, когда противолимфоцитарный агент содержит флударабин, субъекту вводится флударабин при дозе, находящейся в пределах между или примерно между 1 мг/м² и 100 мг/м², например, находящейся в пределах между или примерно между 10 мг/м² и 75 мг/м², 15 мг/м² и 50 мг/м², 20 мг/м² и 30 мг/м², или 24 мг/м² и 26 мг/м². В некоторых случаях, субъекту вводится 25 мг/м² флударабина. В некоторых вариантах осуществления, флударабин может вводиться в одной дозе или может вводиться во множестве доз, например, получаемых ежедневно, через день или каждые три дня. В некоторых вариантах осуществления, флударабин вводится ежедневно, например, в течение 1-5 дней, например, в течение 3-5 дней.

[0367] В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарный агент содержит сочетание агентов, такое как сочетание циклофосфамида и флударабина. Таким образом, сочетание агентов может содержать циклофосфамид при любом временном графике дозирования или введения, например, как описано выше, и флударабин при любом временном графике дозирования или введения, например, как описано выше. Например, в некоторых аспектах, перед дозированием клеток субъекту вводится 60 мг/кг (~2 г/м²) циклофосфамида и 3-5 доз 25 мг/м² флударабина.

[0368] В одном из иллюстративных режимов дозирования перед получением первой дозы субъект получает иммуномодуляторное соединение за 1 день до введения клеток и противолимфоцитарную химиотерапию из циклофосфамида и флударабина (CY/FLU) для предварительной подготовки, которую вводят, по меньшей мере, за два дня до первой дозы CAR-экспрессирующих клеток и, как правило, не более чем за 7 дней до введения клеток. В другом иллюстративном режиме дозирования субъекты получают иммуномодуляторное соединение одновременно с введением клеток, например, в тот же день. Еще в одном иллюстративном режиме дозирования субъекты получают иммуномодуляторное соединение через несколько дней после введения клеток, например, через 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более чем через 14 дней. В некоторых случаях, например, циклофосфамид дают через 24-27 дней после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. После предварительной подготовки субъектам вводят дозу CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, как описано выше.

[0369] В некоторых вариантах осуществления, введение агента для предварительной подготовки перед вливанием дозы клеток улучшает результат лечения. Например, в некоторых аспектах, предварительная подготовка улучшает эффективность лечения с помощью дозы или увеличивает персистентность клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, предварительная подготовка увеличивает выживаемость после заболевания, такую как процент субъектов, которые выживают и не демонстрируют минимального остаточного или молекулярно детектируемого заболевания через заданный период времени после дозирования клеток. В некоторых вариантах осуществления, увеличивается время медианной выживаемости после заболевания.

[0370] После введения клеток субъекту (например, человеку), биологическая активность популяций генно-инженерных клеток в некоторых аспектах измеряется с помощью любого из многочисленных известных способов. Параметры оценки включают специфичное связывание генно-инженерных или природных Т-лимфоцитов или других иммунных клеток с антигеном, in vivo, например, посредством получения изображений, или ex vivo, например, с помощью ELISA или проточной цитометрии. В определенных вариантах осуществления, способность генно-инженерных клеток разрушать целевые клетки можно измерить с использованием любого соответствующего способа известного в данной области, такого как анализы цитотоксичности, описанные, например, в Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009) и Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). В определенных вариантах осуществления, биологическая активность клеток может также измеряться по анализу экспрессирования и/или секретирования определенных цитокинов, таких как CD107a, IFNγ, IL-2 и TNF. В некоторых аспектах биологическая активность измеряется посредством оценки клинических результатов лечения, таких как уменьшение массы или нагрузки опухоли. В некоторых аспектах оценивают токсические результаты лечения, персистентность и/или размножение клеток, и/или присутствие или отсутствие иммунной реакции хозяина.

[0371] В некоторых вариантах осуществления, введение агента для предварительной подготовки перед вливанием дозы клеток улучшает результат лечения, например, посредством улучшения эффективности лечения с помощью этой дозы, или повышает персистентность клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) у субъекта. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления, доза агента для предварительной подготовки, которую дают в способе, который представляет собой сочетанную терапию с иммуномодуляторным соединением и клеточной терапией, выше, чем доза, которую дают в способе без иммуномодуляторного соединения.

II. Т-клеточная терапия и генно-инженерные клетки

[0372] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия для применения вместе с предлагаемыми способами сочетанной терапии включает введение генно-инженерных клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, сконструированных для распознавания и/или специфичного связывания молекул, ассоциируемых с заболеванием или состоянием, и они дают в результате реакцию, такую как иммунная реакция, против таких молекул при связывании с такими молекулами. Рецепторы могут включать химерные рецепторы, например, химерные рецепторы антигенов (CAR), и другие трансгенные рецепторы антигенов, включая трансгенные рецепторы Т-лимфоцитов (TCR).

[0373] В некоторых вариантах осуществления, клетки включают генно-инженерные клетки или получаются из них таким образом, чтобы они содержали генно-инженерный рецептор, например, генно-инженерный рецептор антигена, такой как химерный рецептор антигена (CAR) или рецептор Т-лимфоцитов (TCR). Также предлагаются популяции таких клеток, композиции, содержащие такие клетки и/или обогащенные такими клетками, например, в которых клетки определенного типа, такие как Т-лимфоциты или клетки CD8+ или CD4+, являются обогащенными или выбранными. Среди композиций находятся фармацевтические композиции и препараты для введения, например, для адоптивной клеточной терапии. Также предлагаются терапевтические способы введения клеток и композиций субъектам, например, пациентам.

[0374] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одну или несколько нуклеиновых кислот, введенных посредством генной инженерии, и при этом экспрессируют рекомбинантные или генно-инженерные продукты таких нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах осуществления, перенос гена осуществляется посредством сначала стимулирования клеток, например, посредством объединения их со стимулом, который индуцирует реакцию, такую как пролиферация, выживаемость и/или активирование, например, как измерено с помощью экспрессирования цитокина или маркера активации, с последующим трансдуцированием активированных клеток и размножением в культуре до количеств, достаточных для клинических применений.

A. Рекомбинантные рецепторы

[0375] Клетки, как правило, экспрессируют рекомбинантные рецепторы, такие как рецепторы антигена, включая функциональные рецепторы не-TCR антигена, например, химерные рецепторы антигена (CAR), и другие антиген-связывающие рецепторы, такие как трансгенные рецепторы Т-лимфоцитов (TCR). Также среди рецепторов имеются другие химерные рецепторы.

1. Химерные рецепторы антигена (CAR)

[0376] В некоторых вариантах осуществления, генно-инженерные клетки, такие как Т-лимфоциты, используемые в предлагаемых вариантах осуществления, экспрессируют CAR со специфичностью к конкретному антигену (или маркеру или лиганду), такому как антиген, экспрессируемый на поверхности конкретного типа клеток. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой полипептид. В некоторых вариантах осуществления, он представляет собой углевод или другую молекулу. В некоторых вариантах осуществления, антиген селективно экспрессируется или сверхэкспрессируется на клетках заболевания или состояния, например, на клетках опухоли или патогенных клетках, по сравнению с нормальными или нецелевыми клетками или тканями. В других вариантах осуществления, антиген экспрессируется на нормальных клетках и/или экспрессируется на генно-инженерных клетках.

[0377] В конкретных вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, такой как химерный рецептор, содержит внутриклеточную сигнальную область, которая содержит цитоплазматический сигнальный домен или область (также взаимозаменяемо называемую внутриклеточным сигнальным доменом или областью), такую как цитоплазматическая (внутриклеточная) область способная индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, например, цитоплазматический сигнальный домен или область компонента рецептора Т-лимфоцита (TCR) (например, цитоплазматический сигнальный домен или область цепи зета цепи CD3-зета (CD3ζ) или функциональный вариант или ее сигнальную часть) и/или которая содержит иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

[0378] В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор дополнительно содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен, который специфично связывается с лигандом антигена (например, антигена). В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор представляет собой CAR, который содержит внеклеточный антиген-распознающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, лиганд, такой как антиген, представляет собой белок, экспрессируемый на поверхности клеток.

[0379] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой TCR-подобный CAR и антиген представляет собой процессированный пептидный антиген, такой как пептидный антиген внутриклеточного белка, который, подобно TCR, распознается на поверхности клетки в контексте молекулы главного комплекса гистосовместимости (MHC). Как правило, CAR содержащий антитело или антиген-связывающий фрагмент, который демонстрирует TCR-подобную специфичность, направленную против комплексов пептид-MHC, также может упоминаться как TCR-подобный CAR. В некоторых вариантах осуществления, внеклеточный антиген-связывающий домен специфичный к комплексу MHC-пептид TCR-подобного CAR связывается с одним или несколькими внутриклеточными сигнальными компонентами, в некоторых аспектах посредством линкеров и/или трансмембранного домена (доменов). В некоторых вариантах осуществления, такие молекулы, как правило, могут воспроизводить или примерно воспроизводить сигнал через природный рецептор антигена, такой как TCR, и необязательно, сигнал через такой рецептор в сочетании с костимуляторным рецептором.

[0380] Иллюстративные рецепторы антигенов, включая CAR, и способы генной инженерии и введения таких рецепторов в клетки, включают способы, описанные, например, в публикациях Международных заявок на патенты номера WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995, 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342 и в заявке на Европейский патент номер EP2537416, и/или способы, описанные Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). В некоторых аспектах, рецепторы антигенов включают CAR, как описано в патенте США № 7446190, и те, которые описаны в публикации Международной заявки на патент № WO/2014055668 A1. Примеры CAR включают CAR, как описано в любой из рассмотренных выше публикаций, таких как WO2014031687, патент США №№ 8339645, патент США № 7446179, патент США № 2013/0149337, патент США № 7446190, патент США № 8389282, Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); и Brentjens et al., Sci Transl Med. 5(177) (2013). Смотри также WO2014031687, патент США № 8339645, патент США № 7446179, патент США № 2013/0149337, патент США № 7446190 и патент США № 8389282. Химерные рецепторы, такие как CAR, как правило, содержат внеклеточный антиген-связывающий домен, такие как часть молекулы антитела, как правило, вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и/или вариабельную область легкой цепи (V_L) антитела, например, фрагмент scFv антитела.

[0381] В некоторых вариантах осуществления, CAR конструируют со специфичностью к конкретному антигену (или маркеру или лиганду), такому как антиген, экспрессируемый в конкретном типе клеток, на который должна нацеливаться адоптивная терапия, например, маркер ракового заболевания и/или антиген, предназначенный для индуцирования демпфирующей реакции, такой как антиген, экспрессируемый на нормальном или неболезненном типе клеток. Таким образом, CAR, как правило, содержит в своей внеклеточной части одну или несколько антиген-связывающих молекул, таких как один или несколько антиген-связывающих фрагментов, доменов или частей, или один или несколько вариабельных доменов антител и/или молекулы антитела. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антиген-связывающую часть или части молекулы антитела, такую как одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), полученный из вариабельных тяжелых (V_H) и вариабельных легких (V_L) цепей моноклонального антитела (mAb), или однодоменного антитела (sdAb), такого как sdFv, нанотело, V_HH и V_NAR. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.

[0382] Среди антиген-связывающих доменов, включенных в CAR, имеются фрагменты антитела. “Фрагмент антитела” или “антиген-связывающий фрагмент” относится к молекуле иной, чем интактное антитело, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антитела включают, но, не ограничиваясь этим, Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)₂; диатела; линейные антитела; вариабельные области тяжелой цепи (V_H), одноцепочечные молекулы антител, такие как scFv, и однодоменные антитела, содержащие только область V_H; и мультиспецифичные антитела, сформированные из фрагментов антител. В конкретных вариантах осуществления, антитела представляют собой одноцепочечные фрагменты антител, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и/или вариабельную область легкой цепи (V_L), такие как scFv.

[0383] В определенных вариантах осуществления, мультиспецифичные связывающие молекулы, например, мультиспецифичные химерные рецепторы, такие как мультиспецифичные CAR, могут содержать любое из мультиспецифичных антител, включая, например, биспецифичные антитела, мультиспецифичные одноцепочечные антитела, например, диатела, триатела и тетратела, тандем ди-scFv и тандем три-scFv.

[0384] Однодоменные антитела (sdAbs) представляют собой фрагменты антител, содержащие всю вариабельную область тяжелой цепи антитела или часть ее или всю вариабельную область легкой цепи или часть ее. В определенных вариантах осуществления, однодоменное антитело представляет собой однодоменное антитело человека.

[0385] Фрагменты антитела могут быть получены с помощью различных методик, включая, но, не ограничиваясь этим, протеолитическую ферментацию интактного антитела, а также продуцирование рекомбинантными клетками-хозяевами. В некоторых вариантах осуществления, антитела представляют собой рекомбинантно-продуцируемые фрагменты, такие как фрагменты, содержащие группировки, которые не встречаются в природе, такие как фрагменты с двумя или более областями или цепями антител, соединенные синтетическими линкерами, например, пептидными линкерами, и/или такие, которые не могут быть получены с помощью ферментативного переваривания встречающегося в природе интактного антитела. В некоторых аспектах, фрагменты антитела представляют собой scFv.

[0386] В некоторых вариантах осуществления, антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой одноцепочечный фрагмент антитела, такой как одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) или диатело или однодоменное антитело (sdAb). В некоторых вариантах осуществления, антитело или антиген-связывающий фрагмент представляет собой однодоменное антитело, содержащее только область V_H. В некоторых вариантах осуществления, антитело или антиген-связывающий фрагмент представляет собой scFv, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и вариабельную область легкой цепи (V_L).

[0387] В некоторых вариантах осуществления, антиген, на который нацелен рецептор, представляет собой полипептид. В некоторых вариантах осуществления, он представляет собой углевод или другую молекулу. В некоторых вариантах осуществления, антиген селективно экспрессируется или сверхэкспрессируется на клетках заболевания или состояния, например, на опухолевых или патогенных клетках, по сравнению с нормальными или нецелевыми клетками или тканями. В других вариантах осуществления, антиген экспрессируется на нормальных клетках и/или экспрессируется на генно-инженерных клетках.

[0010] В определенных вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит интегрин αvβ6 (интегрин avb6), антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), B7-H3, B7-H6, угольную ангидразу 9 (CA9, также известную как CAIX или G250), антиген рака яичек, антиген рака яичек 1B (CTAG, также известный как NY-ESO-1 и LAGE-2), канцероэмбриональный антиген (CEA), циклин, A2 циклин, лиганд 1 C-C мотива хемокинов (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, хондроитинсульфат протеогликан 4 (CSPG4), белок эпидермального фактора роста (EGFR), усеченный белок эпидермального фактора роста (tEGFR), мутацию рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFR vIII), эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), эфрин B2, рецептор эфрина A2 (EPHa2), рецептор эстрогенов, Fc рецептор подобный 5 (FCRL5; также известный как Fc рецептор гомолог 5 или FCRH5), рецептор фетального ацетилхолина (фетальный AchR), фолат-связывающий белок (FBP), рецептор фолата альфа, ганглиозид GD2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), ганглиозид GD3, гликопротеин 100 (gp100), глипикан-3 (GPC3), рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), димеры erbB, высокомолекулярный антиген человека, ассоциированный с меланомой (HMW-MAA), поверхностный антиген гепатита B, антиген лейкоцита A1 человека (HLA-A1), антиген лейкоцита A2 человека (HLA-A2), рецептор альфа IL-22(IL-22Rα), рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Rα2), рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, молекулу адгезии клетки L1 (L1-CAM), CE7 эпитоп L1-CAM, обогащенную лейцином вставку, содержащую элемент A семейства 8 (LRRC8A), антиген Ley, антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, мезотелин (MSLN), c-Met, мышиный цитомегаловирус (CMV), муцин 1 (MUC1), MUC16, лиганды элемента D группы 2 природных киллеров (NKG2D), мелан A (MART-1), молекулу адгезии нервных клеток (NCAM), онкофетальный антиген, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), рецептор прогестерона, простата-специфичный антиген, антиген стволовых клеток простаты (PSCA), простата-специфичный мембранный антиген (PSMA), рецептор тирозинкиназы подобный орфанному рецептору 1 (ROR1), сурвивин, гликопротеин трофобластов (TPBG также известный как 5T4), гликопротеин 72, ассоциированный с опухолью (TAG72), белок 1 родственный тирозиназе (TRP1, также известный как TYRP1 или gp75), белок 2 родственный тирозиназе (TRP2, также известный как допахромтаутомераза, допахром дельта-изомераза или DCT), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов (VEGFR), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов 2 (VEGFR2), опухоль Вильмса 1 (WT-1), патоген-специфичный или экспрессируемый патогеном антиген или антиген, ассоциированный с универсальной меткой, и/или биотинилированные молекулы, и/или молекулы, экспрессируемые ВИЧ, ВГС, ВГВ или другими патогенами. Антигены, на которые нацелены рецепторы, в некоторых вариантах осуществления, включают антигены, связанные с раком В-лимфоцитов, такие как любой из множества известных маркеров B-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igкаппа, Igлямбда, CD79a, CD79b или CD30.

[0388] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит патоген-специфичный или экспрессируемый патогеном антиген. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой вирусный антиген (такой как вирусный антиген от ВИЧ, ВГС, ВГВ, и тому подобное), бактериальные антигены и/или паразитарные антигены.

[0389] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой CAR анти-BCMA, который является специфичным к BCMA, например, к BCMA человека. Химерные рецепторы антигенов, содержащие антитела анти-BCMA, включая антитела BCMA мыши анти-человек и антитела BCMA человека анти-человек, и клетки, экспрессирующие такие химерные рецепторы, описаны ранее. Смотри Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, US 9765342, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/094304, WO2017/025038 и WO2017173256. В некоторых вариантах осуществления, CAR анти-BCMA содержит антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержащий вариабельную тяжелую (V_H) и/или вариабельную легкую (V_L) область, полученную из антитела, описанного в WO 2016/090320 или WO2016090327. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен представляет собой фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и вариабельную область легкой цепи (V_L). В некоторых аспектах область, V_H представляет собой или содержит последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с последовательностью аминокислот области V_H, приведенной в любой из SEQ ID NOs: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 181, 183, 185 и 188; и/или область V_L представляет собой или включает последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с последовательностью аминокислот области V_L, приведенной в любой из SEQ ID NOs: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 182, 184, 186 и 189.

[0390] В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 30, и V_L, приведенную в SEQ ID NO:31. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 32, и V_L приведенную в SEQ ID NO:33. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 34, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 36 и V_L, приведенную в SEQ ID NO:37. В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 38 и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 40, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 42, и V_L приведенную в SEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 77, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 79, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 81, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 83, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 85, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 86. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 87, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 88. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 89, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 91, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 93, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 95, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 97, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 99, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 101, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 102. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 103, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 105, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 107, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 30, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 108. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 109, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 110. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 111, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 181, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 182. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 183, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 184. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 185, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 186. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит V_H, приведенную в SEQ ID NO: 187, и V_L, приведенную в SEQ ID NO: 188. В некоторых вариантах осуществления, V_H или V_L имеет последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с любой из рассмотренных выше последовательностей V_H или V_L и сохраняет связывание с BCMA. В некоторых вариантах осуществления, область V_H находится на амино окончании области V_L. В некоторых вариантах осуществления, область V_H находится на карбокси окончании области V_L. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74 или 189.

[0391] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой CAR анти-CD19, который является специфичным к CD19, например, к CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен содержит V_H и/или V_L, полученные из FMC63, который, в некоторых аспектах, может представлять собой scFv. В некоторых вариантах осуществления домены scFv и/или V_H получают из FMC63. FMC63, в целом, относится к моноклональному антителу IgG1 мыши, полученному против клеток Nalm-1 и -16, экспрессирующих CD19 человеческого происхождения (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). Антитело FMC63 содержит CDRH1 и H2, приведенные в SEQ ID NOS: 44, 45, соответственно, и CDRH3, приведенные в SEQ ID NOS: 46 или 47, и CDRL1, приведенные в SEQ ID NOS: 48, и CDR L2, приведенные в SEQ ID NO: 49 или 50, и последовательности CDR L3, приведенные в SEQ ID NO: 51 или 52. Антитело FMC63 содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H), содержащую последовательность аминокислот SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи (V_L), содержащую последовательность аминокислот SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах осуществления, svFv содержит вариабельную легкую цепь, содержащую последовательность CDRL1 из SEQ ID NO:48, последовательность CDRL2 из SEQ ID NO:49 и последовательность CDRL3 из SEQ ID NO:51, и/или вариабельную тяжелую цепь, содержащую последовательность из CDRH1 SEQ ID NO:44, последовательность CDRH2 из SEQ ID NO:45, и последовательность из CDRH3 SEQ ID NO:46. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит вариабельную область тяжелой цепи FMC63, приведенную в SEQ ID NO:53, и вариабельную область легкой цепи FMC63, приведенную в SEQ ID NO:54. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74 или 189. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, V_H, линкер и V_L. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, V_L, линкер и V_H. В некоторых вариантах осуществления, svFv кодируется последовательностью нуклеотидов, приведенной в SEQ ID NO:69, или последовательностью, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:69. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:55, или последовательность, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:55.

[0392] В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен содержит V_H и/или V_L, полученные из SJ25C1, который, в некоторых аспектах, может представлять собой scFv. SJ25C1 представляет собой моноклональное антитело IgG1 мыши, полученное против клеток Nalm-1 и -16, экспрессирующих CD19 человеческого происхождения (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). Антитело SJ25C1 содержит CDRH1, H2 и H3, приведенные в SEQ ID NOS: 59-61, соответственно, и последовательности CDRL1, L2 и L3, приведенные в SEQ ID NOS: 56-58, соответственно. Антитело SJ25C1 содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H), содержащую последовательность аминокислот из SEQ ID NO: 62, и вариабельную область легкой цепи (V_L), содержащую последовательность аминокислот из SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления, svFv содержит вариабельную легкую цепь, содержащую последовательность CDRL1 из SEQ ID NO:56, последовательность CDRL2 из SEQ ID NO: 57 и последовательность из CDRL3 SEQ ID NO:58 и/или вариабельную тяжелую цепь, содержащую последовательность CDRH1 из SEQ ID NO:59, последовательность CDRH2 из SEQ ID NO:60 и последовательность из CDRH3 SEQ ID NO:61. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит вариабельную область тяжелой цепи SJ25C1, приведенную в SEQ ID NO:62, и вариабельную область легкой цепи SJ25C1, приведенную в SEQ ID NO:63. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO:64. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, V_H, линкер и V_L. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, V_L, линкер и V_H. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:65, или последовательность, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:65.

[0393] В некоторых вариантах осуществления, антитело представляет собой антиген-связывающий фрагмент, такой как scFv, который содержит один или несколько линкеров, соединяющих два домена или области антитела, таких как вариабельная область тяжелой цепи (V_H) и вариабельная область легкой цепи (V_L). Соответственно, антитела содержат одноцепочечные фрагменты антител, такие как scFv, и диатела, в частности, одноцепочечные фрагменты антител человека, как правило, содержащие линкер (линкеры), соединяющий два домена или области антитела, такие как области V_H и V_L. Как правило, линкер представляет собой пептидный линкер, например, гибкий и/или растворимый пептидный линкер, например, обогащенный глицином и серином. Среди линкеров имеются обогащенные глицином и серином, и/или, в некоторых случаях, треонином. В некоторых вариантах осуществления, линкеры дополнительно содержат заряженные остатки, такие как лизин и/или глютамат, которые могут улучшить растворимость. В некоторых вариантах осуществления, линкеры дополнительно содержат один или несколько пролинов.

[0394] В некоторых аспектах, линкеры, обогащенные глицином и серином (и/или треонином), содержат, по меньшей мере, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% такой аминокислоты (аминокислот). В некоторых вариантах осуществления, они содержат, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 50%, 55%, 60%, 70% или 75%, глицина, серина и/или треонина. В некоторых вариантах осуществления, линкер состоит, по существу, полностью из глицина, серина и/или треонина. Как правило, линкеры содержат в пределах примерно между 5 и примерно 50 аминокислотами, как правило, между (или примерно) 10 и (или примерно) 30, например, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30, а в некоторых примерах, в пределах между 10 и 25 аминокислотами. Иллюстративные линкеры включают линкеры, содержащие различные количества повторов последовательности GGGGS (4GS; SEQ ID NO:19) или GGGS (3GS; SEQ ID NO:71), например, в пределах между 2, 3, 4 и 5 повторами такой последовательности. Иллюстративные линкеры включают линкеры, содержащие, или состоящие из нее, последовательность, приведенную в SEQ ID NO:72 (GGGGSGGGGSGGGGS), SEQ ID NO:189 (ASGGGGSGGRASGGGGS), SEQ ID NO:73 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG) или SEQ ID NO: 74 (SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA).

[0395] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, такой как CAR, такой как часть антитела рекомбинантного рецептора, например, CAR, дополнительно содержит спейсер, который может представлять собой или содержать, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина или его вариантной или модифицированной версии, такую как шарнирная область, например, шарнирная область IgG4, шарнирная область IgG1, C_H1/C_L и/или область Fc. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер и/или шарнирную область. В некоторых вариантах осуществления, константная область или часть происходит из IgG человека, такого как IgG4 или IgG1. В некоторых аспектах, часть константной области служит в качестве области спейсера между антиген-распознающим компонентом, например, scFv, и трансмембранным доменом. Спейсер может иметь такую длину, которая обеспечивает повышенную отзывчивость клетки после связывания антигена по сравнению с отсутствием спейсера.

[0396] Иллюстративные спейсеры, например, шарнирные области, содержат области, описанные в публикации Международной заявки на патент WO2014031687. В некоторых примерах, спейсер содержит или примерно содержит 12 аминокислот или содержит не более 12 аминокислот. Иллюстративные спейсеры включают спейсеры, содержащие, по меньшей мере, примерно 10-229 аминокислот, примерно 10-200 аминокислот, примерно 10-175 аминокислот, примерно 10-150 аминокислот, примерно 10-125 аминокислот, примерно 10-100 аминокислот, примерно 10-75 аминокислот, примерно 10-50 аминокислот, примерно 10-40 аминокислот, примерно 10-30 аминокислот, примерно 10-20 аминокислот или примерно 10-15 аминокислот, и включая любое целое число между конечными точками любого из перечисленных диапазонов. В некоторых вариантах осуществления, область спейсера содержит примерно 12 аминокислот или меньше, примерно 119 аминокислот или меньше или примерно 229 аминокислот или меньше. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой спейсер, имеющий, по меньшей мере, конкретную длину, например, длину, которая составляет, по меньшей мере, 100 аминокислот, например, по меньшей мере, 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 или 250 аминокислот. Иллюстративные спейсеры включают шарнир IgG4 сам по себе, шарнир IgG4, связанный с доменами C_H2 и C_H3, или шарнир IgG4, связанный с доменом C_H3. Иллюстративные спейсеры включают шарнир IgG4 сам по себе, шарнир IgG4, связанный с доменами C_H2 и C_H3, или шарнир IgG4, связанный с доменом C_H3. Иллюстративные спейсеры включают, но, не ограничиваясь этим, спейсеры, описанные в Hudecek et al., Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135, в публикации Международной заявки на патент номер WO2014031687, в патенте США № 8822647 или в опубликованной заявке на патент США № 2014/0271635. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность шарнирной области иммуноглобулина, области C_H2 и C_H3. В некоторых вариантах осуществления, одна или несколько групп из шарнира C_H2 и C_H3 получаются полностью или частично из IgG4 или IgG2. В некоторых случаях, шарнир C_H2 и C_H3 получают из IgG4. В некоторых аспектах, одна или несколько групп из шарнира C_H2 и C_H3 является химерной и содержит последовательность, полученную из IgG4 и IgG2. В некоторых примерах, спейсер содержит химерный шарнир IgG4/2, область C_H2 IgG2/4 и область C_H3 IgG4.

[0397] В некоторых вариантах осуществления, спейсер, который может представлять собой константную область или часть ее, у иммуноглобулина происходит от IgG человека, такого как IgG4 или IgG1. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность ESKYGPPCPPCP (приведенную в SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер имеет последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, кодируемый спейсер представляет собой или содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления, константная область или часть происходит от IgD. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125.

[0398] В некоторых вариантах осуществления, спейсер может быть получен полностью или частично из IgG4 и/или IgG2 и может содержать мутации, такие как одна или несколько мутаций отдельных аминокислот в одном или нескольких доменах. В некоторых примерах, модификация аминокислоты представляет собой замещение пролина (P) вместо серина (S) в шарнирной области IgG4. В некоторых вариантах осуществления, модификация аминокислоты представляет собой замещение глютамина (Q) вместо аспарагина (N) для уменьшения гетерогенности гликозилирования, такое как мутация N177Q в положении 177, в области C_H2 полноразмерной последовательности Fc IgG4 или N176Q в положении 176, в области C_H2 полноразмерной последовательности Fc IgG4.

[0399] Другие иллюстративные области спейсеров включают шарнирные области, полученные из CD8a, CD28, CTLA4, PD-1 или FcγRIIIa. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит усеченный внеклеточный домен или шарнирную область CD8a, CD28, CTLA4, PD-1 или FcγRIIIa. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой усеченную шарнирную область CD28. В некоторых вариантах осуществления, короткий олиго- или полипептидный линкер, например, линкер из 2-10 аминокислот, такой как линкер, содержащий аланины или аланин и аргинин, например, аланиновый триплет (AAA) или RAAA (SEQ ID NO: 180), присутствует и образует связь между scFv и областью спейсера CAR. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 116. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в люб SEQ ID NO: 117-119. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 122. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124.

[0400] В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с любыми из SEQ ID NOS: 1, 3, 4, 5 или 29, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 122, 124 или 125.

[0401] Этот домен распознавания антигена, как правило, связан с одним или несколькими внутриклеточными сигнальными компонентами, такими как сигнальные компоненты, которые воспроизводят стимулирование и/или активирование с помощью комплекса антиген-рецептор, такого как комплекс TCR, в случае CAR, и/или сигнала через другой рецептор на поверхности клетки. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий компонент (например, антитело) связан с одним или несколькими трансмембранными и внутриклеточными сигнальными доменами. В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен слит с внеклеточным доменом. В одном из вариантов осуществления, используется трансмембранный домен, который в природе ассоциируется с одним из доменов в рецепторе, например, CAR. В некоторых случаях, трансмембранный домен выбирается или модифицируется посредством замещения аминокислоты для устранения связывания таких доменов с трансмембранными доменами таких же или иных поверхностных мембранных белков для сведения к минимуму взаимодействий с другими элементами комплекса рецептора.

[0402] Трансмембранный домен в некоторых вариантах осуществления получают либо из природного, либо из синтетического источника. Когда источник является природным, домен в некоторых аспектах получают из любого мембранно-связанного или трансмембранного белка. Трансмембранные области включают области, полученные (то есть, они содержат, по меньшей мере, их трансмембранную область (области)) альфа, бета или зета цепи рецептора T-лимфоцитов, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137 (4-1BB), CD154, CTLA-4 или PD-1. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления трансмембранный домен является синтетическим. В некоторых аспектах, синтетический трансмембранный домен преимущественно содержит гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. В некоторых аспектах, триплет фенилаланина, триптофана и валина будет находиться на каждом краю синтетического трансмембранного домена. В некоторых вариантах осуществления, связывание осуществляется с помощью линкеров, спейсеров и/или трансмембранного домена (доменов). Иллюстративные последовательности трансмембранных доменов представляют собой или содержат последовательности, приведенные в SEQ ID NOs: 8, 115, 121, 123, 178 или 179.

[0403] Среди внутриклеточных сигнальных доменов имеются такие, которые воспроизводят или примерно воспроизводят сигнал через природный рецептор антигена, сигнал через такой рецептор в сочетании с костимуляторным рецептором и/или сигнал через костимуляторный рецептор сам по себе. В некоторых вариантах осуществления, присутствует короткий олиго- или полипептидный линкер, например, линкер из 2-10 аминокислот, например, содержащий глицины и серины, например, дублет глицин-серин, и он образует связь между трансмембранным доменом и цитоплазматическим сигнальным доменом CAR.

[0404] Рецептор, например, CAR, как правило, содержит, по меньшей мере, один или несколько внутриклеточных сигнальных компонентов. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внутриклеточный компонент комплекса TCR, такой как цепь CD3 TCR, которая медиирует стимулирование T-лимфоцита и/или активирование и цитотоксичность, например, цепь CD3 зета. Таким образом, в некоторых аспектах, антиген-связывающая часть связана с одним или несколькими сигнальными модулями клетки. В некоторых вариантах осуществления, сигнальные модули клетки включают трансмембранный домен CD3, внутриклеточные сигнальные домены CD3, и/или другие трансмембранные домены CD. В некоторых вариантах осуществления, рецептор, например, CAR, дополнительно содержит часть одной или нескольких дополнительных молекул, таких как Fc рецептор γ, CD8, CD4, CD25 или CD16. Например, в некоторых аспектах, CAR или другой химерный рецептор содержит химерную молекулу из CD3-зета (CD3-ζ) или Fc рецептора γ и CD8, CD4, CD25 или CD16.

[0405] В некоторых вариантах осуществления, при лигировании CAR или другого химерного рецептора, цитоплазматический домен или внутриклеточный сигнальный домен рецептора стимулирует и/или активирует, по меньшей мере, одну из нормальных эффекторных функций или реакций иммунной клетки, например, генно-инженерного Т-лимфоцита, для экспрессирования CAR. Например, в некоторых контекстах, CAR индуцируют функцию Т-лимфоцита, такую как цитолитическая активность или T-хелперная активность, такую как секреция цитокинов или других факторов. В некоторых вариантах осуществления, усеченная часть внутриклеточного сигнального домена компонента рецептора антигена или костимуляторной молекулы используется вместо интактной иммуностимулирующей цепи, например, если она трансдуцирует сигнал эффекторной функции. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен или домены содержат цитоплазматические последовательности рецептора Т-лимфоцита (TCR), а в некоторых аспектах, также и те ко-рецепторы, которые в природном контексте действуют совместно с такими рецепторами для инициирования трансдукции сигнала после зацепления антигена и рецептора, и/или с любым производным или вариантом таких молекул и/или с любой синтетической последовательностью, которая имеет такую же функциональную способность.

[0406] В контексте природных TCR, полное активирование, как правило, требует не только передачи сигнала через TCR, но также и костимуляторного сигнала. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, для облегчения полного активирования, компонент для генерирования вторичного или костимуляторного сигнала также включается в CAR. В других вариантах осуществления, CAR не содержит компонента для генерирования костимуляторного сигнала. В некоторых аспектах, дополнительный CAR экспрессируется в той же клетке и обеспечивает компонент для генерирования вторичного или костимуляторного сигнала.

[0407] Стимулирование и/или активирование Т-лимфоцитов в некоторых аспектах описывается как медиируемая двумя классами цитоплазматических сигнальных последовательностей: теми, которые инициируют первичное антиген-зависимое стимулирование и/или активирование через TCR (первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности), и теми, которые действуют антиген-независимым образом для получения вторичного или костимуляторного сигнала (вторичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности). В некоторых аспектах, CAR содержит один или оба таких сигнальных компонента.

[0408] В некоторых аспектах, CAR содержит первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательность, которая регулирует первичное активирование комплекса TCR. Первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности, которые действуют стимулирующим образом, могут содержать сигнальные мотивы, которые известны как иммунорецепторные тирозиновые активирующие мотивы или ITAM. Примеры ITAM, содержащих первичные цитоплазматические сигнальные последовательности, включают группы, полученные из TCR зета, FcR гамма, FcR бета, CD3 гамма, CD3 дельта, CD3 эпсилон, CD8, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. В некоторых вариантах осуществления, цитоплазматическая сигнальная молекула (молекулы) в CAR содержит (содержат) цитоплазматический сигнальный домен, его часть, или последовательность, полученную из CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит сигнальную область и/или трансмембранную часть костимуляторного рецептора, такого как CD28, 4-1BB, OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS и/или других костимуляторных рецепторов. В некоторых аспектах, такой же CAR содержит как первичную цитоплазматическую сигнальную область, так и костимуляторные сигнальные компоненты.

[0409] В некоторых вариантах осуществления, один или несколько различных рекомбинантных рецепторов могут содержать одну или несколько различных внутриклеточных сигнальных областей или доменов. В некоторых вариантах осуществления, первичная цитоплазматическая сигнальная область включается в CAR, в то время как костимуляторный компонент обеспечивается другим рецептором, например, другим CAR, распознающим другой антиген. В некоторых вариантах осуществления, CAR включают активирующие или стимулирующие CAR и костимуляторные CAR, все они экспрессируются на одной и той же клетке (смотри WO2014/055668).

[0410] В некоторых аспектах, клетки содержат один или несколько стимулирующих или активирующих CAR и/или костимуляторных CAR. В некоторых вариантах осуществления, клетки дополнительно включают ингибиторные CAR (iCAR, смотри Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), такие как CAR, распознающие антиген, иной чем антиген, ассоциируемый и/или специфичный для заболевания или состояния, при этом активирующий сигнал, доставляемый с помощью н на заболевание CAR уменьшается или ингибируется посредством связывания ингибиторного CAR с его лигандом, например, для уменьшения нецелевых воздействий.

[0411] В определенных вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит трансмембранный и сигнальнный домен CD28, связанный с внутриклеточным доменом CD3 (например, CD3-зета). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторные домены химерных CD28 и CD137 (4-1BB, TNFRSF9), связанные с внутриклеточным доменом CD3 зета.

[0412] В некоторых вариантах осуществления, CAR охватывает один или несколько, например, два или более, костимуляторных домена и первичную цитоплазматическую сигнальную область в цитоплазматической части. Иллюстративные CAR включают внутриклеточные компоненты, такие как внутриклеточная сигнальная область (области) или домен (домены) CD3-зета, CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область или домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита, например, от CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS, в некоторых случаях, между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью или доменом. В некоторых аспектах, костимуляторная молекула Т-лимфоцита представляет собой одну или несколько CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS.

[0413]

[0414] В некоторых случаях, CAR упоминаются как CAR первого, второго и/или третьего поколения. В некоторых аспектах, CAR первого поколения представляет собой CAR, который обеспечивает только сигнал, индуцируемый CD3-цепью при связывании антигена; в некоторых аспектах, CAR второго поколения представляет собой CAR, который обеспечивает такой сигнал и костимуляторный сигнал, например, сигнал, включающий внутриклеточный сигнальный домен из костимуляторного рецептора, такого как CD28 или CD137; в некоторых аспектах, CAR третьего поколения представляет собой CAR, который содержит множество костимуляторных доменов различных костимуляторных рецепторов.

[0415] В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внеклеточную часть, содержащую антитело или фрагмент антитела. В некоторых аспектах, химерный рецептор антигена содержит внеклеточную часть, содержащую антитело или фрагмент, и внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, антитело или фрагмент содержит scFv и внутриклеточный домен содержит ITAM. В некоторых аспектах, внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен зета цепи, цепи CD3-зета (CD3ζ). В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит трансмембранный домен, связывающий внеклеточный домен и внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых аспектах, трансмембранный домен содержит трансмембранную часть CD28. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержат внутриклеточный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита. Внеклеточный домен и трансмембранный домен могут быть связаны прямо или косвенно. В некоторых вариантах осуществления, внеклеточный домен и трансмембранный домен связаны с помощью спейсера, такого как любой спейсер, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внеклеточную часть молекулы, из которой получен трансмембранный домен, такой как внеклеточная часть CD28. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внутриклеточный домен, полученный из костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее функционального варианта, например, связки между трансмембранным доменом и внутриклеточным сигнальным доменом. В некоторых аспектах, костимуляторная молекула Т-лимфоцита представляет собой CD28 или 4-1BB.

[0416] Например, в некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, например, фрагмент антитела, трансмембранный домен, который представляет собой или содержит трансмембранную часть CD28 или ее функциональный вариант, и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальную часть CD28 или ее функционального варианта и сигнальную часть CD3 зета или ее функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, например, фрагмент антитела, трансмембранный домен, который представляет собой или содержит трансмембранную часть CD28 или ее функциональный вариант, и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальную часть 4-1BB или ее функциональный вариант и сигнальную часть CD3 зета или ее функциональный вариант. В некоторых таких вариантах осуществления, рецептор дополнительно содержит спейсер, содержащий часть молекулы Ig, такой как молекула Ig человека, такой как шарнирная часть Ig, например, шарнирная часть IgG4, такая как спейсер из одной только шарнирной части.

[0417] В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен рекомбинантного рецептора, например, CAR, представляет собой или содержит трансмембранный домен CD28 человека (например, Accession No. P10747.1) или CD8a (Accession No. P01732.1) или его вариант, такой как трансмембранный домен, который содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 8, 115, 178 или 179, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 8, 115, 178 или 179; в некоторых вариантах осуществления, часть рекомбинантного рецептора, содержащая трансмембранный домен, содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 9, или последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с ней.

[0418] В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный компонент (компоненты) рекомбинантного рецептора, например, CAR, содержит внутриклеточный костимуляторный сигнальный домен человека CD28 или его функциональный вариант или часть, такой как домен с замещением GG LL в положениях 186-187 нативного белка CD28. Например, внутриклеточный сигнальный домен может содержать последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 10 или 11 или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 10 или 11. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный домен содержит внутриклеточный костимуляторный сигнальный домен 4-1BB (например, Accession No. Q07011.1) или его функциональный вариант или часть, такую как последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 12, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичность последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0419] В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен рекомбинантного рецептора, например, CAR, содержит стимуляторный сигнальный домен CD3 зета человека или его функциональный вариант, такой как цитоплазматический домен 112 AA изоформы 3 CD3ζ человека (Accession No. P20963,2) или сигнальный домен CD3 зета, как описано в патенте США № 7446190 или в патенте США № 8911993. Например, в некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность аминокислот, как приведено в SEQ ID NO: 13, 14 или 15, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичность последовательности с SEQ ID NO: 13, 14 или 15.

[0420] В некоторых аспектах, спейсер содержит только шарнирную область IgG, такую как шарнирная область IgG4 или IgG1 сама по себе, такую как спейсер только из шарнирной области, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 125. В других вариантах осуществления, спейсер представляет собой или содержит шарнирную область Ig, например, шарнирную область, полученную из IgG4, необязательно, связанную с доменами CH2 и/или CH3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область Ig, например, шарнирную область IgG4, связанную с доменами CH2 и CH3, как приведено в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область Ig, например, шарнирную область IgG4, связанную только с доменом CH3, как приведено в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой или содержит последовательность, обогащенную глицином-серином, или другой гибкий линкер, такой как известные гибкие линкеры. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область CD8a, такую как приведено в любой из SEQ ID NOs: 117-119, шарнирную область FcγRIIIa, как приведено в SEQ ID NO: 124, шарнирную область CTLA4, как приведено в SEQ ID NO: 120, или шарнирную область PD-1, такую как приведено в SEQ ID NO: 122.

[0421] Например, в некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, такое как фрагмент антитела, включая scFv, спейсер, такой как спейсер, содержащий часть молекулы иммуноглобулина, такую часть, как шарнирная область и/или одна или несколько константных областей молекулы тяжелой цепи, такой как спейсер, содержащий Ig-шарнирную область, трансмембранный домен, содержащий полностью или частично трансмембранный домен, полученный из CD28, внутриклеточный сигнальный домен, полученный из CD28, и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело или фрагмент, такой как scFv, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, полученный из CD28 трансмембранный домен, полученный из 4-1BB внутриклеточный сигнальный домен и полученный из CD3 зета сигнальный домен.

[0422] Рекомбинантные рецепторы, такие как CAR, экспрессируемые клетками, вводимыми субъекту, как правило, распознают или специфично связывают молекулу, которая экспрессируется, при заболевании или состоянии, или их клетками, которые лечатся, ассоциируется с ними и/или является специфичной к ним. При специфичном связывании с молекулой, например, с антигеном, рецептор, как правило, доставляет иммуностимулирующий сигнал, такой как ITAM-трансдуцированный сигнал, в клетку, тем самым облегчая иммунную реакцию, нацеленную на заболевание или состояние. Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки экспрессируют CAR, который специфично связывается с антигеном, экспрессируемым клеткой или тканью заболевания или состояния или связанным с заболеванием или состоянием. Неограничивающие иллюстративные последовательности CAR приведены в SEQ ID NOs: 126-177.

[0423] В некоторых вариантах осуществления, кодируемая последовательность CAR может дополнительно содержать сигнальную последовательность или сигнальный пептид, который направляет или доставляет CAR к поверхности клетки, в которой экспрессируется CAR. В некоторых вариантах осуществления, сигнальный пептид получают из трансмембранного белка. В некоторых примерах сигнальный пептид получают из CD8a, CD33 или IgG. Иллюстративные сигнальные пептиды включают последовательности, приведенные в SEQ ID NOs: 21, 75 и 76, или их вариант.

[0424] В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-CD19, такое как фрагмент антитела, включая scFv, спейсер, такой как спейсер, содержащий часть молекулы иммуноглобулина, такую как шарнирная область, и/или одну или несколько константных областей молекулы тяжелой цепи, такой как спейсеры, содержащие любые Ig-шарнирные области, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен, содержащий его полностью или частично полученный из трансмембранного домена CD28, полученный из CD28 внутриклеточный сигнальный домен и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-CD19 или фрагмент, такой как scFv, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, полученный из CD28 трансмембранный домен, полученный из 4-1BB внутриклеточный сигнальный домен и полученный из CD3 зета сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, такие конструкции CAR дополнительно содержат рибосомный перескакивающий элемент T2A и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после CAR.

[0425] В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-BCMA или фрагмент, такой как любое из антител анти-BCMA человека, включая sdAbs и scFv, описанных в настоящем документе, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен CD28, внутриклеточный сигнальный домен CD28 и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-BCMA или фрагмент, такой как любое из антител анти-BCMA человека, включая sdAbs и scFv, описанные в настоящем документе, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен CD28, внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, такие конструкции CAR дополнительно содержат рибосомный перескакивающий элемент T2A и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после CAR.

2. Химерный рецептор аутоантител (CAAR)

[0426] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой химерный рецептор аутоантител (CAAR). В некоторых вариантах осуществления, CAAR связывает, например, специфично связывает, или распознает аутоантитело. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие CAAR, такие как генно-инженерные Т-лимфоциты для экспрессирования CAAR, можно использовать для связывания и уничтожения аутоантитело-экспрессирующих клеток, но не клеток, экспрессирующих нормальные антитела. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки можно использовать для лечения аутоиммунного заболевания, связанного с экспрессированием аутоантигенов, такого как аутоиммунные заболевания. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки могут нацеливаться на B-лимфоциты, которые в конечном счете продуцируют аутоантитела и проявляют аутоантитела на их клеточных поверхностях, метят эти B-лимфоциты как заболевание-специфичные мишени для терапевтического вмешательства. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки можно использовать для эффективного нацеливания на патогенные B-лимфоциты и на их уничтожение при аутоиммунных заболеваниях посредством нацеливания, вызывающих заболевание B-лимфоцитов с использованием антиген-специфичного химерного рецептора аутоантител. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой CAAR, такой как любой CAAR, описанный в публикации заявки на патент США № 2017/0051035.

[0427] В некоторых вариантах осуществления, CAAR содержит аутоантитело-связывающий домен, трансмембранный домен и одну или несколько внутриклеточных сигнальных областей или доменов (также называемых взаимозаменяемо цитоплазматическим сигнальным доменом или областью). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичную сигнальную область, сигнальный домен, который может стимулировать и/или индуцировать первичный сигнал активирования в Т-лимфоците, сигнальный домен компонента рецептора Т-лимфоцита (TCR) (например, внутриклеточный сигнальный домен или область зета цепи CD3-зета цепи (CD3ζ) или его функциональный вариант или ее сигнальную часть), и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

[0428] В некоторых вариантах осуществления, аутоантитело- связывающий домен содержит аутоантиген или его фрагмент. Выбор аутоантигена может зависеть от типа целевого аутоантитела. Например, аутоантиген может выбираться потому, что он распознает аутоантитело на целевой клетке, такой как B-лимфоцит, связанной с конкретным болезненным состоянием, например, с аутоиммунным заболеванием, такими как аутоантитело-медиируемое аутоиммунное заболевание. В некоторых вариантах осуществления, аутоиммунное заболевание включает вульгарный пемфигус (PV). Иллюстративные аутоантигены включют десмоглеин 1 (Dsg1) и Dsg3.

3. TCR

[0429] В некоторых вариантах осуществления предлагаются генно-инженерные клетки, такие как Т-лимфоциты, которые экспрессируют рецептор Т-лимфоцита (TCR) или его антиген-связывающую часть, которая распознает пептидный эпитоп или эпитоп Т-лимфоцита целевого полипептида, такого как антиген опухоли, вирусный или аутоиммунный белок. В некоторых аспектах, TCR представляет собой или содержит рекомбинантный TCR.

[0430] В некоторых вариантах осуществления, “рецептор Т-лимфоцитов” или “TCR” представляет собой молекулу, которая содержит вариабельные цепи α и β (также известные как TCRα и TCRβ, соответственно) или вариабельные цепи γ и δ (также известные как TCRγ и TCRδ, соответственно) или их антиген-связывающие части и которые способны специфически связываться с пептидом, связанным с молекулой MHC. В некоторых вариантах осуществления, TCR находится в форме αβ. Как правило, TCR, которые находятся в формах αβ и γδ, являются, в целом, структурно сходными, но Т-лимфоциты, экспрессирующие их, могут иметь различные анатомические положения или функции. TCR может находиться на поверхности клетки или в растворимой форме. Как правило, TCR находится на поверхности Т-лимфоцитов (или T-лимфоцитов), где они, как правило, ответствен за распознавание антигенов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC).

[0431] Если не утверждается иного, термин “TCR” как понимается, должен охватывать полноразмерные TCR, а также их антиген-связывающие части или антиген-связывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой интактный или полноразмерный TCR, включая TCR в форме αβ или в форме γδ. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой антиген-связывающую часть, которая меньше полноразмерного TCR, но которая связывается со специфичной пептидной связью в молекуле MHC, например, связывается с комплексом MHC-пептид. В некоторых случаях, антиген-связывающая часть или фрагмент TCR может содержать только часть структурных доменов полноразмерного или интактного TCR, но кроме того, он способен связывать пептидный эпитоп, такой как комплекс MHC-пептид, с которым связывается полноразмерный TCR. В некоторых случаях, антиген-связывающая часть содержит вариабельные домены TCR, такие как вариабельная цепь α и вариабельная цепь β TCR, достаточные для образования сайта связывания для связывания конкретного комплекса MHC-пептид. Как правило, вариабельные цепи TCR содержат комплементарность, определяющую области, вовлеченные в распознавание пептида, MHC и/или комплекса MHC-пептид.

[0432] В некоторых вариантах осуществления, вариабельные домены TCR содержат гипервариабельные петли или области, определяющие комплементарность (CDR), которые, как правило, вносят главный вклад в способности распознавания и связывания антигена и в специфичность. В некоторых вариантах осуществления, TCR CDR или их сочетание формируют весь или, по существу, весь антиген-связывающий сайт данной молекулы TCR. Различные CDR в вариабельной области цепи TCR, как правило, разделены рамочными областями (FR), которые, как правило, проявляют меньшую вариабельность среди молекул TCR по сравнению с CDR (смотри, например, Jores et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; смотри также Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). В некоторых вариантах осуществления, CDR3 представляет собой главную CDR, ответственную за связывание антигена или специфичность, или является самой важной среди трех CDR в данной вариабельной области TCR для распознавания антигена и/или для взаимодействия с протестированной пептидной частью комплекса пептид-MHC. В некоторых контекстах, CDR1 цепи альфа может взаимодействовать с N-конечной частью определенных антигенных пептидов. В некоторых контекстах, CDR1 цепи бета может взаимодействовать с C-конечной частью пептида. В некоторых контекстах, CDR2 вносит главный вклад или представляет собой главную CDR, ответственную за взаимодействие с частью MHC комплекса MHC-пептид или за ее распознавание. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная область β-цепи может содержать дополнительную гипервариабельную область (CDR4 или HVR4), которая, как правило, вовлечена в связывание суперантигена, а не в распознавание антигена (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).

[0433] В некоторых вариантах осуществления, TCR также может содержать константный домен, трансмембранный домен и/или короткий цитоплазматический хвост (смотри, например, Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997). В некоторых аспектах, каждая цепь TCR может иметь один N-конечный вариабельный домен иммуноглобулина, один константный домен иммуноглобулина, трансмембранную область и короткий цитоплазматический хвост на C-конечном краю. В некоторых вариантах осуществления, TCR ассоциируется с инвариантными белками комплекса CD3, вовлеченными в медиирование трансдукции сигнала.

[0434] В некоторых вариантах осуществления, цепь TCR содержит один или несколько константных доменов. Например, внеклеточная часть данной цепи TCR (например, α-цепи или β-цепи) может содержать два иммуноглобулино-подобных домена, таких как вариабельный домен (например, Vα или Vβ; как правило, аминокислоты 1-116 на основе нумерации Kabat, Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.) и константный домен (например, константный домен α-цепи или Cα, как правило, положения 117-259 цепи на основе нумерации Kabat или константный домен цепи β или Cβ, как правило, положения 117-295 цепи согласно Kabat) вблизи клеточной мембраны. Например, в некоторых случаях, внеклеточная часть TCR, сформированная из двух цепей, содержит два удаленных от мембраны константных домена и два близких к мембране вариабельных домена, каждый из этих вариабельных доменов содержит CDR. Константный домен TCR может содержать короткие соединительные последовательности, в которых цистеиновый остаток образует дисульфидную связь, тем самым соединяя две цепи TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR может содержать дополнительный цистеиновый остаток в каждой из цепей α и β, так что TCR содержит две дисульфидные связи в константных доменах.

[0435] В некоторых вариантах осуществления, цепи TCR содержат трансмембранный домен. В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен положительно заряжен. В некоторых случаях, цепь TCR содержит цитоплазматический хвост. В некоторых случаях, структура позволяет TCR ассоциироваться с другими молекулами подобными CD3 и с их субъединицами. Например, TCR, содержащий константные домены с трансмембранной областью, может фиксировать белок в клеточной мембране и ассоциироваться с инвариантными субъединицами сигнального аппарата или комплекса CD3. Внутриклеточные хвосты сигнальных субъединиц CD3 (например, цепи CD3γ, CD3δ, CD3ε и CD3ζ) содержат один или несколько иммунорецепторных тирозиновых активирующих мотивов или ITAM, которые вовлечены в способность передачи сигналов комплекса TCR.

[0436] В некоторых вариантах осуществления, TCR может представлять собой гетеродимер из двух цепей α и β (или, необязательно, γ и δ) или он может представлять собой одноцепочечную конструкцию TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой гетеродимер, содержащий две отдельные цепи (цепи α и β или цепи γ и δ), которые связаны, например, дисульфидной связью или дисульфидными связями.

[0437] В некоторых вариантах осуществления, TCR может генерироваться из известной последовательности (последовательностей) TCR, таких как последовательности цепей Vα,β, для которых легко доступна, по существу, полноразмерная кодирующая последовательность. Способы получения полноразмерных последовательностей TCR, включая последовательности цепи V, из клеточных источников хорошо известны. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты, кодирующие TCR, можно получить из различных источников, например, с помощью цепной реакции полимеразы (PCR), амплификации TCR-кодирующих нуклеиновых кислот внутри данной клетки или клеток или выделенных из них или синтеза публично доступных последовательностей ДНК TCR.

[0438] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные рецепторы включают рекомбинантные TCR и/или TCR, клонированные из встречающихся в природе Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, клон Т-лимфоцита с высоким сродством к целевому антигену (например, к антигену рака) идентифицируется, выделяется у пациента и вводится в клетки. В некоторых вариантах осуществления, клон TCR к целевому антигену генерируется в трансгенных мышах, полученных с помощью генной инженерии, с генами иммунной системы человека (например, системы антигена лейкоцитов человека или HLA). Смотри, например, антигены опухоли (смотри, например, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 и Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808. В некоторых вариантах осуществления, используют фаговый дисплей для выделения TCR против целевого антигена (смотри, например, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 и Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354.

[0439] В некоторых вариантах осуществления, TCR получают из биологического источника, например, из клеток, например, из Т-лимфоцитов (например, цитотоксичных Т-лимфоцитов), гибридом T-лимфоцитов или другого публично доступного источника. В некоторых вариантах осуществления, T-лимфоциты можно получить из выделенных клеток in vivo. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой тимически выбранный TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой неоэпитопно-рестриктированный TCR. В некоторых вариантах осуществления, T-лимфоциты могут представлять собой культивированную гибридому или клон T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающую часть можно генерировать синтетически, зная последовательность TCR.

[0440] В некоторых вариантах осуществления, TCR генерируется из TCR, идентифицированного или выбранного из скрининга библиотеки кандидатов в TCR против целевого полипептидного антигена или его целевого эпитопа для Т-лимфоцитов. Библиотеки TCR можно генерировать посредством амплификации репертуара Vα и Vβ из Т-лимфоцитов, выделенных у субъектов, включая клетки, присутствующие в PBMC, селезенке или в другом лимфоидном органе. В некоторых случаях, Т-лимфоциты могут амплифицироваться из противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL). В некоторых вариантах осуществления, библиотеки TCR можно генерировать из клеток CD4+ или CD8+. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно амплифицировать из источника Т-лимфоцитов нормального здорового субъекта, то есть, из библиотек нормальных TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно амплифицировать из источника Т-лимфоцитов болезненного субъекта, то есть, из библиотек болезненных TCR. В некоторых вариантах осуществления, используют дегеративные праймеры для амплификации репертуара генов Vα и Vβ, например, посредством RT-PCR, в таких образцах, как Т-лимфоциты, полученные у людей. В некоторых вариантах осуществления, библиотеки scTv могут быть собраны из библиотек наивных Vα и Vβ, в которых амплифицированные продукты клонируются или собираются для разделения линкером. В зависимости от источника субъекта и клеток, библиотеки могут быть специфичными к аллели HLA. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, библиотеки TCR могут генерироваться посредством мутагенеза или диверсификации исходной или каркасной молекулы TCR. В некоторых аспектах, TCR подвергают воздействию направленной эволюции, например, посредством мутагенеза, например, цепи α или β. В некоторых аспектах, изменяют конкретные остатки в CDR TCR. В некоторых вариантах осуществления, выбранные TCR можно модифицировать посредством созревания сродства. В некоторых вариантах осуществления, антиген-специфичные Т-лимфоциты могут подвергаться селекции, например, с помощью скрининга, для оценки активности CTL против пептида. В некоторых аспектах, TCR, например, присутствующие на антиген-специфичных Т-лимфоцитах, могут подвергаться селекции, например, по активности связывания, например, по конкретному сродству или авидности к антигену.

[0441] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающая часть представляет собой группу, которая модифицируется или которую получают с помощью генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления, используют способы направленной эволюции для генерирования TCR с измененными свойствами, например, с более высоким сродством к конкретному комплексу MHC-пептид. В некоторых вариантах осуществления, направленная эволюция достигается с помощью способов дисплея, включая, но, не ограничиваясь этим, дрожжевой дисплей (Holler et al., (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al., (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), фаговый дисплей (Li et al., (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54), или Т-лимфоцитный дисплей (Chervin et al., (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84). В некоторых вариантах осуществления, подходы с дисплеем включают генную инженерию или модифицирование известного исходного или эталонного TCR. Например, в некоторых случаях, TCR дикого типа можно использовать как шаблон для продуцирования мутагенизированных TCR, в которых CDR мутируют в одном или нескольких остатках, и выбираются мутанты с желаемым измененным свойством, таким как более высокое сродство к желаемому целевому антигену.

[0442] В некоторых вариантах осуществления, пептиды целевого полипептида для использования при продуцировании или генерировании TCR, представляющего интерес, известны, или их можно легко идентифицировать рутинным образом. В некоторых вариантах осуществления, пептиды, пригодные для использования при генерировании TCR или их антиген-связывающих частей, можно определить на основе присутствия HLA-рестриктированного мотива в целевом полипептиде, представляющем интерес, таком как целевой полипептид, описанный ниже. В некоторых вариантах осуществления, пептиды идентифицируют с использованием компьютерных предикативных моделей рутинным образом. В некоторых вариантах осуществления, для предсказания сайтов связывания MHC класса I, такие модели включают, но, не ограничиваясь этим, ProPred1 (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237, и SYFPEITHI (смотри, Schuler et al., (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007). В некоторых вариантах осуществления, MHC-рестриктированный эпитоп представляет собой HLA-A0201, который экспрессируется приблизительно у 39-46% всех европейцев, и, следовательно, представляет собой пригодный для использования выбор антигена MHC для применения при приготовлении TCR или другой молекулы, связывающей MHC-пептид.

[0443] Известны HLA-A0201-связывающие мотивы и сайты расщепления для протеасом и иммунных протеасом с использованием компьютерных предикативных моделей. Для предсказания сайтов связывания MHC класса I, такие модели включают, но, не ограничиваясь этим, ProPred1 (описанную более подробно в Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001), и SYFPEITHI (смотри, Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007).

[0444] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающая часть может представлять собой рекомбинантно продуцируемый природный белок или его мутированную форму, в которой изменены одно или несколько свойств, таких как характеристики связывания. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно получать от одного из различных видов животных, таких как люди, мыши, крысы или другие млекопитающие. TCR может быть связан с клеткой или находиться в растворимой форме. В некоторых вариантах осуществления, для целей предлагаемых способов, TCR находится в форме, связанной с клеткой, экспрессируемый на поверхности клеток.

[0445] В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой полноразмерный TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой антиген-связывающую часть. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой димер TCR (dTCR). В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой одноцепочечный TCR (sc-TCR). В некоторых вариантах осуществления, dTCR или scTCR имеет структуры, описанные в WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186.

[0446] В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит последовательность, соответствующую трансмембранной последовательности. В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит последовательность, соответствующую цитоплазматическим последовательностям. В некоторых вариантах осуществления, TCR может образовывать комплекс TCR с CD3. В некоторых вариантах осуществления, любой из TCR, включая dTCR или scTCR, может связываться с сигнальными доменами, который дают активный TCR на поверхности Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, TCR экспрессируется на поверхности клеток.

[0447] В некоторых вариантах осуществления dTCR содержит первый полипептид, где последовательность, соответствующая последовательности вариабельной области цепи α TCR, слита с N- окончанием последовательности, соответствующей внеклеточной последовательности константной области цепи α TCR, и второй полипептид, где последовательность, соответствующая последовательности вариабельной области цепи β TCR, слита с N-окончанием последовательности, соответствующей внеклеточной последовательности константной области цепи β TCR, эти первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью. В некоторых вариантах осуществления, связь может соответствовать нативной дисульфидной связи между цепями, присутствующей в нативных димерных TCR αβ. В некоторых вариантах осуществления, дисульфидные связи между цепями не присутствуют в нативных TCR. Например, в некоторых вариантах осуществления, один или несколько цистеинов могут вводиться во внеклеточные последовательности константной области полипептидной пары dTCR. В некоторых случаях может быть желательной как нативная, так и ненативная дисульфидная связь. В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит трансмембранную последовательность для фиксации в мембране.

[0448] В некоторых вариантах осуществления, dTCR содержит цепь α TCR, содержащую вариабельный домен α, константный домен α и первый мотив димеризации, присоединенный к C-окончанию константного домена α, и цепь β TCR содержащую вариабельный домен β, константный домен β и первый мотив димеризации, присоединенный к C-окончанию константного домена β, где первый и второй мотивы димеризации легко взаимодействуют с образованием ковалентной связи между аминокислотой в первом мотиве димеризации и аминокислотой во втором мотиве димеризации, связывая вместе цепь α TCR и цепь β TCR.

[0449] В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой scTCR. Как правило, scTCR может генерироваться с использованием соответствующих известных способов, смотри, например, Soo Hoo, W. F. et al., PNAS (USA) 89, 4759 (1992); C. и A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al., PNAS (USA) 90 3830 (1993); опубликованные Международные заявки PCT №№ WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; и Schlueter, C. J. et al., J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит введенную ненативную дисульфидную связь между цепями для облегчения ассоциации цепей TCR (смотри, например, опубликованную Международную заявку PCT № WO 03/020763). В некоторых вариантах осуществления, scTCR представляет собой не имеющий дисульфидной связи усеченный TCR, в котором гетерологичные лейциновые молнии, слитые с его C-окончаниями, облегчают ассоциацию цепей (смотри, например, опубликованную Международную заявку PCT № WO99/60120). В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит вариабельный домен TCRα, ковалентно связанный с вариабельным доменом TCR β с помощью пептидного линкера (смотри, например, опубликованную Международную PCT № WO99/18129).

[0450] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент, состоящий из последовательности аминокислот, соответствующей вариабельной области цепи α TCR, второй сегмент, состоящий из последовательности аминокислота, соответствующей последовательности вариабельной области цепи β TCR, слитой с N-окончанием последовательности аминокислот, соответствующей последовательности внеклеточного константного домена цепи β TCR, и линкерную последовательность, соединяющую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.

[0451] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент состоящий из последовательности вариабельной области цепи α, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домен цепи α, и второй сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи β, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи β, и последовательности трансмембранного домена, и, необязательно, линкерную последовательность, связывающую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.

[0452] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи β TCR, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи β, и второй сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи α, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи α, и последовательности трансмембранного домена, и, необязательно, линкерную последовательность, связывающую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.

[0453] В некоторых вариантах осуществления, линкер scTCR, который связывает первый и второй сегменты TCR, может представлять собой любой линкер, способный образовывать одинарную полипептидную нить, при этом сохраняя специфичность связывания TCR. В некоторых вариантах осуществления, линкерная последовательность может, например, иметь формулу -P-AA-P-, где P представляет собой пролин и AA представляет последовательность аминокислот, где аминокислоты представляют собой глицин и серин. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй сегменты являются парными, так что последовательности их вариабельных областей ориентированы для такого связывания. Следовательно, в некоторых случаях, линкер имеет достаточную длину для увеличения расстояния между С-окончанием первого сегмента и N-окончанием второго сегмента, или наоборот, но он не слишком длинный, чтобы не блокировать или не уменьшить связывание scTCR с целевым лигандом. В некоторых вариантах осуществления, линкер может содержать от или примерно от 10 до 45 аминокислот, например, 10-30 аминокислот или 26-41 остатков аминокислот, например, 29, 30, 31 или 32 аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления, линкер имеет формулу -PGGG-(SGGGG)5-P-, где P представляет собой пролин, G представляет собой глицин и S представляет собой серин (SEQ ID NO: 16). В некоторых вариантах осуществления, линкер имеет последовательность GSADDAKKDAAKKDGKS (SEQ ID NO: 17)

[0454] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит ковалентную дисульфидную связь, связывающую остаток области иммуноглобулина константного домена цепи α с остатком области иммуноглобулина константного домена цепи β. В некоторых вариантах осуществления, дисульфидной связи между цепями в нативном TCR нет. Например, в некоторых вариантах осуществления, один или несколько цистеинов могут вводиться во внеклеточные последовательности константной области первого и второго сегментов полипептида scTCR. В некоторых случаях, может быть желательной как нативная, так и ненативная дисульфидная связь.

[0455] В некоторых вариантах осуществления dTCR или scTCR, содержащих введенные дисульфидные связи между цепями, нативных дисульфидных связей нет. В некоторых вариантах осуществления, один или несколько нативных цистеинов, образующих нативные дисульфидные связи между цепями, замещаются другим остатком, таким как серин или аланин. В некоторых вариантах осуществления, введенная дисульфидная связь может образовываться посредством мутации нецистеиновых остатков на первом и втором сегментах в цистеине. Иллюстративные ненативные дисульфидные связи TCR описаны в опубликованной Международной заявке PCT № WO2006/000830.

[0456] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающий фрагмент демонстрирует сродство с равновесной константой связывания целевого антигена в пределах между или примерно между 10^-5 и 10^-12 M, и включая все индивидуальные величины и диапазоны в этих пределах. В некоторых вариантах осуществления, целевой антиген представляет собой комплекс или лиганд MHC-пептид.

[0457] В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновая кислота или нуклеиновые кислоты, кодирующие TCR, такие как цепи α и β, могут амплифицироваться с помощью PCR, клонирования или других соответствующих средств и клонироваться в соответствующие вектор или векторы экспрессии. Вектор экспрессии может представлять собой любой соответствующий рекомбинантный вектор экспрессии, и его можно использовать для трансофрмирования или трансфицирования любого пригодного для использования хозяина. Соответствующие векторы включают векторы, сконструированные для выращивания и размножения или для экспрессирования, или как для того, так и для другого, такие как плазмиды и вирусы.

[0458] В некоторых вариантах осуществления, вектор может представлять собой вектор серии pUC (Fermentas Life Sciences), серии pBluescript (Stratagene, La Jolla, Calif.), серии pET (Novagen, Madison, Wis.), серии pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) или серии pEX (Clontech, Palo Alto, Calif.). В некоторых случаях, также можно использовать векторы бактериофагов, такие как λG10, λGT11, λZapII (Stratagene), λEMBL4 и λNM1149. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать векторы экспрессии растений, и они включают pBI01, pBI101,2, pBI101,3, pBI121 и pBIN19 (Clontech). В некоторых вариантах осуществления, векторы экспрессии животных включают pEUK-Cl, pMAM и pMAMneo (Clontech). В некоторых вариантах осуществления используют вирусный вектор, такой как ретровирусный вектор.

[0459] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные векторы экспрессии можно приготовить с использованием стандартных методик рекомбинантной ДНК. В некоторых вариантах осуществления, векторы могут содержать регуляторные последовательности, такие как кодоны транскрипции и инициирования трансляции и терминирующие коды, которые специфичны к типу хозяина (например, бактерии, грибку, растению или животному), которому должен вводиться вектор, соответствующим образом, и учитывая, основан ли вектор на ДНК или на RNA. В некоторых вариантах осуществления, вектор может содержать ненативный промотор, функционально связанный с последовательностью нуклеотидов, кодирурующей TCR или антиген-связывающую часть (или другую молекулу, связывающую MHC-пептид). В некоторых вариантах осуществления, промотор может представлять собой невирусный промотор или вирусный промотор, такой как промотор цитомегаловируса (CMV), промотор SV40, промотор RSV и промотор, находящийся в длинном концевом повторе вируса стволовых клеток мышей. Рассматриваются также и другие известные промоторы.

[0460] В некоторых вариантах осуществления, для генерирования вектора, кодирующего TCR, цепи α и β амплифицируются с помощью PCR с общей цДНК, выделенной из клона Т-лимфоцита, экспрессирующего TCR, представляющий интерес, и клонированного в вектор экспрессии. В некоторых вариантах осуществления, цепи α и β клонируют в один и тот же вектор. В некоторых вариантах осуществления, цепи α и β клонируют в разные векторы. В некоторых вариантах осуществления, генерируемые цепи α и β вводятся в ретровирусный, например, лентивирусный, вектор.

4. Мультинацеливание

[0461] В некоторых вариантах осуществления, клетки и способы включают стратегии мультинацеливания, такие как экспрессирование на клетке двух или более генно-инженерных рецепторов, каждый из них распознает такой же или иной антиген, и, как правило, каждый содержит иной внутриклеточный сигнальный компонент. Такие стратегии мультинацеливания описаны, например, в публикации PCT № WO 2014055668 A1 (описывающей сочетания активирующих и костимуляторных CAR, например, нацеливыание двух различных антигенов, присутствующих по отдельности на нецелевых, например, нормальных клетках, но присутствующих вместе только на клетках заболевания или состояния, которое должно лечиться), и Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) (описывающей клетки, экспрессирующие активирующие и ингибиторные CAR, такие как те, в которых активирующий CAR связывается с одним антигеном, экспрессируемым как на нормальных или неболезненных клетках, так и на клетках заболевания или состояния, которое должно лечиться, а ингибиторный CAR связывается с другим антигеном, экспрессируемым только на нормальных клетках или на клетках, которые лечить нежелательно).

[0462] Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки содержат рецептор, экспрессирующий первый генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR), который способен индуцировать активирующий сигнал для клетки, как правило, при специфичном связывании с антигеном, распознаваемым первым рецептором, например, с первым антигеном. В некоторых вариантах осуществления, клетка дополнительно содержит второй генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR), например, химерный костимуляторный рецептор, который способен индуцировать костимуляторный сигнал для иммунной клетки, как правило, при специфичном связывании со вторым антигеном, распознаваемым вторым рецептором. В некоторых вариантах осуществления, первый антиген и второй антиген являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления, первый антиген и второй антиген являются различными.

[0463] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR) способен индуцировать активирующий сигнал для клетки. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внутриклеточный сигнальный компонент, содержащий мотивы ITAM или мотивы подобные ITAM. В некоторых вариантах осуществления, активирование индуцируемое первым рецептором включает трансдукцию сигнала или изменение экспрессирования белка в клетке, приводящее в результате к инициированию иммунной реакции, такой как фосфорилирование ITAM и/или к инициированию ITAM-медиируемого каскада трансдукции сигнала, формированию иммунологического синапса и/или образованию кластера молекул вблизи связанного рецептора (например, CD4 или CD8, и тому подобное), активированию одного или нескольких факторов транскрипции, таких как NF-κB и/или AP-1, и/или к индуцированию экспрессирования гена для таких факторов, как цитокины, пролиферации и/или выживаемости.

[0464] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй рецептор содержит внутриклеточные сигнальные домены костимуляторных рецепторов, таких как CD28, CD137 (4-1 BB), OX40 и/или ICOS. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй рецепторы содержат внутриклеточные сигнальные домены костимуляторного рецептора, которые различаются. В одном из вариантов осуществления, первый рецептор содержит костимуляторную сигнальную область CD28, и второй рецептор содержит костимуляторную сигнальную область 4-1BB, или наоборот.

[0465] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй рецептор включают как внутриклеточный сигнальный домен, содержащий ITAM или ITAM-подобные мотивы, так и внутриклеточный сигнальный домен костимуляторного рецептора.

[0466] В некоторых вариантах осуществления, первый рецептор содержит внутриклеточный сигнальный домен, содержащий ITAM или ITAM-подобные мотивы, а второй рецептор содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторного рецептора. Костимуляторный сигнал в сочетании с активирующим сигналом, индуцируемым в этой же клетке, дает в результате иммунную реакцию, такую как устойчивая и долговременная иммунная реакция, такая как увеличение экспрессирования генов, секреции цитокинов и других факторов, и медиируемых Т-лимфоцитами эффекторных функций, таких как уничтожение клеток.

[0467] В некоторых вариантах осуществления, ни лигирование первого рецептора самого по себе ни лигирование второго рецептора самого по себе не индуцирует устойчивой иммунной реакции. В некоторых аспектах, если лигируется только один рецептор, клетка толеризуется или становится толерантной к антигену или ингибированной, и/или не индуцирует факторов пролиферации или секреции, или не осуществляет эффекторных функций. В некоторых таких вариантах осуществления, однако, когда лигируется множество рецепторов, например, при встрече с клеткой, экспрессирующей первый и второй антигены, достигается желаемая реакция, такая как полное иммунное активирование или стимулирование, например, как показывает секреция одного или нескольких цитокинов, пролиферация, персистентность и/или осуществление иммунной эффекторной функции, такой как цитотоксическое уничтожение целевых клеток.

[0468] В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, дополнительно содержат ингибиторные CAR (iCAR, смотри Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), такие как CAR, распознающие антиген иной, чем антиген, связанный с заболеванием или состоянием и/или специфичный к ним, при этом активирующий сигнал, поступающий через не нацеленный на заболевание CAR, уменьшается или ингибируется посредством связывания ингибиторного CAR с его лигандом, например, для уменьшения нецелевых воздействий.

[0469] В некоторых вариантах осуществления, эти два рецептора индуцируют, соответственно, активирующий и ингибиторный сигнал для клетки, такой что связывание одного из рецепторов с его антигеном активирует клетку или индуцирует отклик, но связывание второго ингибиторного рецептора с его антигеном индуцирует сигнал, который подавляет или демпфирует такую реакцию. Примеры представляют собой сочетания активирующих CAR и ингибиторных CAR или iCAR. Может, например, использоваться такая стратегия, при которой активирующий CAR связывает антиген, экспрессируемый при заболевании или состоянии, но который экспрессируется также на нормальных клетках, а ингибиторный рецептор связывает отдельный антиген, который экспрессируется на нормальных клетках, но не на клетках заболевания или состояния.

[0470] В некоторых аспектах, химерный рецептор представляет собой или содержит ингибиторный CAR (например, iCAR) и содержит внутриклеточные компоненты, которые демпфируют или подавляют иммунную реакцию, такую как ITAM- и/или костимуляторно-промотированную реакцию в клетке. Примеры таких внутриклеточных сигнальных компонентов представляют собой компоненты, находящиеся на молекулах иммунных контрольных точек, включая рецепторы PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2, рецепторы EP2/4 аденозина, включая A2AR. В некоторых аспектах, генно-инженерная клетка содержит ингибиторный CAR, содержащий сигнальный домен такой ингибиторной молекулы или полученный из нее, так что он служит для демпфирования реакции клетки, например, той, которая индуцируется активирующим и/или костимуляторным CAR.

[0471] В некоторых вариантах осуществления, стратегия мультинацеливания используется в случае, когда антиген, связанный с конкретным заболеванием или состоянием, экспрессируется на неболезненной клетке и/или экспрессируется на самой генно-инженерной клетке, либо временно (например, при стимулировании в связи с генной инженерией), либо постоянно. В таких случаях, если потребовать лигирования двух отдельных и индивидуально специфичных рецепторов антигенов, можно улучшить специфичность, селективность и/или эффективность.

[0472] В некоторых вариантах осуществления, множество антигенов, например, первые и вторые антигены, экспрессируются в клетке, ткани или заболевании, или состоянии, которое является целевым, например, на раковой клетке. В некоторых аспектах, клетка, ткань, заболевание или состояние представляет собой множественную миелому или клетку множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления, один или несколько из множества антигенов, как правило, также экспрессируется на клетке, которая не является желательной мишенью клеточной терапии, на такой как нормальная или неболезненная клетка или ткань, и/или сами генно-инженерные клетки. В таких вариантах осуществления, если потребовать лигирования множества рецепторов для достижения реакций клетки, достигается специфичность и/или эффективность.

B. Клетки и приготовление клеток для генной инженерии

[0473] Среди клеток, экспрессирующих рецепторы и вводимых с помощью предлагаемых способов, имеются генно-инженерные клетки. Генная инженерия, как правило, включает введение нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный или генно-инженерный компонент, в композицию, содержащую клетки, например, с помощью ретровирусной трансдукции, трансфекции или трансформации.

[0474] В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты являются гетерологичными, то есть, обычно не присутствуют в клетке или в образце, полученном из клетки, таком как образец, полученный из другого организма или клетки, который, например, обычно не находится в генно-инженерной клетке и/или в организме, из которого получают такую клетку. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты не встречаются в природе, например, нуклеиновая кислота не встречается в природе, включая, нуклеиновую кислоту, содержащую химерные сочетания нуклеиновых кислот, кодирующие различные домены из множества различных типов клеток.

[0475] Клетки, как правило, представляют собой эукариотические клетки, такие как клетки млекопитающих, и как правило, представляют собой клетки человека. В некоторых вариантах осуществления, клетки получают из крови, костного мозга, лимфы или лимфоидных органов, они представляют собой клетки иммунной системы, такие как клетки врожденного или приобретенного иммунитета, например, миелоидные или лимфоидные клетки, включая лимфоциты, как правило, Т-лимфоциты и/или NK-клетки. Другие иллюстративные клетки включают стволовые клетки, такие как мультипотентные и плюрипотентные стволовые клетки, включая индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSC). Клетки, как правило, представляют собой первичные клетки, такие как клетки, выделенные непосредственно у субъекта и/или выделенные у субъекта и замороженные. В некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одно или несколько подмножеств Т-лимфоцитов или других типов клеток, таких как цельные популяции Т-лимфоцитов, клетки CD4+, клетки CD8+ и их субпопуляции, например, определенные по функции, состоянию активирования, зрелости, потенциалам для дифференциации, размножения, рециркуляции, локализации и/или по способностям к персистентности, по типу антиген-специфичности, по типу рецептора антигена, по присутствию в конкретном органе или компартменте, по маркеру или профилю секреции цитокина и/или по степени дифференциации. Относительно субъекта, который должен лечиться, клетки могут быть аллогенными и/или аутологенными. Способы включают стандартные способы. В некоторых аспектах, например, для стандартных технологий, клетки являются плюрипотентными и/или мультипотентными, например, это стволовые клетки, такие как индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSC). В некоторых вариантах осуществления, способы включают выделение клеток у субъекта, их приготовление, процессинг, культивирование и/или генную инженерию, и повторное их введение этому же субъекту, до или после криоконсервации.

[0476] Среди субтипов и субпопуляций Т-лимфоцитов и/или Т-лимфоцитов CD4+ и/или CD8+ имеются наивные T-лимфоциты (T_N), эффекторные Т-лимфоциты (T_EFF), Т-лимфоциты памяти и их субтипы, такие как стволовые T-клетки памяти (T_SCM), центральные T-лимфоциты памяти (T_CM), эффекторные T-лимфоциты памяти (T_EM) или окончательно дифференцированные эффекторные Т-лимфоциты памяти, противоопухолевые эффекторные лимфоциты (TIL), незрелые Т-лимфоциты, зрелые Т-лимфоциты, хелперные Т-лимфоциты, цитотоксичные Т-лимфоциты, мукоза-ассоциированные инвариантные T-лимфоциты (MAIT), встречающиеся в природе и адаптивные регуляторные T-лимфоциты (Treg), хелперные Т-лимфоциты, такие как клетки TH1, клетки TH2, клетки TH3, клетки TH17, клетки TH9, клетки TH22, фолликулярные хелперные Т-лимфоциты, альфа/бета Т-лимфоциты и дельта/гамма Т-лимфоциты.

[0477] В некоторых вариантах осуществления, клетки представляют собой природные киллерные клетки (NK). В некоторых вариантах осуществления, клетки представляют собой моноциты или гранулоциты, например, миелоидные клетки, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, тучные клетки, эозинофилы и/или базофилы.

[0478] В некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одну или несколько нуклеиновых кислот, вводимых с помощью генной инженерии, и при этом экспрессируют рекомбинантные или генно-инженерные продукты таких нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты являются гетерологичными, то есть, обычно, не присутствуют в клетке или в образце, полученном из клетки, например, полученном из другого организма, или клетки, которые, например, обычно не находятся в генно-инженерной клетке и/или в организме, из которого такую клетку получают. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты не встречаются в природе, например, такие как нуклеиновая кислота, не встречающаяся в природе, включая нуклеиновые кислоты, содержащие химерные сочетания нуклеиновых кислот, кодирующих различные домены, от множества различных типов клеток.

[0479] В некоторых вариантах осуществления, получение генно-инженерных клеток, включает одну или несколько стадий культивирования и/или приготовления. Клетки для введения нуклеиновой кислоты, кодирующей трансгенный рецептор, такой как CAR, могут выделяться из образца, такого как биологический образец, например, образец, полученный или выделенный у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, субъект, у которого выделяют клетки, представляет собой того, кто имеет заболевание или состояние, или ему необходима клеточная терапия, или ему вводят клеточную терапию. Субъект в некоторых вариантах осуществления представляет собой человека, нуждающегося в конкретном терапевтическом вмешательстве, таком как адоптивная клеточная терапия, клетки для которой выделяют, процессируют и/или получают с помощью генной инженерии.

[0480] Соответственно, клетки в некоторых вариантах осуществления представляют собой первичные клетки, например, первичные клетки человека. Образцы включают ткань, текучую среду и другие образцы, отобранные непосредственно у субъекта, а также образцы, полученные в результате одной или нескольких стадий обработки, таких как разделение, центрифугирование, генная инженерия (например, трансдукция с помощью вирусного вектора), промывка и/или инкубирование. Биологический образец может представлять собой образец, полученный непосредственно из биологического источника, или образец, который обрабатывают. Биологические образцы включают, но, не ограничиваясь этим, телесные жидкости, такие как кровь, плазма, сыворотка, спинномозговая жидкость, синовиальная жидкость, моча и пот, образцы тканей и органов, включая обработанные образцы, полученные из них.

[0481] В некоторых аспектах, образец, из которого получают или выделяют клетки, представляет собой кровь или образец, полученный из крови, или представляет собой продукт, или продукт, полученный от афереза или лейкафереза. Иллюстративные образцы включают цельную кровь, мононуклеары периферической крови (PBMC), лейкоциты, костный мозг, тимус, биопсию ткани, опухоль, лейкоз, лимфому, лимфоузел, лимфоидную ткань, связанную с желудочно-кишечным трактом, лимфоидную ткань, связанную со слизистой, селезенку, другие лимфоидные ткани, печень, легкое, желудок, кишечник, толстую кишку, почки, поджелудочную железу, молочную железу, кости, предстательную железу, шейку матки, яички, яичники, небную миндалину или другой орган, и/или клетки, полученные из их. Образцы включают, в контексте клеточной терапии, например, адоптивной клеточной терапии, образцы из аутогенных и аллогенных источников.

[0482] В некоторых вариантах осуществления, клетки получают от линий клеток, например, линий Т-лимфоцитов. Клетки в некоторых вариантах осуществления получают из ксеногенного источника, например, от мышей, крыс, приматов иных, чем человек и свиней.

[0483] В некоторых вариантах осуществления, выделение клеток включает одну или несколько стадий приготовления и/или разделения клеток не на основе сродства. В некоторых примерах, клетки отмывают, центрифугируют и/или инкубируют в присутствии одного или нескольких реагентов, например, для удаления нежелательных компонентов, обогащения желательными компонентами, лизиса или удаления клеток, чувствительных к конкретным реагентам. В некоторых примерах, клетки разделяют на основе одного или нескольких свойств, таких как плотность, свойства адгезии, размер, чувствительность и/или резистентность к конкретным компонентам.

[0484] В некоторых примерах, клетки из кровотока субъекта получают, например, посредством афереза или лейкафереза. Образцы, в некоторых аспектах, содержат лимфоциты, включая Т-лимфоциты, моноциты, гранулоциты, B-лимфоциты, другие ядросодержащие лейкоциты, эритроциты и/или тромбоциты, и в некоторых аспектах содержат клетки иные, чем эритроциты и тромбоциты.

[0485] В некоторых вариантах осуществления, клетки крови, собранные у субъекта, отмывают, например, для удаления фракции плазмы и для помещения клеток в соответствующий буфер или среду для последующих стадий обработки. В некоторых вариантах осуществления, клетки промывают фосфатным солевым буфером (PBS). В некоторых вариантах осуществления, промывочный раствор не содержит кальция и/или магния и/или многих или всех двухвалентных катионов. В некоторых аспектах, стадия промывки осуществляется в полуавтоматической “проточной” центрифуге (например, Cobe 2991 cell processor, Baxter) согласно инструкции производителя. В некоторых аспектах, стадию промывки осуществляют с помощью проточной фильтрации вдоль потока (TFF) согласно инструкции производителя. В некоторых вариантах осуществления, клетки повторно суспендируются в разнообразных биологически совместимых буферах после промывки, таких, например, как PBS, не содержащий Ca⁺⁺/Mg⁺⁺. В определенных вариантах осуществления, компоненты образца клеток крови удаляют и клетки непосредственно повторно суспендируют в среде для культивирования.

[0486] В некоторых вариантах осуществления, способы включают способы разделения клеток на основе плотности, таких как приготовление лейкоцитов из периферической крови посредством лизиса эритроцитов и центрифугирования в градиенте Percoll или Ficoll.

[0487] В некоторых вариантах осуществления, способы выделения включают разделение различных типов клеток на основе экспрессирования или присутствия в клетке одной или нескольких специфичных молекул, таких как поверхностные маркеры, например, поверхностные белки, внутриклеточные маркеры или нуклеиновая кислота. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать любой известный способ разделения на основе таких маркеров. В некоторых вариантах осуществления, разделение представляет собой разделение на основе сродства или иммунноафинности. Например, выделение в некоторых аспектах включает разделение клеток и популяций клеток на основе экспрессирования клеток или уровня экспрессирования одного или нескольких маркеров, как правило, поверхностных маркеров клетки, например, посредством инкубирования с антителом или партнером по связыванию, который специфично связывается с такими маркерами, как правило, за этим следуют стадии промывки и разделения клеток, связанных с антителом или партнером по связыванию, и тех клеток, которые не связаны с антителом или партнером по связыванию.

[0488] Такие стадии разделения могут основываться на положительной селекции, при которой клетки, связанные с реагентами, удерживаются для дальнейшего использования, и/или отрицательной селекции, при которой удерживаются клетки, не связанные с антителом или партнером по связыванию. В некоторых примерах, для дальнейшего использования удерживают обе фракции. В некоторых аспектах, отрицательная селекция может быть особенно полезной, когда нет доступного антитела, которое специфично идентифицирует тип клеток в гетерогенной популяции, так что разделение осуществляется лучше всего на основе маркеров, экспрессируемых клетками иными, чем желаемая популяция.

[0489] Разделение не должно давать в результате 100% обогащение или удаление конкретной популяции клеток или клеток, экспрессирующих конкретный маркер. Например, положительная селекции или обогащение клетками конкретного типа, которые, например, экспрессируют маркер, относится к увеличению количества или процента таких клеток, но не должно давать в результате полного отсутствия клеток, не экспрессирующих маркера. Таким образом, отрицательная селекция, удаление или обеднение клеток конкретного типа, такого как те, которые экспрессируют маркер, относится к уменьшению количества или процента таких клеток, но не должно давать в результате полное удаление всех таких клеток.

[0490] В некоторых примерах, осуществляют множество заходов стадий разделения, когда полученная с помощью положительной или отрицательной селекции фракция с одной стадии подвергается воздействию другой стадии разделения, такой как последующая положительная или отрицательная селекция. В некоторых примерах, одна стадия разделения может вызвать обеднение клеток, экспрессирующих множество маркеров одновременно, например, посредством инкубирования клеток со множеством антител или партнеров по связыванию, каждый из которых специфичен к маркеру, нацеленному для отрицательной селекции. Таким образом, множество типов клеток может подвергаться положительной селекции одновременно посредством инкубирования клеток со множеством антител или партнеров по связыванию, экспрессируемых на различных типах клеток.

[0491] Например, в некоторых аспектах, конкретные субпопуляции Т-лимфоцитов, такие как клетки положительные, или экспрессирующие высокие уровни одного или нескольких поверхностных маркеров, например, CD28⁺, CD62L⁺, CCR7⁺, CD27⁺, CD127⁺, CD4+, CD8+, CD45RA⁺, и/или Т-лимфоциты CD45RO⁺, выделяют с помощью методик положительной или отрицательной селекции.

[0492] Например, Т-лимфоциты CD3⁺, CD28⁺ могут подвергаться положительной селекции с использованием конъюгированых магнитных шариков анти-CD3/анти-CD28 (например, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander).

[0493] В некоторых вариантах осуществления, выделение осуществляют посредством обогащения конкретной популяции клеток посредством положительной селекции или обеднения конкретной популяции клеток посредством отрицательной селекции. В некоторых вариантах осуществления, положительная или отрицательная селекция осуществляется посредством инкубирования клеток с одним или несколькими антителами или с другим связывающим агентом, который специфично связывается с одним или несколькими поверхностными маркерами, экспрессируемыми (маркер⁺) при относительно высоком уровне (marker^high) на клетках, полученных с помощью положительной или отрицательной селекции, соответственно.

[0494] В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты выделяют из образца PBMC посредством отрицательной селекции маркеров, экспрессируемых на клетках отличных от Т-лимфоцитов, таких как B-лимфоциты, моноциты или другие лейкоциты, такие как CD14. В некоторых аспектах, стадию селекции CD4+ или CD8+ используют для разделения хелперных Т-лимфоцитов CD4+ и цитотоксичных Т-лимфоцитов CD8+. Такие популяции CD4+ и CD8+ могут в дальнейшем сортироваться на субпопуляции посредством положительной или отрицательной селекции относительно маркеров, экспрессируемых или экспрессируемых при относительно более высоком уровне в одной или нескольких субпопуляциях наивных Т-лимфоцитов, T-лимфоцитов памяти и/или эффекторных T-лимфоцитов.

[0495] В некоторых вариантах осуществления, клетки CD8+ дополнительно обогащаются или обедняются наивными клетками, центральными клетками памяти, эффекторными клетками памяти, и/или центральными стволовыми клетками памяти, например, с помощью положительной или отрицательной селекции на основе поверхностных антигенов, связанных с соответствующей субпопуляцией. В некоторых вариантах осуществления, осуществляют обогащение центральными T-лимфоцитами памяти (T_CM) для увеличения эффективности, например, для улучшения долговременной выживаемости, размножения и/или приживления после введения, которые в некоторых аспектах являются особенно стойкими в таких субпопуляциях. Смотри Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012); Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012). В некоторых вариантах осуществления, объединение TCM-обогащенных Т-лимфоцитов CD8+ и Т-лимфоцитов CD4+ дополнительно повышает эффективность.

[0496] В вариантах осуществления, Т-лимфоциты памяти присутствуют в подмножествах CD8+ лимфоцитов периферической крови как в CD62L⁺, так и в CD62L-. PBMC могут обогащаться или обедняться фракциями CD62L-CD8+ и/или CD62L⁺CD8+, например, с использованием антител анти-CD8 и анти-CD62L.

[0497] В некоторых вариантах осуществления, обогащение центральных T-лимфоцитов памяти (T_CM) основано на положительном или высоком поверхностном экспрессировании CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 и/или CD 127; в некоторых аспектах, оно основано на отрицательной селекции клеток, экспрессирующих или сильно экспрессирующих CD45RA и/или гранзим B. В некоторых аспектах, выделение популяции CD8+, обогащенной клетками T_CM, осуществляется посредством обеднения клеток, экспрессирующих CD4, CD14, CD45RA, и положительной селекции или обогащения клетками, экспрессирующими CD62L. В одном из аспектов, обогащение центральными T-лимфоцитами памяти (T_CM) осуществляется, начиная с отрицательной фракции клеток, полученных селекцией на основе экспрессирования CD4, которые подвергаются отрицательной селекции на основе экспрессирования CD14 и CD45RA, и положительной селекции на основе CD62L. Такие виды селекции в некоторых аспектах осуществляются одновременно, а в других аспектах осуществляются последовательно, в любом порядке. В некоторых аспектах, такая же стадия селекции на основе экспрессирования CD4, как используется при приготовлении популяции или субпопуляции клеток CD8+, используется также для генерирования популяции или субпопуляции клеток CD4+, так что, как положительная, так и отрицательная фракция от разделения на основе CD4 удерживаются и используются на последующих стадиях способов, необязательно, после одной или нескольких дополнительных стадий положительной или отрицательной селекции.

[0498] В конкретном примере, образец PBMC или образец других лейкоцитов подвергается воздействию селекции клеток CD4+, где удерживаются как отрицательные, так и положительные фракции. Затем отрицательная фракция подвергается воздействию отрицательной селекции на основе экспрессирования CD14 и CD45RA или CD19 и положительной селекции на основе характеристик маркера центральных Т-лимфоцитов памяти, таких как CD62L или CCR7, где положительная и отрицательная селекция осуществляются в любом порядке.

[0499] Хелперные T-лимфоциты CD4+ сортируют на наивные клетки, центральные клетки памяти и эффекторные клетки посредством идентификации популяций клеток, которые имеют антигены на поверхности клеток. Лимфоциты CD4+ можно получить с помощью стандартных способов. В некоторых вариантах осуществления, наивные T-лимфоциты CD4+ представляют собой Т-лимфоциты CD45RO-, CD45RA⁺, CD62L⁺, CD4+. В некоторых вариантах осуществления, центральные клетки памяти CD4+ представляют собой CD62L⁺ и CD45RO⁺. В некоторых вариантах осуществления, эффекторные клетки CD4+ представляют собой CD62L- и CD45RO-.

[0500] В одном из примеров, для обогащения клеток CD4+ посредством отрицательной селекции, коктейль моноклональных антител, как правило, содержит антитела к CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR и CD8. В некоторых вариантах осуществления, антитело или партнер по связыванию связывается с твердым носителем или матрицей, такой как магнитный шарик или парамагнитный шарик, чтобы дать возможность для разделения клеток для положительной и/или отрицательной селекции. Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки и популяции клеток разделяют или выделяют с использованием иммуномагнитных (или магнитоаффинных) методик разделения (обсуждаемых в Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).

[0501] В некоторых аспектах, образец или композиция клеток, которые должны разделяться, инкубируются вместе с мелкодисперсным намагничиваемым или магниточувствительным материалом, таким как магниточувствительные частицы или микрочастицы, такие как парамагнитные шарики (например, такие как Dynalbeads или шарики MACS). Магниточувствительный материал, например, частицы, как правило, прямо или косвенно присоединены к партнеру по связыванию, например, к антителу, которое специфично связывается с молекулой, например, поверхностным маркером, присутствующим на клетке, клетках или на популяции клеток, которые желают разделить, например, их желают подвергнуть воздействию отрицательной или положительной селекции.

[0502] В некоторых вариантах осуществления, магнитная частица или шарик содержит магниточувствительный материал, связанный с элементом специфичного связывания, таким как антитело или другой партнер по связыванию. Имеется множество хорошо известных магниточувствительных материалов, используемых в способах магнитной сепарации. Соответствующие магнитные частицы включают частицы, описанные в Molday, патент США № 4452773, и в описании Европейского патента EP 452342 B, которые тем самым включаются в качестве ссылок. Частицы коллоидных размеров, такие как те, которые описаны в Owen, патент США № 4795698, и Liberti et al., патент США № 5200084, представляют собой другие примеры.

[0503] Инкубирование, как правило, осуществляется при условиях, при которых антитела или партнеры по связыванию, или молекулы, такие как вторичные антитела или другие реагенты, которые специфично связываются с такими антителами или партнерами по связыванию, которые присоединяются к магнитной частице или шарику, специфично связываются с молекулами на поверхности клетки, если они присутствуют на клетках в образце.

[0504] В некоторых аспектах, образец помещают в магнитное поле, и клетки, содержащие магниточувствительные или намагничиваемые частицы, присоединенные к ним, будут притягиваться к магниту и отделяться от немеченых клеток. Для положительной селекции удерживаются клетки, которые притягиваются к магниту; для отрицательной селекции удерживаются клетки, которые не притягиваются (немеченые клетки). В некоторых аспектах, сочетание положительной и отрицательной селекции осуществляется в ходе одной и той же стадии селекции, когда положительные и отрицательные фракции удерживаются и дополнительно обрабатываются или подвергаются воздействию дополнительных стадий разделения.

[0505] В определенных вариантах осуществления, магниточувствительные частицы покрывают первичными антителами или другими партнерами по связыванию, вторичными антителами, лектинами, ферментами или стрептавидином. В определенных вариантах осуществления, магнитные частицы присоединяются к клеткам посредством покрытия из первичных антител специфичных к одному или нескольким маркерам. В определенных вариантах осуществления, клетки, а не шарики, метятся первичным антителом или партнером по связыванию, а затем добавляют магнитные частицы, покрытые вторичным антителом специфичным к типу клеток или другим партнером по связыванию (например, стрептавидином). В определенных вариантах осуществления, магнитные частицы, покрытые стрептавидином, используют в сочетании с биотинилированными первичными или вторичными антителами.

[0506] В некоторых вариантах осуществления, магниточувствительные частицы оставляют присоединенными к клеткам, которые должны впоследствии инкубироваться, культивироваться и/или подвергаться генной инженерии; в некоторых аспектах, частицы остаются присоединенными к клеткам для введения пациенту. В некоторых вариантах осуществления, намагничиваемые или магниточувствительные частицы удаляют с клеток. Способы удаления намагничиваемых частиц с клеток известны и включают, например, использование конкурирующих немеченых антител и намагничиваемых частиц или антител, конъюгированных с расщепляемыми линкерами. В некоторых вариантах осуществления, намагничиваемые частицы являются биодеградируемыми.

[0507] В некоторых вариантах осуществления, селекция на основе сродства осуществляется с помощью сортинга с помощью магнитно активированных клеток (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Системы Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) способны к селекции высокой чистоты клеток, содержащих намагниченные частицы, присоединенные к ним. В определенных вариантах осуществления, MACS работает в режиме, когда нецелевые и целевые частицы последовательно элюируются после приложения внешнего магнитного поля. То есть, клетки, присоединенные к магнитным частицам, удерживаются на месте, в то время как не присоединенные частицы элюируются. Затем, после завершения этой первой стадии элюирования, частицы, которые захвачены в магнитном поле, и их элюирование предотвращается, освобождаются некоторым образом, так что они могут элюироваться. В определенных вариантах осуществления, нецелевые клетки метятся и обедняются в гетерогенной популяции клеток.

[0508] В определенных вариантах осуществления, выделение или разделение осуществляется с использованием системы, устройства или аппарата, который осуществляет одно или несколько действий из стадий способов выделения, приготовления клеток, разделения, обработки, инкубирования, культивирования и/или подготовки. В некоторых аспектах, систему используют для осуществления каждой из этих стадий в замкнутой или стерильной окружающей среде, например, для сведения к минимуму ошибки, неправильных действий пользователя и/или загрязнения. В одном из примеров, система представляет собой систему, как описано в публикации PCT номер WO2009/072003 или в заявке на патент США № 20110003380 A1.

[0509] В некоторых вариантах осуществления, система или устройство осуществляет одну или несколько, например, все, стадии из выделения, обработки, генной инженерии и приготовления в объединенной или самодостаточной системе и/или автоматическим или программируемым образом. В некоторых аспектах, система или устройство содержит компьютер и/или компьютерную программу в сообщении с системой или устройством, которая позволяет пользователю программировать, контролировать, оценивать результат и/или регулировать различные аспекты стадий обработки, выделения, генной инженерии и приготовления.

[0510] В некоторых аспектах, разделение и/или другие стадии осуществляются с использованием системы CliniMACS (Miltenyi Biotec), например, для автоматического разделения клеток на уровне клинического масштаба в замкнутой и стерильной системе. Компоненты могут включать встроенный микрокомпьютер, узел магнитной сепарации, перистальтический насос и различные запорные клапаны. Встроенный компьютер в некоторых аспектах контролирует все компоненты инструмента и направляет систему на осуществление повторяющихся процедур в стандартизированной последовательности. Узел магнитной сепарации в некоторых аспектах включает подвижный постоянный магнит и держатель для селекционной колонки. Перистальтический насос контролирует скорость потока через набор трубок и, вместе с запорными клапанами, обеспечивает контролируемый поток буфера через систему и непрерывное суспендирование клеток.

[0511] Система CliniMACS в некоторых аспектах использует связанные с антителом намагничиваемые частицы, которые поставляются в стерильном, непирогенном растворе. В некоторых вариантах осуществления, после мечения клеток магнитными частицами, клетки промывают для удаления избытка частиц. Затем мешок для приготовления клеток соединяется с набором трубок, который, в свою очередь, соединяется c мешком, содержащим буфер, и мешком для сбора клеток. Набор трубок состоит из предварительно собранных стерильных трубок, включая предварительную колонку и разделительную колонку, и они предназначены для одноразового использования. После начала программы разделения, система автоматически вводит образец клеток в разделительную колонку. Меченые клетки удерживаются в колонке, в то время как немеченые клетки удаляются посредством ряда стадий промывки. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования с помощью способов, описанных в настоящем документе, являются немечеными и не удерживаются в колонке. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования вместе со способами, описанными в настоящем документе, являются меченными и удерживаются в колонке. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования вместе со способами, описанными в настоящем документе, элюируются из колонки после удаления магнитного поля и собираются в мешок для сбора клеток.

[0512] В определенных вариантах осуществления, разделение и/или другие стадии осуществляют с использованием системы CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). Система CliniMACS Prodigy в некоторых аспектах снабжена узлом обработки клеток, который делает возможным автоматическую промывку и фракционирование клеток посредством центрифугирования. Система CliniMACS Prodigy может также содержит встроенную камеру и программируемое устройство для распознавания изображений, которое определяет оптимальную конечную точку фракционирования клеток посредством определения различий макроскопических слоев исходного продукта клеток. Например, периферическая кровь автоматически разделяется на эритроциты, лейкоциты и слои плазмы. Система CliniMACS Prodigy может также содержать встроенную камеру для культивирования клеток, которая исполняет протоколы культивирования клеток, такие, например, как дифференциация и размножение клеток, нагрузка антигена и долговременное культивирование клеток. Входные узлы могут сделать возможным стерильное удаление и замену сред, и клетки можно наблюдать с использованием встроенного микроскопа. Смотри, например, Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) и Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

[0513] В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток, описанные в настоящем документе, собираются и обогащаются (или обедняются) с помощью проточной цитометрии, при которой клетки, окрашенные с помощью множества поверхностных маркеров клеток, переносятся в потоке текучей среды. В некоторых вариантах осуществления, популяция клеток, описанная в настоящем документе, собирается и обогащается (или обедняется) с помощью (FACS)-сортинга в препаративном масштабе. В определенных вариантах осуществления, популяция клеток, описанная в настоящем документе, собирается и обогащается (или обедняется) с использованием чипов микроэлектромеханических систем (MEMS) в сочетании с системой детектирования на основе FACS (смотри, например, WO 2010/033140, Cho et al., Lab Chip 10, 1567-1573 (2010); и Godin et al., J Biophoton. 1(5):355-376 (2008). В обоих случаях, клетки могут метиться множеством маркеров с получением возможности выделения хорошо определенных подмножеств T-лимфоцитов высокой чистоты.

[0514] В некоторых вариантах осуществления, антитела или партнеры по связыванию метятся одним или несколькими детектируемыми маркерами для облегчения разделения для положительной и/или отрицательно селекции. Например, разделение может основываться на связывании флуоресцентно меченых антител. В некоторых примерах, разделение клеток, основанное на связывании антител или других партнеров по связыванию специфичных к одному или нескольким поверхностным маркерам клеткам, осуществляется в потоке текучей среды, например, с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (FACS), включая (FACS) в препаративном масштабе и/или чипы микроэлектромеханических систем (MEMS), например, в сочетании с системой проточного цитометрического детектирования. Такие способы делают возможной положительную и отрицательную селекцию на основе множества маркеров одновременно.

[0515] В некоторых вариантах осуществления, способы приготовления включают стадии замораживания, например, криоконсервирование клеток, либо до, либо после выделения, инкубирования и/или генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления, замораживание и последующая стадия оттаивания удаляет гранулоциты и, до некоторой степени, моноциты в популяции клеток. В некоторых вариантах осуществления, клетки суспендируются в растворе для замораживания, например, после стадии промывки для удаления плазмы и тромбоцитов. Можно использовать в некоторых аспектах любые из множества известных растворов для замораживания и параметров. Один из примеров включает использование PBS, содержащего 20% DMSO и 8% сывороточного альбумина человека (HSA), или других соответствующих сред для замораживания клеток. Затем его разбавляют средами 1:1, так что конечная концентрация DMSO и HSA составляет 10% и 4%, соответственно. Затем клетки, как правило, замораживают до -80°C при скорости 1° в минуту и хранят в паровой фазе в танке-хранилище с жидким азотом.

[0516] В некоторых вариантах осуществления, клетки инкубируют и/или культивируют до генетической инженерии или в объединении с ней. Стадии инкубирования могут включать посев, культивирование, стимулирование, активирование и/или выращивание. Инкубирование и/или генная инженерия могут осуществляться в емкости для культивирования, такой как узел, камера, лунка, колонка, пробирка, набор трубок, клапан, флакон, чашка для культивирования, мешок или другой контейнер для посева или культивирования клеток. В некоторых вариантах осуществления, композиции или клетки инкубируют в присутствии условий стимулирования или стимулирующего агента. Такие условия включют условия, разработанные для индуцирования, пролиферации, размножения, активирования и/или выживаемости клеток в популяции, для воспроизведения экспонирования для антигена, и/или для примирования клеток для генной инженерии, например, для введения рекомбинантного рецептора антигена.

[0517] Условия могут включать одну или несколько конкретных сред, температуру, содержание кислорода, содержание диоксида углерода, время, агенты, например, питательные элементы, аминокислоты, антибиотики, ионы и/или стимулирующие факторы, такие как цитокины, хемокины, антигены, партнеры по связыванию, белки слияния, рекомбинантные растворимые рецепторы, и любые другие агенты, разработанные для активирования клеток.

[0518] В некоторых вариантах осуществления, стимулирующие условия или агенты включают один или несколько агентов, например, лиганд, который может активировать внутриклеточный сигнальный домен комплекса TCR. В некоторых аспектах, агент включает или инициирует внутриклеточный сигнальный каскад TCR/CD3 в T-лимфоците. Такие агенты могут включать антитела, например, специфичные к TCR, например, анти-CD3. В некоторых вариантах осуществления, условия стимулирования включают один или несколько агентов, например, лиганд, который может стимулировать костимуляторный рецептор, например, анти-CD28. В некоторых вариантах осуществления, такие агенты и/или лиганды могут связываться с твердым носителем, таким как шарик, и/или с одним или несколькими цитокинами. Необязательно, способ размножения может дополнительно включать стадию добавления антитела анти-CD3 и/или анти-CD28 в среду для культивирования (например, при концентрации, по меньшей мере, примерно 0,5 нг/мл). В некоторых вариантах осуществления, стимулирующие агенты включают IL-2, IL-15 и/или IL-7. В некоторых аспектах, концентрация IL-2 составляет, по меньшей мере, примерно 10 единиц/мл.

[0519] В некоторых аспектах, инкубирование осуществляется согласно методикам, таким как те, которые описаны в патенте США № 6040177, Riddell et al., Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) и/или Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

[0520] В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты размножаются посредством добавления в инициирующую культивирование композицию клеток-фидеров, таких как неделящиеся мононуклеары периферической крови (PBMC) (например, таким образом что получаемая в результате популяция клеток содержит, по меньшей мере, примерно 5, 10, 20 или 40 или больше клеток-фидеров PBMC на каждый T-лимфоцит в начальной популяции, который должен размножаться); и инкубирования культуры (например, в течение времени, достаточного для размножения этих количеств Т-лимфоцитов). В некоторых аспектах, неделящиеся клетки-фидеры могут содержать гамма-облученные клетки-фидеры PBMC. В некоторых вариантах осуществления, PBMC облучают гамма-излучением в диапазоне примерно 3000-3600 рад для предотвращения деления клеток. В некоторых аспектах, клетки-фидеры добавляют в культурную среду перед добавлением популяций Т-лимфоцитов.

[0521] В некоторых вариантах осуществления, условия стимулирования включают температуру, соответствующую росту T-лимфоцитов человека, например, по меньшей мере, примерно 25 градусов Цельсия, как правило, по меньшей мере, примерно 30 градусов, и как правило, соответствующую или примерно соответствующую 37 градусам Цельсия. Необязательно, инкубирование может дополнительно включать добавление неделящихся EBV-трансформированных лимфобластных клеток (LCL) в качестве клеток-фидеров. LCL могут облучаться гамма-излучением в диапазоне примерно от 6000 до 10000 рад. Клетки-фидеры LCL в некоторых аспектах обеспечиваются в любом соответствующем количестве, например, при отношении клеток-фидеров LCL к начальным T-лимфоцитам, по меньшей мере, примерно 10:1.

[0522] В вариантах осуществления, антиген-специфичные Т-лимфоциты, такие как антиген-специфичные Т-лимфоциты CD4+ и/или CD8+, получают посредством стимулирования наивных или антиген-специфичных T-лимфоцитов антигеном. Например, линии или клоны антиген-специфичных Т-лимфоцитов можно генерировать для антигенов цитомегаловируса посредством выделения Т-лимфоцитов у инфицированных субъектов и стимулирования клеток in vitro с помощью этого же антигена.

C. Нуклеиновые кислоты, векторы и способы генной инженерии

[0523] В некоторых вариантах осуществления, клетки, например, Т-лимфоциты, получают с помощью генной инженерии для экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, генную инженерию осуществляют посредством введения молекул нуклеиновой кислоты, которые кодируют рекомбинантный рецептор. Также предлагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие рекомбинантный рецептор, и векторы или конструкции, содержащие такие нуклеиновые кислоты и/или молекулы нуклеиновых кислот.

[0524] В некоторых случаях, последовательность нуклеиновых кислот, кодирующая рекомбинантный рецептор, например, химерный рецептор антигена (CAR), содержит сигнальную последовательность, которая кодирует сигнальный пептид. В некоторых аспектах, сигнальная последовательность может кодировать сигнальный пептид, полученный из нативного полипептида. В других аспектах, сигнальная последовательность может кодировать гетерологичный или ненативный сигнальный пептид. В некоторых вариантах осуществления, сигнальный пептид получают из трансмембранного белка. В некоторых примерах сигнальный пептид получают из CD8a, CD33 или IgG. Неограничивающие иллюстративные примеры сигнальных пептидов, включают, например, сигнальный пептид CD33, приведенный в SEQ ID NO:21, сигнальный пептид CD8a, приведенный в SEQ ID NO:75, или сигнальный пептид, приведенный в SEQ ID NO:76, или их модифицированный вариант.

[0525] В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рекомбинантный рецептор, содержит, по меньшей мере, один промотор, который функционально связан с ней, для контроля экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых примерах, молекула нуклеиновой кислоты содержит два, три или более промоторов, функционально связанных с ней, для контроля экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать регуляторные последовательности, такие как кодоны инициирования транскрипции и трансляции и стоп-кодоны, которые специфичны к типу хозяина (например, бактерии, грибка, растения или животного), в которого должна вводиться молекула нуклеиновой кислоты, соответствующим образом и учитывая то, основывается ли молекула нуклеиновой кислоты на ДНК или RNA. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать регуляторные/контрольные элементы, такие как промотор, ген-усилитель, интрон, сигнал полиаденилирования, консенсусная последовательность Козака и акцептор или донор сплайсирования. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать ненативный промотор, функционально связанный с последовательностью нуклеотидов, кодирующей рекомбинантный рецептор и/или один или несколько дополнительных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления, промотор выбирают из промотора RNA pol I, pol II или pol III. В некоторых вариантах осуществления, промотор распознается RNA полимеразой II (например, CMV, ранняя область SV40 или главный поздний промотор аденовируса). В другом варианте осуществления, промотор распознается RNA полимеразой III (например, промотор U6 или H1). В некоторых вариантах осуществления, промотор может представлять собой невирусный промотор или вирусный промотор, такой как промотор цитомегаловируса (CMV), промотор SV40, промотор RSV и промотор, находящийся в длинном концевом повторе вируса стволовых клеток мышей. Рассматриваются также и другие известные промоторы.

[0526] В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой или содержит конститутивный промотор. Иллюстративные конститутивные промоторы включают, например, ранний промотор вируса обезьян 40 (SV40), немедленно-ранний промотор цитомегаловируса (CMV), промотор C убиквитина человека (UBC), промотор фактора элонгации 1α человека (EF1α), промотор фосфоглицераткиназы 1 мышей (PGK) и промотор β-актина цыплят, связанный с ранним геном-усилителем CMV (CAGG). В некоторых вариантах осуществления, конститутивный промотор представляет собой синтетический или модифицированный промотор. В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой или содержит промотор MND, синтетический промотор, который содержит область LTR MoMuLV, U3-модифицированного с помощью гена-усилителя вируса миелопролиферативной саркомы (смотри Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2):748-755). В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой тканеспецифичный промотор. В другом варианте осуществления, промотор представляет собой вирусный промотор. В другом варианте осуществления, промотор представляет собой невирусный промотор.

[0527] В другом варианте осуществления, промотор представляет собой регулируемый промотор (например, индуцируемый промотор). В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой индуцируемый промотор или репрессируемый промотор. В некоторых вариантах осуществления, промотор содержит операторную последовательность Lac, операторную последовательность тетрациклина, операторную последовательность галактозы или операторную последовательность доксициклина, или представляет собой его аналог или способен связываться с репрессором Lac или с тетрациклиновым репрессором или распознаваться им или его аналогом. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты не содержит регуляторного элемента, например, промотора.

[0528] В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рекомбинантный рецептор, например, CAR или другой рецептор антигена, дополнительно содержит последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие маркер и/или клетки, экспрессирующие CAR или другой рецептор антигена, дополнительно содержит маркер, например, суррогатный маркер, такой как поверхностный маркер клетки, который можно использовать для подтверждения трансдукции или генной инженерии клетки для экспрессирования рецептора, такого как усеченная версия поверхностного рецептора клеток, такого как усеченный EGFR (tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, один или несколько маркеров представляют собой маркер трансдукции, суррогатный маркер и/или маркер селекции.

[0529] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой маркер трансдукции или суррогатный маркер. Маркер трансдукции или суррогатный маркер можно использовать для детектирования клеток, которые вводятся с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, например, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, маркер трансдукции может показывать или подтверждать модифицирование клеток. В некоторых вариантах осуществления, суррогатный маркер представляет собой белок, который получен для соэкспрессирования на поверхности клетки с рекомбинантным рецептором, например, CAR. В конкретных вариантах осуществления, такой суррогатный маркер представляет собой поверхностный белок, который модифицируют, чтобы он имел малую активность или вообще не имел активности. В определенных вариантах осуществления, суррогатный маркер кодируется той же молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, последовательность нуклеиновых кислот, кодирующая рекомбинантный рецептор, функционально связана с последовательностью нуклеиновых кислот, кодирующей маркер, необязательно, отделенной внутренним участком внутренней посадки рибосомы (IRES), или с нуклеиновой кислотой, кодирующей саморасщепляющийся пептид или пептид, который вызывает перескакивание рибосомы, такой как последовательность 2A, такой как T2A, P2A, E2A или F2A. Внешние маркерные гены могут в некоторых случаях использоваться в связи с генно-инженерной клеткой, чтобы сделать возможным детектирование или селекцию клеток и, в некоторых случаях, также облегчить суицид клетки.

[0530] Иллюстративные суррогатные маркеры могут содержать усеченные формы поверхностных полипептидов клетки, таких как усеченные формы, которые являются нефункциональными и не трансдуцируют или не могут трансдуцировать сигнал или сигнал, обычно трансдуцируемый полноразмерной формой поверхностного полипептида клетки, и/или не интернализируются или не способны интернализироваться. Иллюстративные усеченные поверхностные полипептиды клеток включают усеченные формы факторов роста или других рецепторов, таких как усеченный рецептор 2 эпидермального фактора роста человека (tHER2), усеченный рецептор эпидермального фактора роста (tEGFR, иллюстративную последовательность tEGFR, приведенную в SEQ ID NO:11 или 76) или простата-специфичный мембранный антиген (PSMA) или его модифицированную форму. tEGFR может содержать эпитоп, распознаваемый антителом цетуксимаб (Erbitux®) или другим терапевтическим антителом анти-EGFR или связывающейся молекулой, которую можно использовать для идентификации или селекции генно-инженерных клеток, которые получены с помощью конструкции tEGFR и кодированного экзогенного белка, и/или для удаления или разделения клеток, экспрессирующих кодируемый экзогенный белок. Смотри патент США № 8802374 и Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434). В некоторых аспектах, маркер, например, суррогатный маркер, содержит полностью или частично (например, усеченную форму) CD34, NGFR, CD19 или усеченный CD19, например, усеченный CD19 не человека, или рецептор эпидермального фактора роста (например, tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой или содержит флуоресцентный белок, такой как зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (EGFP), такой как суперскладчатый GFP (sfGFP), красный флуоресцентный белок (RFP), такой как tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed или DsRed2, голубой флуоресцентный белок (CFP), сине-зеленый флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (EBFP) и желтый флуоресцентный белок (YFP), и их варианты, включая варианты видов, мономерные варианты и кодон-оптимизированные и/или усиленные варианты флуоресцентных белков. В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой или содержит фермент, такой как люцифераза, ген lacZ из E. coli, щелочная фосфатаза, секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза (SEAP), хлорамфениколацетилтрансфераза (CAT). Иллюстративные светоиспускающие репортерные гены включают люциферазу (luc), β-галактозидазу, хлорамфениколацетилтрансферазу (CAT), β-глюкуронидазу (GUS) или их варианты.

[0531] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой маркер селекции. В некоторых вариантах осуществления, маркер селекции представляет собой или содержит полипептид, который придает резистентность к экзогенным агентам или лекарственным средствам. В некоторых вариантах осуществления, маркер селекции представляет собой ген резистентности к антибиотикам. В некоторых вариантах осуществления, селекции маркер представляет собой ген резистентности к антибиотикам, который придает резистентность к антибиотикам клеткам млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления, селекции маркер представляет собой или содержит ген резистентности к пуромицину, ген резистентности к гигромицину, ген резистентности к бластицидину, ген резистентности к неомицину, ген резистентности к генетицину или ген резистентности к зеоцину, или их модифицированную форму.

[0532] В некоторых аспектах, маркер, например, суррогатный маркер, включает полностью или частично (например, усеченную форму) CD34, NGFR или рецептор эпидермального фактора роста (например, tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновая кислота, кодирующая маркер, функционально связана с полинуклеотидом, кодирующим линкерную последовательность, такую как расщепляемая линкерная последовательность, например, T2A. Например, маркер, и необязательно, линкерная последовательность, могут представлять собой любую руппу, как описано в публикации PCT № WO2014031687. Например, маркер может представлять собой усеченный EGFR (tEGFR), который необязательно связан с линкерной последовательностью, такой как расщепляемая линкерная последовательность T2A. Иллюстративный полипептид для усеченного EGFR (например, tEGFR) содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 7 или 28, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 7 или 28. Иллюстративная T2A линкер последовательность содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 6, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 6.

[0533] В некоторых вариантах осуществления, молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие конструкции CAR, дополнительно содержат последовательность, кодируемую T2A, рибосомный перескакивающий элемент и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после последовательности, кодирующей CAR. В некоторых вариантах осуществления, последовательность кодирует рибосомный перескакивающий элемент T2A, приведенный в SEQ ID NO: 6, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты, экспрессирующие рецептор антигена (например, CAR), могут также генерироваться для экспрессирования усеченного EGFR (EGFRt) как неиммуногенного эпитопа селекции (например, посредством введения конструкции, кодирующей CAR и EGFRt, разделенные рибосомным переключателем T2A, для экспрессирования двух белков из одной конструкции), который затем можно использовать как маркер для детектирования таких клеток (смотри, например, патент США № 8802374). В некоторых вариантах осуществления, последовательность кодирует последовательность tEGFR, приведенную в SEQ ID NO: 7 или 28, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 7 или 28.

[0534] В некоторых вариантах осуществления, отдельный промотор может направлять экспрессирование RNA, которая содержит отдельную рамку открытого считывания (ORF), два или три гена (например, кодирующих молекулу, вовлеченную в модуляцию метаболического пути и кодирующую рекомбинантный рецептор), отделенных друг от друга последовательностями, кодирующими саморасщепляющийся пептид (например, последовательности 2A) или сайт распознавания протеазы (например, фурин). Таким образом, ORF кодирует отдельный полипептид, который, либо в ходе (в случае 2A), либо после трансляции, процессируется в отдельные белки. В некоторых случаях, пептид, такой как T2A, может заставить рибосому перескочить (рибосомное перескакивание) синтез пептидной связи на C-окончании элемента 2A, приводя к разделению конца последовательности 2A и следующего пептида в прямом направлении после нее (смотри, например, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) и deFelipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)). В данной области известно множество элементов 2A. Примеры последовательностей 2A, которые можно использовать в способах и нуклеиновых кислотах, описанных в настоящем документе, включают, без ограничения, последовательности 2A вируса эпизоотического стоматита (F2A, например, SEQ ID NO: 27), вируса конского ринита A (E2A, например, SEQ ID NO: 26), вируса Thosea asigna (T2A, например, SEQ ID NO: 6 или 23) и тешовируса-1 свиней (P2A, например, SEQ ID NO: 24 или 25), как описано в публикации патента США № 20070116690.

[0535] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой молекулу, например, поверхностный белок клетки, не встречающийся в природе на Т-лимфоцитах или не встречающейся в природе на поверхности Т-лимфоцитов, или его часть. В некоторых вариантах осуществления, молекула представляет собой чужеродную молекулу, например, чужеродный белок, то есть, белок, который не распознается как “свой” иммунной системой хозяина, которому клетки будут адоптивно переноситься.

[0536] В некоторых вариантах осуществления, маркер не служит для терапевтической функции и/или не продуцирует воздействия иного, чем использование в качестве маркера для генной инженерии, например, для селекции клеток, успешно полученных с помощью генной инженерии. В других вариантах осуществления, маркер может представлять собой терапевтическую молекулу или молекулу, иным образом оказывающую некоторое желаемое воздействие, например, как лиганд для клетки, которая должна встретиться in vivo, такой как костимуляторная молекула или молекула иммунной контрольной точки для усиления и/или демпфирования реакций клеток при адоптивном переносе и встрече с лигандом.

[0537] Введение молекул нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантный рецептор, в клетку может осуществляться с использованием любого количества известных векторов. Такие векторы включают вирусные и невирусные системы, включая лентивирусные и гаммаретровирусные системы, а также системы на основе транспозона, такие как системы переноса гена на основе PiggyBac или Sleeping Beauty. Иллюстративные способы включают способа переноса нуклеиновых кислот, кодирующих рецепторы, включая вирусную, например, ретровирусную или лентивирусную, трансдукцию, транспозоны и электропорообразование.

[0538] В некоторых вариантах осуществления, перенос гена осуществляется посредством сначала стимулирования клетки, например, посредством объединения ее со стимулом, который индуцирует реакцию, такую как пролиферация, выживаемость и/или активирование, например, как измеряется по экспрессированию цитокина или маркера активирования, с последующим трансдуцированием активирующих клеток и размножением в культуре до количеств достаточных для клинических применений.

[0539] В некоторых вариантах осуществления, до или в ходе переноса гена, клетки инкубируют или культивируют в присутствии иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, включая любое соединение, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, добавляют в ходе процесса получения клеток, например, в ходе процесса генной инженерии Т-лимфоцитов CAR. В некоторых аспектах, присутствие иммуномодуляторного соединения может улучшить качество популяции получаемых клеток. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может увеличить пролиферацию или размножение клеток или может изменить один или несколько путей передачи сигналов с получением в результате клеток с менее дифференцированным или менее активированным фенотипом поверхности, несмотря на демонстрацию достаточного размножения и/или эффекторной функции.

[0540] В некоторых контекстах, сверхэкспрессирование стимулирующего фактора (например, лимфокина или цитокина) может быть токсичным для субъекта. Таким образом, в некоторых контекстах, генно-инженерные клетки содержат сегменты генов, которые делают клетки чувствительными к отрицательной селекции in vivo, например, при введении адоптивной иммунотерапии. Например, в некоторых аспектах, клетки получают с помощью генной инженерии так, что их можно устранить в результате изменения состояния пациента, которому их вводят in vivo. Отрицательно селектируемый фенотип может получаться в результате инсерции гена, который придает чувствительность к вводимому агенту, например, соединению. Отрицательно селектируемые гены включают ген тимидинкиназы вируса герпеса обыкновенного типа I (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2:223, 1977), который придает чувствительность к ганцикловиру; ген клеточной гипоксантинфосфрибозилтрансферазы (HPRT), ген клеточной аденинфосфорибозилтрансферазы (APRT), ген бактериальной цитозиндезаминазы, (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).

[0541] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в клетки с использованием частиц рекомбинантных инфекционных вирусов, таких, например, как векторы, полученные из вируса обезьян 40 (SV40), аденовирусов, адено-ассоциированного вируса (AAV). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты с использованием рекомбинантных лентивирусных векторов или ретровирусных векторов, таких как гамма-ретровирусные векторы (смотри, например, Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camibo et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557.

[0542] В некоторых вариантах осуществления, ретровирусный вектор имеет последовательность длинного концевого повтора (LTR), например, ретровирусный вектор, полученный из вируса лейкоза мышей Молони (MoMLV), вируса миелопролиферативной саркомы (MPSV), вируса эмбриональных стволовых клеток мышей (MESV), вируса стволовых клеток мышей (MSCV), вируса некроза селезенки (SFFV), или адено-ассоциированного вируса (AAV). Большинство ретровирусных векторов получают из ретровирусов мышей. В некоторых вариантах осуществления, ретровирусы включают вирусы, полученные из любого источника клеток птиц или млекопитающих. Ретровирусы, как правило, являются амфотропными, это означает, что они могут инфицировать клетки-хозяева нескольких видов, включая людей. В одном из вариантов осуществления, ген, который должен экспрессироваться, заменяет ретровирусные последовательности gag, pol и/или env. Описан ряд иллюстративных ретровирусных систем (например, патенты США №№ 5219740; 6207453; 5219740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; и Boris-Lawrie и Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109.

[0543] Способы лентивирусной трансдукции известны. Иллюстративные способы описаны, например, в Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; и Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505.

[0544] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты посредством электропорообразования (смотри, например, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 and Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты посредством транспозиции (смотри, например, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; и Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Другие способы введения и экспрессирования генетического материала в иммунных клетках включают кальций-фосфатное трансфицирование (например, как описано в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), слияние протопластов, катионное липосомно-медиируемое трансфицирование; бомбардировку микрочастицами с частицами вольфрама (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); и сопреципитацию стронция фосфата и ДНК (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).

[0545] Другие подходы и векторы для переноса нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантные продукты, описаны, например, в опубликованной заявке на Международный патент №: WO2014055668 и в патенте США № 7446190.

[0546] В некоторых вариантах осуществления, клетки, например, Т-лимфоциты могут трансфицироваться либо в ходе, либо после размножения, например, с помощью рецептора T-лимфоцита (TCR) или химерного рецептора антигена (CAR). Это трансфицирование для введения гена желаемого рецептора можно осуществлять, например, с помощью любого соответствующего ретровирусного вектора. Затем популяция генетически модифицированных клеток может освобождаться от начального стимула (например, стимула CD3/CD2), а затем стимулироваться вторым типом стимула, например, с помощью вводимого de novo рецептора). Этот второй тип стимула может содержать антигенный стимул в форме молекулы пептид/MHC, распознанного (поперечно-сшивающего) лиганда генетически вводимого рецептора (например, природного лиганда CAR) или любого лиганда (такого как антитело), который непосредственно связывается в рамке нового рецептора (например, распознавая константные области в рецепторе). Смотри, например, Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66, или Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).

[0547] В некоторых случаях, можно использовать вектор, который не требует, чтобы клетки, например, Т-лимфоциты, активировались. В некоторых таких случаях, клетки могут селектироваться и/или трансдуцироваться перед активированием. Таким образом, клетки могут быть получены с помощью генной инженерии до, или после культивирования клеток, а в некоторых случаях, в то же время, что и культивирование, или в ходе, по меньшей мере, его части.

[0548] В некоторых аспектах, клетки подвергаются дополнительному воздействию генной инженерии для облегчения экспрессирования цитокинов или других факторов. Среди дополнительных нуклеиновых кислот имеются, например, гены для введения, которые представляют собой такие гены, которые улучшают эффективность терапии, например, способствуя жизнеспособности и/или функционированию переносимых клеток; гены для получения генетического маркера для селекции и/или оценки клеток, например, для оценки выживаемости in vivo или локализации; гены для улучшения безопасности, например, делающие клетки чувствительными к отрицательной селекции in vivo, как описано Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); и Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); смотри также публикации PCT/US91/08442 и PCT/US94/05601, Lupton et al., описывающие использование бифункциональных селектируемых слитых генов, полученных от слияния доминантного положительного селектируемого маркера с отрицательным селектируемым маркером. Смотри, например, Riddell et al., патент США № 6040177, в колонке 14-17.

III. Иллюстративные результаты лечения и способы их оценки

[0549] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений, предложенных в настоящем документе, предлагаемая сочетанная терапия дает в результате один или несколько результатов лечения, таких как особенность, связанная с любыми одним или несколькими параметрами, связанными с терапией или лечением, как описано ниже. В некоторых вариантах осуществления, способ включает оценку экспонирования, персистентности и пролиферации Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, экспонирование или пролонгированное размножение и/или персистентность клеток, и/или изменения фенотипов клеток или функциональной активности клеток, например, клеток, вводимых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, в способах, предложенных в настоящем документе, можно измерить посредством оценки характеристик Т-лимфоцитов in vitro или ex vivo. В некоторых вариантах осуществления, такие анализы можно использовать для определения или подтверждения функции Т-лимфоцитов, например, Т-клеточной терапии, до или после введения сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе.

[0550] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия может дополнительно включать одну или несколько стадий скрининга для идентификации субъектов для лечения с помощью сочетанной терапии и/или продолжения сочетанной терапии, и/или стадию оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения. В некоторых вариантах осуществления, стадия оценки результатов лечения может включать стадии оценки и/или мониторинга лечения и/или идентификации субъектов для введения дополнительных или оставшихся стадий терапии и/или для повторной терапии. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения может использоваться для определения дозы, частоты, продолжительности, распределения по времени и/или порядка осуществления сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе.

[0551] В некоторых вариантах осуществления, любая из стадий скрининга и/или оценки результатов лечения, описанных в настоящем документе, может использоваться до, в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, введения Т-клеточной терапии (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов), и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают до, в ходе, в течение курса или после осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают до осуществления способов, предложенных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают после осуществления одной или нескольких стадий способов, предлагаемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку осуществляют до введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, для скрининга и идентификации пациентов склонных и/или чувствительных к получению сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, оценку осуществляют в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, для оценки промежуточных или конечных результатов лечения, например, для определения эффективности лечения и/или чтобы определить продолжать ли или повторять ли лечение и/или чтобы определить вводить ли оставшиеся стадии сочетанной терапии.

[0552] В некоторых вариантах осуществления, результаты лечения включают улучшение иммунной функции, например, иммунной функции Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе клеток, и/или эндогенных Т-лимфоцитов в организме. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные результаты лечения включают, но, не ограничиваясь этим, усиленную пролиферацию T-лимфоцитов, усиленную функциональную активность T-лимфоцитов, изменения в экспрессировании фенотипического маркера иммунных клеток, например, такие особенности связаны с генно-инженерными Т-лимфоцитами, например, Т-лимфоцитами CAR, вводимыми субъекту. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные результаты лечения включают уменьшение тяжести заболевания, например, массы опухоли, улучшение клинических результатов лечения и/или повышенную эффективность терапии.

[0553] В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку выживаемости и/или функционирования Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе клеток. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку уровней цитокинов или факторов роста. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку тяжести заболевания и/или улучшения, например, оценку массы опухоли и/или клинических результатов. В некоторых вариантах осуществления, стадия либо скрининга и/либо оценки результатов лечения может включать любой из способов оценки и/или анализов, описанных в настоящем документе и/или известных в данной области, и может осуществляться один или несколько раз, например, до, в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии. Иллюстративные наборы параметров, связанные с результатами лечения, которые могут оцениваться в некоторых вариантах осуществления способов, предлагаемых в настоящем документе, включают профиль популяции иммунных клеток периферической крови и/или массу опухоли.

[0554] В некоторых вариантах осуществления, способы влияют на эффективность клеточной терапии для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, персистентность, размножение и/или присутствие клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток, у субъекта после введения дозы клеток в способе с иммуномодуляторным соединением, больше по сравнению с тем, что достигается с помощью способа без введения иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления способов иммунотерапии, предлагаемых в настоящем документе, таких как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), оценка параметров включает оценку размножения и/или персистентности у субъекта, которому вводят Т-лимфоциты для иммунотерапии, например, Т-клеточную терапию, по сравнению со способом, при котором иммунотерапию вводят субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, способы дают в результате вводимые Т-лимфоциты, демонстрирующие повышенное или пролонгированное размножение и/или персистентность у субъекта по сравнению со способом, при котором Т-клеточную терапию вводят субъекту без иммуномодуляторного соединения.

[0555] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, уменьшает тяжесть заболевания, например, массу опухоли, у субъекта по сравнению со способом, в котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, уменьшает количество бластных клеток костного мозга у субъекта по сравнению со способом, при котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, дает в результате улучшенные клинические результаты, например, частоту объективного ответа (ORR), выживаемость без признаков прогрессирования заболевания (PFS) и общую выживаемость (OS), по сравнению со способом, при котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения.

[0556] В некоторых вариантах осуществления, субъект может подвергаться скринингу до введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии. Например, субъект может подвергаться скринингу относительно характеристик заболевания и/или тяжести заболевания, например, массы опухоли, до введения сочетанной терапии, для определения соответствия, отвечаемости и/или восприимчивости к введению сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения может использоваться для определения дозы, частоты, продолжительности, распределения по времени и/или порядка осуществления сочетанной терапии, предлагаемой в настоящем документе.

[0557] В некоторых вариантах осуществления, субъект может подвергаться скринингу после введения одной из стадий сочетанной терапии, для определения и идентификации субъектов относительно получения оставшихся стадий сочетанной терапии и/или для мониторинга эффективности терапии. В некоторых вариантах осуществления, число, уровень или количество вводимых Т-лимфоцитов и/или пролиферация и/или активность вводимых Т-лимфоцитов оценивается до введения и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0558] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до тех пор, пока концентрация или количество генно-инженерных клеток в крови субъекта не составит (i) по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 10 генно-инженерных клеток на микролитр, (ii) по меньшей мере, 20%, 30%, 40% или 50% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC), (iii) по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 10⁵ генно-инженерных клеток или (iv) по меньшей мере, 5000 копий ДНК, кодирующей рекомбинантный рецептор, на микрограмм ДНК; и/или в день 90 после начала введения (a) CAR-экспрессирующие клетки детектируются в крови или сыворотке субъекта; и/или в день 90 после начала введения (a) кровь субъекта содержит, по меньшей мере, 20% CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, 10 CAR-экспрессирующих клеток на микролитр или, по меньшей мере, 1 × 10⁴ CAR-экспрессирующих клеток.

[0559] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до тех пор, пока не появится клиническая выгода от лечения, такая как, по меньшей мере, 50% или большее уменьшение общего объема опухоли или полная реакция (CR), при которой детектируемая опухоль исчезает, выживаемость без признаков прогрессирования заболевания или выживаемость без признаков заболевания в течение более 6 месяцев или более 1 года или больше.

[0560] В некоторых вариантах осуществления, определяется или оценивается изменение и/или альтернация, например, увеличение, повышение, понижение или уменьшение уровней, значений или измерений параметра или результата по сравнению с уровнями, значениями или измерениями этого же параметра или результата в другой момент времени оценки, в другом состоянии, в опорной точке и/или у другого субъекта. Например, в некоторых вариантах осуществления, может определяться кратное изменение, например, увеличение или уменьшение конкретных параметров, например, количество генно-инженерных Т-лимфоцитов в образце, по сравнению с тем же параметром в другом состоянии, например, до или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления определяются уровни, значения или измерения двух или более параметров, и сравниваются относительные уровни. В некоторых вариантах осуществления, определенные уровни, значения или измерения параметров сравниваются с уровнями, значениями или измерениями от контрольного образца или необработанного образца. В некоторых вариантах осуществления, определенные уровни, значения или измерения параметров сравнивают с уровнями из образца от того же субъекта, но в другой момент времени. Значения, полученные при количественном определении индивидуального параметра, могут объединяться для целей оценки заболевания, например, посредством формирования арифметической или логической операции на уровнях, значениях или измерениях параметров с использованием мультипараметрического анализа. В некоторых вариантах осуществления, можно вычислять отношение двух или более конкретных параметров.

A. Экспонирование, персистентность и пролиферация Т-лимфоцитов

[0561] В некоторых вариантах осуществления, параметр, связанный с терапией или результатом лечения, который включает параметры, которые могут оцениваться для стадий скрининга и/или для оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, представляет собой или включает оценку экспонирования, персистентности и пролиферации Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, увеличение экспонирования или пролонгированное размножение и/или персистентность клеток, и/или изменения в фенотипах клеток или функциональной активности клеток, например, клеток, вводимых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, в способах, предлагаемых в настоящем документе, можно измерить посредством оценки характеристик Т-лимфоцитов in vitro или ex vivo. В некоторых вариантах осуществления, такие анализы можно использоваться для определения или подтверждения функции Т-лимфоцитов, используемых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, до или после введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе.

[0562] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, разрабатывается для облегчения экспонирования субъекта для клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов, например, посредством облегчения их размножения и/или персистентности со временем. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, при котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0563] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы повышают экспонирование субъекта для вводимых клеток (например, повышается количество клеток или продолжительность во времени) и/или улучшают эффективность и терапевтические результаты иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, способы являются преимущественными в том, что более высокая и/или более продолжительная степень экспонирования для клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, например, для CAR-экспрессирующих клеток, улучшает результаты лечения по сравнению с другими способами. Такие результаты могут включать выживаемость и ремиссию у пациента, даже у индивидуумов с большой массой опухоли.

[0564] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может увеличить максимальное экспонирование, общее экспонирование и/или продолжительность экспонирования для клеток, например, для Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов, у субъекта по сравнению с введением только Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения. В некоторых аспектах, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в контексте большой тяжести заболевания (и таким образом, больших количеств антигена) и/или более агрессивного или резистентного ракового заболевания усиливает эффективность по сравнению с введением только Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения в том же контексте, что может давать в результате иммуносупрессию, слабость и/или истощение, что может предотвратить размножение и/или персистентность клеток.

[0565] В некоторых вариантах осуществления, детектируется присутствие и/или количество клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов), у субъекта после введения Т-лимфоцитов и до, в ходе и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых аспектах, используют количественную PCR (qPCR) для оценки количества клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов), в образце крови или сыворотке или в образце органа или ткани (например, в месте заболевания, например, в образце опухоли) субъекта. В некоторых аспектах, персистентность количественно определяется как копии ДНК или плазмиды, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, или как количество рецептор-экспрессирующих, например, CAR-экспрессирующих клеток на микролитр образца, например, крови или сыворотки, или на общее количество мононуклеаров периферической крови (PBMC) или лейкоцитов или T-лимфоцитов на микролитр образца.

[0566] В некоторых вариантах осуществления, клетки детектируются у субъекта на или, по меньшей мере, на 4, 14, 15, 27 или 28 день после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов. В некоторых аспектах, клетки детектируются на или, по меньшей мере, на 2, 4 или 6 неделе или на 3, 6 или 12, 18 или 24, или 30 или 36 месяце, или на 1, 2, 3, на 4, 5 или более поздний год после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0567] В некоторых вариантах осуществления, персистентность рецептор-экспрессирующих клеток (например, CAR-экспрессирующих клеток) у субъекта согласно способам, после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, больше по сравнению с тем, что достигалось бы с помощью альтернативных способов, таких как способы, включающие введение только иммунотерапии, например, введение Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, без иммуномодуляторного соединения.

[0568] Экспонирование, например, количество клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, как показатель размножения и/или персистентности может формулироваться в терминах максимальных количества клеток, для которых экспонируется субъект, продолжительности присутствия детектируемых клеток или клеток выше определенного количества или процента, площади под кривой количества клеток в зависимости от времени и/или их сочетаний и их показателей. Такие результаты можно оценивать с использованием известных способов, таких как qPCR, для детектирования количества копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, по сравнению с общим количеством нуклеиновой кислоты или ДНК в конкретном образце, например, крови, сыворотки, плазмы или ткани, например, в образце опухоли, и/или с помощью проточных цитометрических анализов, детектирующих клетки, экспрессирующие рецептор, как правило, с использованием антител специфичных к этим рецепторам. Анализы на основе клеток также можно использовать для детектирования количества или процента функциональных клеток, таких как клетки способные связываться и/или нейтрализовать и/или вызывать реакции, например, цитотоксические реакции, против клеток заболевания или состояния, или экспрессирующих антиген, распознаваемый рецептором.

[0569] В некоторых аспектах, увеличение экспонирования субъекта для клеток включает увеличение размножения клеток. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, например, CAR-экспрессирующие клетки, размножаются в субъекте после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых аспектах, способ дает результате увеличение размножения клеток по сравнению с другими способами, например, включающими введение Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0570] В некоторых аспектах, способ дает в результате высокую пролиферацию in vivo вводимых клеток, например, как измерено с помощью проточной цитометрии. В некоторых аспектах, детектируются высокие пиковые пропорции клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления, на пиковом максимальном уровне после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в крови или в месте заболевания субъекта или во фракции его лейкоцитов, например, во фракции PBMC или во фракции T-лимфоцитов, по меньшей мере, примерно 10%, по меньшей мере, примерно 20%, по меньшей мере, примерно 30%, по меньшей мере, примерно 40%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80% или, по меньшей мере, примерно 90% клеток экспрессируют рекомбинантный рецептор, например, CAR.

[0571] В некоторых вариантах осуществления, способ дает в результате максимальную концентрацию, в крови или сыворотке или другой телесной жидкости или органе или ткани субъекта, по меньшей мере, 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10000 или 15000 копий и самой нуклеиновой кислоты, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК или, по меньшей мере, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 экспрессирующих рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток на общее количество мононуклеаров периферической крови (PBMC), на общее количество мононуклеаров, на общее количество Т-лимфоцитов или на общее количество микролитров. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, детектируются, по меньшей мере, как 10, 20, 30, 40, 50 или 60% от общего количества PBMC в крови субъекта, и/или на таком же уровне в течение, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48 или 52 недель после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, или в течение 1, 2, 3, 4 или 5, или более лет после такого введения.

[0572] В некоторых аспектах, способ дает в результате, по меньшей мере, 2-кратное, по меньшей мере, 4-кратное, по меньшей мере, 10-кратное или, по меньшей мере, 20-кратное увеличение копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, например, в сыворотке, плазме, крови или ткани, например, в образце опухоли у субъекта.

[0573] В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, детектируются в сыворотке, плазме, крови или ткани, например, в образце опухоли у субъекта, например, с помощью указанного способа, такого как qPCR или способ детектирования на основе проточной цитометрии, по меньшей мере, через 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 или 60 или более дней после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, или после введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в течение, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, или 24 или более недель после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0574] В некоторых аспектах, по меньшей мере, примерно 1 × 10², по меньшей мере, примерно 1 × 10³, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁴, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁵, или, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁶ или, по меньшей мере, примерно 5 × 10⁶ или, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁷ или, по меньшей мере, примерно 5 × 10⁷ или, по меньшей мере, примерно 1 × 10⁸ клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток, и/или, по меньшей мере, 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, или 500, или 1000 клеток, экспрессирующих рецептор, на микролитр, например, по меньшей мере, 10 на микролитр, детектируются или присутствуют в субъекте или в его текучей среде, плазме, сыворотке, ткани или компартменте, например, в крови, например, периферической крови, или на месте заболевания, например, в его опухоли. В некоторых вариантах осуществления, такое количество или концентрация клеток детектируется у субъекта, по меньшей мере, в течение примерно 20 дней, по меньшей мере, примерно 40 дней, или, по меньшей мере, примерно 60 дней, или, по меньшей мере, примерно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, или 12 месяцев или, по меньшей мере, в течение 2 или 3 лет после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. Такие количества клеток могут детектироваться с помощью способов на основе проточной цитометрии или способов на основе количественной PCR и экстраполяции на общие количества клеток с использованием известных способов Смотри, например, Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828.

[0575] В некоторых аспектах, количество копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, например, количество копий вектора на 100 клеток, например, в периферической крови или костном мозге или в другом компартменте, измеренное с помощью иммуногистохимии, PCR и/или проточной цитометрии, составляет, по меньшей мере, 0,01, по меньшей мере, 0,1, по меньшей мере, 1 или, по меньшей мере, 10, примерно через 1 неделю, примерно через 2 недели, примерно через 3 недели, примерно через 4 недели, примерно через 5 недель или, по меньшей мере, примерно через 6 недели или, по меньшей мере, примерно через 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяц или, по меньшей мере, через 2 или 3 года после введения клеток, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, количество копий вектора, экспрессирующего рецептор, например, CAR, на микрограмм геномной ДНК, составляет, по меньшей мере, 100, по меньшей мере, 1000, по меньшей мере, 5000 или, по меньшей мере, 10000 или, по меньшей мере, 15000 или, по меньшей мере, 20000, в момент времени примерно 1 неделя, примерно 2 недели, примерно 3 недели или, по меньшей мере, примерно 4 недели после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, или, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев, или, по меньшей мере, 2 или 3 года после такого введения.

[0576] В некоторых аспектах, рецептор, например, CAR, экспрессируемый клетками, детектируется с помощью количественной PCR (qPCR) или с помощью проточной цитометрии у субъекта, в его плазме, сыворотке, крови, ткани и/или в месте заболевания, например, в месте опухоли, в момент времени, который составляет, по меньшей мере, примерно 3 месяца, по меньшей мере, примерно 6 месяцев, по меньшей мере, примерно 12 месяцев, по меньшей мере, примерно 1 год, по меньшей мере, примерно 2 года, по меньшей мере, примерно 3 года или более чем 3 года, после введения клеток, например, после начала введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

[0577] В некоторых вариантах осуществления, площадь под кривой (AUC) для концентрации клеток, экспрессирующих рецептор (например, CAR-), в текучей среде, плазме, сыворотке, крови, ткани, органе и/или месте заболевания, например, на месте опухоли у субъекта, со временем после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, больше по сравнению с тем, что достигается с помощью альтернативного режима дозирования, где субъекту вводят Т-лимфоциты, например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, без введения иммуномодуляторного соединения.

[0578] В некоторых аспектах, способ дает в результате высокую пролиферацию in vivo вводимых клеток, например, измеренную с помощью проточной цитометрии. В некоторых аспектах, детектируются высокие пиковые пропорции клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления, на пиковом или максимальном уровне после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в крови, плазме, сыворотке, ткани или в месте заболевания субъекта, или в его фракции лейкоцитов, например, во фракции PBMC или во фракции T-лимфоцитов, по меньшей мере, примерно 10%, по меньшей мере, примерно 20%, по меньшей мере, примерно 30%, по меньшей мере, примерно 40%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80% или, по меньшей мере, примерно 90% клеток экспрессируют рекомбинантный рецептор, например, CAR.

[0579] В некоторых аспектах, повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности дозы клеток в субъекте, вводимой вместе с иммуномодуляторным соединением, например, леналидомидом, связывается с улучшением результатов лечения, связанных с опухолью у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, результат лечения, связанный с опухолью, включает уменьшение массы опухоли или уменьшение количества бластных клеток костного мозга у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, масса опухоли понижается на или, по меньшей мере, на, или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 процентов после введения согласно этому способу. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, размер опухоли, объем опухоли, массы опухоли и/или нагрузка опухоли, или ее основная масса уменьшается после дозирования клеток, по меньшей мере, на или примерно на 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с субъектом, которого лечат с помощью способа, который не включает введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.

B. Функциональная активность T-лимфоцитов

[0580] В некоторых вариантах осуществления, параметры, связанные с результатами терапии или лечения, которые включают параметры, которые можно оценивать в течение стадии скрининга и/или оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, включают один или несколько параметров из активности, фенотипа, пролиферации или функции Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать любой известный в данной области анализ для оценки активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии. До и/или после введения клеток и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, биологическая активность популяций генно-инженерных клеток, в некоторых вариантах осуществления измеряется, например, с помощью ряда известных способов. Параметры для оценки включают специфичное связывание генно-инженерных или природных T-лимфоцитов или других иммунных клеток с антигеном, in vivo, например, с помощью обработки изображений, или ex vivo, например, с помощью ELISA или проточной цитометрии. В определенных вариантах осуществления, способность генно-инженерных клеток разрушать целевые клетки можно измерить с использованием любого соответствующего способа известного в данной области, такого как анализы цитотоксичности, описанные, например, Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), и Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). В определенных вариантах осуществления, биологическая активность клеток измеряется посредством анализа экспрессирования и/или секретирования одного или нескольких цитокинов, таких как CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF и TNFα, и/или посредством оценки цитолитической активности.

[0581] В некоторых вариантах осуществления, анализы на активность, фенотипы, пролиферацию и/или функцию Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включают, но, не ограничиваясь этим, ELISPOT, ELISA, клеточную пролиферацию, цитотоксичный анализ лимфоцитов (CTL), связывание с эпитопом, антигеном или лигандом T-лимфоцита или внутриклеточное окрашивание цитокинов, анализы пролиферации, анализы секреции лимфокинов, прямые анализы цитотоксичности, и анализ серийных разведений. В некоторых вариантах осуществления, пролиферативные реакции Т-лимфоцитов можно измерить, например, посредством введения ³H-тимидина, BrdU (5-бром-2’-деоксиуридина) или 2’-деокси-5-этинилуридина (EdU) в их ДНК или посредством анализа разведения красителя, используя такие красители, как карбоксифлуоресцеин диацетат, сложный сукциниммуномодуляторный компаундиловый эфир (CFSE), CellTrace Violet или мембранный краситель PKH26.

[0582] В некоторых вариантах осуществления, оценка активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включает измерение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами и/или измерение продуцирования цитокинов в биологическом образце от субъекта, например, в образцах плазмы, сыворотки, крови и/или ткани, например, в образцах опухоли. В некоторых случаях, такие измеряемые цитокины могут включать, без ограничения, интерлейкин-2 (IL-2), интерферон-гамма (IFNγ), интерлейкин-4 (IL-4), TNF-альфа (TNFα), интерлейкин-6 (IL-6), интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-12 (IL-12), колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов (GM-CSF), CD107a и/или TGF-бета (TGFβ). Анализы измерения цитокинов хорошо известны в данной области, и они включают, но, не ограничиваясь этим, ELISA, внутриклеточное окрашивание цитокинов, цитометрический анализ с использованием шариков, RT-PCR, ELISPOT, проточную цитометрию и биоанализы, при которых клетки чувствительные к релевантному цитокину исследуют на восприимчивость (например, на пролиферацию) в присутствии исследуемого образца.

[0583] В некоторых вариантах осуществления, оценка активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включают оценку фенотипов клеток, например, экспрессирования конкретных поверхностных маркеров клеток. В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты, например, Т-лимфоциты, вводимые для Т-клеточной терапии, оцениваются на экспрессирование маркеров активирования Т-лимфоцитов, маркеров истощения Т-лимфоцитов и/или маркеров дифференциации Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, фенотип клеток оценивают до введения. В некоторых вариантах осуществления, фенотип клеток оценивают после введения. Маркеры активирования Т-лимфоцитов, маркеры истощения Т-лимфоцитов и/или маркеры дифференциации Т-лимфоцитов для оценки включают любые маркеры известные в данной области для конкретных подмножеств Т-лимфоцитов, например, CD25, CD38, антигена лейкоцита человека DR (HLA-DR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62L^low, CCR7^low, CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, белка 1 программируемой гибели клеток (PD-1), белка гена 3 активирования лимфоцитов (LAG-3), домена иммуноглобулина T-лимфоциттов и муцинового домена белка 3 (TIM-3), цитотоксического антигена T-лимфоцитов - белка 4 (CTLA-4), B-лимфоцитарного и T-лимфоцитарного аттенюатора (BTLA) и/или иммуноглобулина T-лимфоцита и ингибиторного домена мотива на основе иммунорецепторного тирозина (TIGIT) (смотри, например, Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792). В некоторых вариантах осуществления, оцениваемый поверхностный маркер клетки представляет собой CD25, PD-1 и/или TIM-3. В некоторых вариантах осуществления, оцениваемый поверхностный маркер клетки представляет собой CD25.

[0584] В некоторых аспектах, детектирование уровней экспрессии включает осуществление анализа in vitro. В некоторых вариантах осуществления, анализ in vitro представляет собой иммунный анализ, анализ на основе аптамеров, гистологический или цитологический анализ или анализ уровня экспрессирования mRNA. В некоторых вариантах осуществления, параметр или параметры для одного или нескольких из каждого одного или нескольких факторов, эффекторов, ферментов и/или поверхностных маркеров детектируют с помощью иммуносорбентного анализа на связанных ферментах (ELISA), иммуноблоттинга, иммунопреципитации, радиоиммунного анализа (RIA), иммунного окрашивания, анализа проточной цитометрии, поверхностного плазмонного резонанса (SPR), анализа хемилюминесценции, горизонтального проточного иммунноанализа, анализа ингибирования или анализа авидности. В некоторых вариантах осуществления, детектирование цитокинов и/или поверхностных маркеров определяют с использованием связывающего реагента, который специфично связывается, по меньшей мере, с одним биомаркером. В некоторых случаях, связывающий реагент представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент, аптамер или зонд на основе нуклеиновой кислоты.

[0585] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, увеличивает уровень циркуляции Т-лимфоцитов CAR.

C. Тяжесть заболевания

[0586] В некоторых вариантах осуществления, параметры, связанные с терапией или результатами лечения, которые включают параметры, которые можно оценить в течение стадий скрининга и/или оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, включают массу опухоли или тяжесть заболевания. Введение иммунотерапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов) и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может уменьшить или предотвратить распространение, или тяжесть заболевания или состояния у субъекта. Например, когда заболевание или состояние представляет собой опухоли, способы, как правило, уменьшают размер опухоли, ее основную массу, метастазы, процент бластных клеток в костном мозге или молекулярно детектируемое раковое заболевание, и/или улучшают прогноз или выживаемость, или другой симптом, связанный с массой опухоли.

[0587] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы дают результате уменьшение массы опухоли в леченых субъектов по сравнению с альтернативными способами, при которых иммунотерапия, такая как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) получается без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. Нет необходимости в том, чтобы масса опухоли реально уменьшалась бы у всех субъектов, принимающих сочетанную терапию, но чтобы масса опухоли уменьшалась в среднем у леченых субъектов, например на основе клинических данных, в которых большинство субъектов, леченых с помощью такой сочетанной терапии, демонстрировало бы уменьшение массы опухоли, например, по меньшей мере, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или больше субъектов, леченых с помощью сочетанной терапии, демонстрировало уменьшение массы опухоли.

[0588] Тяжесть заболевания может охватывать общее количество клеток заболевания в субъекте или в органе, ткани или телесной жидкости субъекта, например, в органе или ткани опухоли, или в другом месте, например, которое указывало бы на метастазы. Например, клетки опухоли могут детектироваться и/или количественно определяться в крови, лимфе или костном мозге в контексте определенных гематологических злокачественных новообразований. Тяжесть заболевания может включать, в некоторых вариантах осуществления, массу опухоли, количество или распространенность метастаз и/или процент бластных клеток, присутствующих в костном мозге.

[0589] В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфолейкоз (CLL), диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL) или миелому, например, множественную миелому (MM). В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет MM или DBCBL. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет фолликулярную лимфому (FL).

[0590] В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет плотную опухоль.

[0591] В случае MM, иллюстративные параметры для оценки степени тяжести заболевания включают такие параметры как количество клональных плазматических клеток (например, >10% при биопсии костного мозга, или любое количество при биопсии других тканей; плазмоцитома), присутствие моноклонального белка (парапротеина) либо в сыворотке либо в моче, доказательства ощущения повреждения конечного органа, связанного с расстройством клеток плазмы (например, гиперкальцемии (скорректированный кальций >2,75 ммоль/л); почечную недостаточность, приписываемую миеломе; анемию (гемоглобин <10 г/дл) и/или повреждение костей (литические повреждения или остеопороз с компрессионными переломами)).

[0592] В случае DLBCL, иллюстративные параметры для оценки степени тяжести заболевания включают такие параметры как клеточная морфология (например, центробластные, иммунобластные и анапластические клетки), экспрессирование генов, экспрессирование miRNA и экспрессирование белков (например, экспрессирование BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC и p21).

[0593] В случае лейкоза, степень тяжести заболевания можно определить по оценке остаточного лейкоза в крови или костном мозге. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует морфологическое заболевание, если имеется 5% или больше бластных клеток в костном мозгу, например, как детектируется с помощью световой микроскопии. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует полную или клиническую ремиссию, если имеется меньше 5% бластных клеток в костном мозгу.

[0594] В некоторых вариантах осуществления, для лейкоза, субъект может демонстрировать полную ремиссию, но малая пропорция морфологически недетектируемых (с помощью методики световой микроскопии) остаточных лейкозных клеток присутствует. Субъект как сказано, демонстрирует минимальное остаточное заболевание (MRD), если субъект демонстрирует меньше 5% бластных клеток в костном мозгу и демонстрирует молекулярно детектируемое раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, молекулярно детектируемое раковое заболевание может оцениваться с использованием любой из разнообразных молекулярных методик, которые дают возможность для чувствительного детектирования малого количества клеток. В некоторых аспектах, такие методики включают анализы PCR, которые могут определить уникальные перегруппировки Ig/гена рецептора T-лимфоцита или транскрипций слияния, продуцируемые при хромосомных транслокациях. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать проточную цитометрию для идентификации раковых клеток на основе лейкоз-специфичных иммунофенотипов. В некоторых вариантах осуществления, молекулярное детектирование ракового заболевания может детектировать всего лишь 1 клетку лейкоза среди 100000 нормальных клеток. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует MRD, которая молекулярно детектируется, если детектируется, по меньшей мере, 1 или больше клеток лейкоза среди 100000 клеток, например, с помощью PCR или проточной цитометрии. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания у субъекта представляет собой MRD^-, или оно является молекулярно недетектируемым, так что, в некоторых случаях, клетки лейкоза не могут детектироваться у субъекта с использованием методик PCR или проточной цитометрии.

[0595] В некоторых вариантах осуществления, способы и/или введение иммунотерапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, понижает тяжесть заболевания по сравнению с тяжестью заболевания в момент времени непосредственно перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения.

[0596] В некоторых аспектах, введение иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может предотвратить увеличение тяжести заболевания, и это может быть показано по отсутствию изменений тяжести заболевания.

[0597] В некоторых вариантах осуществления, способ понижает тяжесть заболевания или состояния, например, количество клеток опухоли, размер опухоли, продолжительность выживаемости пациента или бессобытийной выживаемости, до большей степени и/или в течение большего периода времени, по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа с использованием альтернативной терапии, например, такой при которой субъект получает иммунотерапию, например, Т-клеточную терапию саму по себе, без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания уменьшается до большей степени или в течение более длительного времени после сочетанной терапии, с введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по сравнению с уменьшением, которое осуществлялось бы при введении каждого агента самого по себе, например, при введении иммуномодуляторного соединения субъекту, не получающему иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии; или при введении иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, субъекту, который не получает иммуномодуляторного соединения.

[0598] В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания или состояния у субъекта детектируется, оценивается или измеряется. Тяжесть заболевания может детектироваться в некоторых аспектах посредством детектирования общего количества болезненных или связанных с заболеванием клеток, например, клеток опухоли, у субъекта, или в органе, ткани или телесной жидкости субъекта, такой как кровь или сыворотка. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, например, массу опухоли, оценивают посредством измерения массы твердой опухоли и/или количества или распространения метастаз. В некоторых аспектах, оценивают выживаемость субъекта, выживаемость за определенный период времени, степень выживаемости, присутствие или продолжительность бессобытийной или бессимптомной выживаемости или выживаемости без возобновления. В некоторых вариантах осуществления, оценивают любой симптом заболевания или состояния. В некоторых вариантах осуществления, конкретизируется мера тяжести заболевания или состояния. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные параметры для определения включают конкретные клинические результаты, показывающие облегчение или улучшение при заболевании или состоянии, например, при опухоли. Такие параметры включают: продолжительность контроля заболевания, включая полную реакцию (CR), частичную реакцию (PR) или стабильное заболевание (SD) (смотри, например, Response Evaluation Criteria In Solid Tumors (RECIST) guidelines), реакцию опухоли по результатам объективной оценки (ORR), выживаемость без признаков прогрессирования заболевания (PFS) и общую выживаемость (OS). Конкретные пороги параметров могут подбираться для определения эффективности способа сочетанной терапии, предлагаемого в настоящем документе.

[0599] В некоторых вариантах осуществления, субъекты, леченые с помощью этого способа, достигают более стойкой реакции. В некоторых случаях, мера продолжительности реакции (DOR) включает время от документирования реакции опухоли до развития заболевания. В некоторых вариантах осуществления, параметр для оценки реакции может включать стойкую реакцию, например, реакцию, которая поддерживается по прохождении некоторого периода времени от начала терапии. В некоторых вариантах осуществления, стойкая реакция показывается по доле реакции приблизительно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 или 24 месяца после начала терапии. В некоторых вариантах осуществления, реакция является поддерживается в течение больше 3 месяцев, больше 6 месяцев или больше 12 месяцев. В некоторых конкретных вариантах осуществления, субъекты, леченые согласно этому способу, достигают более стойкой реакции после предыдущего возобновления заболевания у субъекта после ремиссии в ответ на введение генно-инженерных клеток.

[0600] В некоторых аспектах, тяжесть заболевания измеряется или детектируется перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, после введения иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, но перед введением иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, после введения иммуномодуляторного соединения, но перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или после введения как иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, так и иммуномодуляторного соединения. В контексте множественного введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии, тяжесть заболевания в некоторых вариантах осуществления может измеряться до или после введения любой из стадий, доз и/или циклов введения, или в момент времени между введением любой из стадий, доз и/или циклов введения.

[0601] В некоторых вариантах осуществления, тяжесть уменьшается на или, по меньшей мере, на, или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 процентов с помощью предлагаемых способов по сравнению с тяжестью непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, и иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, размер опухоли, объем опухоли, масса опухоли и/или нагрузка или основная масса опухоли уменьшается после введения иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и иммуномодуляторного соединения на, по меньшей мере, на или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или более по сравнению с параметрами непосредственно перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения.

[0602] В некоторых вариантах осуществления, уменьшение тяжести заболевания с помощью способа включает индуцирование морфологически полной ремиссии, например, как оценивается через 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца или более 3 месяцев после введения, например, после начала сочетанной терапии.

[0603] В некоторых аспектах, анализ минимального остаточного заболевания, например, как измерено с помощью мультипараметрической проточной цитометрии, является отрицательным, или уровень минимального остаточного заболевания меньше примерно 0,3%, меньше примерно 0,2%, меньше примерно 0,1% или меньше примерно 0,05%.

[0604] В некоторых вариантах осуществления, доля бессобытийной выживаемости или общая доля выживаемости субъекта улучшается с помощью этих способов по сравнению с другими способами. Например, в некоторых вариантах осуществления, доля бессобытийной выживаемости или вероятность для субъектов, леченых с помощью способов, через 6 месяцев после осуществления способа сочетанной терапии, предлагаемого в настоящем документе, больше примерно, чем 40%, больше примерно, чем 50%, больше примерно, чем 60%, больше примерно, чем 70%, больше примерно, чем 80%, больше примерно, чем 90%, или больше примерно, чем 95%. В некоторых аспектах, общая доля выживаемости больше примерно, чем 40%, больше примерно, чем 50%, больше примерно, чем 60%, больше примерно, чем 70%, больше примерно, чем 80%, больше примерно, чем 90%, или больше примерно, чем 95%. В некоторых вариантах осуществления, субъект, леченый с помощью этих способов, демонстрирует бессобытийную выживаемость, выживаемость без возобновления заболевания или выживаемость в течение, по меньшей мере, 6 месяцев, или, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет. В некоторых вариантах осуществления, время до развития заболевания увеличивается, например, время до развития заболевания больше, чем или примерно больше, чем 6 месяцев или, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет.

[0605] В некоторых вариантах осуществления, после лечения с помощью способа, вероятность возобновления заболевания уменьшается по сравнению с другими способами. Например, в некоторых вариантах осуществления, вероятность возобновления заболевания через 6 месяц после применения способа сочетанной терапии, меньше примерно, чем 80%, меньше примерно, чем 70%, меньше примерно, чем 60%, меньше примерно, чем 50%, меньше примерно, чем 40%, меньше примерно, чем 30%, меньше примерно, чем 20% или меньше примерно, чем 10%.

IV. Промышленные изделия и наборы

[0606] Также предлагаются промышленные изделия, содержащие иммуномодуляторное лекарственное средство (иммуномодуляторное соединение), такое как леналидомид, и компоненты для иммунотерапии, например, антитело или его антиген-связывающий фрагмент, или для Т-клеточную терапию, например, генно-инженерные клетки, и/или их композиции. Промышленные изделия могут включать контейнер и этикетку или вставку в упаковку на контейнере, или связанную с ним. Соответствующие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, мешки с растворами для внутривенных вливаний, и тому подобное. Контейнеры могут формироваться из разнообразных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер в некоторых вариантах осуществления содержит композицию, которая содержится сама по себе или в сочетании с другой композицией эффективной для лечения, предотвращения и/или диагностики состояния. В некоторых вариантах осуществления, контейнер имеет стерильный узел доступа. Иллюстративные контейнеры включают мешки с растворами для внутривенных вливаний, флаконы, включая флаконы с пробками, прокалываемыми иглой для инъекций, или бутылки или флаконы для перорально вводимых агентов. Этикетка или вставка в упаковку могут показывать, что композицию используют для лечения заболевания или состояния.

[0607] Промышленное изделие может содержать (a) первый контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит антитело или генно-инженерные клетки, используемые для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии; и (b) второй контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит второй агент, такой как иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид. Промышленное изделие может дополнительно включать вставку в упаковку, показывающую, что композиции можно использовать для лечения конкретного состояния. Альтернативно или в дополнение к этому, промышленное изделие может дополнительно содержать другой или этот же контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер. Кроме того, он может содержать и другие материалы, такие как другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и/или шприцы.

V. Определения

[0608] Если не определено иного, все термины из данной области, обозначения и другие технические и научные термины или терминология, используемая в настоящем документе, как предполагается, имеют такое же значение как обычно понимается специалистами в области, к которой относится предмет изобретения. В некоторых случаях, термины со всем понятными значениями определяются в настоящем документе для ясности и/или для простоты упоминания, и включение таких определений в настоящий документ не должно обязательно рассматриваться как некоторое существенное отличие от того, что, понимается всеми в данной области.

[0609] Как используется в настоящем документе, “субъект” представляет собой млекопитающее, такое как человек или другое животное, как правило, это человек. В некоторых вариантах осуществления, субъект, например, пациент, которому вводятся иммуномодуляторные полипептиды, генно-инженерные клетки или композиции, представляет собой млекопитающее, как правило, примата, такого как человек. В некоторых вариантах осуществления, примат представляет собой обезьян разных видов. Субъект может быть мужского или женского пола и может находиться в любом соответствующем возрасте, включая субъектов детей, подростков, юношу или девушку, взрослых и субъектов преклонного возраста. В некоторых вариантах осуществления, субъект представляет собой млекопитающее отличное от примата, такого как грызун.

[0610] Как используется в настоящем документе, “лечение” (и его грамматические варианты их такие как “лечить” или “леченый”) относится к полному или частичному облегчению или уменьшению заболевания или состояния или расстройства, или симптома, отрицательного воздействия или результата, или фенотипа, связанного с этим. Желаемые воздействия лечения включают, но, не ограничиваясь этим, предотвращение возникновения или возобновления заболевания, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастаз, уменьшение скорости развития заболевания, ослабления или облегчения болезненного состояния и ремиссию или улучшение прогноза. Термины не предполагают полного излечения заболевания или полного устранения любого симптома или воздействия (воздействий) на все симптомы или результаты.

[0611] Как используется в настоящем документе, “замедление развития заболевания" означает отсрочку, затруднение, замедление, задержку, стабилизацию, подавление и/или прекращение развития заболевания (такого как рак). Эта задержка может иметь разную продолжительность во времени, в зависимости от истории заболевания и/или от болезни, которая лечится. Как очевидно, существенная или значительная задержка может в результате охватывать предотвращение, при котором заболевание у индивидуума не развивается. Например, может замедляться раковое заболевание в последней стадии, такое как развитие метастаз.

[0612] “Предотвращение”, как используется в настоящем документе, включает осуществление профилактики относительно появления или возобновления заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но у которого заболевание еще не диагностируется. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые клетки и композиции используют для задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевания.

[0613] Как используется в настоящем документе, “подавление” функции или активности предназначено для уменьшения функции или активности, по сравнению с такими же условиями, за исключением условия или параметра, представляющего интерес, или, альтернативно, по сравнению с другим состоянием. Например, клетки, которые подавляют рост опухоли, уменьшают скорость роста опухоли по сравнению со скоростью роста опухоли в отсутствие клеток.

[0614] “Эффективное количество” агента, например, фармацевтического препарата, клеток или композиции, в контексте введения, относится к количеству эффективному при дозах/количествах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого результата, такого как терапевтический или профилактический результат.

[0615] “Терапевтически эффективное количество” агента, например, фармацевтического препарата или генно-инженерных клеток, относится к количеству эффективному при дозах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого терапевтического результата, например, для лечения заболевания, состояния или расстройства, и/или для фармакокинетического или фармакодинамического воздействия лечения. Терапевтически эффективное количество может изменяться согласно таким факторам, как болезненное состояние, возраст, пол и масса тела субъекта, и вводимые иммуномодуляторные полипептиды или генно-инженерные клетки. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы включают введение иммуномодуляторных полипептидов, генно-инженерных клеток, или композиций при эффективных количествах, например, при терапевтически эффективных количествах.

[0616] “Профилактически эффективное количество” относится к количеству эффективному при дозах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но, необязательно, поскольку профилактическую дозу используют для субъектов до заболевания или на его ранней стадии, профилактически эффективное количество будет меньше терапевтически эффективного количества.

[0617] Термин “фармацевтический препарат” относится к препарату, который находится в такой форме чтобы сделать возможным эффективную биологическую активность активного ингредиента, содержащегося в нем, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому вводился бы препарат.

[0618] “Фармацевтически приемлемый носитель” относится к ингредиенту в фармацевтическом препарате иному, чем активный ингредиент, который нетоксичен для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает, но, не ограничиваясь этим, буфер, наполнитель, стабилизатор или консервант.

[0619] Как используется в настоящем документе, упоминание того, что положения нуклеотидов или аминокислот "соответствуют" положениям нуклеотидов или аминокислот в описанной последовательности, как приведено в Списке последовательностей, относится к положениям нуклеотидов или аминокислот, идентифицируемым при выравнивании с описанной последовательностью до доведения до максимума идентичности с использованием стандартного алгоритма выравнивания, такого как алгоритм GAP. При выравнивании последовательностей, можно идентифицировать соответствующие остатки, например, используя консервативные и идентичные аминокислотные остатки в качестве критериев. Как правило, для идентификации соответствующих положений, последовательности аминокислот выравниваются таким образом, чтобы получить наивысший порядок соответствия (смотри, например: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073).

[0620] Термин “вектор”, как используется в настоящем документе, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной размножать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Термин включает вектор как самореплицирующуюся структуру нуклеиновых кислот, а также как вектор, введенный в геном клетки-хозяина, в которую его вводят. Определенные векторы способны направлять экспрессирование нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы упоминаются в настоящем документе как “векторы экспрессии”. Среди векторов имеются вирусные векторы, такие как ретровирусные, например, гаммаретровирусные и лентивирусные векторы.

[0621] Термины “клетка-хозяин”, “линия клеток-хозяев” и “культура клеток-хозяев” используются взаимозаменяемо и упоминают клетки, в которые введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают “трансформанты” и “трансформированные клетки”, которые включают первичную трансформированную клетку и потомство, полученное из нее, вне зависимости от количества пассажей. Потомство может не быть полностью идентичным по содержанию нуклеиновых кислот с родительской клеткой, но может содержать мутации. Мутантное потомство, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, как после скрининга или селекции для исходной трансформированной клетки, включается в настоящий документ.

[0622] Как используется в настоящем документе, утверждение, что клетка или популяция клеток является “положительной” относительно конкретного маркера относится к детектируемому присутствию на клетке или в ней конкретного маркера, как правило, поверхностного маркера. При упоминании поверхностного маркера, термин относится к присутствию поверхностного экспрессирования, как детектируется с помощью проточной цитометрии, например, посредством окрашивания антителом, которое специфично связывается с маркером, и детектирования указанного антитела, где окрашивание может детектироваться с помощью проточной цитометрии на уровне существенно выше окрашивания, детектируемого при осуществлении такой же процедуры с изотипически сходным контролем при идентичных в остальном условиях и/или на уровне, по существу, сходном с уровнем для клетки известной как положительная относительно маркера, и/или на уровне существенно выше, чем для клетки известной как отрицательная относительно маркера.

[0623] Как используется в настоящем документе, утверждение, что клетка или популяция клеток является “отрицательной” относительно конкретного маркера, относится к отсутствию существенного детектируемого присутствия на клетке или в ней конкретного маркера, как правило, поверхностного маркера. При упоминании поверхностного маркера, термин относится к отсутствию поверхностного экспрессирования, как детектируется с помощью проточной цитометрии, например, посредством окрашивания антителом, которое специфично связывается с маркером, и детектирования указанного антитела, где окрашивание не детектируется с помощью проточной цитометрии на уроне существенно выше окрашивания, детектируемого при осуществлении такой же процедуры с помощью изотипически сходного контроля при идентичных в остальном условиях, и/или детектируется на уровне существенно ниже, чем для клетки, известной как положительная относительно маркера, и/или на уровне по существу сходном по сравнению с клеткой, известной как отрицательная относительно маркера.

[0624] Замещение аминокислот может включать замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Замещение может представлять собой консервативное замещение аминокислоты или неконсервативное замещение аминокислоты. Замещение аминокислот может вводиться в связывающую молекулу, например, антитело, представляющее интерес, и в продукты, просматриваемые относительно желаемой активности, например, сохраняемого/улучшенного связывания антигена, пониженной иммуногенности или улучшенному ADCC или CDC.

[0625] Аминокислоты, в целом, могут группироваться согласно следующим общим свойствам боковых цепей:

(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) нейтрально гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) кислотные: Asp, Glu;

(4) основные: His, Lys, Arg;

(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;

(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.

[0626] В некоторых вариантах осуществления, консервативные замещения могут включать обмен элемента одного из этих классов на другой элемент этого же класса. В некоторых вариантах осуществления, неконсервативные замещения аминокислот могут включать замену элемента одного из этих классов на другой класс.

[0627] Как используется в настоящем документе, “процент (%) идентичности последовательности аминокислот” и “процент идентичности”, когда используется относительно последовательности аминокислот (эталонной последовательности полипептидов) определяется как процент остатков аминокислот в последовательности кандидате (например, в антителе субъекта или в его фрагменте), которые идентичны остаткам аминокислот в эталонной последовательности полипептидов, после выравнивания последовательностей и введения разрывов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и не рассматривая любые консервативные замещения как часть идентичности последовательностей. Выравнивание для целей определения процента идентичности последовательностей аминокислот может быть достигнуто различными путями, например, используя публично доступное компьютерное программное обеспечение, такое как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Соответствующие параметры для выравнивания последовательностей включая любые алгоритмы необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине последовательностей, которые сравниваются, можно определить.

[0628] Как используется в настоящем документе, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекст четко не диктует иного. Например, упоминание предмета в единственном числе означает “по меньшей мере, один” или “один или несколько”. Понятно, что аспекты и варианты, описанные в настоящем документе, включают аспекты и варианты “содержащий” и/или “состоящий по существу из”.

[0629] В настоящем описании, различные аспекты заявляемого предмета изобретения представлены в формате диапазонов. Необходимо понять, что описание в формате диапазонов осуществляется только для удобства и краткости и не должно рассматриваться как негибкое ограничение рамок заявляемого предмета изобретения. Соответственно, описание диапазона должно рассматриваться как содержащее конкретно описанные все возможные субдиапазоны, а также индивидуальные численные значения в этих диапазонах. Например, когда приводится диапазон значений, понимается, что каждое промежуточное значение между верхним и нижним пределом этого диапазона и любое другое сформулированное или промежуточное значение в этом сформулированном диапазоне охватывается заявляемым предметом изобретения. Верхние и нижние пределы этих меньших диапазонов могут независимо включаться в меньшие диапазоны, и они также охватываются заявляемым предметом изобретения, являясь субъектами любого конкретно исключаемого предела в сформулированном диапазоне. Когда сформулированный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие один или оба этих включенных предела, также включаются в заявляемый предмет изобретения. Это применимо независимо от ширины диапазона.

[0630] Термин “примерно” как используется в настоящем документе, относится к обычному диапазону ошибок для соответствующего значения, хорошо известному в данной области техники. Упоминание “примерного” значения или параметра в настоящем документе включает (и описывает) варианты осуществления, которые направлены на это значение или параметр сам по себе. Например, описание, упоминающее “примерно X” включает описание “X”.

[0631] Как используется в настоящем документе, композиция относится к любой смеси двух или более продуктов, веществ или соединений, включая клетки. Она может представлять собой раствор, суспензию, жидкость, порошок, пасту, водную, неводную или любое их сочетание.

VI. Иллюстративные варианты осуществления

[0632] Среди предлагаемых варианты осуществления имеются:

1. Способ лечения, способ включает:

(a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и

(b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения.

2. Способ лечения, способ включает введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят, и/или он подвергается лечению с его помощью, иммуномодуляторное соединение, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.

3. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже ранее вводилась Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.

4. Способ по любому из вариантов осуществления 1-4 и 28-34, где способ тем самым предотвращает, уменьшает или облегчает один или несколько симптомов или результатов заболеваний или состояний.

5. Способ по любому из вариантов осуществления 1-4 и 28-34, где:

(a) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или его симптома или результата; и/или

(b) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или его симптома или результата; и/или

(c) способ тем самым уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до такой степени, которая больше сочетания (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении только одного иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние; и/или

(d) количество вводимого иммуномодуляторного соединения в способе, или вводимого одной или несколькими дозами, представляет собой поддерживающую дозу соединения или соответствует дозе соединения, вводимой субъектам, демонстрирующим реакцию, необязательно, полную реакцию, после введения соединения для лечения.

6. Способ по любому из вариантов осуществления 1-5 и 28-34, где заболевание или состояние не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению и/или становится не поддающимся лечению или резистентным к нему после лечения иммуномодуляторным соединением; и/или субъект или заболевание или состояние, как определено, имеет мутацию или фактор, вызывающий резистентность заболевания или состояния к лечению иммуномодуляторным соединением.

7. Способ по любому из вариантов осуществления 1-6 и 28-34, где иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: иммуномодуляторных лекарственных средств (IMiD), аналогов талидомида, производных талидомида, соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или с одним или несколькими элементами комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы, ингибиторов Ikaros (IKZF1), ингибиторов Aiolos (IKZF3), соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).

8. Способ по любому из вариантов осуществления 1-7 и 28-34, где введение иммуномодуляторного соединения включает:

(i) по меньшей мере, один цикл больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения, где цикл включает введение соединения, необязательно, ежедневно или, по меньшей мере, ежедневно, в течение до 21 дня, последовательно, и/или где последнее введение соединения в цикле соответствует 21 дню или меньше после первого введения соединения в цикле; и/или

(ii) по меньшей мере, два цикла, каждые, по меньшей мере, два цикла включают введение соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или

(iii) введение, необязательно, ежедневное или, по меньшей мере, ежедневное, в течение не более 14 последовательных дней.

9. Способ по любому из вариантов осуществления 1-8 и 28-34, где:

начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день или в последовательные дни, необязательно, одновременно; и/или

по меньшей мере, одна доза иммуномодуляторного соединения вводится в один и тот же день, в пределах одного или двух дней, до или после введения дозы Т-клеточной терапии.

10. Способ по любому из вариантов осуществления 1 и 4-8, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии.

11. Способ лечения, способ включает введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где цикл включает:

(i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или

(ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или

(iii) введение в течение не более 14 последовательных дней.

12. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-11, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 14 дней до начала Т-клеточной терапии.

13. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-12, и 28-34 где введение иммуномодуляторного соединения начинается до введения Т-клеточной терапии, начинаясь:

(i) через неделю или в пределах одной недели до или после отбора у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны обрабатываться и/или подвергаться генной инженерии для получения терапии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или

(ii) в пределах 14 дней до начала введения Т-клеточной терапии.

14. Способ по любому из вариантов осуществления 1- 13 и 28-34, где Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные клетки для экспрессирования рекомбинантного рецептора.

15. Способ по варианту осуществления 14, где генная инженерия включает одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo, необязательно выбранных из:

(1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза;

(2) выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов;

(3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки;

(4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования;

(5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или

(6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.

(6) приготовление клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.

16. Способ по варианту осуществления 14 или 15, дополнительно включающий осуществление способа приготовления и/или дополнительно генную инженерию Т-лимфоцитов для экспрессирования рекомбинантного рецептора, тем самым, генерируя Т-клеточную терапию.

17. Способ по варианту осуществления 16, дополнительно включающий приведение в контакт клеток с иммуномодуляторным соединением в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo.

18. Способ по любому из вариантов осуществления 1-16 и 28-34, где Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные Т-лимфоциты, полученные с помощью способа приготовления, включающего инкубирование клеток ex vivo в присутствии иммуномодуляторного соединения.

19. Способ по варианту осуществления 17 или варианта осуществления 18, где инкубирование клеток в присутствии одного или нескольких условий стимулирования осуществляют в присутствии иммуномодуляторного соединения.

20. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-19, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии.

21. Способ по варианту осуществления 1, где начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии.

22. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно.

23. Способ по любому из вариантов осуществления 1-22, где Т-клеточная терапия представляет собой такую терапию, при которой пиковое количество популяции клеток от терапии, которые необязательно представляют собой клетки CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии и/или необязательно представляют собой Т-лимфоциты CAR+, в крови представляет собой ((a) среднее значение для множества субъектов, леченых с помощью Т-клеточной терапии без введения иммуномодуляторного соединения, или (b) субъектам после введения Т-клеточной терапии) меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

24. Способ по любому из вариантов осуществления 1-23, где Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, необязательно, CAR.

25. Способ по варианту осуществления 24, где рекомбинантный рецептор содержит антиген-связывающий домен специфичный к B-клеточному антигену созревания (BCMA).

26. Способ по варианту осуществления 1, где начало введения иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, в одном цикле осуществляют после начала введения Т-клеточной терапии.

27. Способ по любому из вариантов осуществления 1, и 3-26 и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии, и/или осуществляют через 2-28 дней или 7-21 дней после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии.

28. Способ лечения, способ включает:

(a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, и

(b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

29. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

30. Способ по любому из вариантов осуществления 26-29, где начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который больше примерно, чем 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.

31. Способ по любому из вариантов осуществления 26-30, включающий, до начала введения иммуномодуляторного соединения, выбор субъекта, у которого: (i) в крови детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

32. Способ лечения, включающий введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

33. Способ лечения, включающий:

(a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и

(b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту.

34. Способ по любому из вариантов осуществления 33, где иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно, необязательно, один раз в день.

35. Способ по любому из вариантов осуществления 1-34, где иммуномодуляторное соединение вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней.

36. Способ по любому из вариантов осуществления 1-35, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем введение ежедневно в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится.

37. Способ по варианту осуществления 36, где период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.

38. Способ по любому из вариантов осуществления 1-15, 11-16, 25 и 26, где цикл введения иммуномодуляторного соединения повторяют, по меньшей мере, один раз.

39. Способ по любому из вариантов осуществления 1-39, где иммуномодуляторное соединение вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов или, по меньшей мере, 12 циклов.

40. Способ по любому из вариантов осуществления 1-39, где введение иммуномодуляторного соединения продолжается, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов и до тех пор, пока:

количество клеток от введенной Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии;

количество клеток от Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов;

количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или

субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или

субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.

41. Способ по любому из вариантов осуществления 1-40, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).

42. Способ по любому из вариантов осуществления 1-41, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.

43. Способ по любому из вариантов осуществления 1-42, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

44. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

45. Способ по любому из вариантов осуществления 1-44, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.

46. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

47. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43 и 46, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.

48. Способ по любому из вариантов осуществления 1-47, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно.

49. Способ по варианту осуществления 46, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально.

50. Способ по любому из вариантов осуществления 1-48, где иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.

51. Способ по любому из вариантов осуществления 1-50, где иммуномодуляторное соединение вводится в количестве от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.

52. Способ по любому из вариантов осуществления 1-51, где иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день.

53. Способ по любому из вариантов осуществления 1-52, где иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.

54. Способ по любому из вариантов осуществления 1-53, где:

иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг; или

иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше, чем 25 мг в день.

55. Способ по любому из вариантов осуществления 1-54, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение размножения Т-лимфоцитов, связанных с Т-клеточной терапией, по сравнению с размножением после введения Т-клеточной терапии без иммуномодуляторного соединения.

56. Способ по любому из вариантов осуществления 1-55, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение цитолитической активности, медиируемой Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с цитолитической активностью после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.

57. Способ по любому из вариантов осуществления 1-56, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с продуцированием цитокинов после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.

58. Способ по любому из вариантов осуществления 55-57, где увеличение более или примерно более 1,5-кратного, 2,0-кратного, 3,0-кратного, 4,0-кратного, 5,0-кратного, 10,0-кратного или больше.

59. Способ по любому из вариантов осуществления 1-58, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

60. Способ по любому из вариантов осуществления 1-59, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

61. Способ по любому из вариантов осуществления 1-60, где Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.

62. Способ по варианту осуществления 61, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).

63. Способ по любому из вариантов осуществления 1-62, где Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор антигена, который содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.

64. Способ по любому из вариантов осуществления 62 или 63, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется в ней.

65. Способ по варианту осуществления 64, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.

66. Способ по любому из вариантов осуществления 62 -65, где антиген представляет собой опухолевый антиген.

67. Способ по любому из вариантов осуществления 62-66, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.

68. Способ по любому из вариантов осуществления 62-67, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.

69. Способ по любому из вариантов осуществления 62-68, где антиген представляет собой или содержит антиген, ассоциированный с множественной миеломой, необязательно, BCMA, необязательно, BCMA человека.

70. Способ по любому из вариантов осуществления 62-69, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.

71. Способ по варианту осуществления 70, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.

72. Способ по варианту осуществления 70 или варианта осуществления 71, где фрагмент содержит scFv.

73. Способ по любому из вариантов осуществления 62-72, где Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор, который дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.

74. Способ по любому из вариантов осуществления 62-73, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.

75. Способ по варианту осуществления 74, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.

76. Способ по варианту осуществления 75, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, это сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR), и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

77. Способ по варианту осуществления 75 или по варианту осуществления 76, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть.

78. Способ по любому из вариантов осуществления 75-77, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.

79. Способ по любому из вариантов осуществления 75-78, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.

80. Способ по варианту осуществления 79, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.

81. Способ по варианту осуществления 79 или по варианту осуществления 80, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть.

82. Способ по любому из вариантов осуществления 79-81, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.

83. Способ по любому из вариантов осуществления 79-82, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

84. Способ по любому из вариантов осуществления 1-83, где Т-клеточная терапия содержит:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.

85. Способ по любому из вариантов осуществления 1-84, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.

86. Способ по любому из вариантов осуществления 1-85, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.

87. Способ по любому из вариантов осуществления 1-86, где Т-клеточная терапия содержит клетки, которые являются аутологичными для субъекта.

88. Способ по любому из вариантов осуществления 1-87, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые являются аллогенными для субъекта.

89. Способ по любому из вариантов осуществления 1-88, где субъект является человеком.

90. Способ по любому из вариантов осуществления 1-89, где Т-клеточная терапия включает введение от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.

91. Способ по любому из вариантов осуществления 1-90, где Т-клеточная терапия включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

92. Способ по любому из вариантов осуществления 1-91, где количество клеток, вводимых при Т-клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т-клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения, необязательно, этот другой способ дает в результате сходную или более низкую степень облегчения или уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их тяжести, по сравнению с результатом настоящего способа.

93. Способ по варианту осуществления 92, где количество вводимых клеток является 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе.

94. Способ по любому из вариантов осуществления 1-93, где Т-клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки.

95. Способ по любому из вариантов осуществления 1-94, где Т-клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

96. Способ по любому из вариантов осуществления 1-95, где способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии.

97. Способ по любому из вариантов осуществления 1-96, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.

98. Способ по любому из вариантов осуществления 1-97, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.

99. Способ по варианту осуществления 97 или по варианту осуществления 98, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL).

100. Способ по варианту осуществления 97, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

101. Способ по любому из вариантов осуществления 1-100, где Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения.

102. Способ по любому из вариантов осуществления 1-101, где способ понижает массу опухоли до большей степени и/или в течение большего периода времени по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения и/или в котором иммуномодуляторное соединение вводится без Т-клеточной терапии, необязательно, при такой же дозе или временном графике дозирования.

103. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включающему:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно.

104. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и

(b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения согласно циклу введения, включающему:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно.

105. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в один и тот же день, необязательно, одновременно, как начало введения Т-клеточной терапии.

106. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения до начала введения Т-клеточной терапии.

107. Набор по варианту осуществления 106, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения:

(1) за неделю или в пределах недели перед отбором у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны подвергаться генной инженерии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или

(2) в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo для получения терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов; и/или

(3) в пределах 14 дней до введения Т-клеточной терапии.

108. Набор по варианту осуществления 107, где одна или несколько стадий способа приготовления ex vivo выбираются из:

(1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза;

(2) селекции или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов;

(3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки;

(4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования;

(5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или

(6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.

109. Набор по любому из вариантов осуществления 103-106, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии.

110. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после начала введения Т-клеточной терапии.

111. Набор по варианту осуществления 110, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии.

112. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии и

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того, как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

113. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и

(b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

114. Набор по варианту осуществления 112 или по варианту осуществления 113, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения через промежуток времени, который более или примерно более 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.

115. Набор по любому из вариантов осуществления 112-114, где инструкции конкретизируют выбор субъекта для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после введения Т-клеточной терапии, при котором: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.

116. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

117. Набор, содержащий:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и

(b) инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.

118. Набор по любому из вариантов осуществления 103-117, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве для ежедневного введения и/или инструкции конкретизируют ежедневное введение иммуномодуляторного соединения.

119. Набор по любому из вариантов осуществления 103-118, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня или более или примерно более 28 последовательных дней.

120. Набор по любому из вариантов осуществления 103-119, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в цикле введения, включая ежедневное введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится.

121. Набор по варианту осуществления 120, где инструкции конкретизируют период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.

122. Набор по любому из вариантов осуществления 103-121, где инструкции конкретизируют цикл введения иммуномодуляторного соединения, который повторяют, по меньшей мере, один раз.

123. Набор по любому из вариантов осуществления 103-122, где инструкции конкретизируют продолжение введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока:

количество клеток от введенной Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии;

количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов;

количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или

субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или

субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.

124. Набор по любому из вариантов осуществления 103-123, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).

125. Набор по любому из вариантов осуществления 103-124, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.

126. Набор по любому из вариантов осуществления 103-125, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

127. Набор по любому из вариантов осуществления 103-126, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

128. Набор по любому из вариантов осуществления 103-127, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.

129. Набор по любому из вариантов осуществления 103-126, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

130. Набор по любому из вариантов осуществления 103-127 и 129, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.

131. Набор по любому из вариантов осуществления 103-130, где иммуномодуляторное соединение приготавливают для введения перорально, подкожно или внутривенно.

132. Набор по варианту осуществления 131, где иммуномодуляторное соединение приготавливают для перорального введения.

133. Набор по любому из вариантов осуществления 103-132, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в капсулах или таблетках.

134. Набор по любому из вариантов осуществления 103-133, где:

каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или

каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг.

135. Набор по любому из вариантов осуществления 103-134, где каждая одна или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержат количество больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.

136. Набор по любому из вариантов осуществления 103-135, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

137. Набор по любому из вариантов осуществления 103-136, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

138. Набор по варианту осуществления 136 или по варианту осуществления 137, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.

139. Набор по любому из вариантов осуществления 136-138, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).

140. Набор по любому из вариантов осуществления 136-139, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.

141. Набор по любому из вариантов осуществления 136-140, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней.

142. Набор по варианту осуществления 141, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.

143. Набор по любому из вариантов осуществления 136-142, где антиген представляет собой опухолевый антиген.

144. Набор по любому из вариантов осуществления 136-143, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбриональный антиген (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.

145. Набор по любому из вариантов осуществления 136-144, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.

146. Набор по любому из вариантов осуществления 136-145, где антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека.

147. Набор по любому из вариантов осуществления 136-146, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.

148. Набор по варианту осуществления 147, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.

149. Набор по варианту осуществления 147 или по варианту осуществления 148, где фрагмент содержит scFv.

150. Набор по любому из вариантов осуществления 136-149, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.

151. Набор по любому из вариантов осуществления 136-150, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.

152. Набор по варианту осуществления 151, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.

153. Набор по варианту осуществления 152, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

154. Набор по варианту осуществления 152 или по варианту осуществления 153, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ), или ее сигнальную часть.

155. Набор по любому из вариантов осуществления 152-154, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.

156. Набор по любому из вариантов осуществления 152-155, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.

157. Набор по варианту осуществления 156, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.

158. Набор по варианту осуществления 156 или по варианту осуществления 157, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть.

159. Набор по любому из вариантов осуществления 156-158, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.

160. Набор по любому из вариантов осуществления 156-159, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

161. Набор по любому из вариантов осуществления 103-160, где Т-клеточная терапия содержит:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.

162. Набор по любому из вариантов осуществления 103-161, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.

163. Набор по любому из вариантов осуществления 103-162, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.

164. Набор по любому из вариантов осуществления 103-163, где Т-клеточная терапия является аутологичной для субъекта.

165. Способ по любому из вариантов осуществления 103-164, где Т-клеточная является аллогенной для субъекта.

166. Набор по любому из вариантов осуществления 103-165, где субъект является человеком.

167. Набор по любому из вариантов осуществления 103-166, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.

168. Набор по любому из вариантов осуществления 103-167, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

169. Набор по любому из вариантов осуществления 103-168, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

170. Набор по любому из вариантов осуществления 103-169, где инструкции дополнительно конкретизируют введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии.

171. Набор по любому из вариантов осуществления 103-170, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.

172. Набор по любому из вариантов осуществления 103-171, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.

173. Набор по варианту осуществления 171 или по варианту осуществления 172, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL).

174. Набор по варианту осуществления 171, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

175. Промышленное изделие, содержащее набор по любому из вариантов осуществления 103-174.

176. Фармацевтическая композиция, содержащая Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель.

177. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 176, где Т-клеточную терапию приготавливают в количестве единичной стандартной дозы.

178. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 177, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 10⁵ до 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 10⁵ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 10⁶ до 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.

179. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 177 или по варианту осуществления 178, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 10⁸ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁷ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 10⁶ клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

180. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-179, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы и/или ингибирует фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).

181. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-180, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.

182. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-181, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

183. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

184. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-183, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.

185. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

186. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182 и 185, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.

187. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 176-186, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве единичной стандартной дозы.

188. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-187, где:

количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или

количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг.

189. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 187 или по варианту осуществления 188, где количество иммуномодуляторного соединения в композиции больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.

190. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-189, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

191. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-190, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.

192. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 190 или по варианту осуществления 191, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.

193. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-192, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).

194. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-193, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.

195. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-194, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней.

196. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 195, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.

197. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-195, где антиген представляет собой опухолевый антиген.

198. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-197, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.

199. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-198, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.

200. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-199, где антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека.

201. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-200, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.

202. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 201, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.

203. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 201 или по варианту осуществления 202, где фрагмент содержит scFv.

204. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-203, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.

205. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-204, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.

206. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 205, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.

207. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 206, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

208. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 206 или по варианту осуществления 207, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ), или ее сигнальную часть.

209. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 205-208, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.

210. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 205-209, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.

211. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 210, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.

212. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 210 или по варианту осуществления 211, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть.

213. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-212, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.

214. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-213, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

215. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-214, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит химерный рецептор антигена, содержащий антиген-связывающий домен, спейсер, трансмембранный домен от CD28, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий цепь CD3-зета (CD3ζ) и внутриклеточный сигнальный домен от 4-1BB.

216. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-215, где Т-клеточная терапия содержит:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.

217. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-216, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.

218. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 217, где отношение Т-лимфоцитов CD4+ к Т-лимфоцитам CD8+ составляет от или примерно от 1:3 до 3:1, необязательно, 1:1.

219. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-218, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.

220. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 219, где субъект является человеком.

221. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-220, содержащая объем от или примерно от 1 мл до 100 мл, от 1 мл до 75 мл, от 1 мл до 50 мл, от 1 мл до 25 мл, от 1 мл до 10 мл, от 1 мл до 5 мл, от 5 мл до 100 моет 5 мл до 75 мл, от 5 мл до 50 мл, от 5 мл до 25 мл, от 5 мл до 10 мл, от 10 мл до 100 мл, от 10 мл до 75 мл, от 10 мл до 50 мл, от 10 мл до 25 мл, от 25 мл до 100 моет 25 мл до 75 моет 25 мл до 50 мл, от 50 мл до 100 мл, от 50 мл до 75 мл или от 75 мл до 100 мл.

222. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-221, содержащая объем, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, или примерно 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл, 25 мл, 30 мл, 40 мл, 50 мл, 60 мл, 70 мл, 80 мл, 90 мл или 100 мл.

223. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-222, дополнительно содержащая криопротектор.

224. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-223, которая является стерильной.

225. Промышленное изделие, содержащее фармацевтическую композицию по любому из вариантов осуществления 176-223.

226. Способ лечения, включающий введение фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществления 176-225 субъекту для лечения заболевания или состояния.

227. Способ по варианту осуществления 226, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.

228. Способ по варианту осуществления 227, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.

229. Способ по варианту осуществления 216 или вариант осуществления 228, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфома (DLBCL).

230. Способ по варианту осуществления 227, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

VII. Примеры

[0633] Следующие далее примеры включаются только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения рамок настоящего изобретения.

Пример 1 Цитолитическая активность Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA и продуцирование цитокинов после инкубирования вместе с линиями целевых клеток, экспрессирующих BCMA, в присутствии или в отсутствие леналидомида

[0634] Т-лимфоциты выделяют посредством обогащения на основе иммунноафинности из образцов лейкафереза от здоровых доноров. Выделенные клетки трансдуцируют вирусным вектором, кодирующим один из разнообразных иллюстративных CAR анти-BCMA. Каждый CAR анти-BCMA содержит scFv анти-BCMA человека, спейсерную область, трансмембранный домен CD28, полученную из 4-1BB внутриклеточную ко-сигнальную последовательность и внутриклеточный сигнальный домен, полученный из CD3-зета. Конструкция вирусного вектора дополнительно кодирует усеченный EGFR (EGFRt), который служит как суррогатный маркер для экспрессирования CAR; EGFRt-кодирующая область отделяется от последовательности CAR перескакивающей последовательностью T2A. После трансдуцирования, клетки размножаются, и полученные в результате композиции замораживают с помощью криоконсерирования.

[0635] Криозамороженные Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA оттаивают и оценивают на различные реакции после сокультивирования с BCMA-экспрессирующими целевыми клетками в присутствии или в отсутствие леналидомида. Анализы in vitro для оценки уничтожения целевых клеток и продуцирования цитокинов осуществляются с использованием двух различных целевых линий клеток множественной миеломы, экспрессирующих BCMA RPMI-8226 или OPM-2. Фиг.1A показывает поверхностное экспрессирование BCMA, оцениваемое с помощью проточной цитометрии после окрашивания антителом анти-BCMA, иллюстративных линий клеток множественной миеломы, включая RPMI-8226 и OPM-2. Штриховая линия показывает фон BCMA-отрицательной линии клеток, окрашенных антителом анти-BCMA. MFI - это медианная интенсивность флуоресценции. Экспрессирование BCMA является относительно низким для обеих линий клеток (смотри Lee et al. (2016) Br J Haematol. 174:911-922). RPMI-8226, как показано, являются более чувствительными к леналидомиду по сравнению с OPM-2 (6,43 и 37,4 мкМ, соответственно) (Wellcome Sanger Institute. Genomics of drug sensitivity in cancer. www.cancerrxgene.org/translation/Drug/1020. Accessed February 7, 2018).

A. RPMI-8226

1. Цитолитическая активность

[0636] Клетки целевой линии клеток, экспрессирующих BCMA (RPMI-8226), инкубируют вместе с иллюстративными Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA, экспрессирующими CAR с scFv анти-BCMA человека, при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии 1 мкМ или 10 мкМ леналидомида или без леналидомида (несущая среда). Сокультуры с Т-лимфоцитами, не экспрессирующими CAR (имитационных), или культуры только с целевыми клетками (без CAR T) используют как контроли, каждую, в присутствии или в отсутствие (несущая среда) 10 мкМ или 1 мкМ леналидомида. Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях.

[0637] Целевые клетки RPMI-8226 метят NucLight Red (NLR), чтобы дать возможность их отслеживания с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток за период шесть дней, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Нормированные количества целевых клеток генерируют посредством деления отсчетов целевых клеток на отсчеты клеток в начале культивирования каждой культуры. Процент гибели целевых клеток оценивают, измеряя площадь под кривой (AUC) для нормированных отсчетов целевых клеток как функции времени и нормировки обратных значений AUC (1/AUC) посредством определения величины 0% (только целевые клетки) и величины 100% (Т-лимфоциты CAR+ культивируемые совместно с целевыми клетками в контроле несущей среды).

[0638] Как показано, сокультивирование в присутствии 1 мкМ (Фиг.1C) или 10 мкМ (Фиг.1B, 1C) леналидомида дает в результате повышение степени гибели целевых клеток под действием Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в день 6 сокультивирования, по сравнению с инкубированием целевых клеток вместе с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в отсутствие леналидомида (соответствует 100% на Фиг.1B). Как показано на Фиг.1C, наблюдаемое воздействие леналидомида на цитолитическую активность является доза-чувствительным и отсроченным, не проявляющимся, пока не пройдет приблизительно 50 часов выдерживания в культуре. Результаты согласуются с ролью леналидомида при облегчении непрерывного функционирования и/или выживаемости (например, посредством предотвращения истощения или гибели клеток) Т-лимфоцитов CAR после начального активирования. Сходные результаты наблюдают для генно-инженерных клеток, для экспрессирования ряда других CAR анти-BCMA, каждый из них содержит различные домены связывания scFv.

2. Продуцирование/аккумуляция цитокинов

[0639] Уровни различных цитокинов оценивают в супернатантах культур после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с клетками целевой линии клеток, экспрессирующей BCMA, RPMI-8226 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии или в отсутствие 10 мкМ леналидомида. Культуру Т-лимфоцитов, не экспрессирующих CAR анти-BCMA (имитационных), используют как контроль. Количества IL-2 (Фиг.2A), IFNγ (Фиг.2B) и TNF-α (Фиг.2C) в супернатантах культур оценивают через 48 часов после начала культивирования. Как показано на Фигурах 2A-2C, присутствие леналидомида связано с повышением CAR-зависимого продуцирования цитокинов и/или аккумуляции после сокультивирования целевых клеток Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с антиген-специфичными целевыми клетками. Эти результаты согласуются с ролью леналидомида в облегчении CAR-медиируемых эффекторных функций. Сходные результаты наблюдают для клеток, экспрессирующих различные другие CAR анти-BCMA, содержащих, каждая, различные домены связывания scFv.

B. OPM-2

3. Цитолитическая активность

[0640] Целевые клетки множественной миеломы OPM-2 инкубируют вместе с Т-лимфоцитами человека (выделенными у четырех различных независимых доноров), экспрессирующими иллюстративный CAR анти-BCMA), при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида, за период 7 дней. Клетки OPM-2 метят NucLight Red (NLR), чтобы дать возможность для отслеживания целевых клеток с помощью микроскопию, по существу, как описано выше. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособности целевых клеток в конце инкубирования. Степень цитолитической активности, наблюдаемая для культур, инкубируемых в отсутствие леналидомида, устанавливается как фон, 100%. Результаты показаны на Фиг.3A. Добавление леналидомида, как наблюдается, улучшает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток OPM-2, зависимым от дозы образом. Сходные результаты наблюдают для других CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-BCMA, включая клетки, экспрессирующие различные CAR анти-BCMA, содержащие, каждая, различные домены связывания scFv и/или генно-инженерные клетки, с использованием клеток от разных доноров.

4. Цитокин

[0641] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, полученные у четырех независимых доноров, инкубируют вместе с целевой линией клеток, экспрессирующих BCMA, OPM-2, при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (фон, соответствует 100%). После 24 часов культивирования, оценивают присутствие IFNγ (Фиг.3B), IL-2 (Фиг.3C) и TNF-α (Фиг.3D) в супернатантах культур. Как показано на Фигурах 3B-3D, леналидомид, как наблюдется, повышает продуцирование и/или аккумуляцию цитокинов антиген-стимулируемыми Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA зависимым от дозы образом.

C. Сравнение активности полученных от множества доноров Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA

[0642] В другом исследовании, Т-лимфоциты CAR анти-BCMA от репрезентативного здорового донора и пациента с множественной миеломой (пациент был не поддающимся лечению помалидомидом) инкубируют вместе с флуоресцентно мечеными целевыми клетками OPM-2 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида, в течение 6-7 дней. Цитолитическую активность измеряют по потерям красных флуоресцентных клеток. Для оценки продуцирования цитокинов, Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, полученные от здорового донора и от пациента с множественной миеломой, сокультивируют с флуоресцентно мечеными целевыми клетками OPM-2 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Через 24 часа, отбирают образцы сред для оценки присутствия IFNγ и IL-2. Результаты показаны на Фиг.3E, они представляют собой среднее значение для двух экспериментов; антиген-специфичная цитолитическая активность CAR-T анти-BCMA и продуцирование цитокинов, согласно наблюдениям, повышаются под действием леналидомида зависимым от концентрации образом.

[0643] Исследования, рассмотренные выше, распространяют на Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, генерируемые из клеток от двух дополнительных здоровых доноров. Активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от трех здоровых доноров и одного пациента, не поддающегося лечению с помощью IMiD (пациент донор был не поддающимся лечению помалидомидом), сравнивают с линиями клеток множественной миеломы, экспрессирующих BCMA, как OPM-2, так и RPMI-8226. Цитолитическую активность и продуцирование цитокинов (IFNγ, IL-2 и TNF-α) анализируют, по существу, как описано выше. Вычисляют абсолютные изменения уровней цитокинов относительно контрольной несущей среды. Эксперименты осуществляют 2-3 раза на каждом доноре.

[0644] Повышенная цитолитическая активность CAR T анти-BCMA против целевых клеток OPM-2, титруемых с увеличением концентрации леналидомида, наблюдается у всех доноров (P=6,2 × 10^-5) (Фиг.3F). Как показано на Фиг.3F, влияние лечения леналидомидом на цитолитическую активность CAR T в сокультуре RPMI-8226видимо зависит от донора, при этом пациент донор демонстрирует значительное увеличение цитолитической активности (P=1,9 × 10^-8). В дополнение к этому, все доноры CAR T имеют значительно повышенное продуцирование IFN-γ, IL-2 и TNF-α зависимым от концентрации леналидомида образом в сокультуре с клетками OPM-2 (P<0,002, Фиг.3G). Продуцирование цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами в сокультуре с RPMI-8226 также значительно повышается для всех доноров и цитокинов при лечении леналидомидом (P<0,003, Фиг.3H).

Пример 2 Воздействие леналидомида на размножение T-лимфоцитов CAR и антиген-специфичную функцию при серийном повторном стимулировании

A. Размножение T-лимфоцитов CAR

[0645] Способность Т-лимфоцитов CAR размножаться и демонстрировать антиген-специфичную функцию ex vivo после повторяющихся заходов стимулирования антигеном может коррелировать с функцией in vivo и/или способностью клеток к персистентности in vivo (например, после введения и начального активирования в ответ на встречу с антигеном) (Zhao et al. (2015) Cancer Cell, 28:415-28). Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, генерируемые, как описано выше, инокулируют в трех повторностях при 1 × 10⁵ клеток/лунка в 96-луночных планшетах. Облучаемые целевые клетки, экспрессирующие BCMA (клетки MM1.S), добавляют при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:2 в присутствии или в отсутствие различных концентраций (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ) леналидомида.

[0646] Каждые 3-4 дня (при начале каждого нового захода), Т-лимфоциты CAR считают. Затем клетки харвестируют и повторно инокулируют при начальной плотности посева со свежими средами, вновь добавляемым леналидомидом, при такой же концентрации, где применимо, и заново оттаявшими, заново облученными целевыми клетками. Осуществляют 8 заходов стимулирования в течение периода культивирования 31 день. Для некоторых заходов, при повторном инокулировании, клетки оценивают на фенотипические маркеры с помощью проточной цитометрии.

[0647] Иллюстративные результаты показаны на Фиг.4A. Как показано, увеличение размножения Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA наблюдают в день 14 при всех концентрациях леналидомида, по сравнению с лунками без леналидомида. Анализ осуществляют для различных композиций Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, каждую генерируют посредством введения CAR в Т-лимфоциты, полученные от одного из шести разных доноров. Анализ осуществляют на генно-инженерных клетках от шести различных независимых доноров, для экспрессирования CAR. Для каждого донора, наблюдают увеличение или отсутствие изменений размножения CAR-T при концентрации леналидомида 0,1 мкМ. Фиг.4B показывает результаты сходного анализа, при котором генно-инженерные клетки для экспрессирования двух различных CAR анти-BCMA человека подвергаются воздействию множества заходов стимулирования целевых клеток в присутствии или в отсутствие леналидомида. Как показано, присутствие леналидомида в культурах, как наблюдают, вызывает увеличение размножения в обеих популяциях клеток, начинающееся в пределах между днем 21 и днем 28. Результаты согласуются с тем выводом, что леналидомид может облегчать непрерывное размножение T-лимфоцитов CAR+ и/или выживаемость после повторной встречи с распознанным антигеном.

B. Отсчеты T-лимфоцитов CAR, продуцирование цитокинов и активирование

[0648] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA от 3 доноров, генерируемые как описано выше, инокулируют на трех повторностях на 96-луночные планшеты с облучаемыми целевыми клетками, экспрессирующими BCMA (клетки MM1S), при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:2 в присутствии 0,1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Условия культивирования устанавливают заново каждые 3-4 дня. Реинокуляцию поддерживают в течение 28 дней или пока отсчет клеток не будет <50000 клеток. Эксперименты осуществляют в трех повторностях на 3 донорах. Уровни цитокинов (IFNγ, IL-2 и TNF-α) оценивают через 24 часа после реинокуляции в дни 5, 8 и 15. Активирование Т-лимфоцитов CAR измеряют на клетках, собранных в дни 4, 7 и 14, с помощью проточной цитометрии для CD25.

[0649] Фиг.5A показывает отсчеты клеток (удвоение проективной популяции) of Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA для каждого момента времени повторного стимулирования. “×” показывает недостаточное количество клеток для реинокуляции при анализе. Результаты показывают, что после повторного стимулирования с помощью целевых клеток, все 3 доноры CAR T, леченые леналидомидом, имеют увеличенные отсчеты проективных клеток в течение 28 дней по сравнению с контролем (P <0,003). Фиг.5B показывает медианную интенсивность флуоресценции CD25 (MFI) (настроенную на живых CAR+ CD3+) и Фиг.5C показывает продуцирование цитокинов, нормированное на количество инокулированных клеток. Увеличение отсчетов клеток связывают со значительным увеличением экспрессирования CD25 у CAR T (P<3,4 × 10^-4; Фиг.5B) и продуцирования IL-2, IFN-γ и TNF-α в средах (P<0,5; Фиг.5C). Результаты показывают, что отсчеты Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, продуцирование цитокинов и активирование увеличиваются с помощью леналидомида после повторного стимулирования in vitro.

Пример 3 Воздействия леналидомида на пролиферацию и активирование CAR-T BCMA в 3D модели миеломы

[0650] Для оценки функции клеток в контексте трехмерного (3-D) микроокружения ткани, экспрессирующей BCMA человека, реконструированный костный мозг (rBone™) (zPREDICTA, San Jose, CA) погружают в экспрессирующие BCMA RPMI-8226. 20000 Т-лимфоцитов, экспрессирующих другой иллюстративный CAR анти-BCMA человека (или имитационных Т-лимфоцитов не экспрессирующих CAR), инкубируют в 3-D модели в присутствии или в отсутствие 1,0 мкМ леналидомида.

[0651] Через 2 или 7 дней, клетки выделяют и оценивают с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD3, CD25, CD4 и CD8. Как показано на Фиг.6A, присутствие леналидомида, как наблюдается, дает в результате увеличение общего количества клеток CD3+ в культурах с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в день 7. Увеличение экспрессирования CD25+ в популяциях Т-лимфоцитов CD4+ (Фиг.6B) и CD8+ (Фиг.6C) также наблюдется в присутствии леналидомида. Результаты согласуются с тем выводом, что леналидомид может облегчать увеличение размножения, выживаемости и/или функции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в антиген-экспрессирующем микроокружении опухоли.

Пример 4 Воздействие леналидомида на функцию T-лимфоцитов CAR in vivo

[0652] Противоопухолевые воздействия Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA самих по себе и в сочетании с леналидомидом, оценивают на двух различных моделях опухолей мышей, экспрессирующих BCMA - модели множественной миеломы RPMI 8226 человека привитой мыши (модель подкожного импланта) и модели множественной миеломы OPM-2 человека привитой мыши (ортотропическая модель костного мозга).

A. Модель RPMI-8226

[0653] Мышам делают подкожную инъекцию (s.c.) 5 × 10⁶ клеток RPMI-8226 и дают возможность для роста объема опухоли приблизительно до 150 мм³. В день 0, композицию, содержащую субоптимальную (низкую) дозу Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA (генерируют посредством трансдуцирования клеток, полученных из образцов субъектов доноров людей, по существу, как описано выше), вводят внутривенно мышам (вместе со сходной композицией Т-лимфоцитов, не экспрессирующих CAR (имитационных), используемых как контроль). Конкретно, композиция содержит приблизительно 5 × 10⁵ Т-лимфоцитов CAR+ (или имитационных) CD4+ и 5 × 10⁵ Т-лимфоцитов CAR+ (или имитационных) CD8+. Т-лимфоциты адоптивно переносятся в мышей, сами по себе или в сочетании с леналидомидом, вводимым ежедневно, при 25 мг/кг, внутрибрюшинно (i.p.), начиная в день 0 (вместе с введением T-лимфоцитов), продолжая до дня 21. В другой контрольной группе мышам вводят леналидомид сам по себе, без введения Т-лимфоцитов. Объем опухоли и выживаемость животных отслеживают в течение исследования. Кровь из ретроорбитального (RO) кровотока отбирают еженедельно для оценки уровней BCMA и IFN-гамма в плазме и для фармакокинетической (PK) оценки Т-лимфоцитов CAR+.

[0654] Измерения объема опухоли показаны для отдельных животных на Фиг.7A, введение леналидомида и низкой дозы Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в сочетании, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли, по сравнению с мышами, лечеными леналидомидом или только Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA. Наблюдаемое воздействие очевиднее всего в более поздние моменты времени, включая моменты после последнего ежедневного введения леналидомида (то есть, после дня 21). Результаты согласуются со способностью леналидомида к увеличению способности Т-лимфоцитов к долговременной персистентности и/или функционированию.

[0655] Как показано на Фиг.7B, мыши, которые получали леналидомид и Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, демонстрируют увеличение выживаемости по сравнению с другими группами лечения. Средняя выживаемость (мс) мышей, которым вводили Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA и леналидомид, составляет 85 дней (в два раза больше по сравнению с другими группами лечения, которые демонстрируют среднюю выживаемость 38-43,5 дней).

[0656] В дополнение к тому, количество Т-лимфоцитов CAR+ CD4+ и CD8+ и Т-лимфоцитов без CAR в периферической крови каждого животного определяют в дни 7, 14, 21 и 34. Количества Т-лимфоцитов CAR CD4+ и Т-лимфоцитов без CAR показаны на Фигурах 8A и 8E (дни 7 и 14), соответственно, и на Фиг.8B и 8F (дни 21 и 34), соответственно. Количества Т-лимфоцитов CAR CD8+ и Т-лимфоцитов без CAR показаны на Фигурах 8C и 8G (дни 7 и 14), соответственно, и на Фиг.8D и 8H (дни 21 и 34), соответственно. Как показано, увеличение количества Т-лимфоцитов CAR+ CD4+ и CD8+ (но не Т-лимфоцитов без CAR+) в крови наблюдают в день 36 у мышей, получающих сочетание Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA и леналидомида, по сравнению с другими группами лечения.

B. Модель Opm-2

i. Исследование 1

[0657] Воздействие леналидомида в сочетании с CAR T анти-BCMA также оценивают на ортотопической модели опухоли мышей с использованием клеток OPM-2. Мышам (NOD.Cg-Prkdc^scidIL-2rg^tm1Wjl/мыши SzJ (NSG; Jackson Labs)) делают внутривенную инъекцию (i.v.) 2 × 10⁶ клеток OPM2 (множественной миеломы), трансфицированных люциферазой светлячков (OPM2-ffluc). Дают возможность для приживления опухоли в течение 13 дней перед стадированием (за 14 дней до введения T-лимфоцитов CAR) и проверяют приживление с использованием биолюминесцентных изображений. Мышам вводят одну или несколько композиций в разных группах лечения, как следует далее и приводится в Таблице E1.

[0658] Некоторые группы получают 10 мг/кг леналидомида в фосфатно-буферном солевом растворе посредством внутрибрюшинной инъекции, либо (A) начиная в день -1 (за день до введения Т-лимфоцитов CAR+) (леналидомид (A)); либо (B) в день 14 (день 14 после начала введения T-лимфоцитов CAR+) (леналидомид (B)), в каждом случае, ежедневно, в течение всего исследования. В группах, получающих Т-лимфоциты CAR+, CAR анти-BCMA (генерируемые посредством трансдуцирования клеток, полученных из образцов от субъектов доноров людей, по существу, как описано выше) вводят в день 0 (день 14 после инъекции клеток опухоли), при дозе либо 5 × 10⁵ (низкой) либо 1 × 10⁶ (высокой) CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов. Таблица E1 приводит режимы дозирования.

Таблица E1: Дизайн исследования № Группы Описание группы Вводимые Т-лимфоциты CAR, (или имитационные -трансдуцированные
Т-лимфоциты) 1 Только опухоль 0 2 Имитационные (высокая) (1 × 10⁶) 3 Леналидомид (A) нет 4 Леналидомид (B) нет 5 Имитационные+леналидомид (A) (1 × 10⁶) 6 Имитационные+леналидомид (B) (1 × 10⁶) 7 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая) 1 × 10⁶ 8 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая) 5 × 10⁵ 9 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая) + леналидомид (A) 1 × 10⁶ 10 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая) + леналидомид (A) 5 × 10⁵ 11 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая) + леналидомид (B) 1 × 10⁶ 12 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая) + леналидомид (B) 5 × 10⁵

[0659] Массу опухоли у животных среди в различных группах отслеживают с помощью биолюминесцентных изображений до дня 39 после дозирования T-лимфоцитов CAR+. Для получения биолюминесцентных изображений мыши получают внутрибрюшинные (i.p.) инъекции субстрата люциферина (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA), повторно суспендированного в PBS (15 мкг/г массы тела). Общий световой поток (фотоны/сек) определяют в каждый момент времени.

[0660] Фиг.9A и Фиг.9B показывает результаты для массы опухоли до дня 46, у мышей, леченых леналидомидом ежедневно, начиная в день -1 (леналидомид A), в присутствии или в отсутствие высокой (1 × 10⁶; Фиг.9A) или низкой (5 × 10⁵; Фиг.9B) дозы T-лимфоцитов CAR+. Фиг.9C показывает графики для массы опухоли у отдельных животных до дня 53. Фиг.9D показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ с леналидомидом в день -1 (леналидомид A). Фиг.9E показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ без леналидомида в день -1 (леналидомид A). Звездочки показывают смерть или умерщвление отдельного животного в момент времени, показанный на графике. Как показано, добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли и уменьшение массы опухоли у мышей, которым вводят Т-лимфоциты CAR+, при обеих дозах T-лимфоцитов CAR+.

[0661] Фиг.9F и Фиг.9G показывают результаты по массе опухоли в момент времени, при исследованиях на мышах, которым вводят леналидомид, начиная с дня 14 после введения T-лимфоцитов CAR+ (леналидомид B) (вертикальные линии на Фигурах 9F и 9G) в присутствии или в отсутствие высокой (1 × 10⁶, Фиг.9F) или низкой (5 × 10⁵, Фиг.9G) дозы T-лимфоцитов CAR+. Фиг.9H показывает графики для массы опухоли отдельных животных до дня 53. Фиг.9I показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ с леналидомидом в день -1 (леналидомид A). Фиг.9J показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ без леналидомида в день -1 (леналидомид A). Как показано, в то время как леналидомид сам по себе, как наблюдается, не уменьшает роста опухоли или массы опухоли, добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате тренд в направлении замедления роста опухоли и уменьшения массы опухоли у мышей, которым вводят обе дозы Т-лимфоцитов CAR, с четкими различиями, наблюдаемыми, начиная в день 30-40 после инъекции T-лимфоцитов CAR, для более высокой (1 × 10⁶) дозы Т-лимфоцитов CAR+. При такой дозе, сочетание с леналидомидом, как наблюдается, замедляет рост опухоли, дают ли его в день -1 или посредством отсроченного дозирования.

[0662] Результаты выживаемости в момент времени в исследованиях показаны на Фигурах 10A и 10B (для групп, получающих леналидомид с помощью режимов (d-1) и B (d.14 после CAR (отсроченный) соответственно), и Фигуры 10C и 10D (для групп, получающих высокие и низкие дозы CAR, соответственно). Как показано, добавление леналидомида улучшает воздействие на выживаемость, наблюдаемую у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA (как при высоких, так и при низких оцениваемых дозах), когда они вводятся либо в день -1 (A), либо посредством отсроченного (d.14) дозирования (B).

[0663] Таблица E2 приводит медианную выживаемость (мс) (как оценивается в день 56 после введения Т-лимфоцитов CAR+) и количество мышей в группе, выживающей до дня 56 после введения Т-лимфоцитов CAR+, для каждой группы животных, оцениваемых в этом исследовании.

ТАБЛИЦА E2: ВЫЖИВАЕМОСТЬ Группа Доза клеток Медианная выживаемость
(оцениваемая в день 6) Количество животных, выживших в день 56 после CAR T Имитационные (высокая) 1,00E+06 24 0/8 Леналидомид (A) N/A 28 0/8 Леналидомид (B) N/A 25 0/8 Имитационные+леналидомид (A) 1,00E+06 28 0/8 Имитационные+леналидомид (B) 1,00E+06 25 0/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая) 1,00E+06 56 2/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая) 5,00E+05 35 0/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая) + леналидомид (A) 1,00E+06 N/A 6/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая) + леналидомид (A) 5,00E+05 52 1/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая) + леналидомид (B) 1,00E+06 N/A 6/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая) + леналидомид (B) 5,00E+05 36 2/8

(ii.) Исследование 2

[0664] При дополнительных исследованиях, мышам NOD/Scid/gc^-/- (NSG) вводят инъекцию (i.v.) клеток OPM-2-люциферазы, как описано в Исследовании 1, выше, и дают возможность для приживления в течение 14 дней перед вливанием (i.v.) клеток CAR-T (или имитационных). В некоторых группах, ежедневное внутрибрюшинное введение 10 мг/кг леналидомида или контрольной несущей среды начинают либо в день -1 (за день до введения CAR-T) (одновременно леналидомид (леналидомид (C) или несущая среда (несущая среда (C)), либо в день 14 после введения T-лимфоцитов CAR (или имитационных) (отсроченный леналидомид (D)).

[0665] Через 14 дней после инъекции клеток опухоли (день 0), делают внутривенную инъекцию субтерапевтической дозы Т-лимфоцитов CAR+ (1 × 10⁶ Т-лимфоцитов CAR (генерируемых от двух разных доноров)) или имитационных контрольных клеток. Результаты показаны на Фиг.10E, 10F, 10G и 10H. Данные представлены как среднее значение ± SEM (среднеквадратичное отклонение). Для выживаемости in vivo используют тест Гехана-Бреслоу-Вилкоксона для сравнения групп.

[0666] Фиг.10E показывает результаты оценки массы опухоли до дня 60, как анализируют с помощью биолюминесценции, измеренной с помощью проточной цитометрии. Добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли и уменьшение массы опухоли у мышей, которым вводят Т-лимфоциты CAR+, генерируемые из клеток обоих доноров. Как показано на Фиг.10F, добавление леналидомида, как наблюдается, улучшает воздействие на выживаемость у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, особенно после одновременного введения леналидомида. Линейные модели с фиксированным воздействием или со смешанным воздействием используют для оценки значимости лечения леналидомидом для цитолитической активности, при этом лечение, донор и время рассматриваются как фиксированные воздействия, а животное рассматривается как случайное воздействие, вложенные с помощью времени, когда повторяющиеся измерения получают от одного и того же животного. Значения P получают с помощью тестов отношения вероятностей, сравнивая полную модель с представляющим интерес воздействием с моделью без воздействия, представляющего интерес. Одновременное добавление леналидомида ведет к значимому уменьшению массы опухоли для донора 1 (P=0,02) и увеличение выживаемости для донора 1 (P=0,057) и донора 2 (P=0,04), по сравнению с животными, лечеными несущей средой, которым делают инъекцию только CAR T анти-BCMA. Животные на режиме одновременного дозирования леналидомида также показывают увеличение отсчетов CAR T в периферической крови через 7 дней (P=7,3 × 10^-6), но в более поздние моменты времени. Леналидомид оказывает малое, но значимое воздействие вместе с имитационными CAR T на массу опухоли только для донора 1 (P=0,003). В этом исследовании, добавление отсроченного дозирования леналидомида не улучшает исчезновение опухоли и выживаемость для обоих доноров CAR T. Результаты показывают, что выживаемость и исчезновение опухоли под действием субтерапевтической дозы CAR-T анти-BCMA усиливаются леналидомидом в модели опухоли OPM-2 in vivo.

[0667] Кровь от леченых мышей собирают для фармакокинетического анализа CAR-T, и клетки окрашивают антителами для исключения специфичных к антигенам мыши клеток (H2-kd, TER119 и muCD45) и анализируют их с помощью проточной цитометрии. Клетки гейтируют на CAR+ CD45+ и CD3+ и определяют количество клеток на микролитр крови. Для фармакокинетических измерений, каждый момент времени анализируют с помощью одностороннего теста ANOVA и post-hoc теста Тьюки. Фигуры 10G и 10H показывают проточный цитометрический анализ имитационных контрольных клеток и Т-лимфоцитов CAR в крови мышей в дни 8, 14, 22 и 28 после инъекции Т-лимфоцитов CAR от двух доноров. Результаты показывают, что наблюдается увеличение отсчетов Т-лимфоцитов CAR в периферической крови в ранние моменты времени, в частности, после одновременного введения леналидомида (**P<0,01).

Пример 5 Воздействия леналидомида на пролиферацию CAR анти-CD19 при субоптимальном стимулировании

[0668] CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 генерируются посредством генной инженерии Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ (которые выделяют посредством обогащения на основе иммунноафинности у субъектов здоровых доноров людей) с помощью вирусного вектора, кодирующего CAR анти-CD19. CAR, содержащий scFv анти-CD19, спейсер, полученный из Ig, трансмембранный домен, полученный из CD28 человека, внутриклеточный сигнальный домен полученный из 4-1BB человека, и сигнальный домен, полученный из CD3 зета человека. Конструкция нуклеиновых кислот, кодирующая CAR, также содержит усеченную последовательность EGFR (tEGFR) для использования в качестве маркера трансдукции, отделенную от последовательности CAR саморасщепляющейся последовательностью T2A.

[0669] Т-лимфоциты CAR анти-CD19 подвергаются субоптимальному стимулированию посредством инкубирования вместе с анти-CD3 (без второго реагента, такого как анти-CD28, сконструированного для получения костимуляторного сигнала), в присутствии 5 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 метятся красителем CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) перед инкубированием; пролиферацию оценивают с помощью оценки разбавления красителя с помощью проточной цитометрии. Как показано на Фиг.11, в контексте субоптимальных условий стимулирования в течение периода 72 часа, леналидомид, как наблюдается, имеет усиленную пролиферацию Т-лимфоцитов CAR+.

Пример 6 Наблюдаемое соотношения между результатами лечения и уровнями Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови в когорте субъектов людей, которым вводят CAR-экспрессирующие клетки анти-CD19.

[0670] Результаты лечения и количества Т-лимфоцитов CAR+ в крови оценивают на двадцати восьми взрослых субъектах с возвратной или не поддающейся лечению (R/R) неходжкинской лимфомой (NHL), которым вводят аутологичные Т-лимфоциты, экспрессирующие нацеленный на CD19 химерный рецептор антигена (CAR), содержащий антитело scFv анти-CD19 и внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB (вводимые при отношении CD4+ к Т-лимфоцитам CAR+ CD8+ приблизительно 1:1).

[0671] До введения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, субъектов лечат 30 мг/м² флударабина ежедневно в течение 3 дней и 300 мг/м² циклофосфамида ежедневно в течение 3 дней. В d=0, субъектов лечат 5 × 10⁷ (DL-1) или 1 × 10⁸ (DL-2) CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов с помощью внутривенного вливания.

[0672] Доли реакции, наблюдаемые в конкретный момент времени при осуществляемом исследовании, показаны в Таблице E3 для когорты из 20 субъектов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой (DLBCL), которых лечат однократной дозой DL-1. Как показано, наблюдается общая доля реакции (ORR) 80% (16/20), и 60% (12/20) субъектов, как наблюдается, достигают полной ремиссии (CR). 20% (4/20) субъектов демонстрируют частичную реакцию (PR) и 20% (4/20) демонстрируют прогрессирующее заболевание (PD). Из субъектов, не поддающихся химиотерапии (демонстрирующих стабильное или прогрессирующее заболевание после последнего режима химиотерапии или возврат заболевания менее чем 12 месяцев после аутологичных SCT) перед введением Т-лимфоцитов CAR+, общая доля реакции составляет 83% (10 ORR, 7 CR, 3 PR, 2 PD, n=12). Среди субъектов, не поддающихся лечению (демонстрирующих ремиссию меньше полной после последнего лечения, но не считающихся не поддающимися химиотерапии), общая доля реакции составляет 77% (13 ORR, 9 CR, 4 PR, 4PD, n=17).

Таблица E3. Общая реакция Когорта с DLBCL, однодозовый режим DL1 Все (n=20) Не поддающиеся
лечению^*
(n=17) Не поддающиеся
(n=12) ORR, n (%) [95% CI] 16 (80) [56, 94] 13 (77) [50, 93] 10 (83) [52, 98] CR, n (%) [95% CI] 12 (60) [36, 81] 9 (53) [28, 77] 7 (58) [28, 85] PR 4 (20) 4 (24) 3 (25) PD 4 (20) 4 (24) 2 (17)

*<CR при последней терапии

или PD при последнем режиме химиотерапии или возобновление заболевания <12 месяцев после аутологичных SCT

[0673] Из трех субъектов с DLBCL, которых во время оценки лечат двумя дозами DL-1, двое демонстрируют частичную реакцию (PR) и 1 демонстрирует прогрессирующее заболевание (PD). Среди 2 субъектов, которых во время оценки лечат одной дозой DL-2, оба субъекта, как наблюдается, достигают CR. В когорте с MCL с двумя субъектами в целом, подвергаемых лечению во время оценки одной дозой DL-1, наблюдают 1 PR и 1 PD. Два субъекта с двойной дозой, три субъекты с тройной дозой и четыре субъекта с двойной дозой экспрессора DLBCL, как наблюдается, для достигают реакции (7 CR, 2 PR).

[0674] Количество Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови определяют в определенные моменты времени после лечения с использованием трансгенно-специфичного реагента. Количество Т-лимфоцитов CAR+/CD3+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени после вливания, показано для субъектов, сгруппированных по наилучшей общей реакции, на Фиг.12A. У респондеров наблюдают более высокие пиковые количества Т-лимфоцитов CAR+/CD3+ (CR/PR), чем у субъектов с прогрессирующим заболеванием (PD). Фигуры 12B-D показывают уровни Т-лимфоцитов CAR+/CD3+, Т-лимфоцитов CAR+/CD4+ и Т-лимфоцитов CAR+/CD8+ (клеток/мкл крови; среднее значение ±SEM) у субъектов, которые достигают реакции на лечение, сгруппированных по продолжительности реакции (непрерывная реакция (CR/PR) или PD при 3 месяца). C_max (клетки CAR+/мкл крови) и площадь под кривой (AUC) для респондеров (CR/PR) и PD показаны в Таблице E4. Результаты согласуются с тем выводом, что стойкие реакции коррелируют с более высокими уровнями Т-лимфоцитов CAR+/CD3⁺ в крови, со временем и при пиковом размножении.

Таблица E4. C_max и AUC_0-28 выше у пациентов с CR/PR по сравнению с PD CD3 CD4 CD8 CR/PR
(n=16) PD
(n=4) CR/PR
(n=16) PD
(n=4) CR/PR
(n=16) PD
(n=4) C_max(клетки CAR+ /мкл крови) Среднее значение (SD) 612 (1919) 2 (1) 220 (754) 1 (0,6) 426 (1314) 0,5 (0,5) Медианное значение (Min, Max) 33 (1, 7726) 1 (1, 3) 8 (1, 3040) 1 (0, 2) 4 (0, 5238) 0,3 (0, 1) Q1, Q3 7, 123 0,7, 2 2, 46 0,6, 2 0,8, 104 0,1, 0,9 AUC_0-28 Среднее значение (SD) 5883 (18821) 16 (13) 2369 (8388) 10 (7) 3873 (11963) 6 (6) Медианное значение (Min, Max) 196 (11, 75773) 14 (4, 31) 47 (7, 33740) 9 (3, 17) 23
(1, 47834) 4 (1, 14) Q1, Q3 52, 781 5, 26 16, 261 4, 16 4, 761 1, 10

[0675] Для одного субъекта с не поддающейся химиотерапии трансформированной DLBCL (субтип герминального центра с перегруппировкой BCL2 и множеством копий MYC и BCL6), которому вводят Т-лимфоциты CAR+ при DL-1, количества Т-лимфоцитов CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ в периферической крови, измеренные в определенные моменты времени, показаны на Фиг.13A. Субъект ранее лечился ими и был неподдающимся лечению с помощью предыдущих пяти линий терапии, включая этопозид с индивидуально подобранной дозой, доксорубицин и циклофосфамид с винкристином и преднизоном плюс ритуксимаб (DA-EPOCH-R) и трансплантацию аллогенных стволовых клеток промежуточной интенсивности от 8/8 HLA согласованного неродственного донора. После трансплантации аллогенных стволовых клеток и перед приемом Т-лимфоцитов CAR+, субъект показывал 100% донорский химеризм во всех линиях клеток крови, он прекратил принимать иммуносупрессорную терапию и не имел реакции трансплантата против хозяина (GVHD). Перед введением Т-лимфоцитов CAR+ субъект имел массу, расположенную вокруг ушной раковины, и повреждение височной доли головного мозга, наблюдаемое с помощью позитронно-эмиссионной томографии и компьютерной томографии (ПЭТ-КТ) (Фиг.13B) и подтвержденное с помощью магнитной резонансной томографии (МРТ) (Фиг.13D).

[0676] После получения лечения Т-лимфоцитами CAR анти-CD19, субъект достигает CR через 28 дней после вливания, как показывает ПЭТ-КТ (Фиг.13C) и MRI головного мозга (Фиг.13E), без наблюдаемых признаков нейротоксичности или CRS. Через три месяца после вливания Т-лимфоцитов CAR, у субъекта отмечают появление массы, расположенной вокруг ушной раковины (Фиг.13F), и осуществляют инцизионную биопсию. Как показано на Фиг.13A, после биопсии, видимая опухоль уменьшилась без дополнительной терапии. Фармакокинетический анализ показал заметное повторное размножение Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови (до уровня выше наблюдаемого начального размножения, с пиковыми уровнями, наблюдаемыми примерно через 113 дней после вливания), что совпало с регрессией опухоли. Затем субъект начал достигать второго CR, как подтверждается посредством повторного стадирования ПЭТ-КТ через месяц после биопсии (Фиг.13G), и сохраняет CR 6 месяцев после вливания Т-лимфоцитов CAR. Дополнительная оценка субъекта показала, что реакция CNS является стойкой и субъект сохраняет CR 12 месяцев.

[0677] Эти результаты согласуются с тем выводом, что повторное размножение и активирование Т-лимфоцитов CAR+ может инициироваться in vivo после уменьшения количества или потерь функциональных или активных Т-лимфоцитов CAR+ и/или возобновляться после противоопухолевой реакции на терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR. Затем, после повторного размножения in vivo, гораздо позже после начального вливания Т-лимфоцитов CAR+, Т-лимфоциты CAR+ способны возобновлять противоопухолевую активность. Этот результат подтверждает, что повторное размножение и активирование Т-лимфоцитов CAR+ могут запускаться in vivo и что способы повторного активирования Т-лимфоцитов CAR+, могут дополнительно усилить их эффективность.

Пример 7 Воздействия леналидомида на активность Т-лимфоцитов CAR анти-CD19 после серийного повторного стимулирования

[0678] Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19, генерируемые по существу, как описано в Примере 5, оттаивают и инкубируют вместе с CD19-экспрессирующими клетками (клетками K562, трансдуцированными для экспрессирования CD19) при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 2,5:1 в присутствии или в отсутствие 1 нМ, 5 нМ, 60 нМ, 550 нМ или 5000 нМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контроль). Целевые клетки K562-CD19 метят NucLight Red (NLR), как описано в Примере 1, чтобы дать возможность для отслеживания целевых клеток с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают, измеряя потери жизнеспособных целевых клеток за период примерно 120 часов, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Как показано на Фиг.14, результаты согласуются с тем выводом, что присутствие леналидомида уменьшает CAR-медиируемую цитолитическую активность в этом анализе. В сходных анализах, результаты меняются в зависимости от отношения E:T и для различных композиций Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 (например, генерируемых в различные моменты времени и/или от клеток от разных доноров).

[0679] В другом исследовании, Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют вместе с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении E:T 2,5:1 в присутствии 100 нМ или 1600 нМ леналидомида, 2 нМ или 166 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу, контрольной несущей среды или в отсутствие добавляемого соединения (контроль CAR-T). После 120 часов культивирования, клетки выделяют и оценивают с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD25 или PD-1 в подмножествах Т-лимфоцитов CD4+ или CD8+. Как показано на Фиг.15A инкубирование Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 вместе с эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии самой высокой концентрации леналидомида (например, 1600 нМ) дает в результате более высокие уровни экспрессирования CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ по сравнению с другими условиями. Не наблюдается различий в поверхностном экспрессировании PD-1 в Т-лимфоцитах CD4+ или CD8+ в присутствии леналидомида, даже при самой высокой концентрации 1600 нМ (Фиг.15B).

[0680] В другом исследовании, оценивают количество IL-10 в супернатантах культур после инкубирования, в течение 24 часов, Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 вместе с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 3:1 или 9:1, в присутствии или в отсутствие различных концентраций леналидомида. Как показано на Фиг.16, леналидомид зависимым от дозы образом увеличивает секретирование и/или аккумуляцию IL-10 в супернатантах культур Т-лимфоцитов.

Пример 8 Воздействия леналидомида на размножение Т-лимфоцитов CAR анти-CD19 после серийного повторного стимулирования

[0681] Способность Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 к размножению ex vivo после повторных стимулирований оценивают с использованием способов, по существу, как описано в Примере 2. Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19, генерируемые от двух доноров (pt1 и pt2), по существу, так же, как описано в Примере 5, культивируют вместе с облученными клетками K562, трансдуцированными для экспрессирования CD19 (клеток K562-CD19) при отношении эффекторных и целевых клеток 2,5:1 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу. Для каждого донора, клетки харвестируют каждые 3-5 дней для каждого экспериментального условия в лунках и считают, и повторно стимулируют новыми целевыми клетками с использованием таких же условий культивирования после повторного доведения количества клеток до начальной плотности инокулирования для каждого захода. Осуществляют, в целом, 4 захода стимулирования в ходе 12-дневного периода культивирования. Для каждого захода стимулирования, определяют общее количество клеток, и результаты изображены как кратное изменение количества клеток после стимулирования (Фиг.17A) или количество удвоений по сравнению с начальным количеством (Фиг.17B). Как показано на Фиг.17A и 17B, не наблюдают изменения или наблюдают только небольшое воздействие на размножение клеток Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 при этом анализе повторного стимулирования, когда клетки культивируют в присутствии леналидомида, по сравнению с отсутствием леналидомида.

[0682] После каждого возврата к началу после предварительной обработки, оценивают цитолитическую активность посредством инкубирования повторно стимулируемых клеток вместе с клетками K562-CD19 (мечеными NucLight Red (NLR)) при некотором отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) в присутствии 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода до 40-60 часов, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Репрезентативная гибель клеток, наблюдаемая при 2-ом и 4-ом повторном стимулировании для обоих доноров, показана на Фигурах 18A (как нормированная на K562-CD19-Nuc-меченые клетки при t=0) или на Фиг.18B (% гибели клеток по сравнению с одной только контрольной несущей средой (соответствует 100%)). Как показано на Фиг.18A и 18B, инкубирование с леналидомидом, как наблюдается, дает в результате уменьшение цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 в этом анализе, при исследуемых условиях стимулирования.

Пример 9 Генерирование шариков, конъюгированных с BCMA

[0683] Антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA) конъюгируется с шариками посредством ковалентного связывания конъюгата BCMA-полипептид слияния Fc, содержащего растворимый BCMA человека слитой на его C-окончании с областью Fc IgG, с поверхностью коммерчески доступных тозил-активированных магнитных шариков (ThermoFisher, Waltham MA). Шарики являются суперпарамагнитными, непористыми, монодисперсными, тозил-активированными шариками, которые ковалентно связывают первичные амино и сульфгидрильные группы. Конъюгирование осуществляют с использованием шариков, имеющих диаметр приблизительно 2,8 мкм (обозначаемых M-280) или 4,5 мкм (обозначаемых M-450).

[0684] BCMA-Fc (SEQ ID NO: 22), содержащий внеклеточный домен BCMA человека (GenBank No. NP_001183.2) и Fc IgG1 человека соединенные с линкером, следующим образом:

MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA (внеклеточный домен BCMA; SEQ ID NO: 18)

GGGGS (линкер; SEQ ID NO: 19)

PKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

(Fc IgG1 человека; SEQ ID NO: 20.

[0685] Клон, кодирующий конструкцию слияния Fc - BCMA человека с N-конечной лидерной последовательностью CD33 (SEQ ID NO: 21), вставляют в вектор экспрессии и экспрессируют в клетках HEK 293. Полученный в результате белок слияния BCMA-Fc, как определено, имеет чистоту больше 95%, как оценивают с помощью гель-проникающей хроматографии. Для исследования связывания, белок слияния BCMA-Fc инкубируют с Т-лимфоцитами, экспрессирующими CAR анти-BCMA и Т-лимфоцитами экспрессирующими CAR, которые не связываются с BCMA. Результаты проточной цитометрии показывают, что белок слияния BCMA-Fc специфично связывается с CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-BCMA.

[0686] Различные концентрации белка слияния BCMA-Fc в пределах от 5 мкг до 200 мкг добавляют приблизительно к 1 мл тозил-активированных шариков (например, содержащему примерно 4×10⁹ тозил-активированных шариков, имеющих диаметр 2,8 мкм, или примерно 4×10⁸ тозил-активированных шариков, имеющих диаметр 4,5 мкм). Ковалентное связывание осуществляют посредством инкубирования в течение ночи при 37°C в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS), содержащем 0,1% сывороточного альбумина человека (HSA). Шарики промывают и повторно суспендируют в 1 мл PBS с 0,1% HSA. После конъюгирования, концентрацию шариков определяют с использованием Cellometer. В примерах, ниже, BCMA-конъюгированные шарики, используемые в различных исследованиях, упоминаются с упоминанием либо количества антигена BCMA-Fc, добавляемого на мл, либо концентрации антигена (мкг/мл) в ходе конъюгирования, например, 5 мкг или 5 мкг/мл; 50 мкг или 50 мкг/мл; 200 мкг или 200 мкг/мл и так далее.

Пример 10 Оценка маркеров Т-лимфоцитов на Т-лимфоцитах CAR+ анти-BCMA, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в присутствии или в отсутствие леналидомида

[0687] BCMA-конъюгированные шарики (диаметр 4,5 мкм), конъюгированные с различными количествами антигена BCMA, как описано в Примере 9, инкубируют вместе с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в присутствии или в отсутствие леналидомида, и оценивают экспрессирование маркеров Т-лимфоцитов.

[0688] Приблизительно 1,5 × 10⁶ Т-лимфоцитов CAR+ добавляют в лунки 12-луночного планшета и инкубируют с шариками из 200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированных шариков при отношении Т-лимфоцитов CAR+ и BCMA-конъюгированных шариков 1:0,3, 1:1 или 1:3 (приблизительно 0,5×10⁶, 1,5×10 и 4,5×10⁶ шариков на лунку, соответственно). В качестве контроля, на лунки наносят в виде покрытия 5 мкг/мл антитела анти-CD3 (субоптимальная концентрация для стимулирования) или клетки высевают в отсутствие любого агента (контроль без стимулирования). Каждое состояние инкубируют в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. Клетки инкубируют в течение четырех дней, а затем анализируют с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD4, CD8, Tim3, PD-1, CD25 и CD69.

[0689] Как показано на Фиг.19A, присутствие 5 мкМ леналидомида увеличивает пролиферативную способность Т-лимфоцитов (наблюдаемую по уменьшению интенсивности красителя CTV) после инкубирования в течение трех дней вместе с шариками, конъюгированными с 200 мкг антигена BCMA, при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1, по сравнению с инкубированием с шариками в отсутствие леналидомида (контрольная несущая среда). Как показано на Фигурах 19B и 19C, присутствие леналидомида в ходе инкубирования дополнительно увеличивает степень поверхностного экспрессирования CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+, индуцируемого после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+анти-BCMA вместе с BCMA-конъюгированными шариками (Фиг.19B) или стимулирования анти-CD3 (Фиг.19C).

[0690] В другом эксперименте, композиции T-лимфоцитов CAR анти-BCMA, полученные, по существу, как описано в Примере 1, инокулируют в 96-луночные планшеты при плотности 5 × 10⁵клеток на лунку. Исследуемые композиции Т-лимфоцитов CAR содержат при инокулировании, в среднем, приблизительно 45% клеток CAR+ анти-BCMA. Клетки из каждой композиции инкубируют в течение 18 часов в присутствии шариков из композиции с 5 мкг/мл, 50 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1. В качестве контроля клетки инкубируют вместе с шариками, конъюгированными с антителом анти-CD3/анти-CD28 (положительный контроль), или без добавленного агента (отрицательный контроль). Инкубирование осуществляют без леналидомида или в присутствии 0,5 мкМ или 5 мкМ леналидомида. После инкубирования, клетки обрабатывают реагентами, которые дают возможность для внеклеточного и внутриклеточного окрашивания антитела с помощью проточной цитометрии относительно факторов транскрипции Blimp1, EOMES, GATA-3, ikaros, Helios и Tbet, и маркеров CD25, CD31 и PD-1.

[0691] Уровни маркеров после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ от одного иллюстративного донора показаны для BLIMP-1 (Фиг.20A), CD25 (Фиг.20B), CD31 (Фиг.20C), PD-1 (Фиг.20D), Tbet (Фиг.20E) и EOMES (Фиг.20F), GATA-3 (Фиг.20G) Helios (Фиг.20H) и Ikaros (Фиг.20I). Как показано, экспрессирование ряда оцениваемых факторов транскрипции и маркеров активирования, связанных с эффекторными T-лимфоцитами, увеличивается после стимулирования BCMA-конъюгированными шариками. Для многих оцениваемых маркеров, степень повышения экспрессирования является сходной с экспрессированием, индуцируемым стимулированием шариками анти-CD3/анти-CD28. В некоторых случаях, степень стимулирования BCMA-конъюгированными шариками является самой большой в присутствии 5 мкг шариков. Как показано на Фиг.20I, уровень экспрессирования Ikaros уменьшается в присутствии леналидомида при всех условиях. Сходные результаты наблюдают для композиции Т-лимфоцитов CAR+, генерируемых вторым донором, за исключением того, что изменений экспрессирования Helios из клеток от этого донора не наблюдается, при стимулировании при исследуемых условиях.

Пример 10 Оценка активности Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в присутствии или в отсутствие леналидомида

a. Эффекторные реакции

[0692] Криозамороженые Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, полученные, по существу, как описано в Примере 2, и приготовленные при отношении Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ 1:1, оттаивают. Если не указано иного, шарики (диаметр примерно 4,5 мкм из композиции 5 мкг/мл или 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемых, как описано в Примере 9, добавляют в лунки при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1 в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. Клетки инкубируют до 14 дней и анализируют в различные моменты времени на секретирование цитокинов, размножение клеток, с помощью проточной цитометрии относительно суррогатного маркера EGFRt и на цитолитическую активность.

a. Экспрессирование цитокинов

(i) Присутствие цитокинов в супернатанте

[0693] Через двадцать четыре часа после добавления BCMA-конъюгированных шариков, оценивают присутствие TNF-α, IFNγ и IL-2 в супернатантах культур. Как показано на Фигурах 21A-21C, инкубирование вместе с BCMA-конъюгированными шариками индуцирует секретирование IFNγ (Фиг.21A), IL-2 (Фиг.21B) и TNF-α (Фиг.21C) в супернатантах культур. Степень продуцирования цитокинов выше, когда клетки инкубируются вместе с шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков по сравнению с композицией 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, демонстрируя, что стимулирование CAR с помощью BCMA шариков является зависимым от дозы. Как показано, леналидомид увеличивает BCMA-индуцированное продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ после стимулирования BCMA-конъюгированными шариками.

[0694] В другом иллюстративном исследовании, две различных композиции Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA генерируются от разных доноров, каждая из них содержит Т-лимфоциты, экспрессирующие один и тот же CAR анти-BCMA. Клетки оттаивают и инкубируют вместе с шариками (диаметр примерно 4,5 мкм) из композиции 5 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемой, как описано в Примере 1. Инкубирование осуществляют при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ или 5 мкМ леналидомида. Через двадцать четыре часа после добавления BCMA-конъюгированных шариков, оценивают продуцирование IL-2 Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в супернатантах культур. Как показано на Фиг.21D, более высокое продуцирование IL-2 наблюдается в присутствии высокого стимулирования антигеном (200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков) по сравнению с более низким стимулированием антигеном (5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков). Леналидомид, либо при 1 мкМ, либо при 5 мкМ, увеличивает продуцирование цитокинов в присутствии как высокого, так и низкого стимулирования антигеном.

(ii) Внутриклеточные уровни цитокинов

[0695] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA инкубируют в присутствии 1 мкМ леналидомида или несущей среды и 50 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков в течение 2 часов, и клетки оценивают с помощью проточной цитометрии на фосфорилированный STAT 5. Для оценки уровней цитокинов IFNγ и TNFα, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA инкубируют в присутствии 0,1 мкМ или 1 мкМ леналидомида или несущей среды и 5 мкг/мл, 50 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков в течение 24 часов. Клетки гейтируют на трансдуцированных живых клетках CD3+ и оценивают с помощью проточной цитометрии на внутриклеточное аккумулирование цитокинов IFNγ и TNFα в клетках CD4+ и CD8+.

[0696] Как показано на Фиг.22A, 2-часовое стимулирование антигеном увеличивает процент клеток положительных на фосфорилированный-STAT5 по сравнению с контролем без стимулирования (показанным точечной линией). Результаты для внутриклеточных уровней цитокинов IFNγ и TNFα из Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, генерируемых от репрезентативного нормального донора Т-лимфоцитов CAR, показаны на Фиг.22B. В этом исследовании, продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA увеличивается под действием леналидомида в широком диапазоне уровней антигена и концентраций.

b. Пролиферация клеток

[0697] Общие отсчеты клеток, отслеживаемые в день 4 (Фиг.21E) и день 7 (Фиг.21F), увеличиваются после стимулирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, но не из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, по сравнению с клетками, присутствующими в момент начала инкубирования (штриховая линия). Малое увеличение пролиферации наблюдают в клетках, инкубированных с 50 мкг шариков в присутствии леналидомида, в день 7.

[0698] Для дополнительной оценки пролиферации, клетки, содержащие CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-BCMA, метят красителем CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) как маркером пролиферации согласно протоколу производителя, перед инкубированием вместе с BCMA-конъюгированными шариками. Пролиферацию оценивают посредством разведения красителя с использованием проточной цитометрии на клетках, которые стимулируют шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. По сравнению с пролиферацией без леналидомида, имеется небольшая задержка пролиферации, как оценивается посредством разбавления CTV в присутствии леналидомида в день 4, но не в день 7 (Фиг.21G).

c. Размножение

[0699] Через четыре дня и через семь дней после добавления BCMA-конъюгированных шариков, инкубируемые клетки окрашивают CD4 или CD8 и антителом анти-EGFR для определения процента клеток положительных по EGFRt как суррогатных Т-лимфоцитов CAR+. В момент инокулирования, 26% клеток CD4+ экспрессируют CAR анти-BCMA и 39% клеток CD8+ экспрессируют CAR анти-BCMA, как определяют посредством окрашивания BCMA-Fc. Процент Т-лимфоцитов CD4+ EGFRt+ увеличивается примерно от 26% при начале инкубирования до более 40% в день 4 (Фиг.21H) и до более 60% в день 7 (Фиг.21I), когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Как показано на Фиг.21I, процент Т-лимфоцитов CD8+ EGFRt+ увеличивается в день 7 примерно от 38% при начале инкубирования до более 60%, когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Степень размножения клеток является наибольшей, когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков по сравнению с шариками из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Присутствие леналидомида не влияет существенно на степень размножения Т-лимфоцитов CAR+ в этом исследовании.

d. Цитолитическая активность

[0700] Цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ после инкубирования вместе с BCMA-конъюгированными шариками оценивают с помощью инкубирования вместе с линией целевых BCMA-экспрессирующих клеток RPMI-8226, которая представляет собой линию клеток множественной миеломы BCMA+. После семи дней инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA вместе с BCMA-конъюгированными шариками (5 мкг/мл или 50 мкг/мл) в присутствии или в отсутствие леналидомида, шарики удаляют из культур и клетки инокулируют вместе с целевыми клетками RPMI-8226 при отношении эффекторных клеток к целевым клеткам 3:1 или 1:1 в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида в дальнейшем. Для осуществления цитолитического анализа, целевые клетки RPMI-8226 метят NucLight Red (NLR), чтобы сделать возможным отслеживание целевых клеток с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода четырех дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием INCUCYTE® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Количество жизнеспособных клеток нормируют на клетки в день 0 перед инкубированием вместе с целевыми клетками RPMI-8226.

[0701] Иллюстративные результаты при отношении эффекторных и целевых клеток 1:1 показаны на Фиг.21J. Как показано, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA демонстрируют эффективное уничтожение в этом анализе. Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые стимулируют шариками из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, чуть менее эффективны при уничтожении клеток чем Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые стимулируют шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Для всех условий, предварительное инкубирование с леналидомидом в течение семидневного инкубирования перед анализом уничтожения повышает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+. Присутствие леналидомида в ходе анализа уничтожения клеток не влияет существенно на активность уничтожения. Уничтожения клеток не наблюдается, когда клетки RPMI 8226 культивируют сами по себе или в присутствии леналидомида, демонстрируя, что леналидомид не влияет непосредственно на жизнеспособность целевых клеток в этом анализе.

B. Серийное повторное стимулирование

[0702] Композиции Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA генерируют от трех разных доноров, каждая содержит Т-лимфоциты, экспрессирующие один и тот же CAR анти-BCMA, их оттаивают и инкубируют в течение семи дней вместе с шариками (диаметр примерно 4,5 мкм) при отношении шариков и клеток 1:1 из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемой, как описано в Примере 9. Инкубирование осуществляют в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контрольная несущая среда). Клетки харвестируют через 7 дней и повторно инокулируют в течение трех дополнительных заходов до 28 дней, каждый заход включает возвращение к началу, к начальной плотности посева и инкубированною в течение дополнительных 7 дней в присутствии такой же концентрации леналидомида.

[0703] При каждом возвращении к началу после предварительной обработки, цитолитическую активность оценивают посредством инкубирования вместе с линией BCMA-экспрессирующих целевых клеток RPMI-8226 (меченых NucLight Red (NLR)) при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида в дальнейшем. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода до 80-150 часов, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Определяют % уничтожения клеток по сравнению с контрольной несущей средой самой по себе (соответствует 100%).

[0704] Фиг.23A показывает результаты для цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от иллюстративного донора после предварительной обработки в течение 7 дней, 14 дней или 21 дня. Как показано, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом в течение 7 дней или 14 дней, демонстрируют более высокую цитолитическую активность по сравнению с клетками, которые не инкубируют предварительно в присутствии леналидомида. У этого донора, наблюдают общее уменьшение эффективности уничтожения для Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом в течение 14 или 21 дней, по сравнению с днем 7. У донора наблюдают сходные воздействия по цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после предварительной обработки леналидомидом в течение 7 или 14 дней; цитолитическую активность после 21 дня после предварительной обработки леналидомидом у этого донора не оценивают. Как показано на Фиг.23B, повышенную эффективность уничтожения у Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA наблюдают для этого донора, для тех клеток, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом во все моменты времени.

Пример 12 Воздействия леналидомида на экспрессирование PD-1 и на передачу сигналов PD-L1

[0705] Т-лимфоциты CAR анти-BCMA генерируют из образцов материала, полученных от репрезентативных здоровых доноров или от пациента с множественной миеломой, и культивируют вместе с 50 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков (генерируемых, как описано в Примере 9) при отношении шарики : Т-лимфоциты CAR+ 1:1 в течение 7 дней, в присутствии 1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Экспрессирование CD25, PD-1, Tim3 и Lag3 на Т-лимфоцитах CAR (используя антитело вместо суррогатного маркера CAR), культивируемых при различных условиях, оценивают затем с помощью проточной цитометрии.

[0706] Такие Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, предварительно стимулируемые шариками в присутствии или в отсутствие леналидомида, или свежеоттаявшие Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, генерируемые из сравнимых образцов от доноров, отделяют затем от шариков, промывают и культивируют вместе с целевыми клетками RPMI-8226 (мечеными NucLight Red (NLR), чтобы сделать возможным их отслеживание с помощью микроскопии), в присутствии 1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Конкретно, для предварительно обработанных клеток, предварительную обработку которых осуществляют в присутствии леналидомида, клетки культивируют вместе с целевыми клетками в присутствии леналидомида; подобным же образом, для предварительно обработанных клеток, предварительную обработку которых осуществляют в присутствии несущей среды, клетки культивируют вместе с целевыми клетками в присутствии несущей среды. После сокультивирования, цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода семи дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции. Процент уничтожения нормируют на Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, предварительно стимулируемые на шариках в присутствии несущей среды. Продуцирование цитокинов оценивают с помощью ELISA из супернатанта после культивирования вместе с целевыми клетками в течение 24 часов. Эксперименты осуществляют дважды на 3 донорах. Модели с линейным фиксированным воздействием или модели со смешанным воздействием используют для оценки значимости обработки леналидомидом для цитолитической активности и продуцирования цитокинов, при этом обработка, донор и время рассматриваются как фиксированные воздействия, а животное рассматривается как случайное воздействие, вложенные с помощью времени, когда повторяющиеся измерения получают от одного и того же животного. Значения P получают с помощью тестов отношения вероятностей, сравнивающих полную модель с воздействием, представляющим интерес, и модель без воздействия, представляющего интерес.

[0707] Фиг.24A показывает результаты для антиген-специфичной цитолитической активности CAR и Фиг.24B показывает результаты для продуцирования цитокинов для Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые предварительно стимулируют с шариками BCMA, (по сравнению со свежеоттаявшими (не стимулируемыми предварительно) Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA) в сокультурах, сравнивающие клетки, культивируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида. Предварительно стимулируемые Т-лимфоциты CAR показывают пониженную цитолитическую активность (P=2,1×10^-4) и продуцирование цитокинов (P=0,03 для IFN-γ) по сравнению со свежеоттаявшими Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA. В отсутствие леналидомида при предварительной обработке и последующем сокультивировании, предварительно стимулируемые Т-лимфоциты CAR демонстрируют уменьшенное уничтожение клеток и продуцирование цитокинов по сравнению со свежими Т-лимфоцитами CAR, показывая, что хроническое предварительное стимулирование ведет к функциональному ослаблению. Эти результаты согласуются с фенотипом, подобным истощенному, который вызывается предварительным стимулированием на BCMA-конъюгированных шариках. Присутствие леналидомида в ходе периода предварительного стимулирования сохраняет цитолитическую функцию (P=0,04), и имеется тренд к увеличению продуцирования цитокинов по сравнению с клетками, экспонируемыми для несущей среды в ходе периода предварительного стимулирования (Фиг.24B). Присутствие леналидомида в этом анализе согласуется с тем наблюдением, что леналидомид может уменьшить воздействия, указывающие на фенотип, подобный функциональному истощению, у предварительно стимулируемых Т-лимфоцитов CAR.

[0708] Как показано на Фиг.24C, оценивают фенотип Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, стимулируемых в течение 7 дней на шариках BCMA, и добавление леналидомида значительно увеличивает жизнеспособность CAR+ материала T-лимфоцитов CAR анти-BCMA для 3 здоровых доноров (P=0,04). Добавление леналидомида не изменяет общий отсчет клеток для всех доноров в этот 7-дневный период, и не наблюдается значительных различий в проценте CAR+ между Т-лимфоцитами CAR, обработанными несущей средой и леналидомидом. Фиг.24D показывает репрезентативные результаты проточного цитометрического анализа поверхностного экспрессирования CD25 и PD-1 (средняя интенсивность флуоресценции (MFI), для T-лимфоцитов CAR анти-BCMA CD4+ или CD8+ после стимулирования (предварительной обработки) шариками BCMA в течение 7 дней, в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида. Как показано, результаты указывают на то, что леналидомид уменьшает экспрессирование PD-1 Т-лимфоцитами CAR BCMA, увеличивая при этом экспрессирование CD25 после пролонгированного стимулирования. Как показано на Фиг.24E, проточный цитометрический анализ для трех доноров CAR T показывает, что добавление леналидомида увеличивает поверхностное экспрессирование Tim3 в популяции CD8+ (P=4,0 × 10-4), при смешанных воздействиях на популяцию CAR+ CD4+. Среди всех доноров и в обеих популяциях CAR+, как CD4+, так и CD8+, леналидомид повышает уровень CD25 (CD4+ и CD8+; P=2,2 × 10^-16) и процент положительных по экспрессированию Lag3 (CD8+, P<0,03; CD4+, P=0,002). Заметим, что наблюдается также уменьшение процента клеток PD-1+ в популяции CD4+ (P=0,04), при этом 2 из 3 доноров также показывают уменьшение в популяции CD8+.

[0709] В другом исследовании, шарики конъюгированные с рекомбинантным BCMA человека, используют для стимулирования Т-лимфоцитов CAR при различных концентрациях, для титрования величины стимулирования, либо низкого (5 мкг/мл), либо среднего (50 мкг/мл), либо высокого (200 мкг/ мл) стимулирования. При условиях среднего стимулирования, измеряют продуцирование секретируемых цитокинов через 24 часа после стимулирования и наблюдают 200% увеличение концентраций IL-2 и TNF-α по сравнению с контрольной несущей средой, при зависимом от донора увеличении уровня IFN-γ (Фиг.25A). Клетки стимулируют BCMA-конъюгированными шариками в течение 24 часов в присутствии 0,1 мкМ или 1,0 мкМ леналидомида, или контрольной несущей среды. Ингибитор переноса белка добавляют в последние часы инкубирования и клетки окрашивают для внутриклеточного IL-2, IFN-γ и TNF-α.

[0710] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, активируемые на шариках BCMA, показывает зависимое от уровня стимулирования воздействие на продуцирование цитокинов, при этом 5-мкг шарики BCMA вызывают ограниченное продуцирование эффекторных цитокинов CAR T по сравнению с 50-мкг и 200-мкг шариками BCMA (Фиг.25B). Леналидомид повышает процент внутриклеточного окрашивания IFN-γ⁺ и TNF-α⁺ на всех уровнях стимулирования для Т-лимфоцитов CAR, как CD4+, так и CD8+. Величина стимулирования либо повышает, либо понижает IL-2 в ответ на леналидомид, при этом леналидомид уменьшает процент Т-лимфоцитов CAR+ IL-2⁺ при 50-мкг и 200-мкг при стимулировании, но увеличивает процент Т-лимфоцитов CAR+ IL-2⁺ при условиях 5-мкг стимулирования. В отсутствие стимулирования, леналидомид не оказывает воздействия на продуцирование цитокинов CAR T, показывая, что усиление продуцирования цитокинов, обеспечиваемое леналидомидом, требует стимулирования.

[0711] В другом исследовании, чтобы узнать, перекрывает ли индуцируемое леналидомидом потенциирование активирования CAR T и продуцирование цитокинов пересилить PD-L1-медиируемое ингибирование, клетки культивируют в присутствии шариков BCMA, генерируемых, как описано в Примере 9, с дополнительным конъюгированием рекомбинантного PD-L1-Fc человека или без него. Т-лимфоциты CAR, полученные от здоровых доноров или пациентов, стимулируют в присутствии BCMA-конъюгированных шариков или BCMA/PD-L1-конъюгированных шариков в течение 24 часов в присутствии 1 мкМ леналидомида. Измеряют продуцирование цитокинов в супернатанте. Результаты показаны на Фиг.25C. Как показано на Фиг.25C, оценки Т-лимфоцитов CAR, как от здоровых доноров, так и от пациентов, демонстрируют, что добавление рекомбинантного PD-L1 к рекомбинантным шарикам BCMA уменьшает уровень IFN-γ, IL-2 и TNF-α. Показано, что обработка леналидомидом потенциирует уровни секретируемых цитокинов выше уровней от Т-лимфоцитов CAR, обработанных несущей средой в присутствии PD-L1. Результаты согласуются с тем выводом, что продуцирование цитокинов CAR-T анти-BCMA после инкубирования вместе с BCMA-конъюгированными шариками повышает уровень леналидомида в присутствии PD-L1-медиируемого ингибирования.

Пример 13 Анализ экспрессирования генов и доступности хроматина в Т-лимфоцитах CAR в присутствии или в отсутствие леналидомида

[0712] Оценивают экспрессирование генов и доступность хроматина в Т-лимфоцитах CAR при стимулировании в присутствии или в отсутствие леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-BCMA, генерируемые от четырех (4) различных независимых доноров, стимулируют 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков в течение 24 часов (24 час+stim) или 7 дней (d7+stim), или культивируют без стимулирования в течение 24 часов (24 час), в присутствии или в отсутствие леналидомида (1 мкМ). Эксперименты осуществляют дважды на 3-4 донорах. CAR-экспрессирующие клетки оценивают с помощью секвенирования RNA (RNA-seq) на экспрессирование генов и анализируют на транспозаза-доступный хроматин, используя секвенирование (ATAC-seq) для анализа доступности хроматина. Анализы осуществляют на 50000 клеток в каждый момент времени.

[0713] RNA-seq осуществляют на комплементарных образцах ДНК (cDNA), приготовленных из RNA, выделенных из культивируемых CAR-экспрессирующих клеток анти-BCMA. ATAC-seq осуществляют, в целом, как описано в Buenrostro et al., Nat Methods. (2013) 10(12): 1213-1218. Считываемые фрагменты ATAC со спаренными концами обрезают, выравнивают с помощью Bowtie2 и фильтруют по качеству, длине фрагмента, дупликации и митохондриальному вкладу. Пики доступности ATAC-seq определяют с использованием MACS2 (q<0,01), и консенсусную панель генерируют из перекрывающихся пиков, присутствующих в 2 или более образцах, используя DiffBind. Анализ главных компонентов (PCA) осуществляют для наборов данных RNA-seq и ATAC-seq, генерируемых из DESeq2-нормированных отсчетов. Вычисляют дифференциальное экспрессирование (DE, для RNA-seq) или доступность консенсусных пиков (DA, для ATAC-seq), моделирующее воздействия доноров (Доноры 1-4) и воздействие обработки (леналидомид по сравнению с несущей средой) через 24 часа и в день 7. Дифференциальный порог выбора локуса соответствует q≤0,05 и log2-кратному изменению ≥0,5 для RNA-seq или q≤0,1 для ATAC-seq. Осуществляют анализ обогащения согласно генной онтологии (GO), и z-оценку активирования определяют на подмножестве генов, дифференциально экспрессируемых при q<0,1, с использованием Ingenuity Pathway Analysis software (Qiagen, Inc.), учитывая воздействия донора в пределах каждого условия обработки. Анализ обогащения мотивов осуществляют для пиков, которые, как показано, являются более доступными в присутствии леналидомида, с помощью программного обеспечения HOMER, с использованием консенсусного множества пиков в качестве фона, для данных ATAC-seq при стимулировании в день 7 (d7+stim).

[0714] Тепловые карты RNA-seq генерируют на нормированных (транскрипты на миллион) данных экспрессирования, усредненных по донорам на одно условие, и нормируют по строкам с использованием z-оценок. Обогащение мотивов в пиках DA в день 7 осуществляют с помощью HOMER, используя консенсусные множества пиков в качестве фона.

[0715] Результаты PCA, представляющее общее разнообразие экспрессирования генов или доступности хроматина на геноме, показаны на Фиг.26A (экспрессирование гена; на основе результатов RNA-seq) и Фиг.26B (доступность хроматина; на основе результатов ATAC-seq). Эллипсы вычерчены для указания таких групп, как это наблюдается, что главные факторы, которые вносят вклад в разброс экспрессирования генов или доступности хроматина, представляют собой время культивирования и присутствие стимулирования. Клетки, культивируемые в присутствии леналидомида (кружочки), демонстрируют отличающееся общее экспрессирование генов и доступность хроматина по сравнению с клетками, культивируемыми в отсутствие леналидомида (треугольники, несущая среда), они показывают воздействие обработки леналидомидом для каждого донора и условия культивирования. Для обработки леналидомидом, общее направление изменений (показанное точечной линией между треугольником и кружочком) является сходным для каждого донора, и степень изменения, как правило, больше у клеток, культивируемых в течение 7 дней при стимулировании, по сравнению с изменениями у клеток, культивируемых в течение 24 часов, при стимулировании или без него. Таким образом, PCA демонстрирует кластеризацию на основе стимулирования (stim или no stim) и времени (24 часа или 7 дней) для обоих наборов данных, как RNA-seq (Фигура 26A), так и ATAC-seq (Фигура 26B).

[0716] Затем исследуют роль леналидомида через 24 часа или через 7 дней стимулирования после учета разброса между донорами. Фигуры 27A-27D показывают изменения экспрессирования генов (Фигуры 27A и 27B, после 24 часов и 7 дней культивирования при стимулировании, соответственно) или доступности хроматина (Фигуры 27C и 27D, после 24 часов и 7 дней культивирования при стимулировании соответственно) в присутствии леналидомида. Анализ RNA-seq показывает ап-регулирование небольшого набора генов (214) через 24 часа, и в присутствии леналидомида изменяется большее количество генов (583) через 7 дней стимулирования (Фигуры 27A и 27B). Анализ ATAC-seq показывает ограниченный набор изменений доступности хроматина, связанный с обработкой леналидомидом через 24 часа стимулирования, с драматическими изменениями профиля и увеличением количества сайтов с изменениями доступности хроматина (изменения доступности хроматина в 2804 пиках) через 7 дней стимулирования в присутствии леналидомида (Фигуры 27C и 27D). Эти результаты показывают, что обработка леналидомидом изменяет как транскрипционный, так и эпигенетический профиль Т-лимфоцитов CAR.

[0717] Для дополнительной идентификации конкретных транскрипционных изменений, связанных с обработкой леналидомидом, анализ онтологии генов применяют к набору данных RNA-seq и идентифицируют пути передачи биологических сигналов, которые обогащены дифференциально экспрессируемыми генами (Фигуры 28A и 28B). Направленность и значимость воздействий на биологические пути показаны через 24 часа (Фиг.28A) или через 7 дней (Фиг.28B). Результаты показывают, что присутствие леналидомида дает в результате увеличение экспрессирования генов, вовлеченных в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов. Результаты показывают, что пути, дифференциально регулируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида, показывают обогащение генов, связанных с иммунными синапсами генов, вовлеченных в передачу сигналов цитокинов, и генов, вовлеченных в пути активирования Т-лимфоцитов. Конкретно, пути, связанные с хемотаксисом T-лимфоцитов (экстравазация лейкоцитов, интегрин, ILK и наборы CXCR4-ассоциированных генов), внутриклеточная передача сигналов и цитоскелет (Rac/Rho/Cdc42) ап-регулируются в присутствии леналидомида в пределах 24 часов стимулирования по сравнению с контрольной несущей средой. В дополнение к этому, эти данные поддерживают увеличение в связанных с ICOS путях передачи сигналов - данные, которые согласуются с предыдущими публикациями, демонстрирующими увеличение уровней ICOS и ICOSL в популяции мононуклеаров периферической крови CD3+, обрабатываемой леналидомидом ex vivo (Gorgun et al. (2010) Blood, 116:3227-3237). Через 7 дней стимулирования, леналидомид ап-регулирует пути, связанные с реакцией Th1 T-лимфоцитов и состимулированием, в то же время, уменьшая сигнатуры Th2-ассоциированных генов.

[0718] Для выбранного подмножества генов, включая гены, вовлеченные в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов, изменения экспрессирования генов и доступности хроматина в присутствии леналидомида сравнивают для клеток, культивируемых в течение 7 дней при стимулировании, чтобы определить, коррелирует ли доступность хроматина с транскрипцией. Фиг.29 показывает индивидуальные пики доступности хроматина (ромбики) и среднее изменение доступности хроматина для каждого гена (кружочки) на графике зависимости от соответствующих изменений экспрессирования гена, измеренных с помощью RNA-seq, показывающем соответствие сигнала в этих двух способах. Для доноров наблюдают значительное увеличение доступности хроматина среди множества локусов, ассоциированных с IFN-γ и IL-2RA (CD25), и эти изменения коррелируют со значительным увеличением транскрипции. Важно, что ап-регулирование IFN-γ и CD25 поддерживает предыдущие данные экспериментов по хроническому стимулированию. В дополнение к этому, наблюдают также уменьшение доступности хроматина и транскрипции гена в CD69 и CCR7 при обработке леналидомидом.

[0719] Анализируемый набор данных ATAC-seq для обогащения мотивов и результаты анализа обогащения мотивов для пиков с повышенной доступностью в присутствии леналидомида в 7-дневных культурах показаны на Фиг.30. Мотивы, как предсказано, связывают различные факторы транскрипции, как понимается, вовлеченные в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов, включая AP-1/Jun и ядерный фактор κB, обогащены пиками с повышенной доступностью в присутствии леналидомида. Результаты согласуются с повышением функциональной активности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в присутствии леналидомида.

[0720] Без желания ограничиваться теорией, исследования RNA- и ATAC-seq дают в результате ряд правильных представлений относительно возможных механизмов индуцируемых леналидомидом повышений функции CAR T. Во-первых, количество транскрипционных изменений и изменений доступности хроматина, связанных со стимулированием и временем, сравниваются в основном с воздействиями леналидомида, указывая на относительно тонкое воздействие леналидомида на транскрипционные сети. Во-вторых, изменения, связанные с леналидомидом, являются очень широкими, включая ранние изменения в транскриптах, связанные с восстановлением цитоскелета и хемотаксисом. После хронического стимулирования появляется отличающаяся транскрипционная сигнатура, которая включает уменьшение количества транскриптов, связанных с реакцией Th2, контрольной точкой G2/M и ATM, вместе с увеличением Th1, пероксисомным пролифератор-активируемым рецептором γ и генами, связанными с актиновым цитоскелетом. Эти воздействия могут поддерживать роль обработки леналидомидом и контроля клеточного цикла и активирования T-лимфоцитов. Предыдущие исследования продемонстрировали также воздействия IMiD на Th1- и Th2-связанные сигнатуры, а также на изменения элементов, связанных с восстановлением цитоскелета и миграцией T-лимфоцитов. Демонстрируемые ранние изменения продуцирования цитокинов под действием леналидомида могут вносить вклад в изменение состояния T-лимфоцитов, то есть способны усилить одновременно как функцию памяти, так и эффекторную функцию. В целом, эти результаты говорят, что дополнительные факторы, кроме тех, о которых сообщалось ранее, вовлечены в индуцируемую леналидомидом пролонгацию функции CAR T, включая возможные изменения контроля клеточного цикла.

[0721] Применение ATAC-seq дает дополнительные правильные представления относительно потенциальных механизмов действия леналидомида. Хотя, как стимулирование, так и время представляют собой одни из главных движущих сил изменений доступности хроматина, обработка леналидомидом связана с увеличением доступности хроматина в локусах, обогащенных мотивами, связанными с активированием и функцией T-лимфоцитов, после хронического стимулирования. Эти эпигенетические изменения совпадают с замеченными функциональными изменениями Т-лимфоцитов CAR, инкубируемых вместе с леналидомидом. Изменения в сигнатурах доступности хроматина связаны с истощением Т-лимфоцитов и могут представлять собой более стойкий показатель истощения по сравнению с поверхностным экспрессированием лигандов Т-лимфоцитов. Эти данные демонстрируют, что хроническое стимулирование леналидомидом дает в результате увеличение доступности хроматина и экспрессирования генов IL-2 и CD25 и уменьшение экспрессирования генов и доступности хроматина CCR7 и CD69. Предыдущие исследования говорят о том, что CCR7-экспрессирующие клетки продуцируют более высокие уровни IL-2; однако современные исследования показывают, что путь IL-2 мог бы быть изменен независимо под действием леналидомида, что приводит в результате к альтернативному состоянию Т-лимфоцита. CD69, маркер активирования Т-лимфоцита, содержит элемент, чувствительный к ядерному фактору κB, который необходим для реакции CD69 на TNF-α. Закрывание CD69-ассоциированного хроматина и уменьшение количества транскриптов могут представлять собой реакцию на долговременное увеличение продуцирования TNF-α Т-лимфоцитами CAR, культивируемыми вместе с леналидомидом, или это может представлять собой реакцию T-лимфоцитов на повышенное активирование в присутствии леналидомида. Клетки, обработанные леналидомидом, демонстрируют увеличение обогащения мотива фактора транскрипции для факторов, связанных с активированием Т-лимфоцитов, поддерживая ту идею, что эти клетки экспонируются для передачи сигналов долговременного активирования. В целом, индуцированное леналидомидом состояние Т-лимфоцита CAR включает такие элементы, как функции эффекторного Т-лимфоцита, включая как увеличение продуцирования IFN-γ и TNF-α, так и функцию Т-лимфоцита, включая повышение уровня IL-2 и долговременную пролиферацию.

Пример 14 Оценка фармакодинамической реакции фактора транскрипции Ikaros в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах в присутствии соединения 1 или леналидомида

[0722] Композиции Т-лимфоцитов, содержащие CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19, генерируют из образцов лейкафереза от трех здоровых взрослых доноров людей с помощью способа, включающего селекцию Т-лимфоцитов на основе иммунноафинности (включая клетки CD4+ и CD8+) из образцов, полученных в результате в двух композициях, обогащенных клетками CD8+ и CD4+, соответственно. Клетки инкубируют в присутствии 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) или леналидомида и оценивают экспрессию фактора транскрипции Ikaros.

[0723] Клетки композиций, обогащенных CD4+ и CD8+, активируют по отдельности шариками анти-CD3/анти-CD28 и подвергают воздействию лентивирусной трансдукции с помощью вектора, кодирующего CAR анти-CD19. CAR анти-CD19 содержит scFv анти-CD19, полученный из антитела мышей (вариабельную область, полученную из FMC63), спейсер, полученный из иммуноглобулина, трансмембранный домен, полученный из CD28, костимуляторную область, полученную из 4-1BB, и внутриклеточный сигнальный домен CD3-зета. Конструкция экспрессии в вирусном векторе дополнительно содержит последовательности, кодирующие усеченный рецептор, который служит как суррогатный маркер для экспрессирования CAR, который выделяется из последовательности CAR с помощью рибосомальной перескакивающей последовательности T2A. Трансдуцированные популяции затем инкубируют по отдельности в присутствии стимулирующих реагентов для размножения клеток. Размноженные клетки CD8+ и CD4+ приготавливают и криоконсервируют по отдельности и хранят. Криоконсервированные CAR-экспрессирующие клетки анти-CD19 CD4+ и CD8+ от каждого донора оттаивают и объединяют при отношении CAR+ CD4+:CD8+ приблизительно 1:1 перед использованием.

[0724] Приблизительно 2,5×10⁵ клеток (Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) из генерируемой композиции Т-лимфоцитов CAR+ стимулируют в течение ночи реагентом специфичным к CAR, а затем клетки инкубируют вместе с леналидомидом (100 нМ - 10000 нМ), Соединением 1 (10 нМ - 3000 нМ) или контрольной несущей средой в течение ночи при 37°C, 5% CO₂. Оцениваемые концентрации Соединения 1 и леналидомида охватывают известные клинические C_max и C_min. После инкубирования, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 окрашивают антителами и анализируют с помощью проточной цитометрии для оценки поверхностного экспрессирования CD4, CD8 и суррогатного маркера для экспрессирования CAR, и внутриклеточных уровней Ikaros в клетках CAR+ CD4+ или CAR+ CD8+. Медианные значения интенсивности флуоресценции (MFI) для Ikaros нормируют и вычисляют как процент по отношению к контрольной несущей среде.

[0725] Как показано на Фиг.31, зависимое от концентрации уменьшение экспрессирования внутриклеточного Ikaros наблюдают как в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 CD4+, так и в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 CD8+, после инкубирования вместе с Соединением 1 или леналидомидом. Большее уменьшение экспрессирования Ikaros наблюдают в клетках в присутствии Соединения 1, по сравнению с леналидомидом. Значение EC50 для уменьшения экспрессирования Ikaros вычисляют, как определено по концентрации ингибитора, которая уменьшает MFI Ikaros до 50% от его максимального MFI в отсутствие ингибитора. Значения EC50 для Соединения 1 и леналидомида показаны в Таблице E5.

Таблица E5. EC50 (нМ) Ikaros в Т-лимфоцитах CAR+ CD4+ и Т-лимфоцитах CAR+ CD8+.

CD4+ CD8+ Леналидомид Соединение 1 Леналидомид Соединение 1 Донор 1 61,2 67 80,9 100,9 Донор 2 ND 41,5 ND 60,8 Донор 3 169,8 99,8 235,5 161,1

ND=не определено

Пример 15 Оценка функциональных воздействий на CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты после инкубирования вместе с целевыми клетками в присутствии Соединения 1 или леналидомида

[0726] Композиции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 (содержащие клетки CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14, и инкубируют вместе с целевыми клетками K562, трансдуцированными CD19 человека (K562.CD19), в присутствии 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) (при концентрации 10 нМ, 100 нМ, 500 нМ и 1000 нМ), леналидомида (при концентрации 100 нМ, 1000 нМ и 10000 нМ) или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO₂. Оценивают экспрессирование цитокинов, цитолиз целевых клеток и экспрессирование поверхностных маркеров CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19.

A. Продуцирование цитокинов

[0727] Для оценки продуцирования цитокинов, 1×10⁵ клеток CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) инкубируют вместе с целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1, как описано выше. Через 24 часа, супернатанты харвестируют и анализируют на продуцирование цитокинов IFN-γ, IL-2 и TNF-α.

[0728] Как показано на Фигурах 32A (Соединение 1) и 32B (леналидомид), продуцирование цитокинов увеличивается в присутствии Соединения 1 или леналидомида, соответственно, зависимым от концентрации образом по сравнению с контрольной несущей средой, при отношении E:T, как 5:1, так и 2,5:1. Имеются различия уровней цитокинов среди разных доноров. Обработка Соединением 1 дает в результате большее продуцирование цитокинов для множества условий по сравнению с обработкой леналидомидом при эквивалентных концентрациях. Увеличение является статистически значимым, как определено по увеличению продуцирования цитокинов в присутствии 100 нМ и 1000 нМ Соединения 1 по сравнению с эквивалентной концентрацией леналидомида при отношении E:T 2,5:1 и 5:1, как определено с использованием непарного параметрического t-теста с коррекцией Велша, смотри Таблицу E6 (P-значения при E:T 2,5:1/P-значения при E:T 5:1).

[0729] Таблица E6. Продуцирование цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19, обработанными Соединением 1 или леналидомидом.

Донор 1 Донор 2 Донор 3 Концентрация (нМ): 100 1000 100 1000 100 1000 IFN-γ ***/* */ns ns/ns ns/*** ***/*** ***/*** IL-2 **/* */* **/ ns/ns ns/* ns/ns TNF-α ***/* ***/*** **/ ***/*** **/* **/**

p ≤0,05 : *; p ≤0,01: **; p ≤0,001: ***; ns: не значимое

B. Цитолитическая функция

[0730] Для оценки цитолитической функции, 1×10⁵ или 5×10⁴ клеток CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) инкубируют вместе с 2×10⁴ целевых клеток K562.CD19 при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1 или контрольной несущей среды, как описано выше. Целевые клетки K562.CD19 трансдуцируют NucLight Red, чтобы сделать возможным их отслеживание с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потери жизнеспособных целевых клеток за период пять дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (используя IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Коэффициент гибели определяют с использованием формулы: 1/AUC, и коэффициент гибели нормируют на клетки CAR+, сокультивируемые с целевыми клетками, которые инкубируют вместе с контрольной несущей средой (установлено при уничтожении 100%).

[0731] Как показано на Фиг.33, Соединение 1 и леналидомид, как правило, оказывают ограниченное воздействие на цитолитическую функцию CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19. Когда CAR стимулируют в присутствии более высокого количества антигена, как присутствует в сокультурах, содержащих отношение E:T 2,5:1, Соединение 1 и леналидомид слегка уменьшают цитолитическую активность CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 у тех же доноров. Когда CAR стимулируют в присутствии меньшего количества антигена, как присутствует в сокультурах, содержащих отношение E:T 5:1, наблюдают небольшое, но консистентное увеличение цитолитической активности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 против целевых клеток по сравнению с клетками, которые инкубируют в присутствии высоких концентраций Соединения 1 или леналидомида для донора 2, в то время как для доноров 1 и 3воздействий не наблюдается.

C. Экспрессирование поверхностных маркеров T-лимфоцитов

[0732] Для оценки поверхностного экспрессирования различных маркеров Т-лимфоцитов, 1×10⁵ целевых клеток K562.CD19 инкубируют вместе с клетками CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоциты CD4+ и CD8+ объединенные при отношении 1:1) при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1 или контрольной несущей среды, как описано выше. Через 24 часа, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты окрашивают на CD3, CD4, CD8 и суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие поверхностные маркеры: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27 и LAG3.

[0733] Уровни экспрессирования выбранных маркеров на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ изменяются, как правило, меньше, чем двукратно, по отношению к сокультурам с контрольной несущей средой. Изменения экспрессирования маркеров в присутствии леналидомида или Соединения 1 являются зависимыми от донора, хотя для оцениваемых маркеров памяти экспрессирование CD45RO увеличивается и CD27 уменьшается для всех доноров и отношений E:T. Экспрессирование CD27 является даун-регулируемым зависимым от концентрации образом в ответ на Соединение 1 или леналидомид. Экспрессирование CD69 и LAG3 увеличивается зависимым от концентрации образом для клеток, полученных от донора 3, после инкубирования вместе с Соединением 1, но не после инкубирования полученных от этого же донора клеток CAR+ вместе с леналидомидом. Экспрессирование других оцениваемых маркеров активирования остается неизменным у доноров, обработанных леналидомидом или Соединением 1. Результаты согласуются с тем наблюдением, что Соединение 1 и леналидомид имеют потенциал для собственного модулирования фенотипов раннего активирования CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов.

Пример 16 Оценка продуцирования цитокинов и экспрессирования поверхностного маркера CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами после стимулирования анти-идиотипическим антителом в присутствии Соединения 1 или леналидомида

[0734] Исследования сходные с описанными в Примере 15 осуществляют для оценки продуцирования цитокинов и экспрессирования поверхностного маркера после CAR-зависимого стимулирования CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в присутствии или 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) или леналидомида, за исключением того, что CAR-экспрессирующие клетки стимулируются анти-идиотипическим антителом. Анти-идиотипическое антитело используют для моделирования различных уровней стимулирования в сокультурах, что, как правило, невозможно с помощью целевых клеток K562.CD19, поскольку экспрессирование антигена является однородно высоким на клетках K562.CD19.

[0735] Композиции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 (содержащих Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14. Приблизительно 1×10⁵ CAR-экспрессирующих клеток добавляют в лунки 96-луночного планшета, который предварительно покрывают анти-идиотипическим антителом специфичным к scFv CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, при концентрации 0, 0,3, 3 и 30 мкг/мл. Клетки культивируют в присутствии Соединения 1 (при концентрации 100 нМ и 1000 нМ), леналидомида (при концентрации 500 нМ и 5000 нМ) или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO₂. Оценивают экспрессирование цитокинов и экспрессирование поверхностных маркеров CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19.

A. Продуцирование цитокинов

[0736] Супернатанты стимулируемых культур харвестируют через 24 часа и анализируют на продуцирование цитокинов. На Фигурах 34A и 34B, уровень продуцирования цитокинов в отсутствие Соединения 1 или леналидомида (контрольная несущая среда) показан штриховой линией. Как показано на Фигурах 34A и 34B, продуцирование IFN-γ, IL-2 и TNF-α повышается по сравнению с контрольной несущей средой после обработки Соединением 1 или леналидомидом, соответственно. Повышение является особенно очевидным при промежуточном уровне стимулирования с помощью 3 кг/мл анти-идиотипического антитела.

B. Экспрессирование поверхностных маркеров T-лимфоцитов

[0737] Экспрессирование поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 оценивают через 4 дня в культуре при различных концентрациями анти-идиотипического антитела в присутствии Соединения 1 или леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты окрашивают на CD3, CD4, CD8 и суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие маркеры: CD25, PD-1 и CD69.

[0738] Фигуры 35A и 35B показывают экспрессирование клеточного поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+, соответственно, на клетках, стимулируемых в присутствии Соединения 1, а Фигуры 36A и 36B показывают экспрессирование клеточного поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+, соответственно, на клетках, стимулируемых в присутствии леналидомида. На фигурах, уровень экспрессирования поверхностного маркера в отсутствие Соединения 1 или леналидомида (контрольная несущая среда) показан штриховой линией. Как показано, повышение уровня поверхностных маркеров CD25 и CD69 наблюдается в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ в присутствии Соединения 1 или леналидомида в некоторых полученных от доноров CAR-экспрессирующих клетках, и оно зависит от величины стимулирования с помощью CAR. Экспрессирование PD-1 также увеличивается в присутствии Соединения 1 или леналидомида в клетках, генерируемых, по меньшей мере, от одного донора, хотя, уровни PD-1 неизменны или понижаются в клетках, генерируемых от других доноров. Повышение экспрессирования суррогатного маркера для экспрессирования CAR наблюдают после добавления Соединения 1 или леналидомида при субоптимальной дозе анти-идиотипического антитела 0,3 мкг/мл, но при более высоких концентрациях анти-идиотипического антитела экспрессирование суррогатного маркера остается неизменным или уменьшается.

Пример 17 Оценка экспрессирования поверхностного маркера и потенциала размножения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов после серийного стимулирования в присутствии Соединения 1 или леналидомида

[0739] Серийное стимулирование CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 осуществляют для оценки кратковременных и долговременных воздействий 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) и леналидомида. Композиции CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов анти-CD19 (содержащих Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14. Генерируемые сочетания Т-лимфоцитов CAR+ добавляют как 1×10⁵ клеток на лунку в 96-луночный планшет и инкубируют с облученными положительными по красной флуоресценции целевыми клетками K562.CD19 в присутствии Соединения 1, леналидомида или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO₂ при двух различных отношениях эффекторных и целевых клеток (E:T) 10:1 и 2,5:1. Инкубирование осуществляют в присутствии Соединения 1 (10, 100 или 500 нМ), леналидомида (100 или 1000 нМ) или контрольной несущей среды. Клетки считают каждые 3-4 дня (начиная с каждым новым заходом). Затем клетки харвестируют и повторно инокулируют при 1×10⁵ CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 со свежими средами, свежедобавляемым Соединением 1 или леналидомидом при такой же концентрации, и со свежеоблученными целевыми клетками K562.CD19. Это повторяют в течение 7 заходов серийного стимулирования, и клетки оценивают в различные моменты времени на экспрессирование поверхностного маркера, цитолитическую активность и потенциал размножения.

A. Экспрессирование поверхностных маркеров

[0740] Экспрессирование выбранных поверхностных маркеров оценивают на клетках в день 4 (то есть, через 4 дня после первого стимулирования) и день 28 (то есть, через 4 дня после седьмого стимулирования). Конкретно, харвестированные клетки анализируют с помощью проточной цитометрии на CD3, CD4, CD8 и на суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие поверхностные маркеры: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27 и LAG3.

[0741] Изменения в оцениваемых поверхностных маркерах на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+ после инкубирования с помощью Соединения 1 и леналидомида по-разному наблюдаются у всех доноров и при разных отношениях E:T, хотя изменения экспрессирования являются более выраженными в день 28 по сравнению с днем 4. В день 4, CD25 и LAG3 ап-регулируют для всех трех доноров в ответ на обработку Соединением 1 или леналидомидом, при этом большее уменьшение наблюдается на клетках из дня 28 по сравнению с днем 4. CCR7, как правило, уменьшается в день 28 для всех групп обработки, что согласуется с той возможностью, что инкубирование вместе с целевыми клетками в присутствии Соединения 1 или леналидомида может сдвигать продукт Т-лимфоцитов в направлении фенотипа, связанного со статусом терминального дифференцированного эффектора. PD-1 даун-регулируется до некоторой степени у всех доноров и при обоих отношениях E:T на клетках в день 4 и в день 28 после обработки Соединением 1 или леналидомидом, при этом большее даун-регулирование происходит на клетках в день 28. Как показано на Фигурах 37A и 37B, экспрессирование CD28 уменьшается зависимым от дозы образом в присутствии повышающихся концентраций Соединения 1 и леналидомида, соответственно, на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах, как CD4+, так и CD8+, от всех трех доноров. Вместе, изменения поверхностных маркеров в день 28 по сравнению с днем 4 согласуются со способностью Соединения 1 и леналидомида влиять на Т-лимфоциты CAR+ после долговременной обработки.

B. Цитолитическая функция

[0742] В день 24 после серийного стимулирования, оценивают цитолитическую активность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, в целом, как описано в Примере 15B. Как показано на Фиг.38, долговременная обработка, как Соединением 1, так и леналидомидом, может увеличивать цитолитическую активность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19.

C. Размножение

[0743] Для оценки воздействия Соединения 1 и леналидомида на потенциал размножения Т-лимфоцитов CAR+, считают количества клеток CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 после каждого захода стимулирования и вычисляют удвоения клеток.

[0744] Как показано на Фиг.39A, при отношении E:T 2,5:1, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19, обработанные Соединением 1 при концентрации 500 нМ, имеют отсчеты клеток сравнимые с группой, обработанной контролем, до 3-4 заходов стимулирования для всех доноров. Сходные результаты наблюдают при отношении E:T 10:1 для двух доноров. При более высокой концентрации Соединения 1 500 нМ, количество удвоений клеток CAR+ при последующих заходах ниже, чем в контрольных группах без обработки. В противоположность этому, после 24 дней обработки Соединением 1 при более низких концентрациях 10 нМ и 100 нМ, отсчеты клеток CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 выше, чем для необработанных контролей от двух из трех доноров (Фиг.39B).

[0745] Как показано на Фиг.40A, при отношении E:T 2,5:1 в клетках, обработанных 1000 нМ леналидомида, более низкие удвоения клеток наблюдаются только у двух доноров и не до более поздних заходов стимулирования. Этот результат показывает некоторые различия активности Соединения 1 и леналидомида, поскольку 500 нМ Соединения 1 уменьшают отсчеты клеток для всех доноров при этом отношении E:T. При отношении E:T 10:1, наблюдают уменьшение удвоений клеток после 3-4 заходов стимулирования в присутствии 1000 нМ леналидомида, для клеток, генерируемых от всех доноров (Фиг.40A). Как показано на Фиг.40B, обработка леналидомидом при более низкой концентрации 100 нМ увеличивает отсчеты T-лимфоцитов CAR+ для двух из трех доноров.

[0746] Результаты согласуются с тем наблюдением, что пролонгированная обработка CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов Соединением 1 или леналидомидом при физиологически релевантных концентрациях может увеличить долговременный потенциал пролиферации CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в то время как более высокие концентрации могут быть вредными для долговременных характеристики

Пример 18 Оценка противоопухолевой эффективности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в сочетании с Соединением 1 in vivo

[0747] Противоопухолевую эффективность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в сочетании с Соединением 1 оценивают посредством мониторинга опухолей в модели ксенотрансплантата опухоли. Композиции CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов анти-CD19, содержащие Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1, генерируют, по существу, как описано в Примере 1. Композиции Т-лимфоцитов генерируют от трех разных доноров.

[0748] Мышам NOD.Cg.Prkdc^scidIL2rg^tm1Wjl/SzJ (NSG) делают внутривенную инъекцию (i.v.) с 0,5×10⁶ клеток опухоли лимфомы Раджи (иммортализованная линия клеток опухоли B лимфоцитов человека, которая экспрессирует CD19), которые трансфицированны люциферазой светлячков (Raji-ffluc). Дают возможность для приживления опухоли в течение 6 дней и проверяют его с использованием биолюминесцентных изображений. В День 7, мыши либо не получают лечения, либо получают одну внутривенную (i.v.) инъекцию CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 при низкой дозе (0,5×10⁶ клеток) или при высокой дозе (1,0×10⁶ клеток). В одной исследуемой группе (обозначенной “одновременная), мышам вводят 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион (Соединение 1) при дозе 0,3 мг/кг или контрольную несущую среду посредством внутрибрюшинной инъекции за один день перед введением CAR-экспрессирующих клеток (день 6), которую продолжают делать раз в день в течение всего исследования. Во второй группе (обозначенной как “отсроченная”), мышам вводят либо контрольную несущую среду, либо 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион (Соединение 1) при дозе 0,3 мг/кг посредством внутрибрюшинной инъекции, начиная с дня 14, что происходит после пика размножения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и введение продолжают раз в день в течение всего исследования. Массу опухоли оценивают с помощью биолюминесценции каждые 10 дней. Для получения биолюминесцентных изображений, мыши получают внутрибрюшинные (i.p.) инъекции субстрата люциферина (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA), повторно суспендированного в PBS (15 мкг/г массы тела). Определяют среднюю интенсивность излучения (фотоны/сек/см²/стереорадиан).

[0749] В этом исследовании, сочетание с Соединением 1, согласно наблюдениям, уменьшает массу опухоли и улучшает данные по выживаемости, как в группе “одновременно”, так и в “отсроченной” группе, по сравнению с введением CAR-экспрессирующих клеток самих по себе.

[0750] Настоящее изобретение, как предполагается, не ограничивается рамками конкретных описанных вариантов осуществления, которые приводятся, например, для иллюстрации различных аспектов настоящего изобретения. Различные модификации описанных композиций и способов станут очевидными из описания и концепции настоящего документа. Такие варианты могут осуществляться без отклонения от истинных рамок и духа настоящего описания и, как предполагается попадают в рамки настоящего описания.

Список последовательностей

SEQ ID NO. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ОПИСАНИЕ 1 ESKYGPPCPPCP Спейсер (шарнир IgG4) (aa)
Homo sapiens 2 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT Спейсер (шарнир IgG4) (nt)
Homo sapiens 3 ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Шарнир-спейсер CH3
Homo sapiens 4 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Шарнир-спейсер CH2-CH3
Homo sapiens 5 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSL
WNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH IgD-шарнир-Fc
Homo sapiens 6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR Искуственная T2A 7 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Искуственная tEGFR 8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (аминокислоты 153-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens 9 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (аминокислоты 114-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens 10 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (аминокислоты 180-220 из P10747)
Homo sapiens 11 RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL - GG)
Homo sapiens 12 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB (аминокислоты 214-255 из Q07011,1)
Homo sapiens 13 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens 14 RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens 15 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens 16 PGGG-(SGGGG)5-P-, где P представляет собой пролин, G представляет собой глицин и S представляет собой серин Линкер 17 GSADDAKKDAAKKDGKS Линкер 18 MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA Внеклеточный домен BCMA человека (GenBank No. NP_001183,2) 19 GGGGS Линкерная последовательность 20 PKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Fc модифицированного IgG1 человека 21 MPLLLLLPLLWAGALA Сигнальный пептид CD33 22 MPLLLLLPLLWAGALAMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAGGGGSPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Конструкция BCMA-Fc 23 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A 24 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 25 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 26 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A 27 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A 28 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Искуственная
tEGFR 29 ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Шарнир-спейсер CH2-CH3
Homo sapiens 30 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 31 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 32 QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSA Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 33 DVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 34 EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 35 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 36 EVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 37 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 38 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 39 LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 40 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 41 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 42 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 43 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) Анти-BCMA 44 DYGVS FMC63 CDR H1 45 VIWGSETTYYNSALKS FMC63 CDR H2 46 YAMDYWG FMC63 CDR H3 47 HYYYGGSYAMDY FMC63 HC-CDR3 48 RASQDISKYLN FMC63 CDR L1 49 SRLHSGV FMC63 CDR L2 50 HTSRLHS FMC63 LC-CDR2 51 GNTLPYTFG FMC63 CDR L3 52 QQGNTLPYT FMC63 LC-CDR3 53 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS FMC63 V_H 54 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT FMC63 VL 55 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS FMC63 scFv 56 KASQNVGTNVA SJ25C1 CDR L1 57 SATYRNS SJ25C1 CDR L2 58 QQYNRYPYT SJ25C1 CDR L3 59 SYWMN SJ25C1 CDR H1 60 QIYPGDGDTNYNGKFKG SJ25C1 CDR H2 61 KTISSVVDFYFDY SJ25C1 CDR H3 62 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSS SJ25C1 V_H 63 DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR SJ25C1 VL 64 GGGGSGGGGSGGGGS Линкер 65 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR SJ25C1 scFv 66 HYYYGGSYAMDY FMC63 HC-CDR3 67 HTSRLHS FMC63 LC-CDR2 68 QQGNTLPYT FMC63 LC-CDR3 69 gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc Последовательность, кодирующая scFv 70 GSTSGSGKPGSGEGSTKG Линкер 71 GGGS Линкер 72 GGGGSGGGGSGGGGS Линкер 73 GSTSGSGKPGSGEGSTKG Линкер 74 SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA Линкер 75 MALPVTALLLPLALLLHAARP Сигнальный пептид CD8a 76 METDTLLLWVLLLWVPGSTG Сигнальный пептид 77 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 78 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 79 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 80 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 81 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 82 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 83 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 84 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 85 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) Анти-BCMA 86 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) Анти-BCMA 87 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 88 DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 89 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 90 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 91 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 92 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 93 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 94 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 95 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 96 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 97 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 98 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 99 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 100 DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 101 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 102 DIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 103 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 104 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 105 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 106 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 107 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 108 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 109 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 110 DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 111 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 112 DIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 113 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVICISRSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMISLKPEDTAAYYCAAGADCSGYLRDYEFRGQGTQVTVSS sdAb анти-BCMA 114 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP Спейсер CD28 115 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN CD8a TM 116 LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP Спейсер CD28 (усеченный) 117 PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a 118 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a 119 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a 120 DTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSD Шарнир CTLA4 121 FLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVS CTLA4 TM 122 QIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLV Шарнир PD-1 123 VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI PD-1 TM 124 GLAVSTISSFFPPGYQ Шарнир FcγRIIIa 125 EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Шарнир IgG1 126 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 127 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 128 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 129 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 130 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 131 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 132 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 133 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 134 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 135 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 136 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 137 DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 138 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 139 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 140 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 141 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 142 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 143 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 144 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 145 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 146 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 147 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 148 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 149 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 150 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 151 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 152 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 153 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 154 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAADTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 155 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 156 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 157 EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFKQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIKESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 158 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 159 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 160 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 161 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 162 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 163 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 164 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 165 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 166 QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 167 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 168 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 169 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 170 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 171 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 172 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 173 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 174 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 175 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 176 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 177 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMA 178 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN CD8a TM 179 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT CD8a TM 180 RAAA Пептид связывания 181 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 182 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVL Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 183 EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 184 DIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 185 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 186 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVL Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 187 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (V_H) анти-BCMA 188 LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMA 189 ASGGGGSGGRASGGGGS Линкер

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> JUNO THERAPEUTICS, INC.

PORTS, Michael

WORKS, Melissa

<120> СОЧЕТАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И ИММУНОМОДУЛЯТОРНОГО СОЕДИНЕНИЯ

<130> 735042009640

<140> еще не присвоено

<141> одновременно с данным

<150> 62/492,947

<151> 2017-05-01

<150> 62/538,670

<151> 2017-07-29

<150> 62/549,390

<151> 2017-08-23

<150> 62/580,433

<151> 2017-11-01

<150> 62/596,753

<151> 2017-12-08

<160> 189

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 12

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Спейсер (Шарнир IgG4)

<400> 1

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 2

<211> 36

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Спейсер (Шарнир IgG4)

<400> 2

gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36

<210> 3

<211> 119

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Спейсер Шарнир-CH3

<400> 3

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg

1 5 10 15

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

20 25 30

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

35 40 45

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

50 55 60

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

65 70 75 80

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

85 90 95

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

100 105 110

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

115

<210> 4

<211> 229

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Спейсер шарнир-CH2-CH3

<400> 4

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 5

<211> 282

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> IgD-Шарнир-Fc

<400> 5

Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala

1 5 10 15

Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala

20 25 30

Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys

35 40 45

Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro

50 55 60

Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln

65 70 75 80

Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly

85 90 95

Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val

100 105 110

Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly

115 120 125

Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn

130 135 140

Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro

145 150 155 160

Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys

165 170 175

Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser

180 185 190

Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu

195 200 205

Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro

210 215 220

Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser

225 230 235 240

Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr

245 250 255

Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg

260 265 270

Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His

275 280

<210> 6

<211> 24

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> T2A

<400> 6

Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp

1 5 10 15

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg

20

<210> 7

<211> 335

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> tEGFR

<400> 7

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

1 5 10 15

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

20 25 30

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

35 40 45

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

50 55 60

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

65 70 75 80

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

85 90 95

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

100 105 110

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

115 120 125

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

130 135 140

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

145 150 155 160

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

165 170 175

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

180 185 190

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

195 200 205

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

210 215 220

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

225 230 235 240

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

245 250 255

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

260 265 270

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

275 280 285

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro

290 295 300

Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala

305 310 315 320

Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

325 330 335

<210> 8

<211> 27

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD28

<300>

<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01

<400> 8

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 9

<211> 66

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD28

<300>

<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01

<400> 9

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

35 40 45

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

50 55 60

Trp Val

65

<210> 10

<211> 41

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD28

<300>

<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01

<400> 10

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 11

<211> 41

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD28

<400> 11

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 12

<211> 42

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> 4-1BB

<300>

<308> UniProt Q07011.1

<309> 1995-02-01

<400> 12

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 13

<211> 112

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD3 зета

<400> 13

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 14

<211> 112

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD3 зета

<400> 14

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 15

<211> 112

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD3 зета

<400> 15

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<220>

<221> ПОВТОР

<222> (5)...(9)

<223> SGGGG повторяется 5 раз

<400> 16

Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 17

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 17

Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 18

<211> 54

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Внутриклеточный домен BCMA человека

<400> 18

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

1 5 10 15

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

20 25 30

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

35 40 45

Val Lys Gly Thr Asn Ala

50

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 19

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 20

<211> 231

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc модифицированного IgG1 человека

<400> 20

Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

1 5 10 15

Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 21

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> сигнальный пептид CD33

<400> 21

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

<210> 22

<211> 306

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc BCMA

<400> 22

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

20 25 30

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

35 40 45

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

50 55 60

Val Lys Gly Thr Asn Ala Gly Gly Gly Gly Ser Pro Lys Ser Ser Asp

65 70 75 80

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala

85 90 95

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

100 105 110

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

115 120 125

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

130 135 140

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

145 150 155 160

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

165 170 175

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu

180 185 190

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

195 200 205

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

210 215 220

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

225 230 235 240

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

245 250 255

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

260 265 270

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

275 280 285

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

290 295 300

Gly Lys

305

<210> 23

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> T2A

<400> 23

Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro

1 5 10 15

Gly Pro

<210> 24

<211> 22

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> P2A

<400> 24

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 25

<211> 19

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> P2A

<400> 25

Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn

1 5 10 15

Pro Gly Pro

<210> 26

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> E2A

<400> 26

Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser

1 5 10 15

Asn Pro Gly Pro

20

<210> 27

<211> 22

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> F2A

<400> 27

Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20

<210> 28

<211> 335

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> tEGFR

<400> 28

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

1 5 10 15

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

20 25 30

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

35 40 45

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

50 55 60

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

65 70 75 80

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

85 90 95

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

100 105 110

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

115 120 125

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

130 135 140

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

145 150 155 160

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

165 170 175

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

180 185 190

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

195 200 205

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

210 215 220

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

225 230 235 240

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

245 250 255

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

260 265 270

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

275 280 285

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro

290 295 300

Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala

305 310 315 320

Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

325 330 335

<210> 29

<211> 228

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Спейсер шарнир-CH2-CH3

<400> 29

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr

65 70 75 80

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Leu Gly Lys

225

<210> 30

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 30

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 31

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 31

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 32

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 32

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 33

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 33

Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys

100 105

<210> 34

<211> 116

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 34

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 35

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 36

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 105

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 37

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105

<210> 38

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 38

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 39

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 39

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Val Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Val Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 40

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 41

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 41

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 42

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Gly Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 43

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 43

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 44

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H1 FMC63

<400> 44

Asp Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 45

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H2 FMC63

<400> 45

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 46

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H3 FMC63

<400> 46

Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

1 5

<210> 47

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC-CDR3 FMC63

<400> 47

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 48

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L1 FMC63

<400> 48

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 49

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L2 FMC63

<400> 49

Ser Arg Leu His Ser Gly Val

1 5

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC-CDR2 FMC63

<400> 50

His Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L3 FMC63

<400> 51

Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly

1 5

<210> 52

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC-CDR3 FMC63

<400> 52

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 53

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH FMC63

<400> 53

Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 54

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL FMC63

<400> 54

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

100 105

<210> 55

<211> 245

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> scFv FMC63

<400> 55

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly

100 105 110

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys

115 120 125

Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser

130 135 140

Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser

145 150 155 160

Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile

165 170 175

Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn

195 200 205

Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr

210 215 220

Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser

245

<210> 56

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L1 SJ25C1

<400> 56

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5 10

<210> 57

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L2 SJ25C1

<400> 57

Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser

1 5

<210> 58

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR L3 SJ25C1

<400> 58

Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 59

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H1 SJ25C1

<400> 59

Ser Tyr Trp Met Asn

1 5

<210> 60

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H2 SJ25C1

<400> 60

Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 61

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDR H3 SJ25C1

<400> 61

Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 62

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH SJ25C1

<400> 62

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 63

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL SJ25C1

<400> 63

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 64

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 64

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 65

<211> 245

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> scFv SJ25C1

<400> 65

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Glu Ile Lys Arg

245

<210> 66

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC-CDR3 FMC63

<400> 66

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC-CDR2 FMC63

<400> 67

His Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5

<210> 68

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC-CDR3 FMC63

<400> 68

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 69

<211> 735

<212> DNA

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> scFv

<400> 69

gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60

atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120

gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180

cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240

gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300

ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360

ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420

cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480

tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540

accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600

agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660

gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720

gtgaccgtga gcagc 735

<210> 70

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 70

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 71

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 71

Gly Gly Gly Ser

1

<210> 72

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 72

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 73

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 73

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 74

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 74

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Glu Met Ala

20

<210> 75

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сигнальный пептид CD8a

<400> 75

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 76

<211> 20

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сигнальный пептид

<400> 76

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly

20

<210> 77

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 78

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 79

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 80

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 80

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 81

<211> 116

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 82

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 82

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 83

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 83

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 84

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 84

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 85

<211> 119

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 86

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 86

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 87

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 87

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 88

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 88

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 126

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 90

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 90

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 91

<211> 123

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 91

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 92

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 92

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 93

<211> 121

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp Ser Glu Asp Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 94

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 94

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 95

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 95

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 96

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 96

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 97

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 98

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 98

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 99

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 99

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 100

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 100

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 101

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 102

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 102

Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 103

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 104

<211> 109

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 104

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser

20 25 30

Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro

85 90 95

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 105

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 105

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 106

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 106

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 107

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 107

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 108

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 108

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 109

<211> 119

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 110

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 110

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 111

<211> 119

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 112

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 112

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 113

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> sdAb анти-BCMA

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr

20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45

Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp Tyr Glu Phe Arg

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 114

<211> 39

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Спейсер CD28

<400> 114

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

35

<210> 115

<211> 25

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> TM CD8a

<400> 115

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn

20 25

<210> 116

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Спейсер CD28 (truncated)

<400> 116

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

1 5 10 15

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

20 25 30

<210> 117

<211> 46

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир CD8а

<400> 117

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

1 5 10 15

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

20 25 30

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 118

<211> 45

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир CD8а

<400> 118

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 119

<211> 55

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир CD8а

<400> 119

Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

20 25 30

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

35 40 45

Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

50 55

<210> 120

<211> 39

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир CTLA4

<400> 120

Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro

1 5 10 15

Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro

20 25 30

Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp

35

<210> 121

<211> 24

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CTLA4 TM

<400> 121

Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr

1 5 10 15

Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser

20

<210> 122

<211> 38

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир PD-1

<400> 122

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

1 5 10 15

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

20 25 30

Gln Phe Gln Thr Leu Val

35

<210> 123

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 TM

<400> 123

Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp

1 5 10 15

Val Leu Ala Val Ile

20

<210> 124

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир Fc(гамма) RIIIa

<400> 124

Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln

1 5 10 15

<210> 125

<211> 231

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнир IgG1

<400> 125

Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 126

<211> 457

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 126

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly

115 120 125

Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg

145 150 155 160

Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

180 185 190

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val

225 230 235 240

Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

245 250 255

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

260 265 270

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

340 345 350

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

355 360 365

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

370 375 380

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

385 390 395 400

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

405 410 415

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

420 425 430

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

435 440 445

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 127

<211> 457

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 127

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val

115 120 125

Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu

130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met

145 150 155 160

Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala

165 170 175

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

245 250 255

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

260 265 270

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

340 345 350

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

355 360 365

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

370 375 380

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

385 390 395 400

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

405 410 415

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

420 425 430

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

435 440 445

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 128

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 128

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Val Met

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser

145 150 155 160

Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn

165 170 175

Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu

180 185 190

Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

195 200 205

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu

210 215 220

Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro

225 230 235 240

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala

245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 129

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 129

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

115 120 125

Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln

130 135 140

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

145 150 155 160

Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

165 170 175

Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala

180 185 190

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

195 200 205

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe

225 230 235 240

Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 130

<211> 454

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 130

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

115 120 125

Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr

130 135 140

Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser

145 150 155 160

Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile

180 185 190

Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

210 215 220

Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235 240

Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

245 250 255

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

260 265 270

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

275 280 285

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

290 295 300

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

305 310 315 320

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

325 330 335

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

340 345 350

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

355 360 365

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

370 375 380

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

405 410 415

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

420 425 430

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

435 440 445

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450

<210> 131

<211> 454

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 131

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly

100 105 110

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln

115 120 125

Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys

130 135 140

Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

145 150 155 160

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile

165 170 175

Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg

180 185 190

Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu

195 200 205

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu

210 215 220

Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

225 230 235 240

Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

245 250 255

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

260 265 270

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

275 280 285

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

290 295 300

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

305 310 315 320

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

325 330 335

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

340 345 350

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

355 360 365

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

370 375 380

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

405 410 415

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

420 425 430

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

435 440 445

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450

<210> 132

<211> 461

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 132

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr

145 150 155 160

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr

165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser

180 185 190

Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala

210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gly

225 230 235 240

Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 133

<211> 461

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 133

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Leu

115 120 125

Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr

145 150 155 160

Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

165 170 175

Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

180 185 190

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

195 200 205

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

210 215 220

Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 134

<211> 458

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 134

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro

115 120 125

Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala

180 185 190

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 135

<211> 458

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 135

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val

115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu

130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met

145 150 155 160

Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr

165 170 175

Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 136

<211> 461

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 136

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Leu

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr

145 150 155 160

Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr

165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser

180 185 190

Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala

210 215 220

Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly

225 230 235 240

Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 137

<211> 461

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 137

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val

115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met

145 150 155 160

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

165 170 175

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 138

<211> 471

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 138

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser

115 120 125

Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

145 150 155 160

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

165 170 175

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

180 185 190

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

195 200 205

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

210 215 220

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

225 230 235 240

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

245 250 255

Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

260 265 270

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

275 280 285

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

290 295 300

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

305 310 315 320

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

325 330 335

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

340 345 350

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

355 360 365

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

370 375 380

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

385 390 395 400

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

405 410 415

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

420 425 430

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

435 440 445

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

450 455 460

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 139

<211> 471

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 139

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly

115 120 125

Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160

Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr

180 185 190

Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His

225 230 235 240

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

245 250 255

Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

260 265 270

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

275 280 285

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

290 295 300

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

305 310 315 320

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

325 330 335

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

340 345 350

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

355 360 365

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

370 375 380

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

385 390 395 400

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

405 410 415

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

420 425 430

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

435 440 445

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

450 455 460

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 140

<211> 462

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 140

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly

115 120 125

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val

130 135 140

Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala

145 150 155 160

Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp

165 170 175

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala

180 185 190

Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 141

<211> 462

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 141

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val

115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met

145 150 155 160

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

165 170 175

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Lys

210 215 220

Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 142

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 142

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 143

<211> 473

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 143

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145 150 155 160

Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser

195 200 205

Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys

225 230 235 240

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu

245 250 255

Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

260 265 270

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

275 280 285

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

290 295 300

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

305 310 315 320

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

325 330 335

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

340 345 350

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

355 360 365

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

370 375 380

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

385 390 395 400

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

405 410 415

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

420 425 430

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

435 440 445

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

450 455 460

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 144

<211> 470

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 144

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr

245 250 255

Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

260 265 270

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

275 280 285

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

290 295 300

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

305 310 315 320

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

325 330 335

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

340 345 350

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

355 360 365

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

370 375 380

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

385 390 395 400

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

405 410 415

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

420 425 430

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

435 440 445

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

450 455 460

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 145

<211> 476

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 145

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser

195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp

225 230 235 240

Ser Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala

245 250 255

Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser

260 265 270

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

275 280 285

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

290 295 300

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

305 310 315 320

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

325 330 335

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

340 345 350

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

355 360 365

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

370 375 380

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

385 390 395 400

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

405 410 415

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

420 425 430

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

435 440 445

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

450 455 460

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 146

<211> 475

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 146

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu

225 230 235 240

Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

260 265 270

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

275 280 285

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

290 295 300

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

305 310 315 320

Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn

325 330 335

Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr

340 345 350

Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser

355 360 365

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

370 375 380

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

385 390 395 400

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

405 410 415

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

420 425 430

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

435 440 445

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

450 455 460

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 147

<211> 482

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 147

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser

195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp

225 230 235 240

Ser Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala

245 250 255

Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr

260 265 270

Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala

275 280 285

Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile

290 295 300

Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser

305 310 315 320

Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

325 330 335

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

340 345 350

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

355 360 365

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 148

<211> 476

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 148

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro

245 250 255

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

260 265 270

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

275 280 285

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

290 295 300

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

305 310 315 320

Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

325 330 335

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

340 345 350

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

355 360 365

Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

370 375 380

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

385 390 395 400

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

405 410 415

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

420 425 430

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

435 440 445

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

450 455 460

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 149

<211> 481

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 149

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu

225 230 235 240

Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

260 265 270

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

275 280 285

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

290 295 300

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

305 310 315 320

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr

325 330 335

Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu

340 345 350

Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu

355 360 365

Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln

370 375 380

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

385 390 395 400

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

405 410 415

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

420 425 430

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

435 440 445

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

450 455 460

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

465 470 475 480

Arg

<210> 150

<211> 479

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 150

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145 150 155 160

Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175

Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn

180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser

195 200 205

Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys

225 230 235 240

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr

245 250 255

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

260 265 270

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

275 280 285

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

290 295 300

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

305 310 315 320

Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

325 330 335

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

340 345 350

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 151

<211> 472

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 151

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro

245 250 255

Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro

260 265 270

Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu

275 280 285

Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys

290 295 300

Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg

305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365

Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 152

<211> 472

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 152

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140

Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp

165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala

195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

210 215 220

Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 153

<211> 472

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 153

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 154

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 154

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys

245 250 255

Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn

260 265 270

Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp

275 280 285

Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr

290 295 300

Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 155

<211> 464

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 155

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg

245 250 255

Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His

260 265 270

Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val

275 280 285

Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val

290 295 300

Leu Ala Val Ile Cys Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile

305 310 315 320

Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp

325 330 335

Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

340 345 350

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

355 360 365

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

370 375 380

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

385 390 395 400

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

405 410 415

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

420 425 430

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

435 440 445

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 156

<211> 653

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 156

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser

130 135 140

Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser

145 150 155 160

Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly

165 170 175

Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly

180 185 190

Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu

195 200 205

Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser

210 215 220

Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val

225 230 235 240

Thr Val Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

245 250 255

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

260 265 270

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

275 280 285

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

290 295 300

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

305 310 315 320

Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

325 330 335

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

340 345 350

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

355 360 365

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

370 375 380

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

385 390 395 400

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

405 410 415

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

420 425 430

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

435 440 445

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

450 455 460

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

465 470 475 480

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

485 490 495

Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

500 505 510

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

515 520 525

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

530 535 540

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

545 550 555 560

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

565 570 575

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

580 585 590

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

595 600 605

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

610 615 620

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

625 630 635 640

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 157

<211> 650

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 157

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu

130 135 140

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro

180 185 190

Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile

195 200 205

Asp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser

210 215 220

Tyr Thr Ser Arg Gln Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys

225 230 235 240

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

245 250 255

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

260 265 270

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

275 280 285

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr

305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

340 345 350

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

465 470 475 480

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

485 490 495

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

500 505 510

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

515 520 525

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

530 535 540

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

545 550 555 560

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

565 570 575

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

580 585 590

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

595 600 605

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

610 615 620

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

625 630 635 640

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 158

<211> 651

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 158

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser

130 135 140

Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile

145 150 155 160

Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp

210 215 220

Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val

225 230 235 240

Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro

245 250 255

Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

340 345 350

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460

Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

465 470 475 480

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

485 490 495

Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe

500 505 510

Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg

515 520 525

Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser

530 535 540

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

545 550 555 560

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

565 570 575

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

580 585 590

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

595 600 605

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

610 615 620

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

625 630 635 640

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 159

<211> 658

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 159

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

245 250 255

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

260 265 270

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

275 280 285

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

290 295 300

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

305 310 315 320

Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

325 330 335

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

340 345 350

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

355 360 365

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

370 375 380

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

385 390 395 400

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

405 410 415

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

420 425 430

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

435 440 445

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

450 455 460

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val

465 470 475 480

Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr

485 490 495

Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

500 505 510

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

515 520 525

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

530 535 540

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

545 550 555 560

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

565 570 575

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

580 585 590

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

595 600 605

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

610 615 620

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

625 630 635 640

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

645 650 655

Pro Arg

<210> 160

<211> 654

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 160

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

260 265 270

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

275 280 285

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

290 295 300

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

305 310 315 320

Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

325 330 335

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

340 345 350

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

355 360 365

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

370 375 380

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

385 390 395 400

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

405 410 415

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

420 425 430

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

435 440 445

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

450 455 460

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val

465 470 475 480

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

485 490 495

Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

500 505 510

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

515 520 525

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

530 535 540

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

545 550 555 560

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

565 570 575

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

580 585 590

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

595 600 605

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

610 615 620

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

625 630 635 640

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 161

<211> 653

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 161

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

260 265 270

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

275 280 285

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

290 295 300

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

305 310 315 320

Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

325 330 335

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

340 345 350

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

355 360 365

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

370 375 380

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

385 390 395 400

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

405 410 415

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

420 425 430

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

435 440 445

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

450 455 460

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val

465 470 475 480

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

485 490 495

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

500 505 510

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

515 520 525

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

530 535 540

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

545 550 555 560

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

565 570 575

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

580 585 590

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

595 600 605

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

610 615 620

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

625 630 635 640

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 162

<211> 462

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 162

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr

210 215 220

Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr

225 230 235 240

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

245 250 255

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

260 265 270

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

275 280 285

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

290 295 300

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

305 310 315 320

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

325 330 335

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 163

<211> 469

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 163

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg

180 185 190

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460

Ala Leu Pro Pro Arg

465

<210> 164

<211> 462

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 164

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser

130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp

145 150 155 160

Ile Asn Lys Phe Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu

210 215 220

Ser Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr

225 230 235 240

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

245 250 255

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

260 265 270

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

275 280 285

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

290 295 300

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

305 310 315 320

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

325 330 335

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 165

<211> 464

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 165

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175

Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

210 215 220

Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240

Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

245 250 255

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

260 265 270

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

275 280 285

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

290 295 300

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile

305 310 315 320

Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp

325 330 335

Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

340 345 350

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

355 360 365

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

370 375 380

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

385 390 395 400

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

405 410 415

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

420 425 430

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

435 440 445

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 166

<211> 467

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 166

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser

130 135 140

His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

245 250 255

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

260 265 270

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

275 280 285

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

290 295 300

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

305 310 315 320

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

325 330 335

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

340 345 350

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

355 360 365

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

370 375 380

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

385 390 395 400

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

405 410 415

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

420 425 430

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

435 440 445

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

450 455 460

Pro Pro Arg

465

<210> 167

<211> 472

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 167

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys

130 135 140

Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

145 150 155 160

Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly

165 170 175

Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr

180 185 190

Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala

195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala

210 215 220

Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 168

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 168

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 169

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 169

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 170

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 170

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 171

<211> 482

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 171

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140

Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp

165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala

195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

210 215 220

Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro

245 250 255

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

260 265 270

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

275 280 285

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

290 295 300

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

305 310 315 320

Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 172

<211> 440

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 172

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe

245 250 255

Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

260 265 270

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

275 280 285

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

290 295 300

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

305 310 315 320

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

325 330 335

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

340 345 350

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

355 360 365

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

370 375 380

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

385 390 395 400

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

405 410 415

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

420 425 430

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

435 440

<210> 173

<211> 469

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 173

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460

Ala Leu Pro Pro Arg

465

<210> 174

<211> 655

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 174

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr

245 250 255

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu

275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile

465 470 475 480

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

485 490 495

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

500 505 510

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

515 520 525

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

530 535 540

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

545 550 555 560

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

565 570 575

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

580 585 590

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

595 600 605

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

610 615 620

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

625 630 635 640

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 655

<210> 175

<211> 440

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 175

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe

245 250 255

Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

260 265 270

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

275 280 285

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

290 295 300

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

305 310 315 320

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

325 330 335

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

340 345 350

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

355 360 365

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

370 375 380

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

385 390 395 400

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

405 410 415

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

420 425 430

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

435 440

<210> 176

<211> 469

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 176

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460

Ala Leu Pro Pro Arg

465

<210> 177

<211> 655

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR анти-BCMA

<400> 177

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr

245 250 255

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu

275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile

465 470 475 480

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

485 490 495

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

500 505 510

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

515 520 525

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

530 535 540

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

545 550 555 560

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

565 570 575

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

580 585 590

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

595 600 605

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

610 615 620

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

625 630 635 640

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 655

<210> 178

<211> 28

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> TM CD8a

<400> 178

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn

20 25

<210> 179

<211> 21

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> TM CD8a

<400> 179

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr

20

<210> 180

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> связывающий пептид

<400> 180

Arg Ala Ala Ala

1

<210> 181

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 181

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 182

<211> 110

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 182

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser

85 90 95

Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 183

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 183

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 184

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 184

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly

50 55 60

Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys

100 105

<210> 185

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 185

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 186

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 186

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His

85 90 95

Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 187

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA

<400> 187

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 188

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA

<400> 188

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Val Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Val Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 189

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 189

Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser

<---

Группа изобретений относится к иммунотерапии. Способ лечения включает введение Т–клеточной терапии субъекту, имеющему рак, где T-клеточная терапия включает генно–инженерные Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), который специфически связывается с антигеном, связанным с раком; и введение субъекту иммуномодуляторного соединения, которое облегчает деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3), где начало введения указанного иммуномодуляторного соединения осуществляют по меньшей мере через два дня после начала введения Т-клеточной терапии. Также раскрыт другой вариант способа лечения. Группа изобретений обеспечивает повышенную или улучшенную активность, эффективность, персистентность, размножение и/или пролиферацию Т–лимфоцитов для адоптивной клеточной терапии или эндогенных Т–лимфоцитов, рекрутированных иммунотерапевтическими агентами. 2 н. и 78 з.п. ф-лы, 40 ил., 6 табл., 18 пр.

1. Способ лечения, где способ включает:

(a) введение Т–клеточной терапии субъекту, имеющему рак, где T-клеточная терапия включает генно–инженерные Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), который специфически связывается с антигеном, связанным с раком; и

(b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, которое облегчает деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3), где начало введения указанного иммуномодуляторного соединения осуществляют по меньшей мере через два дня после начала введения Т-клеточной терапии.

2. Способ лечения, где способ включает введение иммуномодуляторного соединения, которое облегчает деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3), субъекту, имеющему рак, где:

в момент начала введения иммуномодуляторного соединения субъекту уже ранее вводилась Т–клеточная терапия для лечения рака, где T-клеточная терапия включает генно–инженерные Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный антигенный рецептор (CAR), который специфически связывается с антигеном, связанным с раком; и

начало введения указанного иммуномодуляторного соединения осуществляется по меньшей мере через два дня после начала введения T-клеточной терапии.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который больше чем 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т–клеточной терапии.

4. Способ по любому из пп. 1–3, в котором рак не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению.

5. Способ по любому из пп. 1–4, где рак становится не поддающимся лечению или резистентным к иммуномодуляторному соединению после лечения иммуномодуляторным соединением.

6. Способ по любому из пп. 1–5, где субъект или рак имеет мутацию или фактор, придающий раку резистентность к лечению иммуномодуляторным соединением.

7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется по меньшей мере через 1 неделю, по меньшей мере через 2 недели, по меньшей мере через 3 недели или по меньшей мере через 4 недели после начала введения Т–клеточной терапии.

8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется в течение 96 часов, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 14 дней, 15 дней, 21 дня, 24 дней, 28 дней, 30 дней, 36 дней, 42 дней, 60 дней, 72 дней или через 90 дней после начала введения T-клеточной терапии.

9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляют от 2 до 28 дней после начала введения T-клеточной терапии.

10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется от 7 до 21 дня после начала введения T-клеточной терапии.

11. Способ по любому из пп. 1–10, в котором иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно в течение более 7 последовательных дней, более 14 последовательных дней, более 21 последовательного дня или более 28 последовательных дней.

12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором иммуномодуляторное соединение вводят ежедневно до 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более 30 дней подряд.

13. Способ по любому из пп. 1–12, в котором введение иммуномодуляторного соединения продолжается по меньшей мере от момента после начала введения Т–клеточной терапии до тех пор, пока:

количество клеток от введенной Т–клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т–клеточной терапии;

количество клеток от Т–клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0–кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т–клеточной терапии;

количество клеток от Т–клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта;

субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т–клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или

субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.

14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный аналог или производное талидомида.

15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:

, где

один из X и Y представляет собой –C(O)– и другой из X и Y представляет собой –C(O)– или –CH₂–;

(1) каждый из R¹, R², R³ и R⁴ независимо представляет собой галоген, алкил с 1–4 атомами углерода или алкокси из 1–4 атомов углерода, или

(2) один из R¹, R², R³ и R⁴ представляет собой –NHR^a и остальные R¹, R², R³ и R⁴ представляют собой водород, где R^a представляет собой водород или алкил с 1–8 атомами углерода;

R⁵ представляет собой водород или алкил с 1–8 атомами углерода, бензил или галоген;

при условии, что R⁵ не является водородом, если X и Y представляют собой –C(O)–, и (i) каждый из R¹, R², R³ и R⁴ представляет собой фтор или (ii) один из R¹, R², R³ и R⁴ представляет собой амино;

или их фармацевтически приемлемую соль.

16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:

, где

один из X и Y представляет собой –C(O)–, а другой из X и Y представляет собой –C(O)– или –CH₂–, и

R⁵ представляет собой водород или низший алкил,

или его фармацевтически приемлемую соль.

17. Способ по любому из пп. 1–14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион, помалидомид, 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион, стереоизомер 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–диона, стереоизомер помалидомида, стереоизомер 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–диона или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.

18. Способ по любому из пп. 1–17, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.

19. Способ по любому из пп. 1–18, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион.

20. Способ по любому из пп. 1-17, где иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.

21. Способ по любому из пп. 1-17 и 20, где иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид.

22. Способ по любому из пп. 1–14 и 17, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.

23. Способ по любому из пп. 1–14, 17 и 22, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион.

24. Способ по любому из пп. 1-14, 17 и 22, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрохлоридную соль 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона.

25. Способ по любому из пп. 1-14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-[4-(4-морфолин-4-илметилбензилокси)-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил]-пиперидин-2,6-дион.

26. Способ по любому из пп. 1–25, в котором иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно.

27. Способ по любому из пп. 1-26, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально.

28. Способ по любому из пп. 1–27, в котором иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.

29. Способ по любому из пп. 1–28, в котором иммуномодуляторное соединение вводится в дозе от 0,1 мг до 100 мг, от 0,1 мг до 50 мг, от 0,1 мг до 25 мг, от 0,1 мг до 10 мг, от 0,1 мг до 5 мг, от 0,1 мг до 1 мг, от 1 мг до 100 мг, от 1 мг до 50 мг, от 1 мг до 25 мг, от 1 мг до 10 мг, от 1 мг до 5 мг, от 5 мг до 100 мг, от 5 мг до 50 мг, от 5 мг до 25 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 100 мг, от 10 мг до 50 мг, от 10 мг до 25 мг, от 25 мг до 100 мг, от 25 мг до 50 мг или от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.

30. Способ по любому из пп. 1–29, в котором иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день.

31. Способ по любому из пп. 1–30, в котором иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве по меньшей мере 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.

32. Способ по любому из пп. 1–31, в котором:

иммуномодуляторное соединение вводится в дозе больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг или 15 мг и меньше чем 25 мг.

33. Способ по любому из пп. 1–32, в котором:

иммуномодуляторное соединение вводится в дозе больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день или 15 мг в день и меньше 25 мг в день.

34. Способ по любому из пп. 1–33, в котором CAR содержит внеклеточный домен, содержащий антигенсвязывающий домен, который специфично связывается с антигеном.

35. Способ по любому из пп. 1-34, в котором антиген представляет собой опухолевый антиген.

36. Способ по любому из пп. 1-35, в котором антиген выбирают из ROR1, B–клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1–CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти–фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG–2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG–40), EPHa2, erb–B2, erb–B3, erb–B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолатсвязывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW–MAA, IL–22R–альфа, IL–13R–альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1–CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)–A1, MAGE–A3, MAGE–A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7–H6, рецептора альфа 2 IL–13 (IL–13Ra2), CA9, GD3, HMW–MAA, CD171, G250/CAIX, HLA–AI MAGE Al, HLA–A2 NY–ESO–1, PSCA, рецептора–а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, фетального AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково–тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY–ESO–1, MART–1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF–R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c–Met, GD–2, O–ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT–1), циклина, A2 циклина, CCL–1, CD138; патоген–специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.

37. Способ по любому из пп. 1-36, в котором антиген представляет собой CD19.

38. Способ по любому из пп. 1-36, в котором антиген представляет собой BCMA.

39. Способ по любому из пп. 34-38, в котором антигенсвязывающий домен содержит антитело или фрагмент антитела.

40. Способ по любому из пп. 34-39, в котором антигенсвязывающий домен представляет собой одноцепочечный фрагмент.

41. Способ по п. 39 или 40, в котором фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.

42. Способ по любому из пп. 39-41, в котором фрагмент содержит scFv.

43. Способ по любому из пп. 1-42, в котором CAR содержит спейсер.

44. Способ по п. 43, в котором спейсер получен из иммуноглобулина.

45. Способ по п. 43, в котором спейсер содержит шарнирную область.

46. Способ по любому из пп. 1-45, в котором CAR содержит внутриклеточную сигнальную область.

47. Способ по п. 46, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.

48. Способ по п. 47, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен.

49. Способ по п. 47 или 48, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т–лимфоците.

50. Способ по любому из пп. 47-49, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).

51. Способ по любому из пп. 47-50, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит компонент сигнального домена рецептора Т–лимфоцита (TCR).

52. Способ по любому из пп. 47-51, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3 или ее сигнальную часть.

53. Способ по любому из пп. 47-52, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит цепь CD3–зета (CD3ζ).

54. Способ по любому из пп. 46-53, в котором рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

55. Способ по п. 54, в котором трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.

56. Способ по любому из пп. 47-55, в котором внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.

57. Способ по п. 56, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т–лимфоцита или ее сигнальную часть.

58. Способ по п. 56 или 57, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4–1BB или ICOS или его сигнальную часть.

59. Способ по любому из пп. 56-58, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4–1BB.

60. Способ по любому из пп. 56-59, в котором костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.

61. Способ по любому из пп. 1–60, в котором Т–лимфоциты выбирают из группы, состоящей из центральных Т–лимфоцитов памяти, эффекторных Т–лимфоцитов памяти, интактных Т–лимфоцитов, стволовых центральных Т–лимфоцитов памяти, эффекторных Т–лимфоцитов и регуляторных Т–лимфоцитов.

62. Способ по любому из пп. 1–61, в котором Т–лимфоциты содержат Т-лимфоциты CD4+.

63. Способ по любому из пп. 1–61, в котором Т–лимфоциты содержат Т-лимфоциты CD8+.

64. Способ по любому из пп. 1–63, в котором Т–лимфоциты представляют собой первичные клетки, полученные от субъекта.

65. Способ по любому из пп. 1–64, в котором Т–лимфоциты являются аутологичными для субъекта.

66. Способ по любому из пп. 1–64, в котором Т–лимфоциты являются аллогенными для субъекта.

67. Способ по любому из пп. 1–66, в котором субъект является человеком.

68. Способ по любому из пп. 1-67, в котором Т-клеточная терапия включает введение от 1×10⁵ до 5×10⁸ клеток, экспрессирующих CAR, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (РВМС), в целом, или от 1×10⁶ до 5×10⁸ клеток, экспрессирующих CAR, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (РВМС), в целом.

69. Способ по любому из пп. 1-68, в котором Т-клеточная терапия включает введение от 1×10⁵ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×10⁶ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 2,5×10⁶ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 5×10⁶ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×10⁷ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 2,5×10⁷ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 5×10⁷ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×10⁸ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, или от 2,5×10⁸ до 5×10⁸ CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом.

70. Способ по любому из пп. 1–69, в котором Т–клеточная терапия включает введение от 1×10⁵ до 1×10⁸ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от 5×10⁵ до 1×10⁷ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от 1×10⁶ до 1×10⁷ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждых включительно.

71. Способ по любому из пп. 1–70, в котором Т–клеточная терапия включает введение не более чем 1×10⁸ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1×10⁷ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5×10⁷ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1×10⁶ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5×10⁶ CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.

72. Способ по любому из пп. 1–71, в котором количество клеток, вводимых при Т–клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т–клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения.

73. Способ по п. 72, в котором количество вводимых клеток является 1,5–кратно, 2–кратно, 3–кратно, 4–кратно, 5–кратно или 10–кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе.

74. Способ по любому из пп. 1–73, в котором Т–клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая Т-лимфоциты.

75. Способ по любому из пп. 1–73, в котором Т–клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.

76. Способ по любому из пп. 1–75, в котором способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т–клеточной терапии.

77. Способ по любому из пп. 1–76, в котором рак представляет собой B-клеточный рак.

78. Способ по любому из пп. 1–76, в котором рак представляет собой миелому, лимфому или лейкоз.

79. Способ по любому из пп. 1-78, в котором раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), диффузную В–крупноклеточную лимфому (DLBCL) или фолликулярную лимфому (FL).

80. Способ по любому из пп. 1-76, в котором раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.

название	год	авторы	номер документа
РЕАГЕНТЫ ДЛЯ РАЗМНОЖЕНИЯ КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ РЕКОМБИНАНТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ	2018	Хоскинс, Коллин Хасселл, Скотт Сьерра, Кэтрин Воркс, Мелисса	RU2783956C2
ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГУМАНИЗИРОВАННОГО ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА ПРОТИВ ВСМА	2015	Брогдон Дженнифер Чой Юджин Эберсбах Хилмар Гласс Дэвид Хют Хитер Джун Карл Х. Манник Джоан Майлон Майкл С. Мерфи Леон Плиса Габриэла Ричардсон Селеста Руелла Марко Сингх Решма Ван Юнцян У Цилун	RU2751660C2
ХИМЕРНЫЙ АНТИГЕННЫЙ РЕЦЕПТОР	2019	Пюле, Мартен Кордоба, Шон Томас, Саймон Онуоха, Симоби Чин Лим, Вэнь Ма, Бяо Феррари, Матьё	RU2810092C2
ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ К BCMA	2015	Морган Ричард Фридман Кевин	RU2747457C2
ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО К BCMA И BCMA-CAR-T-КЛЕТКИ	2020	У, Лицзюн Голубовская, Вита	RU2762942C1
ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО К BCMA И BCMA-CAR-NK-КЛЕТКИ	2020	У, Лицзюн Голубовская, Вита	RU2795443C2
АНТИТЕЛО, НАЦЕЛЕННОЕ НА ВСМА, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ	2018	Ван, Пэн Ван, Хуамао Цзян, Хуа	RU2799655C2
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ СЕЛЕКТИВНОЙ ДЕГРАДАЦИИ БЕЛКА	2018	Голосов, Андрей Гулд, Карлтон, Проктор Гимарайнш, Карле, Патрисия Пинту Хильд, Марк Хорст Питер Мотц, Грегори Росс, Нейтан Томас Соломон, Джонатан, М. Беквит, Роан, Эрик Джон Карбонно, Сет Брэднер, Джеймс, И.	RU2811700C2
КЛЕТКА	2014	Пюле Мартен Конг Кхай Кордоба Шон	RU2717984C2
КЛЕТКА	2014	Пюле Мартен Конг Кхай Кордоба Шон	RU2732236C2

US 2014271635 A1, 18.09.2014
WANG X
Et al
Печь для непрерывного получения сернистого натрия	1921	Настюков А.М. Настюков К.И.	SU1A1
OTÁHAL P
Et al
Lenalidomide enhances antitumor functions of chimeric antigen receptor modified T cells // Oncoimmunology, V
Кипятильник для воды	1921	Богач Б.И.	SU5A1
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды	1921	Богач Б.И.	SU4A1
Печь для непрерывного получения сернистого натрия	1921	Настюков А.М. Настюков К.И.	SU1A1
ХАРКЕВИЧ

СОЧЕТАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И ИММУНОМОДУЛЯТОРНОГО СОЕДИНЕНИЯ Российский патент 2022 года по МПК A61K35/17 A61K31/454 A61P35/00

Описание патента на изобретение RU2777911C2

Похожие патенты RU2777911C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 777 911 C2

Реферат патента 2022 года СОЧЕТАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И ИММУНОМОДУЛЯТОРНОГО СОЕДИНЕНИЯ

Формула изобретения RU 2 777 911 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2022 года RU2777911C2

RU 2 777 911 C2