Способ ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя Российский патент 2023 года по МПК G01N33/68 G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и внутренним болезням, и может быть использовано для ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя.

Известен лабораторный способ диагностики алкогольной болезни печени, основанный на прижизненном морфологическом исследовании биоптатов печени (Ивашкин В.Т., Маевская М.В., Павлов Ч.С., Сиволап Ю.П., Луньков В.Д., Жаркова М.С., Масленников Р.В. Клинические рекомендации Российского общества по изучению печени, по ведению взрослых пациентов с алкогольной болезнью печени. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2017; 27(6):20-40). Недостатки способа: трудоемкость, травматичность, способ требует специальных условий проведения, имеется техническая сложность получения материала и высокий риск развития тяжелых осложнений во время и после проведения манипуляции, охватывает только 0,2% печеночной паренхимы, низкая информативность о распределении инфильтратов, оценка гистологического строения органов достаточно продолжительна по времени, процедура субъективно неприятна.

Технический результат: снижение травматичности, отсутствие риска осложнений, доступность, простота исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности.

Указанный результат достигается путем определения активности каталазы в сыворотке крови у обследуемого пациента с синдромом зависимости от алкоголя при выполнении ранней диагностики алкогольной болезни печени.

Способ осуществляется следующим образом: у больного натощак осуществляют забор венозной крови из локтевой вены в количестве 5 мл в вакуумную пробирку с активатором свертывания. Далее центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин для получения сыворотки. Активность фермента антиоксидантной системы каталазы в сыворотке крови определяли методом Королюк М.А. фотометрически на КФК-3 (фотометр фотоэлектрический, Россия) при длине волны 410 нм (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. №1. С. 16-19).

Метод определения активности фермента каталазы основан на способности перекиси водорода (Н₂О₂) образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс.Активность каталазы определяли по преобразованию ферментом субстрата (пероксида водорода), который способен к образованию окрашенного комплекса с солями молибдата аммония. Экстинция регистрируется при 410 нм. За единицу активности каталазы принимали то количество фермента, которое участвует в превращении 1 мкат Н₂О₂ за 1 секунду при заданных условиях. Расчет активности каталазы вели на 1 л сыворотки крови.

Необходимые реагенты:

1. 0,03% раствор перекиси водорода (H2O2), предназначенный для реагирования с ферментом в качестве субстрата.

2. 4% раствор молибдата аммония (производитель ООО «Биотех», Россия).

Ход определения. Опытная проба - 2 мл 0,03% раствора Н₂О₂+0,1 мл сыворотки. Холостая проба - вместо сыворотки вносили 0,1 мл дистиллированной воды. Для коррекции результатов готовили контрольную пробу - вместо перекиси добавляли 2,0 мл дистиллированной воды. Пробы инкубировали 10 минут при 37°С в термостате. Затем останавливали реакцию путем добавления 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония. После этого пробы центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. Оптическую плотность холостой и опытной проб измеряли против контроля на КФК-3 при длине волны 410 нм. После проводили расчет активности каталазы по формуле:

Е=(Ахол - Аопт)^×V^×t^×К^×100, где

Е - активность каталазы, мкат / л;

Ахол - оптическая плотность холостой пробы;

Аопт - оптическая плотность опытной пробы;

V - объем вносимой пробы, 0,1 мл;

t - время инкубации, 10 мин;

К - коэффициент миллимолярной экстинции перекиси водорода, равный 22,2^×10³ мм-1^×см-1.

При значении активности каталазы более 37 мкат/л диагностируют алкогольную болезнь печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя, при активности каталазы менее или равной 37 мкат/л - отсутствие алкогольной болезни печени.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Пациентка Н., 35 лет обратилась к наркологу в ГБУЗ ПК «Пермский краевой клинический наркологический диспансер» с целью лечения синдрома зависимости от алкоголя с жалобами на диспепсию, умеренно выраженную слабость. В анамнезе имелись данные о систематическом приеме алкоголя в среднем 1 бутылку водки в неделю. При сборе анамнеза было установлено, что пациентка страдает хроническим алкоголизмом в течение 10 лет.

При объективном осмотре выявлено: умеренно выраженная потливость рук, лица, легкий тремор рук. Кожные покровы и видимые слизистые физиологической окраски. Телосложение нормостеническое. Печень выступает из - под края реберной дуги на 1 см, умеренной плотности, гладкая, безболезненная. Биохимическое исследование: АЛТ 30 Ед/л, ACT 26 Ед/л, общий билирубин 10 мкмоль/л, ХС 5,0 ммоль/л, ТГ 0,9 ммоль/л, ХС-ЛПВП 3,56 ммоль/л, ХС-ЛПНП 3,9 ммоль/л. Производим расчет активности каталазы в сыворотке крови:

Е=(0,00000073-0,00000039)*0,1*600*22,2^×10³ мм-1^×см-1*100=45,33 мкат/л

Активность каталазы в сыворотке крови составляет 45,33 мкат/л.

Таким образом, предлагаемым способом подтвержден диагноз «алкогольная болезнь печени».

Пример 2.

Пациент 45 лет, стоит на учете в ГБУЗ ПК «Пермский краевой клинический наркологический диспансер» с диагнозом «Синдром зависимости от алкоголя» в течение 16 лет. Пациент пришел на очередной прием к наркологу. Жалобы на дискомфорт, тупую боль в правом подреберье, эпигастрии, снижение аппетита. Объективный статус: кожные покровы, видимые слизистые физиологической окраски. Телосложение астеническое. Печень выступает из-под края реберной дуги на 2 см, умеренной плотности, гладкая, с закругленным краем. Биохимическое исследование: АЛТ 25 Ед/л, ACT 29 Ед/л, общий билирубин 15 мкмоль/л, ХС 4, ммоль/л, ТГ 0,9 ммоль/л, ХС-ЛПВП 3,1 ммоль/л, ХС-ЛПНП 3,8 ммоль/л.

Производим расчет активности каталазы в сыворотке крови:

Е=(0,00000073-0,00000027)*0,1*600*22,2^×10³ мм-1^×см-1*100=61,33 мкат/л

Активность каталазы в сыворотке крови составляет 61,33 мкат/л.

Таким образом, предлагаемым способом подтвержден диагноз «алкогольная болезнь печени».

Пример 3.

Пациентка, 39 лет, впервые обратилась на прием к наркологу в ГБУЗ ПК «Пермский краевой клинический наркологический диспансер». При тщательном сборе алкогольного анамнеза установлено, что пациентка регулярно, в течение 12 лет принимает около 60 г этанола в сутки. Жалобы на ощущение умеренно выраженного дискомфорта после приема пищи, снижение аппетита. Объективный статус: кожные покровы, видимые слизистые физиологической окраски. Телосложение нормостеническое. Печень на 1 см ниже края реберной дуги, гладкая, плотная. Биохимическое исследование: АЛТ 31 Ед/л, ACT 21 Ед/л, общий билирубин 16 мкмоль/л, ХС 5,0 ммоль/л, ТГ 0,9 ммоль/л, ХС-ЛПВП 3,56 ммоль/л, ХС-ЛПНП 3,9 ммоль/л.

Производим расчет активности каталазы в сыворотке крови:

Е=(0,00000073-0,00000031)*0,1*600*22,2^×10³ мм-1^×см-1*100=55,99 мкат/л

Активность каталазы в сыворотке крови составляет 55,99 мкат/л.

Таким образом, предлагаемым способом подтвержден диагноз «алкогольная болезнь печени».

Пример 4.

Пациентка, 48 лет. Алкоголь употребляет около 4 раз в месяц (примерно 20 г 11% сухого вина). Жалоб не предъявляет.АЛТ 15 Ед/л, ACT 17 Ед/л, общий билирубин 9 мкмоль/л, ХС 4,1 ммоль/л, ТГ 0,9 ммоль/л, ХС-ЛПВП 3,56 ммоль/л, ХС-ЛПНП 3,1 ммоль/л.

Производим расчет активности каталазы в сыворотке крови:

Е=(0,00000061-0,0000005)*0,1*600*22,2^×10³ мм-1^×см-1*100=14,66 мкат/л.

Активность каталазы 14,66 мкат/л. Алкогольная болезни печени у женщины исключена. Данный пример иллюстрирует результат предлагаемого способа диагностики.

Положительный эффект от использования данного способа заключается в своевременном выявлении алкогольной болезни печени на ранней стадии, значительном снижении экономических затрат на лечение, на оплачивание больничных листов.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя. У пациента в сыворотке крови фотометрически определяют активность каталазы, с последующим перерасчетом активности каталазы в мкат/л по формуле: Е=(Ахол - Аопт)×V×t×К×100, где Е - активность каталазы в мкат/л; А - оптическая плотность холостой и опытной проб; V - объем вносимой пробы, 0,1 мл; t - время инкубации, 10 мин; К - коэффициент миллимолярной экстинции перекиси водорода, равный 22,2×10³ мм^-1×см^-1. При значении активности каталазы более 37 мкат/л диагностируют алкогольную болезнь печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя. При значении Е менее или равной 37 мкат/л - отсутствие алкогольной болезни печени. Способ обеспечивает возможность снижения травматичности, отсутствия риска осложнений, доступности, простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности за счет определения активности каталазы в сыворотке крови фотометрическим методом. 4 пр.

Способ ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя, заключающийся в том, что у пациента в сыворотке крови фотометрически определяют активность каталазы с последующим перерасчетом активности каталазы в мкат/л по формуле:

Е=(Ахол - Аопт)×V×t×К×100,

где Е - активность каталазы в мкат/л; А - оптическая плотность холостой и опытной проб; V - объем вносимой пробы, 0,1 мл; t - время инкубации, 10 мин; К - коэффициент миллимолярной экстинции перекиси водорода, равный 22,2×10³ мм^-1×см^-1, и при значении активности каталазы более 37 мкат/л диагностируют алкогольную болезнь печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя, при значении Е менее или равной 37 мкат/л - отсутствие алкогольной болезни печени.