РАСТЕНИЯ BRASSICA OLERACEA, УСТОЙЧИВЫЕ К MYCOSPHAERELLA BRASSICICOLA Российский патент 2023 года по МПК A01H1/04 A01H6/20 C12Q1/68 C12N15/82 

Настоящее изобретение относится к растениям Brassica oleracea, устойчивым к Mycosphaerella brassicicola, содержащим обеспечивающий устойчивость геномный фрагмент, содержащий SEQ ID No. 1 и 3. Предлагаемые растения Brassica oleracea, устойчивые к Mycosphaerella brassicicola не содержат обеспечивающий устойчивость геномный фрагмент, содержащий SEQ ID No. 2 и 3. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам для идентификации предлагаемых растений и применению раскрытых последовательностей для идентификации растений Brassica oleracea, устойчивых к Mycosphaerella brassicicola.

Капусту, или Brassica oleracea, выращивают во всем мире как продовольственную культуру; как правило, почти все части растения можно использовать в пищу. Существует несколько сортов B. oleracea, в том числе кочанная капуста, савойская капуста, браунколь и остроголовая капуста (съедобная часть: листья); брокколи, спаржевая капуста, романеско и цветная капуста (съедобны головки цветков); брюссельская капуста (используется для боковых почек) и кольраби (съедобная часть: гипокотиль здесь как утолщенная часть стебля растения). Общим для всех этих овощей является то, что они богаты необходимыми питательными веществами, в том числе витамином С. Рацион, богатый крестоцветными овощами, также связан со снижением риска развития некоторых видов злокачественных опухолей человека.

Как и в случае со многими культивируемыми растениями, B. oleracea поражается несколькими болезнями и вредителями. Среди них Mycosphaerella brassicicola, относящаяся к Ascomycota, широко распространенный грибок, поражающий среди прочих капустные растения. Заболевание широко известно как кольцевая пятнистость. Исторически M.brassicicola наиболее отмечена на брюссельской капусте, брокколи и белокочанной капусте.

Возбудитель может размножаться как половым, так и бесполым путем. Конидии, образующиеся в результате бесполого размножения, могут вызывать появление пятен на листьях хозяина, однако известно, что такие следы не вызывают заболевания при инфицировании.

Аскоспоры, продуцируемые возбудителем на стадии полового размножения, заражают растения-хозяева, проникая в растение путем прорастания и одновременно проникая через устьица. Аскоспоры являются двуклеточными, восемь из них содержатся в каждой сумке внутри соответствующего им перитеция. Плодовые тела нуждаются во влаге для облегчения своего размножения и имеют тенденцию к образованию после периода очень высокой относительной влажности, продолжающегося, по меньшей мере, четверо суток, предпочтительно при температуре от 20 до 26°С. Чем дольше длится влажный период, тем сильнее может распространяться инфекция, при этом аскоспоры перемещаются между посевами при помощи ветра.

Заражение наиболее заметно на листьях растения-хозяина, но технически споры способны вызвать поражение любой надземной части растения. Повреждения, как правило, появляются примерно через 10-14 дней после грибковой инфекции. На концентрических кольцеобразных поражениях можно увидеть небольшие черные пятна конидий в пикнидах и аскоспоры в перитециях. Оба типа спор вызывают повреждения, хотя половые аскоспоры имеют тенденцию образовывать более крупные и более сферические кольца.

Кольцевидные поражения, вызванные заражением аскоспорами, заканчиваются на жилках листьев, что может ограничивать характерный круговой характер признаков M.brassicicola. Кольцевые симптомы вначале могут быть зелено-коричневого или серо-черного цвета, затем они будут прогрессировать, пока не станут серыми при высыхании и станут черными при намокании. Внешний край, как правило, образует кольцо хлороза вокруг некротизированной ткани в пределах очага поражения. Кольца возникают в виде пятен диаметром от 3 до 5 мм, которые потенциально могут вырасти до 2-3 см. Если инфекция распространяется достаточно далеко, это может привести к преждевременному сбрасыванию листьев у хозяина. Поражения, вызванные M.brassicicola, могут, в свою очередь, быть входными воротами для ряда других вторичных заболеваний, таких как Botrytis sp.

Гриб выживает на оставленных в почве частях растений; после видов Brassica важным хозяином является Raphanus sativus, также крестоцветные сорняки, такие как Hirschfeldia incana, Matthiola incana, Sisymbrium officinale и Thlaspi arvense, могут быть хозяевами возбудителя.

Все эти обстоятельства затрудняют контроль заболевания, особенно в районах интенсивного выращивания овощей, из-за большого количества переносимых по воздуху спор, где условия окружающей среды прохладные и влажные, что способствует распространению инфекции.

Одной из возможностей является применение фунгицидов, таких как беномил, хлорталонил, дифеноконазол или тиофанат-метил. Однако применение фунгицидов все более и более ограничено по экологическим и санитарным причинам. Кроме того, бороться с патогеном с помощью химии сложно, поскольку трудно определить идеальное время для применения фунгицидов.

Ущерб, нанесенный зараженным растениям, приводит к значительным потерям урожая, а также потере товарного вида. Полученный в результате ущерб представляет собой экономическую проблему, требующую надежного и устойчивого решения.

Учитывая проблемы, изложенные выше, целью селекции растений (овощей) является создание устойчивых растений, содержащих один или несколько генов устойчивости или генетических локусов, способствующих устойчивости к этому патогену. Этот подход также способствует более устойчивому производству соответствующей культуры.

В целом резистентность может быть моногенной, т.е. определяется одним локусом или геном, или может зависеть от большего числа локусов или генов. В последнем случае эти гены могут иметь аддитивный эффект, что приведет к локусам количественных признаков или QTL.

Наличие маркерных последовательностей, связанных с геном или генами устойчивости, способствует ускорению процесса селекции, поскольку B. oleracea является двухлетней культурой.

Как только будет налажено применение специфических ДНК-маркеров, сцепленных с геном устойчивости, можно будет применять эти маркеры для выявления устойчивых растений в потомстве от скрещивания. Это может привести к быстрому развитию нескольких родственных культур B. oleracea, где ген устойчивости или гены устойчивости внесены из одной общей родительской линии, несущей признак устойчивости. С применением этих специфических ДНК-маркеров жизненный цикл B. oleracea, который обычно длится два года, может быть преобразован в годовой жизненный цикл, когда потомство непосредственно проверяют на наличие признака, а не подвергают длительным полевым испытаниям.

Благодаря применению молекулярных маркеров исследователь больше не ограничен двухлетним жизненным циклом B. oleracea для тестирования устойчивости к патогену. Молодое потомство может быть непосредственно проверено на наличие локуса, определяющего устойчивость, и, таким образом, результат не зависит от зрелости проростков растений.

Селекцию на устойчивость обычно проводят путем создания первого скрещивания между восприимчивым генетическим материалом, имеющим высокий уровень агрономических качеств, и источником устойчивости. Отобранное устойчивое потомство повторно скрещивают с одной и той же родительской качественной линией при отборе как по качеству, так и по устойчивости к указанному патогену, в данном случае, M.brassicicola. Далее селекционные стадии могут быть ускорены применением клеточно-биологических методов индукции двойных гаплоидов (культура пыльников или культура микроспор), где в одном поколении достигают предельного уровня генетической чистоты.

Принимая во внимание вышеизложенное, целью настоящего изобретения является, помимо прочего, создание новых геномных фрагментов, обеспечивающих устойчивость к Mycosphaerella brassicicola, и растений, содержащих эти фрагменты.

Настоящее изобретение соответствует вышеупомянутой цели, среди других целей, как указано в прилагаемой формуле изобретения.

В частности, настоящее изобретение решает вышеуказанную задачу, среди прочих задач, предлагая растения Brassica oleracea, устойчивые к Mycosphaerella brassicicola, содержащие обеспечивающий устойчивость геномный фрагмент, содержащий SEQ ID No. 1 и 3.

SEQ ID No. 1 и 3 входят в состав геномного фрагмента хромосомы 4 между положениями пар оснований, охватывающими приблизительно 50000 пар. Учитывая среднюю длину гена у растений от 240000 до 250000 пар оснований, предполагают, что настоящая устойчивость кодируется одним геном. Дополнительно, доминирующим является ген, расположенный в настоящем геномном фрагменте, обеспечивающем предлагаемую устойчивость. Принимая во внимание, относительно небольшой размер геномного фрагмента, обеспечивающего предлагаемую устойчивость, специалист может легко, например, путем секвенирования и анализа, выделить предлагаемую в настоящем изобретении устойчивость к Mycosphaerella brassicicola.

В предпочтительном варианте осуществления, растения Brassica oleracea, устойчивые к Mycosphaerella brassicicola, не содержат обеспечивающий устойчивость геномный фрагмент, содержащий SEQ ID No. 2 и 4. Хотя SEQ ID No. 2 и 4 имеют более 99% идентичности последовательности с SEQ ID No. 1 и 3, соответственно, не наблюдают устойчивости к Mycosphaerella brassicicola у растений Brassica oleracea с геномным фрагментом, содержащим SEQ ID No. 2 и 4.

Геномный фрагмент, обеспечивающий предлагаемую устойчивость, дополнительно характеризуется тем, что содержит одну или несколько последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, и SEQ ID No. 17 и SEQ ID No. 23. Предпочтительно, геномный фрагмент, обеспечивающий предлагаемую устойчивость, включает все эти последовательности. Таким образом, настоящее изобретение относится к геномным фрагментам, обеспечивающим предлагаемую устойчивость, состоящим из SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, и SEQ ID No. 17 и SEQ ID No. 23.

Геномный фрагмент, обеспечивающий предлагаемую устойчивость, дополнительно характеризуется тем, что не содержит одну или несколько последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 16, и SEQ ID No. 18 и SEQ ID No. 24. Таким образом, настоящее изобретение относится к геномным фрагментам, обеспечивающим предлагаемую устойчивость, не состоящим из SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 16, и SEQ ID No. 18 и SEQ ID No. 24.

С левой стороны настоящего геномного фрагмента были идентифицированы SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21 и, следовательно, эти последовательности позволяют идентифицировать, амплифицировать, выделить и охарактеризовать настоящий геномный фрагмент.

На правой стороне настоящего геномного фрагмента была идентифицирована SEQ ID No. 25. Таким образом, эта последовательность позволяет идентифицировать, амплифицировать, выделить и охарактеризовать настоящий геномный фрагмент, возможно, в сочетании с приведенными выше последовательностями левой стороны.

В отношении геномных последовательностей левой и правой стороны, характеризующих геномный фрагмент, который обеспечивает предлагаемую устойчивость, следует отметить, что предлагаемая устойчивость не характеризуется соответствующими геномными последовательностями SEQ ID No. 20 и/или SEQ ID No. 22 (слева) и SEQ ID No. 26 (справа).

В соответствии с особенно предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения геномный фрагмент, который обеспечивает предлагаемую устойчивость, можно получать, получен или происходит из растения Brassica, типичные семена которого депонированы под номером NCIMB 43445 от 25 июля 2019 года в NCIMB (NCIMB Limited, Ferguson Building; Craibstone Estate, Bucksburn ABERDEEN, Scotland, AB21 9YA United Kingdom).

В контексте настоящего изобретения рассматриваются следующие растения Brassica oleracea: B. oleracea convar. botrytis var. botrytis (цветная капуста, романеско), B. oleracea convar. botrytis var. cymosa (брокколи), B. oleracea convar. botrytis var. asparagoides (спаржевая капуста), B. oleracea convar. oleracea var. gemnifera (брюссельская капуста), B. oleracea convar. capitata var. alba (белокочанная капуста, остроголовая капуста), B. oleracea convar. capitata var. rubra (краснокочанная капуста), B. oleracea convar. capitata var. sabauda (савойская капуста), B. oleracea convar. acephala var. sabellica (браунколь), B. oleracea convar. acephela var. gongylodes (кольраби) и B. oleracea var. tronchuda syn. costata (португальская капуста).

В соответствии с особенно предпочтительным вариантом осуществления настоящие растения представляют собой генетически нестабильные гибридные растения. В контексте настоящего изобретения «генетически нестабильный» указывает на то, что указанное сегрегирующее гибридное растение не может быть размножено в неизменном виде.

Настоящее изобретение также относится к способу идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola, как определено выше, предусматривающему стадию установления наличия обеспечивающего устойчивость геномного фрагмента, содержащего одну или несколько последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 23 и SEQ ID No. 25 в геноме растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению одной или нескольких последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 23 и SEQ ID No. 25 для идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola.

Дополнительно, настоящее изобретение относится к способам получения растений Brassica oleracea, устойчивых к Mycosphaerella brassicicola, предусматривающим стадию интрогрессии геномного фрагмента, обеспечивающего устойчивость, как определено выше, в растение Brassica oleracea, предпочтительно в растение Brassica oleracea, восприимчивое к Mycosphaerella brassicicola.

Кроме того, настоящее изобретение относится к последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID No. 1-26.

Настоящее изобретение будет дополнительно подробно описано в следующем примере.

Пример

Определение устойчивости к M.brassicicola

Тесты на заболевание проводили в поле, где происходит заражение M.brassicicola посредством присутствующих аскоспор. Никакого искусственного заражения не проводили. После 10-14 суток симптомы заражения M.brassicicola оценивают и присваивают баллы по шкале от 0 (растение погибло) до 9 (растение не имеет симптомов).

Молекулярная характеристика геномной ДНК и картирование гена устойчивости

Несколько популяций обратного скрещивания были получены путем скрещивания и повторного обратного скрещивания источника устойчивости, депонированного как NCIMB 43445, и различных сортов B. oleracea.

Набор SNP-маркеров был разработан путем сравнения данных о последовательностях линий, восприимчивых и устойчивых к M.brassicicola. Эти SNP-маркеры повторно картировали в разных популяциях Brassica и проводили селекцию кроссинговеров. При помощи этих генераций кроссинговеров картируемый регион был сужен. Референсный геном представлял собой сборку брокколи HDEM (B. oleracea convar. botrytis var. cymosa), как описано.

Анализ нескольких поколений растений позволил сократить генетическую локализацию гена устойчивости до площади ~ 50000 п.н. что соответствует приблизительно 0,3% этой хромосомы. Анализ последовательностей идентифицированной области дал настоящие нечетные SEQ ID No. от 1 до 25. Аналогично, анализ последовательностей соответствующей области в восприимчивых растениях дал настоящие четные SEQ ID No. от 2 до 26. Таким образом, могло быть идентифицировано большое количество геномных последовательностей, что позволяет точно и быстро идентифицировать растения, несущие ген, приводящий к устойчивости к M.brassicicola. Отдельные растения выбирали селекционеры из нескольких программ обратного скрещивания, где устойчивость к заболеванию комбинировали с наивысшим уровнем агрономического качества.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Bejo Zaden B.V.

<120> РАСТЕНИЯ BRASSICA OLERACEA, УСТОЙЧИВЫЕ К MYCOSPHAERELLA BRASSISICOLA

<130> P167324PC00

<160> 26

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0147.1R

<400> 1

ctggaatgac cagtgaggaa cctcacacta gttgcaacac ctcgatgcgt taagggaatc 60

ccaagctctg ctgctatccc cgacgcagca gtaatcccag ggataacttg aactcggatc 120

ccttgctgtt gcagaaagtc catttcttcc ccrcctcgtc caaaaaccag aggatctcca 180

cctttaagcc tcacaacagt cgcaccagct tcagcaaaac ttaggagcag ttcatgtatc 240

tcctcctgag ttctgctatg ataaccagca gttttgccga catagagaag cctagcatca 300

ggagcaacca actccagaac atcattagag acaagcctgt cgtaaagcaa aagatcagcg 360

ctttgaatga ctctgacagc tttcaaagtc aaaagctctg g 401

<210> 2

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0147.1S

<400> 2

ctggaatgac cagtgaggaa cctcacacta gttgcaacac ctcgatgcgt taagggaatc 60

ccaagctctg ctgctatccc cgacgcagca gtaatcccag ggataacttg aactcggatc 120

ccttgctgtt gcagaaagtc catttcttcc ccrcctcgtc caaaaaccag aggatctcca 180

cctttaagcc tcacaacagt agcaccagct tcagcaaaac ttaggagcag ttcatgtatc 240

tcctcctgag ttctgctatg ataaccagca gttttgccga catagagaag cctagcatca 300

ggagcaacca actccagaac atcattagag acaagcctgt cgtaaagcaa aagatcagcg 360

ctttgaatga ctctgacagc tttcaaagtc aaaagctctg g 401

<210> 3

<211> 248

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0754.1R

<400> 3

aacttcttta gcgatttgcc tccagtgacc atataaacga tgcaaacgcc tatttccacg 60

atcagctgtt gcggcacgac tatgtaaaga ccgagttttt ccccgaacgc gtgttgtccg 120

agctcgtggt agcgatcgaa acgctttccc ggaaccattt cgtgcatttc taccatttgc 180

cataatgtgt atagtgttat gatccatgag agaaccatta ctgtaattcc tggtccccag 240

ccgagctg 248

<210> 4

<211> 248

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0754.1S

<400> 4

aacttcttta gcgatttgcc tccagtgacc atataaacga tgcaaacgcc tatttccacg 60

atcagctgtt gcggcacgac tatgtaaaga ccgagttttt ccccgaacgc gtgttgtccg 120

agctcgtggt agcgatcgaa acgctttccc ggaaccattt cgtgcatttc taccatttgc 180

cataatgtgt atagtgttat catccatgag agaaccatta ctgtaattcc tggtccccag 240

ccgagctg 248

<210> 5

<211> 317

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0751.1R

<400> 5

attgtgtata tagatgatca atccagctaa aaataagaat gaaagggaat atgcatatag 60

acaagggggc acatcggagt ctgatgagag agatgcatga ggaggtttgg tttttataat 120

taacagagat gctgtgatgc aagacaagaa taagtacact ttgtcgagta cagatgtggt 180

gaggaagaga agcgtgcaga tgcaaagtcg gaagtcatat tcatctactc gtcgtccgat 240

ggcagctgga gatgatggaa ctcgatttgg aaggaggact cttgtggttt ggacttgtgc 300

cgccttaaat acctcac 317

<210> 6

<211> 317

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0751.1S

<400> 6

attgtgtata tagatgatca atccagctaa aaataagaat gaaagggaat atgcatatag 60

acaagggggc acatcggagt ctgatgagag agatgcatga ggaggtttgg tttttacaat 120

taacagagat gctgtgatgc aagacaagaa taagtacact ttgtcgagta cagatgtggt 180

gaggaagaga agcgtgcaga tgcaaagtcg gaagtcatat tcatctactc gtcgtccgat 240

ggcagctgga gatgatggaa ctcgatttgg aaggaggact cttgtggttt ggacttgtgc 300

cgccttaaat acctcac 317

<210> 7

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0148.1R

<400> 7

gtctgatgag agagatgcat gaggaggttt ggtttttata attaacagag atgctgtgat 60

gcaagacaag aataagtaca ctttgtcgag tacagatgtg gtgaggaaga gaagcgtgca 120

gatgcaaagt cggaagtcat attcatctac tcgtcgtccg atggcagctg gagatgatgg 180

aactcgattt ggaaggagga ctcttgtggt ttggacttgt gccgccttaa atacctcacg 240

agtctccctc tggtccttgg gaacatgttc tcgtcgtcgt cggcgatatt catctcctcc 300

gccttggaat cctctaactt cacggcgtta gtgttgatga actcctcctc ttctttagac 360

ttcaaagtcg aaatcatatt ctccatgagg cgtttcactt c 401

<210> 8

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0148.1S

<400> 8

gtctgatgag agagatgcat gaggaggttt ggtttttata attaacagag atgctgtgat 60

gcaagacaag aataagtaca ctttgtcgag tacagatgtg gtgaggaaga gaagcgtgca 120

gatgcaaagt cggaagtcat attcatctac tcgtcgtccg atggcagctg gagatgatgg 180

aactcgattt ggaaggagga gtcttgtggt ttggacttgt gccgccttaa atacctcacg 240

agtctccctc tggtccttgg gaacatgttc tcgtcgtcgt cggcgatatt catctcctcc 300

gccttggaat cctctaactt cacggcgtta gtgttgatga actcctcctc ttctttagac 360

ttcaaagtcg aaatcatatt ctccatgagg cgtttcactt c 401

<210> 9

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0140.1R

<400> 9

cggaactctt ggttcagaca ctggtctatt tcagatgtca ctatcttcaa tgccggaaac 60

cgtttgcaga cacaatgaat tccttctggc gccgagataa ggttgaggaa gatgatgtga 120

gattcaggaa ctcctttctg tatgagtagt tcaatggctt gattagcaga gttacctgta 180

gctaagacag gatctagaag taggacatga cgttcagaga tgtcttgagg aagcttctca 240

tatataagct gttttccatt gtctccaaca cggtggataa gaatcttccc taacttaatc 300

cctttgcagc aagcgcgtaa tgcgttttcc atgctttcac cacttcgaat aatagagatc 360

ccacaaagtt tcttgcagaa atcaactcca gtgtacacag c 401

<210> 10

<211> 401

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 0140.1S

<400> 10

cggaactctt ggttcagaca ctggtctatt tcagatgtca ctatcttcaa tgccggaaac 60

cgtttgcaga cacaatgaat tccttctggc gccgagataa ggttgaggaa gatgatgtga 120

gattcaggaa ctcctttctg tatgagtagt tcaatggctt gattagcaga gttacctgta 180

gctaagacag gatctagaag caggacatga cgttcagaga tgtcttgagg aagcttctca 240

tatataagct gttttccatt gtctccaaca cggtggataa gaatcttccc taacttaatc 300

cctttgcagc aagcgcgtaa tgcgttttcc atgctttcac cacttcgaat aatagagatc 360

ccacaaagtt tcttgcagaa atcaactcca gtgtacacag c 401

<210> 11

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2617.1R

<400> 11

catctactcg agaaagtgtt tcatcacttg cttgtgagtt ggtttcgaaa ctgtctccwa 60

gagaatgctg atcatgcatg tttgcgwacg acccatcact aagttctttg tcrtctgcaa 120

gtggchgagh wgaatcatct gaatgggcag agagyaattc tgcacgagga acttgagaac 180

tctgrtccat cgctgcaagt a 201

<210> 12

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2616.1S

<400> 12

catctactcg agaaagtgtt tcatcacttg cttgtgagtt ggtttcgaaa ctgtctccwa 60

gagaatgctg atcatgcatg tttgcgwacg acccatcact tagttctttg tcrtctgcaa 120

gtggchgagh wgaatcatct gaatgggcag agagyaattc tgcacgagga acttgagaac 180

tctgrtccat cgctgcaagt a 201

<210> 13

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2617.1R

<400> 13

agggcttctt catcctaaag ctccattaaa gcagcwtcgg tttstgacaa aggagctaac 60

aagtcttcgt aggtatctga taacagggac gagtccatta ttaatggtgg agagaacact 120

tggtcttcaa cgtcgtaaaa cgattgthgt gcatcagaag ctacactgtt cgatccagct 180

actgagagaa acscgttccc g 201

<210> 14

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2617.1S

<400> 14

agggcttctt catcctaaag ctccattaaa gcagcwtcgg tttstgacaa aggagctaac 60

aagtcttcgt aggtatctga taacagggac gagtccatta gtaatggtgg agagaacact 120

tggtcttcaa cgtcgtaaaa cgattgthgt gcatcagaag ctacactgtt cgatccagct 180

actgagagaa acscgttccc g 201

<210> 15

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2619.1R

<400> 15

agagagagtt ccattttcat caggtcaaac ccaccggaga ctcgggagga tcaatggcgg 60

cgatactaat cggaagagcc ttcaaatcag ctagagtcgt ccgtgctcga tctttctgca 120

cancgtctgc tgctcgtmaa cccgactccg atggccastc atcggaacct tcttcctcgt 180

cttcgttcac kttcgacaag g 201

<210> 16

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2619.1S; n = A/T/G/C

<400> 16

agagagagtt ccattttcat caggtcaaac ccaccggaga ctcgggagga tcaatggcgg 60

cgatactaat cggaagagcc ttcaaatcag ctagagtcgt tcgtgctcga tctttctgca 120

cancgtctgc tgctcgtmaa cccgactccg atggccastc atcggaacct tcttcctcgt 180

cttcgttcac kttcgacaag g 201

<210> 17

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2624.1R; n = A/T/G/C

<400> 17

ctagagtcgt ycgtgctcga tctttctgca cancgtctgc tgctcgtmaa cccgactccg 60

atggccastc atcggaacct tcttcctcgt cttcgttcac tttcgacaag gaaagcgaga 120

aacccatcct cgtgaaagcc ccgaacgctc grcggaacaa cgaytcggat tcggtgacga 180

tgccgacgtc tttcatgacg g 201

<210> 18

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2624.1S; n = A/T/G/C

<400> 18

ctagagtcgt ycgtgctcga tctttctgca cancgtctgc tgctcgtmaa cccgactccg 60

atggccastc atcggaacct tcttcctcgt cttcgttcac gttcgacaag gaaagcgaga 120

aacccatcct cgtgaaagcc ccgaacgctc grcggaacaa cgaytcggat tcggtgacga 180

tgccgacgtc tttcatgacg g 201

<210> 19

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2608.1R

<400> 19

aagatatgca tgattgggca gcaccgttga tagcttcggc tctattcgcg tttctatcgc 60

cggggctgat actgcagttt cctgggaaag aatctccggt tggtttcatg aacatgaara 120

cgacgatagc ttctattttc gtccacaccg ttctctacgg tctstttctc atcctcttcc 180

tagtcgttct caacgtccat g 201

<210> 20

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2608.1S

<400> 20

aagatatgca tgattgggca gcaccgttga tagcttcggc tctattcgcg tttctatcgc 60

cggggctgat actgcagttt cctgggaaag aatctccggt aggtttcatg aacatgaara 120

cgacgatagc ttctattttc gtccacaccg ttctctacgg tctstttctc atcctcttcc 180

tagtcgttct caacgtccat g 201

<210> 21

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2609.1R

<400> 21

cagcaccgtt gatagcttcg gctctattcg cgtttctatc gccggggctg atactgcagt 60

ttcctgggaa agaatctccg gtwggtttca tgaacatgaa aacgacgata gcttctattt 120

tcgtccacac cgttctctac ggtctstttc tcatcctctt cctagtcgtt ctcaacgtcc 180

atgtttatgc ttagctttag c 201

<210> 22

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2609.1S

<400> 22

cagcaccgtt gatagcttcg gctctattcg cgtttctatc gccggggctg atactgcagt 60

ttcctgggaa agaatctccg gtwggtttca tgaacatgaa gacgacgata gcttctattt 120

tcgtccacac cgttctctac ggtctstttc tcatcctctt cctagtcgtt ctcaacgtcc 180

atgtttatgc ttagctttag c 201

<210> 23

<211> 146

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2621.1R

<400> 23

taagtctctt ttgctcaart acctttttca gttattccaa aaataaagct tctatctgag 60

cttatctgtt tgtagaattg atgattgtaa gggttacatc gatacaggaa tgaaaytaaa 120

gccagagttt cttgcaaaaa aaaaaa 146

<210> 24

<211> 146

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2621.1S

<400> 24

taagtctctt ttgctcaart acctttttca gttattccaa aaataaagct tctatctgag 60

cttatctgtt tgtagaattg atgattgtaa gggttacatc aatacaggaa tgaaaytaaa 120

gccagagttt cttgcaaaaa aaaaaa 146

<210> 25

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2631.1R

<400> 25

aatgatacaa cattgaagaa acatactctt agwttgatct tccatcagat aaacccagca 60

ggaagtgact gaaacatact cttgggcgat cttkcattat ttaaaaaccc atcatcgacg 120

tttatataaa catgctttca actccggcca ctcgattttc ttcttatttg aattaaactg 180

ctcctttttc ttgaaatgca a 201

<210> 26

<211> 201

<212> ДНК

<213> Brassica oleracea

<220>

<223> 2631.1S

<400> 26

aatgatacaa cattgaagaa acatactctt agwttgatct tccatcagat aaacccagca 60

ggaagtgact gaaacatact cttgggcgat cttkcattat ataaaaaccc atcatcgacg 120

tttatataaa catgctttca actccggcca ctcgattttc ttcttatttg aattaaactg 180

ctcctttttc ttgaaatgca a 201

<---

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая способ идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola, и нуклеиновую кислоту, способную идентифицировать растение Brassica oleracea, устойчивое к Mycosphaerella brassicicola. Способ идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola, предусматривает стадию установления наличия обеспечивающего устойчивость геномного фрагмента, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 23 и SEQ ID No. 25 в геноме растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola. Изобретение расширяет арсенал способов идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola. 2 н.п. ф-лы, 1 пр.

1. Способ идентификации растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola, причем способ предусматривает стадию установления наличия обеспечивающего устойчивость геномного фрагмента, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 23 и SEQ ID No. 25 в геноме растения Brassica oleracea, устойчивого к Mycosphaerella brassicicola.

2. Нуклеиновая кислота, способная идентифицировать растение Brassica oleracea, устойчивое к Mycosphaerella brassicicola, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 23 и SEQ ID No. 25.