СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ПРОИЗВОДНЫХ 4-ОКСИКУМАРИНА Российский патент 2024 года по МПК G01N21/31 G01N1/28 

Описание патента на изобретение RU2813185C1

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу медицинских препаратов с помощью оптических средств, и может быть использовано для количественного определения лекарственных средств производных 4-оксикумарина, а именно, бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) и аценокумарола (синкумара) (V) в субстанциях.

Цель изобретения состояла в разработке чувствительной методики количественного определения исследуемых препаратов с использованием метода фотоэлектроколориметрии.

Ниже приводятся методики идентификации и количественного определения исследуемых препаратов.

Производные 4-оксикумарина по физическим свойствам представляют собой белые или белые слегка с кремоватым оттенком кристаллические вещества, практически нерастворимы в воде, мало растворимы в этаноле, растворимы в растворах гидроксидов щелочных металлов, ацетоне, диоксане. [1-3, 5-7].

Подлинность исследуемых препаратов устанавливают по ИК и УФ спектрам. Раствор фепромарона в этаноле имеет максимумы поглощения при 307 м 313 нм; в 0,1 м растворе NaOH - при 307 нм [5, 6, 7]. Аценокумарол в этаноле - при 284 и 306 нм [3].

После предварительной обработки производных 4-оксикумарина раствором щелочи, проходящей с разрывом лактонного кольца, образуется фенольное соединение, вступающее в реакцию азосочетания (образуются азокрасители от ярко-оранжевого до вишнево-красного цвета) [3, 4, 5].

Для установки подлинности этих веществ используют сплавление со щелочами. При этом происходит разложение препарата и образование соли салициловой кислоты. После прибавления соляной кислоты выпадает салициловая кислота, которую идентифицируют раствором железа (3+) хлорида. Образуется сине-фиолетовое окрашивание [3, 4, 5].

Для подтверждения наличия алифатической спиртовой группы проводят реакцию ацетилирования уксусным ангидридом [3, 5].

Наличие алифатической кетонной группы в исследуемых препаратах подтверждают реакцией препарата с салициловым альдегидом в присутствии концентрированной серной кислоты и нагреванием в течение 15 мин. Раствор приобретает оранжевое или красно-оранжевое окрашивание [5].

Для идентификации препаратов, содержащих нитрогруппу в ароматическом кольце (нитрофарин, аценокумарол) проводят восстановление нитрогруппы в аминогруппу цинковой пылью в соляной кислоте. Затем обрабатывают нитритом натрия в кислой среде в присутствии мочевины и через 1 мин прибавляют раствор Р-нафтола. Появляется красное окрашивание азокрасителя [3, 5].

Количественное определение производных 4-оксикумарина основано на кислотных свойствах, обусловленных наличием алифатической ОН-группы. Это определение проводится методом нейтрализации гидроксидом натрия в ацетоне в присутствии фенолфталеина [5].

Известен способ количественного определения варфарина методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методика основана на концентрировании варфарина натрия на бумажные фильтры марки «синяя лента», десорбции его дистиллированной водой под действием ультразвука, фильтрации через мембранный фильтр и количественном определении с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием диодно-матричного детектора при длине волны 210 нм [Голуб А.А. Определение варфарина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Голуб А.А., Ивашкевич Л.С. Здоровье и окружающая среда. - №27. - 2017. - С. 226-229.].

Прототипом заявленного способа является количественное определение 4-оксикумарина оптическим методом в диапазоне концентраций 0,01-10 мкг/мл [Авторское свидетельство SU 1497527 Способ определения 4-оксикумарина. 30.07.1989. бюл. №28. 5 с.]. Способ включает растворение исследуемого вещества в метиловом спирте, обработку полученного раствора 0,5% водным раствора перйодата калия, концентрированной 35-38% соляной кислотой, а также 25% водным раствором гидроксида аммония, при их объемном соотношении 1:0,5:0,5 соответственно. После чего производят измерение интенсивности флуоресценции. Возбуждение проводят при 346 нм, флуоресценцию регистрируют при 418 нм. Чувствительность методики составляет 0,01 мкг/мл. Однако при использовании данной методики невозможно определение синкумарина, фепромарона, нитрофарина и ряда других производных 4-оксикумарина.

Таким образом, приведенные методики идентификации и количественного определения производных 4-оксикумарина являются малочувствительными и неспецифичными.

Разработанный способ определения лекарственных препаратов заключался во взаимодействии производных 4-оксикумарина в диоксане со спиртовым раствором п-анизидина в концентрированной соляной кислоте при комнатной температуре и перемешивании. Образуются окрашенные продукты - азометины [7].

Аналогичные реакции проходят и с остальными производными 4-оксикумарина. В качестве химического реактива предлагается спиртовый раствор п-анизидина в концентрированной соляной кислоте. п-Анизидин - кристаллическое вещество, температура плавления 57,2°С, температура кипения 243°С, растворим в горячей воде, спирте, диэтиловом эфире [7].

Задачей, на решение которой направлено изобретение, являлась в разработка чувствительной методики количественного определения производных 4-оксикумарина в субстанциях, обеспечивающей повышение доступности проведения анализа, точности определения, чувствительности, специфичности для данной группы химических веществ, отсутствие использования токсичных реактивов, а также простоту выполнения.

Технический результат настоящего изобретения состоит в расширении номенклатуры способов количественного определения производных 4-оксикумарина путем разработки экспрессной чувствительной методики количественного определения бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) и аценокумарола (V) в субстанциях с относительной ошибкой не более ±0,77%. в отсутствии использования токсичных реактивов.

Технический результат достигается тем, что в способе количественного определения производных 4-оксикумарина, включающем растворение анализируемой пробы, выдерживание до полного растворения при комнатной температуре, дальнейшую обработку приготовленных растворов субстанций бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) химическим реактивом, измерение оптической плотности окрашенных растворов, определение содержания вещества в субстанции по предварительно построенным калибровочным графикам, согласно изобретению, навеску бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) растворяют в диоксане при комнатной температуре, к аликвоте субстанций добавляют каплями в течение 10 минут избыток по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола 96 масс. % и соляной кислоты концентрированной, при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, реакционную смесь выдерживают 5 минут до образования ярко-желтого окрашивания, затем выдерживают еще 3 минуты, фотоколориметрируют растворы при длине волны 364 нм относительно раствора сравнения - диоксана.

Сущность заявленного способа заключалась в растворении анализируемой пробы в диоксане, выдерживании до полного растворения и доведении объемов растворов до метки тем же растворителем, дальнейшей обработке аликвотной части приготовленного раствора химическим реактивом в кислой среде. После появления окрашивания растворы доводят до метки растворителем и фотоэлектроколориметрируют.

Предлагаемый способ количественного определения 4-оксикумарина заключается во взаимодействии растворов исследуемых препаратов бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) с раствором химического реактива в кислой среде, приводящий к образованию окрашенных продуктов. В качестве химического реактива предлагается спиртовый раствор п- анизидина в концентрированной соляной кислоте.

Пример реализации способа

Ниже приведены методики приготовления спиртового раствора п-анизидина в концентрированной соляной кислоте, растворов исследуемых препаратов и методика их количественного определения.

Приготовление спиртового раствора химического реактива. 0,5 г п-анизидина в конической колбе емкостью 200,0 мл растворяют в 100 мл-смеси: 85 мл этанола 96 масс. % и 15 мл концентрированной соляной кислоты при комнатной температуре и перемешивании. Сохраняют полученный раствор в склянке из темного стекла в течение 2 суток.

Изготовление растворов исследуемых препаратов.

В мерных колбах емкостью 50,00 мл растворяют точно отвешенные навески растертых порошков бензпромарона (I) около 0,01 г, нитрофарина (II) около 0,002 г, фепромарона (III) около 0,01 г, варфарина (IV) около 0,0025 г и аценокумарола (V) около 0,004 г сначала в 25 мл диоксана при комнатной температуре и перемешивании. Выдерживают 5 мин до полного растворения навесок. Объемы растворов доводят до метки диоксаном и встряхивают.

Количественное определение исследуемых препаратов.

В мерные колбы емкостью 20,00 мл помещают 3,0 мл растворов бензпромарона (I) и фепромарона (III), 7,0 мл растворов нитрофарина (II), варфарина (IV) и аценокумарола (V) и прибавляют каплями спиртового раствора химического реактива - 3,0 мл 0,5 масс. %-ного спиртового раствора п-анизидина в концентрированной соляной кислоте при комнатной температуре и перемешивании в течение 10 мин. Затем реакционную смесь выдерживают еще 5 мин. Появляется ярко-желтое окрашивание. Выдерживают 3 мин. Объемы растворов доводят до метки диоксаном и измеряют оптическую плотность поглощения окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при длине волны 364 нм, в кювете с поглощающим слоем 10,0 мм. Раствор сравнения - диоксан.

Построение калибровочных графиков исследуемых препаратов бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V).

В мерных колбах емкостью 50,00 мл растворяют точно отвешенные навески растертых порошков бензпромарона (I) около 0,01 г, нитрофарина (II) около 0,002 г, фепромарона (III) около 0,01 г, варфарина (IV) около 0,0025 г и аценокумарола (V) около 0,004 г сначала в 25 мл диоксана при комнатной температуре и перемешивании. Выдерживают 5 мин до полного растворения навесок. Объемы растворов доводят до метки диоксаном и встряхивают.

В мерные колбы емкостью 20,00 мл помещают объемы 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 мл растворов бензпромарона (I) и фепромарона (III), объемы 5,0; 6,0; 7,0; 8,0;9,0 мл растворов нитрофарина (II), варфарина (IV) и аценокумарола (V) прибавляют каплями спиртового раствора химического реактива - 3,0 мл 0,5 масс. %-ного спиртового раствора п-анизидина в концентрированной соляной кислоте при комнатной температуре и перемешивании в течение 10 мин. Затем реакционную смесь выдерживают еще 5 мин. Появляется ярко-желтое окрашивание. Выдерживают 3 мин. Объемы растворов доводят до метки диоксаном и измеряют оптическую плотность поглощения окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при длине волны 364 нм, в кювете с поглощающим слоем 10,0 мм. Раствор сравнения - диоксан.

Количественное определение исследуемых препаратов.

Подчинения интенсивности поглощения окрашенных растворов закону Бугера-Ламберта-Бера находятся в пределах концентраций для субстанций бензпромарона от 0,020 до 0,040 мг/мл раствора, для субстанции нитрофарина от 0,010 до 0,018 мг/мл раствора; для субстанции фепромарона от 0,020 - до 0,040 мг/мл раствора; для субстанции варфарина от 0,0125 до 0,0225 мг/мл раствора; для субстанции аценокумарола от 0,020 до 0,036 мг/мл раствора.

Коэффициенты а и b в исследуемых препаратах вычислены после обработки калибровочных графиков методом наименьших квадратов и представлены на фиг. 2-6 (в таблицах 2-6), (где X - среднее значение определений, S - стандартное отклонение, Sx - стандартное отклонение средней величины, ΔХ - полуширина доверительного интервала величины, Е - относительная ошибка среднего результата).

Относительная ошибка определения не превышает ±0,77%.

Разработанный способ количественного определения лекарственных средств производных 4-оксикумарина - прост в выполнении и дает воспроизводимые результаты.

Результаты количественного определения бензпромарона (I) в субстанции приведены па фиг. 1, нитрофавина (II) в субстанции на фиг. 2, фепромарона (III) в субстанции на фиг. 3, варфарина (IV) в субстанции на фиг. 4, аценокумарола (V) в субстанции на фиг. 5.

На фиг. 6 представлены сравнительные данные, подтверждающие преимущества предлагаемого способа количественного определения лекарственных средств производных 4-оксикумарина в субстанциях, перед аналогом.

Разработанный способ количественного определения является доступным, специфичным для данной группы химических веществ, не требует использования токсичных реактивов, а также является простым в выполнении и дает воспроизводимые результаты.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. РЛС. Ежегод. сб. М.: МЕДпрессинформ. - 2002. - 1504 с.

[2] АЦЕНОКУМАРОЛ. Вадемекум /на англ.яз./, - PoLfa. - 1993. - С. 28.

[3] Методы идентификации фармацевтических препаратов / Максютина Н.П., Каган Ф.Е., Митченко Ф.А., Кириченко Л.А., Когет Т.А. - К.: Здоровья. - С. 1978. - С.С. 101, 103, 105, 106, 109, 110, 215, 218.

[4] Анализ фармакопейных препаратов по функциональным группам / Мелентьева Г.А., Цуркап А.А., Гулимова Т.А. - Рязань1990. - 200 с.

[5] Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. - Учебное пособие. М.: МЕДпрессинформ. - 2007: - С. 388-398.

[6] Туркевич М.М. Фармацевтична Учбовий - К: Вища школа. - 1973. - С. 254.

[7] Химический энциклопедический словарь /ХЭС/ - М.: Советская энциклопедия. = 1983. - С.С. 47, 206, 387, 527, 617.

Похожие патенты RU2813185C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ФТОРХИНОЛОНОВ (ИЛИ ФЛОКСАЦИНОВ) 2021
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
  • Долотова Татьяна Митрофановна
  • Чупандина Елена Евгеньевна
RU2776961C1
Способ определения 4-оксикумарина 1987
  • Григорьев Олег Анатольевич
  • Хабаров Анатолий Алексеевич
SU1497527A1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ МОРФОЛИНА 2020
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
  • Долотова Татьяна Митрофановна
  • Чупандина Елена Евгеньевна
RU2740909C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗОТЕНОТИАЗИНА-1,1-ДИ-ОКСИДА (ГРУППЫ ОКСИКАМОВ) 2020
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
  • Долотова Татьяна Митрофановна
  • Чупандина Елена Евгеньевна
RU2740908C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ИМИДАЗОЛА (ГРУППЫ ИМИДАЗОЛИНА) 2014
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьяковва Нина Алексеевна
RU2597787C2
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 1,4-ДИГИДРОПРОИЗВОДНЫХ 1,2,4-БЕНЗОТИАДИАЗИНА-1,1-ДИОКСИДА 2021
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
  • Долотова Татьяна Митрофановна
  • Чупандина Елена Евгеньевна
RU2771239C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП СТИГМИНОВ 2014
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
RU2597796C2
Спиртовые комплексы производных 4-оксикумарина, проявляющие антикоагулятрные свойствами 1978
  • Смирнова Т.В.
  • Вишнякова Г.М.
  • Перина А.И.
  • Лакин К.М.
  • Новикова Н.В.
  • Маршалкин В.Н.
SU725423A1
Способ качественного определения 4-оксикумарина 1984
  • Григорьев Олег Анатольевич
  • Хабаров Анатолий Алексеевич
  • Кобелев Сергей Николаевич
SU1182348A1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТИЛКАРБАМАТНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗИМИДАЗОЛА 2014
  • Калашников Валентин Петрович
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Дьякова Нина Алексеевна
RU2589845C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 813 185 C1

Реферат патента 2024 года СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ПРОИЗВОДНЫХ 4-ОКСИКУМАРИНА

Изобретение относится к фармацевтическому анализу. Раскрыт способ количественного определения производных 4-оксикумарина, включающий растворение анализируемой пробы, выдерживание до полного растворения при комнатной температуре, дальнейшую обработку приготовленных растворов субстанций бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) химическим реактивом, измерение оптической плотности окрашенных растворов, определение содержания вещества в субстанции по предварительно построенным калибровочным графикам. При этом навеску бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) растворяют в диоксане при комнатной температуре, к аликвоте субстанций добавляют каплями в течение 10 минут избыток по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола 96 масс.% и соляной кислоты концентрированной при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, реакционную смесь выдерживают 5 минут до образования ярко-желтого окрашивания, затем выдерживают еще 3 минуты, после чего растворы фотоколориметрируют при длине волны 364 нм относительно раствора сравнения - диоксана. Изобретение обеспечивает экспрессную и чувствительную методику количественного определения бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) и аценокумарола (V) в субстанциях с относительной ошибкой не более ±0,77% в отсутствие использования токсичных реактивов. 6 ил., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 813 185 C1

Способ количественного определения производных 4-оксикумарина, включающий растворение анализируемой пробы, выдерживание до полного растворения при комнатной температуре, дальнейшую обработку приготовленных растворов субстанций бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) химическим реактивом, измерение оптической плотности окрашенных растворов, определение содержания вещества в субстанции по предварительно построенным калибровочным графикам, отличающийся тем, что навеску бензпромарона (I), нитрофарина (II), фепромарона (III), варфарина (IV) или аценокумарола (V) растворяют в диоксане при комнатной температуре, к аликвоте субстанций добавляют каплями в течение 10 минут избыток по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола 96 масс.% и соляной кислоты концентрированной при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, реакционную смесь выдерживают 5 минут до образования ярко-желтого окрашивания, затем выдерживают еще 3 минуты, после чего растворы фотоколориметрируют при длине волны 364 нм относительно раствора сравнения - диоксана.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2024 года RU2813185C1

Способ определения 4-оксикумарина 1987
  • Григорьев Олег Анатольевич
  • Хабаров Анатолий Алексеевич
SU1497527A1
Способ разделения и выделения кумаринов 1990
  • Кузнецов Петр Васильевич
  • Шкаренда Вадим Васильевич
SU1770897A1
ZHANG D
et al
Method Optimization: Analysis of Benzbromarone and Tolfenamic Acid in Citrus Tissues and Soil Using Liquid Chromatography Coupled With Triple-Quadrupole Mass Spectrometry // Front
Plant Sci., 2020, V.6(11), pp.1-9.

RU 2 813 185 C1

Авторы

Долотова Татьяна Митрофановна

Сливкин Алексей Иванович

Дьякова Нина Алексеевна

Чупандина Елена Евгеньевна

Харина Анастасия Юрьевна

Даты

2024-02-07Публикация

2023-04-25Подача