Способ определения 4-оксикумарина Советский патент 1989 года по МПК G01N21/64 

Изобретение относится к фармацевтической и аналитической химии, а именно к способам определения 4-окг- сикумарина, и может быть применено для качественного и количественного определения этого соединения как в чистом виде, так и в виде примеси в различном материале при фармацевтических, токсикологических и санитарных исследованиях.

Целью изобретения является повышение достоверности и улучшение воспроизводимости при количественном определении 4-оксикумарина в диапазоне концентраций 0,01-10 мкг/мл.

Способ осуществляют следующим

образом.

Исследуемую пробу растворяют в метиловом спирте и добавляют к полученному раствору 1 мл 0,5%-ного водного раствора перйодата калия, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты, 1,5 мл 25%-ного раствора гидроксида аммония и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора на флуориметре Квант-5 или ЭФ-3 МА по отношению к стандартному раствору с известным содержанием 4-оксикумарина. Расчет содержания 4-оксикумарина в анализи- руемой пробе проводят по калибровочному графику.

Чувствительность способа состав- - ляет 0,01 мкг/ьш, что в 10 раз вьпае ранее известного.

Способ имеет достаточно высокую селективность, так как подобной реакции не дают кумарин, синкумар,

и ;о сл

неодикумарин, фепромарон, нитрофарин, фурокумарины и ряд других близких по структуре соединений, что проверено на достоверных образцах данных веществ. Сведения о флуоресценции 4- оксикумарина и родственных соединений при определении по предлагаемому способу приведены в табл.1.

Найдены оптимальные значения концентрации реагентов Гсм.табл.2). В качестве оптимальных по величине максимальной интенсивности флуоресценции и растворимости реагентов выбколбу на 100 мл и растворяют в 80- 90 мл метилового спирта, доводят объем раствора до метки метанолом, К 0,5 мл полученного раствора добавляют 6,5 мл метилового спирта, 1 мл 0,5%-ного водного раствора перйодата калия, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты (35-38%) и через Гмин 1,5 мл 25%-ного раствора гидроксида аммония, перемешивая раствор после добавления каждого реактива. Флуори- метрируют полученный раствор по отношению к стандартному, содержащему

раны следующие их концентрации: 0,3,- 15 4-оксикумарин в концентрации 5 мкг/мл. 0,5%-ный водный раствор перйодата ка- Содержание 4-оксикумарина в пробе , концентрирования (35-38%) солялия.

рассчитывают по калибровочному графи- ная кислота и 20-25%-ный раствор гидр- ку.

оксида аммония. В качестве раствори- Пример2. Количественное оп- теля выбран метиловый спирт (табл.3). 20 ределение 4-оксикумарина в лекарст- Определены оптимальные условия

7 количественного анализа 4-оксикУмарина. В табл.4 представлена зависимость интенсивности флуоресценции 4-оксикумарина от количества 0,5%- ного водного раствора перйодата калия. В табл.5 и 6 представлена аналогичная зависимость от количества концентрированной соляной кислоты и 25%-ного раствора гидроксида аммония соответственно. Количества реактивов выбраны исходя из максимального значения интенсивности флуоресценции. При использовании запредельных значений количества реактивов желаемый результат не достигается.

Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и концентрацией 4-оксикумарина сохраняется в области 0,01-10 мкг/мл (табл.7).

Спектр возбуждения фпуоресцен- ции 4-оксикумарина с выбранными реактивами находится в области 270- 400 нм с максимумом 346 нм, спектр излучения 375-515 нм с максимумом 418 нм. Величина Стоксового смещения для продукта реакции 4-оксикумарина составляет 72 нм.

Способ применен для количественного определения примеси 4-оксикумарина в лекарственных средствах группы антикоагулянтов непрямого типа действия и зоокумарнне, а также для анализа 4-оксикумарина в чистом виде.

Пример 1. Количественное определение 4-оксикумарина в субстанции. 0,01 г порошка 4-оксикумарина (точная навеска) помещают в мерную

25

30

35

венных средствах и зоокумарине. 0,1 г (точная навеска) порошка измельченных таблеток или субстанции зоокумарина помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 80-90 мп метилового спирта, доводят объем, раствора до метки метанолом. К 0,5 мп полученного раствора добавляют метанол и реактивы в том же количестве и последовательности, как в примере 1. Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием 4-оксикумарина 0,5 мкг/мл. Расчет содержания примеси 4-оксикумарина в пробах проводят по калибровочному графику.

В результате проведенных исследований нами обнаружено, что в таблетках неодикумарина, фепромарона и нитрофаоина содержится в качестве примеси 0,31% 4-оксикумарина, в Синкумаре - 0,18%. Зоокумарин содержит в среднем 0,965% примеси 4- оксикумарина.

Таким обпазом, предлагаемый способ по сравнению с ранее известным является более чувствительным (чувствительность способа 0,01 мкг/мл) и позволяет проводить количественное определение 4-оксикумарина.

Предлагаемый способ найдет применение в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях для количественного определения 4-окси- 55 кумарина в субстанции и примеси его в лекарственных средствах антикоагу- лянтного действия, производных этого соединения (согласно требованиям технической документации), в централь40

45

50

колбу на 100 мл и растворяют в 80- 90 мл метилового спирта, доводят объем раствора до метки метанолом, К 0,5 мл полученного раствора добавляют 6,5 мл метилового спирта, 1 мл 0,5%-ного водного раствора перйодата калия, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты (35-38%) и через Гмин 1,5 мл 25%-ного раствора гидроксида аммония, перемешивая раствор после добавления каждого реактива. Флуори- метрируют полученный раствор по отношению к стандартному, содержащему

4-оксикумарин в концентрации 5 мкг/мл Содержание 4-оксикумарина в пробе

Пример2. Количественное оп- 0 ределение 4-оксикумарина в лекарст-

5

0

5

венных средствах и зоокумарине. 0,1 г (точная навеска) порошка измельченных таблеток или субстанции зоокумарина помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 80-90 мп метилового спирта, доводят объем, раствора до метки метанолом. К 0,5 мп полученного раствора добавляют метанол и реактивы в том же количестве и последовательности, как в примере 1. Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием 4-оксикумарина 0,5 мкг/мл. Расчет содержания примеси 4-оксикумарина в пробах проводят по калибровочному графику.

В результате проведенных исследований нами обнаружено, что в таблетках неодикумарина, фепромарона и нитрофаоина содержится в качестве примеси 0,31% 4-оксикумарина, в Синкумаре - 0,18%. Зоокумарин содержит в среднем 0,965% примеси 4- оксикумарина.

Таким обпазом, предлагаемый способ по сравнению с ранее известным является более чувствительным (чувствительность способа 0,01 мкг/мл) и позволяет проводить количественное определение 4-оксикумарина.

Предлагаемый способ найдет применение в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях для количественного определения 4-окси- 5 кумарина в субстанции и примеси его в лекарственных средствах антикоагу- лянтного действия, производных этого соединения (согласно требованиям технической документации), в централь0

5

0

ных заводских лабораториях для контроля качества и производства даннь1х препаратов, в сельском хозяйстве и агрохимии для определения 4-оксику- марина в родентицидных приманках (зоокумарине и др.) а также в санитарно-гигиенических исследованиях для определения остаточных количеств 4-оксикумарина в воздухе производственных помещений, сельскохозяйственных продуктах, воде, пбчве и тканях отравленных животных.

Обладая высокой достоверностью (чувствительностью и избиратель- костью), способ позволит улучшить воспроизводимость (точность) анализа А-оксикумарина.

Формула изобретения

Способ определения 4-оксикумари- на, включающий растворение пробы в спиртовой среде, последовательную обработку химическими реактивами, возбуждение и регистрацию флуоресценции, полученного раствора, по которой проводят определение, отличающий ся тем, что, с целью повышения достоверности и улучшения воспроизводимости при количественном определении 4-оксикумарина в диапазоне концентраций 0,01-10 мкг/м пробу растворяют в метиловом спирте и обрабатывают 0,5%-ным водным pacTвором перйодата калия, концентрированной 35-38%-ной соляной кислотой и 25%-ным раствором гидроксида аммония при их объемном соотношении 1:0,5:1,5, возбуждение проводят при длине волны 346 нм, а регистрируют флуоресценцию при 418 нм, по величине которой определяют концентрацию..

Т а б л и ц а 1

Продолжение табл.1

11497527

Продолжение табл.3

Изобретение относится к области аналитической и фармацевтической химии, конкретно к способам определения 4-оксикумарина. Цель - повышение достоверности и улучшение воспроизводимости количественного определения. Анализируемую пробу в среде метилового спирта обрабатывают последовательно 0,3-0,5 %-ным водным раствором перйодата калия, концентрированной соляной кислотой и 20-25%-ным раствором гидроксида аммония с последующим измерением интенсивности флуоресцении полученного раствора. 7 табл.

Фиолетовая

Нет

Концентрация, мкг/мл

Т аблицаЗ

25

Таблицаб

45

Таблица7

Относительная интенсивность флуоресценции , %

1497527iO

Продолжение табл.7