СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-ТРИГИДРОКСИ-6-(((4AR,10AR)-7-ГИДРОКСИ-1-ПРОПИЛ-1,2,3,4,4А,5,10,10А-ОКТАГИДРОБЕНЗО[G]ХИНОЛИН-6-ИЛ)ОКСИ)ТЕТРАГИДРО-2Н-ПИРАН-2-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК C07D405/12 C07H1/00 C07H13/02 C07H13/10 A61K31/473 A61P25/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу получения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты, которая представляет собой соединение для применения в лечении нейродегенеративных заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона. Настоящее изобретение также относится к новым промежуточным соединениям в соответствии с указанным способом и способом изготовления указанных промежуточных соединений.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой распространенное нейродегенеративное нарушение, которое становится все более распространенным с возрастом и затрагивает от семи до десяти миллионов человек во всем мире. Болезнь Паркинсона является многогранным заболеванием, характеризующимся как моторными, так и немоторными симптомами. Моторные симптомы включают тремор в покое (дрожание), брадикинезию/акинезию (медлительность и скудность движений), мышечную ригидность, постуральную неустойчивость и дисфункцию походки; при этом немоторные симптомы включают нейропсихиатрические нарушения (например, депрессию, психотические симптомы, тревожность, апатию, умеренное когнитивное нарушение и деменцию), а также вегетативные дисфункции и нарушения сна (Poewe et al., Nature Review, (2017) vol 3 article 17013: 1-21).

Ключевой характерной особенностью патофизиологии болезни Паркинсона является потеря пигментированных дофаминергических нейронов в компактном слое черного вещества, который обеспечивает дофаминергическую иннервацию полосатого тела и других зон головного мозга. Такая прогрессирующая нейродегенерация приводит к уменьшению уровней дофамина в полосатом теле, что приводит в результате к ряду изменений межнейронных связей в базальных ганглиях, что в конечном итоге приводит к появлению четырех основных моторных признаков болезни Паркинсона. Основной мишенью дофамина в полосатом теле являются срединные шипиковые GABA-ергические нейроны (MSN), селективно экспрессирующие рецепторы D1 или D2, продолжающиеся в виде их топографических проекций. GABA-ергический MSN, проецирующийся во внешний отдел бледного шара, также называемый стриатопаллидальным "непрямым путем", экспрессирует рецепторы D2 (MSN-2); при этом GABA-ергический MSN, проецирующийся в ретикулярную часть черного вещества и внутренний отдел бледного шара, также называемый стриатонигральным "прямым путем", экспрессирует рецепторы D1 (MSN-1). Уменьшение количества дофамина вследствие потери нейронов приводит к несбалансированной активности двух путей, что приводит в результате к заметному уменьшению на выходе таламической и кортикальной активности и, в конечном итоге, моторным дисфункциям (Gerfen et al, Science (1990) 250: 1429-32; Delong, (1990) Trends in Neuroscience 13: 281-5; Alexander et Crutcher, (1990) Trends in Neuroscience 13: 266-71; и для обзора Poewe et al., Nature Review (2017) vol. 3 article 17013: 1-21).

Наиболее эффективными терапевтическими стратегиями, доступными для пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, и направленными на контроль моторных симптомов, в основном являются непрямые и прямые агонисты дофамина. Классическая и общепринятая стандартная схема лечения включает постоянный пероральный прием L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-DOPA), который декарбоксилируется в головном мозге с образованием дофамина. Другие подходы заключаются во введении агонистов дофаминовых рецепторов, таких как апоморфин, который действует как на подтипы рецепторов D1, так и на подтипы рецепторов D2, или прамипексол, ропинирол и другие, которые преимущественно направлены на подтипы рецепторов D2. Оптимальное облегчение в отношении моторных симптомов обеспечивается с помощью применения как L-DOPA, так и апоморфина за счет активации ими как подтипов рецепторов D1, так и подтипов рецепторов D2 и целостного уравновешивания непрямых и прямых путей (т.е. агонисты D2 при этом способствуют устранению только дисфункции непрямого пути).

L-DOPA и апоморфин, характеризующиеся структурами, изображенными ниже, в настоящее время представляют собой наиболее эффективные лекарственные средства для лечения PD в клинической практике.

L-DOPA представляет собой пролекарство дофамина и остается наиболее эффективным лекарственным средством в лечении болезни Паркинсона с моторными симптомами. Однако после нескольких лет лечения (т.е. периода "медового месяца") возникают осложнения вследствие присущего заболеванию прогрессирования (т.е. длительной потери дофаминергических нейронов), а также плохого фармакокинетического (PK) профиля L-DOPA. Эти осложнения включают 1) дискинезию, которая представляет собой патологические непроизвольные движения, возникающие во время оптимального "своевременного эффекта" лекарственного средства; и 2) флуктуации в фазе "выключения", что представляет собой период, в течение которого положительный эффект L-DOPA ослабевает и симптомы снова появляются или ухудшаются (Sprenger and Poewe, CNS Drugs (2013), 27: 259-272).

Прямые агонисты дофаминовых рецепторов способны активировать ауторецепторы дофамина, а также постсинаптические дофаминовые рецепторы, расположенные на срединных шипиковых нейронах MSN-1 и MSN-2. Апоморфин относится к классу агонистов дофамина с 1,2-дигидроксибензольным (катехольным) фрагментом. В сочетании с фенетиламиновым мотивом, катехоламины часто обладают низкой пероральной биодоступностью или не обладают ей, как в случае с апоморфином. Апоморфин применяют в клинической терапии PD, хотя и с использованием непероральной доставки (как правило, посредством периодического подкожного введения или непрерывной парентеральной инфузии с помощью насоса в течение дня). В случае апоморфина исследования на животных показали, что трансдермальная доставка или доставка с помощью имплантатов могут обеспечивать возможные формы введения. Однако при исследовании доставки апоморфина из имплантатов у обезьян (Bibbiani et al., Chase Experimental Neurology (2005), 192: 73-78) было установлено, что в большинстве случаев животные должны были подвергаться лечению с помощью иммунодепрессанта дексаметазона для предупреждения местного раздражения и других осложнений после операции по имплантации. Были тщательно изучены альтернативные стратегии доставки для апоморфиновой терапии при PD, такие как ингаляционные и сублингвальные составы (см., например, Grosset et al., Acta Neurol Scand. (2013), 128:166-171 and Hauser et al., Movement Disorders (2016), Vol.32 (9): 1367-1372). Однако эти меры еще не применяются в клинической практике для лечения PD.

Альтернатива составам для неперорального применения на основе катехоламинов предусматривает применение пролекарства, обеспечивающего маскировку свободных гидроксильных групп катехола, чтобы обеспечить возможность перорального введения. Однако известной проблемой, связанной с разработкой пролекарств для клинического применения, являются трудности, связанные с прогнозированием превращения в исходное соединение в организме людей.

В литературе сообщалось о различных сложноэфирных пролекарствах на основе катехоламинов, таких как покрытые энтеросолюбильной оболочкой N-пропилнорапорфин (NPA) и монопивалоиловый сложный эфир апоморфина для дуоденальной доставки (см., например, WO 02/100377) и агонист D1-подобного рецептора адроголид, представляющий собой пролекарство, содержащее диацетил, А-86929 (Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol.7 (3): 305-316). Адроголид подвергается активному метаболизированию при первичном прохождении через печень в организме человека после перорального введения дозы и вследствие этого обладает низкой пероральной биодоступностью (прибл. 4%). У пациентов с PD внутривенный (IV) адроголид имеет противопаркинсоническую эффективность, сравнимую с эффективностью L-DOPA (Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol.7 (3): 305-316).

В дополнение к сложноэфирным пролекарствам на основе катехоламинов альтернативный подход к пролекарству включает защиту двух гидроксильных групп катехола в виде соответствующего производного метилендиокси или производного диацеталила. Этот принцип получения пролекарства был описан, например, в Campbell et al., Neuropharmacology (1982); 21(10): 953-961 и в US 4543256, WO 2009/026934 и WO 2009/026935.

Еще одним предлагаемым подходом для пролекарства на основе катехоламина является образование производного енона, как предлагается, например, в WO 2001/078713 и в Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444. Дополнительные примеры пролекарств на основе катехоламина см., например, в Sozio et al., Exp.Opin. Drug Disc. (2012); 7(5): 385-406.

Соединение (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол, изображенное как соединение (I) ниже, раскрыто в WO 2009/026934. Трансизомер был раскрыт ранее в Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49: 1494-1498, а затем в Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444, включая фармакологические данные, указывающие на то, что соединение обладает низкой пероральной биодоступностью у крыс.Рацемат впервые был раскрыт в Cannon et al., J. Heterocyclic Chem. (1980); 17: 1633-1636.

Соединение (I) является агонистом дофаминовых рецепторов со смешанной активностью в отношении D1 и D2. Некоторые пролекарственные производные соединения (I) известны из уровня техники.

В Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49: 1494-1498 и Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444 раскрыто еноновое производное формулы (la), изображенной ниже, которое, как было показано, превращается в активное соединение (I) в организме крыс.

В WO 2009/026934 и WO 2009/026935 раскрыты два типа пролекарственных производных соединения (I), включая соединение формулы (Ib), приведенной ниже:

Превращение соединения (Ib) в соединение (I) в гепатоцитах крысы и человека было продемонстрировано в WO 2010/097092. Кроме того, фармакология in vivo соединений (Ia) и (Ib), а также активного "исходного соединения" (I) была исследована на различных животных моделях, соответствующих болезни Паркинсона (WO 2010/097092). Было обнаружено, что как соединение (I), так и соединения (la) и (lb) являются эффективными, указывая на то, что соединения (Ia) и (Ib) превращаются in vivo в соединение (I). Сообщалось, что все три соединения характеризовались продолжительностью действия, которая была больше, чем наблюдаемая для L-dopa и апоморфина.

Другое пролекарство соединения (I), раскрытое в WO 2009/026934 и WO 2009/026935, является традиционным пролекарством, представляющим собой сложный эфир, в соответствии с формулой (Ic):

Несмотря на долголетний интерес в данной области, очевидно, что по-прежнему существует неудовлетворенная потребность в разработке эффективных, хорошо переносимых и активных при пероральном применении лекарственных средств для лечения PD. Пролекарственное производное смешанного D1/D2-агониста, характеризующееся стабильным PK-профилем, которое может обеспечить непрерывную дофаминергическую стимуляцию, может удовлетворить такие неудовлетворенные потребности.

Следовательно, также существует необходимость в способе изготовления таких лекарственных средств, особенно в способах, которые подходят для крупномасштабного производства и приводят в результате к высокому выходу соединения формулы (Id).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новому способу получения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты нижеуказанной формулы (Id):

из соединения (4aR, 10aR)-1-nponnn-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[д]хинолин-6,7-диола нижеуказанной формулы (I):

Весь способ, начиная с соединения (I), проиллюстрирован на нижеуказанной схеме 1.

Схема 1. Обзор общего способа

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I), где указанный способ включает следующую стадию 2) осуществления реакции соединения (А2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии со схемой реакции 2.

Схема 2. Обзор стадии 2

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению нижеуказанной формулы (A3),

или его соли.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I),

где указанный способ включает следующую стадию

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии со схемой реакции 3.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения нуклеофильный реагент, используемый на стадии 3, представляет собой основание, например, KOH или NaOH.

Схема 3. Обзор стадии 3

Индивидуальные аспекты настоящего изобретения относятся к каждой из стадий 1), 2) и 3) способа.

Другие индивидуальные аспекты настоящего изобретения относятся к новым промежуточным соединениям способа. Таким образом, дополнительные аспекты настоящего изобретения относятся к соединениям (А2) и (A3) и их солям соответственно, которые являются пригодными промежуточными соединениями в способах изготовления соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли.

Весь способ, также как и каждая отдельный стадия способа и промежуточные соединения, предусмотренные настоящим изобретением, пригодны для крупномасштабного изготовления соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Ссылки на соединения

Ссылки на соединение (I), соединения (Id), (А2) и (A3) включают соединения в растворах и твердых формах соединений, включая свободное вещество (цвиттер-ион) указанных соединений, соли указанных соединений, такие как кислотно-аддитивные соли или соли присоединения оснований, и полиморфные и аморфные формы соединений по настоящему изобретению и их соли. Кроме того, указанные соединения и их соли могут потенциально существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах с растворителями, такими как вода, этанол и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли

Фармацевтически приемлемые соли в настоящем контексте предназначены для обозначения нетоксичных, то есть физиологически приемлемых солей.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, которые представляют собой соли, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами при атоме азота в исходной молекуле. Указанные кислоты могут быть выбраны из, например, хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, фосфорной кислоты, азотистой кислоты, серной кислоты, бензойной кислоты, лимонной кислоты, глюконовой кислоты, молочной кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, щавелевой кислоты, малоновой кислоты, фумаровой кислоты, глутаминовой кислоты, пироглутаминовой кислоты, салициловой кислоты, гентизиновой кислоты, сахарина и сульфоновых кислот, таких как метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, нафталин-2-сульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота и бензолсульфоновая кислота.

Дополнительные примеры пригодных кислот и оснований для образования фармацевтически приемлемых солей можно найти, например, в Stahl и Wermuth (Eds) "Handbook of Pharmaceutical salts. Properties, selection, and use", Wiley-VCH, 2008.

Соединения по настоящему изобретению можно использовать в качестве промежуточных соединений для изготовления соединения (Id)) или его фармацевтически приемлемой соли. Следовательно, солевые формы промежуточных соединений, раскрытые в данном документе, не ограничены их фармацевтически приемлемыми солями. Тем не менее, фармацевтически приемлемые соли промежуточных соединений также могут успешно использоваться в изготовлении соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли. Следовательно, в варианте осуществления настоящего изобретения соль соединений (I), А2, A3 или соединения (Id) представляет собой фармацевтически приемлемую соль.

Пролекарстео

В контексте настоящего изобретения термины "пролекарство" или "производное пролекарства" обозначают соединение, которое после введения живому субъекту, такому как млекопитающее, предпочтительно человек, превращается в организме в фармакологически активный фрагмент. Превращение предпочтительно осуществляют в организме млекопитающего, например, в организме мыши, крысы, собаки, карликовой свиньи, кролика, обезьяны и/или человека. В настоящем контексте "пролекарство на основе соединения (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол", или "пролекарство на основе соединения формулы (I)", или "пролекарство на основе соединения (I)" понимается как соединение, которое после введения превращается в организме в соединение (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол. Указанное введение можно осуществлять любым традиционным путем введения фармацевтических композиций, известным из уровня техники, предпочтительно с помощью перорального введения.

В контексте настоящего изобретения термины "исходное соединение" и "исходная молекула" обозначают фармакологически активный фрагмент, полученный при превращении соответствующего пролекарства. Например, "исходное соединение" соединения формулы (Id) следует понимать как соединение формулы (I).

Фармакокинетические определения и сокращения

Используемый в данном документе термин "PK-профиль" является сокращением термина "фармакокинетический профиль". Фармакокинетические профили и фармакокинетические параметры, описанные в данном документе, основаны на данных зависимости концентрации в плазме от времени, полученных для соединения формулы (I) после перорального введения дозы соединения формулы (Id), с использованием некомпартментного моделирования. Сокращенными PK-параметрами являются: C_max (максимальная концентрация); t_max (время до C_max); (период полувыведения); AUC_0-24 (площадь под кривой от времени введения дозы и через 24 часа после введения дозы) и "воздействие через 24 ч." представляет собой концентрацию, измеренную через 24 часа после введения дозы.

Терапевтически эффективное количество

В контексте настоящего изобретения термин "терапевтически эффективное количество" соединения означает количество, достаточное для облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки клинических проявлений данного заболевания и его осложнений при терапевтическом вмешательстве, предусматривающем введение указанного соединения. Количество, достаточное для осуществления этого, определяется как "терапевтически эффективное количество".

Эффективные количества для каждой цели будут зависеть, например, от тяжести заболевания или повреждения, а также от веса и общего состояния субъекта.

В контексте настоящего изобретения "терапевтически эффективное количество" соединения формулы (Id) указывает на количество указанного соединения по настоящему изобретению, которое способно обеспечить такое количество соединения (I), которое является достаточным для облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки клинических проявлений определенного заболевания и его осложнений, если указанное соединение по настоящему изобретению вводят, предпочтительно пероральным путем, млекопитающему, предпочтительно человеку.

Лечение и осуществление лечения

В контексте настоящего изобретения "лечение" или "осуществление лечения" предназначено для обозначения ведения пациента и ухода за ним с целью облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки развития клинического проявления заболевания. Пациентом, подлежащим лечению, предпочтительно является млекопитающее, в частности человек.

Состояния, подлежащие лечению

Соединение, полученное с помощью способа по настоящему изобретению, предназначено для лечения нейродегенеративных или нейропсихиатрических заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона, и/или других состояний, для которых лечение с помощью агониста дофамина является терапевтически полезным.

Терапевтические показания включают ряд расстройств центральной нервной системы, характеризующихся моторными и/или немоторными нарушениями и для которых компонентом лежащей в основе патофизиологии является дисфункция межнейронных связей, опосредованных полосатым телом. Такие функциональные нарушения можно наблюдать при нейродегенеративных заболеваниях, таких как без ограничения болезнь Паркинсона (PD), синдром беспокойных ног, болезнь Хантингтона и болезнь Альцгеймера, а также при нейропсихиатрических заболеваниях, таких как без ограничения шизофрения, синдром дефицита внимания с гиперактивностью и наркотическая зависимость.

В дополнение к нейродегенеративным заболеваниям и нарушениям существуют другие состояния, при которых увеличение дофаминергического обмена может быть благоприятным, связанные с улучшением психических функций, в том числе различных аспектов когнитивных функций. Это также может иметь положительный эффект у пациентов с депрессией, и это также можно использовать в лечении ожирения в качестве анорексигенного средства и в лечении наркотической зависимости. Это может способствовать улучшению в случае минимальной мозговой дисфункции (MBD), нарколепсии, синдрома дефицита внимания с гиперактивностью и, возможно, отрицательных, положительных, а также когнитивных симптомов шизофрении.

Синдром беспокойных ног (RLS) и синдром периодических движений конечностей (PLMD) являются альтернативными показаниями, которые клинически лечат агонистами дофамина. Кроме того, в случае импотенции, эректильной дисфункции, половой дисфункции, индуцированной SSRI, синдрома гиперстимуляции яичников (OHSS) и некоторых видов опухоли гипофиза (пролактиномы) также, вероятно, можно обеспечить улучшение с помощью лечения агонистами дофамина. Дофамин участвует в регуляции сердечно-сосудистой и мочевыделительной систем и, соответственно, почечную недостаточность и гипертензию можно рассматривать как альтернативные показания для применения соединений по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение охватывает применение соединения формулы (Id), полученного с помощью способа по настоящему изобретению, для лечения перечисленных выше заболеваний и нарушений.

Пути введения

Фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (Id) либо в виде единственного активного соединения, либо в комбинации с другим активным соединением, могут быть, в частности, составлены для введения любым подходящим путем, таким как пероральный, ректальный, назальный, трансбуккальный, сублингвальный, пульмональный, трансдермальный и парентеральный (например, подкожный, внутримышечный и внутривенный) пути. В контексте настоящего изобретения пероральный путь является предпочтительным путем введения.

Следует принять во внимание, что путь будет зависеть от общего состояния и возраста субъекта, подлежащего лечению, природы патологического состояния, подлежащего лечению, и активного ингредиента.

Фармацевтические составы и вспомогательные вещества

Далее термины "вспомогательное вещество" или "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество" относятся к фармацевтическим вспомогательным веществам, в том числе без ограничения носителям, наполнителям, разбавителям, средствам против прилипания, связующим, покрытиям, красителям, разрыхлителям, ароматизаторам, веществам, улучшающим скольжение, смазывающим средствам, консервантам, сорбентам, подсластителям, растворителям, средам-носителям и вспомогательным средствам.

Настоящее изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (Id), т.е. соединение (Id) или его фармацевтически приемлемую соль, непосредственно полученные с применением способа по настоящему изобретению, например, как описано в экспериментальном разделе данного документа. Настоящее изобретение также предусматривает способ получения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (Id) или его фармацевтически приемлемую соль, такое как соединение (Id) или его фармацевтически приемлемая соль, непосредственно полученные с помощью способа по настоящему изобретению. Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением можно составлять с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами в соответствии с традиционным методиками, такими как раскрытые в Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 22 ^е изд. (2013), под редакцией Allen, Loyd V., Jr.

Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению, предпочтительно представляет собой фармацевтическую композицию для перорального введения. Фармацевтические композиции для перорального введения включают твердые пероральные лекарственные формы, такие как таблетки, капсулы, порошки и гранулы; и жидкие пероральные лекарственные формы, такие как растворы, эмульсии, суспензии и сиропы, а также порошки и гранулы для растворения или суспендирования в подходящей жидкости.

Твердые лекарственные формы для перорального введения могут быть представлены в виде отдельных единиц (например, таблеток, или твердых, или мягких капсул), каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента и предпочтительно одно или несколько подходящих вспомогательных веществ. При необходимости твердые лекарственные формы можно покрывать оболочками, такими как энтеросолюбильные оболочки, или их можно составлять так, чтобы обеспечивать модифицируемое высвобождение активного ингредиента, такое как отсроченное или пролонгированное высвобождение, в соответствии со способами, хорошо известными из уровня техники. При необходимости твердая лекарственная форма может представлять собой лекарственную форму, распадающуюся под действием слюны, такую как, например, таблетка, диспергируемая в полости рта.

Примеры вспомогательных веществ, пригодных для перорального твердого состава, включают без ограничения микрокристаллическую целлюлозу, кукурузный крахмал, лактозу, маннит, повидон, кроскармеллозу натрия, сахарозу, циклодекстрин, тальк, желатин, пектин, стеарат магния, стеариновую кислоту и низшие алкиловые эфиры целлюлозы. Аналогичным образом, твердый состав может включать вспомогательные вещества для составов с замедленным или пролонгированным высвобождением, известные из уровня техники, такие как глицерилмоностеарат и гипромеллоза. Если для перорального введения используется твердый материал, то состав можно получать, например, с помощью смешивания активного ингредиента с твердыми вспомогательными веществами, а затем прессования смеси в стандартной таблетирующей машине; или состав, например, в виде порошка, гранулы или мини таблетки, может быть помещен, например, в твердую капсулу. Количество твердого вспомогательного вещества в стандартной дозе будет существенно варьировать, однако, как правило, будет находиться в пределах от приблизительно 25 мг до приблизительно 1 г.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения могут быть представлены в виде, например, настоек, сиропов, капель для перорального применения или наполненных жидкостью капсул. Жидкие лекарственные формы для перорального введения также могут быть представлены в виде порошков для растворения или суспендирования в водной или неводной жидкости. Примеры вспомогательных веществ, пригодных для перорального жидкого состава, включают без ограничения этанол, пропиленгликоль, глицерин, полиэтиленгликоли, полоксамеры, сорбит, полисорбат, моно- и диглицериды, циклодекстрины, кокосовое масло, пальмовое масло и воду. Жидкие лекарственные формы для перорального введения можно получать, например, с помощью растворения или суспендирования активного ингредиента в водной или неводной жидкости, или с помощью включения активного ингредиента в жидкую эмульсию типа "масло-в-воде" или "вода-в-масле".

В твердых и жидких пероральных составах могут использоваться дополнительные вспомогательные вещества, такие как красители, вкусовые добавки и консерванты и т.п.

Фармацевтические композиции для парентерального введения включают стерильные водные и неводные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии для инъекции или вливания, концентраты для инъекции или вливания, а также стерильные порошки, подлежащие ресуспендированию в стерильных растворах или дисперсиях для инъекции или вливания перед применением. Примеры вспомогательных веществ, пригодных для парентерального состава, включают без ограничения воду, кокосовое масло, пальмовое масло и растворы циклодекстринов. Водные составы должны быть подходящим образом забуферены, если это необходимо, и приведены в состояние изотоничности с помощью достаточного количества соляного раствора или глюкозы.

Другие типы фармацевтических композиций включают суппозитории, ингаляторы, кремы, гели, кожные пластыри, имплантаты и составы для трансбуккального или подъязычного введения.

Необходимо, чтобы вспомогательные вещества, используемые для любого фармацевтического состава, соответствовали предполагаемому пути введения и были совместимы с активными ингредиентами.

Дозы

В одном варианте осуществления соединение (Id) или его фармацевтически приемлемая соль, полученные с помощью способа по настоящему изобретению, вводят в количестве от приблизительно 0,0001 мг/кг веса тела до приблизительно 5 мг/кг веса тела в день. В частности, ежедневные дозировки могут находиться в диапазоне от 0,001 мг/кг веса тела до приблизительно 1 мг/кг веса тела в день. Точные дозировки будут зависеть от частоты и способа введения, пола, возраста, веса и общего состояния здоровья подлежащего лечению субъекта, природы и тяжести подлежащего лечению состояния и каких-либо сопутствующих подлежащих лечению заболеваний, предполагаемого эффекта лечения, а также других факторов, известных специалистам в данной области.

Типичная дозировка для перорального введения для взрослых будет находится в диапазоне 0,01-100 мг/день соединения по настоящему изобретению, как например 0,05-50 мг/день, как например, 0,1-10 мг/день или 0,1-5 мг/день. Для удобства соединения по настоящему изобретению вводят в единичной лекарственной форме, содержащей указанные соединения в количестве от приблизительно 0,01 до 50 мг, как например, 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,5 мг, 1 мг, 5 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг или не более 50 мг соединения по настоящему изобретению.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигура 1: РК-профили у крыс линии Wistar, полученные после перорального введения дозы в соответствии с примером 7. Профили получены на основе средних значений концентрации в плазме крови у 3 субъектов для каждого соединения.

Ось X: время (часы); ось Y: концентрация соединения (I) в плазме (пг/мл), полученная после введения доз следующих соединений 1: соединения (Ia); π: соединения (Ib); ♦: соединения (Id).

Фигуры 2 и 3: динамика локомоторной активности (фигура 2) и общее пройденное расстояние (фигура 3) после лечения с помощью среды-носителя (H₂O, р.о.) или соединения (Id) (10, 30, 100 или 300 мкг/кг, р.о.) и по сравнению с видами лечения с использованием стандартов лечения (SoC): апоморфин (АРО, 3 мг/кг, s.c), прамипексол (РРХ, 0,3 мг/кг, s.c). Животным вводили дозу при t=60 минут после периода 60 минут привыкания в испытательных камерах, а затем контролировали активность в течение 350 минут. Данные оценивали с использованием критерия Крускала-Уоллиса с тестом множественных сравнений Данна, в результате чего получали общее значение Р<0,0001.

Фигура 2: ось X: время (мин.); ось Y: пройденное расстояние (см) ±SEM/5-минутные интервалы.

Фигура 3: ось Y: общее пройденное расстояние (см)±SEM. Указаны уровни значимости для апостериорных сравнений (относительно группы, обработанной средой-носителем): *<0,05, **<0,01, ***<0,001, ****<0,0001.

Фигуры 4 и 5. Взаимосвязь между концентрациями соединения (Id) и соединения (I) в плазме крови и гиперактивностью, вызванной соединением (Id) (100 мкг/кг, р.о.) (фигура 4), и соответствующая взаимосвязь между значениями концентрации в плазме крови апоморфина и гиперактивностью, вызванной апоморфином (3 мг/кг, s.c.) (фигура 5).

Ось X: время (мин.); ось Y слева: пройденное расстояние (см)±SEM/5-минутные интервалы; ось Y справа (фигура 4): концентрация соединения (I) в плазме крови (пг/мл); ось Y справа (фигура 5): концентрация апоморфина в плазме крови (нг/мл).

пройденное расстояние (см), λ концентрация в плазме.

Фигура 6: превращение соединения (Id) в соединение (I) в гепатоцитах крысы (6а) и человека (6b).

Ось X: время (мин.); ось Y: концентрация соединения (I) (пг/мл).

Фигура 7: превращение соединения (Id) в цельной крови крысы (7а) и человека (7b).

Ось X: время (мин.); ось Y: концентрация соединения (I) (пг/мл).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу изготовления соединения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты нижеуказанной формулы (Id) и его солей:

Соединение формулы (Id) является пролекарством на основе (4aR,10aR)-1-н-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диола [соединение (I)], которое является двойным агонистом D1/D2 с данными in vitro, приведенными в таблице 2.

Авторы настоящего изобретения наблюдали, что соединение (I) конъюгировано в гепатоцитах крысы и человека с производными сульфата и глюкуронида, включая соединение (Id). Было показано, что конъюгаты превращаются в соединение (I) посредством конъюгации и деконъюгации в организме.

Известно, что глюкуронидные и сульфатные производные нестабильны в кишечнике. Производные образуются в виде высокополярных и растворимых метаболитов для облегчения элиминации соединений из организма и впоследствии легко выводятся из организма. Например, у крыс с канюлированным желчным протоком глюкуронидные и сульфатные конъюгаты часто обнаруживаются в желчи, тогда как их деконъюгат (т.е. исходное соединение) обнаруживается в фекалиях. Обратное превращение глюкуронидных и сульфатных конъюгатов в кишечнике в исходное соединение, которое затем время от времени реабсорбируется, известно как часть процесса кишечно-печеночной рециркуляции. Как упоминалось ранее, пероральное введение дозы фенэтилкатехоламинов, таких как апоморфин, в целом оказалось безрезультатным из-за их низкой биодоступности. Аналогично, соединение (I) имеет недостаток в виде низкой пероральной биодоступности (Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444). Учитывая все вышеперечисленное и принимая во внимание нестабильность глюкуронидных и сульфатных конъюгатов в желудочно-кишечном тракте, не следует ожидать, что пероральное введение дозы глюкуронидных конъюгатов соединения (I) можно использовать для достижения достаточной концентрации соединения в плазме крови.

Принцип применения глюкуронидных производных в качестве пролекарств для пероральной доставки был исследован для ретиноевой кислоты (Goswami et al., J. Nutritional Biochem. (2003) 14: 703-709) и для морфина (Stain-Texier et al., Drug Metab. and Disposition (1998) 26 (5): 383-387). Оба исследования продемонстрировали очень низкие уровни концентрации исходных соединений после перорального введения дозы производных. Другое исследование предполагает использование буденозид-β-D-глюкуронида в качестве пролекарства для местной доставки буденозида в толстый кишечник для лечения язвенного колита, исходя из плохого всасывания пролекарства самого по себе из пищеварительной системы (Nolen et al., J. Pharm Sci. (1995), 84 (6): 677-681).

Тем не менее, неожиданно было обнаружено, что пероральное введение дозы соединения (Id), которое было идентифицировано как метаболит соединения (I) у крыс и минисвиней, обеспечивает системное воздействие соединения (I) в плазме, что предполагает полезность указанного соединения в качестве перорально активного пролекарства соединения (I).

Профиль концентрации в плазме крови соединения (I), полученный в результате перорального введения доз соединений (Ia) и (Ib) и соединения (Id) крысам линии Wistar в соответствии с примером 7, показаны на фигуре 1. Для всех соединений дозы скорректировали по молекулярной массе до дозы, равной 300 мкг/кг соединения (Ib), соответствующей 287 мкг/кг соединения (I). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что пероральное введение дозы соединений (Ia) и (Ib) крысам линии Wistar обеспечивает в результате ранние и высокие пиковые концентрации соединения (I). Такие высокие пиковые концентрации у людей могут быть ассоциированы с дофаминергическими побочными эффектами, такими как, например, тошнота, рвота и головокружение. Напротив, введение дозы соединения (Id) приводит в результате к более медленной скорости абсорбции, избегая быстрых пиковых концентраций, сопровождаемых длительным воздействием соединения (I) в плазме. Кроме того, концентрация в плазме крови соединения (I) у крыс линии Wistar сохраняется в течение 24 часов, хотя полученное значение AUC соединения (I), как правило, ниже, чем значение AUC, полученное после введения дозы соединения (Ib). Однако, поскольку пиковые концентрации соединения (I), которые, как ожидается, вызывают побочные эффекты, являются более низкими, то можно вводить более высокие дозы соединения (Id) для потенциально более высоких общих концентраций соединения (I) в плазме по сравнению с тем, что можно получить при введении доз соединений (Ia) и (Ib). При исследовании фармакокинетических свойств соединения (Ic) изобретатели обнаружили, что концентрации соединения (I) в плазме были чрезвычайно низкими, что делало соединение (Ic) непригодным в качестве пролекарства соединения (I) для перорального введения и подтверждало, что пероральная биодоступность, продемонстрированная для соединения формулы (Id), была очень непредсказуема. PK-параметры для PK-исследований у крыс линии Wistar перечислены в таблице 3.

Превращение соединения (Id) в соединение (I) in vivo также наблюдалось после перорального введения дозы соединения (Id) минисвиньям.

Биоконверсия соединения (Id) у человека подтверждается экспериментами из примера 4а и примера 4b, указывающими на превращение соединений в соединение формулы (I) в гепатоцитах крысы и человека и в крови крысы и человека (фигуры 6 и 7).

Таким образом, в заключение, соединение формулы (Id) полезно в качестве перорально активного пролекарства соединения (I), и, как наблюдали у крыс, оно обеспечивает профиль РК, избегая пика C_max, наблюдаемого для известных пролекарств (Ia) и (Ib), и обеспечивает значительно более высокую AUC соединения (I), чем соединения (Ic).

Соединение (Id) дополнительно исследовали в анализе локомоторной активности крыс в соответствии с примером 8. Анализ продемонстрировал дофаминергический эффект, полученный после перорального введения соединения (Id), см. также фигуры 2, 3 и 4. Факт того, что соединение формулы (Id) не обладает дофаминергической активностью in vitro, см. также пример 5 и таблицу 2, дополнительно указывает на то, что эффект соединения (Id) в анализе локомоторной активности крыс достигается с помощью превращения соединения (Id) в соединение (I).

В заключение, важной проблемой, связанной с соединением (Ib) из уровня техники, является то, что данное соединение является агонистом рецептора 5-НТ2В. Поскольку агонисты рецептора 5-НТ2В связаны с патогенезом порока клапана сердца (VHD) после их длительного воздействия, такие соединения не подходят для применения в лечении хронических заболеваний (Rothman et al., Circulation (2000), 102: 2836-2841 и Cavero and Guillon, J. Pharmacol. Toxicol. Methods (2014), 69: 150-161). Таким образом, дополнительное преимущество соединения (Id) состоит в том, что соединение не является агонистом 5-НТ2В, см. также пример 6 и таблицу 2.

Соединение формулы (Id) полезно в лечении нейродегенеративных заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона, и/или других состояний, для которых лечение агонистом дофамина является терапевтически полезным. Соединение, подходящее для перорального введения, может обеспечить новую парадигму лечения болезни Паркинсона.

Настоящее изобретение предусматривает масштабируемый синтез соединения (Id). Ключевой стадией является непосредственная реакция сочетания глюкуронида с соединением (А2) с использованием (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетата в качестве донора сочетания. Настоящее изобретение также включает стадию удаления защитной группы с использованием гидроксида натрия в смеси метанола/воды, что позволяет избежать использования, например, токсичного KCN. Весь способ, начиная с соединения (I), кратко проиллюстрирован на нижеуказанной схеме 4.

Схема 4. Общий способ

Способ получения соединения (I) для использования на стадии 1) описан в WO 2009/026934. В WO 2019/101917 раскрыт способ получения соединения А2 и соединения (Id).

В нижеуказанной таблице 1 представлен обзор соединений (А2) и (A3), которые являются промежуточными соединениями со следующими соответствующими названиями соединений.

Реагент триизопропилсилилхлорид, используемый на стадии 1), можно приобрести в Sigma-Aldrich (номер CAS: 13154-24-0).

Реагент (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат, используемый на стадии 2), можно приобрести в Sigma-Aldrich (номер CAS: 92420-89-8).

На стадии 1) соединение (I) селективно защищают триизопропилсилильной (TIPS) защитной группой с получением соединения (А2).

Соединение (I) реагирует с триизопроп ил сил ил хлоридом в апротонном растворителе в присутствии основания. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что осуществление реакции в апротонном растворителе, таком как дихлорметан (CH₂Cl₂), сульфолан или метилизобутилкетон (MIBK), в присутствии основания, такого как N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) или триэтиламин, приводит в результате к высокой конверсии и избирательности. Высокая конверсия наблюдалась при использовании 4-5 экв. DIPEA и осуществлении реакции при комнатной температуре.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стадию 1 осуществляли с использованием дихлорметана (CH₂Cl₂) в качестве растворителя.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стадию 1 осуществляли с использованием сульфолана в качестве растворителя.

В еще другом варианте осуществления настоящего изобретения стадию 1 осуществляли с использованием метилизобутилкетона (MIBK) в качестве растворителя.

На стадии 2) соединение (А2) сочетается с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом.

Реакцию осуществляют в апротонном растворителе, предпочтительно в дихлорметане или бензотрифториде, в присутствии кислоты Льюиса, предпочтительно в диэтилэфирате трифторида бора.

На стадии 3) с соединения (A3) снимают защиту с использованием подходящего нуклеофильного реагента с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли.

Удаление защитной группы осуществляют в растворителе, например в смеси метанола (МеОН) и воды, в присутствии подходящего нуклеофильного реагента, например, основания, предпочтительно основного гидроксида, такого как гидроксид калия (KOH) или гидроксид натрия (NaOH).

В одном варианте осуществления стадию 3) осуществляют в присутствии растворителя, такого как смесь метанола (МеОН) и воды.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стадию 3 осуществляют с использованием одного или нескольких подходящих нуклеофильных реагентов, таких как, например, основный гидроксид и NH₄F. Более конкретно, стадия 3 может происходить с использованием комбинации NH₄F и гидроксида калия (KOH) или гидроксида натрия (NaOH).

В конкретном варианте осуществления стадию 3 осуществляют с использованием гидроксида калия (KOH) и NH₄F.

Варианты осуществления изобретения

Ниже раскрыты варианты осуществления настоящего изобретения. Первый вариант осуществления обозначен как Е1, второй вариант осуществления обозначен как Е2 и т.д.

Е1. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

где указанный способ включает следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (А2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

Е2. Способ изготовления нижеуказанного соединения (A3), включающий следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (А2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

Е3. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-2, где указанный апротонный растворитель, используемый на стадии 2), представляет собой дихлорметан.

Е4. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-3, где указанная кислота Льюиса, используемая на стадии 2), представляет собой диэтилэфират трифторида бора.

Е5. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-4, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан, и указанная кислота Льюиса представляет собой диэтилэфират трифторида бора.

Е6. Соединение нижеуказанной формулы (A3),

или его соль.

Е7. Применение соединения в соответствии с вариантом осуществления 6 в способе изготовления соединения формулы (Id).

Е8. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

где указанный способ включает следующую стадию

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с основанием с получением соединения (Id) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

Е9. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1 и 3-5, где за стадией 2) следует следующая стадия

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с основанием с получением соединения (Id) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

Е10. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 8-9, где указанное основание, используемое на стадии 3), выбрано из гидроксида калия и гидроксида натрия.

Е11. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 8-10, где указанное удаление защитной группы осуществляют в смеси метанола и воды.

Е12. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-5 и 9-11, где соединение (А2) было получено на следующей стадии

1) осуществления реакции соединения (I) с триизопропилсилилхлоридом с получением соединения (А2) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии основания.

Е13. Способ в соответствии с вариантом осуществления 12, где указанный апротонный растворитель, используемый на стадии 1), представляет собой дихлорметан.

Е14. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 12-13, где указанное основание, используемое на стадии 1), представляет собой N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA).

Е15. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 12-14, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлор метан, и указанное основание представляет собой N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA).

Е16. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-15, где указанный N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) присутствует в количестве 4-5 экв. по сравнению с соединением (I).

Е17. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-16, где указанный N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) присутствует в количестве приблизительно 4,6 экв. по сравнению с соединением (I).

Е18. Способ получения соединения (Id) из соединения (I);

где указанный способ включает стадию 2) в соответствии с любым из вариантов осуществления 1 и 3-5; за которой следует стадия 3) в соответствии с любым из вариантов осуществления 8 и 10-11; где соединение А2, используемое на стадии 2), было получено с помощью стадии 1) в соответствии с любым из вариантов осуществления 12-17.

Е19. Соединение (Id) с нижеуказанной формулой,

полученное с помощью способа в соответствии с любым из вариантов осуществления 1, 3-5 и 8-18.

Е20. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 1, 3-5, 8, 10-11 и 12-17, где способ включает дополнительную стадию составления соединения Id в твердую лекарственную форму для перорального введения.

Пункты

Следующие пункты служат для описания настоящего изобретения и его вариантов осуществления.

Пункт 1. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой или его фармацевтически приемлемой соли,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

где указанный способ включает следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (А2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

Пункт 2. Способ изготовления нижеуказанного соединения (A3), включающий следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (А2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

Пункт 3. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-2, где стадия 2) включает стадию выделения соединения (A3).

Пункт 4. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-3, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан или бензотрифторид.

Пункт 5. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-4, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан, и указанная кислота Льюиса представляет собой диэтилэфират трифторида бора.

Пункт 6. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-4, где указанный апротонный растворитель представляет собой бензотрифторид, и указанная кислота Льюиса представляет собой диэтилэфират трифторида бора.

Пункт 7. Соединение нижеуказанной формулы (A3),

или его соль.

Пункт 8. Применение соединения в соответствии с пунктом 7 в способе изготовления соединения формулы (Id) или его фармацевтически приемлемой соли.

Пункт 9. Соединение (A3), непосредственно полученное с помощью способа в соответствии с любым из пунктов 2-6.

Пункт 10. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

где указанный способ включает следующую стадию

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

Пункт 11. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-6, где указанный способ включает стадию 3), как определено ниже,

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

Пункт 12. Способ в соответствии с любым из пунктов 10-11, где указанное удаление защитной группы осуществляют в смеси метанола и воды.

Пункт 13. Способ в соответствии с любым из пунктов 10-12, где указанный нуклеофильный реагент, используемый на стадии 3), выбран из гидроксида калия, цианида калия и гидроксида натрия.

Пункт 14. Способ в соответствии с любым из пунктов 10-13, где стадия 3) включает стадию выделения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли.

Пункт 15. Способ в соответствии с любым из пунктов 13-14, где соединение (Id) получают в виде калиевой соли соединения (Id), и где гидроксид калия или цианид калия используют в качестве нуклеофильного реагента на стадии 3).

Пункт 16. Способ в соответствии с любым из пунктов 13-15, где соединение (Id) получают в виде калиевой соли соединения (Id), и где гидроксид калия используют в качестве нуклеофильного реагента на стадии 3).

Пункт 17. Способ в соответствии с любым из пунктов 10-14, где соединение (Id) получают в виде натриевой соли соединения (Id), и где гидроксид натрия используют в качестве нуклеофильного реагента на стадии 3).

Пункт 18. Способ в соответствии с любым из пунктов 10-14, где раствор, полученный на стадии 3), содержащий соединение (Id), последовательно нейтрализуют сильной кислотой.

Пункт 19. Способ в соответствии с пунктом 18, где сильной кислотой является HCl.

Пункт 20. Способ в соответствии с любым из пунктов 18-19, где соединение (Id) получают в виде (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты.

Пункт 21. Способ в соответствии с любым из пунктов 1-6 и 10-20, где соединение (А2) было получено на следующей стадии

1) осуществления реакции соединения (I) или его соли с триизопропилсилилхлоридом с получением соединения (А2) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии основания.

Пункт 22. Способ в соответствии с пунктом 21, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан, сульфолан или метилизобутилкетон.

Пункт 23. Способ в соответствии с любым из пунктов 21-22, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан.

Пункт 24. Способ в соответствии с любым из пунктов 21-22, где указанный апротонный растворитель представляет собой сульфолан.

Пункт 25. Способ в соответствии с любым из пунктов 21-22, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан или метилизобутилкетон.

Пункт 26. Способ в соответствии с любым из пунктов 21-25, где указанное основание представляет собой N,N-диизопропилэтиламин или триэтиламин.

Пункт 27. Способ в соответствии с пунктом 21, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан, и указанное основание представляет собой N,N-диизопропилэтиламин.

Пункт 28. Способ в соответствии с любым из пунктов 26-27, где указанный N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) присутствует в количестве 4-5 эквивалентов по сравнению с количеством соединения (I).

Пункт 29. Способ в соответствии с любым из пунктов 21-28, где стадия 1) включает стадию выделения соединения (А2).

Пункт 30. Способ получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I);

где указанный способ включает

стадию 2) в соответствии с любым из пунктов 1 и 3-6; за которой следует

стадия 3) в соответствии с любым из пунктов 11-20;

где соединение (А2), используемое на стадии 2), было получено на стадии 1) в соответствии с любым из пунктов 21-29.

Пункт 30. Соединение (Id) с нижеуказанной формулой,

или его фармацевтически приемлемая соль,

полученные с помощью способа в соответствии с любым из пунктов 1, 3-6, 11-20 и 21-29.

Пункт 31. Способ в соответствии с любым из пунктов 1 и 3-6, 11-20, 21-29, где способ включает дополнительную стадию составления соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в твердую лекарственную форму для перорального введения.

Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитируемые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки в их полном объеме и в той же степени, как если бы было указано, что каждая ссылка индивидуально и конкретно включена посредством ссылки и приведена в ее полном объеме (в максимальной степени, допускаемой законом).

Заголовки и подзаголовки применяются в данном документе исключительно для удобства, и их не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом настоящее изобретение.

Описание в данном документе любого аспекта или аспектов настоящего изобретения с использованием таких терминов, как "включающий", "имеющий", "в том числе" или "содержащий", по отношению к элементу или элементам предназначено для подтверждения аналогичного аспекта или аспектов настоящего изобретения, который "состоит из", "состоит практически из" данного конкретного элемента или элементов или "по сути содержит" их, если не указано иное или это однозначно не противоречит контексту (например, композиция, описанная в данном документе как содержащая определенный элемент, должна также пониматься как описывающая композицию, состоящую из данного элемента, если не указано иное или это однозначно не противоречит контексту).

Использование всевозможных примеров или вводного слова перед примерами (в том числе "как например", "например", "к примеру", "такой как" и "собственно") в данном описании предназначено исключительно для лучшего освещения настоящего изобретения и не предусматривает ограничение объема настоящего изобретения, если не указано иное.

Следует понимать, что различные аспекты, варианты осуществления, пункты, реализации и признаки настоящего по настоящему изобретению, упомянутые в данном документе, могут быть заявлены по отдельности или в любой комбинации.

Настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта, изложенного в прилагаемой к данному документу формуле изобретения в соответствии с действующим законодательством.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ РАЗДЕЛ

Получение соединения формулы (Id) и промежуточных соединений

ЯМР-способы

QNMR (600 МГц):

1) релаксационная задержка 40 сек 2) время исследования 3,76 сек 3) временной интервал 64k 4) размер 32k 5) сканы для отрицательного контроля 4 6) сканы 8 7) импульс 30 градусов

Способы LC-MS

Способ A: LC-MS осуществляли на приборе Waters Aquity UPLC-MS, состоящем из Waters Aquity, включающем управляющее устройство колонки, бинарную градиентную систему управления, органайзер для образцов, детектор PDA (работающий при 254 нМ), детектор ELS и TQ-MS, оборудованный APPI-источником, работающем в режиме положительных ионов.

Условия LC. Колонка представляла собой Acquity UPLC ВЕН С18 1,7 мкм; 2,1 × 150 мм, работающую при 60°С с 0,6 мл/мин. бинарного градиента, состоящего из воды +0,05% трифторуксусной кислоты (А) и ацетонитрила/воды (95:5)+0,05% трифторуксусной кислоты.

Градиент (линейный):

0,00 мин. 10% В

3,00 мин. 100% В

3,60 мин. 10% В

Общее время прогона: 3,6 минут.

Способ В: LC-MS осуществляли на приборе Agilent 1260 HPLC, состоящем из колоночного отделения, бинарного насоса, образца Hip и одиночного Q-MS, оборудованного источником ESI, работающим в режиме определения положительных ионов.

Условия LC. Колонка: Inertsustain AQ-C18 HP 3,0 мкм; 3,0 × 50 мм, работающая при 35°С с 1,2 мл/мин. бинарного градиента, состоящего из воды +0,05% трифторуксусной кислоты (А) и ацетонитрила+0,05% трифторуксусной кислоты (В).

Градиент (линейный):

0,00 мин. 0% В

3,00 мин. 95% В

4,00 мин. 95% В

Общее время прогона: 4,0 минуты.

Способ С LC-MS

Прибор: Shimadzu LCMS-2020

Колонка: Phenomenex Kinetex EVO C18, 100 × 2,1 мм, 2,6 мкм, ULC-016, детектор, работающий в ультрафиолетовом и видимом диапазонах: 190-800 нм, скорость потока: 0,5 мл/мин., подвижная фаза А: Н₂О+0.1% НСООН, подвижная фаза В: ацетонитрил

Градиент (линейный):

1,00 мин. 2% В

10,00 мин. 90% В

13,00 мин. 90% В

13,10 мин. 2% В

Общее время прогона: 13,1 минуты.

Способ А препаративной HPLC

Колонка: гель AQ, УФ-детектор: 210 нм, скорость потока: 1 л/мин., подвижная фаза А: вода (0,05% NH₄HCO₃), подвижная фаза В: ацетонитрил.

Градиент (линейный):

0,00 мин. 5% В

30,0 мин. 30% В

Общее время прогона: 30,0 минуты.

Способ В препаративной HPLC

Колонка: RP-C18, колонка 360 г, скорость потока: 150 мл/мин., длина волны УФ-детектора: 210 нм. Подвижная фаза А: вода, подвижная фаза В: ацетонитрил.

Градиент (линейный):

0,00 мин. 5% В

4,00 мин. 30% В

Общее время прогона: 4,0 минуты.

Количественная HPLC

Колонка: Phenomenex Synergi Polar RP, 150 × 4,6 мм × 4,0 мкм, насос Thermo - Dionex Ultimate 3000, автодозатор, колоночное отделение, детектор с варьируемой длиной волны, скорость потока: 1 мл/мин., длина волны УФ-детектора: 210 нм. Подвижная фаза А: вода-ацетонитрил 98:2+0,1% трифторуксусная кислота, подвижная фаза В: ацетонитрил+0,1% трифторацетонитрил.

Градиент (линейный):

0,00 мин. 2% В

6,00 мин. 90% В

9,00 мин. 90% В

9,50 мин. 2% В

15,0 мин. 2% В

Общее время прогона: 15,0 минуты.

Пример 1, Получение соединения (А2) (стадия 1)

Пример 1а

В трехгорлую колбу объемом 1 л загружали 15 г (50,4 ммоль, 1 экв.) соли HCI соединения (I), 450 мл сухого дихлорметана, 40,4 мл (232 ммоль) N,N-диизопропилэтиламина (DIPEA) и 20,5 мл (96 ммоль, 1,9 экв.) триизопропилсилилхлорида. Смесь перемешивали при 20-25°С в инертной среде. Через 48 часов реакционную смесь охлаждали до 0-5°С и добавляли насыщенный раствор NH₄Cl (300 мл). Смесь перемешивали в течение 10 минут, а затем фазы разделяли. Органический слой промывали деионизированной водой (2 × 150 мл), высушивали над Na₂SO₄ и упаривали, получая соединение (А2) (27,8 г). Полученное использовали непосредственно на следующей стадии (пример 2а).

LC-MS (способ А): время удерживания (RT)=2,71 мин., [М+Н]⁺=418,2 масса/заряд.

Пример 1b

В трехгорлую круглодонную колбу объемом 3 л, продутую и поддерживаемую инертной атмосферой азота, помещали соль HCl соединения (I) (68 г, 228 ммоль), дихлорметан (1,8 л), N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) (83,6 г) и триизопропилсилилхлорид (135,7 г, 704,0 ммоль). Полученный в результате раствор перемешивали 2 дня при 25°С. Затем реакцию гасили добавлением 1000 мл NH₄Cl. Полученный в результате раствор экстрагировали с дихлорметаном (2×1 л) и органические слои объединяли и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/петролейный эфир (1:1)). Таким образом образовывалось соединение (А2) (78 г) в виде масла. Полученное использовали непосредственно на следующей стадии (пример 2b).

LC-MS (способ В): RT=1,606 мин., [М+Н]⁺=418 масса/заряд

¹Н ЯМР (CDCl₃, ppm): δ 6,64 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,49 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 3,11 (dd, J=15,5, 5,0 Гц, 1Н), 2,97 (dd, J=17,5, 5,0 Гц, 1Н), 2,80-2,50 (т, 3Н), 2,23 (dd, J=17,5, 11,5 Гц, 1Н), 1,95 (d, J=13,0 Гц, 1Н), 1,80-1,65 (m, 3Н), 1,41 - 1,23 (m, 3Н), 1,16- 1,03 (m, 33Н, включая примесь TIPS), 0,91 (t, J=7,5 Гц, 3Н).

Пример 2: получение соединения (A3) (стадия 2)

Пример 2а

В трехгорлую колбу объемом 500 мл, снабженную трубкой для CaCl₂, загружали соединение (А2) (8,7 г, 21 ммоль), безводный дихлорметан (260 мл) и (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат (20 г, 42 ммоль). Раствор охлаждали до 0-5°С и по каплям добавляли диэтилэфират трифторида бора (5,2 мл, 42 ммоль). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали в насыщенный на льду раствор NaHCO₃ (770 мл). После 10 минут перемешивания фазы разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном (235 мл). Объединенную органическую фазу высушивали над Na₂SO₄ и упаривали до сухого остатка с получением 27,9 г неочищенного продукта в виде масла.

Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на силикагеле с нормальной фазой с получением соединения (A3) (первый эксперимент: 7,2 г, чистота >90% (количественная HPLC) (второй эксперимент 2,2 г, чистота ~80% (количественная HPLC).

LC-MS (способ С): RT=8,33 мин., [М+Н]⁺=418,4 масса/заряд

¹Н ЯМР: (CDCl₃, ppm): δ 6,98 (d, J=8,5 Гц, 1H), 6,84 (d, J=8,5 Гц, 1H), 5,38-5,30 (m, 3Н), 5,12 (d, J=6,0 Гц, 1H), 4,26-4,17 (m, 1Н), 3,77 (s, 3Н), 3,18 (dd, J=16,0,5,0 Гц, 1H), 3,10-2,96 (m, 2Н), 2,86-2,70 (m, 1Н), 2,31 (s, 3Н), 2,15-2,00 (m, 10Н), 1,91 (d, J=13,0 Гц, 1H), 1,55 (q, J=7,5 Гц, 2H), 1,35-1,20 (m, 3Н), 1,16-1,04 (m, 1Н), 1,01-0,90 (m, 24Н).

Пример 2b

В трехгорлую круглодонную колбу объемом 3 л, продутую и поддерживаемую инертной средой азота, помещали соединение (А2) (60,0 г, 144 ммоль, 1,0 экв.), дихлорметан (1,2 л) и (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат (351,3 г, 733,9 ммоль). Затем добавляли по каплям диэтилэфират трифторида бора (150 г, 1,25 экв.) при комнатной температуре. Полученный в результате раствор перемешивали 2 дня при 25°С. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем (элюент: этилацетат/петролейный эфир (1:10)) с получением соединения (A3) (75 г) в виде твердого вещества.

LC-MS (способ В): RT=3,531 мин., [М+Н]⁺=720 масса/заряд

¹Н ЯМР: (CDCl₃, ppm): δ 6,98 (d, J=8,5 Гц, 1H), 6,84 (d, J=8,5 Гц, 1H), 5,38 - 5,30 (m, 3Н), 5,12 (d, J=6,0 Гц, 1Н), 4,26-4,17 (m, 1Н), 3,77 (s, 3Н), 3,18 (dd, J=16,0, 5,0 Гц, 1Н), 3,10-2,96 (m, 2Н), 2,86-2,70 (m, 1Н), 2,31 (s, 3Н), 2,15-2,00 (m, 10Н), 1,91 (d, J=13,0 Гц, 1Н), 1,55 (q, J=7,5 Гц, 2Н), 1,35-1,20 (m, 3Н), 1,16-1,04 (m, 1Н), 1,01-0,90 (m, 24Н).

Пример 3, Получение соединения (Id) (стадия 3)

Пример 3а (с использованием KOH)

В трехгорлую круглодонную колбу объемом 10 л, продутую и поддерживаемую инертной атмосферой азота, помещали соединение (A3) (75 г, 102 ммоль), метанол (4 л) и воду (375 мл). После этого добавляли гидроксид калия (28,7 г), NH₄F (3,8 г) при 0°С. Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при 25°С. Полученный в результате раствор нейтрализовали 1 н. HCl (~200 мл, рН доведенный до 7,1) и концентрировали при пониженном давлении с получением 250 мл раствора. Раствор очищали с помощью препаративной HPLC (способ А) с получением соединения (Id) (40 г) в виде твердого вещества. Полученное соединение (Id) получали в виде гептагидрата соединения (Id).

LC-MS (способ В): RT=1,902 мин., [М+Н]⁺=438,3 масса/заряд.

¹Н ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 6,83 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,74 (d, J=8,5 Гц, 1H), 4,74 (d, J=7,5 Гц, 1H), 3,59-3,54 (m, 2H), 3,54-3,45 (m, 3Н), 3,36-3,13 (m, 4H), 3,08-2,99 (m, 2H), 2,72 (dd, J=14,5, 12,0 Гц, 1H), 2,27 (dd, J=17,5, 11,5 Гц, 1H), 1,95 (t, J=15,0 Гц, 2H), 1,88-1,68 (m, 3Н), 1,68-1,58 (m, 1H), 1,31 (dq, J=13,5, 3,5 Гц, 1H), 0,91 (t, J=7,5 Гц, 3Н).

Пример 3b (сравнительный пример с использованием KCN)

В трехгорлой колбе растворяли 6,1 г (8,2 ммоль) соединения (A3) в 260 мл смеси МеОН/вода (12:1) и обрабатывали 10,0 г KCN (19 экв.) при 0°С.После добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 16 часов реакционную смесь фильтровали для удаления нерастворимых неорганических солей. Фильтрат упаривали до сухого остатка с получением 15,2 г неочищенного соединения (Id). Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной HPLC (способ В) с получением соединения (Id) (2,8 г) в виде твердого вещества. Полученное соединение (Id) получали в виде калиевой соли соединения (Id).

LC-MS (способ С): RT=4,17 мин., [М+Н]⁺=438,3 масса/заряд.

Характеристика соединения (Id) in vitro и in vivo

Пример 4a Превращение соединения формулы (Id) в гепатоцитах крысы и человека

Соединение (Id) инкубировали при 1 мкг/мл с гепатоцитами человека или крысы, суспендированными в DMEM (среда Игла, модифицированная по Дульбекко) с HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота) при рН 7,4. Концентрация клеток при инкубации составляла 1 × 10⁶ жизнеспособных клеток/мл. Инкубации проводили в стеклянных пробирках при 37°С с общим инкубируемым объемом 3,5 мл и с проведением инкубации в двух повторностях для каждого исследуемого образца. 3,5 мл суспензии гепатоцитов уравновешивали в течение 10 минут на водяной бане, установленной на 37°С, где затем инициировали инкубацию с помощью добавления 3,5 мкл исходного раствора исследуемого образца в DMSO (диметилсульфоксиде) и осторожного переворачивания пробирок. Конечная концентрация растворителя в инкубируемых средах составляла 0,1% DMSO. Образцы объемом 600 мкл отбирали из инкубируемых сред в заданные моменты времени, равные 0,25, 5, 15, 30 и 60 минутам, после обеспечения гомогенности суспензий гепатоцитов. Извлеченный объем добавляли в криопробирки Nunc объемом 1 мл на влажном льду, содержащие 60 мкл ледяной аскорбиновой кислоты (100 мг/мл) и 30 мкл охлажденного льдом 100 мМ 1,4-лактона сахарной кислоты в 0,5 М лимонной кислоте. Содержимое пробирок смешивали и добавляли 35 мкл раствора охлажденной льдом 20% муравьиной кислоты. Содержимое пробирок тщательно смешивали и хранили при -80°С в ожидании анализа. Способ анализа и оборудование, применяемое для анализа (I) после введения дозы соединения (Id), являлись такими, как описано в нижеуказанном примере 7 в разделе "Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения доз соединений (Ic) и (Id)".

На фигуре 6 показано зависимое от времени превращение в соединение (I) из (Id) как в гепатоцитах крысы, так и в гепатоцитах человека.

Пример 4b Превращение соединения формулы (Id) в свежей крови крысы и человека

Превращение (Id) в крови человека (в среднем от 3 доноров) и крови крыс (в среднем от 45 доноров) в (I) было показано в свежей крови при 37°С с добавлением 1 мкг/мл (Id). Уровень (I) измеряли через 0, 5, 15, 30 и 60 минут в выделенной плазме крови. Способ анализа и оборудование являлись такими, как описано в нижеуказанном примере 7 в разделе "Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединений (1 с) и (Id)",

На фигуре 7 показано зависимое от времени превращение в соединение (I) из (Id) как в крови крысы, так и в крови человека.

Пример 5, Дофаминовая агонистическая активность Агонизм дофаминового рецептора D1

Агонизм дофаминового рецептора D1 измеряли с применением HTRF сАМР от CisBio с использованием протокола, разработанного HD Biosciences (Китай). Вкратце, анализ представлял собой анализ с использованием способа резонансного переноса энергии гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF), в котором измеряли продуцирование сАМР клетками в конкурентном иммуноанализе между нативным сАМР, продуцируемым клетками, и сАМР, меченым XL-665. Меченое криптатом антитело к сАМР визуализировало метку. Анализ проводили в соответствии с инструкциями от производителя.

Исследуемые соединения добавляли в лунки микропланшетов (384-луночный формат). Клетки HEK-293, экспрессирующие рецептор D1 человека, высевали при 1000 клеток/лунка и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Метку сАМР-d2 добавляли в лунки, и затем добавляли препарат на основе меченного криптатом антитела к сАМР, и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре в темноте. Измеряли HTRF сАМР с помощью возбуждения донора лазером при 337 нм ("световая единица TRF") и последующим (время задержки 100 микросекунд) измерением эмиссии криптата и d2 при 615 нм и 665 нм в течение временного промежутка 200 микросекунд с временным промежутком 2000 микросекунд между повторениями/100 импульсов). Измерения HTRF проводили на считывающем устройстве для микропланшетов Envision (PerkinElmer). Сигнал HTRF рассчитывали как соотношение эмиссии при 665 нм и 615 нм. Показатель соотношения HTRF для исследуемых соединений подвергали нормализации до 0% и 100% стимуляции с применением контрольных лунок с DMSO-растворителем или 30 мкМ дофамина. Эффективность исследуемого соединения (ЕС₅₀) оценивали с помощью нелинейной регрессии с использованием сигмоидальной кривой доза-ответ (переменный угловой коэффициент) с применением Xlfit 4 (IDBS, Гилфорд, Суррей, Великобритания, модель 205).

y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^∧D)))),

где y представляет собой нормализованное значение измеренного соотношения HTRF для заданной концентрации исследуемого соединения, x представляет собой концентрацию исследуемого соединения, А представляет собой расчетную эффективность при бесконечном разбавлении соединения, и В представляет собой максимальную эффективность. С представляет собой значение ЕС₅₀, и D представляет собой угловой коэффициент Хилла. Оценки ЕС₅₀ получали из независимого эксперимента, и рассчитывали логарифмическое среднее значение.

Агонизм дофаминового рецептора D2

Агонизм дофаминового рецептора D2 измеряли с применением протокола анализа мобилизации кальция, разработанного HD Biosciences (Китай). Вкратце, клетки HEK293/G15, экспрессирующие рецептор D2 человека, высеивали при плотности 15000 клеток/лунка в покрытых матригелем 384-луночных планшетах с прозрачным дном и выращивали в течение 24 часов при 37°С в присутствии 5% СО₂. Клетки инкубировали с чувствительным к кальцию флуоресцентным красителем Fluo8 в течение 60-90 минут при 37°С в темноте. Исследуемые соединения получали в 3-кратно концентрированном растворе в буфере 1xHBSS с Са²⁺и Mg²⁺. Сигнал потока кальция регистрировался непосредственно после добавления соединений из планшета для соединений в клеточный планшет для FLIPR (Molecular Devices). Данные флуоресценции подвергали нормализации с получением ответов на отсутствие стимуляции (буфер) и полную стимуляцию (1 мкМ дофамина), составляющих 0% и 100% стимуляцию соответственно. Эффективность исследуемого соединения (ЕС₅₀) оценивали с помощью нелинейной регрессии с использованием сигмоидальной кривой доза-ответ (переменный угловой коэффициент) с применением Xlfit 4 (IDBS, Гилфорд, Суррей, Великобритания, модель 205).

y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^∧D)))),

где y представляет собой нормализованное значение измеренного соотношения для заданной концентрации исследуемого соединения, x представляет собой концентрацию исследуемого соединения, А представляет собой расчетную эффективность при бесконечном разбавлении соединения, и В представляет собой максимальную эффективность. С представляет собой значение ЕС₅₀, и D представляет собой угловой коэффициент Хилла. Оценки ЕС₅₀ получали из независимого эксперимента, и рассчитывали логарифмическое среднее значение.

Пример 6, Анализ агонистической активности в отношении 5-НТ2В и связывания Анализ агонистической активности в отношении 5-НТ2В

Оценку агонистической активности соединений (I), (Ia), (Ib), (Ic), и (Id) в отношении рецептора 5-НТ2В человека проводили Eurofins/Cerep (Франция) с измерением влияния соединений на продуцирование инозитолмонофосфата (IP1) с применением способа выявления с HTRF. Вкратце, рецептор 5-НТ2 В человека экспрессировался в трансфицированных клетках СНО. Клетки суспендировали в буфере, содержащем 10 мМ Hepes/NaOH (рН 7,4), 4,2 мМ KCl, 146 мМ NaCl, 1 мМ CaCl₂, 0,5 мМ MgCl₂, 5,5 мМ глюкозу и 50 мМ LiCl, затем распределяли в микропланшеты при плотности 4100 клеток/лунка и инкубировали в течение 30 минут при 37°С в присутствии буфера (контроля фонового уровня), исследуемого соединения или эталонного агониста. Для контрольного измерения при стимулировании отдельные лунки для анализа содержали 1 мкМ 5-НТ. После инкубации клетки лизировали и добавляли акцептор флуоресценции (фторфен-D2-меченный IP1) и донор флуоресценции (антитело к IP1, меченное криптатом европия). Через 60 минут при комнатной температуре перенос энергии флуоресценции измеряли при lambda(Ex) 337 нм и lambda(Em) 620 и 665 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Rubystar, BMG). Концентрацию IP1 определяли путем деления значения сигнала, измеренного при 665 нм, на значение сигнала, измеренного при 620 нм (соотношение). Результаты выражали в виде процента контрольного ответа на 1 мкМ 5-НТ. Стандартным эталонным агонистом являлся 5-НТ, который тестировали в каждом эксперименте при нескольких концентрациях для получения кривой концентрация-ответ, из которой рассчитывали его значение ЕС₅₀, как описано выше для функциональных анализов в отношении дофамина.

Анализ связывания 5-НТ2В

Оценку аффинности соединения (Id) к рецептору 5-НТ2В человека определяли в анализе связывания радиолиганда в Eurofins/Cerep (Франция). Гомогенаты мембран получали из клеток СНО, экспрессирующих рецептор 5НТ2 В человека, инкубировали в течение 60 минут при комнатной температуре с 0,2 нМ [125l](±)DOI (1-(4-йод-2,5-диметоксифенил)пропан-2-амин) в отсутствие или в присутствии исследуемого соединения в буфере, содержащем 50 мМ трис-HCl (рН 7,4), 5 мМ MgCl₂, 10 мкМ паргилин и 0,1% аскорбиновую кислоту. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 1 мкМ (±) DOI. После инкубации образцы быстро фильтровали в вакууме через фильтры из стекловолокна (GF/B, Packard), предварительно пропитанные 0,3% полиэтиленимином (PEI), и ополаскивали несколько раз охлажденным льдом 50 мМ трис-HCl с использованием коллектора клеток на 96 образцов (Unifilter, Packard). Фильтры высушивали и измеряли радиоактивность посредством сцинтилляционного счетчика (Topcount, Packard) с применением сцинтилляционного коктейля (Microscint 0, Packard). Результаты выражены в проценте ингибирования специфического связывания контрольного радиолиганда. Стандартное эталонное соединение представляло собой (±) DOI, которое тестировали в каждом эксперименте при нескольких концентрациях с получением кривой конкуренции, из которой рассчитывали его IC₅₀.

Пример 7, РК-эксперименты е отношении крыс

Для всех экспериментов образцы крови объемом примерно 0,68 мл брали из хвостовой или подъязычной вены и помещали в пробирки K₃EDTA, которые были предварительно охлаждены и получены с использованием стабилизирующего раствора, состоящего из 80 мкл аскорбиновой кислоты и 40 мкл 100 мМ 1,4 лактона D-сахарной кислоты в воде. Пробирки осторожно переворачивали 6-8 раз, чтобы обеспечить тщательное перемешивание, а затем помещали в жидкий лед. Пробирку для сбора образцов помещали в жидкий лед на срок не более 30 минут до центрифугирования. После удаления из жидкого льда немедленно начинали центрифугирование. Сразу после окончания центрифугирования образцы возвращали в жидкий лед. Три подобразца по 130 мкл плазмы крови переносили в каждую из трех соответствующим образом меченых криопробирок, содержащих 6,5 мкл предварительно охлажденной муравьиной кислоты (20%) (в пробирки предварительно осуществляли добавление и хранили охлажденными до применения). Крышку пробирки немедленно заменяли и раствор плазмы крови тщательно смешивали путем осторожного переворачивания 6-8 раз. Образцы хранили замороженными при номинальной температуре -70°С в течение 60 минут после отбора образцов. Условия центрифугирования: при 3000 G в течение 10 минут при 4°С. После сбора плазму крови помещали на водный лед. Конечное хранение осуществляли при примерно -70°С.

Образцы плазмы крови анализировали с помощью твердофазной экстракции или непосредственного осаждения белка с последующей UPLC-MS/MS. Осуществляли MS-выявление с использованием электрораспыления в режиме положительных ионов с мониторингом конкретного отношения массы к заряду при переходах для соединения (I) с использованием внутренних стандартов для корректирования ответа. Анализировали данные зависимости концентрации от времени с использованием стандартного программного обеспечения с использованием подходящих некомпартментных методик с получением оценок полученных PK-параметров.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединения (1а)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity -Sciex API 5000. Аналитическая колонка представляла собой колонку Waters ВЕН UPLC Phenyl 100×2,1 мм, размер частиц 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ формиат аммония (водн.)+0,5% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил. Использовали градиент от 95/5% до 2/98 за 6,1 мин. Скорость потока составляла 0,5 мл/мин. Осуществляли MRM-мониторинг (мониторинг множественных реакций) исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение дозы и забор образцов крови: крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Зульцфельд, Германия. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм от Brogaarden (пеллеты Altromin 1324). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Во время исследования (4-недельное исследование токсичности) крысы перорально получали один раз в день дозы (Ia) через желудочный зонд. У крыс, которым давали 300 мкг/кг (Ia), собирали образцы крови у 3 самцов сателлитных животных в следующие моменты времени в день 29: 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединения (Ib)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity -Sciex API 5000. Аналитическая колонка представляла собой колонку Waters ВЕН UPLC Phenyl 100×2,1 мм, размер частиц 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ формиат аммония (водн.)+0,5% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил. Использовали градиент от 95/5% до 2/98 за 6,1 мин. Скорость потока составляла 0,5 мл/мин. Осуществляли MRM-мониторинг исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение дозы и забор образцов крови: крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Великобритания. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм (корм Teklad 2014С). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Во время исследования (26-недельное исследование токсичности) крысы перорально получали один раз в день дозы (Ib) через желудочный зонд. У крыс, которым давали 300 мкг/кг (Ib), собирали образцы крови у 3 самцов сателлитных животных в следующие моменты времени в день 182: 0,5, 1, 2, 4, 8 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединений (Ic) и (Id)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity - Waters Xevo TQ-S. Аналитическая колонка Acquity ВЕН C18 100 × 2,1 мм, 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ NH₄-формиат+0,2% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил+0,2% муравьиная кислота. Использовали градиент от 95/5% до 5/95% за 11,0 мин. Скорость потока составляла 0,3 мл/мин. Осуществляли MRM-мониторинг исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение доз и забор крови для соединения (Id): крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Wiga GmbH, Германия. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм от Brogaarden (пеллеты Altromin 1324). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Самцам крыс Han Wistar перорально через желудочный зонд вводили однократную пероральную дозу соединения (Id) перорально через желудочный зонд. Крысам вводили 633 мкг/кг соединения (Id), образцы крови у 3 самцов животных собирали в следующие моменты времени в день 1: 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы.

Введение доз и забор крови для соединения (Ic): Крысы линии Wistar Han предоставлены от Envigo, Великобритания. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм Teklad 2014С. Крысы имели неограниченный доступ к корму. Самцам крыс Han Wistar перорально через желудочный зонд вводили однократную дозу соединения (Ic). Крысам вводили 494 мкг/кг соединения (Ic). Собирали образцы крови у 3 самцов животных в следующие моменты времени в день 1: 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа апоморфина: масс-спектрометр (UPCLC-MS/MS) Waters Acquity l-Class-Waters Xevo TQ-S. Аналитическая колонка Acquity HSS ТЗ C18 50 × 2,1 мм, 1,8 мкм. Подвижная фаза A: 10 мМ NH₄-формиат, 0,2% муравьиная кислота:ацетонитрил (95:5). Подвижная фаза В: 10 мМ NH₄-формиат, 0,2% муравьиная кислота:ацетонитрил (5:95). Градиент изменялся от 95/5% до 5/95% за 2,40 минуты. Расход 0,3 мл/мин. Осуществляли MRM-выявление исследуемых образцов и добавленных аналитических стандартов.

Введение доз и забор крови для апоморфина: животные для исследования были такими, как описано в разделе «Введение доз и забор крови для соединения (Id)». Дополнительно крысам вводили однократную дозу апоморфина подкожно. У крыс, которым вводили 3000 мкг/кг (апоморфин), собирали образцы крови у 3 самцов животных в следующие моменты времени в день 1: 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 5 и 7 часов после SC введения дозы.

Пример 8, PK/PD соединения (Id/соединения (I) в анализе гиперактивности на крысах

Животные

Всего в исследовании использовали 206 самцов крыс CD (Charles River, Германия) весом 200-250 грамм (165-190 грамм по прибытии). Животных содержали при стандартной температуре (22±1°С) и в среде с контролируемым освещением (свет включен с 7 утра до 8 вечера) с доступом к пище и воде по желанию. Эксперимент, описанный ниже, проводили в соответствии со стандартными рабочими процедурами Charles River Discovery Research Services Finland Ltd. и в соответствии с руководством национального совета по экспериментам на животных Финляндии (Elainkoelautakunta, ELLA) в отношении испытаний на животных.

Тестирование локомоторной активности, "открытое поле"

Тестовое устройство представляло собой квадратную плексигласовую площадку (размером 40×40×40 см), на которой регистрировали траектории движения крыс с помощью монитора активности (Med. Associates Inc.). Перед началом периода тестов крысам давали привыкнуть к их клетке для испытаний в течение 60 минут. После завершения привыкания животных обрабатывали либо соединением, либо средой-носителем и помещали обратно в установку "открытое поле". Основным измеряемым параметром теста являлось пройденное расстояние (регистрировали через 5-минутные отрезки времени). Общее время измерения после получения начальной обработки составляло 360 минут. Общий период наблюдения в исследовании составлял 420 минут, включая 60 минут привыкания.

Результаты

Оценивали пероральное введение соединения (Id) в анализе локомоторной активности крыс и данные функциональные показатели затем коррелировали со значениями концентрации соединения (I) в плазме крови. Апоморфин и прамипексол также одновременно тестировали в этом анализе в качестве препаратов сравнения (т.е. известного стандарта лечения (SoC) в области терапии болезни Паркинсона) и анализировали концентрацию в плазме крови в отношении апоморфина.

Как показано на фигуре 2, соединение (Id) (от 10 до 300 мкг/кг, р.о.) увеличивало локомоторную активность с эффектом, начинающимся через примерно 2 часа после введения (приблизительно 180-минутный момент времени) и сохраняющимся до конца регистрирования (в 415-минутный момент времени). Напротив, гиперактивность, вызванная апоморфином (3 мг/кг, s.c), являлась мгновенной, но кратковременной, поскольку эффект исчезал через 1,5 часа после введения (в 150-минутный момент времени). Прамипексол (0,3 мг/кг, s.c.) также вызывал увеличение активности, но его эффект проявлялся через приблизительно 1 час после введения и исчезал через 2,5 часа (в 270-минутный момент времени). Общее пройденное расстояние, как видно на фигуре 3, демонстрировало значительно увеличенную активность как для соединения (Id), так и для двух исследуемых препаратов сравнения, и данный эффект являлся эффектом, который следовало ожидать от агонистов дофамина.

Параллельно с оценкой локомоторной активности отбирали образцы плазмы крови у сателлитных животных в 6 различных моментов времени (1,5, 2, 3, 4, 5 и 7 часов после введения дозы для животных, обработанных соединением (Id)). Фармакокинетический анализ продемонстрировал, что эффекты в отношении поведения соединения (Id) (100 мкг/кг, р.о.) коррелировало со значениями концентрации в плазме крови соединения (I) (см. фигуру 4) с подтверждением того, что эффект в отношении поведения соединения (Id) обусловлен соединением (I), а не соединением (Id) самим по себе. В соответствующем анализе воздействия апоморфина (через 1,25, 1,5, 2, 3, 5 и 7 часов после введения дозы) в результате получали корреляцию между значениями концентрации апоморфина в плазме крови и гиперактивным поведением (см. фигуру 5).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

US 4543256

WO 2001/078713

WO 02/100377

WO 2009/026934

WO 2009/026935

WO 2010/097092

WO 2019101917

Alexander et Crutcher, (1990) Trends in Neuroscience 13: 266-71;

Bibbiani et al., Chase Experimental Neurology (2005), 192: 73-78;

Campbell et al., Neuropharmacology (1982); 21(10): 953-961;

Cannon et al., J. Heterocyclic Chem. (1980); 17: 1633-1636;

Cavero and Guillon, J. Pharmacol. Toxicol. Methods (2014), 69: 150-161;

Delong, (1990) Trends in Neuroscience 13: 281-5;

Gerfen et al, Science (1990) 250: 1429-32;

Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol.7 (3): 305-316;

Goswami et al., J. Nutritional Biochem. (2003) 14: 703-709;

Grosset et al., Acta Neurol Scand. (2013), 128:166-171;

Hauser et al., Movement Disorders (2016), Vol.32 (9): 1367-1372;

В Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49: 1494-1498;

Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444;

Nolen et al., J. Pharm Sci. (1995), 84 (6): 677-681;

Poewe et al., Nature Review, (2017) vol 3 article 17013: 1-21;

Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 22^th edition (2013), Edited by Allen, Loyd V., Jr

Rothman et al., Circulation (2000), 102: 2836-2841;

Sprenger and Poewe, CNS Drugs (2013), 27: 259-272;

Sozio et al., Exp.Opin. Drug Disc. (2012); 7(5): 385-406;

Stain-Texier et al., Drug Metab. and Disposition (1998) 26 (5): 383-387;

Wiley-Interscience (publisher): Compendium of Organic Synthetic Methods, Vol.I-XII

Изобретение относится к способу получения соединения формулы (Id) или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I), где указанный способ включает реакцию соединения (A2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетатом в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса с получением соединения (A3) и стадию удаления защитной группы из соединения (А3) при помощи нуклеофильного реагента. Также изобретение относится к соединению формулы (А3) или его соли и применению соединения формулы (А3) в способе изготовления соединения формулы (Id). Технический результат – получение соединения формулы (Id) с высоким выходом. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 9 ил., 3 табл., 12 пр.

,, ,

1. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

(Id),

или его фармацевтически приемлемой соли

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

(I),

где указанный способ включает следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (A2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса, и

причем указанный способ дополнительно включает следующую стадию 3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

.

2. Способ изготовления нижеуказанного соединения (A3), включающий следующую стадию

2) осуществления реакции соединения (A2) с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A3) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где указанную реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии кислоты Льюиса.

3. Способ по любому из пп. 1, 2, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан или бензотрифторид, и указанная кислота Льюиса представляет собой диэтилэфират трифторида бора.

4. Соединение нижеуказанной формулы (A3),

или его соль.

5. Применение соединения по п. 4 в способе изготовления соединения формулы (Id)

(Id),

или его фармацевтически приемлемой соли.

6. Способ получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли с нижеуказанной формулой,

(Id),

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

(I),

где указанный способ включает следующую стадию

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

.

7. Способ по п. 3, где за стадией 2) следует следующая стадия

3) удаления защитной группы из соединения (A3) путем приведения в контакт соединения (A3) с нуклеофильным реагентом с получением соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

.

8. Способ по любому из пп. 1, 6-7, где нуклеофильный реагент, используемый на стадии 3), выбран из гидроксида калия и гидроксида натрия.

9. Способ по любому из пп. 1, 6-8, где указанное удаление защитной группы осуществляют в смеси метанола и воды.

10. Способ по любому из пп. 1-3 и 7-9, где соединение (A2) было получено с помощью следующей стадии

1) осуществления реакции соединения (I) или его соли с триизопропилсилилхлоридом с получением соединения (А2) в соответствии с нижеуказанной схемой реакции:

где реакцию осуществляют в апротонном растворителе в присутствии основания.

11. Способ по п. 10, где указанный апротонный растворитель представляет собой дихлорметан, и указанное основание представляет собой N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA).

12. Способ по п. 11, где указанный N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) присутствует в количестве 4-5 экв. относительно соединения (I).

13. Способ получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли из соединения (I);

где указанный способ включает

стадию 2), указанную в любом из п. 1 и п. 3; за которой следует

стадия 3), указанная в любом из пп. 7-9;

где соединение A2, используемое на стадии 2), было получено с помощью

стадии 1), указанной в любом из пп. 10-12.

14. Способ по любому из пп. 1, 3, 6, 8-12, где способ включает дополнительную стадию составления соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли в твердую лекарственную форму для перорального введения.