СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-ТРИГИДРОКСИ-6-(((4AR,10AR)-7-ГИДРОКСИ-1-ПРОПИЛ-1,2,3,4,4A,5,10,10A-ОКТАГИДРОБЕНЗО[G]ХИНОЛИН-6-ИЛ)ОКСИ)ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-2-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ Российский патент 2024 года по МПК C07D405/12 C07D455/06 A61K31/706 A61P25/16 C07H1/00 C07D221/06 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к способу получения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты, которая представляет собой соединение для применения в лечении нейродегенеративных заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона. Настоящее изобретение также относится к новым промежуточным соединениям из указанного способа.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой распространенное нейродегенеративное нарушение, которое становится все более распространенным с возрастом и затрагивает от семи до десяти миллионов человек во всем мире. Болезнь Паркинсона является многогранным заболеванием, характеризующимся как моторными, так и немоторными симптомами. Моторные симптомы включают тремор в покое (дрожание), брадикинезию/акинезию (медлительность и скудность движений), мышечную ригидность, постуральную неустойчивость и дисфункцию походки; при этом немоторные симптомы включают нейропсихиатрические нарушения (например депрессию, психотические симптомы, тревожность, апатию, умеренное когнитивное нарушение и деменцию), а также вегетативные дисфункции и нарушения сна (Poewe et al., Nature Review, (2017) vol 3 article 17013: 1-21).

Ключевой характерной особенностью патофизиологии болезни Паркинсона является потеря пигментированных дофаминергических нейронов в компактном слое черного вещества, который обеспечивает дофаминергическую иннервацию полосатого тела и других зон головного мозга. Такая прогрессирующая нейродегенерация приводит к уменьшению уровней дофамина в полосатом теле, что в конечном итоге вызывает ряд изменений межнейронных связей в базальных ганглиях, что в конечном итоге приводит к появлению четырех основных моторных признаков болезни Паркинсона. Основной мишенью дофамина в полосатом теле являются срединные шипиковые GABA-ергические нейроны (MSN), селективно экспрессирующие рецепторы D1 или D2, продолжающиеся в виде их топографических проекций. GABA-ергический MSN, проецирующийся во внешний отдел бледного шара, также называемый стриатопаллидальным 'непрямым путем', экспрессирует рецепторы D2 (MSN-2); при этом GABA-ергический MSN, проецирующийся в ретикулярную часть черного вещества и внутренний отдел бледного шара, также называемый стриатонигральным 'прямым путем', экспрессирует рецепторы D1 (MSN-1). Уменьшение количества дофамина вследствие потери нейронов приводит к несбалансированной активности двух путей, что приводит к заметному уменьшению на выходе таламической и кортикальной активности и, в конечном итоге, моторным дисфункциям (Gerfen et al, Science (1990) 250: 1429-32; Delong, (1990) Trends in Neuroscience 13: 281-5; Alexander et Crutcher, (1990) Trends in Neuroscience 13: 266-71; и для обзора Poewe et al., Nature Review (2017) vol. 3 article 17013: 1-21).

Наиболее эффективными терапевтическими стратегиями, доступными для пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, и направленными на контроль моторных симптомов, в основном являются непрямые и прямые агонисты дофамина. Классическая и общепринятая стандартная схема лечения включает постоянный пероральный прием L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-DOPA), который декарбоксилируется в головном мозге с образованием дофамина. Другие подходы заключаются во введении агонистов дофаминовых рецепторов, таких как апоморфин, который действует как на подтипы рецепторов D1, так и на подтипы рецепторов D2, или прамипексол, ропинирол и другие, которые преимущественно направлены на подтипы рецепторов D2. Оптимальное облегчение в отношении моторных симптомов обеспечивается с помощью применения как L-DOPA, так и апоморфина за счет активации ими как подтипов рецепторов D1, так и подтипов рецепторов D2 и целостного уравновешивания непрямых и прямых путей (т.е. агонисты D2 при этом способствуют устранению только дисфункции непрямого пути).

L-DOPA и апоморфин, характеризующиеся структурами, изображенными ниже, в настоящее время представляют собой наиболее эффективные лекарственные средства для лечения PD в клинической практике.

L-DOPA представляет собой пролекарство дофамина и остается наиболее эффективным лекарственным средством при лечении болезни Паркинсона с моторными симптомами. Однако после нескольких лет лечения (т.е. периода "медового месяца") возникают осложнения вследствие присущего заболеванию прогрессирования (т.е. длительной потери дофаминергических нейронов), а также плохого фармакокинетического (PK) профиля L-DOPA. Эти осложнения включают ¹⁾ дискинезию, которая представляет собой патологические непроизвольные движения, возникающие во время оптимального 'своевременного эффекта' лекарственного средства; и ²⁾ флуктуации в фазе «выключения», что представляет собой период, в течение которого положительный эффект L-DOPA ослабевает и симптомы снова появляются или ухудшаются (Sprenger and Poewe, CNS Drugs (2013), 27: 259-272). Прямые агонисты дофаминовых рецепторов способны активировать ауторецепторы дофамина, а также постсинаптические дофаминовые рецепторы, расположенные на срединных шипиковых нейронах MSN-1 и MSN-2. Апоморфин относится к классу агонистов дофамина с 1,2-дигидроксибензольным (катехольным) фрагментом. В сочетании с фенетиламиновым мотивом, катехоламины часто обладают низкой пероральной биодоступностью или не обладают ей, как в случае с апоморфином. Апоморфин применяют в клинической терапии PD, хотя и с использованием непероральной доставки (как правило, посредством периодического подкожного введения или непрерывной парентеральной инфузии с помощью насоса в течение дня). В случае апоморфина исследования на животных показали, что трансдермальная доставка или доставка с помощью имплантатов могут обеспечивать возможные формы введения. Однако при исследовании доставки апоморфина из имплантатов у обезьян (Bibbiani et al., Chase Experimental Neurology (2005), 192: 73-78) было установлено, что в большинстве случаев животные должны были подвергаться лечению с помощью иммунодепрессанта дексаметазона для предупреждения местного раздражения и других осложнений после операции по имплантации. Были тщательно изучены альтернативные стратегии доставки для апоморфиновой терапии при PD, такие как ингаляционные и сублингвальные составы (см., например, Grosset et al., Acta Neurol Scand. (2013), 128:166-171 and Hauser et al., Movement Disorders (2016), Vol. 32 (9): 1367-1372). Однако эти меры еще не применяются в клинической практике для лечения PD.

Альтернатива составам для неперорального применения на основе катехоламинов предусматривает применение пролекарства, обеспечивающего маскировку свободных гидроксильных групп катехола, чтобы обеспечить возможность перорального введения. Однако известной проблемой, связанной с разработкой пролекарств для клинического применения, являются трудности, связанные с прогнозированием превращения в исходное соединение в организме людей.

В литературе сообщалось о различных сложноэфирных пролекарствах на основе катехоламинов, таких как покрытые энтеросолюбильной оболочкой N-пропилнорапорфин (NPA) и монопивалоиловый сложный эфир апоморфина для дуоденальной доставки (см., например, WO 02/100377) и агонист D1-подобного рецептора адроголид, представляющий собой пролекарство, содержащее диацетил, А-86929 (Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol. 7 (3): 305-316). Адроголид подвергается активному метаболизированию при первичном прохождении через печень в организме человека после перорального приема и вследствие этого обладает низкой пероральной биодоступностью (прибл. 4%). У пациентов с PD внутривенный (IV) адроголид имеет противопаркинсоническую эффективность, сравнимую с эффективностью L-DOPA (Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol. 7 (3): 305-316).

В дополнение к представляющим собой сложные эфиры пролекарствам на основе катехоламинов альтернативный подход в отношении пролекарства предусматривает маскировку двух гидроксильных групп катехола в виде соответствующего производного метилендиокси или производного диацеталила в виде ацеталя, полученного из других альдегидов, за исключением формальдегида, или в виде кеталя, полученного из различных кетонов. Этот принцип получения пролекарства был описан, например, в Campbell et al., Neuropharmacology (1982); 21(10): 953-961 и в US 4543256, WO 2009/026934 и WO 2009/026935.

Еще одним предлагаемым подходом для пролекарства на основе катехоламина является образование производного енона, как предлагается, например, в WO 2001/078713 и в Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444. Дополнительные примеры пролекарств на основе катехоламина см., например, в Sozio et al., Exp.Opin. Drug Disc. (2012); 7(5): 385-406.

Соединение (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол, изображенное как соединение (I), указанное ниже, раскрыто в WO 2009/026934. Транс-изомер был раскрыт ранее в Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49:1494-1498 и затем в Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444, включая фармакологические данные, указывающие на то, что соединение обладает низкой пероральной биодоступностью у крыс. Рацемат впервые был раскрыт в Cannon et al., J. Heterocyclic Chem. (1980); 17: 1633-1636.

Соединение (I) является агонистом дофаминовых рецепторов со смешанной активностью в отношении D1 и D2. Некоторые пролекарственные производные соединения (I) известны из уровня техники.

В Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49:1494-1498 и Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444 раскрыто еноновое производное формулы (Ia), изображенной ниже, которое, как было показано, превращается в активное соединение (I) в организме крыс.

В WO 2009/026934 и WO 2009/026935 раскрыты два типа пролекарственных производных соединения (I), включая соединение формулы (Ib), приведенной ниже:

Превращение соединения (Ib) в соединение (I) в гепатоцитах крысы и человека было продемонстрировано в WO 2010/097092. Кроме того, фармакология in vivo соединений (Ia) и (Ib), а также активного "исходного соединения" (I) была исследована на различных животных моделях, соответствующих болезни Паркинсона (WO 2010/097092). Было обнаружено, что как соединение (I), так и соединения (Ia) и (Ib) являются эффективными, указывая на то, что соединения (Ia) и (Ib) превращаются in vivo в соединение (I). Сообщалось, что все три соединения характеризовались продолжительностью действия, которая была больше, чем наблюдаемая для L-dopa и апоморфина.

Другое пролекарство соединения (I), раскрытое в WO 2009/026934 и WO 2009/026935, является традиционным представляющим собой сложный эфир пролекарством согласно формуле (Ic):

Несмотря на долголетний интерес в данной области, очевидно, что по-прежнему существует неудовлетворенная потребность в разработке эффективных, хорошо переносимых и активных при пероральном применении лекарственных средств для лечения PD. Пролекарственное производное смешанного D1/D2-агониста, характеризующееся стабильным РK-профилем, которое может обеспечить непрерывную дофаминергическую стимуляцию, может удовлетворить такие неудовлетворенные потребности.

Следовательно, также существует необходимость в способе получения таких лекарственных средств, особенно в способах, которые подходят для крупномасштабного производства и приводят к высокому выходу соединения формулы (Id).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Неожиданно было обнаружено, что пероральное введение (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты (соединение (Id)) предусматривает системное воздействие соединения (I) в плазме крови, что свидетельствует о применимости указанного соединения в качестве перорально активного пролекарства соединения (I). Примеры 9 и 10 в данном документе демонстрируют полезные эффекты соединения (I) in vitro и in vivo после введения дозы соединения (Id).

Настоящее изобретение относится к новому способу получения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты нижеуказанной формулы (Id):

из соединения (4aR, 10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диола нижеуказанной формулы (I):

Способ включает бензилирование соединения (I) для введения защитных групп, которые позволяют селективно связываться с конъюгатом глюконовой кислоты.

Общий способ, начиная с соединения (I), кратко проиллюстрирован на схеме 1 ниже.

Схема 1. Обзор общего способа

X выбран из группы, состоящей из Cl, Br и I.

Y представляет собой щелочной металл, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из Li, Na и K.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения X представляет собой Cl.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения Y представляет собой K (калий).

Индивидуальные аспекты относятся к каждой из стадий способа 1), 2), 3), 4) и 5).

Другие индивидуальные аспекты настоящего изобретения относятся к новым промежуточным соединениям способа. Таким образом, в дополнительных аспектах настоящего изобретения предусмотрены соединения (А2), (A3), (А4) и (А5) и их соли соответственно, которые являются приемлемыми промежуточными соединениями в способах получения соединения (Id).

Общий способ, также как и каждая отдельная стадия способа и промежуточные соединения, предусмотренные настоящим изобретением, приемлемы для крупномасштабного производства соединения (Id) и могут применяться без или с минимальным использованием колоночной хроматографии. Уклонение от колоночной хроматографии является преимуществом, поскольку это способствует крупномасштабному производству соединения (Id).

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Ссылки на соединения

Ссылки на соединение (I), соединение (Id), (А2), (A3), (А4) и (А5) включают соединения в растворе и твердые формы соединений, включая свободное вещество (цвиттер-ион) указанных соединений, соли указанных соединений, такие как соли присоединения кислоты или соли присоединения основания, и полиморфные и аморфные формы соединений по настоящему изобретению и его солей. Кроме того, указанные соединения и их соли могут потенциально существовать как в несольватированных, так и в сольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. В варианте осуществления соль соединения (Id) представляет собой фармацевтически приемлемую соль.

Иногда конкретная форма соли указывается для соединения, так как, например, (A3-HI), что обозначает соль HI (A3), или (A5-Y), что обозначает соль щелочного металла (А5), такуюкак соль калия.

Фармацевтически приемлемые соли

Фармацевтически приемлемые соли в настоящем контексте предназначены для обозначения нетоксичных, то есть физиологически приемлемых солей.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, которые представляют собой соли, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами при атоме азота в исходной молекуле. Указанные кислоты могут быть выбраны из, например, хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, фосфорной кислоты, азотистой кислоты, серной кислоты, бензойной кислоты, лимонной кислоты, глюконовой кислоты, молочной кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, щавелевой кислоты, малоновой кислоты, фумаровой кислоты, глутаминовой кислоты, пироглутаминовой кислоты, салициловой кислоты, гентизиновой кислоты, сахарина и сульфоновых кислот, таких как метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, нафталин-2-сульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота и бензолсульфоновая кислота.

Термин фармацевтически приемлемые соли также включает фармацевтически приемлемые соли присоединения основания, которые представляют собой соли, образованные с неорганическими и/или органическими основаниями на кислотных группах соединения формулы (Id). Указанные основания могут быть выбраны из, например, гидроксида цинка и оснований щелочных металлов, таких как гидроксид натрия гидроксид лития, гидроксид калия, и щелочноземельных оснований, таких как гидроксид кальция и гидроксид магния, и органических оснований, таких как холин, диэтиламин, триметиламин и триэтиламин

Дополнительные примеры пригодных кислот и оснований для образования фармацевтически приемлемых солей можно найти, например, в Stahl и Wermuth (Eds) "Handbook of Pharmaceutical salts. Properties, selection, and use", Wiley-VCH, 2008.

Соединения (I), (A2), (A3), (A4) и (A5) можно использовать в качестве промежуточных соединений для получения соединения (Id)). Таким образом, солевые формы промежуточных соединений не ограничиваются их фармацевтически приемлемыми солями. Тем не менее, фармацевтически приемлемые соли соединений (I), (А2), (A3), (А4) и (А5) также можно предпочтительно использовать при получении соединения (Id) и соединения (Ib). Таким образом, в варианте осуществления настоящего изобретения соль соединения (I), (А2), (A3), (А4), (А5) и соединения (Id) представляет собой фармацевтически приемлемую соль.

Пролекарство

В контексте настоящего изобретения термины "пролекарство" или "производное пролекарства" обозначают соединение, которое после введения живому субъекту, такому как млекопитающее, предпочтительно человек; превращается в организме в фармакологически активный фрагмент. Превращение предпочтительно происходит в организме млекопитающего, например в организме мыши, крысы, собаки, карликовой свиньи, кролика, обезьяны и/или человека. В настоящем контексте "пролекарство на основе соединения (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол", или "пролекарство на основе соединения формулы (I)", или "пролекарство на основе соединения (I)" понимается как соединение, которое после введения превращается в организме в соединение (4aR,10aR)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диол. Указанное введение можно осуществлять любым традиционным путем введения фармацевтических композиций, известным из уровня техники, предпочтительно путем перорального введения.

В контексте настоящего изобретения термины "исходное соединение" и "исходная молекула" обозначают фармакологически активный фрагмент, полученный при превращении соответствующего пролекарства. Например, "исходное соединение" соединения формулы (Id) следует понимать как соединение формулы (I).

Фармакокинетические определения и сокращения

Применяемый в данном документе "PK-профиль" является сокращением термина "фармакокинетический профиль". Фармакокинетические профили и фармакокинетические параметры, описанные в данном документе, основаны на данных зависимости концентрации в плазме от времени, полученных для соединения формулы (I) после перорального введения дозы соединения формулы (Id), с использованием некомпартментного моделирования. Сокращенными PK-параметрами являются: C_max (максимальная концентрация); W (время до C_max); (период полувыведения); AUC 0-24 (площадь под кривой от времени введения дозы и через 24 часа после введения дозы) и "воздействие через 24 ч." представляет собой концентрацию, измеренную через 24 часа после введения дозы.

Терапевтически эффективное количество

В контексте настоящего изобретения термин "терапевтически эффективное количество" соединения означает количество, достаточное для облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки клинических проявлений данного заболевания и его осложнений при терапевтическом вмешательстве, предусматривающем введение указанного соединения. Количество, достаточное для осуществления этого, определяется как "терапевтически эффективное количество". Эффективные количества для каждой цели будут зависеть, например, от тяжести заболевания или повреждения, а также от веса и общего состояния субъекта.

В контексте настоящего изобретения "терапевтически эффективное количество" соединения формулы (Id) указывает на количество указанного соединения по настоящему изобретению, которое способно обеспечить такое количество соединения (I), которое является достаточным для облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки клинических проявлений определенного заболевания и его осложнений, если указанное соединение по настоящему изобретению вводят, предпочтительно пероральным путем, млекопитающему, предпочтительно человеку.

Лечение и осуществление лечения

В контексте настоящего изобретения "лечение" или "осуществление лечения" предназначено для обозначения ведения пациента и ухода за ним с целью облегчения, остановки, частичной остановки, устранения или задержки развития клинического проявления заболевания. Пациентом, подлежащим лечению, предпочтительно является млекопитающее, в частности человек.

Состояния, подлежащие лечению

Соединение, полученное с помощью способа по настоящему изобретению, предназначено для лечения нейродегенеративных заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона, и/или других состояний, для которых лечение с помощью агониста дофамина является терапевтически полезным.

Терапевтические показания включают ряд расстройств центральной нервной системы, характеризующихся моторными и/или немоторными нарушениями и для которых компонентом лежащей в основе патофизиологии является дисфункция межнейронных связей, опосредованных полосатым телом. Такие функциональные нарушения можно наблюдать при нейродегенеративных заболеваниях, таких как без ограничения болезнь Паркинсона (PD), синдром беспокойных ног, болезнь Хантингтона и болезнь Альцгеймера, а также при нейропсихиатрических заболеваниях, таких как без ограничения шизофрения, синдром дефицита внимания с гиперактивностью и наркотическая зависимость.

В дополнение к нейродегенеративным заболеваниям и нарушениям существуют другие состояния, при которых увеличение дофаминергического обмена может быть благоприятным, связанные с улучшением психических функций, в том числе различных аспектов когнитивных функций. Это также может иметь положительный эффект у пациентов с депрессией, и это также можно использовать в лечении ожирения в качестве анорексигенного средства и в лечении наркотической зависимости. Это может обеспечить улучшение в случае минимальной мозговой дисфункции (MBD), нарколепсии, синдрома дефицита внимания с гиперактивностью и, возможно, негативных, позитивных, а также когнитивных симптомов шизофрении.

Синдром беспокойных ног (RLS) и синдром периодических движений конечностей (PLMD) являются альтернативными показаниями, которые клинически лечат агонистами дофамина. Кроме того, в случае импотенции, эректильной дисфункции, половой дисфункции, индуцированной SSRI, синдрома гиперстимуляции яичников (OHSS) и некоторых видов опухоли гипофиза (пролактиномы) также, вероятно, можно обеспечить улучшение путем лечения агонистами дофамина, мочевыделительной систем и, соответственно, почечную недостаточность и гипертензию можно рассматривать как альтернативные показания для применения соединения формулы (Id).

Настоящее изобретение охватывает применение соединения формулы (Id), полученного с помощью способа по настоящему изобретению, для лечения перечисленных выше заболеваний и нарушений.

Пути введения

Фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (Id) либо в виде единственного активного соединения, либо в комбинации с другим активным соединением, могут быть, в частности, составлены для введения любым подходящим путем, как например пероральный, ректальный, назальный, трансбуккальный, сублингвальный, пульмональный, трансдермальный и парентеральный (например, подкожный, внутримышечный и внутривенный) пути. В контексте настоящего изобретения пероральный путь является предпочтительным путем введения.

Следует принять во внимание, что путь будет зависеть от общего состояния и возраста субъекта, подлежащего лечению, природы патологического состояния, подлежащего лечению, и активного ингредиента.

Фармацевтические составы и вспомогательные вещества

Далее термин "вспомогательное вещество" или "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество" относится к фармацевтическим вспомогательным веществам, в том числе без ограничения носителям, наполнителям, разбавителям, средствам против прилипания, связующим, покрытиям, красителям, разрыхлителям, ароматизаторам, веществам, улучшающим скольжение, смазывающим средствам, консервантам, сорбентам, подсластителям, растворителям, средам-носителям и вспомогательным средствам.

В настоящем изобретении также предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (Id), такое как одно из соединений, раскрытых в экспериментальном разделе в данном документе. В настоящем изобретении также предусмотрен способ получения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (Id). Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением можно составлять с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами в соответствии с традиционным методиками, такими как раскрытые в Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 22^-е изд. (2013), под редакцией Allen, Loyd V., Jr.

Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению, предпочтительно представляет собой фармацевтическую композицию для перорального введения. Фармацевтические композиции для перорального введения включают твердые пероральные лекарственные формы, такие как таблетки, капсулы, порошки и гранулы; и жидкие пероральные лекарственные формы, такие как растворы, эмульсии, суспензии и сиропы, а также порошки и гранулы для растворения или суспендирования в подходящей жидкости.

Твердые пероральные лекарственные формы могут быть представлены в виде отдельных единиц (например, таблеток или твердых или мягких капсул), каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента и предпочтительно одно или несколько подходящих вспомогательных веществ. При необходимости твердые лекарственные формы можно покрывать оболочкой разных типов, таких как энтеросолюбильные оболочки, или их можно составлять так, чтобы обеспечивать регулируемое высвобождение активного ингредиента, такое как замедленное или пролонгированное высвобождение, в соответствии со способами, хорошо известными из уровня техники. При необходимости твердая лекарственная форма может представлять собой лекарственную форму, распадающуюся под действием слюны, такую как, например, таблетка, диспергируемая в полости рта.

Примеры вспомогательных веществ, пригодных для перорального твердого состава, включают без ограничения микрокристаллическую целлюлозу, кукурузный крахмал, лактозу, маннит, повидон, кроскармеллозу натрия, сахарозу, циклодекстрин, тальк, желатин, пектин, стеарат магния, стеариновую кислоту и низшие алкиловые простые эфиры целлюлозы. Аналогичным образом, твердый состав может включать вспомогательные вещества для составов с замедленным или пролонгированным высвобождением, известные в области техники, такие как глицерилмоностеарат и гипромеллоза. Если для перорального введения применяют твердый материал, то состав можно получать, например, путем смешивания активного ингредиента с твердыми вспомогательными веществами, а затем прессования смеси в стандартной таблетирующей машине; или состав, например, в виде порошка, гранулы или мини таблетки, может быть помещен, например, в твердую капсулу. Количество твердого вспомогательного вещества в стандартной дозе будет существенно варьировать, но, как правило, будет находиться в пределах от приблизительно 25 мг до приблизительно 1 г.

Жидкие пероральные лекарственные формы могут быть представлены в виде, например, настоек, сиропов, капель для перорального применения или наполненных жидкостью капсул. Жидкие пероральные лекарственные формы также могут быть представлены в виде порошков для растворения или суспендирования в водной или неводной жидкости. Примеры вспомогательных веществ, пригодных для перорального жидкого состава, включают без ограничения этанол, пропиленгликоль, глицерин, полиэтиленгликоли, полоксамеры, сорбит, полисорбат, моно- и диглицериды, циклодекстрины, кокосовое масло, пальмовое масло и воду. Жидкие пероральные лекарственные формы можно получать, например, растворением или суспендированием активного ингредиента в водной или неводной жидкости, или путем включения активного ингредиента в жидкую эмульсию типа "масло-в-воде" или "вода-в-масле".

В твердых и жидких пероральных составах могут использоваться дополнительные вспомогательные вещества, такие как красители, вкусовые добавки и консерванты и т.п.

Фармацевтические композиции для парентерального введения включают стерильные водные и неводные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии для инъекции или вливания, концентраты для инъекции или вливания, а также стерильные порошки, подлежащие ресуспендированию в стерильных растворах или дисперсиях для инъекции или вливания перед применением. Примеры вспомогательных веществ, пригодных для парентерального состава, включают без ограничения воду, кокосовое масло, пальмовое масло и растворы циклодекстринов. Водные составы должны быть подходящим образом забуферены, если необходимо, и приведены в состояние изотоничности с помощью достаточного количества соляного раствора или глюкозы.

Другие типы фармацевтических композиций включают суппозитории, ингаляторы, кремы, гели, кожные пластыри, имплантаты и составы для трансбуккального или подъязычного введения.

Необходимо, чтобы вспомогательные вещества, используемые для любого фармацевтического состава, соответствовали предполагаемому пути введения и были совместимы с активными ингредиентами.

Дозы

В одном варианте осуществления соединение (Id), полученное с помощью способа по настоящему изобретению вводят в количестве от приблизительно 0,0001 мг/кг массы тела до приблизительно 5 мг/кг массы тела в день. В частности, ежедневная дозировка может находиться в диапазоне от 0,001 мг/кг массы тела до приблизительно 1 мг/кг массы тела в день. Точная дозировка будет зависеть от частоты и способа введения, пола, возраста, веса и общего состояния подлежащего лечению субъекта, природы и тяжести подлежащего лечению состояния и каких-либо сопутствующих подлежащих лечению заболеваний, предполагаемого эффекта лечения, а также других факторов, известных специалистам в данной области.

Типичная дозировка для перорального введения взрослым будет находится в диапазоне 0,01-100 мг/день соединения по настоящему изобретению, как например 0,05-50 мг/день, как например 0,1-10 мг/день или 0,1-5 мг/день. Для удобства соединения по настоящему изобретению вводят в единичной лекарственной форме, содержащей указанные соединения в количестве от приблизительно 0,01 до 50 мг, как например 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,5 мг, 1 мг, 5 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг или не более 50 мг, соединения по настоящему изобретению.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигура 1. PK-профили у крыс линии Wistar, полученные после перорального введения дозы в соответствии с примером 9. Профили получены на основе средних значений концентрации в плазме крови у 3 субъектов для каждого соединения.

Ось X: время (часы); Ось Y: концентрация соединения (I) в плазме (пг/мл), полученная после введения доз следующих соединений ●: соединения (Ia); ▲: соединения (Ib); ♦: соединения (Id).

Фигуры 2 и 3, динамика локомоторной активности (фигура 2) и общее пройденное расстояние (фигура 3) после лечения с помощью среды-носителя (Н₂О, р.о.) или соединения (Id) (10, 30, 100 или 300 мкг/кг, р.о.) и по сравнению с видами лечения с использованием стандартов лечения (SoC): апоморфин (АРО, 3 мг/кг, s.c), прамипексол (РРХ, 0,3 мг/кг, s.c). Животным вводили дозу при t=60 минут после 60-мин периода привыкания в испытательных камерах, и затем контролировали активность в течение 350 минут. Данные оценивали с применением критерия Крускала-Уоллиса с тестом множественных сравнений Данна, в результате чего получали общее значение Р<0,0001.

Фигура 2: ось X: время (мин); ось Y: Пройденное расстояние (см) ± SEM/5-минутные интервалы.

Фигура 3: ось Y: общее пройденное расстояние (см) ± SEM. Указаны уровни значимости для апостериорных сравнений (относительно группы, обработанной средой-носителем): *<0,05, **<0,01, ***<0,001, ****<0,0001.

Фигуры 4 и 5. Взаимосвязь между концентрациями соединения (Id) и соединения (I) в плазме крови и гиперактивностью, вызванной соединением (Id) (100 мкг/кг, р.о.) (фигура 4), и соответствующая взаимосвязь между значениями концентрации в плазме крови апоморфина и гиперактивностью, вызванной апоморфином (3 мг/кг, s.c.) (фигура 5).

Ось X: время (мин); ось Y слева: пройденное расстояние (см) ± SEM/5-минутные интервалы; ось Y справа (фигура 4): концентрация соединения (I) в плазме крови (пг/мл); ось Y справа (фигура 5): концентрация апоморфина в плазме крови (нг/мл).

□: пройденное расстояние (см) ● концентрация в плазме крови.

Фигура 6, Превращение соединения (Id) в соединение (I) в гепатоцитах крысы (6а) и человека (6b).

Ось X: время (мин); ось Y: концентрация соединения (I) (пг/мл).

Фигура 7, Превращение соединения (Id) в цельной крови крысы (7а) и человека (7b).

Ось X: время (мин); ось Y: концентрация соединения (I) (пг/мл).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты нижеуказанной формулы (Id) и его солей

Соединение формулы (Id) является пролекарством на основе (4aR,10aR)-1-н-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6,7-диола [соединение (I)], которое является двойным агонистом D1/D2 с данными in vitro, приведенными в таблице 2.

Авторы настоящего изобретения наблюдали, что соединение (I) конъюгировано в гепатоцитах крысы и человека с производными сульфата и глюкуронида, включая соединение (Id). Было показано, что конъюгаты превращаются в соединение (I) посредством конъюгации и деконъюгации в организме.

Известно, что глюкуронидные и сульфатные производные нестабильны в кишечнике. Производные образуются в виде высокополярных и растворимых метаболитов для облегчения элиминации соединений из организма и впоследствии легко выводятся из организма. Например, у крыс с канюлированным желчным протоком глюкуронидные и сульфатные конъюгаты часто обнаруживаются в желчи, тогда как их деконъюгат (т.е. исходное соединение) обнаруживается в фекалиях. Обратное превращение глюкуронидных и сульфатных конъюгатов в кишечнике в исходное соединение, которое затем время от времени реабсорбируется, известно как часть процесса кишечно-печеночной рециркуляции. Как упоминалось ранее, пероральное введение дозы фенэтилкатехоламинов, как например апоморфин, в целом оказалось безрезультатным из-за их низкой биодоступности. Аналогично, соединение (I) имеет недостаток в виде низкой пероральной биодоступности (Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444). Учитывая все вышеперечисленное и принимая во внимание нестабильность глюкуронидных и сульфатных конъюгатов в желудочно-кишечном тракте, не следует ожидать, что пероральное введение дозы глюкуронидных и сульфатных конъюгатов соединения (I) можно использовать для достижения достаточной концентрации соединения в плазме крови.

Принцип применения глюкуронидных производных в качестве пролекарств для пероральной доставки был исследован для ретиноевой кислоты (Goswami et al., J. Nutritional Biochem. (2003) 14: 703-709) и для морфина (Stain-Texier et al., Drug Metab. and Disposition (1998) 26 (5): 383-387). Оба исследования показали очень низкие уровни концентрации исходных соединений после перорального введения дозы производных. Другое исследование предполагает применение буденозид-β-D-глюкуронида в качестве пролекарства для местной доставки буденозида в толстый кишечник для лечения язвенного колита исходя из плохого всасывания пролекарства самого по себе из пищеварительной системы (Nolen et al., J. Pharm Sci. (1995), 84 (6): 677-681).

Тем не менее, неожиданно было обнаружено, что пероральное введение дозы соединения (Id), которое было идентифицировано как метаболит соединения (I) у крыс и минисвиней, обеспечивает системное воздействие соединения (I) в плазме, что предполагает полезность указанного соединения в качестве перорально активного пролекарства соединения (I).

Профиль соединения (I) в плазме крови, полученный в результате перорального введения дозы соединений (Ia) и (Ib) и соединения (Id) крысам Wistar в соответствии с примером 9, показан на фигуре 1. Для всех соединений дозы скорректировали по молекулярной массе до дозы, равной 300 мкг/кг соединения (Ib), соответствующей 287 мкг/кг соединения (I). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что пероральное введение дозы соединений (Ia) и (Ib) крысам линии Wistar обеспечивает ранние и высокие пиковые концентрации соединения (I). Такие высокие пиковые концентрации у людей могут быть ассоциированы с дофаминергическими побочными эффектами, такими как, например, тошнота, рвота и головокружение. Напротив, введение дозы соединения (Id) приводит к более медленной скорости абсорбции, избегая быстрых пиковых концентраций, сопровождаемых длительным воздействием соединения (I) в плазме. Кроме того, концентрация в плазме крови соединения (I) у крыс линии Wistar сохраняется в течение 24 часов, хотя полученное значение AUC соединения (I), как правило, ниже, чем значение AUC, полученное после введения дозы соединения (Ib). Однако, поскольку пиковые концентрации соединения (I), которые, как ожидается, вызывают побочные эффекты, являются более низкими, то можно вводить более высокие дозы соединения (Id) для потенциально более высоких общих концентраций соединения (I) в плазме по сравнению с тем, что можно получить при введении доз соединений (Ia) и (Ib). При исследовании фармакокинетических свойств соединения (Ic) изобретатели обнаружили, что концентрации соединения (I) в плазме были чрезвычайно низкими, что делало соединение (Ic) непригодным в качестве пролекарства соединения (I) для перорального введения и подтверждало, что пероральная биодоступность, продемонстрированная для соединения формулы (Id), была очень непредсказуема. PK-параметры для PK-исследований у крыс линии Wistar перечислены в таблице 3.

Превращение соединения (Id) в соединение (I) in vivo также наблюдалось после перорального введения дозы соединения (Id) минисвиньям.

Биоконверсия соединения (Id) у человека подтверждается экспериментами из примера 6, показывающими превращение в соединение формулы (I) в гепатоцитах крысы и человека и в крови крысы и человека (фигуры 6 и 7).

Таким образом, в заключение, соединение формулы (Id) полезно в качестве перорально активного пролекарства соединения (I), и, как наблюдали у крыс, оно обеспечивает профиль PK, избегая пика C_max, наблюдаемого для известных пролекарств (Ia) и (Ib), и обеспечивает значительно более высокую AUC соединения (I), чем соединения (Ic).

Соединение (Id) дополнительно исследовали в анализе локомоторной активности крыс в соответствии с примером 10. Анализ продемонстрировал дофаминергический эффект, полученный после перорального введения соединения (Id), см. также фигуры 2, 3 и 4. Факт того, что соединение формулы (Id) не обладает дофаминергической активностью in vitro, см. также пример 9 и таблицу 3, дополнительно указывает на то, что эффект соединения (Id) в анализе локомоторной активности крыс достигается путем превращения соединения (Id) в соединение (I).

В заключение, важной проблемой, связанной с соединением (Ib) из уровня техники, является то, что данное соединение является агонистом рецептора 5-НТ2В. Поскольку агонисты рецептора 5-НТ2В связаны с патогенезом порока клапана сердца (VHD) после их длительного воздействия, такие соединения не подходят для применения в лечении хронических заболеваний (Rothman et al., Circulation (2000), 102: 2836-2841; and Cavero and Guillon, J. Pharmacol. Toxicol. Methods (2014), 69: 150-161). Таким образом, дополнительное преимущество соединений по настоящему изобретению заключается в том, что они не являются агонистами 5-НТ2В, см. также пример 8 и таблицу 2.

Соединение формулы (Id) полезно в лечении нейродегенеративных заболеваний и нарушений, таких как болезнь Паркинсона, и/или других состояний, для которых лечение агонистом дофамина является терапевтически полезным. Соединение, подходящее для перорального введения, может обеспечить новую парадигму лечения болезни Паркинсона.

В настоящем изобретении предусмотрен адаптируемый синтез соединения (Id), который позволяет избежать очистки колоночной хроматографией, обеспечивая при этом соединение (Id) с высокой чистотой. Общий способ, начиная с соединения (I), кратко проиллюстрирован на схеме 2 ниже.

Схема 2. Общий способ

X выбран из группы, состоящей из Cl, Вr и I.

Y представляет собой щелочной металл, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из Li, Na и K.

Способ получения соединения (I) для использования на стадии 1) описан в WO 2009/026934.

В таблице 1 ниже предусмотрен обзор соединений (А2), (A3), (А4) и (А5), которые являются интермедиатами со следующими соответствующими названиями соединений.

Реагент (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат, использованный на стадии 3, можно приобрести у Sigma-Aldrich (номер CAS: 92420-89-8).

Стадия 1

На стадии 1) авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение (I) неожиданно может быть подвергнуто реакции дибензилирования с бензилгалогенидом, таким как, например, бензилхлорид или бензилбромид, с получением соединения (А2) без значительных потерь на кватернизацию фрагмента третичного амина. Существуют примеры дибензилирования 3-алкилзамещенных катехинов, в которых нет электроноакцепторных групп, присоединенных непосредственно к ароматическому кольцу катехина, в то время как не существует примеров с дополнительным структурным присутствием незащищенного амина. Loev, В и др. (JACS, 1956, 78, р. 6095-6097), Imai, K. и др. (RSC Adv., 2017, 7, 17968-17979), Mandell, L. и др. (J. Org. Chem., 1982, 47, 731-734), Loozen, В. и др. (Recueil des Travaux Chimiques des Pays Bas, 1982, 101, 298 - 310), Montanari, S. и др. (US 5747513, 1998, А) и Shimada, X. и др. (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1986, 34, 179 - 187) сообщали о дибензилировании с использованием бензилбромида в DMF, ацетоне или EtOH с карбонатом калия в качестве основания, очищая продукт с помощью колоночной хроматографии на силикагеле.

X выбран из Cl, Br и I.

Реакция протекает в органическом растворителе, предпочтительно выбранном из ацетонитрила (MeCN), диметилформамида (DMF) или метилизобутилкетона (MIBK) в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, такого как, например, гидроксид натрия или калия (NaOH или KOH), или карбонат калия (K₂CO₃).

Стадия 2

Стадия 2) представляет собой селективное удаление защитных групп и существует только несколько примеров селективного монодебензилирования 3-замещенного дибензилированного катехина. Hitoshi, Т и др. (Chem Pharm Bull, 1986, 628) сообщали о селективном дебензилировании с использованием трифторуксусной кислоты (TFA, соотношение региоизомеров 86:7, выход 86%) или трихлорида алюминия (AlCl₃, соотношение региоизомеров 85:7, выход 85%) в бензоле и трибромида алюминия (AlBr₃) в нитробензоле (выход 80%, один региоизомер) или сероуглероде (выход 78%, один региоизомер). Крупномасштабное использование растворителей, таких как бензол, нитробензол и сероуглерод, не рекомендуется из-за канцерогенных и токсикологических свойств. Применение трифторуксусной кислоты является оптимальным из-за экологических соображений, а трихлорид алюминия и трибромид алюминия требуют водной обработки при нейтральном или щелочном рН, что неблагоприятно с точки зрения стабильности и выделения (A3). Montanari, S. и др. (US 5747513) сообщили об использовании триметилсилилиодида (TMSI) в дихлорметане и очистке неочищенного продукта с использованием колоночной хроматографии на силикагеле. Применение колоночной хроматографии на силикагеле для выделения и очистки ограничивает возможности масштабирования способа. В настоящем изобретении описан масштабируемый способ, в котором монодебензилирование может быть достигнуто с высокой селективностью (>99:1) в присутствии незащищенного амина.

В предпочтительном варианте осуществления соль HI (A3) выделяют непосредственно в виде стабильного твердого вещества. Выделение соли HI соединения (A3) в качестве твердого вещества предусматривает высокий выход, что позволяет избежать утомительной очистки с использованием колоночной хроматографии на силикагеле.

Таким образом, в стадии 2 предусмотрено масштабируемое и селективное монодебензилирование соединения (А2), опосредованное средством дебензилирования, таким как триметилсилилиодид, что селективно приводит к высокому выходу соединения (A3), которое может быть выделено в виде гидроиодидной соли (A3-HI).

Реакцию предпочтительно проводят в атмосфере азота в органическом растворителе, таком как, например, ацетонитрил (MeCN), дихлорметан или хлороформ (CHCl₃). Соединение получают непосредственно в виде гидроиодидной соли высокой чистоты без применения колоночной хроматографии.

Стадия 3

На стадии 3) соединение (A3) объединяют с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом в органическом растворителе, таком как, например, дихлорметан или (трифторметил)бензол, чему способствует протонная кислота, такая как трифторметансульфоновая кислота или комбинация кислоты Льюиса и протонной кислоты, такой как диэтилэфират трифторида бора и гидроиодид с получением соединения (А4).

Дополнительная проблема представляет собой удаление избыточных остатков сахара без использования колоночной хроматографии. Колоночной хроматографии можно избежать путем экстрагирования продукта в раствор с рН от 1 до 5, например от 2 до 4, например от 2,5 до 3,5, например от 2,7 до 3,2, например приблизительно 3. Оптимальные условия рН могут быть получены, например, путем экстрагирования продукта в раствор кислоты с pKa от 2 до 4, например от 2,5 до 3,5, например от 2,7 до 3,2, например приблизительно 3; такой как, например, раствор лимонной кислоты. Таким образом, остатки сахара могут быть удалены и после нейтрализации рН раствора может быть выделено соединение (А4).

Стадия 4

На стадии 4) соединение (А4) используется дополнительно непосредственно для снятия защиты фрагмента сахара с последующим осаждением соли соединения (А5), такой как соль щелочного металла, предпочтительно соль калия.

Y представляет собой щелочной металл, предпочтительно выбранный из Li, Na и K.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что путем осаждения соединения в виде калиевой соли из водного раствора, соединение может быть выделено фильтрованием и получено с высокой чистотой. Конъюгаты глю кур он о вой кислоты обычно очень хорошо растворимы в воде (Stachulski, А.V. et al. Nat. Prod. Rep., 2013, 30, 806-848), поэтому удивительно, что А5 осаждается в виде калиевой соли непосредственно из воды, тем самым выделяя А5 с высокой чистотой без использование обращенно-фазовой колоночной хроматографии.

Стадия 5

На стадии 5) соединение (А5-Y) дебензилируют с получением соединения (Id).

Дебензилирование можно проводить гидрированием в воде, например, в присутствии Pd/C и водорода. Конечный продукт может быть выделен фильтрованием и нейтрализован кислотой, такой как, например, HCl, таким образом получая соединение (Id) в виде гептагидрата.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Раскрыты следующие варианты осуществления настоящего изобретения. Первый вариант осуществления обозначен как Е1, второй вариант осуществления обозначен как Е2 и т.д.

Е1. Способ получения соединения (Id) или его фармацевтически приемлемой соли с нижеуказанной формулой:

из соединения (I) или его соли с нижеуказанной формулой:

включающий следующую стадию:

1) проведение реакции соединения (I) или его соли с бензилгалогенидом с получением соединения (А2) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где X выбран из Cl, Br и I.

Е2. Способ получения соединения формулы (А2), представленной ниже, включающий следующую стадию:

1) проведение реакции соединения (I) или его соли с бензил галогенидом с получением соединения (А2) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где X выбран из Cl, Br и I.

Е3. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-2, где

a) указанный бензилгалогенид представляет собой бензилхлорид, а X представляет собой Cl; или

b) указанный бензил галогенид представляет собой бензилбромид, а X представляет собой Br.

Е4. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-3, где указанная реакция протекает в органическом растворителе, таком как, например, ацетонитрил (MeCN), диметилформамид (DMF) или метилизобутилкетон (MIBK) и в присутствии основы, такой как, например, гидроксид натрия или калия (NaOH или KOH), или карбонат калия (K₂CO₃).

Е5. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-4, где соединение (I) представлено в форме соли HCl, представленной ниже:

Е6. Соединение нижеуказанной формулы (А2),

или его соль.

Е7. Применение соединения согласно варианту осуществления Е6 в способе получения соединения формулы (Id).

Е8. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

2) подвергание соединения (А2) реакции дибензилирования с получением соединения (A3) или его соли согласно нижеуказанной схеме реакции:

Е9. Соединение нижеуказанной формулы A3,

или его соль.

Е10. Способ согласно варианту осуществления 8, где реакция дибензилирования включает стадии:

I) проведения реакции триметилсил илиодида с соединением (А2) с образованием смеси;

II) добавления спирта к указанной смеси, полученной на стадии I), с получением соединения (A3) или его соли;

III) необязательно выделения соединения (A3) или его соли.

Е11. Способ согласно варианту осуществления 10, где спирт, добавленный к указанной смеси на стадии II), представляет собой МеОН или н-гептиловый спирт.

Е12. Способ согласно вариантам осуществления 10-11, где соединение (A3) получают в форме гидроиодидной соли (A3-HI).

Е13. Способ получения соединения формулы (А3-HI), представленной ниже, включающий следующую стадию:

2) проведение реакции соединения (А2) с триметилсилилиодидом с получением соединения (A3-HI)

Е14. Способ согласно любому из вариантов осуществления 8-13, где указанная реакция протекает в атмосфере азота в органическом растворителе, таком как, например, ацетонитрил (MeCN), дихлорметан (CH₂Cl₂) или хлороформ (CHCl₃).

Е15. Соединение нижеуказанной формулы A3,

или его соль.

Е16. Соединение согласно варианту осуществления 15, которое представлено в форме гидроиодидной соли, изображенное ниже:

Е17. Применение соединения согласно любому из вариантов осуществления 15-16 в способе получения соединения (Id).

Е18. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

3) проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (А4) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Е19. Способ получения соединения формулы (А4), представленной ниже, включающий следующую стадию:

3) проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом согласно нижеуказанной схеме реакции с получением соединения (А4) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Е20. Способ согласно любому из вариантов осуществления 18-19, где указанная реакция протекает в органическом растворителе, таком как, например, дихлорметан или (трифторметил)бензол, в присутствии протонной кислоты, такой как трифторметансульфоновая кислота или комбинации кислоты Льюиса и протонной кислоты, таких как, например, диэтилэфират трифторида бора и гидроиодид.

Е21. Способ согласно любому из вариантов осуществления 18-20, дополнительно включающий экстрагирование неочищенного соединения (А4) в раствор с рН от 1 до 5, например от 2 до 4, например от 2,5 до 3,5, например от 2,7 до 3,2, например, приблизительно 3; и последующее выделение соединения (А4).

Е22. Способ согласно любому из вариантов осуществления 18-20, дополнительно включающий экстрагирование неочищенного соединения (А4) в раствор кислоты с pKa от 2 до 4, например, от 2,5 до 3,5, например, от 2,7 до 3,2, например, приблизительно 3; такой как, например, раствор лимонной кислоты; и последующее выделение соединения (А4).

Е23. Соединение нижеуказанной формулы (А4),

или его соль.

Е24. Применение соединения согласно варианту осуществления 23 в способе получения соединения (Id).

Е25. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

4) проведение реакции соединения (А4) или его соли с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из Li, Na и K.

Е26. Способ получения соединения согласно формуле (A5-Y), представленной ниже, включающий следующую стадию:

4) проведение реакции соединения (А4) или его соли с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из Li, Na и K.

Е27. Способ согласно любому из вариантов осуществления 25-26, где

а) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид лития, и Y представляет собой Li; или

b) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид натрия, и Y представляет собой Na; или

c) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид калия, и Y представляет собой K.

Е28. Способ согласно любому из вариантов осуществления 25-27, где соединение (A5-Y) выделяют путем осаждения из водного раствора.

Е29. Соединение нижеуказанной формулы А5,

или его соль.

Е30. Соединение согласно варианту осуществления 29, которое представлено в форме соли щелочного метала, изображенное ниже:

где Y выбран из Li, Na и K.

Е31. Соединение согласно варианту осуществления 30, где Y представляет собой K.

Е32. Применение соединения согласно любому из вариантов осуществления 29-31 в способе получения соединения (Id).

Е33. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

5) дебензилирование соединения (A5-Y) с получением соединения (Id) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Е34. Способ согласно варианту осуществления 33, где указанное дебензилирование проводят посредством гидрирования в воде, например, в присутствии Pd/C и водорода при давлении приблизительно 2 бар.

Е35. Способ согласно вариантам осуществления 33-34, где соединение (Id) выделяют фильтрованием и нейтрализуют кислотой, такой как, например, HCl, тем самым получая соединение (Id) в виде гептагидрата.

Е36. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из вариантов осуществления 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления с 8 по 12 и 14.

Е37. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22.

Е38. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28.

Е39. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28; затем

стадия 5) согласно любому из вариантов осуществления 33-35.

Е40. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из вариантов осуществления 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22.

Е41. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28.

Е42. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28; затем

стадия 5) согласно любому из вариантов осуществления 33-35.

Е43. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из вариантов осуществления 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28.

Е44. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28; затем

стадия 5) согласно любому из вариантов осуществления 33-35.

Е45. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из вариантов осуществления 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из вариантов осуществления 8 и 12 и 14; затем

стадию 3) согласно любому из вариантов осуществления 18 и 20-22; затем

стадию 4) согласно любому из вариантов осуществления 25 и 27-28; затем

стадия 5) согласно любому из вариантов осуществления 33-35.

Е46. Гептагидрат (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты.

ПУНКТЫ

Следующие пункты дополнительно служат для описания настоящего изобретения и его вариантов осуществления.

Пункт 1. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой или его фармацевтически приемлемой соли,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой или его соли,

включающий следующую стадию:

1) проведение реакции соединения (I) или его соли с бензил галогенидом с получением соединения (А2) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где X выбран из группы, состоящей из Cl, Br и I.

Пункт 2. Способ получения соединения формулы (А2), представленной ниже, включающий следующую стадию:

1) проведение реакции соединения (I) или его соли с бензил галогенидом с получением соединения (А2) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где X выбран из группы, состоящей из Cl, Br и I.

Пункт 3. Способ согласно любому из пунктов 1-2, где

a) указанный бензил галогенид представляет собой бензилхлорид, а X представляет собой Cl; или

b) указанный бензил галогенид представляет собой бензил бромид, а X представляет собой Br.

Пункт 4. Способ согласно любому из пунктов 1-3, где указанный бензилгалогенид представляет собой бензилхлорид и X представляет собой Cl.

Пункт 5. Способ согласно любому из пунктов 1-4, где указанная реакция протекает в органическом растворителе и в присутствии основания.

Пункт 6. Способ согласно любому из пунктов 1-5, где указанная реакция протекает в органическом растворителе, выбранном из группы, состоящей из ацетонитрила (MeCN) или диметилформамида (DMF) и метилизобутилкетона (MIBK).

Пункт 7. Способ согласно любому из пунктов 1-6, где указанная реакция протекает в присутствии основания, выбранного из группы, состоящей из гидроксида натрия (NaOH), гидроксида калия (KOH) и карбоната калия (K₂CO₃).

Пункт 8. Способ согласно любому из пунктов 1-7, где указанная реакция протекает в органическом растворителе, таком как, например, ацетонитрил (MeCN), диметилформамид (DMF) или метилизобутилкетон (MIBK) и в присутствии основания, такого как, например, гидроксид натрия или калия (NaOH или KOH), или карбонат калия (K₂CO₃).

Пункт 9. Способ согласно любому из пунктов 1-8, где указанный органический растворитель представляет собой метилизобутилкетон (MIBK) и указанное основание представляет собой карбонат калия (K₂CO₃).

Пункт 10. Способ согласно любому из пунктов 1-9, где соединение (I) представлено в форме соли HCl, представленной ниже.

Пункт 11. Соединение нижеуказанной формулы (А2),

или его соль.

Пункт 12. Соединение (А2), полученное с помощью способа согласно любому из пунктов 2-10.

Пункт 13. Применение соединения согласно пункту 11 в способе получения соединения формулы (Id).

Пункт 14. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

при этом способ включает следующую стадию:

2) подвергание соединения (А2) реакции дебензилирования с получением соединения (A3) или его соли согласно нижеуказанной схеме реакции:

Пункт 15. Способ согласно пункту 14, где реакция дебензилирования включает стадии:

I) проведения реакции три метил сил ил иодида с соединением (А2) с образованием смеси;

II) добавления спирта к указанной смеси, полученной на стадии I), с получением соединения (A3) или его соли;

III) необязательно выделения соединения (A3) или его соли.

Пункт 16. Способ по пункту 15, где стадия I) осуществляется в органическом растворителе, выбранном из группы, состоящей из ацетонитрила (MeCN), дихлорметана (CH₂Cl₂) и хлороформа (CHCl₃).

Пункт 17. Способ согласно любому из пунктов 15-16, где стадия I) осуществляется в органическом растворителе, таком как ацетонитрил (MeCN).

Пункт 18. Способ согласно любому из пунктов 15-17, где стадия I) осуществляется в атмосфере азота.

Пункт 19. Способ согласно любому из пунктов 15-18, где указанная реакция в стадии I) осуществляется в атмосфере азота в органическом растворителе, таком как, например, ацетонитрил (MeCN), дихлорметан (CH₂Cl₂) или хлороформ (CHCl₃).

Пункт 20. Способ согласно любому из пунктов 15-19, где спирт, добавляемый к указанной смеси на стадии II), выбран из группы, состоящей из МеОН, н-гептилового спирта и этанола.

Пункт 21. Способ согласно любому из пунктов 15-20, где спирт, добавленный к указанной смеси на стадии II), представляет собой МеОН или н-гептиловый спирт.

Пункт 22. Способ согласно любому из пунктов 15-21, где спирт, добавляемый к указанной смеси на стадии II), представляет собой этанол.

Пункт 23. Способ согласно любому из пунктов 15-22, где изопропилацетат добавляют к соединению (A3), полученному на стадии II).

Пункт 24. Способ согласно любому из пунктов 15-23, включающий стадию III), где выделяют соединение (A3) или его соль.

Пункт 25. Способ согласно любому из пунктов 15-24, где соединение (A3) получают в форме гидроиодидной соли (А3-HI), как показано в нижеуказанной формуле.

Пункт 26. Способ получения соединения формулы (A3), включающий стадии, которые определены в пунктах 14-24.

Пункт 27. Способ получения соединения формулы (А3-HI), представленной ниже, включающий следующую стадию:

2) проведение реакции соединения (А2) с триметилсилилиодидом с получением соединения (A3-HI)

Пункт 28. Способ по пункту 27, включающий одну или несколько стадий, которые определены в любом из пунктов 14-25.

Пункт 29. Соединение нижеуказанной формулы (A3),

или его соль.

Пункт 30. Соединение согласно пункту 28, где указанное соединение представляет собой гидроиодидную соль с формулой (А3-HI), приведенной ниже,

Пункт 31. Соединение (A3), полученное с помощью способа согласно любому из пунктов 14-24.

Пункт 32. Соединение (А3-HI), полученное с помощью способа согласно любому из пунктов 14-25.

Пункт 33. Применение соединения согласно любому из пунктов 29-32 в способе получения соединения (Id).

Пункт 34. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

3) проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (А4) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Пункт 35. Способ получения соединения формулы (А4), представленной ниже, включающий следующую стадию:

3) проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетатом согласно нижеуказанной схеме реакции с получением соединения (А4) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Пункт 36. Способ согласно любому из пунктов 34-35, где указанная реакция на стадии 3 протекает в органическом растворителе, таком как, например, дихлорметан или (трифторметил)бензол, в присутствии протонной кислоты, такой как трифторметансульфоновая кислота или комбинации кислоты Льюиса и протонной кислоты, таких как, например, диэтилэфират трифторида бора и гидроиодид.

Пункт 37. Способ согласно любому из пунктов 34-36, где указанный органический растворитель представляет собой (трифторметил)бензол.

Пункт 38. Способ согласно любому из пунктов 34-37, где указанная реакция на стадии 3 осуществляется в присутствии диэтилэфирата трифторида бора.

Пункт 39. Способ согласно любому из пунктов 34-38, где указанная реакция на стадии 3 осуществляется в присутствии трифторметансульфоновой кислоты.

Пункт 40. Способ согласно любому из пунктов 34-39, дополнительно включающий дополнительную стадию экстракции неочищенного соединения (А4) в раствор с рН от 1 до 5, например от 2 до 4, например от 2,5 до 3,5, например от 2,7 до 3,2, например, приблизительно 3; и последующее выделение соединения (А4).

Пункт 41. Способ согласно любому из пунктов 34-40, дополнительно включающий дополнительную стадию экстракции неочищенного соединения (А4) в раствор кислоты с pKa от 2 до 4, например, от 2,5 до 3,5, например, от 2,7 до 3,2, например, приблизительно 3; такой как, например, раствор лимонной кислоты; и последующее выделение соединения (А4).

Пункт 42. Соединение нижеуказанной формулы (А4),

или его соль.

Пункт 43. Соединение (А4) или его соль, полученные с помощью способа согласно любому из пунктов от 35 до 41.

Пункт 44. Применение соединения согласно пункту 42 в способе получения соединения (Id).

Пункт 45. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

4) проведение реакции соединения (А4) или его соли с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из Li, Na и K.

Пункт 46. Способ с получением соединения согласно формуле (A5-Y), представленной ниже, включающий следующую стадию:

4) проведение реакции соединения (А4) или его соли с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из Li, Na и K.

Пункт 47. Способ согласно любому из пунктов 45-46, где

a) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид лития, и Y представляет собой Li; или

b) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид натрия, и Y представляет собой Na; или

c) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид калия, и Y представляет собой K.

Пункт 48. Способ согласно любому из пунктов 45-47, где указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид калия, и Y представляет собой K.

Пункт 49. Способ согласно любому из пунктов 45-58, где соединение (A5-Y) выделяют путем осаждения из водного раствора.

Пункт 50. Соединение нижеуказанной формулы А5,

или его соль.

Пункт 51. Соединение согласно пункту 50, которое представлено в форме соли щелочного металла, изображенное ниже:

где Y выбран из группы, состоящей из Li, Na и K.

Пункт 52. Соединение согласно пункту 51, где Y представляет собой K.

Пункт 53. Соединение (А5) или его соли, которые получены с помощью способа по любому из пунктов 45-49.

Пункт 54. Применение соединения согласно любому из пунктов 50-51 в способе получения соединения (Id).

Пункт 55. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

5) дебензилирование соединения (A5-Y) с получением соединения (Id) согласно нижеуказанной схеме реакции:

Пункт 56. Способ согласно пункту 55, где указанное дебензилирование проводят посредством гидрирования в воде, например, в присутствии палладия на углероде (Pd/C) и водорода при давлении приблизительно 2 бар.

Пункт 57. Способ согласно пунктам 55-56, где соединение (Id) выделяют фильтрованием и нейтрализуют кислотой, такой как, например, HCl, тем самым получая соединение (Id) в качестве гептагидрата.

Пункт 58. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из пунктов 1 и 3-10; затем

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25.

Пункт 59. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41.

Пункт 60. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49.

Пункт 61. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49; затем

стадию 5) согласно любому из пунктов 55-57.

Пункт 62. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из пунктов 1 и 3-10; затем

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41.

Пункт 63. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49.

Пункт 64. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49; затем

стадию 5) согласно любому из пунктов 55-57.

Пункт 65. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из пунктов 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49.

Пункт 66. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49; затем

стадию 5) согласно любому из пунктов 55-57.

Пункт 67. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) согласно любому из пунктов 1 и 3-5; затем

стадию 2) согласно любому из пунктов 14-25, затем

стадию 3) согласно любому из пунктов 34 и 36-41; затем

стадию 4) согласно любому из пунктов 45 и 47-49; затем

стадию 5) согласно любому из пунктов 55-57.

Пункт 68. Гептагидрат (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты.

Пункт 69. Гептагидрат (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4aR,10aR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты, полученный с помощью способа по любому из пунктов 55-57.

Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитируемые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте и в той же степени, как если бы было указано, что каждая ссылка индивидуально и конкретно включена посредством ссылки и приведена во всей своей полноте (в максимальной степени, допускаемой законом).

Заголовки и подзаголовки применяются в данном документе исключительно для удобства, и их не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом настоящее изобретение.

Описание в данном документе любого аспекта или аспектов настоящего изобретения с использованием таких терминов, как "включающий", "имеющий", "в том числе" или "содержащий", по отношению к элементу или элементам предназначено для подтверждения аналогичного аспекта или аспектов настоящего изобретения, который "состоит из", "состоит практически из" данного конкретного элемента или элементов или "по сути содержит" их, если не указано иное или это однозначно не противоречит контексту (например, композиция, описанная в данном документе как содержащая определенный элемент, должна также пониматься как описывающая композицию, состоящую из данного элемента, если не указано иное или это однозначно не противоречит контексту).

Использование всевозможных примеров или вводного слова перед примерами (в том числе "как например", "например", "к примеру", "такой как" и "собственно") в данном описании предназначено исключительно для лучшего освещения настоящего изобретения и не предусматривает ограничение объема настоящего изобретения, если не указано иное.

Следует понимать, что различные аспекты, варианты осуществления, пункты, реализации и признаки настоящего по настоящему изобретению, упомянутые в данном документе, могут быть заявлены по отдельности или в любой комбинации.

Настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта, изложенного в прилагаемой к данному документу формуле изобретения согласно действующему законодательству.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ РАЗДЕЛ

Получение соединения формулы (Id) и промежуточных соединений

ЯМР-способы

QNMR (600 МГц):

1) релаксационная задержка 40 сек

2) время исследования 3,76 сек

3) временной интервал 64k

4) размер 32k

5) сканы для отрицательного контроля 4

6) сканы 8

7) импульс 30 градусов.

Способы LC-MS

Аналитические данные LC-MS получали с применением способов, определенных ниже.

Способ 550, LC-MS проводили на приборе Waters Aquity UPLC-MS, состоящем из Waters Aquity, включающем управляющее устройство колонки, бинарную градиентную систему управления, органайзер для образцов, детектор PDA (работающий при 254 нМ), детектор ELS и TQ-MS, оборудованный APPI-источником, работающем в режиме положительных ионов.

Условия LC. Колонка представляла собой Acquity UPLC ВЕН С18 1,7 мкм; 2,1×50 мм, работающую при 60°С с 1,2 мл/мин бинарного градиента, состоящего из воды + 0,05% трифторуксусной кислоты (А) и ацетонитрил/вода (95:5)+0,05% трифторуксусной кислоты.

Градиент (линейный):

0,00 мин 10% В 1.00 мин 100% В 1.01 мин 10% В 1,15 мин 10% В

Общее время прогона: 1,15 минут.

Способ 551. LC-MS проводили на приборе Waters Aquity UPLC-MS, состоящем из Waters Aquity, включающем управляющее устройство колонки, бинарную градиентную систему управления, органайзер для образцов, детектор PDA (работающий при 254 нМ), детектор ELS и TQ-MS, оборудованный APPI-источником, работающем в режиме положительных ионов.

Условия LC. Колонка представляла собой Acquity UPLC HSS Т3 1,8 мкм; 2,1×50 мм, работающую при 60°С с 1,2 мл/мин бинарного градиента, состоящего из воды + 0,05% трифторуксусной кислоты (А) и ацетонитрил/вода (95:5)+0,05% трифторуксусной кислоты.

Градиент (линейный):

0,00 мин 2% В 1,00 мин 100% В 1,15 мин 2% В

Общее время прогона: 1,15 минут.

Способ 555, LC-MS проводили на приборе Waters Aquity UPLC-MS, состоящем из Waters Aquity, включающем управляющее устройство колонки, бинарную градиентную систему управления, органайзер для образцов, детектор PDA (работающий при 254 нМ), детектор ELS и TQ-MS, оборудованный APPI-источником, работающем в режиме положительных ионов.

Условия LC. Колонка представляла собой Acquity UPLC ВЕН С18 1,7 мкм; 2,1×150 мм, работающую при 60°С с 0,6 мл/мин бинарного градиента, состоящего из воды + 0,05% трифторуксусной кислоты (А) и ацетонитрил/вода (95:5)+0,05% трифторуксусной кислоты.

Градиент (линейный):

0,00 мин 10% В 3,00 мин 100% В 3,60 мин 10% В

Общее время прогона: 3,6 минут.

Пример 1. Получение соединения (А2) (стадия 1)

Пример 1а.

В круглодонную колбу объемом 50 мл с магнитной мешалкой загружали соль HCl соединения (I) (775 мг, 2,60 ммоль) и K₂CO₃ (1260 мг, 9,12 ммоль). Затем горлышко закрывали пробкой, колбу упаривали и снова заполняли азотом с последующим введением сухого ацетонитрила (7,8 мл). Последовательно добавляли бензилхлорид (682 мг, 620 мкл, 5,39 ммоль) и смесь нагревали до 50°С в течение 18 часов, прежде чем охлаждали до комнатной температуры и добавляли Et₃N (263 мг, 363 мкл, 2,60 ммоль), и смесь перемешивали еще час при комнатной температуре. Затем смесь разбавляли гептаном (5 мл) и водой (5 мл) (наблюдали три фазы - гептан вверху, ацетонитрил в середине и вода внизу) и фазу гептан/ацетонитрил экстрагировали водой (3×5 мл) (после одной экстракции водой ацетонитрильная фаза перешла в водную фазу, как и ожидалось). Объединенные водные фазы экстрагировали гептаном (3×5 мл) и объединенные органические фазы промывали солевым раствором (5 мл) и концентрировали. С помощью LC-MS наблюдали, что в водной фазе присутствовал только тройной бензилированный побочный продукт и с помощью LC-MS в выделенном твердом веществе наблюдали, что присутствует только продукт. После концентрирования получали сироп/масло, которое затвердевало в течение ночи при выдерживании в вакууме. Это обеспечивало получение неочищенного соединения (А2) (992 мг) в виде твердого вещества.

LCMS (способ 550): время удерживания (RT)=0,73 минуты, [М+Н]⁺=442,6 масса/заряд.

Пример 1b.

В круглодонную колбу объемом 1 л с одним горлышком с магнитной мешалкой загружали соль HCl соединения (I) (10,75 г, 36,1 ммоль) и K₂CO₃ (17,5 г, 126 ммоль). Колбу упаривали и снова заполняли азотом с последующим введением сухого DMF (107 мл). Последовательно добавляли бензилхлорид (9,41 г, 8,55 мл, 74,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, затем нагревали до 100°С в течение 5 часов, а затем охлаждали до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 19 часов. Последовательно добавляли дополнительный K₂CO₃ (7,48 г, 54,1 ммоль) и бензилхлорид (6,85 г, 6,29 мл, 54,1 ммоль) и смесь перемешивали в течение 5 часов при 100°С. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (500 мл) и гептан (250 мл). Водную фазу промывали гептаном (3×100 мл) и объединенные органические фазы промывали солевым раствором (100 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением оранжево-коричневого сиропа, который затвердевал при выдерживании в вакууме. Неочищенный продукт (соединение (А2)) (14,6 г) использовали непосредственно на следующей стадии.

LCMS (способ 550): время удерживания (RT)=0,73 минуты, [М+Н]⁺=442,6 масса/заряд.

Пример 1с.

В реактор объемом 15 л загружали соль HCl соединения (I) (600 г, 2015 ммоль), K₂CO₃ (974 г, 7047 ммоль), бензилхлорид (487 мл, 536 г, 4234 ммоль) и MIBK (4,8 л). Устанавливали азотную атмосферу. Реакционную суспензию нагревали до 105°С в течение 17 часов перед охлаждением до комнатной температуры. Добавляли дополнительное количество бензилхлорида (25 мл, 28 г, 221 ммоль) и реакционную смесь повторно нагревали при 105°С еще в течение 18 часов перед охлаждением до комнатной температуры. К реакционной смеси добавляли холодную воду (4,8 л) и смесь перемешивали в течение 30 минут. Водную фазу на дне сливали. Добавляли 3М лимонной кислоты (3 л) и смесь хорошо перемешивали в течение 45 минут. Фазы разделяли. Водную фазу лимонной кислоты на дне промывали смесью Me-THF (1,2 л) и гептана (2,4 л). Медленно отделяющуюся вязкую водную фазу лимонной кислоты повторно загружали в пустой реактор на 15 л и добавляли Me-THF (3 л). Добавляли 25% водный раствор аммиака (3 л) с регулируемой температурой от 20 до 38°С с рН от 10 до 11. Добавляли гептан (4,5 л) и после перемешивания в течение 15 минут фазы разделяли. Органическую фазу промывали водой (3 л) и затем концентрировали при пониженном давлении/50°С приблизительно до 1 л. Добавляли ацетонитрил (1 л) и смесь повторно концентрировали при пониженном давлении/50°С приблизительно до 0,9 л. Добавляли ацетонитрил (2,5 л) и неочищенный продукт (соединение А2, приблизительно 800 г) в растворе использовали непосредственно на следующей стадии.

Пример 2. Получение соединения (А3-HI) (стадия 2)

Пример 2а.

В круглодонную колбу объемом 1 л с одним горлышком с магнитной мешалкой загружали соединение (А2) (11,54 г, 26,1 ммоль). Затем колбу закрывали резиновой пробкой и колбу упаривали, и снова заполняли азотом три раза. Последовательно добавляли сухой ацетонитрил (115 мл) и смесь перемешивали до растворения всего исходного материала. Затем добавляли TMS-I (13,23 г, 9,00 мл, 66,1 ммоль) и смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 17 часов, в течение которых после добавления наблюдали осаждение. После этого добавляли н-гептиловый спирт (15,18 г, 18,55 мл, 131 ммоль) и смесь перемешивали в течение 45 минут, в течение которых последовательно оксилированный продукт TMS десилилировался. Во время добавления н-гептилового спирта твердое вещество растворялось и через 1-2 минуты образовывалось новое твердое вещество. Последовательно добавляли изопропилацетат/гептан 1:15 (об./об.) (160 мл), смесь охлаждали (ледяная баня) и перемешивали в течение 60 минут. Осадок отфильтровывали и осадок на фильтре промывали смесью изопропилацетат/гептан 1:15 (об./об.) (50 мл). Твердое вещество сушили в вакуумной печи в течение 21 часа при 40°С, получая неочищенное соединение (A3-HI) (10,14 г).

Пример 2b.

В круглодонную колбу объемом 1 л с одним горлышком с магнитной мешалкой загружали соединение (А2) (11,9 г, 26,8 ммоль). Затем колбу закрывали резиновой пробкой и колбу упаривали, и снова заполняли азотом три раза. Последовательно добавляли сухой MeCN (180 мл) и смесь перемешивали до растворения всего исходного материала, затем добавляли TMS-I (14,7 г, 10,0 мл, 73,4 ммоль) и смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 2 часов, в течение которых образовался осадок. Затем добавляли МеОН (5,5 мл) и смесь перемешивали в течение 1 часа. Во время добавления МеОН твердое вещество растворялось и образовывалось новое твердое вещество. Последовательно добавляли изопропилацетат/гептан 1:15 (об./об.) (160 мл), смесь охлаждали (ледяная баня) и перемешивали в течение 60 минут. Осадок отфильтровывали и промывали смесью изопропилацетат/гептан 1:15 (об/об) (1×50 мл). Твердое вещество сушили в вакуумной печи при 40°С, с получением соединения (A3-HI) (7,6 г).

LCMS (способ 550): время удерживания (RT)=0,55 минуты, [М+Н]⁺=352,5 масса/заряд.

¹Н ЯМР (600 МГц, Хлороформ-d₃) δ 10,42 (bs, 1Н), 7,43 - 7,33 (m, 5Н), 6,78 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,58 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 5,72 (s, 1Н), 5,08 (s, 2Н), 3,71 (dd, J=15,1, 11,3 Гц, 1Н), 3,58 (ddt, J=10,3, 4,0, 2,0, 1Н), 3,25-3,11 (m, 4Н), 2,90 (m, 1Н), 2,72 (qt, J=13,6, 3,8 Гц, 1Н), 2,61 (qdd, J=11,5, 5,5, 3,9 Гц, 1Н), 2,26 (dd, J=11,70 Гц, 17,0 Гц 1Н), 2,19 (m, 1Н), 1,97 (m,2Н), 1,75 (tdd, J=12,5, 7,4, 5,5 Гц, 1Н), 1,39 (qd, J=13,5, 11,7, 3,9 Гц, 1Н), 1,06 (t, J=7,3 Гц, 3Н).

Пример 2с.

В реактор объемом 15 л загружали раствор ацетонитрила (из примера 1с) неочищенного соединения А2 (2821 г раствора, приблизительно 800 г соединения А2, 1810 ммоль). Раствор нагревали до появления конденсата и растворитель отгоняли до конечного объема приблизительно 0,9 л. Добавляли ацетонитрил (6 л) и раствор нагревали до 30°С. Свежеприготовленную смесь триметилсилилиодида (661 мл, 929 г, 4640 ммоль) в изопропилацетате (1100 мл) добавляли к реакционной смеси в течение 5 минут. Реакционную смесь перемешивали 3,5 часа при от 30 до 32°С и затем охлаждали до 25°С и перемешивали в течение ночи. Из реакционной смеси отбирали пробы для HPLC анализа. Реакционную смесь гасили добавлением этанола (650 мл) при 25°С, что вскоре приводило к получению прозрачного раствора, но за этим следовало осаждение продукта. Суспензию перемешивали 2 часа при 28°С и затем добавляли изопропилацетат (7 л). Суспензию перемешивали 1 час при 28°С и затем медленно охлаждали в течение ночи до комнатной температуры. Суспензию охлаждали до 15°С и перемешивали 2 часа с последующей фильтрацией. Осадок на фильтре промывали смесью ацетонитрил/изопропилацетат (1:2, 3 л) и затем изопропилацетатом (1 л). Твердое вещество сушили в вакуумной печи в течение 3 дней при 40°С, что обеспечивало получение соединения (A3-HI) (632 г).

Выделение свободной основной формы (4aR, 10aR)-7-(бензилокси)-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ола из гидроиодидной соли

В круглодонную колбу объемом 250 мл загружали магнитную мешалку, соединение (А3-HI) (6,00 г, 12,52 ммоль) и K₂CO₃ (1,82 г, 13,14 ммоль) с последующим введением изопропанола (46,8 г, 60,0 мл, 779 ммоль), что предоставляло суспензию твердых частиц в жидкости. Суспензию твердых частиц в жидкости перемешивали в течение 30 минут перед добавлением 5% солевого раствора (40 мл). Суспензию твердых частиц в жидкости перемешивали при комнатной температуре еще в течение 30 минут перед тем, как двухфазную суспензию твердых частиц в жидкости вливали в делительную воронку. Затем добавляли изопропилацетат (60 мл) и делительную воронку встряхивали, две фазы разделяли и органическую фазу нагревали с помощью струйной воздушной сушилки, чтобы растворить весь продукт. Затем органическую фазу промывали 5% солевым раствором (10 мл) (органическую фазу повторно нагревали с помощью струйной воздушной сушилки после каждой промывки) и концентрировали до твердого вещества (неочищенное 4,86 г). Неочищенный продукт сушили в вакуумной печи в течение 18 часов, что обеспечивало получение соединения (A3) в виде твердого вещества (4,78 г). Использовали непосредственно неочищенный продукт.

¹Н ЯМР (600 МГц, Хлороформ-d₃) δ 7,40 (m, 4Н), 7,36 (m, 1Н), 6,75 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,60 (d, J=8,3 Гц, 1 Н), 5,72 (s, 1 Н), 5,08 (s, 2Н), 3,14 (dd, J=15,7, 4,8 Гц, 1 Н), 3,02 (d, J=11,6 Гц, 1Н), 2,98 (dd, J=17,5, 5,1 Гц, 1Н), 2,76 (ddd, J=13,2, 10,4, 6,0 Гц, 1Н), 2,65 (t, J=13,5 Гц, 1Н), 2,53 (td, J=12,9, 12,0, 5,5 Гц, 1Н), 2,31 (td, J=11,0, 4,3 Гц, 1Н), 2,23 (dd, J=17,3, 11,6 Гц, 2Н), 1,95 (m, 1Н), 1,72 (m, 3Н), 1,54 (qdd, J=13,8, 11,4, 6,2 Гц, 2Н), 1,15 (m, 1Н), 0,90(t, J=7,4 Гц, 3Н).

Пример 3. Получение соединения (А4) (стадия 3)

Пример 3а.

Соединение (A3-HI) (6,20 г, 12,9 ммоль) и (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат (24,8 г, 51,7 ммоль) суспендировали в (трифторметил)бензоле (112 мл) и охлаждали до 2°С. Затем добавляли диэтилэфират трифторида бора (2,29 г, 2,05 мл, 16,2 ммоль) в атмосфере азота и смесь перемешивали при 2°С в течение 20 минут, затем нагревали до 25°С и перемешивали в течение ночи в атмосфере азота. Через 21 час смесь охлаждали до 5°С и гасили путем добавления триэтиламина (6,22 г, 8,6 мл, 61,4 ммоль) и метанола (15,5 мл), охлаждающую ванну удаляли и смесь перемешивали в течение 1 часа и 10 минут, затем добавляли воду (90 мл). Органическую фазу промывали водой (2×65 мл) и объединенную водную фазу экстрагировали (трифторметил)бензолом (25 мл). Объединенные органические фазы экстрагировали концентрированной водной лимонной кислотой (82 мл, 262 ммоль, 3,18 моль) и смесь перемешивали в течение 20 минут. Органическую фазу экстрагировали дополнительным количеством концентрированной водной лимонной кислоты (61,0 мл, 194 ммоль, 3,18 моль). К фазе лимонной кислоты добавляли THF/н-гептан (2:1, 50 мл) и смесь охлаждали до 5°С, медленно нейтрализовали водным аммиаком (125 мл, 0,166 моль, 25%) при интенсивном перемешивании (>500 об/мин) и температуре <16°С до рН=7,8. Водную фазу экстрагировали дополнительным количеством THF/н-гептана (2:1, 50 мл) и объединенную органическую фазу высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и выпаривали до сухого остатка в вакууме, получая неочищенное соединение (А4) (10,6 г).

LC-MS (способ 555): время удерживания (RT)=2,18 минуты, [М+Н]⁺=668,4 масса/заряд.

Пример 3b.

Получение из свободного основания (4aR, 10aR)-7-(бензилокси)-1-пропил-1,2,3,4,4а, 5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ола

Суспензия высушенного соединения (A3) (2,00 г, 5,69 ммоль) и (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетата (6,81 г, 14,23 ммоль) в (трифторметил)бензоле (36 мл) охлаждали до 0°С в атмосфере азота. Последовательно по каплям добавляли трифторметансульфоновую кислоту (1,281 г, 0,758 мл, 8,54 ммоль), при этом суспензия твердых частиц в жидкости быстро растворялась с образованием нового осадка через 10 минут. Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С в атмосфере азота. LC-MS показала полное превращение исходного материала через 1 ч. Последовательно добавляли Et₃N (2,61 г, 3,60 мл, 25,8 ммоль) и МеОН (3,96 г, 5,00 мл, 124 ммоль) и ледяную баню удаляли. Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Затем добавляли воду (28 мл) и разделяли две фазы. Органическую фазу промывали водой (28 мл) и объединенные водные фазы экстрагировали (трифторметил)бензолом (12 мл). К объединенным органическим фазам добавляли 3,18 М лимонной кислоты (26,0 мл, 83 ммоль, 3,18 М) и смесь перемешивали в течение 25 минут. Две фазы разделяли и органическую фазу дополнительно экстрагировали 3,18 М лимонной кислоты (12 мл, 38,2 ммоль, 3,18 моль). Затем к водной фазе добавляли изопропилацетат (26 мл) и раствор охлаждали на льду. Последовательно добавляли 25% аммиак (0,388 г, 0,493 мл, 5,69 ммоль, 25%) в течение более 1,5 часа до достижения рН 7,5. Две фазы разделяли и водную фазу экстрагировали изопропилацетатом (26 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до коричневой пены, которую оставляли под вакуумом на ночь (неочищенный: 5,00 г). Это обеспечивало получение неочищенного соединения (А4) (5,00 г). Неочищенный продукт применяли непосредственно в примере 4b.

LC-MS (способ 555): время удерживания (RT)=2,18 минуты, [М+Н]⁺=668,3 масса/заряд.

Пример 4. Получение соединения (А5-K) (стадия 4)

Пример 4а.

Соединение (А4) (10,6 г, 8,68 ммоль, 54,5% (вес/вес)) растворяли в THF (45,5 мл)/н-гептане (4,5 мл) и добавляли Н₂О (50 мл). Смесь охлаждали до 6°С и добавляли водный гидроксид калия (9,52 г, 6,52 мл, 78 ммоль, 46%), и смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 2,5 часа. Добавляли н-гептан (10 мл), что приводило к разделению фаз. Органическую фазу сливали. Водную фазу промывали смесью THF:н-гептан (25 мл, 4:1) и затем концентрировали (THF удаляли) в вакууме при 42°С, что приводило к осаждению. Смесь перемешивали при 0°С в течение 20 минут, затем фильтровали, получая твердое вещество, которое сушили в вакуумной печи в течение 3 часов, получая соединение (А5-K) (4,8 г).

LC-MS (способ 550): время удерживания (RT)=0,41 минуты, [М+Н]⁺=528,4 масса/заряд.

¹Н ЯМР (600 МГц, Оксид дейтерия) δ 7,42-7,26 (m, 5Н), 6,89 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,82 (d, J=8,5 Гц, 1 Н), 5,04 (d, J=2,8 Гц, 2Н), 4,91 - 4,88 (m, 1 Н), 3,53 - 3,45 (m, 4Н), 3,42 - 3,32 (m, 1Н), 3,31 -3,17 (m, 3Н), 3,11 (td, J=11,3, 5,3 Гц, 1Н), 3,05-2,93 (m, 2Н), 2,69 (dd, J=15,7, 11,0 Гц, 1Н), 2,26 (dd, J=17,6, 11,7 Гц, 1Н), 1,93 (t, J=14,2 Гц, 2Н), 1,85 - 1,66 (m, 3Н), 1,61 (tt, J=12,5, 6,3 Гц, 1Н), 1,30 (dd, J=17,6, 8,1 Гц, 1Н), 0,90 (td, J=7,4, 1,5 Гц, 3Н).

Пример 4b.

Неочищенное соединение (А4), полученное в примере 3b (5,0 г, 3,62 ммоль, чистота QNMR 48,4%), суспендировали в THF (12 мл), воде (12 мл). Добавляли н-гептан (0,813 г, 1,189 мл, 8,12 ммоль) и раствор охлаждали до 0°С. Последовательно добавляли KOH (2,21 г, 1,52 мл, 18,12 ммоль, 46% раствор) в течение 2 минут и смесь перемешивали в течение 4 часов при 1°С. LC-MS не показала полного превращения, поэтому добавляли еще KOH (2,91 г, 2,0 мл, 23,87 ммоль, 46% раствор) и смесь перемешивали еще в течение 2 часов, в течение которых весь исходный материал был израсходован. Смесь переносили в делительную воронку и добавляли н-гептан (12 мл), что приводило к разделению фаз. Две фазы разделяли. Водную фазу промывали смесью 4:1 THF (5 мл)/н-гептана (1,2 мл) и затем коричневую водную фазу концентрировали (для удаления любого THF) в вакууме. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней и наблюдали выпадение осадка перед тем, как смесь охлаждали до 0°С и оставляли на 45 минут. Затем осадок отфильтровывали, получая белое твердое вещество, которое сушили в вакуумной печи в течение ночи при 40°С с получением соединения (А5-K) в виде белого твердого вещества (1,98 г).

LC-MS (способ 555): время удерживания (RT)=1,54 минуты, [М+Н]⁺=528,3 масса/заряд.

¹Н ЯМР (600 МГц, Оксид дейтерия) δ 7,47 - 7,36 (m, 5Н), 6,88 (d, J=8,6 Гц, 1Н), 6,83 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 5,13 (m, 2Н), 5,01 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 3,59 (m, 1Н), 3,54 (m, 1Н), 3,47 (td, J=9,2, 0,7 Гц, 1Н), 3,42 (dd, J=9,8, 0,7 Гц, 1Н),3,23 (dd, J=17,6, 4,8 Гц, 1Н), 3,13 (dd, J=16,2, 5,1 Гц, 1Н), 2,98 (d, J=11,5 Гц, 1Н), 2,69 (ddd, J=13,1, 11,4, 5,1 Гц, 1Н), 2,49 (dd, J=16,0, 11,1 Гц, 1Н), 2,42 (ddd, J=13,1, 11,3, 5,0 Гц, 1Н), 2,28 (td, J=12,2, 2,8 Гц, 1Н), 2,17 (m, 2Н), 1,91 (m, 1Н), 1,71 (m, 1Н), 1,60 (m, 1Н), 1,50 (m, 2Н), 1,43 (m, 1Н), 1,08 (qd, J=13,0, 4,0 Гц, 1H), 0,85 (t, J=7,3 Гц, 3Н).

Пример 4 с.

Соединение (A3-HI) (360 г, 751 ммоль) и (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат (1440 г, 3008 ммоль) суспендировали в (трифторметил)бензоле (5760 мл) и охлаждали до 2°С. Затем добавляли смесь диэтилэфирата трифторида бора (133 г, 116 мл, 940 ммоль) в (трифторметил)бензоле (720 мл) в атмосфере азота в течение 25 минут. Смесь перемешивали при 2°С в течение 60 минут, затем нагревали до 22°С и перемешивали 2 часа. Реакционную смесь нагревали до 27°С и перемешивали в течение ночи в атмосфере азота. Через всего 23 часа при температуре от 22 до 27°С реакционную смесь охлаждали до 2°С и гасили добавлением сначала триэтиламина (453 г, 624 мл, 4477 ммоль), а затем через 15 минут метанола (494 г, 624 мл, 15410 ммоль). Полученный прозрачный раствор нагревали до 21°С и перемешивали 3,5 часа. Добавляли воду (4300 мл) и смесь перемешивали 30 минут. Смесь оставляли для разделения в течение ночи при 25°С. Органическую фазу промывали водой (2,5 л). К органической фазе добавляли 3М водной лимонной кислоты (3,6 л) и смесь перемешивали 25 минут. К смеси добавляли THF (1440 мл) и гептан (1440 мл), и смесь перемешивали 10 минут. Водную фазу лимонной кислоты сохраняли. К органической фазе добавляли 3М водной лимонной кислоты (2,4 л) и смесь перемешивали 10 минут. Органическую фазу сливали. К объединенным водным фазам лимонной кислоты добавляли THF (1080 мл) и гептан (1080 мл), и смесь перемешивали 10 минут. Органическую фазу сливали. К водной фазе лимонной кислоты добавляли THF (2900 мл) и гептан (720 мл), и смесь охлаждали до 5°С. Через 3 часа медленно добавляли 25% водный раствор аммиака (4,7 л) до рН от 9 до 9,5, поддерживая температуру ниже 18°С. Фазы разделяли и водную фазу повторно экстрагировали смесью THF (1140 мл) и гептана (360 мл). Объединенные органические фазы промывали смесью воды (2,2 л) и 25% водного аммиака (360 мл), и затем два раза 5% NaCl (2×1,8 л). Фазы разделяли. К органической фазе добавляли THF (5,4 л) и воду (1,8 л), и смесь охлаждали до 3°С. Через 2 минуты к холодной реакционной смеси добавляли смесь 12М KOH (424 мл) и воды (1,8 л). Реакционную смесь перемешивали при температуре от 3 до 5°С в течение 1 часа и затем нагревали до 23°С более 1,2 часа и перемешивали в течение ночи при 23°С. К реакционной смеси добавляли гептан (1,8 л) и перемешивание продолжали в течение 10 минут. Органическую фазу сливали. Водную фазу промывали смесью THF (1440 мл) и гептана (360 мл). Органическую фазу сливали. Водную фазу нагревали до 50°С и проводили вакуумную перегонку для удаления остаточного THF. Водную фазу (4 л) охлаждали до 20°С и перемешивали в течение ночи. Полученную суспензию продукта охлаждали до 2°С и фильтровали. Осадок на фильтре дважды промывали холодной водой (2×720 мл). Продукт высушивали в течение ночи при 50°С в вакууме и выделяли соединение (А5-K) (273 г).

Пример 5. Получение соединения (Id) (стадия 5)

Пример 5а (без затравки).

Соединение (А5) (0,59 г, 1,1 ммоль) растворяли в МеОН : воде (2:1, 12 мл) и добавляли активированный уголь (0,8 г), и смесь перемешивали в течение 20 минут, затем фильтровали через пробку вспомогательной фильтрирующей присадки и твердые частицы промывали смесью МеОН : воды (2:1, 4,5 мл). Объединенные фильтраты помещали в автоклав Asynth, добавляли Pd/C (0,30 г, 0,054 ммоль, 1,9%) и смесь перемешивали при 40°С, заполняя азотом (три раза), затем водородом (три раза, 6 бар). Через 1 час и 30 минут смесь три раза заполняли азотом, затем фильтровали через пробку вспомогательной фильтрирующей присадки и твердые частицы промывали смесью МеОН/воды (2:1, 15 мл). Фильтрат выпаривали до сухого остатка. Твердое вещество растворяли в воде (2 мл) и перемешивали в течение ночи, затем фильтровали, получая соединение (Id) (0,29 г).

LC-MS (способ 551): RT=0,39 минуты, [М+Н]⁺=438,3 масса/заряд.

¹Н ЯМР (600 МГц, Оксид дейтерия) δ 6,85 (d, J=8,4 Гц, 1Н),6,77 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 4,76 (d, J=7,5 Гц, 2Н), 3,59-3,55 (m, 2Н), 3,54-3,46 (m, 3Н), 3,38 - 3,28 (m, 2Н), 3,28 - 3,19 (m, 2Н), 3,20 - 3,01 (m, 2Н), 2,74 (dd, J=15,0, 11,5 Гц, 1Н), 2,30 (dd, J=17,5, 11,5 Гц, 1Н), 2,00- 1,92 (m, 2Н), 1,88-1,69 (m, 2Н), 1,69-1,58 (m, 1Н), 1,33 (dq, J=13,5, 4,0 Гц, 1Н), 0,92 (t, J=7,3 Гц, 3Н).

Пример 5b (с затравкой).

Соединение (А5-K) (4,8 г, 8,5 ммоль) и Pd/C Johnson-Matthey 5R39 (0,349 г, 0,064 ммоль, 1,94% Pd (вес/вес.)) суспендировали в Н₂О (48 мл) и помещали в автоклав, три раза заполняли азотом, затем три раза газообразным водородом (2 бара) и смесь перемешивали при 40°С в течение 1,5 часа. Смесь снова заполняли азотом и фильтровали через пробку в круглодонную колбу на 100 мл. Твердые вещества выполаскивали водой (2×1,5 мл) и рН объединенной водной фазы доводили (от рН=10) до рН=6,2, используя водную HCl (2,1 мл, 8,5 ммоль, 4 М) при комнатной температуре, и затравочные кристаллы соединения (Id) добавляли при 40°С и происходило осаждение. Смесь перемешивали в течение 2 часов, затем охлаждали до 2°С. Смесь фильтровали и высушивали на фильтре в течение ночи с всасыванием, получая соединение (Id) в виде гептагидрата (3,90 г, 6,92 ммоль, 82%, >99% чистоты на основе QNMR).

LC-MS (способ 551): RT=0,38 минуты, [М+Н]⁺=438,3 масса/заряд.

¹Н ЯМР (600 МГц, Оксид дейтерия, малеиновая кислота используется в качестве внутреннего стандарта) 5 6,85 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,75 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 4,82 (d, J=2,8 Гц, 2Н), 3,83 (d, J=9,7 Гц, 1 Н), 3,61 - 3,54 (m, 2Н), 3,54 - 3,48 (m, 2Н), 3,34 (dd, J=15,5, 5,0 Гц, 1Н), 3,28 (dd, J=17,5, 5,0 Гц, 1Н), 3,25-3,18 (m, 2Н), 3,01 -3,08 (m, 2Н), 2,73 (dd, J=15,5, 11,5 Гц, 1Н), 2,29 (dd, J=17,5, 11,5 Гц, 1Н), 1,99-1,90 (m, 2Н), 1,89 -1,69 (m, ЗН), 1,70-1,58 (m, 1Н), 1,33 (dq, J=13,5, 4,0 Гц, 1Н), 0,91 (t, J=7,3 Гц, 3Н).

Пример 6. Характеристика соединения (Id) in vitro и in vivo

Пример 6a. Превращение соединения формулы (Id) в гепатоцитах крысы и человека

Соединение (Id) инкубировали при 1 мкг/мл с гепатоцитами человека или крысы, суспендированными в DMEM (среда Игла, модифицированная по Дульбекко) с HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота) при рН 7,4. Концентрация клеток при инкубации составляла 1×10⁶ жизнеспособных клеток/мл. Инкубации проводили в стеклянных пробирках при 37°С с общим инкубируемым объемом 3,5 мл и с проведением инкубации в двух повторностях для каждого исследуемого образца. 3,5 мл суспензии гепатоцитов уравновешивали в течение 10 минут на водяной бане, установленной на 37°С, где затем инициировали инкубацию путем добавления 3,5 мкл исходного раствора исследуемого образца в DMSO (диметилсульфоксиде) и осторожного переворачивания пробирок. Конечная концентрация растворителя в инкубируемых средах составляла 0,1% DMSO. Образцы объемом 600 мкл отбирали из инкубируемых сред в заданные моменты времени, равные 0,25, 5, 15, 30 и 60 минутам, после обеспечения гомогенности суспензий гепатоцитов. Извлеченный объем добавляли в криопробирки Nunc объемом 1 мл на влажном льду, содержащие 60 мкл ледяной аскорбиновой кислоты (100 мг/мл) и 30 мкл охлажденного льдом 100 мМ 1,4-лактона сахарной кислоты в 0,5 М лимонной кислоте. Содержимое пробирок смешивали и добавляли 35 мкл раствора охлажденной льдом 20% муравьиной кислоты. Содержимое пробирок тщательно смешивали и хранили при -80°С в ожидании анализа. Способ анализа и оборудование, применяемое для анализа (I) при введении доз соединения (Id), являлись такими, как описано в примерах 9 и 10 ниже в разделе "Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) при введении доз соединения (Ic) и (Id.)".

На фигуре 7 показано зависимое от времени превращение в соединение (I) из (Id) как в гепатоцитах крысы, так и в гепатоцитах человека.

Пример 6b. Превращение соединения формулы (Id) в свежей крови крысы и человека

Превращение (Id) в крови человека (в среднем от 3 доноров) и крови крыс (в среднем от 45 доноров) в (I) было показано в свежей крови при 37°С с добавлением 1 мкг/мл (Id). Уровень (I) измеряли через 0, 5, 15, 30 и 60 минут в выделенной плазме крови. Способ анализа и оборудование являются такими, как описано в примерах 9 и 10 ниже в разделе "Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) при введении доз соединений (Ic) и (Id)".

На фигуре 8 показано зависимое от времени превращение в соединение (I) из (Id) как в крови крысы, так и в крови человека.

Пример 7. Дофаминовая агонистическая активность

Агонизм дофаминового рецептора D1

Агонизм дофаминового рецептора D1_измеряли с применением HTRF сАМР от CisBio с использованием протокола, разработанного HD Biosciences (Китай). Вкратце, анализ представляет собой анализ способом резонансного переноса энергии гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF), в котором измеряют продуцирование сАМР клетками в конкурентном иммуноанализе между нативным сАМР, продуцируемым клетками, и сАМР, меченным XL-665. Меченное криптатом антитело к сАМР визуализирует метку. Анализ проводили в соответствии с инструкциями от производителя.

Исследуемые соединения добавляли в лунки микропланшетов (384-луночный формат). Клетки HEK-293, экспрессирующие рецептор D1 человека, высевали при 1000 клеток/лунка и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Метку сАМР-d2 добавляли в лунки, и затем добавляли препарат на основе меченного криптатом антитела к сАМР, и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре в темноте. Измеряли HTRF сАМР путем возбуждения донора лазером при 337 нм ("световая единица TRF") и последующим (время задержки 100 микросекунд) измерением эмиссии криптата и d2 при 615 нм и 665 нм в течение временного промежутка 200 микросекунд с временным промежутком 2000 микросекунд между повторениями/100 импульсов). Измерения HTRF проводили на считывающем устройстве для микропланшетов Envision (PerkinElmer). Сигнал HTRF рассчитывали как соотношение эмиссии при 665 нм и 615 нм. Показатель соотношения HTRF для исследуемых соединений подвергали нормализации до 0% и 100% стимуляции с применением контрольных лунок с DMSO-растворителем или 30 мкМ дофамина. Эффективность исследуемого соединения (ЕС₅₀) оценивали с помощью нелинейной регрессии с использованием сигмоидальной кривой доза-ответ (переменный угловой коэффициент) с применением Xlfit 4 (IDBS, Гилфорд, Суррей, Великобритания, модель 205).

y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))),

где у представляет собой нормализованное значение измеренного соотношения HTRF для заданной концентрации исследуемого соединения, х представляет собой концентрацию исследуемого соединения, А представляет собой расчетную эффективность при бесконечном разбавлении соединения, и В представляет собой максимальную эффективность. С представляет собой значение ЕС₅₀, и D представляет собой угловой коэффициент Хилла. Оценки ЕС₅₀ получали из независимого эксперимента, и рассчитывали логарифмическое среднее значение.

Агонизм дофаминового рецептора D2

Агонизм дофаминового рецептора D2 измеряли с применением протокола анализа мобилизации кальция, разработанного HD Biosciences (Китай). Вкратце, клетки HEK293/G15, экспрессирующие рецептор D2 человека, высеивали при плотности 15000 клеток/лунка в покрытых матригелем 384-луночных планшетах с прозрачным дном и выращивали в течение 24 часов при 37°С в присутствии 5% СO₂. Клетки инкубировали с чувствительным к кальцию флуоресцентным красителем Fluo8 в течение 60-90 минут при 37°С в темноте. Исследуемые соединения получали в 3-кратно концентрированном растворе в буфере 1xHBSS с Са²⁺ и Mg²⁺. Сигнал потока кальция регистрировался непосредственно после добавления соединений из планшета для соединений в клеточный планшет для FLIPR (Molecular Devices). Данные флуоресценции подвергали нормализации с получением ответов на отсутствие стимуляции (буфер) и полную стимуляцию (1 мкМ дофамина), составляющих 0% и 100% стимуляцию соответственно. Эффективность исследуемого соединения (ЕС50) оценивали с помощью нелинейной регрессии с использованием сигмоидальной кривой доза-ответ (переменный угловой коэффициент) с применением Xlfit 4 (IDBS, Гилфорд, Суррей, Великобритания, модель 205).

y=(A₊((B-A)/(1+((C/x)^D)))),

где у представляет собой нормализованное значение измеренного соотношения для заданной концентрации исследуемого соединения, х представляет собой концентрацию исследуемого соединения, А представляет собой расчетную эффективность при бесконечном разбавлении соединения, и В представляет собой максимальную эффективность. С представляет собой значение ЕС50, и D представляет собой угловой коэффициент Хилла. Оценки ЕС50 получали из независимого эксперимента, и рассчитывали логарифмическое среднее значение.

Пример 8. Анализ агонистической активности в отношении 5-НТ2В и связывания

Анализ агонистической активности в отношении 5-НТ2В

Оценку агонистической активности соединений (I), (Ia), (Ib), (Ic), и (Id) в отношении рецептора 5-НТ2В человека проводили Eurofins/Cerep (Франция) с измерением влияния соединений на продуцирование инозитолмонофосфата (IP1) с применением способа обнаружения с HTRF. Вкратце, рецептор 5-НТ2В человека экспрессировался в тра неф и циро ванных клетках СНО. Клетки суспендировали в буфере, содержащем 10 мМ Hepes/NaOH (рН 7,4), 4,2 мМ KCl, 146 мМ NaCl, 1 мМ CaCl₂, 0,5 мМ MgCl₂, 5,5 мМ глюкозу и 50 мМ LiCl, затем распределяли в микропланшеты при плотности 4100 клеток/лунка и инкубировали в течение 30 минут при 37°С в присутствии буфера (контроля фонового уровня), исследуемого соединения или эталонного агониста. Для контрольного измерения при стимулировании отдельные лунки для анализа содержали 1 мкМ 5-НТ. После инкубации клетки лизировали и добавляли акцептор флуоресценции (фторфен-D2-меченный IP1) и донор флуоресценции (антитело к IP1, меченное криптатом европия). Через 60 минут при комнатной температуре перенос энергии флуоресценции измеряли при lambda(Ex) 337 нм и lambda(Em) 620 и 665 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Rubystar, BMG). Концентрацию IP1 определяли путем деления значения сигнала, измеренного при 665 нм, на значение сигнала, измеренного при 620 нм (соотношение). Результаты выражали в виде процента контрольного ответа на 1 мкМ 5-НТ. Стандартным эталонным агонистом являлся 5-НТ, который тестировали в каждом эксперименте при нескольких концентрациях для получения кривой концентрация-ответ, из которой рассчитывали его значение ЕС50, как описано выше для функциональных анализов в отношении дофамина.

Анализ связывания 5-НТ2В

Оценку аффинности соединений в отношении рецептора 5-НТ2В человека определяли в анализе связывания радиолиганда в Eurofins/Cerep (Франция). Гомогенаты мембран получали из клеток СНО, экспрессирующих рецептор 5НТ2 В человека, инкубировали в течение 60 минут при комнатной температуре с 0,2 нМ [¹²⁵l](±)DOI (1-(4-йод-2,5-диметоксифенил)пропан-2-амин) в отсутствие или в присутствии исследуемого соединения в буфере, содержащем 50 мМ трис-HCl (рН 7,4), 5 мМ MgCl₂, 10 мкМ паргилин и 0,1% аскорбиновую кислоту. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 1 мкМ (±)DOI. После инкубации образцы быстро фильтровали в вакууме через фильтры из стекловолокна (GF/B, Packard), предварительно пропитанные 0,3% полиэтиленимином (PEI), и ополаскивали несколько раз охлажденным льдом 50 мМ трис-HCl с применением коллектора клеток на 96 образцов (Unifilter, Packard). Фильтры высушивали и измеряли радиоактивность посредством сцинтилляционного счетчика (Topcount, Packard) с применением сцинтилляционного коктейля (Microscint 0, Packard). Результаты выражены в проценте ингибирования специфического связывания контрольного радиолиганда. Стандартное эталонное соединение представляло собой (±)DOI, которое тестировали в каждом эксперименте при нескольких концентрациях с получением кривой конкуренции, из которой рассчитывали его IC₅₀.

Пример 9. PK-эксперименты в отношении крыс

Для всех экспериментов образцы крови объемом примерно 0,68 мл брали из хвостовой или подъязычной вены и помещали в пробирки K3EDTA, которые были предварительно охлаждены и получены с использованием стабилизирующего раствора, состоящего из 80 мкл аскорбиновой кислоты и 40 мкл 100 мМ 1,4 лактона D-сахарной кислоты в воде. Пробирки осторожно переворачивали 6-8 раз, чтобы обеспечить тщательное перемешивание, а затем помещали в жидкий лед. Пробирку для сбора образцов помещали в жидкий лед на срок до 30 минут до центрифугирования. После удаления из жидкого льда немедленно начинали центрифугирование. Сразу после окончания центрифугирования образцы возвращали в жидкий лед. Три подобразца по 130 мкл плазмы крови переносили в каждую из трех соответствующим образом меченных криопробирок, содержащих 6,5 мкл предварительно охлажденной муравьиной кислоты (20%) (в пробирки предварительно осуществляли добавление и хранили охлажденными до применения). Крышку пробирки немедленно заменяли, и раствор плазмы крови тщательно смешивали путем осторожного переворачивания 6-8 раз. Образцы хранили замороженными при номинальной температуре -70°С в течение 60 минут после отбора образцов. Условия центрифугирования: при 3000 G в течение 10 минут при 4°С. После сбора плазму крови помещали на водный лед. Конечное хранение осуществляли при температуре приблизительно -70°С.

Образцы плазмы крови анализировали с помощью твердофазной экстракции или непосредственного осаждения белка с последующей UPLC-MS/MS. Осуществляли MS-обнаружение с применением электрораспыления в режиме положительных ионов с мониторингом конкретного отношения массы к заряду при переходах для соединения (I) с применением внутренних стандартов для корректирования ответа. Анализировали данные зависимости концентрации от времени с применением стандартного программного обеспечения с применением подходящих некомпартментных методик с получением оценок полученных PK-параметров.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединения (Ia)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity -Sciex API 5000. Аналитическая колонка представляла собой колонку Waters ВЕН UPLC Phenyl 100×2,1 мм, размер частиц 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ формиат аммония (водн.) + 0,5% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил. Градиент изменяется от 95/5% до 2/98 за 6,1 минуты. Расход 0,5 мл/мин Осуществляли MRM-мониторинг (мониторинг множественных реакций) исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение дозы и забор образцов крови Крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Зульцфельд, Германия. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм от Brogaarden (пеллеты Altromin 1324). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Во время исследования (4-недельное исследование токсичности) крысы перорально получали один раз в день дозы (Ia) через желудочный зонд. У крыс, которым давали 300 мкг/кг (Ia), собирали образцы крови) у 3 самцов сателлитных животных в следующие моменты времени в день 29: 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения дозы соединения (Ib)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity -Sciex API 5000. Аналитическая колонка представляла собой колонку Waters ВЕН UPLC Phenyl 100×2,1 мм, размер частиц 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ формиат аммония (водн.) + 0,5% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил. Градиент изменяется от 95/5% до 2/98 за 6,1 минуты. Расход 0,5 мл/мин Осуществляли MRM-мониторинг исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение дозы и забор образцов крови Крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Великобритания. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм (корм Teklad 2014С). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Во время исследования (26-недельное исследование токсичности) крысы перорально получали один раз в день дозы (Ib) через желудочный зонд. У крыс, которым давали 300 мкг/кг (Ib), собирали образцы крови у 3 самцов сателлитных животных в следующие моменты времени в день 182: 0,5, 1, 2, 4, 8 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа соединения (I) после введения доз соединений (Ic) и (Id)

Масс-спектрометр (LC-MS/MS) Waters Acquity - Waters Xevo TQ-S. Аналитическая колонка Acquity ВЕН C18 100×2,1 мм, 1,7 мкм. Подвижная фаза А: 20 мМ NH₄-формиат + 0,2% муравьиная кислота. Подвижная фаза В: ацетонитрил + 0,2% муравьиная кислота. Градиент изменяется от 95/5% до 5/95% за 11,0 минуты. Расход 0,3 мл/мин Осуществляли MRM-мониторинг исследуемого образца и добавленных аналитических стандартов.

Введение доз и забор крови для соединения (Id). Крысы линии Wistar Han предоставлены от Charles River Laboratories, Wiga GmbH, Германия. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм от Brogaarden (пеллеты Altromin 1324). Крысы имели неограниченный доступ к корму. Самцам крыс Han Wistar перорально через желудочный зонд вводили однократную пероральную дозу соединения (Id) перорально через желудочный зонд. Крысам вводили 633 мкг/кг соединения (Id), образцы крови у 3 самцов животных собирали в следующие моменты времени в день 1: 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы.

Введение доз и забор крови для соединения (Ic): Крысы линии Wistar Han предоставлены от Envigo, Великобритания. Поддерживали искусственный автоматически контролируемый 12-часовой цикл света и темноты. Крысы получали стандартный лабораторный корм Teklad 2014С.Крысы имели неограниченный доступ к корму. Самцам крыс Han Wistar перорально через желудочный зонд вводили однократную дозу соединения (Ic). Крысам вводили 494 мкг/кг соединения (Ic). Собирали образцы крови у 3 самцов животных в следующие моменты времени в день 1: 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы.

Оборудование, применяемое для анализа апоморфина:

Масс-спектрометр (UPCLC-MS/MS) Waters Acquity l-Class-Waters Xevo TQ-S. Аналитическая колонка Acquity HSS Т3 C18 50×2,1 мм, 1,8 мкм. Подвижная фаза А: 10 мМ NH₄-формиат, 0,2% муравьиная кислота : ацетонитрил (95:5). Подвижная фаза В: 10 мМ NH₄-формиат, 0,2% муравьиная кислота : ацетонитрил (5:95). Градиент изменяется от 95/5% до 5/95% за 2,40 минуты. Расход 0,3 мл/мин Осуществляли MRM-мониторинг исследуемых образцов и добавленных аналитических стандартов.

Введение доз и забор крови для апоморфина.

Животные для исследования были такими же, которые описаны в примере 9. Дополнительно крысам вводили однократную дозу апоморфина подкожно. У крыс, которым вводили 3000 мкг/кг (апоморфин), собирали образцы крови у 3 самцов животных в следующие моменты времени в день 1: 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 5 и 7 часов после SC введения дозы.

Пример 10. PK/PD соединения (Id)/соединения (I) в анализе гиперактивности на крысах Животные

Всего в исследовании использовали 206 самцов крыс CD (Charles River, Германия) весом 200-250 грамм (165-190 грамм по прибытии). Животных содержали при стандартной температуре (22±1°С) и в среде с контролируемым освещением (свет включен с 7 утра до 8 вечера) с доступом к пище и воде по желанию. Эксперимент, описанный ниже, проводили в соответствии со стандартными рабочими процедурами Charles River Discovery Research Services Finland Ltd. и в соответствии с руководством национального совета по экспериментам на животных Финляндии (Elainkoelautakunta, ELLA) в отношении испытаний на животных.

Исследование локомоторной активности, тест "открытое поле"

Испытательное устройство представляет собой квадратную плексигласовую площадку (размером 40×40×40 см), на которой регистрируют траектории движения крыс с помощью монитора активности (Med. Associates Inc.). Перед началом периода испытаний крысам давали привыкнуть к их клетке для испытаний в течение 60 минут. После завершения привыкания животных обрабатывали либо соединением, либо средой-носителем и помещали обратно в установку "открытое поле". Основным измеряемым параметром теста является пройденное расстояние (регистрировали через 5-минутные отрезки времени). Общее время измерения после получения начальной обработки составляло 360 минут. Общий период наблюдения в исследовании составлял 420 минут, включая 60 минут привыкания.

Результаты

Оценивали пероральное введение соединения (Id) в анализе локомоторной активности крыс и данные функциональные показатели затем коррелировали со значениями концентрации соединения (I) в плазме крови. Апоморфин и прамипексол также одновременно исследовали в данном анализе в качестве препаратов сравнения (т.е. известного стандарта лечения (SoC) в области терапии болезни Паркинсона), и анализировали концентрацию в плазме крови в отношении апоморфина.

Как показано на фигуре 3, соединение (Id) (от 10 до 300 мкг/кг, р.о.) увеличивает локомоторную активность с эффектом, начинающимся примерно через 2 часа после введения (приблизительно 180-минутный момент времени) и сохраняющимся до конца регистрирования (в 415-минутный момент времени). Напротив, гиперактивность, вызванная апоморфином (3 мг/кг, s.c), является мгновенной, но кратковременной, поскольку эффект исчезает через 1,5 часа после введения (в 150-минутный момент времени). Прамипексол (0,3 мг/кг, s.c.) также вызывает увеличение активности, но его эффект проявляется через приблизительно 1 час после введения и исчезает через 2,5 часа (в 270-минутный момент времени). Общее пройденное расстояние, как видно на фигуре 2, демонстрирует значительно увеличенную активность как для соединения (Id), так и для двух исследуемых препаратов сравнения, и данный эффект является эффектом, который следует ожидать от агонистов дофамина.

Параллельно с оценкой локомоторной активности отбирали образцы плазмы крови у сателлитных животных в 6 различных моментов времени (1,5, 2, 3, 4, 5 и 7 часов после введения дозы для животных, обработанных соединением (Id)). Фармакокинетический анализ демонстрирует, что влияние на поведение соединения (Id) (100 мкг/кг, р.о.) коррелирует со значениями концентрации соединения (I) в плазме крови (см. фигуру 4) с подтверждением того, что влияние на поведение соединения (Id) обусловлено соединением (I), а не соединением (Id) самим по себе. В соответствующем анализе воздействия апоморфина (через 1,25, 1,5, 2, 3, 5 и 7 часов после введения дозы) в результате получали корреляцию между значениями концентрации апоморфина в плазме крови и гиперактивным поведением (см. фигуру 5).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

US 4543256

WO 2001/078713

WO 02/100377

WO 2009/026934

WO 2009/026935

WO 2010/097092

WO 2019101917

Alexander et Crutcher, (1990) Trends in Neuroscience 13: 266-71

Bibbiani et al., Chase Experimental Neurology (2005), 192: 73-78

Campbell et al., Neuropharmacology (1982); 21(10): 953-961

Cannon et al., J. Heterocyclic Chem. (1980); 17: 1633-1636

Cavero and Guillon, J. Pharmacol. Toxicol. Methods (2014), 69: 150-161

Delong, (1990) Trends in Neuroscience 13: 281-5

Gerfen et al, Science (1990) 250: 1429-32

Giardina and Williams; CNS Drug Reviews (2001), Vol.7 (3): 305-316

Goswami et al., J. Nutritional Biochem. (2003) 14: 703-709

Grosset et al., Acta Neurol Scand. (2013), 128:166-171

Hauser et al., Movement Disorders (2016), Vol. 32 (9): 1367-1372

Hitoshi, T et al. (Chem Pharm Bull, 1986, 628)

Imai, K. et al (RSC Adv., 2017, 7, 17968-17979)

В Liu et al., J. Med. Chem. (2006), 49: 1494-1498

Liu et al., Bioorganic Med. Chem. (2008), 16: 3438-3444

Loev, В et al. (JACS, 1956, 78, p.6095-6097)

Loozen, B. ef al. (Recueil des Travaux Chimiques des Pays Bas, 1982, 101, 298 - 310), and

Mandell, L. et al (J. Org. Chem., 1982, 47, 731-734)

Montanari, S. et al. (US5747513, 1998, A),

Nolen et al., J. Pharm Sci. (1995), 84 (6): 677-681

Poewe et al., Nature Review, (2017) vol 3 article 17013: 1-21

Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 22^nd edition (2013), Edited by Allen, Loyd V., Jr

Rothman et al., Circulation (2000), 102: 2836-2841

Shimada, X. et al. (Chemical and Pharmaceutical Bulletin), 1986, 34, 179 - 187

Sprenger and Poewe, CNS Drugs (2013), 27: 259-272

Sozio et al., Exp. Opin. Drug Disc. (2012); 7(5): 385-406

Stachulski, A.V. et al. Nat. Prod. Rep., 2013, 30, 806-848

Stain-Texier et al., Drug Metab. and Disposition (1998) 26 (5): 383-387

Stahl and Wermuth (Eds) "Handbook of Pharmaceutical salts. Properties, selection, and use", Wiley-VCH, 2008

Wiley-Interscience (publisher): Compendium of Organic Synthetic Methods, Vol. I-XII.

Настоящее изобретение относится к способу получения (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-тригидрокси-6-(((4аR,10аR)-7-гидрокси-1-пропил-1,2,3,4,4а,5,10,10а-октагидробензо[g]хинолин-6-ил)окси)тетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты структурной формулы (Id) и ее солей, применяемой в лечении нейродегенеративных заболеваний, а также к промежуточным соединениям из указанного способа. Способ получения соединения (Id) из соединения (I) включает стадию 1 с проведением реакции соединения (I) или его соли с бензилгалогенидом в органическом растворителе, выбранном из ацетонитрила, диметилформамида или метилизобутилкетона в присутствии основания, с получением соединения (А2), стадию 2 с подверганием соединения (A2) реакции дебензилирования с получением соединения (A3) или его соли, проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5- триилтриацетатом с получением соединения (A4) (стадия 3), проведение реакции соединения (A4) с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) (стадия 4) и стадию 5 с дебензилированием соединения (A5-Y) с получением соединения (Id). Техническим результатом изобретения является обеспечение способа получения целевого соединения с высоким выходом и подходящего для крупномасштабного производства. 10 н. и 14 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 10 пр.

1. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

1) проведение реакции соединения (I) или его соли с бензилгалогенидом с получением соединения (А2) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где X выбран из группы, состоящей из Cl, Br и I;

причем реакция протекает в органическом растворителе, выбранном из ацетонитрила (MeCN), диметилформамида (DMF) или метилизобутилкетона (MIBK) в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, такого как, например, гидроксид натрия или калия (NaOH или KOH), или карбонат калия (K₂CO₃).

2. Способ по п. 1, где указанный органический растворитель представляет собой метилизобутилкетон (MIBK) и указанное основание представляет собой карбонат калия (K₂CO₃).

3. Способ по пп. 1 и 2, где указанный бензилгалогенид представляет собой бензилхлорид, а X представляет собой Cl.

4. Соединение нижеуказанной формулы (A2),

или его соль.

5. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

2) подвергание соединения (A2) реакции дебензилирования с получением соединения (A3) или его соли согласно нижеуказанной схеме реакции:

6. Соединение нижеуказанной формулы A3,

,

или его соль.

7. Способ по п. 5, где реакция дебензилирования включает стадии:

I) проведения реакции триметилсилилиодида с соединением (А2) с образованием смеси; и

II) добавления спирта к указанной смеси из стадии I) с получением соединения (A3) или его соли; и

III) необязательно выделения соединения (A3) или его соли, которые получены на стадии (II).

8. Способ по п. 7, где спирт, добавляемый к указанной смеси на стадии II), выбран из группы, состоящей из МеОН, н-гептилового спирта и этанола.

9. Способ по любому из пп. 5 и 7-8, где соединение (A3) получают в форме гидроиодидной соли с нижеуказанной формулой (A3-HI):

10. Соединение по п. 6, которое находится в форме гидроиодидной соли с нижеуказанной формулой (A3-HI):

11. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

3) проведение реакции соединения (A3) или его соли с (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(метоксикарбонил)-6-(2,2,2-трихлор-1-иминоэтокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетатом с получением соединения (A4) согласно нижеуказанной схеме реакции:

12. Способ по п. 11, где соединение (A3) представлено в форме гидроиодидной соли (A3-HI) с нижеуказанной формулой:

.

13. Соединение нижеуказанной формулы (A4),

,

или его соль.

14. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

4) проведение реакции соединения (A4) с гидроксидом щелочного металла с получением (A5-Y) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из Li, Na и K.

15. Способ по п. 14, где

а) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид лития, и Y представляет собой Li; или

b) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид натрия, и Y представляет собой Na; или

c) указанный гидроксид щелочного металла представляет собой гидроксид калия, и Y представляет собой K.

16. Соединение нижеуказанной формулы A5,

,

или его соль.

17. Соединение по п. 16, которое представлено в форме соли щелочного металла, изображенное ниже:

,

где Y выбран из группы, состоящей из Li, Na и K.

18. Способ получения соединения (Id) с нижеуказанной формулой,

из соединения (I) с нижеуказанной формулой,

включающий следующую стадию:

5) дебензилирование соединения (A5-Y) с получением соединения (Id) согласно нижеуказанной схеме реакции:

где Y выбран из группы, состоящей из Li, Na и K.

19. Способ по п. 18, где Y представляет собой K.

20. Способ по любому из пп. 18, 19, где указанное дебензилирование проводят посредством гидрирования в воде.

21. Способ по любому из пп. 18-20, где указанное дебензилирование проводят посредством гидрирования в воде в присутствии палладия на углероде (Pd/C) и водорода.

22. Способ по любому из пп. 18-21, где соединение (Id) выделяют фильтрованием и нейтрализуют кислотой.

23. Способ по любому из пп. 18-22, где соединение (Id) выделяют фильтрованием и нейтрализуют кислотой, тем самым получая соединение (Id) в качестве гептагидрата.

24. Способ получения соединения (Id) из соединения (I), включающий

стадию 1) по любому из пп. 1-3, затем

стадию 2) по любому из пп. 5 и 7-9; затем

стадию 3) по любому из пп. 11-12, затем

стадию 4) по любому из пп. 14-15, затем

стадию 5) по любому из пп. 18-23.