КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ КАССЕТЫ КИСЛОЙ α-ГЛЮКОЗИДАЗЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК C07K16/44 C12N15/11 C12N15/86 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет по временной патентной заявке США № 62/672419, поданной 16 мая 2018 года, и временной патентной заявке США № 62/734454, поданной 21 сентября 2018 года. Полное содержание указанных выше заявок включено в настоящее описание в качестве ссылки, включая весь текст, таблицы, список последовательностей и чертежи.

Введение

[0002] Гликогеноз типа II, также известный как болезнь Помпе, является аутосомно-рецессивным нарушением, вызванным мутациями в гене, кодирующем лизосомальный фермент кислую α-глюкозидазу (GAA), катализирующий деградацию гликогена. Формирующаяся недостаточность фермента приводит к патологическому накоплению гликогена и лизосомальным изменениям во всех тканях организма, что приводит к сердечной, респираторной дисфункции и дисфункции скелетных мышц (van der Ploeg & Reuser, 2008 Lancet, 372:1342-1353). Общепринято болезнь Помпе делят на два основных фенотипа - инфантильная форма болезни Помпе (IOPD) (также обозначаемая как младенческая форма болезни Помпе (IPD) или болезнь Помпе с ранним началом) и болезнь Помпе с поздним началом (LOPD) - с учетом остаточной активности фермента GAA, возраст начала, вовлечение органов (т.е. наличия кардиомиопатии), тяжести и скорости прогрессирования. В случае болезни Помпе доступна заместительная терапия (ERT); однако, она обладает некоторыми ограничениями (т.е. ограниченное биораспределение и высокая иммуногенность), приводящими к безуспешности лечения и ограниченной длительной эффективности (van der Ploeg & Reuser, 2008).

Сущность изобретения

[0003] Настоящее изобретение относится к оптимизированным кассетам для печеночно-ориентированной экспрессии секретируемой версии GAA человека. Эта оптимизация кассет приводит к повышению секреции GAA в печени и делает возможным перенос печеночного гена для достижения уровней GAA в кровотоке, достаточных для системной перекрестной коррекции недостаточности GAA у индивидуумов. С помощью этих кассет достигают повышенной экспрессии трансгена, улучшенных характеристик безопасности и потенциально сниженной иммуногенности. Эти кассеты можно будет использовать в качестве генной терапии индивидуумов с болезнью Помпе и другими заболеваниями и нарушениями, которые можно лечить с использованием GAA.

[0004] Оптимизацию кодонов экспрессирующей кассеты GAA осуществляли для улучшения экспрессии GAA. В одном из вариантов осуществления последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие GAA, модифицировали для устранения динуклеотидов CpG. Всего создавали 20 новых кодон-оптимизированных последовательностей трансгена (GAA1-GAA20). Учитывая сравнение in vitro активности GAA, выбирали 5 кодон-оптимизированных последовательностей (GAA 2, 5, 7, 8 и 13) для дальнейшей оптимизации. Последовательность GAA13 использовали для анализа различий экспрессии GAA после добавления полинуклеотидной последовательности длиной 29 пар оснований к 5'-нетранслируемой области (UTR). В случае GAA7, 8 и 13 также оценивали две разные последовательности полиаденилирования, полученные из бычьего гормона роста (bGH или BGH) (дикого типа и со сниженным содержанием CpG). Полученные 9 экспрессирующих кассет (таблица 1) упаковывали в капсид SEQ ID NO: 30-32; одну также упаковывали в капсид AAV6.

[0005] Настоящее изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим кислую α-глюкозидазу (GAA), экспрессирующим кассетам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие кислую α-глюкозидазу (GAA), и вирусным векторам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие кислую α-глюкозидазу (GAA).

[0006] В одном из вариантов осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 86% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5. В дополнительных аспектах нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 87% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

[0007] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 87% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15. В конкретных аспектах нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 88% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15. В дополнительных конкретных аспектах нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 89% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15. В дополнительных конкретных аспектах нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 90% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15. В дополнительных конкретных аспектах нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 91% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.

[0008] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 91% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 16-24.

[0009] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 92% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0010] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 93% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0011] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 94% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0012] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 95% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0013] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 96% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0014] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 97% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0015] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 98% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0016] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 99% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0017] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет более 99,5% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0018] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, имеет 100% идентичности последовательности в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

[0019] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 127 динуклеотидов CpG.

[0020] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 126 динуклеотидов CpG.

[0021] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 126-120 динуклеотидов CpG.

[0022] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 120-110 динуклеотидов CpG.

[0023] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 110-100 динуклеотидов CpG.

[0024] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 100-90 динуклеотидов CpG.

[0025] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 90-80 динуклеотидов CpG.

[0026] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 80-70 динуклеотидов CpG.

[0027] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 70-60 динуклеотидов CpG.

[0028] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 60-50 динуклеотидов CpG.

[0029] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 50-40 динуклеотидов CpG.

[0030] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 40-30 динуклеотидов CpG.

[0031] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 30-20 динуклеотидов CpG.

[0032] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 20 динуклеотидов CpG.

[0033] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 20-10 динуклеотидов CpG.

[0034] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 10 динуклеотидов CpG.

[0035] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит приблизительно 10-5 динуклеотидов CpG.

[0036] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 5 динуклеотидов CpG.

[0037] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 4 динуклеотида CpG.

[0038] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 3 динуклеотида CpG.

[0039] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 2 динуклеотида CpG.

[0040] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 1 динуклеотид CpG.

[0041] В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит 0 динуклеотидов CpG.

[0042] Изобретение также относится к экспрессирующим кассетам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, как указано в настоящем описании, функционально связанные с элементом контроля экспрессии.

[0043] В одном из вариантов осуществления экспрессирующая кассета содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, с более 86% идентичности последовательности (например, 87-100% идентичности) в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

[0044] В другом варианте осуществления экспрессирующая кассета содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, с более 87% идентичности последовательности (например, 88%-100% идентичности) в отношении любой из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.

[0045] В другом варианте осуществления экспрессирующая кассета содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, с менее чем 127 динуклеотидами CpG, менее чем 127 динуклеотидами CpG, менее чем 127 динуклеотидами CpG, менее чем 126 динуклеотидами CpG, менее чем 125 динуклеотидами CpG, менее чем 124 динуклеотидами CpG, менее чем 123 динуклеотидами CpG, менее чем 122 динуклеотидами CpG, менее чем 121 динуклеотидом CpG, менее чем 120 динуклеотидами CpG, менее чем 119 динуклеотидами CpG, менее чем 118 динуклеотидами CpG, менее чем 117 динуклеотидами CpG, менее чем 116 динуклеотидами CpG, менее чем 115 динуклеотидами CpG, менее чем 114 динуклеотидами CpG, менее чем 113 динуклеотидами CpG, менее чем 112 динуклеотидами CpG, менее чем 111 динуклеотидами CpG, менее чем 110 динуклеотидами CpG, менее чем 109 динуклеотидами CpG, менее чем 108 динуклеотидами CpG, менее чем 107 динуклеотидами CpG, менее чем 106 динуклеотидами CpG, менее чем 105 динуклеотидами CpG, менее чем 104 динуклеотидами CpG, менее чем 103 динуклеотидами CpG, менее чем 102 динуклеотидами CpG, менее чем 101 динуклеотидом CpG, менее чем 101 динуклеотидом CpG и т.д. до нуля (0) динуклеотидов CpG.

[0046] В одном из вариантов осуществления элемент контроля экспрессии расположен в 5'-направлении относительно нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA.

[0047] В другом варианте осуществления экспрессирующая кассета включает последовательность полиаденилирования (поли-A), расположенную в 3'-направлении относительно нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA.

[0048] В другом варианте осуществления элемент контроля экспрессии или последовательность полиаденилирования имеет сниженное содержание CpG по сравнению с элементом контроля экспрессии или последовательностью полиаденилирования дикого типа.

[0049] В другом варианте осуществления элемент контроля экспрессии содержит последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT.

[0050] В другом варианте осуществления последовательность полиаденилирования содержит последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH).

[0051] В другом варианте осуществления последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательность полиаденилирования bGH имеет сниженное содержание CpG по сравнению с последовательностью энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательностью полиаденилирования bGH дикого типа.

[0052] В одном из аспектов последовательность полиаденилирования bGH дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 27.

[0053] В другом аспекте последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 28 или 29.

[0054] В другом аспекте последовательность полиаденилирования bGH со сниженным содержанием CpG содержит последовательность SEQ ID NO: 26.

[0055] В другом варианте осуществления экспрессирующая кассета дополнительно содержит интрон, расположенный между 3'-концом элемента контроля экспрессии и 5'-концом нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA.

[0056] В другом варианте осуществления GAA содержит или состоит из последовательности, приведенной как SEQ ID NO: 25.

[0057] Изобретение дополнительно относится к вирусным векторам, таким как векторы аденоассоциированного вируса (AAV), содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, как указано в настоящем описании.

[0058] В одном из вариантов осуществления вирусный вектор, такой как вектор аденоассоциированного вируса (AAV), содержит любую из нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, как указано в настоящем описании, функционально связанных с элементом контроля экспрессии.

[0059] В другом варианте осуществления вирусный вектор, такой как вектор аденоассоциированного вируса (AAV), содержит любую из экспрессирующих кассет, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, как указано в настоящем описании.

[0060] В другом варианте осуществления вектор AAV содержит: один или более из капсидов AAV и один или более инвертированных концевых повторов (ITR) AAV, где ITR AAV фланкируют 5'- или 3'- конец нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассеты.

[0061] В дополнительных вариантах осуществления вектор AAV дополнительно содержит интрон, расположенный в 5'- или 3'-направлении относительно одного или более ITR.

[0062] В дополнительных вариантах осуществления вектор AAV, содержащий по меньшей мере один или более ITR или интронов, содержит один или более ITR или интронов, модифицированных так, что они имеют сниженное содержание CpG.

[0063] В дополнительных вариантах осуществления вектор AAV имеет серотип капсида, содержащий модифицированный капсид VP1, VP2 и/или VP3 AAV или его вариант, имеющий 90% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательностей VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 95% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательностей VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 100% идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8, или последовательностей VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32.

[0064] В дополнительных вариантах осуществления вектор AAV, содержащий один или более ITR, содержит один или более ITR любого из серотипов AAV AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV3B или их комбинации.

[0065] Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям, содержащим любые из нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, экспрессирующих кассет, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, или вирусных векторов, таких как векторы AAV, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, или экспрессирующие кассеты, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, как указано в настоящем описании.

[0066] В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция содержит множество векторов AAV, как указано в настоящем описании, в биологически совместимом носителе или эксципиенте.

[0067] В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция, содержащая любой из векторов AAV, как указано в настоящем описании, дополнительно содержит пустые капсиды AAV.

[0068] В конкретных вариантах осуществления в фармацевтической композиции, содержащей векторы AAV и пустые капсиды AAV, соотношение пустых капсидов AAV и вектора AAV составляет в пределах или приблизительно 100:1-50:1, приблизительно 50:1-25:1, приблизительно 25:1-10:1, приблизительно 10:1-1:1, приблизительно 1:1-1:10, приблизительно 1:10-1:25, приблизительно 1:25-1:50 или приблизительно 1:50-1:100.

[0069] В конкретных аспектах в фармацевтической композиции, содержащей векторы AAV и пустые капсиды AAV, соотношение пустых капсидов AAV и вектора AAV, составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.

[0070] В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция включает поверхностно-активное вещество.

[0071] Изобретение дополнительно относится к способам лечения человека, нуждающегося в кислой α-глюкозидазе (GAA), посредством введения или доставки человеку любой из нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, экспрессирующих кассет, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, или вирусных векторов, таких как векторы AAV, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, или экспрессирующие кассеты, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA.

[0072] В одном из вариантов осуществления способ лечения человека, нуждающегося в кислой α-глюкозидазе (GAA), включает: (a) получение нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты или вирусного вектора, такого как вектор AAV, как указано в настоящем описании, или любой фармацевтической композиции, как указано в настоящем описании; и (b) введение количества нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты, вирусного (например, AAV) вектора или фармацевтической композиции человеку, где GAA экспрессируется у человека.

[0073] В конкретных вариантах осуществления человек имеет болезнь Помпе, такую как инфантильная форма болезни Помпе или болезнь Помпе с поздним началом.

[0074] В другом варианте осуществления человек имеет гликогеноз (GSD).

[0075] В конкретных аспектах GSD является любым из: GSD типа I (болезни Гирке), GSD типа III (болезни Форбса), GSD типа IV (болезни Андерсен, амилопектиноза), GSD типа V (болезни Мак-Ардла), GSD типа VI (болезни Герса), GSD типа VII (болезни Таруи) или врожденного GSD сердца (например, летального врожденного GSD сердца).

[0076] В конкретных вариантах осуществления нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, экспрессирующую кассету, содержащую нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, или вектор AAV вводят человеку внутривенно, внутриартериально, внутриполостно, внутрислизисто или с помощью катетера.

[0077] В конкретных вариантах осуществления в способе GAA экспрессируется на повышенных уровнях, необязательно, более 1% от уровней GAA, обнаруживаемых у человека, ненуждающегося в GAA.

[0078] В конкретных вариантах осуществления вектор AAV вводят в диапазоне от приблизительно 1×10⁸ до приблизительно 1×10¹⁴ векторных геномов на килограмм (ВГ/кг) массы человека.

[0079] В конкретных вариантах осуществления с помощью способа снижают, уменьшают или ингибируют один или более симптомов потребности в GAA или заболевания; или предотвращают или снижают прогрессирование или ухудшение одного или более симптомов потребности в GAA или заболевания; или стабилизируют один или более симптомов потребности в GAA или заболевания; или улучшают один или более симптомов потребности в GAA или заболевания.

[0080] В конкретных аспектах симптом, который можно лечить по изобретению, может представлять собой одно или более из следующего: проблемы с приемом пищи и/или отсутствие набора веса; плохой контроль головы и/или шеи; проблемы с дыханием и/или легочные инфекции; увеличение и/или утолщение сердца; пороки сердца; увеличение языка; проблемы с глотанием; увеличение печени; низкая мышечная сила; низкий мышечный тонус; слабость в ногах, области талии и/или руках; одышка; проблемы с выполнением физических упражнений; трудности с дыханием во время сна; искривление позвоночника и/или анкилоз.

[0081] Изобретение дополнительно относится к клеткам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, клеткам, содержащим экспрессирующие кассеты, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и клеткам, содержащим вирусные векторы, такие как векторы AAV, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, или экспрессирующие кассеты, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA.

[0082] В одном из вариантов осуществления клетка продуцирует вирусный вектор.

[0083] В другом варианте осуществления клетка продуцирует вектор AAV, как указано в настоящем описании.

[0084] Кроме того, изобретение также относится к способам получения вирусных векторов, таких как векторы AAV, как указано в настоящем описании.

[0085] В одном из вариантов осуществления способ получения векторов AAV включают: встраивание генома вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, или экспрессирующую кассету, содержащую нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, как указано в настоящем описании, в упаковывающую хелперную клетку; и культивирование хелперной клетки в условиях для получения векторов AAV.

[0086] В другом варианте осуществления способ получения ошибок в векторе AAV включает: встраивание нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA, или экспрессирующей кассеты, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA, как указано в настоящем описании, в упаковывающую хелперную клетку; и культивирование хелперных клеток в условиях для получения вектора AAV.

[0087] В дополнительных вариантах осуществления клетки являются клетками млекопитающих.

[0088] В дополнительных вариантах осуществления клетки для получения вектора выполняют хелперные функции, такие как AAV-хелперные функции, упаковывая вектор в вирусную частицу. В конкретном аспекте хелперные функции выполняют белки Rep и/или Cap для упаковки вектора AAV.

[0089] В дополнительных вариантах осуществления клетки для получения вектора можно стабильно или транзиторно трансфицировать с использованием полинуклеотидов, кодирующих последовательности Rep и/или Cap.

[0090] В дополнительных вариантах осуществления клетки для получения вектора предоставляют белки Rep78 и/или Rep68. В случае таких клеток, их можно стабильно или транзиторно трансфицировать с использованием полинуклеотидных последовательностей, кодирующих белки Rep78 и/или Rep68.

[0091] В конкретных вариантах осуществления клетки для получения вектора являются эмбриональными клетками почки человека. В конкретном аспекте клетки для получения вектора являются клетками HEK-293.

Краткое описание чертежей

[0092] На фигуре 1 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.fixUTR.GAA13.BGH (SEQ ID NO: 16).

[0093] На фигуре 2 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.BGH (SEQ ID NO: 17).

[0094] На фигуре 3 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.BGH (SEQ ID NO: 18).

[0095] На фигуре 4 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.BGH (SEQ ID NO: 19).

[0096] На фигуре 5 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA2.wtBGH (SEQ ID NO: 20).

[0097] На фигуре 6 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA5.wtBGH (SEQ ID NO: 21).

[0098] На фигуре 7 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.wtBGH (SEQ ID NO: 22).

[0099] На фигуре 8 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.wtBGH (SEQ ID NO: 23).

[0100] На фигуре 9 показана схема pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.wtBGH. (SEQ ID NO: 24)

[0101] На фигуре 10 показана оценка уровней активности GAA в супернатантах клеток Huh7 посредством анализа активности GAA.

[0102] На фигуре 11 показана оценка уровней активности GAA в плазме мыши посредством анализа активности GAA.

[0103] На фигуре 12 показана оценка уровней GAA в плазме мыши посредством вестерн-блоттинга GAA.

[0104] На фигуре 13 показана оценка уровней активности GAA в плазме мыши посредством анализа активности GAA.

[0105] На фигуре 14 показана оценка уровней GAA в плазме мыши посредством вестерн-блоттинга GAA.

[0106] На фигуре 15 показана оценка уровней активности GAA в плазме мыши посредством анализа активности GAA.

[0107] На фигуре 16 показана оценка уровней активности GAA в плазме крысы и мыши посредством анализа активности GAA.

[0108] На фигуре 17 показана оценка уровней активности GAA в плазме не являющихся человеком приматов (самцов макак-резусов) посредством анализа активности GAA.

[0109] На фигуре 18 показана оценка уровней активности GAA в плазме не являющихся человеком приматов (зеленой мартышки) посредством анализа активности GAA. По оси X отложены дни после инъекции.

[0110] На фигуре 19 показана оценка уровней GAA в плазме не являющихся человеком приматов (зеленой мартышки) посредством вестерн-блоттинга с графическим представлением некоторых данных.

[0111] На фигуре 20 показана оценка активности GAA в супернатантах клеток Huh7, трансдуцированных с использованием SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 или отрицательного контроля (rAAV с не-GAA трансгеном, упакованным в вектор AAV SEQ ID NO: 30-32).

[0112] На фигуре 21 показана оценка активности GAA в плазме макак-резусов после однократного внутривенного введения SPK-AAV-02 в дозах 2×10¹², 6×10¹², 2×10¹³ ВГ/кг.

Подробное описание

[0113] Изобретение относится к модифицированным нуклеиновым кислотам, кодирующим GAA, экспрессирующим кассетам, содержащим модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, векторным геномам AAV, содержащим модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и рекомбинантным векторам и частицам AAV, содержащим модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA. Модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, векторные геномы AAV, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и рекомбинантные векторы и частицы AAV по изобретению можно использовать для лечения болезни Помпе, а также других гликогенозов (GSD).

[0114] В рамках изобретения термин "модифицировать" и его грамматические варианты означают, что нуклеиновая кислота или белок отклоняются от референсной или родительской последовательности. Модифицированная нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, изменена по сравнению с референсной (например, дикого типа) или родительской нуклеиновой кислотой. Таким образом, модифицированные нуклеиновые кислоты могут иметь, по существу, ту же, большую или меньшую активность или функцию относительно референсной или родительской нуклеиновой кислоты, но по меньшей мере сохраняет частичную активность, функцию и или идентичность последовательности относительно референсной или родительской нуклеиновой кислоты. Модифицированную нуклеиновую кислоту можно генетически модифицировать так, чтобы она кодировала модифицированную GAA или вариант GAA.

[0115] Термин "модифицированная нуклеиновая кислота, кодирующая GAA" означает, что нуклеиновая кислота GAA имеет изменение по сравнению с родительской немодифицированной нуклеиновой кислотой, кодирующей GAA. Конкретным примером модификации является замена нуклеотида. Термин "модификация" в настоящем описании можно не упоминать в каждом случае, когда ссылаются на нуклеиновую кислоту, кодирующую GAA.

[0116] В конкретных вариантах осуществления в случае модифицированной нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA, белок GAA сохраняет по меньшей мере часть функции или активности белка GAA дикого типа. Функция или активность белка GAA включает активность кислой альфа-глюкозидазы, лизосомальной гидролазы, приводящей к деградации гликогена, мальтозы и изомальтозы. Таким образом, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, включают модифицированные формы при условии, что кодируемая GAA сохраняет некоторую степень или аспект активности лизосомальной гидролазы GAA.

[0117] Как указано в настоящем описании, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, могут демонстрировать разные признаки или характеристики по сравнению с референсной или родительской нуклеиновой кислотой. Например, модифицированные нуклеиновые кислоты включают последовательности с 100% идентичности в отношении референсной нуклеиновой кислотой, кодирующей GAA, как указано в настоящем описании, а также последовательностям с менее 100% идентичности в отношении референсной нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA.

[0118] Термины "идентичность", "гомология" и их грамматические варианты означают, что два или более упомянутых веществ являются одинаковыми, когда они являются "выровненными" последовательностями. Таким образом, в качестве примера, если две нуклеиновые кислоты являются идентичными, они имеют одинаковую последовательность по меньшей мере в пределах указанной области или части. Идентичность может распространяться на определенную область (или домен) последовательности.

[0119] Термин "область" идентичности относится к частям двух или более указанных веществ, являющимся одинаковыми. Таким образом, если две белковые последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты являются идентичными в одной или более областях последовательности, они обладают идентичностью в этой области. Термин "выровненная" последовательность относится к множеству белковых (аминокислотных) последовательностей или последовательностей нуклеиновой кислоты, зачастую содержащих поправки на отсутствующие или дополнительные основания или аминокислоты (пропуски) по сравнению с референсной последовательности.

[0120] Идентичность может распространяться на всю длину последовательности или часть последовательности. В некоторых вариантах осуществления длина последовательности, обладающей процентом идентичность, составляет 2, 3, 4, 5 или более смежных аминокислот или нуклеиновых кислот, например, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д. смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, обладающей идентичностью, составляет 21 или более смежных аминокислот или нуклеиновых кислот, например, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 и т.д. смежных аминокислот или нуклеиновых кислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, обладающей идентичностью, составляет 41 или более смежных аминокислот или нуклеиновых кислот, например, 42, 43, 44, 45, 45, 47, 48, 49, 5, и т.д. смежных аминокислот или нуклеиновых кислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, обладающей идентичностью, составляет 50 или более смежных аминокислот или нуклеиновых кислот, например, 50-55, 55-60, 60-65, 65-70, 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-500, 500-1000 и т.д. смежных аминокислот или нуклеиновых кислот.

[0121] Как указано в настоящем описании, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, могут отличаться или проявлять 100% идентичности или менее 100% идентичности в отношении референсной нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA.

[0122] В конкретных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты по изобретению, кодирующие GAA, могут являться более чем на 86% идентичными в отношении любой нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID NO: 1-5.

[0123] В конкретных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты по изобретению, кодирующие GAA, могут являться более чем на 87% идентичными в отношении любой нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID NO: 6-14.

[0124] В конкретных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты по изобретению, кодирующие GAA, могут являться более чем на 91% идентичными в отношении любой нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID NO: 16-24.

[0125] Такие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, могут проявлять даже большую идентичность, например, является более чем на 87% идентичными; более чем на 88% идентичными, более чем на 89% идентичными, более чем на 90% идентичными, более чем на 91% идентичными, более чем на 92% идентичными, более чем на 93% идентичными, более чем на 94% идентичными, более чем на 95% идентичными, более чем на 96% идентичными, более чем на 97%, более чем на 98% идентичными, более чем на 99% идентичными или на 100% идентичными в отношении любой из SEQ ID NO: 1-24.

[0126] Степень идентичности (гомологии) или "процент идентичности" между двумя последовательностями можно устанавливать с использованием компьютерной программы и/или математического алгоритма. В целях по настоящему изобретению сравнения последовательностей нуклеиновой кислоты осуществляют с использованием пакета программ GCG Wisconsin Package версии 9.1, доступного в Genetics Computer Group в Madison, Wisconsin. Для удобства, для сравнения идентичности последовательности в рамках настоящего изобретения используют параметры по умолчанию (штраф за открытие пропуска =12, штраф за удлинение пропуска =4), определенные для этой программы. Альтернативно, для определения уровня идентичности и сходства между последовательностями нуклеиновой кислоты и аминокислотными последовательностями можно использовать программу Blastn 2.0, предоставляемую National Center for Biotechnology Information (можно найти в сети интернет по адресу ncbi.nlm.nih.gov/blast/; Altschul et al., 1990, J Mol Biol 215:403-410) с использованием выравнивания с пропусками с использованием параметров по умолчанию. В случае сравнения полипептидных последовательностей, алгоритм BLASTP, как правило, используют в комбинации с матрицей весов, такой как PAM100, PAM 250, BLOSUM 62 или BLOSUM 50. Для количественного анализа степени идентичности также используют программы для сравнения последовательностей FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) и SSEARCH (Pearson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol Biol. 132:185 (2000) и Smith et al., J. Mol. Biol. 147:195 (1981)). Также разработаны программы для количественного анализа структурного сходства белков с использованием топологического картирования на основе триангуляции Делоне (Bostick et al., Biochem Biophys Res Commun. 304:320 (2003)).

[0127] Модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, проявляющие разные признаки или характеристики по сравнению с референсной или родительской нуклеиновой кислоты, включают замены нуклеотидов. Например, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, включают нуклеиновые кислоты со сниженным количеством динуклеотидов CpG по сравнению с референсной нуклеиновой кислотой, кодирующей GAA.

[0128] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 127 динуклеотидов CpG.

[0129] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 126 динуклеотидов CpG.

[0130] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 125 динуклеотидов CpG.

[0131] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 124 динуклеотидов CpG.

[0132] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 123 динуклеотидов CpG.

[0133] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 122 динуклеотидов CpG.

[0134] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 121 динуклеотида CpG.

[0135] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 120 динуклеотидов CpG.

[0136] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 119 динуклеотидов CpG.

[0137] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 118 динуклеотидов CpG.

[0138] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 117 динуклеотидов CpG.

[0139] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 116 динуклеотидов CpG.

[0140] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 115 динуклеотидов CpG.

[0141] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 114 динуклеотидов CpG.

[0142] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 113 динуклеотидов CpG.

[0143] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 112 динуклеотидов CpG.

[0144] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 111 динуклеотидов CpG.

[0145] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 110 динуклеотидов CpG.

[0146] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 109 динуклеотидов CpG.

[0147] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 108 динуклеотидов CpG.

[0148] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 107 динуклеотидов CpG.

[0149] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 106 динуклеотидов CpG.

[0150] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 105 динуклеотидов CpG.

[0151] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 104 динуклеотидов CpG.

[0152] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 103 динуклеотидов CpG.

[0153] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 102 динуклеотидов CpG.

[0154] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 101 динуклеотида CpG.

[0155] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 100 динуклеотидов CpG.

[0156] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 99 динуклеотидов CpG.

[0157] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 98 динуклеотидов CpG.

[0158] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 97 динуклеотидов CpG.

[0159] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 96 динуклеотидов CpG.

[0160] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 95 динуклеотидов CpG.

[0161] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 94 динуклеотидов CpG.

[0162] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 93 динуклеотидов CpG.

[0163] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 92 динуклеотидов CpG.

[0164] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 91 динуклеотида CpG.

[0165] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 90 динуклеотидов CpG.

[0166] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 89 динуклеотидов CpG.

[0167] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 88 динуклеотидов CpG.

[0168] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 87 динуклеотидов CpG.

[0169] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 86 динуклеотидов CpG.

[0170] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 85 динуклеотидов CpG.

[0171] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 84 динуклеотидов CpG.

[0172] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 83 динуклеотидов CpG.

[0173] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 82 динуклеотидов CpG.

[0174] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 81 динуклеотида CpG.

[0175] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 80 динуклеотидов CpG.

[0176] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 79 динуклеотидов CpG.

[0177] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 78 динуклеотидов CpG.

[0178] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 77 динуклеотидов CpG.

[0179] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 76 динуклеотидов CpG.

[0180] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 75 динуклеотидов CpG.

[0181] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 74 динуклеотидов CpG.

[0182] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 73 динуклеотидов CpG.

[0183] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 72 динуклеотидов CpG.

[0184] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 71 динуклеотида CpG.

[0185] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 70 динуклеотидов CpG.

[0186] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 69 динуклеотидов CpG.

[0187] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 68 динуклеотидов CpG.

[0188] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 67 динуклеотидов CpG.

[0189] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 66 динуклеотидов CpG.

[0190] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 65 динуклеотидов CpG.

[0191] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 64 динуклеотидов CpG.

[0192] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 63 динуклеотидов CpG.

[0193] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 62 динуклеотидов CpG.

[0194] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 61 динуклеотида CpG.

[0195] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 60 динуклеотидов CpG.

[0196] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 59динуклеотидов CpG.

[0197] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 58динуклеотидов CpG.

[0198] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 57динуклеотидов CpG.

[0199] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 56динуклеотидов CpG.

[0200] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 55динуклеотидов CpG.

[0201] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 54динуклеотидов CpG.

[0202] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 53динуклеотидов CpG.

[0203] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 52динуклеотидов CpG.

[0204] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 51 динуклеотида CpG.

[0205] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 50 динуклеотидов CpG.

[0206] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 49 динуклеотидов CpG.

[0207] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 48 динуклеотидов CpG.

[0208] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 47 динуклеотидов CpG.

[0209] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 46 динуклеотидов CpG.

[0210] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 45 динуклеотидов CpG.

[0211] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 44 динуклеотидов CpG.

[0212] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 43 динуклеотидов CpG.

[0213] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 42 динуклеотидов CpG.

[0214] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 41 динуклеотида CpG.

[0215] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 40 динуклеотидов CpG.

[0216] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 39 динуклеотидов CpG.

[0217] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 38 динуклеотидов CpG.

[0218] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 37 динуклеотидов CpG.

[0219] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 36 динуклеотидов CpG.

[0220] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 35 динуклеотидов CpG.

[0221] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 34 динуклеотидов CpG.

[0222] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 33 динуклеотидов CpG.

[0223] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 32 динуклеотидов CpG.

[0224] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 31 динуклеотида CpG.

[0225] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 30 динуклеотидов CpG.

[0226] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 29 динуклеотидов CpG.

[0227] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 28 динуклеотидов CpG.

[0228] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 27 динуклеотидов CpG.

[0229] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 26 динуклеотидов CpG.

[0230] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 25 динуклеотидов CpG.

[0231] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 24 динуклеотидов CpG.

[0232] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 23 динуклеотидов CpG.

[0233] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 22 динуклеотидов CpG.

[0234] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 21 динуклеотида CpG.

[0235] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 20 динуклеотидов CpG.

[0236] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 19 динуклеотидов CpG.

[0237] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 18 динуклеотидов CpG.

[0238] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 17 динуклеотидов CpG.

[0239] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 16 динуклеотидов CpG.

[0240] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 15 динуклеотидов CpG.

[0241] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 14динуклеотидов CpG.

[0242] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 13динуклеотидов CpG.

[0243] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 12динуклеотидов CpG.

[0244] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 11динуклеотидов CpG.

[0245] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 10динуклеотидов CpG.

[0246] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 9динуклеотидов CpG.

[0247] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 8 динуклеотидов CpG.

[0248] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 7 динуклеотидов CpG.

[0249] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 6 динуклеотидов CpG.

[0250] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 5 динуклеотидов CpG.

[0251] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 4 динуклеотидов CpG.

[0252] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 3 динуклеотидов CpG.

[0253] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 2 динуклеотидов CpG.

[0254] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, содержит менее 1 динуклеотида CpG.

[0255] Термин "вектор" относится к небольшой молекуле нуклеиновой кислоты-носителю, плазмиде, вирусу (например, вектор AAV) или другому носителю, на который можно воздействовать посредством инсерции или встраивания нуклеиновой кислоты. Такие векторы можно использовать для генетической манипуляции (т.е. "клонирующие векторы"), для встраивания/переноса полинуклеотидов в клетки и для транскрипции или трансляции встроенного полинуклеотида в клетках. "Экспрессирующий вектор" является специальным вектором, содержащим ген или последовательность нуклеиновой кислоты с регуляторными областями, необходимыми для экспрессии в клетке-хозяине.

[0256] Последовательность нуклеиновой кислоты вектора, как правило, содержит по меньшей мере участок начала репликации для размножения в клетке и, необязательно, дополнительные элементы, такие как гетерологичная полинуклеотидная последовательность, элемент контроля экспрессии (например, промотор, энхансер), интрон, инвертированный концевой повтор (ITR), селективный маркер (например, резистентности к антибиотику), сигнал полиаденилирования.

[0257] Вирусный вектор получают из одного или более элементов нуклеиновой кислоты, содержащих вирусный геном, или он основан на них. Конкретные вирусные векторы включают лентивирусные векторы и векторы аденоассоциированного вируса (AAV).

[0258] Термин "рекомбинантный" в качестве определения вектора, такого как рекомбинантный вектор AAV (rAAV), а также определения последовательностей, таких как рекомбинантные полинуклеотиды и полипептиды, означает, что на композиции воздействовали (т.е. конструировали) таким образом, которым, как правило, это не происходит в природе. Конкретным примером рекомбинантного вектора AAV будет вектор, в котором последовательность нуклеиновой кислоты для клик-реакции, которая в норме не присутствует в геноме AAV дикого типа, встраивают в геном AAV. Хотя термин "рекомбинантный" не всегда используют в настоящем описании по отношению к векторам AAV, а также последовательностям, таким как полинуклеотиды, в него конкретно включены рекомбинантные формы, включая полинуклеотиды, несмотря на любое такое опущение.

[0259] "Рекомбинантный вектор AAV" или "rAAV" получают из генома AAV дикого типа с использованием молекулярных способов для удаления генома дикого типа из генома AAV и заменой ненативной последовательностью нуклеиновой кислоты, обозначаемой как гетерологичная нуклеиновая кислота. Как правило, в случае AAV одну или обе последовательности инвертированных концевых повторов (ITR) генома AAV сохраняют в векторе AAV. rAAV отличается от генома AAV, т.к. весь геном AAV или его часть заменяют ненативной последовательностью в отношении геномной нуклеиновой кислоты AAV. Таким образом, встраивание ненативной последовательности определяет вектор AAV как "рекомбинантный" вектор, который можно обозначать как "вектор rAAV".

[0260] Последовательность rAAV можно упаковывать, в этом случае его обозначают в настоящем описании как "частицу", для последующей инфекции (трансдукции) клетки ex vivo, in vitro или in vivo. Если последовательность рекомбинантного вектора AAV заключают в капсид или упаковывают в частицу AAV, частицу также можно обозначать как "вектор rAAV" или "частица rAAV". Такие частицы rAAV включают белки, заключающие в капсид или упаковывающие векторный геном, и в случае AAV их обозначают как белки капсида.

[0261] Термин векторный "геном" относится к части рекомбинантной последовательности плазмиды, которая в конечном итоге упаковывается или заключается в капсид с образованием вирусной частицы (например, rAAV). В случаях, когда рекомбинантные плазмиды используют для конструирования или производства рекомбинантных векторов, векторный геном не включает часть "плазмиды", несоответствующую последовательности векторного генома рекомбинантной плазмиды. Эту часть рекомбинантной плазмиды, не являющуюся векторным геномом, можно обозначать как "остов плазмиды", который важен для клонирования и амплификации плазмиды, процесса, необходимого для размножения и продукции рекомбинантного вируса, но сама она не упаковывается или не заключается в капсид в вирусные частицы (например, AAV). Таким образом, термин векторный "геном" относится к нуклеиновой кислоте, упаковываемой или заключаемой в капсид вирусом (например, AAV).

[0262] Клетки-хозяева для получения рекомбинантных частиц AAV включают, в качестве неограничивающих примеров, микроорганизмы, дрожжевые клетки, клетки насекомых и клетки млекопитающих, которые можно использовать или используют в качестве реципиентов гетерологичных векторов rAAV. Можно использовать клетки из стабильной линии клеток человека HEK293 (доступные, например, в American Type Culture Collection под регистрационным номером ATCC CRL1573). В некоторых вариантах осуществления для получения рекомбинантных частиц AAV используют модифицированную линию эмбриональных клеток почки человека (например, HEK293), трансформированную с использованием фрагментов ДНК аденовируса типа-5 и экспрессирующую аденовирусные гены E1a и E1b. Модифицированную линию клеток HEK293 легко трансфицировать, и она представляет собой особенно удобную платформу для получения частиц rAAV. Другие линии клеток-хозяев, подходящие для рекомбинантной продукции AAV, описаны в международной заявке PCT/2017/024951.

[0263] В некоторых вариантах осуществления AAV-хелперные функции вносят в клетку-хозяина посредством трансфекции клетки-хозяина с использованием AAV-хелперной конструкции до или одновременно с трансфекцией экспрессирующего вектора AAV. Клетку-хозяина, имеющую AAV-хелперные функции можно обозначать как "хелперная клетка" или "упаковывающая хелперная клетка". Таким образом, AAV-хелперные конструкции иногда используют для обеспечения по меньшей мере транзиторной экспрессии генов AAV rep и/или cap для дополнения отсутствующий функций AAV, необходимых для продуктивной трансдукции AAV. В AAV-хелперных конструкциях зачастую отсутствуют ITR AAV, и они не могут ни реплицироваться, ни упаковывать себя. Эти конструкции могут находиться в форме плазмиды, фага, транспозона, космиды, вируса или вириона. Описан ряд AAV-хелперных конструкций, таких как широко используемые плазмиды pAAV/Ad и pIM29+45, кодирующие продукты экспрессии Rep и Cap. Известен ряд других векторов, кодирующих продукты экспрессии Rep и/или Cap.

[0264] В этой области известны способы получения рекомбинантных частиц AAV, с помощью которых можно трансдуцировать клетки млекопитающих. Например, рекомбинантные частицы AAV можно получать, как описано в патенте США № 9408904 и международных заявках №№ PCT/US2017/025396 и PCT/US2016/064414.

[0265] Термины "нуклеиновая кислота" и "полинуклеотид" в настоящем описании используют взаимозаменяемо для обозначения всех форм нуклеиновой кислоты, олигонуклеотидов, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Нуклеиновые кислоты включают геномную ДНК, кДНК и антисмысловую ДНК и сплайсированную или несплайсированную мРНК, рРНК, тРНК и ингибиторную ДНК или РНК (РНКи, например, малую или короткую шпилечную (sh)РНК, микроРНК (мкРНК), малую или короткую интерферирующую (ми)РНК, РНК транс-сплайсинга или антисмысловую РНК). Нуклеиновые кислоты включают природные, синтетические и преднамеренно модифицированные или измененные полинуклеотиды (например, вариант нуклеиновой кислоты). Нуклеиновые кислоты, такие как кДНК, геномная ДНК, РНК и их фрагменты, могут являться одно- или двухцепочечными.

[0266] Полинуклеотиды могут являть одноцепочечными, двухцепочечными или триплексом, линейными или кольцевыми и могут иметь любую длину. В обсуждаемых полинуклеотидах последовательность или структуру конкретного полинуклеотида можно описывать в соответствии с представлением последовательности в 5'-3'-направлении.

[0267] Термин "трансген" используют в настоящем описании для обозначения гетерологичной нуклеиновой кислоты, предназначенной для встраивания или встраиваемой в клетку или организм. Трансгены включают любую гетерологичную нуклеиновую кислоту, такую как модифицированная нуклеиновая кислота, кодирующая GAA.

[0268] Термин "трансдуцировать" и его грамматические варианты относятся к встраиванию молекулы, такой как вектор rAAV, в клетку или организм-хозяин. Гетерологичная нуклеиновая кислота/трансген может интегрироваться или не интегрироваться в геномную нуклеиновую кислоту клетки-реципиента. Встраиваемая гетерологичная нуклеиновая кислота также может существовать в клетке-реципиенте или организме-хозяине экстрахромосомно или только транзиторно.

[0269] "Трансдуцированная клетка" является клеткой, в которую встроен трансген. Таким образом, термин "трансдуцированная" клетка (например, у млекопитающего, такая как клетка, или ткань, или клетка органа) означает генетическое изменение в клетке после встраивания, например, нуклеиновой кислоты (например, трансгена) в клетке. Таким образом, "трансдуцированная" клетка является клеткой, в которой или в потомстве которой встроена экзогенная нуклеиновая кислота. Можно выращивать клетки и экспрессировать встроенный белок. В случае применения в генной терапии и способов генной терапии трансдуцированная клетка может находиться в индивидууме.

[0270] Термин "элемент контроля экспрессии" относится к последовательностям нуклеиновой кислоты, влияющим на экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты. Элементы контроля экспрессии, как указано в настоящем описании, включают промоторы и энхансеры. Последовательности векторов, включая векторы AAV, могут включать один или более "элементов контроля экспрессии". Как правило, такие элементы включают для облегчения правильной транскрипции гетерологичного полинуклеотида и, при необходимости, его трансляции (например, промотор, энхансер, сигнал сплайсинга для интронов, поддержание правильной рамки считывания гена для осуществления трансляции мРНК в рамке считывания и стоп-кодонов и т.д.). Такие элементы, как правило, действуют в цис-положении, и их обозначают как "цис-действующие" элементы, но они также могут действовать в транс-положении.

[0271] На контроль экспрессии можно влиять на уровне транскрипции, трансляции, сплайсинга, стабильности мРНК и т.д. Как правило, элемент контроля экспрессии, модулирующий транскрипцию, расположен вблизи 5'-конца (т.е. "выше") транскрибируемой нуклеиновой кислоты. Элементы контроля экспрессии также могут находиться на 3'-конце (т.е. "ниже") транскрибируемой последовательности или в пределах транскрипта (например, в интроне). Элементы контроля экспрессии могут находиться смежно или на расстоянии от транскрибируемой последовательности (например, 1-10, 10-25, 25-50, 50-100, от 100 до 500 или более нуклеотидов от полинуклеотида), даже на значительном расстоянии. Несмотря на это, из-за ограничений длины векторов AAV элементы контроля экспрессии, как правило, будут находиться в пределах от 1 до 1000 нуклеотидов от участка начала транскрипции гетерологичной нуклеиновой кислоты.

[0272] Функционально экспрессия функционально связанной нуклеиновой кислоты является по меньшей мере частично контролируемой с помощью элемента (например, промотора) таким образом, что элемент модулирует транскрипцию нуклеиновой кислоты и, при необходимости, трансляцию транскрипта. Конкретным примером элемента контроля экспрессии является промотор, как правило, находящийся в 5'-направлении от транскрибируемой последовательности нуклеиновой кислоты. Промотор, как правило, повышает количество продукта, экспрессирующегося с функционально связанной нуклеиновой кислоты, по сравнению с количеством, экспрессирующимся в отсутствие промотора.

[0273] В рамках изобретения термин "энхансер" может относиться к последовательности, расположенной смежно с гетерологичной нуклеиновой кислотой. Энхансерные элементы, как правило, находятся выше промоторного элемента, но также функционируют и могут находиться ниже последовательности или в последовательности. Таким образом, энхансерный элемент может находиться на 10-50 пар оснований, 50-100 пар оснований, 100-200 пар оснований или 200-300 пар оснований или более пар оснований выше или ниже гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты. Энхансерные элементы, как правило, повышают экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты выше экспрессии, обеспечиваемой промоторным элементом.

[0274] Экспрессирующая конструкция может содержать регуляторные элементы, служащие для регуляции экспрессии в конкретном типе клеток или тканей. Элементы контроля экспрессии (например, промоторы) включают элементы, активные в конкретном типе тканей или клеток, обозначаемые в настоящем описании как "тканеспецифические элементы контроля экспрессии/промоторы". Тканеспецифические элементы контроля экспрессии, как правило, являются активными в конкретной клетке или ткани (например, печени). Элементы контроля экспрессии, как правило, являются активными в конкретных клетках, тканях или органах, т.к. они распознаются транскрипционными активаторными белками или другими регуляторами транскрипции, являющимися уникальными для конкретного типа клеток, ткани или органа. Такие регуляторные элементы известны специалистам в этой области (см., например, Sambrook et al. (1989) и Ausubel et al. (1992)).

[0275] Включение тканеспецифических регуляторных элементов в экспрессирующие конструкции обеспечивает по меньшей мере частичный тканевой тропизм для экспрессии гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или ингибиторную РНК. Примерами промоторов, являющихся активными в печени, являются, помимо прочего, промотор гена транстиретина (TTR); промотор 1-антитрипсина альфа человека (hAAT); промотор альбумина, Miyatake, et al.,J. Virol., 71:5124-32 (1997); коровый промотор вируса гепатита B, Sandig, et al., Gene Ther. 3:1002-9 (1996); промотор альфа-фетопротеина (AFP), Arbuthnot, et al., Hum. Gene. Ther., 7:1503-14 (1996). Примером энхансера, активного в печени, является HCR-1 и HCR-2 аполипопротеина E (apoE) (Allan et al., J. Biol. Chem., 272:29113-19 (1997)).

[0276] Элементы контроля экспрессии также включают убиквитарные или промискуитетные промоторы/энхансеры, способные регулировать экспрессию полинуклеотида во множестве разных типов клеток. Такие элементы включают, в качестве неограничивающих примеров, последовательности предраннего промотора/энхансера цитомегаловируса (CMV), последовательности промотора/энхансера вируса саркомы Рауса (RSV) и другие вирусные промоторы/энхансеры, активные в различных типах клеток млекопитающих, или синтетические элементы, отсутствующие в природе (см., например, Boshart et al., Cell, 41:521-530 (1985)), промотор SV40, промотор дигидрофолатредуктазы, промотор цитоплазматического β-актина и промотор фосфоглицеринкиназы (PGK).

[0277] Элементы контроля экспрессии также могут обеспечивать экспрессию регулируемым образом, т.е. сигнал или стимулы повышают или снижают экспрессию функционально связанного гетерологичного полинуклеотида. Регулируемый элемент, повышающий экспрессию функционально связанного полинуклеотида в ответ на сигнал или стимулы, также обозначают как "индуцибельный элемент" (т.е. индуцируемый сигналом). Конкретные неограничивающие примеры включают гормон (например, стероид)-индуцибельный промотор. Как правило, степень повышения или снижения, придаваемого такими элементами, пропорциональна величине сигнала или стимулов; чем больше величина сигнала или стимулов, тем больше повышение или снижение экспрессии. Конкретные неограничивающие примеры включают цинк-индуцибельный промотор металлотионеина (MT) овцы; стероид-индуцибельный промотор вируса рака молочных желез мышей (MMTV); систему промотора полимеразы T7 (WO 98/10088); тетрациклин-репрессируемую систему (Gossen, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992)); тетрациклин-индуцибельную систему (Gossen, et al., Science. 268:1766-1769 (1995); также см. Harvey, et al., Curr. Opin. Chem. Biol. 2:512-518 (1998)); RU486-индуцибельную систему (Wang, et al., Nat. Biotech. 15:239-243 (1997) и Wang, et al., Gene Ther. 4:432-441 (1997)]; и рапамицин-индуцибельную систему (Magari, et al., J. Clin. Invest. 100:2865-2872 (1997); Rivera, et al., Nat. Medicine. 2:1028-1032 (1996)). Другие регулируемые элементы контроля, которые можно использовать в этом контексте, являются элементами, регулируемыми конкретным физиологическим состоянием, например, температурой, острой фазой, стадией развития.

[0278] Элементы контроля экспрессии также включают нативные элементы для гетерологичного полинуклеотида. Нативный элемент контроля (например, промотор) можно использовать, когда желательно, чтобы экспрессия гетерологичного полинуклеотида имитировала нативную экспрессию. Нативный элемент можно использовать, когда экспрессия гетерологичного полинуклеотида подлежит регуляции в зависимости от времени или стадии развития, или тканеспецифическим образом, или в ответ на специфические транскрипционные стимулы. Также можно использовать другие нативные элементы контроля экспрессии, такие как интроны, участки полиаденилирования или консенсусные последовательности Козак.

[0279] Термин "функционально связанный" означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты, располагают в подходящих положениях относительно последовательности так, чтобы осуществлять экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты. То же самое определение иногда используют в отношении расположения последовательностей нуклеиновой кислоты и элементов контроля транскрипции (например, промоторов, энхансеров и элементов терминации) в экспрессирующем векторе, например, векторе rAAV.

[0280] В примере элемента контроля экспрессии, функционально связанного с нуклеиновой кислотой, взаимосвязь является такой, что элемент контроля модулирует экспрессию нуклеиновой кислоты. Более конкретно, например, термин "две функционально связанные последовательности ДНК" означает, что две ДНК расположены (цис или транс) в такой взаимосвязи, что по меньшей мере одна из последовательностей ДНК может вызывать физиологический эффект в отношении другой последовательности.

[0281] Таким образом, дополнительные элементы для векторов включают, в качестве неограничивающих примеров, элемент контроля экспрессии (например, промотор/энхансер), сигнал терминации транскрипции или стоп-кодон, 5'- или 3'-нетранслируемые области (например, последовательности полиаденилирования (поли-A)), фланкирующие последовательность, такие как одна или более копий последовательности ITR AAV, или интрон.

[0282] Дополнительные элементы включают, например, филлерные или спейсерные полинуклеотидные последовательности, например, для улучшения упаковки и снижения присутствия контаминирующей нуклеиновой кислоты. Векторы AAV, как правило, принимают вставки ДНК, имеющие диапазон размеров, как правило, от приблизительно 4 т.п.н. до приблизительно 5,2 т.п.н. или немного больше. Таким образом, в случае более коротких последовательностей включение спейсера или филлера для коррекции длины до приблизительно нормального или нормального размера геномной последовательности вируса, приемлемой для упаковки вектора AAV в вирусную частицу. В различных вариантах осуществления филлерная/спейсерная последовательность нуклеиновой кислоты является нетранслируемым (некодирующим белок) сегментом нуклеиновой кислоты. В случае последовательности нуклеиновой кислоты менее чем 4,7 т.п.н. филлерная или спейсерная полинуклеотидная последовательность имеет длину, которая при комбинировании (например, встраивании в вектор) с последовательностью составляет общую длину приблизительно 3,0-5,5 т.п.н., или приблизительно 4,0-5,0 т.п.н., или приблизительно от 4,3-4,8 т.п.н.

[0283] Термин "выделенный" при использовании в качестве определения композиции, означает, что композиции сделаны человеком или отделены полностью или по меньшей мере частично от своей природной среды in vivo. Как правило, выделенные композиции, по существу, не содержат один или более материалов, с которыми они, как правило, ассоциированы в природе, например, один или более белков, нуклеиновых кислот, липидов, углеводов, клеточных мембран.

[0284] Термин "выделенный" не исключает комбинации, полученные человеком, например, последовательность rAAV или частицу rAAV, упаковывающую или заключающую в капсид векторный геном AAV, и фармацевтический состав. Термин "выделенный" также не исключает альтернативные физические формы композиции, такие как гибриды/химеры, мультимеры/олигомеры, модификации (например, фосфорилирование, гликозилирование, липидирование) или дериватизированные формы или формы, экспрессирующиеся в клетках-хозяевах, полученных человеком.

[0285] Термин "по существу, чистый" относится к препарату, содержащему по меньшей мере 50-60% по массе интересующего соединения (например, нуклеиновой кислоты, олигонуклеотида, белка и т.д.). Препарат может содержать по меньшей мере 75% по массе, или по меньшей мере 85% по массе, или приблизительно 90-99% по массе интересующего соединения. Чистоту измеряют способами, подходящими для интересующего соединения (например, хроматографическими способами, с помощью электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле, анализа ВЭЖХ и т.п.).

[0286] Фраза "состоящий, по существу, из" по отношению к конкретной нуклеотидной последовательности или аминокислотной последовательности означает последовательность, имеющую свойства указанной SEQ ID NO. Например, при использовании по отношению к аминокислотной последовательности фраза включает саму последовательность и молекулярные модификации, которые не будут влиять на основные и новые характеристики последовательности.

[0287] Нуклеиновые кислоты, экспрессирующие векторы (например, векторные геномы AAV), плазмиды, включая модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, по изобретению можно получать способов рекомбинантной ДНК. Доступность информации о нуклеотидной последовательности делает возможным получение выделенных молекул нуклеиновой кислоты по изобретению различными способами. Нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA можно получать с использованием различных стандартных способов клонирования, рекомбинантных ДНК, экспрессии в клетках или трансляции in vitro и химического синтеза. Чистоту полинуклеотидов можно определять посредством секвенирования, электрофореза в геле и т.п. Например, нуклеиновые кислоты можно выделять с использованием способов гибридизации или компьютерного скрининга баз данных. Такие способы включают, в качестве неограничивающих примеров: (1) гибридизацию геномной ДНК или библиотек кДНК с зондами для детекции гомологичных нуклеотидных последовательностей; (2) скрининг антител для детекции полипептидов, имеющих общие структурные признаки, например, с использованием экспрессионной библиотеки; (3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с использованием геномной ДНК или кДНК с помощью праймеров, способных отжигаться на интересующей последовательности нуклеиновой кислоты; (4) компьютерный поиск в базах данных последовательностей на предмет родственных последовательностей; и (5) дифференциальный скрининг библиотеки вычитаемых нуклеиновых кислот.

[0288] Нуклеиновые кислоты можно поддерживать в виде ДНК в любом удобном клонирующем векторе. В одном из вариантов осуществления клоны поддерживают в плазмидном клонирующем/экспрессирующем векторе, таком как pBluescript (Stratagene, La Jolla, CA), размножаемом в подходящей клетке-хозяине E. coli. Альтернативно, нуклеиновые кислоты можно поддерживать в векторе, подходящем для экспрессии в клетках млекопитающих, например, векторе AAV. В случаях, когда посттрансляционная модификация влияет на функцию белка, молекулу нуклеиновой кислоты можно экспрессировать в клетках млекопитающих.

[0289] В рамках изобретения векторы rAAV, необязательно, могут содержать регуляторные элементы, необходимые для экспрессии гетерологичной нуклеиновой кислоты в клетке, расположенной так, чтобы сделать возможной экспрессию кодируемого белка в клетке-хозяине. Такие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии, включают, в качестве неограничивающих примеров, промоторные последовательности, энхансерные последовательности и последовательности инициации транскрипции, как указано в настоящем описании и известно специалистам в этой области.

[0290] Способы и применение по изобретению включают доставку (трансдукцию) нуклеиновой кислоты (трансгена) в клетки-хозяева, включая делящиеся и/или неделящиеся клетки. Нуклеиновые кислоты, вектор rAAV, способы, применение и фармацевтические составы по изобретению дополнительно можно использовать в способе доставки, введения или предоставления последовательности, кодируемой гетерологичной нуклеиновой кислотой нуждающемуся в этом индивидууму, в качестве способа лечения. Таким образом, нуклеиновая кислота транскрибируется, и белок продуцируется in vivo в организме индивидуума. Индивидуум может получить пользу или нуждаться в белке, т.к. индивидуум имеет недостаточности белка, или т.к. продукция белка в организме индивидуума может иметь некоторый терапевтический эффект в виде способа лечения или иного.

[0291] Настоящее изобретение можно использовать на животных, включая человека, и в ветеринарии. Таким образом, подходящие индивидуумы включают млекопитающих, таких как люди, а также не являющихся человеком млекопитающих. Термин "индивидуум" относится к животному, как правило, млекопитающему, такому как люди, не являющиеся человеком приматы (человекообразные обезьяны, гиббоны, гориллы, шимпанзе, орангутаны, макаки), домашнему животному (собакам и кошкам), сельскохозяйственным животным (домашней птице, такой как куры и утки, лошадям, коровам, козам, овцам, свиньям) и экспериментальным животным (мыши, крысе, кролику, морской свинке). Люди включают плод, новорожденного, ребенка грудного возраста, подростка и взрослых индивидуумов. Индивидуумы включают модели заболеваний на животных, например, модели недостаточностей белков/ферментов, таких как болезнь Помпе, и гликогенозов (GSD) на мышах и других животных и другие модели, известные специалистам в этой области.

[0292] Индивидуумы, подходящие для лечения по изобретению, включают индивидуумов продуцирующих или имеющих риск продуцирования недостаточного количества GAA, или продуцирующих аномальную, частично функциональную или нефункциональную GAA. Индивидуумов можно тестировать на активность GAA для определения того, подходят ли такие индивидуумы для лечения способом по изобретению. Индивидуумы, подходящие для лечения по изобретению, также включают индивидуумов, которые получат пользу от GAA. Такие индивидуумы, которые могут получить пользу от GAA, включают индивидуумов, имеющих гликогеноз (GSD). Подвергаемых лечению индивидуумов можно подвергать мониторингу после лечения периодически, например, каждые 1-4 недели, 1-6 недель, 6-12 недели или 1, 2, 3, 4, 5 или более лет.

[0293] Индивидуумов можно тестировать на иммунный ответ, например, антитела против AAV. Таким образом, индивидуумов-кандидатов можно подвергать скринингу перед лечением способом по изобретению. Индивидуумов также можно тестировать на антитела после AAV после лечения и, необязательно, подвергать мониторингу в течение периода времени после лечения. Индивидуумов, имеющих ранее существовавшие или развивающиеся антитела против AAV, можно лечить с использованием иммуносупрессорного средства или другой схемы лечения, как указано в настоящем описании.

[0294] Индивидуумы, подходящие для лечения по изобретению, также включают индивидуумов, продуцирующих или имеющих риск продукции антител против AAV. Векторы rAAV можно вводить или доставлять таким индивидуумам несколькими способами. Например, пустой капсид AAV (т.е. AAV, в котором отсутствует модифицированная нуклеиновая кислота, кодирующая GAA) можно доставлять для связывания с антителами против AAV в организме индивидуума, таким образом, позволяя вектору rAAV, содержащему гетерологичную нуклеиновую кислоту, трансдуцировать клетки индивидуума.

[0295] Модифицированные нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и векторы rAAV по изобретению можно использовать для лечения недостаточности GAA. Таким образом, в различных вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторы rAAV по изобретению можно использовать в качестве терапевтического и/или профилактического средства.

[0296] В конкретных вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторы rAAV по изобретению можно использовать для лечения болезнь Помпе, а также других гликогенозов. Введение модифицированных нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, экспрессирующих кассет, содержащих модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторов rAAV по изобретению пациенту с болезнью Помпе или другим гликогенозом приводит к экспрессии белка GAA, служащего для супрессии, ингибирования или снижения накопления гликогена, предотвращения накопления гликогена или деградации гликогена, что, в свою очередь, может снижать или уменьшать одно или более нежелательных явлений или симптомов болезни Помпе.

[0297] Индивидуумы, животные или пациенты, которым вводят модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторы rAAV по изобретению можно оценивать с помощью различных тестов, анализов и функциональных оценок для демонстрации, измерения и/или оценки эффективности модифицированных нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, экспрессирующих кассет, содержащих модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторов rAAV по изобретению в качестве терапевтических и/или профилактических средств. Такие тесты и анализы включают, в качестве неограничивающих примеров, измерение активности GAA (например, с использованием стандартных анализов активности GAA) и/или количества GAA (например, посредством вестерн-блоттинга с использованием антитела против GAA) в биологическом образце, таком как кровь или плазма; измерение содержания гликогена в тканях, таких как образцы мышечной ткани; гистологическую оценку мышц (таких как мышечная ткань из трехглавой мышцы плеча, четырехглавой мышцы бедра, диафрагмы и сердца), спинного мозга (включая исследование и подсчет ChAT-положительных двигательных нейронов в переднем роге шейных, грудных и поясничных сегментов спинного мозга и оценку астроглиальной реакции и активации микроглии); оценку респираторной функции во время спокойного дыхания; тест висения на проволоке на передних конечностях; измерение силы сжатия; тест "вращающегося стержня" для определения двигательной координации; рентгенографию грудной клетки, на которой можно определить кардиомегалию; электрокардиографию (ЭКГ) для исследования функции сердца; электромиографию (ЭМГ), с помощью которой можно определять миопатию; измерение активности GAA в фибробластах кожи; анализы активности GAA в образцах высушенной крови; анализы крови/сыворотки на креатинкиназу сыворотки, которая при повышении является неспецифическим маркером болезни Помпе; анализы крови/сыворотки на аминотрансферазу, аланинаминотрансфераза или лактатдегидрогеназу, которые могут повышаться, что является показателем высвобождения из мышц при болезни Помпе; анализ на тетрасахарид глюкозы в моче (чувствительный, неспецифический маркер болезни Помпе; анализ пиковых и равновесных уровней полученного с помощью вектора фермента GAA, оцениваемых по общему белку GAA и активности в плазме; тестирование функции легких; тестирование функции мышц; биопсию мышц и окрашивание на наличие гликогена в вакуолях клеток; биомаркеры состояния печени; исследование состояния лизосом; тестирование на иммунные ответы на капсид AAV; тестирование на иммунные ответы на белковый продукт трансгена GAA; тест шестиминутной ходьбы (6MWT); тестирование форсированной жизненной емкости легких; пиковые и равновесные уровни полученного с помощью вектора AAV фермента GAA (оцениваемые по общему белку GAA и активности, измеряемых в плазме; тест "ходьба, подъем по лестнице, прием Говерса и вставание со стула" (GSGC); тестирование мышечной силы с использованием шкалы оценки Medical Research Council (MRC) на основе модели Раша; сообщаемая пациентом оценка жизнедеятельности/социализации; Количественные измерения сна и дыхания во время сна посредством полисомнографии (PSG); сообщаемые пациентом показатели утомляемости, сонливости в дневное время и качества сна; шкалу Уолтона и Гарднер-Медвина (WGM); тесты дыхательной функции, включая, в качестве неограничивающих примеров, назальное давление при резком вдохе через нос (SNIP) и максимальное давление при вдохе и выдохе (MIP и MEP, соответственно); биомаркеры печени; анализ β-гексозаминидазы (βHexo); измерения показателей состояния здоровья, включая, в качестве неограничивающих примеров, краткий опросник для оценки состояния здоровья, содержащий 26 вопросов (SF-36); шкалу активности болезни Помпе на основе модели Раша (R-PAct); шкалу оценки тяжести усталости (FSS); и банки элементов информационной системе измерений сообщаемых пациентом исходов (PROMIS).

[0298] Кроме того, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и векторы rAAV по изобретению можно использовать для лечения гликогеноза (GSD). Гликогенозы включают, например, GSD типа I (болезнь Гирке), GSD типа II (болезнь Помпе), GSD типа III (болезнь Форбса), GSD типа IV (болезнь Андерсен, амилопектиноз), GSD типа V (болезнь Мак-Ардла), GSD типа VI (болезнь Герса), GSD типа VII (болезнь Таруи) или летальный врожденный гликогеноз сердца.

[0299] Как указано в настоящем описании, rAAV можно использовать в качестве векторов для генной терапии, т.к. они могут проникать в клетки и встраивать нуклеиновую кислоту/генетический материал в клетки. Т.к. AAV не ассоциированы с заболеваниями у людей, с помощью векторов rAAV можно доставлять гетерологичные полинуклеотидные последовательности (например, терапевтические белки и средства) пациентам-людям, не вызывая значительной патологии или заболевания, связанных с AAV.

[0300] Векторы rAAV обладают рядом желаемых признаков для такого использования, включая тропизм к делящимся и неделящимся клеткам. Ранний клинический опыт использования этих векторов также не показал устойчивой токсичности, и иммунные ответы, как правило, являются минимальными или неопределяемыми. Известно, что AAV инфицирует широкий спектр типов клеток in vivo с помощью рецептор-опосредованного эндоцитоза и трансцитоза. Эти векторные системы тестировали на людях, используя в качестве мишени многие ткани, такие как эпителий сетчатки, печень, скелетные мышцы, дыхательные пути, головной мозг, суставы и гемопоэтические стволовые клетки.

[0301] Желательным может являться встраивание вектора rAAV, который может обеспечивать, например, получение множества копий GAA и, таким образом, более высоких количеств белка GAA. Улучшенные векторы rAAV и способы получения этих векторов подробно описаны в ряде источников, патентов и патентных заявок, включая Wright J.F. (Hum. Gene Ther., 20:698-706, 2009).

[0302] Прямая доставка векторов rAAV или трансдукция ex vivo клеток человека с последующей инфузией в тело приводит к экспрессии гетерологичной нуклеиновой кислоты, таким образом, вызывая благоприятный терапевтический эффект гемостаза. В контексте модифицированных нуклеиновых кислот, кодирующих GAA, введение супрессирует, ингибирует или снижает количество или накопление гликогена, предотвращает накопление гликогена или приводит к деградации гликогена. Это, в свою очередь, может приводить к супрессии, ингибированию, снижению или уменьшению одного или более неблагоприятных эффектов болезни Помпе, например, стимуляции или улучшению тонуса мышц и/или мышечной силы и/или уменьшению увеличенной печени.

[0303] Рекомбинантный вектор AAV, а также способы и их применение включают любой штамм или серотип вируса. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV может быть основан на любом геноме AAV, таком как AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8, например. Такие векторы могут быть основаны на одном и том же штамме или серотипе (или подгруппе или варианте) или могут отличаться друг от друга. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV на основе генома конкретного серотипа может являться идентичным серотипу белков капсида, в который упакован вектор. Кроме того, рекомбинантный геном вектора AAV может быть основан на геноме серотипа AAV, отличающемся от серотипа белков капсида AAV, в который упакован вектор. Например, векторный геном AAV может быть основан на AAV2, в то время как по меньшей мере один из трех белков капсида может представлять собой, например, AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8 или их вариант.

[0304] В конкретных вариантах осуществления векторы аденоассоциированного вируса (AAV) включают AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B и AAV-2i8, а также их варианты (например, варианты капсида, такие как инсерции, добавления, замены и делеции аминокислот), например, как описано в WO 2013/158879 (международная заявка № PCT/US2013/037170), WO 2015/013313 (международная заявка № PCT/US2014/047670) и US 2013/0059732 (в патенте США № 9169299 описаны LK01, LK02, LK03 и т.д.).

[0305] В рамках изобретения термин "серотип" является различительным термином, используемым для обозначения AAV, имеющего капсид, серологически отличающийся от других серотипов AAV. Серологические отличительные признаки определяют на основе отсутствия перекрестной реактивности между антителами против одного AAV по сравнению с другим AAV. Такие различия в перекрестной реактивности, как правило, являются результатом последовательностей белков капсида/антигенных детерминант (например, по причине отличий последовательности VP1, VP2 и/или VP3 серотипов AAV). Несмотря на возможность того, что варианты AAV, включая варианты капсида, могут серологически не отличаться от референсного AAV или другого серотипа AAV, они отличаются по меньшей мере одним нуклеотидом или аминокислотным остатком от референсного или другого серотипа AAV.

[0306] В соответствии с общепринятым определением термин "серотип" означает, что интересующий вирус тестировали против сыворотки, специфической для всех существующих и охарактеризованных серотипов, для нейтрализации активности, и не обнаруживали антитела, нейтрализующие интересующий вирус. С обнаружением все большего количества природных изолятов вируса и/или с получением все большего количества мутантов капсида, могут возникать или не возникать серологические различия с любым из существующих в настоящее время серотипов. Таким образом, в случаях, когда новый вирус (например, AAV) не имеет серологических отличий, этот новый вирус (например, AAV) будет представлять собой подгруппу или вариант соответствующего серотипа. Во многих случаях, серологическое тестирование на нейтрализующую активность еще предстоит провести на мутантных вирусах с модификациями последовательностей капсида для определения, принадлежат ли они к другому серотипу в соответствии с общепринятым определением серотипа. Таким образом, для краткости, удобства и во избежание повторения, термин "серотип" в широком смысле относится к серологически отличающимся вирусам (например, AAV), а также вирусам (например, AAV), серологически неотличающимся, которые могут находиться в рамках подгруппы или варианта указанного серотипа.

[0307] Как указано в настоящем описании, белки капсида AAV могут демонстрировать менее 100% идентичности последовательности в отношении референсного или родительского серотипа AAV, такого как AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8, но отличаются и не являются идентичными известным генам или белкам AAV, таким как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8. В одном из вариантов осуществления модифицированный белок капсида AAV/вариант белка капсида AAV включает или состоит из последовательности, являющейся по меньшей мере на 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д. до 99,9% идентичной референсному или родительскому белку капсида AAV, такому как AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8.

[0308] Векторы rAAV можно вводить пациенту посредством инфузии в биологически совместимом носителе, например, посредством внутривенной инъекции. Векторы rAAV можно вводить в отдельности или в комбинации с другими молекулами. Таким образом, векторы rAAV и другие композиции, средства, лекарственные средства, биологические средства (белки) можно включать в фармацевтические композиции. Такие фармацевтические композиции можно использовать, в частности, для введения и доставки индивидууму in vivo или ex vivo.

[0309] В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции также содержат фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Такие эксципиенты включают любое фармацевтическое средство, само по себе не вызывающее иммунный ответ, неблагоприятный для индивидуума, которому вводят композицию, и которое можно вводить без чрезмерной токсичности.

[0310] В рамках изобретения термины "фармацевтически приемлемый" и "физиологически приемлемый" означают биологически приемлемый состав, газообразный, жидкий или твердый, или его смесь, подходящий для одного или более путей введения, доставки in vivo или приведения в контакт. "Фармацевтически приемлемая" или "физиологически приемлемая" композиция является материалом, не являющимся биологически или иным образом нежелательным, например, материал можно вводить индивидууму, не вызывая значительных нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такую фармацевтическую композицию можно использовать, например, в введении индивидууму нуклеиновой кислоты, вектора, вирусной частицы или белка.

[0311] Фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, в качестве неограничивающих примеров, жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин, сахара и этанол. Также можно включать фармацевтически приемлемые соли, например, соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Эксципиенты также включают белки, такие как альбумин. Кроме того, в таких носителях могут присутствовать вспомогательные средства, такие как увлажнители или эмульгаторы, pH-буферные вещества, и т.п.

[0312] Фармацевтическую композицию можно предоставлять в виде соли, и ее можно получать с использованием многих кислот, включая, в качестве неограничивающих примеров, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли имеют склонность быть более растворимыми в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие формы свободных оснований. В других случаях препарат может являться лиофилизированным порошком, который может содержать любое или все из следующего: 1-50 мМ гистидин, 0,1%-2% сахарозы и 2-7% маннита с диапазоном pH от 4,5 до 5,5, который комбинируют с буфером перед использованием.

[0313] Фармацевтические композиции включают растворители (водные или неводные), растворы (водные или неводные), эмульсии (например, "масло-в-воде" или "вода-в-масле"), суспензии, сиропы, эликсиры, дисперсионные и суспензионные среды, покрытия, изотонические и способствующие абсорбции или замедляющие абсорбцию средства, совместимые с фармацевтическим введением, или приведением в контакт in vivo, или доставкой. Водные и неводные растворители, растворы и суспензии могут включать суспендирующие средства и загустители. Такие фармацевтически приемлемые носители включают таблетки (с покрытием или без покрытием), капсулы (твердые или мягкие), микрочастицы, порошки, гранулы и кристаллы. В композиции также можно включать вспомогательные активные соединения (например, консерванты, антибактериальные, противовирусные и противогрибковые средства).

[0314] Фармацевтические композиции можно составлять так, чтобы они являлись совместимыми с конкретным путем введения или доставки, как указано в настоящем описании или известно специалисту в этой области. Таким образом, фармацевтические композиции включают носители, дилюенты или эксципиенты, подходящие для введения различными путями.

[0315] Композиции, подходящие для парентерального введения, содержат водные и неводные растворы, суспензии или эмульсии активного соединения, где препараты, как правило, являются стерильными и могут являться изотоническими в отношении крови предполагаемого реципиента. Неограничивающие иллюстративные примеры включают воду, забуференный физиологический раствор, раствор Хэнкса, раствор Рингера, декстрозу, фруктозу, этанол, масла животного, растительного или синтетического происхождения. Водные инъецируемые суспензии могут содержать вещества, повышающие вязкость суспензии, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран.

[0316] Кроме того, суспензии активного соединения можно получать в виде соответствующих масляных инъецируемых суспензий. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как сезамовое масло, или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Необязательно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или средства, повышающие растворимость соединений, делая возможным получение высококонцентрированных растворов.

[0317] В состав можно добавлять сорастворители и вспомогательные вещества. Неограничивающие примеры сорастворители содержат гидроксильные группы или другие полярные группы, например, спирты, такие как изопропиловый спирт; гликоли, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, простой эфир гликоля; глицерин; полиоксиэтиленовые спирты и полиоксиэтиленовые сложные эфиры жирных кислот. Вспомогательные вещества включают, например, поверхностно-активные вещества, такие как лецитин сои и олеиновая кислота; сложные эфиры сорбитана, такие как сорбитан триолеат; и поливинилпирролидон.

[0318] После получения фармацевтических композиций, их можно помещать в подходящий контейнер и помечать для лечения. Такие пометки могут включать количество, частоту и способ введения.

[0319] В этой области известны фармацевтические композиции и системы доставки, подходящие для композиций, способов и применения по изобретению (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2003) 20^th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18^th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12^th ed., Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993), Technomic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.; Ansel and Stoklosa, Pharmaceutical Calculations (2001) 11^th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD; и Poznansky et al., Drug Delivery Systems (1980), R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y., pp. 253-315).

[0320] Термины "эффективное количество" или "достаточное количество" относится к количеству, обеспечивающему в однократной или многократных дозах, в отдельности или в комбинации с одной или более другими композициями (терапевтическими или иммуносупрессорными средствами, такими как лекарственное средство), способами лечения, протоколами или средствами в рамках схем лечения детектируемый ответ любой продолжительности (долговременный или кратковременный), ожидаемый или желаемый ответ или пользу для индивидуума любой измеримой или детектируемой степени или любой продолжительности (например, в течение минут, часов, дней, месяцев, лет или с достижением излечения).

[0321] Дозы могут варьироваться и зависеть от типа, дебюта, прогрессирования, тяжести, частоты, длительности или вероятности развития заболевания, на которое направлено лечение, желаемой клинической конечной точки, предшествующего или сопутствующего лечения, общего состояния здоровья, возраста, пола, расы или иммунокомпетентности индивидуума и других факторов, которые будут известны специалистам в этой области. Вводимое количество, количество, частоту или длительность введения доз можно пропорционально повышать или снижать, на что указывают какие-либо нежелательные побочные эффекты, осложнения или другие факторы риска лечения или терапии и статус индивидуума. Специалистам в этой области будут известны факторы, которые могут влиять на дозы и время, необходимые для обеспечения количества, достаточного для обеспечения терапевтического или профилактического благоприятного эффекта.

[0322] Доза для достижения терапевтического эффекта, например, доза в векторных геномах/килограмм массы тела (ВГ/кг), будет варьироваться с учетом нескольких факторов, включая, в качестве неограничивающих примеров: путь введения, уровень экспрессии гетерологичного полинуклеотида, необходимый для достижения терапевтического эффекта, конкретное заболевание, подвергаемое лечению, любой иммунный ответ организма-хозяина на вирусный вектор, иммунный ответ организма-хозяина на гетерологичный полинуклеотид или продукт экспрессии (белок) и стабильность экспрессируемого белка. Специалист в этой области может определять диапазон доз rAAV/векторного генома для лечения пациента, имеющего конкретное заболевание или нарушение, с учетом указанных выше факторов, а также других факторов.

[0323] Как правило, дозы будут находиться в диапазоне от по меньшей мере 1×10⁸ векторных геномов на килограмм (ВГ/кг) массы тела индивидуума или более, например, 1×10⁹, 1×10¹⁰, 1×10¹¹, 1×10¹², 1×10¹³ или 1×10¹⁴ или более векторных геномов на килограмм (ВГ/кг) массы тела индивидуума для достижения терапевтического эффекта. Доза rAAV в диапазоне 1×10¹⁰-1×10¹¹ ВГ/кг у мышей и 1×10¹²-1×10¹³ ВГ/кг у собак является эффективной. Дозы могут быть меньше, например, доза может составлять менее 6×10¹² ВГ/кг. Более конкретно, доза может составлять 5×10¹¹ ВГ/кг или 1×10¹² ВГ/кг.

[0324] Дозы вектора rAAV могут находиться на уровне, как правило, на более низком конце спектра доз, таким образом, что не наблюдают существенного иммунного ответа против гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодируемого белка или ингибиторной нуклеиновой кислоты или вектора rAAV. Более конкретно, доза может составлять до, но менее 6×10¹² ВГ/кг, например, от приблизительно 5×10¹¹ до приблизительно 5×10¹² ВГ/кг, или более конкретно - приблизительно 5×10¹¹ ВГ/кг или приблизительно 1×10¹² ВГ/кг.

[0325] В рамках изобретения термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически дискретным единицам, приспособленным в виде однократных доз для индивидуума, подлежащего лечению; каждая единица содержит заранее определенное количество, необязательно, вместе с фармацевтическим носителем (эксципиентом, дилюентом, носителем или наполнителем), которое при введении в одной или более доз предназначено для вызывания желаемого эффекта (например, профилактического или терапевтического эффекта). Стандартные лекарственные формы могут находиться, например, в ампулах и флаконах, которые могут включать жидкую композицию или композицию в лиофилизированном состоянии; например, перед введением или доставкой in vivo можно добавлять стерильный жидкий носитель. Отдельные стандартные лекарственные формы можно включать в многодозовые наборы или контейнеры. Частицы rAAV и их фармацевтические композиции можно упаковывать в однократную или многократную стандартную лекарственную форму для простоты введения и единообразия дозировки.

[0326] Дозы "эффективного количества" или "достаточного количества" для лечения (например, для улучшения или обеспечения терапевтической пользы или улучшения), как правило, являются эффективными для обеспечения ответа на один, множество или все нежелательные симптомы, последствия или осложнения заболевания, один или более нежелательных симптомов, нарушений, заболеваний, патологий или осложнений, например, вызванных или ассоциированных с заболеванием, в измеримой степени, хотя снижение, ингибирование, супрессия, ограничение или контроль прогрессирования или ухудшения заболевания является удовлетворительным исходом.

[0327] Эффективное количество или достаточное количество, необязательно, можно вводить за одно введение, оно может потребовать множества введений, и его, необязательно, можно вводить в отдельности или в комбинации с другой композицией (например, средством), способом лечения, протоколом или схемой лечения. Например, количество можно пропорционально повышать в зависимости от потребностей индивидуума, типа, статуса и тяжести заболевания, подвергаемого лечению, или побочных эффектов лечения (если они есть). Кроме того, эффективное количество или достаточное количество может не являться эффективным или достаточным при введении в однократной или многократных дозах без второй композиции (например, другого лекарственного средства или средства), способа лечения, протокола или схемы лечения, т.к. можно включать дополнительные дозы, количества или длительность введения за пределам таких доз или дополнительные композиции (например, лекарственные средства или средства), способы лечения, протоколы или схемы лечения, чтобы они считались эффективными или достаточными для указанного индивидуума. Количества, считающиеся эффективными, также включают количества, приводящие к снижению использования другого лечения, схемы лечения или протокола, такого как введение модифицированной нуклеиновой кислоты, кодирующей GAA, для лечения недостаточности GAA (например, болезни Помпе) или другого гликогеноза.

[0328] Таким образом, способы и применение по изобретению также включают, в частности, способы и применение, приводящие к сниженной потребности или использованию другого соединения, средства, лекарственного средства, схемы лечения, протокола лечения, способа или лекарственного средства. Например, в случае недостаточности GAA способ или применение по изобретению имеют терапевтическую пользу, если у указанного индивидуума используют реже вводимую или сниженную дозу или устраняют введение рекомбинантной GAA для восполнения недостаточной или дефектной GAA у индивидуума. Таким образом, изобретение относится к способам и применению для снижения потребности или использования другого лечения или терапии.

[0329] Эффективное количество или достаточное количество может не являться эффективным ни для каждого индивидуума, подвергаемого лечению, ни для большинства индивидуумов, подвергаемых лечению, в указанной группе или популяции. Эффективное количество или достаточное количество означает эффективность или достаточность для конкретного индивидуума, а не группы или общей популяции. Что характерно для таких способов, некоторые индивидуумы будут демонстрировать больший ответ или меньший ответ или не демонстрировать ответ на указанный способ лечения или применение.

[0330] Введение или доставку in vivo индивидууму можно осуществлять до развития нежелательного симптома, состояния, осложнения и т.д., вызванного или ассоциированного с заболеванием. Например, можно использовать скрининг (например, генетический) для идентификации таких индивидуумов как кандидатов для композиций, способов и применению по изобретению. Таким образом, такие индивидуумы включают индивидуумов, положительных по результатам скрининга по недостаточному количеству или недостаточности функционального продукта гена (например, недостаточности GAA или белка, приводящей к GSD), или у которых продуцируется аномальный, частично функциональный или нефункциональный продукт гена (например, GAA или белок, вовлеченный в GSD).

[0331] Введение или доставку in vivo индивидууму в соответствии со способами и применению по изобретению, как представлено в настоящем описании, можно осуществлять на практике в пределах 1-2, 2-4, 4-12, 12-24 или 24-72 часов после идентификации индивидуума как имеющего заболевание, намеченное для лечения, имеющего один или более симптомов заболевания или подвергнутого скринингу и идентифицированного как положительного, как указано в настоящем описании, даже если индивидуум не имеет одного или более симптомов заболевания. Разумеется, способы и применение по изобретению можно осуществлять на практике через 1-7, 7-14, 14-24, 24-48, 48-64 или более дней, месяцев или лет после того, как индивидуума идентифицировали как имеющего заболевание, намеченное для лечения, имеющего один или более симптомов заболевания или подвергнутого скринингу и идентифицированного как положительного, как указано в настоящем описании.

[0332] Термин "улучшать" означает детектируемое или измеримое улучшение заболевания индивидуума или его симптома или лежащего в его основе клеточного ответа. Детектируемое или измеримое улучшение включает субъективное или объективное снижение, уменьшение, ингибирование, супрессию, ограничение или контроль возникновения, частоты, тяжести, прогрессирования или длительности заболевания или осложнения, вызванного или ассоциированного с заболеванием, или улучшение симптома, или основополагающей причины, или следствия заболевания или реверсирование заболевания.

[0333] В случае болезни Помпе, эффективное количество будет являться количеством, например, ингибирующим или снижающим продукцию или накопление гликогена, повышающим или увеличивающим деградацию или удаление гликогена. Эффективное количество также будет являться количеством, улучшающим проблемы с приемом пищи и/или отсутствием набора веса; плохой контроль головы и/или шеи; проблемы с дыханием и/или легочные инфекции; увеличение и/или утолщение сердца; пороки сердца; увеличение языка; проблемы с глотанием; увеличение печени; низкая мышечная сила; низкий мышечный тонус; слабость в ногах, области талии и/или руках; одышка; проблемы с выполнением физических упражнений; трудности с дыханием во время сна; искривление позвоночника и/или анкилоз; низкий мышечный тонус и/или отсутствие мышечной силы. Эффективное количество также будет являться количеством, снижающим или ингибирующим один или более симптомов, или предотвращающим или снижающим прогрессирование или ухудшение одного или более симптомов, или стабилизирующим один или более симптомов, или улучшающим один или более симптомов у пациента или индивидуума, нуждающегося в GAA или имеющего болезнь Помпе.

[0334] Терапевтические дозы будут зависеть, помимо других факторов, от возраста и общего состояния здоровья индивидуума, тяжести заболевания или нарушения. Терапевтически эффективное количество у людей будет попадать в относительно широкий диапазон, который может определять медицинский персонал с учетом ответа отдельного пациента.

[0335] Композиции, такие как фармацевтические композиции, можно вводить индивидууму таким образом, чтобы сделать возможной продукцию кодируемого белка. В конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции содержат достаточный генетический материал, чтобы реципиент мог продуцировать терапевтически эффективное количество белка.

[0336] Композиции можно составлять и/или вводить в любом стерильном, биосовместимом фармацевтическом носителе, включая, в качестве неограничивающих примеров, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу и воду. Композиции можно составлять и/или вводить пациенту в отдельности или в комбинации с другими средствами (например, кофакторами), влияющими на гемостаз.

[0337] Способы и применение по изобретению включают доставку и введение системно, местно или локально или любым путем, например, посредством инъекции или инфузии. Доставку фармацевтических композиций in vivo, как правило, можно осуществлять посредством инъекции с использованием общепринятого шприца, хотя предусмотрены другие способы доставки, такие как конвекционная доставка (см. например, патент США № 5720720). Например, композиции можно вводить подкожно, эпидермально, внутрикожно, интратекально, интраорбитально, внутрислизисто, интраназально, интраперитонеально, внутривенно, внутриплеврально, внутриартериально, внутриполостно, перорально, внутрипеченочно, через воротную вену или внутримышечно. Другие способы введения включают пероральное и легочное введение, суппозитории и трансдермальное введение. Клиницист, специализирующийся на лечении пациентов с болезнью Помпе или другими гликогенозами, может определять оптимальный путь для введения векторов аденоассоциированного вируса с учетом ряда критериев, включая, в качестве неограничивающих примеров: состояние пациента и цель лечения (например, повышенные или пониженные уровни GAA).

[0338] Композиции можно вводить в отдельности. В некоторых вариантах осуществления частица rAAV обеспечивает терапевтический эффект без иммуносупрессорного средства. Терапевтический эффект, необязательно, сохраняется в течение периода времени, например, 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30 или 30-50 дней или более, например, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 дней или более без введения иммуносупрессорного средства. Таким образом, обеспечивают терапевтический эффект в течение периода времени.

[0339] Векторы rAAV, способы и применение по изобретению можно комбинировать с любым соединением, средством, лекарственным средством, лечением или другой схемой лечения или протоколом, имеющими желаемую терапевтическую, благоприятную, аддитивную, синергическую или комплементарную активность или эффект. Примеры комбинированных композиций и способов лечения включают вторые активные вещества, такие как биологические средства (белки), средства (например, иммуносупрессорные средства) и лекарственные средства. Такие биологические средства (белки), средства, лекарственные средства, способы лечения и терапии можно вводить или осуществлять до, по существу, одновременно или после любого другого способа или применения по изобретению.

[0340] Соединение, средство, лекарственное средство, лечение или другую схему лечения или протокол можно использовать в качестве комбинированной композиции или использовать раздельно, например, одновременно или последовательно (до или после) доставки или введения нуклеиновой кислоты, вектора или частицы rAAV. Таким образом, настоящее изобретение относится к комбинациям, в которых способ или применение по изобретению находятся в комбинации с любым соединением, средством, лекарственным средством, схемой лечения, протоколом лечения, способом лечения, лекарственным средством или композицией, приведенными в настоящем описании или известными специалисту в этой области. Соединение, средство, лекарственное средство, схему лечения, протокол лечения, способ лечения, лекарственное средство или композицию можно вводить или осуществлять до, по существу, одновременно или после введения нуклеиновой кислоты, вектора или частицы rAAV по изобретению индивидууму.

[0341] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновую кислоту, вектор или частицу rAAV по изобретению вводят пациенту в комбинации с иммуносупрессорным средством или схемой лечения, где пациент имеет иммунный ответ или имеет риск развития иммунного ответа против частицы rAAV и/или белка GAA. Такое иммуносупрессорное средство или схему лечения можно использовать до, по существу, одновременно или после введения нуклеиновой кислоты, вектора или вектора rAAV по изобретению.

[0342] В некоторых вариантах осуществления у индивидуума или пациента, такого как пациент-человек, с болезнью Помпе появляются ингибиторы к белку GAA (включая антитела против GAA и/или T-клетки против GAA), которые могут возникать после лечения с использованием общепринятой заместительной ферментной терапии (например, после введения рекомбинантно полученного белка GAA). Такие ингибиторов GAA могут появляться у пациентов, подвергаемых заместительной ферментной терапии, в частности, если пациент имеет недетектируемые уровни GAA (что может происходить в случае инфантильной формы болезни Помпе), что приводит к тому, что иммунная система пациента распознает заменяющий белок GAA в качестве "чужеродного". В некоторых вариантах осуществления для пациента с болезнью Помпе, имеющего ингибиторы GAA, используют одну или более схем лечения, предназначенных для достижения иммунологической толерантности или уменьшения иммунного ответа на белок GAA у пациента до, по существу, одновременно или после введения вектора rAAV по изобретению. Такие схемы для достижения иммунологической толерантности или уменьшения иммунного ответа на белок GAA могут включать введение одного или более иммуносупрессорных средств, включая, в качестве неограничивающих примеров, метотрексат, ритуксимаб, внутривенный гаммаглобулин (IVIG), омализумаб и рапамицин в синтетических вакцинных частицах (SVP™) (рапамицин, инкапсулированный в биодеградируемую наночастицу), и/или использование одного или более способов иммуносупрессии, таких как истощение B-клеток, иммуноадсорбция и плазмаферез.

[0343] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят в комбинации с одним или более иммуносупрессорными средствами до, по существу, одновременно или после введения вектора rAAV. В некоторых вариантах осуществления проходит, например, 1-12, 12-24 или 24-48 часов или 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30, 30-50 или более 50 дней после введения вектора rAAV. Такое введение иммуносупрессорных средств осуществляют после периода времени после введения вектора rAAV, если наблюдают снижение кодируемого белка или ингибиторной нуклеиновой кислоты после исходных уровней экспрессии в течение периода времени, например, 20-25, 25-30, 30-50, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 или более 200 дней после введения вектора rAAV.

[0344] В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессорное средство является противовоспалительным средством. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессорное средство является стероидом, например, кортикостероидом. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессорное средство является преднизоном, преднизолоном, циклоспорином (например, циклоспорином A), микофенолатом, антителом против B-клеток, например, ритуксимабом; ингибитором протеасом, например, бортезомибом; ингибитором мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR), например, рапамицином; ингибитором тирозинкиназ, например, ибрутинибом; ингибитором фактора активации B-клеток (BAFF); или ингибитором индуцирующего пролиферации лиганда (APRIL) или его производным. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессорное средство является средством против ИЛ-1β (например, моноклональным антителом против ИЛ-1β канакинумабом (Ilaris^®)) или средством против ИЛ-6 (например, антителом против ИЛ-6 сирукумабом или антителом против рецептора ИЛ-6 тоцилизумабом (Actemra^®)) или их комбинацией.

[0345] Способы иммуносупрессии, включая использование рапамицина, в отдельности или в комбинации с ИЛ-10, можно использовать для снижения, уменьшения, ингибирования, профилактики или блокирования гуморальных и клеточных иммунных ответов на белок GAA. Перенос печеночных генов с использованием векторов AAV по изобретению можно использовать для индуцирования иммунологической толерантности к белку GAA посредством индуцирования регуляторных T-клеток (T_reg) и других механизмов. Стратегии для снижения (преодоления) или избежания гуморального ответа на AAV при системном переносе генов включают введение высоких доз вектора, использование пустых капсидов AAV в качестве ловушек для адсорбции антител против AAV, введение иммуносупрессорных лекарственных средств для снижения, уменьшения, ингибирования, профилактики или эрадикации гуморального иммунного ответа на AAV, изменение серотипа капсида AAV или конструирование капсида AAV так, чтобы он был менее восприимчивым к нейтрализующим антителам, использование циклов плазмообмена для адсорбции иммуноглобулинов против AAV и, таким образом, снижение титра антител против AAV и использование способов доставки, таких как использование баллонных катетеров с последующей промывкой физиологическим раствором. Такие стратегии описаны в Mingozzi et al., 2013, Blood, 122:23-36. Обзор способов и подходов для индуцирования толерантности к GAA у пациентов с болезнью Помпе для улучшения терапевтического лечения приведен в Doerfler et al., 2016, Mol. Ther., 3:15053.

[0346] Соотношение пустых капсидов AAV и вектора rAAV может составлять в пределах или приблизительно 100:1-50:1, приблизительно 50:1-25:1, приблизительно 25:1-10:1, приблизительно 10:1-1:1, приблизительно 1:1-1:10, приблизительно 1:10-1:25, приблизительно 1:25-1:50 или приблизительно 1:50-1:100. Соотношения также могут составлять приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.

[0347] Количества пустых капсидов AAV для введения можно калибровать с учетом количества (титра) антител против AAV, продуцирующихся у конкретного индивидуума. Пустые капсиды AAV могут иметь любой серотип, например, AAV (SEQ ID NO: 30-32), LK03 (SEQ ID NO: 33), AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B или AAV-2i8.

[0348] Альтернативно или дополнительно, вектор rAAV можно доставлять посредством прямой внутримышечной инъекции (например, в одно или более медленных мышечных волокон). В другом альтернативном примере для доставки векторов rAAV в печень через печеночную артерию можно использовать катетер, введенный в бедренную артерию. Также можно использовать нехирургические способы, такие как эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография (ERCP), для доставки векторов rAAV напрямую в печень, таким образом, обходя кровоток и антитела против AAV. В качестве входных ворот для доставки векторов rAAV индивидууму, у которого возникли или уже были антитела против AAV, также можно использовать другие протоковые системы, такие как протоки подчелюстной железы.

[0349] Дополнительные стратегии для снижения гуморального иммунитета к AAV включают способы удаления, истощения, захвата и/или инактивации антител против AAV, общепринято обозначаемые как аферез и, более конкретно, плазмаферез, включающие препараты крови. Аферез или плазмаферез является способом, при котором плазма человека циркулирует ex vivo (экстракорпорально) через устройство, модифицирующее плазму посредством добавления, удаления и/или замены компонентов перед их возвращением пациенту. Плазмаферез можно использовать для удаления иммуноглобулинов человека (например, IgG, IgE, IgA, IgD) из препарата крови (например, плазмы). Этим способом истощают, захватывают, инактивируют, снижают или удаляют иммуноглобулины (антитела), связывающиеся с AAV, таким образом, снижая титр антител против AAV у индивидуума, подвергаемого лечению, которые могут участвовать в нейтрализации вектора AAV. Примером является устройство, состоящее из матричной аффинной колонки для капсида AAV. Пропуская препарат крови (например, плазму) через аффинную матрицу для капсида AAV будет приводить к связыванию только антител против AAV, и при этом, всех изотипов (включая IgG, IgM и т.д.).

[0350] Прогнозируют, что достаточная степень плазмафереза с использованием аффинной матрицы для капсида AAV будет приводить, по существу, к удалению антител против капсида AAV и снижению титра (нагрузки) антитела против капсида AAV у человека. В некоторых вариантах осуществления титр у индивидуума, подвергаемого лечению, снижают, по существу, до низких уровней (до <1:5 или менее, таких как < 1:4, или < 1:3, или <1:2, или < 1:1). Снижение титра антител будет временным, т.к. будут ожидать, что B-лимфоциты, продуцирующие антитела против капсида AAV, будут постепенно вызывать восстановление титра антител против капсида AAV до равновесного уровня перед плазмаферезом.

[0351] В случае, если титр уже существующих антител против AAV снижался с 1:100 до 1:1, титр антител против AAV восстанавливается на приблизительно 0,15% (что соответствует титру 1:1,2), 0,43% (1:1,4), 0,9% (1:1,9), 1,7% (1:2,7) и 3,4% (1:4,4) через 1 час, 3 часа, 6 часов, 12 часов и 24 часа, соответственно, после завершения плазмафереза. Временное удаление антител против AAV из такого индивидуума будет соответствовать временному окну (например, приблизительно 24 часа или менее, например, 12 часов или менее, или 6 часов или менее, или 3 часов или менее, или 2 часа или менее, или 1 час или менее), в течение которого вектор AAV можно вводить индивидууму и, как прогнозируют, эффективно трансдуцировать целевые ткани без существенной нейтрализации вектора AAV антителами против AAV.

[0352] В случае, если титр уже существующих антител против AAV снижался с 1:1000 до 1:1, титр антител против AAV восстанавливается на приблизительно 0,15% (то соответствует титру 1:2,5) 0,4% (1:5,3), 0,9% (1:9,7), 1,7% (1:18) и 3,4% (1:35) через 1 час, 3 часа, 6 часов, 12 часов и 24 часа, соответственно, после завершения плазмафереза. Таким образом, окно для введения вектора AAV будет являться сравнительно коротким.

[0353] Антитела против AAV могут уже существовать и могут присутствовать на уровнях, снижающих или блокирующих терапевтический перенос гена GAA посредством трансдукции вектором клеток-мишеней. Альтернативно, антитела против AAV могут возникать после воздействия AAV или введения вектора AAV. Если такие антитела возникают после введения вектора AAV, этих индивидуумов также можно лечить посредством афереза, более конкретно, плазмафереза.

[0354] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и векторы AAV по изобретению можно использовать в комбинации с симптоматической и поддерживающей терапией, включая, например, респираторную поддержку (включая механическую вентиляцию), физиотерапию для укрепления мышц, физиотерапию для улучшения силы и физических возможностей, эрготерапию, включая использование тростей, ходунков и инвалидной коляски, логопедическое лечение для улучшения артикуляции и речи, использование ортопедических устройств, включая ортопедические аппараты, и лечебное питание и зонды для кормления для обеспечения правильного питания и увеличения массы.

[0355] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и векторы AAV по изобретению можно использовать в комбинации с фармакологической шаперонотерапией (также известной как терапия ферментативного усиления), где один или более фармакологических шаперонов вводят до, одновременно или после введения нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты или векторов AAV по изобретению для лечения GSD, такого как болезнь Помпе.

[0356] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и векторы AAV по изобретению можно использовать в комбинации с одним или более фармакологическими шаперонами, которые могут стабилизировать белок GAA. Фармакологические шапероны, которые можно использовать в комбинации с нуклеиновыми кислотами, экспрессирующими кассетами и векторами AAV по изобретению, включают 1-дезоксиноджиримицин (1-DNJ, также известный как дивоглустат), N-бутил-1-дезоксиноджиримицин (также известный как миглустат), N-метил-DNJ, N-этил-DNJ, N-пропил-DNJ, N-пентил-DNJ, N-гексил-DNJ, N-гептил-DNJ, N-октил-DNJ, N-нонил-DNJ, N-метилциклопропил-DNJ, N-метилциклопентил-DNJ, N-2-гидроксиэтил-DNJ, 5-N-карбоксипентил-DNJ и фармакологические шапероны, описанные в патентах США №№ 6599919 и 9181184 и публикации международной патентной заявки № WO/2013/182652.

[0357] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и векторы AAV по изобретению можно использовать в комбинации с адъюнктивной терапией с использованием одного или более β2-агонистов, включая, например, кленбутерол, альбутерол, формотерол и салметерол, и как описано в публикации международной патентной заявки № WO/2017/049161.

[0358] В конкретных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты и экспрессирующие кассеты по изобретению доставляют или вводят с помощью векторных частиц AAV. В других вариантах осуществления нуклеиновые кислоты и экспрессирующие кассеты по изобретению можно доставлять или вводить с помощью других типов вирусных частиц, включая ретровирусные, аденовирусные, хелпер-зависимые аденовирусные, гибридные аденовирусные частицы, частицы вируса простого герпеса, лентивирусные частицы, частицы поксвируса, частицы вируса Эпштейна-Барр, частицы вируса осповакцины и частицы цитомегаловируса человека.

[0359] В других вариантах осуществления нуклеиновые кислоты и экспрессирующие кассеты по изобретению доставляют или вводят с помощью невирусной системы доставки. Невирусные системы доставки включают, например, химические способы, например, с использованием липосом, наночастиц, липидных наночастиц, полимеров, микрочастиц, микрокапсул, мицелл или внеклеточных везикул, и физические способы, такие как генная пушка, электропорация, бомбардировка частицами, обработка ультразвуком и магнитофекция.

[0360] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты и экспрессирующие кассеты по изобретению доставляют в виде депротеинизированной ДНК, миниколец, транспозонов или линейной дуплексной ДНК с тупыми концами.

[0361] В других вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, и экспрессирующие кассеты по изобретению доставляют или вводят в частицах вектора AAV или других вирусных частицах, которые дополнительно инкапсулируют или комплексируют с липосомами, наночастицами, липидными наночастицами, полимерами, микрочастицами, микрокапсулами, мицеллами или внеклеточными везикулами.

[0362] Термин "липидная наночастица" или "LNP" относится к везикуле на основе липидов, которую можно использовать для доставки AAV и имеющей размеры в нанодиапазоне, т.е. от приблизительно 10 нм до приблизительно 1000 нм, или от приблизительно 50 до приблизительно 500 нм, или от приблизительно 75 до приблизительно 127 нм. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что LNP обеспечивают нуклеиновую кислоту, экспрессирующую кассету или вектор AAV частичным или полным экранированием от иммунной системы. Экранирование делает возможной доставку нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты или вектора AAV в ткань или клетку, позволяя избегать индуцирования значительного иммунного ответа против нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты или вектора AAV in vivo. Экранирование также может сделать возможным повторное введение без индуцирования значительного иммунного ответа против нуклеиновой кислоты, экспрессирующего вектора или вектора AAV in vivo (например, у индивидуума, такого как человек). Экранирование также может улучшать или повышать эффективность доставки нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты или вектора AAV in vivo.

[0363] pI (изоэлектрическая точка) AAV находится в диапазоне от приблизительно 6 до приблизительно 6,5. Таким образом, поверхность AAV несет немного отрицательный заряд. В связи с этим, благоприятным может являться, если LNP будет содержать катионный липид, такой как, например, аминолипид. Примеры аминолипидов описаны в патентах США №№ 9352042, 9220683, 9186325, 9139554, 9126966 9018187, 8999351, 8722082, 8642076, 8569256, 8466122 и 7745651 и патентных публикациях США №№ 2016/0213785, 2016/0199485, 2015/0265708, 2014/0288146, 2013/0123338, 2013/0116307, 2013/0064894, 2012/0172411 и 2010/0117125.

[0364] Термины "катионный липид" и "аминолипид" используют в настоящем описании взаимозаменяемо для включения липидов и их солей, имеющих одну, две, три или более цепей жирных кислот или жирных алкилов и pH-титруемых аминогрупп (например, алкиламино- или диалкиламиногрупп). Катионный липид, как правило, является протонированным (т.е. положительно заряженным) при pH ниже pKa катионного липида и, по существу, нейтральным при pH выше pKa. Катионные липиды также могут являться титруемыми катионными липидами. В некоторых вариантах осуществления катионные содержат: протонируемую третичную аминогруппу (например, pH-титруемую); C18-алкильные цепи, где каждая алкильная цепь независимо имеет от 0 до 3 (например, 0, 1, 2 или 3) двойных связей; и простые эфирные связи, сложноэфирные связи или кетальные связи между концевой группой и алкильными цепями.

[0365] Катионные липиды могут включать, в качестве неограничивающих примеров, 1,2-дилинолеилокси-N, N-диметиламинопропан (DLinDMA), 1,2-дилиноленилокси-N, N-диметиламинопропан (DLenDMA), 1,2-ди-γ-линоленилокси-N, N-диметиламинопропан (γ-DLenDMA), 2,2-дилиолеил-4-(2-диметиламиноэтил)-[1,3]-диоксолан (DLin-K-C2-DMA, также известный как DLin-C2K-DMA, XTC2 и C2K), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил-[1,3]-диоксолан (DLin-K-DMA), дилинолеилметил-3-диметиламинопропионат (DLin-M-C2-DMA, также известный как MC2), (6Z,9Z,28Z,31 Z)-гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил 4-(диметиламино)бутаноат (DLin-M-C3-DMA, также известный как MC3), их соли и смеси. Другие катионные липиды также включают, в качестве неограничивающих примеров, 1,2-дистеарилокси-N, N-диметил-3-аминопропан (DSDMA), 1,2-диолеилокси-N, N-диметил-3-аминопропан (DODMA), 2,2-дилинолеил-4-(3-диметиламинопропил)-[1,3]-диоксолан (DLin-K-C3-DMA), 2,2-дилинолеил-4-(3-диметиламинобутил)-[1,3]-диоксолан (DLin-K-C4-DMA), DLen-C2K-DMA, γ-DLen-C2K-DMA и (DLin-MP-DMA) (также известный как 1-B11).

[0366] Дополнительные катионные липиды могут включать, в качестве неограничивающих примеров, 2,2-дилинолеил-5-диметиламинометил-[1,3]-диоксан (DLin-K6-DMA), 2,2-дилинолеил-4-N-метилпиперазино-[1,3]-диоксолан (DLin-K-MPZ), 1,2-дилинолеилкарбамоилокси-3-диметиламинопропан (DLin-C-DAP), 1,2-дилинолеилокси-3-(диметиламино)ацетоксипропан (DLin-DAC), 1,2-дилинолеилокси-3-морфолинопропан (DLin-MA), 1,2-дилинолеоил-3-диметиламинопропан (DLinDAP), 1,2-дилинолеилтио-3-диметиламинопропан (DLin-S-DMA), 1-линолеоил-2-линолеилокси-3-диметиламинопропан (DLin-2-DMAP), хлорид 1,2-дилинолеилокси-3-триметиламинопропана (DLin-TMA.Cl), хлорид 1,2-дилинолеоил-3-триметиламинопропан (DLin-TAP.Cl), 1,2-дилинолеилокси-3-(N-метилпиперазинo)пропан (DLin-MPZ), 3-(N, N-дилинолеиламино)-1,2-пропандиол (DLinAP), 3-(N, N-диолеиламино)-1,2-пропандиол (DOAP), 1,2-дилинолеилоксо-3-(2-N, N-диметиламино)этоксипропан (DLin-EG-DMA), хлорид N, N-диолеил-N, N-диметиламмония (DODAC), хлорид N-(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-N, N,N-триметиламмония (DOTMA), бромид N, N-дистеарил-N, N-диметиламмония (DDAB), хлорид N-(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-N, N,N-триметиламмония (DOTAP), 3-(N-(N',N'-диметиламиноэтан)-карбамоил)холестерин (DC-Chol), бромид N-(1,2-димиристилоксипроп-3-ил)-N, N-диметил-N-гидроксиэтиламмония (DMRIE), трифторацетат 2,3-диолеилокси-N-[2(спермин-карбоксамидо)этил]-N, N-диметил-1-пропанаминия (DOSPA), диоктадециламидоглицилспермин (DOGS), 3-диметиламино-2-(холест-5-ен-3-бета-оксибутан-4-окси)-1-(цис, цис-9,12-октадекадиенокси)пропан (CLinDMA), 2-[5'-(холест-5-ен-3-бета-окси)-3'-оксапентокси)-3-диметил-1-(цис, цис-9',1-2'-октадекадиенокси)пропан (CpLinDMA), N, N-диметил-3,4-диолеилоксибензиламин (DMOBA), 1,2-N, N'-диолеилкарбамил-3-диметиламинопропан (DOcarbDAP), 1,2-N, N'-дилинолеилкарбамил-3-диметиламинопропан (DLincarbDAP), дексаметазон-спермин (DS) и дизамещенный спермин (D2S) или их смеси.

[0367] Можно использовать ряд коммерческих препаратов катионных липидов, таких как LIPOFECTIN® (включая DOTMA и DOPE, доступные в GIBCO/BRL) и LIPOFECTAMINE® (содержащие DOSPA и DOPE, доступные в GIBCO/BRL).

[0368] В некоторых вариантах осуществления катионный липид может присутствовать в количестве от приблизительно 10% по массе LNP до приблизительно 85% по массе липидной наночастицы или от приблизительно 50% по массе LNP до приблизительно 75% по массе LNP.

[0369] Стерины могут придавать LNP текучесть. В рамках изобретения термин "стерин" относится к любому природному стерину растительного (фитостерины) или животного (зоостерины) происхождения, а также неприродным синтетическим стеринам, все из которых отличаются наличием гидроксильной группы в 3-положении стероидного A-кольца. Стерин может являться любым стерином, общепринято используемым в области получения липосом, липидных везикул или липидных частиц, чаще всего - холестерином. Фитостерины могут включать кампестерин, ситостерин и стигмастерин. Стерины также включают стерин-модифицированные липиды, такие как липиды, описанные в публикации патентной заявки США № 2011/0177156. В некоторых вариантах осуществления стерин может присутствовать в количестве от приблизительно 5% по массе LNP до приблизительно 50% по массе липидной наночастицы или от приблизительно 10% по массе LNP до приблизительно 25% по массе LNP.

[0370] LNP может содержать нейтральный липид. Нейтральные липиды могут содержать любой тип липидов, существующих в незаряженной или нейтральной цвиттерионной форме при физиологическом pH. Такие липиды включают, в качестве неограничивающих примеров, диацилфосфатидилхолин, диацилфосфатидилэтаноламин, церамид, сфингомиелин, дигидросфингомиелин, цефалин и цереброзиды. При выборе нейтральных липидов, как правило, руководствуются, помимо прочего, размером частиц и необходимой стабильностью. В некоторых вариантах осуществления нейтральный липидный компонент может являться липидом, имеющим две ацильные группы (например, диацилфосфатидилхолином и диацилфосфатидилэтаноламином).

[0371] Доступны липиды, имеющие различные ацильные группы с разной длиной цепи и степенью насыщения, или их можно выделять или синтезировать хорошо известными способами. В некоторых вариантах осуществления можно использовать липиды, содержащие насыщенные жирные кислоты с длиной углеродной цепи в диапазоне от C14 до C22. В другой группе вариантов осуществления используют липиды с моно- или диненасыщенными жирными кислотами с длиной углеродной цепи в диапазоне от C14 до C22. Кроме того, можно использовать липиды, имеющие смеси цепей насыщенных и ненасыщенных жирных кислот. Примеры нейтральных липидов включают, в качестве неограничивающих примеров, 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидил-этаноламин (DOPE), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DSPC), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (POPC) или любой родственный фосфатидилхолин. Нейтральные липиды также могут состоять из сфингомиелина, дигидросфингомиелина или фосфолипидов с другими концевыми группами, такими как серин и инозитол.

[0372] В некоторых вариантах осуществления нейтральный липид может присутствовать в количестве от приблизительно 0,1% по массе липидной наночастицы до приблизительно 75% по массе LNP или от приблизительно 5% по массе LNP до приблизительно 15% по массе LNP.

[0373] Инкапсулированные в LNP нуклеиновые кислоты, экспрессирующие кассеты и вектор AAV можно включать в фармацевтические композиции, например, фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Такие фармацевтические композиции можно использовать, в частности, для введения и доставки инкапсулированных в LNP нуклеиновых кислот, экспрессирующих кассет и вектора AAV индивидууму in vivo или ex vivo.

[0374] Препараты LNP можно комбинировать с дополнительными компонентами. Неограничивающие примеры включают полиэтиленгликоль (PEG) и стерины.

[0375] Термин "PEG" относится к полиэтиленгликолю, линейному, водорастворимому полимеру повторяющихся единиц PEG с двумя концевыми гидроксильными группами. PEG классифицируют по их молекулярным массам; например, PEG 2000 имеет среднюю молекулярную массу приблизительно 2000 Дальтон, и PEG 5000 имеет среднюю молекулярную массу приблизительно 5000 Дальтон. PEG являются коммерчески доступными в Sigma Chemical Co. и других компаниях и включают, например, следующие функциональные PEG: монометоксиполиэтиленгликоль (MePEG-OH), монометоксиполиэтиленгликоль-сукцинат (MePEG-S), монометоксиполиэтиленгликоль-сукцинимидилсукцинат (MePEG-S-NHS), монометоксиполиэтиленгликоль-амин (MePEG-NH2), монометоксиполиэтиленгликоль-трезилат (MePEG-TRES) и монометоксиполиэтиленгликоль-имидазолили-карбонил (MePEG-IM).

[0376] В некоторых вариантах осуществления PEG может являться полиэтиленгликолем со средней молекулярной массой от приблизительно 550 до приблизительно 10000 Дальтон и, необязательно, замещен алкилом, алкоксигруппой, ацилом или арилом. В некоторых вариантах осуществления PEG может быть замещен метилом в положении концевого гидроксила. В другом предпочтительном варианте осуществления PEG может иметь среднюю молекулярную массу от приблизительно 750 до приблизительно 5000 Дальтон, или от приблизительно 1000 до приблизительно 5000 Дальтон, или от приблизительно 1500 до приблизительно 3000 Дальтон, или приблизительно 2000 Дальтон, или приблизительно 750 Дальтон. PEG может являться необязательно замещенным алкилом, алкоксигруппой, ацилом или арилом. В некоторых вариантах осуществления концевую гидроксильную группу можно замещать метоксигруппой или метилом.

[0377] PEG-модифицированные липиды включают конъюгаты PEG-диалкилоксипропил (PEG-DAA), описанные в патентах США №№ 8936942 и 7803397. PEG-модифицированные липиды (или конъюгаты липид-полиоксиэтилен), которые можно использовать, могут иметь различные "якорные" липидные части для прикрепления PEG-части к поверхности липидной везикулы. Примеры подходящих PEG-модифицированных липидов включают PEG-модифицированный фосфатидилэтаноламин и фосфатидную кислоту, конъюгаты PEG-церамид (например, PEG-CerC14 или PEG-CerC20), описанные в патенте США № 5820873, PEG-модифицированные диалкиламины и PEG-модифицированные 1,2-диацилоксипропан-3-амины. В некоторых вариантах осуществления PEG-модифицированный липид может представлять собой PEG-модифицированные диацилглицерины и диалкилглицерины. В некоторых вариантах осуществления PEG может находиться в количестве от приблизительно 0,5% по массе LNP до приблизительно 20% по массе LNP или от приблизительно 5% по массе LNP до приблизительно 15% по массе LNP.

[0378] Кроме того, LNP может являться PEG-модифицированной и стерин-модифицированной LNP. LNP, комбинированные с дополнительными компонентами, могут быть одними и теми же или отдельными LNP. Другими словами, одна и та же LNP может являться PEG-модифицированной и стерин-модифицированной или, альтернативно, первая LNP может являться PEG-модифицированной, а вторая LNP может являться стерин-модифицированной. Необязательно, можно комбинировать первую и вторую модифицированные LNP.

[0379] В некоторых вариантах осуществления перед инкапсуляцией LNP могут иметь размер в диапазоне приблизительно от 10 нм до 500 нм, или от приблизительно 50 нм до приблизительно 200 нм, или от 75 нм до приблизительно 125 нм. В некоторых вариантах осуществления LNP, в которой инкапсулируют нуклеиновую кислоту, экспрессирующий вектор или вектор AAV, может иметь размер в диапазоне приблизительно от 10 нм до 500 нм.

[0380] Рекомбинантные клетки, способные экспрессировать последовательности GAA по изобретению, можно использовать для доставки или введения.

[0381] Для введения или доставки лентивирусных векторов можно использовать депротеинизированную ДНК, такую как миникольца и транспозоны. Кроме того, для доставки кодирующей последовательности по изобретению также можно использовать технологии редактирования генома, такие как нуклеазы с цинковыми пальцами, мегануклеазы, TALEN и CRISPR.

[0382] Гликогеноз (GSD) является результатом отсутствия фермента, в конечном итоге превращающего соединения гликогена в глюкозу. Недостаточность фермента приводит к накоплению гликогена в тканях. Во многих случаях дефект имеет системные последствия, но в некоторых случаях дефект ограничен конкретными тканями. Большинство пациентов испытывают мышечные симптомы, такие как слабость и спазмы, хотя некоторые GSD манифестируют в виде конкретных синдромов, таких как гипогликемические судороги или кардиомегалия.

[0383] Далее приведены неограничивающие примеры GSD:

0 - недостаточность гликогенсинтазы; Ia - недостаточность глюкозо-6-фосфатазы (болезнь Гирке); II - недостаточность кислой мальтазы (болезнь Помпе); III - недостаточность деветвящего фермента (болезнь Форбса); IV - недостаточность трансглюкозидазы (болезнь Андерсен, амилопектиноз); V - недостаточность миофосфорилазы (болезнь Мак-Ардла); VI - недостаточность фосфорилазы (болезнь Герса); и VII - недостаточность фосфофруктокиназы (болезнь Таруи).

[0384] Различные формы GSD влияют на пути метаболизма углеводов. Хотя в литературе описано по меньшей мере 14 уникальных GSD, четырьмя, вызывающими клинически значимую мышечную слабость, являются болезнь Помпе (GSD типа II, недостаточность кислой мальтазы), болезнь Форбса (GSD типа IIIa, недостаточность деветвящего фермента), болезнь Мак-Ардла (GSD типа V, недостаточность миофосфорилазы) и болезнь Таруи (GSD типа VII, недостаточность фосфофруктокиназы). Одна из форм, болезнь Гирке (GSD типа Ia, недостаточность глюкозо-6-фосфатазы), вызывает клинически значимое ишемическое повреждение органов со значительной заболеваемостью.

[0385] В основном, GSD наследуются как аутосомно-рецессивные состояния. Эти наследуемые дефекты ферментов, как правило, проявляются в детстве, хотя некоторые, такие как болезнь Мак-Ардла и болезнь Помпе, имеют отдельные формы с поздним началом.

[0386] GSD можно лечить посредством заместительной ферментной терапии (ERT), например, с использование рекомбинантно получаемой GAA. Заместительная ферментная терапия является одобренным лечением для всех пациентов с болезнью Помпе. Она включает внутривенное введение рекомбинантной кислой α-глюкозидазы человека. Этим лекарственным средством, производимое Genzyme, корпорацией Sanofi, является лумизим (продаваемый как миозим вне США), и впервые одобренный Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в 2006 году. Он одобрен для всех пациентов с болезнью Помпе. Польза ERT может снижаться в результате образования антител, таким образом, ERT также можно комбинировать с иммунной экспрессией.

[0387] GSD можно лечить посредством лечебного питания, включающего неукоснительное соблюдение схемы питания, можно снижать размер печени, предотвращать гипогликемию, делать возможным уменьшение симптомов и рост и развитие.

[0388] Дополнительное лечение болезни Помпе является симптоматическим и поддерживающим. Может потребоваться респираторная поддержка, т.к. большинство пациентов имеют некоторую степень дыхательной недостаточности. Физиотерапия может быть полезной для укрепления дыхательных мышц. Некоторым пациентам может потребоваться искусственное дыхание посредством механической вентиляции (т.е. BIPAP или объемные вентиляторы) в течение ночи и/или периодов дня. Кроме того, может потребоваться дополнительная поддержка во время инфекций дыхательных путей. Искусственную вентиляцию легких можно осуществлять неинвазивными или инвазивными способами. Лучше всего, если решение о продолжительности респираторной поддержки будет принимать семья при тщательной консультации с лечащими врачами пациента и другими членами медицинской бригады в зависимости от специфики пациента. При неинфантильной форме болезни Помпе благоприятным может являться питание с высоким содержанием белка.

[0389] Для улучшения силы и физических возможностей рекомендуют физиотерапию. Может потребоваться эрготерапия, включая использование трости или ходунков. В конечном итоге, некоторым индивидуумам может потребоваться использование инвалидной коляски. Речевая терапия может являться полезной для улучшения артикуляции и речи у некоторых пациентов.

[0390] В случае некоторых пациентов можно рекомендовать ортопедические устройства, включая ортопедические аппараты. В случае некоторых ортопедических симптомов, таких как контрактуры или деформация позвоночника, может потребоваться хирургическое вмешательство.

[0391] Т.к. при болезни Помпе ослабевают мышцы, используемые для жевания и глотания, могут потребоваться меры для обеспечения правильного питания и увеличения массы. Некоторым пациентам может потребоваться специализированная, высококалорийная диета и обучение способам изменения размера и текстуры пищи для уменьшения риска аспирации. Некоторым детям грудного возраста может потребоваться введение питательной трубки, пропускаемой через нос, затем через пищевод в желудок (назогастральный зонд). В случае некоторых детей может потребоваться введение питательной трубки непосредственно в желудок через небольшое хирургическое отверстие в брюшной стенке. Некоторым индивидуумам с болезнью Помпе с поздним началом может потребоваться диета с мягкой пищей, но некоторым требуется введение питательных трубок.

[0392] Индивидуумов можно тестировать на один или более печеночных ферментов в случае нежелательного ответа на лечение или для определения того, подходят ли такие индивидуумы для лечения способом по изобретению, до лечения. Таким образом, индивидуумов-кандидатов можно подвергать скринингу на количества одного или более печеночных ферментов до или после лечения способом по изобретению. Индивидуумов, подвергаемых лечению, можно подвергать мониторингу после лечения на повышенные печеночные ферменты периодически, например, каждые 1-4 недель, 1-6 месяцев, 6-12 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5 или более лет.

[0393] Примеры печеночных ферментов включают аланинаминотрансферазу (АЛТ), аспартатаминотрансферазу (АСТ) и лактатдегидрогеназу (ЛДГ), но другие ферменты, являющиеся показателями повреждения печени, также можно подвергать мониторингу. Нормальный уровень этих ферментов в кровотоке, как правило, определяют как диапазон, имеющий верхний уровень, выше которого уровень фермента считают повышенным и, таким образом, показателем повреждения печени. Нормальный диапазон частично зависит от стандартов, используемых клинической лабораторией, проводящей анализ.

[0394] Изобретение относится к наборам с упаковочным материалом и одним или более компонентами в нем. Набор, как правило, включает ярлык или вкладыш в упаковку, включающий описание компонентов или инструкции по использованию in vitro, in vivo или ex vivo компонентов в нем. Набор может содержать группу таких компонентов, например, частицу rAAV и, необязательно, второе активное средство, такое как другое соединение, средство, лекарственное средство или композиция.

[0395] Термин "набор" относится к физической структуре, являющейся вместилищем для одного или более компонентов набора. С помощью упаковочного материала можно сохранять компоненты стерильными, и его можно делать из материала, общеупотребительного для таких целей (например, бумаги, гофрированного картона, стекла, пластика, фольги, ампул, флаконов, пробирок и т.д.).

[0396] Ярлыки или вкладыши могут включать идентифицирующую информацию об одном или более компонентов, дозах, клинической фармакологии активных ингредиентов, включая механизмы действия, фармакокинетику и фармакодинамику. Ярлыки или вкладыши могут включать информацию о производителе, номерах партий, месте и дате производства, дате истечения срока годности. Ярлыки или вкладыши могут включать информацию о производителе, номерах партий, месте и дате производства. Ярлыки или вкладыши могут включать информацию о заболевании, в случае которого можно использовать компонент набора. Ярлыки или вкладыши могут включать инструкции для клинициста или индивидуума по использованию одного или более из компонентов набора в способе, применении, протоколе лечения или схеме лечения. Инструкции могут включать дозы, частоту или длительность введения и инструкции по практическому осуществлению любого из способов, применения, протоколов лечения или схемы профилактики или лечения, представленных в настоящем описании.

[0397] Ярлыки или вкладыши могут включать информацию о какой-либо пользе, которую может приносить компонент, такой как профилактическая или терапевтическая польза. Ярлыки или вкладыши могут включать информацию о потенциальных нежелательных побочных эффектах, осложнениях или реакциях, такую как предупреждение для индивидуума или клинициста, касающееся ситуаций, когда использование конкретной композиции будет нецелесообразным. Нежелательные побочные эффекты или осложнения также могут возникать, когда индивидуум принимал, будет принимать или в настоящее время принимает одно или более других лекарственных средств, которые могут являться несовместимыми с композицией, или индивидуума подвергали, будут подвергать или в настоящее время подвергают другому протоколу лечения или схеме лечения, которые будут несовместимыми с композицией, и, таким образом, инструкции могут включать информацию о такой несовместимости.

[0398] Ярлыки или вкладыши включают "печатные материалы", например, бумажные или картонные, или отдельные или прикрепленные к компоненту, набору или упаковочному материалу (например, коробке), или прикрепленные к ампуле, пробирке или флакону, составляющему компонент набора. Ярлыки или вкладыши могут дополнительно включать машиночитаемый носитель, такой как этикетка с напечатанным штрихкодом, диск, оптический диск, такой как CD- или DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, магнитная лента или электрические запоминающие устройства, такие как RAM и ROM, или их гибриды, такие как магнитные/оптические носители, FLASH-носители или карты памяти.

[0399] Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают значением, общепринято понятным специалисту в области, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя в практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, схожие или эквивалентные представленным в настоящем описании, подходящие способы и материалы представлены в настоящем описании.

[0400] Все патенты, патентные заявки, публикации и другие ссылки, записи в GenBank и записи в ATCC, процитированные в настоящем описании, в полном объеме включены в него в качестве ссылки. В случае конфликта настоящее описание, включая определение, будет обладать приоритетом.

[0401] Все признаки, представленные в настоящем описании, можно комбинировать в любой комбинации. Каждый признак, представленный в настоящем описании, можно заменять альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или схожей цели. Таким образом, если конкретно не указано иное, описанные признаки (например, модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, экспрессирующие кассеты, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA, и частицы rAAV, содержащие модифицированные нуклеиновые кислоты, кодирующие GAA) являются примерами рода эквивалентных или схожих признаков.

[0402] В рамках изобретения термины в единственном числе включают ссылки на множественное число, если контекст четко не указывает на иное. Таким образом, например, ссылка на "нуклеиновую кислоту" включает множество таких нуклеиновых кислот, ссылка на "вектор" включает множество таких векторов, и ссылка на "вирус" или "частицу" включает множество таких вирусов/частиц.

[0403] В рамках изобретения все числовые значения или числовые диапазоны включают целые числа в таких диапазонах и доли значений или целые числа в таких диапазонах, если контекст четко не указывает на иное. Таким образом, например, ссылка на 86% или более идентичности, включает 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% и т.д., а также 86,1%, 86,2%, 86,3%, 86,4%, 86,5%, и т.д., 87,1%, 88,2%, 88,3%, 88,4%, 88,5% и т.д.

[0404] Ссылка на целое число с "более чем" или "менее чем" включает любое число, больше или меньше референсного числа, соответственно. Таким образом, например, ссылка на менее чем 127, 126, 125, 124, 123, 122, 121, 120, 119, 118, 117, 116, 115, 114, 113, 112, 111, 110 и т.д. вплоть до нуля (0); и "менее 10" включает 9, 8, 7 и т.д. вплоть до нуля (0).

[0405] В рамках изобретения все числовые значения или диапазоны включают поддиапазоны и доли значений и целые числа в таких диапазонах и поддиапазонах и the wrong 1, а также the file okay thanks доли целых чисел в таких диапазонах, если контекст четко не указывает на иное. Таким образом, в качестве примера, ссылка на числовой диапазон, такой как 1-10, включает 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10,и т.д.; и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д. Таким образом, ссылка на диапазон 1-50 включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д. вплоть до и включая 50, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д., 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5 и т.д.

[0406] Ссылка на серию диапазонов включает диапазоны, в которых комбинируют значения границ разных диапазонов в серии. Таким образом, в качестве примера, ссылка на серию диапазонов, например, 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-75, 75-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-400, 400-500, 500-750, 750-850, включает диапазоны 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 1-60, 10-30, 10-40, 10-50, 10-60, 10-70, 10-80, 20-40, 20-50, 20-60, 20-70, 20-80, 20-90, 50-75, 50-100, 50-150, 50-200, 50-250, 100-200, 100-250, 100-300, 100-350, 100-400, 100-500, 150-250, 150-300, 150-350, 150-400, 150-450, 150-500 и т.д.

[0407] Настоящее изобретение, в целом, представлено в настоящем описании с использованием утвердительных выражений для описания многочисленных вариантов осуществления и аспектов. Настоящее изобретение также конкретно включает варианты осуществления, в которых конкретный объект изобретения исключен, полностью или частично, такой как вещества или материалы, стадии и условия способа, способы. Например, в некоторых вариантах осуществления или аспектах изобретения материалы и/или стадии способа исключены. Таким образом, несмотря на то, что настоящее изобретение, в целом, не выражено в настоящем описании в терминах того, что изобретение не включает, аспекты, которые не исключены конкретно, несмотря на это, представлены в настоящем описании.

[0408] Описан ряд вариантов осуществления изобретения. Несмотря на это, специалист в этой области может осуществлять различные изменения и модификации изобретения для его адаптации к разному использованию и условиям без отклонения от сущности и объема изобретения. Таким образом, следующие примеры предназначены для иллюстрирования, а не ограничения объема изобретения, заявленного каким-либо образом.

ПРИМЕР 1

Таблица 1 - Обзор GAA-экспрессирующей кассеты

Экспрессирующая кассета (SEQ ID NO: 16-24) SEQ ID NO Кодон-оптимизированный вариант ПолиA-сигнал BGH Упаковка в вектор (SEQ ID NO: 30-32) pAAV-ApoE/hAAT.fixUTR.GAA13.BGH 16 GAA13 Со сниженным содержанием CpG SPK-AAV-01 pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.BGH 17 GAA13 Со сниженным содержанием CpG SPK-AAV-02 pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.BGH 18 GAA7 Со сниженным содержанием CpG SPK-AAV-03 pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.BGH 19 GAA8 Со сниженным содержанием CpG SPK-AAV-04 pAAV-ApoE/hAAT.GAA2.wtBGH 20 GAA2 BGH дикого типа SPK-AAV-05 pAAV-ApoE/hAAT.GAA5.wtBGH 21 GAA5 BGH дикого типа SPK-AAV-06 pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.wtBGH 22 GAA7 BGH дикого типа SPK-AAV-07 pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.wtBGH 23 GAA8 BGH дикого типа SPK-AAV-08 pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.wtBGH 24 GAA13 BGH дикого типа SPK-AAV-09 pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.BGH 17 GAA13 Со сниженным содержанием CpG SPK-AAV-10*

*SPK-AAV-10 упакован в капсид AAV6, а все остальные упакованы в вариант капсида AAV-4-1, описанный в публикации международной патентной заявки № WO 2016/210170.

[0409] GAA-экспрессирующие кассеты приведены на фигурах 1-9. Все содержат 5-' и 3'-фланкирующие инвертированные концевые повторы AAV (ITR), печень-специфическую последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT, функционально связанную с оптимизированной GAA-кодирующей последовательностью, включая интрон бета-субъединицы гемоглобина человека (HBB2) с последующей последовательностью полиаденилирования (поли-A) бычьего гормона роста (bGH)дикого типа или со сниженным содержанием CpG.

SEQ ID NO: 1: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA2

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGAGCTGCTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGGCTGCTGGTGCCTAGGGAGCTGTCTGGGTCTAGCCCTGTGCTGGAGGAGACTCACCCTGCCCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCTCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATTACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTACATTCCAGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCTAGCTATAAACTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTATACTGCCACCCTGACTAGGACTACTCCCACCTTTTTTCCTAAGGATATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATTAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAAGTGCCTCTGGAGACTCCTCATGTGCACTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAATAGGGATCTGGCCCCCACCCCTGGGGCTAATCTGTATGGCTCTCATCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTCCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGGTATTCTTCTACTGCTATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCTCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGACTCTAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTCCCTGCTATGGTCCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCAGCTATAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGGCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCTCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGGTGCCCCAATAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACTATTTGTGCCAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAACCTGCACAATCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCCTTTGTGATCTCTAGAAGCACCTTTGCTGGCCATGGGAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCTCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATAGCAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCCCTGGACACCATTAATGTGCATCTGAGGGCTGGGTATATTATCCCCCTGCAGGGGCCTGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCTATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATTTTCCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAAGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGA

SEQ ID NO: 2: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA5

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCCCTGCTGGGGACTACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAACTGTCTGGCTCTAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTTCTAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCAAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACTCTAGATTTGATTGTGCCCCTGATAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCTAGGGGCTGCTGCTACATCCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCCTCTTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACTACTCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCATTTCACCATCAAGGATCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCACAGCAGGGCTCCTTCTCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAACCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGATCAGTTCCTGCAGCTGTCCACTTCTCTGCCTAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACTAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCAGCCACCCCTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAATAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCTCCCTACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCTCTACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAATATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACTCTAGGAGGGACTTCACCTTCAATAAGGATGGCTTCAGAGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCTCTTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGGCAGCCCCTGATTGGGAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAATCCTACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCTAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCTAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATTTCTAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGGCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTAGCTGGGAGCAGCTGGCTTCTTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGGTTCCTGGGCAACACTTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACTCCTGTGCTGCAGGCTGGGAAGGCTGAGGTGACTGGCTATTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGATACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATCATTCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACTACTGAGTCTAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAGGCTAGGGGGGAGCTGTTTTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACTCAGGTGATCTTCCTGGCCAGGAACAATACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTATAGCCCTGATACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGA

SEQ ID NO: 3: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA7

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGTTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGCAGCAGCCCTGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCTCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCTCACCCTGGGAGACCCAGGGCTGTGCCCACTCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCTATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGGTGCTGCTACATTCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCTCTTATCCCAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACTCCCACCTTCTTTCCCAAGGATATTCTGACTCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCCCTGGAGACTCCTCATGTGCATAGCAGGGCCCCTTCTCCTCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACTTCTCTGCCCAGCCAGTACATTACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACTCCTGGGGCTAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCAGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATTCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAACCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCCCCCTATTGGGGGCTGGGGTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCATTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGATAGCAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTTCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTATATGATGATTGTGGACCCTGCTATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGCCAGCCTCTGATTGGCAAGGTCTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGATTTTACTAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGATCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGATATGAATGAACCAAGCAACTTCATCAGAGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACCATTTGTGCTAGCAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAAGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCTTTTGTGATCAGCAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATTCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCCTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTATACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGATCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTCACTGGCTACTTCCCTCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCTCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCTCCCCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATTATCCCCCTGCAGGGCCCAGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGACAGCAGCCCATGGCTCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAAGCTAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTATACCCAGGTGATCTTCCTGGCTAGGAACAACACCATTGTCAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGGCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCTCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGACATCTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGA

SEQ ID NO: 4: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA8

ATGGCCTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCTCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTCCCCAGGGAGCTGTCTGGCTCTTCTCCTGTCCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCTCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTATATCCCTGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTTCCCCCCTCTTATCCTAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGGTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACCCCCACTTTCTTCCCTAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAATAGGCTGCACTTTACTATCAAGGACCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCTCCCCTGTTTTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGATCTGGCTCCTACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGTCTACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTTCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTATCCTTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGACAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACAGCAGGAGGGACTTCACCTTTAACAAGGATGGCTTTAGGGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCAGCCATCAGCAGCTCTGGGCCTGCTGGGTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGGAGCACTGCCTTCCCTGATTTTACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGATATGGTGGCTGAGTTTCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAATCCTCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCCTCTAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTATAACCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGAGGGACCAGGCCCTTTGTGATCTCTAGGAGCACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCAGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAATACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACTCAGCTGGGGGCCTTCTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGTCTCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCTCAGCAGGCTATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTTCTGGAGTTTCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGACCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCTCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGGTACTTCCCCCTGGGGACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCACCCCCTGCTGCCCCTAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTATATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGGCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGTCTAACTTCACCTACAGCCCTGATACTAAGGTGCTGGATATCTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTTCTGGTGAGCTGGTGCTGA

SEQ ID NO: 5: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA13

ATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGA

SEQ ID NO: 6: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA2 с поли-A BGH WT

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGAGCTGCTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGGCTGCTGGTGCCTAGGGAGCTGTCTGGGTCTAGCCCTGTGCTGGAGGAGACTCACCCTGCCCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCTCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATTACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTACATTCCAGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCTAGCTATAAACTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTATACTGCCACCCTGACTAGGACTACTCCCACCTTTTTTCCTAAGGATATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATTAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAAGTGCCTCTGGAGACTCCTCATGTGCACTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAATAGGGATCTGGCCCCCACCCCTGGGGCTAATCTGTATGGCTCTCATCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTCCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGGTATTCTTCTACTGCTATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCTCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGACTCTAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTCCCTGCTATGGTCCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCAGCTATAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGGCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCTCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGGTGCCCCAATAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACTATTTGTGCCAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAACCTGCACAATCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCCTTTGTGATCTCTAGAAGCACCTTTGCTGGCCATGGGAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCTCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATAGCAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCCCTGGACACCATTAATGTGCATCTGAGGGCTGGGTATATTATCCCCCTGCAGGGGCCTGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCTATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATTTTCCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAAGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 7: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA5 с поли-A BGH WT

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCCCTGCTGGGGACTACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAACTGTCTGGCTCTAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTTCTAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCAAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACTCTAGATTTGATTGTGCCCCTGATAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCTAGGGGCTGCTGCTACATCCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCCTCTTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACTACTCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCATTTCACCATCAAGGATCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCACAGCAGGGCTCCTTCTCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAACCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGATCAGTTCCTGCAGCTGTCCACTTCTCTGCCTAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACTAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCAGCCACCCCTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAATAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCTCCCTACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCTCTACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAATATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACTCTAGGAGGGACTTCACCTTCAATAAGGATGGCTTCAGAGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCTCTTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGGCAGCCCCTGATTGGGAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAATCCTACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCTAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCTAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATTTCTAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGGCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTAGCTGGGAGCAGCTGGCTTCTTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGGTTCCTGGGCAACACTTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACTCCTGTGCTGCAGGCTGGGAAGGCTGAGGTGACTGGCTATTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGATACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATCATTCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACTACTGAGTCTAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAGGCTAGGGGGGAGCTGTTTTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACTCAGGTGATCTTCCTGGCCAGGAACAATACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTATAGCCCTGATACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 8: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA7 с поли-A BGH WT

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGTTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGCAGCAGCCCTGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCTCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCTCACCCTGGGAGACCCAGGGCTGTGCCCACTCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCTATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGGTGCTGCTACATTCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCTCTTATCCCAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACTCCCACCTTCTTTCCCAAGGATATTCTGACTCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCCCTGGAGACTCCTCATGTGCATAGCAGGGCCCCTTCTCCTCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACTTCTCTGCCCAGCCAGTACATTACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACTCCTGGGGCTAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCAGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATTCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAACCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCCCCCTATTGGGGGCTGGGGTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCATTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGATAGCAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTTCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTATATGATGATTGTGGACCCTGCTATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGCCAGCCTCTGATTGGCAAGGTCTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGATTTTACTAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGATCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGATATGAATGAACCAAGCAACTTCATCAGAGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACCATTTGTGCTAGCAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAAGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCTTTTGTGATCAGCAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATTCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCCTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTATACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGATCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTCACTGGCTACTTCCCTCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCTCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCTCCCCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATTATCCCCCTGCAGGGCCCAGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGACAGCAGCCCATGGCTCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAAGCTAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTATACCCAGGTGATCTTCCTGGCTAGGAACAACACCATTGTCAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGGCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCTCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGACATCTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 9: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA8 с поли-A BGH WT

ATGGCCTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCTCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTCCCCAGGGAGCTGTCTGGCTCTTCTCCTGTCCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCTCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTATATCCCTGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTTCCCCCCTCTTATCCTAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGGTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACCCCCACTTTCTTCCCTAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAATAGGCTGCACTTTACTATCAAGGACCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCTCCCCTGTTTTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGATCTGGCTCCTACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGTCTACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTTCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTATCCTTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGACAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACAGCAGGAGGGACTTCACCTTTAACAAGGATGGCTTTAGGGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCAGCCATCAGCAGCTCTGGGCCTGCTGGGTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGGAGCACTGCCTTCCCTGATTTTACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGATATGGTGGCTGAGTTTCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAATCCTCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCCTCTAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTATAACCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGAGGGACCAGGCCCTTTGTGATCTCTAGGAGCACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCAGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAATACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACTCAGCTGGGGGCCTTCTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGTCTCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCTCAGCAGGCTATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTTCTGGAGTTTCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGACCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCTCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGGTACTTCCCCCTGGGGACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCACCCCCTGCTGCCCCTAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTATATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGGCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGTCTAACTTCACCTACAGCCCTGATACTAAGGTGCTGGATATCTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTTCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 10: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA13 с поли-A BGH WT

ATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 11: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA2 с поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGAGCTGCTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGGCTGCTGGTGCCTAGGGAGCTGTCTGGGTCTAGCCCTGTGCTGGAGGAGACTCACCCTGCCCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCTCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATTACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTACATTCCAGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCTAGCTATAAACTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTATACTGCCACCCTGACTAGGACTACTCCCACCTTTTTTCCTAAGGATATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATTAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAAGTGCCTCTGGAGACTCCTCATGTGCACTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAATAGGGATCTGGCCCCCACCCCTGGGGCTAATCTGTATGGCTCTCATCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTCCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGGTATTCTTCTACTGCTATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCTCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGACTCTAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTCCCTGCTATGGTCCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCAGCTATAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGGCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCTCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGGTGCCCCAATAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACTATTTGTGCCAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAACCTGCACAATCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCCTTTGTGATCTCTAGAAGCACCTTTGCTGGCCATGGGAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCTCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATAGCAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCCCTGGACACCATTAATGTGCATCTGAGGGCTGGGTATATTATCCCCCTGCAGGGGCCTGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCTATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATTTTCCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAAGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

SEQ ID NO: 12: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA5 с поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCCCTGCTGGGGACTACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAACTGTCTGGCTCTAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTTCTAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCAAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACTCTAGATTTGATTGTGCCCCTGATAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCTAGGGGCTGCTGCTACATCCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCCTCTTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACTACTCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCATTTCACCATCAAGGATCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCACAGCAGGGCTCCTTCTCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAACCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGATCAGTTCCTGCAGCTGTCCACTTCTCTGCCTAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACTAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCAGCCACCCCTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAATAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCTCCCTACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCTCTACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAATATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACTCTAGGAGGGACTTCACCTTCAATAAGGATGGCTTCAGAGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCTCTTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGGCAGCCCCTGATTGGGAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAATCCTACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCTAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCTAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATTTCTAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGGCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTAGCTGGGAGCAGCTGGCTTCTTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGGTTCCTGGGCAACACTTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACTCCTGTGCTGCAGGCTGGGAAGGCTGAGGTGACTGGCTATTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGATACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATCATTCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACTACTGAGTCTAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAGGCTAGGGGGGAGCTGTTTTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACTCAGGTGATCTTCCTGGCCAGGAACAATACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTATAGCCCTGATACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

SEQ ID NO: 13: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA7 с поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

ATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGTTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGCAGCAGCCCTGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCTCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCTCACCCTGGGAGACCCAGGGCTGTGCCCACTCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCTATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGGTGCTGCTACATTCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCTCTTATCCCAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACTCCCACCTTCTTTCCCAAGGATATTCTGACTCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCCCTGGAGACTCCTCATGTGCATAGCAGGGCCCCTTCTCCTCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACTTCTCTGCCCAGCCAGTACATTACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACTCCTGGGGCTAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCAGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATTCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAACCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCCCCCTATTGGGGGCTGGGGTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCATTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGATAGCAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTTCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTATATGATGATTGTGGACCCTGCTATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGCCAGCCTCTGATTGGCAAGGTCTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGATTTTACTAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGATCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGATATGAATGAACCAAGCAACTTCATCAGAGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACCATTTGTGCTAGCAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAAGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCTTTTGTGATCAGCAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATTCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCCTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTATACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGATCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTCACTGGCTACTTCCCTCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCTCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCTCCCCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATTATCCCCCTGCAGGGCCCAGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGACAGCAGCCCATGGCTCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAAGCTAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTATACCCAGGTGATCTTCCTGGCTAGGAACAACACCATTGTCAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGGCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCTCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGACATCTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

SEQ ID NO: 14: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA8 с поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

ATGGCCTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCTCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTCCCCAGGGAGCTGTCTGGCTCTTCTCCTGTCCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCTCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTATATCCCTGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTTCCCCCCTCTTATCCTAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGGTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACCCCCACTTTCTTCCCTAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAATAGGCTGCACTTTACTATCAAGGACCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCTCCCCTGTTTTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGATCTGGCTCCTACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGTCTACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTTCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTATCCTTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGACAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACAGCAGGAGGGACTTCACCTTTAACAAGGATGGCTTTAGGGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCAGCCATCAGCAGCTCTGGGCCTGCTGGGTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGGAGCACTGCCTTCCCTGATTTTACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGATATGGTGGCTGAGTTTCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAATCCTCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCCTCTAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTATAACCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGAGGGACCAGGCCCTTTGTGATCTCTAGGAGCACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCAGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAATACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACTCAGCTGGGGGCCTTCTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGTCTCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCTCAGCAGGCTATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTTCTGGAGTTTCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGACCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCTCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGGTACTTCCCCCTGGGGACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCACCCCCTGCTGCCCCTAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTATATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGGCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGTCTAACTTCACCTACAGCCCTGATACTAAGGTGCTGGATATCTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTTCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

SEQ ID NO: 15: Последовательность нуклеиновой кислоты GAA13 с поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

ATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

>pAAV-ApoE/hAAT.fixUTR.GAA13.BGH (SEQ ID NO: 16)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATACCACTTTCACAATCTGCTAGCGTTTAAACGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCAGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.BGH (SEQ ID NO: 17)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCAGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.BGH (SEQ ID NO: 18)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGTTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGCAGCAGCCCTGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCTCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCTCACCCTGGGAGACCCAGGGCTGTGCCCACTCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCTATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGGTGCTGCTACATTCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCTCTTATCCCAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACTCCCACCTTCTTTCCCAAGGATATTCTGACTCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCCCTGGAGACTCCTCATGTGCATAGCAGGGCCCCTTCTCCTCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACTTCTCTGCCCAGCCAGTACATTACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACTCCTGGGGCTAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCAGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATTCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAACCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCCCCCTATTGGGGGCTGGGGTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCATTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGATAGCAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTTCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTATATGATGATTGTGGACCCTGCTATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGCCAGCCTCTGATTGGCAAGGTCTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGATTTTACTAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGATCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGATATGAATGAACCAAGCAACTTCATCAGAGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACCATTTGTGCTAGCAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAAGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCTTTTGTGATCAGCAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATTCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCCTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTATACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGATCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTCACTGGCTACTTCCCTCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCTCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCTCCCCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATTATCCCCCTGCAGGGCCCAGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGACAGCAGCCCATGGCTCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAAGCTAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTATACCCAGGTGATCTTCCTGGCTAGGAACAACACCATTGTCAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGGCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCTCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGACATCTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCAGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.BGH (SEQ ID NO: 19)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCCTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCTCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTCCCCAGGGAGCTGTCTGGCTCTTCTCCTGTCCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCTCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTATATCCCTGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTTCCCCCCTCTTATCCTAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGGTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACCCCCACTTTCTTCCCTAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAATAGGCTGCACTTTACTATCAAGGACCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCTCCCCTGTTTTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGATCTGGCTCCTACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGTCTACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTTCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTATCCTTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGACAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACAGCAGGAGGGACTTCACCTTTAACAAGGATGGCTTTAGGGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCAGCCATCAGCAGCTCTGGGCCTGCTGGGTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGGAGCACTGCCTTCCCTGATTTTACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGATATGGTGGCTGAGTTTCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAATCCTCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCCTCTAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTATAACCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGAGGGACCAGGCCCTTTGTGATCTCTAGGAGCACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCAGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAATACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACTCAGCTGGGGGCCTTCTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGTCTCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCTCAGCAGGCTATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTTCTGGAGTTTCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGACCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCTCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGGTACTTCCCCCTGGGGACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCACCCCCTGCTGCCCCTAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTATATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGGCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGTCTAACTTCACCTACAGCCCTGATACTAAGGTGCTGGATATCTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTTCTGGTGAGCTGGTGCTGAAGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCAGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA2.wtBGH (SEQ ID NO: 20)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGAGCTGCTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGGCTGCTGGTGCCTAGGGAGCTGTCTGGGTCTAGCCCTGTGCTGGAGGAGACTCACCCTGCCCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCTCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATTACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTACATTCCAGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCTAGCTATAAACTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTATACTGCCACCCTGACTAGGACTACTCCCACCTTTTTTCCTAAGGATATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATTAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAAGTGCCTCTGGAGACTCCTCATGTGCACTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAATAGGGATCTGGCCCCCACCCCTGGGGCTAATCTGTATGGCTCTCATCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTCCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGGTATTCTTCTACTGCTATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCTCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGACTCTAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTCCCTGCTATGGTCCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCAGCTATAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGGCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCTCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGGTGCCCCAATAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACTATTTGTGCCAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAACCTGCACAATCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCCTTTGTGATCTCTAGAAGCACCTTTGCTGGCCATGGGAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCTCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATAGCAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCCCTGGACACCATTAATGTGCATCTGAGGGCTGGGTATATTATCCCCCTGCAGGGGCCTGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCTATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATTTTCCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAAGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGACTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA5.wtBGH (SEQ ID NO: 21)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCCCTGCTGGGGACTACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAACTGTCTGGCTCTAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTTCTAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCAAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCCCCCAACTCTAGATTTGATTGTGCCCCTGATAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCTAGGGGCTGCTGCTACATCCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTATCCCTCTTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACTACTCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCATTTCACCATCAAGGATCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCACAGCAGGGCTCCTTCTCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAACCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGATCAGTTCCTGCAGCTGTCCACTTCTCTGCCTAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCTCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACTAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCAGCCACCCCTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAATAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCTCCCTACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCTCTACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAATATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACTCTAGGAGGGACTTCACCTTCAATAAGGATGGCTTCAGAGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCCATCAGCTCTTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGGCAGCCCCTGATTGGGAAGGTGTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGACTTCACCAATCCTACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCTAGCTCTCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCACAGGGCCCTGGTGAAGGCTAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATTTCTAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGGCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTAGCTGGGAGCAGCTGGCTTCTTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGGTTCCTGGGCAACACTTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCTTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACTCCTGTGCTGCAGGCTGGGAAGGCTGAGGTGACTGGCTATTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGATACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATCATTCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACTACTGAGTCTAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAGGCTAGGGGGGAGCTGTTTTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACTCAGGTGATCTTCCTGGCCAGGAACAATACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTATAGCCCTGATACCAAGGTGCTGGATATTTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGACTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA7.wtBGH (SEQ ID NO: 22)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCTTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGTTGGGCTCTGCTGGGCACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGCAGCAGCCCTGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCTCATCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCTCACCCTGGGAGACCCAGGGCTGTGCCCACTCAGTGTGATGTGCCCCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCTATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGGTGCTGCTACATTCCTGCTAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCTCTTATCCCAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACTCCCACCTTCTTTCCCAAGGATATTCTGACTCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAACAGGCTGCACTTCACTATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCCCTGGAGACTCCTCATGTGCATAGCAGGGCCCCTTCTCCTCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGGCAGCTGGATGGCAGGGTGCTGCTGAACACCACTGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACTTCTCTGCCCAGCCAGTACATTACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCTCTTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGACCTGGCCCCCACTCCTGGGGCTAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTTCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCTCTCCAGCCCTGTCTTGGAGGAGCACTGGGGGCATTCTGGATGTGTACATTTTCCTGGGGCCTGAACCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTACCCCTTCATGCCCCCCTATTGGGGGCTGGGGTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCATTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGATAGCAGGAGGGATTTCACCTTCAACAAGGATGGCTTCAGGGACTTTCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTATATGATGATTGTGGACCCTGCTATCAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGCTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTTATCACTAATGAAACTGGCCAGCCTCTGATTGGCAAGGTCTGGCCTGGCTCTACTGCCTTCCCTGATTTTACTAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGATCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATTGATATGAATGAACCAAGCAACTTCATCAGAGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACCATTTGTGCTAGCAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTACAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAAGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACTAGGCCTTTTGTGATCAGCAGGAGCACTTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATTCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCCCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGAGCCTGCCTCAGGAGCCCTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCACCTGTATACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGATCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTCACTGGCTACTTCCCTCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCCCCCCCTGCTGCTCCCAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCTCCCCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTACATTATCCCCCTGCAGGGCCCAGGGCTGACTACCACTGAGAGCAGACAGCAGCCCATGGCTCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGGGGGGAAGCTAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTATACCCAGGTGATCTTCCTGGCTAGGAACAACACCATTGTCAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGGCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCTCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACAGCCCTGACACCAAGGTGCTGGACATCTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGACTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA8.wtBGH (SEQ ID NO: 23)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCCTTCCTGTGGCTGCTGTCTTGCTGGGCTCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTCCCCAGGGAGCTGTCTGGCTCTTCTCCTGTCCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCTAGCAGGCCTGGCCCCAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCCACCCAGTGTGATGTGCCTCCCAACAGCAGGTTTGACTGTGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAGCAGTGTGAGGCCAGGGGCTGCTGCTATATCCCTGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCTCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTTCCCCCCTCTTATCCTAGCTATAAGCTGGAGAACCTGAGCAGCTCTGAGATGGGGTACACTGCCACCCTGACCAGGACCACCCCCACTTTCTTCCCTAAGGACATCCTGACCCTGAGGCTGGATGTGATGATGGAGACTGAGAATAGGCTGCACTTTACTATCAAGGACCCTGCCAACAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATTCTAGGGCCCCCAGCCCCCTGTACTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTGATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGCAGGGTCCTGCTGAACACCACTGTGGCTCCCCTGTTTTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGAGCACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCACCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACAGGGATCTGGCTCCTACCCCTGGGGCCAACCTGTATGGCTCTCACCCCTTTTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCTATGGATGTGGTGCTGCAGCCCAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGTCTACTGGGGGCATCCTGGATGTGTACATCTTTCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTACCTGGATGTGGTGGGCTATCCTTTTATGCCCCCCTATTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGACAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTACATGGACAGCAGGAGGGACTTCACCTTTAACAAGGATGGCTTTAGGGACTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCATCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCAGCCATCAGCAGCTCTGGGCCTGCTGGGTCTTACAGGCCCTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGGAGCACTGCCTTCCCTGATTTTACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGATATGGTGGCTGAGTTTCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGCATGTGGATTGACATGAATGAGCCCAGCAATTTCATCAGGGGCTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAATCCTCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACCCTGCAGGCTGCCACCATCTGTGCCTCTAGCCACCAGTTCCTGAGCACCCACTATAACCTGCATAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGAGGGACCAGGCCCTTTGTGATCTCTAGGAGCACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGAGCTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCAGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTCCTGGGCAATACCTCTGAAGAGCTGTGTGTGAGGTGGACTCAGCTGGGGGCCTTCTATCCCTTCATGAGGAACCACAACAGCCTGCTGTCTCTGCCCCAGGAGCCCTACAGCTTCTCTGAGCCTGCTCAGCAGGCTATGAGGAAGGCCCTGACCCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTACACCCTGTTCCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCCAGGCCCCTGTTTCTGGAGTTTCCCAAGGACAGCAGCACCTGGACTGTGGACCATCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCTCTGCTGATTACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGGTACTTCCCCCTGGGGACTTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAAGCTCTGGGCAGCCTGCCCCCACCCCCTGCTGCCCCTAGGGAGCCTGCCATCCACTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGCTATATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGGCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACTAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGAGCCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAACACCATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACTTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTGCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGTCTAACTTCACCTACAGCCCTGATACTAAGGTGCTGGATATCTGTGTGAGCCTGCTGATGGGGGAGCAGTTTCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGACTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

>pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.wtBGH (SEQ ID NO: 24)

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATAGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTCTGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCTTGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAGCTCCTGGGCAACCTGCTGGTCTCTCTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGCACGCGTGCCACCATGGCCTTTCTGTGGCTGCTGTCCTGCTGGGCCCTGCTGGGGACCACCTTTGGCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCTGGGAGCAGCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCTGCCCACCAGCAGGGGGCCAGCAGGCCTGGCCCTAGGGATGCCCAGGCCCACCCTGGCAGGCCCAGGGCTGTGCCTACCCAGTGTGATGTGCCACCCAATTCTAGGTTTGACTGTGCTCCTGACAAGGCCATCACTCAGGAGCAGTGTGAAGCTAGGGGGTGCTGCTACATCCCAGCCAAGCAGGGCCTGCAGGGGGCCCAGATGGGCCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCCCCCAGCTACCCTAGCTACAAGCTGGAGAATCTGAGCAGCTCTGAGATGGGCTACACTGCTACCCTGACCAGGACCACTCCTACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACTCTGAGGCTGGATGTCATGATGGAGACTGAAAATAGGCTGCACTTCACCATCAAGGACCCTGCCAATAGGAGGTATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCCCATGTGCATAGCAGGGCTCCCAGCCCCCTGTATTCTGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCCTTTGGGGTCATTGTGAGGAGACAGCTGGATGGGAGGGTGCTGCTGAACACTACTGTGGCTCCCCTGTTCTTTGCTGACCAGTTCCTGCAGCTGTCTACCAGCCTGCCCAGCCAGTACATCACTGGGCTGGCTGAGCATCTGAGCCCCCTGATGCTGAGCACCAGCTGGACCAGGATCACTCTGTGGAACAGGGATCTGGCCCCCACTCCTGGGGCCAACCTGTATGGGAGCCATCCCTTCTACCTGGCCCTGGAGGATGGGGGCTCTGCCCATGGGGTGTTCCTGCTGAACAGCAATGCCATGGATGTGGTGCTGCAGCCTAGCCCTGCCCTGAGCTGGAGGAGCACTGGGGGCATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGGCCTGAGCCCAAGTCTGTGGTGCAGCAGTATCTGGATGTGGTGGGGTATCCCTTCATGCCCCCCTACTGGGGCCTGGGCTTTCACCTGTGCAGGTGGGGCTACAGCAGCACTGCCATCACCAGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCTCTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGACTATATGGATTCTAGGAGAGACTTTACTTTTAACAAGGATGGCTTCAGGGATTTCCCTGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGGGGCAGGAGGTACATGATGATTGTGGACCCTGCTATTAGCAGCTCTGGCCCTGCTGGGTCTTACAGGCCTTATGATGAGGGCCTGAGGAGGGGGGTGTTCATCACCAATGAGACTGGCCAGCCCCTGATTGGCAAGGTGTGGCCTGGCAGCACTGCCTTCCCTGACTTCACCAACCCCACTGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTTGATGGGATGTGGATTGACATGAATGAGCCCTCTAACTTCATCAGGGGGTCTGAGGATGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCCCCCTATGTGCCTGGGGTGGTGGGGGGCACTCTGCAGGCTGCCACTATCTGTGCTTCTTCTCACCAGTTTCTGAGCACCCACTATAATCTGCACAACCTGTATGGCCTGACTGAGGCCATTGCCAGCCATAGGGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACCAGGCCCTTTGTGATCAGCAGGTCTACCTTTGCTGGCCATGGCAGGTATGCTGGCCACTGGACTGGGGATGTGTGGTCTTCTTGGGAGCAGCTGGCCAGCTCTGTGCCTGAGATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTGGGGGCTGATGTGTGTGGCTTTCTGGGCAACACCTCTGAGGAGCTGTGTGTGAGGTGGACCCAGCTGGGGGCCTTTTACCCCTTCATGAGGAACCACAATAGCCTGCTGAGCCTGCCCCAGGAGCCTTACTCTTTCTCTGAGCCTGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTGACTCTGAGGTATGCCCTGCTGCCCCATCTGTATACCCTGTTTCACCAGGCCCATGTGGCTGGGGAGACTGTGGCTAGGCCTCTGTTTCTGGAGTTCCCTAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTGATCACCCCTGTGCTGCAGGCTGGCAAGGCTGAGGTGACTGGCTACTTCCCCCTGGGCACCTGGTATGACCTGCAGACTGTGCCTGTGGAGGCCCTGGGGAGCCTGCCTCCCCCCCCTGCTGCCCCCAGGGAGCCTGCCATTCATTCTGAGGGCCAGTGGGTGACCCTGCCTGCCCCTCTGGACACCATCAATGTGCACCTGAGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTGACCACCACTGAGAGCAGGCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCTCTGACCAAGGGGGGGGAGGCCAGGGGGGAGCTGTTCTGGGATGATGGGGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGGGGGGCCTACACCCAGGTGATCTTTCTGGCCAGGAACAATACTATTGTGAATGAGCTGGTGAGGGTGACCTCTGAGGGGGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTGCTGGGGGTGGCCACTGCCCCCCAGCAGGTCCTGAGCAATGGGGTGCCTGTGAGCAACTTCACCTACTCTCCTGACACCAAGGTGCTGGACATTTGTGTGTCTCTGCTGATGGGGGAGCAGTTCCTGGTGAGCTGGTGCTGACTCGAGAGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGACTCGAGATCCACTAGGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

SEQ ID NO: 25: Аминокислотная последовательность секретируемого белка GAA

MAFLWLLSCWALLGTTFGLLVPRELSGSSPVLEETHPAHQQGASRPGPRDAQAHPGRPRAVPTQCDVPPNSRFDCAPDKAITQEQCEARGCCYIPAKQGLQGAQMGQPWCFFPPSYPSYKLENLSSSEMGYTATLTRTTPTFFPKDILTLRLDVMMETENRLHFTIKDPANRRYEVPLETPHVHSRAPSPLYSVEFSEEPFGVIVRRQLDGRVLLNTTVAPLFFADQFLQLSTSLPSQYITGLAEHLSPLMLSTSWTRITLWNRDLAPTPGANLYGSHPFYLALEDGGSAHGVFLLNSNAMDVVLQPSPALSWRSTGGILDVYIFLGPEPKSVVQQYLDVVGYPFMPPYWGLGFHLCRWGYSSTAITRQVVENMTRAHFPLDVQWNDLDYMDSRRDFTFNKDGFRDFPAMVQELHQGGRRYMMIVDPAISSSGPAGSYRPYDEGLRRGVFITNETGQPLIGKVWPGSTAFPDFTNPTALAWWEDMVAEFHDQVPFDGMWIDMNEPSNFIRGSEDGCPNNELENPPYVPGVVGGTLQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEAIASHRALVKARGTRPFVISRSTFAGHGRYAGHWTGDVWSSWEQLASSVPEILQFNLLGVPLVGADVCGFLGNTSEELCVRWTQLGAFYPFMRNHNSLLSLPQEPYSFSEPAQQAMRKALTLRYALLPHLYTLFHQAHVAGETVARPLFLEFPKDSSTWTVDHQLLWGEALLITPVLQAGKAEVTGYFPLGTWYDLQTVPVEALGSLPPPPAAPREPAIHSEGQWVTLPAPLDTINVHLRAGYIIPLQGPGLTTTESRQQPMALAVALTKGGEARGELFWDDGESLEVLERGAYTQVIFLARNNTIVNELVRVTSEGAGLQLQKVTVLGVATAPQQVLSNGVPVSNFTYSPDTKVLDICVSLLMGEQFLVSWC

SEQ ID NO: 26: Последовательность нуклеиновой кислоты поли-A BGH со сниженным содержанием CpG

AGATCTAGAGCTGAATTCCTGCAGCCAGGGGGATCAGCCTCTACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCTTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCACATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCAGTGGGCTCTATGG

SEQ ID NO: 27: Последовательность нуклеиновой кислоты поли-A wtBGH

AGATCTACCGGTGAATTCACCGCGGGTTTAAACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGGCTAGCTCTAGA

SEQ ID NO: 28: Последовательность ApoE/hAAT, фланкированная участками рестрикции ApaI (подчеркнуты).

GGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCC

SEQ ID NO: 29: Последовательность ApoE/hAAT.

ATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACA

Капсиды вектора AAV:

VP1 (SEQ ID NO: 30)

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLD

KGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQ

AKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDS

ESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRV

ITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQ

RLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSA

HQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFED

VPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNW

LPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSS

GVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNS

QGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADP

PTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTE

GTYSEPRPIGTRYLTRNL

VP2 (SEQ ID NO: 31)

TAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPS

GLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHL

YKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFK

LFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQ

YGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLM

NPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQ

NNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDY

SSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQ

GPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYS

TGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRN

L

VP3 (SEQ ID NO: 32)

MAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISN

GTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQV

KEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTL

NNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQ

YLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNF

AWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLT

SEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAK

IPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSV

EIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL

LK03-AAV VP1 (SEQ ID NO: 33)

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL

ПРИМЕР 2

Дизайн исследования - активность in vitro (клетки Huh7)

[0410] Для оценки активности GAA-экспрессирующих кассет с помощью 200 нг плазмидной ДНК, соответствующей каждой кассете, трансфицировали линию клеток печеночноклеточной карциномы человека (Huh7) с использованием Lipofectamine® 2000 (ThermoFisher). После 48 часов инкубации образцы среды для культивирования клеток, трансфицированных с использование плазмид, несущих каждую экспрессирующую кассету, оценивали на уровни GAA посредством анализа активности GAA и нормализовали по содержанию внутриклеточного белка.

Результаты

[0411] На фигуре 10 показана оценка различных GAA-экспрессирующих плазмид in vitro в клетках Huh7 посредством анализа активности GAA. Результаты представляют собой среднее для трех биологических параллелей n=3. Планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению.

[0412] За исключением GAA5.wtBGH, все плазмиды демонстрировали повышенные уровни экспрессии секретируемой GAA по сравнению с контрольной плазмидой зеленого флуоресцентного белка (GFP), что свидетельствует о том, что эти плазмиды приводили к экспрессии белкового продукта GAA (фигура 10). В основном, плазмиды "BGH" (несущие последовательность поли-A со сниженным содержанием CpG) превосходили плазмиды "wtBGH" (с поли-A bGH дикого типа). Кроме того, кодон-оптимизированные последовательности GAA2, GAA7, GAA8 и GAA13, по-видимому, являлись относительно схожими и имели тенденцию к более высокой экспрессии с плазмид GAA13. Наблюдали общее снижение уровней экспрессии по сравнению с родительской плазмидой spΔGAApar.

ПРИМЕР 3

Дизайн исследования - активность кассеты при гидродинамической инъекции у мышей

[0413] Для оценки активности разных GAA-экспрессирующих кассет у млекопитающих 25 микрограммов плазмидной ДНК, соответствующей каждой кассете, вводили самцам мышей C57BL/6 (возрастом приблизительно 8 недель) внутривенно в боковую хвостовую вену посредством гидродинамической инъекции. Плазму собирали через 72 часа после инъекции и оценивали ее на наличие циркулирующего фермента GAA посредством анализа активности GAA и вестерн-блоттинга.

Результаты

[0414] На фигурах 11 и 12 показана оценка разных GAA-экспрессирующих кассет посредством гидродинамической инъекции самцам мышей C57BL/6 посредством анализа активности GAA и вестерн-блоттинга, соответственно, в плазме. Как показано на фигуре 11, уровни GAA в плазме нормализовали по родительской конструкции (spΔGAApar). Результаты представляют собой среднее для биологических параллелей n=4-5. Планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению. NS, незначимо. * p<0,05, ** p<0,01.

[0415] Как показано на фигуре 12, при анализе вестерн-блоттинга GAA плазмы на столбиковой диаграмме представлен количественный анализ верхней полосы, нормализованной по нижней, неспецифической полосе. Показана каждая из биологических параллелей (n=4-5 на группу).

[0416] Оценка кодон-оптимизированных GAA-экспрессирующих кассет у мышей посредством гидродинамической инъекции показала, что эти кассеты могут приводить к экспрессии и секреции продукта трансгена GAA из печени мыши с уровнями, схожими с наблюдаемыми в случае родительской конструкции GAA spΔGAApar (фигура 11). Как и в исследованиях in vitro на клетках Huh7 (пример 2), GAA-экспрессирующие кассеты, несущие последовательность поли-A BGH со сниженным содержанием CpG, превосходили кассеты с поли-A BGH дикого типа. Неожиданно, по сравнению с результатами в примере 2, некоторые из кодон-оптимизированных конструкций GAA функционировали так же хорошо или лучше, чем родительская плазмида spΔGAApar.

ПРИМЕР 4

Дизайн исследования - активность вектора у мышей

[0417] Для оценки активности кодон-оптимизированных кассет GAA по изобретению по сравнению с родительской кассетой spΔGAApar, spΔGAApar и 9 кодон-оптимизированных кассет упаковывали в вектор AAV, содержащий капсиды SEQ ID NO: 30-32 (таблица 1). Пяти самцам мышей C57BL/6 на группу инъецировали внутривенно через хвостовую вену 1 из 2 доз вектора (5×10¹¹ ВГ/кг или 2×10¹² ВГ/кг). Активность циркулирующей GAA измеряли в динамике после введения вектора AAV мышам. Плазму тестировали на активность GAA раз в две недели. В день 70 7 из 10 групп тестируемых животных умерщвляли, а остальные три группы (SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и родительский вектор) умерщвляли в день 147.

Результаты

[0418] На фигуре 13 показана оценка различных кодон-оптимизированных GAA-экспрессирующих кассет, упакованных в вектор AAV (SEQ ID NO: 30-32), на самцах мышей C57BL/6 с помощью анализа активности GAA в плазме через 70 дней после инфузии вектора. Результаты представляют собой среднее для биологических параллелей n=4-5. Планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению. NS, не значимо. * p<0,05, ** p<0,01.

[0419] Два вектора, SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02, неизменно демонстрировали значимо более высокую активность GAA в плазме (приблизительно в 2-3 раза более высокую в высокой дозе) по сравнению с родительским вектором (обозначенным в настоящем описании как SPK-AAV-11).

[0420] На фигуре 14 показана оценка различных кодон-оптимизированных GAA-экспрессирующих кассет, упакованных в вектор AAV (SEQ ID NO: 30-32), на самцах мышей C57BL/6 с помощью вестерн-блоттинга GAA в плазме через 7 дней после инфузии вектора. Результаты представляют собой среднее для биологических параллелей n=4-5. Планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению. NS, не значимо. * p<0,05, ** p<0,01.

[0421] На фигуре 15 показаны уровни активности GAA, измеренные в плазме после введения мышам кодон-оптимизированных GAA-экспрессирующих кассет, упакованный в вектор AAV (SEQ ID NO: 30-32). Самцам мышей C57BL/6 инъецировали дозу 5×10¹¹(верхняя панель) или 2×10¹² ВГ/кг (нижняя панель) любого из двух GAA-экспрессирующих векторов AAV с лучшими свойствами (SEQ ID NO: 30-32) (n=5 животных/группу). Для сравнения показана активность GAA, измеряемая в плазме мышей, которым вводили вектор SPK-AAV-11 (родительская конструкция spΔGAApar). Начиная со дня 42 активность GAA в плазме являлась значимо более высокой в случае векторов SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02, чем вектора SPK-AAV-11 (***p≤0,001,****p≤0,0001 по критерию множественных сравнений Тьюки-Крамера).

ПРИМЕР 5

Дизайн исследования - активность у крыс

[0422] Целью этого исследования являлась оценка активности SPK-AAV-02 на двух разных линиях крыс. Активность циркулирующей GAA измеряли в плазме после введения вектора крысам Wistar Hannover (n=4) и крысам Спрег-Доули (n=5). Самцам мышей инъецировали внутривенно через хвостовую вену 2×10¹³ ВГ/кг вектора.

Результаты

[0423] На фигуре 16 показана оценка SPK-AAV-02 (pAAV-ApoE/hAAT.GAA13.BGH, упакованного в вектор AAV (SEQ ID NO: 30-32)) на самцах крыс Wistar Hanover и крыс Спрег-Доули по сравнению с мышами C57BL/6 с помощью анализа активности GAA в плазме. Результаты представляют собой среднее для биологических параллелей n=4-5. Планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению.

[0424] Уровни активности GAA начинали выходить на плато день 28 при измеряемой активности GAA приблизительно 15000 нмоль/ч/мл. Мышам инъецировали SPK-AAV-02 во в 10 раз меньшей дозе (2×10¹² ВГ/кг вектора), чем крысам.

ПРИМЕР 6

Дизайн исследования - активность у не являющихся человеком приматов (NHP), часть 1

[0425] Для оценки длительных эффектов экспрессии секретируемой GAA однократную дозу вектора SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 или SPK-AAV-10 вводили биологическим видам, филогенетически близким человеку, макакам-резусам (Macaca mulatta), и животных оценивали на уровни активности GAA в плазме.

[0426] Самцов макак-резусов (n=3/дозовую когорту) подвергали 30-минутной инфузии IV в подкожную вену ноги в однократной дозе 6×10¹² ВГ/кг вектора SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 или SPK-AAV-10. После введения вектора AAV животных ежедневно подвергали мониторингу клинических показателей и еженедельно собирали кровь.

Результаты

[0427] Макакам-резусам инъецировали дозу 6×10¹² ВГ/кг GAA-экспрессирующих векторов AAV (SEQ ID NO: 30-32) (n=3 животных/группу). На фигуре 17 показаны уровни активности GAA, измеряемой в плазме после введения GAA-экспрессирующих кассет, упакованных в вектор AAV (SEQ ID NO: 30-32), самцам макак-резусов. Не наблюдали значимых различий уровней активности GAA в плазме в случае NHP, которым инъецировали вектор SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10.

[0428] Предварительные данные в исследовании NHP подтверждают результаты, наблюдаемые в исследованиях на мышах, и свидетельствуют о том, что уровни активности GAA в плазме, являющиеся результатом введения SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02, являются схожими (фигура 17).

ПРИМЕР 7

Дизайн исследования - активность у не являющихся человеком приматов, часть 2

[0429] Основной целью этого исследования являлась оценка профиля трансдукции SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02 у зеленых мартышек (AGM; Chlorocebus sabaeus). Самцов AGM (n=4/дозовую когорту) подвергали 30-минутной инфузии IV в подкожную вену ноги в однократной дозе 6×10¹² вектора ВГ/кг SPK-AAV-01 или SPK-AAV-02. После введения вектора AAV животных ежедневно подвергали мониторингу клинических показателей и еженедельно собирали кровь.

Результаты

[0430] Предварительные данные в исследовании зеленых мартышек подтверждают результаты, наблюдаемые в исследованиях на мышах, о том, что уровни активности GAA в плазме, являющиеся результатом введения SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02, являются схожими (фигура 18).

ПРИМЕР 8

Выводы

[0431] Кодон-оптимизированные кассеты GAA, экспрессирующие секретируемую GAA человека, представляют собой значительное улучшение по сравнению с родительской конструкцией spΔGAApar. В частности, SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02 демонстрируют исключительную активность и экспрессию секретируемой GAA человека в культуре клеток, у грызунов и в двух моделях на не являющихся человеком приматах.

ПРИМЕР 9

Дизайн исследования - диапазоны доз у NHP

[0432] Для оценки эффекта дозы в случае экспрессии секретируемой GAA три дозы вектора SPK-AAV-02 вводили виду приматов, филогенетически близкому людям, макакам-резусам (Macaca mulatta), и животных оценивали на уровни активности GAA в течение одного месяца.

[0433] Самцов макак-резусов (n=4/дозовую когорту) подвергали 30-минутной внутривенной (IV) инфузии в подкожную вену ноги в дозе 2×10¹²,6×10¹², 2×10¹³ ВГ/кг вектора SPK-AAV-02. Самок макак-резусов (n=4/дозовую когорту) подвергали 30-минутной IV инфузии в подкожную вену ноги в дозе 2×10¹³ ВГ/кг вектора SPK-AAV-02. После введения вектора AAV животных ежедневно подвергали мониторингу клинических признаков. Кровь собирали еженедельно в течение 4 недель для измерения активности GAA, уровней антигена GAA, образования IgG против GAA, общего и биохимического анализа крови, включая уровни глюкозы, для мониторинга потенциальных изменений гликемии.

Результаты

[0434] На фигуре 21 показаны уровни активности GAA, измеряемые в плазме после введения вектора SPK-AAV-02 самцам и самкам макак-резусов. Результаты в отношении активности GAA, измеряемой в плазме через 7, 14, 21 и 28 дней после инъекции вектора, свидетельствуют о корреляции между дозой вектора и уровнем активности GAA в плазме. Уровни активности GAA в плазме самок NHP, которым инъецировали дозу 2×10¹³ ВГ/кг, являлись приблизительно в 0,5 раз более низкими (49,6%), чем уровни, измеряемые у самцов NHP, которым инъецировали равную дозу.

[0435] Данные в этом исследовании на NHP подтверждают результаты, наблюдаемые в исследованиях на мышах, а именно, что уровни активности GAA в плазме, достигнутые с помощью векторов AAV для экспрессии секретируемой GAA, приводят к дозозависимой активности GAA в плазме после введения вектора (фигура 21). При однократной инфузии SPK-AAV-02 NHP в трех увеличивающихся дозах наблюдали дозозависимую экспрессию GAA в плазме NHP.

ПРИМЕР 10

Исследование на NHP в течение девяти месяцев

[0436] Каждый из SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10 вводили в однократной дозе (6×10¹² ВГ/кг) посредством внутривенной инфузии самцам макак-резусов (Macaca mulatta). В течение исследования у части животных, которым вводили векторы, экспрессирующие секретируемую GAA, наблюдали снижение активного белка GAA в плазме и сопутствующее повышение уровней антител IgG против GAA. Утрата активности GAA и уровня антигена в плазме, вероятно, являлась результатом развития IgG-опосредованного гуморального иммунного клиренса белкового продукта трансгена человека. Для снижения гуморального иммунного ответа и, вероятно, восстановления детектируемых уровней циркулирующего фермента GAA, начиная со дня 183, для некоторых животных использовали иммуносупрессорную схему лечения ежемесячного введения ритуксимаба в комбинации с ежедневным введением циклоспорина A.

Результаты

[0437] Уровни секретируемой и активной GAA в плазме определяли у всех животных, наблюдая пиковые средние уровни активности в день 15 482,07±47,90, 664,43±417,55 и 427,833±307,94 нмоль/мл/ч в случае SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10, соответственно. Наблюдали детектируемые уровни циркулирующего антигена GAA со средними пиковыми уровнями 14,84±2,21, 19,11±23,23, 14,64±16,96 нг/мл у животных, которым вводили SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10, соответственно. Одновременно с наблюдаемым снижением циркулирующей GAA, начиная со дня 15, наблюдали повышение уровней циркулирующих IgG против GAA. С помощью анализа векторных геномов посредством qPCR в ткани печени подтверждали наличие вектора в печени, соответствующее среднему количеству копий векторного генома 6,39±2,72, 11,43±4,23 и 19,01±13,93 на гаплоидный геном, в случае животных, которым вводили SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10, соответственно.

[0438] Образцы печени анализировали на уровни полноразмерной GAA и расщепленной GAA (лизосомальной формы). Исследуемые образцы сравнивали с образцами печени вектор-наивных макак-резусов, служащих в качестве отрицательного контроля, не демонстрировавших детектируемые уровни расщепленной или интактной GAA при уровнях белковой нагрузки (n=3). Количество полноразмерного белка в печени исследуемых животных составляло 4,0±7,0, 5,4±9,1, 11,0±11,3 нг GAA/мг общего белка у животных, которым вводили SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10, соответственно. Каждая когорта содержала боле высокие уровни расщепленной GAA, чем полноразмерной GAA, при этом наблюдали уровни 41,6±57,6, 44,4±74,5, 49,0±40,3 нг GAA/мг общего белка у животных, которым вводили SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10, соответственно. Независимо от процессинга GAA, различия между группами не являлись значимыми (P=0,72 в случае полноразмерной (интактной) формы; P=0,83 в случае лизосомальной (расщепленной) формы по критерию Краскелла-Уоллиса). В конце во всех группах, которым вводили векторы AAV по изобретению, наблюдали средние детектируемые уровни GAA в печени выше исходного уровня.

Выводы

[0439] Введение каждого из SPK-AAV-01, SPK-AAV-02 и SPK-AAV-10 приводило к детектируемым и повышенным уровням антигена GAA в плазме, достигающим пика в недели 2-3 и линейно коррелирующим с активностью GAA, при этом наблюдают схожую кинетику, независимо от векторного генома. Активность GAA и уровни антигена GAA в плазме снижались последовательно в последующие моменты времени у всех животных, кроме одного. Как ранее наблюдали у NHP, которым вводили векторы AAV, наблюдали гуморальный ответ на продукт трансгена человека, начиная со дня 43, который обратно коррелировал с уровнями антигена GAA в плазме у всех животных, у которых развился GAA-специфический IgG-ответ. Супрессия уровней IgG против GAA посредством введения иммуносупрессорного средства, нацеленного на опосредованный B-клетками IgG-ответ, (ритуксимаба) приводила к восстановлению детектируемых уровней GAA в плазме у подгруппы животных. Во всех группах копии векторного генома являлись детектируемыми в печени в конце исследования даже в отсутствие измеримых уровней циркулирующей GAA в плазме. Соответственно, белок GAA определяли во всех тканях печени к концу исследования в случае введения вектора, в то время как антиген GAA находился ниже предела определения в ткани печени, неподвергнутой воздействию. В совокупности, эти результаты свидетельствуют о том, что векторы AAV по изобретению могут опосредовать длительную экспрессию секретируемой GAA человека в печени в течение более 9 месяцев, независимо от развития гуморального ответа на продукт трансгена человека.

ПРИМЕР 11

Исследование иммуносупрессии на грызунах в течение девяти недель

[0440] Уровни экспрессии продукта трансгена GAA измеряли в течение девяти недель после внутривенного введения однократной дозы 2×10¹² ВГ/кг частиц SPK-AAV-02 в присутствии или отсутствие рапамицина и/или преднизолона у самцов и самок мышей C57BL/6. Мышей тестировали в 5 группах, как показано в таблице 2.

Таблица 2 - Определение групп и уровни доз

Группа Количество животных SPK-AAV-02 (ВГ/кг) Рапамицин
(2-3 мг/кг)* Преднизолон
(1-0,25 мг/кг)** Самцы Самки 1 5 5 Носитель 2 10 10 2×10¹² 3 10 10 X 4 10 10 X 5 10 10 X X

ВГ=векторные геномы, X=введение;

* Рапамицин вводили ежедневно в количестве 2 мг/кг со дня (-)7 до дня 5. Начиная со дня 6, введение заменяли на 3 мг/кг через день;

** Преднизолон вводили в концентрации 1 мг/кг со дня (-)1 до дня 15, 0,5 мг/кг со дня 16 до дня 22, и 0,25 мг/кг со дня 23 до дня 28.

[0441] В группах, которым вводили иммуносупрессорные средства, средства вводили перед введением частиц AAV и в течение первых 5 недель исследования. После завершения введения AAV животных подвергали мониторингу клинических показателей и массы тела в течение 9 недель. В конце исследования проводили клинический и биохимический анализ крови и гистопатологический анализ выбранных тканей. Антитела IgG против капсида rAAV и активность GAA в плазме оценивали еженедельно на всем протяжении исследования.

Результаты

[0442] Определяли уровни активности GAA в плазме выше фонового уровня у всех животных, которым вводили вектор. У самцов, которым вводили носитель, в группе 1 наблюдали фоновые уровни приблизительно 300-400 нмоль/мл/ч. Уровни активность циркулирующей GAA повышались после введения вектора с немного разной кинетикой в зависимости от группы иммуносупрессорного лечения, но демонстрировали эквивалентные пиковые средние уровни активности GAA. В частности, пиковые средние уровни активности GAA составляли 16114±5411, 14875±6882, 14890±6882 и 21480±6340 нмоль/мл/ч в случае самцов в группе 2 (SPK-AAV-02 в отдельности), группе 3 (SPK-AAV-02, 2-3 мг/кг рапамицина), группе 4 (SPK-AAV-02, 1-0,25 мг/кг преднизолона) и группе 5 (SPK-AAV-02, 2-3 мг/кг рапамицина, 1-0,25 мг/кг преднизолона), соответственно. Не наблюдали статистически значимых различий пиковых уровней активности GAA между какими-либо из групп введения AAV.

[0443] У самок мышей пиковые средние уровни активности GAA составляли 7380±4034, 5912±3259, 6096±3249 и 9955±3104 нмоль/мл/ч в группе 2, группе 3, группе 4 и группе 5, соответственно. Эти уровни активности GAA значимо превышали фоновый уровень, определяемый у самок животных, которым вводили носитель. Как и в случае самцов мышей, пиковые уровни активности GAA у самок мышей статистически значимо не отличались между какими-либо из групп введения AAV. Наблюдаемые различия уровней активности GAA в плазме между самцами и самками соответствует хорошо описанному явлению сниженной трансдукцией AAV гепатоцитов у самок мышей (Davidoff et al., 2003, Blood, 102:480-488; DOI: 10.1182/blood-2002-09-2889).

[0444] IgG против капсида rAAV в плазме определяли у всех животных, которым вводили SPK-AAV-02, наблюдая пиковые средние уровни 86527±92140, 6695±3555, 64368±29635 и 11374±6053 нг/мл у самцов в группе 2, группе 3, группе 4 и группе 5, соответственно, и пиковые средние уровни 182009±148148, 66141±77925, 182654±90161 и 57752±59192 нг/мл у самок в группах 2, 3, 4 и 5, соответственно. В группе 1 (носитель) самцы и самки имели уровни IgG против капсида rAAV ниже количественного предела анализа во всех временных точках.

Вывод

[0445] Введение SPK-AAV-02 приводило к детектируемым уровням активности GAA у всех животных. Комбинированное лечение рапамицином и преднизолоном приводило к уровням активности GAA, являющимся статистически повышенными (по сравнению с вектором rAAV в отдельности) в дни 22, 36 и 42 у самцов мышей и в день 43 у самок животных. Следует отметить, что различия пиковых уровней активности GAA, независимо от того, когда достигали максимальной экспрессии, не являлись статистически значимыми между какими-либо из групп введения AAV среди полов.

[0446] Гуморальный ответ IgG, индуцированный против капсида rAAV, наблюдали во всех группах, которым вводили SPK-AAV-02. У обоих полов наличие рапамицина (группы 3 и 5) значимо снижало образование IgG против капсида по сравнению с вектором в отдельности. Лечение преднизолоном имело более умеренный эффект в отношении образования IgG против капсида со значительным снижением в дни 15, 43 и 60 у самцов и дни 43 и 60 у самок в группе 4.

[0447] Иммуносупрессия рапамицином и/или преднизолоном у мышей приводила к сниженным гуморальным ответам на капсид rAAV и не влияла значимо на пиковые уровни активности GAA в плазме.

ПРИМЕР 12

4-недельное исследование однократных доз, вводимых NHP совместно с рапамицином

[0448] В этом исследовании оценивали активность циркулирующей GAA (уровни активности GAA в плазме) за период четыре недели после введения однократной дозы SPK-AAV-02 5,5×10¹³ ВГ/кг в присутствии рапамицина трем самцам зеленых мартышек (Chlorocebus sabaeus).

[0449] Животным вводили рапамицин (2 мг/кг ежедневно), начиная за 5 дней до введения AAV и продолжая во время всего четырехнедельного исследования. Однократную дозу 5,5×10¹³ ВГ/кг SPK-AAV-02 вводили внутривенно через подкожную вену ноги. После завершения введения AAV животных подвергали мониторингу клинических показателей и массы тела в течение 4 недель. В завершение исследования проводили клинический и биохимический анализ крови и гистопатологический анализ выбранных тканей. Активность GAA в плазме измеряли еженедельно на всем протяжении исследования.

Результаты

[0450] Уровни активности GAA в плазме превышали фоновый уровень у всех животных после введения SPK-AAV-02 с пиковыми уровнями активности у каждого из трех животных, достигающими 1158,1, 711,9 и 623,8 нмоль/мл/ч в конечной точке измерений (таблица 3).

Таблица 3 - Активность GAA в плазме у отдельных NHP, которым вводили рапамицин.

Активность GAA в плазме (нмоль/мл/ч) Номера отдельных NHP 1 2 3 Среднее ± SD Исходный уровень 2,1 4,9 3,7 3,6±1,4 День 7 777,2 331,3 187,4 432,0±307,5 День 14 924,0 349,9 368,0 547,3±326,4 День 21 973,2 289,6 490,0 584,3±351,4 День 28 1158,1 711,9 623,8 831,3±286,5

Выводы

[0451] Введение SPK-AAV-02 приводило к детектируемой активности GAA в плазме всех трех NHP. Комбинация SPK-AAV-02 и рапамицина хорошо переносилась и имела благоприятный профиль безопасности при всех проводимых тестах.

ПРИМЕР 13

Терапевтическая эффективность в модели болезни Помпе на мышах Gaa^-/-

[0452] Проводили 10-месячное исследование с последующим наблюдением 4-месячных Gaa^-/- мышей (общепринятой модели болезни Помпе на мышах), которым вводили SPK-AAV-02 в трех дозах (1,25×10¹¹, 5×10¹¹ и 2×10¹² ВГ/кг). Исследование показало: (1) дозозависимое повышение активности циркулирующего фермента GAA, (2) значительное улучшение мышечной силы и (3) отсутствие значимых гуморальных иммунных ответов против GAA.

ПРИМЕР 14

Способы

Клеточный анализ для измерения эффективности экспрессии белка с плазмид, кодирующих трансгены секретируемой GAA человека

[0453] Клетки Huh7 высевали в 48-луночные планшеты в количестве 5×10⁴ клеток на лунку на ночь в DMEM+10% FBS+пенициллин/стрептомицин/L-глутамин. С помощью плазмид, полученных с использованием набора Plasmid Giga Kit (Qiagen), трансфицировали клетки в количестве 250 нг на лунку с использованием Lipofectamine^® 2000. Клетки поддерживали при 37°C и 5% CO₂ в течение 48-72 часов и супернатанты собирали и хранили в планшетах для микротитрования с низким удержанием при -80°C до анализа на активность GAA. Супернатанты разводили 1:10 и инкубировали с 3 мМ флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкопиранозида в течение 1 часа при 37°C. Реакцию останавливали через 1 час с помощью карбонатного буфера (pH 10,5) и сравнивали со стандартной кривой, полученной посредством разведения 4-метилумбеллиферона (4-MU) в стоп-буфере и получения 12-точечной стандартной кривой, начиная с 250 пмоль/мкл и заканчивая 0 пмоль/мкл. Планшет считывали при λex 360 нм; λem 449 нм.

Гидродинамическая инъекция плазмидной ДНК для оценки активности плазмид, кодирующих трансгены секретируемой GAA человека

[0454] Плазмиды, полученные с использованием набора Plasmid Giga Kit (Qiagen), разводили в PBS180+0,001% Плюроник. 25 мкг плазмидной ДНК, соответствующей каждой кассете, подлежащей тестированию, вводили самцам мышей C57BL/6 возрастом приблизительно 8 недель внутривенно в латеральную хвостовую вену посредством гидродинамической инъекции. Через 72 часа после инъекции цельную кровь собирали в пробирки с цитратом натрия посредством венесекции подчелюстной вены. Первую каплю крови выбрасывали, 200 мкл крови собирали в цитрат натрия и пробирку переворачивали во избежание гемолиза и свертывания. Образец центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°C. Плазму аликвотировали по пробиркам и хранили в морозильной камере при -80°C до анализа на активность GAA. Образцы плазмы разводили в разной степени и инкубировали с 3 мМ флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкопиранозида в течение 1 часа при 37°C. Реакцию останавливали через 1 час с помощью карбонатного буфера (pH 10,5) и сравнивали со стандартной кривой, полученной посредством разведения 4-MU в стоп-буфере и получения 12-точечной стандартной кривой, начиная с 250 пмоль/мкл и заканчивая 0 пмоль/мл. Планшет считывали при λex 360 нм; λem 449 нм.

Клеточный анализ для измерения активности векторов AAV, кодирующих трансгены секретируемой GAA человека

[0455] Клетки Huh7 высевали в 48-луночные планшеты в количестве 5×10⁴ клеток на лунку на ночь. SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02 из стокового вектора получали в соответствии с кривой доз (множественность заражения, MOI, диапазон 2×10⁶-1×10⁴) в Opti-MEM^TM или DMEM+10% FBS+пенициллин/стрептомицин/L-глутамин. Имеющуюся среду удаляли из клеток Huh7 и заменяли средой, содержащей вирусные частицы. Клетки поддерживали при 37°C и 5% CO₂ в течение 72 часов, супернатанты собирали и хранили в планшетах для микротитрования с низким удержанием при -80°C до анализа на активность GAA. Супернатанты разводили 1:10 и инкубировали с 3 мМ флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкопиранозида в течение 1 часа при 37°C. Реакцию останавливали через 1 час с помощью карбонатного буфера (pH 10,5) и сравнивали со стандартной кривой, полученной посредством разведения 4-MU в стоп-буфере и получения 12-точечной стандартной кривой, начиная с 250 пмоль/мкл и заканчивая 0 пмоль/мкл. Планшет считывали при λex 360 нм; λem 449 нм.

Анализ активности GAA в плазме мышей/крыс

[0456] Цельную кровь собирали в пробирки с цитратом натрия посредством венесекции подчелюстной вены. Первую каплю крови выбрасывали и 200 мкл крови собирали в цитрат натрия; пробирку переворачивали во избежание гемолиза и свертывания. Образец центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°C. Плазму аликвотировали по пробиркам и хранили в морозильной камере -80°C до анализа на активность GAA. Образцы плазмы разводили в разной степени и инкубировали с 3 мМ флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкопиранозида в течение 1 часа при 37°C. Реакцию останавливали через 1 час с помощью карбонатного буфера (pH 10,5) и сравнивали со стандартной кривой, полученной посредством разведения 4-MU в стоп-буфере, и получения 12-точечной стандартной кривой, начиная с 250 пмоль/мкл и заканчивая 0 пмоль/мкл. Планшет считывали при λex 360 нм; λem 449 нм.

Анализ активности GAA в плазме NHP (макаки-резусы/AGM)

[0457] Самцам макак-резусов/зеленых мартышек делали внутривенную инъекцию через подкожную вену ноги и цельную кровь собирали в пробирки с цитратом натрия, которые переворачивали во избежание гемолиза и свертывания. Образец центрифугировали при 10000 об./мин в течение 10 минут при 4°C. Плазму аликвотировали по пробиркам и хранили в морозильной камере при -80°C до анализа на активность GAA. Образцы плазмы разводили в разной степени и инкубировали с 3 мМ флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкопиранозида в течение 1 часа при 37°C. Реакцию останавливали через 1 час с помощью карбонатного буфера (pH 10,5) и сравнивали со стандартной кривой, полученной посредством разведения 4-MU в стоп-буфере и получения 12-точечной стандартной кривой, начиная с 250 пмоль/мкл и заканчивая 0 пмоль/мкл, или 11-точечной стандартной кривой (5 мкМ/мл - 0,49 нМ/мл). Планшет считывали при λex 360 нм; λem 449 нм. Активность GAA для тестируемых образцов интерполировали из стандартной кривой 4-MU и выражали как скорость (наномоль/миллилитр/час (нмоль/мл/ч)).

Оценка уровня белка GAA в супернатантах Huh7 посредством вестерн-блоттинга

[0458] Клетки Huh7 высевали в 48-луночные планшеты в количестве 5×10⁴ клеток на лунку в течение ночи. SPK-AAV-01 и SPK-AAV-02 из стокового вектора подготавливали в соответствии с кривой дозы (множественность заражения, MOI, диапазон 2×10⁶-1×10⁴) в Opti-MEM^TM или DMEM+10% FBS+пенициллин/стрептомицин/L-глутамин. Имеющуюся среду удаляли из клеток Huh7 и заменяли средой, содержащей вирусные частицы. Клетки поддерживали при 37°C и 5% CO₂ в течение 72 часов, супернатанты собирали и хранили в планшетах для микротитрования с низким удержанием при -80°C до анализа на уровень белка GAA. Супернатанты разводили 1:20 буфером RIPA, инкубировали при 95°C в течение 5 минут и анализировали с помощью 4-12% бис-Трис геля NuPage с подвижным буфером MOPS. Белок переносили на мембрану из поливинилидендифторида (pvdf) с использованием системы iBlot^® (ThermoFisher) и блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в буфере Odyssey^® TBS. Мембрану инкубировали в течение ночи при 4°C с первичным антителом, антителом кролика против GAA человека (Abcam), разведенным 1:1000. Мембрану промывали и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов с флуоресцентно меченым вторичным антителом против кролика, разведенным 1:10,000. Мембрану промывали и визуализировали с использованием системы визуализации Li-Core^®. Полосы сравнивали с 10 нг Myozyme^® и маркером. Денситометрический анализ проводили с использованием программного обеспечения Li-Core^® и полосы нормализовали по контролю Myozyme^®.

Оценка уровня белка GAA в плазме мышей посредством вестерн-блоттинга

[0459] Самцам и самкам мышей C57BL/6 делали внутривенную инъекцию через хвостовую вену и цельную кровь собирали в пробирки с цитратом натрия посредством венесекции подчелюстной вены. Первую каплю крови выбрасывали и 200 мкл крови собирали в цитрат натрия; пробирку переворачивали во избежание гемолиза и свертывания. Образец центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°C. Плазму аликвотировали по пробиркам и хранили в морозильной камере при -80°C до анализа уровня белка GAA. Плазму разводили 1:20 буфером RIPA, инкубировали при 95°C в течение 5 минут и анализировали с помощью 4-12% бис-Трис геля NuPage с подвижным буфером MOPS. Белок переносили на мембрану pvdf с использованием системы iBlot^® (ThermoFisher) и блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в буфере Odyssey^® TBS. Мембрану инкубировали в течение ночи при 4°C с первичным антителом, антителом кролика против GAA человека (Abcam), разведенным 1:1000. Мембрану промывали и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов с флуоресцентно меченым вторичным антителом против кролика, разведенным 1:10000. Мембрану промывали и визуализировали с использованием системы визуализации Li-Core^®. Полосы сравнивали с 10 нг Myozyme^® и маркером. Денситометрический анализ проводили с использованием программного обеспечения Li-Core^® программное обеспечение и полосы нормализовали по контролю Myozyme^®.

Оценка уровня белка GAA в плазме NHP посредством WES

[0460] Самцам макак-резусов/зеленых мартышек делали внутривенную инъекцию через подкожную вену ноги и цельную кровь собирали в пробирки с цитратом натрия, которые переворачивали во избежание гемолиза и свертывания. Образцы центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°C. Плазму аликвотировали по пробиркам и хранили в морозильной камере при -80°C до анализа на уровни белка GAA. Образцы плазмы разводили 1:6000 в дилюенте для образцов. К каждому чипу с Myozyme^®, начинающимся с концентрации 50 нг/мл, добавляли 8-точечную двукратную стандартную кривую. Образцы разводили в буфере, подвергали денатурации при 95°C в течение 5 минут и нагружали на чип WES™ (Protein Simple). Первичное антитело добавляли в разведении 1:1000, а вторичное антитело добавляли в рабочем разведении. Чип анализировали с помощью программного обеспечения WES™ Protein Simple, полученные полосы анализировали и сравнивали со стандартной кривой Myozyme^® и нормализовали по неспецифической второй полосе.

Антитела IgG против капсида AAV

[0461] Общее образование IgG против капсида AAV измеряли с использованием анализа ELISA с захватом. Лунки планшета для ELISA покрывали 50 мкл раствора, содержащего 1 мкг/мл частиц rAAV. Общие IgG человека (Southern Biotech, 0150-01) разводили для получения 10-точечной стандартной кривой в диапазоне от 10000 нг/мл до 0,5 нг/мл и добавляли на планшет. Предел количественно определения анализа составлял 460 нг/мл после обратного вычисления. Подготавливали три уровня образцов для контроля качества и включали их в каждый планшет для оценки показателей анализа. Частицы капсида, стандарты и образцы для контроля качества инкубировали в течение ночи при 4°C. После промывки лунки блокировали 2% BSA, 0,05% Tween-20 в PBS в течение 2 часов при комнатной температуре. Серийные разведения образцов в блокирующем буфере наносили на планшет и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. В качестве детекторного антитела использовали HRP-конъюгированное антитело овцы против IgG человека (GE Healthcare, NA933V), разведенное 1:5000 в блокирующем буфере, и инкубировали в планшете в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывки анализировали активность пероксидазы, инкубируя ее в течение 10 минут при комнатной температуре с субстратом 3,3',5,5'-тетраметилбензидином (TMB). Реакцию останавливали с помощью 1 M серной кислоты и планшет считывали с помощью абсорбционного спектрофотометра для чтения планшетов по оптической плотности (OD) при 450 нм. Концентрацию IgG определяли относительно стандартной кривой, полученной с использованием серийного разведения очищенных общих IgG человека.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SPARK THERAPEUTICS, INC.

ANGUELA, Xavier

ARMOUR, Sean

NORDIN, Jayme

<120> КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ КАССЕТЫ КИСЛОЙ

α-ГЛЮКОЗИДАЗЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> 023637-0504752

<140> PCT/US2019/032502

<141> 2019-05-15

<150> 62/672,419

<151> 2018-05-16

<150> 62/734,454

<151> 2018-09-21

<160> 33

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2808

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 1

atggctttcc tgtggctgct gagctgctgg gctctgctgg gcaccacctt tgggctgctg 60

gtgcctaggg agctgtctgg gtctagccct gtgctggagg agactcaccc tgcccatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gctcaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

attacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctaca ttccagctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc tagctataaa 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tatactgcca ccctgactag gactactccc 420

accttttttc ctaaggatat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactattaa ggaccctgcc aataggaggt atgaagtgcc tctggagact 540

cctcatgtgc actctagggc ccccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccctctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaata gggatctggc ccccacccct ggggctaatc tgtatggctc tcatcccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctcctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tcttcctggg ccctgagccc aagtctgtgg tccagcagta tctggatgtg 1020

gtgggctacc cctttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggg 1080

tattcttcta ctgctatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc tcacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggactcta ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt ccctgctatg gtccaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc agctctggcc ctgctggcag ctataggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactgggca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgctctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa cttcatcagg ggctctgagg atgggtgccc caataatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccactatt 1620

tgtgccagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaacc tgcacaatct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccctttgtg 1740

atctctagaa gcacctttgc tggccatggg aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc tctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt ttcctaagga tagcagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagccctggg cagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccccc tggacaccat taatgtgcat 2400

ctgagggctg ggtatattat ccccctgcag gggcctgggc tgactaccac tgagagcagg 2460

cagcagccta tggccctggc tgtggctctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatt 2580

ttcctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaagt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctga 2808

<210> 2

<211> 2808

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 2

atggctttcc tgtggctgct gtcttgctgg gccctgctgg ggactacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg aactgtctgg ctctagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggctt ctaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gccaagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac tctagatttg attgtgcccc tgataaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggctaggggc tgctgctaca tccctgctaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc ctcttacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gactactccc 420

accttcttcc ccaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcatt tcaccatcaa ggatcctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc acagcagggc tccttctccc ctgtactctg tggagttctc tgaggaaccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgatca gttcctgcag ctgtccactt ctctgcctag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccctctg atgctgagca cctcttggac taggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccacccct ggggccaacc tgtatggcag ccaccccttc 840

tatctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa tagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc tccctactgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagctcta ctgccatcac caggcaggtg gtggagaata tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggactcta ggagggactt caccttcaat 1200

aaggatggct tcagagactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc tcttctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactgggca gcccctgatt 1380

gggaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaatcctac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgctagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcta ggggcaccag gccctttgtg 1740

atttctagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg ggcactggac tggggatgtg 1800

tggtctagct gggagcagct ggcttcttct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt gggttcctgg gcaacacttc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg ttcctggagt tccccaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcactcc tgtgctgcag 2220

gctgggaagg ctgaggtgac tggctatttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgccc cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggataccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacatcat tcccctgcag ggccctggcc tgaccactac tgagtctagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg accaaggggg gggaggctag gggggagctg 2520

ttttgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac tcaggtgatc 2580

ttcctggcca ggaacaatac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tatagccctg ataccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctga 2808

<210> 3

<211> 2808

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 3

atggctttcc tgtggctgct gtcttgttgg gctctgctgg gcaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg cagcagccct gtgctggagg agacccaccc tgctcatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggctc accctgggag acccagggct 180

gtgcccactc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgctcc tgacaaggct 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggg tgctgctaca ttcctgctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc cctcttatcc cagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gaccactccc 420

accttctttc ccaaggatat tctgactctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc cctggagact 540

cctcatgtgc atagcagggc cccttctcct ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcactt ctctgcccag ccagtacatt 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccactcct ggggctaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctccagcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcattctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgaaccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc cccctattgg gggctggggt ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccatttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggatagca ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt tcctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tatatgatga ttgtggaccc tgctatcagc agctctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactggcca gcctctgatt 1380

ggcaaggtct ggcctggctc tactgccttc cctgatttta ctaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gatcaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gatatgaatg aaccaagcaa cttcatcaga ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccaccatt 1620

tgtgctagca gccaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaagcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccttttgtg 1740

atcagcagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagcagct gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga ttctgcagtt taacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ctactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtata ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt tccccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg atcatcagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtcac tggctacttc cctctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggctctggg cagcctgccc cccccccctg ctgctcccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgctcccc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacattat ccccctgcag ggcccagggc tgactaccac tgagagcaga 2460

cagcagccca tggctctggc tgtggccctg accaaggggg gggaagctag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctatac ccaggtgatc 2580

ttcctggcta ggaacaacac cattgtcaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

gggctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgctcccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggacatc 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctga 2808

<210> 4

<211> 2808

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 4

atggccttcc tgtggctgct gtcttgctgg gctctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtccccaggg agctgtctgg ctcttctcct gtcctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gcctcccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctata tccctgccaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttctttcccc cctcttatcc tagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggg tacactgcca ccctgaccag gaccaccccc 420

actttcttcc ctaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaat 480

aggctgcact ttactatcaa ggaccctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc attctagggc ccccagcccc ctgtactctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag acagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggct 660

cccctgtttt ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggatctggc tcctacccct ggggccaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgagctgga ggtctactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tctttctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctatc cttttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac cagacaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggacagca ggagggactt cacctttaac 1200

aaggatggct ttagggactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc agccatcagc agctctgggc ctgctgggtc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctgggag cactgccttc cctgatttta ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg atatggtggc tgagtttcat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaatc ctccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgcctcta gccaccagtt cctgagcacc cactataacc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagagccctg gtgaaggcca gagggaccag gccctttgtg 1740

atctctagga gcacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgccagaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaatacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggactcagct gggggccttc tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgtctctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg ctcagcaggc tatgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg tttctggagt ttcccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg accatcagct gctgtggggg gaggctctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tgggtacttc cccctgggga cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagctctggg cagcctgccc ccaccccctg ctgcccctag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctatatcat ccccctgcag ggccctgggc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagagag gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgtc taacttcacc tacagccctg atactaaggt gctggatatc 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttt ctggtgagct ggtgctga 2808

<210> 5

<211> 2808

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 5

atggcctttc tgtggctgct gtcctgctgg gccctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg gagcagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcca gcaggcctgg ccctagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcctaccc agtgtgatgt gccacccaat tctaggtttg actgtgctcc tgacaaggcc 240

atcactcagg agcagtgtga agctaggggg tgctgctaca tcccagccaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctaccc tagctacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcta ccctgaccag gaccactcct 420

accttcttcc ccaaggacat cctgactctg aggctggatg tcatgatgga gactgaaaat 480

aggctgcact tcaccatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc atagcagggc tcccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtca ttgtgaggag acagctggat gggagggtgc tgctgaacac tactgtggct 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgtctacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcact 780

ctgtggaaca gggatctggc ccccactcct ggggccaacc tgtatgggag ccatcccttc 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc tagccctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtctaca tcttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta tctggatgtg 1020

gtggggtatc ccttcatgcc cccctactgg ggcctgggct ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttccct 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggattcta ggagagactt tacttttaac 1200

aaggatggct tcagggattt ccctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgctattagc agctctggcc ctgctgggtc ttacaggcct 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggcag cactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg gatgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa cttcatcagg gggtctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccactatc 1620

tgtgcttctt ctcaccagtt tctgagcacc cactataatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcaccag gccctttgtg 1740

atcagcaggt ctacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggtcttctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggctttctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt taccccttca tgaggaacca caatagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgactc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtata ccctgtttca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg tttctggagt tccctaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

attcattctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg ggtacatcat ccccctgcag ggccctggcc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggctctg accaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagtc tctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaatac tattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtcctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tactctcctg acaccaaggt gctggacatt 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctga 2808

<210> 6

<211> 3016

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 6

atggctttcc tgtggctgct gagctgctgg gctctgctgg gcaccacctt tgggctgctg 60

gtgcctaggg agctgtctgg gtctagccct gtgctggagg agactcaccc tgcccatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gctcaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

attacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctaca ttccagctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc tagctataaa 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tatactgcca ccctgactag gactactccc 420

accttttttc ctaaggatat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactattaa ggaccctgcc aataggaggt atgaagtgcc tctggagact 540

cctcatgtgc actctagggc ccccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccctctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaata gggatctggc ccccacccct ggggctaatc tgtatggctc tcatcccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctcctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tcttcctggg ccctgagccc aagtctgtgg tccagcagta tctggatgtg 1020

gtgggctacc cctttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggg 1080

tattcttcta ctgctatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc tcacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggactcta ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt ccctgctatg gtccaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc agctctggcc ctgctggcag ctataggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactgggca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgctctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa cttcatcagg ggctctgagg atgggtgccc caataatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccactatt 1620

tgtgccagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaacc tgcacaatct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccctttgtg 1740

atctctagaa gcacctttgc tggccatggg aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc tctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt ttcctaagga tagcagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagccctggg cagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccccc tggacaccat taatgtgcat 2400

ctgagggctg ggtatattat ccccctgcag gggcctgggc tgactaccac tgagagcagg 2460

cagcagccta tggccctggc tgtggctctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatt 2580

ttcctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaagt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgact cgagagatct 2820

accggtgaat tcaccgcggg tttaaactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 2880

cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 2940

aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 3000

gggggctagc tctaga 3016

<210> 7

<211> 3016

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 7

atggctttcc tgtggctgct gtcttgctgg gccctgctgg ggactacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg aactgtctgg ctctagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggctt ctaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gccaagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac tctagatttg attgtgcccc tgataaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggctaggggc tgctgctaca tccctgctaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc ctcttacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gactactccc 420

accttcttcc ccaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcatt tcaccatcaa ggatcctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc acagcagggc tccttctccc ctgtactctg tggagttctc tgaggaaccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgatca gttcctgcag ctgtccactt ctctgcctag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccctctg atgctgagca cctcttggac taggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccacccct ggggccaacc tgtatggcag ccaccccttc 840

tatctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa tagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc tccctactgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagctcta ctgccatcac caggcaggtg gtggagaata tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggactcta ggagggactt caccttcaat 1200

aaggatggct tcagagactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc tcttctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactgggca gcccctgatt 1380

gggaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaatcctac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgctagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcta ggggcaccag gccctttgtg 1740

atttctagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg ggcactggac tggggatgtg 1800

tggtctagct gggagcagct ggcttcttct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt gggttcctgg gcaacacttc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg ttcctggagt tccccaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcactcc tgtgctgcag 2220

gctgggaagg ctgaggtgac tggctatttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgccc cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggataccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacatcat tcccctgcag ggccctggcc tgaccactac tgagtctagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg accaaggggg gggaggctag gggggagctg 2520

ttttgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac tcaggtgatc 2580

ttcctggcca ggaacaatac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tatagccctg ataccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgact cgagagatct 2820

accggtgaat tcaccgcggg tttaaactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 2880

cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 2940

aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 3000

gggggctagc tctaga 3016

<210> 8

<211> 3016

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 8

atggctttcc tgtggctgct gtcttgttgg gctctgctgg gcaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg cagcagccct gtgctggagg agacccaccc tgctcatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggctc accctgggag acccagggct 180

gtgcccactc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgctcc tgacaaggct 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggg tgctgctaca ttcctgctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc cctcttatcc cagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gaccactccc 420

accttctttc ccaaggatat tctgactctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc cctggagact 540

cctcatgtgc atagcagggc cccttctcct ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcactt ctctgcccag ccagtacatt 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccactcct ggggctaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctccagcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcattctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgaaccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc cccctattgg gggctggggt ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccatttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggatagca ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt tcctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tatatgatga ttgtggaccc tgctatcagc agctctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactggcca gcctctgatt 1380

ggcaaggtct ggcctggctc tactgccttc cctgatttta ctaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gatcaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gatatgaatg aaccaagcaa cttcatcaga ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccaccatt 1620

tgtgctagca gccaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaagcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccttttgtg 1740

atcagcagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagcagct gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga ttctgcagtt taacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ctactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtata ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt tccccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg atcatcagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtcac tggctacttc cctctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggctctggg cagcctgccc cccccccctg ctgctcccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgctcccc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacattat ccccctgcag ggcccagggc tgactaccac tgagagcaga 2460

cagcagccca tggctctggc tgtggccctg accaaggggg gggaagctag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctatac ccaggtgatc 2580

ttcctggcta ggaacaacac cattgtcaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

gggctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgctcccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggacatc 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgact cgagagatct 2820

accggtgaat tcaccgcggg tttaaactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 2880

cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 2940

aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 3000

gggggctagc tctaga 3016

<210> 9

<211> 3016

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 9

atggccttcc tgtggctgct gtcttgctgg gctctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtccccaggg agctgtctgg ctcttctcct gtcctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gcctcccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctata tccctgccaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttctttcccc cctcttatcc tagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggg tacactgcca ccctgaccag gaccaccccc 420

actttcttcc ctaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaat 480

aggctgcact ttactatcaa ggaccctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc attctagggc ccccagcccc ctgtactctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag acagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggct 660

cccctgtttt ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggatctggc tcctacccct ggggccaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgagctgga ggtctactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tctttctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctatc cttttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac cagacaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggacagca ggagggactt cacctttaac 1200

aaggatggct ttagggactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc agccatcagc agctctgggc ctgctgggtc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctgggag cactgccttc cctgatttta ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg atatggtggc tgagtttcat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaatc ctccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgcctcta gccaccagtt cctgagcacc cactataacc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagagccctg gtgaaggcca gagggaccag gccctttgtg 1740

atctctagga gcacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgccagaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaatacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggactcagct gggggccttc tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgtctctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg ctcagcaggc tatgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg tttctggagt ttcccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg accatcagct gctgtggggg gaggctctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tgggtacttc cccctgggga cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagctctggg cagcctgccc ccaccccctg ctgcccctag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctatatcat ccccctgcag ggccctgggc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagagag gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgtc taacttcacc tacagccctg atactaaggt gctggatatc 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttt ctggtgagct ggtgctgact cgagagatct 2820

accggtgaat tcaccgcggg tttaaactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 2880

cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 2940

aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 3000

gggggctagc tctaga 3016

<210> 10

<211> 3016

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 10

atggcctttc tgtggctgct gtcctgctgg gccctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg gagcagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcca gcaggcctgg ccctagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcctaccc agtgtgatgt gccacccaat tctaggtttg actgtgctcc tgacaaggcc 240

atcactcagg agcagtgtga agctaggggg tgctgctaca tcccagccaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctaccc tagctacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcta ccctgaccag gaccactcct 420

accttcttcc ccaaggacat cctgactctg aggctggatg tcatgatgga gactgaaaat 480

aggctgcact tcaccatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc atagcagggc tcccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtca ttgtgaggag acagctggat gggagggtgc tgctgaacac tactgtggct 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgtctacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcact 780

ctgtggaaca gggatctggc ccccactcct ggggccaacc tgtatgggag ccatcccttc 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc tagccctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtctaca tcttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta tctggatgtg 1020

gtggggtatc ccttcatgcc cccctactgg ggcctgggct ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttccct 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggattcta ggagagactt tacttttaac 1200

aaggatggct tcagggattt ccctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgctattagc agctctggcc ctgctgggtc ttacaggcct 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggcag cactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg gatgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa cttcatcagg gggtctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccactatc 1620

tgtgcttctt ctcaccagtt tctgagcacc cactataatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcaccag gccctttgtg 1740

atcagcaggt ctacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggtcttctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggctttctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt taccccttca tgaggaacca caatagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgactc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtata ccctgtttca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg tttctggagt tccctaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

attcattctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg ggtacatcat ccccctgcag ggccctggcc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggctctg accaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagtc tctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaatac tattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtcctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tactctcctg acaccaaggt gctggacatt 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgact cgagagatct 2820

accggtgaat tcaccgcggg tttaaactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 2880

cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 2940

aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 3000

gggggctagc tctaga 3016

<210> 11

<211> 3076

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 11

atggctttcc tgtggctgct gagctgctgg gctctgctgg gcaccacctt tgggctgctg 60

gtgcctaggg agctgtctgg gtctagccct gtgctggagg agactcaccc tgcccatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gctcaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

attacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctaca ttccagctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc tagctataaa 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tatactgcca ccctgactag gactactccc 420

accttttttc ctaaggatat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactattaa ggaccctgcc aataggaggt atgaagtgcc tctggagact 540

cctcatgtgc actctagggc ccccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccctctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaata gggatctggc ccccacccct ggggctaatc tgtatggctc tcatcccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctcctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tcttcctggg ccctgagccc aagtctgtgg tccagcagta tctggatgtg 1020

gtgggctacc cctttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggg 1080

tattcttcta ctgctatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc tcacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggactcta ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt ccctgctatg gtccaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc agctctggcc ctgctggcag ctataggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactgggca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgctctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa cttcatcagg ggctctgagg atgggtgccc caataatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccactatt 1620

tgtgccagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaacc tgcacaatct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccctttgtg 1740

atctctagaa gcacctttgc tggccatggg aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc tctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt ttcctaagga tagcagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagccctggg cagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccccc tggacaccat taatgtgcat 2400

ctgagggctg ggtatattat ccccctgcag gggcctgggc tgactaccac tgagagcagg 2460

cagcagccta tggccctggc tgtggctctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatt 2580

ttcctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaagt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgaag atctagagct 2820

gaattcctgc agccaggggg atcagcctct actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 2880

gtttgcccct cccccttgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 2940

taataaaatg aggaaattgc atcacattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 3000

ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 3060

gcagtgggct ctatgg 3076

<210> 12

<211> 3076

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 12

atggctttcc tgtggctgct gtcttgctgg gccctgctgg ggactacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg aactgtctgg ctctagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggctt ctaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gccaagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gccccccaac tctagatttg attgtgcccc tgataaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggctaggggc tgctgctaca tccctgctaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctatcc ctcttacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gactactccc 420

accttcttcc ccaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcatt tcaccatcaa ggatcctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc acagcagggc tccttctccc ctgtactctg tggagttctc tgaggaaccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgatca gttcctgcag ctgtccactt ctctgcctag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccctctg atgctgagca cctcttggac taggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccacccct ggggccaacc tgtatggcag ccaccccttc 840

tatctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa tagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc tccctactgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagctcta ctgccatcac caggcaggtg gtggagaata tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggactcta ggagggactt caccttcaat 1200

aaggatggct tcagagactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgccatcagc tcttctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactgggca gcccctgatt 1380

gggaaggtgt ggcctggctc tactgccttc cctgacttca ccaatcctac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgctagct ctcaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca cagggccctg gtgaaggcta ggggcaccag gccctttgtg 1740

atttctagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg ggcactggac tggggatgtg 1800

tggtctagct gggagcagct ggcttcttct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt gggttcctgg gcaacacttc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttc taccctttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg ttcctggagt tccccaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcactcc tgtgctgcag 2220

gctgggaagg ctgaggtgac tggctatttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgccc cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggataccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacatcat tcccctgcag ggccctggcc tgaccactac tgagtctagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg accaaggggg gggaggctag gggggagctg 2520

ttttgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctacac tcaggtgatc 2580

ttcctggcca ggaacaatac cattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tatagccctg ataccaaggt gctggatatt 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgaag atctagagct 2820

gaattcctgc agccaggggg atcagcctct actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 2880

gtttgcccct cccccttgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 2940

taataaaatg aggaaattgc atcacattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 3000

ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 3060

gcagtgggct ctatgg 3076

<210> 13

<211> 3076

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 13

atggctttcc tgtggctgct gtcttgttgg gctctgctgg gcaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg cagcagccct gtgctggagg agacccaccc tgctcatcag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggctc accctgggag acccagggct 180

gtgcccactc agtgtgatgt gccccccaac agcaggtttg actgtgctcc tgacaaggct 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggg tgctgctaca ttcctgctaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc cctcttatcc cagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcca ccctgaccag gaccactccc 420

accttctttc ccaaggatat tctgactctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaac 480

aggctgcact tcactatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc cctggagact 540

cctcatgtgc atagcagggc cccttctcct ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag gcagctggat ggcagggtgc tgctgaacac cactgtggcc 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgagcactt ctctgcccag ccagtacatt 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca cctcttggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggacctggc ccccactcct ggggctaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt ttctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc ctctccagcc ctgtcttgga ggagcactgg gggcattctg 960

gatgtgtaca ttttcctggg gcctgaaccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctacc ccttcatgcc cccctattgg gggctggggt ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccatttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggatagca ggagggattt caccttcaac 1200

aaggatggct tcagggactt tcctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tatatgatga ttgtggaccc tgctatcagc agctctggcc ctgctggctc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttt atcactaatg aaactggcca gcctctgatt 1380

ggcaaggtct ggcctggctc tactgccttc cctgatttta ctaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gatcaggtgc cttttgatgg catgtggatt 1500

gatatgaatg aaccaagcaa cttcatcaga ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccaccatt 1620

tgtgctagca gccaccagtt cctgagcacc cactacaatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaagcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcactag gccttttgtg 1740

atcagcagga gcacttttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagcagct gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga ttctgcagtt taacctgctg 1860

ggggtgcccc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgagcctgc ctcaggagcc ctactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc cacctgtata ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg ttcctggagt tccccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg atcatcagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtcac tggctacttc cctctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggctctggg cagcctgccc cccccccctg ctgctcccag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgctcccc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctacattat ccccctgcag ggcccagggc tgactaccac tgagagcaga 2460

cagcagccca tggctctggc tgtggccctg accaaggggg gggaagctag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagaggg gggcctatac ccaggtgatc 2580

ttcctggcta ggaacaacac cattgtcaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

gggctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgctcccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tacagccctg acaccaaggt gctggacatc 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgaag atctagagct 2820

gaattcctgc agccaggggg atcagcctct actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 2880

gtttgcccct cccccttgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 2940

taataaaatg aggaaattgc atcacattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 3000

ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 3060

gcagtgggct ctatgg 3076

<210> 14

<211> 3076

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 14

atggccttcc tgtggctgct gtcttgctgg gctctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtccccaggg agctgtctgg ctcttctcct gtcctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcta gcaggcctgg ccccagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcccaccc agtgtgatgt gcctcccaac agcaggtttg actgtgcccc tgacaaggcc 240

atcacccagg agcagtgtga ggccaggggc tgctgctata tccctgccaa gcagggcctg 300

cagggggctc agatgggcca gccctggtgc ttctttcccc cctcttatcc tagctataag 360

ctggagaacc tgagcagctc tgagatgggg tacactgcca ccctgaccag gaccaccccc 420

actttcttcc ctaaggacat cctgaccctg aggctggatg tgatgatgga gactgagaat 480

aggctgcact ttactatcaa ggaccctgcc aacaggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc attctagggc ccccagcccc ctgtactctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtga ttgtgaggag acagctggat ggcagggtcc tgctgaacac cactgtggct 660

cccctgtttt ttgctgacca gttcctgcag ctgagcacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcacct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcacc 780

ctgtggaaca gggatctggc tcctacccct ggggccaacc tgtatggctc tcaccccttt 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgct 900

atggatgtgg tgctgcagcc cagccctgcc ctgagctgga ggtctactgg gggcatcctg 960

gatgtgtaca tctttctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta cctggatgtg 1020

gtgggctatc cttttatgcc cccctattgg ggcctgggct tccacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac cagacaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttcccc 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactac atggacagca ggagggactt cacctttaac 1200

aaggatggct ttagggactt ccctgccatg gtgcaggagc tgcatcaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc agccatcagc agctctgggc ctgctgggtc ttacaggccc 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctgggag cactgccttc cctgatttta ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg atatggtggc tgagtttcat gaccaggtgc cctttgatgg catgtggatt 1500

gacatgaatg agcccagcaa tttcatcagg ggctctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaatc ctccctatgt gcctggggtg gtggggggca ccctgcaggc tgccaccatc 1620

tgtgcctcta gccaccagtt cctgagcacc cactataacc tgcataacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagagccctg gtgaaggcca gagggaccag gccctttgtg 1740

atctctagga gcacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggagctctt gggagcagct ggccagctct gtgccagaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggcttcctgg gcaatacctc tgaagagctg 1920

tgtgtgaggt ggactcagct gggggccttc tatcccttca tgaggaacca caacagcctg 1980

ctgtctctgc cccaggagcc ctacagcttc tctgagcctg ctcagcaggc tatgaggaag 2040

gccctgaccc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtaca ccctgttcca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc caggcccctg tttctggagt ttcccaagga cagcagcacc 2160

tggactgtgg accatcagct gctgtggggg gaggctctgc tgattacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tgggtacttc cccctgggga cttggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aagctctggg cagcctgccc ccaccccctg ctgcccctag ggagcctgcc 2340

atccactctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg gctatatcat ccccctgcag ggccctgggc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg actaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagag cctggaggtg ctggagagag gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaacac cattgtgaat gagctggtga gggtgacttc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtgctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgtc taacttcacc tacagccctg atactaaggt gctggatatc 2760

tgtgtgagcc tgctgatggg ggagcagttt ctggtgagct ggtgctgaag atctagagct 2820

gaattcctgc agccaggggg atcagcctct actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 2880

gtttgcccct cccccttgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 2940

taataaaatg aggaaattgc atcacattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 3000

ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 3060

gcagtgggct ctatgg 3076

<210> 15

<211> 3076

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 15

atggcctttc tgtggctgct gtcctgctgg gccctgctgg ggaccacctt tggcctgctg 60

gtgcccaggg agctgtctgg gagcagccca gtgctggagg agacccaccc tgcccaccag 120

cagggggcca gcaggcctgg ccctagggat gcccaggccc accctggcag gcccagggct 180

gtgcctaccc agtgtgatgt gccacccaat tctaggtttg actgtgctcc tgacaaggcc 240

atcactcagg agcagtgtga agctaggggg tgctgctaca tcccagccaa gcagggcctg 300

cagggggccc agatgggcca gccctggtgc ttcttccccc ccagctaccc tagctacaag 360

ctggagaatc tgagcagctc tgagatgggc tacactgcta ccctgaccag gaccactcct 420

accttcttcc ccaaggacat cctgactctg aggctggatg tcatgatgga gactgaaaat 480

aggctgcact tcaccatcaa ggaccctgcc aataggaggt atgaggtgcc tctggagacc 540

ccccatgtgc atagcagggc tcccagcccc ctgtattctg tggagttctc tgaggagccc 600

tttggggtca ttgtgaggag acagctggat gggagggtgc tgctgaacac tactgtggct 660

cccctgttct ttgctgacca gttcctgcag ctgtctacca gcctgcccag ccagtacatc 720

actgggctgg ctgagcatct gagccccctg atgctgagca ccagctggac caggatcact 780

ctgtggaaca gggatctggc ccccactcct ggggccaacc tgtatgggag ccatcccttc 840

tacctggccc tggaggatgg gggctctgcc catggggtgt tcctgctgaa cagcaatgcc 900

atggatgtgg tgctgcagcc tagccctgcc ctgagctgga ggagcactgg gggcatcctg 960

gatgtctaca tcttcctggg gcctgagccc aagtctgtgg tgcagcagta tctggatgtg 1020

gtggggtatc ccttcatgcc cccctactgg ggcctgggct ttcacctgtg caggtggggc 1080

tacagcagca ctgccatcac caggcaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttccct 1140

ctggatgtgc agtggaatga cctggactat atggattcta ggagagactt tacttttaac 1200

aaggatggct tcagggattt ccctgccatg gtgcaggagc tgcaccaggg gggcaggagg 1260

tacatgatga ttgtggaccc tgctattagc agctctggcc ctgctgggtc ttacaggcct 1320

tatgatgagg gcctgaggag gggggtgttc atcaccaatg agactggcca gcccctgatt 1380

ggcaaggtgt ggcctggcag cactgccttc cctgacttca ccaaccccac tgccctggcc 1440

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc cctttgatgg gatgtggatt 1500

gacatgaatg agccctctaa cttcatcagg gggtctgagg atggctgccc caacaatgag 1560

ctggagaacc ccccctatgt gcctggggtg gtggggggca ctctgcaggc tgccactatc 1620

tgtgcttctt ctcaccagtt tctgagcacc cactataatc tgcacaacct gtatggcctg 1680

actgaggcca ttgccagcca tagggccctg gtgaaggcca ggggcaccag gccctttgtg 1740

atcagcaggt ctacctttgc tggccatggc aggtatgctg gccactggac tggggatgtg 1800

tggtcttctt gggagcagct ggccagctct gtgcctgaga tcctgcagtt caacctgctg 1860

ggggtgcctc tggtgggggc tgatgtgtgt ggctttctgg gcaacacctc tgaggagctg 1920

tgtgtgaggt ggacccagct gggggccttt taccccttca tgaggaacca caatagcctg 1980

ctgagcctgc cccaggagcc ttactctttc tctgagcctg cccagcaggc catgaggaag 2040

gccctgactc tgaggtatgc cctgctgccc catctgtata ccctgtttca ccaggcccat 2100

gtggctgggg agactgtggc taggcctctg tttctggagt tccctaagga ctctagcacc 2160

tggactgtgg accaccagct gctgtggggg gaggccctgc tgatcacccc tgtgctgcag 2220

gctggcaagg ctgaggtgac tggctacttc cccctgggca cctggtatga cctgcagact 2280

gtgcctgtgg aggccctggg gagcctgcct cccccccctg ctgcccccag ggagcctgcc 2340

attcattctg agggccagtg ggtgaccctg cctgcccctc tggacaccat caatgtgcac 2400

ctgagggctg ggtacatcat ccccctgcag ggccctggcc tgaccaccac tgagagcagg 2460

cagcagccca tggccctggc tgtggctctg accaaggggg gggaggccag gggggagctg 2520

ttctgggatg atggggagtc tctggaggtg ctggagaggg gggcctacac ccaggtgatc 2580

tttctggcca ggaacaatac tattgtgaat gagctggtga gggtgacctc tgagggggct 2640

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtgctg ggggtggcca ctgcccccca gcaggtcctg 2700

agcaatgggg tgcctgtgag caacttcacc tactctcctg acaccaaggt gctggacatt 2760

tgtgtgtctc tgctgatggg ggagcagttc ctggtgagct ggtgctgaag atctagagct 2820

gaattcctgc agccaggggg atcagcctct actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 2880

gtttgcccct cccccttgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 2940

taataaaatg aggaaattgc atcacattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 3000

ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 3060

gcagtgggct ctatgg 3076

<210> 16

<211> 4730

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 16

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggcctag taggctcaga ggcacacagg agtttctggg 180

ctcaccctgc ccccttccaa cccctcagtt cccatcctcc agcagctgtt tgtgtgctgc 240

ctctgaagtc cacactgaac aaacttcagc ctactcatgt ccctaaaatg ggcaaacatt 300

gcaagcagca aacagcaaac acacagccct ccctgcctgc tgaccttgga gctggggcag 360

aggtcagaga cctctctggg cccatgccac ctccaacatc cactcgaccc cttggaattt 420

cggtggagag gagcagaggt tgtcctggcg tggtttaggt agtgtgagag gggtacccgg 480

ggatcttgct accagtggaa cagccactaa ggattctgca gtgagagcag agggccagct 540

aagtggtact ctcccagaga ctgtctgact cacgccaccc cctccacctt ggacacagga 600

cgctgtggtt tctgagccag gtacaatgac tcctttcggt aagtgcagtg gaagctgtac 660

actgcccagg caaagcgtcc gggcagcgta ggcgggcgac tcagatccca gccagtggac 720

ttagcccctg tttgctcctc cgataactgg ggtgaccttg gttaatattc accagcagcc 780

tcccccgttg cccctctgga tccactgctt aaatacggac gaggacaggg ccctgtctcc 840

tcagcttcag gcaccaccac tgacctggga cagtgaatac cactttcaca atctgctagc 900

gtttaaacga tcctgagaac ttcagggtga gtctatggga cccttgatgt tttctttccc 960

cttcttttct atggttaagt tcatgtcata ggaaggggag aagtaacagg gtacacatat 1020

tgaccaaatc agggtaattt tgcatttgta attttaaaaa atgctttctt cttttaatat 1080

acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct ctttctttca gggcaataat 1140

gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat aacagtgata atttctgggt 1200

taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca tataaattgt aactgatgta 1260

agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac cattctgctt ttattttctg 1320

gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc cttttgctaa tcttgttcat 1380

acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacctgctg gtctctctgc tggcccatca 1440

ctttggcaaa gcacgcgtgc caccatggcc tttctgtggc tgctgtcctg ctgggccctg 1500

ctggggacca cctttggcct gctggtgccc agggagctgt ctgggagcag cccagtgctg 1560

gaggagaccc accctgccca ccagcagggg gccagcaggc ctggccctag ggatgcccag 1620

gcccaccctg gcaggcccag ggctgtgcct acccagtgtg atgtgccacc caattctagg 1680

tttgactgtg ctcctgacaa ggccatcact caggagcagt gtgaagctag ggggtgctgc 1740

tacatcccag ccaagcaggg cctgcagggg gcccagatgg gccagccctg gtgcttcttc 1800

ccccccagct accctagcta caagctggag aatctgagca gctctgagat gggctacact 1860

gctaccctga ccaggaccac tcctaccttc ttccccaagg acatcctgac tctgaggctg 1920

gatgtcatga tggagactga aaataggctg cacttcacca tcaaggaccc tgccaatagg 1980

aggtatgagg tgcctctgga gaccccccat gtgcatagca gggctcccag ccccctgtat 2040

tctgtggagt tctctgagga gccctttggg gtcattgtga ggagacagct ggatgggagg 2100

gtgctgctga acactactgt ggctcccctg ttctttgctg accagttcct gcagctgtct 2160

accagcctgc ccagccagta catcactggg ctggctgagc atctgagccc cctgatgctg 2220

agcaccagct ggaccaggat cactctgtgg aacagggatc tggcccccac tcctggggcc 2280

aacctgtatg ggagccatcc cttctacctg gccctggagg atgggggctc tgcccatggg 2340

gtgttcctgc tgaacagcaa tgccatggat gtggtgctgc agcctagccc tgccctgagc 2400

tggaggagca ctgggggcat cctggatgtc tacatcttcc tggggcctga gcccaagtct 2460

gtggtgcagc agtatctgga tgtggtgggg tatcccttca tgccccccta ctggggcctg 2520

ggctttcacc tgtgcaggtg gggctacagc agcactgcca tcaccaggca ggtggtggag 2580

aacatgacca gggcccactt ccctctggat gtgcagtgga atgacctgga ctatatggat 2640

tctaggagag actttacttt taacaaggat ggcttcaggg atttccctgc catggtgcag 2700

gagctgcacc aggggggcag gaggtacatg atgattgtgg accctgctat tagcagctct 2760

ggccctgctg ggtcttacag gccttatgat gagggcctga ggaggggggt gttcatcacc 2820

aatgagactg gccagcccct gattggcaag gtgtggcctg gcagcactgc cttccctgac 2880

ttcaccaacc ccactgccct ggcctggtgg gaggacatgg tggctgagtt ccatgaccag 2940

gtgccctttg atgggatgtg gattgacatg aatgagccct ctaacttcat cagggggtct 3000

gaggatggct gccccaacaa tgagctggag aaccccccct atgtgcctgg ggtggtgggg 3060

ggcactctgc aggctgccac tatctgtgct tcttctcacc agtttctgag cacccactat 3120

aatctgcaca acctgtatgg cctgactgag gccattgcca gccatagggc cctggtgaag 3180

gccaggggca ccaggccctt tgtgatcagc aggtctacct ttgctggcca tggcaggtat 3240

gctggccact ggactgggga tgtgtggtct tcttgggagc agctggccag ctctgtgcct 3300

gagatcctgc agttcaacct gctgggggtg cctctggtgg gggctgatgt gtgtggcttt 3360

ctgggcaaca cctctgagga gctgtgtgtg aggtggaccc agctgggggc cttttacccc 3420

ttcatgagga accacaatag cctgctgagc ctgccccagg agccttactc tttctctgag 3480

cctgcccagc aggccatgag gaaggccctg actctgaggt atgccctgct gccccatctg 3540

tataccctgt ttcaccaggc ccatgtggct ggggagactg tggctaggcc tctgtttctg 3600

gagttcccta aggactctag cacctggact gtggaccacc agctgctgtg gggggaggcc 3660

ctgctgatca cccctgtgct gcaggctggc aaggctgagg tgactggcta cttccccctg 3720

ggcacctggt atgacctgca gactgtgcct gtggaggccc tggggagcct gcctcccccc 3780

cctgctgccc ccagggagcc tgccattcat tctgagggcc agtgggtgac cctgcctgcc 3840

cctctggaca ccatcaatgt gcacctgagg gctgggtaca tcatccccct gcagggccct 3900

ggcctgacca ccactgagag caggcagcag cccatggccc tggctgtggc tctgaccaag 3960

gggggggagg ccagggggga gctgttctgg gatgatgggg agtctctgga ggtgctggag 4020

aggggggcct acacccaggt gatctttctg gccaggaaca atactattgt gaatgagctg 4080

gtgagggtga cctctgaggg ggctggcctg cagctgcaga aggtgactgt gctgggggtg 4140

gccactgccc cccagcaggt cctgagcaat ggggtgcctg tgagcaactt cacctactct 4200

cctgacacca aggtgctgga catttgtgtg tctctgctga tgggggagca gttcctggtg 4260

agctggtgct gaagatctag agctgaattc ctgcagccag ggggatcagc ctctactgtg 4320

ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctccccct tgccttcctt gaccctggaa 4380

ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcaca ttgtctgagt 4440

aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa 4500

gacaatagca ggcatgctgg ggatgcagtg ggctctatgg cttctgaggc agaaagaacc 4560

agctggggct cgagatccac tagggccgca ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc 4620

ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg 4680

ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcagc tgcctgcagg 4730

<210> 17

<211> 4701

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 17

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggcctag taggctcaga ggcacacagg agtttctggg 180

ctcaccctgc ccccttccaa cccctcagtt cccatcctcc agcagctgtt tgtgtgctgc 240

ctctgaagtc cacactgaac aaacttcagc ctactcatgt ccctaaaatg ggcaaacatt 300

gcaagcagca aacagcaaac acacagccct ccctgcctgc tgaccttgga gctggggcag 360

aggtcagaga cctctctggg cccatgccac ctccaacatc cactcgaccc cttggaattt 420

cggtggagag gagcagaggt tgtcctggcg tggtttaggt agtgtgagag gggtacccgg 480

ggatcttgct accagtggaa cagccactaa ggattctgca gtgagagcag agggccagct 540

aagtggtact ctcccagaga ctgtctgact cacgccaccc cctccacctt ggacacagga 600

cgctgtggtt tctgagccag gtacaatgac tcctttcggt aagtgcagtg gaagctgtac 660

actgcccagg caaagcgtcc gggcagcgta ggcgggcgac tcagatccca gccagtggac 720

ttagcccctg tttgctcctc cgataactgg ggtgaccttg gttaatattc accagcagcc 780

tcccccgttg cccctctgga tccactgctt aaatacggac gaggacaggg ccctgtctcc 840

tcagcttcag gcaccaccac tgacctggga cagtgaatag atcctgagaa cttcagggtg 900

agtctatggg acccttgatg ttttctttcc ccttcttttc tatggttaag ttcatgtcat 960

aggaagggga gaagtaacag ggtacacata ttgaccaaat cagggtaatt ttgcatttgt 1020

aattttaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat ttctaatact 1080

ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct ctttgcacca 1140

ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt ctgcatataa 1200

atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa tagcagctac 1260

aatccagcta ccattctgct tttattttct ggttgggata aggctggatt attctgagtc 1320

caagctaggc ccttttgcta atcttgttca tacctcttat cttcctccca cagctcctgg 1380

gcaacctgct ggtctctctg ctggcccatc actttggcaa agcacgcgtg ccaccatggc 1440

ctttctgtgg ctgctgtcct gctgggccct gctggggacc acctttggcc tgctggtgcc 1500

cagggagctg tctgggagca gcccagtgct ggaggagacc caccctgccc accagcaggg 1560

ggccagcagg cctggcccta gggatgccca ggcccaccct ggcaggccca gggctgtgcc 1620

tacccagtgt gatgtgccac ccaattctag gtttgactgt gctcctgaca aggccatcac 1680

tcaggagcag tgtgaagcta gggggtgctg ctacatccca gccaagcagg gcctgcaggg 1740

ggcccagatg ggccagccct ggtgcttctt cccccccagc taccctagct acaagctgga 1800

gaatctgagc agctctgaga tgggctacac tgctaccctg accaggacca ctcctacctt 1860

cttccccaag gacatcctga ctctgaggct ggatgtcatg atggagactg aaaataggct 1920

gcacttcacc atcaaggacc ctgccaatag gaggtatgag gtgcctctgg agacccccca 1980

tgtgcatagc agggctccca gccccctgta ttctgtggag ttctctgagg agccctttgg 2040

ggtcattgtg aggagacagc tggatgggag ggtgctgctg aacactactg tggctcccct 2100

gttctttgct gaccagttcc tgcagctgtc taccagcctg cccagccagt acatcactgg 2160

gctggctgag catctgagcc ccctgatgct gagcaccagc tggaccagga tcactctgtg 2220

gaacagggat ctggccccca ctcctggggc caacctgtat gggagccatc ccttctacct 2280

ggccctggag gatgggggct ctgcccatgg ggtgttcctg ctgaacagca atgccatgga 2340

tgtggtgctg cagcctagcc ctgccctgag ctggaggagc actgggggca tcctggatgt 2400

ctacatcttc ctggggcctg agcccaagtc tgtggtgcag cagtatctgg atgtggtggg 2460

gtatcccttc atgcccccct actggggcct gggctttcac ctgtgcaggt ggggctacag 2520

cagcactgcc atcaccaggc aggtggtgga gaacatgacc agggcccact tccctctgga 2580

tgtgcagtgg aatgacctgg actatatgga ttctaggaga gactttactt ttaacaagga 2640

tggcttcagg gatttccctg ccatggtgca ggagctgcac caggggggca ggaggtacat 2700

gatgattgtg gaccctgcta ttagcagctc tggccctgct gggtcttaca ggccttatga 2760

tgagggcctg aggagggggg tgttcatcac caatgagact ggccagcccc tgattggcaa 2820

ggtgtggcct ggcagcactg ccttccctga cttcaccaac cccactgccc tggcctggtg 2880

ggaggacatg gtggctgagt tccatgacca ggtgcccttt gatgggatgt ggattgacat 2940

gaatgagccc tctaacttca tcagggggtc tgaggatggc tgccccaaca atgagctgga 3000

gaaccccccc tatgtgcctg gggtggtggg gggcactctg caggctgcca ctatctgtgc 3060

ttcttctcac cagtttctga gcacccacta taatctgcac aacctgtatg gcctgactga 3120

ggccattgcc agccataggg ccctggtgaa ggccaggggc accaggccct ttgtgatcag 3180

caggtctacc tttgctggcc atggcaggta tgctggccac tggactgggg atgtgtggtc 3240

ttcttgggag cagctggcca gctctgtgcc tgagatcctg cagttcaacc tgctgggggt 3300

gcctctggtg ggggctgatg tgtgtggctt tctgggcaac acctctgagg agctgtgtgt 3360

gaggtggacc cagctggggg ccttttaccc cttcatgagg aaccacaata gcctgctgag 3420

cctgccccag gagccttact ctttctctga gcctgcccag caggccatga ggaaggccct 3480

gactctgagg tatgccctgc tgccccatct gtataccctg tttcaccagg cccatgtggc 3540

tggggagact gtggctaggc ctctgtttct ggagttccct aaggactcta gcacctggac 3600

tgtggaccac cagctgctgt ggggggaggc cctgctgatc acccctgtgc tgcaggctgg 3660

caaggctgag gtgactggct acttccccct gggcacctgg tatgacctgc agactgtgcc 3720

tgtggaggcc ctggggagcc tgcctccccc ccctgctgcc cccagggagc ctgccattca 3780

ttctgagggc cagtgggtga ccctgcctgc ccctctggac accatcaatg tgcacctgag 3840

ggctgggtac atcatccccc tgcagggccc tggcctgacc accactgaga gcaggcagca 3900

gcccatggcc ctggctgtgg ctctgaccaa ggggggggag gccagggggg agctgttctg 3960

ggatgatggg gagtctctgg aggtgctgga gaggggggcc tacacccagg tgatctttct 4020

ggccaggaac aatactattg tgaatgagct ggtgagggtg acctctgagg gggctggcct 4080

gcagctgcag aaggtgactg tgctgggggt ggccactgcc ccccagcagg tcctgagcaa 4140

tggggtgcct gtgagcaact tcacctactc tcctgacacc aaggtgctgg acatttgtgt 4200

gtctctgctg atgggggagc agttcctggt gagctggtgc tgaagatcta gagctgaatt 4260

cctgcagcca gggggatcag cctctactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 4320

cccctccccc ttgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 4380

aaatgaggaa attgcatcac attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 4440

ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcagt 4500

gggctctatg gcttctgagg cagaaagaac cagctggggc tcgagatcca ctagggccgc 4560

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 4620

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 4680

gagcgcgcag ctgcctgcag g 4701

<210> 18

<211> 4701

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 18

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggcctag taggctcaga ggcacacagg agtttctggg 180

ctcaccctgc ccccttccaa cccctcagtt cccatcctcc agcagctgtt tgtgtgctgc 240

ctctgaagtc cacactgaac aaacttcagc ctactcatgt ccctaaaatg ggcaaacatt 300

gcaagcagca aacagcaaac acacagccct ccctgcctgc tgaccttgga gctggggcag 360

aggtcagaga cctctctggg cccatgccac ctccaacatc cactcgaccc cttggaattt 420

cggtggagag gagcagaggt tgtcctggcg tggtttaggt agtgtgagag gggtacccgg 480

ggatcttgct accagtggaa cagccactaa ggattctgca gtgagagcag agggccagct 540

aagtggtact ctcccagaga ctgtctgact cacgccaccc cctccacctt ggacacagga 600

cgctgtggtt tctgagccag gtacaatgac tcctttcggt aagtgcagtg gaagctgtac 660

actgcccagg caaagcgtcc gggcagcgta ggcgggcgac tcagatccca gccagtggac 720

ttagcccctg tttgctcctc cgataactgg ggtgaccttg gttaatattc accagcagcc 780

tcccccgttg cccctctgga tccactgctt aaatacggac gaggacaggg ccctgtctcc 840

tcagcttcag gcaccaccac tgacctggga cagtgaatag atcctgagaa cttcagggtg 900

agtctatggg acccttgatg ttttctttcc ccttcttttc tatggttaag ttcatgtcat 960

aggaagggga gaagtaacag ggtacacata ttgaccaaat cagggtaatt ttgcatttgt 1020

aattttaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat ttctaatact 1080

ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct ctttgcacca 1140

ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt ctgcatataa 1200

atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa tagcagctac 1260

aatccagcta ccattctgct tttattttct ggttgggata aggctggatt attctgagtc 1320

caagctaggc ccttttgcta atcttgttca tacctcttat cttcctccca cagctcctgg 1380

gcaacctgct ggtctctctg ctggcccatc actttggcaa agcacgcgtg ccaccatggc 1440

tttcctgtgg ctgctgtctt gttgggctct gctgggcacc acctttggcc tgctggtgcc 1500

cagggagctg tctggcagca gccctgtgct ggaggagacc caccctgctc atcagcaggg 1560

ggctagcagg cctggcccca gggatgccca ggctcaccct gggagaccca gggctgtgcc 1620

cactcagtgt gatgtgcccc ccaacagcag gtttgactgt gctcctgaca aggctatcac 1680

ccaggagcag tgtgaggcca gggggtgctg ctacattcct gctaagcagg gcctgcaggg 1740

ggcccagatg ggccagccct ggtgcttctt ccccccctct tatcccagct ataagctgga 1800

gaacctgagc agctctgaga tgggctacac tgccaccctg accaggacca ctcccacctt 1860

ctttcccaag gatattctga ctctgaggct ggatgtgatg atggagactg agaacaggct 1920

gcacttcact atcaaggacc ctgccaatag gaggtatgag gtgcccctgg agactcctca 1980

tgtgcatagc agggcccctt ctcctctgta ttctgtggag ttctctgagg agccctttgg 2040

ggtgattgtg aggaggcagc tggatggcag ggtgctgctg aacaccactg tggcccccct 2100

gttctttgct gaccagttcc tgcagctgag cacttctctg cccagccagt acattactgg 2160

gctggctgag catctgagcc ccctgatgct gagcacctct tggaccagga tcaccctgtg 2220

gaacagggac ctggccccca ctcctggggc taacctgtat ggctctcacc ccttttacct 2280

ggccctggag gatgggggct ctgcccatgg ggtgtttctg ctgaacagca atgctatgga 2340

tgtggtgctg cagccctctc cagccctgtc ttggaggagc actgggggca ttctggatgt 2400

gtacattttc ctggggcctg aacccaagtc tgtggtgcag cagtacctgg atgtggtggg 2460

ctaccccttc atgcccccct attgggggct ggggtttcac ctgtgcaggt ggggctacag 2520

cagcactgcc atcaccaggc aggtggtgga gaacatgacc agggcccatt tccccctgga 2580

tgtgcagtgg aatgacctgg actacatgga tagcaggagg gatttcacct tcaacaagga 2640

tggcttcagg gactttcctg ccatggtgca ggagctgcac caggggggca ggaggtatat 2700

gatgattgtg gaccctgcta tcagcagctc tggccctgct ggctcttaca ggccctatga 2760

tgagggcctg aggagggggg tgtttatcac taatgaaact ggccagcctc tgattggcaa 2820

ggtctggcct ggctctactg ccttccctga ttttactaac cccactgccc tggcctggtg 2880

ggaggacatg gtggctgagt tccatgatca ggtgcctttt gatggcatgt ggattgatat 2940

gaatgaacca agcaacttca tcagaggctc tgaggatggc tgccccaaca atgagctgga 3000

gaaccccccc tatgtgcctg gggtggtggg gggcactctg caggctgcca ccatttgtgc 3060

tagcagccac cagttcctga gcacccacta caatctgcac aacctgtatg gcctgactga 3120

agccattgcc agccataggg ccctggtgaa ggccaggggc actaggcctt ttgtgatcag 3180

caggagcact tttgctggcc atggcaggta tgctggccac tggactgggg atgtgtggag 3240

cagctgggag cagctggcca gctctgtgcc tgagattctg cagtttaacc tgctgggggt 3300

gcccctggtg ggggctgatg tgtgtggctt cctgggcaac acctctgagg agctgtgtgt 3360

gaggtggacc cagctggggg ccttttatcc cttcatgagg aaccacaaca gcctgctgag 3420

cctgcctcag gagccctact ctttctctga gcctgcccag caggccatga ggaaggccct 3480

gaccctgagg tatgccctgc tgccccacct gtataccctg ttccaccagg cccatgtggc 3540

tggggagact gtggccaggc ccctgttcct ggagttcccc aaggacagca gcacctggac 3600

tgtggatcat cagctgctgt ggggggaggc cctgctgatc acccctgtgc tgcaggctgg 3660

caaggctgag gtcactggct acttccctct gggcacctgg tatgacctgc agactgtgcc 3720

tgtggaggct ctgggcagcc tgcccccccc ccctgctgct cccagggagc ctgccatcca 3780

ctctgagggc cagtgggtga ccctgcctgc tcccctggac accatcaatg tgcacctgag 3840

ggctggctac attatccccc tgcagggccc agggctgact accactgaga gcagacagca 3900

gcccatggct ctggctgtgg ccctgaccaa ggggggggaa gctagggggg agctgttctg 3960

ggatgatggg gagagcctgg aggtgctgga gaggggggcc tatacccagg tgatcttcct 4020

ggctaggaac aacaccattg tcaatgagct ggtgagggtg acttctgagg gggctgggct 4080

gcagctgcag aaggtgactg tgctgggggt ggccactgct ccccagcagg tgctgagcaa 4140

tggggtgcct gtgagcaact tcacctacag ccctgacacc aaggtgctgg acatctgtgt 4200

gtctctgctg atgggggagc agttcctggt gagctggtgc tgaagatcta gagctgaatt 4260

cctgcagcca gggggatcag cctctactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 4320

cccctccccc ttgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 4380

aaatgaggaa attgcatcac attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 4440

ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcagt 4500

gggctctatg gcttctgagg cagaaagaac cagctggggc tcgagatcca ctagggccgc 4560

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 4620

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 4680

gagcgcgcag ctgcctgcag g 4701

<210> 19

<211> 4701

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 19

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggcctag taggctcaga ggcacacagg agtttctggg 180

ctcaccctgc ccccttccaa cccctcagtt cccatcctcc agcagctgtt tgtgtgctgc 240

ctctgaagtc cacactgaac aaacttcagc ctactcatgt ccctaaaatg ggcaaacatt 300

gcaagcagca aacagcaaac acacagccct ccctgcctgc tgaccttgga gctggggcag 360

aggtcagaga cctctctggg cccatgccac ctccaacatc cactcgaccc cttggaattt 420

cggtggagag gagcagaggt tgtcctggcg tggtttaggt agtgtgagag gggtacccgg 480

ggatcttgct accagtggaa cagccactaa ggattctgca gtgagagcag agggccagct 540

aagtggtact ctcccagaga ctgtctgact cacgccaccc cctccacctt ggacacagga 600

cgctgtggtt tctgagccag gtacaatgac tcctttcggt aagtgcagtg gaagctgtac 660

actgcccagg caaagcgtcc gggcagcgta ggcgggcgac tcagatccca gccagtggac 720

ttagcccctg tttgctcctc cgataactgg ggtgaccttg gttaatattc accagcagcc 780

tcccccgttg cccctctgga tccactgctt aaatacggac gaggacaggg ccctgtctcc 840

tcagcttcag gcaccaccac tgacctggga cagtgaatag atcctgagaa cttcagggtg 900

agtctatggg acccttgatg ttttctttcc ccttcttttc tatggttaag ttcatgtcat 960

aggaagggga gaagtaacag ggtacacata ttgaccaaat cagggtaatt ttgcatttgt 1020

aattttaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat ttctaatact 1080

ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct ctttgcacca 1140

ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt ctgcatataa 1200

atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa tagcagctac 1260

aatccagcta ccattctgct tttattttct ggttgggata aggctggatt attctgagtc 1320

caagctaggc ccttttgcta atcttgttca tacctcttat cttcctccca cagctcctgg 1380

gcaacctgct ggtctctctg ctggcccatc actttggcaa agcacgcgtg ccaccatggc 1440

cttcctgtgg ctgctgtctt gctgggctct gctggggacc acctttggcc tgctggtccc 1500

cagggagctg tctggctctt ctcctgtcct ggaggagacc caccctgccc accagcaggg 1560

ggctagcagg cctggcccca gggatgccca ggcccaccct ggcaggccca gggctgtgcc 1620

cacccagtgt gatgtgcctc ccaacagcag gtttgactgt gcccctgaca aggccatcac 1680

ccaggagcag tgtgaggcca ggggctgctg ctatatccct gccaagcagg gcctgcaggg 1740

ggctcagatg ggccagccct ggtgcttctt tcccccctct tatcctagct ataagctgga 1800

gaacctgagc agctctgaga tggggtacac tgccaccctg accaggacca cccccacttt 1860

cttccctaag gacatcctga ccctgaggct ggatgtgatg atggagactg agaataggct 1920

gcactttact atcaaggacc ctgccaacag gaggtatgag gtgcctctgg agacccccca 1980

tgtgcattct agggccccca gccccctgta ctctgtggag ttctctgagg agccctttgg 2040

ggtgattgtg aggagacagc tggatggcag ggtcctgctg aacaccactg tggctcccct 2100

gttttttgct gaccagttcc tgcagctgag caccagcctg cccagccagt acatcactgg 2160

gctggctgag cacctgagcc ccctgatgct gagcaccagc tggaccagga tcaccctgtg 2220

gaacagggat ctggctccta cccctggggc caacctgtat ggctctcacc ccttttacct 2280

ggccctggag gatgggggct ctgcccatgg ggtgttcctg ctgaacagca atgctatgga 2340

tgtggtgctg cagcccagcc ctgccctgag ctggaggtct actgggggca tcctggatgt 2400

gtacatcttt ctggggcctg agcccaagtc tgtggtgcag cagtacctgg atgtggtggg 2460

ctatcctttt atgcccccct attggggcct gggcttccac ctgtgcaggt ggggctacag 2520

cagcactgcc atcaccagac aggtggtgga gaacatgacc agggcccact tccccctgga 2580

tgtgcagtgg aatgacctgg actacatgga cagcaggagg gacttcacct ttaacaagga 2640

tggctttagg gacttccctg ccatggtgca ggagctgcat caggggggca ggaggtacat 2700

gatgattgtg gacccagcca tcagcagctc tgggcctgct gggtcttaca ggccctatga 2760

tgagggcctg aggagggggg tgttcatcac caatgagact ggccagcccc tgattggcaa 2820

ggtgtggcct gggagcactg ccttccctga ttttaccaac cccactgccc tggcctggtg 2880

ggaggatatg gtggctgagt ttcatgacca ggtgcccttt gatggcatgt ggattgacat 2940

gaatgagccc agcaatttca tcaggggctc tgaggatggc tgccccaaca atgagctgga 3000

gaatcctccc tatgtgcctg gggtggtggg gggcaccctg caggctgcca ccatctgtgc 3060

ctctagccac cagttcctga gcacccacta taacctgcat aacctgtatg gcctgactga 3120

ggccattgcc agccatagag ccctggtgaa ggccagaggg accaggccct ttgtgatctc 3180

taggagcacc tttgctggcc atggcaggta tgctggccac tggactgggg atgtgtggag 3240

ctcttgggag cagctggcca gctctgtgcc agagatcctg cagttcaacc tgctgggggt 3300

gcctctggtg ggggctgatg tgtgtggctt cctgggcaat acctctgaag agctgtgtgt 3360

gaggtggact cagctggggg ccttctatcc cttcatgagg aaccacaaca gcctgctgtc 3420

tctgccccag gagccctaca gcttctctga gcctgctcag caggctatga ggaaggccct 3480

gaccctgagg tatgccctgc tgccccatct gtacaccctg ttccaccagg cccatgtggc 3540

tggggagact gtggccaggc ccctgtttct ggagtttccc aaggacagca gcacctggac 3600

tgtggaccat cagctgctgt ggggggaggc tctgctgatt acccctgtgc tgcaggctgg 3660

caaggctgag gtgactgggt acttccccct ggggacttgg tatgacctgc agactgtgcc 3720

tgtggaagct ctgggcagcc tgcccccacc ccctgctgcc cctagggagc ctgccatcca 3780

ctctgagggc cagtgggtga ccctgcctgc ccctctggac accatcaatg tgcacctgag 3840

ggctggctat atcatccccc tgcagggccc tgggctgacc accactgaga gcaggcagca 3900

gcccatggcc ctggctgtgg ccctgactaa ggggggggag gccagggggg agctgttctg 3960

ggatgatggg gagagcctgg aggtgctgga gagaggggcc tacacccagg tgatctttct 4020

ggccaggaac aacaccattg tgaatgagct ggtgagggtg acttctgagg gggctggcct 4080

gcagctgcag aaggtgactg tgctgggggt ggccactgcc ccccagcagg tgctgagcaa 4140

tggggtgcct gtgtctaact tcacctacag ccctgatact aaggtgctgg atatctgtgt 4200

gagcctgctg atgggggagc agtttctggt gagctggtgc tgaagatcta gagctgaatt 4260

cctgcagcca gggggatcag cctctactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 4320

cccctccccc ttgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 4380

aaatgaggaa attgcatcac attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 4440

ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcagt 4500

gggctctatg gcttctgagg cagaaagaac cagctggggc tcgagatcca ctagggccgc 4560

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 4620

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 4680

gagcgcgcag ctgcctgcag g 4701

<210> 20

<211> 4611

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 20

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca ggctcagagg cacacaggag tttctgggct 180

caccctgccc ccttccaacc cctcagttcc catcctccag cagctgtttg tgtgctgcct 240

ctgaagtcca cactgaacaa acttcagcct actcatgtcc ctaaaatggg caaacattgc 300

aagcagcaaa cagcaaacac acagccctcc ctgcctgctg accttggagc tggggcagag 360

gtcagagacc tctctgggcc catgccacct ccaacatcca ctcgacccct tggaatttcg 420

gtggagagga gcagaggttg tcctggcgtg gtttaggtag tgtgagaggg gtacccgggg 480

atcttgctac cagtggaaca gccactaagg attctgcagt gagagcagag ggccagctaa 540

gtggtactct cccagagact gtctgactca cgccaccccc tccaccttgg acacaggacg 600

ctgtggtttc tgagccaggt acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac 660

tgcccaggca aagcgtccgg gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt 720

agcccctgtt tgctcctccg ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc 780

ccccgttgcc cctctggatc cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc 840

agcttcaggc accaccactg acctgggaca gtgaatagat cctgagaact tcagggtgag 900

tctatgggac ccttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta tggttaagtt catgtcatag 960

gaaggggaga agtaacaggg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 1020

ttttaaaaaa tgctttcttc ttttaatata cttttttgtt tatcttattt ctaatacttt 1080

ccctaatctc tttctttcag ggcaataatg atacaatgta tcatgcctct ttgcaccatt 1140

ctaaagaata acagtgataa tttctgggtt aaggcaatag caatatttct gcatataaat 1200

atttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa 1260

tccagctacc attctgcttt tattttctgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca 1320

agctaggccc ttttgctaat cttgttcata cctcttatct tcctcccaca gctcctgggc 1380

aacctgctgg tctctctgct ggcccatcac tttggcaaag cacgcgtgcc accatggctt 1440

tcctgtggct gctgagctgc tgggctctgc tgggcaccac ctttgggctg ctggtgccta 1500

gggagctgtc tgggtctagc cctgtgctgg aggagactca ccctgcccat cagcaggggg 1560

ctagcaggcc tggccccagg gatgctcagg cccaccctgg caggcccagg gctgtgccca 1620

cccagtgtga tgtgcccccc aacagcaggt ttgactgtgc ccctgacaag gccattaccc 1680

aggagcagtg tgaggccagg ggctgctgct acattccagc taagcagggc ctgcaggggg 1740

cccagatggg ccagccctgg tgcttcttcc cccccagcta tcctagctat aaactggaga 1800

acctgagcag ctctgagatg ggctatactg ccaccctgac taggactact cccacctttt 1860

ttcctaagga tatcctgacc ctgaggctgg atgtgatgat ggagactgag aacaggctgc 1920

acttcactat taaggaccct gccaatagga ggtatgaagt gcctctggag actcctcatg 1980

tgcactctag ggcccccagc cccctgtatt ctgtggagtt ctctgaggag ccctttgggg 2040

tgattgtgag gaggcagctg gatggcaggg tgctgctgaa caccactgtg gcccccctgt 2100

tctttgctga ccagttcctg cagctgagca ccagcctgcc cagccagtac atcactgggc 2160

tggctgagca tctgagccct ctgatgctga gcacctcttg gaccaggatc accctgtgga 2220

atagggatct ggcccccacc cctggggcta atctgtatgg ctctcatccc ttttacctgg 2280

ccctggagga tgggggctct gcccatgggg tgtttctgct gaacagcaat gccatggatg 2340

tggtgctgca gccctctcct gccctgagct ggaggagcac tgggggcatc ctggatgtgt 2400

acatcttcct gggccctgag cccaagtctg tggtccagca gtatctggat gtggtgggct 2460

acccctttat gcccccctat tggggcctgg gcttccacct gtgcaggtgg gggtattctt 2520

ctactgctat caccaggcag gtggtggaga acatgaccag ggctcacttc cccctggatg 2580

tgcagtggaa tgacctggac tatatggact ctaggaggga tttcaccttc aacaaggatg 2640

gcttcaggga cttccctgct atggtccagg agctgcatca ggggggcagg aggtacatga 2700

tgattgtgga ccctgccatc agcagctctg gccctgctgg cagctatagg ccctatgatg 2760

agggcctgag gaggggggtg tttatcacta atgaaactgg gcagcccctg attggcaagg 2820

tgtggcctgg ctctactgcc ttccctgact tcaccaaccc cactgctctg gcctggtggg 2880

aggacatggt ggctgagttc catgaccagg tgccttttga tggcatgtgg attgacatga 2940

atgagcccag caacttcatc aggggctctg aggatgggtg ccccaataat gagctggaga 3000

acccccccta tgtgcctggg gtggtggggg gcaccctgca ggctgccact atttgtgcca 3060

gctctcacca gttcctgagc acccactaca acctgcacaa tctgtatggc ctgactgagg 3120

ccattgccag ccacagggcc ctggtgaagg ccaggggcac taggcccttt gtgatctcta 3180

gaagcacctt tgctggccat gggaggtatg ctggccactg gactggggat gtgtggagct 3240

cttgggagca gctggccagc tctgtgcctg agatcctgca gttcaacctg ctgggggtgc 3300

ccctggtggg ggctgatgtg tgtggcttcc tgggcaacac ctctgaagag ctgtgtgtga 3360

ggtggaccca gctgggggcc ttctaccctt tcatgaggaa ccacaacagc ctgctgagcc 3420

tgcctcagga gccttactct ttctctgagc ctgcccagca ggccatgagg aaggccctga 3480

ccctgaggta tgctctgctg ccccacctgt acaccctgtt ccaccaggcc catgtggctg 3540

gggagactgt ggccaggccc ctgttcctgg agtttcctaa ggatagcagc acctggactg 3600

tggaccacca gctgctgtgg ggggaggccc tgctgattac ccctgtgctg caggctggca 3660

aggctgaggt gactggctac ttccccctgg gcacttggta tgacctgcag actgtgcctg 3720

tggaagccct gggcagcctg cctccccccc ctgctgcccc cagggagcct gccatccact 3780

ctgagggcca gtgggtgacc ctgcctgccc ccctggacac cattaatgtg catctgaggg 3840

ctgggtatat tatccccctg caggggcctg ggctgactac cactgagagc aggcagcagc 3900

ctatggccct ggctgtggct ctgactaagg ggggggaggc caggggggag ctgttctggg 3960

atgatgggga gagcctggag gtgctggaga ggggggccta cacccaggtg attttcctgg 4020

ccaggaacaa caccattgtg aatgagctgg tgagggtgac ctctgagggg gctggcctgc 4080

agctgcagaa agtgactgtg ctgggggtgg ccactgcccc ccagcaggtg ctgagcaatg 4140

gggtgcctgt gagcaacttc acctacagcc ctgacaccaa ggtgctggat atttgtgtga 4200

gcctgctgat gggggagcag ttcctggtga gctggtgctg actcgagaga tctaccggtg 4260

aattcaccgc gggtttaaac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 4320

cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 4380

gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtgggggct 4440

agctctagac tcgagatcca ctagggccgc aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4500

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4560

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ctgcctgcag g 4611

<210> 21

<211> 4611

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 21

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca ggctcagagg cacacaggag tttctgggct 180

caccctgccc ccttccaacc cctcagttcc catcctccag cagctgtttg tgtgctgcct 240

ctgaagtcca cactgaacaa acttcagcct actcatgtcc ctaaaatggg caaacattgc 300

aagcagcaaa cagcaaacac acagccctcc ctgcctgctg accttggagc tggggcagag 360

gtcagagacc tctctgggcc catgccacct ccaacatcca ctcgacccct tggaatttcg 420

gtggagagga gcagaggttg tcctggcgtg gtttaggtag tgtgagaggg gtacccgggg 480

atcttgctac cagtggaaca gccactaagg attctgcagt gagagcagag ggccagctaa 540

gtggtactct cccagagact gtctgactca cgccaccccc tccaccttgg acacaggacg 600

ctgtggtttc tgagccaggt acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac 660

tgcccaggca aagcgtccgg gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt 720

agcccctgtt tgctcctccg ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc 780

ccccgttgcc cctctggatc cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc 840

agcttcaggc accaccactg acctgggaca gtgaatagat cctgagaact tcagggtgag 900

tctatgggac ccttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta tggttaagtt catgtcatag 960

gaaggggaga agtaacaggg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 1020

ttttaaaaaa tgctttcttc ttttaatata cttttttgtt tatcttattt ctaatacttt 1080

ccctaatctc tttctttcag ggcaataatg atacaatgta tcatgcctct ttgcaccatt 1140

ctaaagaata acagtgataa tttctgggtt aaggcaatag caatatttct gcatataaat 1200

atttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa 1260

tccagctacc attctgcttt tattttctgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca 1320

agctaggccc ttttgctaat cttgttcata cctcttatct tcctcccaca gctcctgggc 1380

aacctgctgg tctctctgct ggcccatcac tttggcaaag cacgcgtgcc accatggctt 1440

tcctgtggct gctgtcttgc tgggccctgc tggggactac ctttggcctg ctggtgccca 1500

gggaactgtc tggctctagc ccagtgctgg aggagaccca ccctgcccac cagcaggggg 1560

cttctaggcc tggccccagg gatgcccagg cccaccctgg caggccaagg gctgtgccca 1620

cccagtgtga tgtgcccccc aactctagat ttgattgtgc ccctgataag gccatcaccc 1680

aggagcagtg tgaggctagg ggctgctgct acatccctgc taagcagggc ctgcaggggg 1740

ctcagatggg ccagccctgg tgcttcttcc cccccagcta tccctcttac aagctggaga 1800

atctgagcag ctctgagatg ggctacactg ccaccctgac caggactact cccaccttct 1860

tccccaagga catcctgacc ctgaggctgg atgtgatgat ggagactgag aacaggctgc 1920

atttcaccat caaggatcct gccaacagga ggtatgaggt gcctctggag accccccatg 1980

tgcacagcag ggctccttct cccctgtact ctgtggagtt ctctgaggaa ccctttgggg 2040

tgattgtgag gaggcagctg gatggcaggg tcctgctgaa caccactgtg gcccccctgt 2100

tctttgctga tcagttcctg cagctgtcca cttctctgcc tagccagtac atcactgggc 2160

tggctgagca cctgagccct ctgatgctga gcacctcttg gactaggatc accctgtgga 2220

acagggacct ggcccccacc cctggggcca acctgtatgg cagccacccc ttctatctgg 2280

ccctggagga tgggggctct gcccatgggg tgttcctgct gaatagcaat gctatggatg 2340

tggtgctgca gcccagccct gccctgtctt ggaggagcac tgggggcatc ctggatgtgt 2400

acattttcct ggggcctgag cccaagtctg tggtgcagca gtacctggat gtggtgggct 2460

accccttcat gcctccctac tggggcctgg gcttccacct gtgcaggtgg ggctacagct 2520

ctactgccat caccaggcag gtggtggaga atatgaccag ggcccacttc cccctggatg 2580

tgcagtggaa tgacctggac tacatggact ctaggaggga cttcaccttc aataaggatg 2640

gcttcagaga cttccctgcc atggtgcagg agctgcatca ggggggcagg aggtacatga 2700

tgattgtgga ccctgccatc agctcttctg gccctgctgg ctcttacagg ccctatgatg 2760

agggcctgag gaggggggtg ttcatcacca atgagactgg gcagcccctg attgggaagg 2820

tgtggcctgg ctctactgcc ttccctgact tcaccaatcc tactgccctg gcctggtggg 2880

aggacatggt ggctgagttc catgaccagg tgccctttga tggcatgtgg attgacatga 2940

atgagccctc taatttcatc aggggctctg aggatggctg ccccaacaat gagctggaga 3000

acccccccta tgtgcctggg gtggtggggg gcaccctgca ggctgccacc atctgtgcta 3060

gctctcacca gttcctgagc acccactaca atctgcataa cctgtatggc ctgactgagg 3120

ccattgccag ccacagggcc ctggtgaagg ctaggggcac caggcccttt gtgatttcta 3180

ggagcacttt tgctggccat ggcaggtatg ctgggcactg gactggggat gtgtggtcta 3240

gctgggagca gctggcttct tctgtgcctg agatcctgca gttcaacctg ctgggggtgc 3300

ctctggtggg ggctgatgtg tgtgggttcc tgggcaacac ttctgaggag ctgtgtgtga 3360

ggtggaccca gctgggggcc ttctaccctt tcatgaggaa ccacaacagc ctgctgagcc 3420

tgccccagga gccctacagc ttctctgagc ctgcccagca ggccatgagg aaggccctga 3480

ccctgaggta tgccctgctg ccccacctgt acaccctgtt ccaccaggcc catgtggctg 3540

gggagactgt ggctaggcct ctgttcctgg agttccccaa ggactctagc acctggactg 3600

tggaccacca gctgctgtgg ggggaggccc tgctgatcac tcctgtgctg caggctggga 3660

aggctgaggt gactggctat ttccccctgg gcacctggta tgacctgcag actgtgcctg 3720

tggaggccct ggggagcctg cccccccccc ctgctgcccc cagggagcct gccatccact 3780

ctgagggcca gtgggtgacc ctgcctgccc ctctggatac catcaatgtg cacctgaggg 3840

ctggctacat cattcccctg cagggccctg gcctgaccac tactgagtct aggcagcagc 3900

ccatggccct ggctgtggcc ctgaccaagg ggggggaggc taggggggag ctgttttggg 3960

atgatgggga gagcctggag gtgctggaga ggggggccta cactcaggtg atcttcctgg 4020

ccaggaacaa taccattgtg aatgagctgg tgagggtgac ctctgagggg gctggcctgc 4080

agctgcagaa ggtgactgtg ctgggggtgg ccactgcccc ccagcaggtg ctgagcaatg 4140

gggtgcctgt gagcaacttc acctatagcc ctgataccaa ggtgctggat atttgtgtga 4200

gcctgctgat gggggagcag ttcctggtga gctggtgctg actcgagaga tctaccggtg 4260

aattcaccgc gggtttaaac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 4320

cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 4380

gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtgggggct 4440

agctctagac tcgagatcca ctagggccgc aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4500

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4560

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ctgcctgcag g 4611

<210> 22

<211> 4611

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 22

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca ggctcagagg cacacaggag tttctgggct 180

caccctgccc ccttccaacc cctcagttcc catcctccag cagctgtttg tgtgctgcct 240

ctgaagtcca cactgaacaa acttcagcct actcatgtcc ctaaaatggg caaacattgc 300

aagcagcaaa cagcaaacac acagccctcc ctgcctgctg accttggagc tggggcagag 360

gtcagagacc tctctgggcc catgccacct ccaacatcca ctcgacccct tggaatttcg 420

gtggagagga gcagaggttg tcctggcgtg gtttaggtag tgtgagaggg gtacccgggg 480

atcttgctac cagtggaaca gccactaagg attctgcagt gagagcagag ggccagctaa 540

gtggtactct cccagagact gtctgactca cgccaccccc tccaccttgg acacaggacg 600

ctgtggtttc tgagccaggt acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac 660

tgcccaggca aagcgtccgg gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt 720

agcccctgtt tgctcctccg ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc 780

ccccgttgcc cctctggatc cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc 840

agcttcaggc accaccactg acctgggaca gtgaatagat cctgagaact tcagggtgag 900

tctatgggac ccttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta tggttaagtt catgtcatag 960

gaaggggaga agtaacaggg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 1020

ttttaaaaaa tgctttcttc ttttaatata cttttttgtt tatcttattt ctaatacttt 1080

ccctaatctc tttctttcag ggcaataatg atacaatgta tcatgcctct ttgcaccatt 1140

ctaaagaata acagtgataa tttctgggtt aaggcaatag caatatttct gcatataaat 1200

atttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa 1260

tccagctacc attctgcttt tattttctgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca 1320

agctaggccc ttttgctaat cttgttcata cctcttatct tcctcccaca gctcctgggc 1380

aacctgctgg tctctctgct ggcccatcac tttggcaaag cacgcgtgcc accatggctt 1440

tcctgtggct gctgtcttgt tgggctctgc tgggcaccac ctttggcctg ctggtgccca 1500

gggagctgtc tggcagcagc cctgtgctgg aggagaccca ccctgctcat cagcaggggg 1560

ctagcaggcc tggccccagg gatgcccagg ctcaccctgg gagacccagg gctgtgccca 1620

ctcagtgtga tgtgcccccc aacagcaggt ttgactgtgc tcctgacaag gctatcaccc 1680

aggagcagtg tgaggccagg gggtgctgct acattcctgc taagcagggc ctgcaggggg 1740

cccagatggg ccagccctgg tgcttcttcc ccccctctta tcccagctat aagctggaga 1800

acctgagcag ctctgagatg ggctacactg ccaccctgac caggaccact cccaccttct 1860

ttcccaagga tattctgact ctgaggctgg atgtgatgat ggagactgag aacaggctgc 1920

acttcactat caaggaccct gccaatagga ggtatgaggt gcccctggag actcctcatg 1980

tgcatagcag ggccccttct cctctgtatt ctgtggagtt ctctgaggag ccctttgggg 2040

tgattgtgag gaggcagctg gatggcaggg tgctgctgaa caccactgtg gcccccctgt 2100

tctttgctga ccagttcctg cagctgagca cttctctgcc cagccagtac attactgggc 2160

tggctgagca tctgagcccc ctgatgctga gcacctcttg gaccaggatc accctgtgga 2220

acagggacct ggcccccact cctggggcta acctgtatgg ctctcacccc ttttacctgg 2280

ccctggagga tgggggctct gcccatgggg tgtttctgct gaacagcaat gctatggatg 2340

tggtgctgca gccctctcca gccctgtctt ggaggagcac tgggggcatt ctggatgtgt 2400

acattttcct ggggcctgaa cccaagtctg tggtgcagca gtacctggat gtggtgggct 2460

accccttcat gcccccctat tgggggctgg ggtttcacct gtgcaggtgg ggctacagca 2520

gcactgccat caccaggcag gtggtggaga acatgaccag ggcccatttc cccctggatg 2580

tgcagtggaa tgacctggac tacatggata gcaggaggga tttcaccttc aacaaggatg 2640

gcttcaggga ctttcctgcc atggtgcagg agctgcacca ggggggcagg aggtatatga 2700

tgattgtgga ccctgctatc agcagctctg gccctgctgg ctcttacagg ccctatgatg 2760

agggcctgag gaggggggtg tttatcacta atgaaactgg ccagcctctg attggcaagg 2820

tctggcctgg ctctactgcc ttccctgatt ttactaaccc cactgccctg gcctggtggg 2880

aggacatggt ggctgagttc catgatcagg tgccttttga tggcatgtgg attgatatga 2940

atgaaccaag caacttcatc agaggctctg aggatggctg ccccaacaat gagctggaga 3000

acccccccta tgtgcctggg gtggtggggg gcactctgca ggctgccacc atttgtgcta 3060

gcagccacca gttcctgagc acccactaca atctgcacaa cctgtatggc ctgactgaag 3120

ccattgccag ccatagggcc ctggtgaagg ccaggggcac taggcctttt gtgatcagca 3180

ggagcacttt tgctggccat ggcaggtatg ctggccactg gactggggat gtgtggagca 3240

gctgggagca gctggccagc tctgtgcctg agattctgca gtttaacctg ctgggggtgc 3300

ccctggtggg ggctgatgtg tgtggcttcc tgggcaacac ctctgaggag ctgtgtgtga 3360

ggtggaccca gctgggggcc ttttatccct tcatgaggaa ccacaacagc ctgctgagcc 3420

tgcctcagga gccctactct ttctctgagc ctgcccagca ggccatgagg aaggccctga 3480

ccctgaggta tgccctgctg ccccacctgt ataccctgtt ccaccaggcc catgtggctg 3540

gggagactgt ggccaggccc ctgttcctgg agttccccaa ggacagcagc acctggactg 3600

tggatcatca gctgctgtgg ggggaggccc tgctgatcac ccctgtgctg caggctggca 3660

aggctgaggt cactggctac ttccctctgg gcacctggta tgacctgcag actgtgcctg 3720

tggaggctct gggcagcctg cccccccccc ctgctgctcc cagggagcct gccatccact 3780

ctgagggcca gtgggtgacc ctgcctgctc ccctggacac catcaatgtg cacctgaggg 3840

ctggctacat tatccccctg cagggcccag ggctgactac cactgagagc agacagcagc 3900

ccatggctct ggctgtggcc ctgaccaagg ggggggaagc taggggggag ctgttctggg 3960

atgatgggga gagcctggag gtgctggaga ggggggccta tacccaggtg atcttcctgg 4020

ctaggaacaa caccattgtc aatgagctgg tgagggtgac ttctgagggg gctgggctgc 4080

agctgcagaa ggtgactgtg ctgggggtgg ccactgctcc ccagcaggtg ctgagcaatg 4140

gggtgcctgt gagcaacttc acctacagcc ctgacaccaa ggtgctggac atctgtgtgt 4200

ctctgctgat gggggagcag ttcctggtga gctggtgctg actcgagaga tctaccggtg 4260

aattcaccgc gggtttaaac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 4320

cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 4380

gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtgggggct 4440

agctctagac tcgagatcca ctagggccgc aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4500

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4560

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ctgcctgcag g 4611

<210> 23

<211> 4611

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 23

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca ggctcagagg cacacaggag tttctgggct 180

caccctgccc ccttccaacc cctcagttcc catcctccag cagctgtttg tgtgctgcct 240

ctgaagtcca cactgaacaa acttcagcct actcatgtcc ctaaaatggg caaacattgc 300

aagcagcaaa cagcaaacac acagccctcc ctgcctgctg accttggagc tggggcagag 360

gtcagagacc tctctgggcc catgccacct ccaacatcca ctcgacccct tggaatttcg 420

gtggagagga gcagaggttg tcctggcgtg gtttaggtag tgtgagaggg gtacccgggg 480

atcttgctac cagtggaaca gccactaagg attctgcagt gagagcagag ggccagctaa 540

gtggtactct cccagagact gtctgactca cgccaccccc tccaccttgg acacaggacg 600

ctgtggtttc tgagccaggt acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac 660

tgcccaggca aagcgtccgg gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt 720

agcccctgtt tgctcctccg ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc 780

ccccgttgcc cctctggatc cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc 840

agcttcaggc accaccactg acctgggaca gtgaatagat cctgagaact tcagggtgag 900

tctatgggac ccttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta tggttaagtt catgtcatag 960

gaaggggaga agtaacaggg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 1020

ttttaaaaaa tgctttcttc ttttaatata cttttttgtt tatcttattt ctaatacttt 1080

ccctaatctc tttctttcag ggcaataatg atacaatgta tcatgcctct ttgcaccatt 1140

ctaaagaata acagtgataa tttctgggtt aaggcaatag caatatttct gcatataaat 1200

atttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa 1260

tccagctacc attctgcttt tattttctgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca 1320

agctaggccc ttttgctaat cttgttcata cctcttatct tcctcccaca gctcctgggc 1380

aacctgctgg tctctctgct ggcccatcac tttggcaaag cacgcgtgcc accatggcct 1440

tcctgtggct gctgtcttgc tgggctctgc tggggaccac ctttggcctg ctggtcccca 1500

gggagctgtc tggctcttct cctgtcctgg aggagaccca ccctgcccac cagcaggggg 1560

ctagcaggcc tggccccagg gatgcccagg cccaccctgg caggcccagg gctgtgccca 1620

cccagtgtga tgtgcctccc aacagcaggt ttgactgtgc ccctgacaag gccatcaccc 1680

aggagcagtg tgaggccagg ggctgctgct atatccctgc caagcagggc ctgcaggggg 1740

ctcagatggg ccagccctgg tgcttctttc ccccctctta tcctagctat aagctggaga 1800

acctgagcag ctctgagatg gggtacactg ccaccctgac caggaccacc cccactttct 1860

tccctaagga catcctgacc ctgaggctgg atgtgatgat ggagactgag aataggctgc 1920

actttactat caaggaccct gccaacagga ggtatgaggt gcctctggag accccccatg 1980

tgcattctag ggcccccagc cccctgtact ctgtggagtt ctctgaggag ccctttgggg 2040

tgattgtgag gagacagctg gatggcaggg tcctgctgaa caccactgtg gctcccctgt 2100

tttttgctga ccagttcctg cagctgagca ccagcctgcc cagccagtac atcactgggc 2160

tggctgagca cctgagcccc ctgatgctga gcaccagctg gaccaggatc accctgtgga 2220

acagggatct ggctcctacc cctggggcca acctgtatgg ctctcacccc ttttacctgg 2280

ccctggagga tgggggctct gcccatgggg tgttcctgct gaacagcaat gctatggatg 2340

tggtgctgca gcccagccct gccctgagct ggaggtctac tgggggcatc ctggatgtgt 2400

acatctttct ggggcctgag cccaagtctg tggtgcagca gtacctggat gtggtgggct 2460

atccttttat gcccccctat tggggcctgg gcttccacct gtgcaggtgg ggctacagca 2520

gcactgccat caccagacag gtggtggaga acatgaccag ggcccacttc cccctggatg 2580

tgcagtggaa tgacctggac tacatggaca gcaggaggga cttcaccttt aacaaggatg 2640

gctttaggga cttccctgcc atggtgcagg agctgcatca ggggggcagg aggtacatga 2700

tgattgtgga cccagccatc agcagctctg ggcctgctgg gtcttacagg ccctatgatg 2760

agggcctgag gaggggggtg ttcatcacca atgagactgg ccagcccctg attggcaagg 2820

tgtggcctgg gagcactgcc ttccctgatt ttaccaaccc cactgccctg gcctggtggg 2880

aggatatggt ggctgagttt catgaccagg tgccctttga tggcatgtgg attgacatga 2940

atgagcccag caatttcatc aggggctctg aggatggctg ccccaacaat gagctggaga 3000

atcctcccta tgtgcctggg gtggtggggg gcaccctgca ggctgccacc atctgtgcct 3060

ctagccacca gttcctgagc acccactata acctgcataa cctgtatggc ctgactgagg 3120

ccattgccag ccatagagcc ctggtgaagg ccagagggac caggcccttt gtgatctcta 3180

ggagcacctt tgctggccat ggcaggtatg ctggccactg gactggggat gtgtggagct 3240

cttgggagca gctggccagc tctgtgccag agatcctgca gttcaacctg ctgggggtgc 3300

ctctggtggg ggctgatgtg tgtggcttcc tgggcaatac ctctgaagag ctgtgtgtga 3360

ggtggactca gctgggggcc ttctatccct tcatgaggaa ccacaacagc ctgctgtctc 3420

tgccccagga gccctacagc ttctctgagc ctgctcagca ggctatgagg aaggccctga 3480

ccctgaggta tgccctgctg ccccatctgt acaccctgtt ccaccaggcc catgtggctg 3540

gggagactgt ggccaggccc ctgtttctgg agtttcccaa ggacagcagc acctggactg 3600

tggaccatca gctgctgtgg ggggaggctc tgctgattac ccctgtgctg caggctggca 3660

aggctgaggt gactgggtac ttccccctgg ggacttggta tgacctgcag actgtgcctg 3720

tggaagctct gggcagcctg cccccacccc ctgctgcccc tagggagcct gccatccact 3780

ctgagggcca gtgggtgacc ctgcctgccc ctctggacac catcaatgtg cacctgaggg 3840

ctggctatat catccccctg cagggccctg ggctgaccac cactgagagc aggcagcagc 3900

ccatggccct ggctgtggcc ctgactaagg ggggggaggc caggggggag ctgttctggg 3960

atgatgggga gagcctggag gtgctggaga gaggggccta cacccaggtg atctttctgg 4020

ccaggaacaa caccattgtg aatgagctgg tgagggtgac ttctgagggg gctggcctgc 4080

agctgcagaa ggtgactgtg ctgggggtgg ccactgcccc ccagcaggtg ctgagcaatg 4140

gggtgcctgt gtctaacttc acctacagcc ctgatactaa ggtgctggat atctgtgtga 4200

gcctgctgat gggggagcag tttctggtga gctggtgctg actcgagaga tctaccggtg 4260

aattcaccgc gggtttaaac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 4320

cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 4380

gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtgggggct 4440

agctctagac tcgagatcca ctagggccgc aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4500

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4560

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ctgcctgcag g 4611

<210> 24

<211> 4611

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 24

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca ggctcagagg cacacaggag tttctgggct 180

caccctgccc ccttccaacc cctcagttcc catcctccag cagctgtttg tgtgctgcct 240

ctgaagtcca cactgaacaa acttcagcct actcatgtcc ctaaaatggg caaacattgc 300

aagcagcaaa cagcaaacac acagccctcc ctgcctgctg accttggagc tggggcagag 360

gtcagagacc tctctgggcc catgccacct ccaacatcca ctcgacccct tggaatttcg 420

gtggagagga gcagaggttg tcctggcgtg gtttaggtag tgtgagaggg gtacccgggg 480

atcttgctac cagtggaaca gccactaagg attctgcagt gagagcagag ggccagctaa 540

gtggtactct cccagagact gtctgactca cgccaccccc tccaccttgg acacaggacg 600

ctgtggtttc tgagccaggt acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac 660

tgcccaggca aagcgtccgg gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt 720

agcccctgtt tgctcctccg ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc 780

ccccgttgcc cctctggatc cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc 840

agcttcaggc accaccactg acctgggaca gtgaatagat cctgagaact tcagggtgag 900

tctatgggac ccttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta tggttaagtt catgtcatag 960

gaaggggaga agtaacaggg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 1020

ttttaaaaaa tgctttcttc ttttaatata cttttttgtt tatcttattt ctaatacttt 1080

ccctaatctc tttctttcag ggcaataatg atacaatgta tcatgcctct ttgcaccatt 1140

ctaaagaata acagtgataa tttctgggtt aaggcaatag caatatttct gcatataaat 1200

atttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa 1260

tccagctacc attctgcttt tattttctgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca 1320

agctaggccc ttttgctaat cttgttcata cctcttatct tcctcccaca gctcctgggc 1380

aacctgctgg tctctctgct ggcccatcac tttggcaaag cacgcgtgcc accatggcct 1440

ttctgtggct gctgtcctgc tgggccctgc tggggaccac ctttggcctg ctggtgccca 1500

gggagctgtc tgggagcagc ccagtgctgg aggagaccca ccctgcccac cagcaggggg 1560

ccagcaggcc tggccctagg gatgcccagg cccaccctgg caggcccagg gctgtgccta 1620

cccagtgtga tgtgccaccc aattctaggt ttgactgtgc tcctgacaag gccatcactc 1680

aggagcagtg tgaagctagg gggtgctgct acatcccagc caagcagggc ctgcaggggg 1740

cccagatggg ccagccctgg tgcttcttcc cccccagcta ccctagctac aagctggaga 1800

atctgagcag ctctgagatg ggctacactg ctaccctgac caggaccact cctaccttct 1860

tccccaagga catcctgact ctgaggctgg atgtcatgat ggagactgaa aataggctgc 1920

acttcaccat caaggaccct gccaatagga ggtatgaggt gcctctggag accccccatg 1980

tgcatagcag ggctcccagc cccctgtatt ctgtggagtt ctctgaggag ccctttgggg 2040

tcattgtgag gagacagctg gatgggaggg tgctgctgaa cactactgtg gctcccctgt 2100

tctttgctga ccagttcctg cagctgtcta ccagcctgcc cagccagtac atcactgggc 2160

tggctgagca tctgagcccc ctgatgctga gcaccagctg gaccaggatc actctgtgga 2220

acagggatct ggcccccact cctggggcca acctgtatgg gagccatccc ttctacctgg 2280

ccctggagga tgggggctct gcccatgggg tgttcctgct gaacagcaat gccatggatg 2340

tggtgctgca gcctagccct gccctgagct ggaggagcac tgggggcatc ctggatgtct 2400

acatcttcct ggggcctgag cccaagtctg tggtgcagca gtatctggat gtggtggggt 2460

atcccttcat gcccccctac tggggcctgg gctttcacct gtgcaggtgg ggctacagca 2520

gcactgccat caccaggcag gtggtggaga acatgaccag ggcccacttc cctctggatg 2580

tgcagtggaa tgacctggac tatatggatt ctaggagaga ctttactttt aacaaggatg 2640

gcttcaggga tttccctgcc atggtgcagg agctgcacca ggggggcagg aggtacatga 2700

tgattgtgga ccctgctatt agcagctctg gccctgctgg gtcttacagg ccttatgatg 2760

agggcctgag gaggggggtg ttcatcacca atgagactgg ccagcccctg attggcaagg 2820

tgtggcctgg cagcactgcc ttccctgact tcaccaaccc cactgccctg gcctggtggg 2880

aggacatggt ggctgagttc catgaccagg tgccctttga tgggatgtgg attgacatga 2940

atgagccctc taacttcatc agggggtctg aggatggctg ccccaacaat gagctggaga 3000

acccccccta tgtgcctggg gtggtggggg gcactctgca ggctgccact atctgtgctt 3060

cttctcacca gtttctgagc acccactata atctgcacaa cctgtatggc ctgactgagg 3120

ccattgccag ccatagggcc ctggtgaagg ccaggggcac caggcccttt gtgatcagca 3180

ggtctacctt tgctggccat ggcaggtatg ctggccactg gactggggat gtgtggtctt 3240

cttgggagca gctggccagc tctgtgcctg agatcctgca gttcaacctg ctgggggtgc 3300

ctctggtggg ggctgatgtg tgtggctttc tgggcaacac ctctgaggag ctgtgtgtga 3360

ggtggaccca gctgggggcc ttttacccct tcatgaggaa ccacaatagc ctgctgagcc 3420

tgccccagga gccttactct ttctctgagc ctgcccagca ggccatgagg aaggccctga 3480

ctctgaggta tgccctgctg ccccatctgt ataccctgtt tcaccaggcc catgtggctg 3540

gggagactgt ggctaggcct ctgtttctgg agttccctaa ggactctagc acctggactg 3600

tggaccacca gctgctgtgg ggggaggccc tgctgatcac ccctgtgctg caggctggca 3660

aggctgaggt gactggctac ttccccctgg gcacctggta tgacctgcag actgtgcctg 3720

tggaggccct ggggagcctg cctccccccc ctgctgcccc cagggagcct gccattcatt 3780

ctgagggcca gtgggtgacc ctgcctgccc ctctggacac catcaatgtg cacctgaggg 3840

ctgggtacat catccccctg cagggccctg gcctgaccac cactgagagc aggcagcagc 3900

ccatggccct ggctgtggct ctgaccaagg ggggggaggc caggggggag ctgttctggg 3960

atgatgggga gtctctggag gtgctggaga ggggggccta cacccaggtg atctttctgg 4020

ccaggaacaa tactattgtg aatgagctgg tgagggtgac ctctgagggg gctggcctgc 4080

agctgcagaa ggtgactgtg ctgggggtgg ccactgcccc ccagcaggtc ctgagcaatg 4140

gggtgcctgt gagcaacttc acctactctc ctgacaccaa ggtgctggac atttgtgtgt 4200

ctctgctgat gggggagcag ttcctggtga gctggtgctg actcgagaga tctaccggtg 4260

aattcaccgc gggtttaaac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 4320

cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 4380

gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtgggggct 4440

agctctagac tcgagatcca ctagggccgc aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4500

cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4560

gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ctgcctgcag g 4611

<210> 25

<211> 935

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид GAA

<400> 25

Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr

1 5 10 15

Phe Gly Leu Leu Val Pro Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Pro Val Leu

20 25 30

Glu Glu Thr His Pro Ala His Gln Gln Gly Ala Ser Arg Pro Gly Pro

35 40 45

Arg Asp Ala Gln Ala His Pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr Gln

50 55 60

Cys Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys Ala

65 70 75 80

Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro Ala

85 90 95

Lys Gln Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe Phe

100 105 110

Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser Glu

115 120 125

Met Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe Pro

130 135 140

Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu Asn

145 150 155 160

Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu Val

165 170 175

Pro Leu Glu Thr Pro His Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu Tyr

180 185 190

Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val Arg Arg Gln

195 200 205

Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe Phe

210 215 220

Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr Ile

225 230 235 240

Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser Trp

245 250 255

Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly Ala

260 265 270

Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly Gly

275 280 285

Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val Val

290 295 300

Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile Leu

305 310 315 320

Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln Gln

325 330 335

Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly Leu

340 345 350

Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr Arg

355 360 365

Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val Gln

370 375 380

Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe Asn

385 390 395 400

Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His Gln

405 410 415

Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser Ser

420 425 430

Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg Gly

435 440 445

Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val Trp

450 455 460

Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu Ala

465 470 475 480

Trp Trp Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe Asp

485 490 495

Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly Ser

500 505 510

Glu Asp Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val Pro

515 520 525

Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser Ser

530 535 540

His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly Leu

545 550 555 560

Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly Thr

565 570 575

Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg Tyr

580 585 590

Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu Ala

595 600 605

Ser Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro Leu

610 615 620

Val Gly Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu Leu

625 630 635 640

Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg Asn

645 650 655

His Asn Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser Glu

660 665 670

Pro Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala Leu

675 680 685

Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly Glu

690 695 700

Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser Thr

705 710 715 720

Trp Thr Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile Thr

725 730 735

Pro Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro Leu

740 745 750

Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Val Glu Ala Leu Gly Ser

755 760 765

Leu Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser Glu

770 775 780

Gly Gln Trp Val Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val His

785 790 795 800

Leu Arg Ala Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Gly Leu Thr Thr

805 810 815

Thr Glu Ser Arg Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu Thr Lys

820 825 830

Gly Gly Glu Ala Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Leu

835 840 845

Glu Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val Ile Phe Leu Ala Arg

850 855 860

Asn Asn Thr Ile Val Asn Glu Leu Val Arg Val Thr Ser Glu Gly Ala

865 870 875 880

Gly Leu Gln Leu Gln Lys Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr Ala Pro

885 890 895

Gln Gln Val Leu Ser Asn Gly Val Pro Val Ser Asn Phe Thr Tyr Ser

900 905 910

Pro Asp Thr Lys Val Leu Asp Ile Cys Val Ser Leu Leu Met Gly Glu

915 920 925

Gln Phe Leu Val Ser Trp Cys

930 935

<210> 26

<211> 268

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированная нуклеиновая кислота

<400> 26

agatctagag ctgaattcct gcagccaggg ggatcagcct ctactgtgcc ttctagttgc 60

cagccatctg ttgtttgccc ctcccccttg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc 120

actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt gcatcacatt gtctgagtag gtgtcattct 180

attctggggg gtggggtggg gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg 240

catgctgggg atgcagtggg ctctatgg 268

<210> 27

<211> 202

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 27

agatctaccg gtgaattcac cgcgggttta aactgtgcct tctagttgcc agccatctgt 60

tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc 120

ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg 180

tggggtgggg gctagctcta ga 202

<210> 28

<211> 456

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 28

gggcccatgc cacctccaac atccactcga ccccttggaa tttcggtgga gaggagcaga 60

ggttgtcctg gcgtggttta ggtagtgtga gaggggtacc cggggatctt gctaccagtg 120

gaacagccac taaggattct gcagtgagag cagagggcca gctaagtggt actctcccag 180

agactgtctg actcacgcca ccccctccac cttggacaca ggacgctgtg gtttctgagc 240

caggtacaat gactcctttc ggtaagtgca gtggaagctg tacactgccc aggcaaagcg 300

tccgggcagc gtaggcgggc gactcagatc ccagccagtg gacttagccc ctgtttgctc 360

ctccgataac tggggtgacc ttggttaata ttcaccagca gcctcccccg ttgcccctct 420

ggatccactg cttaaatacg gacgaggaca gggccc 456

<210> 29

<211> 444

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 29

atgccacctc caacatccac tcgacccctt ggaatttcgg tggagaggag cagaggttgt 60

cctggcgtgg tttaggtagt gtgagagggg tacccgggga tcttgctacc agtggaacag 120

ccactaagga ttctgcagtg agagcagagg gccagctaag tggtactctc ccagagactg 180

tctgactcac gccaccccct ccaccttgga cacaggacgc tgtggtttct gagccaggta 240

caatgactcc tttcggtaag tgcagtggaa gctgtacact gcccaggcaa agcgtccggg 300

cagcgtaggc gggcgactca gatcccagcc agtggactta gcccctgttt gctcctccga 360

taactggggt gaccttggtt aatattcacc agcagcctcc cccgttgccc ctctggatcc 420

actgcttaaa tacggacgag gaca 444

<210> 30

<211> 738

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Капсид вектора AAV

<400> 30

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Ser Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 31

<211> 601

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Капсид вектора AAV

<400> 31

Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser

1 5 10 15

Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys

20 25 30

Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp

35 40 45

Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser

50 55 60

Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu

65 70 75 80

Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser

85 90 95

Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala

100 105 110

Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro

130 135 140

Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg

145 150 155 160

Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg

165 170 175

Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn

180 185 190

Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val

195 200 205

Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His

210 215 220

Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln

225 230 235 240

Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser

245 250 255

Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly

260 265 270

Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser

275 280 285

Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile

290 295 300

Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr

305 310 315 320

Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met

325 330 335

Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln

340 345 350

Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp

355 360 365

Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn

370 375 380

Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe

385 390 395 400

Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp

405 410 415

Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys

420 425 430

Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn

435 440 445

Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln

450 455 460

Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln

465 470 475 480

Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro

485 490 495

Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile

500 505 510

Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn

515 520 525

Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val

530 535 540

Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp

545 550 555 560

Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val

565 570 575

Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile

580 585 590

Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

595 600

<210> 32

<211> 535

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Капсид вектора AAV

<400> 32

Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala

1 5 10 15

Asp Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp

20 25 30

Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro

35 40 45

Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly

50 55 60

Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly

65 70 75 80

Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp

85 90 95

Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn

100 105 110

Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly

115 120 125

Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr

130 135 140

Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly

145 150 155 160

Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly

165 170 175

Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe

180 185 190

Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

195 200 205

Phe Glu Phe Ser Tyr Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr

210 215 220

Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln

225 230 235 240

Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly

245 250 255

Thr Gln Gln Leu Leu Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala

260 265 270

Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val

275 280 285

Ser Thr Thr Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly

290 295 300

Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly

305 310 315 320

Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser

325 330 335

Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val

340 345 350

Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr

355 360 365

Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln

370 375 380

Gln Gln Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala

385 390 395 400

Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro

405 410 415

Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro

420 425 430

Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile

435 440 445

Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala

450 455 460

Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val

465 470 475 480

Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro

485 490 495

Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe

500 505 510

Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr

515 520 525

Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

530 535

<210> 33

<211> 736

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Капсид вектора AAV

<400> 33

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr

435 440 445

Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln

565 570 575

Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr

580 585 590

Thr Arg Thr Val Asn Asp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<---

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии, в частности, к нуклеиновым кислотам, кодирующим кислую альфа-глюкозидазу (GAA). Настоящее изобретение также относится к экспрессирующим кассетам, векторам, клеткам и линиям клеток и способам применения таких нуклеиновых кислот, кодирующих кислую альфа-глюкозидазу (GAA). Изобретение позволяет использовать изобретение в качестве генной терапии индивидуумов с болезнью Помпе и другими заболеваниями и нарушениями, которые можно лечить с использованием GAA. 12 н. и 74 з.п. ф-лы, 21 ил., 3 табл., 14 пр.

1. Нуклеиновая кислота, кодирующая функциональную кислую α-глюкозидазу (GAA), где указанная нуклеиновая кислота имеет более 90% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

2. Нуклеиновая кислота, кодирующая функциональную GAA, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 87% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5, и содержит последовательность полиаденилирования, которая имеет сниженное содержание CpG по сравнению с последовательностью полиаденилирования дикого типа, расположенную в 3’-направлении от указанной нуклеиновой кислоты.

3. Нуклеиновая кислота, кодирующая функциональную GAA по п.1 или 2, где указанная нуклеиновая кислота содержит 20-10, 10-5 или 5-1 динуклеотидов CpG или 0 динуклеотидов CpG.

4. Нуклеиновая кислота, кодирующая функциональную GAA, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 92% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

5. Нуклеиновая кислота, кодирующая функциональную GAA, где указанная нуклеиновая кислота имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24.

6. Нуклеиновая кислота по п.2 или 3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 88% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

7. Нуклеиновая кислота по п.2 или 3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 89% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

8. Нуклеиновая кислота по п.2 или 3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 90% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.

9. Нуклеиновая кислота по п.2 или 3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 91% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.

10. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 127 динуклеотидов CpG.

11. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 126 динуклеотидов CpG.

12. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 126-120 динуклеотидов CpG.

13. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 120-110 динуклеотидов CpG.

14. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 110-100 динуклеотидов CpG.

15. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 100-90 динуклеотидов CpG.

16. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 90-80 динуклеотидов CpG.

17. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 80-70 динуклеотидов CpG.

18. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 70-60 динуклеотидов CpG.

19. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 60-50 динуклеотидов CpG.

20. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 50-40 динуклеотидов CpG.

21. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 40-30 динуклеотидов CpG.

22. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 30-20 динуклеотидов CpG.

23. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, 4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 20 динуклеотидов CpG.

24. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 20-10 динуклеотидов CpG.

25. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 10 динуклеотидов CpG.

26. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 10-5 динуклеотидов CpG.

27. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 5 динуклеотидов CpG.

28. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 4 динуклеотида CpG.

29. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 3 динуклеотида CpG.

30. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 2динуклеотида CpG.

31. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 1 динуклеотид CpG.

32. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4 или 6-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит 0 динуклеотидов CpG.

33. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 93% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

34. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 94% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

35. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 95% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

36. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 96% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

37. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 97% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

38. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 98% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

39. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 99% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

40. Нуклеиновая кислота по п.4, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 99,5% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.

41. Экспрессирующая кассета, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-40, функционально связанную с элементом контроля экспрессии.

42. Экспрессирующая кассета по п.41, где указанный элемент контроля экспрессии располагают в 5’-направлении от указанной нуклеиновой кислоты.

43. Экспрессирующая кассета по п.41, дополнительно содержащая последовательность полиаденилирования, расположенную в 3’-направлении от указанной нуклеиновой кислоты.

44. Экспрессирующая кассета по п.42 или 43, где указанный элемент контроля экспрессии или последовательность полиаденилирования имеет сниженное содержание CpG по сравнению с элементом контроля экспрессии или последовательностью полиаденилирования дикого типа.

45. Экспрессирующая кассета по любому из пп.41-44, где указанный элемент контроля экспрессии содержит последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT.

46. Экспрессирующая кассета по любому из пп.43-45, где указанная последовательность полиаденилирования содержит последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH).

47. Экспрессирующая кассета по п.45 или 46, где указанная последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательность полиаденилирования bGH имеет сниженное содержание CpG по сравнению с последовательностью энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательностью полиаденилирования bGH дикого типа.

48. Экспрессирующая кассета по п.47, где указанная последовательность полиаденилирования bGH дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 27.

49. Экспрессирующая кассета по п.47, где указанная последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 28 или 29.

50. Экспрессирующая кассета по п.47, где указанная последовательность полиаденилирования bGH со сниженным содержанием CpG содержит последовательность SEQ ID NO: 26.

51. Экспрессирующая кассета по любому из пп.41-50, дополнительно содержащая интрон, расположенный между 3'-концом указанного элемента контроля экспрессии и 5'-концом указанной нуклеиновой кислоты.

52. Нуклеиновая кислота или экспрессирующая кассета по любому из пп.1-51, где указанная GAA содержит последовательность, приведенную как SEQ ID NO: 25.

53. Вектор аденоассоциированного вируса (AAV) для экспрессии GAA, содержащий нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по п.52.

54. Вектор AAV по п.53, где указанный вектор AAV содержит:

a) один или более капсидов AAV и

b) один или более инвертированных концевых повторов (ITR) AAV, где указанные ITR AAV фланкируют 5’- или 3’-конец указанной нуклеиновой кислоты или указанной экспрессирующей кассеты.

55. Вектор AAV по п.54, дополнительно содержащий интрон, расположенный в 5’- или 3’-направлении от указанного одного или более ITR.

56. Вектор AAV по п.54 или 55, где по меньшей мере один или более из указанных ITR или указанных интронов модифицирован для снижения содержания CpG.

57. Вектор AAV по любому из пп.53-56, где указанный вектор AAV имеет серотип капсида, содержащий модифицированный капсид VP1, VP2 и/или VP3 AAV или вариант капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV, имеющий 90% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 95% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8, или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 100% идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32.

58. Вектор AAV по любому из пп.54-57, где указанные ITR содержат один или более ITR из любого из: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV3B, серотипов AAV или их комбинации.

59. Фармацевтическая композиция для лечения человека, нуждающегося в GAA, содержащая множество векторов AAV по любому из пп.53-58 в биологически совместимом носителе или эксципиенте.

60. Фармацевтическая композиция по п.59, дополнительно содержащая пустые капсиды AAV.

61. Фармацевтическая композиция по п.60, где соотношение указанных пустых капсидов AAV и указанного вектора AAV составляет в пределах или приблизительно 100:1-50:1, приблизительно 50:1-25:1, приблизительно 25:1-10:1, приблизительно 10:1-1:1, приблизительно 1:1-1:10, приблизительно 1:10-1:25, приблизительно 1:25-1:50 или приблизительно 1:50-1:100.

62. Фармацевтическая композиция по п.60, где соотношение указанных пустых капсидов AAV и указанного вектора AAV составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.

63. Фармацевтическая композиция по любому из пп.60-62, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.

64. Способ лечения человека, нуждающегося в кислой α-глюкозидазе (GAA), включающий:

(a) получение нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассеты по любому из пп.1-52, или вектора AAV по любому из пп.53-58, или фармацевтической композиции по любому из пп.59-63; и

(b) введение количества указанной нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты, вектора AAV или фармацевтической композиции указанному человеку, где указанная GAA экспрессируется в указанном человеке.

65. Способ по п.64, где указанный человек имеет болезнь Помпе.

66. Способ по п.64, где указанный человек имеет инфантильную форму болезни Помпе.

67. Способ по п.64, где указанный человек имеет болезнь Помпе с поздним началом.

68. Способ по п.64, где указанный человек имеет гликогеноз (GSD).

69. Способ по п.68, где указанный GSD выбран из: GSD типа I (болезни Гирке), GSD типа III (болезни Форбса), GSD типа IV (болезни Андерсен, амилопектиноза), GSD типа V (болезни Мак-Ардла), GSD типа VI (болезни Герса), GSD типа VII (болезни Таруи) и летального врожденного GSD сердца.

70. Способ по любому из пп.64-69, где указанный вектор AAV вводят указанному человеку внутривенно, внутриартериально, внутриполостно, внутрислизисто или через катетер.

71. Способ по любому из пп.64-70, где указанная GAA экспрессируется на повышенных уровнях, необязательно, выше 1% уровней GAA, обнаруживаемых у человека, не нуждающегося в GAA.

72. Способ по любому из пп.64-71, где указанный вектор AAV вводят в диапазоне от приблизительно 1×108 до приблизительно 1×1014 векторных геномов на килограмм (ВГ/кг) массы указанного человека.

73. Способ по любому из пп.64-72, где указанным способом снижают, уменьшают или ингибируют один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или предотвращают или снижают прогрессирование или ухудшение одного или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или стабилизируют один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или улучшают один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания.

74. Способ по п.73, где указанный один или более симптомов выбраны из группы, состоящей из: проблемы с приемом пищи; отсутствие набора веса; плохой контроль головы; плохой контроль шеи; проблемы с дыханием; легочные инфекции; увеличенное сердце; утолщение сердца; пороки сердца; увеличение языка; проблемы с глотанием; увеличение печени; низкой мышечной силы; низкого мышечного тонуса; слабости в ногах; слабости в области талии; слабости в руках; одышку; проблемы с выполнением физических упражнений; трудности с дыханием во время сна; искривление позвоночника и анкилоз.

75. Клетка, содержащая нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по любому из пп.1-52, где нуклеиновая кислота или экспрессионная кассета кодирует функциональную GAA.

76. Клетка, продуцирующая вектор AAV, трансфицированная нуклеиновой кислотой или кассетой экспрессии по любому из пп.53-58.

77. Способ получения вектора AAV по любому из пп.53-58, включающий

a. встраивание векторного генома AAV, содержащего указанную нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по любому из пп.1-52, в упаковывающую хелперную клетку; и

b. культивирование указанной хелперной клетки в условиях для получения указанного вектора AAV.

78. Способ получения вектора AAV по любому из пп.53-58, включающий

a. встраивание указанной нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассеты по пп.1-52 в упаковывающую хелперную клетку; и

b. культивирование указанных хелперных клеток в условиях для получения указанного вектора AAV.

79. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка включает клетки млекопитающих.

80. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка выполняет хелперные функции по упаковке указанного вектора в вирусную частицу.

81. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка выполняет AAV-хелперные функции.

82. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка предоставляет белки Rep и/или Cap AAV.

83. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанную клетку стабильно или транзиторно трансфицируют с использованием полинуклеотидов, кодирующих последовательности белков Rep и/или Cap.

84. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка предоставляет белки Rep78 и/или Rep68.

85. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанную клетку стабильно или транзиторно трансфицируют с использованием последовательностей, кодирующих белки Rep78 и/или Rep68.

86. Клетка или способ по любому из пп.75-78, где указанная клетка включает клетки HEK-293.