Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США №62/659563, поданной 18 апреля 2018 г., предварительной заявке США №62/684143, поданной 12 июня 2018 г., предварительной заявке США №62/724396, поданной 29 августа 2018 г., и предварительной заявке США №62/756800, поданной 7 ноября 2018 г., раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Уровень техники
Два чрезвычайно многообещающих подхода в иммунотерапии рака включают лечение на основе цитокинов и блокировку белков иммунных контрольных точек, таких как PD-1.
Цитокины, такие как ИЛ-2 и ИЛ-15, способствуют пролиферации и дифференцировке В-клеток, Т-клеток и NK-клеток. Оба цитокина осуществляют свою клеточную сигнальную функцию посредством связывания с тримерным комплексом, состоящим из двух общих рецепторов – общей цепи гамма (γc; CD132) и цепи бета рецептора к ИЛ-2 (ИЛ-2Рß; CD122), а также рецепторной альфа-цепи, уникальной для каждого цитокина: рецептора ИЛ-2 альфа (ИЛ-2Рα; CD25) или рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα; CD215). Оба цитокина считаются потенциально ценными терапевтическими средствами в онкологии, а ИЛ-2 был одобрен для применения у пациентов с метастатической почечно-клеточной карциномой и злокачественной меланомой. В настоящее время нет одобренных вариантов применения рекомбинантного ИЛ-15, несмотря на то что несколько клинических испытаний еще продолжаются. Однако, как потенциальные лекарственные препараты, оба цитокина страдают очень быстрым клиренсом, с периодами полужизни, измеряемыми в минутах. Иммунотерапия с применением ИЛ-2 была связана с системной токсичностью при введении в высоких дозах для преодоления быстрого клиренса. О такой системной токсичности также сообщалось при иммунотерапии с применением ИЛ-15 в недавних клинических испытаниях (Guo et al., J Immunol, 2015, 195 (5): 2353-64).
Белки иммунных контрольных точек, такие как PD-1, активируются после активации Т-клеток для предотвращения аутоиммунных реакций путем истощения активированных Т-клеток после связывания с лигандами иммунных контрольных точек, такими как PD-L1. Однако белки иммунных контрольных точек также активируются в инфильтрирующих опухоль лимфоцитах (ИОЛ, англ. «TIL»), а лиганды иммунных контрольных точек сверхэкспрессируются на опухолевых клетках, что способствует ускользанию опухолевых клеток от иммунных реакций. Дерепрессия ИОЛ путем блокирования взаимодействий иммунных контрольных точек такими препаратами, как Опдиво® (ниволумаб) и Кейтруда® (пембролизумаб), доказала свою высокую эффективность при лечении рака. Несмотря на многообещающие методы лечения препаратами, которые блокируют контрольные точки, такими как ниволумаб и пембролизумаб, многие пациенты по-прежнему не могут достичь достаточного клинического ответа только на блокировку контрольных точек.
Следовательно, в лечении онкологических заболеваний остается неудовлетворенная потребность в терапевтических стратегиях с использованием цитокинов, которые не требуют высоких доз и нацелены на опухоли, чтобы избежать системной токсичности. Кроме того, существует потребность в определении дополнительных терапевтических методов, сочетающихся с блокировкой контрольных точек, которые могут повысить уровень клинического ответа пациента. Данное изобретение направлено на удовлетворение указанных потребностей и преодоление ограничений путем предоставления слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc с пониженной активностью и улучшенной фармакокинетикой и фармакодинамикой, и которые синергически комбинируются с антителами, блокирующими контрольные точки.
Краткое описание сущности изобретения
Данное изобретение направлено на введение нового гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в комбинации с антителом, блокирующим контрольную точку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитело против CTLA-4.
В некоторых аспектах, в данном документе предусмотрен способ лечения рака у пациента, который в этом нуждается, включающий введение:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, включающего:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα);
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3; и
б) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариантный домен ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и одну любую из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3;
при этом первый и второй вариантные домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения суши-домен ИЛ-15Рα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc имеют замены S364K/E357Q: L368D/K370S. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый вариантный домен Fc имеет замены S364K/E357Q, а второй вариантный домен Fc имеет замены L368D/K370S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены M428L/N434S каждый.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, вводят одновременно или последовательно.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 или XENP24045.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак представляет собой метастатический рак. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак выбран из группы, состоящей из следующего: рак молочной железы, рак легких, рак толстой кишки, рак яичников, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак почек, рак почки, рак печени, рак головы и шеи, колоректальный рак, меланома, рак поджелудочной железы, рак (карцинома) желудка, рак пищевода, мезотелиома, рак простаты, лейкоз, лимфома и миелома.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения описанный в данном документе способ лечения рака приводит к минимальному уровню транссудации у пациента.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения уровень транссудации колеблется от снижения сывороточного альбумина на 20% или менее у пациента после введения.
В некоторых аспектах, в данном документе предусмотрен способ лечения рака у пациента, при этом способ включает введение пациенту комбинированного лекарственного средства, содержащего гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, при этом гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc включает:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα);
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3; и
б) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариантный домен ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и одну любую из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3;
где первый и второй вариантные домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU; и антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения суши-домен ИЛ-15Рα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc имеют замены S364K/E357Q: L368D/K370S. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый вариантный домен Fc имеет замены S364K/E357Q, а второй вариантный домен Fc имеет замены L368D/K370S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены M428L/N434S каждый.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 264) или XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак представляет собой метастатический рак. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак выбран из группы, состоящей из следующего: рак молочной железы, рак легких, рак толстой кишки, рак яичников, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак почек, рак почки, рак печени, рак головы и шеи, колоректальный рак, меланома, рак поджелудочной железы, рак (карцинома) желудка, рак пищевода, мезотелиома, рак простаты, лейкоз, лимфома и миелома.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака, описанный в данном документе, приводит к минимальному уровню транссудации у пациента.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения уровень транссудации колеблется от снижения сывороточного альбумина на 20% или менее у пациента после введения.
В некоторых аспектах, в данном документе предусмотрен способ индукции размножения Т-клеток у пациента, включающий введение:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, и указанный белок содержит:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα);
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3; и
б) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариантный домен ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и одну любую из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3; где первый и второй вариантные домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения суши-домен ИЛ-15Рα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc имеют замены S364K/E357Q: L368D/K370S. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый вариантный домен Fc имеет замены S364K/E357Q, а второй вариантный домен Fc имеет замены L368D/K370S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены M428L/N434S каждый.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, вводят одновременно или последовательно.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254) или XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента рак. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак представляет собой метастатический рак. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак выбран из группы, состоящей из следующего: рак молочной железы, рак легких, рак толстой кишки, рак яичников, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак почек, рак почки, рак печени, рак головы и шеи, колоректальный рак, меланома, рак поджелудочной железы, рак (карцинома) желудка, рак пищевода, мезотелиома, рак простаты, лейкоз, лимфома и миелома.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение Т-клеток представляет собой по меньшей мере 2-кратное увеличение количества Т-клеток. В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение Т-клеток колеблется от 2-кратного до 15-кратного увеличения количества Т-клеток.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ не увеличивает вероятность индукции гипоальбуминемии.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения Т-клетки содержат инфильтрирующие опухоль лимфоциты.
В некоторых аспектах данное изобретение предусматривает комбинированную терапию, включающую гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, выбранное из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα);
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3; и
б) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариантный домен ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и одну любую из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2-CH3;
где первый и второй вариантные домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный домен ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения суши-домен ИЛ-15Рα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc имеют замены S364K/E357Q: L368D/K370S. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый вариантный домен Fc имеет замены S364K/E357Q, а второй вариантный домен Fc имеет замены L368D/K370S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены M428L/N434S каждый.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй вариантные домены Fc содержат замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254) или XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24306 (SEQ ID NO: 253 и 254), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 204), а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность XENP24045 (SEQ ID NO: 204 и 205), а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 изображена структура ИЛ-15 в комплексе с его рецепторами ИЛ-15Рα (CD215), ИЛ-15Рβ (CD122) и общей гамма-цепью (CD132).
На фиг. 2А и фиг. 2В изображены последовательности для ИЛ-15 и его рецепторов.
На фиг. 3А – фиг. 3E изображены пригодные пары гетеродимеризационных вариантов Fc (в том числе искаженных вариантов и вариантов по pI). На фиг. 3D и фиг. 3E изображены варианты, для которых отсутствуют соответствующие варианты «мономера 2»; они представляют собой варианты по pI, которые могут быть использованы в отдельности в отношении любого мономера.
На фиг. 4 изображен перечень константных областей изостерических вариантных антител и их соответствующие замены. pI_( ) обозначает варианты с более низким значением pI, в то время как pI_(+) обозначает варианты с более высоким значением pI. Они могут быть необязательно и независимо объединены с другими гетеродимеризационными вариантами согласно данному изобретению (а также с вариантами других типов, описанными в данном документе).
На фиг. 5 изображены пригодные абляционные варианты, которые приводят к устранению связывания FcγR (иногда обозначаемые как «нокауты» или «КО» варианты). Как правило, абляционные варианты встречаются на обоих мономерах, хотя в некоторых случаях они могут присутствовать только на одном мономере.
На фиг. 6A – фиг. 6E представлены особенно пригодные варианты реализации «нецитокиновых» компонентов согласно данному изобретению.
На фиг. 7 изображен ряд иллюстративных линкеров переменной длины. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанные линкеры находят применение в связывании C-конца ИЛ-15 и (или) ИЛ-15Рα (суши) с N-концом области Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанные линкеры находят применение для слияния ИЛ-15 с ИЛ-15Рα (суши).
На фиг. 8A – фиг. 8D представлены последовательности нескольких полезных каркасов макромолекул формата ИЛ-15/Рα-Fc на основе человеческого IgG1 без цитокиновых последовательностей (например, ИЛ-15 и (или) ИЛ-15Рα (суши)). Каркас 1 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 2 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 3 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K : L368E/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368E/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 4 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты D401K : K360E/Q362E/T411E, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами K360E/Q362E/T411E и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 5 основан на IgG1 человека (аллотип 356D/358L) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 6 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях, а также вариант N297A в обеих цепях. Каркас 7 является идентичным каркасу 6, за исключением того, что мутация представляет собой N297S. Альтернативные форматы каркасов макромолекул 6 и 7 могут исключать абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Каркас 8 основан на IgG4 человека и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S, а также вариант S228P (нумерация EU, соответствует S241P при нумерации по Кабату) в обеих цепях, который приводит к устранению обмена фрагментами Fab, как известно в данной области техники. Каркас 9 основан на IgG2 человека и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S. Каркас 10 основан на IgG2 человека и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S, а также вариант S267K в обеих цепях. Каркас 11 идентичен каркасу 1, за исключением того, что содержит мутации Xtend M428L/N434S. Каркас 12 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих идентичных цепях и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих идентичных цепях. Каркас 13 основан на IgG1 человека (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, варианты по pI P217R/P229R/N276K в цепи с искаженными вариантами S364K/E357Q и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях.
Как будет понятно специалистам в данной области техники и изложено ниже, указанные последовательности можно использовать с любыми парами ИЛ-15 и IL-15Рα (суши), описанными в данном документе, включая следующие, но не ограничиваясь ими: ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, нкИЛ-15/Рα, оцИЛ-15/Рα и дсИЛ-15/Рα, как схематически изображено на фиг. 9A – 9G и фиг. 39. Кроме того, любые варианты ИЛ-15 и (или) ИЛ-15Рα (суши) могут быть включены в указанные каркасы макромолекул, показанные на фиг. 8A-8D, в любой комбинации.
В каждый из этих каркасов макромолекул включены последовательности, которые на 90%, 95%, 98% и 99% идентичны (как определено в данном документе) перечисленным последовательностям и (или) содержат от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дополнительных аминокислотных замен (по сравнению с «родительской» последовательностью из указанной фигуры, которая, как будет понятно специалистам в данной области техники, уже содержит ряд аминокислотных модификаций по сравнению с родительским IgG1 человека (или IgG2 или IgG4, в зависимости от каркаса). Таким образом, указанные каркасы макромолекул могут содержать дополнительные аминокислотные модификации (как правило, аминокислотные замены) в дополнение к искаженным вариантам, вариантам по pI и абляционным вариантам, содержащимся в каркасах, представленных на данной фигуре.
На фиг. 9A – фиг. 9G показаны несколько форматов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. Гетеродимерный Fc-слитый белок ИЛ-15Рα, или «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc» (фиг.9А), содержит ИЛ-15, рекомбинантно слитый с одной стороной гетеродимерного фрагмента Fc, и ИЛ-15Рα (суши), рекомбинантно слитый с другой стороной гетеродимерного фрагмента Fc. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) могут иметь линкер Gly-Ser переменной длины между С-концом и N-концом области Fc. Одноцепочечный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «оцИЛ-15/Рα– Fc» (фиг. 9B), содержит ИЛ-15Рα (суши), слитый с ИЛ-15 линкером переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши) или «оцИЛ-15/Рα»), который затем слит с N-концом гетеродимерного фрагмента Fc, при этом другая сторона молекулы представляет собой «только Fc» или «пустой Fc». Нековалентный ИЛ-15/Рα – Fc, или «нкИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 9C), содержит ИЛ-15Рα (суши), слитый с гетеродимерным фрагментом Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицируется отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/Рα, при этом другая сторона молекулы представляет собой «только Fc» или «пустой Fc». Бивалентный нековалентный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 9D), содержит ИЛ-15Рα (суши), слитый с N-концом гомодимерного фрагмента Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицируется отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/Рα. Бивалентный одноцепочечный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 9E), содержит ИЛ-15, слитый с ИЛ-15Рα (суши) линкером переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши), или «оцИЛ-15/Рα»), который затем слит с N-концом гомодимерного фрагмента Fc. Нековалентный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, или «Fc – нкИЛ-15/Рα» (фиг. 9F), содержит ИЛ-15Рα (суши), слитый с С-концом гетеродимерного фрагмента Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицирован отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/Рα, при этом другая сторона молекулы представляет собой «только Fc» или «пустой Fc». Одноцепочечный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, или «Fc – оцИЛ-15/Рα» (фиг. 9G), содержит ИЛ-15, слитый с ИЛ-15Рα (суши) линкером переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши), или «оцИЛ-15/Рα»), который затем слит с С-концом гетеродимерного фрагмента Fc, при этом другая сторона молекулы представляет собой «только Fc» или «пустой Fc».
На фиг. 10 представлены последовательности XENP20818 и XENP21475 – иллюстративные слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc формата «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc», с дополнительными последовательностями XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21476, XENP21477, включенными в список в WO2018071919 на фиг. 104A – фиг. 104D, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 418 – 423, 424 – 429, 430 – 435, 436 – 441, 442 – 447, 454 – 459 и 460 – 465, соответственно. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 11 представлены последовательности XENP21478 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «оцИЛ-15/Рα – Fc», с дополнительными последовательностями XENP21993, XENP21994, XENP21995, XENP23174, XENP23175, XENP24477 и XENP24480, включенными в список в WO2018071919 на фиг. 104G, фиг. 104H, фиг. 104AG, фиг. 104AU и фиг. 104AV, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 514 – 518, 519 – 523, 524 – 528, 849 – 853, 1063 – 1067 и 1078 – 1082, соответственно. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 12А – фиг. 12B представлены последовательности XENP21479, XENP22366 и XENP24348 – иллюстративные слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc формата «нкИЛ-15/Рα – Fc». ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 13 представлены последовательности XENP21978 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», с дополнительными последовательностями XENP21979, включенными в список в WO2018071919 на фиг. 104E и как последовательности SEQ ID NO: 480 – 483. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 14 представлены последовательности для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc». ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 15 представлены последовательности XENP22637 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «Fc – нкИЛ-15/Рα», с дополнительными последовательностями XENP22638, включенными в список в WO2018071919 на фиг. 104T и как последовательность SEQ ID NO: 668 – 672. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 16 представлены последовательности для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «Fc – оцИЛ-15/Рα». ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 17А – фиг. 17E представлены данные для иллюстративного формата слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP20818. На фиг. 17A представлен формат слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP20818. На фиг. 17B показана чистота и гомогенность XENP20818, определенная с помощью метода ЭХПР. На фиг. 17C показана чистота и гомогенность XENP20818, определенная с помощью метода КИФ. На фиг. 17D показана аффинность XENP20818 к ИЛ-2Рß, определенная с помощью метода Octet. На фиг. 17E показана стабильность XENP20818, определенная с помощью метода ДСФ.
На фиг. 18A – фиг. 18E представлены данные для иллюстративного формата слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP21478. На фиг. 18A показан формат слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP21478. На фиг. 18B показана чистота и гомогенность XENP21478, определенная с помощью метода ЭХПР. На фиг. 18C показана чистота и гомогенность XENP21478, определенная с помощью метода КИФ. На фиг. 18D показана аффинность XENP21478 к ИЛ-2Рß, определенная с помощью метода Octet. На фиг. 18E показана стабильность XENP21478, определенная с помощью метода ДСФ.
На фиг. 19A – фиг. 19E представлены данные для иллюстративного формата слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP21479. На фиг. 19A показан формат слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc для XENP21479. На фиг. 19B показана чистота и гомогенность XENP21479, определенная с помощью метода ЭХПР. На фиг. 19С показана чистота и гомогенность XENP21479, определенная с помощью метода КИФ. На фиг. 19D показана аффинность XENP21479 к ИЛ-2Рß, определенная с помощью метода Octet. На фиг. 19E показана стабильность XENP21479, определенная с помощью метода ДСФ.
На фиг. 20А – фиг. 20C представлена индукция пролиферации NK (CD56+ /CD16+) клеток (фиг. 20A), CD4+ T-клеток (фиг. 20B) и CD8+ T-клеток (фиг. 20C) иллюстративными слитыми белками ИЛ-15/Рα – Fc формата ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с разной длиной линкера на основе экспрессии Ki67, измеренной с помощью метода FACS.
На фиг. 21A – фиг. 21C представлена индукция пролиферации NK (CD56+ /CD16+) клеток (фиг. 21A), CD4+ T-клеток (фиг. 21B) и CD8+ T-клеток (фиг. 21C) иллюстративными слитыми белками ИЛ-15/Рα – Fc формата оцИЛ-15/Рα – Fc (XENP21478) и формата нкИЛ-15/Рα – Fc (XENP21479) на основе экспрессии Ki67, измеренной с помощью метода FACS.
На фиг. 22 показано усиление секреции ИЛ-2 с помощью иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, изотипического контроля и бивалентного антитела против PD-1 по сравнению с контролем ФСБ в анализе МКПК, стимулированных с помощью SEB.
На фиг. 23 показана кривая выживаемости для мышей NSG с привитыми МКПК после обработки XENP20818 и рекомбинантным ИЛ-15.
На фиг. 24 показана концентрация ИФН-γ в сыворотке крови мышей NSG на 7-е сутки после приживления МКПК человека и обработки XENP20818 в указанных концентрациях.
На фиг. 25A – фиг. 25C представлено количество CD4+ T-клеток (фиг. 25A), CD8+ T-клеток (фиг. 25B) и CD45+ клеток (фиг. 25C) в цельной крови мышей NSG с привитыми МКПК человека через 7 суток после обработки XENP20818 в указанных концентрации.
На фиг. 26 изображена структурная модель гетеродимера ИЛ-15/Рα, показывающая положения сконструированных пар дисульфидных связей.
На фиг. 27 представлены последовательности для иллюстративных вариантов ИЛ-15Рα (суши), сконструированных с дополнительными остатками на С-конце, которые служат каркасом для конструирования остатков цистеина.
На фиг. 28 представлены последовательности для иллюстративных вариантов ИЛ-15, сконструированных с цистеинами для образования ковалентных дисульфидных связей с вариантами ИЛ-15Рα (суши), сконструированными с цистеинами.
На фиг. 29 представлены последовательности для иллюстративных вариантов ИЛ-15Рα (суши), сконструированных с цистеинами для образования ковалентных дисульфидных связей с вариантами ИЛ-15, сконструированными с цистеинами.
На фиг. 30А – фиг. 30C изображены гетеродимеры ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями между ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши), и без этих связей. Нековалентный гетеродимерный белок ИЛ-15/Рα, или «гетеродимер нкИЛ-15/Рα» (фиг. 30A), содержит ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15, трансфицированные отдельно и нековалентно связанные. Гетеродимерный белок ИЛ-15/Рα с дисульфидной связью, или «гетеродимер дсИЛ-15/Рα» (фиг. 30B), включает ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15, трансфицированные отдельно и ковалентно связанные в результате сконструированных цистеинов. Одноцепочечный гетеродимерный белок ИЛ-15/Рα, или «гетеродимер оцИЛ-15/Рα» (фиг. 30C), включает ИЛ-15Рα (суши), слитый с ИЛ-15 с помощью линкера Gly-Ser переменной длины.
На фиг. 31 представлены последовательности XENP21996 для иллюстративного гетеродимера нкИЛ-15/Рα. Важно отметить, что эти последовательности были созданы с использованием полигистидиновых (Hisx6 или HHHHHH (SEQ ID NO: 10)) С-концевых меток на С-конце ИЛ-15Рα (суши).
На фиг. 32 представлены последовательности XENP22004, XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494 для иллюстративных гетеродимеров дсИЛ-15/Рα, а дополнительные последовательности XENP22007, XENP22009, XENP22010, XENP22011, XENP22012 и XENP22493 представлены в WO2018071919 на фиг. 104J, фиг. 104K и фиг. 104I, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 543 – 544, 545 – 546, 547 – 548, 551 – 552, 553 – 554 и 647 – 648, соответственно. Важно отметить, что эти последовательности были созданы с использованием полигистидиновых (Hisx6 или HHHHHH (SEQ ID NO: 10)) C-концевых меток на C-конце ИЛ-15Рα (суши).
На фиг. 33 представлена последовательность XENP22049 для иллюстративного гетеродимера оцИЛ-15/Рα. Важно отметить, что эти последовательности были созданы с использованием полигистидиновых (Hisx6 или HHHHHH (SEQ ID NO: 10)) C-концевых меток на C-конце ИЛ-15. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα и линкером.
На фиг. 34 показаны чистота и гомогенность иллюстративных гетеродимерных белков ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями и без них, как определено с помощью метода КИФ.
На фиг. 35 показаны чистота и гомогенность иллюстративных гетеродимерных белков ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями и без них, как определено с помощью метода КИФ.
На фиг. 36 показаны стабильность и температуры плавления иллюстративных гетеродимерных белков ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями и без них, как показано по кривым плавления, полученным с помощью метода ДСФ.
На фиг. 37 показаны стабильность и температуры плавления иллюстративных гетеродимерных белков ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями и без них, как показано по кривым плавления, полученным с помощью метода ДСФ.
На фиг. 38 показаны экспрессионный выход, молекулярная масса, прогнозируемое изменение аффинности между ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши), рассчитанные с помощью программного обеспечения MOE, температура плавления и аффинность к ИЛ-2Рβ для гетеродимерных белков ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями и без них. Мутации указаны в скобках после соответствующего мономера.
На фиг. 39А – фиг. 39D показаны дополнительные форматы слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению со сконструированными дисульфидными связями. Дисульфидно-связанный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «дсИЛ-15/Рα – гетеро-Fc» (фиг. 39A), является таким же, как «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Дисульфидно-связанный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «дсИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 39B) является таким же, как «нкИЛ-15/Рα – Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Бивалентный дисульфидно-связанный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «бивалентный дсИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 39C), является таким же, как «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Дисульфидно-связанный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, или «Fc – дсИЛ-15/Рα» (фиг. 39D), является таким же, как «Fc – нкIL-15/Рα», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов.
На фиг. 40А – фиг. 40В показаны последовательности XENP22013, XENP22014, XENP22015 и XENP22017 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «дсИЛ-15/Рα – гетеро-Fc». ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 41А – фиг. 41B показаны последовательности XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22684 и XENP22361 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «дсИЛ-15/Рα – Fc». Дополнительные последовательности XENP 22360, 22362, 22363, 22364, 22365, 22366 представлены в WO2018/071919 на фиг. 104O, фиг. 104P, фиг. 104Q и фиг. 104R, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 612 – 616, 622 – 626, 627 – 631, 632 – 636, 637 – 641 и 642 – 646, соответственно, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 42 показаны последовательности XENP22634, XENP22635 и XENP22636 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный дсИЛ-15/Рα – Fc». Дополнительные последовательности XENP22687 представлены в WO2018/071919 на фиг. 104V и в виде последовательностей SEQ ID NO: 685 – 688, которые включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 43 показаны последовательности XENP22639 и XENP22640 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «Fc – дсИЛ-15/Рα». ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 44 показаны чистота и гомогенность иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них, как определено с помощью метода КИФ.
На фиг. 45А – фиг. 45C показана индукция пролиферации NK (CD56+ /CD16+) клеток (фиг. 45A), CD8+ T-клеток (фиг. 45B) и CD4+ T-клеток (фиг. 45C) с помощью иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них на основе экспрессии Ki67, измеренной с помощью метода FACS.
На фиг. 46 изображена структура ИЛ-15 в комплексе с ИЛ-15Рα, ИЛ-2Рß и с общей гамма-цепью. Показаны положения замен, предназначенных для снижения активности.
На фиг. 47А – фиг. 47C показаны последовательности иллюстративных вариантов ИЛ-15, сконструированных для снижения активности. В каждую из этих вариантных последовательностей ИЛ-15 включены последовательности, которые на 90%, 95%, 98% и 99% идентичны (как определено в данном документе) указанным последовательностям и (или) содержат от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дополнительных аминокислотных замен. В качестве неограничивающего примера, указанные последовательности могут содержать дополнительные аминокислотные модификации, такие как те, которые способствуют образованию ковалентных дисульфидных связей, как описано в Примере 2.
На фиг. 48А – фиг. 48H показаны последовательности XENP22816, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22829, XENP22834, XENP23554, XENP23557, XENP23561, XENP24018, XENP24019, XENP24045, XENP24051 и XENP24052 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc», сконструированных для более низкой активности. Дополнительные последовательности XENP 22815, 22817, 22818, 22823, 22824, 22825, 22826, 22827, 22828, 22830, 22831, 22832, 22833, 23555, 23559, 23560, 24017, 24020, 24043 и 24048 представлены в WO2018071919 на фиг. 104Z, фиг. 104AA, фиг. 104AC, фиг. 104AD, фиг. 104AE, фиг. 104AF, фиг. 104AJ, фиг. 104AK, фиг. 104AM, фиг. 104AN и фиг. 104AO, а также как последовательности SEQ ID NO: 729 – 734, 741 – 746, 747 – 752, 777 – 782, 783 – 788, 789 – 794, 795 – 800, 801 – 806, 807 – 812, 819 – 824, 825 – 830, 831 – 836, 837 – 842, 887 – 892, 899 – 904, 905 – 910, 937 – 942, 955 – 960, 961 – 966 и 979 – 984, соответственно. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 49А – фиг. 49D показаны последовательности XENP24015, XENP24050, XENP24475, XENP24476, XENP24478, XENP24479 и XENP24481 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «оцИЛ-15/Рα – Fc», сконструированные для достижения более низкой активности. Дополнительные последовательности XENP 24013, 24014, 24016 представлены в WO2018071919 на фиг. 104AK и фиг. 104AL, а также как последовательности SEQ ID NO: 914 – 921, 922 – 926 и 932 – 936. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 50А – фиг. 50B показаны последовательности XENP24349, XENP24890 и XENP25138 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «нкИЛ-15/Рα – Fc», сконструированные для достижения более низкой активности. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 51 показаны последовательности XENP22801 и XENP22802 для иллюстративных гетеродимерных белков нкИЛ-15/Рα, сконструированные для достижения более низкой активности. Дополнительные последовательности XENP 22791, 22792, 22793, 22794, 22795, 22796, 22803, 22804, 22805, 22806, 22807, 22808, 22809, 22810, 22811, 22812, 22813, 22814 представлены в WO2018071919 на фиг. 104V, фиг. 104W, фиг. 104X, фиг. 104Y и фиг. 104Z, а также как последовательности SEQ ID NO: 689 – 690, 691 – 692, 693 – 694, 695 – 696, 697 – 698, 699 – 700, 705 – 706, 707 – 708, 709 – 710, 711 – 712, 713 – 714, 715 – 716, 717 – 718, 719 – 720, 721 – 722, 723 – 724, 725 – 726 и 727 – 728, соответственно. Важно отметить, что эти последовательности были созданы с использованием полигистидиновых (Hisx6 или HHHHHH (SEQ ID NO: 10)) C-концевых меток на C-конце ИЛ-15Рα (суши).
На фиг. 52 показаны последовательности XENP24342 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», сконструированные для достижения более низкой активности. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 53 показаны последовательности XENP23472 и XENP23473 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «дсИЛ-15/Рα – Fc», сконструированные для достижения более низкой активности. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 54А – фиг. 54C показана индукция пролиферации NK-клеток (фиг. 54A), CD8 + (CD45RA-) Т-клеток (фиг. 54B) и CD4 + (CD45RA-) T-клеток (фиг. 54C) с помощью вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc на основе экспрессии Ki67, измеренной с помощью метода FACS.
На фиг. 55 показана EC50 для индукции пролиферации NK и CD8 + T-клеток с помощью вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc и кратное снижение EC50 по сравнению с XENP20818.
На фиг. 56А – фиг. 56C показано гейтирование лимфоцитов и субпопуляций для экспериментов, изображенных на фиг. 59A – фиг. 59D. На фиг. 56A показана популяция гейтированных лимфоцитов. На фиг. 56B показаны CD3-отрицательные и CD3-положительные субпопуляции. На фиг. 56C показаны CD16-отрицательные и CD16-положительные субпопуляции CD3-отрицательных клеток.
На фиг. 57А – фиг. 57C показано гейтирование субпопуляций CD3 + лимфоцитов для экспериментов, изображенных на фиг. 59A – фиг. 59D. На фиг. 57A показаны субпопуляции CD4 +, CD8 + и γδ CD3 + Т-клеток. На фиг. 57B показаны субпопуляции CD45RA (-) и CD45RA (+) CD4 + Т-клеток. На фиг. 57C показаны субпопуляции CD45RA (-) и CD45RA (+) CD8 + Т-клеток.
На фиг. 58А – фиг. 58B показана экспрессия CD69 и CD25 до (фиг. 58A) и после (фиг. 58B) инкубации МКПК человека с XENP22821.
На фиг. 59A – фиг. 59D показана клеточная пролиферация МКПК человека, инкубированных в течение четырех суток с указанным вариантом слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc. На фиг. 59A – фиг. 59C показано процентное содержание пролиферирующих NK-клеток (CD3-CD16+) (фиг. 59A), CD8+ Т-клеток (CD3+ CD8+ CD45RA-) (фиг. 59B) и CD4+ Т-клеток (CD3+ CD4+ CD45RA-) (фиг. 59C). На фиг. 59D показано кратное изменение в EC50 различных гетеродимерных белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc по сравнению с контролем (XENP20818).
На фиг. 60А – фиг. 60D показана клеточная пролиферация МКПК человека, инкубированных в течение трех суток с указанным вариантом слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc. На фиг. 60A – фиг. 60C показано процентное содержание пролиферирующих CD8+ (CD45RA-) Т-клеток (фиг. 60A), CD4+ (CD45RA-) T-клеток (фиг. 60B), γδ Т-клеток (фиг. 60C) и NK-клеток (фиг. 60D).
На фиг. 61A – фиг. 61C показан процент экспрессии Ki67 на CD8+ Т-клетках (фиг. 61A), CD4+ T-клетках (фиг. 61B) и NK-клетках (фиг. 61C) после обработки дополнительными вариантными белками ИЛ-15/Рα.
На фиг. 62A – фиг. 62E показан процент экспрессии Ki67 на CD8+ (CD45RA-) T-клетках (фиг. 62A), CD4+ (CD45RA-) T-клетках (фиг. 62B), γδ Т-клетках (фиг. 62C), NK (CD16+ CD8α-) клетках (фиг. 62D) и NK (CD56+ CD8α-) клетках (фиг. 62E) после обработки вариантными белками ИЛ-15/Рα.
На фиг. 63А – фиг. 63E показан процент экспрессии Ki67 на CD8 + (CD45RA-) T-клетках (фиг. 63A), CD4 + (CD45RA-) T-клетках (фиг. 63B), γδ Т-клетках (фиг. 63C), NK (CD16+ CD8α-) клетках (фиг. 63D) и NK (CD56+ CD8α-) клетках (фиг. 63E) после обработки вариантными белками ИЛ-15/Рα.
На фиг. 64A – фиг. 64D показан процент экспрессии Ki67 на CD8+ Т-клетках (фиг. 64A), CD4+ Т-клетках (фиг. 64B), γδ Т-клетках (фиг. 64C) и NK (CD16+) клетках (фиг. 64D) после обработки дополнительными вариантными белками ИЛ-15/Рα, сконструированными для достижения пониженной активности с разной длиной линкера.
На фиг. 65 – фиг. 65D показан процент экспрессии Ki67 на CD8 + Т-клетках (фиг. 65A), CD4 + Т-клетках (фиг. 65B), γδ Т-клетках (фиг. 65C) и NK (CD16+) клетках (фиг. 65D) после обработки дополнительными вариантными белками ИЛ-15/Рα.
На фиг. 66A – фиг. 66D показано гейтирование лимфоцитов и их субпопуляций для экспериментов, изображенных на фиг. 67A – фиг. 67C. На фиг. 66A показано гейтирование популяции лимфоцитов. На фиг. 66B показаны CD4+ и CD8+ Т-клетки. На фиг. 66C показаны субпопуляции CD4+ Т-клеток, экспрессирующие CD45RA и CD27. На фиг. 66D показаны субпопуляции CD8+ Т-клеток, экспрессирующие CD45RA и CD27.
На фиг. 67 – фиг. 67C показано фосфорилирование STAT5 на CD8 + Т-клетках (CD45RA- CD27-) (фиг. 67A) и CD4 + T-клетках (CD45RA- CD27-) (фиг. 67B) после инкубации МКПК в течение 4 суток с указанными вариантами слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в указанных концентрациях. На фиг. 67C показано кратное изменение в EC50 различных гетеродимерных белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc по сравнению с контролем (XENP20818).
На фиг. 68А – фиг. 68В показано фосфорилирование STAT5 на CD8 + CD45RA - Т-клетках (фиг. 68A) и CD4 + CD45RA - Т-клетках (фиг. 68B) в спленоцитах мыши после инкубации с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 69 представлена фармакокинетика (ФК) в/в – т/в доз слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc или контролей у мышей C57BL/6 при однократной дозе 0,1 мг/кг.
На фиг. 70 представлена корреляция между периодом полужизни и активностью для NK-клеток.
На фиг. 71 представлена корреляция между периодом полужизни и передачей сигналов STAT5 у мышей для аффинных вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 72 показана концентрация исследуемых препаратов в сыворотке крови через 8 суток после введения дозы мышам-альбиносам C57BL/6.
На фиг. 73 показано количество CD8 + Т-клеток в селезенке мышей-альбиносов C57BL/6 через 8 суток после введения указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 74 показано, что уровни CD45 + клеток являются предикативными маркерами заболевания.
На фиг. 75А – фиг. 75B показано усиление приживления с помощью вариантных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, на что указывает количество CD45 + клеток на 4-е сутки (фиг. 75A) и 8-е сутки (фиг. 75B).
На фиг. 76А – фиг. 76C показаны уровни ИФН-γ на 4-е сутки (фиг. 76A), 7-е сутки (фиг. 76B) и 11-е сутки (фиг. 76C) после воздействия на мышей NSG, которым были привиты МКПК человека, указанными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc или контролем.
На фиг. 77А – фиг. 77C показано количество CD45 +лимфоцитов на 4-е сутки (фиг. 77A), 7-е сутки (фиг. 77B) и 11-е сутки (фиг. 77C) после воздействия на мышей NSG, которым были привиты МКПК человека, указанными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc или контролем.
На фиг. 78А – фиг. 78C показано количество NK-клеток (CD16+ CD56+ CD45RA+) на 4-е сутки (фиг. 78A), 7-е сутки (фиг. 78B) и 11-е сутки (фиг. 78C) после воздействия на мышей NSG, которым были привиты МКПК человека, указанными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc или контролем.
На фиг. 79А – фиг. 79B показано количество CD8 + Т-клеток (CD8+ CD45RA+) на 7-е сутки (фиг. 79A) и 11-е сутки (фиг. 79B) после воздействия на мышей NSG, которым были привиты МКПК человека, указанными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc или контролем.
На фиг. 80A – фиг. 80B показано количество CD4+ Т-клеток (CD4+ CD45RA+) на 7-е сутки (фиг. 80A) и на 11-е сутки (фиг. 80B) после воздействия на мышей NSG, которым были привиты МКПК человека, указанными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc или контролем.
На фиг. 81 показан уровень ИФН-γ на 4-е сутки, 7-е сутки и 11-е сутки в сыворотке крови мышей, которым были привиты МКПК человека (челМКПК, англ. «huPBMC»), дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 82A – фиг. 82C показано количество CD8+ Т-клеток на 4-е сутки (фиг. 82A), 7-е сутки (фиг. 82B) и 11-е сутки (фиг. 82C) в цельной крови мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 83A – фиг. 83C показано количество CD4+ Т-клеток на 4-е сутки (фиг. 83A), 7-е сутки (фиг. 83B) и 11-е сутки (фиг. 83C) в цельной крови мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 84A – фиг. 84C показано количество CD45+ клеток на 4-е сутки (фиг. 84A), 7-е сутки (фиг. 84B) и 11-е сутки (фиг. 84C) в цельной крови мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 85A – фиг. 85C показана масса тела в процентах от начальной массы тела мышей с привитым челМКПК на 4-е сутки (фиг. 85A), 7-е сутки (фиг. 85B) и 11-е сутки (фиг. 85C) после обработки дополнительными вариантами белка ИЛ-15/Рα. Каждая точка представляет собой одну мышь NSG. Мышей, масса тела которых упала ниже 70% от исходной массы тела, умерщвляли. Умерщвленные мыши отображены на отметке 70%.
На фиг. 86А – фиг. 86B показано процентное содержание CD8 + T-клеток яванской макаки (фиг. 86A) и NK-клеток яванской макаки (фиг. 86B), экспрессирующих Ki67, после инкубации с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 87A – фиг. 87E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам белка XENP20818. Фиг. 87A-E, соответственно, показывают кратное изменение абсолютного количества CD56+ NK-клеток (фиг. 87A), CD16+ NK-клеток (фиг. 87B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 87C), CD8+ T-клеток (фиг. 87D) и CD4+ Т-клеток (фиг. 87E).
На фиг. 88A – фиг. 88E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 88A), CD16+ NK-клеток (фиг. 88B), CD8+ Т-клеток (CD45RA+) (фиг. 88C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 88D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 88E) после введения яванским макакам дозы белка XENP20818.
На фиг. 89A – фиг. 89E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам дозы белка XENP22819. На фиг. 89A – фиг. 89E показано кратное изменение абсолютного количества CD56+ NK-клеток (фиг. 89A), CD16+ NK-клеток (фиг. 89B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 89C), CD8+ T-клеток (фиг. 89D) и CD4+ Т-клеток (фиг. 89E).
На фиг. 90A – фиг. 90E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 90A), CD16+ NK-клеток (фиг. 90B), CD8+ Т-клеток (CD45RA+) (фиг. 90C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 90D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 90E) после введения яванским макакам дозы белка XENP22819.
На фиг. 91A – фиг. 91E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам дозы белка XENP22821. На фиг. 91A – фиг. 91E показано кратное изменение абсолютного количества CD56+ NK-клеток (фиг. 91A), CD16+ NK-клеток (фиг. 91B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 91C), CD8+ T-клеток (фиг. 91D) и CD4+ Т-клеток (фиг. 91E).
На фиг. 92A – фиг. 92E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 92A), CD16+ NK-клеток (фиг. 92B), CD8+ Т-клеток (CD45RA+) (фиг. 92C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 92D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 92E) после введения яванским макакам дозы белка XENP22821.
На фиг. 93A – фиг. 93E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам дозы белка XENP22822. На фиг. 93A-E, соответственно, показано кратное изменение абсолютного количества CD56+ NK-клеток (фиг. 93A), CD16+ NK-клеток (фиг. 93B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 93C), CD8+ T-клеток (фиг. 93D) и CD4+ Т-клеток (фиг. 93E).
На фиг. 94А – фиг. 94E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 94A), CD16+ NK-клеток (фиг. 94B), CD8 + T-клеток (CD45RA+) (фиг. 94C), CD8 + T-клеток (CD45RA-) (фиг. 94D) и CD4 + Т-клеток (CD45RA-) (фиг. 94E) после введения яванским макакам дозы белка XENP22822.
На фиг. 95A – фиг. 95E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам дозы белка XENP22834. На фиг. 95A-E, соответственно, показано кратное изменение абсолютного количества CD56+ NK-клеток (фиг. 95A), CD16+ NK-клеток (фиг. 95B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 95C), CD8+ T-клеток. (фиг. 95D) и CD4+ T-клеток (фиг. 95E).
На фиг. 96A – фиг. 96E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 96A), CD16+ NK-клеток (фиг. 96B), CD8+ Т-клеток (CD45RA+) (фиг. 96C), CD8+ Т-клеток (CD45RA-) (фиг. 96D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 96E) после введения яванским макакам дозы белка XENP22834.
На фиг. 97А – фиг. 97E показано количество лимфоцитов после введения яванским макакам дозы белка XENP23343. На фиг. 97A-E, соответственно, показано кратное изменение абсолютного количества CD56 + NK-клеток (фиг. 97A), CD16 + NK-клеток (фиг. 97B), γδ Т-клеток (CD45RA+ CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 97C), CD8 + Т-клеток (фиг. 97D) и CD4 + Т-клеток (фиг. 97E).
На фиг. 98A – фиг. 98E показана пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 98A), CD16+ NK-клеток (фиг. 98B), CD8+ Т-клеток (CD45RA+) (фиг. 98C), CD8+ Т-клеток (CD45RA-) (фиг. 98D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 98E) после введения яванским макакам дозы белка XENP23343.
На фиг. 99A – фиг. 99C показаны последовательности XENP23343, XENP23504, XENP24113, XENP24301, XENP24306 и XENP24341 для иллюстративных вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc» с заменами M428L/N434S. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 100 показаны последовательности XENP25938 (также называемой XENP24294) для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «оцИЛ-15/Рα – Fc» с заменами M428L/N434S.
На фиг. 101 показаны последовательности XENP24383 для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «нкИЛ-15/Рα – Fc» с заменами M428L/N434S. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как будет понятно специалистам в данной области техники, указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых показаны на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 102 показаны последовательности XENP24346 и XENP24351 для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc» с заменами M428L/N434S. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной чертой, линкеры подчеркнуты двойной чертой (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фиг. 7), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и областями Fc.
На фиг. 103А – фиг. 103C показан процент экспрессии Ki67 на CD8 + Т-клетках человека (фиг. 103A), CD4 + T-клетках человека (фиг. 103B) и NK-клетках человека (фиг. 103C) после обработки вариантными белками ИЛ-15/Рα с мутациями M428L/N434S в области Fc.
На фиг. 104А – фиг. 104D показан процент экспрессии Ki67 на CD8 + Т-клетках человека (фиг. 104A), CD4 + T-клетках человека (фиг. 104B), NK-клетках человека (фиг. 104C) и γδ Т-клетках человека (фиг. 104D) после обработки белком XmAb24306 (также называемым XENP24306).
На фиг. 105А – фиг. 105C показан процент экспрессии Ki67 на CD8 + T-клетках яванской макаки (фиг. 105A), CD4 + T-клетках яванской макаки (фиг. 105B) и NK-клетках яванской макаки (фиг. 105C) после обработки вариантными белками ИЛ-15/Рα – Fc ДТ и ИЛ-15/Рα с пониженной активностью с мутациями M428L/N434S в области Fc.
На фиг. 106 показан процент экспрессии Ki67 на CD8α+ CD45RA- Т-клетках яванской макаки после обработки белками XENP20818 или XmAb24306.
На фиг. 107A – фиг. 107C показано количество CD4+ Т-клеток на 4-е сутки (фиг. 107A) и 7-е сутки (фиг. 107B) в цельной крови и на 8-й день (фиг. 107C) в селезенке мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 108А – фиг. 108C показано количество CD8 + Т-клеток на 4-е сутки (фиг. 108A) и 7-е сутки (фиг. 108B) в цельной крови, и на 8-е сутки (фиг. 108C) – в селезенке мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 109A – фиг. 109C показано количество CD8+ Т-клеток на 4-е сутки (фиг. 109A) и 7-е сутки (фиг. 109B) в цельной крови, и на 8-е сутки (фиг. 109C) – в селезенке мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки дополнительными вариантами слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
На фиг. 110A – фиг. 110F показана масса тела в процентах от начальной массы тела мышей, которым были привиты челМКПК, в День -2 (фиг. 110A), День 1 (фиг. 110B), День 5 (фиг. 110C), День 8 (фиг. 110D) и День 11 (фиг. 110E) после обработки дополнительными вариантами белка ИЛ-15/Рα. Каждая точка представляет собой одну мышь NSG. На фиг. 110F изображена динамика массы тела у мышей, которым были привиты челМКПК, после обработки вариантами белка ИЛ-15/Рα.
На фиг. 111A – фиг. 111D показано процентное содержание CD8+ CD45RA- Т-клеток (фиг. 111A), CD4+ CD45RA- T-клеток (фиг. 111B), γδ Т-клеток (фиг. 111C) и CD16+ NK-клеток (фиг. 111D), которые экспрессируют Ki67, после инкубации с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 112A – фиг. 112D показано количество CD8+ Т-клеток (фиг. 112A), CD4+ T-клеток (фиг. 112B), NK-клеток (фиг. 112C) и γδ Т-клеток (фиг. 112D) у яванских макак после обработки вариантами белка ИЛ-15/Рα.
На фиг. 113A – фиг.113H показаны концентрации в сыворотке крови с течением времени и периоды полужизни указанных исследуемых препаратов у яванских макак.
На фиг. 114A – фиг. 114F показано связывание исследуемых препаратов, меченных флуорофором AF647 (слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc ДТ и аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend и без доменных линкеров), с CD8+ CD45RA- T-клетками (фиг. 114A), CD8+ CD45RA+ T-клетками (фиг. 114B), CD4+ CD45RA- T-клетками (фиг. 114C), CD4+ CD45RA+ T-клетками (фиг. 114D), CD16+ NK-клетками (фиг. 114E) и γδ Т-клетками (фиг. 114F) в свежих и активированных МКПК.
На фиг. 115А – фиг. 115F показано связывание исследуемых препаратов, меченных флуорофором AF647 (слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc ДТ и аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend и без доменных линкеров) с CD8 + CD45RA - Т-клетками (фиг. 115A), CD8 + CD45RA + Т-клетками (фиг. 115B), CD4 + CD45RA - Т-клетками (фиг. 115C), CD4 + CD45RA + Т-клетками (фиг. 115D), CD16 + NK-клетками (фиг. 115Е) и γδ T-клетками (фиг. 115F) в свежих и активированных МКПК.
На фиг. 116A – фиг. 116F показано связывание исследуемых препаратов, меченных флуорофором AF647 (слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc ДТ и ИЛ-15/Рα – Fc в дополнительных форматах с вариантами Xtend, такими как варианты по FcRn), с CD8 + CD45RA - Т-клетками (фиг. 116A), CD8 + CD45RA + Т-клетками (фиг. 116B), CD4 + CD45RA - Т-клетками (фиг. 116C), CD4 + CD45RA + Т-клетками (фиг. 116D), CD16 + NK-клетками (фиг. 116E) и γδ Т-клетками (фиг. 116F) в свежих и активированных МКПК.
На фиг. 117 показано связывание исследуемых препаратов, меченных флуорофором AF647 (включительно с белками XENP24341 и XENP24113) с CD8 + CD45RA - Т-клетками в активированных МКПК.
На фиг. 118А – фиг. 118B показана экспрессия CD25 на CD8 + Т-клетках в (фиг. 118A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 118B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 119А – фиг. 119B показана экспрессия CD25 на CD4 + Т-клетках в (фиг. 119A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 119B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 120А – фиг. 120B показана экспрессия CD69 на CD8 + Т-клетках в (фиг. 120A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 120B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 121А – фиг. 121B показана экспрессия CD69 на CD4 + Т-клетках в (фиг. 121A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 121B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 122А – фиг. 122B показана внутриклеточная экспрессия ИФН-γ в CD8 + Т-клетках в (фиг. 122A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 122B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 123А – фиг. 123B показана внутриклеточная экспрессия ИФН-γ в CD4 + Т-клетках в (фиг. 123A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 123B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 124А – фиг. 124C показано процентное содержание (фиг. 124A) Ki-67 +/ ИФН-γ -, (фиг. 124B) Ki-67 +/ ИФН-γ + и (фиг. 124C) Ki-67 -/ ИФН-γ + фракций CD8 + Т-клеток в группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 125А – фиг. 125C показано процентное содержание (фиг. 125A) Ki-67 +/ ИФН-γ -, (фиг. 125B) Ki-67 +/ ИФН-γ + и (фиг. 125C) Ki-67 -/ ИФН-γ + фракций CD4 + Т-клеток в группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 126А – фиг. 126C показано процентное содержание (фиг. 126A) Ki-67 +/ ИФН-γ -, (фиг. 126B) Ki-67 +/ ИФН-γ + и (фиг. 126C) Ki-67 -/ ИФН-γ + фракций CD8 + Т-клеток в группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 127А – фиг. 127C показано процентное содержание (фиг. 127A) Ki-67 +/ ИФН-γ -, (фиг. 127B) Ki-67 +/ИФН-γ + и (фиг. 127C) Ki-67 -/ИФН-γ + фракций CD4 + Т-клеток в группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 128А – фиг. 128B показана экспрессия CD107a на CD8 + Т-клетках в (фиг. 128A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 128B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 129А – фиг. 129B показана экспрессия CD107a на CD4 + Т-клетках в (фиг. 129A) группе 1 (очищенные Т-клетки, инкубированные с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами) и в (фиг. 129B) группе 2 (очищенные Т-клетки, инкубированные с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и с указанными исследуемыми препаратами).
На фиг. 130А – фиг. 130B показаны оставшиеся клетки-мишени [фиг. 130A: родительские опухолевые клетки MCF-7; фиг. 130B: экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7] после инкубации с очищенными Т-клетками и с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 131А – фиг. 131B показано количество мертвых клеток [фиг. 131A: родительские опухолевые клетки MCF-7; фиг. 131B: экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7] после инкубации с очищенными Т-клетками и с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 132 показано процентное содержание Ki-67+/ ИФН-γ+ фракций CD8 + Т-клеток после инкубации очищенных Т-клеток с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 или экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7, с антителами против HLA-A или без них.
На фиг. 133 показано количество клеток-мишеней (например, родительских опухолевых клеток MCF-7 или экспрессирующих pp65 опухолевых клеток MCF-7) после инкубации очищенных Т-клеток с родительскими опухолевыми клетками MCF-7 или экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7, с антителами против HLA-A или без них.
На фиг. 134А – фиг. 134B показана экспрессия CD25 на CD8 + Т-клетках (фиг. 134A) и на CD4 + Т-клетках (фиг. 134B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 135А – фиг. 135B показана экспрессия CD69 на CD8 + Т-клетках (фиг. 135A) и CD4 + Т-клетках (фиг. 135B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 136А – фиг. 136B показана экспрессия Ki67 на CD8 + Т-клетках (фиг. 136A) и CD4 + Т-клетках (фиг. 136B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 137А – фиг. 137B показан процент фракций Ki-67 +/ ИФН-γ + среди CD8 + Т-клеток (фиг. 137A) и CD4 + Т-клеток (фиг. 137B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 138А – фиг. 138B показано процентное содержание фракций CD69 +/ ИФН-γ + среди CD8 + Т-клеток (фиг. 138A) и CD4 + Т-клеток (фиг. 138B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 139A – фиг. 139B показан процент фракций CD69+/ Ki67+ среди CD8+ Т-клеток (фиг. 139A) и CD4+ Т-клеток (фиг. 139B) после инкубации очищенных Т-клеток с экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 140 показаны оставшиеся клетки-мишени (экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7) после инкубации с очищенными Т-клетками и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 141 показано число мертвых клеток (экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7) после инкубации с очищенными Т-клетками и указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 142А – фиг. 142B показан средний объем опухоли (фиг. 142A) и изменение объема опухоли (фиг. 142B) у мышей, которым были привиты экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7 и pp65-реактивные МКПК человека после обработки препаратом XENP24045 – не содержащим Xtend аналогом XmAb24306.
На фиг. 143 A – фиг. 143D показано число CD45 + клеток (фиг. 143A), CD4 + клеток (фиг. 143B), CD8 + клеток (фиг. 143C) и NK-клеток (фиг. 143D) в цельной крови мышей, которым были привиты экспрессирующие pp65 опухолевые клетки MCF-7 и pp65-реактивные МКПК человека, после обработки препаратом XENP24045 – не содержащим Xtend аналогом XmAb24306.
На фиг. 144 показаны концентрации в сыворотке крови с течением времени и период полураспада различных исследуемых препаратов в различных концентрациях у яванских макак.
На фиг. 145 показаны нормализованные концентрации Cmax в сыворотке крови для препарата XENP22821 в дозах 1X и 3X с течением времени у яванских макак.
На фиг. 146А – фиг. 146E показано среднее кратное изменение числа CD8 + Т-клеток (фиг. 146A), CD4 + T-клеток (фиг. 146B), CD16 + NK-клеток (фиг. 146C), CD56 + NK-клеток (фиг. 146D) и γδ T-клеток (фиг. 146E) у яванских макак после введения указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 147А – фиг. 147B показано кратное изменение CD8 + T-клеток (фиг. 147A) и γδ T-клеток (фиг. 147B) в цельной крови яванских макак с течением времени после введения препарата XENP24306 в дозе 3X или 0,6X.
На фиг. 148 показан процент CD8α + CD45RA + Т-клеток в экспрессирующих Ki67 лимфатических узлах яванских макак после введения дозы 0,3X препарата XENP22821 и дозы 0,6X препарата XENP24306.
На фиг. 149 показано процентное содержание CD8α + CD45RA + Т-клеток в цельной крови яванских макак, экспрессирующих Ki67 (левая ось), и кратное изменение в числе клеток (правая ось) после введения дозы 0,3X препарата XENP22821 и дозы 0,6X препарата XENP24306.
На фиг. 150 показано процентное содержание различных популяций лимфоцитов в МКПК яванских макак, экспрессирующих Ki67, после введения дозы 0,3X препарата XENP22821.
На фиг. 151 показано процентное содержание различных популяций лимфоцитов в МКПК яванских макак, экспрессирующих Ki67, после введения дозы 0,6X препарата XmAb24306.
На фиг. 152 показано наложение процентного содержания CD8α+ CD45RA+ Т-клеток в цельной крови яванских макак, экспрессирующих Ki67, и концентрации препарата XmAb24306 в сыворотке крови с течением времени после введения препарата XmAb24306 в дозе 0,6X.
На фиг. 153 показано кратное изменение числа CD8 + T-клеток, CD4 + T-клеток, CD56 + CD8α + NK-клеток и γδ T-клеток в цельной крови яванских макак с течением времени после введения препарата XmAb24306 в дозе 0,6X.
На фиг. 154 показано кратное изменение числа CD8 + Т-клеток и Treg-клеток в цельной крови яванских макак с течением времени после введения препарата XmAb24306 в дозе 0,6X.
На фиг. 155А – фиг. 155C показано наложение количества CD8 + Т-клеток (фиг. 155A), CD4 + T-клеток (фиг. 155B) и CD16 + NK-клеток (фиг. 155C) с течением времени в цельной крови яванских макак после введения им XENP20818 или XmAb24306.
На фиг. 156А – фиг. 156C показано кратное изменение в экспрессии связанных с иммунитетом генов в цельных МКПК (фиг. 156A), в очищенных NK-клетках (фиг. 156B) и в очищенных CD8 + T-клетках (фиг. 156C) после их обработки в течение 24 часов препаратом XENP20818 или XmAb24306 при их концентрациях ЕС50 по сравнению с необработанными образцами.
На фиг. 157А – фиг. 157C показано кратное изменение в экспрессии генов в цельных МКПК (фиг. 157A), в очищенных NK-клетках (фиг. 157B) и в очищенных CD8 + Т-клетках (фиг. 157C) после их обработки в течение 48 часов препаратом XENP20818 или XmAb24306 при их концентрациях ЕС50 по сравнению с необработанными образцами.
На фиг. 158A – фиг. 159B показано кратное изменение в экспрессии генов в цельных МКПК после их обработки в течение 48 часов препаратом XmAb24306 или ИЛ-15 (фиг. 158A) и препаратом XmAb24306 или ИЛ-2 (фиг. 158B) при их концентрациях ЕС50 по сравнению с необработанными образцами.
На фиг. 159A – фиг. 159B показана пролиферация отвечающих CD8+ (фиг. 159A) и CD4+ (фиг. 159B) Т-клеток в присутствии XmAb24306 и различных концентраций Treg-клеток, размноженных с помощью рапамицина.
На фиг. 160 показаны последовательности для XENP16432 – бивалентного мАт против PD-1 с абляционным вариантом (E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, «IgG1_PVA_/S267k»). Области CDR подчеркнуты. Как отмечено в данном документе и верно для каждой последовательности из данного документа, содержащей области CDR, точная идентификация местоположений CDR может немного отличаться в зависимости от используемой системы нумерации, как продемонстрировано в таблице 1, и, таким образом, в данный документ включены не только подчеркнутые области CDR, но также области CDR, содержащиеся в доменах VH и VL при использовании других систем нумерации. Кроме того, каждая из областей CDR имеет свой собственный номер SEQ ID NO: или идентификатор последовательности в списке последовательностей, и каждый домен VH и VL имеет свой собственный номер SEQ ID NO: или идентификатор последовательности в списке последовательностей.
На фиг. 161А – фиг. 161B представлены CD8 + Т-клетки из цельной крови мышей на 6-е сутки (фиг. 161A) и на 10-е сутки (фиг. 161B) после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 162А – фиг. 162B представлены CD4 + Т-клетки из цельной крови мышей на 6-е сутки (фиг. 162A) и на 10-е сутки (фиг. 162B) после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 163А – фиг. 163B представлены CD45 + Т-клетки из цельной крови мышей на 6-е сутки (фиг. 163A) и на 10-е сутки (фиг. 163B) после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 164А – фиг. 164B представлены NK-клетки из цельной крови мышей на 6-е сутки (фиг. 164A) и на 10-е сутки (фиг. 164B) после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 165 показан уровень ИФН-γ в сыворотке крови мышей NSG на 7-е сутки после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 166A – фиг. 166D показана масса тела мышей на 7-е сутки (фиг. 166A), 11-е сутки (фиг. 166B), 14-е сутки (фиг. 166C) и 18-е сутки (фиг. 166D) после введения первой дозы указанных исследуемых препаратов.
На фиг. 167 показано процентное содержание указанных популяций лимфоцитов, экспрессирующих Ki67, после инкубации с препаратом XENP20818.
На фиг. 168 показаны уровни фосфорилирования STAT5 на CD8 + CD45RA + Т-клетках после инкубации с препаратами XENP20818, XENP22821, XENP24050 и XENP24306.
На фиг. 169 показаны уровни фосфорилирования STAT5 на CD8+ CD45RA+ Т-клетках после инкубации с препаратами XENP20818, XENP22819, XENP22821 и XENP22834.
На фиг. 170 показано процентное содержание CD8+ CD45RA- Т-клеток, экспрессирующих Ki67, с течением времени после инкубации с препаратом XENP20818 или XENP24306 при их соответствующих концентрациях EC50.
На фиг. 171 показана экспрессия BCL2 на CD8 + CD45RA - Т-клетках с течением времени после инкубации с препаратом XENP20818 или XENP24306 при их соответствующих концентрациях EC50.
На фиг. 172 показана экспрессия CD25 на CD8 + CD45RA - Т-клетках с течением времени после инкубации с препаратом XENP20818 или XENP24306 при их соответствующих концентрациях EC50.
На фиг. 173 показаны уровни фосфорилирования STAT5 на CD8 + Т-клетках в свежих и стимулированных МКПК человека после инкубации с препаратом XENP24045 или XENP20818.
На фиг. 174 показано процентное содержание пролиферирующих клеток CD8 + CD45RA - (что определено с помощью метода разведения КФСЭ (англ. «CFSE») после инкубации МКПК человека с указанной дозой XENP24306 и указанной дозой связанного с планшетом антитела против CD3 (OKT3).
На фиг. 175 показана концентрация ИФН-γ в сыворотке крови мышей NSG с привитыми челМКПК на 10-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 176 показано количество клеток CD45 + в крови мышей NSG с привитыми челМКПК на 17-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 177 показана масса тела (в процентах от начальной массы тела) мышей NSG с привитыми челМКПК на 25-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 178 показана концентрация ИФН-γ в сыворотке крови мышей NSG с привитыми челМКПК на 7-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 179A, фиг. 179B, фиг. 179C и фиг. 179D представлены: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + Т-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток в крови мышей NSG с привитыми челМКПК на 10-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 180 показана масса тела (в процентах от начальной массы тела) мышей NSG с привитыми челМКПК на 11-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 181 показано изменение массы тела с течением времени (в процентах от начальной массы тела) мышей NSG с привитыми челМКПК после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 182 показано число CD45 + клеток на 21-е сутки у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF7 и челМКПК, после первого введения XENP16432 и (или) XENP24045.
На фиг. 183 показан объем опухоли на 31-е сутки у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF7 и челМКПК, после первого введения XENP16432 и (или) XENP24045.
На фиг. 184 показан объем опухоли с течением времени (после прививания челМКПК) у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF7 и челМКПК (1,5 x 106), после первого введения XENP16432 и (или) XENP24045.
На фиг. 185 показан объем опухоли с течением времени (после прививания челМКПК) у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF7 и челМКПК (5 x 106), после первого введения XENP16432 и (или) XENP24045.
На фиг. 186 представлены последовательности препарата XENP21993 – слитого белка оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащего ИЛ-15 дикого типа. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фигурах данного документа), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и константными областями/ областями Fc.
На фиг. 187 представлены последовательности XENP22853 – слитого белка ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, содержащего ИЛ-15 дикого типа и вариант Fc с Xtend (M428L/N434S). ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фигурах данного документа), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и константными областями/ областями Fc.
На фиг. 188 представлены последовательности XENP24294 – слитого белка оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащего вариант ИЛ-15 (N4D/N65D) и замену Xtend в Fc (M428L/N434S). ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фигурах данного документа), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и константными областями/ областями Fc.
На фиг. 189 показана концентрация указанных исследуемых препаратов в сыворотке крови яванских макак с течением времени после введения первой дозы в указанных относительных концентрациях.
На фиг. 190 показаны относительные концентрации препарата XENP22853 и соответствующего препарата ДТ XENP20818 без Xtend в сыворотке крови с течением времени.
На фиг. 191 представлены последовательности иллюстративных вариантов ИЛ-15, сконструированных для снижения активности и содержащих замену D30N. В каждую из этих вариантных последовательностей ИЛ-15 входят последовательности, которые на 90%, на 95%, на 98% и на 99% идентичны (как определено в данном документе) указанным последовательностям и (или) содержат от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дополнительных аминокислотных замен. В неограничивающем примере указанные последовательности могут содержать дополнительные аминокислотные модификации, такие как те, которые вносят вклад в образование ковалентных дисульфидных связей, как описано в Примере 2.
На фиг. 192A – фиг. 192C показаны иллюстративные слитые белки оцИЛ-15/Рα – Fc, которые содержат варианты ИЛ-15, содержащие замену D30N. ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) подчеркнуты одинарной линией, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых изображены на фигурах данного документа), а косая черта (/) обозначает границу (границы) между ИЛ-15, ИЛ-15Рα, линкерами и константными областями/ областями Fc.
На фиг. 193A, фиг. 193B, фиг. 193C, фиг. 193D, фиг. 193E, фиг. 193F и фиг. 193G показано процентное содержание A) CD4+ CD45RA- клеток, B) CD4+ CD45RA+ клеток, C) CD8+ CD45RA- клеток, D) CD8+ CD45RA+ клеток, E) CD16+ NK-клеток, F) CD56+ NK-клеток и G) γδ-клеток, экспрессирующих Ki67, после инкубации с указанными исследуемыми препаратами.
На фиг. 194A, фиг. 194B, фиг. 194C, фиг. 194D и фиг. 194E показано, что механистическая модель ФК/RO/TMDD отображает относительные фармакодинамические (ФД) эффекты, как описано в Примере 18. Примечательно, что предсказанные значения RO-ППК очень хорошо коррелируют с экспериментально определенной ФД-ППК (фармакодинамическая ППК), указывая на то, что RO-ППК является целевым значением для оптимизации, позволяющим прогнозировать оптимальное значение параметра Kd.
На фиг. 195 представлена схема, иллюстрирующая гипотезу о том, что опосредованная рецептором интернализация является ключевым фактором, влияющим на отношения ФК/ФД различных интерлейкинов-15. kпролиф обозначает скорость клеточной пролиферации. kгибельЦТК обозначает скорость гибели клеток. Kd обозначает константу диссоциации. kэл обозначает скорость элиминации. kинфузии обозначает скорость инфузии в центральный кровоток. kсин обозначает скорость синтеза рецепторов к ИЛ-15. kдег обозначает скорость деградации рецепторов к ИЛ-15.
На фиг. 196 показано наложение фармакокинетических (ФК) данных из нескольких исследований на яванских макаках, которые были вводными данными для моделирований на основе модели, изображенной на фиг. 195.
На фиг. 197 показано, что расчетные значения KD на основе модели, изображенной на фиг. 1, линейно коррелируют с экспериментально измеренными значениями ЕС50 для связывания.
На фиг. 198 показаны смоделированные профили ФК, кривые занятости рецепторов (RO) и фармакодинамические профили на основе модели, изображенной на фиг. 195. Модель демонстрирует, что пониженная активность продлевает экспозицию, и что существует оптимальная KD для максимальной фармакодинамики (т.е. размножения Т-клеток).
На фиг. 199A – фиг. 199F показана корреляция между: A) предсказанными значениями RO-ППК и экспериментально определенными значениями ФД-ППК (фармакодинамической ППК), B) предсказанными значениями RO-ППК и экспериментально определенными значениями ФД-Макс (максимальное количество CD8+ T-клеток), C) предсказанными значениями RO-ППК и экспериментально определенным значениями АЛЬБ-мин (надирная концентрация сывороточного альбумина), D) предсказанными значениями RO-Макс (максимальная занятость рецепторов) и экспериментально определенным значениями ФД-ППК, E) предсказанными значениями RO-Макс и экспериментально определенным значениями ФД-Макс, и F) предсказанными значениями RO-Макс с экспериментально определенным значениями АЛЬБ-мин. Примечательно, что предсказанные значения RO-ППК очень хорошо коррелируют с экспериментально определенными значениями ФД-ППК и ФД-макс, в то время как предсказанные значения RO-Макс очень хорошо коррелируют с экспериментально определенным значениями АЛЬБ-мин.
На фиг. 200 представлены смоделированные кривые (которые основаны на модели, изображенной на фиг. 195) относительно различных значений KD, выполненные для версий белка слияния ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с Xtend или без Xtend, и показывающие, что предсказанное оптимальное значение KD составляет примерно 200 нМ, что аналогично измеренному значению KD для XmAb24306.
На фиг. 201A и фиг. 201B показаны: A) число CD8+ T-клеток человека и B) экспрессия CD25 на CD8+ T-клетках человека у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF7 и челМКПК, и которым вводили препарат XENP16432 и (или) XENP24045. *** обозначает p ≤ 0,001, а ** обозначает p ≤ 0,01, что было определено по непарному t-критерию. Было обнаружено, что воздействие комбинацией препарата XENP24045 и моноклональным антителом против PD-1 значительно усиливало размножение CD8+ Т-клеток в более поздние дни, и индуцировало более раннюю активацию CD8+ Т-клеток.
На фиг. 202A – фиг. 202C представлено размножение: A) CD8+ T-клеток, B) CD16+ NK-клеток и C) лимфоцитов у яванских макак после введения им препарата XENP20818 в дозе 0,3X, препарата XmAb24306 в дозе 0,3X и препарата XmAb24306 в дозе 0,6X. Эти данные демонстрируют улучшенную фармакодинамику, обеспечиваемую препаратом XmAb24306 пониженной активности.
На фиг. 203 показано процентное изменение альбумина в сыворотке крови (как индикатор выпотевания жидкости через сосуды) у яванских макак после введения им препарата XENP20818 в дозе 0,3X, препарата XmAb24306 в дозе 0,3X и препарата XmAb24306 в дозе 0,6X. Эти данные указывают на улучшенную переносимость (на что указывает снижение уровня альбумина), обусловленную препаратом XmAb24306 пониженной активности.
На фиг. 204A – фиг. 204F показано: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + T-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток, E) число CD16 + CD56 + NK-клеток и F) соотношение CD4 и CD8 в крови мышей NSG, которым были привиты челМКПК, на 7-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 205A – фиг. 205F показано: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + T-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток, E) число CD16 + CD56 + NK-клеток и F) соотношение CD4 и CD8 в крови мышей NSG, которым были привиты челМКПК, на 14-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. Эти данные демонстрируют, что на 14-е сутки воздействие комбинацией препарата XENP24306 в дозе 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг и препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг значительно усиливало размножение CD3+ Т-клеток по сравнению с воздействием одного только препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг (статистический анализ был проведен с данными, которые были подвергнуты логарифмической трансформации, с использованием непарного t-критерия).
На фиг. 206A – фиг. 206F показано: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + T-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток, E) число CD16 + CD56 + NK-клеток и F) соотношение CD4 и CD8 в крови мышей NSG, которым были привиты челМКПК, на 21-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 207A – фиг. 207I показано изменение массы тела (как индикатора БТПХ) у мышей NSG, которым были привиты челМКПК, A) на 3-е сутки, B) на 6-е сутки, C) на 10-е сутки, D) на 13-е сутки, E) на 17-е сутки, F) на 20-е сутки, G) на 25-е сутки, H) на 28-е сутки и I) на 29-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. Эти данные демонстрируют, что на 10-е сутки воздействие комбинацией препарата XENP24306 в дозе 0,3 мг/кг, 0,1 мг/кг или 0,01 мг/кг и препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг значительно усиливало БТПХ по сравнению с воздействием одного только препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг (статистический анализ был проведен с использованием непарного t-критерия).
На фиг. 208 показано изменение массы тела (как индикатора БТПХ) у мышей NSG, которым были привиты челМКПК, с течением времени после введения исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 209A – фиг. 209C показана концентрация ИФН-γ в сыворотке крови у мышей NSG, которым были привиты челМКПК, A) на 7-е сутки, B) на 14-е сутки и C) на 21-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях.
На фиг. 210A – фиг. 210F показано: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + T-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток, E) число CD16 + CD56 + NK-клеток и F) соотношение CD4 и CD8 в крови мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF-7 и челМКПК, на 14-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. * обозначает p <0,05, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной ФСБ; † обозначает p <0,04, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной XENP16432. Перед статистическим анализом данные были подвергнуты логарифмической трансформации. Эти данные демонстрируют, что на 14-е сутки в каждой из групп, получавших только XENP24306 или XENP24306 в комбинации с XENP16432, значительно усиливалось размножение лимфоцитов после выше того уровня, который был вызван обработкой ФСБ. Примечательно, что на 14-е сутки каждая из групп, получавших комбинацию препарата XENP24306 с препаратом XENP16432, независимо от концентрации препарата XENP24306, а также более высокие концентрации одного только препарата XENP24306, значительно усиливали размножение лимфоцитов по сравнению с обработкой одним только препаратом XENP16432.
На фиг. 211A – фиг. 211F показано: A) число CD45 + клеток, B) число CD3 + T-клеток, C) число CD4 + T-клеток, D) число CD8 + T-клеток, E) число CD16 + CD56 + NK-клеток и F) соотношение CD4 и CD8 в крови мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF-7 и челМКПК, на 21-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. * обозначает p <0,05, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной ФСБ; † обозначает p <0,04, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной XENP16432. Перед статистическим анализом данные были подвергнуты логарифмической трансформации.
На фиг. 212A – фиг. 212I показано изменение объема опухоли (скорректированного относительно базового уровня) у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF-7 и челМКПК, A) на 4-е сутки, B) на 6-е сутки, C) на 8-е сутки, D) на 11-е сутки, E) на 13-е сутки, F) на 15-е сутки, G) на 19-е сутки, H) на 22-е сутки и I) на 25-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. Эти данные демонстрируют, что на 11-е сутки воздействие комбинацией препарата XENP24306 в дозе 1,0 мг/кг, 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг и препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг значительно уменьшало объем опухоли по сравнению с воздействием одного только препарата XENP16432 (статистический анализ был проведен с использованием непарного t-критерия на измерениях опухоли, скорректированных относительно базового уровня).
На фиг. 213A – фиг. 213B показаны A) изменение объема опухоли и B) изменение массы тела (как индикатор БТПХ) мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF-7 и челМКПК, с течением времени после введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. Эти данные демонстрируют, что, хотя все мыши в группах C, F и G были мертвы, это соответствовало БТПХ (на что указывает изменение массы тела).
На фиг. 214A – фиг. 214C показана концентрация ИФН-γ в сыворотке крови у мышей NSG, которым были привиты клетки pp65-MCF-7 и челМКПК, A) на 7-е сутки, B) на 14-е сутки и C) на 21-е сутки после первого введения указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях. * обозначает p <0,05, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной ФСБ; † обозначает p <0,04, непарный t-критерий, указанная группа по сравнению с группой, обработанной XENP16432. Перед статистическим анализом данные были подвергнуты логарифмической трансформации. Эти данные демонстрируют, что на 7-е сутки обработка комбинацией 1,0 мг/кг, 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг препарата XENP24306 и 3 мг/кг препарата XENP16432 значительно усиливала секрецию ИФН-γ по сравнению с введением одного только препарата XENP16432.
Подробное описание сущности изобретения
Определения
С целью более полного понимания данной заявки, ниже приведены несколько определений. Такие определения предназначены для охвата грамматических эквивалентов.
Под термином «абляция» в данном документе подразумевается снижение или устранение способности к связыванию и (или) активности. Так, например, «абляция связывания FcγR» означает, что аминокислотный вариант области Fc характеризуется менее чем 50% начального связывания по сравнению с областью Fc, не содержащей специфического варианта, с потерей менее чем 70%, менее чем 80%, менее чем 90%, менее чем 95%, менее чем 98% способности к связыванию, что является предпочтительным, и, как правило, со способности к связыванию, которая ниже уровня детектируемого связывания в анализе Biacore. Особенно применимыми при абляции связывания FcγR являются те варианты, которые показаны на фиг. 5. Однако, если не указано иное, мономеры Fc согласно данному изобретению сохраняют способность к связыванию с FcRn.
Под термином «АЗКЦ» (англ. «ADCC»), или «антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность», используемым в данном документе, подразумевается клеточно-опосредованная реакция, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на клетке-мишени и впоследствии вызывают лизис этой клетки-мишени. АЗКЦ коррелирует со связыванием области Fc с FcγRIIIa; усиление связывания с FcγRIIIa приводит к увеличению в активности АЗКЦ. Как обсуждается в данном документе, многие варианты осуществления данного изобретения приводят к полному устранению активности АЗКЦ.
Под термином «АЗКФ» (англ. «ADCP»), или «антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз», используемым в данном документе, подразумевается клеточно-опосредованная реакция, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на клетке-мишени и впоследствии вызывают фагоцитоз этой клетки-мишени.
Под термином «модификация», используемым в данном документе, подразумевается аминокислотная замена, вставка и (или) делеция в полипептидной последовательности или изменение фрагмента, химически связанного с белком. Например, модификация может представлять собой измененную углеводную или ПЭГ-структуру, присоединенную к белку. Под термином «аминокислотная модификация», используемым в данном документе, подразумевается аминокислотная замена, вставка и (или) делеция в полипептидной последовательности. Для ясности, если не указано иное, аминокислотная модификация всегда относится к аминокислоте, кодируемой ДНК, например, к 20 аминокислотам, которые имеют кодоны в ДНК и РНК.
Под термином «аминокислотная замена» или «замена», используемым в данном документе, подразумевается замена аминокислоты в конкретном положении в родительской полипептидной последовательности другой аминокислотой. В частности, в некоторых вариантах реализации данного изобретения замена представляет собой аминокислоту, которая не встречается в природе в конкретном положении, либо не встречается в природе в организме, либо в любом организме. Например, замена E272Y или 272Y относится к вариантному полипептиду, в данном случае к Fc варианту, в котором глутаминовая кислота в положении 272 заменен тирозином. Для ясности, белок, который был сконструирован для изменения последовательности, кодирующей нуклеиновую кислоту, но не для замены исходной аминокислоты (например, обмен триплета CGG (кодирующего аргинин) на CGA (все еще кодирующего аргинин) для повышения уровня экспрессии в организме хозяина), не является «аминокислотной заменой»; то есть, несмотря на создание нового гена, кодирующего тот же белок, если белок имеет ту же аминокислоту в конкретном положении, с которой он был первоначально, это не является аминокислотной заменой. Замены могут включать встречающиеся в природе аминокислоты и, в некоторых случаях, синтетические аминокислоты. Примеры включают патентные публикации США № 6586207; WO 98/48032; WO 03/073238; US2004-0214988A1; WO 05/35727A2; WO 05/74524A2; J. W. Chin et al., (2002), Journal of the American Chemical Society 124: 9026 – 9027; J. W. Chin, & P. G. Schultz, (2002), ChemBioChem 11: 1135 – 1137; J. W. Chin, et al., (2002), PICAS United States of America 99: 11020 – 11024; and, L. Wang, & P. G. Schultz, (2002), Chem. 1 – 10, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Под термином «вставка аминокислоты» или «вставка», используемым в данном документ, подразумевается добавление аминокислотного остатка или аминокислотной последовательности в конкретном положении в последовательности родительского полипептида. Например, -233E обозначает вставку глутаминовой кислоты после положения 233 и перед положением 234. Кроме того, -233ADE или A233ADE обозначает вставку AlaAspGlu после положения 233 и перед положением 234.
Под термином «делеция аминокислоты» или «делеция», используемым в данном документе, подразумевается удаление аминокислотного остатка или аминокислотной последовательности в конкретном положении в последовательности родительского полипептида. Например, E233- или E233#, E233() или E233del обозначает делецию глутаминовой кислоты в положении 233. Кроме того, EDA233- или EDA233# обозначает делецию последовательности GluAspAla, которая начинается с положения 233.
Под термином «вариантный белок», или «вариант белка», или «вариант», используемым в данном документе, подразумевается белок, который отличается от родительского белка, по меньшей мере, модификацией одной аминокислоты. Вариант белка может относиться к самому белку, композиции, содержащей указанный белок, к аминокислотной последовательности, которая его кодирует, либо последовательности ДНК или нуклеиновой кислоты, которая его кодирует. Предпочтительно, вариант белка имеет, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию по сравнению с родительским белком, например, от около одной до около семидесяти аминокислотных модификаций, и предпочтительно – от около одной до около пяти аминокислотных модификаций по сравнению с родительским белком. Модификация может заключаться в добавлении, удалении или замене. Как описано ниже, в некоторых вариантах реализации данного изобретения родительский полипептид, например, родительский полипептид Fc, представляет собой последовательность дикого типа человека, такую как область Fc из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, несмотря на то, что последовательности человека с вариантами также могут служить в качестве «родительских полипептидов», и примером может служить гибрид IgG1/2. Вариант последовательности белка в данном документе предпочтительно будет обладать, по меньшей мере, около 80% идентичностью с последовательностью родительского белка, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, около 90% идентичностью, более предпочтительно – по меньшей мере, около 95-98-99% идентичностью.
Соответственно, под термином «вариант антитела», или «вариантное антитело», в контексте данного документа подразумевается антитело, которое отличается от родительского антитела за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации, под термином «вариант IgG», или «вариантный IgG», в контексте данного документа подразумевается антитело, которое отличается от родительского IgG (опять же, во многих случаях от последовательности IgG человека) за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации, а под термином «вариант иммуноглобулина», или «иммуноглобулиновый вариант», в контексте данного документа подразумевается последовательность иммуноглобулина, которая отличается из последовательности родительского иммуноглобулина за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации. В контексте данного документа под термином «Fc-вариант» или «вариант по Fc» подразумевается белок, содержащий аминокислотную модификацию в домене Fc. Модификация может заключаться в добавлении, удалении или замене. Варианты Fc согласно данному изобретению определены в соответствии с аминокислотными модификациями, которые их составляют. Таким образом, например, N434S или 434S представляет собой вариант по Fc с замещенным остатком серина в положении 434 относительно родительского полипептида Fc, при этом нумерация соответствует индексу EU. Аналогично, M428L/N434S определяет вариант по Fc с заменами M428L и N434S относительно родительского полипептида Fc. Идентичность аминокислоты ДТ может быть неопределенной, и в этом случае вышеупомянутый вариант обозначается как 428L/434S. Следует отметить, что порядок, в котором представлены замены, является произвольным, т.е., к примеру, 428L/434S представляет собой тот же самый вариант по Fc, что и 434S/428L, и т.д. Для всех положений, обсуждаемых в данном изобретении, которые связаны с антителами или их производными и фрагментами, если не указано иное, нумерация аминокислотных положений соответствует индексу EU. Индекс EU, или EU-индекс, как по Кабату, или схема нумерации EU, относится к системе нумерации антител EU (Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63: 78 – 85, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Модификация может заключаться в добавлении, удалении или замене. Замены могут включать встречающиеся в природе аминокислоты и, в некоторых случаях, синтетические аминокислоты.
Под термином «белок», используемым в данном документе, подразумевается по меньшей мере две ковалентно связанные аминокислоты, при этом указанный термин включает белки, полипептиды, олигопептиды и пептиды. Пептидильная группа может содержать встречающиеся в природе аминокислоты и пептидные связи, или синтетические пептидомиметические структуры, то есть «аналоги», такие как пептоиды (см. Simon et al., PNAS USA 89 (20): 9367 (1992), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Аминокислоты могут быть либо встречающимися в природе, либо синтетическими (например, не быть аминокислотой, которая кодируется ДНК); что будет понятно специалистами в данной области техники. Например, для целей данного изобретения, гомофенилаланин, цитруллин, орнитин и норлейцин считаются синтетическими аминокислотами, а также могут применяться как D-, так и L- (R или S) сконфигурированные аминокислоты. Варианты данного изобретения могут содержать модификации, что включает применение синтетических аминокислот, встроенных с помощью, например, технологий, разработанных Schultz с коллегами, включая, но не ограничиваясь ими, способы, описанные в Cropp & Shultz, 2004, Trends Genet. 20 (12): 625-30, Anderson et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA 101 (2): 7566 – 71, Zhang et al., 2003, 303 (5656): 371 – 3 и Chin et al., 2003, Science 301 (5635): 964 – 7, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Кроме того, полипептиды могут включать синтетическую дериватизацию одной или большего количества боковых цепей или концов, гликозилирование, пегилирование, циклическую перестановку, циклизацию, связи с другими молекулами, слияние с белками или белковыми доменами и добавление пептидных тегов или меток. В тех случаях, когда биологически функциональная молекула включает два белка или более, каждый белок может называться «мономером», «субъединицей» или «доменом»; а биологически функциональная молекула может называться «комплексом».
Под термином «остаток», используемым в данном документе, подразумевается положение в белке и ассоциированную с ним идентичность аминокислот. Например, аспарагин 297 (также называемый Asn297 или N297) представляет собой остаток в положении 297 антитела IgG1 человека.
Под термином «модификация подкласса IgG» или «модификация изотипа», используемым в контексте данного документа, подразумевается аминокислотная модификация, которая превращает одну аминокислоту из одного изотипа IgG в соответствующую аминокислоту в другом, выровненном изотипе IgG. Например, поскольку IgG1 содержит тирозин, а IgG2 содержит фенилаланин в EU положении 296, замена F296Y в IgG2 считается модификацией подкласса IgG.
Под термином «не встречающаяся в природе модификация», используемым в контексте данного документа, подразумевается аминокислотная модификация, которая не является изотипической. Например, поскольку ни один из IgG не содержит серин в положении 434, замена 434S в IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 (или в их гибридах) считается не встречающейся в природе модификацией.
Под термином «аминокислота» и «идентичность аминокислоты», используемым в контексте данного документа, подразумевается одна из 20 встречающихся в природе аминокислот, которые кодируются ДНК и РНК.
Под термином «эффекторная функция», используемым в контексте данного документа, подразумевается биохимическое явление, которое возникает в результате взаимодействия области Fc антитела с рецептором Fc или лигандом Fc. Эффекторные функции включают АЗКЦ, АЗКФ и КЗЦ, но не ограничиваются ими.
Под термином «лиганд Fc IgG», или «лиганд Fc», используемым в контексте данного документа, подразумевается молекула, предпочтительно полипептид, из любого организма, которая связывается с областью Fc антитела IgG с образованием комплекса Fc/Fc – лиганд. Лиганды Fc включают следующие, но не ограничиваются ими: FcγRIs, FcγRIIs, FcγRIIIs, FcRn, C1q, C3, маннан-связывающий лектин, рецептор маннозы, стафилококковый белок A, стрептококковый белок G и вирусный FcγR. Лиганды Fc также включают гомологи рецепторов Fc (FcRH), представляющих собой семейство рецепторов Fc, которые являются гомологичными с FcγR (Davis et al., 2002, Immunological Reviews 190: 123 – 136; данная публикация включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Лиганды Fc могут включать неизвестные молекулы, которые связывают Fc. Конкретными лигандами Fc IgG являются FcRn и Fc гамма рецепторы.
Под термином «Fc гамма рецептор», «FcγR» или «Fc гамма Р», используемым в контексте данного документа, подразумевается любой представитель семейства белков, который связывает область Fc антитела IgG и кодируется геном FcγR. У людей это семейство включает следующие, но не ограничиваясь ими: FcγRI (CD64), в том числе изоформы FcγRIa, FcγRIb и FcγRIc; FcγRII (CD32), в том числе изоформы FcγRIIa (в том числе аллотипы H131 и R131), FcγRIIb (в том числе FcγRIIb-1 и FcγRIIb-2) и FcγRIIc; и FcγRIII (CD16), в том числе изоформы FcγRIIIa (в том числе аллотипы V158 и F158) и FcγRIIIb (в том числе аллотипы FcγRIIIb-NA1 и FcγRIIIb-NA2) (Jefferis et al., 2002, Immunol Lett 82: 57 – 65; данная публикация включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме), а также любые неизвестные изоформы или аллотипы FcγRs или FcγR человека. FcγR может происходить из любого организма, в том числе, но не ограничиваясь ими, организма людей, мышей, крыс, кроликов и обезьян. FcγR мыши включают следующие, но не ограничиваются ими: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII (CD16) и FcγRIII-2 (CD16-2), а также любые неизвестные изоформы или аллотипы FcγR или FcγR мыши.
Под термином «FcRn» или «неонатальный рецептор Fc», используемым в контексте данного документа, подразумевается белок, который связывает область Fc антитела IgG и кодируется, по меньшей мере, отчасти, геном FcRn. FcRn может происходить из любого организма, в том числе, но не ограничиваясь ими, людей, мышей, крыс, кроликов и обезьян. Как известно в данной области техники, функциональный белок FcRn включает в себя два полипептида, часто обозначаемых как тяжелая цепь и легкая цепь. Легкая цепь представляет собой бета-2-микроглобулин (β2-микроглобулин), а тяжелая цепь кодируется геном FcRn. Если в данном документе не указано иное, FcRn или белок FcRn относится к комплексу тяжелой цепи FcRn с β2-микроглобулином. Для усиления связывания с FcRn и, в некоторых случаях, для увеличения периода полужизни в сыворотке, могут использоваться различные варианты Fc. В общем, если не указано иное, мономеры Fc согласно данному изобретению сохраняют способность к связыванию с FcRn (и, как указано ниже, могут включать варианты аминокислот для усиления связывания с FcRn).
Под термином «родительский полипептид», используемым в контексте данного документа, подразумевается исходный полипептид, который впоследствии модифицируют для получения варианта. Родительский полипептид может представлять собой встречающийся в природе полипептид или вариант, или сконструированный вариант встречающегося в природе полипептида. Родительский полипептид может относиться к самому полипептиду, композициям, которые содержат родительский полипептид, или к аминокислотной последовательности, которая его кодирует. Соответственно, под термином «родительский иммуноглобулин» в контексте данного документа подразумевается немодифицированный полипептид иммуноглобулина, который модифицирован для получения варианта, а под термином «родительское антитело» в контексте данного документа подразумевается немодифицированное антитело, которое модифицировано для получения варианта антитела. Следует отметить, что термин «родительское антитело» включает в себя известные коммерческие, рекомбинантно продуцируемые антитела, как указано ниже.
Под термином «Fc», «областью Fc» или «доменом Fc», используемым в контексте данного документа, подразумевается полипептид, содержащий константную область антитела, в некоторых случаях за исключением всего или части первого иммуноглобулинового домена константной области (например, CH1) или его часть, а в некоторых случаях – дополнительно исключая весь шарнир или его часть. Таким образом, Fc относится к двум последним константным областям иммуноглобулиновых доменов (например, CH2 и CH3) IgA, IgD и IgG, к трем последним константным областям иммуноглобулиновых доменов IgE и IgM, и, необязательно, ко всему гибкому шарнирному N-концу этих доменов или к его части. В IgA и IgM Fc может включать J-цепь. В IgG домен Fc включает иммуноглобулиновые домены CH2 и CH3 (Cγ2 и Cγ3), а также нижнюю шарнирную область между CH1 (Cγ1) и CH2 (Cγ2). Несмотря на то, что границы области Fc могут варьировать, фрагмент Fc тяжелой цепи IgG человека обычно определяется как включающий остатки E216, C226 или A231 к его карбоксильному концу, при этом нумерация соответствует индексу EU, как по Кабату. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, что более полно описано ниже, модификации аминокислот осуществляются в области Fc, например, для изменения связывания с одним или большим количеством рецепторов FcγR или с рецептором FcRn.
Как будет понятно специалистам в данной области техники, точная нумерация и размещение доменов тяжелых константных областей могут отличаться в разных системах нумерации. Полезное сравнение нумерации тяжелых константных областей в соответствии с EU и по Кабату приведено ниже, см. Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63: 78 – 85, и Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, которые включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Таблица 1
Под термином «слитый белок», используемым в контексте данного документа, подразумевается ковалентное соединение по меньшей мере двух белков. Слитые белки могут содержать искусственные последовательности, например, доменный линкер, как описано в данном документе. Под термином «слитый белок Fc», или «иммуноадгезин», используемым в контексте данного документа, подразумевается белок, содержащий область Fc, обычно связанную (необязательно – через доменный линкер, как описано в данном документе) с одним или несколькими различными белками, такими как ИЛ-15 и (или) ИЛ-15Р, как описано в данном документе. В некоторых случаях два слитых белка Fc могут образовывать гомодимерный слитый белок Fc или гетеродимерный слитый белок Fc, причем последний является предпочтительным. В некоторых случаях один мономер гетеродимерного слитого белка Fc содержит только домен Fc (например, пустой домен Fc), а другой мономер представляет собой слитый домен Fc, содержащий вариантный домен Fc и белковый домен, такой как рецептор, лиганд или другой партнер по связыванию.
Под термином «положение», используемым в контексте данного документа, подразумевается местоположение в последовательности белка. Положения могут быть пронумерованы последовательно или в соответствии с установленным форматом, например, индексом EU для нумерации антител.
Под «наличием цепей» в контексте мономеров гетеродимерных белков согласно данному изобретению в данном документе подразумевается, что, подобно двум цепям ДНК, которые «совпадают», гетеродимеризационные варианты включены в каждый мономер с целью сохранения, создания и (или) усиления способности «совпадать» с образованием гетеродимеров. Например, если некоторые варианты по pI сконструированы в мономер A (например, делая pI выше), тогда стерические варианты, которые представляют собой «пары зарядов», которые также могут использоваться, не влияют на варианты по pI, например, варианты зарядов, которые делают pI выше, помещаются в одну и ту же «цепь» или «мономер» с тем, чтобы сохранить обе функциональные возможности. Аналогично, для «искаженных» вариантов, которые входят в пары совокупности, как более подробно изложено ниже, специалист в данной области техники будет учитывать pI при принятии решения, в какую цепь или мономер, которые включают одну совокупность пары, направляться с тем, чтобы сделать разделение по pI максимальным также с использованием рI искаженных вариантов.
Под термином «дикий тип», или «ДТ», используемым в контексте данного документа, подразумевается аминокислотная последовательность или нуклеотидная последовательность, которая встречается в природе, в том числе аллельные вариации. Белок ДТ имеет аминокислотную последовательность или нуклеотидную последовательность, которая не была намеренно модифицирована.
Гетеродимерные белки согласно данному изобретению обычно являются выделенными или рекомбинантными. Термин «выделенный», при применении его для описания различных полипептидов, раскрытых в данном документе, означает полипептид, который был идентифицирован и отделен и (или) извлечен из клетки или клеточной культуры, из которой он был экспрессирован. Обычно выделенный полипептид будет получен, по меньшей мере, в результате одного этапа очистки. Под термином «изолированный белок», используемым в контексте данного документа, подразумевается белок, который по существу не содержит других белков из клеточной культуры, например, таких, как белки клетки-хозяина. Термином «рекомбинантный», используемый в контексте данного документа, означает, что белки получают с помощью методик рекомбинантных нуклеиновых кислот в экзогенных клетках-хозяевах.
«Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» по отношению к последовательности белка определяется в виде процента аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной (родительской) последовательности после выравнивания последовательностей и введения гэпов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности, и без учета каких-либо консервативных замен в виде части идентичности последовательности. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые известны специалисту в данной области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для измерения выравнивания, в том числе любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине последовательностей, которые подлежат сравнению. Одной из конкретных программ является программа ALIGN-2, описанная в параграфах с [0279] по [0280] публикации США № 20160244525, включенная в данный документе посредством ссылки.
Степень идентичности между аминокислотной последовательностью согласно данному изобретению («последовательность согласно данному изобретению») и родительской аминокислотной последовательностью рассчитывают в виде количества точных совпадений в выравнивании двух последовательностей, деленное на длину «последовательности согласно данному изобретению» или длину родительской последовательности, в зависимости от того, какая из них является самой короткой. Полученный результат выражается в проценте идентичности.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения две или более аминокислотных последовательности являются, по меньшей мере, на 50%, на 60%, на 70%, на 80% или на 90% идентичными. В некоторых вариантах реализации данного изобретения две или более аминокислотных последовательности являются, по меньшей мере, на 95%, на 97%, на 98%, на 99% или даже на 100% идентичными.
Под термином «антигенсвязывающий домен», или «АСД» (англ. «ABD»), используемым в контексте данного документа, подразумевается часть антигенсвязывающей молекулы, которая придает молекуле свою специфичность связывания с антигенной детерминантой.
Под термином «антигенсвязывающая молекула», используемым в контексте данного документа, подразумевается в самом широком смысле любая молекула, которая специфически связывается с антигенной детерминантой. Антигенсвязывающая молекула может представлять собой белок, углевод, липид или другое химическое соединение. Примерами антигенсвязывающих молекул являются иммуноглобулин и его производные или фрагменты, например, Fab и scFv. Дополнительными примерами антигенсвязывающих молекул являются рецепторы и лиганды.
Под термином «специфическое связывание», или «специфически связывается», или «специфично для» конкретного антигена или эпитопа подразумевается связывание, которое измеримо отличается от неспецифического взаимодействия. Специфическое связывание может быть измерено, например, путем определения связывающей способности молекулы по сравнению со связывающей способностью контрольной молекулы, которая обычно представляет собой молекулу сходной структуры, но которая при этом не обладает связывающей способностью. Например, специфическое связывание может быть определено путем конкуренции с контрольной молекулой, которая сходна с мишенью.
Сила, или аффинность, специфического связывания может быть выражена в виде показателя константы диссоциации (KD) взаимодействия, при этом меньшая KD обозначает более высокую аффинность, а большая KD обозначает более низкую аффинность. Связывающие свойства могут быть определены методами, хорошо известными в данной области техники, такими как биослойная интерферометрия и методы на основе поверхностного плазмонного резонанса. Один из таких методов включает в себя измерение скоростей ассоциации и диссоциации комплекса антигенсвязывающий сайт – антиген или рецептор – лиганд, при этом скорости зависят от концентрации компонентов комплекса, аффинности взаимодействия и геометрических параметров, которые в равной степени влияют на скорость протекания взаимодействия в обоих направлениях. Таким образом, можно определить как скорость ассоциации (ka), так и скорость диссоциации (kd), а отношение kd/ka равно константе диссоциации KD (см., например, Nature 361: 186 – 187 (1993) и Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59: 439 – 473).
Специфическое связывание для конкретной молекулы или эпитопа может проявляться, например, в том, что антигенсвязывающая молекула имеет показатель KD для связывания антигена или эпитопа, составляющий по меньшей мере около 10-4 М, по меньшей мере около 10-5 М, по меньшей мере около 10-6 М, по меньшей мере около 10-7 М, по меньшей мере около 10-8 М, по меньшей мере около 10-9 М, в качестве альтернативного варианта – по меньшей мере около 10-10 М, по меньшей мере около 10-11 М, по меньшей мере около 10-12 М или выше. Как правило, антитело, которое специфически связывает антиген, будет иметь показатель KD, который в 20, 50, 100, 500, 1000, 5000, 10000 или более раз выше для контрольной молекулы относительно антигена или эпитопа.
Кроме того, специфическое связывание для конкретной молекулы или эпитопа может проявляться, например, в том, что антигенсвязывающая молекула имеет показатель константы ассоциации с антигеном или эпитопом ka, который в 20, 50, 100, 500, 1000, 5000, 10000 или более раз выше для эпитопа по сравнению с контролем.
Под термином «эпитоп», используемым в контексте данного документа, подразумевается детерминанта, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим доменом, например, с вариабельной областью молекулы антитела, известной как паратоп. Эпитопы представляют собой группы молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахаров, и обычно имеют специфические структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Один молекула может иметь более одного эпитопа. Эпитоп может содержать аминокислотные остатки, непосредственно участвующие в связывании (также называемые иммунодоминантным компонентом эпитопа), и другие аминокислотные остатки, которые не участвуют непосредственно в связывании, такие как аминокислотные остатки, которые эффективно блокируются специфическим антигенсвязывающим пептидом; другими словами, аминокислотный остаток находится в зоне действия специфического антигенсвязывающего пептида. Эпитопы могут иметь конформационную или линейную природу. Конформационный эпитоп продуцируется пространственно сопоставленными аминокислотами из разных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, продуцируемый соседними аминокислотными остатками в полипептидной цепи. Конформационные и неконформационные эпитопы могут различаться тем, что в присутствии денатурирующих растворителей теряется связывание с первыми, но не со вторыми эпитопами. Как правило, эпитоп включает по меньшей мере 3, а более характерно – по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Антитела, которые распознают один и тот же эпитоп, могут быть верифицированы с помощью простого иммуноанализа, демонстрирующего способность одной антигенсвязывающей молекулы блокировать связывание другой антигенсвязывающей молекулы с антигеном-мишенью, например, «бининг». Как указано ниже, данное изобретение включает не только перечисленные в данном документе антигенсвязывающие молекулы и антигенсвязывающие домены, но и те, которые конкурируют за связывание с эпитопами, связанными с перечисленными антигенсвязывающими молекулами или антигенсвязывающими доменами.
Под термином «слитый», или «ковалентно связанный», используемым в контексте данного документа, подразумевается то, что компоненты (например, ИЛ-15 и домен Fc) связаны пептидными связями либо напрямую, либо через доменные линкеры, описанные в данном документе.
Под термином «одноцепочечная», используемым в контексте данного документа, подразумевается молекула, содержащей мономеры аминокислот, линейно связанные пептидными связями.
Перед дальнейшим описанием данного изобретения следует понимать, что данное изобретение не ограничивается конкретными описанными вариантами реализации, поскольку они, конечно, могут варьировать. Также следует понимать, что используемая в данном документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов реализации данного изобретения, и не предназначена для ограничения, поскольку объем данного изобретения будет ограничиваться только прилагаемой формулой изобретения.
Антитела
Как обсуждается ниже, термин «антитело» применяется в широком смысле. Антитела, которые находят применение в данном изобретении, могут принимать ряд форматов, описанных в данном документе, включая традиционные антитела, также как и производные, фрагменты и миметики антител, описанные в данном документе и изображенные на соответствующих фигурах.
Как правило, традиционные структурные единицы антитела содержат тетрамер. Как правило, каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, а каждая пара имеет одну «легкую» (как правило, имеющую молекулярную массу около 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (как правило, имеющую молекулярную массу около 50-70 кДа). Легкие цепи человека классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Данное изобретение направлено на биспецифические антитела, которые в целом основаны на классе IgG, имеющем несколько подклассов, включая следующие, но не ограничиваясь ими: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. В целом, IgG1, IgG2 и IgG4 применяются чаще, чем IgG3. Следует отметить, что IgG1 имеет разные аллотипы с полиморфизмами в положении 356 (D или E) и в положении 358 (L или M). Последовательности, приведенные в данном документе, используют аллотип 356E/358M, однако другой аллотип также включен в данный документ. То есть любая последовательность, включающая домен Fc IgG1, включенная в данный документ, может иметь аллотип 356D/358L, заменяющий собой аллотип 356E/358M.
Кроме того, многие из представленных в данном документе антител имеют по крайней мере один из цистеинов в положении 220, замененный серином; обычно это сторона «мономера scFv» для большинства описанных в данном документе последовательностей, хотя данная замена также может находиться на стороне «мономера Fab», или на стороне и того, и другого, чтобы уменьшить образование дисульфида. В частности, в конкретных последовательностях, описанных в данном документе, один или оба указанных выше цистеина заменены (C220S).
Таким образом, под термином «изотип», используемым в контексте данного документа, подразумевается любой из подклассов иммуноглобулинов, определяемый химическими и антигенными характеристиками их константных областей. Следует понимать, что терапевтические антитела также могут содержать гибриды изотипов и (или) подклассов. Например, как продемонстрировано в публикации США № 2009/0163699, которая включена в данный документ посредством ссылки, в данном изобретении используются гибриды IgG1/G2 человека.
Гипервариабельная область обычно охватывает аминокислотные остатки примерно из аминокислотных остатков 24 – 34 (LCDR1; «L» обозначает легкую цепь), 50 – 56 (LCDR2) и 89 – 97 (LCDR3) в вариабельной области легкой цепи и примерно из аминокислотных остатков 31 – 35B (HCDR1; «H» обозначает тяжелую цепь), 50 – 65 (HCDR2) и 95 – 102 (HCDR3) в вариабельной области тяжелой цепи; Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), и (или) те остатки, которые образуют гипервариабельную петлю (например, остатки 26 – 32 (LCDR1), 50 – 52 (LCDR2) и 91 – 96 (LCDR3) в вариабельной области легкой цепи и 26 – 32 (HCDR1), 53 – 55 (HCDR2) и 96 – 101 (HCDR3) в вариабельной области тяжелой цепи; Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901 – 917. Специфические CDR согласно данному изобретению описаны ниже.
Как будет понятно специалистам в данной области техники, точная нумерация и размещение CDR могут отличаться в разных системах нумерации. Однако следует понимать, что описание последовательности вариабельной области тяжелой цепи и (или) вариабельной области легкой цепи включает в себя описание ассоциированных (присущих) CDR. Соответственно, описание каждой вариабельной области тяжелой цепи представляет собой описание vhCDR (например, vhCDR1, vhCDR2 и vhCDR3), а описание каждой вариабельной области легкой цепи представляет собой описание vlCDR (например, vlCDR1, vlCDR2 и vlCDR3). Полезное сравнение нумерации CDR приведено ниже, см. Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27 (1): 55 – 77 (2003):
Таблица 2
Чотиа
В данном описании система нумерации по Кабату обычно применяется для обозначения остатка в вариабельном домене (приблизительно, остатки 1 – 107 вариабельной области легкой цепи и остатки 1 – 113 вариабельной области тяжелой цепи), а система нумерации EU – для областей Fc (например, Kabat et al., выше (1991)).
Другим типом домена Ig тяжелой цепи является шарнирная область. Под термином «шарнир», или «шарнирная область», или «шарнирная область антитела», или «шарнирный домен», используемым в контексте данного документа, подразумевается гибкий полипептид, содержащий аминокислоты между первым и вторым константными доменами антитела. Структурно домен CH1 IgG заканчивается в EU положении 215, а домен CH2 IgG начинается с остатка в EU положении 231. Таким образом, для IgG шарнир антитела в данном документе определен как включающий положения с 216 (E216 в IgG1) по 230 (p230 в IgG1), при этом нумерация соответствует индексу EU, как по Кабату. В некоторых случаях используется «шарнирный фрагмент», который содержит меньшее число аминокислот на одном или обоих N- и C-концах шарнирного домена. Как отмечено в данном документе, варианты по pI также могут быть созданы в шарнирной области.
Легкая цепь обычно содержит два домена: вариабельный домен легкой цепи (содержащий области CDR легкой цепи и вместе с вариабельными доменами тяжелой цепи образующий область Fv) и константную область легкой цепи (часто называемую CL или Cκ).
Другой областью, представляющей интерес для дополнительных замен, описанной ниже, является область Fc.
В данном изобретении предлагается большое количество различных наборов CDR. В данном случае «полный набор CDR» включает в себя три вариабельных области CDR легкой цепи и три вариабельных области CDR тяжелой цепи, например, vlCDR1, vlCDR2, vlCDR3, vhCDR1, vhCDR2 и vhCDR3. Соответственно, они могут быть частью большего вариабельного домена легкой или тяжелой цепи. Кроме того, как более полно указано в данном документе, вариабельные домены тяжелой цепи и вариабельные домены легкой цепи могут находиться на отдельных полипептидных цепях, когда применяется тяжелая и легкая цепь (например, когда применяются фрагменты Fab), или на одной полипептидной цепи в случае последовательностей scFv.
Области CDR способствуют образованию антигенсвязывающего или, более конкретно, эпитопсвязывающего сайта антител. Термин «эпитоп» относится к детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельной области молекулы антитела, известной как паратоп. Эпитопы представляют собой группы молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахаров, и обычно имеют специфические структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Один антиген может иметь более одного эпитопа.
Эпитоп может содержать аминокислотные остатки, непосредственно участвующие в связывании (также называемые иммунодоминантным компонентом эпитопа), и другие аминокислотные остатки, которые не участвуют непосредственно в связывании, такие как аминокислотные остатки, которые эффективно блокируются специфическим антигенсвязывающим пептидом; другими словами, аминокислотный остаток находится в зоне действия специфического антигенсвязывающего пептида.
Эпитопы могут иметь конформационную или линейную природу. Конформационный эпитоп продуцируется пространственно сопоставленными аминокислотами из разных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, продуцируемый соседними аминокислотными остатками в полипептидной цепи. Конформационные и неконформационные эпитопы могут различаться тем, что в присутствии денатурирующих растворителей теряется связывание с первыми, но не со вторыми эпитопами.
Как правило, эпитоп включает по меньшей мере 3, а более характерно – по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Антитела, которые распознают один и тот же эпитоп, могут быть верифицированы с помощью простого иммуноанализа, демонстрирующего способность одного антитела блокировать связывание другого антитела с антигеном-мишенью, например, «бининг». Как указано ниже, данное изобретение включает не только перечисленные в данном документе антигенсвязывающие домены и антитела, но и те, которые конкурируют за связывание с эпитопами, связанными с перечисленными антигенсвязывающими доменами.
Таким образом, в данном изобретении предложены различные домены антител. Как описано в данном документе и известно в данной области техники, гетеродимерные антитела согласно данному изобретению содержат разные домены в тяжелой и легкой цепях, которые также могут перекрываться. Эти домены включают следующие, но не ограничиваются ими: домен Fc, домен CH1, домен CH2, домен CH3, шарнирный домен, константный домен тяжелой цепи (домен CH1 – шарнир – Fc или CH1 – шарнир – CH2 – CH3), вариабельный домен тяжелой цепи, вариабельный домен легкой цепи, константный домен легкой цепи, домены Fab и домены scFv.
Таким образом, «домен Fc» включает домен – CH2 – CH3 и, необязательно, шарнирный домен (– H – CH2 – CH3). В приведенных в данном документе вариантах реализации, когда scFv присоединяется к домену Fc, именно С-конец конструкции scFv присоединяется ко всему или части шарнира из домена Fc; например, он обычно прикрепляется к последовательности EPKS (SEQ ID NO: 292), которая является началом шарнира. Тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи и константный домен тяжелой цепи, который включает шарнирный домен Fc, необязательно с CH1, содержащий CH2 – CH3. Легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи. Область scFv содержит вариабельный домен тяжелой цепи, линкер scFv и вариабельный домен легкой цепи. В большинстве описанных в данном документе конструкций и последовательностей С-конец вариабельного домена тяжелой цепи присоединен к N-концу линкера scFv, С-конец которого присоединен к N-концу вариабельного домена легкой цепи (N – vh – линкер – vl – C), хотя этот порядок может быть изменён (N – vl – линкер – vh – C).
Некоторые варианты реализации данного изобретения содержат по меньшей мере один домен scFv, который, хотя и не встречается в природе, обычно содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, связанные вместе линкером scFv. Как указано в данном документе, хотя домен scFv обычно ориентирован от N- к С-концу в виде vh – scFv – линкер – vl, этот порядок может быть перевернут для любого из доменов scFv (или тех, которые сконструированы с использованием последовательностей vh и vl из областей Fab) в виде vl – scFv – линкер – vh, с необязательными линкерами на одном или обоих концах в зависимости от формата.
Как показано в данном документе, существует ряд подходящих линкеров (для применения в качестве доменных линкеров или линкеров scFv), которые могут быть использованы для ковалентного присоединения указанных доменов, в том числе – традиционные пептидные связи, получаемые с помощью рекомбинантных методик. В некоторых вариантах реализации данного изобретения линкерный пептид может преимущественно содержать следующие аминокислотные остатки: Gly, Ser, Ala или Thr. Линкерный пептид должен иметь длину, которая является достаточной для связывания двух молекул таким образом, чтобы они принимали правильную конформацию относительно друг друга, с целью сохранения необходимой активности. В одном варианте реализации данного изобретения линкер состоит из около 1 – 50 аминокислот в длину, предпочтительно – из около 1 – 30 аминокислот в длину. В одном варианте реализации данного изобретения можно применять линкеры от 1 до 20 аминокислот в длину, при этом в некоторых вариантах реализации данного изобретения находят применение линкеры от около 5 до около 10 аминокислот в длину. Пригодные линкеры включают в себя глицин-сериновые полимеры, в том числе, например, (GS)n (SEQ ID NO: 11), (GSGGS)n (SEQ ID NO: 12), (GGGGS)n (SEQ ID NO: 13) и (GGGS)n (SEQ IS NO: 14), где n представляет собой целое число, равное по меньшей мере единице (и, как правило, от 3 до 4), глицин-аланиновые полимеры, аланин-сериновые полимеры и другие гибкие линкеры. В альтернативном варианте могут найти применение в качестве линкеров различные непротеиновые полимеры, в том числе следующие, но не ограничиваясь ими: полиэтиленгликоль (ПЭГ), полипропиленгликоль, полиоксиалкилены или сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля.
Другие линкерные последовательности могут содержать любую последовательность любой длины из домена CL/CH1, однако не все остатки из домена CL/CH1; например, первые 5 –12 аминокислотных остатков из доменов CL/CH1. Линкеры могут быть получены из легкой цепи иммуноглобулинов, например Cκ или Cλ. Линкеры могут быть получены из тяжелых цепей иммуноглобулинов любого изотипа, в том числе, например, Cγ1, Cγ2, Cγ3, Cγ4, Cα1, Cα2, Cδ, Cε и Cμ. Линкерные последовательности также могут быть получены из других белков, таких как Ig-подобные белки (например, TCR, FcR, KIR), последовательности, происходящие из шарнирных областей, и другие природные последовательности из других белков.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения линкер представляет собой «доменный линкер», используемый для связывания вместе двух любых доменов, как указано в данном документе. Например, может использоваться доменный линкер, который присоединяет C-конец домена CH1 от Fab к N-концу от scFv, с другим необязательным доменным линкером, присоединяющим C-конец от scFv к домену CH2 (хотя во многих вариантах реализации данного изобретения в качестве доменного линкера используется шарнирная область). Несмотря на то, что может быть использован любой подходящий линкер, во многих вариантах реализации данного изобретения в качестве доменного линкера используется глицин-сериновый полимер, в том числе, например, (GS)n (SEQ IS NO: 15), (GSGGS)n (SEQ ID NO: 16), (GGGGS)n (SEQ ID NO: 17) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 18), где n представляет собой целое число, равное по меньшей мере единице (и, как правило, от 3 до 4 и до 5), а также любая пептидная последовательность, которая обеспечивает рекомбинантное присоединение двух доменов с достаточной длиной и гибкостью с тем, чтобы каждый домен сохранял свою биологическую функцию. В некоторых случаях, и если уделить внимание «наличию цепей», как изложено ниже, могут использоваться заряженные доменные линкеры, например, как в некоторых вариантах реализации данного изобретения, могут использоваться линкеры scFv.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения линкер представляет собой линкер scFv, используемый для ковалентного присоединения доменов vh и vl, как обсуждается в данном документе. Во многих случаях линкер scFv представляет собой заряженный линкер scFv.
Соответственно, данное изобретение дополнительно предусматривает заряженные линкеры scFv для облегчения разделения по pI между первым и вторым мономером. Это значит, что встраивание заряженного линкера scFv, положительного или отрицательного (или обоих, в случае скаффолдов, которые используют scFv на разных мономерах) позволяет мономеру, содержащему заряженный линкер, изменять pI без дальнейших изменений в доменах Fc. Указанные заряженные линкеры можно заменить на любые стандартные линкеры, содержащие scFv. Опять же, что будет понятно специалистам в данной области техники, заряженные линкеры scFv используются на соответствующей «цепи» или мономере в соответствии с желаемыми изменениями в pI. Например, как обсуждается в данном документе, для получения гетеродимерного антитела тройного F-формата рассчитывается исходное значение pI области Fv для каждого из желаемых антигенсвязывающих доменов, и один выбирается для получения scFv, и в зависимости от pI, выбираются либо положительный, либо отрицательный линкеры.
Заряженные доменные линкеры также могут быть использованы для усиления разделения по pI мономеров согласно данному изобретению, и, таким образом, линкеры, включенные в данный документ, могут быть использованы в любом варианте реализации данного изобретения, в котором используется линкер.
В частности, некоторые форматы антител, обычно называемые «гетеродимерными антителами», означают, что белок имеет по меньшей мере две связанные последовательности Fc, самоорганизованные в гетеродимерный домен Fc, и по меньшей мере две области Fv, будь то Fab или scFv.
I. Химерные и гуманизированные антитела
В определенных вариантах реализации данного изобретения антитела согласно данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи из конкретного гена тяжелой цепи иммуноглобулина зародышевой линии и (или) вариабельную область легкой цепи из конкретного гена легкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии. Например, такие антитела могут содержать или состоять из антитела человека, которое содержит вариабельные области тяжелой или легкой цепи, которые являются «продуктом», или «получены из», конкретной последовательности зародышевой линии. Антитело человека, которое является «продуктом», или «полученным из», последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, можно идентифицировать как таковое путем сравнения аминокислотной последовательности антитела человека с аминокислотными последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека и выбора последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, которая наиболее близка по последовательности (то есть имеет наибольший % идентичности) к последовательности антитела человека (с использованием методов, описанных в данном документе). Антитело человека, которое является «продуктом», или «полученным из», конкретной последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, может содержать аминокислотные различия по сравнению с последовательностью зародышевой линии, например, из-за встречающихся в природе соматических мутаций или преднамеренного внесения сайт-направленной мутации. Тем не менее, гуманизированное антитело, как правило, является по меньшей мере на 90% идентичным по аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии человека, и содержит аминокислотные остатки, которые идентифицируют антитело как происходящее из последовательностей человека по сравнению с аминокислотными последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии других видов (например, последовательностями зародышевой линии мыши). В определенных случаях гуманизированное антитело может быть по меньшей мере на 95%, на 96%, на 97%, на 98% или на 99%, или даже по меньшей мере на 96%, на 97%, на 98% или на 99%% идентичным по аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. Обычно гуманизированное антитело, полученное из конкретной последовательности зародышевой линии человека, будет иметь не более 10 – 20 аминокислотных отличий от аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии человека (до введения любых искаженных вариантов, вариантов по pI и абляционных вариантов, описанных в данном документе; то есть количество вариантов, как правило, невелико до введения вариантов согласно данному изобретению). В определенных случаях гуманизированное антитело может иметь не более чем 5 или даже не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем 1 аминокислотных отличий с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии (опять же, до введения любых искаженных вариантов, вариантов по pI и абляционных вариантов, описанных в данном документе; то есть количество вариантов, как правило, невелико до введения вариантов согласно данному изобретению).
В одном варианте реализации данного изобретения родительское антитело характеризуется зрелой аффинностью, как известно в данной области техники. Для гуманизации и созревания аффинности можно применять способы на основе структуры, например, как описано в USSN 11/004590. Для гуманизации и (или) созревания аффинности вариабельных областей антител можно применять способы на основе селекции, включая, но не ограничиваясь ими, способы, описанные в Wu et al., 1999, J. Mol. Biol. 294: 151 – 162; Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272 (16): 10678 – 10684; Rosok et al., 1996, J. Biol. Chem. 271 (37): 22611 – 22618; Rader et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 8910 – 8915; Krauss et al., 2003, Protein Engineering 16 (10): 753 – 759, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Другие способы гуманизации могут включать прививание только частей CDR, включая, но не ограничиваясь ими, способы, описанные в USSN 09/810510; Tan et al., 2002, J. Immunol. 169: 1119 – 1125; De Pascalis et al., 2002, J. Immunol. 169: 3076 – 3084, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
II. Гетеродимерные белки, слитые с Fc
Данное изобретение относится к гетеродимерным белкам, слитым с Fc, которые включают белковые домены ИЛ-15 и рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) в различных ориентациях. Домены Fc могут быть получены из доменов Fc IgG, например, доменов Fc IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, причем домены Fc IgG1 находят особое применение в данном изобретении.
Карбокси-концевая часть каждой цепи определяет константную область, в первую очередь ответственную за эффекторную функцию. Kabat с соавт. собрали многочисленные первичные последовательности вариабельных областей тяжелых цепей и легких цепей. На основании степени консервативности последовательностей, они классифицировали отдельные первичные последовательности на последовательности CDR и последовательности каркаса, а также составили их перечень (см. SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th edition, NIH publication, No. 91 – 3242, E.A. Kabat et al.; данная публикация включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). В данном описании система нумерации по Кабату обычно применяется для обозначения остатка в вариабельном домене (приблизительно, остатки 1 – 107 вариабельной области легкой цепи и остатки 1 – 113 вариабельной области тяжелой цепи), а система нумерации EU – для областей Fc (например, Kabat et al., выше (1991)).
В подклассе иммуноглобулинов IgG имеется несколько доменов иммуноглобулинов в тяжелой цепи. Под термином «домен иммуноглобулина (Ig)», используемым в контексте данного документа, подразумевается область иммуноглобулина, имеющая отчетливую третичную структуру. В данном изобретении представляют интерес домены тяжелой цепи, в том числе константные домены тяжелой цепи (СН) и шарнирные домены. Применительно к антителам IgG, каждый из изотипов IgG имеет три области СН. Соответственно, «CH» домены применительно к IgG являются следующими: «CH1» относится к положениям 118 – 215 в соответствии с индексом EU, как по Кабату. «Шарнир» относится к положениям 216 – 230 по индексу EU, как по Кабату. «CH2» относится к положениям 231 – 340 в соответствии с индексом EU, как по Кабату, а «CH3» относится к положениям 341 – 447 в соответствии с индексом EU, как по Кабату. Как продемонстрировано в таблице 1, точная нумерация и размещение доменов тяжелой цепи могут отличаться в разных системах нумерации. Как продемонстрировано в данном документе и описано ниже, варианты по pI могут находиться в одной или большем количестве областей СН, а также в шарнирной области, обсуждаемой ниже.
Другим типом домена Ig тяжелой цепи является шарнирная область. Под термином «шарнир», или «шарнирная область», или «шарнирная область антитела», или «шарнирная область иммуноглобулина», используемым в контексте данного документа, подразумевается гибкий полипептид, содержащий аминокислоты между первым и вторым константными доменами тяжелой цепи антитела. Структурно домен CH1 IgG заканчивается в EU положении 215, а домен CH2 IgG начинается с остатка в EU положении 237. Таким образом, для IgG, шарнир антитела в данном описании определен как включающий положения с 216 (E216 в IgG1) по 230 (P230 в IgG1), при этом нумерация соответствует индексу EU, как по Кабату. В некоторые варианты реализации данного изобретения, например, применительно к фрагменту Fc, включен шарнир, что обычно относится к положениям 216 – 230. Как отмечено в данном документе, варианты по pI также могут быть созданы в шарнирной области.
Таким образом, в данном изобретении предложены различные домены антител. Как описано в данном документе и известно в данной области, гетеродимерные белки согласно данному изобретению содержат разные домены, которые также могут перекрываться. Эти домены включают следующие, но не ограничиваются ими: домен Fc, домен CH1, домен CH2, домен CH3, шарнирный домен и константный домен тяжелой цепи (домен CH1 – шарнир – Fc или CH1 – шарнир – CH2 – CH3).
Таким образом, «домен Fc» включает домен – CH2 – CH3 и, необязательно, шарнирный домен. В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен Fc также включает часть домена CH1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, когда фрагмент белка, например, ИЛ-15 или ИЛ-15Рα, присоединяется к домену Fc, именно С-конец конструкции ИЛ-15 или ИЛ-15Рα присоединяется ко всей или части шарнира из домена Fc; например, он обычно прикрепляется к последовательности EPKSC (SEQ IS NO: 293), которая является началом шарнира. В других вариантах реализации данного изобретения, когда фрагмент белка, например, ИЛ-15 или ИЛ-15Рα, присоединяется к домену Fc, именно N-конец фрагмента белка присоединяется к C-концу из домена CH3.
В некоторых конструкциях и последовательностях белка домена Fc, описанных в данном документе, C-конец белкового фрагмента ИЛ-15 или ИЛ-15Рα присоединяется к N-концу доменного линкера, C-конец которого присоединяется к N-концу константного домена Fc (N – фрагмент белка ИЛ-15 или ИЛ-15Рα – линкер – домен Fc – C), хотя данный порядок может быть изменен (N – домен Fc – линкер – фрагмент белка ИЛ-15 или ИЛ-15Рα – С). В других конструкциях и последовательности, описанных в данном документе, C-конец первого фрагмента белка присоединяется к N-концу второго фрагмента белка, необязательно через доменный линкер, а C-конец второго фрагмента белка присоединяется к N-концу константного домена Fc, необязательно через доменный линкер. В других конструкциях и последовательностях, описанных в данном документе, предусмотрен константный домен Fc, который не присоединяется к первому фрагменту белка или второму фрагменту белка. Гетеродимерный слитый белок Fc может содержать два или более иллюстративных белков мономерного домена Fc, описанных в данном документе. В еще одной конструкции, N-конец первого фрагмента белка присоединен к C-концу второго фрагмента белка, необязательно через доменный линкер, а N-конец второго фрагмента белка присоединен к C-концу константного домена Fc, необязательно через доменный линкер.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения линкер представляет собой «доменный линкер», используемый для связывания вместе двух любых доменов, как указано в данном документе, некоторые из которых изображены на фиг. 87. Несмотря на то, что может быть использован любой подходящий линкер, во многих вариантах реализации данного изобретения используется глицин-сериновый полимер, в том числе, например, (GS)n (SEQ ID NO: 19), (GSGGS)n (SEQ ID NO: 20), (GGGGS)n (SEQ ID NO: 21) и (GGGS)n (SEQ IS NO: 22), где n представляет собой целое число, равное, по меньшей мере, единице (и, как правило, от 0 до 1 до 2 до 3 до 4 до 5), а также любая пептидная последовательность, которая обеспечивает рекомбинантное присоединение двух доменов с достаточной длиной и гибкостью с тем, чтобы каждый домен сохранял свою биологическую функцию. В некоторых случаях, и если уделить внимание «наличию цепей», как изложено ниже, могут использоваться заряженные доменные линкеры.
Соответственно, в некоторых вариантах реализации данного изобретения предложены гетеродимерные белки, слитые с Fc, которые основаны на использовании двух различных последовательностей вариантов Fc тяжелой цепи, которые будут самособираться с образованием гетеродимерного полипептида, слитого с доменом Fc.
В одном варианте реализации данного изобретения гетеродимерные белки, слитые с Fc, содержат по меньшей мере два константных домена, которые могут быть сконструированы для получения гетеродимеров, например, путем инженерии pI. Другие домены Fc, которые могут быть использованы, включают фрагменты, содержащие один или несколько из CH1, CH2, CH3 и шарнирных доменов согласно данному изобретению, которые были сконструированы путем инженерии pI. В частности, форматы, изображенные на фиг. 9A – 9G и фиг. 39A – 39D, представляют собой гетеродимерные белки, слитые с Fc, что означает, что белок имеет две ассоциированные последовательности Fc, самоорганизованные в гетеродимерный домен Fc, и по крайней мере один белковый фрагмент (например, 1, 2 или более белковых фрагментов). В некоторых случаях первый фрагмент белка связан с первой последовательностью Fc, а второй фрагмент белка связан со второй последовательностью Fc. В других случаях первый фрагмент белка связан с первой последовательностью Fc, а первый фрагмент белка нековалентно присоединен ко второму фрагменту белка, который не связан с последовательностью Fc. В некоторых случаях гетеродимерный слитый белок Fc содержит первый фрагмент белка, связанный со вторым фрагментом белка, который связан с первой последовательностью Fc, и вторую последовательность Fc, которая не связана ни с первым, ни со вторым фрагментами белка.
Данное изобретение направлено на новые конструкции для получения гетеродимерных слитых белков Fc, которые позволяют обеспечить связывание с одним или несколькими партнерами по связыванию, лигандами или рецепторами. Гетеродимерные слитые конструкции Fc основаны на самособирающейся природе двух доменов Fc тяжелых цепей антител, например, двух «мономеров», которые собираются в «димер». Гетеродимерные белки, слитые с Fc, получают путем изменения аминокислотной последовательности каждого мономера, что более подробно обсуждается ниже. Таким образом, данное изобретение в целом направлено на создание гетеродимерных слитых белков Fc, которые способны взаимодействовать с партнером (-ами) по связыванию или лигандом (-ами), или рецептором (-ами), и которые основаны на аминокислотных вариантах в константных областях, различающихся в каждой цепи, чтобы способствовать образованию гетеродимеров и (или) обеспечить более легкую очистку гетеродимеров по сравнению с гомодимерами.
Существует ряд механизмов, которые могут быть использованы для создания гетеродимеров согласно данному изобретению. В качестве дополнения, как будет понятно специалистам в данной области техники, указанные механизмы могут быть объединены для обеспечения высокой гетеродимеризации. Таким образом, аминокислотные варианты, которые приводят к получению гетеродимеров, называются «гетеродимеризационными вариантами». Как обсуждается ниже, гетеродимеризационные варианты могут включать стерические варианты (например, варианты «выступы и впадины» или «искаженные» варианты, описанные ниже, и варианты «пары зарядов», описанные ниже), а также «варианты по pI», что позволяет при очистке отделять гомодимеры от гетеродимеров. Как в целом описано в WO2014/145806, включенном в данный документ посредством ссылки в полном объеме, и как конкретно описано ниже для обсуждения «гетеродимеризационных вариантов», пригодные механизмы гетеродимеризации включают в себя «выступы и впадины» («ВИВ», англ. «KIH»; иногда называемые в данном документе «искаженными» вариантами (см. обсуждение в WO2014/145806), «электростатическое координирование» или «пары зарядов», описанные в WO2014/145806, варианты по pI, описанные в WO2014/145806, и общие дополнительные варианты Fc, описанные в WO2014/145806 и ниже.
В данном изобретении предусмотрено несколько основных механизмов, которые могут приводить к облегчению процесса очистки гетеродимерных белков; каждый из них основан на использовании вариантов по pI таким образом, что каждый мономер – а следовательно и каждый димерный вид – имеет разное значение pI, что способствует изоэлектрической очистке димерных белков A – A, A – B и B – B. В качестве альтернативы, некоторые форматы также допускают разделение по размеру. Как дополнительно изложено ниже, также возможно «искажать» образование гетеродимеров по сравнению с гомодимерами. Таким образом, комбинация стерических гетеродимеризационных вариантов и вариантов по pI, или вариантов пары зарядов находит конкретное применение в данном изобретении.
В целом, варианты реализации, которые находят конкретное применение в данном изобретении, основаны на наборах вариантов, включающих искаженные варианты, которые способствуют образованию гетеродимеризации по сравнению с образованием гомодимеризации, в сочетании с вариантами по pI, которые увеличивают разницу pI между двумя мономерами и между каждым димерным видом.
В качестве дополнения, как более подробно изложено ниже, в зависимости от формата гетеродимерного слитого белка Fc, варианты по pI могут содержаться либо внутри константных доменов и (или) доменов Fc мономера, либо могут использоваться доменные линкеры. То есть данное изобретение предоставляет варианты по pI, которые находятся на одном или обоих мономерах, а также (или) предоставляет заряженные доменные линкеры. Кроме того, дополнительная аминокислотная инженерия для альтернативных функциональных возможностей может также вызывать изменения в pI, например, в таких вариантах, как варианты Fc, FcRn и KO.
В данном изобретении, в котором значение pI используется в качестве основы для механизма разделения с целью очистки гетеродимерных белков, аминокислотные варианты могут быть введены в один или оба мономерных полипептида; это значит, что значение pI одного из мономеров (для простоты называемого в данном документе «мономер A») может быть предусмотрено таким образом, что оно будет удалено от мономера B, или могут быть изменены как мономер A, так и мономер B, при этом увеличивается значение pI мономера A и уменьшается значение pI мономера B. Как обсуждается, изменения в pI одного или обоих мономеров могут быть выполнены путем удаления или добавления заряженного остатка (например, нейтральная аминокислота заменяется положительно или отрицательно заряженным аминокислотным остатком, например, глутамин заменяется на глутаминовую кислоту), приводя к изменению заряженного остатка с положительного или отрицательного на противоположный заряд (например, аспарагиновая кислота заменяется на лизин) или изменению заряженного остатка на нейтральный остаток (например, потеря заряда; лизин заменяется на серин). Некоторые из таких вариантов изображены в разделе Фигуры.
Соответственно, в указанном варианте реализации данного изобретения представлено выполнение достаточного изменения pI, по меньшей мере, в одном из мономеров, таким образом, что гетеродимеры могут быть отделены от гомодимеров. Как будет понятно специалистам в данной области техники и как будет обсуждено ниже, это можно осуществить с помощью константной области тяжелой цепи «дикого типа» и вариантной области, которая была сконструирована либо для увеличения, либо для уменьшения ее значения pI (A ДТ : B+ или A ДТ : B-), или путем увеличения его в одной области и уменьшения в другой области (A+ : B- или A- : B+).
Таким образом, в целом, компонент в некоторых вариантах реализации данного изобретения представляет собой аминокислотные варианты в константных областях, которые направлены на изменение изоэлектрической точки (pI), по меньшей мере, одного, если не обоих, мономеров димерного белка путем встраивания аминокислотных замен («вариантов по pI» или «замен по pI») в один или оба мономера. Отделение гетеродимеров от двух гомодимеров может быть достигнуто, если значения pI указанных двух мономеров различаются всего на 0,1 единицу рН, при этом все из значений 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 или больше находят применение в данном изобретении.
Специалистам в данной области техники будет понятно, что количество вариантов по pI, которые должны быть включены в каждый мономер или оба мономера для достижения хорошего разделения, будет частично зависеть от начального значения параметра pI компонентов. То есть, чтобы определить, какой мономер конструировать или в каком «направлении» (например, более положительный или более отрицательный), вычисляются последовательности доменов Fc и, в некоторых случаях, белковый (-е) домен (-ы), связанный (-е) с доменом Fc, и на основании этого принимается решение. Как известно в данной области техники, разные домены Fc и (или) белковые домены будут иметь разные начальные значения параметра pI, которые используются в данном изобретении. В общем, как указано в данном документе, значения параметра pI рассчитаны таким образом, чтобы в результате общая разность в значениях pI для каждого мономера составляла по меньшей мере около 0,1 log, и предпочтительно – от 0,2 log до 0,5 log, как указано в данном документе.
Кроме того, как будет понятно специалистам в данной области техники и как описано в данном документе, в некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимеры могут быть отделены от гомодимеров на основе размера. Как показано на фигурах, например, некоторые из форматов позволяют разделить гетеродимеры и гомодимеры на основе размера.
В случае, когда варианты по pI используются для достижения гетеродимеризации, за счет использования константной (-ых) области (-ей) домена (-ов) Fc предоставляется более модульный подход к конструированию и очистке гетеродимерных слитых белков Fc. Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения необходимо сконструировать гетеродимеризационные варианты (включая искаженные и очищающие гетеродимеризационные варианты). Кроме того, в некоторых вариантах реализации данного изобретения возможность иммуногенности, возникающая от вариантов по pI, значительно снижается путем импорта вариантов по pI из различных изотипов IgG, так что pI изменяется без введения значительной иммуногенности. Таким образом, дополнительной проблемой, которую необходимо решить, является выявление константных доменов с низким значением параметра pI и высоким содержанием последовательностей человека, например – минимизация количества или исключение остатков, происходящих не от человека, в любом конкретном положении.
Дополнительным преимуществом, которое может возникнуть при использовании данного подхода к инженерии pI, является также увеличение периода полужизни в сыворотке и увеличение связывания с FcRn. То есть, как описано в USSN 13/194904 (включенном в данный документ посредством ссылки в полном объеме), снижение параметра pI константных доменов антител (включая те, которые обнаруживаются в антителах и слитых белках Fc) может привести к более длительному удерживанию в сыворотке in vivo. Данные варианты по pI, сконструированные для увеличения периода полужизни в сыворотке, также способствуют изменению pI для процесса очистки.
Кроме того, следует отметить, что варианты по pI гетеродимеризационных вариантов дают дополнительное преимущество для процесса анализа и контроля качества слитых белков Fc, поскольку способность либо устранять, либо минимизировать, либо различать присутствие гомодимеров является значительной. Сходным образом важна возможность надежного тестирования воспроизводимости производства гетеродимерного слитого белка Fc.
A. Гетеродимеризационные варианты
В данном изобретении представлены гетеродимерные белки, в том числе гетеродимерные белки, слитые с Fc, в различных форматах, в которых используются гетеродимерные варианты для обеспечения образования гетеродимеров и (или) их очистки от гомодимеров. Гетеродимерные слитые конструкции основаны на самособирающейся природе двух доменов Fc, например, двух «мономеров», которые собираются в «димер».
Существует ряд подходящих пар наборов искаженных гетеродимеризационных вариантов. Указанные варианты входят в «пары» «наборов». То есть, один набор пары встроен в первый мономер, а другой набор пары встроен во второй мономер. Следует отметить, что указанные наборы не обязательно ведут себя как варианты «выступы во впадинах», с однозначным соответствием между остатком в одном мономере и остатком в другом; это значит, что указанные пары наборов образуют границу раздела между двумя мономерами, которая стимулирует образование гетеродимеров и препятствует образованию гомодимеров, способствуя тому, что процент гетеродимеров, которые спонтанно образуются в биологических условиях, будет составлять более 90%, а не ожидаемые 50% (25% гомодимер A/A : 50% гетеродимер A/B : 25% гомодимер B/B).
B. Стерические варианты
В некоторых вариантах реализации данного изобретения образование гетеродимеров может быть облегчено путем добавления стерических вариантов. То есть, в результате изменения аминокислот в каждой тяжелой цепи, различные тяжелые цепи с большей вероятностью ассоциируются с образованием гетеродимерной структуры, чем с образованием гомодимеров с одинаковыми аминокислотными последовательностями в Fc. Подходящие стерические варианты включены в Фиг. 29 из USSN 15/141350, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме, а также представлены на фиг. 84.
Один из механизмов обычно упоминается в данной области техники как «выступы и впадины», обозначая конструирование аминокислот, которое приводит к созданию стерических влияний, способствующих образованию гетеродимеров, и препятствующих образованию гомодимеров, как описано в USSN 61/596846, Ridgway et al., Protein Engineering 9 (7): 617 (1996); Atwell et al., J. Mol. Biol. 1997 270: 26; патент США № 8216805, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. В разделе Фиг. обозначено несколько пар «мономер A – мономер B», которые основаны на механизме «выступы и впадины». В качестве дополнения, как описано в работе Merchant et al., Nature Biotech. 16: 677 (1998), указанные мутации «выступы и впадины» могут быть объединены с дисульфидными связями для образования искаженных гетеродимеризационных вариантов.
Дополнительный механизм, который находит применение в создании гетеродимеров, иногда называют «электростатическим координированием», как описано в работе Gunasekaran et al., J. Biol. Chem. 285 (25): 19637 (2010), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Данный механизм иногда обозначают в данном документе как «пары зарядов». В указанном варианте реализации данного изобретения электростатические силы используются для искажения образования вариантов в сторону гетеродимеризации. Специалистам в данной области техники будет понятно, что указанные механизмы также могут оказывать влияние на показатель pI и, следовательно, на очистку, и, таким образом, в некоторых случаях также могут рассматриваться как варианты по pI. В то же время, поскольку они были созданы для усиления гетеродимеризации и не были использованы в качестве инструментов очистки, они классифицируются как «стерические варианты». Они включают следующие, но не ограничиваясь ими: D221E/P228E/L368E в паре с D221R/P228R/K409R (например, они представляют собой «наборы, соответствующие мономерам») и C220E/P228E/368E в паре с C220R/E224R/P228R/K409R.
Дополнительные варианты мономеров A и мономеров B, которые можно комбинировать с другими вариантами, необязательно и независимо в любом количестве, такими как варианты по pI, описанные в данном документе, или другие стерические варианты, которые представлены на фиг. 37 в US 2012/0149876, все из которых явно включены в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения стерические варианты, изложенные в данном документе, могут быть необязательно и независимо встроены с любым вариантом по pI (или другими вариантами, такими как варианты по Fc, варианты по FcRn и т.д.) в один или оба мономера, и могут быть независимо и необязательно включены или исключены из белков согласно данному изобретению.
Список подходящих искаженных вариантов приведен на фиг. 3A – 3E. Особенно пригодными для использования во многих вариантах реализации данного изобретения являются пары наборов, которые включают следующие, но не ограничиваются ими: S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L; K370S : S364K/E357Q; и T366S/L368A/Y407V : T366W (необязательно содержащие связывающий дисульфид, T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C). С точки зрения номенклатуры, пара «S364K/E357Q : L368D/K370S» означает, что один из мономеров имеет набор с двойным вариантом S364K/E357Q, а другой имеет набор с двойным вариантом L368D/K370S; как указано выше, «наличие цепей» указанных пар зависит от исходного значения параметра pI.
C. Варианты по pI (варианты по изоэлектрической точке) для гетеродимеров
В целом, как будет понятно специалистам в данной области техники, существует две основные категории вариантов по pI: варианты, которые приводят к повышению значения pI белка (основные изменения), и варианты, которые приводят к уменьшению значения pI белка (кислотные изменения). Как описано в данном документе, могут быть использованы все комбинации указанных вариантов: один мономер может относиться к дикому типу или варианту, который не имеет существенно отличающееся от дикого типа значение pI, а другой может быть либо более основным, либо более кислым. В качестве альтернативы, каждый мономер может быть изменен, один – в более основной и один – в более кислый.
Предпочтительные комбинации вариантов по pI продемонстрированы на фиг. 30 из USSN 15/141350, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Как изложено в данном документе и продемонстрировано в разделе фиг., указанные изменения показаны относительно IgG1, но все изотипы могут быть изменены таким же образом, также как и гибриды изотипов. В случае, когда константный домен тяжелой цепи происходит от IgG2-4, также могут быть использованы R133E и R133Q. Варианты по pI изображены на фиг. 4.
В одном варианте реализации данного изобретения предпочтительная комбинация вариантов по pI содержит один мономер, содержащий варианты 208D/295E/384D/418E/421D (N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D по сравнению с IgG1 человека), если один из мономеров Fc включает домен CH1. В некоторых случаях второй мономер содержит положительно заряженный доменный линкер, включительно с (GKPGS)4 (SEQ ID NO: 294). В некоторых случаях первый мономер включает домен CH1, включительно с положением 208. Соответственно, в конструкциях, которые не включают домен CH1 (например, для гетеродимерных слитых белков Fc, в которых не используется домен CH1 на одном из доменов), предпочтительный вариантный набор Fc с отрицательным значением pI включает варианты 295E/384D/418E/421D (Q295E/N384D/Q418E/N421D по сравнению с IgG1 человека).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения мутации производятся в шарнирном домене домена Fc, включительно с положениями 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 и 230. Таким образом, мутации по pI и, в частности, замены могут быть сделаны в одном или нескольких положениях 216 – 230, причем в данном изобретении находят применение 1, 2, 3, 4 или 5 мутаций. Опять же, рассматриваются все возможные комбинации, отдельно или с другими вариантами по pI в других доменах.
Конкретные замены, которые находят применение для понижения значения pI шарнирных доменов, включают следующие, но не ограничиваются ими: делеция в положении 221, ненативный валин или треонин в положении 222, делеция в положении 223, ненативная глютаминовая кислота в положении 224, делеция в положении 225, делеция в положении 235 и делеция ненативного аланина в положении 236. В некоторых случаях в шарнирном домене выполняются только замены по pI, а в других эти замены (замена) добавляются к другим вариантам по pI в других доменах в любой комбинации.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения мутации могут быть сделаны в области CH2, включительно с положениями 233, 234, 235, 236, 274, 296, 300, 309, 320, 322, 326, 327, 334 и 339. Опять же, могут быть выполнены все возможные комбинации указанных 14 позиций; например, pI антитело может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен по pI в CH2.
Конкретные замены, которые находят применение для снижения параметра pI в доменах CH2, включают следующие, но не ограничиваются ими: ненативный глютамин или глютаминовая кислота в положении 274, ненативный фенилаланин в положении 296, ненативный фенилаланин в положении 300, a ненативный валин в положении 309, ненативная глютаминовая кислота в положении 320, ненативная глютаминовая кислота в положении 322, ненативная глютаминовая кислота в положении 326, ненативный глицин в положении 327, ненативная глютаминовая кислота в положении 334, ненатуральный треонин в положении 339 и все возможные комбинации в пределах CH2 и с другими доменами.
В данном варианте реализации данного изобретения мутации могут быть независимо и необязательно выбраны из положений 355, 359, 362, 384, 389, 392, 397, 418, 419, 444 и 447. Конкретные замены, которые находят применение для снижения параметра pI в доменах CH3, включают следующие, но не ограничиваются ими: ненативный глютамин или глютаминовая кислота в положении 355, ненативный серин в положении 384, ненативный аспарагин или глютаминовая кислота в положении 392, ненативный метионин в положении 397, ненативная глютаминовая кислота в положении 419, ненативная глютаминовая кислота в положении 359, ненативная глютаминовая кислота в положении 362, ненативная глютаминовая кислота в положении 389, ненативная глютаминовая кислота в положении 418, ненативная глютаминовая кислота в положении 444 и делеция или ненативная аспарагиновая кислота в положении 447.
D. Изотипические варианты
В качестве дополнения, многие варианты реализации данного изобретения основаны на «импорте» pI аминокислот в определенных положениях из одного изотипа IgG в другой, тем самым уменьшая или исключая возможность внесения нежелательной иммуногенности в указанные варианты. Некоторые из них изображены на фиг. 21 публикации США № 2014/0370013, которая включена в данный документ посредством ссылки. Это значит, что IgG1 представляет собой общий изотип для терапевтических антител по ряду причин, в том числе в связи с высокой эффекторной функцией. В то же время, константная область тяжелой цепи IgG1 имеет более высокое значение pI, чем у IgG2 (8,10 по сравнению с 7,31). В результате введения остатков IgG2 в определенных положениях в каркас IgG1 значение pI образованного в результате мономера снижается (или увеличивается) и дополнительно демонстрирует более длительный период полужизни в сыворотке крови. Например, в IgG1 содержится глицин (pI 5,97) в положении 137, а в IgG2 содержится глютаминовая кислота (pI 3,22); импортирование глютаминовой кислоты будет влиять на значение pI образованного в результате белка. Как описано ниже, требуется, как правило, несколько аминокислотных замен для значительного влияния на значение pI вариантного слитого белка Fc. В то же время, следует отметить, что, как обсуждается ниже, даже изменения в молекулах IgG2 способствуют увеличению периода полужизни в сыворотке крови.
В других вариантах реализации данного изобретения выполняют замены неизотипных аминокислот либо с целью уменьшения общего заряженного состояния образованного в результате белка (например, путем изменения аминокислоты с более высоким значением pI на аминокислоту с более низким значением pI), либо для обеспечения приспособления в структуре с целью стабильности и т.д., как более подробно описано ниже.
Кроме того, с помощью pI инженерии константных доменов как тяжелых, так и легких цепей, можно наблюдать значительные изменения в каждом из мономеров гетеродимера. Как обсуждается в данном документе, наличие значений pI двух мономеров, отличающихся по меньшей мере на 0,5, может способствовать разделению с помощью метода ионообменной хроматографии или изоэлектрической фокусировки, или других способов, чувствительных к изоэлектрической точке.
E. Расчет значения pI
pI каждого мономера может зависеть от значения pI варианта константного домена тяжелой цепи и pI всего мономера, включая вариантный константный домен тяжелой цепи и партнера по слиянию. Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения изменение в значении pI рассчитывают на основе константного домена вариантной тяжелой цепи, используя диаграмму на фиг. 19 публикации США № 2014/0370013. Как обсуждается в данном документе, мономер, подлежащий конструированию, как правило, определяется собственным присущим значением pI каждого мономера.
F. Варианты по pI, которые также обеспечивают улучшенное связывание с FcRn in vivo
В случае, когда вариант по pI снижает значение pI мономера, это может иметь дополнительное преимущество в виде улучшенного удержания в сыворотке крови in vivo.
Несмотря на то, что вопрос все еще находится на изучении, считается, что области Fc имеют более длительные периоды полужизни in vivo, поскольку связывание с FcRn при рН 6 в эндосоме приводит к секвестрированию Fc (Ghetie and Ward, 1997 Immunol Today. 18 (12): 592 – 598, включена посредством ссылки в полном объеме). Затем эндосомальный компартмент рециркулирует Fc на поверхность клетки. После того, как компартмент открывается во внеклеточное пространство, более высокое значение рН – ~7,4 – способствует высвобождению Fc обратно в кровоток. Dall 'Acqua с соавт. показали на мышах, что мутантные Fc с повышенным связыванием с FcRn при pH 6 и pH 7,4 на самом деле имели пониженные концентрации в сыворотке крови и такой же период полужизни, как Fc дикого типа (Dall 'Acqua et al. 2002, J. Immunol. 169: 5171 – 5180, данная публикация включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Считается, что повышенная аффинность Fc к FcRn при pH 7,4 запрещает высвобождение Fc обратно в кровоток. Следовательно, мутации в Fc, которые увеличивают время полужизни для Fc in vivo, в идеале увеличивают связывание с FcRn при более низком значении pH, в то же время позволяя высвобождать Fc при более высоком значении pH. Аминокислота гистидин меняет свое заряженное состояние в диапазоне значений pH от 6,0 до 7,4. В связи с этим неудивительно, что остатки His находятся в важных положениях в комплексе Fc – FcRn.
G. Дополнительные варианты Fc для дополнительной функциональности
В качестве дополнения к аминокислотным вариантам по pI, существует ряд пригодных аминокислотных модификаций в Fc, которые могут быть выполнены по ряду причин, в том числе – по следующим, но не ограничиваясь ими: изменение связывания с одним или несколькими рецепторами FcγR, изменение связывания с рецепторами FcRn и т.д.
Соответственно, белки согласно данному изобретению могут содержать аминокислотные модификации, в том числе гетеродимеризационные варианты, изложенные в данном документе, которые включают варианты по pI и стерические варианты. Каждая совокупность вариантов может быть независимо и необязательно включена или исключена из любого конкретного гетеродимерного белка.
H. Варианты FcγR
Соответственно, существует ряд пригодных замен по Fc, которые можно осуществить для изменения связывания с одним или несколькими рецепторами FcγR. Могут быть пригодными замены, которые приводят к повышению связывания, равно как и к уменьшению связывания. Например, известно, что повышенное связывание с FcγRIIIa приводит к повышению АЗКЦ (антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности; клеточно-опосредованной реакции, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на клетке-мишени и впоследствии вызывают лизис данной клетки-мишени). Аналогичным образом, в некоторых случаях также может быть пригодным уменьшение связывания с FcγRIIb (ингибирующий рецептор). Аминокислотные замены, которые находят применение в данном изобретении, включают замены, перечисленные в USSN 11/124620 (особенно на фиг. 41), 11/174287, 11/396495, 11/538406, все из которых явным образом включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме и конкретно для раскрытых в них вариантов. Конкретные варианты, которые находят применение, включают следующие, но не ограничиваясь ими: 236A, 239D, 239E, 332E, 332D, 239D/332E, 267D, 267E, 328F, 267E/328F, 236A/332E, 239D/332E/330Y, 239D, 332E/330L, 243A, 243L, 264A, 264V и 299T.
Кроме того, аминокислотные замены, которые повышают аффинность к FcγRIIc, также могут быть включены в варианты домена Fc, описанные в данном документе. Полезны замены, описанные, например, в USSN 11/124620 и 14/578305.
В качестве дополнения, существуют дополнительные замены Fc, которые находят применение в повышенном связывании с рецептором FcRn и увеличенном периоде полужизни в сыворотке крови, как конкретно раскрыто в USSN 12/341769, который включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме, в том числе следующие, но не ограничиваясь ими: 434S, 434A, 428L, 308F, 259I, 428L/434S, 259I/308F, 436I/428L, 436I или V/434S, 436V/428L и 259I/308F/428L.
I. Абляционные варианты
Аналогичным образом, другая категория функциональных вариантов представляет собой «абляционные варианты FcγR», или «варианты нокаута Fc (Fc-KO или KO)». В указанных вариантах реализации данного изобретения для некоторых терапевтических применений желательно уменьшить или устранить нормальное связывание домена Fc с одним, или несколькими, или всеми рецепторами Fcγ (например, FcγR1, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa и т.д.), чтобы избежать дополнительных механизмов действия. Таким образом, например, во многих вариантах реализации данного изобретения, в особенности – при использовании иммуномодулирующих белков, желательно устранять связывание с FcγRIIIa для избегания или значительного снижения активности АЗКЦ, таким образом, чтобы один из доменов Fc содержал один или несколько абляционных вариантов по Fcγ рецепторам. Указанные абляционные варианты изображены на фиг. 31 в USSN 15/141350, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме, и каждый из них может быть независимо и необязательно включен или исключен, причем в предпочтительных аспектах используются абляционные варианты, выбранные из группы, состоящей из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с индексом EU. Следует отметить, что абляционные варианты, упомянутые в данном документе, устраняют связывание с FcγR, но, обычно, не связывание с FcRn. Пригодные абляционные варианты, которые приводят к устранению связывания с FcγR (иногда обозначаемые как «нокауты» или «КО» варианты) изображены на фиг. 5.
J. Комбинирование гетеродимерных вариантов и вариантов Fc
Как будет понятно специалистам в данной области техники, все из перечисленных гетеродимеризационных вариантов (в том числе искаженных и (или) вариантов по pI) могут быть необязательно и независимо скомбинированы любым способом, при условии, что они сохраняют свое «наличие цепей» или «разделение мономеров». В качестве дополнения, все из указанных вариантов могут быть скомбинированы в любой из гетеродимеризационных форматов.
В случае вариантов по pI, несмотря на то что варианты реализации данного изобретения, находящие особенное применение, продемонстрированы в разделе Фиг., могут быть созданы другие комбинации, на основе основного правила изменения разницы в значениях pI между двумя мономерами для облегчения очистки.
В качестве дополнения, любой из гетеродимеризационных вариантов, искаженных вариантов и вариантов по pI также независимо и необязательно комбинируется с абляционными вариантами по Fc, вариантами по Fc, вариантами по FcRn, как в целом изложено в данном документе.
Кроме того, мономерный домен Fc может содержать набор аминокислотных замен, который включает в себя C220S/S267K/L368D/K370S или C220S/S267K/S364K/E357Q.
Кроме того, гетеродимерные белки, слитые с Fc, могут содержать искаженные варианты (например, набор аминокислотных замен, как продемонстрировано на фиг. 1A – 1C из USSN 15/141350, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме), с особенно полезными искаженными вариантами, выбранными из группы, состоящей из S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L, K370S : S364K/E357Q, T366S/L368A/Y407V : T366W; and T366S/L368A/Y407V : T366W (необязательно включая мостиковый дисульфид, T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C), необязательно включая абляционные варианты, необязательно включая заряженные доменные линкеры; и необязательно включая варианты по pI.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен Fc содержит одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующего: 236R, S239D, S239E, F243L, M252Y, V259I, S267D, S267E, S67K, S298A, V308F, L328F, L328R, 330L, I332D, I332E, M428L, N434A, N434S, 236R/L328R, S239D/I332E, 236R/L328F, V259I/V308F, S267E/L328F, M428L/N43S, Y436I/M428L, N436V/M428L, V436I/N434S, Y436V/N434S, S239D/I332E/330L, M252Y/S54T/T256E, V259I/V308F/M428L, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236_ и E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, в соответствии с индексом EU.
В одном варианте реализации данного изобретения конкретная комбинация искаженных вариантов и вариантов по pI, которая находит применение в данном изобретении, представляет собой T366S/L368A/Y407V : T366W (необязательно включая мостиковый дисульфид, T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C) с одним мономером, содержащим Q295E/N384D/Q418E/N481D, и другим мономером, содержащим доменный линкер с положительным зарядом. Как будет понятно специалисту в данной области техники, варианты «выступы и впадины» не приводят к изменению параметра pI и, таким образом, могут использоваться на любом мономере.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен Fc содержит аминокислотные замены, содержащие M428L/N434S. В некоторых вариантах реализации данного изобретения каждый домен Fc нецелевых гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc содержит аминокислотные замены, содержащие M428L/N434S.
Полезные варианты реализации доменов Fc из гетеродимерных слитых белков Fc, содержащих описанные в данном документе белки ИЛ-15 и ИЛ-15Рα, представлены на фиг. 6A – 6E.
III. Белковые домены ИЛ-15 и ИЛ-15Рα
В данном изобретении предложены гетеродимерные белки, слитые с Fc, которые содержат белки ИЛ-15 и ИЛ-15Рα. Как показано на соответствующих Фигурах, комплекс ИЛ-15 может иметь несколько форм. Как указано выше, белок ИЛ-15 сам по себе является менее стабильным, чем в комплексе с белком ИЛ-15Рα. Как известно в данной области техники, белок ИЛ-15Рα содержит «суши-домен», который является самой короткой областью рецептора, сохраняющей активность связывания с ИЛ-15. Таким образом, хотя могут быть получены гетеродимерные слитые белки, содержащие весь белок ИЛ-15Рα, предпочтительные варианты реализации, предложенные в данном документе, включают комплексы, в которых использован только суши-домен, последовательность которого показана на соответствующих Фигурах.
Соответственно, комплексы ИЛ-15 обычно содержат белок ИЛ-15 и суши-домен из ИЛ-15Рα (если не указано иное – что используется полноразмерная последовательность, то термины «ИЛ-15Рα», «ИЛ-15Рα (суши)» и «суши» используются взаимозаменяемо по всему тексту данного документа). Указанный комплекс может быть использован в трех разных форматах. Как показано на фиг. 9A, фиг. 9C, фиг. 9D и фиг. 9F, белок ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши) не связаны ковалентно, а скорее самоорганизуются посредством регулярных взаимодействий лиганд – лиганд. Как более подробно описано в данном документе, быть ковалентно связанным с доменом Fc может быть либо домен ИЛ-15, либо суши-домен (обычно с использованием необязательного доменного линкера). В качестве альтернативы, они могут быть ковалентно присоединены с использованием доменного линкера, как это в целом показано на фиг. 9B, фиг. 9E и фиг. 9G. На фиг. 9B суши-домен изображен как N-концевой домен, хотя это можно изменить. Наконец, каждый из доменов ИЛ-15 и суши может быть сконструирован таким образом, чтобы он содержал аминокислоту цистеин, которая образует дисульфидную связь с образованием комплекса, как это в целом показано на фиг. 39A – 39D, и опять же, к домену Fc ковалентно присоединяется либо домен ИЛ-15, либо суши-домен (с использованием необязательного доменного линкера).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека имеет аминокислотную последовательность, указанную в NCBI Ref. Seq. № NP_000576.1 или в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях кодирующая последовательность ИЛ-15 человека указана в NCBI Ref. Seq. № NM_000585. Иллюстративный белок ИЛ-15 из гетеродимерного слитого белка Fc, описанный в данном документе, может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 (зрелый ИЛ-15) или аминокислоты 49 – 162 из последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет по меньшей мере 90%, например 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из C42S, L45C, Q48C, V49C, L52C, E53C, E87C и E89C. Белок ИЛ-15 из слитого белка Fc может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 аминокислотных замен.
Аминокислотная замена (замены) может быть изостерической заменой на границе раздела ИЛ-15 : ИЛ-2β и ИЛ-15 : общая гамма-цепь. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека, такой как зрелый белок ИЛ-15 человека, имеет одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующего: N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D, Q108E и любые их сочетания. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/N65D. В некоторых случаях белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет по меньшей мере 97% или 98% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2, включительно с заменами N4D/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых случаях белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет по меньшей мере 97% или 98% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2, включительно с заменами D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых случаях белок ИЛ-15 человека из слитого белка Fc имеет по меньшей мере 96% или 97% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2, включительно с заменами D30N/E64Q/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 человека, например, такой как зрелый белок ИЛ-15 человека, из слитого белка Fc, идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых случаях белок ИЛ-15 человека, такой как зрелый белок ИЛ-15 человека, не имеет аминокислотных замен.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок зрелого ИЛ-15 человека имеет одну или несколько аминокислотных мутаций (например, замены, вставки и (или) делеции). В некоторых случаях мутация вводит остаток цистеина, который может образовывать дисульфидную связь с белком рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека имеет аминокислотную последовательность, указанную в NCBI Ref. Seq. № NP_002180.1 или в SEQ ID NO: 3. В некоторых случаях кодирующая последовательность ИЛ-15Рα человека указанную в NCBI Ref. Seq. № NM_002189.3. Иллюстративный белок ИЛ-15Рα из гетеродимерного слитого белка Fc, описанного в данном документе, может включать или состоять из суши-домена с последовательностью SEQ ID NO: 3 (например, аминокислоты 31 – 95 из последовательности SEQ ID NO: 3) или, другими словами, с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15Рα имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и аминокислотную вставку, которая выбрана из группы, состоящей из D96, P97, A98, D96/P97, D96/C97, D96/P97/A98, D96/P97/C98 и D96/C97/A98, причем положение аминокислот указано относительно полноразмерного белка ИЛ-15Рα человека, или последовательности SEQ ID NO: 3. Например, аминокислота (-ы), такая (-ие) как D (например, Asp), P (например, Pro), A (например, Ala), DP (например, Asp – Pro), DC (например, Asp – Cys), DPA (например, Asp – Pro – Ala), DPC (например, Asp – Pro – Cys) или DCA (например, Asp – Cys – Ala) могут быть добавлены к C-концу белка ИЛ-15Рα из последовательности SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15Рα имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из K34C, A37C, G38C, S40C и L42C, причем положение аминокислот указано относительно последовательности SEQ ID NO: 4. Белок ИЛ-15Рα (суши) из последовательности SEQ ID NO: 5 может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более аминокислотных мутаций (например, замены, вставки и (или) делеции).
SEQ ID NO: 1 представляет собой MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS.
SEQ ID NO: 2 представляет собой NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS.
SEQ ID NO: 3 представляет собой MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL.
SEQ ID NO: 5 представляет собой ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотным вариантом D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотную замену D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотную замену D30N.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотным вариантом N1D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотную замену N1D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотную замену N1D.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотным вариантом N4D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотную замену N4D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотную замену N4D.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотным вариантом E64Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотную замену E64Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотную замену E64Q.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотным вариантом N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотную замену N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотную замену N65D.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотными заменами N1D/D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N1D/D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотные замены N1D/D30N.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотными заменами N4D/D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены N4D/D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотные замены N4D/D30N.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотными заменами D30N/E64Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотные замены D30N/E64Q.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотными заменами D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотные замены D30N/N65D.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к белкам, содержащим вариант ИЛ-15 человека с аминокислотными заменами D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и по меньшей мере аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D.
IV. Доменные линкеры
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 и белок ИЛ-15Рα связаны вместе через линкер. Необязательно, белки не связаны вместе через линкер. В других вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 и белок ИЛ-15Рα связаны нековалентно.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 присоединен к домену Fc через линкер. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 присоединен к домену Fc напрямую, например, без линкера. В конкретных вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 присоединен к домену Fc через шарнирную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15Рα присоединен к домену Fc через линкер. В других вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15Рα присоединен к домену Fc напрямую, например, без линкера. В конкретных вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15Рα присоединен к домену Fc через шарнирную область или ее фрагмент. В некоторых случаях линкер не используется для присоединения белка ИЛ-15 или белка ИЛ-15Рα к домену Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения линкер представляет собой «доменный линкер», используемый для связывания вместе двух любых доменов, как указано в данном документе. Несмотря на то, что может быть использован любой подходящий линкер, во многих вариантах реализации данного изобретения используется глицин-сериновый полимер, в том числе, например, (GS)n (SEQ ID NO: 23), (GSGGS)n (SEQ ID NO: 24), (GGGGS)n (SEQ ID NO: 25) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 26), где n представляет собой целое число, равное, по меньшей мере, 0 (и, как правило, от 0 до 1 до 2 до 3 до 4 и до 5), а также любая пептидная последовательность, которая обеспечивает рекомбинантное присоединение двух доменов с достаточной длиной и гибкостью с тем, чтобы каждый домен сохранял свою биологическую функцию. В некоторых случаях пригодные линкеры включают (GGGGS)0 или (GGGGS)1 или (GGGGS)2. Пригодные доменные линкеры продемонстрированы на фиг. 7. В некоторых случаях, и если уделить внимание «наличию цепей», как изложено ниже, могут использоваться заряженные доменные линкеры, что обсуждается в данном документе и продемонстрировано на фиг. 7 и в данном документе.
V. Пригодные форматы согласно данному изобретению
Как показано на фиг. 9A – 9G и фиг. 39A – 39D, существует ряд пригодных форматов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. В общем, гетеродимерные слитые белки согласно данному изобретению имеют два функциональных компонента: компонент ИЛ-15/ ИЛ-15Рα (суши) и компонент Fc, оба из которых могут принимать разные формы, как описано в данном документе, и оба могут быть объединены другим компонентом в любой конфигурации.
Первый и второй домены Fc могут иметь набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из а) S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; b) S364K/E357Q : L368D/K370S; c) L368D/K370S : S364K; d) L368E/K370S : S364K; e) T411E/K360E/Q362E : D401K; f) L368D/K370S : S364K/E357L и g) K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый домен Fc имеет аминокислотные замены L368D/K370S, а второй домен Fc имеет аминокислотные замены S364K/E357Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый домен Fc имеет аминокислотные замены S364K/E357Q, а второй домен Fc имеет аминокислотные замены L368D/K370S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, включающий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с системой нумерации EU.
Необязательно, первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с системой нумерации EU.
Необязательно, первый и (или) второй домены Fc имеют варианты 428L/434S для продления периода полужизни. В некоторых случаях первый и (или) второй домены Fc имеют варианты M428L/N434S для продления периода полужизни. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый домен Fc имеет аминокислотные замены M428L/N434S, а второй домен Fc имеет аминокислотные замены M428L/N434S.
A. Формат ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9A, гетеродимерный слитый белок содержит два мономера (два мономера Fc). Первый мономер содержит (в направлении от N-конца к C-концу) ИЛ-15 – необязательный доменный линкер – CH2 – CH3, при этом доменный линкер иногда содержит весь шарнир или его часть. Второй мономер содержит ИЛ-15/Рα (суши) домен – необязательный доменный линкер – CH2 – CH3, где доменный линкер иногда содержит весь шарнир или его часть.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S. В некоторых случаях вариант L368D/K370S находится на первом мономере, а вариант S354K/E357Q находится на втором мономере.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/, и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека, мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D / N65D.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D / N65D и пара искаженных вариантов S364K / E357Q : L368D / K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D / N65D, пара искаженных вариантов S364K / E357Q : L368D / K370S и варианты 428L / 434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D / N65D, пара искаженных вариантов S364K / E357Q : L368D / K370S и варианты M428L / N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека, мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши) и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6A. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека, мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения представлены в WO2018/071919 на фиг. 48A (XENP22822, включительно с цепью 1 (17693) и цепью 2 (15908)), фиг. 94A (XENP23504, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AO (XENP24045, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AQ (XENP24306, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 48A (XENP22821, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 94A (XENP23343, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AJ (XENP23557, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AP (XENP24113, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AP (XENP24051, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AR (XENP24341, включительно с цепью 1 и цепью 2), фиг. 104AP (XENP24052, включительно с цепью 1 и цепью 2) и фиг. 104AP (XENP24301, включительно с цепью 1 и цепью 2), все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В формате ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения представлены на фиг. 10 (XENP22822, включительно с цепью 1 (15902) и цепью 2 (15908)) и (XENP21475, включительно с цепью 1 (16479) и цепью 2 (16481)).
B. оцИЛ-15-Рα – Fc
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9B, гетеродимерный слитый белок содержит два мономера. Первый мономер включает (в направлении от N-конца к C-концу) ИЛ-15/Рα (суши) – доменнный линкер – ИЛ-15 – необязательный доменнный линкер – CH2 – CH3, при этом доменнный линкер иногда включает весь шарнир или его часть. Второй мономер содержит «пустой» Fc, содержащий весь шарнир или его часть – CH2 – CH3. Данная структура называется «оцИЛ-15/Рα – Fc», где «оц» означает «одноцепочечный» (например, комплекс ИЛ-15/Рα суши).
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и, на каждом из мономеров Fc, варианты 428L/434S. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и, на каждом из мономеров Fc, варианты M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замену по замену FcRn M428L/N434S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замену по FcRn M428L/N434S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замену по FcRn M428L/N434S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека и домен ИЛ-15Рα (суши); мономер оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения включают XENP21478, включительно с цепью 1 (16478) и цепью 2 (8924), что и продемонстрировано на фиг. 11. Другие варианты реализации данного формата включают XENP21993, XENP21994, XENP21995, XENP23174, XENP23175, XENP24477 и XENP24480, и продемонстрированы в WO2018071919 на фиг. 104G, фиг. 104H, фиг. 104AG, фиг. 104AU и фиг. 104AV, а аминокислотные последовательности указаны в последовательностях SEQ ID NO: 514 – 518, 519 – 523, 524 – 528, 849 – 853, 1063 – 1067 и 1078 – 1082, соответственно.
C. нкИЛ-15/Рα – Fc
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9C, гетеродимерный слитый белок содержит три мономера. Первый мономер содержит (в направлении от N-конца к С-концу) ИЛ-15/Рα (суши) – доменный линкер – CH2 – CH3, при этом доменный линкер иногда содержит весь шарнир или его часть. Второй мономер содержит «пустой» Fc, содержащий весь шарнир или его часть – CH2 – CH3. Третий мономер представляет собой ИЛ-15. Данная структура называется «нкИЛ-15/Рα – Fc», где «нк» означает «нековалентный»).
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, которая содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и абляционный мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc с аминокислотной заменой C220S, гетеродимерными заменами по pI S364K/E357Q, абляционными заменами E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и заменами по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате нкИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, которая содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую зрелый вариант Q108E человеческого ИЛ-15; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате нкИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – гетеро-Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и мономеры Fc, содержащие аминокислотные замены, изображенные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит одну цепь, содержащую вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши); мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате нкИЛ-15/Рα – гетеро-Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения продемонстрированы в WO2018071919 на фиг. 104AS (XENP24349, включительно с цепью 1 и цепью 2) и фиг. 104AT (XENP24383, включительно с цепью 1 и цепью 2), все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения продемонстрированы на фиг. 12A и фиг. 12B, такие как XENP21479, включительно с цепью 1 (16484) и цепью 2 (8793) и цепью 3 (16481); XENP22366, включительно с цепью 1 (16478) и цепью 2 (8924) и цепью 3 (); и XENP22366, включительно с цепью 1 (16484) и цепью 2 (8793) и цепью 3 (15908); и XENP24348.
D. Бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9D, гомодимерный слитый белок содержит четыре мономера. Первый и второй мономеры содержат (в направлении от N-конца к C-концу) ИЛ-15/Рα (суши) – доменный линкер – CH2 – CH3, при этом доменный линкер иногда включает весь шарнир или его часть. Третий и четвертый мономеры содержат ИЛ-15. Данная структура называется «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», где «нк» означает «нековалентный»).
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc включает два варианта Q108E зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта Q108E зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc включает два варианта дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; первый мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий домен ИЛ-15Рα человека (абляция) и мономер Fc, содержащий аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc предпочтительный вариант реализации данного изобретения продемонстрирован в WO2018071919 на фиг. 104E (XENP21979, включительно с цепью 1 и цепью 2) и в списке последовательностей как последовательности SEQ ID NO: 480 – 483, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В формате бивалентного нкИЛ-15/Рα – Fc предпочтительные варианты реализации данного изобретения продемонстрированы на фиг. 13, такие как XENP21978, включительно с цепью 1 (17023) и цепью 2 (16484).
E. Бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9E, гомодимерный слитый белок содержит два мономера. Первый и второй мономеры содержат (в направлении от N-конца к C-концу) ИЛ-15/Рα (суши) – доменный линкер – ИЛ-15 – необязательный доменный линкер – CH2 – CH3, при этом доменный линкер иногда включает весь шарнир или его часть. Данная структура называется «бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc», где «оц» означает «одноцепочечный» (например, комплекс ИЛ-15/Рα суши).
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N65D зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта Q108E зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащему аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит два варианта дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, два домена ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения бивалентный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc содержит первый мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и второй мономер ИЛ-15/Рα (суши) – Fc, содержащий вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с мономером Fc, содержащим аминокислотную замену C220S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
Для формата бивалентного оцИЛ-15/Рα – Fc предпочтительный вариант реализации данного изобретения продемонстрирован на фиг. 14.
F. Fc – нкИЛ-15/Рα
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9F, гетеродимерный слитый белок содержит три мономера. Первый мономер содержит (в направлении от N-конца к C-концу) CH2 – CH3 – доменный линкер – ИЛ-15/Рα (суши), при этом Fc содержит весь шарнир или его часть. Второй мономер содержит «пустой» Fc, содержащий весь шарнир или его часть – CH2 – CH3. Третий мономер представляет собой ИЛ-15. Данная структура называется «нкИЛ-15/Рα – Fc», где «нк» означает «нековалентный»).
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc (или Fc – нкИЛ-15/Рα) в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит зрелый вариант D30N/N65D ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит зрелый вариант D30N/N65D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит зрелый вариант D30N/N65D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-конце мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-конце мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C -концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N65D ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C -концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с С-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате нкИЛ-15/Рα – Fc в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 Q108E, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант Q108E ИЛ-15 человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – нкИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант ИЛ-15 дикого типа человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc содержит вариант ИЛ-15 дикого типа человека, мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с C-концом мономера Fc, содержащего аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα предпочтительные варианты реализации данного изобретения, включающие XENP22638, продемонстрированы в WO2018071919 на фиг. 104T и в списке последовательностей как SEQ ID NO: 668-672, все из которых включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В формате Fc – нкИЛ-15/Рα предпочтительные варианты реализации данного изобретения включают XENP22637 в виде цепи 1 (17603), цепи 2 (8927) и цепи 3 (16484), что продемонстрировано на фиг. 15.
G. Fc – оцИЛ-15/Рα
В данном варианте реализации данного изобретения, как продемонстрировано на фиг. 9G, гетеродимерный слитый белок содержит два мономера. Первый мономер содержит (в направлении от N-конца к С-концу) CH2 – CH3 – необязательный доменный линкер – ИЛ-15/Рα (суши) – доменный линкер – ИЛ-15, при этом Fc содержит весь шарнир или его часть. Второй мономер содержит «пустой» Fc, содержащий весь шарнир или его часть – CH2 – CH3. Данная структура называется «Fc – оцИЛ-15/Рα» или «оцИЛ-15/Рα – Fc», где «оц» означает «одноцепочечный» (например, комплекс ИЛ-15/Рα суши).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 D30N/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, показанные на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используются варианты ИЛ-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), который содержит мономер Fc, содержащий в свою очередь аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), который содержит мономер Fc, содержащий в свою очередь аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты 428L/434S на каждом из мономеров Fc. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S и варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащие аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, связанным с вариантом N1D/N65D зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант Q108E ИЛ-15.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант Q108E ИЛ-15 и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант Q108E ИЛ-15 и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, а также варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант Q108E ИЛ-15 и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, а также варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант Q108E зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом Q108E зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом Q108E зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа.
В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, а также варианты 428L/434S на обоих мономерах. В формате Fc – оцИЛ-15/Рα в предпочтительном варианте реализации данного изобретения используется вариант ИЛ-15 дикого типа и пара искаженных вариантов S364K/E357Q : L368D/K370S, а также варианты M428L/N434S на обоих мономерах.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит вариант дикого типа зрелого ИЛ-15 человека, домен ИЛ-15Рα (суши); и два мономера Fc, содержащих аминокислотные замены, которые показаны на фиг. 6Е. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок Fc – оцИЛ-15/Рα содержит мономер Fc – ИЛ-15/Рα (суши), содержащий мономер Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI L368D/K370S, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, и замены по FcRn M428L/N343S, таким образом, что домен Fc связан с доменом ИЛ-15Рα (суши) человека, в свою очередь связанным с вариантом дикого типа зрелого ИЛ-15 человека; и мономер с пустым Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные варианты по pI S364K/E357Q, изостерические замены по pI P217R/P228R/N276K, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N343S.
В формате оцИЛ-15/Рα – Fc предпочтительный вариант реализации данного изобретения продемонстрирован на фиг. 16.
VI. Частные варианты реализации данного изобретения
В данном документе представлены композиции, содержащие ненаправленные слитые белки ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в различных форматах и антитела, блокирующие контрольную точку. Также предусмотрены способы, включающие введение ненаправленных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антител, блокирующих контрольную точку, субъекту, например, субъекту-человеку.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, в композициях, описанных в данном документе, выбрано из группы, состоящей из антитела против PD-1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 выбрано из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба или пидилизумаба.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc из композиций, описанных в данном документе, организован в формате, описанном в данном документе, таком как формат ИЛ-15/ИЛ-15Рα – гетеро-Fc, формат оцИЛ-15/Рα – Fc, формат нкИЛ-15/Рα – Fc, формат бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc, формат бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc, формат Fc – нкИЛ-15/Рα или формат Fc – оцИЛ-15/Рα. В некоторых вариантах реализации данного изобретения ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc имеет формат ИЛ-15/ИЛ-15Рα – гетеро-Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc из композиции имеет формат ИЛ-15/ИЛ-15Рα – гетеро-Fc и содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc содержит вариант N65D зрелого ИЛ-15 человека; домен ИЛ-15Рα (суши) человека; мономер ИЛ-15 – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и мономер ИЛ-15Рα (суши) – Fc, содержащий аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI0 L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (а) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/E64Q/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI0 L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант N4D/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI0 L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат антитело против PD-1 и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат ниволумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пембролизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q и абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ, описанные в данном документе, содержат пидилизумаб и ненаправленный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который содержит: (a) первый мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит вариант D30N/N65D зрелого ИЛ-15 человека, связанный с мономером ИЛ-15 – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотную замену C220S, гетеродимерные замены по pI L368D/K370S, изостерические замены по pI Q295E/N384D/Q418E/N421D, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S; и (b) второй мономер, который (в направлении от N- до C-конца) содержит домен ИЛ-15Рα (суши) человека, связанный с мономером ИЛ-15Рα (суши) – Fc, который в свою очередь содержит аминокислотные замены C220S, гетеродимерные замены по pI S364K/E357Q, абляционные замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K и замены по FcRn M428L/N434S.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24306 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит ниволумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пембролизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пидилизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24045 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит ниволумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пембролизумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пидилизумаб и XENP24045.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24306 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя ниволумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя пембролизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя пидилизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24045 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя ниволумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя пембролизумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения комбинированная терапия или лечение включает в себя пидилизумаб и XENP24045. В некоторых случаях комбинированная терапия полезна для лечения онкологического заболевания, индуцирования размножения Т-клеток и (или) приводит к минимальному выпотеванию жидкости через сосуды у субъекта. В некоторых вариантах реализации данного изобретения субъекту проводится комбинированная терапия и индуцирует экспансию Т-клеток у субъекта. В некоторых случаях размноженная популяция Т-клеток, например, популяция ИОЛ (инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, англ. «TIL») превышает популяцию, наблюдаемую при введении субъекту либо антитела против PD-1, либо ненаправленного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc. В некоторых вариантах реализации данного изобретения субъекту проводится комбинированная терапия и приводит к минимальному выпотеванию жидкости через сосуды по сравнению с введением либо антитела против PD-1, либо ненаправленного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24306 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя ниволумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит пембролизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя пидилизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24045 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя ниволумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя пембролизумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ лечения рака включает в себя пидилизумаб и XENP24045.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24306 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя ниволумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя пембролизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя пидилизумаб и XENP24306. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя антитело против PD-1, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба и пидилизумаба, и XENP24045 (включительно с идентификаторами последовательностей указанных соединений, как будет понятно специалистам в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя ниволумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя пембролизумаб и XENP24045. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ размножения Т-клеток у субъекта включает в себя пидилизумаб и XENP24045.
Проведение лечения антителом против PD-1 и иллюстративным вариантом слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc индуцирует пролиферацию Т-клеток, включительно с активированными Т-клетками, у субъекта. Как продемонстрировано в Примере 22, комбинация антитела против PD-1 (например, XENP16432) и вариантов слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24306) может приводить к значительному увеличению численности лимфоцитов in vivo по сравнению с эффектом от одного только антитела против PD-1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против PD-1 и иллюстративного варианта слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc индуцирует продуцирование ИФН-γ. В некоторых случаях уровень продуцирования ИФН-γ увеличивается при введении антитела против PD-1 и слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc. Уровень ИФН-γ является более высоким при проведении лечения, включающего антитело против PD-1 и слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, по сравнению с одним только антителом против PD-1 или с одним только слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против PD-1 и иллюстративного варианта слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc уменьшает размер опухоли. В некоторых случаях размер опухоли является меньшим при проведении лечения, включающего антитело против PD-1 и слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, по сравнению с одним только антителом против PD-1 или с одним только слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и любой из гетеродимерных слитых белков согласно данному изобретению. Как будет понятно специалистам в данной области техники и как более подробно обсуждается ниже, гетеродимерные слитые белки согласно данному изобретению могут принимать большое количество разнообразных конфигураций, которые в обобщенном виде изображены на фиг. 9A – 9G и фиг. 39A – 39D. Аминокислотные последовательности иллюстративных слитых белков представлены на фиг. 12A, фиг. 12B, фиг. 13, фиг. 14, фиг. 15, фиг. 16, фиг. 40A, фиг. 40B, фиг. 41A, фиг. 41B, фиг. 42, фиг. 43, фиг. 48A – 48H, фиг. 49A – 49D, фиг. 50A – 50B, фиг. 51, фиг. 52, фиг. 53, фиг. 99A – 99C, фиг. 100, фиг. 101 и фиг. 102, как будет очевидно из соответствующих идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и любой иллюстративный белок «ИЛ-15/Рα – гетеро Fc» и «дсИЛ-15/Рα – гетеро Fc». Многие из вариантов реализации данного изобретения, описанных в данном документе, в целом основаны на формате, который содержит первый мономер (первый слитый белок), содержащий белковый домен ИЛ-15, ковалентно присоединенный с использованием первого доменного линкера к N-концу первого домена Fc, и второй мономер (второй слитый белок), содержащий белковый домен ИЛ-15Рα, ковалентно присоединенный с использованием второго доменного линкера к N-концу второго домена Fc. Иллюстративные варианты реализации данного изобретения в указанном формате («ИЛ-15/Рα – гетеро Fc» и «дсИЛ-15/Рα – гетеро Fc») включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559, XENP23561, XENP24018, XENP24019, XENP24020, XENP24051, XENP24052, XENP23504, XENP24306, XENP24306, XENP23343, XENO24113, XENP24341 и XENP24301 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и слитый гетеродимерный белок ИЛ-15/Рα – Fc, имеющий формат «ИЛ-15/Рα – гетеро Fc» и «дсИЛ-15/Рα – гетеро Fc» соединения XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366, XENP22684, XENP22361, XENP22816, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22829, XENP22834, XENP23554, XENP23557, XENP23561, XENP24018, XENP24019, XENP24045, XENP24051, XENP24052, XENP23343, XENP23504, XENP24113, XENP24301, XENP24306, XENP24341, XENP23472, XENP23473, XENP22815, XENP22817, XENP22818, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP23555, XENP23559, XENP23560, XENP24017, XENP24020, XENP24043 или XENP24048 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 41A, фиг. 41B, фиг. 48A, фиг. 48B, фиг. 48C, фиг. 48D, фиг. 48E, фиг. 48F, фиг. 48G, фиг. 48H, фиг. 53, фиг. 90A, фиг. 99B и фиг. 99C, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и гетеродимерный слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc, который содержит слитый белок, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу второго домена белка через первый доменный линкер, который ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc через второй доменный линкер, и второй домен Fc (например, пустой домен Fc). В некоторых случаях первый белковый домен представляет собой белковый домен ИЛ-15Рα, а второй белковый домен представляет собой белковый домен ИЛ-15. Иллюстративный вариант реализации такого формата («оцИЛ-15/Рα – Fc») включает, но не ограничивается им, XENP21478 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, имеющий формат «оцИЛ-15/Рα – Fc» соединения XENP24013, XENP24014, XENP24016, XENP24015, XENP24050, XENP24475, XENP24476, XENP24478, XENP24479, XENP24481 и XENP25938 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 49A, фиг. 49B, фиг. 49C, фиг. 49D и фиг. 100, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и гетеродимерный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc или дсИЛ-15/Рα – Fc, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу первого домена Fc через доменный линкер, второй домен Fc (например, пустой домен Fc) и второй белковый домен, который нековалентно присоединен к первому белковому домену. В некоторых случаях первый белковый домен представляет собой белковый домен ИЛ-15, а второй белковый домен представляет собой белковый домен ИЛ-15Рα. Иллюстративный вариант реализации такого формата («нкИЛ-15/Рα – Fc» или «дсИЛ-15/Рα – Fc») включает следующие соединения, но не ограничивается ими: XENP21479, XENP22357, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366, XENP22637, XENP24348, XENP24349 и XENP24383 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, имеющий формат «нкИЛ-15/Рα – Fc», представляет собой XENP21479, XENP22366, XENP24348, XENP24383, XENP24349, XENP24890 и XENP25138 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 12A, фиг. 12B, фиг. 50A, фиг. 50B и фиг. 101, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включают в себя антитело против PD-1 и бивалентный слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc или бивалентный слитый белок дсИЛ-15/Рα – Fc, который содержит первый слитый белок, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу указанного первого домена Fc через первый доменный линкер, второй слитый белок, содержащий второй белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу указанного второго домена Fc через второй доменный линкер, третий белковый домен, нековалентно присоединенный к указанному первому белковому домену указанного первого слитого белка, и четвертый белковый домен, нековалентно присоединенный к указанному второму белковому домену указанного второго слитого белка. В некоторых случаях первый и второй белковые домены представляют собой белковые домены Rα ИЛ-15, а третий и четвертый белковые домены представляют собой белковые домены ИЛ-15. Иллюстративный вариант реализации такого формата («бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc» или «бивалентный дсИЛ-15/Рα – Fc») включает в себя следующие соединения, но не ограничивается ими: XENP21978, XENP22634, XENP24342 и XENP24346 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα– Fc, имеющий формат «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», представляет собой XENP21978, XENP24342, XENP24346 и XENP24351 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 13, фиг. 52 и фиг. 102, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
Другой полезный формат («бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc») представлен здесь на фиг. 14, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция или способ включает в себя антитело против PD-1 и слитый белок Fc – нкИЛ-15/Рα или слитый белок Fc – дсИЛ-15/Рα, который содержит первый слитый белок, содержащий первый домен Fc, ковалентно присоединенный к N-концу первого белкового домена с использованием доменного линкера, второй домен Fc (например, пустой домен Fc) и второй белковый домен, нековалентно присоединенный к указанному первому белковому домену. Иллюстративный вариант реализации такого формата («Fc – нкИЛ-15/Рα» или «Fc – дсИЛ-15/Рα») включает в себя следующие соединения, но не ограничивается ими: XENP22637 и XENP22639, а также те, что изображены на фиг. 15, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый белок и второй белок присоединены друг к другу через линкер (фиг. 9G).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, имеющий формат «Fc – нкИЛ-15/Рα», представляет собой XENP22637 и XENP22638. Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 15, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, имеющий формат «Fc – оцИЛ-15/Рα», представлен на фиг. 16, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, имеющий формат «Fc – дсИЛ-15/Рα», представляет собой XENP22639 и XENP22640. Иллюстративные аминокислотные последовательности таких форматов представлены на фиг. 42, как будет очевидно из идентификаторов последовательностей.
Для любого из гетеродимерных слитых белков Fc, описанных в данном документе, первый доменный линкер и второй доменный линкер могут быть одинаковыми или разными. Кроме того, первый домен Fc и второй домен Fc гетеродимерного белка могут иметь разные аминокислотные последовательности.
Домены Fc согласно данному изобретению включают домены Fc из IgG, например, домены Fc из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, при этом домены Fc из IgG1, IgG2 и IgG4 находят конкретное применение в некоторых вариантах реализации данного изобретения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и второй домены Fc содержат набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из: L368D/K370S и S364K; L368D/K370S и S364K/E357L; L368D/K370S и S364K/E357Q; T411E/K360E/Q362E и D401K; L368E/K370S и S364K; K370S и S364K/E357Q; K370S и S364K/E357Q; S267K/L368D/K370S и S267K/S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых случаях первый и (или) второй домены Fc любого из форматов гетеродимерных слитых белков Fc, описанных в данном документе, могут иметь дополнительный набор аминокислотных замен, включающий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с системой нумерации EU.
Дополнительные гетеродимеризационные варианты могут быть независимо и необязательно включены и выбраны из вариантов, обозначенных на фигурах. Данные композиции могут дополнительно содержать абляционные варианты, варианты по pI, заряженные варианты, изотипические варианты и т.д.
В данном документе представлены композиции, содержащие антитела против PD-1 и гетеродимерные слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями на границе раздела ИЛ-15/Рα (см., например, Пример 2). Такие слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc могут индуцировать или способствовать пролиферации иммунных клеток, включая NK-клетки, CD8 + T-клетки и CD4 + T-клетки.
В данном документе также представлены композиции, содержащие антитела против PD-1 и слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированные с целью понижения активности (также называемые «аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc»; см., например, Пример 3). В некоторых случаях варианты слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc демонстрируют улучшенную фармакокинетику, пониженную активность и пролонгированный (например, увеличенный) период полужизни.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиции, содержащие антитела против PD-1 и варианты слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированные с целью снижения их активности, также сконструированы с заменой Xtend в Fc (FcRn), таким образом, что каждый мономер Fc содержит аминокислотные замены M428L/N434S. Иллюстративные варианты реализации таких вариантов ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend изображены на фиг. 99А – 99C, фиг. 100, фиг. 101 и фиг. 102 (см. также таблицу 6). Введение вариантов ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend индуцирует у субъекта пролиферацию Т-клеток, включительно с активированными Т-клетками. Как продемонстрировано в Примере 4D, аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc с доменным линкером (например, XENP24113) могут вызывать более значительное увеличение числа лимфоцитов in vivo по сравнению с соответствующими аффинными вариантами ИЛ-15/Рα – Fc без линкера (только с шарниром; например, XENP24341). Аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc могут обеспечивать пролонгированную фармакологию Т-клеток.
Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению могут предпочтительно связываться с Т-клетками и NK-клетками, и в некоторых случаях избирательно нацеливаться на активированные Т-клетки в раковой среде в организме субъекта. Примечательно, что варианты слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc (например, аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc) без доменных линкеров (только с шарниром; например, XENP24341) продемонстрировали меньшее связывание с различными популяциями лимфоцитов, чем соответствующие аффинные варианты ИЛ-15/Рα – Fc с доменным линкером (например, XENP24113) (см. фиг. 117).
Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, описанные в данном документе, могут усиливать противоопухолевые эффекты активированных Т-клеток (см. Примеры 5B и 5C). В одном из вариантов реализации данного изобретения слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, описанные в данном документе, могут индуцировать пролиферацию CD8 + Т-клеток (например, активированных CD8 + Т-клеток) и CD4 + Т-клеток (например, активированных CD4 + Т-клеток). В некоторых случаях слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc могут индуцировать преимущественную пролиферацию CD8 + T-клеток по сравнению с CD4 + T-клетками. В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, описанные в данном документе, могут индуцировать пролиферацию CD8 + Т-клеток (например, фракций CD69 +/ ИФН-γ + и (или) фракций CD69 +/ Ki-67 + CD8 + Т-клеток) и CD4 + Т-клеток (например, фракций CD69 +/ ИФН-γ + и (или) фракций CD69 +/ Ki-67 + CD4+ Т-клеток). Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению могут способствовать киллингу опухолевых клеток и могут избирательно увеличивать количество активированных лимфоцитов, в том числе инфильтрирующих опухоль лимфоцитов. Примечательно, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc могут предпочтительно индуцировать пролиферацию CD8 + и CD4 + Т-клеток.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, описанные в данном документе, могут усиливать противоопухолевые эффекты у субъектов, которым вводят такие белки. Как проиллюстрировано в Примерах, описанных ниже (см. Пример 5D), лечение слитыми белками ИЛ-15/Рα – Fc значительным образом снижает рост опухолей у субъектов, имеющих опухоли, по сравнению с лечением без таких слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения снижение эффективности слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc с заменами Xtend в Fc и без них, описанными в данном документе, может улучшить как их фармакодинамику, так и их фармакокинетику в организме субъектов, которым вводят такие белки. Как проиллюстрировано в Примерах, описанных ниже (см. Пример 6), слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc с заменами Xtend (FcRn) (например, варианты M428L/N434S на каждом из мономеров Fc) согласно данному изобретению, такие как XmAb24306 и XENP23343, демонстрируют более длительный период полужизни в сыворотке крови у субъектов по сравнению с соответствующими слитыми белками ИЛ-15/Рα – Fc без замен Xtend. В некоторых случаях замены Xtend значительно улучшали экспозицию, о чем свидетельствует увеличение периода полужизни.
Ниже продемонстрировано (см. Пример 7), что варианты ИЛ-15/Рα – Fc с пониженной активностью, такие как XENP22821, могут увеличивать количество лимфоцитов на более длительный срок, чем описанные в данном документе слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc дикого типа, такие как XENP20818. Примечательно, что XENP23343, аналог белка XENP22821, имеющий замену Xtend, дополнительно увеличивал продолжительность размножения лимфоцитов по сравнению с XENP22821.
Как показано в Примерах, описанных ниже (см. Пример 8), слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, такие как XmAb24306 (также называемый XENP24306), но не ограничиваясь им, могут преодолевать супрессию, оказываемую клетками Treg на пролиферацию эффекторных Т-клеток, индуцированную антителами против CD3.
Как описано в данном документе (см. Пример 9), слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, такие как XENP24045, но не ограничиваясь им, могут способствовать размножению лейкоцитов и усугублять ксеногенную БТПХ в диапазоне уровней доз. Примечательно, что комбинированная терапия с XENP24045 и антителом против PD-1, таким как XENP13432, показала синергизм (например, синергический эффект), особенно при низкой дозе.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению представляет собой XENP23557 (см. фиг. 48E). XENP23557 содержит цепь 1 (человеческий_ИЛ-15_N4D/N65D_ (GGGGS) 1_Fc (216) _IgG1_pI (-) _ Изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (18786)) и цепь 2 (человеческий_ИЛ-15Рa (суши)_(GGGGS)1_Fc (216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (15908)).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению представляет собой XENP24045 (см. фиг. 48E). XENP24045 содержит цепь 1 (человеческий_ИЛ-15_D30N/E64Q/N65D_ (GGGGS) 1_Fc (216) _IgG1_pI (-) _ Изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S) и цепь 2 (человеческий_ИЛ-15Рa (суши)_(GGGGS)1_ Fc (216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению представляет собой XENP24113 (см. фиг. 99B). XENP24113 содержит цепь 1 (человеческий_ИЛ-15_N4D/N65D_ (GGGGS) 1_Fc (216) _IgG1_pI (-) _ Изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S/M428L/N434S) и цепь 2 (человеческий_ИЛ-15Рa (суши)_(GGGGS)1_Fc (216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q/M428L/N434S).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению представляет собой XENP24306 (см. фиг. 99C). XENP24306 содержит цепь 1 (человеческий_ИЛ-15_D30N/E64Q/N65D_ (GGGGS) 1_Fc (216) _IgG1_pI (-) _ Изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S/M428L/N434S) и цепь 2 (человеческий_ИЛ-15Рα (суши)_(GGGGS)1_Fc (216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q/M428L/N434S).
Соответственно, в одном аспекте данного изобретения представлен гетеродимерный белок, содержащий а) первый слитый белок, который содержит первый белковый домен и первый домен Fc, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc с использованием первого доменного линкера; b) второй слитый белок, который содержит второй белковый домен и второй домен Fc, причем второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу домена Fc с использованием второго доменного линкера; при этом первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, и при этом первый белковый домен содержит белок ИЛ-15, а второй белковый домен содержит белок ИЛ-15Рα. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc напрямую и без использования первого доменного линкера, и (или) второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго домена Fc напрямую и без использования второго доменного линкера. В некоторых вариантах реализации данного изобретения также представлено антитело, блокирующее контрольную точку, такое как антитело против PD-1.
В некоторых случаях гетеродимерный белок выбран из группы, состоящей из следующего: XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559, XENP24019 и XENP24020 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В дополнительном аспекте, в данном изобретении представлен гетеродимерный белок, содержащий: а) слитый белок, который содержит первый белковый домен, второй белковый домен и первый домен Fc, где первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго белкового домена с использованием первого доменного линкера, при этом второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc с использованием второго доменного линкера; б) второй домен Fc; при этом первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, при этом первый белковый домен содержит белок ИЛ-15Рα, а второй белковый домен содержит белок ИЛ-15. В некоторых случаях также представлено антитело, блокирующее контрольную точку, такое как антитело против PD-1.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный белок может представлять собой XENP21478.
В другом аспекте, в данном изобретении представлен гетеродимерный белок, содержащий: а) слитый белок, который содержит первый белковый домен и первый домен Fc, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc с использованием доменного линкера; б) второй домен Fc; и c) второй белковый домен, нековалентно связанный с первым белковым доменом; при этом первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, при этом первый белковый домен содержит белок ИЛ-15Рα, а второй белковый домен содержит белок ИЛ-15. В некоторых случаях также представлено антитело, блокирующее контрольную точку, такое как антитело против PD-1.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный белок может быть выбран из группы, состоящей из следующего: XENP21479, XENP22357, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366 и XENP22637 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей).
В дополнительном аспекте, в данном изобретении представлен гетеродимерный белок, содержащий: а) первый слитый белок, который содержит первый белковый домен и первый домен Fc, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу указанного первого домена Fc с использованием доменного линкера; b) второй слитый белок, который содержит вторую тяжелую цепь, содержащую второй белковый домен, и первую тяжелую цепь, содержащую второй домен Fc, при этом второй белковый домен ковалентно присоединен к С-концу второго домена Fc с использованием доменного линкера; c) третий белковый домен, который нековалентно присоединен к первому белковому домену первого слитого белка; и d) четвертый белковый домен, который нековалентно присоединен ко второму белковому домену второго слитого белка, причем первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, и при этом первый белковый домен и второй белковый домен содержат белок ИЛ-15Рα, и при этом третий белковый домен и четвертый белковый домен содержат белок ИЛ-15. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный белок может представлять собой XENP21978 или XENP22634. В некоторых случаях также представлено антитело, блокирующее контрольную точку, такое как антитело против PD-1.
В дополнительном аспекте, в данном изобретении представлен гетеродимерный белок, содержащий: a) первый слитый белок, который содержит первый домен Fc и первый белковый домен, где первый домен Fc ковалентно присоединен к N-концу первого домена белка с использованием доменного линкера; б) второй домен Fc, и в) второй белковый домен, который нековалентно присоединен к первому белковому домену первого слитого белка; при этом первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, и при этом первый белковый домен содержит белок ИЛ-15Рα, а второй белковый домен содержит белок ИЛ-15. В некоторых случаях также представлено антитело, блокирующее контрольную точку, такое как антитело против PD-1.
В любом из вариантов реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc могут иметь дополнительный набор аминокислотных замен, включающий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых случаях первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с системой нумерации EU.
В любом из вариантов реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет полипептидную последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из полноразмерного ИЛ-15 человека и усеченного ИЛ-15 человека, а белок ИЛ-15Рα имеет полипептидную последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из полноразмерного ИЛ-15Рα человека и домена суши из ИЛ-15Рα человека. В некоторых случаях белок ИЛ-15 и белок ИЛ-15Рα имеют набор аминокислотных замен или добавлений, выбранных из группы, состоящей из E87C : D96/P97/C98; E87C : D96/C97/A98; V49C : S40C; L52C : S40C; E89C : K34C; Q48C : G38C; E53C : L42C; C42S : A37C; и L45C : A37C, соответственно.
В дополнительном аспекте, в данном изобретении представлено антитело, блокирующее контрольную точку, и гетеродимерный белок, который выбран из группы, состоящей из следующего: XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP21478, XENP21479, XENP21978, XENP22013, XENP22015, XENP22017, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366, XENP22637 и XENP22639 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). В некоторых аспектах данного изобретения представлен гетеродимерный белок, который выбран из группы, состоящей из следующего: XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559, XENP24019 и XENP24020 (включительно с соответствующими идентификаторами последовательностей). Также представлены нуклеиновые кислоты, экспрессионные векторы и клетки-хозяева в дополнение к способам получения этих белков и лечения с их помощью пациентов.
В некоторых аспектах в данном документе представлен способ лечения рака у пациента, который в этом нуждается, и минимизации уровня выпотевания жидкости через сосуды у указанного пациента. Такой способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, например, антитела против PD-1, и терапевтически эффективного количества описанного в данном документе гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, или фармацевтической композиции, описанной в данном документе.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ также включает введение терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой атезолизумаб, авелумаб или дурбалумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения уровень выпотевания жидкости через сосуды варьирует от снижения на 20% или менее, например, снижение на 20%, снижение на 19%, снижение на 18%, снижение на 17%, снижение на 16%, снижение на 20%, снижение на 20%, снижение на 20%, снижение на 20%, снижение на 20%, снижение на 15%, снижение на 14%, снижение на 13%, снижение на 12%, снижение на 11%, снижение на 10%, или меньшего снижения в уровне сывороточного альбумина у пациента после введения гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела против PD-1. В некоторых случаях такое снижение сывороточного альбумина происходит в период с 1-х по 15-е сутки после введения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения снижение происходит (или может быть обнаружено) в 1-е сутки, во 2-е сутки, в 3-е сутки, в 4-е сутки, в 5-е сутки, в 6-е сутки, в 7-е сутки, в 8-е сутки, в 9-е сутки, в 10-е сутки, в 11-е сутки, в 12-е сутки, в 13-е сутки, в 14-е сутки, в 15-е сутки или позже после введения гетеродимерного слитого белка FИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела против PD-1.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента наблюдается увеличение в от 2 до 15 раз, например, увеличение в 2 раза, увеличение в 3 раза, увеличение в 4 раза, увеличение в 5 раз, увеличение в 6 раз, увеличение в 7 раз, увеличение в 8 раз, увеличение в 9 раз, увеличение в 10 раз, увеличение в 11 раз, увеличение в 12 раз, увеличение в 13 раз, увеличение в 14 раз или увеличение в 15 раз в числе лимфоцитов после введения гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела против PD-1. В некоторых случаях такое увеличение в числе лимфоцитов происходит в период с 1-х по 15-е сутки после введения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения увеличение в числе лимфоцитов происходит (или может быть обнаружено) в 1-е сутки, во 2-е сутки, в 3-е сутки, в 4-е сутки, в 5-е сутки, в 6-е сутки, в 7-е сутки, в 8-е сутки, в 9-е сутки, в 10-е сутки, в 11-е сутки, в 12-е сутки, в 13-е сутки, в 14-е сутки, в 15-е сутки или позже после введения.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента наблюдается увеличение в от 2 до 13 раз, например, увеличение в 2 раза, увеличение в 3 раза, увеличение в 4 раза, увеличение в 5 раз, увеличение в 6 раз, увеличение в 7 раз, увеличение в 8 раз, увеличение в 9 раз, увеличение в 10 раз, увеличение в 11 раз, увеличение в 12 раз или увеличение в 13 раз в числе периферических CD8+ T-клеток после введения гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела против PD-1. В некоторых случаях такое увеличение в числе периферических CD8+ Т-клеток происходит в период с 1-х по 15-е сутки после введения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения увеличение в числе периферических CD8+ Т-клеток происходит (или может быть обнаружено) в 1-е сутки, во 2-е сутки, в 3-е сутки, в 4-е сутки, в 5-е сутки, в 6-е сутки, в 7-е сутки, в 8-е сутки, в 9-е сутки, в 10-е сутки, в 11-е сутки, в 12-е сутки, в 13-е сутки, в 14-е сутки, в 15-е сутки или позже после введения.
В некоторых аспектах в данном документе представлен способ индукции размножения Т-клеток у пациента, нуждающегося в этом, без увеличения вероятности индукции гипоальбуминемии, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества описанного в данном документе гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc или описанной в данном документе фармацевтической композиции. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ также включает введение терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение T-клеток приводит к увеличению числа T-клеток по меньшей мере в 2 раза, например, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 6 раз, в 7 раз, в 8 раз, в 9 раз, в 10 раз, в 11 раз, в 12 раз, в 13 раз, в 14 раз, в 15 раз, в 16 раз, в 17 раз, в 18 раз, в 19 раз, в 20 раз, в 21 раз или в большее число раз. В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение T-клеток приводит к увеличению числа T-клеток в от 2-х до 15-ти раз, например, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 6 раз, в 7 раз, в 8 раз, в 9 раз, в 10 раз, в 11 раз, в 12 раз, в 13 раз, в 14 раз или в 15 раз. В некоторых случаях такое размножение Т-клеток происходит в период с 1-х по 15-е сутки после введения гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела, блокирующего контрольную точку, например, антитела против PD-1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение Т-клеток происходит (или может быть обнаружено) в 1-е сутки, во 2-е сутки, в 3-е сутки, в 4-е сутки, в 5-е сутки, в 6-е сутки, в 7-е сутки, в 8-е сутки, в 9-е сутки, в 10-е сутки, в 11-е сутки, в 12-е сутки, в 13-е сутки, в 14-е сутки, в 15-е сутки или позже после введения гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела, блокирующего контрольную точку, например, антитела против PD-1.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения описанный в данном документе гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в комбинации с антителом против PD-1 усиливает размножение лимфоцитов по сравнению с контрольным белком, содержащим ИЛ-15 или ИЛ-15Рα, а также приводит к уменьшению падения альбумина (данные показаны на фиг. 203). Уменьшение падения альбумина указывает на превосходный терапевтический индекс для гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитела против PD-1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в комбинации с антителом против PD-1 способствует по меньшей мере 3-кратному (200%) возрастанию числа периферических CD8 + Т-клеток. В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в комбинации с антителом против PD-1 опосредовал или способствовал степени снижения альбумина, не превышающей 15%. В некоторых случаях гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc в комбинации с антителом против PD-1 вызывал или индуцировал снижение уровней альбумина, которое ниже, чем у контрольного белка, содержащего ИЛ-15 или ИЛ-15Рα. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенту, описанному в данном документе, вводят гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело против PD-1, что способствует по меньшей мере 11-кратному (1000%) возрастанию числа периферических CD8 + Т-клеток при сохранении уровней альбумина выше 20%-го снижения.
Данное изобретение относится к способу индукции размножения Т-клеток у пациента путем введения антитела, блокирующего контрольную точку, и белка ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα, усовершенствование включает введение пациенту антитела против PD-1 и вариантного белка ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα, при этом вариантный белок ИЛ-15 имеет пониженную аффинность, так что у пациента снижается вероятность гипоальбуминемии.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 имеет одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D и Q108E. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N1D или по меньшей мере замену N1D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N4D или по меньшей мере замену N4D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N1D или по меньшей мере замену D8N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену D30N или по меньшей мере замену D30N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену D61N или по меньшей мере замену D61N. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену E64Q или по меньшей мере замену E64Q. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N65D или по меньшей мере замену N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену Q108E или по меньшей мере замену Q108E.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену, которая выбрана из группы, состоящей из N4D, N65D, N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N4D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотные замены N4D/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотные замены D30N/N65D. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα представляет собой любой из описанных в данном документе гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc.
Соответственно, в одном аспекте данного изобретения представлен гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, содержащий (а) первый слитый белок, который содержит первый белковый домен и первый домен Fc, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc с использованием первого доменного линкера; (b) второй слитый белок, который содержит второй белковый домен и второй домен Fc, при этом второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу домена Fc с использованием второго доменного линкера; при этом первый и второй домены Fc имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с системой нумерации EU, и при этом первый белковый домен содержит белок ИЛ-15, а второй белковый домен содержит белок ИЛ-15Рα. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc напрямую и без использования первого доменного линкера, и (или) второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго домена Fc напрямую и без использования второго доменного линкера.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, включающий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый и (или) второй домены Fc имеют дополнительную аминокислотную замену M428L/N434S, в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет полипептидную последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из полноразмерного белка ИЛ-15 человека и усеченного белка ИЛ-15 человека, и указанный белок ИЛ-15Рα имеет полипептидную последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из полноразмерного белка ИЛ-15Рα человека и домена суши из белка ИЛ-15Рα человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет одну или более аминокислотных замен, которые выбраны из группы, состоящей из N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D и Q108E. В конкретных вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену, которая выбрана из группы, состоящей из N4D, N65D, N4D/N65D и D30N/E64Q/N65D.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок ИЛ-15 и белок ИЛ-15Рα имеют набор аминокислотных замен или добавлений, которые выбраны из группы, состоящей из E87C : D96/P97/C98; E87C : D96/C97/A98; V49C : S40C; L52C : S40C; E89C : K34C; Q48C : G38C; E53C : L42C; C42S : A37C; и L45C : A37C, соответственно.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого домена Fc напрямую и без использования первого доменного линкера, и (или) второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго домена Fc напрямую и без использования второго доменного линкера.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc выбран из группы, состоящей из XENP20818, XENP22013, XENP22014, XENP22015, XENP22017, XENP23343, XENP23504, XENP23557, XENP24045, XENP24113, XENP24301, XENP24306 и XENP24341.
Также представлены нуклеиновые кислоты, экспрессионные векторы и клетки-хозяева в дополнение к способам получения этих белков и лечения с их помощью пациентов.
В одном аспекте, в данном изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая любой из гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, описанных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом аспекте, в данном изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, который выбран из группы, состоящей из XENP20818, XENP22013, XENP22014, XENP22015, XENP22017, XENP23343, XENP23504, XENP23557, XENP24045, XENP24113, XENP24301, XENP24306 и XENP24341; и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте, в данном изобретении представлен способ лечения рака у пациента, который в этом нуждается, включающий введение такому пациенту терапевтически эффективного количества любого из гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, описанных в данном документе, или их фармацевтической композиции. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ также включает введение терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых случаях антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб. В некоторых случаях антитело против PD-L1 представляет собой атезолизумаб, авелумаб или дурбалумаб.
Дополнительные гетеродимерные слитые белки ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc подробно описаны, например, в заявке на патент США № 62/408655, поданной 14 октября 2016 г., в заявке на патент США № 62/416087, поданной 1 ноября 2016 г., в заявке на патент США 62/443465, поданной 6 января 2017 г., в заявке на патент США № 62/477926, поданной 28 марта 2017 г., в заявке на патент США № 15/785401, поданной 16 октября 2017 г., и в WO 2018071919, которые явным образом включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме, с конкретной ссылкой на фигуры, подписи к фигурам и формулы изобретений указанных заявок.
В одном аспекте, в данном изобретении представлен способ лечения рака у пациента, который в этом нуждается, и минимизации уровня выпотевания жидкости через сосуды у пациента. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает в себя введение пациенту терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, описанного в данном документе, или фармацевтической композиции, описанной в данном документе.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ также включает введение терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой атезолизумаб, авелумаб или дурбалумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения уровень выпотевания жидкости через сосуды варьирует от 20%-го или меньшего снижения сывороточного альбумина у пациента после введения.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента после введения наблюдается увеличение количества лимфоцитов в от 2-х до 15-ти раз.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента после введения наблюдается увеличение количества периферических CD8+ Т-клеток в от 2-х до 13-ти раз.
В одном аспекте, в данном изобретении представлен способ индуцирования размножения Т-клеток у пациента, нуждающегося в этом, без увеличения вероятности индукции гипоальбуминемии, включающий введение терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, описанного в данном документе, или фармацевтической композиции, описанной в данном документе.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ также включает введение терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело, блокирующее контрольную точку, выбрано из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против TIM3, антитела против TIGIT, антитела против LAG3 и антитела против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой атезолизумаб, авелумаб или дурбалумаб.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение Т-клеток представляет собой по меньшей мере 2-кратное увеличение количества Т-клеток. В некоторых вариантах реализации данного изобретения размножение Т-клеток колеблется от 2-кратного до 15-кратного увеличения количества Т-клеток.
В некоторых аспектах данное изобретение относится к способу индукции размножения Т-клеток у пациента путем введения белка ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα, усовершенствование включает введение пациенту вариантного белка ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα, при этом вариантный белок ИЛ-15 имеет пониженную аффинность, так что у пациента снижается вероятность гипоальбуминемии.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 имеет одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D и Q108E.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 имеет аминокислотную замену, которая выбрана из группы, состоящей из N4D, N65D, N4D/N65D и D30N/E64Q/N65D.
В некоторых вариантах реализации способа, описанного в данном документе, вариантный белок ИЛ-15 в комплексе с белком ИЛ-15Рα представляет собой любой из описанных в данном документе гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc.
VII. Нуклеиновые кислоты согласно данному изобретению
Данное изобретение также относится к композициям нуклеиновых кислот, кодирующих гетеродимерный слитый белок Fc согласно данному изобретению (или, в случае белка мономерного домена Fc, нуклеиновые кислоты, кодирующие также и их).
Как будет понятно специалистам в данной области техники, композиции нуклеиновых кислот будут зависеть от формата гетеродимерного белка. Таким образом, например, когда для формата требуется три аминокислотные последовательности, то три последовательности нуклеиновой кислоты могут быть включены в один или несколько экспрессионных векторов для экспрессии. Точно так же для некоторых форматов необходимы только две нуклеиновые кислоты; опять же, они могут быть помещены в один или два экспрессионных вектора.
Как известно в данной области техники, нуклеиновые кислоты, кодирующие компоненты согласно данному изобретению, могут быть включены в экспрессионные векторы, известные в данной области техники, и, в зависимости от клеток-хозяев, использоваться для получения гетеродимерных слитых белков Fc согласно данному изобретению. Как правило, нуклеиновые кислоты функционально связаны с любым количеством регуляторных элементов (промоторов, точек начала репликации, селектируемых маркеров, сайтов связывания рибосом, индукторов и т.д.). Экспрессионные векторы могут представлять собой внехромосомные или интегрирующие векторы.
Затем нуклеиновые кислоты и (или) экспрессионные векторы согласно данному изобретению трансформируют в любое количество различных типов клеток-хозяев, как хорошо известно в данной области техники, в том числе – в клетки млекопитающих, бактерий, дрожжей, насекомых и (или) грибов, при этом клетки млекопитающих (например, клетки СНО) находят применение во многих вариантах реализации данного изобретения.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения каждая из нуклеиновых кислот, кодирующая каждый мономер, сообразно обстоятельствам и в зависимости от формата, каждая содержится в одном экспрессионном векторе, как правило, под контролем различных или одинаковых промоторов. В вариантах реализации данного изобретения с особой применимостью в данном изобретении каждая из этих двух или трех нуклеиновых кислот содержится в разных экспрессионных векторах.
Гетеродимерный слитый белок Fc согласно данному изобретению получают путем культивирования клеток-хозяев, содержащих экспрессионный (экспрессионные) вектор (векторы), как хорошо известно в данной области техники. После получения выполняются традиционные стадии очистки слитых белков или антител, в том числе – стадия ионообменной хроматографии. Как обсуждается в данном документе, наличие значений pI двух мономеров, отличающихся по меньшей мере на 0,5, может способствовать разделению с помощью метода ионообменной хроматографии или изоэлектрической фокусировки, или других способов, чувствительных к изоэлектрической точке. То есть, вводят в состав замены по pI, которые изменяют изоэлектрическую точку (pI) каждого мономера, таким образом, что каждый мономер имеет другое значение pI, и гетеродимер также имеет другое значение pI, что, таким образом, облегчает изоэлектрическую очистку гетеродимера (например, с использованием анионообменных колонок, катионообменных колонок). Указанные замены также облегчают определение и мониторинг любых загрязняющих гомодимеров после очистки (например, гели ИЭФ, кИЭФ и аналитические ионообменные (ИО) колонки).
VIII. Биологическая и биохимическая функциональность иммуномодулирующих гетеродимерных слитых белков ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc
Обычно гетеродимерные белки, слитые с Fc, согласно данному изобретению вводят пациентам с раком, и эффективность оценивают несколькими способами, как описано в данном документе. Таким образом, наряду с проведением стандартных анализов эффективности, таких как определение раковой нагрузки, размера опухоли, оценка наличия или степени метастазирования и т.д., эффективность лечения с применением иммуно-онкологических препаратов также можно оценивать на основе параметров иммунного статуса. Это можно осуществлять с помощью ряда способов, включая анализы как in vitro, так и in vivo. Например, может быть проведена оценка изменений в иммунном статусе (например, наличие ICOS+ CD4+ T-клеток после лечения ipi) наряду с «традиционными» измерениями, такими как опухолевая нагрузка, размер опухоли, инвазивность, вовлечение ЛУ, метастазирование и т.д. Таким образом, можно оценить любой или все из следующих параметров: ингибирующие эффекты белка PVRIG на активацию или пролиферацию CD4+ T-клеток, активацию или пролиферацию CD8+ T (ЦТК) клеток, цитотоксическую активность, опосредованную CD8+ T-клетками, и (или) ЦТК-опосредованное деплетирование клеток, активность NK-клеток и деплетирование клеток, опосредованное NK-клетками, потенцирующие эффекты PVRIG на дифференцировку и пролиферацию Treg-клеток, или иммуносупрессию либо иммунотолерантность, опосредованные Treg- или супрессорными клетками миелоидного происхождения (СКМП), и (или) эффекты PVRIG на продукцию провоспалительных цитокинов иммунными клетками, например, продукцию ИЛ-2, ИФН-ɣ или ФНО-α Т-клетками или другими клетками иммунной системы.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения оценку лечения проводят путем анализа пролиферации иммунных клеток, применяя, например, метод разведения КФСЭ (англ. «CFSE»), внутриклеточное окрашивание иммунных эффекторных клеток с помощью Ki67 и метод включения 3H-тимидина.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения оценку лечения проводят путем анализа повышения в экспрессии генов или повышенных белковых уровней маркеров, ассоциированных с активацией, включая один или большее количество из следующих: CD25, CD69, CD137, ICOS, PD1, GITR, OX40, а также путем измерения дегрануляции клеток по поверхностной экспрессии CD107A.
Как правило, анализы экспрессии генов проводят так, как известно в данной области техники.
Как правило, измерения экспрессии белка также выполняются аналогично тому, как это известно в данной области техники.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения оценку лечения проводят путем анализа цитотоксической активности, измеренной путем определения жизнеспособности клеток-мишеней посредством оценки многочисленных клеточных параметров, таких как ферментная активность (включая протеазную активность), проницаемость клеточной мембраны, адгезия клеток, продукция АТФ, продуцирование кофермента и активность поглощения нуклеотидов. Конкретные примеры таких анализов включают в себя, но не ограничиваются ими, способ с окрашиванием трипановым синим или PI, способ с высвобождением 51Cr или 35S, анализ активности ЛДГ, анализы МТТ и (или) WST, анализ кальцеина-AM, анализ на основе люминесценции и другие.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения оценку лечения проводят путем анализа активности T-клеток, измеренную по продуцированию цитокинов, при этом в культуральной надосадочной жидкости исследуют внутриклеточную продукцию цитокинов, включая, но не ограничиваясь следующими: ИФН-γ, ФНО-α, ГМ-КСФ, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-13 с применением хорошо известных методик.
Соответственно, оценку лечения можно проводить с помощью анализов, которые оценивают один или большее количество из следующих механизмов: (i) повышение иммунного ответа, (ii) повышение активации αβ и (или) γδ T-клеток, (iii) повышение активности цитотоксических T-клеток, (iv) повышение активности NK- и (или) NKT-клеток, (v) ослабление супрессии αβ и (или) γδ Т-клеток, (vi) повышение секреции провоспалительных цитокинов, (vii) повышение секреции ИЛ-2; (viii) увеличение продуцирования интерферона-γ, (ix) повышение ответа Th1-клеток, (x) снижение ответа Th2-клеток, (xi) уменьшение количества или элиминация клеток и (или) активности по меньшей мере одной из популяций регуляторных Т-клеток (Treg-клеток)..
A. Анализы для измерения эффективности и активности
В некоторых вариантах реализации данного изобретения активация Т-клеток оценивается с помощью анализа реакции смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ, англ. «MLR») так, как известно в данной области техники. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение иммунного ответа, что измеряется, например, по фосфорилированию или дефосфорилированию различных факторов, или путем измерения других посттрансляционных модификаций. ИЛ-15 опосредует экспрессию и секрецию ИФН-γ посредством фосфорилирования STAT5. Соответственно, в некоторых вариантах реализации данного изобретения анализ сигнального пути измеряет повышение или снижение иммунного ответа, на что указывает фосфорилирование STAT5. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение активации αβ и (или) γδ T-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение активности цитотоксических Т-клеток, что измеряется, например, по непосредственному уничтожению клеток-мишеней, таких как, например, раковые клетки, или по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение активности NK и (или) NKT-клеток, что измеряется, например, по непосредственному уничтожению клеток-мишеней, таких как, например, раковые клетки, или по секреции цитокинов, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD107a и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение супрессии αβ и (или) γδ Т-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение секреции провоспалительных цитокинов, что измеряется, например, с помощью ИФА, или с помощью методов на основе гранул Luminex или Multiplex, или с помощью внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или с помощью Alispot и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение секреции ИЛ-2, что измеряется, например, с помощью ИФА, или с помощью методов на основе гранул Luminex или Multiplex, или с помощью внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или с помощью Alispot и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение продуцирования интерферона-ɣ, что измеряется, например, с помощью ИФА, или с помощью методов на основе гранул Luminex или Multiplex, или с помощью внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или с помощью Alispot и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа Th1-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по изменениям в экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа Th2-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по изменениям в экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют увеличение или уменьшение количества клеток и (или) активности по меньшей мере одной из популяций регуляторных Т-клеток (Treg-клеток), что измеряется, например, с помощью метода проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют увеличение или уменьшение количества клеток макрофагов М2, что измеряется, например, с помощью метода проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение проонкогенной активности макрофагов М2, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по изменениям в экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют увеличение или уменьшение количества нейтрофилов N2, что измеряется, например, с помощью метода проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение проонкогенной активности нейтрофилов N2, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по изменениям в экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение ингибирования активации Т-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение ингибирования активации ЦТК, что измеряется, например, по непосредственному уничтожению клеток-мишеней, таких как, например, раковые клетки, или по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение истощения αβ и (или) γδ Т-клеток, что измеряется, например, по изменениям в экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие снижения являются такими же, как и для повышений, описанных ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа αβ и (или) γδ Т-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение стимуляции антиген-специфических ответов памяти, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD45RA, CCR7 и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение апоптоза или лизиса раковых клеток, что измеряется, например, с помощью анализов цитотоксичности, таких как, например, анализ MTT, анализ высвобождения Cr, анализ кальцеина AM, или с помощью анализов на основе проточной цитометрии, таких как, для примера, разведение КФСЭ или окрашивание йодидом пропидия и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение стимуляции цитотоксического или цитостатического эффекта на раковые клетки, что измеряется, например, с помощью анализов цитотоксичности, таких как, например, анализ MTT, анализ высвобождения Cr, анализ кальцеина AM, или с помощью анализов на основе проточной цитометрии, таких как, для примера, разведение КФСЭ или окрашивание йодидом пропидия и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют увеличение или уменьшение непосредственного уничтожения раковых клеток, что измеряется, например, с помощью анализов цитотоксичности, таких как, например, анализ MTT, анализ высвобождения Cr, анализ кальцеина AM, или с помощью анализов на основе проточной цитометрии, таких как, для примера, разведение КФСЭ или окрашивание йодидом пропидия и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение активности Th17-клеток, что измеряется, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения с помощью анализа сигнального пути измеряют повышение или снижение индукции комплемент-зависимой цитотоксичности и (или) антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности, что измеряется, например, с помощью анализов цитотоксичности, таких как, например, анализ MTT, анализ высвобождения Cr, анализ кальцеина AM, или с помощью анализов на основе проточной цитометрии, таких как, для примера, разведение КФСЭ или окрашивание йодидом пропидия и т.д. Повышение активности указывает на иммуностимулирующую активность. Соответствующие повышения активности описаны ниже.
В одном варианте реализации данного изобретения активацию Т-клеток измеряют, например, по непосредственному уничтожению клеток-мишеней, таких как, например, раковые клетки, или по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Для Т-клеток повышение пролиферации, повышение маркеров активации клеточной поверхности (например, CD25, CD69, CD137, PD1), цитотоксичность (способность уничтожать клетки-мишени) и продуцирование цитокинов (например, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИФН-γ, ФНО-α, ИЛ-10, ИЛ-17A) будут указывать на иммунную модуляцию, которая согласуется с усиленным уничтожением раковых клеток.
В одном варианте реализации данного изобретения активацию NK-клеток измеряют, например, по непосредственному уничтожению клеток-мишеней, таких как, например, раковые клетки, или по секреции цитокинов, или по изменениям в экспрессии маркеров активации, таких как, для примера, CD107a и т.д. Для NK-клеток, повышение пролиферации, повышение цитотоксичности (способности уничтожать клетки-мишени, и повышение в экспрессии CD107a, гранзима и перфорина), продуцирование цитокинов (например, ИФН-γ и ФНО) и экспрессия рецепторов на клеточной поверхности (например, CD25) могут указывать на иммуномодуляцию, которая согласуется с усиленным уничтожением раковых клеток.
В одном варианте реализации данного изобретения активацию γδ T-клеток измеряют, например, по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменениям в экспрессии маркеров активации.
В одном варианте реализации данного изобретения активацию Th1-клеток измеряют, например, по секреции цитокинов, или по изменениям в экспрессии маркеров активации.
Соответствующими повышениями активности или ответа (или снижением, в зависимости от ситуации, как указано выше) являются повышения на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или от 98% до 99% по сравнению с сигналом либо в эталонном образце, либо в контрольных образцах, например, в тестовых образцах, которые не содержат антитела против PVRIG согласно данному изобретению. Аналогичным образом, повышение по меньшей мере в 1, 2, 3, 4 или 5 раз по сравнению с эталонными или контрольными образцами указывает на эффективность.
IX. Антитела, блокирующие контрольные точки
В некоторых вариантах реализации данного изобретения гетеродимерные белки, слитые с Fc, которые содержат белки ИЛ-15 и ИЛ-15Рα, описанные в данном документе, комбинируются с другими терапевтическими агентами, включая антитела, блокирующие контрольные точки, такие как, но не ограничиваясь ими, ингибитор PD-1, ингибитор TIM3, ингибитор CTLA4, ингибитор PD-L1, ингибитор TIGIT, ингибитор LAG3 или их комбинация.
A. Антитела против PD1
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, описанные в данном документе, можно вводить субъекту, имеющему рак, в комбинации с антителом, блокирующим контрольную точку, например, антителом против PD-1. В некоторых случаях антитело против PD-1 включает в себя XENP13432 (бивалентное мАт против PD-1 на основе ниволумаба с удаленной эффекторной функцией; аминокислотная последовательность XENP13432 изображена на фиг. 160).
Иллюстративные неограничивающие молекулы антитела против PD-1 раскрыты в патентной публикации США № 2015/0210769, опубликованной 30 июля 2015 г. и озаглавленной «Молекулы антител против PD-1 и их использование» (“Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof”), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя по меньшей мере один или два вариабельных домена тяжелой цепи (необязательно – включительно с константной областью), по меньшей мере один или два вариабельных домена легкой цепи (необязательно – включительно с константной областью), или и то, и другое, включая в себя аминокислотную последовательность BAP049-Clone-A, BAP049-Clone-B, BAP049-Clone-C, BAP049-Clone-D или BAP049-Clone-E; или, как описано в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность по существу идентична (например, идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей. Молекула антитела против PD-1, необязательно, содержит лидерную последовательность из тяжелой цепи, легкой цепи или обеих цепей, как показано в таблице 4 из патентной публикации США № 2015/0210769; или последовательность, по существу идентичную ей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три определяющие комплементарность области (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и (или) вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитело, выбранное из любого из BAP049-hum01, BAP049-hum02, BAP049-hum03, BAP049-hum04, BAP049-hum05, BAP049-hum06, BAP049-hum07, BAP049-hum08, BAP049-hum09, BAP049-hum10, BAP049-hum11, BAP049-hum12, BAP049-hum13, BAP049-hum14, BAP049-hum15, BAP049-hum16, BAP049-Clone-A, BAP049-Clone-B, BAP049-Clone-C, BAP049-Clone-D или BAP049-Clone-E; или так, как описано в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность, по существу идентичную (например, идентичную по меньшей мере на 80%, на 85%, на 90%, на 92%, на 95%, на 97%, на 98%, на 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, и содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области легкой цепи, и содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя замену в CDR из легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и (или) CDR3 из легкой цепи. В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя замену в CDR3 из легкой цепи в положении 102 из вариабельной области легкой цепи, например замену цистеина на тирозин или цистеина на остаток серина в положении 102 из вариабельной области легкой цепи в соответствии с таблицей 1 (например, последовательность SEQ ID NO: 16 или 24 – для мышиных или химерных, немодифицированных; или любая из последовательностей SEQ ID NO: 34, 42, 46, 54, 58, 62, 66, 70, 74 или 78 – для модифицированной последовательности).
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой и легкой цепей, и содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В одном из вариантов реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 включает в себя:
(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 4, аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 33, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769;
(b) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 32, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769;
(c) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 224, аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 33, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769; или
(d) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 224; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 32, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-1 содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 224; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 5; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 14, и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0210769.
В других вариантах реализации данного изобретения ингибитор PD-1 представляет собой антитело против PD-1, выбранное из ниволумаба, пембролизумаба или пидилизумаба.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. Альтернативные названия ниволумаба включают MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538 или BMS-936558. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб (регистрационный номер CAS: 946414-94-4). Ниволумаб представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело IgG4, которое специфически блокирует PD1. Ниволумаб (клон 5C4) и другие моноклональные антитела человека, которые специфически связываются с PD1, раскрыты в патентных публикациях США № 8008449 и WO2006/121168. В одном варианте реализации данного изобретения ингибитор PD-1 представляет собой ниволумаб и имеет последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или аналогичную ей, например, последовательность, которая по меньшей мере, на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности). В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. Пембролизумаб (также упоминается как ламбролизумаб, MK-3475, MK03475, SCH-900475 или KEYTRUDA®; Merck) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG4, которое связывается с PD-1. Пембролизумаб и другие гуманизированные антитела против PD-1 раскрыты в Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134 – 44, в патентных публикациях США № 8354509 и WO2009/114335.
В одном из вариантов реализации данного изобретения ингибитор PD-1 представляет собой пембролизумаб, раскрытый, например, в патентных публикациях США № 8354509 и WO 2009/114335, и имеющий последовательность, описанную в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или аналогичную ей, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб. Пидилизумаб (CT-011; Cure Tech) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG1k, которое связывается с PD1. Пидилизумаб и другие гуманизированные моноклональные антитела против PD-1 раскрыты в патентных публикациях США № 8747847 и WO 2009/101611.
Другие антитела против PD1 включают AMP 514 (Amplimmune), среди прочих, например, антитела против PD1, раскрытые в патентных публикациях США № 8609089, № 2010028330 и (или) № 20120114649.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения ингибитор PD-1 представляет собой иммуноадгезин (например, иммуноадгезин, содержащий внеклеточную или связывающую PD-1 часть из PD-L1 или PD-L2, слитую с константной областью (например, областью Fc из иммуноглобулиновой последовательности). В некоторых вариантах реализации данного изобретения ингибитор PD-1 представляет собой AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; например, раскрыт в WO2010/027827 и WO2011/066342) – растворимый слитый рецептор PD-L2 – Fc, который блокирует взаимодействие между PD-1 и B7-H1.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против PD-1 можно использовать в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. Существует несколько антител против PD-1, включая, но не ограничиваясь ими, два антитела, одобренные в настоящее время FDA – пембролизумаб и ниволизумаб, а также антитела, проходящие в настоящее время клинические испытания, включая, но не ограничиваясь ими, тислелизумаб, Sym021, REGN2810 (разработано Rengeneron), JNJ-63723283 (разработанный J & J), SHR-1210, пидилизумаб, AMP-224, MEDIo680, PDR001 и CT-001, а также другие, перечисленные в Liu et al., J. Hemat. & Oncol. (2017) 10: 136, указанные антитела явным образом включены в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с ингибитором PD-1 (например, антителом против PD-1). В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, вводят в комбинации с антителом против PD-1.
B. Антитела против TIM3
Иллюстративные неограничивающие молекулы антител против TIM-3 раскрыты в патентной публикации США № 2015/0218274, опубликованной 6 августа 2015 г. и озаглавленной «Молекулы антител к TIM-3 и их использование» (“Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof”), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя по меньшей мере один или два вариабельных домена тяжелой цепи (необязательно – включительно с константной областью), по меньшей мере один или два вариабельных домена легкой цепи (необязательно – включительно с константной областью) или и то, и другое, включая в себя аминокислотную последовательность из ABTIM3, ABTIM3-hum01, ABTIM3-hum02, ABTIM3-hum03, ABTIM3-hum04, ABTIM3-hum05, ABTIM3-hum06, ABTIM3-hum07, ABTIM3-hum08, ABTIM3-hum09, ABTIM3-hum10, ABTIM3-hum11, ABTIM3-hum12, ABTIM3-hum13, ABTIM3-hum14, ABTIM3-hum15, ABTIM3-hum16, ABTIM3-hum17, ABTIM3-hum18, ABTIM3-hum19, ABTIM3-hum20, ABTIM3-hum21, ABTIM3-hum22, ABTIM3-hum23; или так, как описано в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274; или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблицах 1-4; или последовательность, по существу идентичную (например, идентичную по меньшей мере на 80%, на 85%, на 90%, на 92%, на 95%, на 97%, на 98%, на 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей. Молекула антитела против TIM-3, необязательно, содержит лидерную последовательность из тяжелой цепи, легкой цепи или из обеих цепей, как продемонстрировано в патентной публикации США № 2015/0218274; или последовательность, по существу идентичную ей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области, определяющие комплементарность (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и (или) из вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из одного из следующих: ABTIM3, ABTIM3-hum01, ABTIM3-hum02, ABTIM3-hum03, ABTIM3-hum04, ABTIM3-hum05, ABTIM3-hum06, ABTIM3-hum07, ABTIM3-hum08, ABTIM3-hum09, ABTIM3-hum10, ABTIM3-hum11, ABTIM3-hum12, ABTIM3-hum13, ABTIM3-hum14, ABTIM3-hum15, ABTIM3-hum16, ABTIM3-hum17, ABTIM3-hum18, ABTIM3-hum19, ABTIM3-hum20, ABTIM3-hum21, ABTIM3-hum22, ABTIM3-hum23; или так, как описано в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274; или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблицах 1-4; или последовательность, по существу идентичную (например, идентичную по меньшей мере на 80%, на 85%, на 90%, на 92%, на 95%, на 97%, на 98%, на 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя аминокислотную замену в CDR из легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и (или) CDR3 из легкой цепи.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблицах 1-4.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против TIM-3 включает:
(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 10; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274;
(b) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 4; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 6, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274;
(c) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 25; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274;
(d) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 24; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 6, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274;
(e) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 31; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274; или
(f) VH, содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 30; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 5; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 6, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 из патентной публикации США № 2015/0218274.
Иллюстративные антитела против TIM-3 раскрыты в патенте США № 8552156, WO 2011/155607, EP 2581113 и публикации США № 2014/044728, и включают Sym023 (находится в клинической разработке для Symphogen), TSR-22 (находится в клинической разработке для Tesaro), LY3321367 (находится в клинической разработке для Eli Lilly), BGTB-A425 (находится в клинической разработке для BeiGene), MBG453 (находится в клинической разработке для Novartis) и INCAGN02390 (находится в клинической разработке для Incyte).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против TIM-3 могут быть использованы в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. В клинической разработке находятся несколько антител против TIM-3, включая, но не ограничиваясь ими, MBG453 и TSR-022.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с ингибитором TIM-3 (например, антителом против TIM3). В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, вводят в комбинации с антителом против TIM3.
C. Антитела против CTLA4
Примеры антител против CTLA4 включают тремелимумаб (моноклональное антитело IgG2, доступное от Pfizer, ранее известное как тицилимумаб, CP-675,206); и ипилимумаб (антитело CTLA-4, также известное как MDX-010, номер CAS 477202-00-9). Другие иллюстративные антитела против CTLA-4 раскрыты, например, в патенте США № 5811097.
В одном из вариантов реализации данного изобретения антитело против CTLA4 представляет собой ипилимумаб, раскрытый, например, в US 5811097, US 7605238, WO00/32231 и WO97/20574, и имеющий последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В одном из вариантов реализации данного изобретения антитело против CTLA4 представляет собой тремелимумаб, раскрытый, например, в US 6682736 и WO 00/37504, и имеющий последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против CTLA-4 могут быть использованы в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. Таким образом, подходящие антитела против CTLA-4 для использования в комбинированной терапии, как описано в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, ипилимумаб – антитело, одобренное в настоящее время FDA, и несколько других антител, находящихся в разработке, включая CP-675,206 и AGEN-1884.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с ингибитором CTLA-4 (например, антителом против CTLA-4). В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, вводят в комбинации с антителом против CTLA-4.
D. Антитела против PD-L1
Иллюстративные неограничивающие молекулы антитела против PD-1 раскрыты патентной публикации США № 2016/0108123, опубликованной 21 апреля 2016 г. и озаглавленной «Молекулы антител против PD-L1 и их использование» (“Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof”), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает в себя по меньшей мере один или два вариабельных домена тяжелой цепи (необязательно – включительно с константной областью), по меньшей мере один или два вариабельных домена легкой цепи (необязательно – включительно с константной областью), или и то, и другое, включая в себя аминокислотную последовательность любого из BAP058-hum01, BAP058-hum02, BAP058-hum03, BAP058-hum04, BAP058-hum05, BAP058-hum06, BAP058-hum07, BAP058-hum08, BAP058-hum09, BAP058-hum10, BAP058-hum11, BAP058-hum12, BAP058-hum13, BAP058-hum14, BAP058-hum15, BAP058-hum16, BAP058-hum17, BAP058-Clone-K, BAP058-Clone-L, BAP058-Clone-M, BAP058-Clone-N или BAP058-Clone-O; или так, как описано в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность по существу идентична (например, идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области, определяющие комплементарность (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и (или) вариабельной области легкой цепи антитела, описанного в данном документе, например, антитела, выбранного из любого из BAP058-hum01, BAP058-hum02, BAP058-hum03, BAP058-hum04, BAP058-hum05, BAP058-hum06, BAP058-hum07, BAP058-hum08, BAP058-hum09, BAP058-hum10, BAP058-hum11, BAP058-hum12, BAP058-hum13, BAP058-hum14, BAP058-hum15, BAP058-hum16, BAP058-hum17, BAP058-Clone-K, BAP058-Clone-L, BAP058-Clone-M, BAP058-Clone-N или BAP058-Clone-O; или так, как описано в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность по существу идентична (например, идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) любой из упомянутых выше последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 содержит замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и (или) CDR3 из легкой цепи.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть областей CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой и легкой цепей, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает:
(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 195; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123; и
(ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 9, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 10 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 11, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 включает:
(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 195; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123; и
(ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 1. В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 4. В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 195, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2016/0108123.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения ингибитор PD-L1 представляет собой молекулу антитела. В некоторых вариантах реализации данного изобретения ингибитор PD-L1 выбран из YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, MDX-1105, атезолизумаба, дурбалумаба, авелумаба или BMS936559.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой атезолизумаб. Атезолизумаб (также обозначаемый как MPDL3280A и Atezo®; Roche) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с PD-L1. Атезолизумаб и другие гуманизированные антитела против PD-L1 раскрыты в патентной публикации США № 8217149 и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой авелумаб. Авелумаб (также обозначаемый как A09-246-2; Merck Serono) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с PD-L1. Авелумаб и другие гуманизированные антитела против PD-L1 раскрыты в патентных публикациях США № 9324298 и WO2013/079174, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой дурвалумаб. Дурвалумаб (также обозначаемый как MEDI4736; AstraZeneca) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с PD-L1. Дурвалумаб и другие гуманизированные антитела против PD-L1 раскрыты в патентной публикации США № 8779108 и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против PD-L1 представляет собой BMS-936559. BMS-936559 (также обозначаемый как MDX-1105; BMS) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с PD-L1. BMS-936559 и другие гуманизированные антитела против PD-L1 раскрыты в патентных публикациях США № 7943743 и № WO2007005874, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против PD-L1 могут быть использованы в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. Существует несколько антител против PD-L1, включая три антитела, одобренные в настоящее время FDA – атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб, а также те антитела, которые проходят клинические испытания в настоящее время, включая, но не ограничиваясь ими, LY33000054 и CS1001, а также другие, описанные в Liu et al. др., J. Hemat. & Oncol. (2017) 10: 136, указанные антитела явным образом включены в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения описанный в данном документе гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα может быть использован в комбинации с ингибитором PD-L1 или PD-L2 (например, антителом против PD-L1).
E. Антитела против TIGIT
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против TIGIT представляет собой OMP-313M32. OMP-313M32 (OncoMed Pharmaceuticals) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с TIGIT. OMP-313M32 и другие гуманизированные антитела против TIGIT раскрыты в патентных публикациях США № 20160376365 и № WO2016191643, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против TIGIT представляет собой BMS-986207. BMS-986207 (также обозначаемый как ONO-4686; Bristol-Myers Squibb) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с TIGIT. BMS-986207 и другие гуманизированные антитела против TIGIT раскрыты в патентных публикациях США US20160176963 и WO2016106302, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против TIGIT представляет собой MTIG7192. MTIG7192 (Genentech) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с TIGIT. MTIG7192 и другие гуманизированные антитела против TIGIT раскрыты в патентных публикациях США № 2017088613, № WO 2017053748 и № WO 2016011264, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против TIGIT могут быть использованы в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. В клинической разработке находятся несколько антител к TIGIT: BMS-986207 (находится в клинической разработке с BMS), OMP-313M32 (находится в клинической разработке с OncoMed), MTIG7192A (находится в клинической разработке с Genentech) и AB154 (находится в клинической разработке с Arcus Biosciences).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с ингибитором TIGIT (например, антителом против TIGIT). В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, вводят в комбинации с антителом против TIGIT.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против TIGIT могут быть использованы в сочетании с XENP24306, включая, но не ограничиваясь ими, BMS-986207 (находится в клинической разработке с BMS), OMP-313M32 (находится в клинической разработке с OncoMed), MTIG7192A (находится в клинической разработке с Genentech) и AB154 (находится в клинической разработке с Arcus Biosciences).
F. Антитела против LAG3
Иллюстративные неограничивающие молекулы антитела против LAG-3 раскрыты в патентной публикации США № 2015/0259420, опубликованной 17 сентября 2015 г. и озаглавленной «Молекулы антител против LAG-3 и их использование» (“Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof”), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает в себя по меньшей мере один или два вариабельных домена тяжелой цепи (необязательно – включительно с константной областью), по меньшей мере один или два вариабельных домена легкой цепи (необязательно – включительно с константной областью), или и то, и другое, включая в себя аминокислотную последовательность любого из BAP050-hum01, BAP050-hum02, BAP050-hum03, BAP050-hum04, BAP050-hum05, BAP050-hum06, BAP050-hum07, BAP050-hum08, BAP050-hum09, BAP050-hum10, BAP050-hum11, BAP050-hum12, BAP050-hum13, BAP050-hum14, BAP050-hum15, BAP050-hum16, BAP050-hum17, BAP050-hum18, BAP050-hum19, BAP050-hum20, huBAP050(Ser) (например, BAP050-hum01-Ser, BAP050-hum02-Ser, BAP050-hum03-Ser, BAP050-hum04-Ser, BAP050-hum05-Ser, BAP050-hum06-Ser, BAP050-hum07-Ser, BAP050-hum08-Ser, BAP050-hum09-Ser, BAP050-hum10-Ser, BAP050-hum11-Ser, BAP050-hum12-Ser, BAP050-hum13-Ser, BAP050-hum14-Ser, BAP050-hum15-Ser, BAP050-hum18-Ser, BAP050-hum19-Ser или BAP050-hum20-Ser), BAP050-Clone-F, BAP050-Clone-G, BAP050-Clone-H, BAP050-Clone-I или BAP050-Clone-J; или так, как описано в таблице 1 из заявки на патент США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность по существу идентична (например, идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) любой из вышеупомянутых последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три определяющие комплементарность области (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и (или) вариабельной области легкой цепи раскрытого в данном документе антитела, например, антитела, выбранного из любого из BAP050-hum01, BAP050-hum02, BAP050-hum03, BAP050-hum04, BAP050-hum05, BAP050-hum06, BAP050-hum07, BAP050-hum08, BAP050-hum09, BAP050-hum10, BAP050-hum11, BAP050-hum12, BAP050-hum13, BAP050-hum14, BAP050-hum15, BAP050-hum16, BAP050-hum17, BAP050-hum18, BAP050-hum19, BAP050-hum20, huBAP050(Ser) (например, BAP050-hum01-Ser, BAP050-hum02-Ser, BAP050-hum03-Ser, BAP050-hum04-Ser, BAP050-hum05-Ser, BAP050-hum06-Ser, BAP050-hum07-Ser, BAP050-hum08-Ser, BAP050-hum09-Ser, BAP050-hum10-Ser, BAP050-hum11-Ser, BAP050-hum12-Ser, BAP050-hum13-Ser, BAP050-hum14-Ser, BAP050-hum15-Ser, BAP050-hum18-Ser, BAP050-hum19-Ser или BAP050-hum20-Ser), BAP050-Clone-F, BAP050-Clone-G, BAP050-Clone-H, BAP050-Clone-I или BAP050-Clone-J; или так, как описано в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1; или последовательность по существу идентична (например, идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) любой из вышеупомянутых последовательностей.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает в себя по меньшей мере одну, две или три области CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения молекула антитела против PD-L1 содержит замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и (или) CDR3 из легкой цепи.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть областей CDR (или в совокупности все CDR) из вариабельной области тяжелой и легкой цепей, которая содержит аминокислотную последовательность, продемонстрированную в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1. В одном варианте реализации данного изобретения одна или несколько CDR (или в совокупности все CDR) имеют одно, два, три, четыре, пять, шесть или более изменений, например, аминокислотные замены или делеции, относительно аминокислотной последовательности, продемонстрированной в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, продемонстрированной в таблице 1.
В одном из вариантов реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает:
(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 286; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420; и
(ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 12, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420.
В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 включает:
(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 286; аминокислотную последовательность VHCDR2 по SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 по SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420; и
(ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность VLCDR1 по SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 по SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 по SEQ ID NO: 15, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420.
В одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 1. В другом варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 4. В еще одном варианте реализации данного изобретения молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 по SEQ ID NO: 286, каждая из которых раскрыта в таблице 1 из патентной публикации США № 2015/0259420.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против LAG-3 представляет собой BMS-986016. BMS-986016 (также обозначаемый как BMS986016; Bristol-Myers Squibb) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с LAG-3. BMS-986016 и другие гуманизированные антитела против LAG-3 раскрыты в патентных публикациях US 2011/0150892, WO2010/019570 и WO2014/008218.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против LAG3 представляет собой LAG525. LAG525 (также обозначаемый как IMP701; Novartis) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с LAG3. LAG525 и другие гуманизированные антитела против LAG3 раскрыты в патентных публикациях US 9244059 и WO2008132601, и имеют последовательность, раскрытую в данном документе (или последовательность, по существу идентичную или сходную с ней, например, последовательность, которая по меньшей мере на 85%, на 90%, на 95% или более идентична указанной последовательности).
Другие иллюстративные антитела против LAG3 раскрыты, например, в патентных публикациях US2011150892 и US2018066054.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против LAG-3 могут быть использованы в комбинации со слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению. В клинической разработке находятся несколько антител против LAG-3, включая REGN3767 от Regeneron, TSR-033 (Tesaro), BMS-986016 (BMS) и Sym022 (Symphogen).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с ингибитором LAG3 (например, антителом против LAG3). В некоторых вариантах реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, вводят в комбинации с антителом против LAG3.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против LAG-3 могут быть использованы в комбинации с XENP24306, включая, но не ограничиваясь ими, REGN3767 от Regeneron, TSR-033 (Tesaro), BMS-986016 (BMS) и Sym022 (Symphogen).
X. Комбинированная терапия
В некоторых аспектах, описанные в данном документе слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc вводят в комбинации с другим терапевтическим агентом. Фраза «вводят в комбинации с», используемая в данном документе, означает, что субъекту проводят два (или более) разных вида лечения в ходе протекания у субъекта расстройства, например, два или более вида лечения проводят после того, как у субъекта было диагностировано расстройство, и до того, как расстройство было вылечено или устранено, или лечение было прекращено по другим причинам. В некоторых вариантах реализации данного изобретения проведение одного вида лечения все еще происходит, когда начинается проведение второго вида лечения, так что существует частичное совпадение с точки зрения введения. Это иногда упоминается в данном документе как «одновременная» или «параллельная доставка». В других вариантах реализации данного изобретения один вид лечения заканчивается до того, как начинается другой вид лечения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, в любом из указанных случаев лечение является более эффективным благодаря комбинированному введению. Например, второй вид лечения является более эффективным, например, эквивалентный эффект наблюдается при меньшем количестве второго вида лечения, или второй вид лечения уменьшает симптомы в большей степени, чем было бы, если бы второй вид лечения проводился в отсутствие первого вида лечения, или аналогичная ситуация наблюдается при первом виде лечения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения лечения доставляется таким образом, что уменьшение симптома или другого параметра, связанного с расстройством, превышает то, уменьшение, которое наблюдалось бы при проведении одного вида лечения при отсутствии другого. Эффект от двух видов лечения может быть частично аддитивным, полностью аддитивным или более сильным, чем аддитивный. Доставка лечения может быть такой, что эффект от проведения первого вида лечения все еще будет обнаруживаться при проведении второго.
Слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент можно вводить одновременно, в одной и той же или в отдельных композициях, или последовательно. Для последовательного введения слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанные в данном документе, могут быть введены первыми, а дополнительный агент может быть введен вторым, или порядок введения может быть изменен.
Лечение слитым белком ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанным в данном документе, и (или) другими терапевтическими агентами, процедурами или способами воздействия можно вводить в периоды активного расстройства или в течение периода ремиссии, или в периоды менее активного заболевания. Слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045) может быть введен до другого вида лечения, одновременно с лечением, после лечения или во время ремиссии нарушения.
При введении в комбинации слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045) и дополнительный агент (например, второй или третий агент), или все они могут быть введены в количестве или дозе, меньшей или равной количеству или дозе каждого агента, используемого индивидуально, например, в качестве монотерапии. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вводимое количество или доза слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), дополнительного агента (например, второго или третьего агента), или их всех является более низким (например, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 50%), чем количество или доза каждого агента, используемого индивидуально, например, в качестве монотерапии. В других вариантах реализации данного изобретения количество или доза слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), дополнительного агента (например, второго или третьего агента), или их всех, которое приводит к желаемому эффекту (например, лечению онкологического заболевания), является более низким (например, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40% или по меньшей мере на 50% ниже), чем количество или доза каждого агента, используемого индивидуально, например, в качестве монотерапии, необходимое для достижения такого же терапевтического эффекта.
В дополнительных аспектах слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, может быть использован в схеме лечения в комбинации с химиотерапией, облучением, иммуносупрессивными агентами, такими как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат и FK506, антитела, направленные против ингибиторов контрольных точек, или другие иммуноаблятивные агенты, такие как CAMPATH, другие виды терапии антителами, цитоксан, флударабин, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофеноловая кислота, стероиды, FR90165 и облучение, пептидная вакцина, например та, что описана в Izumoto et al. 2008 г. J Neurosurg 108: 963 - 971.
В определенных случаях соединения согласно данному изобретению комбинируют с другими терапевтическими агентами, такими как другие противораковые агенты, противоаллергические агенты, агенты против тошноты (или противорвотные), болеутоляющие агенты, цитопротекторные агенты и их комбинации.
В одном варианте реализации данного изобретения слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc (например, XENP24113, XENP24306, XENP23557 или XENP24045), описанный в данном документе, может быть использован в комбинации с химиотерапевтическим агентом. Примеры химиотерапевтических агентов включают в себя антрациклин (например, идарубицин, даунорубицин, доксорубицин (например, липосомальный доксорубицин)), производное антрацендиона (например, митоксантрон), алкалоид барвинка (например, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин), алкилирующий агент (например, циклофосфамид, дакарбазин, мелфалан, ифосфамид, темозоломид), антитела иммунных клеток (например, алемтузамаб, гемтузумаб, ритуксимаб, офатумумаб, тозитумомаб, брентуксимаб), антиметаболиты (в том числе аналоги, например, антагонисты фолиевой кислоты, цитарабин, аналоги пиримидина, аналоги пурина и ингибиторы аденозиндезаминазы (например, флударабин)), ингибитор mTOR, агонист TNFR-индуцированного глюкокортикоидами TNFR-родственного белка (GITR), ингибитор протеасом (например, аклациномицин А, глиотоксин или бортезомиб), иммуномодулятор, такой как талидомид или его производное (например, леналидомид), ингибитор киназы, такой как ибрутиниб (например, Imbruvica), кортикостероид (например, дексаметазон, преднизон), ЦВП (англ. CVP – комбинация циклофосфамида, винкристина и преднизона), ЦГОП (англ. CHOP – комбинация циклофосфамида, гидроксидаунорубицина, Oncovin® (винкристин) и преднизона) с этопозидом или без него (например, VP-16), комбинация циклофосфамида и пентостатина, комбинация хлорамбуцила и преднизона, комбинация флударабина и циклофосфамида, или другой агент, такой как гидрохлорид мехлорэтамина (например, Мустарген), доксорубицин (Адриамицин®), метотрексат, оксалиплатин или цитарабин (ara-C).
Общие химиотерапевтические агенты, рассматриваемые для использования в комбинированной терапии, включают в себя анастрозол (Arimidex®), бикалутамид (Casodex®), блеомицина сульфат (Blenoxane®), бусульфан (Myleran®), бусульфан для инъекций (Busulfex®), капецитабин (Xeloda®), N4-пентоксикарбонил-5-дезокси-5-фторцитидин, карбоплатин (Paraplatin®), кармустин (BiCNU®), хлорамбуцил (Leukeran®), цисплатин (Platinol®), кладрибин (Leustatin®), циклофосфамид (Cytoxan® или Neosar®), цитарабин, цитозина арабинозид (Cytosar-U®), липосомы цитарабина для инъекций (DepoCyt®), дакарбазин (DTIC-Dome®), дактиномицин (Actinomycin D, Cosmegan), даунорубицина гидрохлорид (Cerubidine®), липосомы даунорубицина цитрата для инъекций (DaunoXome®), дексаметазон, доцетаксел (Taxotere®), доксорубицина гидрохлорид (Adriamycin®, Rubex®), этопозид (Vepesid®), флударабина фосфат (Fludara®), 5-фторурацил (Adrucil®, Efudex®), флутамид (Eulexin®), тезацитибин, гемцитабин (дифтордезоксицитидин), гидроксимочевина (Hydrea®), идарубицин (Idamycin®), ифосфамид (IFEX®), иринотекан (Camptosar®), L-аспарагиназа (ELSPAR®), кальция лейковорин, мелфалан (Alkeran®), 6-меркаптопурин (Purinethol®), метотрексат (Folex®), митоксантрон (Novantrone®), милотарг, паклитаксел (Taxol®), феникс (Yttrium90/MX-DTPA), пентостатин, полифепрозан 20 с имплантатом кармустина (Gliadel®), тамоксифена цитрат (Nolvadex®), тенипозид (Vumon®), 6-тиогуанин, тиотепа, тирапазамин (Tirazone®), топотекана гидрохлорид для инъекций (Hycamptin®), винбластин (Velban®), винкристин (Oncovin®) и винорелбин (Navelbine®).
XI. Виды лечения
После изготовления, композиции согласно данному изобретению находят применение в ряде онкологических применений при лечении онкологических заболеваний, как правило, путем стимуляции активации Т-клеток (например, Т-клетки больше не подавляются) связыванием гетеродимерных белков, слитых с Fc, согласно данному изобретению.
Соответственно, гетеродимерные композиции согласно данному изобретению находят применение при лечении указанных видов онкологических заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, метастатические онкологические заболевания.
A. Композиции гетеродимерных белков для введения in vivo
Фармацевтические составы антител, используемые в соответствии с данным изобретением, готовят для хранения путем смешивания антител, имеющих необходимую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами (как в целом изложено в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. [1980]), в форме лиофилизированных фармацевтических составов или водных растворов. Приемлемые носители, буферы, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, и включают в себя буферы, такие как фосфатный, цитратный и на основе других органических кислот; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензила аммонийхлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензетония хлорид; феноловый, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкоза, манноза или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn – белок); и (или) неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
B. Способы введения
Гетеродимерные белки и химиотерапевтические агенты согласно данному изобретению вводят субъекту в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение в виде болюса или путем непрерывной инфузии в течение определенного периода времени.
C. Методы лечения
В способах согласно данному изобретению терапевтические средства используются для обеспечения положительного терапевтического ответа в отношении заболевания или патологического состояния. Под «положительным терапевтическим ответом» подразумевается нормализация заболевания или состояния и (или) нормализация симптомов, связанных с заболеванием или патологическим состоянием. Например, положительный терапевтический ответ может относиться к одному или нескольким из следующих видов положительной динамики заболевания: (1) снижение количества неопластических клеток; (2) повышенная гибель неопластических клеток; (3) ингибирование выживания неопластических клеток; (5) ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени, предпочтительно остановка) опухолевого роста; (6) повышенная выживаемость пациентов; и (7) некоторое ослабление одного или нескольких симптомов, связанных с заболеванием или патологическим состоянием.
Положительные терапевтические ответы при любом заболевании или патологическом состоянии могут быть определены с помощью стандартизированных критериев ответа, специфичных в отношении данного заболевания или патологического состояния. Реакция опухоли может быть оценена в отношении изменений морфологии опухоли (т.е. общей опухолевой нагрузки, размера опухоли и т.п.) с использованием методик скрининга, таких как магниторезонансная томография (МРТ), рентгенография, компьютерная томография (КТ), сканирование костей скелета, эндоскопия и биопсия опухоли, в том числе аспирация костного мозга (АКМ) и подсчет опухолевых клеток в кровотоке.
В дополнение к этим положительным терапевтическим ответам, субъект, проходящий лечение, может испытывать положительный эффект в виде ослабления симптомов, связанных с заболеванием.
Согласно данному изобретению, лечение включает в себя «терапевтически эффективное количество» используемых лекарственных препаратов. «Терапевтически эффективное количество» означает то количество, которое является эффективным для достижения желаемого терапевтического результата в дозировках и в течение требуемых периодов времени.
Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от таких факторов, как течение заболевания, возраст, пол и масса тела индивидуума, а также способность лекарственных препаратов вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также представляет собой количество, при котором любые токсические или вредные эффекты белка или части белка компенсируются терапевтически полезными эффектами.
«Терапевтически эффективное количество» в случае терапии опухолей также может быть измерено по его способности стабилизировать прогрессирование заболевания. Способность соединения ингибировать рак может быть оценена в животной модельной системе, прогнозирующей эффективность для онкологических заболеваний человека.
В качестве альтернативы, это свойство композиции может быть оценено путем исследования способности соединения ингибировать клеточный рост или индуцировать апоптоз с помощью анализов in vitro, известных специалисту в данной области техники. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может приводить к уменьшению размера опухоли или иным образом ослаблять симптомы у субъекта. Рядовой специалист в данной области техники сможет определить такие количества на основе таких факторов, как размер субъекта, степень тяжести симптомов субъекта и конкретный состав композиции или выбранный способ введения.
Режимы введения доз корректируются для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Например, может вводиться однократная болюсная доза, могут вводиться несколько разделенных доз в течение некоторого времени или доза может быть пропорционально понижена или повышена сообразно потребностям терапевтической ситуации. Композиции для парентерального введения могут быть составлены в виде стандартной лекарственной формы для простоты введения и единообразия введения доз. Используемое в данном документе выражение «стандартная лекарственная форма» обозначает физически раздельные единицы, подходящие в качестве однократных доз для субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит заранее установленное количество активного соединения, рассчитанное на то, чтобы вызвать необходимый терапевтический эффект, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем.
Спецификация для стандартной лекарственной формы согласно данному изобретению обусловлена и напрямую зависит от (a) уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, которого необходимо достичь, и (b) ограничений, свойственных области техники составления такого активного соединения для лечения чувствительности у индивидуумов.
Эффективные дозы и режимы введения доз для гетеродимерных белков, используемых в данном изобретении, зависят от заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и могут быть определены специалистами в данной области техники.
Иллюстративный неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества гетеродимерного белка, используемого в данном изобретении, составляет около 0,1-100 мг/кг.
Все цитируемые ссылки явно включены в данный документ посредством ссылки в их полном объеме.
Принимая во внимание то, что конкретные варианты реализации данного изобретения были описаны выше в иллюстративных целях, специалистам в данной области техники будет понятно, что могут быть выполнены многочисленные вариации деталей без отклонения от изобретения, описанного в прилагаемой формуле изобретения.
Примеры
Ниже приведены примеры для иллюстрации данного изобретения. Эти примеры не предназначены для ограничения данного изобретения каким-либо конкретным применением или принципом работы. Для всех положений константных областей, обсуждаемых в данном изобретении, нумерация осуществляется в соответствии с индексом EU, как по Кабату (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda; данная публикация включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Специалисты в области техники антител поймут, что это соглашение состоит из непоследовательной нумерации в конкретных областях последовательности иммуноглобулина, что позволяет нормализовать ссылку на консервативные положения в семействах иммуноглобулинов. Соответственно, положения любого указанного иммуноглобулина, определенные согласно индексу EU, не обязательно будут соответствовать его последовательной последовательности.
Общие и конкретные научные методики изложены в патентных публикациях США 2015/0307629, 2014/0288275 и WO2014/145806, все из которых прямо включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте и, в частности, для описанных в них методик.
XII. Пример 1. Слитые белки ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши) – Fc
Чтобы решить проблему короткого периода полужизни гетеродимеров ИЛ-15/ИЛ-15Рα, мы создали комплекс ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши) в виде слияния с Fc (далее именуемого «слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc») с целью облегчения его выработки и стимулирования FcRn-опосредованной рециклинга комплекса и продления периода полужизни.
A. 1A: Разработка слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc
Плазмиду, кодирующую ИЛ-15 или домен ИЛ-15Рα суши, конструировали с помощью стандартного синтеза генов с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию с Fc (например, константные области, изображенные на фиг. 8A – фиг. 8D). Схематические изображения иллюстративных форматов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc представлены на фиг. 9A – фиг. 9G.
Формат гетеродимерного ИЛ-15Рα, слитого с Fc, или формат «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc» включает в себя ИЛ-15, рекомбинантно слитый с одной стороной гетеродимерного Fc, и домен ИЛ-15Рα суши, рекомбинантно слитый с другой стороной гетеродимерного Fc (фиг. 9A). ИЛ-15 и ИЛ-15Рα могут иметь линкер переменной длины (см. фиг. 7) между их соответствующим C-концом и N-концом области Fc. Иллюстративные белки этого формата включают XENP20818 и XENP21475, последовательности для которых представлены на фиг. 10 (см. также таблицу 2). Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21476, XENP21477, изображены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104A – фиг. 104D, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 418 – 423, 424 – 429, 430 – 435, 436 – 441, 442 – 447, 454 – 459 и 460 – 465, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Таблица 2
Формат одноцепочечного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, или формат «оцИЛ-15/Рα – Fc» включает в себя домен ИЛ-15Рα суши, слитый с ИЛ-15 линкером переменной длины (называемый «одноцепочечный» ИЛ-15/ИЛ-15Рα или «оцИЛ-15/Рα»), который затем сливается с N-концом гетеродимерной области Fc, при этом другая сторона молекулы представляет собой гетеродимерный Fc с «только Fc» или «пустым Fc» (фиг. 9B). Последовательности для иллюстративных линкеров представлены на фиг. 7. Иллюстративным белком этого формата является XENP21478, последовательности которого представлены на фиг. 11 (см. также таблицу 3). Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP21993, XENP21994, XENP21995, XENP23174, XENP24477 и XENP24480, изображены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104G, фиг. 104H, фиг. 104AG, фиг. 104AU и фиг. 104AV, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 514 – 518, 519 – 523, 524 – 528, 849 – 853, 1063 – 1067 и 1078 – 1082, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Таблица 3
Формат нековалентного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, или формат «нкИЛ-15/Рα – Fc», включает в себя домен ИЛ-15Рα суши, слитый с гетеродимерной областью Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицируется отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/ИЛ-15Рα, при этом другая сторона молекулы представляет собой гетеродимерный Fc с «только Fc» или «пустым Fc» (фиг. 9C). Иллюстративные белки этого формата включают в себя XENP21479, XENP22366 и XENP24348, последовательности которых представлены на фиг. 12A – фиг. 12B.
Формат бивалентного нековалентного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, или формат «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 9D) включает в себя ИЛ-15Рα (суши), слитый с N-концом гомодимерной области Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицируется отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/Рα. Иллюстративным белком этого формата является XENP21978, последовательности которого представлены на фиг. 13. Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP21979, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104E и как последовательности SEQ ID NO: 480 – 483, и включены в данный документ посредством ссылки.
Формат бивалентного одноцепочечного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, или формат «бивалентный оцИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 9E) включает в себя ИЛ-15, слитый с ИЛ-15Рα (суши) с помощью линкера переменной длины (называемый «одноцепочечный» комплекс ИЛ-15/ИЛ-15Рα (суши), или оцИЛ-15/Рα), который затем сливают с N-концом гомодимерной области Fc. Последовательности для иллюстративных линкеров представлены на фиг. 7. Последовательности для иллюстративного белка этого формата представлены на фиг. 14.
Формат белка ИЛ-15/Рα, нековалентно слитого с Fc, или формат «Fc – нкИЛ-15/Рα» (фиг. 9E) включает в себя ИЛ-15Рα (суши), слитый с С-концом гетеродимерной области Fc, в то время как ИЛ-15 трансфицируется отдельно, так что образуется нековалентный комплекс ИЛ-15/Рα, при этом другая сторона молекулы является «только Fc» или «пустым Fc». Иллюстративным белком этого формата является XENP22637, последовательности которого представлены на фиг. 15. Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP22638, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104T и как последовательности SEQ ID NO: 668 – 672, и включены в данный документ посредством ссылки.
Формат одноцепочечного белка ИЛ-15/Рα, слитого с Fc, или формат «Fc – оцИЛ-15/Рα» (фиг. 9G) включает в себя ИЛ-15, слитый с ИЛ-15Рα (суши) с помощью линкера переменной длины («оцИЛ-15/Рα»), который затем сливают с С-концом гетеродимерной области Fc, при этом другая сторона молекулы является «только Fc» или «пустым Fc». Последовательности для иллюстративных линкеров представлены на фиг. 7. Последовательности для иллюстративного белка этого формата представлены на фиг. 16.
Белки получали путем транзиентной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию на протеине A (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (колонка HiTrapQ объемом 5 мл с градиентом 5-40%, содержащим 50 мМ Tris pH 8,5 и 50 мМ Tris pH 8,5 с 1 М NaCl).
B. 1B: Характеризация слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc относительно чистоты и гомогенности
Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, полученные в нескольких из форматов, описанных выше, были охарактеризованы с помощью эксклюзионной хроматографии по размеру (ЭХПР) и капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ) относительно чистоты и гомогенности, как в целом описано ниже.
Белки анализировали с использованием ЭХПР для измерения их размера (т.е. гидродинамического объема) и определения подобного нативному поведения очищенных образцов. Анализ проводился на системе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Agilent 1200. Образцы вводили в колонку Superdex™ 200 10/300 GL (GE Healthcare Life Sciences) со скоростью 1,0 мл/мин, используя 1 x PBS, pH 7,4 в качестве подвижной фазы, при 4°C в течение 25 минут с детектированием при длине УФ волны 280 нМ. Анализ выполняли с использованием системы хроматографических данных Agilent OpenLab (CDS) ChemStation Edition AIC версии C.01.07. Хроматограммы выбранных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc продемонстрированы на фиг. 17B, фиг. 18B и фиг. 19B.
Белки анализировали электрофоретически с помощью метода КИФ с использованием LabChip GXII Touch HT (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс) с использованием набора реагентов Protein Express Assay LabChip и Protein Express Assay Reagent Kit согласно инструкциям производителя. Образцы анализировали в двух повторах, один в восстанавливающих условиях (с дитиотреитолом), а другой – в невосстанавливающих условиях. Изображения гелей для выбранных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc продемонстрированы на фиг. 17C, фиг. 18C и фиг. 19C.
Симметрия пиков и относительно низкие популяции других видов для каждого из слитых белков указывают на устойчивость различных форматов.
C. 1C: Характеризация слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc относительно аффинности и стабильности
Скрининг аффинности слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc проводили с использованием метода Octet, основанного на технологии биослойной интерферометрии (БСИ, англ. «BLI»). Экспериментальные этапы для метода Octet, как правило, включали следующее: иммобилизацию (захват лиганда или исследуемого препарата в биосенсор); ассоциацию (погружение покрытых лигандом или исследуемым препаратом биосенсоров в лунки, содержащие серийные разведения соответствующего исследуемого препарата или лиганда); и диссоциацию (возврат биосенсоров в лунку, содержащую буфер) для определения аффинности исследуемых препаратов. Референтную лунку, содержащую только буфер, также включали в данный анализ для фоновой коррекции при обработке данных. В частности, биосенсоры против Fc человека (AHC) использовали для захвата исследуемых препаратов, а затем погружали в различные концентрации ИЛ-2Рβ (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота) для определения KD. Результаты анализов на аффинность и соответствующие сенсограммы представлены на фиг. 17D, фиг. 18D и фиг. 19D. Каждый из трех конструктов продемонстрировал высокую аффинность связывания (3-8 нМ) с ИЛ-1Рβ.
Стабильность слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc оценивали с помощью метода дифференциальной сканирующей флуориметрии (ДСФ, англ. «DSF»). Эксперименты по методу ДСФ проводили с использованием системы детектирования ПЦР в реальном времени Bio-Rad CFX Connect. Белки смешивали с флуоресцентным красителем SYPRO Orange и разбавляли до концентрации 0,2 мг/мл в ФСБ. Конечная концентрация SYPRO Orange составляла 10Х. После начального 10-минутного периода инкубации при 25°C белки нагревали от 25°C до 95°C, применяя скорость нагрева 1°C/мин. Измерение флуоресценции проводилось каждые 30 секунд. Температуры плавления (Тп, англ. «Tm») рассчитывались с использованием программного обеспечения прибора. Результаты анализов на стабильность и соответствующие кривые плавления представлены на фиг. 17E, фиг. 18E и фиг. 19E. Каждый из конструктов продемонстрировал благоприятную общую стабильность с Tп ~ 68°C.
D. 1D: Активность слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в анализах пролиферации клеток
Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc в различных форматах, которые описаны выше, тестировали в анализе пролиферации клеток. МКПК человека обрабатывали исследуемыми препаратами в указанных концентрациях. Через 4 суток после обработки, МКПК метили антителами анти-CD8-FITC (RPA-T8), анти-CD4-PerCP/Cy5.5 (OKT4), анти-CD27-PE (M-T271), анти-CD56-BV421 (5.1H11), анти-CD16-BV421 (3G8) и анти-CD45RA-BV605 (Hi100) для гейтирования относительно следующих типов клеток: CD4+ Т-клетки, CD8+ Т-клетки и NK-клетки (CD56+/ CD16+). Ki67 представляет собой белок, строго связанный с пролиферацией клеток, и окрашивание на внутриклеточный Ki67 выполняли с использованием анти-Ki67-APC (Ki-67) и набора буферов для окрашивания Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс). Процентное содержание Ki67 в вышеуказанных типах клеток измеряли с использованием FACS (представлено на фиг. 20A – 20C и фиг. 21A – 21C).
Различные слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc индуцировали сильную пролиферацию CD8+ Т-клеток и NK-клеток. Примечательно, что различия в пролиферативной активности зависели от длины линкера на стороне ИЛ-15 – Fc. В частности, конструкты без линкера (только шарнир), включительно с XENP21471, XENP21474 и XENP21475, продемонстрировали более слабую пролиферативную активность.
E. 1E: Активность слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в анализе SEB-стимулированных МКПК
Как описано выше, гетеродимеры ИЛ-15/Рα могут сильно активировать Т-клетки. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc в различных форматах, которые описаны выше, тестировали в анализе МКПК, стимулированных с помощью SEB. Стафилококковый энтеротоксин B (SEB) представляет собой суперантиген, который вызывает активацию и пролиферацию Т-клеток аналогично тому, как это достигается путем активации через Т-клеточный рецептор (ТКР, англ. «TCR»). Стимуляция МКПК человека с помощью SEB является распространенным методом анализа активации и пролиферации Т-клеток.
МКПК человека, полученные от нескольких доноров, стимулировали с помощью SEB в концентрации 10 нг/мл в течение 72 часов в сочетании с 20 мкг/мл различных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc или контролей (ФСБ, изотипический контроль и бивалентное антитело против PD-1). После обработки надосадочные жидкости собирали и анализировали на ИЛ-2, данные для которого представлены на фиг. 22. Эти данные ясно демонстрируют, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc усиливали секрецию ИЛ-2 в большей степени, чем ФСБ и изотипический контроль. Примечательно, что ряд слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc обладают активностью, эквивалентной или более высокой, чем активность антитела против PD-1.
F. 1F: Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc усиливают приживление трансплантата и активность заболевания у мышей NSG с привитыми МКПК человека
Слитый белок XENP20818 ИЛ-15/Рα – Fc оценивали на модели болезни «трансплантат против хозяина» (БТПХ, англ. «GVHD») на самках мышей NSG с иммунодефицитом (NOD-SCID-gamma). Когда мышам NSG вводили МКПК человека, у МКПК человека развился аутоиммунный ответ против клеток мыши. Обработка мышей NSG, которым инъецировали МКПК человека, последующим введением слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc усиливает пролиферацию привитых Т-клеток.
10 миллионов МКПК человека приживляли мышам NSG с помощью IV-OSP в День 0 с последующим введением доз препарата XENP20818 (1 мг/кг в День 1 и затем еженедельно после этого) и рекомбинантного ИЛ-15 (Biolegend; 0,17 мг/кг в День 1 и затем еженедельно после этого). Кривая выживаемости продемонстрирован на фиг. 23. Эти данные показывают, что мыши, получавшие слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, демонстрировали быструю заболеваемость и смертность (все погибали на 10-е сутки) по сравнению с мышами, получавшими рекомбинантный ИЛ-15 (все выжили к 14-м суткам). По всей видимости, это связано с ожидаемым более длительным периодом полужизни слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc.
В другом эксперименте 10 миллионов МКПК человека приживляли мышам NSG посредством IV-OSP в День 0 с последующим введением доз препарата XENP20818 (1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,1 мг/кг или 0,03 мг/кг в День 1 и затем еженедельно после этого) или ФСБ. Контрольные группы, в которых мышам не приживляли МКПК, были включены для исследования любого эффекта препарата XENP20818 на мышей NSG дикого типа. Кровь собирали на 7-е сутки для измерения ИФН-γ, данные для которого представлены на фиг. 24, и для измерения количества CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток и CD45+ клеток, данные для которых представлены на фиг. 25A – 25C. Эти данные демонстрируют четкую зависимость доза-ответ для препарата XENP20818.
XIII. Пример 2. Гетеродимерные слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями
Для дальнейшего повышения стабильности и продления периода полужизни слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc мы сконструировали дисульфидные связи на границе раздела ИЛ-15/Рα.
A. 2A: Разработка и характеризация гетеродимеров ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидными связями
Путем изучения кристаллической структуры комплекса ИЛ-15/Рα, а также путем моделирования с помощью программного обеспечения Molecular Operating Environment (MOE; Chemical Computing Group, Монреаль, Квебек, Канада), было предсказано, что остатки на внутренней поверхности ИЛ-15/Рα могут быть замещены цистеином для образования ковалентных дисульфидных связей, как показано на фиг. 26.
Плазмиды, кодирующие ИЛ-15 или ИЛ-15/Рα (суши), конструировали с помощью стандартного синтеза генов с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5. Цепь ИЛ-15Рα (суши) содержала С-концевой полигистидиновый тэг. Остатки, идентифицированные, как описано выше, заменяли цистеинами с использованием стандартных методов мутагенеза. Кроме того, до трех аминокислот, следующих за доменом суши в ИЛ-15Рα, были добавлены к С-концу ИЛ-15Рα (суши) в качестве основы для инженерии цистеинов (иллюстративные последовательности для которых представлены на фиг. 27). Последовательности для иллюстративных вариантов ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (суши), сконструированных с цистеинами, соответственно представлены на фиг. 28 и фиг. 29, и в перечне последовательностей.
Схематические изображения гетеродимеров ИЛ-15/Рα со сконструированными дисульфидами и без них показаны на фиг. 30A – 30C.
Последовательности для иллюстративного гетеродимера нкИЛ-15/Рα XENP21996 представлены на фиг. 31. Последовательности для иллюстративных гетеродимеров дсИЛ-15/Рα XENP22004, XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494 представлены на фиг. 32. Последовательности для иллюстративного оцИЛ-15/Рα гетеродимера XENP22049 представлены на фиг. 33.
Гетеродимеры ИЛ-15/Рα «дикого типа» с дополнительными остатками на С-конце, но без сконструированных цистеинов, были получены в качестве контролей. Последовательности для дополнительных белков данного формата, включительно с XENP22001, XENP22002 и XENP22003, представлены в патентной публикации WO2018/071919 на фиг. 104H и фиг. 104I, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 531 – 532, 533 – 534 и 535 – 536, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Белки получали путем транзиентной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью хроматографии Ni-NTA.
После очистки белков их характеризовали с помощью метода капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ, англ. «CEF») относительно их чистоты и гомогенности, как в целом описано в Примере 1B, изображения гелей для которого представлены на фиг. 34 – фиг. 35. Затем белки подвергали скринингу на стабильность с использованием метода ДСФ, как в целом описано в примере 1C, данные для которого представлены на фиг. 36 – фиг. 38. В конечной итоге, белки подвергали скринингу на связывание с ИЛ-2Рβ с помощью Octet, как в целом описано в Примере 1C, данные для которого представлены на фиг. 38.
Многие из дисульфидных связей были сформированы правильно, на что указывают результаты денатурирующего невосстанавливающего КИФ, в которых можно увидеть большую молекулярную массу ковалентного комплекса по сравнению с контролями без сконструированных дисульфидных связей (фиг. 34 – фиг. 35). Гетеродимеры ИЛ-15/Рα с дисульфидной связью имели повышенную термостабильность до +13°C (фиг. 38). На связывание с ИЛ-2Рβ включение сконструированных дисульфидных связей не повлияло (фиг. 38). Предпочтительными парами с дисульфидными связями были XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494, которые были сконструированы как белки, слитые с Fc, как описано ниже.
B. 2B: Характеризация слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями
Плазмиды, кодирующие ИЛ-15 или домен ИЛ-15Рα суши с описанными выше мутациями, были субклонированы в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию с Fc (например, константные области, как показано на фиг. 8A – фиг. 8D). Схематические изображения слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc со сконструированными дисульфидными связями представлены на фиг. 39A – фиг. 39D.
Дисульфидно-связанный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «дсИЛ-15/Рα – гетеро-Fc» (фиг. 39A), является таким же, как «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки этого формата включают в себя XENP22013, XENP22014, XENP22015 и XENP22017, последовательности для которых представлены на фиг. 40A – фиг. 40B.
Дисульфидно-связанный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «дсИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 39B) является таким же, как «нкИЛ-15/Рα – Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки этого формата включают в себя XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22684 и XENP22361, последовательности для которых представлены на фиг. 41A – фиг. 41B. Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP22360, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366 представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104O, фиг. 104P, фиг. 104Q и фиг. 104R, соответственно, и как последовательности SEQ ID NO: 612 – 616, 622 – 626, 627 – 631, 632 – 636, 637 – 641 и 642 – 646, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Бивалентный дисульфидно-связанный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, или «бивалентный дсИЛ-15/Рα – Fc» (фиг. 39C), является таким же, как «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки этого формата включают в себя XENP22634, XENP22635 и XENP22636, последовательности для которых представлены на фиг. 42. Последовательности для дополнительных белков этого формата, включительно с XENP22687, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104V и как последовательности SEQ ID NO: 685 – 688, и включены в данный документ посредством ссылки.
Дисульфидно-связанный слитый белок Fc – ИЛ-15/Рα, или «Fc – дсИЛ-15/Рα» (фиг. 39D), является таким же, как «Fc – нкIL-15/Рα», но в нем ИЛ-15Рα (суши) и ИЛ-15 дополнительно ковалентно связаны в результате присутствия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки этого формата включают в себя XENP22639 и XENP22640, последовательности для которых представлены на фиг. 43.
Слитые белки «дикого типа» ИЛ-15/Рα – Fc с дополнительными остатками на С-конце, но без сконструированных цистеинов, были получены в качестве контролей. Последовательности для этих контрольных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, включительно с XENP21988, XENP21989, XENP21990, XENP21991, XENP21992, XENP22354 и XENP22355, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104F, фиг. 104G, фиг. 104L и фиг. 104M, и как последовательности SEQ ID NO 484 – 489, 490 – 495, 496 – 501, 502 – 507, 508 – 513, 582 – 586 и 587 – 591 соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Белки получали путем транзиентной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию на протеине A (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (колонка HiTrapQ объемом 5 мл с градиентом 5-40%, содержащим 50 мМ Tris pH 8,5 и 50 мМ Tris pH 8,5 с 1 М NaCl).
После очистки белков их характеризовали с помощью капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ) относительно чистоты и гомогенности, как в целом описано в Примере 1B. Как указано выше, многие из дисульфидных связей были сформированы правильно, на что указывают результаты денатурирующего невосстанавливающего КИФ, в которых можно увидеть большую молекулярную массу ковалентного комплекса по сравнению с контролями без сконструированных дисульфидных связей (фиг. 44).
Затем белки тестировали в анализе пролиферации клеток. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc (со сконструированными дисульфидными связями или без них) или контроли инкубировали с МКПК в течение 4 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD4-PerCP/Cy5.5 (RPA-T4), анти-CD8-FITC (RPA-T8), анти-CD45RA-BV510 (HI100), анти-CD16-BV421 (3G8), анти-CD56-BV421 (HCD56), анти-CD27-PE (O323) и анти-Ki67-APC (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация NK-клеток, CD4+ Т-клеток и CD8+ Т-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 45A – фиг. 45C. Каждый из слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc и контрольный ИЛ-15 индуцировал сильную пролиферацию NK-клеток, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток.
XIV. Пример 3. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированные для более низкой активности, улучшения ФК и увеличения периода полужизни
Мы пришли к выводу, что с целью дальнейшего улучшения ФК и продления периода полужизни, снижение активности ИЛ-15 приведет к уменьшению антиген-зависимого клиренса и, таким образом, увеличению периода полужизни.
A. 3A: Разработка и производство вариантов гибридных белков ИЛ-15/Рα – Fc
При изучении кристаллической структуры границ раздела ИЛ-15 : ИЛ-2Рβ и ИЛ-15 : общая цепь гамма, а также при моделировании с помощью программного обеспечения MOE, было предсказано, что на этих границах раздела есть остатки, которые могут быть заменены в целях снижения активности. На фиг. 46 изображена структурная модель комплексов ИЛ-15 : рецептор, показывающая местоположения предсказанных остатков, которые были сконструированы изостерическими заменами (с целью снижения риска иммуногенности). Последовательности для иллюстративных вариантов ИЛ-15, сконструированных с целью снижения активности, представлены на фиг. 47A – 47C.
Плазмиды, кодирующие ИЛ-15 или домен ИЛ-15Рα суши, конструировали с помощью стандартного синтеза генов с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию с Fc (например, константные области, представленные на фиг. 8A – фиг. 8D). Замены, идентифицированные так, как было описано выше, вводили с помощью стандартных методов мутагенеза.
Последовательности для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc», сконструированных с целью понижения активности, представлены на фиг. 48A – фиг. 48H, а дополнительные последовательности, включительно с XENP22815, XENP22817, XENP22818, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP23555, XENP23559, XENP23560, XENP24017, XENP24020, XENP24043 и XENP24048, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104Z, фиг. 104AA, фиг. 104AC, фиг. 104AD, фиг. 104AE, фиг. 104AF, фиг. 104AJ, фиг. 104AK, фиг. 104AM, фиг. 104AN и фиг. 104AO, и как последовательности SEQ ID NO: 729 – 734, 741 – 746, 747 – 752, 777 – 782, 783 – 788, 789 – 794, 795 – 800, 801 – 806, 807 – 812, 819 – 824, 825 – 830, 831 – 836, 837 – 842, 887 – 892, 899 – 904, 905 – 910, 937 – 942, 955 – 960, 961 – 966 и 979 – 984, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Последовательности для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «оцИЛ-15/Рα – Fc», сконструированных с целью понижения активности, представлены на фиг. 49A – фиг. 49D, а дополнительные последовательности, включительно с XENP24013, XENP24014 и XENP24016, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104AK и фиг. 104AL, и как последовательности SEQ ID NO: 914 – 921, 922 – 926 и 932 – 936, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Последовательности для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «нкИЛ-15/Рα – Fc», сконструированных с целью понижения активности, представлены на фиг. 50A – фиг. 50B. Последовательности для иллюстративных гетеродимерных белков нкИЛ-15/Рα, сконструированных с целью понижения активности, представлены на фиг. 51, а дополнительные последовательности, включительно с XENP22791, XENP22792, XENP22793, XENP22794, XENP22795, XENP22796, XENP22803, XENP22804, XENP22805, XENP22806, XENP22807, XENP22808, XENP22809, XENP22810, XENP22811, XENP22812, XENP22813 и XENP22814, представлены в патентной публикации WO2018071919 на фиг. 104V, фиг. 104W, фиг. 104X, фиг. 104Y и фиг. 104Z, и как последовательности SEQ ID NO: 689 – 690, 691 – 692, 693 – 694, 695 – 696, 697 – 698, 699 – 700, 705 – 706, 707 – 708, 709 – 710, 711 – 712, 713 – 714, 715 – 716, 717 – 718, 719 – 720, 721 – 722, 723 – 724, 725 – 726 и 727 – 728, соответственно, и включены в данный документ посредством ссылки.
Последовательности для иллюстративного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc формата «бивалентный нкИЛ-15/Рα – Fc», сконструированного с целью понижения активности, представлены на фиг. 52. Последовательности для иллюстративных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc формата «дсИЛ-15/Рα – Fc», сконструированные с целью понижения активности, представлены на фиг. 53.
Белки получали путем транзиентной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию на протеине A (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (колонка HiTrapQ объемом 5 мл с градиентом 5-40%, содержащим 50 мМ Tris pH 8,5 и 50 мМ Tris pH 8,5 с 1 М NaCl).
B. 3B: Активность in vitro вариантов гибридных белков ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc и оцИЛ-15/Рα – Fc, сконструированных с целью понижения активности
Варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc тестировали в ряде анализов пролиферации клеток.
В первом анализе пролиферации клеток слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc (со сконструированными заменами или без них) или контроль инкубировали с МКПК в течение 4 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD4-Evolve605 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD56-eFluor450 (TULY56), анти-CD3-FITC (OKT3) и анти-Ki67-APC (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация NK-клеток, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 54A – 54C и фиг. 55. Большинство слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc индуцировало пролиферацию каждой клеточной популяции; однако активность варьировала в зависимости от конкретных сконструированных замен.
Во втором анализе клеточной пролиферации слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc (со сконструированными заменами или без них) инкубировали с МКПК в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-Evolve604 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD56-eFluor450 (TULY56), анти-CD27-PE (O323), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100) и анти-Ki67-APC (20Raj1) для маркировки различных популяций клеток. На фиг. 56A – фиг. 56C и фиг. 57A – фиг. 57C показано селективное разделение различных популяций клеток после инкубации с XENP22821 с помощью метода FACS. Сначала лимфоциты были гейтированы на основе показателей бокового рассеяния (SSC) и прямого рассеяния (FSC) (фиг. 56A). Затем лимфоциты гейтировали на основе экспрессии CD3 (фиг. 56B). Клетки, отрицательные по экспрессии CD3, далее гейтировали на основе экспрессии CD16 для идентификации NK-клеток (CD16+) (фиг. 56C). CD3+ Т-клетки были далее гейтированы на основе экспрессии CD4 и CD8 для идентификации CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток и γδ Т-клеток (CD3+ CD4- CD8-) (фиг. 57A). CD4+ и CD8+ Т-клетки гейтировали на основе экспрессии CD45RA, как показано соответственно на фиг. 57B-C. Наконец, на основании процента экспрессии Ki67 определяли пролиферацию различных популяций клеток, и данные представлены на фиг. 59A – 59D. NK-клетки и CD8+ Т-клетки более чувствительны, чем CD4+ Т-клетки, к слитым белкам ИЛ-15/Рα – Fc, и, как указано выше, пролиферативная активность варьировала в зависимости от конкретных сконструированных замен. На фиг. 59D показано кратное изменение в концентрации ЕС50 для различных слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc по сравнению с контролем XENP20818. На фиг. 58A и фиг. 58B также показана активация лимфоцитов после обработки слитыми белками ИЛ-15/Рα – Fc путем гейтирования относительно экспрессии CD69 и CD25 (маркеры активации Т-клеток) до и после инкубации МКПК с XENP22821.
В третьем эксперименте дополнительные варианты гибридных белков ИЛ-15/Рα – Fc инкубировали с человеческими МКПК в течение 3 суток при температуре 37 °C. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-SB600 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD25-PE (M-A251) и анти-Ki67-APC (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация CD8+ (CD45RA-) T-клеток, CD4+ (CD45RA-) T-клеток, γδ T-клеток и NK-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 60A – 60D.
В четвертом эксперименте МКПК человека инкубировали с дополнительными вариантами ИЛ-15/Рα – Fc в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4 (SB600), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD25. -PE (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100) и анти-Ki67-APC (Ki67), и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Процентное содержание Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках и NK-клетках после обработки представлено на фиг. 61A – 61C.
В пятом эксперименте варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc инкубировали с МКПК человека в течение 3 суток при температуре 37°C. После инкубации клетки окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8α-BV510 (SK1), анти-CD8β-APC (2ST8.5H7), анти-CD16. -BV421 (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD56-BV605 (NCAM16.2) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67), и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Процентное содержание Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK-клетках представлено на фиг. 62A – 62E.
В шестом эксперименте варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc инкубировали с МКПК человека в течение 3 суток при температуре 37°C. После инкубации клетки окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8α-BV510 (SK1), анти-CD8β-APC (SIDI8BEE), анти-CD16-BV421. (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD56-BV605 (NCAM16.2) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67), и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Процент содержание Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK-клетках представлено на фиг. 63A – 63E.
C. 3C: Активность in vitro вариантов слитых белков оцИЛ-15/Рα – Fc, сконструированных с целью понижения активности с различной длиной линкера между ИЛ-15 и ИЛ-15Рα
Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc с некоторыми заменами, описанными выше, а также с линкерами различной длины между ИЛ-15 и ИЛ-15Рα (как показано в таблице 4) инкубировали с МКПК человека в указанных концентрациях в течение 3 суток при температуре 37°C. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67), и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Процент содержание Ki67 на CD8+ Т-клетках, CD4+ Т-клетках, γδ Т-клетках и NK-клетках (CD16+) представлено на фиг. 64A-D. Эти данные демонстрируют, что слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc XENP21479 является наиболее мощным индуктором пролиферации CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, NK-клеток (CD16+) и γδ Т-клеток. Каждый из слитых белков оцИЛ-15/Рα – Fc был менее эффективен, чем XENP21479, в индукции пролиферации, но различия зависели как от длины линкера, так и от конкретных сконструированных замен.
Таблица 4
D. 3D: Активность in vitro вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированных с целью понижения активности в дополнительных форматах
Варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в различных форматах (как показано в таблице 5) инкубировали с МКПК человека в указанных концентрациях в течение 3 суток при температуре 37°C. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67), и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Процентное содержание Ki67 на CD8+ Т-клетках, CD4+ Т-клетках, γδ Т-клетках и NK-клетках (CD16+), соответственно, представлено на фиг. 65A – 65D. Как указано выше, эти данные показывают, что слитый белок нкИЛ-15/Рα – Fc XENP21479 является наиболее мощным индуктором пролиферации CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, NK-клеток (CD16+) и γδ Т-клеток. Примечательно, что введение замены Q108E в формат нкИЛ-15/Рα – Fc (XENP24349) резко снижает его пролиферативную активность по сравнению с диким типом (XENP21479).
Таблица 5
E. 3E: Фосфорилирование STAT5 вариантами слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc
Транспрезентация ИЛ-15 и ИЛ-15Рα запускает фосфорилирование STAT5 и последующую пролиферацию NK- и Т-клеток (CD4+ и CD8+). В соответствии с этим, CD8+ и CD4+ Т-клетки анализировали на фосфорилирование STAT5 после 15 минут инкубации с указанными исследуемыми препаратами ИЛ-15/Рα – Fc. МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD4-BV421 (RPA-T4) и анти-CD8-A700 (SK1) в течение 30-45 минут при комнатной температуре. Клетки промывали и инкубировали с предварительно охлажденным (-20°C) 90% метанолом в течение 20-60 минут. После инкубации с метанолом клетки снова промывали и окрашивали с помощью антител анти-CD45RA-BV510 (HI100), анти-CD27-BV605 (L128), анти-CD25-PE (M A251), анти-pSTAT5-Alexa647 (pY687) и анти-FoxP3-Alexa488 (259D) для маркировки различных популяций клеток и фосфорилирования STAT5. На фиг. 66A – 66D показано селективное разделение различных популяций клеток после инкубации с XENP22821. Сначала лимфоциты гейтировали на основе SSC и FSC (фиг. 66A). Затем лимфоциты гейтировали на основе экспрессии CD4 и CD8 для идентификации CD4+ и CD8+ Т-клеток (фиг. 66B). Затем CD4+ и CD8+ Т-клетки дополнительно гейтировали на основе экспрессии CD45RA и CD27 для идентификации дополнительных субпопуляций, представленных соответственно на фиг. 66C – 66D. Наконец, было определено фосфорилирование STAT5 в различных популяциях клеток, и данные продемонстрированы на фиг. 67A – 67C. Фосфорилирование STAT5 на Т-клетках индуцировалось дозозависимым образом, а также варьировало в зависимости от конкретных сконструированных замен. На фиг. 67C продемонстрировано кратное изменение в ЕС50 для фосфорилирования STAT5 вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc по сравнению с контролем.
В другом эксперименте спленоциты мышей B6 инкубировали с указанными исследуемыми препаратами в указанных концентрациях в течение 15 минут. После инкубации спленоциты окрашивали с помощью антитела анти-CD44-BV605 (IM7). Клетки промывали и инкубировали с предварительно охлажденным (-20°C) 90% метанолом в течение 20-60 минут. После инкубации с метанолом клетки снова промывали и окрашивали с помощью антител анти-CD3-BV421 (145-2C11), анти-CD4-PE (GK1.5), анти-CD8-FITC (53-6.7) и анти-pSTAT5-Alexa647 (pY694) в течение 30-45 минут при комнатной температуре, чтобы маркировать различные популяции клеток и фосфорилирование STAT5. Средняя интенсивность флуоресценции (СИФ) от Alexa647, указывающая на фосфорилирование STAT5 на мышиных CD8+ CD45RA- и CD4+ CD45RA-, представлена на фиг. 68A – 68B.
F. 3F: ФК вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированных с целью понижения активности
Чтобы выяснить, улучшают ли слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc период полужизни и ФК, мы протестировали эти варианты в исследовании ФК на мышах C57BL/6. Двум когортам мышей (5 мышей на исследуемый препарат на когорту) вводили дозу 0,1 мг/кг указанных исследуемых препаратов путем в/в - т/в в День 0. Сыворотку крови собирали через 60 минут после введения дозы, а затем в День 2, День 4 и День 7 для когорты 1 и День 1, День 3 и День 8 для когорты 2. Уровни слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в сыворотке крови определяли с использованием антител против ИЛ-15 и против ИЛ-15Рα в сэндвич-варианте твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА, англ. «ELISA»). Иллюстративные последовательности представлены на фиг. 69. На фиг. 70 показана корреляция между активностью NK-клеток человека и периодом полужизни исследуемых препаратов. На фиг. 71 показана корреляция между активностью передачи сигнала STAT5 мыши и периодом полужизни исследуемых препаратов.
Как и предполагалось, варианты с пониженной активностью продемонстрировали значительно более длительный период полужизни. Примечательно, что период полужизни увеличился почти до 9 суток (см. XENP22821 и XENP22822) по сравнению с 0,5 суток для контрольного XENP20818 дикого типа.
G. 3G: Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc с пониженной активностью усиливают размножение лимфоцитов
В следующем эксперименте на мышах-альбиносах C57BL/6 животным вводили дозы указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях (5 мышей на группу). У мышей брали кровь и умерщвляли на День 8 для оценки сывороточной концентрации исследуемых препаратов (фиг. 146A – 146D) и количества CD8+ Т-клеток в селезенке (фиг. 73).
Эти данные демонстрируют, что варианты с пониженной активностью, такие как XENP22818 и XENP22829, способствуют большему размножению лимфоцитов. Однако слишком сильное снижение активности (такое, как наблюдается с XENP22821) отменяет усиление роста лимфоцитов.
H. 3H: Варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc усиливают приживление трансплантата и активность заболевания у мышей NSG с привитыми МКПК человека
Варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc оценивали в исследовании на моделях БТПХ, проводимом на самках мышей NSG с иммунодефицитом, как в целом описано в Примере 1F.
В первом исследовании 10 миллионов МКПК человека были приживлены мышам NSG через в/в-OSP в День 0 с последующим введением слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в указанных концентрациях в День 1. Пролиферация CD45+ коррелирует со снижением массы тела (как продемонстрировано на фиг. 74), поэтому число клеток CD45+ измеряли в День 4 и День 8 как индикатор активности заболевания в этом исследовании (фиг. 75A – 75B). Эти данные демонстрируют, что каждый из слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc усиливает пролиферацию клеток CD45+ у мышей NSG с привитыми МКПК человека по сравнению с контролем (ФСБ).
В другом исследовании 10 миллионов МКПК человека были приживлены мышам NSG через в/в-OSP в День 0 с последующим введением слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc в указанных концентрациях в День 1. Уровни ИФН-γ и число NK-клеток, CD45+ лимфоцитов, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток человека измеряли в День 4, День 7 и День 11 (фиг. 76A – 76C, фиг. 77A – 77C, фиг. 78A – 78B, фиг. 79A – 79B и фиг. 80A – 80B). Эти данные демонстрируют, что варианты слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc усиливают секрецию ИФН-γ и пролиферацию NK-клеток и Т-клеток человека в зависимости от дозы. Примечательно, что наблюдаемая активность коррелирует с активностью каждого варианта in vitro.
В еще одном исследовании 10 миллионов МКПК человека были приживлены мышам NSG с помощью в/в-OSP в День -8 с последующим введением указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях в День 0. Уровни ИФН-γ и число NK-клеток, CD45 + лимфоцитов, CD8 + T-клеток и CD4+ T-клеток измеряли в День 4, День 7 и День 11. На фиг. 81 продемонстрированы уровни ИФН-γ в сыворотке мышей в День 4, День 7 и День 11. На фиг. 82A – 82C, соответственно, показано число CD8 + Т-клеток в День 4, День 7 и День 11. На фиг. 83A – 83C, соответственно, показано число CD4 + Т-клеток в День 4, День 7 и День 11. На фиг. 84A – 84C, соответственно, показано число клеток CD45+ в День 4, День 7 и День 11. Массу тела мышей также измеряли в День 4, День 7 и День 11, и отобразили как процент от начальной массы тела на фиг. 85A – 85C.
I. 3I: Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc вызывают пролиферацию лимфоцитов у яванских макак
Для облегчения клинической разработки полезно оценить различные параметры слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc, такие как фармакодинамика, фармакокинетика и токсичность у яванских макак. Соответственно, было исследовано, способны ли слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc пролиферировать лимфоциты яванской макаки. МКПК яванской макаки инкубировали с указанными исследуемыми препаратами и оценивали экспрессию Ki67 в различных популяциях лимфоцитов, данные для которых представлены на фиг. 86.
J. 3J: Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc проявляют активность у яванских макак
Яванским макакам вводили однократную внутривенную (в/в) дозу XENP20818 (n = 3), XENP22819 (n = 1), XENP22821 (n = 3), XENP22822 (n = 3), XENP22834 (n = 3) и XENP23343 (n = 3). Число лимфоцитов (фиг. 87A – 87E, фиг. 89A – 89E, фиг. 91A – 91E, фиг. 93A – 93E, фиг. 95A – 95E и фиг. 97A – 97E) и пролиферацию (фиг. 88A – 88E, фиг. 90A – 90E, фиг. 92A – 92E, фиг. 94A – 94E, фиг. 96A – 96E и фиг. 98A – 98E) оценивали с течением времени. Полученные данные демонстрируют значительные изменения в CD56 + NK-клетках (фиг. 91A), CD16 + NK-клетках (фиг. 91B), γδ T-клетках (фиг. 91C), CD8 + T-клетках (CD45RA+) (фиг. 91D), CD8+ T-клетках (CD45RA-) (фиг. 91E) и CD4 + Т-клетках (фиг. 91F) после обработки препаратом XENP22821, достигая пика в День 6 с последующим восстановлением и нормализацией. Наконец, на фиг. 92A – 92E демонстрируется значительная экспрессия Ki67 на CD56 + NK-клетках (фиг. 92A), CD16 + NK-клетках (фиг. 92B), CD8 + T-клетках (CD45RA +) (фиг. 92C), CD8+ T-клетках (CD45RA-) (фиг. 92D) и CD4 + Т-клетках (фиг. 92E), указывающие на пролиферативную активность после обработки препаратом XENP22821. Сходная пролиферативная активность наблюдалась после обработки препаратами XENP20818, XENP22819, XENP22822 и XENP23343, демонстрируя, что большинство слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению проявляют активность у яванских макак.
XV. Пример 4. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированные с Xtend Fc
Варианты ИЛ-15/Рα – Fc, сконструированные с целью понижения активности, как описано выше, были дополнительно сконструированы с использованием Xtend Fc (далее именуемые слитые белки «ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc») для дальнейшего увеличения периода полужизни путем субклонирования плазмид, кодирующих ИЛ-15 и (или) ИЛ-15Рα (суши) в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию с Fc с заменами M428L/N434S (см. фиг. 8A – 8D, Каркас 11). Последовательности для иллюстративного ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc представлены на фиг. 99A – 99C, фиг. 100, фиг. 101 и фиг. 102 (см. также таблицу 6).
Таблица 6
A. 4А: Активность дополнительных вариантов ИЛ-15/Рα – Fc in vitro
1. 4A (a): Пролиферация лимфоцитов человека
МКПК человека инкубировали с вариантами ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-PE (RPA-T4), анти-CD8-eFluor450 (SK-1), анти-CD45RA-PE/Cy7 (HI100), анти-CD16-PerCP/Cy5.5 (3G8), анти-CD25-APC/Fire750 (M-A251) и анти-Ki67-APC (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток и NK-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 103A – 103C.
В другом эксперименте МКПК человека обрабатывали препаратами XENP20818 и XENP24306 в указанных концентрациях. Через 3 суток после обработки МКПК сначала окрашивали с помощью антител анти-CD3-PerCP/Cy5.5 (OKT3), анти-CD4-BV786 (RPA-T4), анти-CD8ß-PE/Cy7 (SIDI8BEE), анти-CD16-BV421 (3G8), анти-CD56-BV605 и анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100). Затем клетки снова промывали и окрашивали с помощью антител анти-FoxP3-AF488 (259D) и анти-Ki67-APC с использованием набора буферов для окрашивания eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс). Пролиферация CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, NK-клеток и γδ Т-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 104A – 104D.
2. 4A (b): Пролиферация лимфоцитов яванской макаки, на которую указывает Ki67
Поскольку варианты с Xtend были отобраны для исследования активности у яванских макак, была исследована их способность вызывать пролиферацию Т-клеток яванской макаки. МКПК яванской макаки инкубировали с выбранными исследуемыми препаратами в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (SP34), анти-CD4-PE/Cy7 (OKT4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25-BV421 (M-A251) и анти-Ki67-PerCP/Cy5.5 (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток и NK-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 105A – 105C. Кроме того, в соответствии с данными, приведенными в Примере 1D, аффинный вариант ИЛ-15/Рα – Fc без доменного линкера (только шарнир; т.е. XENP24341) продемонстрировал меньшую активность в отношении пролиферации лимфоцитов яванской макаки, чем соответствующий аффинный вариант ИЛ-15/Рα – Fc с линкером (например, XENP24113). В другом эксперименте МКПК яванской макаки от 3 животных инкубировали с препаратами XENP20818 и XMAb24306 в указанных концентрациях в течение 4 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-FITC (SP34), анти-CD4-PE/Cy7 (OKT4), анти-CD8α-PB (BW135), анти-CD8b-eF660 (SIDI8BEE), анти-CD45RA-APC/H7 (5H9), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD56-PerCP/Cy5.5 (B159) и анти-Ki67-PerCP/Cy5.5 (Ki-67) для маркировки различных популяций клеток, и анализировали с помощью метода FACS, как в целом описано в Примере 1D. Пролиферация CD8+ CD8α+ CD45RA- Т-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, представлена на фиг. 106.
B. 4B: Активность вариантов ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc в модели БТПХ in vivo
10 миллионов МКПК человека были приживлены мышам NSG с помощью в/в-OSP в День -7 с последующим введением указанных исследуемых препаратов (0,3 мг/кг) в День 0. Цельную кровь собирали в День 4 и День 7, и мышей умерщвляли в День 5-8 или День 11 для препарирования их селезенки с целью измерения количества CD4+ T-клеток, CD8+ T-клеток и CD45+ клеток с использованием метода FACS. На фиг. 107A – фиг. 107C, соответственно, показано количество CD4+ Т-клеток в День 4 и День 7 в цельной крови и в День 8 – в селезенке. На фиг. 108A – фиг. 108C, соответственно, показано количество CD8+ Т-клеток в День 4 и День 7 в цельной крови и в День 8 – в селезенке. На фиг. 109A – фиг. 109C, соответственно, показано количество CD4+ Т-клеток в День 4 и День 7 в цельной крови и в День 8 – в селезенке. Массу тела мышей также измеряли в День -8, День -2, День 1, День 5, День 8 и День 11, как показано на фиг. 110A – фиг. 110F. Каждая точка на графиках представляет собой одну самку мышей NSG.
C. 4C: Активность in vitro вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc в МКПК яванской макаки
Способность вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc вызывать пролиферацию у яванской макаки определяли так, как в целом описано в Примере 3I. В частности, МКПК яванской макаки инкубировали с указанными исследуемыми препаратами в течение 3 суток. После инкубации клетки окрашивали с помощью анти-CD3 FITC (OKT3), анти-CD4-PE (RPA-T4), анти-CD8-Efluor450 (SK-1), анти-CD15 PerCP/Cy5.5 (3G8), анти-CD25-APC/Fire750 (M-A251), анти-CD45RA-PE/Cy7 (HI100) и анти-Ki67-APC, и анализировали с помощью метода проточной цитометрии. Данные, отображающие процентное содержание различных популяций лимфоцитов, экспрессирующих Ki67, представлены на фиг. 111A – 111D.
D. 4D: Активность in vivo вариантов слитых белков ИЛ-15/Рα – Xtend-Fc у яванских макак
Макакам (n = 3) вводили однократную внутривенную (в/в) дозу указанных исследуемых препаратов (День 1), и кровь собирали ежедневно. Количество CD8+ T-клеток, CD4+ T-клеток и NK-клеток в крови оценивали с течением времени, как показано соответственно на фиг. 112A – 112C. Каждая точка на графиках представляет собой среднее значение от 3-х яванских макак. Эти данные показывают, что каждый из вариантов был активен в пролиферации иммунных клеток, что указывает на то, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению могут быть полезны в качестве терапевтических средств против онкологических заболеваний у людей. Кроме того, в соответствии с данными, представленными в Примерах 1D и 4A, аффинный вариант ИЛ-15/Рα – Fc с доменным линкером (т.е. XENP24113) вызвал более значительное увеличение числа лимфоцитов яванской макаки по сравнению с соответствующим аффинным вариантом ИЛ-15/Рα – Fc без линкера (только шарнир, т.е. XENP24341). Концентрации исследуемых препаратов в сыворотке крови также оценивали с течением времени, а период полужизни определяли так, как показано на фиг. 113A-113H. Эти данные показывают, что XENP24306 демонстрирует наиболее продолжительные фармакологические эффекты на Т-клетки. XENP24113 также демонстрирует продолжительные фармакологические эффекты на Т-клетки. В будущих исследованиях XENP24113 будет оцениваться в более низких дозах.
XVI. Пример 5. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc усиливают противоопухолевую активность активированных Т-клеток
A. 5A: Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc предпочтительно связывают активированные Т-клетки
В контексте иммуноонкологии важно, чтобы слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению избирательно нацеливали активированные Т-клетки в раковой среде. Для изучения этого был проведен эксперимент по связыванию со свежими и активированными МКПК. Активированные МКПК, используемые в качестве суррогатов для активированных лимфоцитов в среде опухоли, получали путем стимуляции свежих МКПК с помощью 100 нг/мл связанного с планшетом антитела против CD3 (OKT3) и 1 мкг/мл антитела против ИЛ-2 в течение 2 суток. Свежие и активированные МКПК инкубировали с указанными исследуемыми препаратами, меченными AF647, в течение 1 часа на льду. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE/Cy7 (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (SK1), анти-CD16-BV421 (3G8) и анти-CD45RA-PE-HI100 для идентификации различных клеточных популяций. Связывание исследуемых препаратов с различными популяциями клеток, на которое указывает СИФ от AF647, представлено на фиг. 114A – 114F (для аффинных вариантов ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend и без доменных линкеров), фиг. 115A – 115F (для аффинных вариантов ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend с доменными линкерами) и фиг. 116A – 116F (слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc в дополнительных форматах с Xtend). Эти данные демонстрируют, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению преимущественно связываются с Т-клетками и NK-клетками в активированных МКПК, что позволяет предположить пригодность их использования в иммуноонкологии. Кроме того, в соответствии с данными, приведенными в Примерах 1D, 4A и 4D, аффинный вариант ИЛ-15/Рα – Fc без доменного линкера (только шарнир; например, XENP24341) продемонстрировал меньшее связывание с различными популяциями лимфоцитов, чем соответствующий аффинный вариант ИЛ-15/Рα – Fc с доменным линкером (например, XENP24113), как показано на фиг. 117.
B. 5B: XmAb24306 усиливает противоопухолевый эффект активированных Т-клеток
Т-клетки очищали из МКПК человека (ЦМВ + HLA-A0201) с использованием набора реактивов EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные Т-клетки инкубировали с родительскими опухолевыми клетками MCF-7, меченными КФСЭ (обозначены в этом примере как Группа 1), или с опухолевыми клетками MCF-7, меченными КФСЭ, которые экспрессируют pp65 (обозначены в этом примере как Группа 2) в соотношении E : T = 20 : 1, и с указанными исследуемыми препаратами в течение 4 суток. В День 3 к клеткам добавляли брефельдин A (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) и антитело анти-CD107a PerCP/Cy5.5 (LAMP-1). После инкубации клетки инкубировали с набором реактивов Zombie Aqua™ Fixable Viability Kit (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) в течение 30 минут при комнатной температуре. Клетки промывали и окрашивали с помощью антител анти-CD4-APC/eFluor780 (RPA-T4), анти-CD8b-PE/Cy7 (SIDI8BEE), анти-CD25-PE (M-A251) и анти-CD69-BV605 (FN50) в течение 1 часа на льду. Клетки снова промывали и окрашивали с помощью антител анти-ИФН-γ-BV421 (4S.B3) и анти-Ki67-APC с использованием набора буферов для окрашивания eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс). Клетки анализировали с помощью метода проточной цитометрии на различные клеточные популяции. Клетки-мишени идентифицировали на основе окрашивания с КФСЭ, а мертвые клетки-мишени идентифицировали на основе окрашивания с реактивом Zombie. Эффекторные клетки (КФСЭ-, англ. «CFSE-») гейтировали на основе экспрессии CD4 и CD8.
CD25 и CD69 представляют собой маркеры активации Т-клеток. На фиг. 118A и 118B, соответственно, показана экспрессия CD25 (на которую указывает СИФ от PE) на CD8+ Т-клетках в двух группах, а на фиг. 119A и 119B, соответственно, показана экспрессия CD25 на CD4+ Т-клетках. На фиг. 120A и 120B, соответственно, показана экспрессия CD69 (на которую указывает СИФ от BV605) на CD8+ Т-клетках в двух группах, а на фиг. 121A и 121B, соответственно, показана экспрессия CD69 на CD4+ Т-клетках.
Ki67 представляет собой белок, строго связанный с клеточной пролиферацией. На фиг. 122A – 122B, соответственно, показана внутриклеточная экспрессия ИФН-γ (на которую указывает СИФ от BV421) в CD8+ Т-клетках в двух группах, а на фиг. 123A – 123B, соответственно, показана внутриклеточная экспрессия ИФН-γ в CD4+ Т-клетках. На фиг. 124A – фиг. 124C, соответственно, показаны фракции CD8+ Т-клеток Ki-67+/ ИФН-γ-, Ki-67+/ ИФН-γ+ и Ki-67-/ ИФН-γ+ в группе 1. На фиг. 125A – фиг. 125C, соответственно, показаны фракции CD4+ Т-клеток Ki-67+/ ИФН-γ-, Ki-67+/ ИФН-γ+ и Ki-67-/ ИФН-γ+ в группе 1. На фиг. 126A – фиг. 126C, соответственно, показаны фракции CD8+ Т-клеток Ki-67+/ ИФН-γ-, Ki-67+/ ИФН-γ+ и Ki-67-/ ИФН-γ+ в группе 2. На фиг. 127A – фиг. 127C, соответственно, показаны фракции CD4+ Т-клеток Ki-67+/ ИФН-γ-, Ki-67+/ ИФН-γ+ и Ki-67-/ ИФН-γ+ в группе 2.
CD107a связан с дегрануляцией и является дополнительным индикатором цитолитической активности. На фиг. 128A – фиг. 128B, соответственно, показана экспрессия CD107a (на которую указывает СИФ от PerCP/Cy5.5) на CD8+ Т-клетках в двух группах, а на фиг. 129A– фиг. 129B, соответственно, показана экспрессия CD107a на CD4+ T-клетках.
На фиг. 130A – фиг. 130B, соответственно, показано количество оставшихся клеток-мишеней (т.е. родительских опухолевых клеток MCF-7 или опухолевых клеток MCF-7, экспрессирующих pp65) для двух групп, а на фиг. 131A – фиг. 131B показано количество мертвых клеток-мишеней.
В целом, эти данные демонстрируют, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению не только способствуют уничтожению опухолевых клеток, но также что слитые белки селективно увеличивают число активированных лимфоцитов, что указывает на потенциал селективности в отношении лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль. Примечательно, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc предпочтительно индуцируют пролиферацию CD8+ и CD4+ Т-клеток, на что указывает процентное содержание Ki67 + ИФН-γ + в каждой популяции.
В аналогичном эксперименте для подтверждения преимущественной пролиферации активированных Т-клеток очищенные Т-клетки из МКПК человека (ЦМВ + HLA-A0201) инкубировали с родительскими или экспрессирующими pp65 опухолевыми клетками MCF-7 в соотношении E : T = 30 : 1 с антителом против HLA-A (W6/32) или без него (для снижения/отмены активации Т-клеток через ТКР). Данные, отображающие процент CD8+ Т-клеток, которые являются Ki67 +/ ИФН-γ +, представлены на фиг. 132. Данные, отображающие количество оставшихся клеток-мишеней (например, родительских опухолевых клеток MCF-7 или опухолевых клеток MCF-7, экспрессирующих pp65), представлены на фиг. 133. Инкубация с антителом против HLA-A и последующее снижение активации Т-клеток приводили к более низкому процентному содержанию CD8+ Ki67+ ИФН-γ+ Т-клеток и менее эффективному уничтожению клеток-мишеней, что дополнительно иллюстрирует избирательное размножение активированных лимфоцитов.
C. 5C: XENP24113 усиливает противоопухолевый эффект активированных Т-клеток
Т-клетки очищали из МКПК человека (ЦМВ + HLA-A0201) с использованием набора реактивов EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные Т-клетки инкубировали с КФСЭ-меченными опухолевыми клетками MCF-7, экспрессирующими pp65, в соотношении Е : Т = 20 : 1 и указанными исследуемыми препаратами в течение 4 суток. В День 3 к клеткам добавляли брефельдин A (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) и антитело анти-CD107a-PerCP/Cy5.5 (LAMP-1). После инкубации клетки инкубировали с набором реактивов Zombie Aqua™ Fixable Viability Kit (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) в течение 30 минут при комнатной температуре. Клетки промывали и окрашивали с помощью антител анти-CD4-APC/eFluor780 (RPA-T4), анти-CD8b-PE/Cy7 (SIDI8BEE), анти-CD25-PE (M-A251) и анти-CD69-BV605 (FN50) в течение 1 часа на льду. Клетки снова промывали и окрашивали с помощью антител анти-ИФН-γ-BV421 (4S.B3) и анти-Ki67-APC с использованием набора буферов для окрашивания eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс). Клетки анализировали с помощью метода проточной цитометрии на различные клеточные популяции. Клетки-мишени идентифицировали на основе окрашивания с КФСЭ, а мертвые клетки-мишени идентифицировали на основе окрашивания с реактивом Zombie. Эффекторные клетки (КФСЭ-, англ. «CFSE-») гейтировали на основе экспрессии CD4 и CD8.
CD25 и CD69 представляют собой маркеры активации Т-клеток. На фиг. 134A – 134B, соответственно, показана экспрессия CD25 (на которую указывает СИФ от PE) на CD8 + Т-клетках и CD4 + Т-клетках. На фиг. 135A – 135B, соответственно, показана экспрессия CD69 (на которую указывает СИФ от BV605) на CD8 + Т-клетках и CD4 + Т-клетках.
Ki67 представляет собой белок, строго связанный с клеточной пролиферацией. На фиг. 136A-B, соответственно, показана экспрессия Ki67 (на которую указывает СИФ от APC) в CD8 + Т-клетках и CD4 + Т-клетках. На фиг. 137A – 137B, соответственно, показаны фракции Ki-67+/ ИФН-γ+ CD8+ Т-клеток и CD4+ Т-клеток. На фиг. 138A – 138B, соответственно, показаны фракции CD69+/ ИФН-γ+ CD8+ Т-клеток и CD4+ Т-клеток. На фиг. 139A – 139B, соответственно, показаны фракции CD69+/ Ki-67+ CD8+ Т-клеток и CD4+ Т-клеток. На фиг. 140 показано количество оставшихся клеток-мишеней (например, опухолевых клеток MCF-7, экспрессирующих pp65), а на фиг. 141 показано количество мертвых клеток-мишеней.
В соответствии с примером 5B, каждый из слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc предпочтительно индуцирует пролиферацию CD8+ Т-клеток по сравнению с CD4+ Т-клетками, на что указывает экспрессия Ki67. Примечательно, что увеличение как фракций CD69+ KI67+, так и фракций CD69+ ИФН-γ+ коррелировало с уничтожением мишени pp65-MCF7. Следовательно, XENP24113, который обладает большей активностью, чем XmAb24306, в отношении пролиферирующих активированных Т-клеток, также более активен в отношении уничтожения мишеней.
D. 5D: ИЛ-15/Рα – Fc усиливает противоопухолевый эффект у мышей
В исследовании, представленном в Примере 4B, некоторые из вариантов с более низкой активностью, включительно с XmAb24306, не смогли усилить БТПХ. В то время как замены Xtend (M428L/N434S) усиливают ФК у человека и яванской макаки, эти замены фактически снижают экспозицию у мышей. В соответствии с исследованиями, представленными в этом примере, XENP24045, аналог XmAb24306 без Xtend, оценивался на предмет его противоопухолевого эффекта на мышах.
Мышам NOD SCID gamma (NSG) (10 на группу) внутрикожно прививали 3 × 106 клеток MCF-7, экспрессирующих p65, в задний боковой участок тела на 14-е сутки. В День 0 мышам внутрибрюшинно прививали 5 × 106 МКПК человека от HLA-согласованного донора ЦМВ+, который показал положительный результат в скрининге на pp65-реактивность Т-клеток (или ФСБ – для контрольных мышей). Мышей еженедельно обрабатывали указанными исследуемыми препаратами или ФСБ (для контрольных мышей) в течение 4 недель (всего 4 дозы). Объемы опухоли контролировали с помощью штангенциркуля, данные для которых показаны (сутки после 1-й дозы) на фиг. 142A – 142B. Кровь брали в День 7, День 12, День 19 и День 26, и анализировали с помощью метода проточной цитометрии для подсчета различных популяций лимфоцитов, как показано на фиг. 143A – 143D. В этой модели XENP24045 значительно снижал рост опухоли по сравнению с только МКПК.
XVII. Пример 6. Снижение активности слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc с Xtend-Fc и без него улучшает как фармакодинамику, так и фармакокинетику у яванских макак
Как показано в Примере 3J, ряд вариантов ИЛ-15/Рα – Fc с пониженной активностью, а также XENP23343, который является Xtend-аналогом XENP22821, проявляли активность у яванских макак.
Концентрация исследуемых препаратов в сыворотке крови с течением времени и период полужизни показаны на фиг. 144. Эти данные показывают, что активность обратно коррелирует с экспозицией для яванских макак, причем неактивный вариант слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc XENP22834 имеет самый длительный период полужизни. Это согласуется с данными, полученными на мышах, как показано в Примере 3F. Примечательно, что увеличение дозы оказывает минимальное влияние на ФК, на что указывает нормализованная концентрация Cmax в сыворотке крови для XENP22821 при дозе 1X и 3X (показано на фиг. 145). Кроме того, замены Xtend значительно улучшают экспозицию, о чем свидетельствует период полужизни XENP23343.
Кроме того, графики для числа лимфоцитов у яванских макак после воздействия препаратами XENP20818, XENP22821 и XENP23343, как показано на фиг. 87A – 87E, фиг. 91A – 91E и фиг. 97A – 97E, было повторно построено как наложение их среднего кратного изменения на фиг. 146A – 146E, чтобы подчеркнуть улучшение фармакодинамики. Эти данные ясно показывают, что XENP22821 – вариант слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, имеющий пониженную активность, увеличивает количество лимфоцитов на более длительный срок, чем XENP20818 – вариант слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc дикого типа. Примечательно, что XENP23343, аналог белка XENP22821, имеющий замену Xtend, дополнительно увеличивал продолжительность размножения лимфоцитов по сравнению с XENP22821.
В другом исследовании яванским макакам вводили однократную внутривенную (в/в) дозу 0,3X дозы препарата XENP22821 (n = 3) или 0,6X дозы препарата XmAb24306, и различные параметры оценивались с течением времени. Полученные данные демонстрируют, что препарат XmAb24306 проявляет аналогичную ФК/ФД при более низкой дозе 0,6X (по сравнению с дозой 3X, как показано в Примере 4D; наложение увеличения числа лимфоцитов из двух исследований, показанных на фиг. 147A – 147B) с благоприятной переносимостью. Примечательно, что, несмотря на аналогичную дозу препарата XENP22821 (при дозе 0,3Х), препарат XmAb24306 (при дозе 0,6Х) проявляет более благоприятную ФК/ФД по сравнению с более активным препаратом XENP22821, с положительной периферической экспрессией Ki-67 вплоть до 10-х суток (фиг. 149 – фиг. 151) и с положительной экспрессией Ki-67 в лимфатических узлах вплоть до 15-х суток (конец исследования; фиг. 148). Кроме того, препарат XmAb24306 предпочтительно увеличивает число CD8+ Т-клеток по сравнению с CD4+ Т-клетками, включая Treg (см. фиг. 153 – фиг. 154). На фиг. 155A – 155C показаны наложения количества CD8+ T-клеток, CD4+ T-клеток, CD16+ NK-клеток из этого исследования (после введения доз препарата XmAb24306) и исследования, показанного в примере 3J (после введения доз препарата XENP20818 – ИЛ-15/Рα – Fc ДТ), чтобы дополнительно проиллюстрировать улучшенную фармакодинамику, обусловленную снижением активности.
XVIII. Пример 7. Понижение активности не влияет на иммунный механизм действия слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc
Пониженная активность препарата XmAb24306 требует большей концентрации для достижения того же уровня размножения Т-клеток, который наблюдается при воздействии слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc с более высокой активностью таких как XENP20818 ДТ. Тем не менее, были опасения, что понижение активности и (или) более высокая концентрация изменит иммунный механизм, связанный с лечением ИЛ-15/Рα – Fc. Соответственно, мы исследовали профиль связанных с иммунитетом генов в МКПК, изолированных CD8+ T-клетках и изолированных NK-клетках после их инкубации либо с препаратом XENP20818 (слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc ДТ), либо с препаратом XmAb24306 в их соответствующих концентрациях EC50.
CD8+ Т-клетки обогащали с использованием набора реактивов EasySep™ Human CD8+ T Cell Enrichment Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. NK-клетки обогащали с помощью набора реактивов EasySep™ Human CD56 Positive Selection Kit II (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. 2 миллиона свежих МКПК, CD8+ T-клеток или NK-клеток инкубировали с препаратом XENP20818, препаратом XmAb24306, рекомбинантным ИЛ-15 или рекомбинантным ИЛ-2 в течение 24 или 48 часов. После инкубации экстрагировали РНК с помощью набора реактивов RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Хильден, Германия). 100 нг РНК на образец анализировали с помощью иммунопрофилирующей панели nCounter® PanCancer Immune Profiling Panel (NanoString Technologies, Сиэтл, Вашингтон). Кратное изменение в экспрессии генов после обработки препаратами XENP20818 и XmAb24306 было нанесено на график для различных условий, как показано на фиг. 156A – 156C и фиг. 157A – 157C. Эти данные показывают, что в каждом случае профиль экспрессии генов хорошо коррелировал между XENP20818 и XmAb24306, что позволяет предположить, что не должно происходить никаких изменений в иммунном механизме после введения дозы слитого ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с более низкой активностью в более высокой концентрации. Для сравнения, корреляция кратного изменения в экспрессии генов после 48-часовой обработки препаратом XmAb24306 по сравнению с ИЛ-15 показана на фиг. 158A. Предполагается, что более низкая корреляция связана с тем, что рекомбинантный ИЛ-15 также связывается с клетками, несущими рецептор ИЛ-15Рα. Далее, для сравнения, корреляция кратного изменения в экспрессии генов после 48-часовой обработки препаратом XmAb24306 по сравнению с ИЛ-2 показана на фиг. 158B. Предполагается, что более низкая корреляция обусловлена связыванием рекомбинантного ИЛ-2 с другим рецептором (например, ИЛ-2Рα).
XIX. Пример 8. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc и клетки Treg
Помимо пролиферирующих эффекторных Т-клеток, ИЛ-15 может также связываться с рецепторами на Treg-клетках и усиливать их пролиферацию; однако клетки Treg подавляют иммунный ответ и поэтому считаются неблагоприятными для лечения онкологических заболеваний. В исследовании, описанном в Примере 6, мы обнаружили, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению селективно увеличивали число CD8+ Т-клеток по сравнению с Treg-клетками. В данном Примере мы также исследовали влияние слитых белков ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению на супрессию эффекторных Т-клеток, вызванную Treg-клетками.
Ранее сообщалось, что рапамицин способствует пролиферации CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg-клеток in vitro, и размноженные в результате этого Treg-клетки оказывают супрессивное влияние на пролиферацию CD4+ и CD8+ T-клеток (см., например, Battaglia et al. (2006). Rapamycin promotes expansion of functional CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells of both healthy subjects and type 1 diabetic patients. J Immunol. 177 (12) 8338 – 8347; и Strauss et al. (2007) Selective survival of naturally occurring human CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells cultured with rapamycin. J Immunol. 178 (1) 320 – 329). CD4+ Т-клетки обогащали из МКПК человека путем отрицательной селекции с использованием набора реактивов EasySep™ Human CD4+ T Cell Enrichment Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада). Treg-клетки размножали с помощью реактива Human Treg Expander Dynabeads™ (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс) в RPMI1640 + 10% фетальная бычья сыворотка + 0,1 мкг/мл рапамицина + 500 ЕД/мл ИЛ-2 в течение 1-4 суток. Treg-клетки переносили в колбы T75, покрытые 0,5 мкг/мл антитела против CD3 (OKT3, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния) и культивировали с RPMI1640 + 10% фетальная бычья сыворотка + 0,1 мкг/мл рапамицина + 100 ЕД/мл ИЛ-2 + 0,5 мкг/мл анти-CD28 мАт. Эксперименты проводили, по меньшей мере, через 8 суток после исходного обогащения CD4+ Т-клеток из МКПК.
1 x 105 КФСЭ-меченных МКПК (аутологичных) культивировали совместно с 2-кратными разведениями Treg-клеток, меченных с помощью Tag-it Violet, на планшетах со связанными антителами против CD3 (100 нг/мл; OKT3) с 10 мкг/мл препарата XmAb24306 в течение 3 суток при температуре 37°C. Пролиферацию отвечающих CD8+ и CD4+ клеток измеряли с помощью разведения КФСЭ или Tag-it Violet, а для исключения мертвых клеток использовали окрашивание с помощью набора реактивов Zombie Aqua™ Fixable Viability Kit (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния), данные для которых показаны на фиг. 159A – 159B. Эти данные показывают, что препарат XmAb24306 преодолевает вызванную Treg клетками супрессию индуцированной антителами против CD3 пролиферации эффекторных Т-клеток.
XX. Пример 9. Слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc в комбинации с антителами, блокирующими контрольную точку
Далее мы исследовали, подходят ли слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc согласно данному изобретению для объединения с блокированием контрольной точки. Как и в Примере 5B, использовался аналог XmAb24306 без Xtend. Антитело, использованное для блокирования контрольной точки, представляло собой XENP16432 (бивалентное мАт против PD-1 на основе ниволумаба с отключенной эффекторной функцией; последовательность представлена на фиг. 160). 10 миллионов МКПК человека были приживлены мышам NSG с помощью в/в-OSP в День -1 с последующим введением указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях в День 0, День 7, День 14 и День 21. Цельную кровь собирали в День 6 и День 10 для измерения количества CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, CD45+ клеток и NK-клеток с помощью метода FACS, а также с целью измерения концентрации ИФН-γ в сыворотке крови, а также измеряли массу тела дважды в неделю. Число клеток в День 6 и День 10 показано на фиг. 161A – 161B, фиг. 162A – 162B, фиг. 163A – 163B и фиг. 164A – 164B, концентрация ИФН-γ в сыворотке в День 7 представлена на фиг. 165, а изменение массы тела в День 7, День 11, День 14 и День 18 показано на фиг. 166A – 166D. Каждая точка на графиках представляет собой одну самку мышей NSG. Эти данные демонстрируют, что препарат XENP24045 способствует размножению лейкоцитов и обостряет ксеногенную БТПХ при всех уровнях доз. Примечательно, что препарат XENP24045 проявляет сильный синергизм с блокировкой PD-1 (XENP16432), особенно при более низкой дозе XENP24045 в 0,3 мг/кг.
XXI. Пример 10. Пролиферативный эффект ИЛ-15/Рα – Fc дикого типа на различные популяции лимфоцитов
Процентное содержание различных популяций лимфоцитов, экспрессирующих Ki67, после инкубации с ИЛ-15/Рα – Fc ДТ (препарат XENP20818) исследовали так, как в целом описано в других разделах описанных в данном документе Примеров, данные для которого представлены на фиг. 167.
XXII. Пример 11. XENP24306 демонстрирует пониженную активность в стимуляции фосфорилирования STAT5 на CD8+ CD25+ Т-клетках
Фосфорилирование STAT5 на CD8+ CD45RA+ Т-клетках после инкубации с препаратом XENP24306, ИЛ-15/Рα – Fc ДТ (препарат XENP20818) и другими вариантами по активности исследовали так, как в целом описано в других разделах Примеров, данные для которого представлены на фиг. 168 и фиг. 169.
XXIII. Пример 12. При понижении активности наблюдается аналогичная кинетика в передаче сигналов при поправке на дозу
МКПК человека стимулировали дозой EC50 препарата XENP20818 или XENP24306, и анализировали каждый день в течение 6 суток. Клетки были отмыты от исследуемых препаратов через 3 суток. Данные, отображающие процентное содержание CD8 + CD45RA - Т-клеток, экспрессирующих Ki67, а также экспрессию BCL-2 и CD25 на CD8 + CD45RA - Т-клетках, представлены, соответственно, на фиг. 170, фиг. 171 и фиг. 172. Эти данные демонстрируют, что при понижении активности наблюдается аналогичная кинетика в передаче сигналов по сравнению с ДТ, при поправке на дозу.
XXIV. Пример 13. Препарат XENP24045 предпочтительно индуцирует фосфорилирование STAT5 на активированных Т-клетках
Фосфорилирование STAT5 на CD8 + Т-клетках в свежих и стимулированных МКПК человека после инкубации с препаратом XENP24045 (аналогом XENP24306 без Xtend) и ИЛ-15/Рα – Fc ДТ исследовали так, как в целом описано в других разделах, описанных в данном документе Примеров, данные для которого представлены на фиг. 173. Эти данные демонстрируют, что как XENP20818, так и XENP24045 предпочтительно индуцируют фосфорилирование STAT5 на CD8 + Т-клетках в стимулированных МКПК, что указывает на предпочтение относительно активированных Т-клеток.
XXV. Пример 14. Препарат XENP24306 вызывает предпочтительное размножение активированных Т-клеток
2 × 105 КФСЭ-меченных МКПК человека инкубировали с указанной дозой препарата XENP24306 в течение 4 суток на планшетах с указанной дозой связанного с планшетом антитела против CD3 (OKT3). Пролиферацию Т-клеток измеряли с помощью разведения КФСЭ, а для исключения мертвых клеток использовали краситель Zombie. Данные, отображающие процентное содержание пролиферирующих CD8 + CD45RA - Т-клеток, представлены на фиг. 174 и демонстрируют, что повышенная активация Т-клеток (за счет более высоких концентраций αCD3) делает возможной более значительную пролиферацию CD8 + Т-клеток с помощью препарата XENP24306.
XXVI. Пример 15. Препараты XENP24045 и XENP23557 усиливают пролиферацию Т-клеток и продуцирование ИФН-γ у мышей NSG с привитыми челМКПК (модель БТПХ), и комбинируются с блокированием контрольной точки
Препараты XENP24045 (аналог XENP24306 без Xtend) и XENP23557 (аналог XENP24113 без Xtend) исследовали отдельно или в комбинации с мАт против PD-1, в другом исследовании БТПХ. Мышам NSG прививали 5 × 10 6 МКПК человека с помощью в/в-OSP в День -1 и вводили дозы указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях в День 0, День 7, День 14 и День 21. На фиг. 175 показаны концентрации ИФН-γ в сыворотке крови в День 10, на фиг. 176 показано количество клеток CD45 + в День 17, а на фиг. 177 показана масса тела (в процентах от начальной массы тела) в День 25.
Эти данные демонстрируют, что препараты XENP24045 и XENP23557 усиливают пролиферацию Т-клеток и продуцирование ИФН-γ, а также усиливают БТПХ. Примечательно, что полученные данные демонстрируют четкую зависимость доза – ответ как для пролиферации Т-клеток, так и для продуцирования ИФН-γ, а также дальнейшего обострения БТПХ, о чем свидетельствует изменение массы тела при введении дозы 0,3 мг/кг по сравнению с 0,1 мг/кг для препарата XENP24045, и 0,1 мг/кг по сравнению с 0,03 мг/кг для препарата XENP23557. Кроме того, полученные данные демонстрируют, что слитые белки ИЛ-15/Рα – Fc хорошо комбинируются с блокировкой контрольной точки, на что указывают усиленная пролиферация Т-клеток и секреция ИФН-γ, а также усиление БТПХ.
XXVII. Пример 16. Препарат XENP24045 усиливает пролиферацию Т-клеток и продуцирование ИФН-γ у мышей NSG с привитыми челМКПК (модель БТПХ), и комбинируется с блокированием контрольной точки
В другом исследовании БТПХ, направленном на изучение препарата XENP24045 (аналог XENP24306 без Xtend), отдельно или в комбинации с мАт против PD-1, мышам NSG прививали 10 x 10 6 МКПК человека с помощью в/в-OSP в День -1 и вводили дозы указанных исследуемых препаратов в указанных концентрациях в День 0, День 7, День 14 и День 21.
На фиг. 178 показаны концентрации ИФН-γ в сыворотке в День 7, на фиг. 179 показаны количества различных популяций лимфоцитов в День 10, а на фиг. 180 – фиг. 181, соответственно, показана масса тела (в процентах от начальной массы тела) в День 11 в течение всего периода исследования. В соответствии с примером 15, эти данные демонстрируют, что препарат XENP24045 усиливает пролиферацию Т-клеток и продуцирование ИФН-γ. Кроме того, полученные данные снова демонстрируют, что препарат XENP24045 хорошо комбинируется с блокировкой контрольной точки, на что указывают усиленная пролиферация Т-клеток и секреция ИФН-γ, а также усиление БТПХ.
XXVIII. Пример 17. Слитые белки ИЛ-15 – Fc усиливают противоопухолевую активность блокирования PD-1 в мышиной модели опухоли
Мышам NSG (10 на группу) внутрикожно инокулировали 3 × 10 6 pp65-трансдуцированных клеток MCF-7 в День -14. Затем мышам внутрибрюшинно вводили 1,5 × 10 6 или 5 × 10 6 pp65-реактивных МКПК человека (или ФСБ в качестве контроля), и воздействовали исследуемыми препаратами (ФСБ, 3,0 мг/кг препарата XENP16432 или 0,5 мг/кг препарата XENP24045 в комбинации с 3 мг/кг препарата XENP16432) в День 0, и далее воздействовали указанными исследуемыми препаратами в День 7, День 14 и День 21. Количество клеток CD45+ в День 21 день после приживления челМКПК у мышей, которым были привиты 1,5 x 10 6 челМКПК, показано на фиг. 182. Объем опухоли в День 31 после приживления челМКПК у мышей, которым были привиты 1,5 x 10 6 челМКПК, а также в течение всего периода исследования, показаны на фиг. 183 и фиг. 184. Объем опухоли у мышей, которым были привиты 5 x 10 6 челМКПК, в течение всего периода исследования показан на фиг. 185. Эти данные демонстрируют, что слитый белок ИЛ-15 – Fc XENP24045 усиливает противоопухолевую активность блокирования PD-1 у мышей, которым были привиты 1,5 x 10 6 челМКПК. Примечательно, что, как продемонстрировано на фиг. 185, у мышей, которым были привиты 5 x 10 6 челМКПК, комбинирование препарата XENP24045 с XENP16432 не увеличивало противоопухолевую активность по сравнению с воздействием одним только XENP16432. Это предполагает: а) что комбинирование слитых белков ИЛ-15 – Fc с блокированием контрольной точки может обеспечить существенное преимущество в лечении опухолей, при которых наблюдается низкое количество инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (ИОЛ, англ. «TIL»); и b) что у пациентов с субоптимальным ответом на одну только иммунотерапию, блокирующую контрольную точку, добавление цитокиновой иммунотерапии, такой как терапия слитыми белками ИЛ-15 – Fc согласно данному изобретению, может усилить противоопухолевый ответ.
XXIX. Пример 18. Исследование фармакокинетики вариантов по активности ИЛ-15 – Fc у яванских макак
В другом исследовании по изучению фармакокинетики вариантов по активности ИЛ-15 – Fc с Xtend, яванским макакам вводили первую однократную внутривенную (в/в) дозу препарата XENP22853 (ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc ДТ с Xtend), препарата XENP24306 (ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D)/Рα – гетеро-Fc с Xtend), препарата XENP24113 (ИЛ-15 (N4D/N65D)/Рα – гетеро-Fc с Xtend) и препарата XENP24294 (оцИЛ-15 (N4D/N65D)/Рα – Fc с Xtend) в различных концентрациях.
На фиг. 189 показана концентрация исследуемых препаратов в сыворотке крови с течением времени после введения первой дозы. На фиг. 190 показаны относительные концентрации в сыворотке крови препарата XENP22853 и соответствующего препарата XENP20818 ДТ без Xtend (из более раннего исследования на яванских макаках) во времени. В соответствии с данными, представленными в Примере 6, эти данные демонстрируют, что одна замена Xtend (как в препарате XENP22853) обеспечивает некоторое улучшение фармакокинетики слитых белков ИЛ-15 – Fc. Примечательно, что включение вариантов по активности в дополнение к замене Xtend (как в препаратах XENP24306 и XENP24113) значительно улучшает фармакокинетику слитых белков ИЛ-15 – Fc. Неожиданно, препарат XENP24113 продемонстрировал существенно худшую фармакокинетику по сравнению с препаратом XENP24306. Аналогичным образом, слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc XENP24294 (который имеет тот же вариант по активности ИЛ-15 (N4D/N65D), что и XENP24113) также продемонстрировал существенно худшую фармакокинетику по сравнению с препаратом XENP24306. В то время как ухудшение фармакокинетики для препарата XENP24113 (и препарата XENP24294) было ожидаемым на основе того, что слитые белки ИЛ-15 – Fc, имеющие вариант ИЛ-15 (N4D/N65D), демонстрируют более высокую активность in vitro, чем слитые белки ИЛ-15 – Fc, вариант ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D) (как показано в Примере 3B и на фиг. 61), ухудшение фармакокинетики было неожиданно непропорциональным повышению активности.
Исследования на макаках показали период полужизни в несколько суток для слитых белков ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с пониженной активностью, который значительно превышает период полужизни для ИЛ-15, составляющий < 1 часа. Более того, наблюдалась заметная обратная корреляция фармакодинамики и клиренса с вариантами пониженной активности, позволяющими более высокие, более переносимые дозы и повышенную пролиферацию лимфоцитов из-за более длительной экспозиции. Основываясь на этих наблюдениях, мы предположили, что опосредованная рецепторами интернализация является ключевым фактором, который влияет на отношения ФК/ФД различных ИЛ-15 (как схематично изображено на фиг. 195).
Чтобы исследовать это дальше, мы разработали механистическую модель ФК/ФД с целью прогнозирования оптимальной аффинности лекарственного средства к рецептору, уравновешивая активность и опосредованный мишенью клиренс. Некоторые из результатов продемонстрированы на фиг. 194. Данные по ФК из нескольких исследований на яванских макаках (фиг. 196) были введены в эти модели, а нескольким дополнительным параметрам было разрешено варьироваться («плавать») в глобальном выравнивании данных по ФК. Примечательно, что моделирование сошлось на расчетных значениях KD, которые линейно коррелируют с экспериментально измеренными значениями ЕС50 для связывания (фиг. 197). На основе расчетных значений KD были сгенерированы смоделированные профили ФК, кривые занятости рецепторов (RO) и фармакодинамические профили (как показано на фиг. 198), что позволило также определить прогнозируемую площадь под кривой для RO (RO-ППК), также как и максимальную занятость рецептора (RO-Макс). Мы построили графики предсказанных значений RO-ППК против экспериментально определенного ФД-ППК (фармакодинамическая ППК – площадь под кривой для кратного увеличения в числе CD8+ Т-клеток с течением времени) (фиг. 199A), предсказанных значений RO-ППК против экспериментально определенного ФД-Макс (пиковое увеличение в числе CD8 + Т-клеток (кратное по сравнению с базовым уровнем)) (фиг. 199B), предсказанных значений RO-ППК относительно экспериментально определенного АЛЬБ-мин (нижний предел % снижения альбумина по сравнению с базовым уровнем) (фиг. 199C), предсказанных значений RO-Макс (максимальная занятость рецептора) относительно экспериментально определенного ФД-ППК (фиг. 199D), предсказанных значений RO-Макс относительно экспериментально определенного ФД-Макс (фиг. 199E) и предсказанных значений RO-Макс относительно экспериментально определенного АЛЬБ-мин (фиг. 199F). Примечательно, что предсказанные значения RO-ППК очень хорошо коррелируют с экспериментально определенным ФД-ППК (фармакодинамическая ППК), как показано на фиг. 199A, а также ФД-Макс, как показано на фиг. 198B, что указывает на то, что RO-ППК является целевым значением для минимизации.
Наконец, было выполнено моделирование кривых по множеству значений KD для версий с Xtend или без Xtend слитых белков ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc (как показано на фиг. 200), которое выявило, что предсказанное оптимальное значение KD составляет примерно 200 нМ, что аналогично измеренному значению KD для XmAb24306.
XXX. Пример 19. Слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с пониженной активностью продуктивно комбинируется с антителом против PD-1 для размножения периферических Т-клеток
В мышиной модели опухоли, которая была описана в Примере 17, воздействие комбинацией XENP24045 и мАт против PD-1 значительно усиливало противоопухолевую активность по сравнению с лечением одним только мАт против PD-1 (p ≤ 0,05 в День 21, День 27, День 38, День 41 и День 43; и p ≤ 0,01 в День 24, День 29, День 31, День 34 и День 36 согласно непарному t-критерию). Мы дополнительно исследовали размножение периферических Т-клеток. Данные, отражающие размножение CD8 + Т-клеток человека (на которое указывают подсчеты числа клеток в День 7, День 14, День 21 и День 28 исследования), показаны на фиг. 201A и фиг. 201B. Примечательно, что в День 14, День 21 и День 28 число CD8 + Т-клеток значительно увеличивалось при воздействии комбинацией XENP24045 и мАт против PD-1 по сравнению с воздействием одним только мАт против PD-1. Кроме того, как продемонстрировано на фиг. 201B, воздействие комбинацией XENP24045 и мАт против PD-1 усиливала активацию CD8 + Т-клеток (на что указывает экспрессия CD25 CD8 T-клетками) намного раньше, чем воздействие одним только мАт против PD-1.
XXXI. Пример 20. Слитый белок ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc с пониженной активностью не только улучшает фармакодинамику, но и улучшает переносимость
Основываясь на данных, собранных в ходе различных исследований на яванских макаках, мы обнаружили, что сконструированные с целью понижения активности слитые белки ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc проявляют улучшенную фармакодинамику по сравнению со слитыми белками ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, содержащими ИЛ-15 дикого типа (данные наложены на фиг. 202A – фиг. 202C), и усиливают размножение CD8 + T-клеток, CD16 + NK-клеток и лимфоцитов при введении 0,3X дозы препарата XENP20818, 0,3X дозы препарата XmAb24306 и 0,6X дозы препарата XmAb24306), с увеличением числа лимфоцитов вплоть до 1000%. Синдром выпотевания жидкости через сосуды представляет собой характерный токсический побочный эффект, ассоциированный с лечением цитокинами, такими как ИЛ-2. Одним из признаков выпотевания жидкости через сосуды является гипоальбуминемия – снижение концентрации альбумина в сыворотке крови. Соответственно, мы исследовали снижение уровня альбумина у яванских макак, которым вводили дозы препаратов, как описано выше, и, примечательно, обнаружили, что препарат XmAb24306 не только усиливает размножение лимфоцитов по сравнению с препаратом XENP20818, но также приводит к снижению падения альбумина (данные показаны на фиг. 203), что указывает на превосходящий терапевтический индекс для препарата XmAb24306. Например, в то время как и XmAb24306, и XENP20818 способствовали по крайней мере 3-кратному (200%) увеличению числа периферических CD8+ Т-клеток (при одинаковом уровне доз), степень снижения альбумина, опосредованная препаратом XmAb24306, не превышала 15%, тогда как препарат XENP20818 вызвал снижение альбумина как минимум на 25%. Более того, в 2 раза более высокая доза препарата XmAb24306 (0,6Х) способствовала по меньшей мере 11-кратному (1000%) увеличению числа периферических CD8+ Т-клеток при сохранении уровней альбумина выше 20%-ного снижения. Кроме того, из моделирования, описанного в Примере 18, по всей видимости следует, что предсказанные значения RO-Макс очень хорошо коррелировали с экспериментально определенным АЛЬБ-Мин (см. фиг. 199F), что указывает на то, что RO-Макс является целевым значением для оптимизации с целью точной настройки переносимости ИЛ-15 и других цитокинов.
XXXII. Пример 21. Разработка дополнительных вариантов с пониженной активностью ИЛ-15, содержащих модификации на границе раздела ИЛ-15 : CD132
Как продемонстрировано в Примере 3В и на фиг. 55, слитый белок оцИЛ-15/Рα – Fc дикого типа, XENP21478, проявил более низкую активность, чем ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc дикого типа, XENP20818, в индукции пролиферации NK-клеток и CD8+ Т-клеток. Соответственно, мы пришли к выводу, что варианты ИЛ-15 с пониженной активностью, подходящие для использования в слитых белках ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, могут быть слишком слабыми и непригодными для использования в других форматах слитых белков ИЛ-15, таких как слитые белки оцИЛ-15/Рα – Fc. Соответственно, нас интересовал вариант ИЛ-15 (N4D/N65D) для использования в таких других форматах, как слитые белки ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, содержащие вариант ИЛ-15 (N4D/N65D), продемонстрировавшие большую эффективность in vitro по сравнению со слитыми белками ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, содержащими вариант ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D).
Однако, как продемонстрировано выше, слитые белки ИЛ-15 – Fc, содержащие вариант ИЛ-15 (N4D/N65D), демонстрируют худшую фармакокинетику по сравнению со слитыми белками ИЛ-15 – Fc, содержащими вариант ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D). Мы отметили, что ИЛ-15 (N4D/N65D) содержит обе эти замены на границе раздела ИЛ-15, ответственные за связывание с CD122, тогда как ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D) содержит две замены (E64Q и N65D) на границе раздела ИЛ-15 : CD122; и одна замена (D30N) на границе раздела ИЛ-15 отвечает за связывание с CD132. Соответственно, мы пришли к выводу, что модификация границы раздела ИЛ-15 : CD132 может способствовать превосходной фармакокинетике, наблюдаемой для препарата XENP24306.
Принимая во внимание вышеизложенное, мы создали дополнительную библиотеку вариантов по активности ИЛ-15, включающую замену D30N. Последовательности для иллюстративных таких вариантов ИЛ-15 изображены на фиг. 191, и иллюстративные слитые белки оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащие эти варианты (последовательности для которых представлены на фиг. 192), были получены и исследованы в анализе пролиферации клеток.
МКПК человека инкубировали с указанными исследуемыми препаратами в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали с помощью антител анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-eF660 (SIDI8BEE), анти-CD16-BV421 (3G8), анти-CD45RA- APC/Fire750 (HI100), анти-CD56-BV605 (5.1H11) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67), и анализировали с помощью метода проточной цитометрии. На фиг. 193A – фиг. 193G показано процентное содержание различных популяций лимфоцитов, экспрессирующих Ki67, что свидетельствует о пролиферации.
Как и ожидалось, эти данные показывают, что слитые белки оцИЛ-15/Рα – Fc, включительно с вариантом ИЛ-15 (D30N/E64Q/N65D), не обладали активностью или резко снижали активность в отношении пролиферации различных популяций лимфоцитов по сравнению как с ИЛ-15/Рα – гетеро-Fc, содержащим тот же вариант ИЛ-15, так и со слитыми белками оцИЛ-15/Рα – Fc, содержащими вариант ИЛ-15 (N4D/N65D). Однако многие слитые белки оцИЛ-15/Рα – Fc, включающие в себя варианты ИЛ-15, которые содержат замену D30N, проявили активность, аналогичную активности оцИЛ-15/Рα – Fc ДТ XENP21993. Примечательно, что мы идентифицировали конкретный вариант ИЛ-15 (D30N/N65D), который не только содержит модификацию границы раздела ИЛ-15 : CD132, но также обладает активностью, аналогичной таковой у варианта ИЛ-15 (N4D/N65D) (в контексте слитого белка оцИЛ-15/Рα – Fc).
XXXIII. Пример 22. Дополнительные исследования
A. 22A: Препарат XENP24306 усиливает пролиферацию Т-клеток и продуцирование ИФН-γ у мышей NSG с привитыми МКПК человека (модель БТПХ), и продуктивно комбинируется с блокировкой контрольных точек
Различные концентрации препарата XENP24306 были исследованы отдельно или в комбинации с мАт против PD-1 XENP16432 в исследовании БТПХ. Мышам NSG прививали 10 × 10 6 МКПК человека с помощью в/в-OSP в День -1 и вводили дозы указанных исследуемых препаратов с указанными концентрациями в День 0, День 7, День 14 и День 21. Кровь брали в День 3, День 7, День 14 и День 21 для исследования размножения лимфоцитов (данные показаны на фиг. 204 – фиг. 206) и концентрации ИФН-γ (данные показаны на фиг. 209); масса тела измерялась дважды в неделю как индикатор БТПХ (данные показаны на фиг. 207 – фиг. 208).
Эти данные демонстрируют, что на 10-е сутки воздействие комбинацией препарата XENP24306 в дозе 0,3 мг/кг, 0,1 мг/кг или 0,01 мг/кг и препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг значительно усиливало БТПХ по сравнению с воздействием одного только препарата XENP16432 в дозе 3 мг/кг (статистический анализ был проведен с использованием непарного t-критерия). Ко Дню 14 лечение комбинацией 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг препарата XENP24306 и 3 мг/кг препарата XENP16432 значительно усилило размножение CD3+ Т-клеток по сравнению с воздействием одним только препаратом XENP16432 в дозе 3 мг/кг (статистический анализ был проведен на логарифмически преобразованных данных с использованием непарного t-критерия).
B. 22B: Препарат XENP24306 усиливает противоопухолевую активность блокировки PD-1 в мышиной модели опухоли
Различные концентрации препарата XENP24306 были исследованы отдельно или в комбинации с мАт против PD-1 XENP16432 на мышиной модели опухоли. Мышам NSG внутрикожно инокулировали 3 × 10 6 клеток MCF-7, трансдуцированных pp65, в День -15. Затем в День 0 мышам внутрибрюшинно вводили 1,5 × 10 6 МКПК человека и далее вводили указанные исследуемые препараты в День 0, День 7, День 14 и День 21. Кровь брали в День 7, День 14 и День 21 для исследования увеличения числа лимфоцитов (данные показаны на фиг. 210 – фиг. 211) и концентрации ИФН-γ (данные показаны на фиг. 214). Объем опухоли измеряли штангенциркулем три раза в неделю (данные показаны на фиг. 212 и фиг. 213A), а массу измеряли дважды в неделю в качестве индикатора БТПХ (данные показаны на фиг. 213B).
Эти данные демонстрируют, что ко Дню 11 воздействие комбинацией 1,0 мг/кг, 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг препарата XENP24306 и 3 мг/кг препарата XENP16432 значительно уменьшило объем опухоли по сравнению с воздействием одним только препаратом XENP16432 (статистический анализ был проведен с использованием непарного t-критерия на измерениях опухоли, скорректированных относительно базового уровня). Ко Дню 7 воздействие комбинацией 1,0 мг/кг, 0,3 мг/кг или 0,1 мг/кг препарата XENP24306 и 3 мг/кг препарата XENP16432 значительно усилило секрецию ИФН-γ по сравнению с воздействием одним только препаратом XENP16432. Ко Дню 14 в каждой из групп, получавших только XENP24306 или XENP24306 в комбинации с XENP16432, значительно увеличилось размножение лимфоцитов по сравнению с обработкой ФСБ. Примечательно, что на 14-е сутки каждая из групп, получавших комбинацию препарата XENP24306 с препаратом XENP16432, независимо от концентрации препарата XENP24306, а также более высокие концентрации одного только препарата XENP24306, значительно усиливали размножение лимфоцитов по сравнению с обработкой одним только препаратом XENP16432.
Приведенные выше примеры представлены для того, чтобы предоставить рядовым специалистам в данной области техники полное раскрытие и описание того, как создавать и использовать варианты реализации композиций, систем и способов согласно данному изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы изобретения считают своим изобретением. Предполагается, что модификации описанных выше способов реализации данного изобретения, очевидные для специалистов в данной области техники, находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения. Все патенты и публикации, упомянутые в данном описании, указывают на уровень квалификации специалистов в области техники, к которой относится данное изобретение. Все ссылки, процитированные в данном раскрытии, включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая ссылка была включена индивидуально посредством ссылки в полном объеме.
Все заголовки и обозначения разделов используются только для ясности и в справочных целях, и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие. Например, специалисты в данной области техники оценят полезность комбинирования различных аспектов данного раскрытия из разных заголовков и разделов, в зависимости от ситуации, в соответствии с духом и объемом изобретения, описанного в данном документе.
Все ссылки, процитированные в данном документе, тем самым включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте и для всех целей в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка была специально и индивидуально указана как включенная в качестве ссылки во всей ее полноте для всех целей.
Многие модификации и вариации данной заявки могут быть выполнены без отклонения от ее сущности и объема, как будет очевидно для специалистов в данной области техники. Конкретные варианты реализации данного изобретения и примеры, описанные в данном документе, предлагаются только в качестве примера, и данная заявка должна быть ограничена только условиями прилагаемой формулы изобретения вместе с полным объемом эквивалентов, на которые распространяется формула данного изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> XENCOR, INC.
<120> ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ ИЛ-15/ИЛ-15Р? – FC И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 067461-5203-WO
<140> PCT/US2019/028107
<141> 2019-04-18
<150> 62/756,800
<151> 2018-11-07
<150> 62/724,396
<151> 2018-08-29
<150> 62/684,143
<151> 2018-06-12
<150> 62/659,563
<151> 2018-04-18
<160> 294
<170> PatentIn, версия3.5
<210> 1
<211> 162
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr
1 5 10 15
Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His
20 25 30
Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala
35 40 45
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
50 55 60
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
65 70 75 80
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
85 90 95
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
100 105 110
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
115 120 125
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
130 135 140
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
145 150 155 160
Thr Ser
<210> 2
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 2
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 3
<211> 267
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Ala Pro Arg Arg Ala Arg Gly Cys Arg Thr Leu Gly Leu Pro Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Pro Pro Ala Thr Arg Gly Ile Thr
20 25 30
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
35 40 45
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
50 55 60
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
65 70 75 80
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp
85 90 95
Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr
100 105 110
Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu
115 120 125
Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala
130 135 140
Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr
145 150 155 160
Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser
165 170 175
Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln
180 185 190
Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile
195 200 205
Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu
210 215 220
Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu
225 230 235 240
Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg
245 250 255
Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu
260 265
<210> 4
<211> 175
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 4
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr
100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
145 150 155 160
His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr
165 170 175
<210> 5
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 5
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 6
<211> 551
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6
Met Ala Ala Pro Ala Leu Ser Trp Arg Leu Pro Leu Leu Ile Leu Leu
1 5 10 15
Leu Pro Leu Ala Thr Ser Trp Ala Ser Ala Ala Val Asn Gly Thr Ser
20 25 30
Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala Asn Ile Ser Cys Val Trp
35 40 45
Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser Cys Gln Val His Ala Trp
50 55 60
Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys Glu Leu Leu Pro Val Ser
65 70 75 80
Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu Gly Ala Pro Asp Ser Gln
85 90 95
Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu Arg Val Leu Cys Arg Glu
100 105 110
Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln Asp Phe Lys Pro Phe Glu
115 120 125
Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu Gln Val Val His Val Glu
130 135 140
Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile Ser Gln Ala Ser His Tyr
145 150 155 160
Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg Thr Leu Ser Pro Gly His
165 170 175
Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu Lys Gln Lys Gln Glu Trp
180 185 190
Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr Gln Tyr Glu Phe Gln Val
195 200 205
Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr Thr Trp Ser Pro Trp Ser
210 215 220
Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala Ala Leu Gly Lys Asp Thr
225 230 235 240
Ile Pro Trp Leu Gly His Leu Leu Val Gly Leu Ser Gly Ala Phe Gly
245 250 255
Phe Ile Ile Leu Val Tyr Leu Leu Ile Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro
260 265 270
Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe
275 280 285
Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu
290 295 300
Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro
305 310 315 320
Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu
325 330 335
Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn
340 345 350
His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His
355 360 365
Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr
370 375 380
Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro
385 390 395 400
Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp
405 410 415
Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro
420 425 430
Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser
435 440 445
Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro
450 455 460
Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro
465 470 475 480
Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala
485 490 495
Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro
500 505 510
Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg
515 520 525
Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly
530 535 540
Gln Asp Pro Thr His Leu Val
545 550
<210> 7
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 7
Ala Val Asn Gly Thr Ser Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala
1 5 10 15
Asn Ile Ser Cys Val Trp Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser
20 25 30
Cys Gln Val His Ala Trp Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys
35 40 45
Glu Leu Leu Pro Val Ser Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu
50 55 60
Gly Ala Pro Asp Ser Gln Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu
65 70 75 80
Arg Val Leu Cys Arg Glu Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln
85 90 95
Asp Phe Lys Pro Phe Glu Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu
100 105 110
Gln Val Val His Val Glu Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile
115 120 125
Ser Gln Ala Ser His Tyr Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg
130 135 140
Thr Leu Ser Pro Gly His Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu
145 150 155 160
Lys Gln Lys Gln Glu Trp Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr
165 170 175
Gln Tyr Glu Phe Gln Val Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr
180 185 190
Thr Trp Ser Pro Trp Ser Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala
195 200 205
Ala Leu Gly Lys Asp Thr
210
<210> 8
<211> 369
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 8
Met Leu Lys Pro Ser Leu Pro Phe Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Leu
1 5 10 15
Pro Leu Leu Gly Val Gly Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly
20 25 30
Asn Glu Asp Thr Thr Ala Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp
35 40 45
Ser Leu Ser Val Ser Thr Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val
50 55 60
Phe Asn Val Glu Tyr Met Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro
65 70 75 80
Gln Pro Thr Asn Leu Thr Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn
85 90 95
Asp Lys Val Gln Lys Cys Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr
100 105 110
Ser Gly Cys Gln Leu Gln Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe
115 120 125
Val Val Gln Leu Gln Asp Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln
130 135 140
Met Leu Lys Leu Gln Asn Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu
145 150 155 160
Thr Leu His Lys Leu Ser Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn
165 170 175
Arg Phe Leu Asn His Cys Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp
180 185 190
Trp Asp His Ser Trp Thr Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe
195 200 205
Ser Leu Pro Ser Val Asp Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg
210 215 220
Ser Arg Phe Asn Pro Leu Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp
225 230 235 240
Ser His Pro Ile His Trp Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe
245 250 255
Leu Phe Ala Leu Glu Ala Val Val Ile Ser Val Gly Ser Met Gly Leu
260 265 270
Ile Ile Ser Leu Leu Cys Val Tyr Phe Trp Leu Glu Arg Thr Met Pro
275 280 285
Arg Ile Pro Thr Leu Lys Asn Leu Glu Asp Leu Val Thr Glu Tyr His
290 295 300
Gly Asn Phe Ser Ala Trp Ser Gly Val Ser Lys Gly Leu Ala Glu Ser
305 310 315 320
Leu Gln Pro Asp Tyr Ser Glu Arg Leu Cys Leu Val Ser Glu Ile Pro
325 330 335
Pro Lys Gly Gly Ala Leu Gly Glu Gly Pro Gly Ala Ser Pro Cys Asn
340 345 350
Gln His Ser Pro Tyr Trp Ala Pro Pro Cys Tyr Thr Leu Lys Pro Glu
355 360 365
Thr
<210> 9
<211> 240
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 9
Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly Asn Glu Asp Thr Thr Ala
1 5 10 15
Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp Ser Leu Ser Val Ser Thr
20 25 30
Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val Phe Asn Val Glu Tyr Met
35 40 45
Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro Gln Pro Thr Asn Leu Thr
50 55 60
Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn Asp Lys Val Gln Lys Cys
65 70 75 80
Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr Ser Gly Cys Gln Leu Gln
85 90 95
Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe Val Val Gln Leu Gln Asp
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln Met Leu Lys Leu Gln Asn
115 120 125
Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu Thr Leu His Lys Leu Ser
130 135 140
Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn Arg Phe Leu Asn His Cys
145 150 155 160
Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp Trp Asp His Ser Trp Thr
165 170 175
Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe Ser Leu Pro Ser Val Asp
180 185 190
Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg Ser Arg Phe Asn Pro Leu
195 200 205
Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp Ser His Pro Ile His Trp
210 215 220
Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe Leu Phe Ala Leu Glu Ala
225 230 235 240
<210> 10
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая
6xHis tag
<400> 10
His His His His His His
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(8)
<223> Данная последовательность может включать 1-4 «Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 11
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 12
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Данная последовательность может включать 1-4 «Gly Ser Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 12
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser
20
<210> 13
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Данная последовательность может включать 1-4 «Gly Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 13
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 14
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> Данная последовательность может включать 1-4 «Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 14
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 15
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> Данная последовательность может включать 1-5 «Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 16
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 1-5 «Gly Ser Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 16
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser
20 25
<210> 17
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 1-5 «Gly Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 17
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 18
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Данная последовательность может включать 1-5 «Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 18
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 19
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 19
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 20
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Ser Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 20
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser
20 25
<210> 21
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 21
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 22
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 22
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 23
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 23
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 24
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Ser Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 24
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser
20 25
<210> 25
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(25)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 25
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 26
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Данная последовательность может включать 0-5 «Gly Gly Gly Ser»
повторяющихся единиц
<220>
<223> Подробное описание см. в поданной спецификации касательно
замен и предпочтительных вариантов реализации
<400> 26
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 27
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 27
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 28
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 29
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 30
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 31
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 31
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 32
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 32
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 33
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 33
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser
20 25 30
<210> 34
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 34
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser
20 25
<210> 35
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 35
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 36
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 36
Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
20 25 30
<210> 37
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 37
Gly Lys Pro Gly Ser
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 38
Gly Gly Gly Glu Ser
1 5
<210> 39
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 39
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 40
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 40
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 41
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 41
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 42
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 42
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 43
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 43
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 44
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 44
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Glu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 45
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 45
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Lys Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 46
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 46
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Glu
130 135 140
Asn Glu Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Glu Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 47
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 47
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Gln Leu Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 48
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 48
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 49
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 49
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 50
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 50
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 51
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 51
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 52
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 52
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 53
<211> 229
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 53
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 54
<211> 229
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 54
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Glu Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 55
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 55
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 56
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 56
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 57
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 57
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 58
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 58
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 59
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 59
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 60
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 60
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 61
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 61
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 62
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 62
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 63
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 63
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 64
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 64
Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 65
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 65
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 66
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 66
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 67
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 67
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 68
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 68
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 69
<211> 440
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 69
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn
85 90 95
Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
100 105 110
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
115 120 125
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
130 135 140
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn
145 150 155 160
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
165 170 175
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
180 185 190
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr
195 200 205
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
275 280 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 70
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 70
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 71
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 71
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 72
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 72
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 73
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 73
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 74
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 74
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 75
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 75
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 76
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 76
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 77
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 77
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 78
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 78
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 79
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 79
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 80
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 80
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 81
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 81
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 82
<211> 415
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 82
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys
65 70 75 80
Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr
85 90 95
Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys
100 105 110
Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser
115 120 125
Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu
130 135 140
Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu
145 150 155 160
Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile
165 170 175
Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
180 185 190
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
195 200 205
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu
225 230 235 240
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
245 250 255
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
260 265 270
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
275 280 285
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
290 295 300
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
325 330 335
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
340 345 350
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
355 360 365
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
370 375 380
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
385 390 395 400
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
405 410 415
<210> 83
<211> 306
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 83
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp
245 250 255
Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser
260 265 270
Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu
275 280 285
Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
290 295 300
Ile Arg
305
<210> 84
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 84
Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 85
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 85
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 86
<211> 425
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 86
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp
245 250 255
Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser
260 265 270
Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu
275 280 285
Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
290 295 300
Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu
305 310 315 320
Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu
325 330 335
Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys
340 345 350
Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala
355 360 365
Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser
370 375 380
Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu
385 390 395 400
Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His
405 410 415
Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser
420 425
<210> 87
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 87
Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 88
<211> 66
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 88
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp
65
<210> 89
<211> 67
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 89
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro
65
<210> 90
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 90
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala
65
<210> 91
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 91
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 92
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 92
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Cys Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 93
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 93
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 94
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 94
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Cys Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 95
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 95
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Cys
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 96
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 96
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Cys Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 97
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 97
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Ser Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 98
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 98
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Cys Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 99
<211> 67
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 99
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys
65
<210> 100
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 100
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Cys
65
<210> 101
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 101
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala
65
<210> 102
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 102
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 103
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 103
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Cys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 104
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 104
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Cys Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 105
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 105
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Cys Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 106
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 106
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Cys Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 107
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 107
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 108
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 108
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 109
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 109
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 110
<211> 67
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 110
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys
65
<210> 111
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 111
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 112
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 112
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Cys
65
<210> 113
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 113
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 114
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 114
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala
65
<210> 115
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 115
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 116
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 116
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 117
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 117
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Cys Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 118
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 118
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Cys Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 119
<211> 209
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 119
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn
85 90 95
Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
100 105 110
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
115 120 125
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
130 135 140
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn
145 150 155 160
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
165 170 175
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
180 185 190
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr
195 200 205
Ser
<210> 120
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 120
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 121
<211> 303
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 121
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
65 70 75 80
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
85 90 95
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
100 105 110
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu
115 120 125
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
130 135 140
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
145 150 155 160
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
165 170 175
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
180 185 190
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
195 200 205
Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu
210 215 220
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
225 230 235 240
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
245 250 255
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
260 265 270
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
275 280 285
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 122
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 122
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 123
<211> 304
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 123
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
65 70 75 80
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
85 90 95
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
100 105 110
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro
115 120 125
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
130 135 140
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
145 150 155 160
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
165 170 175
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
180 185 190
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
195 200 205
Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys
210 215 220
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
225 230 235 240
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
260 265 270
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
275 280 285
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 124
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 124
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 125
<211> 304
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 125
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
65 70 75 80
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
85 90 95
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
100 105 110
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro
115 120 125
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
130 135 140
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
145 150 155 160
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
165 170 175
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
180 185 190
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
195 200 205
Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys
210 215 220
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
225 230 235 240
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
260 265 270
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
275 280 285
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 126
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 126
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 127
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 127
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 128
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 128
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 129
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 129
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 130
<211> 304
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 130
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
65 70 75 80
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
85 90 95
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
100 105 110
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro
115 120 125
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
130 135 140
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
145 150 155 160
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
165 170 175
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
180 185 190
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
195 200 205
Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys
210 215 220
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
225 230 235 240
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
260 265 270
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
275 280 285
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 131
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 131
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 132
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 132
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 133
<211> 304
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 133
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
65 70 75 80
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
85 90 95
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
100 105 110
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro
115 120 125
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
130 135 140
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
145 150 155 160
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
165 170 175
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
180 185 190
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
195 200 205
Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys
210 215 220
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
225 230 235 240
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
260 265 270
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
275 280 285
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 134
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 134
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 135
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 135
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 136
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 136
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 137
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 137
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 138
<211> 299
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 138
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
65 70 75 80
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
85 90 95
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
100 105 110
Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
115 120 125
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
130 135 140
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
145 150 155 160
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
165 170 175
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
180 185 190
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
195 200 205
Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
210 215 220
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
225 230 235 240
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
245 250 255
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
260 265 270
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
275 280 285
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 139
<211> 298
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 139
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
65 70 75 80
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
85 90 95
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
100 105 110
Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
115 120 125
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
130 135 140
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
145 150 155 160
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
165 170 175
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
180 185 190
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
195 200 205
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
210 215 220
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
225 230 235 240
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
245 250 255
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
260 265 270
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
275 280 285
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 140
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 140
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 141
<211> 299
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 141
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
65 70 75 80
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
85 90 95
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
100 105 110
Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
115 120 125
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
130 135 140
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
145 150 155 160
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
165 170 175
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
180 185 190
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
195 200 205
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
210 215 220
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
225 230 235 240
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
245 250 255
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
260 265 270
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
275 280 285
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 142
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 142
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 143
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 143
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 144
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 144
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 145
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 145
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp
245 250 255
Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser
260 265 270
Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu
275 280 285
Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys
290 295 300
Ile Arg Asp Cys
305
<210> 146
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 146
Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 147
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 147
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 148
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 148
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 149
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 149
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 150
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 150
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 151
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 151
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 152
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 152
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 153
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 153
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 154
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 154
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 155
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 155
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 156
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 156
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 157
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 157
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 158
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 158
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 159
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 159
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 160
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 160
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 161
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 161
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 162
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 162
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 163
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 163
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 164
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 164
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 165
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 165
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 166
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 166
Asp Trp Val Asp Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 167
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 167
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 168
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 168
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 169
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 169
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 170
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 170
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 171
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 171
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 172
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 172
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 173
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 173
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 174
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 174
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 175
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 175
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 176
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 176
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 177
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 177
Asp Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 178
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 178
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 179
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 179
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 180
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 180
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 181
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 181
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 182
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 182
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 183
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 183
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 184
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 184
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 185
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 185
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 186
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 186
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 187
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 187
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 188
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 188
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 189
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 189
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 190
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 190
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 191
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 191
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 192
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 192
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 193
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 193
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 194
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 194
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 195
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 195
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 196
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 196
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 197
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 197
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 198
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 198
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 199
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 199
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 200
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 200
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 201
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 201
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 202
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 202
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 203
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 203
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 204
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 204
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 205
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 205
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 206
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 206
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 207
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 207
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 208
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 208
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 209
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 209
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 210
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 210
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 211
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 211
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 212
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 212
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asp Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asp Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 213
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 213
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 214
<211> 440
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 214
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn
85 90 95
Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
100 105 110
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
115 120 125
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
130 135 140
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn
145 150 155 160
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
165 170 175
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
180 185 190
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn Thr
195 200 205
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
275 280 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 215
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 215
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 216
<211> 440
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 216
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn
85 90 95
Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
100 105 110
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
115 120 125
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
130 135 140
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asp
145 150 155 160
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
165 170 175
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
180 185 190
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr
195 200 205
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
275 280 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 217
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 217
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 218
<211> 445
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 218
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile
100 105 110
Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu
115 120 125
Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu
130 135 140
Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His
145 150 155 160
Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu
180 185 190
Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu
195 200 205
Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu
405 410 415
Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 219
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 219
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 220
<211> 445
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 220
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile
100 105 110
Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu
115 120 125
Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu
130 135 140
Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His
145 150 155 160
Asp Thr Val Glu Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu
180 185 190
Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln
195 200 205
Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu
405 410 415
Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 221
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 221
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 222
<211> 440
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 222
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn
85 90 95
Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
100 105 110
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
115 120 125
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
130 135 140
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn
145 150 155 160
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
165 170 175
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
180 185 190
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn Thr
195 200 205
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
275 280 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 223
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 223
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 224
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 224
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 225
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 225
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 226
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 226
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 227
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 227
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 228
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 228
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 229
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 229
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 230
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 230
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 231
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 231
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 232
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 232
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 233
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 233
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 234
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 234
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 235
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 235
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 236
<211> 65
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 236
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg
65
<210> 237
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 237
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 238
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 238
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 239
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 239
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 240
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 240
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 241
<211> 298
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 241
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Cys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
65 70 75 80
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
85 90 95
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
100 105 110
Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
115 120 125
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
130 135 140
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
145 150 155 160
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
165 170 175
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
180 185 190
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln
195 200 205
Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
210 215 220
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
225 230 235 240
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
245 250 255
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
260 265 270
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
275 280 285
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 242
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 242
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 243
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 243
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 244
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 244
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 245
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 245
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
325 330 335
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 246
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 246
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 247
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 247
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
325 330 335
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 248
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 248
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 249
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 249
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
325 330 335
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 250
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 250
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 251
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 251
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 252
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 252
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 253
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 253
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
325 330 335
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 254
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 254
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 255
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 255
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
130 135 140
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
145 150 155 160
Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
165 170 175
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
180 185 190
Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
195 200 205
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
210 215 220
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
225 230 235 240
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
245 250 255
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro
260 265 270
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn
275 280 285
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
290 295 300
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val
305 310 315 320
Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln
325 330 335
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 256
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 256
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 257
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 257
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asp Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asp Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu
405 410 415
His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 258
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 258
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 259
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 259
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 260
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 260
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 261
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 261
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 262
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 262
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 263
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 263
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 264
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 264
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 265
<211> 296
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 265
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
130 135 140
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
165 170 175
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
180 185 190
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
195 200 205
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
210 215 220
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
225 230 235 240
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
260 265 270
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
275 280 285
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
<210> 266
<211> 442
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 266
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
340 345 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 267
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 267
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 268
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 268
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 269
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 269
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 270
<211> 350
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 270
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
115 120 125
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val
260 265 270
Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
325 330 335
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 271
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 271
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
85 90 95
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
100 105 110
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys
115 120 125
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
130 135 140
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
145 150 155 160
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
165 170 175
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
180 185 190
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
195 200 205
Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
245 250 255
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
275 280 285
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 272
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 272
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asp Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asp Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Leu
405 410 415
His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 273
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 273
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 274
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 274
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 275
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 275
Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 276
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 276
Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 277
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 277
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 278
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 278
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 279
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 279
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln
50 55 60
Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 280
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 280
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 281
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 281
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 282
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 282
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 283
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 283
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 284
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 284
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asp Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 285
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 285
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 286
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 286
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln Asn Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 287
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 287
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 288
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 288
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asp Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 289
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 289
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 290
<211> 435
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 290
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp
100 105 110
Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr
115 120 125
Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln Asp Leu Ile Ile Leu Ala
145 150 155 160
Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys
165 170 175
Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His
245 250 255
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
260 265 270
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr
275 280 285
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
290 295 300
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
305 310 315 320
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 291
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид
<400> 291
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
35 40 45
Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 292
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 292
Glu Pro Lys Ser
1
<210> 293
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 293
Glu Pro Lys Ser Cys
1 5
<210> 294
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид
<400> 294
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser
20
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| IL-12 ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ FC | 2019 |
|
RU2819097C2 |
| ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ Fc-СЛИТЫЕ БЕЛКИ IL15/IL15Rα | 2017 |
|
RU2779938C2 |
| БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 2017 |
|
RU2745648C2 |
| БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНОМ | 2018 |
|
RU2788531C2 |
| МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ BCMA, И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2812322C2 |
| ИММУНОЦИТОКИН, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛКОВЫЙ КОМПЛЕКС НА ОСНОВЕ IL-15/IL-15Rα, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2753282C2 |
| Белки, связывающие NKG2D, CD16 и опухолеассоциированный антиген | 2018 |
|
RU2816716C2 |
| ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА CAIX, ANO1, МЕЗОТЕЛИН, TROP2, СEA ИЛИ КЛАУДИН-18.2 | 2018 |
|
RU2792671C2 |
| ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА NKG2D, CD16 И TROP2 | 2018 |
|
RU2820629C2 |
| АНТИТЕЛА К IL-6 И ИХ СЛИТЫЕ КОНСТРУКЦИИ И КОНЪЮГАТЫ | 2019 |
|
RU2810777C2 |
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть применимо в медицине. Изобретение раскрывает новые гетеродимерные слитые белки ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и их применение в комбинации с антителами к PD-1 или к PD-L1 в иммунотерапии различных онкологических заболеваний. 6 н. и 25 з.п. ф-лы, 214 ил., 6 табл., 22 пр.
1. Способ лечения онкологического заболевания у пациента, который в этом нуждается, включающий введение данному пациенту:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, включающего:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека;
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3; и
b) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариант домена ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и любую одну из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3;
при этом первый и второй варианты домена Fc человека имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1.
2. Способ индуцирования размножения Т-клеток у пациента, включающий введение данному пациенту:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, включающего:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека;
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3; и
b) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариант домена ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и любую одну из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3;
при этом первый и второй варианты домена Fc человека имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что вариант домена ИЛ-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что суши-домен ИЛ-15Рα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первый и второй варианты доменов Fc человека имеют замены S364K/E357Q : L368D/K370S.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первый вариант домена Fc человека имеет замены S364K/E357Q, а второй вариант домена Fc человека имеет замены L368D/K370S.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что каждый из первого и второго вариантов домена Fc человека содержит замены M428L/N434S.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что каждый из первого и второго вариантов домена Fc человека содержит замены E233P/L234V/L235A/G236del/S267K.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, вводят одновременно или последовательно.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотную последовательность
(1) SEQ ID NO:253 и 254 или
(2) SEQ ID NO:204 и 205.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 253 и 254, а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб.
13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 253 и 254, а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб.
14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 253 и 254, а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
15. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 204 и 205, а антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб.
16. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 204 и 205, а антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб.
17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 204 и 205, а антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб.
18. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 253 и 254 и антитело, блокирующее контрольную точку, представляет собой атезолизумаб.
19. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 204 и 205 и антитело, блокирующее контрольную точку, представляет собой атезолизумаб.
20. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что онкологическое заболевание представляет собой метастатический рак.
21. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что онкологическое заболевание выбрано из группы, состоящей из рака молочной железы, рака легких, рака толстой кишки, рака яичников, рака кожи, рака мочевого пузыря, рака почек, рака почки, рака печени, рака головы и шеи, колоректального рака, меланомы, рака поджелудочной железы, рака (карциномы) желудка, рака пищевода, мезотелиомы, рака простаты, лейкоза, лимфомы и миеломы.
22. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что уровень выпотевания жидкости сквозь сосуды у пациента минимизируется.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что уровень выпотевания жидкости сквозь сосуды находится в диапазоне от 20%-ного снижения или менее сывороточного альбумина у пациента после введения.
24. Способ по любому из пп. 2-23, отличающийся тем, что размножение Т-клеток представляет собой по меньшей мере 2-кратное увеличение количества Т-клеток.
25. Способ по любому из пп. 2-24, отличающийся тем, что размножение Т-клеток колеблется от 2-кратного до 15-кратного увеличения количества Т-клеток.
26. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что указанный способ не повышает вероятность индукции гипоальбуминемии.
27. Способ по любому из пп. 2-26, отличающийся тем, что Т-клетки включают в себя инфильтрирующие опухоль лимфоциты.
28. Комбинация, содержащая гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, выбранное из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1 для использования при лечении онкологического заболевания у пациента, который в этом нуждается,
при этом гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека;
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3; и
b) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариант домена ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и любую одну из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3;
первый и второй варианты домена Fc человека имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU.
29. Комбинация, содержащая гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc и антитело, блокирующее контрольную точку, выбранное из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1 для использования для размножения Т-клеток у пациента,
при этом гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc содержит:
а) первый мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) суши-домен рецептора ИЛ-15 альфа (ИЛ-15Рα) человека;
ii) первый доменный линкер; и
iii) первый вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3; и
b) второй мономер, содержащий в направлении от N- до C-конца:
i) вариант домена ИЛ-15, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и любую одну из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N4D/N65D, D30N/N65D и D30N/E64Q/N65D;
ii) второй доменный линкер; и
iii) второй вариант домена Fc человека, содержащий CH2-CH3;
первый и второй варианты домена Fc человека имеют набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411E/K360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU.
30. Способ лечения онкологического заболевания у пациента, который в этом нуждается, включающий введение:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, включающего:
а) первый мономер, содержащий аминокислотную последовательность, закодированную полинуклеотидом, который кодирует SEQ ID NO: 253; и
b) второй мономер, содержащий аминокислотную последовательность, закодированную полинуклеотидом, который кодирует SEQ ID NO: 254; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1.
31. Способ индуцирования размножения Т-клеток у пациента, включающий введение:
терапевтически эффективного количества гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/ИЛ-15Рα – Fc, включающего:
а) первый мономер, содержащий аминокислотную последовательность, закодированную полинуклеотидом, который кодирует SEQ ID NO: 253; и
b) второй мономер, содержащий аминокислотную последовательность, закодированную полинуклеотидом, который кодирует SEQ ID NO: 254; и
терапевтически эффективного количества антитела, блокирующего контрольную точку, выбранного из группы, состоящей из антитела против PD-1 и антитела против PD-L1.
| WO 2016004060 A2, 07.01.2016 | |||
| EP 3093295 A1, 16.11.2016 | |||
| US 2016355608 A1, 08.12.2016 | |||
| WRANGLE J.M | |||
| et al | |||
| Дезинтегратор | 1922 |
|
SU803A1 |
| Способ изготовления электрических сопротивлений посредством осаждения слоя проводника на поверхности изолятора | 1921 |
|
SU19A1 |
| Кипятильник для воды | 1921 |
|
SU5A1 |
| XIAOYUN, ZHU et al | |||
| Novel | |||
