ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ Fc-СЛИТЫЕ БЕЛКИ IL15/IL15Rα Российский патент 2022 года по МПК C07K14/54 C07K14/715 C07K19/00 C12N15/09 A61K38/00 A61K38/19 A61P35/00 

Притязание на приоритет

Эта заявка заявляет приоритет заявки США № 62/408655, поданной 14 октября 2016 г., заявки США № 62/416087, поданной 1 ноября 2016 г., заявки США № 62/443465, поданной 6 января 2017 г., и заявки США № 62/477926, поданной 28 марта 2017 г., которые явным образом и в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки, с особым акцентом на приведенные в них фигуры, подписи и формулы изобретения.

Уровень техники

IL-2 и IL-15 способствуют пролиферации и дифференцировке В-клеток, Т-клеток и NK-клеток. IL-2 также важен для функции и выживаемости регуляторных T-клеток (Treg). Оба цитокина осуществляют свою клеточную сигнальную функцию посредством связывания с тримерным комплексом, состоящим из двух общих рецепторов, общей гамма-цепи (γc; CD132) и β-цепи рецептора IL-2 (IL-2Rβ; CD122), а также альфа-цепи рецептора, уникальной для каждого цитокина: рецептора IL-2 альфа (IL-2Rα; CD25) или рецептора IL-15 альфа (IL-15Rα; CD215). Оба цитокина считаются потенциально ценными терапевтическими средствами в онкологии, а IL-2 был одобрен для применения в случае пациентов с метастатической почечно-клеточной карциномой и злокачественной меланомой. В настоящее время применение рекомбинантного IL-15 не одобрено, хотя проводится несколько клинических испытаний.

IL-2 имеет несколько проблем как терапевтический агент. Во-первых, он преимущественно активирует Т-клетки, которые экспрессируют высокоаффинный рецепторный комплекс, который зависит от экспрессии CD25. Поскольку клетки Treg конститутивно экспрессируют CD25, они конкурируют за IL-2 с эффекторными T-клетками, активация которых является предпочтительной при лечении онкологических заболеваний. Этот дисбаланс привел к концепции применения высоких доз IL-2. Однако этот подход создает дополнительные проблемы из-за опосредованной IL-2 токсичности, такой как синдром протекания жидкости из сосудов.

IL-2 секретируется главным образом активированными T-клетками, тогда как его рецепторы расположены на активированных T-клетках, Treg, NK-клетках и B-клетках. В противоположность этому, IL-15 вырабатывается в моноцитах и дендритных клетках и в основном представлен в виде мембраносвязанного гетеродимерного комплекса с IL-15Rα, присутствующего на тех же клетках. Его эффекты реализуются посредством транс-презентации комплекса IL-15/IL-15Rα NK-клеткам и CD8+ T-клеткам, экспрессирующим IL-2Rβ и общую гамма-цепь.

Как потенциальные лекарственные препараты, оба цитокина подвержены очень быстрому выведению с измеряемым в минутах временем полужизни. Кроме того, IL-15 сам по себе менее стабилен вследствие тенденции к существованию преимущественно в виде IL-15R-ассоциированного комплекса. Также было показано, что рекомбинантно получаемый гетеродимер IL15/IL15Rα может эффективно активировать Т-клетки. Тем не менее, короткое время полужизни препятствует благоприятному дозированию. Данное изобретение решает эту проблему путем предоставления новых гетеродимерных Fc-слитых белков IL15/IL15Rα.

Краткое описание сущности изобретения

Соответственно, в одном аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, содержащий (а) первый слитый белок, содержащий первый белковый домен и первый Fc-домен, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого Fc-домена посредством первого доменного линкера; (b) второй слитый белок, содержащий второй белковый домен и второй Fc-домен, при этом второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу Fc-домена посредством второго доменного линкера; при этом первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU, и при этом первый белковый домен содержит белок IL15, а второй белковый домен содержит белок IL15Rα. В некоторых вариантах реализации изобретения первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого Fc-домена напрямую и без применения первого доменного линкера и/или второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго Fc-домена напрямую и без применения второго доменного линкера.

В некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимерный белок содержит: (i) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15902), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP5908), (ii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15902), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15909), (iii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16479), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (iv) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15902), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16481), (v) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15902), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16483), (vi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16479), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15909), (vii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16479), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16481), (viii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16480), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16482), (ix) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16480), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15909), (x) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17064), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17038), (xi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17064), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17040), (xii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17062), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (V17044), (xiii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17686), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xiv) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17687), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xv) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17688), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xvi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17689), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xvii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17690), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xviii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17691), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xix) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17692), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xx) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17693), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17694), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17695), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxiii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17696), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxiv) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17697), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxv) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17698), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxvi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17699), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxvii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17701), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxviii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17691), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxix) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17702), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxx) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17703), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxi) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17704), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17705), и второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxiii) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP18295), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP17761), (xxxiv) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP18783), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxv) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP18784), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxvi) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP18786), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxvii) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP18788), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP15908), (xxxviii) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP19242), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16481), или (xxxix) указанный первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP19243), и указанный второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16481).

В некоторых случаях гетеродимерный белок выбран из группы, состоящей из XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559, XENP24019 и XENP24020.

В дополнительном аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, содержащий (а) слитый белок, содержащий первый белковый домен, второй белковый домен и первый Fc-домен, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу второго белкового домена посредством первого доменного линкера, а второй белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого Fc-домена посредством второго доменного линкера; (b) второй Fc-домен; при этом первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU, и при этом первый белковый домен содержит белок IL15Rα, а второй белковый домен содержит белок IL15.

В некоторых вариантах реализации изобретения первый слитый белок имеет полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16478), а Fc-домен имеет полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8924). Гетеродимерный белок может представлять собой XENP21478.

В другом аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, содержащий (а) слитый белок, содержащий первый белковый домен и первый Fc-домен, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу первого Fc-домена посредством первого доменного линкера; (b) второй Fc-домен; и c) второй белковый домен, нековалентно присоединенный к первому белковому домену, при этом первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU, и при этом первый белковый домен содержит IL15Rα, а второй белковый домен содержит белок IL15.

В некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимерный белок содержит: (i) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (XENP16481), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484); (ii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17034), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484); (iii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17038), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484); (iv) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17036), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484); (v) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17038), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17074); (vi) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17039), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17074); (vii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17040), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17074); (viii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17044), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17071); (ix) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17044), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17072); (x) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17075), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17041); (xi) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17043), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17070); (xii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17045), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17073); (xiii) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17042), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17083); или (xiv) слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (15908), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (8793), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484). Гетеродимерный белок может быть выбран из группы, состоящей из XENP21479, XENP22357, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366 и XENP22637.

В дополнительном аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, содержащий: a) первый слитый белок, содержащий первый белковый домен и первый Fc-домен, при этом первый белковый домен ковалентно присоединен к N-концу указанного первого Fc-домена посредством доменного линкера; b) второй слитый белок, содержащий первую тяжелую цепь, содержащую второй белковый домен, и вторую тяжелую цепь, содержащую второй Fc-домен, при этом второй белковый домен ковалентно присоединен к С-концу второго Fc-домена посредством доменного линкера; c) третий белковый домен, нековалентно присоединенный к первому белковому домену первого слитого белка; и d) четвертый белковый домен, нековалентно присоединенный ко второму белковому домену второго слитого белка, при этом первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU, и при этом первый белковый домен и второй белковый домен содержат белок IL15Rα, а третий белковый домен и четвертый белковый домен содержат белок IL15.

В некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимерный белок содержит (i) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17023), второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17023), третий белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484), и четвертый белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (16484), или (ii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17581), второй слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17581), третий белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17074), и четвертый белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO:XX (17074). Гетеродимерный белок может представлять собой XENP21978 или XENP22634.

В дополнительном аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, содержащий: (а) первый слитый белок, содержащий первый Fc-домен и первый белковый домен, при этом Fc-домен ковалентно присоединен к N-концу первого белкового домена посредством первого доменного линкера; (b) второй Fc-домен, и c) второй белковый домен, нековалентно присоединенный к первому белковому домену первого слитого белка; при этом первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L и K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU, и при этом первый белковый домен содержит белок IL15Rα, а второй белковый домен содержит белок IL15.

В некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимерный белок содержит (i) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (17603), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (8927), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (16484); или ii) первый слитый белок, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (17605), второй Fc-домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (8927), и второй белковый домен, имеющий полипептидную последовательность SEQ ID NO: XX (17074).

В любых из вариантов реализации данного изобретения первый и/или второй Fc-домены могут содержать дополнительный набор аминокислотных замен, содержащий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с нумерацией EU. В некоторых случаях первый и/или второй Fc-домены содержат дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с нумерацией EU.

В любых из вариантов реализации данного изобретения белок IL15 имеет полипептидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 (полноразмерный человеческий IL15) и SEQ ID NO:2 (усеченный человеческий IL-15), а белок IL15 имеет полипептидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:3 (полноразмерный человеческий IL15Rα) и SEQ ID NO:4 (домен sushi человеческого IL15Rα). В некоторых случаях белок IL15 и белок IL15Rα содержат набор аминокислотных замен или добавлений, выбранный из группы, состоящей из E87C : D96/P97/C98; E87C : D96/C97/A98; V49C : S40C; L52C : S40C; E89C : K34C; Q48C : G38C; E53C : L42C; C42S : A37C; и L45C : A37C, соответственно.

В дополнительном аспекте в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, выбранный из группы, состоящей из XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP21478, XENP21479, XENP21978, XENP22013, XENP22015, XENP22017, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366, XENP22637 и XENP22639. В некоторых аспектах в данном изобретении предложен гетеродимерный белок, выбранный из группы, состоящей из XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559, XENP24019 и XENP24020. Также предложены нуклеиновые кислоты, экспрессионные векторы и клетки-хозяева в дополнение к способам получения этих белков и лечения пациентов с их помощью.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 иллюстрирует структуру IL-15 в комплексе с его рецепторами IL-15Rα (CD215), IL-15Rβ (CD122) и общей гамма-цепью (CD132).

Фиг. 2A-2B иллюстрируют последовательности для IL-15 и его рецепторов. Фиг. 2А иллюстрирует последовательности для человеческого IL-15, человеческого IL-15Rα и человеческого IL-15Rβ. Фиг. 2А иллюстрирует последовательности для человеческой общей гамма-цепи.

Фиг. 3A-3E иллюстрируют применимые пары наборов вариантов с гетеродимеризацией Fc (включая искаженные и pI-варианты). На фиг. 3D и 3E приведены варианты, для которых нет соответствующих вариантов «мономера 2»; это pI-варианты, которые можно использовать отдельно для любого мономера.

На фиг. 4 приведен список изостерических вариантов константных областей антитела и их соответствующие замены. pI_(-) обозначает варианты с более низкой pI, тогда как pI_(+) обозначает варианты с более высокой pI. Они могут быть необязательно и независимо скомбинированы с другими гетеродимеризационными вариантами согласно изобретению (а также другими типами вариантов, описанными в данном документе).

На фиг. 5 проиллюстрированы применимые абляционные варианты, которые предотвращают связывание FcγR (иногда называемые «нокаутными» или «НО» вариантами). Обычно абляционные варианты встречаются в обоих мономерах, хотя в некоторых случаях они могут присутствовать только в одном мономере.

Фиг. 6A-6E иллюстрируют два в особенности применимых варианта реализации «нецитокиновых» компонентов согласно изобретению.

На фиг. 7 проиллюстрирован ряд типовых линкеров переменной длины. В некоторых вариантах реализации изобретения эти линкеры применяются для связывания C-конца IL-15 и/или IL-15R(sushi) с N-концом Fc-области. В некоторых вариантах реализации изобретения эти линкеры применяются при слиянии IL-15 с IL-15R(sushi).

Фиг. 8A-8E иллюстрируют последовательности нескольких применимых остовов формата IL-15/Fc-Rα на основании человеческого IgG1 без цитокиновых последовательностей (например, IL-15 и/или IL-15Rα(sushi)). Остов 1 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 2 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 3 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K : L368E/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368E/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 4 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты D401K : K360E/Q362E/T411E, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами K360E/Q362E/T411E и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 5 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356D/358L) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 6 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях, а также вариант N297A в обеих цепях. Остов 7 идентичен 6-ому за исключением того, что мутация представляет собой N297S. В альтернативных форматах остовов 6 и 7 могут быть исключены абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях. Остов 8 основан на человеческом IgG4 и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S, а также вариант S228P (нумерация EU, что соответствует S241P по Kabat) в обеих цепях, который приводи к абляции обмена Fab-фрагментами, как известно в данной области техники. Остов 9 основан на человеческом IgG2 и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S. Остов 10 основан на человеческом IgG2 и содержит искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты Q295E/N384D/Q418E/N421D в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S, а также вариант S267K в обеих цепях. Остов 11 идентичен остову 1 за исключением того, что он содержит мутации Xtend M428L/N434S. Остов 12 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих идентичных цепях, абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих идентичных цепях. Остов 13 основан на человеческом IgG1 (аллотип 356E/358M) и содержит C220S в обеих цепях, искаженные варианты S364K/E357Q : L368D/K370S, pI-варианты P217R/P229R/N276K в цепи с искаженными вариантами L368D/K370S и абляционные варианты E233P/L234V/L235A/G236del/S267K в обеих цепях.

Как понятно специалистам в данной области техники и описано ниже, эти последовательности можно использовать с любыми описанными в данном документе парами IL-15 и IL-15Rα(sushi), включая, но не ограничиваясь этим, IL-15/Rα-гетероFc, ncIL-15/Rα, scIL-15/Rα и dsIL-15/Rα, как схематически изображено на фиг. 9A-9G и фиг. 39A-39D. Кроме того, любые варианты IL-15 и/или IL-15Rα(sushi) могут быть включены в остовы с фиг. 8А-8Е в любой комбинации.

В каждый из этих остовов включены последовательности, которые на 90%, 95%, 98% и 99% идентичны (по определению данного документа) перечисленным последовательностям и/или содержат от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дополнительных аминокислотных замен (по сравнению с «родительской» конструкцией с фигуры, которая, как понятно специалистам в данной области техники, уже содержит ряд аминокислотных модификаций по сравнению с родительским человеческим IgG1 (или IgG2, или IgG4, в зависимости от остова). Таким образом, указанные остовы могут содержать дополнительные аминокислотные модификации (в общем случае аминокислотные замены) в дополнение к искаженным, pI- и абляционным вариантам, содержащимся в остовах с этой фигуры (фиг. 8).

На фиг. 9A-9G проиллюстрировано несколько форматов для слитых белков IL-15/Rα-Fc согласно данному изобретению. Слияние IL-15Rα и гетеродимерного Fc или «IL-15/Rα-гетероFc» (фиг. 9A) содержит IL-15, рекомбинантно слитый с одной стороной гетеродимерного Fc, и IL-15Rα(sushi), рекомбинантно слитый с другой стороной гетеродимерного Fc. IL-15 и IL-15Rα(sushi) могут содержать линкер Gly-Ser переменной длины между C-концом и N-концом Fc-области. Слияние одноцепочечный IL-15/Rα-Fc или «scIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9B) содержит IL-15Rα(sushi), слитый с IL-15 посредством линкера переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом IL-15/IL-15Rα(sushi) или «scIL-15/Rα»), который затем сливается с N-концом гетеродимерной Fc-области, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc». Нековалентный IL-15/Rα-Fc или «ncIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9C) содержит IL-15Rα(sushi), слитый с гетеродимерной Fc-областью, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/Rα, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc». Слияние бивалентный нековалентный IL-15/Rα-Fc или «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9D) содержит IL-15Rα (sushi), слитый с N-концом гомодимерной Fc-области, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/Rα. Слияние бивалентный одноцепочечный IL-15/Rα-Fc или «бивалентный scIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9E) содержит IL-15, слитый с IL-15Rα (sushi) посредством линкера переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом IL-15/IL-15Rα (sushi) или «scIL-15/Rα»), который затем сливают с N-концом гомодимерной Fc-области. Слияние Fc и нековалентного IL-15/Rα или «Fc-ncIL-15/Rα» (фиг. 9F) содержит IL-15Rα (sushi), слитый с С-концом гетеродимерной Fc-области, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/Rα, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc». Слияние Fc и одноцепочечного IL-15/Rα или «Fc-scIL-15/Rα» (фиг. 9G) содержит IL-15, слитый с IL-15Rα (sushi) посредством линкера переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом IL-15/IL-15Rα (sushi) или «scIL-15/Rα»), который затем сливают с С-концом гетеродимерной Fc-области, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc».

На фиг. 10 приведены последовательности XENP20818 и XENP21475, иллюстрирующие слитые белки IL-15/Rα-Fc формата «IL-15/Rα-гетероFc», при этом дополнительные последовательности перечислены в перечне последовательностей как XENP 20819, 21471, 21472, 21473, 21474, 21476 и 21477. IL-15 и IL-15Rα (sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 11 приведены последовательности XENP21478, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «scIL-15/Rα-Fc», при этом дополнительные последовательности перечислены в перечне последовательностей как XENP 21993, 21994, 21995, 23174, 23175, 24477 и 24480. IL-15 и IL-15Rα (sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 12 приведены последовательности XENP21479, XENP22366 и XENP24348, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «ncIL-15/Rα-Fc». IL-15 и IL-15Rα (sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 13 приведены последовательности XENP21978, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc», при этом дополнительные последовательности перечислены в перечне последовательностей как XENP21979. IL-15 и IL-15Rα (sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 14 приведены последовательности иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентный scIL-15/Rα-Fc». IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 15 приведены последовательности XENP22637, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «Fc-ncIL-15/Rα», при этом дополнительные последовательности перечислены в перечне последовательностей как XENP22638. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 16 приведены последовательности иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc формата «Fc-scIL-15/Rα». IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 17A-17E проиллюстрированы А) формат слитого белка IL-15/Rα-Fc для XENP20818, чистота и гомогенность XENP20818 по определению B) ЭХ и С) КИФ, D) аффинность XENP20818 в отношении IL-2Rβ по определению в анализе Octet и Е) стабильность XENP20818 по определению ДСФ.

На фиг. 18A-18E проиллюстрированы А) формат слитого белка IL-15/Rα-Fc для XENP21478, чистота и гомогенность XENP21478 по определению B) ЭХ и С) КИФ, D) аффинность XENP21478 в отношении IL-2Rβ по определению в анализе Octet и Е) стабильность XENP21478 по определению ДСФ.

На фиг. 19A-19E проиллюстрированы А) формат слитого белка IL-15/Rα-Fc для XENP21479, чистота и гомогенность XENP21479 по определению B) ЭХ и С) КИФ, D) аффинность XENP21479 в отношении IL-2Rβ по определению в анализе Octet и Е) стабильность XENP21479 по определению ДСФ.

На фиг. 20A-20C проиллюстрирована индукция А) NK-клеток (CD56⁺/CD16⁺), B) CD4⁺ Т-клеток, и С) пролиферация CD8⁺ Т-клеток иллюстративными слитыми белками IL-15/Rα-Fc в формате IL-15/Rα-гетероFc с разными длинами линкеров на основании экспрессии Ki67, измеряемой методом FACS.

На фиг. 21A-21C проиллюстрирована индукция А) NK-клеток (CD56⁺/CD16⁺), B) CD4⁺ Т-клеток, и С) пролиферация CD8⁺ Т-клеток иллюстративными слитыми белками IL-15/Rα-Fc в формате scIL-15/Rα-Fc (XENP21478) и в формате ncIL-15/Rα-Fc (XENP21479) на основании экспрессии Ki67, измеряемой методом FACS.

На фиг. 22 проиллюстрировано повышение секреции IL-2 иллюстративными слитыми белками IL-15/Rα-Fc, изотипическим контролем и анти-PD-1 антителом по сравнению с контрольным ФСБ в анализе SEB-стимуляции МКПК.

На фиг. 23 проиллюстрирована кривая выживаемости для мышей NSG с трансплантированным МКПК после обработки XENP20818 и рекомбинантным IL-15.

На фиг. 24 проиллюстрирована концентрация в сыворотке мышей NSG на 7 сутки после трансплантации человеческих МКПК и обработки XENP20818 в указанных концентрациях.

На фиг. 25A-25C проиллюстрировано число A) CD4+ T-клеток, B) CD8+ T-клеток и C) CD45+ клеток в цельной крови мышей NSG с трансплантированным человеческими МКПК через 7 суток после обработки XENP20818 в указанных концентрациях.

На фиг. 26 приведена структурная модель гетеродимера IL-15/Rα с указанием расположения сконструированных пар дисульфидных связей.

На фиг. 27 приведены последовательности иллюстративных вариантов IL-15Rα(sushi), сконструированных с дополнительными остатками в С-конце, чтобы они служили каркасом для сконструированных остатков цистеина.

На фиг. 28 приведены последовательности иллюстративных вариантов IL-15, сконструированных с цистеинами для образования ковалентных дисульфидных связей с вариантами IL-15Rα(sushi), сконструированными с цистеинами.

На фиг. 29 приведены последовательности иллюстративных вариантов IL-15Rα(sushi), сконструированных с цистеинами для образования ковалентных дисульфидных связей с вариантами IL-15, сконструированными с цистеинами.

На фиг. 30A-30C проиллюстрированы гетеродимеры IL-15/Rα со сконструированными дисульфидными связями между IL-15 и IL-15Rα(sushi) и без них. Нековалентный гетеродимер IL-15/Rα или «гетеродимер ncIL-15/Rα» (фиг. 30A) содержит IL-15Rα(sushi) и IL-15, трансфицированные по отдельности и нековалентно связанные. Дисульфид-связанный гетеродимер IL-15/Rα или «гетеродимер ncIL-15/Rα» (фиг. 30B) содержит IL-15Rα(sushi) и IL-15, трансфицированные по отдельности и ковалентно связанные в результате наличия сконструированных цистеинов. Одноцепочечный гетеродимер IL-15/Rα или «гетеродимер scIL-15/Rα» (фиг. 30C) содержит IL-15Rα(sushi), слитый с IL-15 посредством линкера Gly-Ser переменной длины.

На фиг. 31 приведены последовательности XENP21996, иллюстративного гетеродимера ncIL-15/Rα. Важно отметить, что эти последовательности были получены с применением полигистидиновых (His6 или HHHHHH) C-концевых тэгов в С-конце IL-15Rα(sushi).

На фиг. 32 приведены последовательности XENP22004, XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494, иллюстративных гетеродимеров dsIL-15/Rα, при этом дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP 22007, 22009, 22010, 22011, 22012 и 22493. Важно отметить, что эти последовательности были получены с применением полигистидиновых (His6 или HHHHHH) C-концевых тэгов в С-конце IL-15Rα(sushi).

На фиг. 33 приведены последовательности XENP22049, иллюстративного гетеродимера scIL-15/Rα. Важно отметить, что эти последовательности были получены с применением полигистидиновых (His6 или HHHHHH) C-концевых тэгов в С-конце IL-15. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα и линкерами.

Фиг. 34 иллюстрирует чистоту и гомогенность иллюстративных гетеродимеров IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них по определению методом КИФ.

Фиг. 35 иллюстрирует чистоту и гомогенность иллюстративных гетеродимеров IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них по определению методом КИФ.

Фиг. 36 иллюстрирует стабильность и температуры плавления иллюстративных гетеродимеров IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них по данным кривых плавления, полученных методом ДСФ.

Фиг. 37 иллюстрирует стабильность и температуры плавления иллюстративных гетеродимеров IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них по данным кривых плавления, полученных методом ДСФ.

На фиг. 38 проиллюстрированы выход экспрессии, молекулярная масса, прогнозируемое изменение аффинности между IL-15 и IL-15Rα(sushi), рассчитанные с помощью программного обеспечения MOE, температура плавления и аффинность в отношении IL-2Rβ для гетеродимеров IL-15/Rα со сконструированными дисульфидными связями и без них. Мутации указаны в скобках после соответствующего мономера.

На фиг. 39A-39D проиллюстрированы дополнительные форматы для слитых белков IL-15/Rα-Fc согласно данному изобретению со сконструированными дисульфидными связями. Слияние дисульфид-связанного IL-15/Rα с гетеродимерным Fc или «dsIL-15/Rα-гетероFc» (фиг. 39A) является аналогичным «IL-15/Rα-гетероFc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Слияние дисульфид-связанного IL-15/Rα с Fc или «dsIL-15/Rα-Fc» (фиг. 39B) является аналогичным «ncIL-15/Rα-Fc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Слияние дисульфид-связанный IL-15/Rα-Fc или «бивалентный dsIL-15/Rα-Fc» (фиг. 39C) является аналогичным «бивалентному ncIL-15/Rα-Fc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Слияние Fc-дисульфид-связанный IL-15/Rα или «Fc-dsIL-15/Rα» (фиг. 39D) является аналогичным «Fc-ncIL-15/Rα», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов.

На фиг. 40A-40B приведены последовательности XENP22013, XENP22014, XENP22015 и XENP22017, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «dsIL-15/Rα-гетероFc». IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 41A-41B приведены последовательности XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22684 и XENP22361, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «dsIL-15/Rα-Fc». Дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP 22360, 22362, 22363, 22364, 22365 и 22366. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 42 приведены последовательности XENP22634, XENP22635 и XENP22636, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентный dsIL-15/Rα-Fc». Дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP22687. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 43 приведены последовательности XENP22639 и XENP22640, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «Fc-dsIL-15/Rα». IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

Фиг. 44 иллюстрирует чистоту и гомогенность иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них по определению методом КИФ.

На фиг. 45A-45C проиллюстрирована индукция А) NK-клеток (CD56+/CD16+), B) CD8⁺ Т-клеток, и С) пролиферация CD4⁺ Т-клеток иллюстративными слитыми белками IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями и без них на основании экспрессии Ki67, измеряемой методом FACS.

Фиг. 46 иллюстрирует структуру IL-15 в комплексе с IL-15Rα, IL-2Rβ и общей гамма-цепью. Приведены положения замен, сконструированных для снижения активности.

На фиг. 47А-47С приведены последовательности для иллюстративных вариантов IL-15, сконструированных для снижения активности. В каждую из этих последовательностей вариантов IL-15 включены последовательности, которые на 90%, 95%, 98% и 99% идентичны (по определению данного документа) перечисленным последовательностям и/или содержат от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дополнительных аминокислотных замен. В неограничивающем примере перечисленные последовательности могут содержать дополнительные аминокислотные модификации, такие как модификации, способствующие образованию ковалентных дисульфидных связей, как описано в примере 2.

На фиг. 48A-48D приведены последовательности XENP22821, XENP22822, XENP23554, XENP23557, XENP23561, XENP24018, XENP24019, XENP24045, XENP24051 и XENP24052, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc формата «IL-15/Rα-гетероFc», сконструированных для снижения активности. Дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP 22815, 22816, 22817, 22818, 22819, 22820, 22823, 22824, 22825, 22826, 22827, 22828, 22829, 22830, 22831, 22832, 22833, 22834, 23555, 23559, 23560, 24017, 24020, 24043 и 24048. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 49A-49C приведены последовательности XENP24015, XENP24050, XENP24475, XENP24476, XENP24478, XENP24479 и XENP24481, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «scIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности. Дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP 24013, 24014 и 24016. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 50A-50B приведены последовательности XENP24349, XENP24890 и XENP25138, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «ncIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 51 приведены последовательности XENP22801 и XENP22802, иллюстративных гетеродимеров ncIL-15/Rα, сконструированных для снижения активности. Дополнительные последовательности приведены в перечне последовательностей как XENP 22791, 22792, 22793, 22794, 22795, 22796, 22803, 22804, 22805, 22806, 22807, 22808, 22809, 22810, 22811, 22812, 22813 и 22814. Важно отметить, что эти последовательности были получены с применением полигистидиновых (His6 или HHHHHH) C-концевых тэгов в С-конце IL-15Rα(sushi).

На фиг. 52 приведены последовательности XENP24342, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc», сконструированного для снижения активности. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 53 приведены последовательности XENP23472 и XENP23473, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «dsIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 54A-54C проиллюстрирована индукция (А) NK-клеток, (B) CD8⁺ (CD45RA-) Т-клеток и (C) пролиферация CD4⁺ (CD45RA-) Т-клеток вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc на основании экспрессии Ki67, измеряемой методом FACS.

На фиг. 55 приведены значения ЕС50 для индукции NK-клеток и пролиферации CD8⁺ Т-клеток вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc, а также кратность снижения ЕС50 относительно XENP20818.

На фиг. 56A-56C проиллюстрирован гейтинг лимфоцитов и субпопуляций для экспериментов, проиллюстрированных на фиг. 59A-59D. Фиг. 56A иллюстрирует популяцию лимфоцитов, для которых проводили гейтинг. Фиг. 56B иллюстрирует CD3-отрицательные и CD3-положительные субпопуляции. Фиг. 56C иллюстрирует CD16-отрицательные и CD16-положительные субпопуляции CD3-отрицательных клеток

На фиг. 57A-57C проиллюстрирован гейтинг CD3⁺ субпопуляций лимфоцитов для экспериментов, проиллюстрированных на фиг. 59A-59D. Фиг. 57A иллюстрирует субпопуляции CD4⁺, CD8⁺ и γδ T-клеток из CD3⁺ T-клеток. Фиг. 57B иллюстрирует субпопуляции CD45RA(-) и CD45RA(+) CD4⁺ T-клеток. Фиг. 57C иллюстрирует субпопуляции CD45RA(-) и CD45RA(+) CD8⁺ T-клеток.

Фиг. 58A-58B иллюстрируют экспрессию CD69 и CD25 до (фиг. 58A) и после (фиг. 58B) инкубации человеческих МКПК с XENP22821.

На фиг. 59A-59D проиллюстрирована пролиферация клеток в человеческих МКПК, которые инкубировали в течение четырех суток с указанными вариантами слитых белков IL-15/Rα-Fc. Фиг. 59A-C иллюстрирует процент пролиферирующих NK-клеток (CD3-CD16+) (фиг. 59A), CD8+ T-клеток (CD3+CD8+CD45RA-) (фиг. 59B) и CD4+ T-клеток (CD3+CD4+CD45RA-) (фиг. 59С). Фиг. 59D иллюстрирует кратность изменения ЕС50 различных гетеродимеров IL15/IL15Rα Fc в сравнении с контролем (XENP20818).

На фиг. 60А-60D проиллюстрирована пролиферация клеток в человеческих МКПК, которые инкубировали в течение трех суток с указанным вариантом слитых белков IL-15/Rα-Fc. Фиг. 60A-C иллюстрирует процент пролиферирующих CD8+ (CD45RA-) T-клеток (фиг. A), CD4+ (CD45RA-) T-клеток (фиг. 60B), γδ T-клеток (фиг. 60C) и NK-клеток (фиг. 60D).

Фиг. 61A-61C иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ Т-клетках, (В) CD4⁺ Т-клетках и (С) NK-клетках после обработки дополнительными вариантами IL-15/Rα.

Фиг. 62A-62E иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ (CD45RA-) Т-клетках, (В) CD4⁺ (CD45RA-) Т-клетках, (С) γδ Т-клетках, (D) NK-клетках (CD16+CD8α-) и (E) NK-клетках (CD56+CD8α-) после обработки вариантами IL-15/Rα.

Фиг. 63A-63E иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ (CD45RA-) Т-клетках, (В) CD4⁺ (CD45RA-) Т-клетках, (С) γδ Т-клетках, (D) NK-клетках (CD16+CD8α-) и (E) NK-клетках (CD56+CD8α-) после обработки вариантами IL-15/Rα.

Фиг. 64A-64D иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ Т-клетках, (В) CD4⁺ Т-клетках, (С) γδ Т-клетках и (D) NK-клетках (CD16+) после обработки дополнительными вариантами IL-15/Rα, сконструированными для снижения активности с разными длинами линкеров.

Фиг. 65A-65D иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ Т-клетках, (В) CD4⁺ Т-клетках, (С) γδ Т-клетках и (D) NK-клетках (CD16+) после обработки дополнительными вариантами IL-15/Rα.

На фиг. 66A-66D проиллюстрирован гейтинг лимфоцитов и их субпопуляций для экспериментов, проиллюстрированных на фиг. 67. Фиг. 66A иллюстрирует гейтинг популяции лимфоцитов. Фиг. 66B иллюстрирует CD4+ и CD8+ Т-клетки. Фиг. 66C иллюстрирует субпопуляции CD4+ T-клеток, экспрессирующие CD45RA и CD27. Фиг. 66D иллюстрирует субпопуляции CD8+ T-клеток, экспрессирующие CD45RA и CD27.

Фиг. 67А-67С иллюстрируют фосфорилирование STAT5 на А) CD8+ Т-клетках (CD45RA-CD27-) и В) CD4+ Т-клетках (CD45RA-CD27-) после инкубации МКПК в течение 4 суток с указанным вариантными слитыми белками IL15/IL15Rα-Fc в указанных концентрациях. Фиг. 67C иллюстрирует кратность изменения ЕС50 различных гетеродимеров IL15/IL15Rα Fc в сравнении с контролем (XENP20818).

Фиг. 68 иллюстрирует ФК ВВ-ТВ дозы различных слитых белков IL-15/Rα-Fc или контроля у мышей линии C57BL/6 при однократной дозе 0,1 мг/кг.

Фиг. 69 иллюстрирует корреляцию времени полужизни и активности NK-клеток.

Фиг. 70 иллюстрирует, что уровни CD45+ клеток являются прогностическими в отношении заболевания.

Фиг. 71A-71B иллюстрируют повышение приживления вариантами слитых белков IL-15/Rα-Fc, на что указывает число CD45+ клеток на A) 4 и B) 8 сутки.

Фиг. 72A-72C иллюстрируют уровни IFNγ на (A) 4, (B) 7 и (C) 11 сутки после обработки мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК указанными вариантными слитыми белками IL15/Rα-Fc или контролем.

Фиг. 73A-73C иллюстрируют число CD45+ лимфоцитов на (A) 4, (B) 7 и (C) 11 сутки после обработки мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК указанными вариантными слитыми белками IL15/Rα-Fc или контролем.

Фиг. 74A-74C иллюстрируют число NK-клеток (CD16+CD56+CD45RA+) на A) 4, B) 7 и C) 11 сутки после обработки мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК указанными слитыми белками IL15/Rα-Fc или контролем.

Фиг. 75A-75B иллюстрируют число CD8+ T-клеток (CD8+CD45RA+) на (A) 7 и (B) 11 сутки после обработки мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК указанными слитыми белками IL15/Rα-Fc или контролем.

Фиг. 76A-76B иллюстрируют число CD4+ T-клеток (CD4+CD45RA+) на A) 7 и B) 11 сутки после обработки мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК указанными слитыми белками IL15/Rα-Fc или контролем.

На фиг. 77 проиллюстрирован уровень IFNγ на 4, 7 и 11 сутки в сыворотке мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

Фиг. 78A-78С иллюстрируют число CD8+ T-клеток на (A) 4, (B) 7 и (C) 11 сутки в цельной крови мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

Фиг. 79A-79С иллюстрируют число CD4+ T-клеток на (A) 4, (B) 7 и (C) 11 сутки в цельной крови мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

Фиг. 80A-80С иллюстрируют число CD45+ клеток на (A) 4, (B) 7 и (C) 11 сутки в цельной крови мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

На фиг. 81A-81C проиллюстрирована масса тела в виде процентной доли от исходной массы тела мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) на сутки (A) 4, (B) 7 и (C) 11 после обработки дополнительными вариантами IL-15/Rα. Каждая точка представляет собой одну мышь линии NSG. Мышей, масса тела которых снижалась на более чем 70% от исходной массы тела, умерщвляли. Умерщвленные мыши представлены как 70%.

Фиг. 82A-82E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP20818. На фиг. 82A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 82A), CD16+ NK-клеток (фиг. 82B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 82C), CD8+ T-клеток (фиг. 82D) и CD4+ T-клеток (фиг. 82E).

На фиг. 83A-83E проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 83A), CD16+ NK-клеток (фиг. 83B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 83C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 83D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 83E) после дозирования яванских макаков XENP20818.

Фиг. 84A-84E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP22819. На фиг. 84A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 84A), CD16+ NK-клеток (фиг. 84B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 84C), CD8+ T-клеток (фиг. 84D) и CD4+ T-клеток (фиг. 84E).

На фиг. 85A-85E проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 85A), CD16+ NK-клеток (фиг. 85B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 85C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 85D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 85E) после дозирования яванских макаков XENP22819.

Фиг. 86A-86E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP22821. На фиг. 86A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 86A), CD16+ NK-клеток (фиг. 86B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 86C), CD8+ T-клеток (фиг. 86D) и CD4+ T-клеток (фиг. 86E).

На фиг. 87A-87D проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 87A), CD16+ NK-клеток (фиг. 87B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 87C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 87D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 87E) после дозирования яванских макаков XENP22821.

Фиг. 88A-88E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP22822. На фиг. 88A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 88A), CD16+ NK-клеток (фиг. 88B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 88C), CD8+ T-клеток (фиг. 88D) и CD4+ T-клеток (фиг. 88E).

На фиг. 89A-89E проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 89A), CD16+ NK-клеток (фиг. 89B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 89C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 89D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 89E) после дозирования яванских макаков XENP22822.

Фиг. 90A-90E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP22834. На фиг. 90A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 90A), CD16+ NK-клеток (фиг. 90B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 90C), CD8+ T-клеток (фиг. 90D) и CD4+ T-клеток (фиг. 90E).

На фиг. 91A-91E проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 91A), CD16+ NK-клеток (фиг. 91B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 91C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 91D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 91E) после дозирования яванских макаков XENP22834.

Фиг. 92A-92E иллюстрируют число лимфоцитов после дозирования яванских макаков XENP23343. На фиг. 92A-E, соответственно, проиллюстрирована кратность изменения абсолютного числа CD56+ NK-клеток (фиг. 92A), CD16+ NK-клеток (фиг. 92B), γδ T-клеток (CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (фиг. 92C), CD8+ T-клеток (фиг. 92D) и CD4+ T-клеток (фиг. 92E).

На фиг. 93A-93E проиллюстрирована пролиферация CD56+ NK-клеток (фиг. 93A), CD16+ NK-клеток (фиг. 93B), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 93C), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 93D) и CD4+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 93E) после дозирования яванских макаков XENP23343.

На фиг. 94A-94D приведены последовательности XENP23343, XENP23504, XENP24113, XENP24301, XENP24306 и XENP24341, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «IL-15/Rα-гетероFc» с заменами M428L/N434S. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями. На фиг. 94D приведены последовательности XENP25938, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «scIL-15/Rα-Fc» с заменами M428L/N434S.

На фиг. 95 приведены последовательности XENP24383, иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «ncIL-15/Rα-Fc» с заменами M428L/N434S. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

На фиг. 96 приведены последовательности XENP24346 и XENP24351, иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc» с заменами M428L/N434S. IL-15 и IL-15Rα(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией (хотя, как понятно специалистам в данной области техники, эти линкеры могут быть заменены другими линкерами, некоторые из которых приведены на фиг. 7), а косыми линиями (/) указаны границы между IL-15, IL-15Rα, линкерами и Fc-областями.

Фиг. 97A-97C иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) человеческих CD8⁺ Т-клетках, (В) человеческих CD4⁺ Т-клетках и (С) человеческих NK-клетках после обработки вариантами IL-15/Rα с Fc-мутациями M428L/N434S.

Фиг. 98A-98C иллюстрируют процент экспрессии Ki67 на (А) CD8⁺ Т-клетках яванского макака, (В) CD4⁺ Т-клетках яванского макака и (С) NK-клетках яванского макака после обработки вариантами IL-15/Rα с Fc-мутациями M428L/N434S.

Фиг. 99A-99C иллюстрируют число CD4+ T-клеток на (A) 4 сутки и (B) 7 сутки в цельной крови и (C) 8 сутки в селезенке мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

Фиг. 100A-100C иллюстрируют число CD8+ T-клеток на (A) 4 сутки и (B) 7 сутки в цельной крови и (C) 8 сутки в селезенке мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

Фиг. 101A-101C иллюстрируют число CD8+ T-клеток на (A) 4 сутки и (B) 7 сутки в цельной крови и (C) 8 сутки в селезенке мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки дополнительными вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc.

На фиг. 102A-102E проиллюстрирована масса тела в виде процентной доли от исходной массы тела мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) на (A) -2, (B) 1, (C) 5, (D) 8 и (E) 11 сутки после обработки дополнительными вариантами IL-15/Rα. Каждая точка представляет собой одну мышь линии NSG. Фиг. 102F иллюстрирует временную динамику изменения массы тела у мышей с привитыми человеческими МКПК (huМКПК) после обработки вариантами IL-15/Rα.

Фиг. 103A-103C иллюстрируют число (A) CD8+ T-клеток, (B) CD4+ T-клеток и (C) NK-клеток у яванских макаков после обработки вариантами IL-15/Rα на 1 сутки.

На фиг. 104A-104Z, 104AA-104AZ и 104BA-104BL приведены последовательности согласно изобретению. CDR выделены жирным шрифтом, IL-15 и IL15-R(sushi) подчеркнуты, линкеры подчеркнуты двойной линией, а косые линии (/) разделяют IL-15, IL15-Rα(sushi), линкеры и Fc-домены.

Фиг. 105 иллюстрирует некоторые предпочтительные варианты реализации изобретения. Версии «Xtend» содержат варианты 428L/434S в Fc-доменах каждого мономера.

На фиг. 106 приведен перечень сконструированных искаженных гетеродимерных (например, со «стерической гетеродимеризацией») Fc- вариантов с выходом гетеродимеров (по определению ВЭЖХ-КИО) и значениями температурной стабильности (по определению ДСК). Не определенная температурная стабильность обозначена «н. д.» (нет данных).

Подробное описание сущности изобретения

I. Определения

Для более полного понимания сути данной заявки ниже приведены некоторые определения. Подразумевается, что такие определения включают и грамматические эквиваленты.

В контексте данного документа «абляция» означает снижение или устранение активности. Так, например, «абляция связывания FcγR» означает, что аминокислотный вариант Fc-области демонстрирует менее 50% исходного связывания по сравнению с Fc-областью, не содержащей этот конкретный вариант, предпочтительно с потерей активности менее 70-80-90-95-98%, и в целом с активностью ниже уровня выявляемого связывания в анализе Biacore. Особенно применимыми для абляции связывания FcγR являются те, что указаны на фиг. 86. Однако, если не указано иное, Fc-мономеры согласно изобретению сохраняют связывание с FcRn-рецептором.

В контексте данного документа «АЗКЦ» или «антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность» означает клеточноопосредованную реакцию, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на целевой клетке и впоследствии вызывают лизис целевой клетки. АЗКЦ коррелирует со связыванием с FcγRIIIa; а повышенное связывание с FcγRIIIa приводит к повышению активности АЗКЦ. Как обсуждается в данном документе, многие варианты реализации изобретения полностью аблируют активность АЗКЦ.

В контексте данного документа «АЗКФ» или «антителозависимый клеточноопосредованный фагоцитоз» означает клеточноопосредованную реакцию, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на целевой клетке и впоследствии вызывают фагоцитоз целевой клетки.

Под «модификацией» в данном документе подразумевается аминокислотная замена, вставка и/или делеция в полипептидной последовательности или изменение фрагмента, химически связанного с белком. Например, модификация может быть проведена изменением углевода или ПЭГ-структуры, присоединенной к белку. Под «аминокислотной модификацией» в данном документе подразумевается аминокислотная замена, вставка и/или делеция в полипептидной последовательности. В целях ясности, если не указано иное, аминокислотная модификация всегда проводится в аминокислоте, кодируемой ДНК, например, в 20 аминокислотах, которые имеют кодоны в ДНК и РНК.

Под «аминокислотной заменой» или «заменой» в данном документе подразумевается замена аминокислоты в конкретной позиции в исходной полипептидной последовательности другой аминокислотой. В частности, в некоторых вариантах реализации изобретения замену проводят в аминокислоте, которая не встречается в природе в этой конкретной позиции, и также не встречается в природе в организме или в любом организме. Например, замена E272Y относится к варианту полипептида, в данном случае Fc-варианту, в котором глутаминовая кислота в позиции 272 заменена тирозином. В целях ясности, белок, который был сконструирован для изменения кодирующей последовательности нуклеиновой кислоты, но не меняет исходную аминокислоту (например, замена CGG (кодирующего аргинин) на CGA (также кодирующий аргинин) для повышения уровней экспрессии в организме-хозяине) не является «аминокислотной заменой»; то есть, несмотря на создание нового гена, кодирующего тот же белок, если белок содержит в конкретной позиции такую же аминокислоту, которая была там ранее, это не является аминокислотной заменой.

В контексте данного документа под «аминокислотной вставкой» подразумевается добавление аминокислотной последовательности в конкретной позиции в родительской полипептидной последовательности. Например, -233E или 233E обозначает вставку глутаминовой кислоты после позиции 233 и перед позицией 234. Кроме того, -233ADE или A233ADE обозначает вставку AlaAspGlu после позиции 233 и перед позицией 234.

В контексте данного документа под «аминокислотной делецией» или «делецией» подразумевается удаление аминокислотной последовательности в конкретной позиции в родительской полипептидной последовательности. Например, E233- или E233#, E233() или E233del обозначает делецию глутаминовой кислоты в позиции 233. Кроме того, EDA233- или EDA233# обозначает удаление последовательности GluAspAla, которая начинается в позиции 233.

В контексте данного документа под «вариантным белком» или «белковым вариантом» или «вариантом» подразумевается белок, который отличается от родительского белка за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации. Белковый вариант может относиться к самому белку, композиции, содержащей белок, или к аминокислотной последовательности, которая его кодирует. Предпочтительно, чтобы белковый вариант имел по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с родительским белком, например, от около одной до около семидесяти аминокислотных модификаций, и предпочтительно от около одной до около пяти аминокислотных модификаций по сравнению с родительским белком. Как описано ниже, в некоторых вариантах реализации изобретения родительский полипептид, например, родительский Fc-полипептид, представляет собой человеческую последовательность дикого типа, такую как Fc-область из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, хотя человеческие последовательности с вариантами также могут служить в качестве «родительских полипептидов», например, может быть включен гибрид IgG1/2. Последовательность белкового варианта согласно данному документу предпочтительно обладает по меньшей мере около 80% идентичности с последовательностью родительского белка, и наиболее предпочтительно по меньшей мере около 90% идентичности, более предпочтительно по меньшей мере около 95-98-99% идентичности. Вариантный белок может относиться к самому вариантному белку, композициям, содержащим белковый вариант, или последовательности ДНК, которая его кодирует.

Соответственно, в контексте данного документа «вариант антитела» или «вариантное антитело» означает антитело, которое отличается от родительского антитела за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации. В контексте данного документа «вариант IgG» или «вариантный IgG» означает антитело, которое отличается от родительского IgG (снова, во многих случаях, от последовательности человеческого IgG) за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации, и в контексте данного документа «вариант иммуноглобулина» или «вариантный иммуноглобулин» означает последовательность иммуноглобулина, которая отличается от последовательности родительского иммуноглобулина за счет по меньшей мере одной аминокислотной модификации. В контексте данного документа «Fc-вариант» или «вариантный Fc» означает белок, содержащий аминокислотную модификацию в Fc-домене. Fc-варианты согласно данному изобретению определяют в соответствии с аминокислотными модификациями, которые их составляют. Таким образом, например, N434S или 434S представляет собой Fc-вариант с заменой серина в позиции 434 относительно родительского Fc-полипептида, при этом нумерация соответствует индексу EU. Аналогично, M428L/N434S определяет Fc-вариант с заменами M428L и N434S относительно родительского Fc-полипептида. Идентичность аминокислоты ДТ может быть неопределенной, в случае чего вышеупомянутый вариант обозначается как 428L/434S. Следует отметить, что порядок, в котором проведены замены, является произвольным, что означает, например, что 428L/434S представляет собой такой же Fc-вариант, что и M428L/N434S, и т.д. В случае всех позиций, обсуждаемых в данном изобретении, которые относятся к антителам, если не указано иное, нумерация аминокислотных позиций соответствует индексу EU. Индекс EU, или EU-индекс, как в схеме нумерации Кабата, или EU, относится к нумерации антитела EU (Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85, в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки). Модификация может быть добавлением, делецией или заменой. Замены могут включать аминокислоты природного происхождения и, в некоторых случаях, синтетические аминокислоты. Примеры включают патент США № 6586207; WO 98/48032; WO 03/073238; US2004-0214988A1; WO 05/35727A2; WO 05/74524A2; J. W. Chin et al., (2002), Journal of the American Chemical Society 124:9026-9027; J. W. Chin, & P. G. Schultz, (2002), ChemBioChem 11:1135-1137; J. W. Chin, et al., (2002), PICAS United States of America 99:11020-11024; и L. Wang, & P. G. Schultz, (2002), Chem. 1-10, которые все в полном объеме включены посредством ссылки.

В контексте данного документа под «белком» подразумеваются по меньшей мере две ковалентно связанные аминокислоты, что включает белки, полипептиды, олигопептиды и пептиды. Пептидильная группа может содержать аминокислоты природного происхождения и пептидные связи или синтетические пептидомиметические структуры, то есть «аналоги», такие как пептоиды (смотрите Simon et al., PNAS USA 89(20):9367 (1992), в полном объеме включенную посредством ссылки). Аминокислоты могут быть природного происхождения или синтетическими (например, не являться аминокислотой, кодируемой ДНК); как понятно специалистам в данной области техники. Например, гомофенилаланин, цитруллин, орнитин и норлейцин считаются синтетическими аминокислотами в целях изобретения, при этом могут использоваться использованы как D-, так и L- (R или S) конфигурации аминокислот. Варианты согласно данному изобретению могут содержать модификации, которые включают применение синтетических аминокислот, вводимых с помощью, например, технологий, разработанных Шульцем и его коллегами, включая, но не ограничиваясь этим, способы, описанные в Cropp & Shultz, 2004, Trends Genet. 20(12):625-30, Anderson et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA 101 (2):7566-71, Zhang et al., 2003, 303(5656):371-3, и Chin et al., 2003, Science 301(5635):964-7, которые все в полном объеме включены посредством ссылки. Кроме того, полипептиды могут включать синтетическую дериватизацию одной или более боковых цепей или одного или более концов, гликозилирование, ПЭГилирование, циклическую перестановку, циклизацию, линкеры с другими молекулами, слияние с белками или белковыми доменами и добавление пептидных тэгов или меток.

В контексте данного документа под «остатком» подразумевается позиция в белке и связанная с ней аминокислотная идентичность. Например, аспарагин 297 (также называемый Asn297 или N297) представляет собой остаток в позиции 297 в человеческом антителе IgG1.

В контексте данного документа под «модификацией подкласса IgG» или «модификацией изотипа» подразумевается аминокислотная модификация, которая превращает одну аминокислоту одного изотипа IgG в соответствующую аминокислоту другого, выровненного изотипа IgG. Например, поскольку IgG1 содержит тирозин, а IgG2 - фенилаланин в позиции 296 по EU, то замена F296Y в IgG2 считается модификацией подкласса IgG.

В контексте данного документа под «модификацией неприродного происхождения» подразумевается модификация аминокислоты, которая не является изотипической. Например, поскольку ни один из IgG не содержит серин в позиции 434, замена 434S в IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 (или их гибридах) считается модификацией неприродного происхождения.

В контексте данного документа под «аминокислотой» или «аминокислотной идентичностью» подразумевается одна из 20 аминокислот природного происхождения, которые кодируются ДНК или РНК.

В контексте данного документа под «эффекторной функцией» подразумевается биохимическое событие, которое происходит в результате взаимодействия Fc-области антитела с Fc-рецептором или лигандом. Эффекторные функции включают, но не ограничиваются этим, АЗКЦ, АЗКФ и КЗЦ.

В контексте данного документа под «Fc-лигандом IgG» подразумевается молекула, предпочтительно полипептид, полученная из любого организма, которая связывается с Fc-областью антитела IgG с образованием комплекса Fc/Fc-лиганд. Fc-лиганды включают, но не ограничиваются этим, FcγRI, FcγRII, FcγRIII, FcRn, C1q, C3, маннан-связывающий лектин, рецептор маннозы, стафилококковый протеин A, стрептококковый протеин G и вирусный FcγR. Fc-лиганды также включают гомологи Fc-рецепторов (FcRH), представляющие собой семейство Fc-рецепторов, которые гомологичны FcγR ((Davis et al., 2002, Immunological Reviews 190:123-136, в полном объеме включенная посредством ссылки). Fc-лиганды могут включать еще неизвестные молекулы, которые связывают Fc. Конкретными Fc-лигандами IgG являются FcRn (неонатальный Fc-рецептор) и Fc-гамма-рецепторы. В контексте данного документа под «Fc-лигандом» подразумевается молекула, предпочтительно полипептид, полученная из любого организма, которая связывается с Fc-областью антитела с образованием комплекса Fc/Fc-лиганд.

В контексте данного документа под термином «Fc-гамма рецептор», «FcγR» или «Fc-гамма-R» подразумевается любой представитель семейства белков, который связывает Fc-область антитела IgG и кодируется геном FcγR. В случае людей это семейство включает, но не ограничивается этим, FcγRI (CD64), включая изоформы FcγRIa, FcγRIb и FcγRIc; FcγRII (CD32), включая изоформы FcγRIIa (включая аллотипы H131 и R131), FcγRIIb (включая FcγRIIb-1 и FcγRIIb-2) и FcγRIIc; и FcγRIII (CD16), включая изоформы FcγRIIIa (включая аллотипы V158 и F158) и FcγRIIIb (включая аллотипы FcγRIIb-NA1 и FcγRIIb-NA2) (Jefferis et al., 2002, Immunol Lett 82:57-65, в полном объеме включенная посредством ссылки), а также любые еще неизвестные человеческие FcγR или изоформы или аллотипы FcγR. FcγR может происходить из любого организма, включая, но не ограничиваясь этим, людей, мышей, крыс, кроликов и обезьян. Мышиные FcγR включают, но не ограничиваются этим, FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII (CD16) и FcγRIII-2 (CD16-2), а также любые еще неизвестные мышиные FcγR или изоформы или аллотипы FcγR.

В контексте данного документа под «FcRn» или «неонатальным Fc-рецептором» подразумевается белок, который связывает Fc-область IgG-антитела и кодируется, по меньшей мере частично, геном FcRn. FcRn может происходить из любого организма, включая, но не ограничиваясь этим, людей, мышей, крыс, кроликов и обезьян. Как известно в данной области техники, функциональный белок FcRn содержит два полипептида, которые часто называют тяжелой цепью и легкой цепью. Легкая цепь представляет собой бета-2-микроглобулин, а тяжелая цепь кодируется геном FcRn. Если в данном документе не указано иное, FcRn или белок FcRn относится к комплексу тяжелой цепи FcRn с бета-2-микроглобулином. Для повышения связывания с FcRn-рецептором и, в некоторых случаях, для увеличения сывороточного времени полужизни можно использовать множество вариантов FcRn. В общем случае, если не указано иное, Fc-мономеры согласно изобретению сохраняют связывание с FcRn-рецептором (и, как отмечено ниже, могут включать аминокислотные варианты для повышения связывания с FcRn-рецептором).

В контексте данного документа под «родительским полипептидом» подразумевается исходный полипептид, который впоследствии модифицируют для создания варианта. Родительский полипептид может представлять собой полипептид природного происхождения или вариант или сконструированную версию полипептида природного происхождения. Родительский полипептид может относиться к самому полипептиду, композициям, которые содержат родительский полипептид, или аминокислотной последовательности, которая его кодирует. Соответственно, в контексте данного документа под «родительским иммуноглобулином» подразумевается немодифицированный полипептид иммуноглобулина, который модифицируют для создания варианта, а под «родительским антителом» в контексте данного документа подразумевается немодифицированное антитело, которое модифицируют для создания вариантного антитела. Следует отметить, что «родительское антитело» включает известные коммерческие, полученные рекомбинантным способом антитела, как описано ниже.

В контексте данного документа под «Fc» или «Fc-областью», или «Fc-доменом» подразумевается полипептид, содержащий константную область антитела, за исключением первого домена константной области иммуноглобулина (например, CH1), и, в некоторых случаях, часть шарнирной области. Таким образом, Fc может относиться к последним двум доменам константной области иммуноглобулина (например, CH2 и CH3) IgA, IgD и IgG, последним трем доменам константной области иммуноглобулина IgE и IgM, и к гибкой шарнирной области, расположенной N-терминально к этим доменам. В случае IgA и IgM Fc может содержать J-цепь. В случае IgG Fc-домен содержит домены иммуноглобулина Cγ2 и Cγ3 (Cγ2 и Cγ3) и нижнюю шарнирную область между Cγ1 (Cγ1) и Cγ2 (Cγ2). В некоторых вариантах реализации изобретения Fc относится к усеченному домену CH1, и CH2, и CH3 иммуноглобулина. Хотя границы Fc-области могут варьироваться, Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG обычно по определению содержит остатки E216 или C226, или P230 в карбокси-конце, при этом нумерация соответствует индексу EU по Kabat. В некоторых вариантах реализации изобретения, как более полно описано ниже, аминокислотные модификации проводят в Fc-области, например, для изменения связывания с одним или более FcγR-рецепторами или с FcRn-рецептором.

В контексте данного документа под «Fc-слитым белком» или «иммуноадгезином» подразумевается белок, содержащий Fc-область, в общем случае связанную (необязательно посредством линкерного фрагмента, как описано в данном документе) с другим белком, таким как IL-15 и/или IL-15R, описанные в данном документе. В некоторых случаях два Fc-слитых белка могут образовывать гомодимерный Fc-слитый белок или гетеродимерный Fc-слитый белок, причем последний является предпочтительным. В некоторых случаях один мономер гетеродимерного Fc-слитого белка содержит только Fc-домен (например, пустой Fc-домен), а другой мономер представляет собой Fc-слияние, содержащее вариантный Fc-домен и белковый домен, такой как рецептор, лиганд или другой партнер по связыванию.

В контексте данного документа под «позицией» подразумевается позиция в последовательности белка. Позиции могут быть пронумерованы последовательно или в соответствии с установленным форматом, например, индексом EU для нумерации антител.

В данном документе под «цепочностью» в контексте мономеров гетеродимерных антител согласно изобретению подразумевается, что аналогично двум «совпадающим» цепям ДНК гетеродимеризационные варианты включены в каждый мономер так, чтобы сохранять способность «совпадения» с образованием гетеродимеров. Например, если некоторые pI-варианты встроены в мономер A (например, повышая pI), то стерические варианты, которые представляют собой «заряженные пары», которые также можно использовать, не создают помех для pI-вариантов, например, заряженные варианты, которые повышают pI, помещают в одну и ту же «цепь» или «мономер», чтобы сохранить обе функциональности. Аналогично, в случае «искаженных» вариантов, которые входят в пары набора, как более подробно описано ниже, квалифицированный специалист будет учитывать pI при принятии решения о том, в какую цепь или какой мономер, которые содержат один набор, пойдет эта пара, чтобы максимизировать pI, используя также pI искаженных вариантов.

В контексте данного документа под «диким типом» или «ДТ» подразумеваются аминокислотная последовательность или нуклеотидная последовательность, которые встречаются в природе, включая аллельные вариации. Белок ДТ имеет аминокислотную последовательность или нуклеотидную последовательность, которая не была намеренно модифицирована.

Гетеродимерные белки согласно данному изобретению обычно являются выделенными или рекомбинантными. В контексте данного документа термин «выделенный», употребляемый для описания различных полипептидов, описанных в данном документе, обозначает полипептид, который был идентифицирован и отделен и/или выделен из клетки или клеточной культуры, в которой он был экспрессирован. Как правило, выделенный полипептид получен посредством по меньшей мере одного этапа очистки. «Выделенный белок» относится к белку, который практически не содержит других антител, имеющих отличную антигенную специфичность. «Рекомбинантный» означает, что белки созданы с помощью методов с применением рекомбинантных нуклеиновых кислот в экзогенных клетках-хозяевах.

«Процент (%) идентичности аминокислотных последовательностей» относительно белковой последовательности определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые являются идентичными с аминокислотными остатками в конкретной (родительской) последовательности, после выравнивания последовательностей и внесения, в случае необходимости, гэпов для достижения максимальной идентичности последовательностей, но без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательностей. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотных последовательностей можно осуществлять различными способами в пределах уровня знаний, доступных специалисту в данной области техники, например, используя общедоступное компьютерное программное обеспечение, такое как BLAST, BLAST-2, ALIGN или программное обеспечение Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для определения степени выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Одной из конкретных программ является программа ALIGN-2, описанная в параграфах [0279]-[0280] публикации США № 20160244525, включенной в данный документ посредством ссылки.

Степень идентичности между аминокислотной последовательностью согласно данному изобретению («последовательностью изобретения») и родительской аминокислотной последовательностью рассчитывают, деля количество точных совпадений при выравнивании двух последовательностей на длину «последовательности изобретения» или длину «родительской последовательности, в зависимости от того, какая из них более короткая. Результат выражают в проценте идентичности.

В некоторых вариантах реализации изобретения две или более аминокислотных последовательностей идентичны по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80% или 90%. В некоторых вариантах реализации изобретения две или более аминокислотных последовательностей идентичны по меньшей мере на 95%, 97%, 98%, 99% или даже на 100%.

Выражения «специфическое связывание», или «специфически связывается с», или является «специфическим в отношении» конкретного антигена или эпитопа означают связывание, которое измеряемо отличается от неспецифического взаимодействия. Специфическое связывание можно измерить, например, определяя связывания молекулы по сравнению со связыванием контрольной молекулы, которая в общем случае представляет собой молекулу с аналогичной структурой, которая не обладает активностью связывания. Например, специфическое связывание можно определять по конкуренции с контрольной молекулой, сходной с мишенью.

Перед дополнительным описанием изобретения следует понять, что это изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами реализации, которые, таким образом, конечно, могут варьироваться. Также следует понимать, что употребляемая в данном документе терминология предназначена исключительно для описания конкретных вариантов реализации изобретения и не подразумевает ограничения, поскольку объем данного изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

II. Гетеродимерные Fc-слитые белки

Данное изобретение относится к гетеродимерным Fc-слитым белкам, которые содержат белковые домены IL-15 и рецептора альфа IL-15 (IL-15Rα) в разных ориентациях. Fc-домены могут быть получены из Fc-доменов IgG, например, Fc-доменов IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, причем Fc-домены IgG1 в особенности применимы в этом изобретении.

Карбокси-концевая часть каждой цепи определяет константную область, в основном ответственную за эффекторную функцию. В Kabat et al. собраны многочисленные первичные последовательности вариабельных областей тяжелых цепей и легких цепей. На основании степени консервативности последовательностей они разделили отдельные первичные последовательности на CDR и каркасные области и составили их перечень (смотрите SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th edition, NIH publication, No. 91-3242, E.A. Kabat et al., в полном объеме включенную посредством ссылки). В тексте данного описания в общем случае используют систему нумерации по Kabat при описании остатка в вариабельном домене (приблизительно остатки 1-107 вариабельной области легкой цепи и остатки 1-113 вариабельной области тяжелой цепи) и систему нумерации EU для Fc-областей (например, Kabat et al., выше (1991)).

В подклассе IgG иммуноглобулинов имеется несколько доменов иммуноглобулина в тяжелой цепи. В контексте данного документа под «доменом иммуноглобулина (Ig)» подразумевается область иммуноглобулина, имеющая характерную третичную структуру. В данном изобретении интерес представляют домены тяжелой цепи, включая константные домены тяжелой цепи (CH) и шарнирные домены. В контексте антител IgG каждый из изотипов IgG имеет по три области CH. Соответственно, домены «CH» в контексте IgG являются следующими: «CH1» относится к позициям 118-220 в соответствии с индексом EU по Kabat. «CH2» относится к позициям 237-340 в соответствии с индексом EU по Kabat, а «CH3» относится к позициям 341-447 в соответствии с индексом EU по Kabat. Как показано в данном документе и описано ниже, pI-варианты могут находиться в одной или более CH-областях, в также в шарнирной области, как обсуждается ниже.

Другим типом Ig-домена тяжелой цепи является шарнирная область. В контексте данного документа «шарнир», или «шарнирная область», или «шарнирная область антитела», или «шарнирная область иммуноглобулина» означает гибкий полипептид, содержащий аминокислоты между первым и вторым константными доменами антитела. Структурно CH1-домен IgG заканчивается в позиции 220 по EU, а CH2-домен IgG начинается с остатка в позиции 237 EU. Таким образом, шарнирная область антитела IgG в данном документе определяется как включающая позиции от 221 (D221 в IgG1) до 236 (G236 в IgG1), при этом нумерация соответствует индексу EU по Kabat. В некоторых вариантах реализации изобретения, например, в контексте Fc-области, включена нижняя шарнирная область, при этом «нижняя шарнирная область» в целом относится к позициям 226 или 230. Как отмечено в данном документе, pI-варианты также можно создавать в шарнирной области.

Таким образом, в данном изобретении предложены разные домены антител. Как описано в данном документе и известно в данной области техники, гетеродимерные белки согласно изобретению содержат разные домены, которые также могут перекрываться. Эти домены включают, но не ограничиваются этим, Fc-домен, CH1-домен, CH2-домен, CH3-домен, шарнирный домен и константный домен тяжелой цепи (CH1-шарнир-Fc-домен или CH1-шарнир-CH2-CH3).

Таким образом, «Fc-домен» содержит домен -СН2-СН3, и необязательно шарнирный домен. В некоторых вариантах реализации изобретения Fc-домен также содержит усеченный домен CH1. В вариантах реализации этого изобретения, когда белковый фрагмент, например, IL-15 или IL-15Rα, присоединен к Fc-домену, ко всей или части шарнирной области Fc-домена присоединен С-конец конструкции IL-15 или IL-15Rα; например, он в общем случае присоединен к последовательности EPKSS, которая является началом шарнирной области. В других вариантах реализации изобретения, когда белковый фрагмент, например, IL-15 или IL-15Rα, присоединен к Fc-домену, к домену CH1 Fc-домена присоединен С-конец конструкции IL-15 или IL15Rα.

В некоторых описанных в данном документе конструкциях и последовательностях белка Fc-домена, С-конец фрагмента белка IL-15 или IL-15Rα присоединен к N-концу доменного линкера, С-конец которого присоединен к N-концу константного Fc-домена (N-белковый фрагмент IL-15 или IL-15Rα-линкер-Fc-домен-C), хотя возможен и обратный вариант (N-Fc-домен-линкер-белковый фрагмент IL-15 или IL-15Rα-C). В других описанных в данном документе конструкциях и последовательностях С-конец первого белкового фрагмента присоединен к N-концу второго белкового фрагмента, необязательно, посредством доменного линкера, С-конец второго белкового фрагмента присоединен к N-концу константного Fc-домена, необязательно, посредством доменного линкера. В других описанных в данном документе конструкциях и последовательностях предложен константный Fc-домен, который не присоединен к первому белковому фрагменту или второму белковому фрагменту. Гетеродимерный Fc-слитый белок может содержать два или более типовых мономерных белков Fc-домена, описанных в данном документе.

В некоторых вариантах реализации изобретения линкер представляет собой «доменный линкер», применяемый для соединения вместе любых двух доменов, описанных в данном документе, некоторые из которых проиллюстрированы на фиг. 87. Хотя можно использовать любой подходящий линкер, во многих вариантах реализации изобретения используют глицин-сериновый полимер, включая, например, (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n и (GGGS)n, где n представляет собой целое число, равное по меньшей мере единице (и в общем случае от 0 до 1 до 2 до 3 до 4 до 5), а также любую пептидную последовательность, которая делает возможным рекомбинантное соединение двух доменов, достаточной длины и гибкости, чтобы позволить каждому домену сохранять свою биологическую функцию. В некоторых случаях и с уделением особого внимания «цепочности», как описано ниже, можно использовать заряженные доменные линкеры.

В одном варианте реализации изобретения гетеродимерные Fc-слитые белки содержат по меньшей мере два константных домена, которые могут быть сконструированы для получения гетеродимеров, как в случае pI-конструирования. Другие Fc-домены, которые можно использовать, включают фрагменты, содержащие один или более CH1-, CH2-, CH3- и шарнирных доменов согласно изобретению, которые были pI-сконструированы. В частности, форматы, проиллюстрированные на фиг. 9A-9G и 39A-39D, представляют собой гетеродимерные Fc-слитые белки, что означает, что белок содержит две связанные Fc-последовательности, самособранные в гетеродимерный Fc-домен, и по меньшей мере один белковый фрагмент (например, 1, 2 или более белковых фрагментов). В некоторых случаях первый белковый фрагмент связан с первой Fc-последовательностью, а второй белковый фрагмент связан со второй Fc-последовательностью. В других случаях первый белковый фрагмент связан с первой Fc-последовательностью и первый белковый фрагмент нековалентно соединен со вторым белковым фрагментом, который не связан с Fc-последовательностью. В некоторых случаях гетеродимерный Fc-слитый белок содержит первый белковый фрагмент, связанный со вторым белковым фрагментом, который связан с первой Fc-последовательностью, и второй Fc-последовательностью, которая не связана ни с первым, ни со вторым белковыми фрагментами.

Соответственно, в некоторых вариантах реализации в данном изобретении предложены гетеродимерные Fc-слитые белки, которые основаны на использовании двух разных вариантных Fc-последовательностей тяжелой цепи, которые будут проходить самосборку с образованием слитого полипептида с гетеродимерным Fc-доменом.

Данное изобретение относится к новым конструкциям для обеспечения гетеродимерных Fc-слитых белков, которые делают возможным связывание с одним или более партнерами по связыванию, лигандами или рецепторами. В основе гетеродимерных Fc-слитых конструкций лежит способность к самосборке двух Fc-доменов тяжелых цепей антител, например, двух «мономеров», которые собираются в «димер». Гетеродимерные Fc-слияния создают путем изменения аминокислотной последовательности каждого мономера, как более подробно описано ниже. Таким образом, данное изобретение в целом относится к созданию гетеродимерных Fc-слитых белков, которые могут совместно задействовать партнеров по связыванию, лиганды или рецепторы несколькими путями, что обусловлено аминокислотными вариантами в константных областях, которые являются разными в каждой цепи, для стимуляции гетеродимерного образования и/или облегчения очистки гетеродимеров по сравнению с гомодимерами.

Существует ряд механизмов, которые можно использовать для создания гетеродимеров согласно данному изобретению. Кроме того, как понятно специалистам в данной области техники, эти механизмы можно комбинировать для гарантии высокой степени гетеродимеризации. Таким образом, аминокислотные варианты, которые приводят к получению гетеродимеров, называются «гетеродимеризационными вариантами». Как описано ниже, гетеродимеризационные варианты могут включать стерические варианты (например, «выступы и впадины» или «искаженные» варианты, описанные ниже, и варианты с «заряженными парами», описанные ниже), а также «pI-варианты», что делает возможной очистку гомодимеров от гетеродимеров. Как в целом описано в WO2014/145806, в полном объеме включенной в данный документ посредством ссылки, и, в частности, в нижеприведенном обсуждении «гетеродимеризационных вариантов», применимые механизмы гетеродимеризации включают: «выступы и впадины» («ВИВ»), иногда, в контексте данного документа, «искаженные» варианты, (смотрите обсуждение в WO2014/145806), «электростатическое ориентирование» или «заряженные пары», описанные в WO2014/145806, pI-варианты, описанные в WO2014/145806, и общие дополнительные Fc-варианты, описанные в WO 2014/145806 и ниже.

В данном изобретении существует несколько основных механизмов, которые могут приводить к облегчению очистки гетеродимерных антител; один основан на применении pI-вариантов, так что каждый мономер имеет отличную pI, что, таким образом, позволяет проводить изоэлектрическую очистку димерных белков A-A, A-B и B-B. В альтернативном варианте некоторые форматы также допускают разделение на основании размера. Как дополнительно отмечено ниже, также можно «искажать» образование гетеродимеров относительно гомодимеров. Таким образом, комбинация стерических гетеродимеризационных вариантов и pI-вариантов или вариантов заряженных пар находит конкретное применение в данном изобретении.

В общем случае варианты реализации конкретного применения в данном изобретении основаны на наборах вариантов, которые включают искаженные варианты, которые стимулируют гетеродимеризацию относительно гетеродимеризации, в сочетании с pI-вариантами, которые увеличивают разницу pI между двумя мономерами.

Кроме того, как более подробно описано ниже, в зависимости от формата гетеродимерного Fc-слитого белка, pI-варианты могут находиться в константных и/или Fc-доменах мономера, или же можно использовать линкеры. Это означает, что в изобретении предложены pI-варианты, которые находятся в одном или обоих мономерах, и/или заряженные доменные линкеры. Кроме того, дополнительное аминокислотное конструирование для получения альтернативных функциональных возможностей может также обеспечивать изменения pI, такие как варианты Fc, FcRn и НO.

В данном изобретении, в котором pI применяется в качестве механизма разделения, который позволяет очищать гетеродимерные белки, аминокислотные варианты можно вносить в один или оба мономерных полипептида; это означает, что pI одного из мономеров (для упрощения называемого в данном документе «мономером A») можно сконструировать отдельно от мономера B, или же можно изменять заряд обоих мономеров A и B с увеличением pI мономера A и уменьшением pI мономера B. Как обсуждалось выше, изменение pI как одного, так и обоих мономеров можно осуществлять путем удаления или добавления заряженного остатка (например, замены нейтральной аминокислоты положительно или отрицательно заряженным аминокислотным остатком, например, глицина на глутаминовую кислоту), изменения заряда остатка с положительного или отрицательного на противоположный заряд (например, аспарагиновой кислоты на лизин) или изменения заряженного остатка на нейтральный остаток (например, с потерей заряда; лизина на серин). Ряд этих вариантов проиллюстрирован на фигурах.

Соответственно, в этом варианте реализации данного изобретения предложено создание достаточного изменения pI в по меньшей мере одном из мономеров так, чтобы гетеродимеры можно было отделять от гомодимеров. Как понятно специалистам в данной области техники и как дополнительно обсуждается ниже, это можно осуществлять, используя константную область тяжелой цепи «дикого типа» и вариантную область, которая была сконструирована с повышением или снижением pI (ДТ A-+B или ДТ A - -B), или повышая значение для одной области и снижая для другой области (A+ -B- или A- B+).

Таким образом, в общем случае компонентом некоторых вариантов реализации данного изобретения являются аминокислотные варианты в константных областях, которые направлены на изменение изоэлектрической точки (pI) по меньшей мере одного, если не обоих, мономеров димерного белка путем внесения аминокислотных замен («pI-варианты» или «pI-замены») в один или оба мономера. Как показано в данном документе, отделение гетеродимеров от двух гомодимеров можно осуществлять, если pI двух мономеров отличаются всего лишь на 0,1 единицы pH, при этом все значения 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 или более используются в данном изобретении.

Как понятно специалистам в данной области техники, количество pI-вариантов, включаемых в каждый или оба мономера для достижения надлежащего разделения, будет частично зависеть от исходной pI компонентов. Как известно в данной области техники, разные Fc будут иметь разные исходные значения pI, которые используются в данном изобретении. В целом, как отмечается в данном документе, pI конструируют для получения общей разницы в pI каждого мономера, составляющей по меньшей мере около 0,1 log, предпочтительно от 0,2 до 0,5, как описано в данном документе.

Как понятно специалистам в данной области техники, количество pI-вариантов, включаемых в каждый или оба мономера для достижения надлежащего разделения, будет частично зависеть от исходной pI компонентов. Это означает, что для определения того, какой мономер следует сконструировать или в каком «направлении» это делать (например, делать более положительным или более отрицательным), рассчитывают последовательности Fc-доменов и, в некоторых случаях, белковых доменов, связанных с Fc-доменами, и на основе этого принимают решение. Как известно в данной области техники, разные Fc-домены будут иметь разные исходные значения pI, которые используются в данном изобретении. В целом, как отмечается в данном документе, pI конструируют для получения общей разницы в pI каждого мономера, составляющей по меньшей мере около 0,1 log, предпочтительно от 0,2 до 0,5, как описано в данном документе.

Кроме того, как понятно специалистам в данной области техники и как описано в данном документе, в некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимеры могут быть отделены от гомодимеров на основании размера. Как проиллюстрировано на фигурах, например, некоторые форматы позволяют проводить разделение гетеродимеров и гомодимеров на основании размера.

В случае, когда pI-варианты используются для обеспечения гетеродимеризации с применением константной области (областей) Fc-домена (доменов), предложен более модульный подход к конструированию и очистке гетеродимерных Fc-слитых белков. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения необходимо конструировать гетеродимеризационные варианты (включая гетеродимеризационные варианты с асимметрией и очисткой). Кроме того, в некоторых вариантах реализации изобретения возможная иммуногенность в результате pI-вариантов существенно снижена путем переноса pI-вариантов из разных изотипов IgG, так что pI меняется без внесения существенной иммуногенности. Таким образом, дополнительная проблема, требующая разрешения, заключается в определении константных доменов с низкой pI и с высоким содержанием человеческих последовательностей, например, минимизацией или избеганием наличия нечеловеческих остатков в любой конкретной позиции.

Дополнительным преимуществом, которое может появиться при таким pI-конструировании, является продление сывороточного времени полужизни и повышение связывания FcRn. Иными словами, как описано в USSN 13/194904 (в полном объеме включенной посредством ссылки), снижение pI константных доменов антител (включая находящиеся в антителах и Fc-слияниях) может приводить к продлению удержания в сыворотке in vivo. Эти pI-варианты для повышения сывороточного времени полужизни также облегчают изменение pI для очистки.

Кроме того, следует отметить, что pI-варианты гетеродимеризационных вариантов обеспечивают дополнительное преимущество для аналитики и контроля качества Fc-слитых белков, поскольку возможность элиминации, минимизации и различения присутствия гомодимеров, является существенной. Аналогично, важна возможность надежной проверки воспроизводимости получения гетеродимерного Fc-слитого белка.

A. Гетеродимеризационные варианты

В данном изобретении предложены гетеродимерные белки, включая гетеродимерные Fc-слитые белки в различных форматах, в которых используются гетеродимерные варианты, обеспечивающие образование гетеродимеров и/или их очистку от гомодимеров. В основе гетеродимерных слитых конструкций лежит способность к самосборке двух Fc-доменов, например, двух «мономеров», которые собираются в «димер».

Существует ряд подходящих пар наборов гетеродимеризационных искаженных вариантов. Эти варианты входят в «пары» «наборов». То есть, один набор пары включают в первый мономер, а другой набор пары включают во второй мономер. Следует отметить, что эти наборы не обязательно взаимодействуют как варианты «выступ-во-впадину» с однозначным соответствием между остатком в одном мономере и остатком в другом; то есть, эти пары наборов образуют поверхность взаимодействия между двумя мономерами, которая способствует образованию гетеродимеров и препятствует образованию гомодимеров, обеспечивая процент гетеродимеров, которые самопроизвольно образуют в биологических условиях, превышающий 90% вместо ожидаемых 50% (25% гомодимер А/А:50% гетеродимер А/В:25% гомодимер В/В).

B. Стерические варианты

В некоторых вариантах реализации изобретения образование гетеродимеров может облегчаться добавлением стерических вариантов. Это означает, что изменяя аминокислоты в каждой тяжелой цепи, с большей вероятностью происходит ассоциация разных тяжелых цепей с образованием гетеродимерной структуры, чем с образованием гомодимеров с одинаковыми аминокислотными последовательностями Fc. Подходящие стерические варианты проиллюстрированы на фиг. 29 USSN 15/141350, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки, а также на фиг. 84.

Также, необязательно, можно использовать один механизм, в общем случае называемый в данной области техники «выступы и впадины» и относящийся к аминокислотному конструированию, которое создает стерическое влияние, способствующие образованию гетеродимеров и препятствующее образованию гомодимеров; иногда его называют «выступы и впадины», как описано в USSN 61/596846, Ridgway et al., Protein Engineering 9(7):617 (1996); Atwell et al., J. Mol. Biol. 1997 270:26; патенте США № 8216805, которые все в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки. На фигурах определен ряд пар «мономер A - мономер B», которые основаны на «выступах и впадинах». В дополнение к этому, как описано в Merchant et al., Nature Biotech. 16:677 (1998), эти мутации типа «выступов и впадин» можно комбинировать с дисульфидными связями для смещения в направлении гетеродимеризации.

Дополнительный механизм, который применяют при создании гетеродимеров, иногда называют «электростатическим ориентированием», описанным в Gunasekaran et al., J. Biol. Chem. 285(25):19637 (2010), которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки. Этот механизм иногда называется в данном документе «заряженными парами». В этом варианте реализации изобретения применяют электростатические взаимодействия для смещения в сторону гетеродимеризации. Специалистам в данной области техники понятно, что эти взаимодействия могут влиять на pI и, таким образом, на очистку, и поэтому в некоторых случаях также могут считаться pI-вариантами. Но поскольку эти пары создавались для стимуляции гетеродимеризации и не использовались как инструменты очистки, то они классифицируются как «стерические варианты». Они включают, но не ограничиваются этим, D221E/P228E/L368E, спаренные с D221R/P228R/K409R (например, они являются «соответствующими наборами мономеров»), и C220E/P228E/368E, спаренные с C220R/E224R/P228R/K409R.

Дополнительные варианты мономера A и мономера B можно необязательно и независимо и в любом количестве комбинировать с другими вариантами, например, такими как описанные в данном документе pI-варианты, или другие стерические варианты, проиллюстрированные на фиг. 37 US 2012/0149876, которая явным образом включена в данный документ посредством ссылки.

В некоторых вариантах реализации изобретения описанные в данном документе стерические варианты можно необязательно и независимо включать вместе с любым pI-вариантом (или другими вариантами, такими как Fc-варианты, FcRn-варианты и т.д.) в один или оба мономера, и можно независимо и необязательно включать или исключать из белков согласно изобретению.

Перечень подходящих искаженных вариантов проиллюстрирован на фиг. 84. В особенности применимыми во многих вариантах реализации изобретения являются пары наборов, включающие, но не ограничивающиеся этим, S364K/E357Q : L368D/K370S; L368D/K370S : S364K; L368E/K370S : S364K; T411T/E360E/Q362E : D401K; L368D/K370S : S364K/E357L, K370S : S364K/E357Q и T366S/L368A/Y407V : T366W (необязательно включая мостиковый дисульфид, T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C). С точки зрения номенклатуры, пара «S364K/E357Q: L368D/K370S» означает, что один из мономеров содержит набор с двумя вариантами S364K/E357Q, а другой содержит набор с двумя вариантами L368D/K370S, как и выше, «цепочность» этих пар зависит от исходного значения pI.

C. pI-варианты (варианты изоэлектрической точки) для гетеродимеров

В целом, как понятно специалистам в данной области техники, существуют две основные категории pI-вариантов: те, которые увеличивают pI белка (основные изменения), и те, которые уменьшают pI белка (кислые изменения). Как описано в данном документе, можно осуществлять все комбинации этих вариантов: один мономер может иметь дикий тип или являться вариантом, который не проявляет существенно отличную от дикого типа pI, а другой может являться более основным или более кислым. В альтернативном варианте изменяют каждый мономер, один - в сторону большей основности, а другой - в сторону большей кислотности.

Предпочтительные комбинации pI-вариантов проиллюстрированы на фиг. 30 USSN 15/141350, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки. Как описано в данном документе и проиллюстрировано на фигурах, эти изменения показаны относительно IgG1, но таким образом можно изменять все изотипы, а также изотипные гибриды. В случае, когда константный домен тяжелой цепи получен из IgG2-4, можно также использовать замены R133E и R133Q.

В одном варианте реализации изобретения предпочтительная комбинация pI-вариантов имеет один мономер, содержащий варианты 208D/295E/384D/418E/421D (N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D в случае человеческого IgG1), если один из Fc-мономеров содержит CH1-домен. В некоторых случаях второй мономер содержит положительно заряженный доменный линкер, включая (GKPGS)₄. В некоторых случаях первый мономер содержит CH1-домен, включая позицию 208. Соответственно, в конструкциях, которые не содержат CH1-домен (например, в случае гетеродимерных Fc-слитых белков, в которых не используется CH1-домен в одном из доменов), предпочтительный набор отрицательных pI-вариантов Fc включает варианты 295E/384D/418E/421D (Q295E/N384D/Q418E/N421D в случае человеческого IgG1).

В некоторых вариантах реализации изобретения мутации вносят в шарнирный домен Fc-домена, включая позиции 221, 222, 223, 224, 225, 233, 234, 235 и 236. Следует отметить, что можно осуществлять изменения в 233-236 с целью повышения эффекторной функции (наряду с 327A) в остове IgG2. Таким образом, pI-мутации и, в частности, замены можно осуществлять в одной или более позициях 221-225, при этом 1, 2, 3, 4 или 5 мутаций применимы в данном изобретении. Опять же, подразумеваются все возможные комбинации, в отдельности или с другими pI-вариантами в других доменах.

Конкретные замены, применяемые для снижения pI шарнирных доменов, включают, но не ограничиваются этим, делецию в позиции 221, ненативный валин или треонин в позиции 222, делецию в позиции 223, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 224, делецию в позиции 225, делецию в позиции 235 и делецию или ненативный аланин в позиции 236. В некоторых случаях в шарнирном домене проводят только pI-замены, а в других эти замены добавляют к другим pI-вариантам в других доменах в любой комбинации.

В некоторых вариантах реализации изобретения можно вносить мутации в CH2-области, включая позиции 274, 296, 300, 309, 320, 322, 326, 327, 334 и 339. Опять же, возможны все комбинации этих 10 позиций; например, pI-антитело может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 pI-замен в CH2.

Конкретные замены, применяемые для снижения pI CH2-доменов, включают, но не ограничиваются этим, ненативные глутамин или глутаминовую кислоту в позиции 274, ненативный фенилаланин в позиции 296, ненативный фенилаланин в позиции 300, ненативный валин в позиции 309, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 320, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 322, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 326, ненативный глицин в позиции 327, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 334, ненативный треонин в позиции 339 и все возможные комбинации в СН2 и с другими доменами.

В этом варианте реализации изобретения мутации могут быть независимо и необязательно выбраны из позиции 355, 359, 362, 384, 389,392, 397, 418, 419, 444 и 447. Конкретные замены, применяемые для снижения pI CH3-доменов, включают, но не ограничиваются этим, ненативные глутамин или глутаминовую кислоту в позиции 355, ненативный серин в позиции 384, ненативный аспарагин или глутаминовую кислоту в позиции 392, ненативный метионин в позиции 397, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 419, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 359, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 362, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 389, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 418, ненативную глутаминовую кислоту в позиции 444 и делецию или ненативную аспарагиновую кислоту в позиции 447.

D. Изотипические варианты

В дополнение к этому, многие варианты реализации изобретения основаны на «импортировании» pI-аминокислот в конкретных позициях из одного изотипа IgG в другой, тем самым снижая или устраняя возможность нежелательной иммуногенности, связанной с этими вариантами. Некоторые из них проиллюстрированы на фиг. 21 публикации заявки США № 2014/0370013, включенной в данный документ посредством ссылки. Это означает, что IgG1 является общепринятым изотипом для терапевтических антител по множеству причин, включая сильную эффекторную функцию. Однако константная область тяжелой цепи IgG1 имеет более высокую pI, чем такая же область IgG2 (8,10 по сравнению с 7,31). Вследствие внесения остатков IgG2 в конкретные позиции в остове IgG1, pI получаемого в результате мономера снижается (или повышается) и дополнительно он демонстрирует большее сывороточное время полужизни. Например, IgG1 содержит глицин (pI 5,97) в позиции 137, а IgG2 содержит глутаминовую кислоту (pI 3,22); импортирование глутаминовой кислоты будет влиять на pI получаемого в результате белка. Как описано ниже, обычно требуется некоторое количество аминокислотных замен для оказания существенного влияния на pI вариантного Fc-слитого белка. Однако следует отметить, что, как обсуждается ниже, даже изменения в молекулах IgG2 обеспечивают повышение сывороточного времени полужизни.

В других вариантах реализации изобретения осуществляют неизотипические аминокислотные замены, как для снижения общего уровня заряда получаемого в результате белка (например, путем замены аминокислоты с большей pI аминокислотой с меньшей pI), так и для обеспечения согласованности в структуре для стабильности и т.д., как более подробно описано ниже.

Кроме того, с помощью pI-конструирования константных доменов как легких, так и тяжелых цепей можно наблюдать значительные изменения в каждом мономере гетеродимера. Как обсуждается в данном документе, изменение pI двух мономеров по меньшей мере на 0,5 может позволить проводить разделение методами ионообменной хроматографии или изоэлектрического фокусирования, или другими методами, чувствительными в отношении изоэлектрической точки.

E. Расчет pI

Значение pI каждого мономера может зависеть от pI вариантного константного домена тяжелой цепи и pI всего мономера, содержащего вариантный константный домен тяжелой цепи и партнера по слиянию. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения изменение pI рассчитывают на основании вариантного константного домена тяжелой цепи, используя диаграмму с фиг. 19 публикации заявки США № 2014/0370013. Как обсуждалось в данном документе, выбор подлежащего конструированию мономера в общем случае определяется изначальным значением pI каждого мономера.

F. pI-варианты, которые также обеспечивают лучшее связывание FcRn in vivo

В случае, когда pI-варианты снижают pI мономера, они могут обеспечивать дополнительное преимущество, улучшая удержание в сыворотке in vivo.

Хотя это явление еще изучается, считается, что Fc-области имеют большее время полужизни in vivo, так как связывание с FcRn при pH 6 в эндосоме приводит к отделению Fc (Ghetie and Ward, 1997 Immunol Today. 18(12): 592-598, в полном объеме включенная посредством ссылки). Затем эндосомальный компартмент осуществляет рециклинг Fc на поверхность клетки. Как только компартмент открывается во внеклеточное пространство, более высокий pH ~7,4 индуцирует высвобождение Fc обратно в кровь. В случае мышей Dall’ Acqua et al. показали, что Fc-мутанты с повышенным связыванием FcRn при pH 6 и pH 7,4 действительно имели сниженные сывороточные концентрации в сыворотке и такое же время полужизни, как и Fc дикого типа (Dall’ Acqua et al. 2002, J. Immunol. 169:5171-5180, в полном объеме включенная посредством ссылки). Считается, что повышенная аффинность Fc в отношении FcRn при pH 7,4 препятствует высвобождению Fc обратно в кровь. Следовательно, Fc-мутации, которые будут повышать время полужизни Fc in vivo, в идеале будут повышать связывание FcRn при более низком pH, в то же время продолжая обеспечивать высвобождение Fc при более высоком pH. Аминокислота гистидин меняет зарядовое состояние в диапазоне pH от 6,0 до 7,4. Следовательно, неудивительно, что остатки His можно обнаружить в важных позициях в комплексе Fc/FcRn.

G. Дополнительные Fc-варианты для обеспечения дополнительной функциональности

В дополнение к аминокислотным pI-вариантам существует ряд полезных аминокислотных модификаций Fc, которые можно осуществлять по множеству причин, включая, но не ограничиваясь этим, изменение связывания с одним или более FcγR-рецепторами, изменение связывания с FcRn-рецепторами и т.д.

Соответственно, белки согласно изобретению могут содержать аминокислотные модификации, включая гетеродимеризационные варианты, описанные в данном документе, которые включают pI-варианты и стерические варианты. Каждый набор вариантов может быть независимо и необязательно включен или исключен из любого конкретного гетеродимерного белка.

H. FcγR-варианты

Соответственно, существует ряд полезных Fc-замен, которые можно осуществлять для изменения связывания с одним или более FcγR-рецепторами. Можно применять замены, которые приводят к повышению связывания, а также снижению связывания. Например, известно, что повышенное связывание с FcγRIIIa приводит к повышению АЗКЦ (антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности, клеточноопосредованной реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, распознают связанное антитело на целевой клетке и впоследствии вызывают лизис целевой клетки). Аналогично, при некоторых обстоятельствах также может быть выгодным снижение связывания с FcγRIIb (ингибирующий рецептор). Аминокислотные замены, применяемые в данном изобретении, включают перечисленные в USSN 11/124620 (в особенности на фиг. 41), 11/174287, 11/396495, 11/538406, которые все явным образом и в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки и, в частности, в отношении описанных в них вариантов. Конкретные применяемые варианты включают, но не ограничиваются этим, 236A, 239D, 239E, 332E, 332D, 239D/332E, 267D, 267E, 328F, 267E/328F, 236A/332E, 239D/332E/330Y, 239D, 332E/330L, 243A, 243L, 264A, 264V и 299T.

Кроме того, аминокислотные замены, которые повышают аффинность к FcγRIIc, также могут быть включены в варианты Fc-доменов, описанные в данном документе. Можно применять замены, описанные, например, в USSN 11/124202 и 14/578305.

Кроме того, существуют дополнительные Fc-замены, применяемые для повышения связывания с FcRn-рецептором и повышения сывороточного времени полужизни, как, в частности, описано в USSN 12/341769, в полном объеме включенной в данный документ посредством ссылки, включая, но не ограничиваясь этим, 434S, 434A, 428L, 308F, 259I, 428L/434S, 259I/308F, 436I/428L, 436I или V/434S, 436V/428L и 259I/308F/428L.

I. Абляционные варианты

Аналогично, другая категория функциональных вариантов представлена «FcγR-абляционными вариантами» или «Fc-нокаутными» (FcНО или НО) вариантами. В этих вариантах реализации изобретения в случае некоторых терапевтических применений требуется снижение или устранение нормального связывания Fc-домена с одним или более или всеми Fcγ-рецепторами (например, FcγR1, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa и т.д.), чтобы избежать дополнительных механизмов действия. Что значит, например, что во многих вариантах реализации изобретения, в частности, при использовании биспецифических иммуномодулирующих антител, необходима абляция связывания FcγRIIIa для устранения или существенного снижения активности АЗКЦ, так чтобы один из Fc-доменов содержал один или более абляционных вариантов Fcγ-рецептора. Эти абляционные варианты проиллюстрированы на фиг. 31 USSN 15/141350, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки, и каждый из них может быть независимо и необязательно включен или исключен, причем в предпочтительных аспектах используются абляционные варианты, выбранные из группы, состоящей из: G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с индексом EU. Следует отметить, что абляционные варианты, упоминаемые в данном документе, аблируют связывание FcγR, но, в общем случае, не связывание FcRn.

J. Комбинация гетеродимерных и Fc-вариантов

Как понятно специалистам в данной области техники, все перечисленные гетеродимеризационные варианты (включая искаженные и/или pI-варианты) можно необязательно и независимо комбинировать любым образом, при условии, что они сохраняют свою «цепочность» или «мономерное разделение». Кроме того, все эти варианты можно комбинировать с получением любого гетеродимеризационного формата.

В случае pI-вариантов, хотя варианты реализации, имеющие конкретное применение, проиллюстрированы на фигурах, можно создавать другие комбинации, следуя основному правилу изменения разницы pI между двумя мономерами для облегчения очистки.

Кроме того, любой из гетеродимеризационных вариантов, искаженных и pI, также можно независимо и необязательно комбинировать с абляционными Fc-вариантами, Fc-вариантами, FcRn-вариантами, как в общем случае описано в данном документе.

Кроме того, мономерный Fc-домен может содержать набор аминокислотных замен, который включает C220S/S267K/L368D/K370S или C220S/S267K/S364K/E357Q.

Кроме того, гетеродимерные Fc-слитые белки могут содержать искаженные варианты (например, набор аминокислотных замен, как проиллюстрировано на фиг. 1А-1С USSN 15/141350, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки), причем в особенности применимы искаженные варианты, выбранные из группы, состоящей из S364K/E357Q: L368D/K370S; L368D/K370S: S364K; L368E/K370S: S364K; T411T/E360E/Q362E: D401K; L368D/K370S: S364K/E357L, K370S: S364K/E357Q, T366S/L368A/Y407V: T366W и T366S/L368A/Y407V/Y349C: T366W/S354C, необязательно, абляционных вариантов, необязательно, заряженных доменных линкеров и тяжелой цепи, содержащей pI-варианты.

В некоторых вариантах реализации изобретения Fc-домен содержит аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из: 236R, 239D, 239E, 243L, M252Y, V259I, 267D, 267E, 298A, V308F, 328F, 328R, 330L, 332D, 332E, M428L, N434A, N434S, 236R/328R, 239D/332E, M428L, 236R/328F, V259I/V308F, 267E/328F, M428L/N434S, Y436I/M428L, Y436V/M428L, Y436I/N434S, Y436V/N434S, 239D/332E/330L, M252Y/S254T/T256E, V259I/V308F/M428L, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, G236R/L328R и PVA/S267K. В некоторых случаях Fc-домен содержит аминокислотную замену 239D/332E. В других случаях Fc-домен содержит аминокислотную замену G236R/L328R или PVA/S267K.

В одном варианте реализации изобретения конкретная комбинация искаженных и pI-вариантов, применяемая в данном изобретении, представляет собой T366S/L368A/Y407V: T366W (необязательно включая мостиковый дисульфид, T366S/L368A/Y407V/Y349C: T366W/S354C), где один мономер содержит Q295E/N384D/Q418E/N481D, а другой - положительно заряженный доменный линкер. Как известно в данной области техники, варианты «выступ-во-впадину» не меняют pI и, таким образом, могут использоваться в любом мономере.

III. Белковые домены IL-15 и IL15Rα

В данном изобретении предложены гетеродимерные Fc-слитые белки, содержащие белки IL-15 и IL-15Rα. Как проиллюстрировано на фигурах, комплекс IL-15 может принимать несколько форм. Как указано выше, белок IL-15 сам по себе менее стабилен, чем в комплексе с белком IL-15Rα. Как известно в данной области техники, белок IL-15Rα содержит «домен sushi», который является самой короткой областью рецептора, которая сохраняет активность связывания IL-15. Таким образом, хотя можно создавать гетеродимерные слитые белки, содержащие весь белок IL-15Rα, предпочтительные варианты реализации согласно данному документу включают комплексы, в которых используется только домен sushi, последовательность которого приведена на фигурах.

Соответственно, комплексы IL-15 в общем случае содержат белок IL-15 и sushi-домен IL-15Rα (если не указано, что используется полноразмерная последовательность, «IL-15Rα», «IL-15Rα(sushi)» и «sushi» взаимозаменяемо используются по всему тексту). Этот комплекс можно использовать в трех разных форматах. Как показано на фиг. 9A, белок IL-15 и IL-15Rα(sushi) соединены не ковалентно, а скорее имеет место самосборка посредством регулярных взаимодействий лиганд-лиганд. Как более подробно описано в данном документе, это может быть либо домен IL-15, либо домен sushi, который ковалентно связан с Fc-доменом (в общем случае посредством необязательного доменного линкера). В альтернативном варианте они могут быть ковалентно связаны посредством доменного линкера, как в целом показано на фиг. 9B, 9E, 9G. На фиг. 9B. изображен домен sushi в виде N-концевого домена, хотя возможен обратный вариант. Наконец, каждый из доменов IL-15 и sushi может быть сконструирован так, чтобы содержать аминокислоту цистеин, которая образует дисульфидную связь с образованием комплекса, как в общих чертах проиллюстрировано на фиг. 39A-39D, опять же, домен IL-15 или домен sushi ковалентно присоединен (посредством необязательного доменного линкера) к Fc-домену.

В некоторых вариантах реализации изобретения человеческий белок IL-15 имеет аминокислотную последовательность, приведенную в эталонной последовательности NCBI № NP_000576.1 или SEQ ID NO:1. В некоторых случаях кодирующая последовательность человеческого IL-15 приведена в эталонной последовательности NCBI № NM_000585. Типовой белок IL-15 Fc-слитого гетеродимерного белка, описанный в данном документе, может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или аминокислоты 49-162 из SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 имеет по меньшей мере 90%, например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичности последовательности с SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, и аминокислотную замену N72D. В других вариантах реализации изобретения белок IL-15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из C42S, L45C, Q48C, V49C, L52C, E53C, E87C и E89C. Необязательно, белок IL-15 также содержит замену N72D. Белок IL-15 Fc-слитого белка может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 аминокислотных замен.

Аминокислотная (-ые) замена (-ы) может (могут) представлять собой изостерические замены на поверхности взаимодействия IL-15:IL-2β и IL-15:общая гамма-цепь. В некоторых вариантах реализации изобретения человеческий белок IL15 содержит одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D, Q108E и любой их комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 содержит аминокислотную замену Q108E. В некоторых случаях белок IL-15 содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более аминокислотных замен. Белок IL-15 может содержать замену N1D, N4D, D8N, D30N, D61N, E64Q, N65D или Q108E. В некоторых вариантах реализации изобретения аминокислотная замена может включать N1D/D61N, N1D/E64Q, N4D/D61N, N4D/E64Q, D8N/D61N, D8N/E64Q, D61N/E64Q, E64Q/Q108E, N1D/N4D/D8N, D61N/E64Q/N65D, N1D/D61N/E64Q, N1D/D61N/E64Q/Q108E или N4D/D61N/E64Q/Q108E. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 содержит аминокислотные замены D30N/E64Q/N65D.

В некоторых вариантах реализации изобретения белок человеческого рецептора альфа IL-15 (IL-15Rα) имеет аминокислотную последовательность, приведенную в эталонной последовательности NCBI № NP_002180.1 или SEQ ID NO:3. В некоторых случаях кодирующая последовательность человеческого IL-15Rα приведена в эталонной последовательности NCBI № NM_002189.3. Типовой белок IL-15Rα Fc-слитого гетеродимерного белка, описанный в данном документе, может содержать или состоять из домена sushi с SEQ ID NO:3 (например, аминокислоты 31-95 из SEQ ID NO:3), или, другими словами, аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15Rα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 и аминокислотную вставку, выбранную из группы, состоящей из D96, P97, A98, D96/P97, D96/C97, D96/P97/A98, D96/P97/C98 и D96/C97/A98, где аминокислотная позиция указана относительно полноразмерного человеческого белка IL-15Rα или SEQ ID NO:3. Например, аминокислоты, такие как D (например, Asp), P (например, Pro), A (например, Ala), DP (например, Asp-Pro), DC (например, Asp-Cys), DPA (например, Asp-Pro-Ala), DPC (например, Asp-Pro-Cys) или DCA (например, Asp-Cys-Ala) можно добавлять к C-концу белка IL-15Rα с SEQ ID NO:4. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15Rα содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 и одну или более аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из K34C, A37C, G38C, S40C и L42C, где аминокислотная позиция указана относительно SEQ ID NO:4. Белок IL-15Rα может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более аминокислотных мутаций (например, замен, вставок и/или делеций).

IV. Доменные линкеры

В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 и белок IL-15Rα связаны вместе посредством линкера. Необязательно, белки не соединены посредством линкера. В других вариантах реализации изобретения белок IL-15 и белок IL-15Rα связаны нековалентно. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 присоединен к Fc-домену посредством линкера. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-15 присоединен к Fc-домену напрямую, например, без линкера. В других вариантах реализации изобретения белок IL-15Rα присоединен к Fc-домену посредством линкера. В других вариантах реализации изобретения белок IL-15Rα присоединен к Fc-домену напрямую. В некоторых случаях линкер не используется для присоединения белка IL-15 или белка IL-15Rα к Fc-домену.

В некоторых вариантах реализации изобретения линкер представляет собой «доменный линкер», применяемый для соединения любых двух доменов, как описано в данном документе. Хотя можно использовать любой подходящий линкер, во многих вариантах реализации изобретения используют глицин-сериновый полимер, включая, например, (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n и (GGGS)n, где n представляет собой целое число, равное по меньшей мере 0 (и в общем случае от 0 до 1 до 2 до 3 до 4 до 5), а также любую пептидную последовательность, которая делает возможным рекомбинантное соединение двух доменов, достаточной длины и гибкости, чтобы позволить каждому домену сохранять свою биологическую функцию. В некоторых случаях применимые линкеры включают (GGGGS)₀ или (GGGGS)₁ или (GGGGS)₂. В некоторых случаях и с уделением особого внимания «цепочности», как описано ниже, можно использовать заряженные доменные линкеры, как обсуждается в данном документе и проиллюстрировано на фиг. 7.

V. Применимые форматы согласно изобретению

Как проиллюстрировано на фиг. 9A-9G и 39A-39D, существует целый ряд применимых форматов биспецифических гетеродимерных слитых белков согласно изобретению. В общем случае гетеродимерные слитые белки согласно изобретению имеют два функциональных компонента: компонент IL-15/IL-15Rα(sushi) и Fc-компонент, которые оба могут принимать разные формы, как описано в данном документе, и которые оба можно комбинировать с другим компонентом в любой конфигурации.

Первый и второй Fc-домены могут содержать набор аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из a) S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q; b) S364K/E357Q : L368D/K370S; c) L368D/K370S : S364K; d) L368E/K370S : S364K; e) T411T/E360E/Q362E : D401K; f) L368D/K370S : S364K/E357L и g) K370S : S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU.

В некоторых вариантах реализации изобретения первый и/или второй Fc-домены содержат дополнительный набор аминокислотных замен, содержащий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с нумерацией EU.

Необязательно, первый и/или второй Fc-домены содержат дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с нумерацией EU.

Необязательно, первый и/или второй Fc-домены содержат варианты 428L/434S для продления времени полужизни.

A. Формат IL-15/Rα-гетероFc

В этом варианте реализации изобретения, как показано на фиг. 9А, гетеродимерный слитый белок содержит два мономера. Первый мономер содержит (от N- к С-концу) IL-15-необязательный доменный линкер-CH2-CH3, при этом доменный линкер иногда содержит всю или часть шарнирной области. Второй мономер содержит домен IL-15/Rα(sushi)-необязательный доменный линкер-CH2-CH3, при этом доменный линкер иногда содержит всю или часть шарнирной области.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 Q108E.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S, а также варианты 428L/434S в обоих мономерах.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N65D.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N4D/N65D.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N1D/N65D.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

Предпочтительные варианты реализации формата IL-15/Rα-гетероFc проиллюстрированы на фиг. 48A (XENP22822, включая цепь 1 (17693) и цепь 2 (15908)), фиг. 94A (XENP23504, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AO (XENP24045, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AQ (XENP24306, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 48A (XENP22821, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 94A (XENP23343, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AJ (XENP23557, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AP (XENP24113, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AP (XENP24051, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AR (XENP24341, включая цепь 1 и цепь 2), фиг. 104AP (XENP24052, включая цепь 1 и цепь 2) и фиг. 104AP (XENP24301, включая цепь 1 и цепь 2).

B. scIL-15-Rα-Fc

В этом варианте реализации изобретения, как показано на фиг. 9B, гетеродимерный слитый белок содержит два мономера. Первый мономер содержит (от N- к С-концу) IL-15/Rα(sushi)-доменный линкер-IL-15-необязательный доменный линкер-CH2-CH3, при этом доменный линкер иногда содержит всю или часть шарнирной области. Второй мономер содержит и «пустой» Fc, содержащий всю или часть области шарнир-CH2-CH3. Такая конструкция обозначается как «scIL-15/Rα-Fc», где «sc» означает «одноцепочечный» (например, в отношении комплекса IL-15/sushi).

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 Q108E.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S, а также варианты 428L/434S в обоих мономерах.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N65D.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N4D/N65D.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N1D/N65D.

В формате scIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате IL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

C. ncIL-15/Rα-Fc

В этом варианте реализации изобретения, как показано на фиг. 9C, гетеродимерный слитый белок содержит три мономера. Первый мономер содержит (от N- к С-концу) IL-15/Rα(sushi)-доменный линкер-CH2-CH3, при этом доменный линкер иногда содержит всю или часть шарнирной области. Второй мономер содержит и «пустой» Fc, содержащий всю или часть области шарнир-CH2-CH3. Третий мономер представляет собой IL-15. Такая конструкция обозначается как «ncIL-15/Rα-Fc», где «nc» обозначает «нековалентный».

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 Q108E.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S, а также варианты 428L/434S в обоих мономерах.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N65D.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N4D/N65D.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N1D/N65D.

В формате ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате ncIL-15/Rα-гетероFc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

Предпочтительные варианты реализации формата ncIL-15/Rα-гетероFc проиллюстрированы на фиг. 104AS (XENP24349, включая цепь 1 и цепь 2) и фиг. 104AT (XENP24383, включая цепь 1 и цепь 2).

D. Бивалентный ncIL-15/Rα-Fc

В этом варианте реализации изобретения, как показано на фиг. 9D, гетеродимерный слитый белок содержит четыре мономера. Первый и второй мономеры содержат (от N- к С-концу) IL-15/Rα(sushi)-доменный линкер-CH2-CH3, при этом доменный линкер иногда содержит всю или часть шарнирной области. Третий и четвертый мономеры содержат IL-15. Такая конструкция обозначается как «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc», где «nc» обозначает «нековалентный».

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 Q108E.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 Q108E и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S, а также варианты 428L/434S в обоих мономерах.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 D30N/E64Q/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N65D.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются варианты IL-15 N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N4D/N65D.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N4D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используется вариант IL-15 N1D/N65D.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D и пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S.

В формате бивалентный ncIL-15/Rα-Fc в предпочтительном варианте реализации изобретения используются вариант IL-15 N1D/N65D, пара искаженных вариантов S364K/E357Q: L368D/K370S и варианты 428L/434S в каждом Fc-мономере.

Предпочтительные варианты реализации формата бивалентный ncIL-15/Rα-Fc проиллюстрированы на фиг. 104AR (XENP24342, включая цепь 1 и цепь 2) и (XENP24346, включая цепь 1 и цепь 2).

VI. Применимые варианты реализации изобретения

Как понятно специалистам в данной области техники и более подробно обсуждается ниже, гетеродимерные слитые белки согласно данному изобретению могут принимать множество разных конфигураций, как в целом проиллюстрировано на фиг. 9A-9G и фиг. 39A-39D. Аминокислотные последовательности типовых слитых белков проиллюстрированы на фиг. 8A-8E, 10, 11, 12A, 12B, 13-15, 40A, 40B, 41A, 41B, 42, 43, 48A-48D, 49A-49C, 50A, 50B, 51, 52, 53 и 94A-94D.

Многие из описанных в данном документе вариантов реализации в целом основаны на формате, содержащем первый мономер (первый слитый белок), содержащий белковый домен IL-15, ковалентно присоединенный посредством первого доменного линкера к N-концу первого Fc-домена, и второй мономер (второй слитый белок), содержащий белковый домен IL-15Rα, ковалентно присоединенный посредством второго доменного линкера к N-концу второго Fc-домена. Типовые варианты реализации этого формата («IL-15/Rα гетероFc» и «dsIL-15/Rα гетероFc») включают, но не ограничиваются этим, XENP20818, XENP20819, XENP21471, XENP21472, XENP21473, XENP21474, XENP21475, XENP21476, XENP21477, XENP22013, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP22822, XENP22823, XENP22824, XENP22825, XENP22826, XENP22827, XENP22828, XENP22829, XENP22830, XENP22831, XENP22832, XENP22833, XENP22834, XENP22815, XENP22816, XENP22817, XENP22818, XENP22819, XENP22820, XENP22821, XENP23343, XENP23554, XENP23555, XENP23557, XENP23559,XENP23561,XENP24018, XENP24019, XENP24020, XENP24051, XENP24052, XENP23504, XENP24306, XENP24306, XENP23343, XENO24113, XENP24341 и XENP24301.

Применимый формат гетеродимерного Fc-слитого белка содержит слитый белок, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу второго белкового домена посредством первого доменного линкера, который ковалентно присоединенный к N-концу первого Fc-домена посредством второго доменного линкера, и второй Fc-домен (например, пустой Fc-домен). В некоторых случаях первый белковый домен представляет собой белковый домен IL-15Rα, а второй белковый домен представляет собой белковый домен IL-15. Типовой вариант реализации этого формата («scIL-15/Rα-Fc») включает, но не ограничивается этим, XENP21478.

Другой применимый формат гетеродимерного Fc-слитого белка, описанного в данном документе, содержит слитый белок, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу первого Fc-домена посредством доменного линкера, второй Fc-домен (например, пустой Fc-домен) и второй белковый домен, который нековалентно присоединен к первому белковому домену. В некоторых случаях первый белковый домен представляет собой белковый домен IL-15, а второй белковый домен представляет собой белковый домен IL-15Rα. Типовой вариант реализации этого формата («ncIL-15/Rα-Fc» или «dsIL-15/Rα-Fc») включает, но не ограничивается этим, XENP21479, XENP22357, XENP22354, XENP22355, XENP22356, XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22360, XENP22361, XENP22362, XENP22363, XENP22364, XENP22365, XENP22366, XENP22637, XENP24348, XENP24349 и XENP24383.

Другой применимый формат гетеродимерного Fc-слитого белка, описанного в данном документе, содержит первый слитый белок, содержащий первый белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу указанного первого Fc-домена посредством первого доменного линкера, второй слитый белок, содержащий второй белковый домен, ковалентно присоединенный к N-концу указанного второго Fc-домена посредством второго доменного линкера, третий белковый домен, нековалентно присоединенный к указанному первому белковому домену указанного первого слитого белка, и четвертый белковый домен, нековалентно присоединенный к указанному второму белковому домену указанного второго слитого белка В некоторых случаях первый и второй белковые домены представляют собой белковые домены IL-15Rα, а третий и четвертый белковые домены представляют собой белковые домены IL-15. Типовой вариант реализации этого формата («бивалентный ncIL-15/Rα-Fc» или «бивалентный dsIL-15/Rα-Fc») включает, но не ограничивается этим, XENP21978, XENP22634, XENP24342 и XENP24346.

Другой применимый формат («бивалентный scIL-15/Rα-Fc») проиллюстрирован в данном документе на фиг. 14.

Другой применимый формат гетеродимерного Fc-слитого белка, описанного в данном документе, содержит первый слитый белок, содержащий первый Fc-домен, ковалентно присоединенный к N-концу первого белкового домена посредством доменного линкера, второй Fc-домен (например, пустой Fc-домен) и второй белковый домен, нековалентно присоединенный к первому белковому домену. Типовой вариант реализации этого формата («Fc-ncIL-15/Rα» или «Fc-dsIL-15/Rα») включает, но не ограничивается этим, XENP22637 и XENP22639, а также варианты, проиллюстрированные на фиг. 16. В некоторых вариантах реализации изобретения первый белок и второй белок соединены посредством линкера (фиг. 9G).

В случае любого описанного в данном документе гетеродимерного Fc-слитого белка первый доменный линкер и второй доменный линкер могут быть одинаковыми или разными. Кроме того, первый Fc-домен и второй Fc-домен гетеродимерного белка могут иметь разные аминокислотные последовательности.

Fc-домены согласно данному изобретению содержат Fc-домены IgG, например, Fc-домены IgG1. В некоторых вариантах реализации изобретения первый и второй Fc-домены содержат набор аминокислотных замен, выбранный из группы, состоящей из L368D/K370S и S364K; L368D/K370S и S364K/E357L; L368D/K370S и S364K/E357Q; T411E/K360E/Q362E и D401K; L368E/K370S и S364K; K370S и S364K/E357Q; K370S и S364K/E357Q; S267K/L368D/K370S и S267K/S364K/E357Q, в соответствии с нумерацией EU. В некоторых случаях первый и/или второй Fc-домены любого из гетеродимерных Fc-слитых форматов, описанных в данном документе, могут содержать дополнительный набор аминокислотных замен, содержащий Q295E/N384D/Q418E/N421D, в соответствии с нумерацией EU. В некоторых вариантах реализации изобретения первый и/или второй Fc-домены содержат дополнительный набор аминокислотных замен, состоящий из G236R/L328R, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K, E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G, E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G и E233P/L234V/L235A/G236del, в соответствии с нумерацией EU.

Дополнительные гетеродимеризационные варианты можно независимо и необязательно включать и выбирать из вариантов, проиллюстрированных на фигурах. Эти композиции могут дополнительно содержать абляционные варианты, pI-варианты, заряженные варианты, изотипические варианты и т.д.

VII. Нуклеиновые кислоты согласно изобретению

В этом изобретении дополнительно предложены композиции нуклеиновых кислот, кодирующие гетеродимерный Fc-слитый белок согласно изобретению (или, в случае мономерного белка Fc-домена, также нуклеиновые кислоты, кодирующие его).

Как понятно специалистам в данной области техники, композиции нуклеиновых кислот зависят от формата гетеродимерного белка. Таким образом, например, если формат требует наличия трех аминокислотных последовательностей, в один или более экспрессионных векторов могут быть включены три нуклеотидные последовательности для экспрессии. Аналогично, в некоторых форматах необходимы лишь две нуклеиновые кислоты; опять же, они могут быть помещены в один или два экспрессионных вектора.

Как известно специалистам в данной области техники, нуклеиновые кислоты, кодирующие компоненты согласно изобретению могут быть вставлены в векторы экспрессии, как известно в данной области техники, и в зависимости от клеток-хозяев, применятся для получения гетеродимерных Fc-слитых белков согласно изобретению. В общем случае нуклеиновые кислоты функционально связаны с любым количеством регуляторных элементов (промоторы, точки начала репликации, селективные маркеры, сайты связывания рибосом, индукторы и т.д.). Экспрессионные векторы могут представлять собой внехромосомные или интегрирующиеся векторы.

Затем нуклеиновыми кислотами и/или экспрессионными векторами согласно изобретению трансформируют любое число разных типов клеток-хозяев, хорошо известных в данной области техники, включая клетки млекопитающих, бактерий, дрожжей, насекомых и/или грибов, при этом во многих вариантах реализации изобретения применяют клети млекопитающих (например, клетки СНО).

В некоторых вариантах реализации изобретения каждая из нуклеиновых кислот, кодирующих каждый мономер, в зависимости от формата, содержится в одном экспрессионном векторе, в общем случае под управлением разных или одинаковых промоторов. В особо применяемых вариантах реализации изобретения каждая из этих двух или трех нуклеиновых кислот содержится в отдельном экспрессионном векторе.

Гетеродимерный Fc-слитый белок согласно изобретению получают путем культивирования клеток-хозяев, содержащих вектор(-ы) экспрессии, как хорошо известно в данной области техники. После получения, проводят традиционные этапы очистки слитых белков или антител, включающие этап ионообменной хроматографии. Как обсуждается в данном документе, изменение pI двух мономеров по меньшей мере на 0,5 может позволить проводить разделение методами ионообменной хроматографии или изоэлектрического фокусирования, или другими методами, чувствительными в отношении изоэлектрической точки. Это означает, что включение pI-замен, которые меняют изоэлектрическую точку (pI) каждого мономера так, чтобы каждый мономер имел отличную pI и каждый гетеродимер также имел отличную pI, облегчая, таким образом, изоэлектрическую очистку гетеродимира (например, с применением анионообменных колонок, катионообменных колонок). Эти замены также помогают при определении и отслеживании любых примесных гомодимеров после очистки (например, с применением гелей ИЭФ, кИЭФ и аналитических ИО-колонок).

VIII. Биологическая и биохимическая функциональность гетеродимерных иммуномодулирующих Fc-слитых белков IL-15/IL15Rα

Обычно гетеродимерные Fc-слитые белки согласно изобретению вводят пациентам с раком и оценивают эффективность рядом способов, описанных в данном документе. Таким образом, наряду с применением стандартных методов анализа эффективности, таких как оценка опухолевой нагрузки, размеров опухолей, оценка наличия или степени метастазирования и т.д., оценку результатов иммуноонкологического лечения также можно проводить на основании оценок иммунного статуса. Это можно осуществлять несколькими способами, включая анализы in vitro и in vivo. Например, можно проводить оценку изменений иммунного статуса (например, присутствия ICOS+ CD4+ Т-клеток после лечения ipi) наряду с «старомодными» измерениями, такими как оценка опухолевой нагрузки, размеров, инвазивности, вовлеченности лимфатических узлов, метастазирования и т.д. Таким образом, можно оценить любое или все из следующих свойств: ингибиторный эффект PVRIG на активацию или пролиферацию CD4⁺ Т-клеток, активацию или пролиферацию CD8⁺ T-клеток (ЦТЛ), опосредованную CD8⁺ T-клетками цитотоксическую активность и/или опосредованное ЦТЛ истощение клеток, активность NK-клеток и опосредованное NK истощение клеток, потенцирующий эффект PVRIG на дифференцировку и пролиферацию Treg-клеток и опосредованную Treg-клетками или миелоидными супрессорными клетками (МСК) иммуносупрессию или иммунную толерантность и/или эффект PVRIG на выработку провоспалительных цитокинов иммунными клетками, например, выработку IL-2, IFN- или TNF-α T-клетками или другими иммунными клетками.

В некоторых вариантах реализации изобретения оценку лечения проводят, оценивая пролиферацию иммунных клеток, используя, например, метод разведения CFSE, внутриклеточное окрашивание иммунных эффекторных клеток Ki67 и метод включения ³H-тимидина.

В некоторых вариантах реализации изобретения оценку лечения проводят, оценивая повышение генной экспрессии или повышение белковых уровней связанных с активацией маркеров, включая один или более из: CD25, CD69, CD137, ICOS, PD1, GITR, OX40, и дегрануляцию клеток, измеряемую по поверхностной экспрессии CD107A.

В общем случае анализ генной экспрессии проводят, как известно в данной области техники.

В общем случае измерение белковой экспрессии проводят аналогично, как известно в данной области техники.

В некоторых вариантах реализации изобретения оценку лечения проводят, оценивая цитотоксическую активность, измеряемую с помощью определения жизнеспособности целевых клеток посредством оценки многочисленных клеточных параметров, таких как активность ферментов (включая активность протеаз), проницаемость клеточной мембраны, клеточная адгезия, выработка АТФ, выработка коферментов и активность захвата нуклеотидов. Конкретные примеры этих методов анализа включают, но не ограничиваются этим, окрашивание трипановым синим или ПИ, метод высвобождения ⁵¹Cr или ³⁵S, активность ЛДГ, анализы MTT и/или WST, анализ с кальцеином-AM, анализ на основе люминесценции и другие.

В некоторых вариантах реализации изобретения оценку лечения проводят, оценивая активность Т-клеток, измеряемую по выработке цитокинов, при этом измерения проводят внутриклеточно в культуральном супернатанте, используя цитокины, включающие, но не ограничивающиеся этим, IFNγ, TNF-α, GM-CSF, IL2, IL6, IL4, IL5, IL10, IL13, используя хорошо известные методы.

Соответственно, оценку лечения можно проводить, используя методы анализа, в которых оценивают одно или более из следующих свойств: (i) повышение иммунного ответа, (ii) повышение активации αβ и/или γδ T-клеток, (iii) повышение цитотоксической активности T-клеток (iv) повышение активности NK- и/или NKT-клеток, (v) облегчение подавления αβ и/или γδ T-клеток, (vi) повышение секреции провоспалительных цитокинов, (vii) повышение секреции IL-2; (viii) повышение выработки интерферона-, (ix) повышение ответа Th1, (x) снижение ответа Th2, (xi) уменьшение или элиминация числа клеток и/или активности по меньшей мере одной из регуляторных Т-клеток (Treg).

A. Методы анализа для измерения эффективности

В некоторых вариантах реализации изобретения активацию Т-клеток оценивают, используя анализ реакции смешанной культуры лимфоцитов (РСКЛ), как известно в данной области техники. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение иммунного ответа, определяемое, например, по фосфорилированию или дефосфорилированию разных факторов, или путем определения других посттрансляционных модификаций. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение активации αβ и/или γδ Т-клеток, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение активности цитотоксических Т-клеток, определяемое, например, по прямому уничтожению целевых клеток, например, в случае раковых клеток, или по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение активности NK- и/или NKT-клеток, определяемое, например, по прямому уничтожению целевых клеток, например, в случае раковых клеток, или по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD107a, и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение супрессии αβ и/или γδ Т-клеток, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение секреции провоспалительных цитокинов, определяемое, например, методом ELISA или методом Luminex, или методами Multiplex на основе применения гранул, или путем внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или методом Alispot и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение секреции IL-2, определяемое, например, методом ELISA или методом Luminex, или методами Multiplex на основе применения гранул, или путем внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или методом Alispot и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение выработки интерферона-, определяемое, например, методом ELISA или методом Luminex, или методами Multiplex на основе применения гранул, или путем внутриклеточного окрашивания и анализа FACS, или методом Alispot и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа Th1, определяемое, например, по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа Th2, определяемое, например, по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение числа клеток и/или активности по меньшей мере одной из регуляторных Т-клеток (Treg), определяемое, например, методом проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение числа клеток макрофагов M2, определяемое, например, методом проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение проонкогенной активности макрофагов M2, определяемое, например, по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение в повышении нейтрофилов N2, определяемое, например, методом проточной цитометрии или ИГХ. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение проонкогенной активности нейтрофилов N2, определяемое, например, по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение ингибирования активации Т-клеток, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение ингибирования активации ЦТЛ, определяемое, например, путем прямого уничтожения целевых клеток, например, в случае раковых клеток, или по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение истощения αβ и/или γδ Т-клеток, определяемое, например, по изменению экспрессии маркеров активации. Снижение ответа указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры снижения такие же, как и для повышения, и описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение ответа αβ и/или γδ Т-клеток, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение стимуляции ответов антигенспецифической памяти, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD45RA, CCR7 и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение апоптоза или лизиса раковых клеток, определяемое, например, методами анализа цитотоксичности, например, MTT, высвобождения Cr, кальцеина АМ, или методами анализа на основе проточной цитометрии, такими как, например, разведение CFSE или окрашивание пропидиум йодидом и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение стимуляции цитотоксического или цитостатического эффекта на раковые клетки, определяемое, например, методами анализа цитотоксичности, например, MTT, высвобождения Cr, кальцеина АМ, или методами анализа на основе проточной цитометрии, такими как, например, разведение CFSE или окрашивание пропидиум йодидом и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение прямого уничтожения раковых клеток, определяемое, например, методами анализа цитотоксичности, например, MTT, высвобождения Cr, кальцеина АМ, или методами анализа на основе проточной цитометрии, такими как, например, разведение CFSE или окрашивание пропидиум йодидом и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение активации Th17, определяемое, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения в анализе сигнального пути измеряют повышение или снижение индукции комплементзависимой цитотоксичности и/или антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности, определяемое, например, методами анализа цитотоксичности, например, MTT, высвобождения Cr, кальцеина АМ, или методами анализа на основе проточной цитометрии, такими как, например, разведение CFSE или окрашивание пропидиум йодидом и т.д. Повышение активности указывает на наличие иммуностимулирующей активности. Соответствующие примеры повышения активности описаны ниже.

В одном варианте реализации изобретения активацию Т-клеток измеряют, например, по прямому уничтожению целевых клеток, например, раковых клеток, или по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD137, CD107a, PD1 и т.д. В случае Т-клеток повышение пролиферации, числа клеточно-поверхностных маркеров активации (например, CD25, CD69, CD137, PD1), цитотоксичности (способности уничтожать целевые клетки) и выработки цитокинов (например, IL-2, IL-4, IL-6, IFNγ, TNF-a, IL-10, IL-17A) будет показателем иммунной модуляции, которая согласуется с повышением уничтожения раковых клеток.

В одном варианте реализации изобретения активацию NK-клеток измеряют, например, по прямому уничтожению целевых клеток, например, раковых клеток, или по секреции цитокинов, или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации, таких как, например, CD107a и т.д. В случае NK-клеток повышение пролиферации, цитотоксичности (способности уничтожать целевые клетки и повышать экспрессию CD107a, гранзимов и перфорина), выработки цитокинов (например, IFNγ и TNF) и экспрессии рецепторов клеточной поверхности (например, CD25) будет показателем иммунной модуляции, которая согласуется с повышением уничтожения раковых клеток.

В одном варианте реализации изобретения активацию γδ T-клеток измеряют, например, по секреции цитокинов или по пролиферации, или по изменению экспрессии маркеров активации.

В одном варианте реализации изобретения активацию клеток Th1 измеряют, например, по секреции цитокинов или по изменению экспрессии маркеров активации.

Соответствующее повышение активности или ответа (или, в соответствующих случаях снижение, как указано выше) составляет 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98-99% относительно сигнала в эталонном образце или в контрольных образцах, например, тестовых образцах, которые не содержат анти-PVRIG антитело согласно изобретению. Аналогично, повышение по меньшей мере в один, два, три, четыре или пять раз по сравнению с эталонным или контрольным образцами демонстрирует эффективность.

IX. Варианты лечения

После приготовления композиции согласно изобретению используют в ряде онкологических применений, а именно для лечения рака, в общем случае путем стимуляции активации Т-клеток (например, прекращения супрессии Т-клеток) за счет связывания гетеродимерных Fc-слитых белков согласно изобретению.

Соответственно, гетеродимерные композиции согласно изобретению находят применение при лечении этих раковых заболеваний.

A. Гетеродимерные белковые композиции для введения in vivo

Лекарственные формы антител, применяемые в соответствии с данным изобретением, получают с целью хранения путем смешивания антитела, имеющего необходимую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (как в целом описано в Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. [1980]), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Приемлемые носители, буферы, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксическими для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный, и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензэтония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные полипептиды (менее чем около 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, _анит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как ТВИН™, ПЛЮРОНИКИ™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).

B. Схемы введения

Гетеродимерные белки и химиотерапевтические агенты согласно изобретению вводят субъекту в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение в виде болюса или путем непрерывной инфузии в течение некоторого периода времени.

C. Схемы лечения

В способах согласно изобретению терапия используется для обеспечения положительного терапевтического ответа в отношении заболевания или патологического состояния. Под «положительным терапевтическим ответом» подразумевается улучшение в заболевании или патологическом состоянии и/или улучшение в симптомах, связанных с заболеванием или патологическим состоянием. Например, положительный терапевтический ответ будет относиться к одному или более из следующих улучшений в заболевании: (1) снижение числа неопластических клеток; (2) повышение гибели неопластических клеток; (3) ингибирование выживаемости неопластических клеток; (5) ингибирование (то есть замедление в некоторой степени, предпочтительно прекращение) роста опухоли; (6) повышение выживаемости пациентов; и (7) некоторое облегчение одного или более симптомов, связанных с заболеванием или патологическим состоянием.

Положительные терапевтические ответы при любом заболевании или патологическом состоянии можно определять по стандартизованным критериям ответа, специфичным в отношении этого заболевания или патологического состояния. Опухолевый ответ можно оценивать в отношении изменений морфологии опухоли (то есть общей опухолевой нагрузки, размера опухоли и т.д.), используя методы скрининга, такие как магнитно-резонансная томография (МРТ), рентгенография, компьютерная томография (КТ), остеосцинтиграфия, эндоскопия и взятие материала опухолевой биопсии, включая аспирацию костного мозга (АКМ) и подсчет опухолевых клеток в циркуляции.

В дополнение к этим положительным терапевтическим ответам субъект, проходящий терапию, может испытать благоприятный эффект улучшения симптомов, связанных с этим заболеванием.

Лечение в соответствии с данным изобретением включает применение «терапевтически эффективного количества» лекарственных препаратов. «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического результата.

Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости от таких факторов, как течение заболевания, возраст, пол и масса индивида, а также способность лекарственных препаратов вызывать необходимый ответ у индивида. Терапевтически эффективное количество также является таким, для которого любые токсические или вредные эффекты лечения антителом или частью антитела перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами.

«Терапевтически эффективное количество» для опухолевой терапии также можно определять по его способности стабилизировать прогрессирование заболевания. Способность соединения ингибировать рак можно оценить в животной модельной системе, прогностической в отношении эффективности в случае человеческих опухолей.

В альтернативном варианте это свойство композиции можно оценить путем изучения способности соединения ингибировать рост клеток или индуцировать апоптоз с помощью методов in vitro анализа, известных практикующему специалисту. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может уменьшать размер опухоли или иным образом ослаблять симптомы у субъекта. Специалист в данной области техники способен определить такие количества на основе таких факторов, как размеры субъекта, степень тяжести симптомов субъекта и конкретные выбранные композиция или путь введения.

Схемы дозирования корректируют для обеспечения оптимального необходимого ответа (например, терапевтического ответа). Например, можно вводить однократную болюсную инъекцию, можно вводить несколько разделенных доз в течение некоторого времени или же дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать по показаниям терапевтической ситуации. Парентеральные композиции можно составлять в виде единичной дозированной формы для удобства применения и однородности дозы. В контексте данного документа единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для субъектов, подлежащих лечению; причем каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта в комбинации с необходимым фармацевтическим носителем.

Спецификация для единичной дозированной формы согласно данному изобретению продиктована и непосредственно зависит от (a) уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и (b) ограничений, известных в области составления такого активного соединения для лечения чувствительности у индивидов.

Эффективные дозы и схемы дозирования биспецифических антител, применяемых в данном изобретении, зависят от заболевания или патологического состояния, подлежащего лечению, и могут быть определены специалистами в данной области техники.

Типовой неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества биспецифического антитела, применяемого в данном изобретении, составляет около 0,1-100 мг/кг.

Все цитируемые ссылки явным образом и в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки.

Принимая во внимание то, что конкретные варианты реализации изобретения были описаны выше в иллюстративных целях, специалистам в данной области техники понятно, что можно осуществлять многочисленные изменения деталей, не отступая от изобретения, описанного в прилагаемой формуле изобретения.

Примеры

Ниже приведены примеры для иллюстрации данного изобретения. Эти примеры не подразумевают ограничения данного изобретения любым конкретным применением или принципом работы. В случае всех позиций константной области, обсуждаемых в данном изобретении, нумерация приведена в соответствии с индексом EU согласно Kabat (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, которая в полном объеме включена посредством ссылки). Специалистам в области техники антител понятно, что эта система подразумевает непоследовательную нумерацию конкретных областей последовательностей иммуноглобулина, обеспечивающую возможность применения унифицированных ссылок на консервативные позиции в семействах иммуноглобулинов. Соответственно, позиции в любом заданном иммуноглобулине, определяемые индексом EU, необязательно будут соответствовать его последовательной последовательности.

Общие и специализированные научные методики описаны в публикациях США 2015/0307629, 2014/0288275 и WO2014/145806, которые все явным образом и в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки, в частности, в отношении описанных в них способов.

Пример 1. Fc-слитые белки IL-15/IL-15Rα(sushi)

Чтобы решить проблему малого времени полужизни гетеродимеров IL-15/IL-15Rα, мы создали комплекс IL-15/IL-15Rα(sushi) в виде Fc-слияния (далее называемого слитыми белками IL-15/Rα-Fc) с целью облегчения получения и стимуляции FcRn-опосредованного рециклинга комплекса и продления времени полужизни.

Пример 1А. Конструирование слитых белков IL-15/Rα-Fc

Плазмиды, кодирующие IL-15 или домен sushi IL-15Rα, конструировали методом стандартного генного синтеза с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию Fc (например, константные области, проиллюстрированные на фиг. 8). Схематические рисунки иллюстративных форматов слитых белков IL-15/Rα-Fc приведены на фиг. 9A-G.

Продукт слияния IL-15Rα и гетеродимерного Fc или «IL-15/Rα-гетероFc» содержит IL-15, рекомбинантно слитый с одной стороной гетеродимерного Fc, и IL-15Rα sushi, рекомбинантно слитый с другой стороной гетеродимерного Fc (фиг. 9A). IL-15 и IL-15Rα могут содержать линкер переменной длины (см. фиг. 7) между соответствующими C-концом и N-концом Fc-области. Иллюстративные белки в этом формате включают XENP20818 и XENP21475, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 10 (см. также таблицу 1). Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 20819, 21471, 21472, 21473, 21474, 21476 и 21477.

Таблица 1

XENP Линкер IL-15-Fc Линкер IL-15Rα(sushi)-Fc 20818 (GGGGS)₁ (GGGGS)₁ 20819 (GGGGS)₁ (GGGGS)₄ 21471 НЕТ (GGGGS)₁ 21472 (GGGGS)₁ НЕТ 21473 (GGGGS)₁ (GGGGS)₃ 21474 НЕТ (GGGGS)₄ 21475 НЕТ НЕТ 21476 (GGGGS)₂ (GGGGS)₂ 21477 (GGGGS)₂ (GGGGS)₄

Продукт слияния одноцепочечный IL-15/Rα-Fc или «scIL-15/Rα-Fc» содержит домен IL-15Rα sushi, слитый с IL-15 посредством линкера переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом IL-15/IL-15Rα или «scIL-15/Rα»), который затем сливается с N-концом гетеродимерной Fc-области, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc» (фиг. 9B). Последовательности для иллюстративных линкеров проиллюстрированы на фиг. 7. Иллюстративным белком в этом формате является XENP21478, последовательности для которого проиллюстрированы на фиг. 11 (также см. таблицу 2). Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 21993, 21994, 21995, 23174, 23175, 24477 и 24480.

Таблица 2

XENP Линкер между IL-15 и IL-15Rα 21478 (GGGGS)₆ 21993 (GGGGS)₅ 21994 (GGGGS)₄ 21995 (GGGGS)₃ 23174 (GKPGS)₆ 23175 (GKPGS)₅ 24477 (GGGGS)₇ 24480 30AК-линкер

Слияние нековалентный IL-15/Rα-Fc или формат «ncIL-15/Rα-Fc» содержит IL-15Rα sushi, слитый с гетеродимерной Fc-областью, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/IL-15Rα, при этом другая сторона молекулы содержит гетеродимерный Fc типа «только Fc» или «пустой Fc» (фиг. 9С). Иллюстративные белки в этом формате включают XENP21479, XENP22366 и XENP24348, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 12.

Слияние бивалентный нековалентный IL-15/Rα-Fc или формат «бивалентный ncIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9D) содержит IL-15Rα(sushi), слитый с N-концом гомодимерной Fc-области, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/Rα. Иллюстративным белком в этом формате является XENP21978, последовательности для которого проиллюстрированы на фиг. 13. Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP21979.

Слияние бивалентный одноцепочечный IL-15/Rα-Fc или формат «бивалентный scIL-15/Rα-Fc» (фиг. 9E) содержит IL-15, слитый с IL-15Rα(sushi) посредством линкера переменной длины (называемый «одноцепочечным» комплексом IL-15/IL-15Rα(sushi) или «scIL-15/Rα»), который затем сливают с N-концом гомодимерной Fc-области. Последовательности для иллюстративных линкеров проиллюстрированы на фиг. 7. Последовательности для иллюстративного бифункционального белка в этом формате проиллюстрированы на фиг. 14.

Слияние Fc и нековалентного IL-15/Rα или формат «Fc-ncIL-15/Rα» (фиг. 9E) содержит IL-15Rα(sushi), слитый с С-концом гетеродимерной Fc-области, тогда как IL-15 трансфицируется отдельно с образованием нековалентного комплекса IL-15/Rα, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc». Иллюстративным белком в этом формате является XENP22637, последовательности для которого проиллюстрированы на фиг. 15. Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP22638.

Слияние Fc и одноцепочечного IL-15/Rα или формат «Fc-scIL-15/Rα» (фиг. 9G) содержит IL-15, слитый с IL-15Rα(sushi) посредством линкера переменной длины («scIL-15/Rα»), который затем сливают с С-концом гетеродимерной Fc-области, при этом другая сторона молекулы содержит «только Fc» или «пустой Fc». Последовательности для иллюстративных линкеров проиллюстрированы на фиг. 7. Последовательности для иллюстративного бифункционального белка в этом формате проиллюстрированы на фиг. 16.

Белки получали путем временной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию с протеином А (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (5 мл колонка HiTrapQ с 5-40% градиентом 50 мМ Трис, рН 8,5, и 50 мМ Трис, рН 8,5, с 1 М NaCl).

Пример 1B. Конструирование слитых белков IL-15/Rα-Fc

Связанные с чистотой и гомогенностью характеристики слитых белков IL-15/Rα-Fc, полученных в нескольких описанных выше форматах, изучали с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ) и капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ) в целом, как описано ниже.

Белки анализировали, используя ЭХ для измерения их размера (т.е. гидродинамического объема) и определения подобного нативному поведения очищенных образцов. Анализ проводили с помощью системы для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Agilent 1200. Образцы вводили в колонку Superdex™ 200 10/300 GL (GE Healthcare Life Sciences) со скоростью 1,0 мл/мин, используя 1 × ФСБ, pH 7,4, в качестве подвижной фазы, при 4°C в течение 25 минут, с УФ-выявлением на длине волны 280 нМ. Анализ проводили, используя систему Agilent OpenLab Chromatography Data System (CDS) ChemStation Edition AIC версии C.01.07. Хроматограммы для выбранных слитых белков IL-15/Rα-Fc проиллюстрированы на фиг. 17B, 18B и 19B.

Белки подвергали электрофоретическому анализу с помощью КИФ, используя LabChip GXII Touch HT (PerkinElmer, Waltham, MA), используя анализы Protein Express Assay LabChip и Protein Express Assay Reagent Kit, проводимые в соответствии с инструкциями производителя. Образцы исследовали в двух повторностях, один в восстанавливающих (с дитиотреитолом), а другой в невосстанавливающих условиях. Гель-изображения для выбранных слитых белков IL-15/Rα-Fc проиллюстрированы на фиг. 17C, 18C и 19C.

Симметрия пиков и относительно низкое содержание других молекул в случае каждого из слитых белков указывают на стабильность различных форматов.

Пример 1С. Изучение характеристик слитых белков IL-15/Rα-Fc в отношении аффинности и стабильности

Исследования аффинности слитых белков IL-15/Rα-Fc проводили, используя анализ Octet на основе биослоевой интерферометрии (БСИ). Экспериментальные этапы для Octet в общем случае включали следующее: иммобилизацию (захват лиганда или исследуемого объекта на биосенсоре); ассоциацию (погружение биосенсоров, покрытых лигандом или исследуемым объектом, в лунки, содержащие серийные разведения соответствующего исследуемого объекта или лиганда); и диссоциацию (возвращение биосенсоров в лунки, содержащие буфер) для определения аффинности исследуемых объектов. Также в данном способе была включена контрольная лунка, содержащая только буфер, для осуществления поправки на фон при обработке данных. В частности, использовали биосенсоры против человеческого Fc (AHC) для захвата исследуемых объектов, а затем погружали в ряд концентраций IL-2Rβ (R&D Systems, Minneapolis, Minn.) для определения KД. Результаты по аффинности и соответствующие сенсограммы проиллюстрированы на фиг. 17D, 18D и 19D. Каждая из трех конструкций демонстрировала высокую аффинность связывания (3-8 нМ) в отношении IL-1Rβ.

Стабильность слитых белков IL-15/Rα-Fc оценивали, используя дифференциальную сканирующую флуориметрию (ДСФ). ДСФ-эксперименты проводили, используя систему для ПЦР-выявления в режиме реального времени Bio-Rad CFX Connect. Белки смешивали с флуоресцентным красителем оранжевым SYPRO и разводили до 0,2 мг/мл в ФСБ. Конечная концентрация оранжевого SYPRO составляла 10Х. После первоначального 10-минутного периода инкубации при 25°С белки нагревали от 25 до 95°С со скоростью нагревания 1°С/мин. Измерение флуоресценции проводили каждые 30 секунд. Температуры плавления (Tп) рассчитывали, используя инструментальное программное обеспечение. Результаты по стабильности и соответствующие кривые плавления проиллюстрированы на фиг. 17E, 18E и 19E. Каждая из конструкций демонстрировала положительную общую стабильность с Tп ~ 68°С.

Пример 1D. Активность слитых белков IL-15/Rα-Fc в анализе пролиферации клеток

Вышеописанные слитые белки IL-15/Rα-Fc в различных форматах исследовали в анализе пролиферации клеток. Человеческие МКПК обрабатывали исследуемыми объектами в указанных концентрациях. Через 4 суток после обработки окрашивали МКПК анти-CD8-FITC (RPA-T8), анти-CD4-PerCP/Cy5.5 (OKT4), анти-CD27-PE (M-T271), анти-CD56-BV421. (5.1H11), анти-CD16-BV421 (3G8) и анти-CD45RA-BV605 (Hi100) для гейтинга относительно следующих типов клеток: CD4+ T-клетки, CD8+ T-клетки и NK-клетки (CD56+/CD16+). Ki67 является белком, тесно связанным с пролиферацией клеток, а окрашивание в отношении внутриклеточного Ki67 проводили, используя анти-Ki67-APC (Ki-67) и буферный набор для окрашивания Foxp3/транскрипционный фактор (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Процент Ki67 в вышеуказанных типах клеток измеряли, используя метод FACS (проиллюстрировано на фиг. 20A-20C и 21A-21C).

Различные слитые белки IL-15/Rα-Fc индуцировали сильную пролиферацию CD8+ T-клеток и NK-клеток. Примечательно, что различия в пролиферативной активности зависели от длины линкера со стороны IL-15-Fc. В частности, конструкции, не содержащие линкер (только шарнирную область), включая XENP21471, XENP21474 и XENP21475, продемонстрировали более слабую пролиферативную активность.

Пример 1E. Активность слитых белков IL-15/Rα-Fc в анализе SEB-стимулированных МКПК

Как описано выше, гетеродимеры IL-15/Rα могут эффективно активировать Т-клетки. Слитые белки IL-15/Rα-Fc в различных описанных выше форматах исследовали в анализе SEB-стимулированных МКПК. Стафилококковый энтеротоксин B (SEB) представляет собой суперантиген, который вызывает активацию и пролиферацию Т-клеток способом, подобным тому, который достигается путем активации через рецептор Т-клеток (TCR). Стимуляция МКПК человека с помощью SEB является распространенным методом анализа активации и пролиферации Т-клеток.

Человеческие МКПК от нескольких доноров стимулировали 10 нг/мл SEB в течение 72 часов в комбинации с 20 мкг/мл различных слитых белков IL-15/Rα-Fc или контролей (ФСБ, изотипического контроля и бивалентного анти-PD-1 антитела). После обработки собирали супернатант и анализировали в отношении IL-2, данные для которого проиллюстрированы на фиг. 22. Данные четко показывают, что слитые белки IL-15/Rα-Fc сильнее повышают секрецию IL-2, чем ФСБ и изотипический контроль. Примечательно, что ряд слитых белков IL-15/Rα-Fc имеют активность, эквивалентную или превосходящую активность анти-PD-1 антитела.

Пример 1F. Слитые белки IL-15/Rα-Fc повышают приживление и активность заболевания у мышей NSG с трансплантированными человеческими МКПК

Слитый белок IL-15/Rα-Fc XENP20818 оценивали в модели реакции трансплантат против хозяина (РТПХ), осуществляемой на самках иммунодефицитных мышей линии NSG (NOD-SCID-гамма). Когда мышам линии NSG вводили человеческие МКПК, вследствие наличия человеческих МКПК у них развивался аутоиммунный ответ против мышиных клеток. Обработка мышей линии NSG, которым вводили человеческие МКПК, а потом - слитые белки IL-15/Rα-Fc, повышает пролиферацию трансплантированных T-клеток.

10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на 0 сутки с последующим дозированием XENP20818 (1 мг/кг на 1 сутки и затем раз в неделю) и рекомбинантного IL-15 (Biolegend; 0,17 мг/кг на 1 сутки и затем раз в неделю). Кривая выживаемости проиллюстрирована на фиг. 23. Данные показывают, что мыши, получавшие слитый белок IL-15/Rα-Fc, демонстрировали быструю заболеваемость и смертность (все погибли к 10 суткам) по сравнению с мышами, получавшими рекомбинантный IL-15 (все были живы к 14 суткам). Вероятно, это связано с ожидаемым большим временем полужизни слитого белка IL-15/Rα-Fc.

В другом эксперименте 10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на 0 сутки с последующим дозированием XENP20818 (1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,1 мг/кг или 0,03 мг/кг на 1 сутки и затем раз в неделю) или ФСБ. Контрольные группы, в которых мышам не трансплантировали МКПК, были включены для исследования любого влияния XENP20818 на мышей линии NSG дикого типа. Кровь брали на 7 сутки для измерения IFNγ, данные для которого проиллюстрированы на фиг. 24, и для измерения числа CD4+ T-клеток, CD8+ T-клеток и CD45+ клеток, данные для которых проиллюстрированы на фиг. 25. Данные показывают четкую зависимость от дозы в случае XENP20818.

Пример 2. Гетеродимерные слитые белки IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями

Чтобы дополнительно улучшить стабильность и продлить время полужизни слитых белков IL-15/Rα-Fc, мы сконструировали дисульфидные связи на поверхности взаимодействия IL-15/Rα.

Пример 2А. Конструирование и изучение характеристик гетеродимеров IL-15/Rα со сконструированными дисульфидными связями

Посредством изучения кристаллической структуры комплекса IL-15/Rα, а также посредством моделирования с помощью программного обеспечения Molecular Operating Environment (MOE; Chemical Computing Group, Montreal, Quebec, Canada), мы спрогнозировали остатки на поверхности взаимодействия IL-15/Rα, которые можно замещать цистеином для образования ковалентных дисульфидных связей, как проиллюстрировано на фиг. 26.

Плазмиды, кодирующие IL-15 или IL-15Rα(sushi), конструировали методом стандартного генного синтеза с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5. Цепь IL-15Rα(sushi) содержала С-концевой полигистидиновый тэг. Остатки, определенные выше, заменяли цистеинами с помощью стандартных методов мутагенеза. Кроме того, в С-конец IL-15Rα(sushi) добавляли до трех аминокислот, следующих за доменом sushi в IL-15Rα, в качестве основы для конструирования цистеинов (иллюстративные последовательности для которых приведены на фиг. 27). Последовательности для иллюстративных вариантов IL-15 и IL-15Rα(sushi), сконструированных с цистеинами, соответственно приведены на фиг. 28 и 29.

Схематические рисунки гетеродимеров IL-15/Ra со сконструированными дисульфидами и без них проиллюстрированы на фиг. 30A-C. Последовательности для иллюстративного гетеродимера ncIL-15/Rα XENP21996 проиллюстрированы на фиг. 31. Последовательности для иллюстративных гетеродимеров dsIL-15/Rα XENP22004, XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494 проиллюстрированы на фиг. 32. Последовательности для иллюстративного гетеродимера scIL-15/Rα проиллюстрированы на фиг. 33. В качестве контроля создавали гетеродимеры IL-15/Rα «дикого типа» с дополнительными остатками в С-конце, но без сконструированных цистеинов. Последовательности для этих контрольных гетеродимеров IL-15/Rα перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 22001, 22002 и 22003. Белки получали путем временной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью хроматографии Ni-NTA.

После очистки белков их исследовали методом капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ) в отношении чистоты и гомогенности, как в целом описано в примере 1B, гель-изображения для которого проиллюстрированы на фиг. 34-35. Затем белки исследовали в отношении стабильности с помощью ДСФ, как в целом описано в примере 1С, данные для которого проиллюстрированы на фиг. 36-38. И наконец, белки исследовали в отношении связывания с IL-2Rβ в анализе Octet, как в целом описано в примере 1С, данные для которого проиллюстрированы на фиг. 38.

Многие дисульфидные связи были сформированы правильно, на что указывают данные денатурирующего невосстанавливающего КИФ, по которым можно видеть большую молекулярную массу ковалентного комплекса по сравнению с контрольными образцами без сконструированных дисульфидных связей (фиг. 34-35). Дисульфид-связанные гетеродимеры IL-15/Rα обладали повышенной температурной стабильностью до +13°C (фиг. 38). Связывание с IL-2Rβ не зависело от включения сконструированных дисульфидных связей (фиг. 38). Предпочтительными дисульфид-связанными парами были XENP22005, XENP22006, XENP22008 и XENP22494, которые были сконструированы в виде Fc-слитых белков, как описано ниже.

Пример 2В. Изучение характеристик слитых белков IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями

Плазмиды, кодирующие IL-15 или домен sushi IL-15Rα с вышеописанными мутациями, субклонировали в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию Fc (например, константные области, проиллюстрированные на фиг. 8). Схематические рисунки слитых белков IL-15/Rα-Fc со сконструированными дисульфидными связями приведены на фиг. 39A-D.

Слияние дисульфид-связанного IL-15/Rα с гетеродимерным Fc или «dsIL-15/Rα-гетероFc» (фиг. 39A) является аналогичным «IL-15/Rα-гетероFc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки в этом формате включают XENP22013, XENP22014, XENP22015 и XENP22017, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 40.

Слияние дисульфид-связанного IL-15/Rα с Fc или «dsIL-15/Rα-Fc» (фиг. 39B) является аналогичным «ncIL-15/Rα-Fc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки в этом формате включают XENP22357, XENP22358, XENP22359, XENP22684 и XENP22361, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 41. Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 22360, 22362, 22363, 22364, 22365 и 22366.

Слияние дисульфид-связанный IL-15/Rα-Fc или «бивалентный dsIL-15/Rα-Fc» (фиг. 39C) является аналогичным «бивалентному ncIL-15/Rα-Fc», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки в этом формате включают XENP22634, XENP22635 и XENP22636, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 42. Последовательности дополнительных белков в этом формате перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP22687.

Слияние Fc-дисульфид-связанный IL-15/Rα или «Fc-dsIL-15/Rα» (фиг. 39D) является аналогичным «Fc-ncIL-15/Rα», но IL-15Rα(sushi) и IL-15 дополнительно ковалентно связаны в результате наличия сконструированных цистеинов. Иллюстративные белки в этом формате включают XENP22639 и XENP22640, последовательности для которых проиллюстрированы на фиг. 43.

В качестве контроля создавали слитые белки IL-15/Rα-Fc «дикого типа» с дополнительными остатками в С-конце, но без сконструированных цистеинов. Последовательности для этих контрольных слитых белков IL-15/Rα-Fc перечислены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 21988, 21989, 21990, 21991, 21992, 22354, 22355 и 22356.

Белки получали путем временной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию с протеином А (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (5 мл колонка HiTrapQ с 5-40% градиентом 50 мМ Трис, рН 8,5, и 50 мМ Трис, рН 8,5, с 1 М NaCl).

После очистки белков их исследовали методом капиллярного изоэлектрического фокусирования (КИФ) в отношении чистоты и гомогенности, как в целом описано в примере 1B. Как было отмечено выше, многие дисульфидные связи были сформированы правильно, на что указывают данные денатурирующего невосстанавливающего КИФ, по которым можно видеть большую молекулярную массу ковалентного комплекса по сравнению с контрольными образцами без сконструированных дисульфидных связей (фиг. 44).

Затем белки исследовали в анализе пролиферации клеток. Слитые белки IL-15/Rα-Fc (со сконструированными дисульфидными связями или без них) или контрольные образцы инкубировали с МКПК в течение 4 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD4-PerCP/Cy5.5 (RPA-T4), анти-CD8-FITC (RPA-T8), анти-CD45RA-BV510 (HI100), анти-CD16-BV421 (3G8 ), анти-CD56-BV421 (HCD56), анти-CD27-PE (O323) и анти-Ki67-APC (Ki-67), чтобы пометить разные популяции клеток, и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Пролиферация NK-клеток, CD4+ T-клеток и CD8+ T-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, проиллюстрирована на фиг. 45A-C. Каждый из слитых белков IL-15/Rα-Fc и контроль IL-15 вызывали сильную пролиферацию NK-клеток, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток.

Пример 3. Слитые белки IL-15/Rα-Fc, сконструированные для снижения активности и повышения ФК и времени полужизни

Для дальнейшего улучшения ФК и продления времени полужизни мы пришли к выводу, что снижение активности IL-15 уменьшит антиген-зависимый клиренс и, следовательно, увеличит время полужизни.

Пример 3A. Конструирование и получение вариантных слитых белков IL-15/Rα-Fc

Посредством изучения кристаллической структуры поверхности взаимодействия IL-15:IL-2Rβ и IL-15:общая гамма-цепь, а также посредством моделирования с помощью программного обеспечения MOE, мы спрогнозировали остатки на этих поверхностях взаимодействия, которые можно заменять для снижения активности. На фиг. 46 проиллюстрирована структурная модель комплексов IL-15:рецептор, на которой показано расположение прогнозных остатков, в которых были сконструированы изостерические замены (чтобы снизить риск иммуногенности). Последовательности для иллюстративных вариантов IL-15, сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 47.

Плазмиды, кодирующие IL-15 или IL-15Rα(sushi), конструировали методом стандартного генного синтеза с последующим субклонированием в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по слиянию Fc (например, константные области, проиллюстрированные на фиг. 8). Внесение замен, определенных выше, были проводили с помощью стандартных методов мутагенеза. Последовательности для иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «IL-15/Rα-гетероFc», сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 48, при этом дополнительные последовательности приведены как XENP 22815, 22816, 22817, 22818, 22819. , 22820, 22823, 22824, 22825, 22826, 22827, 22828, 22829, 22830, 22831, 22832, 22833, 22834, 23555, 23559, 23560, 24017, 24020, 24043 и 24048 на фигурах и в перечне последовательностей.

Последовательности для иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «scIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 45, при этом дополнительные последовательности приведены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 24013, 24014 и 24016. Последовательности для иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «ncIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 50. Последовательности для иллюстративных гетеродимеров ncIL-15/Rα, сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 51, при этом дополнительные последовательности приведены на фигурах и в перечне последовательностей как XENP 22791, 22792, 22793, 22795, 22796, 22803, 22804, 22805, 22806, 22807, 22808 22809, 22810, 22811, 22812, 22813 и 22814. Последовательности для иллюстративного слитого белка IL-15/Rα-Fc в формате «бивалентного ncIL-15/Rα-Fc», сконструированного для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 52. Последовательности для иллюстративных слитых белков IL-15/Rα-Fc в формате «dsIL-15/Rα-Fc», сконструированных для снижения активности, проиллюстрированы на фиг. 53.

Белки получали путем временной трансфекции в клетках HEK293E и очищали с помощью двухэтапного процесса очистки, включающего хроматографию с протеином А (GE Healthcare) и анионообменную хроматографию (5 мл колонка HiTrapQ с 5-40% градиентом 50 мМ Трис, рН 8,5, и 50 мМ Трис, рН 8,5, с 1 М NaCl).

Пример 3B. In vitro активность вариантных слитых белков IL-15/Rα-гетероFc и scIL-15/Rα-Fc, сконструированных для снижения активности

Вариантные слитые белки IL-15/Rα-Fc исследовали в ряде анализов пролиферации клеток.

В первом анализе пролиферации клеток слитые белки IL-15/Rα-Fc (со сконструированными заменами или без них) или контроль инкубировали с МКПК в течение 4 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD4-Evolve605 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD16-eFluor450 ( CB16), анти-CD56-eFluor450 (TULY56), анти-CD3-FITC (OKT3) и анти-Ki67-APC (Ki-67), чтобы пометить разные популяции клеток, и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Пролиферация NK-клеток, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, проиллюстрирована на фиг. 54-55. Большинство слитых белков IL-15/Rα-Fc вызывали пролиферацию каждой клеточной популяции; однако активность варьировалась в зависимости от конкретных сконструированных замен.

Во втором анализе пролиферации клеток слитые белки IL-15/Rα-Fc (со сконструированными заменами или без них) инкубировали с МКПК в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-Evolve604 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD16-eFluor450 (CB16) , анти-CD56-eFluor450 (TULY56), анти-CD27-PE (O323), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100) и анти-Ki67-APC (20Raj1) антителами, чтобы пометить разные популяции клеток. На фиг. 56-57 проиллюстрирован отбор различных клеточных популяций после инкубации с XENP22821, проводимый методом FACS. Сначала проводили гейтинг лимфоцитов на основании бокового рассеяния (БР) и прямого рассеяния (ПР) (фиг. 56A). Затем проводили гейтинг лимфоцитов на основании экспрессии CD3 (фиг. 56В). Для клеток, отрицательных в отношении экспрессии CD3, проводили дополнительный гейтинг на основании экспрессии CD16 для идентификации NK-клеток (CD16+) (фиг. 56C). Дополнительно проводили гейтинг CD3+ T-клеток на основании экспрессии CD4 и CD8 для идентификации CD4+ T-клеток, CD8+ T-клеток и γδ T-клеток (CD3+CD4-CD8-) (фиг. 57A). Проводили гейтинг CD4+ и CD8+ Т-клеток в отношении экспрессии CD45RA, как проиллюстрировано соответственно на фиг. 57B-C. И наконец, определяли пролиферацию различных клеточных популяций была на основании процентной экспрессии Ki67, а данные приведены на фиг. 59A-D. NK- и CD8+ T-клетки более чувствительны, чем CD4+ T-клетки, к слитым белкам IL-15/Rα-Fc, и, как указано выше, пролиферативная активность варьируется в зависимости от конкретных сконструированных замен. На фиг. 59D приведена кратность изменения EC50 различных слитых белков IL-15/Rα-Fc относительно контрольного XENP20818. На фиг. 58А и В дополнительно проиллюстрирована активация лимфоцитов после обработки слитыми белками IL-15/Rα-Fc посредством гейтинга в отношении экспрессии CD69 и CD25 (маркеры активации Т-клеток) до и после инкубации МКПК с XENP22821.

В третьем эксперименте дополнительные варианты слитых белков IL-15/Rα-Fc инкубировали с человеческими МКПК в течение 3 суток при 37°С. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-SB600 (SK-3), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Cy7 ( HI100), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD25-PE (M-A251) и анти-Ki67-APC (Ki-67), чтобы пометить разные популяции клеток, и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Пролиферация CD8+ (CD45RA-) T-клеток, CD4+ (CD45RA-) T-клеток, γδ T-клеток и NK-клеток, на которую указывает экспрессия Ki67, проиллюстрирована на фиг. 60A-D.

В четвертом эксперименте человеческие МКПК инкубировали с дополнительными вариантами IL-15/Rα-Fc в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4 (SB600), анти-CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8), анти-CD16-eFluor450 (CB16), анти-CD25 -PE (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100) и анти-Ki67-APC (Ki67) и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Процент Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках и NK-клетках после обработки приведен на фиг. 61.

В пятом эксперименте варианты слитых белков IL-15/Rα-Fc инкубировали с человеческими МКПК в течение 3 суток при 37°С. После инкубации клетки окрашивали анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8α-BV510 (SK1), анти-CD8β-APC (2ST8.5H7), анти-CD16 -BV421 (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD56-BV605 (NCAM16.2) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67) и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Процент Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK-клетках приведен на фиг. 62A-E.

В шестом эксперименте варианты слитых белков IL-15/Rα-Fc инкубировали с человеческими МКПК в течение 3 суток при 37°С. После инкубации клетки окрашивали анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8α-BV510 (SK1), анти-CD8β-APC (SIDI8BEE), анти-CD16-BV421 (3G8), анти-CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Cy7 (HI100), анти-CD56-BV605 (NCAM16.2) и анти-Ki67-PE/Cy7 ( Ki-67) и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Процент Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK-клетках приведен на фиг. 63A-E.

Пример 3C. In vitro активность вариантных слитых белков scIL-15/Rα-Fc, сконструированных для снижения активности, с разными длинами линкеров между IL-15 и IL-15Rα

Слитые белки IL-15/Rα-Fc, имеющие некоторые из вышеописанных замен и дополнительно имеющие разной длины линкеры между IL-15 и IL-15Rα (приведенные в таблице 3), инкубировали с человеческими МКПК в указанных концентрациях в течение 3 суток при 37°С. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25. -PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67) и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Процент Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK (CD16 +) клетках приведен на фиг. 64A-D. Данные показывают, что слитый белок ncIL-15/Rα-Fc XENP21479 является наиболее эффективным индуктором пролиферации CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, NK-клеток (CD16+) и Т-клеток γδ. Каждый из слитых белков scIL-15/Rα-Fc был менее активен, чем XENP21479, в отношении индукции пролиферации, но отличия зависели как от длины линкера, так и от конкретных сконструированных замен.

Таблица 3

XENP Формат Линкер между IL-15 и IL-15Rα Мутация 24013 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₅ D61N 21014 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₅ N65D 24015 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₅ Q108E 24475 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₆ Q108E 24476 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₆ N4D/N65D 24478 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₇ Q108E 24479 scIL-15/Rα-Fc (GGGGS)₇ N4D/N65D 24481 scIL-15/Rα-Fc 30AК-линкер Q108E

Пример 3D. In vitro активность вариантных слитых белков IL-15/Rα-Fc, сконструированных для снижения активности в дополнительных форматах

Вариантные слитые белки IL-15/Rα-Fc в разных форматах (приведенных в таблице 4), инкубировали с человеческими МКПК в указанных концентрациях в течение 3 суток при 37°С. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-PE (OKT3), анти-CD4-FITC (RPA-T4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25. -PerCP/Cy5.5 (M-A251), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100) и анти-Ki67-PE/Cy7 (Ki-67) и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Процент Ki67 на CD8+ T-клетках, CD4+ T-клетках, γδ T-клетках и NK-клетках (CD16+) соответственно изображен на фиг. 65A-D. Как и выше, данные показывают, что слитый белок ncIL-15/Rα-Fc XENP21479 является наиболее эффективным индуктором пролиферации CD8+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, NK-клеток (CD16+) и Т-клеток γδ. Примечательно, что введение замены Q108E в формате ncIL-15/Rα-Fc (XENP24349) резко снижает его пролиферативную активность по сравнению с диким типом (XENP21479).

Таблица 4

XENP Формат Мутация 24351 Бивалентный IL-15/Rα-Fc N4D/N65D 21479 ncIL-15/Rα-Fc ДТ 23472 dsIL-15/Rα-Fc N65D 23557 IL-15/Rα-гетероFc N4D/N65D 24349 ncIL-15/Rα-Fc Q108E

Пример 3E. Фосфорилирование STAT5 вариантными слитыми белками IL-15/Rα-Fc

Транспрезентация IL-15 и IL-15Rα приводит к фосфорилированию STAT5 и последующей пролиферации NK- и T-клеток (CD4+ и CD8+). Соответственно, CD8+ и CD4+ Т-клетки анализировали в отношении фосфорилирования STAT5 после 15-минутной инкубации с указанными исследуемыми объектами IL-15/Rα-Fc. МКПУ окрашивали анти-CD4-BV421 (RPA-T4) и анти-CD8-A700 (SK1) в течение 30-45 минут при комнатной температуре. Клетки промывали и инкубировали с предварительно охлажденным (-20°С) 90% метанолом в течение 20-60 минут. После инкубации с метанолом клетки снова промывали и окрашивали анти-CD45RA-BV510 (HI100), анти-CD27-BV605 (L128), анти-CD25-PE (M-A251), анти-pSTAT5-Alexa647 (pY687) и анти-FoxP3-Alexa488 (259D), чтобы промаркировать различные клеточные популяции и фосфорилирование STAT5. На фиг. 66A-D проиллюстрирован отбор различных клеточных популяций после инкубации с XENP22821. Сначала проводили гейтинг лимфоцитов на основании БР и ПР (фиг. 66A). Затем проводили гейтинг лимфоцитов на основании экспрессии CD4 и CD8 для идентификации CD4+ и CD8+ Т-клеток (фиг. 66В). Затем проводили дополнительный гейтинг CD4+ и CD8+ Т-клеток на основании экспрессии CD45RA и CD27 для идентификации дополнительных субпопуляций, проиллюстрированных соответственно на фиг. 66C-D. И наконец, определяли фосфорилирование STAT5 в различных клеточных популяциях, а данные приведены на фиг. 67A-С. Индукция фосфорилирования STAT5 на Т-клетках происходила дозозависимым образом и также варьировалось в зависимости от конкретных сконструированных замен. На фиг. 67C приведена кратность изменения EC50 для фосфорилирования STAT5 для вариантных слитых белков IL-15/Rα-Fc относительно контроля.

Пример 3F. ФК вариантных слитых белков IL-15/Rα-Fc, сконструированных для снижения активности

Чтобы выяснить, имеют ли слитые белки IL-15/Rα-Fc, сконструированные для снижения активности, улучшенные показатели времени полужизни и ФК, мы изучали эти варианты в ФК-исследовании на мышах линии C57BL/6. Две группы мышей (по 5 мышей на исследуемый препарат на группу) дозировали 0,1 мг/кг указанных исследуемых препаратов посредством ВВ-ТВ на 0 сутки. Сыворотку собирали через 60 минут после дозирования, а затем на 2, 4 и 7 сутки в случае группы 1 и 1, 3 и 8 сутки в случае группы 2. Уровни слитых белков IL-15/Rα-Fc определяли, используя анти-IL-15 и анти-IL-15Rα антитела, в сэндвич-варианте ELISA. Результаты проиллюстрированы на фиг. 68. На фиг. 69 приведена корреляция между активностью и временем полужизни исследуемых препаратов.

Как и прогнозировалось, варианты со сниженной активностью демонстрировали значительно большее время полужизни. Примечательно, что время полужизни было улучшено почти до 9 суток (смотрите XENP22821 и XENP22822) по сравнению с 0,5 суток для контрольного XENP20818 дикого типа.

Пример 3G. Вариантные слитые белки IL-15/Rα-Fc повышают приживление и активность заболевания у мышей NSG с трансплантированными человеческими МКПК

Вариантные слитые белки IL-15/Rα-Fc оценивали в модели РТПХ, осуществляемой на самках иммунодефицитных мышей линии NSG, как в целом описано в примере 1F.

В первом исследовании 10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на 0 сутки с последующим дозированием слитых белков IL-15/Rα-Fc в указанных концентрациях на 1 сутки. Пролиферация CD45+ коррелирует со снижением массы тела (как проиллюстрировано на фиг. 70), и поэтому измерения для клеток CD45+ проводили на 4 и 8 сутки в качестве показателя активности заболевания в этом исследовании (фиг. 71A-B). Данные демонстрируют, что каждый из слитых белков IL-15/Rα-Fc усиливает пролиферацию CD45+ клеток у мышей линии NSG с привитыми человеческими МКПК по сравнению с контролем (ФСБ).

В другом исследовании 10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на 0 сутки с последующим дозированием слитыми белками IL-15/Rα-Fc в указанных концентрациях на 1 сутки. Уровни IFNγ и число человеческих NK-клеток, CD45+ лимфоцитов, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток измеряли на 4, 7 и 11 сутки (фиг. 72-76). Данные показывают, что вариантные слитые белки IL-15/Rα-Fc повышают секрецию IFNγ и пролиферацию человеческих NK-клеток и Т-клеток дозозависимым образом. Примечательно, что наблюдаемая активность коррелирует с активностью in vitro каждого варианта.

В другом исследовании 10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на -8 сутки с последующим дозированием указанных исследуемых образцов в указанных концентрациях на 0 сутки. Уровни IFNγ и число человеческих NK-клеток, CD45+ лимфоцитов, CD8+ T-клеток и CD4+ T-клеток измеряли на 4, 7 и 11 сутки. На фиг. 77 проиллюстрированы уровни IFNγ в сыворотке мышей на 4, 7 и 11 сутки. На фиг. 78A-C соответственно проиллюстрировано число CD8+ Т-клеток на 4, 7 и 11 сутки. На фиг. 79A-C соответственно проиллюстрировано число CD4+ Т-клеток на 4, 7 и 11 сутки. На фиг. 80A-C соответственно проиллюстрировано число CD45+ Т-клеток на 4, 7 и 11 сутки. Также измеряли массу тела мышей на 4, 7 и 11 сутки и выражали в виде процента от исходной массы тела, как проиллюстрировано на фиг. 81.

Пример 3H. Слитые белки IL-15/Rα-Fc активны в организме яванских макаков

Яванским макакам вводили одну внутривенную (в/в) дозу XENP20818 (n = 3), XENP22819 (n = 1), XENP22821 (n = 3), XENP22822 (n = 3), XENP22834 (n = 3) и XENP23343 (n = 3). Число лимфоцитов (фиг. 82, 84, 86, 88, 90 и 92) и пролиферацию (фиг. 83, 85, 87, 89, 91 и 93) оценивали в динамике по времени. Данные демонстрируют наличие значительных изменений в числе CD56+ NK-клеток (фиг. 86A), CD16+ NK-клеток (фиг. 86B), γδ T-клеток (фиг. 86C), CD8+ T-клеток (CD45RA+) (фиг. 86D), CD8+ T-клеток (CD45RA-) (фиг. 86E) и CD4+ T-клеток (фиг. 86F) после обработки XENP22821 с достижением пика на 6 сутки с последующим восстановлением и возвращением к норме. И наконец, на фигурах проиллюстрирована существенная экспрессия Ki67 на CD56+ NK-клетках (фиг. 87A), CD16+ NK-клетках (фиг. 87B), CD8+ T-клетках (CD45RA+) (фиг. 87C), CD8+ T-клетках (CD45RA-) (фиг. 87D) и CD4+ T-клетках (фиг. 87E), что указывает на наличие пролиферативной активности после обработки XENP22821. Подобную пролиферативную активность наблюдали после обработки XENP20818, XENP22819, XENP22822 и XENP23343, что демонстрирует, что большинство слитых белков IL-15/Rα-Fc согласно изобретению активны в организме яванских макаков.

Пример 4. Слитые белки IL-15/Rα-Fc, сконструированные с Xtend Fc

Варианты IL-15/Rα-Fc, сконструированные для снижения активности, как описано выше, дополнительно конструировали с Xtend Fc (что далее называется слитыми белками «IL-15/Rα-XtendFc»), чтобы дополнительно продлить время полужизни, путем субклонирования плазмид, кодирующих IL-15 и/или IL-15Rα(sushi), в экспрессионный вектор pTT5, содержащий партнеров по Fc-слиянию с заменами M428L/N434S (см. фиг. 8, остов 11). Последовательности для иллюстративных IL-15/Rα-XtendFc проиллюстрированы на фиг. 94-96 (также см. таблицу 5).

Таблица 5

XENP Формат Мутация 24306 IL-15/Rα-гетероFc D30N/E64Q/N65D 24341 IL-15/Rα-гетероFc N1D/N65D 24301 IL-15/Rα-гетероFc N4D/N65D 24383 ncIL-15/Rα-Fc Q108E 24346 Бивалентный IL-15/Rα-Fc Q108E

Пример 4A. In vitro активность дополнительных вариантов IL-15/Rα-Fc

Человеческие МКПК инкубировали с вариантами IL-15/Rα-XtendFc в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-FITC (OKT3), анти-CD4-PE (RPA-T4), анти-CD8-eFluor450 (SK-1), анти-CD45RA-PE/Cy7 (HI100), анти-CD16-PerCP/Cy5.5 (3G8), анти-CD25-APC/Fire750 (M-A251) и анти-Ki67-APC (Ki-67), чтобы пометить разные популяции клеток, и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Пролиферация CD8+ T-клеток, CD4+ T-клеток и NK-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, проиллюстрирована на фиг. 97.

Поскольку варианты Xtend были отобраны для исследования активности у яванских макаков, изучали их способность вызывать пролиферацию T-клеток яванских макаков. МКПК яванских макаков инкубировали с отобранными исследуемыми объектами в указанных концентрациях в течение 3 суток. После инкубации МКПК окрашивали анти-CD3-FITC (SP34), анти-CD4-PE/Cy7 (OKT4), анти-CD8-APC (RPA-T8), анти-CD45RA-APC/Fire750 (HI100), анти-CD16-BV605 (3G8), анти-CD25-BV421 (M-A251) и анти-Ki67-PerCP/Cy5.5 (Ki-67), чтобы пометить разные популяции клеток, и анализировали методом FACS, как в целом описано в примере 1D. Пролиферация CD8+ T-клеток, CD4+ T-клеток и NK-клеток после обработки, на которую указывает экспрессия Ki67, проиллюстрирована на фиг. 98.

Пример 4B. In vivo активность вариантов IL-15/Rα-XtendFc в модели РТПХ

10 миллионов человеческих МКПК трансплантировали мышам линии NSG посредством ВВ-OSP на -7 сутки с последующим дозированием указанных исследуемых образцов (0,3 мг/кг) на 0 сутки. Цельную кровь брали на 4 и 7 сутки и умерщвляли мышей на 5-8 или 11 сутки, чтобы получить селезенки и измерить число CD4+ T-клеток, CD8+ T-клеток и CD45+ клеток методом FACS. На фиг. 99A-C соответственно проиллюстрировано число CD4+ Т-клеток на 4 и 7 сутки в цельной крови и на 8 сутки в селезенке. На фиг. 100A-C соответственно проиллюстрировано число CD8+ Т-клеток на 4 и 7 сутки в цельной крови и на 8 сутки в селезенке. На фиг. 101A-C соответственно проиллюстрировано число CD4+ Т-клеток на 4 и 7 сутки в цельной крови и на 8 сутки в селезенке. Также измеряли массу тела мышей на -8, -2, 1, 5, 8 и 11, как проиллюстрировано на фиг. 102A-102F. Каждая точка представляет одну мышь линии NSG.

Пример 4C. In vivo активность вариантных слитых белков IL-15/Rα-XtendFc в организме яванских макаков

Обезьянам (n = 3) вводили однократную внутривенную (в/в) дозу указанных исследуемых объектов (сутки 1) и ежедневно брали кровь. Число CD8+ T-клеток, CD4+ T-клеток и NK-клеток в крови оценивали в динамике по времени, как проиллюстрировано соответственно на фиг. 103A-C. Каждая точка соответствует усредненным данным по трем яванским макакам. Данные показывают, что каждый из вариантов был активен в отношении индукции пролиферации иммунных клеток, что указывает на то, что слитые белки IL-15/Rα-Fc согласно изобретению могли бы оказаться полезными в качестве терапевтических средств против рака у людей.

Описанные выше примеры приведены для того, чтобы предоставить специалистам в данной области техники полное раскрытие и описание того, как создавать и применять варианты реализации композиций, систем и способов согласно изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы считают своим изобретением. Предполагается, что модификации вышеописанных схем осуществления изобретения, очевидные для специалистов в данной области техники, входят в объем нижеприведенной формулы изобретения. Все патенты и публикации, упоминаемые в описании, отражают уровень компетенции специалистов в области техники, к которой относится изобретение. Все ссылки, цитируемые в этом описании, включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая ссылка была отдельно и в полном объеме включена посредством ссылки.

Все заголовки и наименования разделов используются исключительно в целях ясности и в справочных целях и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие. Например, специалисты в данной области техники оценят пользу комбинирования различных аспектов из разных заголовков и разделов, в зависимости от ситуации, в соответствии с сущностью и объемом описанного в данном документе изобретения.

Все ссылки, цитируемые в данном документе, в полном объеме и во всех целях включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы было указано, что каждая отдельная публикация, патент или заявка на патент специально и индивидуально включены посредством ссылки в полном объеме и во всех целях.

Как очевидно для специалистов в данной области техники, можно осуществлять большое количество модификаций и вариаций этой заявки, не отступая от ее сущности и объема. Конкретные варианты реализации и примеры, описанные в данном документе, предложены исключительно в качестве примера, а сама заявка ограничена только в контексте прилагаемой формулы изобретения наряду с полным объемом эквивалентов, на которые имеет право данная формула изобретения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> XENCOR, INC.

<120> ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ FС-СЛИТЫЕ БЕЛКИ IL15/IL15R-АЛЬФА

<130> 067461-5201-WO

<140> PCT/US2017/056829

<141> 2017-10-16

<150> 62/477,926

<151> 2017-03-28

<150> 62/443,465

<151> 2017-01-06

<150> 62/416,087

<151> 2016-11-01

<150> 62/408,655

<151> 2016-10-14

<160> 1204

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 162

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr

1 5 10 15

Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His

20 25 30

Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala

35 40 45

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

50 55 60

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

65 70 75 80

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

85 90 95

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

100 105 110

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

115 120 125

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

130 135 140

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

145 150 155 160

Thr Ser

<210> 2

<211> 114

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 2

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 3

<211> 267

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Ala Pro Arg Arg Ala Arg Gly Cys Arg Thr Leu Gly Leu Pro Ala

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Pro Pro Ala Thr Arg Gly Ile Thr

20 25 30

Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser

35 40 45

Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys

50 55 60

Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala

65 70 75 80

Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp

85 90 95

Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr

100 105 110

Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu

115 120 125

Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala

130 135 140

Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr

145 150 155 160

Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser

165 170 175

Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln

180 185 190

Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile

195 200 205

Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu

210 215 220

Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu

225 230 235 240

Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg

245 250 255

Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu

260 265

<210> 4

<211> 65

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 4

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 5

<211> 162

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 5

Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr

1 5 10 15

Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His

20 25 30

Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala

35 40 45

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

50 55 60

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

65 70 75 80

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

85 90 95

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

100 105 110

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

115 120 125

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

130 135 140

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

145 150 155 160

Thr Ser

<210> 6

<211> 114

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 6

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 7

<211> 267

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 7

Met Ala Pro Arg Arg Ala Arg Gly Cys Arg Thr Leu Gly Leu Pro Ala

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Pro Pro Ala Thr Arg Gly Ile Thr

20 25 30

Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser

35 40 45

Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys

50 55 60

Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala

65 70 75 80

Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp

85 90 95

Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr

100 105 110

Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu

115 120 125

Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala

130 135 140

Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr

145 150 155 160

Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser

165 170 175

Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln

180 185 190

Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile

195 200 205

Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu

210 215 220

Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu

225 230 235 240

Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg

245 250 255

Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu

260 265

<210> 8

<211> 175

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 8

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val

65 70 75 80

Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly

85 90 95

Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr

100 105 110

Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro

115 120 125

Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr

130 135 140

Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser

145 150 155 160

His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr

165 170 175

<210> 9

<211> 65

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 9

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 10

<211> 551

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 10

Met Ala Ala Pro Ala Leu Ser Trp Arg Leu Pro Leu Leu Ile Leu Leu

1 5 10 15

Leu Pro Leu Ala Thr Ser Trp Ala Ser Ala Ala Val Asn Gly Thr Ser

20 25 30

Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala Asn Ile Ser Cys Val Trp

35 40 45

Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser Cys Gln Val His Ala Trp

50 55 60

Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys Glu Leu Leu Pro Val Ser

65 70 75 80

Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu Gly Ala Pro Asp Ser Gln

85 90 95

Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu Arg Val Leu Cys Arg Glu

100 105 110

Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln Asp Phe Lys Pro Phe Glu

115 120 125

Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu Gln Val Val His Val Glu

130 135 140

Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile Ser Gln Ala Ser His Tyr

145 150 155 160

Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg Thr Leu Ser Pro Gly His

165 170 175

Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu Lys Gln Lys Gln Glu Trp

180 185 190

Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr Gln Tyr Glu Phe Gln Val

195 200 205

Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr Thr Trp Ser Pro Trp Ser

210 215 220

Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala Ala Leu Gly Lys Asp Thr

225 230 235 240

Ile Pro Trp Leu Gly His Leu Leu Val Gly Leu Ser Gly Ala Phe Gly

245 250 255

Phe Ile Ile Leu Val Tyr Leu Leu Ile Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro

260 265 270

Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe

275 280 285

Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu

290 295 300

Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro

305 310 315 320

Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu

325 330 335

Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn

340 345 350

His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His

355 360 365

Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr

370 375 380

Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro

385 390 395 400

Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp

405 410 415

Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro

420 425 430

Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser

435 440 445

Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro

450 455 460

Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro

465 470 475 480

Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala

485 490 495

Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro

500 505 510

Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg

515 520 525

Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly

530 535 540

Gln Asp Pro Thr His Leu Val

545 550

<210> 11

<211> 214

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 11

Ala Val Asn Gly Thr Ser Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala

1 5 10 15

Asn Ile Ser Cys Val Trp Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser

20 25 30

Cys Gln Val His Ala Trp Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys

35 40 45

Glu Leu Leu Pro Val Ser Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu

50 55 60

Gly Ala Pro Asp Ser Gln Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu

65 70 75 80

Arg Val Leu Cys Arg Glu Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln

85 90 95

Asp Phe Lys Pro Phe Glu Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu

100 105 110

Gln Val Val His Val Glu Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile

115 120 125

Ser Gln Ala Ser His Tyr Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg

130 135 140

Thr Leu Ser Pro Gly His Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu

145 150 155 160

Lys Gln Lys Gln Glu Trp Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr

165 170 175

Gln Tyr Glu Phe Gln Val Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr

180 185 190

Thr Trp Ser Pro Trp Ser Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala

195 200 205

Ala Leu Gly Lys Asp Thr

210

<210> 12

<211> 369

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 12

Met Leu Lys Pro Ser Leu Pro Phe Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Leu

1 5 10 15

Pro Leu Leu Gly Val Gly Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly

20 25 30

Asn Glu Asp Thr Thr Ala Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp

35 40 45

Ser Leu Ser Val Ser Thr Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val

50 55 60

Phe Asn Val Glu Tyr Met Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro

65 70 75 80

Gln Pro Thr Asn Leu Thr Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn

85 90 95

Asp Lys Val Gln Lys Cys Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr

100 105 110

Ser Gly Cys Gln Leu Gln Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe

115 120 125

Val Val Gln Leu Gln Asp Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln

130 135 140

Met Leu Lys Leu Gln Asn Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu

145 150 155 160

Thr Leu His Lys Leu Ser Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn

165 170 175

Arg Phe Leu Asn His Cys Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp

180 185 190

Trp Asp His Ser Trp Thr Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe

195 200 205

Ser Leu Pro Ser Val Asp Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg

210 215 220

Ser Arg Phe Asn Pro Leu Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp

225 230 235 240

Ser His Pro Ile His Trp Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe

245 250 255

Leu Phe Ala Leu Glu Ala Val Val Ile Ser Val Gly Ser Met Gly Leu

260 265 270

Ile Ile Ser Leu Leu Cys Val Tyr Phe Trp Leu Glu Arg Thr Met Pro

275 280 285

Arg Ile Pro Thr Leu Lys Asn Leu Glu Asp Leu Val Thr Glu Tyr His

290 295 300

Gly Asn Phe Ser Ala Trp Ser Gly Val Ser Lys Gly Leu Ala Glu Ser

305 310 315 320

Leu Gln Pro Asp Tyr Ser Glu Arg Leu Cys Leu Val Ser Glu Ile Pro

325 330 335

Pro Lys Gly Gly Ala Leu Gly Glu Gly Pro Gly Ala Ser Pro Cys Asn

340 345 350

Gln His Ser Pro Tyr Trp Ala Pro Pro Cys Tyr Thr Leu Lys Pro Glu

355 360 365

Thr

<210> 13

<211> 240

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 13

Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly Asn Glu Asp Thr Thr Ala

1 5 10 15

Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp Ser Leu Ser Val Ser Thr

20 25 30

Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val Phe Asn Val Glu Tyr Met

35 40 45

Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro Gln Pro Thr Asn Leu Thr

50 55 60

Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn Asp Lys Val Gln Lys Cys

65 70 75 80

Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr Ser Gly Cys Gln Leu Gln

85 90 95

Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe Val Val Gln Leu Gln Asp

100 105 110

Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln Met Leu Lys Leu Gln Asn

115 120 125

Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu Thr Leu His Lys Leu Ser

130 135 140

Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn Arg Phe Leu Asn His Cys

145 150 155 160

Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp Trp Asp His Ser Trp Thr

165 170 175

Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe Ser Leu Pro Ser Val Asp

180 185 190

Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg Ser Arg Phe Asn Pro Leu

195 200 205

Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp Ser His Pro Ile His Trp

210 215 220

Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe Leu Phe Ala Leu Glu Ala

225 230 235 240

<210> 14

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 14

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 15

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 15

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 16

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 16

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 17

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 17

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 18

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 18

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25

<210> 19

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 19

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25 30

<210> 20

<211> 35

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 20

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ser

35

<210> 21

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 21

Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

20 25 30

<210> 22

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 22

Gly Lys Pro Gly Ser

1 5

<210> 23

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 23

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

1 5 10 15

Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser

20 25

<210> 24

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 24

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

1 5 10 15

Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser

20 25 30

<210> 25

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 25

Gly Gly Gly Glu Ser

1 5

<210> 26

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 26

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 27

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 27

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 28

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 28

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 29

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 29

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 30

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 30

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 31

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 31

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Glu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 32

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 32

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Lys Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 33

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 33

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Glu

130 135 140

Asn Glu Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Glu Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 34

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 34

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Gln Leu Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 35

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 35

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 36

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 36

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 37

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 37

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 38

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 38

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 39

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 39

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 40

<211> 229

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 40

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 41

<211> 229

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 41

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Glu Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 42

<211> 228

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 42

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

65 70 75 80

Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 43

<211> 228

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 43

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser Thr

65 70 75 80

Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 44

<211> 228

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 44

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

65 70 75 80

Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 45

<211> 228

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 45

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Ser Thr

65 70 75 80

Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 46

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 46

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 47

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 47

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 48

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 48

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 49

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 49

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 50

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 1

<400> 50

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 51

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15/R-альфа-Fc, мономер 2

<400> 51

Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 52

<211> 350

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP20818, цепь 1 - человеческий_IL15_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_

pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (15902)

<400> 52

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

115 120 125

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val

260 265 270

Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 53

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP20818, человеческий IL15

<400> 53

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 54

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP20818

<400> 54

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 55

<211> 301

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP20818, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)_(GGGGS)1_

Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (15908)

<400> 55

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

85 90 95

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

100 105 110

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys

115 120 125

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

130 135 140

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

145 150 155 160

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

165 170 175

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

180 185 190

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

195 200 205

Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys

210 215 220

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

225 230 235 240

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

245 250 255

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

260 265 270

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

275 280 285

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 56

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP20818, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 56

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 57

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP20818

<400> 57

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 58

<211> 345

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21475, цепь 1 - человеческий_IL15-Fc(216)_IgG1_pI(-)_

изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (16479)

<400> 58

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

130 135 140

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

145 150 155 160

Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

165 170 175

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

180 185 190

Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

195 200 205

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

210 215 220

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

225 230 235 240

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

245 250 255

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro

260 265 270

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn

275 280 285

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

290 295 300

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val

305 310 315 320

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

325 330 335

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 59

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21475, человеческий IL15

<400> 59

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 60

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP21475

<400> 60

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 61

<211> 296

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21475, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)-Fc(216)_

IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (16481)

<400> 61

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

65 70 75 80

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

85 90 95

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

100 105 110

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

115 120 125

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

130 135 140

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

145 150 155 160

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

165 170 175

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr

195 200 205

Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

210 215 220

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

245 250 255

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

260 265 270

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 62

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21475, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 62

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 63

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP21475

<400> 63

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 64

<211> 440

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21478, цепь 1 - человеческий_IL15R-альфа(sushi)_(GGGGS)6-

человеческий_

IL15-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D

/K370S (16478)

<400> 64

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

65 70 75 80

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn

85 90 95

Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln

100 105 110

Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro

115 120 125

Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val

130 135 140

Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn

145 150 155 160

Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr

165 170 175

Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys

180 185 190

Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr

195 200 205

Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu

275 280 285

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

305 310 315 320

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 65

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21478, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 65

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 66

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21478, человеческий IL15

<400> 66

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 67

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP21478

<400> 67

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 68

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21478, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_

/S267K/S364K/E357Q (8924)

<400> 68

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 69

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21479, цепь 1 - человеческий_IL15_без_тэга (16484)

<400> 69

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 70

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21479, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_

A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (8793)

<400> 70

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 71

<211> 296

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21479, цепь 3 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)-Fc(216)_

IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (16481)

<400> 71

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

65 70 75 80

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

85 90 95

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

100 105 110

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

115 120 125

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

130 135 140

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

145 150 155 160

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

165 170 175

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr

195 200 205

Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

210 215 220

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

245 250 255

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

260 265 270

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 72

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP21479, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 72

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 73

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP21479

<400> 73

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 74

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022366, цепь 1 - человеческий_IL15_без_тэга (16484)

<400> 74

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 75

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022366, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_

A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (8793)

<400> 75

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 76

<211> 301

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022366, цепь 3 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)_(GGGGS)1_

Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (15908)

<400> 76

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

85 90 95

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

100 105 110

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys

115 120 125

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

130 135 140

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

145 150 155 160

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

165 170 175

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

180 185 190

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

195 200 205

Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys

210 215 220

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

225 230 235 240

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

245 250 255

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

260 265 270

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

275 280 285

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 77

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022366, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 77

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 78

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022366

<400> 78

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 79

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP024348, цепь 1 - IL15 ДТ

<400> 79

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 80

<211> 296

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP024348, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 80

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

65 70 75 80

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

85 90 95

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

100 105 110

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

115 120 125

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu

130 135 140

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

145 150 155 160

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

165 170 175

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

195 200 205

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser

210 215 220

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

245 250 255

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe

260 265 270

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 81

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP024348, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 81

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 82

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP024348

<400> 82

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 83

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP024348, цепь 3 - пустой_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_

/S267K/S364K/E357Q

<400> 83

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 84

<211> 296

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP021978, цепь 1 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi)-Fc(216)_

IgG1_C220S/PVA_/S267K (17023)

<400> 84

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

65 70 75 80

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

85 90 95

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

100 105 110

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

115 120 125

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

130 135 140

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

145 150 155 160

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

165 170 175

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

195 200 205

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

210 215 220

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

245 250 255

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

260 265 270

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 85

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP021978, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 85

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 86

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP021978

<400> 86

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 87

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP021978, цепь 2 - человеческий_IL15_без_тэга (16484)

<400> 87

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 88

<211> 415

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> человеческий_IL15R-альфа(sushi)(одноцепочечный)-человеческий_

IL15_Fc(216)_IgG1_

C220S/PVA_/S267K

<400> 88

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys

65 70 75 80

Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

85 90 95

Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys

100 105 110

Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser

115 120 125

Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu

130 135 140

Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu

145 150 155 160

Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile

165 170 175

Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr

180 185 190

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val

195 200 205

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

210 215 220

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu

225 230 235 240

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

245 250 255

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

260 265 270

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

275 280 285

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

290 295 300

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

305 310 315 320

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

325 330 335

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

340 345 350

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

355 360 365

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

370 375 380

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

385 390 395 400

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405 410 415

<210> 89

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> человеческий_IL15R-альфа(sushi)(одноцепочечный)-человеческий_

IL15_Fc(216)_IgG1_

C220S/PVA_/S267K, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 89

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 90

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> человеческий_IL15R-альфа(sushi)(одноцепочечный)-человеческий_

IL15_Fc(216)_IgG1_

C220S/PVA_/S267K, человеческий IL15

<400> 90

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 91

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь человеческий_IL15R-альфа(sushi)(одноцепочечный)-

человеческий_IL15_

Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K

<400> 91

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 92

<211> 306

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022637, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_

A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi)

(17603)

<400> 92

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

225 230 235 240

Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

245 250 255

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

260 265 270

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

275 280 285

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

290 295 300

Ile Arg

305

<210> 93

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022637

<400> 93

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 94

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022637 IL15R-альфа(Sushi)

<400> 94

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 95

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022637, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_ISO(+RR)_C220S/PVA_

/S267K/S364K/E357Q (8927)

<400> 95

Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 96

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022637, цепь 3 - человеческий_IL15_без_тэга (16484)

<400> 96

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 97

<211> 425

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223>, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_

/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi)_IL15(одноцепочечный)

<400> 97

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

225 230 235 240

Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

245 250 255

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

260 265 270

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

275 280 285

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

290 295 300

Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu

305 310 315 320

Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu

325 330 335

Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys

340 345 350

Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala

355 360 365

Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser

370 375 380

Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu

385 390 395 400

Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His

405 410 415

Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

420 425

<210> 98

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi)_

IL15(одноцепочечный)

<400> 98

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 99

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223>, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_

/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi)_IL15(одноцепочечный)

IL15R-альфа(Sushi)

<400> 99

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 100

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223>, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_

/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi)_IL15(одноцепочечный)

IL15

<400> 100

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 101

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223>, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_ISO(+RR)_C220S/PVA_

/S267K/S364K/E357Q (8927)

<400> 101

Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 102

<211> 66

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96)

<400> 102

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp

65

<210> 103

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96/P97)

<400> 103

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro

65

<210> 104

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96/P97/A98)

<400> 104

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Ala

65

<210> 105

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(E87C)

<400> 105

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 106

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(V49C)

<400> 106

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Cys Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 107

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(L52C)

<400> 107

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 108

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(E89C)

<400> 108

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Cys Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 109

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(Q48C)

<400> 109

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Cys

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 110

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(E53C)

<400> 110

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Cys Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 111

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(C42S)

<400> 111

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Ser Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 112

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15(L45C)

<400> 112

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Cys Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 113

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96/C97)

<400> 113

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys

65

<210> 114

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96/P97/C98)

<400> 114

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys

65

<210> 115

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-D96/C97/A98)

<400> 115

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 116

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-S40C)

<400> 116

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 117

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-K34C)

<400> 117

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Cys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 118

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-G38C)

<400> 118

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Cys Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 119

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-L42C)

<400> 119

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Cys Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 120

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> IL-15R-альфа(sushi-A37C)

<400> 120

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Cys Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 121

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP021996, цепь 1 - человеческий_IL15_без_тэга (16484)

<400> 121

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 122

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP021996, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi) (17033)

<400> 122

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 123

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022004, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 123

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 124

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022004, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97)

(17051)

<400> 124

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys

65

<210> 125

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022005, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 125

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 126

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022005, цепь 2 - человеческий_

IL15R-альфа(Sushi-D96/P97/C98) (17052)

<400> 126

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys

65

<210> 127

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022006, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 127

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 128

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022006, цепь 2 - человеческий_

IL15R-альфа(Sushi-D96/C97/A98) (17053)

<400> 128

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 129

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022008, цепь 1 - человеческий_IL15_L52C_без_тэга (17072)

<400> 129

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 130

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022008, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-S40C) (17057)

<400> 130

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 131

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022494, цепь 1 - человеческий_IL15_L45C_без_тэга (17069)

<400> 131

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Cys Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 132

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022494, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-A37C) (17055)

<400> 132

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Cys Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 133

<211> 209

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022049 человеческий_IL15R-альфа(sushi)_(GGGGS)6-человеческий_

IL15-sc

<400> 133

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

65 70 75 80

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn

85 90 95

Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln

100 105 110

Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro

115 120 125

Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val

130 135 140

Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn

145 150 155 160

Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr

165 170 175

Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys

180 185 190

Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr

195 200 205

Ser

<210> 134

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022049, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 134

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 135

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022049, человеческий IL15

<400> 135

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 136

<211> 350

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022013, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_(GGGGS)1_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 136

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

115 120 125

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val

260 265 270

Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 137

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022013, человеческий IL15

<400> 137

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 138

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022013

<400> 138

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 139

<211> 303

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022013, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q

<400> 139

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr

65 70 75 80

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val

85 90 95

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

100 105 110

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu

115 120 125

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

130 135 140

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

145 150 155 160

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

165 170 175

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

180 185 190

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

195 200 205

Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu

210 215 220

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

225 230 235 240

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

245 250 255

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

260 265 270

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

275 280 285

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 140

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022013, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 140

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys

65

<210> 141

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022013

<400> 141

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 142

<211> 350

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022014, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_(GGGGS)1_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 142

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

115 120 125

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val

260 265 270

Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 143

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022014, человеческий IL15

<400> 143

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 144

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022014

<400> 144

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 145

<211> 304

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022014, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/P97/C98)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q

<400> 145

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys

65 70 75 80

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser

85 90 95

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

100 105 110

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro

115 120 125

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

130 135 140

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

145 150 155 160

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

165 170 175

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

180 185 190

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

195 200 205

Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys

210 215 220

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

225 230 235 240

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

245 250 255

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

260 265 270

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

275 280 285

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 146

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022014, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 146

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys

65

<210> 147

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022014

<400> 147

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 148

<211> 350

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022015, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_(GGGGS)1_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 148

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

115 120 125

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val

260 265 270

Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 149

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022015, человеческий IL15

<400> 149

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 150

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022015

<400> 150

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 151

<211> 304

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022015, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97/A98)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q

<400> 151

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys

65 70 75 80

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser

85 90 95

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

100 105 110

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro

115 120 125

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

130 135 140

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

145 150 155 160

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

165 170 175

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

180 185 190

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

195 200 205

Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys

210 215 220

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

225 230 235 240

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

245 250 255

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

260 265 270

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

275 280 285

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 152

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022015, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 152

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 153

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022015

<400> 153

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 154

<211> 350

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022017, цепь 1 - человеческий_IL15_L52C_(GGGGS)1-_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 154

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

115 120 125

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val

260 265 270

Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 155

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022017, человеческий IL15

<400> 155

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 156

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022017

<400> 156

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 157

<211> 301

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022017, цепь 2 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-S40C)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q

<400> 157

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

85 90 95

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

100 105 110

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys

115 120 125

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

130 135 140

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

145 150 155 160

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

165 170 175

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

180 185 190

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

195 200 205

Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys

210 215 220

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

225 230 235 240

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

245 250 255

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

260 265 270

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

275 280 285

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 158

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022017, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 158

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 159

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022017

<400> 159

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 160

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022358, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 160

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 161

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022358, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (8793)

<400> 161

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 162

<211> 304

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022358, цепь 3 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/P97/C98)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (17039)

<400> 162

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys

65 70 75 80

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser

85 90 95

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

100 105 110

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro

115 120 125

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

130 135 140

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

145 150 155 160

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

165 170 175

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

180 185 190

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

195 200 205

Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys

210 215 220

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

225 230 235 240

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

245 250 255

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

260 265 270

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

275 280 285

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 163

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022358, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 163

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Pro Cys

65

<210> 164

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022358

<400> 164

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 165

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022359, цепь 1 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 165

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 166

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022359, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (8793)

<400> 166

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 167

<211> 304

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022359, цепь 3 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97/A98)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (17040)

<400> 167

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys

65 70 75 80

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser

85 90 95

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

100 105 110

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro

115 120 125

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

130 135 140

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

145 150 155 160

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

165 170 175

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

180 185 190

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

195 200 205

Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys

210 215 220

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

225 230 235 240

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

245 250 255

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

260 265 270

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

275 280 285

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 168

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022359, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 168

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 169

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022359

<400> 169

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 170

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022361, цепь 1 - человеческий_IL15_L52C_без_тэга (17072)

<400> 170

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 171

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022361, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (8793)

<400> 171

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 172

<211> 301

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022361, цепь 3 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-S40C)_

(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (17044)

<400> 172

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

85 90 95

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

100 105 110

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys

115 120 125

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

130 135 140

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

145 150 155 160

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

165 170 175

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

180 185 190

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

195 200 205

Arg Glu Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys

210 215 220

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

225 230 235 240

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

245 250 255

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

260 265 270

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

275 280 285

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295 300

<210> 173

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022361, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 173

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 174

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022361

<400> 174

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 175

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022684, цепь 1 - IL15_E87C

<400> 175

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 176

<211> 299

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022684, цепь 2 - IL15R-альфа(Sushi-D96/C97/A98)_Fc(216)_

IgG1_pI(-)_изостерический_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 176

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

65 70 75 80

Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

85 90 95

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

100 105 110

Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

115 120 125

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

130 135 140

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

145 150 155 160

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

165 170 175

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

180 185 190

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

195 200 205

Gln Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

210 215 220

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

245 250 255

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

260 265 270

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

275 280 285

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 177

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022684 IL15R-альфа(Sushi)

<400> 177

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 178

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022684

<400> 178

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 179

<211> 298

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022634, цепь 1 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97)-

Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K (17581)

<400> 179

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

65 70 75 80

Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

85 90 95

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

100 105 110

Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

115 120 125

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

130 135 140

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

145 150 155 160

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

165 170 175

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

180 185 190

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

195 200 205

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

210 215 220

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

225 230 235 240

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

245 250 255

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

260 265 270

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

275 280 285

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 180

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022634, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 180

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys

65

<210> 181

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022634

<400> 181

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 182

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022634, цепь 2 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 182

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 183

<211> 299

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022635, цепь 1 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-D96/C97/A98)

- Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K (17582)

<400> 183

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

65 70 75 80

Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

85 90 95

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

100 105 110

Cys Val Val Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

115 120 125

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

130 135 140

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

145 150 155 160

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

165 170 175

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

180 185 190

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

195 200 205

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

210 215 220

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

245 250 255

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

260 265 270

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

275 280 285

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 184

<211> 68

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022635, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 184

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys Ala

65

<210> 185

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022635

<400> 185

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 186

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022635, цепь 2 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 186

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 187

<211> 296

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022636, цепь 1 - человеческий_IL15R-альфа(Sushi-S40C)-Fc(216)_

IgG1_C220S/PVA_/S267K (17583)

<400> 187

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

65 70 75 80

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

85 90 95

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

100 105 110

Val Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

115 120 125

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

130 135 140

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

145 150 155 160

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

165 170 175

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

180 185 190

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

195 200 205

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

210 215 220

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

245 250 255

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

260 265 270

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

290 295

<210> 188

<211> 65

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022636, человеческий IL15R-альфа(Sushi)

<400> 188

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 189

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022636

<400> 189

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 190

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022636, цепь 2 - человеческий_IL15_L52C_без_тэга (17072)

<400> 190

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 191

<211> 308

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022639, цепь 1 - пустой-Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S_(GGGGS)2_IL15R-альфа(Sushi-D96/

C97) (17605)

<400> 191

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

225 230 235 240

Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

245 250 255

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

260 265 270

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

275 280 285

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

290 295 300

Ile Arg Asp Cys

305

<210> 192

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Fc-цепь XENP022639

<400> 192

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 193

<211> 67

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022639 IL15R-альфа(Sushi)

<400> 193

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg Asp Cys

65

<210> 194

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022639, цепь 2 - пустой-Fc(216)_IgG1_ISO(+RR)_C220S/PVA_

/S267K/S364K/E357Q (8927)

<400> 194

Glu Arg Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Lys Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gln Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 195

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022639, цепь 3 - человеческий_IL15_E87C_без_тэга (17074)

<400> 195

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 196

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022640, цепь 1 - IL15

<400> 196

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Cys Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 197

<211> 231

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> XENP022640, цепь 2 - пустой_Fc(216)_IgG1_pI(-)_изостерический_A_

C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S

<400> 197

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Lys His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Asp Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asp Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Gln Gly Asp Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 198

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D

<400> 198

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 199

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N4D

<400> 199

Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 200

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D8N

<400> 200

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 201

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D30N

<400> 201

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 202

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D61N

<400> 202

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 203

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> E64Q

<400> 203

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 204

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N65D

<400> 204

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 205

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> Q108E

<400> 205

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 206

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/D61N

<400> 206

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 207

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/E64Q

<400> 207

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 208

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N4D/D61N

<400> 208

Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 209

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N4D/E64Q

<400> 209

Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 210

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D8N/D61N

<400> 210

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 211

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D8N/E64Q

<400> 211

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 212

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D61N/E64Q

<400> 212

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 213

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> E64Q/Q108E

<400> 213

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 214

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/N4D/D8N

<400> 214

Asp Trp Val Asp Val Ile Ser Asn Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 215

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D61N/E64Q/N65D

<400> 215

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 216

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/D61N/E64Q/Q108E

<400> 216

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 217

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N4D/D61N/E64Q/Q108E

<400> 217

Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asn Thr Val Gln

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 218

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/N65D

<400> 218

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 219

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N1D/Q108E

<400> 219

Asp Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 220

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N4D/N65D

<400> 220

Asn Trp Val Asp Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 221

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D30N/N65D

<400> 221

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 222

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> D30N/Q108E

<400> 222

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asn Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 223

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<223> N65D/Q108E

<400> 223

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asp Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Glu Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 224

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>