Способ прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом Российский патент 2024 года по МПК G01N33/68 G01N33/86 G01N33/564 

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА (антифосфолипидных антител) и отягощенным акушерским анамнезом.

Известен Способ диагностики хронической плацентарной недостаточности (патент на изобретение №2313795), в котором с целью повышения точности диагностики ХПН осуществляют определение в крови беременных женщин фактора роста плаценты и термостабильной щелочной фосфатазы, дополнительно производят определение содержания лимфоцитов, экспрессирующих специализированный рецептор сигналов индукции апоптоза - Fas-антиген (СД95+), и концентрацию фактора некроза опухоли альфа (ФНОα) и при изменении этих показателей по сравнению с нормой диагностируют хроническую плацентарную недостаточность и степень ее тяжести. Недостатком данного способа является отсутствие указания срока беременности, на котором данный способ может быть применен. Примеры, отраженные в описательной части, указывают на применение способа в III триместре беременности, что может привести к несвоевременной диагностике ХПН ввиду изменения показателей, указанных в формуле, с течением срока беременности.

Задачей предложенного изобретения является повышение точности прогнозирования развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств специфичного и точного прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом при сроке беременности 16-18 недель.

Указанный технический результат достигается тем, что при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом, включающий измерение уровня Д-димера, определенного в крови пациенток в сроке 16-18 недель, измерение уровня антитромбина III (AT III), определенного в крови беременных в сроке 16-18 недель, а также включающий значения полученных измерений уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), определенной в крови пациенток в сроке 6-8 недель, и включающий значения полученных измерений уровня плацентарного фактора роста (P1GF), определенного в крови беременных в сроке 6-8 недель, далее рассчитывают риск развития хронической плацентарной недостаточности в процентах по следующей формуле:

Р = 1 / (1 + e ^z) × 100%

z = -10,152 - 0,006Х_Д._димер + 0,127Х_{АТ III} - 0,012Xs_F1t/P1GF;

где Р – вероятность развития хронической плацентарной недостаточности;

z – уравнение регрессии;

е – основание натуральных логарифмов;

Х_{Д.димер} – уровень Д-димера (нг/мл), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности;

Х_{АТ III} – уровень AT III (%), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности;

X_SF1t/P1GF – соотношение sF1t/P1GF, определенное в крови пациенток в сроке 6-8 недель беременности;

при Р, равном 32,2% и выше, прогнозируют высокий риск развития хронической плацентарной недостаточности, при Р, равном 32,1% и менее, прогнозируют низкий риск развития хронической плацентарной недостаточности.

Новизна изобретения заключается в том, что впервые предложен способ, с помощью которого возможно прогнозирование риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом, для реализации которого в качестве предикторов определяется уровень Д-димера, уровень антитромбина III, уровень растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), плацентарного фактора роста (P1GF), в крови пациенток.

На основании результатов наблюдения за течением беременности пациенток с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом, была разработана прогностическая модель для определения вероятности ХПН в зависимости от уровня Д-димера, антитромбина III, определенных в крови пациенток при сроке 16-18 недель и соотношения sF1t/P1GF, определенного в сроке 6-8 недель, методом бинарной логистической регрессии. Число наблюдений составило 156.

В Табл. 1 представлены характеристики связи предикторов модели с вероятностью выявления ХПН. В Табл. 2 представлены пороговые значения логистической функции Р.

Полученная регрессионная модель является статистически значимой (р < 0,001). Исходя из значения коэффициента детерминации Найджелкерка, модель объясняет 56,5% наблюдаемой дисперсии ХПН.

При оценке зависимости вероятности хронической плацентарной недостаточности от значения логистической функции Р с помощью ROC-анализа была получена следующая кривая (Фиг. 1).

Площадь под ROC-кривой составила 0,838 ± 0,067 с 95% ДИ: 0,707 - 0,968.

Полученная модель была статистически значимой (р < 0,001).

Пороговое значение логистической функции Р в точке cut-off, которому соответствовало наивысшее значение индекса Юдена, составило 0,332. Хроническая плацентарная недостаточность прогнозировалась при значении логистической функции Р выше данной величины или равном ей. Чувствительность и специфичность модели составили 87,5% и 75,0%, соответственно (Фиг. 2).

Разработанная прогностическая модель исследует взаимосвязь между уровнем Д-димера, антитромбина III при сроке беременности 16-18 недель и соотношением sF1t/P1GF, измеренным на ранних сроках беременности (6-8 недель) и вероятностью развития хронической плацентарной недостаточности (ХПН).

Таким образом, данная модель предоставляет ценные направления для клинической практики, позволяя своевременно идентифицировать беременных женщин с высоким риском развития ХПН и принимать необходимые профилактические меры.

Краткое описание чертежей

На Фиг. 1 представлена ROC-кривая, характеризующая зависимость вероятности ХПН от значения логистической функции Р, полученная с помощью ROC-анализа.

На Фиг. 2 представлен Анализ чувствительности и специфичности модели в зависимости от пороговых значений логистической функции Р.

Способ осуществляется следующим образом:

У пациенток с циркуляцией диагностических титров АФА (критериальных и некритериальных) и отягощенным акушерским анамнезом, то есть у которых в анамнезе зафиксировано:

-потеря/потери плода,

-тяжелая преэклампсия,

-преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты (ПОНРП),

-синдром задержки роста плода,

-невынашивания беременности/тей, в т.ч. после вспомогательных репродуктивных технологий,

-кровотечения после родов, абортов, преждевременных родов;

при сроке беременности 16-18 недель осуществляют измерение уровня Д-димера, определенного в крови пациенток в сроке 16-18 недель, измеряют уровень антитромбина III (AT III), определенного в крови беременных в сроке 16-18 недель, а также включают значения полученных измерений уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), определенной в крови пациенток в сроке 6-8 недель, и включают значения полученных измерений уровня плацентарного фактора роста (P1GF), определенного в крови беременных в сроке 6-8 недель.

Определение наличия в крови растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt).

Fms-подобная тирозинкиназа (sFlt) является растворимой формой васкулярного эндотелиального фактора роста (VEGF) рецептора 1, которая активно участвует в регуляции ангиогенеза. sFlt действует как «ловушка» для VEGF, предотвращая его связывание с мембранными рецепторами на эндотелиальных клетках, тем самым модулируя ангиогенез и сосудистую проницаемость. В контексте акушерства, повышенные уровни sFlt ассоциируются с патогенезом преэклампсии, заболеванием, характеризующимся высоким артериальным давлением и нарушением функции других органов у беременных.

Содержание sFlt (пг/мл) в сыворотке периферической крови определяют методом электрохемилюминесцентного анализа с использованием коммерческих тест-систем Elecsys sFlt фирмы Roche Diagnostics GmbH (Германия) на автоматическом иммунохимическом анализаторе Cobas е411 (Япония). К 20 мкл образца сыворотки крови пациента добавляется одновременно биотинилированное моноклональное антитело, специфичное к sFlt и специфичное к sFlt моноклональное антитело, меченное рутениевым комплексом. После инкубации в течение 9 минут при 37°С добавляются микрочастицы, покрытые стрептавидином. Образовавшиеся в результате первой инкубации комплексы связываются с микрочастицами посредством взаимодействия биотина и стрептавидина. Далее реакционная смесь забирается в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на поверхность электрода в результате магнитного взаимодействия. Затем с помощью промывающих растворов удаляются не связавшиеся вещества. Далее приложенное к электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется фотоумножителем. Результаты исследования оценивали количественным способом с помощью 2-точечной калибровочной кривой и референсной калибровочной кривой, данные которой предоставлены производителем в штрих-коде к реагенту.

Определение наличия в крови плацентарного фактора роста (P1GF).

Плацентарный фактор роста (PIGF) представляет собой белок, который также участвует в регуляции ангиогенеза и взаимодействует с VEGF и его рецепторами. P1GF способствует росту и выживаемости эндотелиальных клеток, а также стимулирует васкуляризацию плаценты. Уровни P1GF снижаются при преэклампсии, что делает его потенциальным маркером для раннего выявления и мониторинга этого состояния.

Содержание PIGF (пг/мл) в сыворотке периферической крови определяют методом электрохемилюминесцентного анализа с использованием коммерческих тест-систем «Elecsys PIGF» фирмы Roche Diagnostics GmbH (Германия) на автоматическом иммунохимическом анализаторе Cobas е411 (Япония). К 20 мкл образца сыворотки крови пациента добавляется одновременно биотинилированное моноклональное антитело, специфичное к PIGF и специфичное к PIGF моноклональное антитело, меченное рутениевым комплексом. После инкубации в течение 9 минут при 37°С добавляются микрочастицы, покрытые стрептавидином. Образовавшиеся в результате первой инкубации комплексы связываются с микрочастицами посредством взаимодействия биотина и стрептавидина. Далее реакционная смесь забирается в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на поверхность электрода в результате магнитного взаимодействия. Затем с помощью промывающих растворов удаляются не связавшиеся вещества. Далее приложенное к электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется фотоумножителем. Результаты исследования оценивали количественным способом с помощью 2 точечной калибровочной кривой и референсной калибровочной кривой, данные которой предоставлены производителем в штрих-коде к реагенту.

Определение наличия в крови Д-димера и AT III осуществляется оптическим методом на автоматическом коагулометре модели ACL-200 производства компании Instrumentation Laboratory (Испания) с реактивами HemosIL (Италия) согласно инструкции.

Далее рассчитывают риск развития хронической плацентарной недостаточности в процентах по следующей формуле:

P = l / (l + e ^z) × 100%

Способ подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1

Повторнородящая 29 лет с антенатальной гибелью плода в сроке 25 недели беременности в анамнезе, 1 неразвивающейся беременностью при сроке 7 недель, высоким уровнем волчаночного антикоагулянта (ВА) в крови (1,32).

При обследовании в сроке 7 недель беременности определялись показатели в крови:

Соотношение sFlt/ P1GF - 31,458.

При обследовании в сроке 17 недель беременности определялись показатели в крови:

уровень Д-димера в крови (нг/мл) - 745;

уровень ATIII (%) - 92,0;

Р = 1 / (1 + e ^z) × 100%

Z = -10,152 - 0,006Х_{Д-димер} + 0,127Х_{AT III} - 0,012Xs_F1t/P1GfF

Рассчитывают значение Z:

z=-10,152-0,006×745+0,127×92-0,012×31,458 = -10,152-4,47+11,684-0,377 = -3,315

Рассчитывают значение e ^z=0,0363.

Рассчитывают вероятность развития хронической плацентарной недостаточности при последующей беременности:

P=l/(l+e ^z) ×100% = 96,5%

У пациентки развилась хроническая плацентарная недостаточность - гемодинамические нарушения I степени (в правой маточной артерии) при сроке 30 недель. Роды путем экстренной операции кесарева сечения в 35 недель в связи с началом родовой деятельности и рубцом на матке после кесарева сечения, родилась девочка 2260/45 с оценкой по Апгар 7 баллов. По данным гистологического исследования плаценты - ХПН, субкомпенсированная стадия.

Таким образом, значение Р указывает на высокий риск хронической плацентарной недостаточности, что и подтвердилось при наблюдении за течением беременности.

Пример 2

Повторнобеременная первородящая 34 лет с 1 неразвивающейся беременностью при сроке 8 недель и 1 самопроизвольным выкидышем при сроке 7 недель, высоким уровнем ВА в крови (1,29), диагностическим тиром AT к аннексину 5 - 9,129.

При обследовании в сроке 7 недель беременности определялись показатели в крови:

Соотношение sFlt/ P1GF - 24,329

При обследовании в сроке 17 недель беременности определялись показатели в крови:

уровень Д-димера в крови (нг/мл) - 239;

уровень АТIII (%) - 115,0

Р = 1 / (1 + e ^z) × 100%

z = -10,152 - 0,006ХД._димер + 0,127Х_{АТ III} - 0,012Xs_F1t/P1GF

Рассчитывают значение Z:

z = -10,152-0,006×239+0,127×115-0,012×24,329 = -10,152-1,434+14,605-0,292 = 2,727

Рассчитывают значение e ^z=15,287

Рассчитывают вероятность развития хронической плацентарной недостаточности при последующей беременности:

P=l/(l+e ^z) × 100% = 6,13%

У пациентки беременность протекала без осложнений, признаков плацентарной недостаточности не было выявлено. Роды через естественные родовые пути в 39 5/7 недель, родился живой доношенный мальчик 3470 грамм, длиной 52 см, с оценкой по Апгар 8 баллов. По данным гистологического исследования плаценты - нормопластический тип строения плаценты.

Таким образом, значение Р указывает на низкий риск хронической плацентарной недостаточности, что и подтвердилось при анализе исхода беременности.

Пример 3

Повторнородящая 39 лет с ПОНРП в анамнезе при сроке 29 недель беременности в анамнезе, кровотечением, высоким уровнем AT к кардиолипину - 15,239 в крови.

При обследовании в сроке 8 недель беременности определялись показатели в крови:

Соотношение sFlt/ P1GF - 36,294.

При обследовании в сроке 16 недель беременности определялись показатели в крови:

Уровень Д-димера в крови (нг/мл) - 325

уровень АТШ (%) - 100,0

Р = 1 / (1+e ^z) × 100%

z = -10,152 - 0,006Хд._димер + 0,127Х_{AT III} - 0,012X_sf1t>P1GF;

Рассчитывают значение Z:

z = -10,152 - 0,006×325+0,127×100-0,012×36,294 = -10,152-1,95+12,7-0,435 = 0,163

Рассчитывают значение e ^z=l,177

Рассчитывают вероятность развития хронической плацентарной недостаточности при последующей беременности

P=l/(l+e ^z) × 100% = 45,9%

У пациентки развилась хроническая плацентарная недостаточность - гемодинамические нарушения I степени (в правой маточной артерии) при сроке 32 недели. Роды через естественные родовые пути в 37/38 недель, родилась девочка 2800/47 с оценкой по Апгар 8 баллов. По данным гистологического исследования плаценты - ХПН, компенсированная стадия.

Таким образом, значение Р указывает на высокий риск хронической плацентарной недостаточности, что и подтвердилось при наблюдении за течением беременности.

Таким образом, использование предложенного способа позволяет осуществить прогнозирование риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом. Своевременное выявление данного заболевания, учитывая факторы антиогинеза (sFlt/PIGF), а также учитывая существенное влияние системы гемостаза, позволяет своевременно начать профилактические и терапевтические мероприятия, направленные на профилактику развития ХПН.

Использование комплексного подхода, включающего определение в крови ряда маркеров (растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), плацентарного фактора роста (P1GF), Д-димера, антитромбина III), позволяет достичь высокой точности прогнозирования риска развития ХПН.

Регрессионная модель, разработанная на основе клинических наблюдений и предикторов, демонстрирует статистическую значимость и способна объяснить 56,5% наблюдаемой дисперсии ХПН, что подтверждает эффективность и надежность способа. Предложенный способ предлагает новые возможности для профилактики и патогенетически обоснованной терапии хронической плацентарной недостаточности, что может оказать положительное влияние на исходы беременности у женщин с высоким риском развития данного состояния.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией антифосфолипидных антител (АФА) и отягощенным акушерским анамнезом. Осуществляют измерение уровня Д-димера в крови пациенток в сроке 16-18 недель, измерение уровня антитромбина III (АТ III) в крови беременных в сроке 16-18 недель. Также включают значения полученных измерений уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), определенной в крови пациенток в сроке 6-8 недель и значения полученных измерений уровня плацентарного фактора роста (PlGF), определенного в крови беременных в сроке 6-8 недель. Рассчитывают риск развития хронической плацентарной недостаточности в процентах по следующей формуле: P = 1 / (1 + e ^z) × 100%; z = -10,152 - 0,006X_{Д-димер} + 0,127X_{АТ III} - 0,012X_sFlt/PlGF; где P – вероятность развития хронической плацентарной недостаточности; z – уравнение регрессии; е – основание натуральных логарифмов; X_{Д-димер} – уровень Д-димера (нг/мл), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности; X_{АТ III} – уровень АТ III (%), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности; X_sFlt/PlGF – соотношение sFlt/PlGF, определенное в крови пациенток в сроке 6-8 недель беременности. При P, равном 32,2% и выше, прогнозируют высокий риск развития хронической плацентарной недостаточности. При P, равном 32,1% и менее, прогнозируют низкий риск развития хронической плацентарной недостаточности. Способ обеспечивает возможность повышения специфичности и точности прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности у женщин с циркуляцией АФА и отягощенным акушерским анамнезом при сроке беременности 16-18 недель за счет измерения уровня Д-димера и антитромбина III в крови пациенток при сроке беременности 16-18 недель и измерения уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы sFlt и плацентарного фактора роста P1GF в крови пациенток в сроке 6-8 недель. 2 ил., 2 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности при сроке беременности 16-18 недель у женщин с циркуляцией антифосфолипидных антител (АФА) и отягощенным акушерским анамнезом, включающий измерение уровня Д-димера, определенного в крови пациенток в сроке 16-18 недель, измерение уровня антитромбина III (АТ III), определенного в крови беременных в сроке 16-18 недель, а также включающий значения полученных измерений уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt), определенной в крови пациенток в сроке 6-8 недель, и включающий значения полученных измерений уровня плацентарного фактора роста (PlGF), определенного в крови беременных в сроке 6-8 недель, далее рассчитывают риск развития хронической плацентарной недостаточности в процентах по следующей формуле:

P = 1 / (1 + e ^z) × 100%

z = -10,152 - 0,006X_{Д-димер} + 0,127X_{АТ III} - 0,012X_sFlt/PlGF;

где P – вероятность развития хронической плацентарной недостаточности;

Z – уравнение регрессии;

е – основание натуральных логарифмов;

X_{Д-димер} – уровень Д-димера (нг/мл), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности;

X_{АТ III} – уровень АТ III (%), определенный в крови пациенток в сроке 16-18 недель беременности;

X_sFlt/PlGF – соотношение sFlt/PlGF, определенное в крови пациенток в сроке 6-8 недель беременности;

при P, равном 32,2% и выше, прогнозируют высокий риск развития хронической плацентарной недостаточности, при P, равном 32,1% и менее, прогнозируют низкий риск развития хронической плацентарной недостаточности.