АНТИ-ROR1/АНТИ-CD3 БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ Российский патент 2024 года по МПК C07K16/28 A61K39/395 A61P35/00 

Ссылка на родственную заявку

[0001] Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США №62/852039, поданной 23 мая 2019 года, которая включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Перечень последовательностей

[0002] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан электронным путем в формате ASCII и посредством этого включен в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Электронная копия перечня последовательностей, созданная 18 мая 2020 года, имеет название 024651_WO004_SL.txt и размер 258844 байт.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

[0003] Рецепторный тирозинкиназоподобный орфанный рецептор 1 (ROR1) представляет собой белок клеточной поверхности, который опосредует сигналы от его лигандов, секретируемых гликобелком Wnt5a. В соответствии с его ролью влияния на дифференцировку стволовых клеток в ходе эмбриогенеза, экспрессия ROR1 наблюдается при инвазивных злокачественных новообразованиях, которые возвращаются к эмбриональной программе транскрипции, но не наблюдается в нормальных тканях взрослого, предлагая благоприятный профиль селективности в качестве терапевтической мишени. ROR1 обычно экспрессируется на злокачественных клетках у пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ALL), острым миелоидным лейкозом (AML), хроническим лимфобластным лейкозом (CLL), лимфомой из клеток зоны мантии (MCL), фолликулярной лимфомой (FL), лимфомой маргинальной зоны (MZL), диффузной В-крупноклеточной лимфомой (DLBCL) и трансформацией Рихтера или синдромом Рихтера (RS). ROR1 также представлен на клеточных поверхностях множества солидных опухолей, где, по-видимому, он является маркером раковых стволовых клеток. Поскольку он не экспрессируется до заметных уровней в здоровых тканях взрослого, но показывает высокие уровни экспрессии в многочисленных гематологических и солидных опухолях, ROR1 является привлекательной мишенью для опухолеспецифической терапии.

[0004] Кластер дифференцировки 3 (CD3) представляет собой мультимерный белковый комплекс, экспрессируемый на Т-клетках в ассоциации с Т-клеточным рецепторным комплексом (TCR), и необходим для активации Т-клеток. Функциональный CD3 образуется из димерной ассоциации двух из четырех различных цепей эпсилон, гамма, дельта и дзета в одну из следующих трех пар димеров: гамма/эпсилон, дельта/эпсилон и дзета/дзета. Было показано, что антитела против CD3 образуют кластер CD3 на Т-клетках, вызывая активацию Т-клеток. Соответственно, антитела против CD3 были предложены для терапевтических целей, включающих активацию Т-клеток. Например, биспецифические антитела, которые способны связывать CD3 и антиген-мишень, были предложены для терапевтических применений, включая нацеливание Т-клеточных иммунных ответов на ткани и клетки, экспрессирующие антиген-мишень. Недавнее одобрение привлекающего Т-клетки биспецифического активатора CD19 × CD 3 (BiTE), блинатумомаба, подтвердило этот подход.

[0005] Для биспецифических связывающих молекул описаны многочисленные формы и композиции. На эффективность этих молекул in vivo влияет множество переменных, включая параметры PK, эпитопы-мишени антигена, относительное сродство антигенсвязывающих компонентов и валентность, а также пространственная конфигурация паратопов. В настоящее время не существует надежного способа конструирования априори одной молекулы, которая оптимизирует все эти параметры для биспецифической связывающей молекулы, такой как антитело, которое специфически связывается как с ROR1, так и с CD3. Необходимо сконструировать, получить и исследовать биспецифические конструкции, чтобы систематически оценить влияние многих из этих параметров, и выбрать оптимальные биспецифические связывающие молекулы для терапевтических применений, таких как лечение рака.

[0006] Ввиду вышеизложенного существует потребность в новых и улучшенных терапевтических средствах против рака, которые сочетают опухолеспецифичность антигена ROR1 с высокой активностью перенаправленных Т-клеток.

Сущность настоящего изобретения

[0007] Настоящее изобретение относится к новым биспецифическим связывающим молекулам, нацеленным на ROR1 и CD3, а также фармацевтическим композициям, содержащим одно или более из этих антител, и применению антител и фармацевтических композиций для лечения рака. По сравнению с доступными в настоящее время средствами лечения рака, включая средства лечения на основе антител, предполагают, что биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению могут обеспечить превосходный клинический ответ.

[0008] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом ROR1 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом CD3 человека.

[0009] Согласно определенным вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с ROR1 человека с антителом или связывается с тем же эпитопом ROR1 человека, что и указанное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и аминокислотную последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 83. Согласно конкретным вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

a) (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDRl-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно,

b) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно,

c) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 72, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 73,

d) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 74, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

e) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 72, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

f) тяжелую цепь (НС), содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 84, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

g) НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 82, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

h) НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, или

i) НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83.

[0010] Согласно определенным вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с антителом или связывается с тем же эпитопом CD3 человека, что и указанное антитело, которое содержит:

a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71,

b) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67, или

c) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69. Согласно конкретным вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит:

a) (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDR1-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

b) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

c) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

d) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 70, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 71,

e) VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 67,

f) VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 69,

g) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71,

h) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67,

i) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69,

j) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 80, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 81,

k) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 76, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 77, или

l) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 78, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 79.

[0011] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDR1-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит Н-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит Н-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит Н-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит Н-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит Н-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно.

[0012] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно.

[0013] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно.

[0014] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей:

а) первый антигенсвязывающий домен, который содержит тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (LC), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

g) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

h) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

i) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

j) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

k) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно, или

l) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно.

[0015] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей:

а) первый антигенсвязывающий домен, который содержит тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (LC), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

g) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

h) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

i) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

j) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

k) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно, или

l) первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно.

[0016] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 19, согласно SEQ ID NO: 7 и 19, согласно SEQ ID NO: 7 и 18 или согласно SEQ ID NO: 7 и 23. Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

а) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 1 и 16,

b) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 2 и 16,

c) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 3 и 16,

d) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 4 и 16,

e) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 5 и 16,

f) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 6 и 16,

g) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 17,

h) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 20,

i) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 21,

j) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 22,

k) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 9 и 16,

l) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 10 и 16,

m) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 11 и 16,

n) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 11 и 16,

о) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 13 и 16 или

р) аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 15 и 16.

[0017] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула, описанная в настоящем документе, может иметь любую из следующих валентностей для первого и второго антигенсвязывающих доменов:

a) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2,

b) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 или

c) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1.

[0018] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула, описанная в настоящем документе, может содержать константную область IgG1 человека, причем указанная константная область может содержать аминокислотные замены L234A, L235A и/или G237A, где остатки пронумерованы согласно системе EU.

[0019] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе, представляет собой scFv.

[0020] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе, аминокислотная последовательность тяжелой или легкой цепи второго антигенсвязывающего домена слита с аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи первого антигенсвязывающего домена посредством пептидного линкера. Согласно определенным вариантам осуществления пептидный линкер имеет аминокислотную последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93). Согласно конкретным вариантам осуществления аминокислотная последовательность тяжелой или легкой цепи второго антигенсвязывающего домена может быть слита с, например:

a) карбоксильным концом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена, или

b) аминоконцом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена.

[0021] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула, описанная в настоящем документе, имеет по меньшей мере одно (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12) из следующих свойств:

a) имеет K_D для иммобилизованного ROR1, равную 0,5 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

b) имеет K_D для растворимого b-ROR1, равную 0,4 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

c) показывает пониженную интернализацию в ROR1-трансфицированные клетки МЕС и/или клетки Jurkat по сравнению с антителом, содержащим аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно,

d) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных ROR1-трансфицированных клетках МЕС при 1 мкг/мл или менее,

e) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках JeKo-1 при 1 мкг/мл или менее,

f) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках Mino при 1 мкг/мл или менее,

g) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках MDA-МВ-468 при 1 мкг/мл или менее,

h) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с ROR1-трансфицированными клетками МЕС, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

i) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками JeKo-1, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

j) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками Mino, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

k) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками MDA-MB-468, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии, и

l) индуцирует высвобождение IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4 и IL-2 из Т-клеток, совместно культивированных с клетками Jeko-1 или ROR1-трансфицированными клетками МЕС, при 1 мкг/мл или менее.

[0022] Настоящее изобретение также относится к иммуноконъюгату, содержащему биспецифическую связывающую молекулу, описанную в настоящем документе, конъюгированную с цитотоксическим средством.

[0023] Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей биспецифическую связывающую молекулу, описанную в настоящем документе, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

[0024] Настоящее изобретение также относится к одной или более выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные домены тяжелой и легкой цепи (VH и VL) первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержащим нуклеотидные последовательности, которые кодируют V_H и V_L второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления выделенная (выделенные) молекула (молекулы) нуклеиновой кислоты содержит (содержат):

a) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 37 и 42,

b) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 42,

c) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 41,

d) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 46,

e) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 24 и 39,

f) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 25 и 39,

g) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 26 и 39,

h) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 27 и 39,

i) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 28 и 39,

j) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 29 и 39,

k) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 40,

l) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 43,

m) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 44,

n) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 45,

o) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

р) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

q) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

r) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

s) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 36 и 39 или

t) нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 38 и 39.

[0025] Настоящее изобретение также относится к вектору, содержащему выделенную (выделенные) молекулу (молекулы) нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе.

[0026] Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные домены тяжелой и легкой цепи (VH и VL) первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержащей нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин содержит нуклеотидную последовательность:

a) SEQ ID NO: 37 и 42,

b) SEQ ID NO: 30 и 42,

c) SEQ ID NO: 30 и 41,

d) SEQ ID NO: 30 и 46,

e) SEQ ID NO: 24 и 39,

f) SEQ ID NO: 25 и 39,

g) SEQ ID NO: 26 и 39,

h) SEQ ID NO: 27 и 39,

l) SEQ ID NO: 28 и 39,

j) SEQ ID NO: 29 и 39,

k) SEQ ID NO: 30 и 40,

l) SEQ ID NO: 30 и 43,

m) SEQ ID NO: 30 и 44,

n) SEQ ID NO: 30 и 45,

о) SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

p) SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

q) SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

r) SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

s) SEQ ID NO: 35, 36 и 39 или

t) SEQ ID NO: 31, 38 и 39.

[0027] Настоящее изобретение также относится к способу получения биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе, предусматривающему предоставление клетки-хозяина, как описано в настоящем документе, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии биспецифической связывающей молекулы, и выделение полученной биспецифической связывающей молекулы.

[0028] Настоящее изобретение также относится к способу лечения рака у пациента, предусматривающему введение пациенту биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения рака у пациента, и биспецифической связывающей молекуле, описанной в настоящем документе, для применения для лечения рака у пациента. Согласно некоторым вариантам осуществления раком является ROR1-положительный рак. Согласно некоторым вариантам осуществления раком является лейкоз, лимфома или солидная опухоль. Согласно некоторым вариантам осуществления раком является острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, Т-клеточный лейкоз, лимфома из клеток зоны мантии, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, лимфома Беркитта, Т-клеточная неходжкинская лимфома, лимфоплазмацитоидная лимфома, макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, лимфома маргинальной зоны, мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома или неходжкинская лимфома, которая подверглась трансформации Рихтера. Согласно некоторым вариантам осуществления раком является рак ободочной кишки, немелкоклеточный рак легкого, глиобластома, гепатоклеточная карцинома, рак поджелудочной железы, саркома Юинга, остеосаркома, рак головы и шеи, рак яичников, рак молочной железы или рак молочной железы с тройным негативным фенотипом. Согласно определенным вариантам осуществления пациент может получать лечение одним или более дополнительными терапевтическими средствами, такими как ингибитор тирозинкиназы Брутона (BTK), ингибитор В-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2), ингибитор мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR) и/или ингибитор фосфоинозитид-3-киназы (PI3K). Согласно конкретным вариантам осуществления дополнительным терапевтическим средством является ибрутиниб, акалабрутиниб, венетоклакс, эверолимус, сапанисертиб или иделалисиб.

[0029] Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему биспецифическую связывающую молекулу, как описано в настоящем документе. Кроме того, настоящее изобретение относится к изделию, содержащему биспецифическую связывающую молекулу, как описано в настоящем документе, где указанное изделие является подходящим для лечения рака у пациента.

Краткое описание чертежей

[0030] На Фиг. 1 представлена схематическая диаграмма, демонстрирующая иллюстративные конфигурации биспецифических связывающих молекул согласно настоящему изобретению.

[0031] На Фиг. 2 представлена пара графиков, иллюстрирующих связывание с ROR1 человека исходного Ab1 Fab (дикий тип) и трех вариантов тяжелых цепей (Ab2 (Т32А), Ab3 (Т32Е) и W110Y), как определено посредством ELISA (Часть А) и посредством анализа проточной цитометрии связывания живых ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В).

[0032] На Фиг. 3 представлен график, иллюстрирующий связывание с ROR1 человека исходного Abl Fab (дикий тип) и трех вариантов (Ab2 (Т32А), Ab6 (Т32А (НС)+А25Р (LC)) и Ab7 (Т32А (НС)+T69R (LC))), как определено посредством ELISA с применением условий пролонгированной промывки.

[0033] На Фиг. 4 представлена пара графиков, показывающих селективность биспецифических конструкций 1-3, 7-9 и 13-15 в отношении ROR1, как продемонстрировано посредством анализа проточной цитометрии связывания с ROR1-трансфицированными клетками МЕС (Часть А) и контрольными клетками МЕС (Часть В). Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля («Контроль»).

[0034] На Фиг. 5 представлен набор графиков, показывающих влияние уровней экспрессии ROR1 на связывание биспецифических конструкций 1-3, 7-9 и 13-15 (Часть А), 4-6 и 10-12 (Часть В) и 3, 9 и 15-20 (Часть С). Связывание оценивали посредством проточной цитометрии с применением клеток JeKo-1, которые экспрессировали более низкие уровни ROR1 (~13000 копий/клетка), чем ROR1-трансфицированные клетки МЕС (~56000 копий/клетка).

[0035] На Фиг. 6 представлена пара графиков, показывающих связывание биспецифических конструкций с иммобилизованным ROR1 человека, как охарактеризовано посредством ELISA.

[0036] На Фиг. 7 представлен график, показывающий связывание биспецифических конструкций с растворимым, биотинилированным ROR1 человека, как охарактеризовано посредством ELISA.

[0037] На Фиг. 8 представлен набор графиков, показывающих уровни на клеточной поверхности биспецифических связывающих молекул, связанных с ROR1 («Поверхностное biAb»), уровни на клеточной поверхности свободного ROR1, не связанного биспецифическими связывающими молекулами («незанятый эпитоп»), и общий ROR1 клеточной поверхности («общий ROR1») для ROR1-трансфицированных клеток МЕС, инкубированных с конструкцией 1 (Часть А), конструкцией 7 (Часть В) и конструкцией 13 (Часть С).

[0038] На Фиг. 9 представлена пара графиков, показывающих уровни на клеточной поверхности биспецифических связывающих молекул, связанных с ROR1 («Поверхностное biAb»), уровни на клеточной поверхности свободного ROR1, не связанного биспецифическими связывающими молекулами («незанятый эпитоп»), и общий ROR1 клеточной поверхности («общий ROR1») для RORl-трансфицированных клеток МЕС, инкубированных с конструкцией 19 (Часть А) и конструкцией 20 (Часть В).

[0039] На Фиг. 10 представлен график, показывающий количественный анализ биспецифических конструкций 1, 7 и 13 на поверхности ROR1-трансфицированных клеток МЕС после инкубации в течение 24 часов.

[0040] На Фиг. 11 представлен набор графиков, иллюстрирующих связывание с клетками Jurkat биспецифических конструкций 1-6 (Часть А), 7-12 (Часть В) и 13-15 (Часть С), как продемонстрировано посредством анализа проточной цитометрии. Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля («Контроль»).

[0041] На Фиг. 12 представлена пара графиков, иллюстрирующих связывание с клетками Jurkat биспецифических конструкций 1, 7 и 13 (Часть А) и биспецифических конструкций 3, 9 и 15-10 (Часть В), как продемонстрировано посредством анализа проточной цитометрии. Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля в одном эксперименте (Часть А, «Контроль»), тогда как не связанную с ROR1 × CD3 биспецифическую конструкцию (Публикация патента США 2017/0233472) включали в качестве контроля во втором эксперименте (Часть В, «Контроль 1»).

[0042] На Фиг. 13 представлен график, показывающий количественный анализ уровней биспецифических конструкций 1-3, 7-9 и 13-15 на поверхности клеток Jurkat в зависимости от времени, после связывания с CD3 в отсутствии ROR1.

[0043] На Фиг. 14 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где ROR1-трансфицированные клетки МЕС инкубировали с (1) РВМС человека и (2) биспецифическими конструкциями 1, 3, 7, 9, 13 и 15, и контрольной анти-CD19/анти-CD3 биспецифической связывающей молекулой («CD19 × CD3»).

[0044] На Фиг. 15 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где ROR1-трансфицированные клетки МЕС инкубировали РВМС человека и биспецифическими конструкциями 3, 9 и 15-20.

[0045] На Фиг. 16 представлен график, показывающий сравнение высвобождения LDH между ROR1-трансфицированными и нетрансфицированными клетками МЕС, инкубированными с (1) РВМС и (2) биспецифическими конструкции 1-3, 7-9 и 13-15, и контролем анти-CD19/анти-CD3 биспецифической связывающей молекулой. Высвобождение LDH также оценивали в образцах, которые не содержали клетки-мишени («РВМС»), и образцах, которые не содержали биспецифическую конструкцию («нет biAb»).

[0046] На Фиг. 17 представлен набор графиков, показывающих оценку уровней CD69 на Т-клетках, где ROR1^-/CD19⁺ МЕС клетки (Часть А) или ROR1⁺/CD19⁺ МЕС клетки (Часть В) инкубировали с (1) Т-клетками и (2) биспецифической конструкцией 7 или контролем анти-CD19/анти-CD3 биспецифической связывающей молекулой («CD19 × CD3»).

[0047] На Фиг. 18 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из клеток JeKo-1 (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где клетки JeKo-1 инкубировали с РВМС человека и биспецифическими конструкциями 2, 3, 8, 9, 14 и 15.

[0048] На Фиг. 19 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из клеток JeKo-1 (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где клетки JeKo-1 инкубировали с РВМС человека и биспецифическими конструкциями 3, 7, 9 и 15-20.

[0049] На Фиг. 20 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из клеток Mino (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где клетки Mino инкубировали с РВМС человека и биспецифическими конструкциями 7-9.

[0050] На Фиг. 21 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из клеток MDA-MB-468 (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где клетки MDA-MB-468 инкубировали с РВМС человека и биспецифическими конструкциями 2, 3, 8, 9, 12 и 14.

[0051] На Фиг. 22 представлена пара графиков количественного высвобождения LDH из клеток MDA-MB-468 (Часть А) и уровни на клеточной поверхности CD69 на клетках CD8⁺ (Часть В), где клетки MDA-MB-468 инкубировали с РВМС человека и биспецифическими конструкциями 9, 18 и 20.

[0052] На Фиг. 23 представлен набор графиков количественного высвобождения TNF-α из клеток JeKo-1 (Часть А), ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-трансфицированных ROR1^- МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 1,9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18, 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- МЕС клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD3 биспецифическую конструкцию.

[0053] На Фиг. 24 представлен набор графиков количественного высвобождения IFN-γ из клеток JeKo-1 (Часть А), ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-трансфицированных ROR1^- МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 7, 9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18 и 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- МЕС клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD 3 биспецифическую конструкцию.

[0054] На Фиг. 25 представлен набор графиков количественного высвобождения IL-2 из клеток JeKo-1 (Часть А), RORl-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-трансфицированных ROR1^- МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 7, 9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18 и 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- MEC клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD 3 биспецифическую конструкцию.

[0055] На Фиг. 26 представлен набор графиков количественного высвобождения IL-4 из клеток JeKo-1 (Часть А), ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-трансфицированных ROR1^- МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 7, 9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18 и 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- MEC клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD 3 биспецифическую конструкцию.

[0056] На Фиг. 27 представлен набор графиков количественного высвобождения IL-6 из клеток JeKo-1 (Часть А), ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-трансфицированных ROR1" МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 7, 9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18 и 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- MEC клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD 3 биспецифическую конструкцию.

[0057] На Фиг. 28 представлен набор графиков количественного высвобождения IL-10 из клеток JeKo-1 (Часть А), ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В) и из mock-транс фицированных, ROR1^- МЕС клеток (Часть С) после активации Т-клеток намеченными клетками-мишенями и биспецифическими конструкциями 7, 9, 18 и 20 (Часть А) или 9, 18 и 20 (Части В и С). Mock-трансфицированные ROR1^- MEC клетки (Часть С) обрабатывали одной концентрацией (1 мкг/мл) биспецифических конструкций. «Контроль 1» представляет собой не связанную с ROR1 × CD 3 биспецифическую конструкцию.

[0058] На Фиг. 29 представлена таблица, показывающая SEQ ID NO для указанных последовательностей анти-ROR1 и анти-CD3 антигенсвязывающих доменов.

Подробное описание настоящего изобретения

[0059] Настоящее изобретение относится к новым биспецифическим связывающим молекулам, которые связываются с ROR1 и CD3. Согласно некоторым вариантам осуществления связывание биспецифических связывающих молекул с ROR1 и CD3 сближает Т-клетки с ROR1-положительным опухолевыми клетками, посредством чего рак лечат с помощью вызова цитотоксичности Т-клеток. Если не указано иное, в контексте настоящего изобретения «ROR1» относится к ROR1 человека. Полипептидная последовательность ROR1 доступна под номером доступа в UniProt Q01973-1 (SEQ ID NO: 89). Если не указано иное, в контексте настоящего изобретения «CD3» относится к CD3 человека. CD3 состоит из гамма-цепи, дельта-цепи и двух эпсилон-цепей. Полипептидная последовательность гамма CD3 человека доступна под номером доступа в GenBank NP 000064.1 (SEQ ID NO: 90). Полипептидная последовательность дельта CD3 человека доступна под номером доступа в GenBank NP 000723.1 (SEQ ID NO: 91). Полипептидная последовательность эпсилон CD3 человека доступна под номером доступа в GenBank NP 000724.1 (SEQ ID NO: 92).

[0060] Согласно некоторым вариантам осуществления антигенсвязывающие домены биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению происходят из анти-ROR1 антитела и анти-CD3 антитела. В контексте настоящего изобретения термин «антитело» (Ab) или «иммуноглобулин» (Ig) может относиться к тетрамеру, содержащему две тяжелые цепи (Н) (около 50-70 кДа) и две легкие цепи (L) (около 25 кДа), соединенные между собой дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (СН). Каждая легкая цепь состоит из вариабельного домена легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL). Домены V_H и V_L могут быть далее подразделены на гипервариабельные области, называемые «определяющими комплементарность областями» (CDR), с включениями более консервативных областей, называемых «каркасными областями» (FR). Каждая V_H и V_L состоит из трех CDR (H-CDR в настоящем документе означает CDR тяжелой цепи, a L-CDR в настоящем документе означает CDR легкой цепи) и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

[0061] Точные границы аминокислотной последовательности данной CDR или FR могут быть легко определены с использованием любой из нескольких хорошо известных схем, включая схемы, описанные в Kabat et al., 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) (схема нумерации «Kabat»), Al-Lazikani et al., JMB 273, 927-948 (1997) (схема нумерации «Chothia»), MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996) (схема нумерации «contact»), Lefranc et al., Dev Comp Immunol. 27(l):55-77 (2003) (схема нумерации «IMGT»), и Honegger and Pluckthun, J Mol Biol, 309(3):657-70 (2001) (схема нумерации «Aho»).

[0062] Границы данной CDR или FR могут варьироваться в зависимости от схемы, используемой для идентификации. Например, схема нумерации Kabat основана на выравниваниях последовательностей, а схема нумерации Chothia основана на информации о структуре. Нумерация для обеих схем Kabat и Chothia основана на наиболее общих длинах последовательностей областей антитела с вставками, обозначенными буквами вставки, например, «30а». В этих двух схемах определенные вставки и делеции («вставка/делеция») помещены в разные положения, что приводит к разной нумерации. Схема contact основана на анализе сложных кристаллических структур и во многом аналогична схеме нумерации Chothia. Если не указано иное, CDR антител, указанных в настоящем документе, могут быть идентифицированы любым из способов Kabat, Chothia, IMGT, contact и Aho.

[0063] Согласно некоторым вариантам осуществления анти-ROR1 антитело и/или анти-CD3 антитело, из которых происходит биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению, представляют собой моноклональные антитела. Согласно некоторым вариантам осуществления анти-ROR1 и/или анти-CD3 антитела представляют собой химерные, гуманизированные или полностью человеческие антитела.

[0064] Термин «аффинность» относится к мере притяжения между антигеном и антителом или его антигенсвязывающим фрагментом или родственной молекулой, такой как биспецифическая связывающая молекула. Присущее антителу притяжение для антигена обычно выражается как константа равновесия аффинности связывания (K_D) конкретного взаимодействия антитело-антиген. Антитело обозначают как специфически связывающееся с антигеном, когда K_D составляет ≤ 1 мМ, предпочтительно ≤ 100 нМ. Константу аффинности связывания K_D можно измерить, например, с помощью поверхностного плазмонного резонанса (BIAcore™) или интерферометрии биослоя, например, с использованием системы IBIS МХ96 SPR от IBIS Technologies или системы Octet™ от ForteBio.

[0065] Термин «паратоп» относится к антигенсвязывающему сайту антитела (т.е. части антитела, которая распознает и связывается с эпитопом антигена).

[0066] В контексте настоящего изобретения термин «эпитоп» относится к части (детерминанте) антигена, которая специфически связывается с антителом или родственной молекулой, такой как биспецифическая связывающая молекула. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или углеводы, или боковые цепи сахаров, и в общем имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Эпитоп может быть «линейным» или «конформационным». В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком (например, антигеном) и взаимодействующей молекулой (например, антителом) расположены линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия возникают между аминокислотными остатками белка, которые отделены друг от друга в первичной аминокислотной последовательности. После определения желаемого эпитопа на антигене можно создать антитела к этому эпитопу, используя методы, хорошо известные в данной области техники. Например, антитело к линейному эпитопу может быть создано, например, путем иммунизации животного пептидом, имеющим аминокислотные остатки линейного эпитопа. Антитело к конформационному эпитопу может быть создано, например, путем иммунизации животного мини-доменом, содержащим релевантные аминокислотные остатки конформационного эпитопа. Антитело к конкретному эпитопу также может быть создано, например, путем иммунизации животного представляющей интерес молекулой-мишенью (например, ROR1 или CD3) или ее соответствующей частью, а затем скрининга на связывание с эпитопом.

[0067] Можно определить, связывается ли антитело с тем же эпитопом ROR1 или CD3, что и биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению, или конкурирует ли за связывание с биспецифической связывающей молекула согласно настоящему изобретению, с помощью способов, известных в данной области техники, включая без ограничения конкурентные анализы, связывание эпитопа и аланиновое сканирование. Согласно одному варианту осуществления биспецифической связывающей молекуле согласно настоящему изобретению позволяют связываться с ROR1 или CD3 в условиях насыщения, а затем измеряют способность тестируемого антитела связываться с указанным антигеном. Если тестируемое антитело способно связываться с указанным антигеном одновременно с указанной биспецифической связывающей молекула, то тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, чем указанная биспецифическая связывающая молекула. Однако, если тестируемое антитело не способно одновременно связываться с антигеном, то тестируемое антитело связывается с тем же эпитопом, перекрывающимся эпитопом или эпитопом, который находится в непосредственной близости от эпитопа, связанного биспецифической связывающей молекула согласно настоящему изобретению. Этот эксперимент можно провести, используя, например, ELISA, RIA, BIACORE™, SPR, интерферометрию биослоя или проточную цитометрию. Чтобы определить, конкурирует ли перекрестно биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению с другим антителом за связывание с ROR1 или CD3, можно использовать описанный выше способ конкурентного анализа в двух направлениях, т.е. определить, блокирует ли известное антитело тестируемое антитело и наоборот. Такие эксперименты по перекрестной конкуренции могут быть выполнены, например, с использованием устройства IBIS МХ96 SPR или системы Octet™.

[0068] В контексте настоящего изобретения термин «антигенсвязывающая часть» или «антигенсвязывающий фрагмент» антитела относится к одной или более частям или фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, ROR1 человека или CD3 или их часть). Было показано, что определенные фрагменты антитела полной длины могут выполнять антигенсвязывающую функцию антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином «антигенсвязывающая часть», включают (i) фрагмент Fab: одновалентный фрагмент, состоящий из доменов V_L, V_H, C_L и C_H1, (ii) фрагмент F(ab')₂: двухвалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанные дисульфидным мостиком в шарнирной области, (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов V_H и C_H1, (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов V_L и V_H одного плеча антитела, (v) фрагмент dAb, который состоит из домена V_H, и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), способную специфически связываться с антигеном. Кроме того, хотя два домена Fv-фрагмента, V_L и V_H, кодируются отдельными генами, они могут быть соединены с использованием рекомбинантных способов с помощью синтетического линкера, который позволяет им быть полученными в виде единой белковой цепи, в которой домены V_L и V_H спариваются с образованием одновалентных молекул (известных как одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFv)). Также настоящее изобретение охватывает антигенсвязывающие молекулы, содержащие V_L и/или V_H. В случае V_H молекула может также содержать одну или более областей из СН1, шарнира, СН2 или СН3. Такие одноцепочечные антитела также охватываются термином «антигенсвязывающая часть» антитела. Также охватываются другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела. Диатела представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены V_H и V_L экспрессируются в одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который является слишком коротким, чтобы обеспечить спаривание между двумя доменами в одной цепи, тем самым вынуждая домены спариваться с комплементарными доменами другой цепи с получением двух антигенсвязывающих сайтов.

[0069] Если не указано иное, все номера аминокислотных остатков антител, указанные в настоящем документе, соответствуют схеме нумерации Honegger (Honegger and Plückthun, JMolBiol, 309(3):657-70 (2001)).

Анти-ROR1/анти-CD3 биспецифические связывающие молекулы

[0070] Настоящее изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, содержащей первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом ROR1 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом CD3 человека.

[0071] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен связывается с эпитопом на внеклеточной части белка ROR1, как например, эпитопом в одном или более из иммуноглобулин (Ig)-подобного домена, домена Frizzled и домена Kringle. Согласно определенным вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен связывается с аминокислотной последовательностью ROR1, показанной в SEQ ID NO: 94 или 95 (не включен концевой цистеин, который добавляют для облегчения конъюгации).

[0072] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с ROR1 человека с анти-ROR1 антителом и/или связывается с тем же эпитопом ROR1 человека, что и указанное анти-ROR1 антитело, которое описано в международной патентной заявке PCT/US2013/32572. Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с ROR1 человека с антителом и/или связывается с тем же эпитопом ROR1 человека, что и указанное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и аминокислотную последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 83 («Ab1»).

[0073] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит (H)-CDR1-3 тяжелой цепи в аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и (L)-CDR1-3 легкой цепи в аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 83, где CDR определены согласно способу Kabat, Chothia, IMGT или contact, или любой их комбинации.

[0074] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности:

- SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 60, 61, 62, 99, 64, 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 102, 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 97, 61, 62, 99, 64, 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 102, 65, соответственно,

- SEQ ID NO: 98, 61, 62, 99, 64, 65, соответственно или

- SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 102, 65, соответственно.

[0075] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентична SEQ ID NO: 72, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 73.

[0076] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 72, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 74, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 75, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 72, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 100,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 72, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 103,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 74, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 100,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 74, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 103,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 75, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 100, или

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 75, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 103.

[0077] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит тяжелую цепь (НС), содержащую аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентична SEQ ID NO: 82, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 83.

[0078] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 82, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 84, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 85, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 82, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 82, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 84, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 84, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 85, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101 или

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 85, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104.

Согласно определенным вариантам осуществления последовательность НС модифицирована для снижения или исключения эффекторной функции. Например, часть IgG1 последовательности НС может содержать мутации «LALA» (L234A/L235A) или «LALAGA» (L234A/L235A/G237A) (где все остатки пронумерованы согласно схеме нумерации EU).

[0079] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 14, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 105, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 14, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 14, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 105, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, или

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 105, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104.

[0080] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, или

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104.

[0081] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен содержит:

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104,

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, или

- НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104.

[0082] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигене вязывающий домен содержит шесть CDR, вариабельные домены тяжелой и легкой цепи и/или аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи анти-ROR1 антитела, как описано в PCT/US2013/32572.

[0083] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигене вязывающий домен связывается эпитопом Группы I или Группы II в CD3, как определено в Tunnacliffe et al., International Immunology 1:546-550 (1989)).

[0084] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигене вязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с анти-CD3 антителом OKT3 или SP34 и/или связывается с тем же эпитопом CD3, что и анти-CD3 антитело OKT3 или SP34. Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с антителом и/или связывается с тем же эпитопом CD3, что и антитело, которое содержит:

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69 или

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71.

[0085] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3 в аминокислотных последовательностях:

- SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно, или

- SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

где CDR определены согласно способу Kabat, Chothia, IMGT или contact, или любой их комбинации.

[0086] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности:

- SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно, или

- SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно.

[0087] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит:

- VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 67,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 69 или

- VH, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентична SEQ ID NO: 70, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичную SEQ ID NO: 71.

[0088] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит:

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 76, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 77,

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 78, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 79, или

- VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 80, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 81.

[0089] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен содержит шесть CDR и/или вариабельные домены тяжелой и легкой цепи анти-CD3 антитела, как описано в публикации патента США №2018/0112011.

[0090] Настоящее изобретение также охватывает любую комбинацию описанных выше первого и второго антигенсвязывающих доменов.

[0091] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1- и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 99, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 98, 61, 62, 63, 102 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно.

[0092] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, на по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%) идентичные аминокислотным последовательностям согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно.

[0093] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 100, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 75 и 103, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно.

[0094] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 85 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно.

Согласно определенным вариантам осуществления последовательность НС модифицирована для снижения или исключения эффекторной функции. Например, часть IgG1 последовательности НС может содержать мутации L235E, «LALA» (L234A/L235A) или «LALAGA» (L234A/L235A/G237A) (где все остатки пронумерованы согласно схеме нумерации EU).

[0095] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 101, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 105 и 104, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно.

[0096] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 108, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно.

[0097] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 101, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71 или 80 и 81, соответственно,

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67 или 76 и 77, соответственно, или

- первый антигенсвязывающий домен, который содержит НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 88, НС, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 104, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69 или 78 и 79, соответственно.

[0098] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит:

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 1 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 2 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 3 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 4 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 5 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 6 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 17,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 18,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 19,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 20,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 21,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 22,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 9 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 10 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 11 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 11 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 13 и 16,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 14 и 19,

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 15 и 16 или

- аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 7 и 23.

[0099] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит один или два первых антигенсвязывающих доменов, как описано выше. Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению содержит один или два вторых антигенсвязывающих доменов, как описано выше.

[0100] Согласно некоторым вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен в биспецифической связывающей молекуле согласно настоящему изобретению имеет валентность 1 или 2. Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен в биспецифической связывающей молекуле согласно настоящему изобретению имеет валентность 1 или 2. Предусматривается любая комбинация валентностей первого и второго антигенсвязывающих доменов, например, первый и второй антигенсвязывающие домены могут иметь валентности 2 и 2, соответственно, 1 и 1, соответственно, 2 и 1, соответственно, или 1 и 2, соответственно.

[0101] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению может содержать человеческую константную область IgG, IgM, IgE, IgA или IgD. Согласно определенным вариантам осуществления человеческая константная область относится к изотипу IgG, например, подклассу IgG IgGl, IgG2a или IgG2b, IgG3 или IgG4. Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению может содержать константную область κ человека. Класс биспецифической связывающей молекулы, описанной в настоящем документе, может быть изменен или переключен на другой класс или подкласс. Например, константная область, которая изначально представляла собой IgM, может быть подвергнута переключению класса на IgG. Кроме того, переключение класса может использоваться для превращения одного подкласса IgG в другой, например, из IgG1 в IgG2. Константная область легкой цепи κ может быть изменена, например, на константную область легкой цепи λ.

[0102] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению может содержать константную область IgG человека. Согласно конкретным вариантам осуществления константная область IgG может включать мутации, которые снижают или исключают эффекторную функцию (см., например, Wang et al., Protein Cell 9(1):63-73 (2018)). Например, биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению может содержать человеческую константную область IgG1 с мутациями L235E, «LALA» (L234A/L235A) или мутациями «LALAGA» (L234A/L235A/G237A), все пронумерованы согласно схеме нумерации EU).

[0103] Класс (изотип) и подкласс биспецифических связывающих молекул согласно настоящему изобретению могут быть определены любым способом, известным в данной области техники. В общем, класс и подкласс антитела можно определить с использованием антител, которые специфичны для конкретного класса и подкласса антител. Такие антитела коммерчески доступны. Класс и подкласс можно определить с помощью ELISA, вестерн-блоттинга, а также другими методами. Альтернативно, класс и подкласс можно определить путем секвенирования всех или части константных областей тяжелой и/или легкой цепей антител, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и подклассов иммуноглобулинов и определения класса и подкласса антител.

[0104] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению представляет собой гомодимер. Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению представляет собой гетеротример (легкая цепь, объединенная с гетеродимером тяжелой цепи), где гетеродимер тяжелой цепи находится, например, в формате, описанном в Brinkmann and Kontermann, MABS 9:182-212 (2017). Например, стратегии «выступы-во-впадины», HA-TF, ZW1, СНЗ заряженная пара, EW-RVT, LUZ-Y, домен, сконструированный путем обмена между цепями (SEEDbody), Biclonic, DuoBody, BEAT, 7.8.60, 20.8.34, Triomab/Quadroma или CrossMAb можно применять для промотирования гетеродимеризации (например, сверх гомодимеризации) полипептида, содержащего область Fc иммуноглобулина в структуре биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно определенным вариантам осуществления может быть использован подход «выступы-во-впадины», в котором вариант домена «выступ» получают заменой аминокислоты с небольшой боковой цепью (например, аланина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, глицина, серина, треонина или валина) другой аминокислотой с большей боковой цепью (например, аргинин, фенилаланин, тирозин или триптофан). Вариант домена «впадина» получают заменой аминокислоты с большой боковой цепью (например, аргинина, фенилаланина, тирозина или триптофана) на другую аминокислоту с меньшей боковой цепью (например, аланин, аспарагин, аспарагиновая кислота, глицин, серии, треонин или валин). Согласно определенному варианту осуществления мутации выступа и/или впадины расположены в домене СНЗ.

[0105] Согласно некоторым вариантам осуществления антигенсвязывающий фрагмент анти-ROR1 антитела и/или антигенсвязывающий фрагмент анти-CD3 антитела можно использовать для получения биспецифической связывающей молекула согласно настоящему изобретению. Примеры фрагментов антител включают без ограничения Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, фрагменты рекомбинантного IgG (rIgG), диатела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антител (например, scFv или sFv) и однодоменные антитела (например, sdAb, sdFv, нанотела). Согласно определенным вариантам осуществления фрагменты представляют собой одноцепочечные фрагменты антител, содержащие вариабельную область тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи, такую как scFv.

[0106] Согласно конкретным вариантам осуществления первый антигенсвязывающий домен, второй антигенсвязывающий домен или оба представляют собой одноцепочечные антитела (scFv), содержащие вариабельный домен тяжелой цепи (VH) антитела, связанный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) всего антитела, где слитый белок сохраняет ту же антиген-специфичность, что и антитело. VH и VL могут быть связаны посредством пептидного линкера. Согласно определенным вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который специфически связывается с CD3.

[0107] Для создания одноцепочечного антитела (scFv) фрагменты ДНК, кодирующие VH и VL, функционально связывают с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например, кодирующим аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)4 (SEQ ID NO: 96), так что последовательности VH и VL могут быть экспрессированы как непрерывный одноцепочечный белок с доменами VL и VH, соединенными гибким линкером. Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если используется только один VH и VL, двухвалентным, если используются два VH и VL, или поливалентным, если используется более двух VH и VL.

[0108] Согласно некоторым вариантам осуществления аминокислотная последовательность первого антигенсвязывающего домена слита с аминокислотной последовательностью второго антигенсвязывающего домена, например, посредством пептидного линкера, с образованием слитого белка. Согласно определенным вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен представляет собой scFv и слит с аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи первого антигенсвязывающего домена. Например, второй антигенсвязывающий домен может быть слит с:

- аминоконцом тяжелой цепи первого антигенсвязывающего домена,

- аминоконцом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена,

- карбоксильным концом тяжелой цепи первого антигенсвязывающего домена и/или

- карбоксильным концом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена.

[0109] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет конфигурацию, как представлено на любом из схематических изображений А-Е на ФИГ. 1.

[0110] Согласно определенным вариантам осуществления пептидный линкер, конъюгированный с первым и вторым антигенсвязывающим доменами, имеет длину 5-30, 5-25, 5-15, 10-30, 10-20 или 10-15 аминокислот. Согласно определенным вариантам осуществления пептидный линкер содержит аминокислоты, которые обеспечивают растворимость пептидного линкера, такие как, например, серин и треонин. Согласно определенным вариантам осуществления линкер может быть заряжен (см., например, патент США №9,856,327). Согласно определенным вариантам осуществления пептидный линкер содержит аминокислоты, которые обеспечивают гибкость пептидного линкера, такие как, например, глицин, или жесткость пептидного линкера. Согласно определенным вариантам осуществления последовательность пептидного линкера, конъюгированного с первым и вторым антигенсвязывающими доменами, представляет собой (Gly4-Ser)X, где X может представлять собой 1, 2, 3 или 4 (SEQ ID NO: 114). Согласно конкретным вариантам осуществления последовательностью пептидного линкера является GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93).

[0111] Согласно некоторым вариантам осуществления второй антигенсвязывающий домен, как описано в настоящем документе, содержит одну или более мутаций (например, замена аминокислотных остатков цистеинами) для стабилизации дисульфидной связи, например, для предотвращения или снижения агрегации биспецифической связывающей молекулы.

[0112] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет K_D для иммобилизованного ROR1, равную 100 нМ, 50 нМ, 40 нМ, 30 нМ, 20 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 2 нМ, 1 нМ, 0,9 нМ, 0,8 нМ, 0,7 нМ, 0,6 нМ, 0,5 нМ, 0,4 нМ, 0,3 нМ, 0,2 нМ, 0,1 нМ, 0,09 нМ, 0,08 нМ, 0,07 нМ, 0,06 нМ, 0,05 нМ, 0,04 нМ, 0,03 нМ, 0,02 нМ, 0,01 нМ, 0,005 нМ или 0,001 нМ, или менее (например, 0,5 нМ или менее), как определено посредством ELISA.

[0113] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет K_D для растворимого b-ROR1, равную 100 нМ, 50 нМ, 40 нМ, 30 нМ, 20 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 2 нМ, 1 нМ, 0,9 нМ, 0,8 нМ, 0,7 нМ, 0,6 нМ, 0,5 нМ, 0,4 нМ, 0,3 нМ, 0,2 нМ, 0,1 нМ, 0,09 нМ, 0,08 нМ, 0,07 нМ, 0,06 нМ, 0,05 нМ, 0,04 нМ, 0,03 нМ, 0,02 нМ, 0,01 нМ, 0,005 нМ или 0,001 нМ, или менее (например, 0,4 нМ или менее), как определено посредством ELISA.

[0114] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет Kd для CD3, равную 100 нМ, 50 нМ, 40 нМ, 30 нМ, 20 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 2 нМ, 1 нМ, 0,9 нМ, 0,8 нМ, 0,7 нМ, 0,6 нМ, 0,5 нМ, 0,4 нМ, 0,3 нМ, 0,2 нМ, 0,1 нМ, 0,09 нМ, 0,08 нМ, 0,07 нМ, 0,06 нМ, 0,05 нМ, 0,04 нМ, 0,03 нМ, 0,02 нМ, 0,01 нМ, 0,005 нМ или 0,001 нМ, или менее (например, 5 нМ или менее), как определено посредством ELISA.

[0115] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных ROR1-трансфицированных клетках МЕС при 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее.

[0116] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках JeKo-1 при 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее.

[0117] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках Mino при 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл или 0,05 нг/мл, 0,01 нг/мл, или менее.

[0118] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках MDA-MB-468 при 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее.

[0119] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует ROR1-зависимое уничтожение ROR1-трансфицированных клеток МЕС, клеток JeKo-1, клеток Mino, клеток MDA-MB-468 или любой их комбинации, посредством РВМС in vitro.

[0120] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, инкубированных с ROR1-трансфицированными клетками МЕС, при 50 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее, как определено посредством проточной цитометрии.

[0121] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, инкубированных с клетками JeKo-1, при 50 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее, как определено посредством проточной цитометрии.

[0122] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, инкубированных с клетками Mino, при 50 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл,

5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее, как определено посредством проточной цитометрии.

[0123] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, инкубированных с клетками MDA-MB-468, при 50 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл,

6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее, как определено посредством проточной цитометрии.

[0124] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует высвобождение IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4 и IL-2 из Т-клеток, совместно культивированных с клетками JeKo-1 или ROR1-трансфицированными клетками МЕС, при 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 20 нг/мл, 10 нг/мл, 9 нг/мл, 8 нг/мл, 7 нг/мл, 6 нг/мл, 5 нг/мл, 4 нг/мл, 3 нг/мл, 2 нг/мл, 1 нг/мл, 0,9 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,05 нг/мл или 0,01 нг/мл, или менее.

[0125] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:

a) имеет K_D для иммобилизованного ROR1, равную 0,5 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

b) имеет Kd для растворимого b-ROR1, равную 0,4 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

c) показывает пониженную интернализацию в ROR1-трансфицированные клетки МЕС и/или клетки Jurkat по сравнению с антителом, содержащим аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно,

d) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных ROR1-трансфицированных клетках МЕС при 1 мкг/мл или менее,

e) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках JeKo-1 при 1 мкг/мл или менее,

f) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках Mino при 1 мкг/мл или менее,

g) индуцирует высвобождение LDH в РВМС-экспонированных клетках MDA-МВ-468 при 1 мкг/мл или менее,

h) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с ROR1-трансфицированными клетки МЕС, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

i) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками JeKo-1, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

j) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками Mino, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

к) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками MDA-MB-468, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии, и

1) индуцирует высвобождение IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4 и IL-2 из Т-клеток, совместно культивированных с клетками JeKo-1 или ROR1-трансфицированными клетками МЕС, при 1 мкг/мл или менее.

Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 из указанных свойств. Согласно конкретным вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению имеет все указанные свойства.

[0126] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению индуцирует Т-клеточную цитотоксичность против ROR1-положительных клеток.

Молекулы нуклеиновых кислот и векторы

[0127] Настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот и последовательностям, кодирующим биспецифические связывающие молекулы, описанные в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления различные молекулы нуклеиновых кислот кодируют различные полипептиды, которые образуют биспецифическую связывающую молекулу. Согласно другим вариантам осуществления одна и та же молекула нуклеиновой кислоты кодирует более одного или все полипептиды, которые образуют биспецифическую связывающую молекулу.

[0128] Ссылка на нуклеотидную последовательность охватывает ее комплемент, если не указано иное. Таким образом, должно быть понятно, что ссылка на нуклеиновую кислоту, имеющую конкретную последовательность, охватывает ее комплементарную цепь с ее комплементарной последовательностью. В контексте настоящего изобретения термин «полинуклеотид» означает полимерную форму нуклеотидов длиной по меньшей мере 10 оснований, либо рибонуклеотидов, либо дезоксинуклеотидов, либо модифицированную форму любого типа нуклеотида. Термин включает одно- и двухцепочечные формы.

[0129] Согласно любому из вышеуказанных вариантов осуществления молекулы нуклеиновых кислот могут быть выделены. Молекулы нуклеиновых кислот, указываемые в настоящем документе как «выделенные» или «очищенные», представляют собой нуклеиновые кислоты, которые (1) были отделены от нуклеиновых кислот геномной ДНК или клеточной РНК их источника происхождения и/или (2) не встречаются в природе.

[0130] Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют:

- H-CDR1-3 и/или L-CDR1-3 первого антигенсвязывающего домена

- H-CDR1-3 и/или L-CDR1-3 второго антигенсвязывающего домена,

- VH и/или VL первого антигенсвязывающего домена,

- VH и/или VL второго антигенсвязывающего домена и/или

- НС и/или LC первого антигенсвязывающего домена,

биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению.

[0131] Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют H-CDR1-3 и L-CDR1-3 первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют H-CDR1-3 и L-CDR1-3 второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодирует НС и LC первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению.

[0132] Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24-46.

[0133] Согласно определенным вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению содержит:

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 24 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 25 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 26 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 27 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 28 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 29 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 40,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 41,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 42,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 43,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 44,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 45,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 36 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 37 и 42,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 38 и 39 или

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 46.

[0134] Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к вектору, подходящему для экспрессии одного или более полипептидов, которые образуют биспецифическую связывающую молекулу, как описано в настоящем документе. В контексте настоящего изобретения термин «вектор» означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Согласно некоторым вариантам осуществления вектором является плазмида, т.е., кольцевая двухцепочечная часть ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. Согласно некоторым вариантам осуществления вектором является вирусный вектор, где дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Согласно некоторым вариантам осуществления векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они введены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный ориджин репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Согласно другим вариантам осуществления векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяин и посредством этого реплицируются вместе с геномом хозяина. Более того, определенные векторы способны управлять экспрессией генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы указаны в настоящем документе как «рекомбинантные экспрессионные векторы» (или просто «экспрессионные векторы»).

[0135] Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность из первого антигенсвязывающего домена, соединенную в рамке считывания со второй нуклеотидной последовательностью из второго антигенсвязывающего домена.

[0136] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению экспрессируются путем вставки ДНК, кодирующих полипептидные компоненты биспецифических связывающих молекул, в экспрессионные векторы, так что ДНК функционально связаны с необходимыми последовательностями контроля экспрессии, такими как последовательности контроля транскрипции и трансляции. Экспрессионные векторы включают плазмиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы (AAV), вирусы растений, такие как вирус мозаики цветной капусты, вирус табачной мозаики, космиды, YAC, эписомы, происходящие от EBV, и тому подобное. Кодирующая последовательность может быть лигирована в вектор таким образом, чтобы последовательности контроля транскрипции и трансляции в векторе выполняли предназначенную для них функцию регулирования транскрипции и трансляции кодирующей последовательности. Экспрессионный вектор и последовательности контроля экспрессии могут быть выбраны таким образом, чтобы они были совместимы с используемой для экспрессии клеткой-хозяином. Нуклеотидные последовательности, которые кодируют разные полипептидные компоненты биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению, могут быть вставлены в одни и те же или отдельные векторы и могут быть функционально связаны с одними и теми же или разными последовательностями контроля экспрессии (например, промоторами). Согласно одному варианту осуществления две или более кодирующих последовательностей вставлены в один и тот же экспрессионный вектор и могут быть функционально связаны с одними и теми же последовательностями контроля экспрессии (например, с общим промотором), с отдельными идентичными последовательностями контроля экспрессии (например, промоторами) или с разными последовательностями контроля экспрессии (например, промоторами). Кодирующие последовательности могут быть вставлены в экспрессионный вектор стандартными методами (например, лигированием комплементарных сайтов рестрикции при фрагменте гена антитела и векторе или лигированием тупых концов, если сайты рестрикции отсутствуют).

Клетки-хозяева и способы получения биспецифической связывающей молекулы

[0137] Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способам получения биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления способ получения биспецифической связывающей молекулы, как определено в настоящем документе, предусматривает предоставление рекомбинантной клетки-хозяина, способной экспрессирование биспецифическую связывающую молекулу (например, клетки-хозяина, как описано в настоящем документе), культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии биспецифической связывающей молекулы, и выделение полученной биспецифической связывающей молекулы.

[0138] Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области техники и включают множество иммортализованных клеточных линий, доступных из Американской коллекции типовых культур (АТСС). К ним относятся, среди прочего, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки NS0, клетки SP2, клетки НЕК-293Т, клетки 293 Freestyle (Invitrogen), клетки NIH-3T3, клетки HeLa, клетки почки новорожденного хомяка (ВНК), клетки почек африканской зеленой мартышки (COS), клетки гепатоклеточной карциномы человека (например, Hep G2), клетки А549 и ряд других клеточных линий. Другие клеточные линии, которые можно использовать, представляют собой клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9 или Sf21, и клеточные линии дрожжей. Клеточные линии могут быть выбраны на основе их уровней экспрессии.

[0139] Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют:

- H-CDR1-3 и/или L-CDRT-3 первого антигенсвязывающего домена

- H-CDR1-3 и/или L-CDR1-3 второго антигенсвязывающего домена,

- VH и/или VL первого антигенсвязывающего домена,

- VH и/или VL второго антигенсвязывающего домена, и/или

- НС и/или LC первого антигенсвязывающего домена,

биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению.

[0140] Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют H-CDR1-3 и L-CDR1-3 первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют H-CDR1-3 и L-CDR1-3 второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют НС и LC первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению.

[0141] Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24-46.

[0142] Согласно определенным вариантам осуществления клетка-хозяин согласно настоящему изобретению содержит:

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 24 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 25 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 26 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 27 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 28 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 29 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 40,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 41,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 42,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 43,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 44,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 45,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 35, 36 и 39,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 37 и 42,

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 31, 38 и 39, или

- нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 и 46.

Фармацевтические композиции

[0143] Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента (или в качестве единственного активного ингредиента) биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению. Фармацевтическая композиция может содержать любую биспецифическую связывающую молекулу, как описано в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления композиции предназначены для облегчения, предупреждения и/или лечения рака, описанного в настоящем документе (например, ROR1-положительного рака).

[0144] В общем, биспецифическая связывающая молекула согласно настоящему изобретению является подходящей для введения в виде состава вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, например, как описано ниже.

[0145] В контексте настоящего изобретения термин «вспомогательное вещество» описывает любой ингредиент, отличный от соединения (соединений) согласно настоящему изобретению. Выбор вспомогательного вещества (веществ) будет в значительной степени зависеть от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние вспомогательного вещества на растворимость и стабильность и природа лекарственной формы. В контексте настоящего изобретения термин «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические агенты и агенты, замедляющие абсорбцию, и тому подобное, которые являются физиологически совместимыми. Некоторыми примерами фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ являются вода, физиологический раствор, физиологический раствор с фосфатным буфером, декстроза, глицерин, этанол и тому подобное, а также их комбинации. Во многих случаях предпочтительно включать в композицию изотонические агенты, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит или хлорид натрия. Дополнительными примерами фармацевтически приемлемых веществ являются смачивающие агенты или небольшие количества вспомогательных веществ, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые увеличивают срок хранения или биспецифическую эффективность связывающей молекулы.

[0146] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению и способы их получения будут очевидны специалистам в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995). Фармацевтические композиции предпочтительно получают в условиях GMP (надлежащей производственной практики).

[0147] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть получена, упакована или продана без упаковки, в виде единичной стандартной дозы или в виде множества единичных стандартных доз. В контексте настоящего изобретения термин «стандартная доза» означает дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента в общем равно дозе активного ингредиента, которую следует вводить субъекту, или удобной части такой дозы, такой как, например, половина или одна треть такой дозы.

[0148] Любой способ введения пептидов, белков или антител, принятый в данной области техники, может быть подходящим образом использован для биспецифических связывающих молекул согласно настоящему изобретению.

[0149] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению являются особенно подходящими для парентерального введения. В контексте настоящего изобретения «парентеральное введение» фармацевтической композиции включает любой путь введения, характеризующийся физическим повреждением ткани субъекта и введением фармацевтической композиции через повреждение ткани, что, как правило, приводит к прямому введению в кровоток, в мышцу или во внутренний орган. Таким образом, парентеральное введение включает без ограничения введение фармацевтической композиции путем инъекции композиции, путем введение композиции через хирургический разрез, путем введения композиции через проникающую в ткань не хирургическую рану и тому подобное. В частности, предполагается, что парентеральное введение включает без ограничения подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутригрудинную, внутривенную, внутриартериальную, интратекальную, внутрижелудочковую, внутриуретральную, внутричерепную, внутриопухолевую и внутрисуставную инъекцию или инфузию, а также методы диалитической инфузии в почки. Также предполагается региональная перфузия. Конкретные варианты осуществления включают внутривенный и подкожный пути введения.

[0150] Составы фармацевтической композиции, подходящие для парентерального введения (например, внутривенного введения), как правило, содержат активный ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический солевой раствор. Такие составы могут быть получены, упакованы или проданы в форме, подходящей для болюсного введения или для непрерывного введения. Композиции для инъекций могут быть получены, упакованы или проданы в виде стандартной лекарственной формы, такой как ампулы или многодозовые контейнеры, содержащие консервант.Составы для парентерального введения включают без ограничения суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных носителях, пасты и тому подобное. Такие составы могут дополнительно содержать один или более дополнительных ингредиентов, включая без ограничения суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. Согласно одному варианту осуществления состава для парентерального введения активный ингредиент предоставляют в сухой (т.е. порошкообразной или гранулированной) форме для восстановления подходящим носителем (например, стерильной апирогенной водой) перед парентеральным введением восстановленной композиции. Составы для парентерального введения также включают водные растворы, которые могут содержать вспомогательные вещества, такие как соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно до значения рН от 3 до 9), но для некоторых применений они могут быть более подходящими в виде стерильного неводного раствора или в виде высушенной формы для использования в сочетании с подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода. Иллюстративные формы для парентерального введения включают растворы или суспензии в стерильных водных растворах, например, водные растворы пропиленгликоля или декстрозы. При желании такие лекарственные формы могут быть буферизованы подходящим образом. Другие подходящие для парентерального введения композиции включают те, которые содержат активный ингредиент в микрокристаллической форме или в липосомальном препарате. Составы для парентерального введения могут быть составлены с немедленным и/или модифицированным высвобождением. Составы с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, импульсное, контролируемое, нацеленное и запрограммированное высвобождение.

Терапевтические применения биспецифических связывающих молекул

[0151] Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению применяют для лечения рака, такого как ROR1-положительный рак, у пациента. Пациентом может быть млекопитающее, например, человек. Было показано, что ROR1 экспрессируется во многих типах опухолей, включая лимфомы и солидные опухоли. При высоких процентах раковых заболеваний у человека происходит экспрессия ROR1. Например, Zhang et al. показали, что при 54% случаев рака яичников, 57% случаев рака ободочной кишки, 77% случаев рака легких, 90% случаев лимфом, 89% случаев рака кожи, 83% случаев рака поджелудочной железы, 73% случаев рака яичек, 43% случаев рака мочевого пузыря, 96% случаев рака матки, 90% случаев рака предстательной железы и 83% случаев рака надпочечников, которые они исследовали, наблюдалось от умеренного до высокого окрашивание анти-ROR1 антителом 4А5 (Zhang et al., Am J Pathol. 181(6): 1903-10 (2012)). Daneshmanesh et al. подобным образом обнаружили почти универсальную экспрессию ROR1 при хроническом лимфоцитарном лейкозе (CLL) и волосатоклеточном лейкозе (HCL) и различные степени экспрессии при других видах рака лимфатической система, таких как лимфома из клеток зоны мантии (MCL), диффузная В-крупноклеточная лимфома (DLBCL)/лимфома маргинальной зоны (MZL), фолликулярная лимфома (FL), хронический миелобластный лейкоз (CML), острый миелоидный лейкоз (AML) и миелома (Daneshmanesh et al., Leuk Lymphoma 54(4):843-50 (2013)). Множество групп продемонстрировали экспрессию ROR1 в подгруппе В-клеточного острого лимфобластного лейкоза (ALL) (см., например, Dave et al., PLoS One 7:e52655 (2012)). ROR1 также экспрессируется в значительной части случаев гепатоцеллюлярного рака (НСС) или немелкоклеточного рака легкого (NSCLC) (публикация патента США 2018/0369406). Кроме того, было показано, что экспрессия ROR1 увеличивается при агрессивных формах рака и коррелирует с плохим прогнозом, таким образом, биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению являются особенно подходящими для лечения агрессивных или запущенных форм рака.

[0152] «Лечить», «лечение» и «обработка» относятся к способам облегчения или устранения биологического нарушения и/или по меньшей мере одного из сопутствующих ему симптомов. В контексте настоящего изобретения «облегчение» заболевания, нарушения или состояния означает снижение тяжести и/или частоты проявления симптомов заболевания, нарушения или состояния. Кроме того, в настоящем документе указание на «лечение» включает указание на лечебное, паллиативное и профилактическое лечение. Лечение рака включает ингибирование роста рака (включая вызов частичной или полной регрессии рака), ингибирование прогрессирования или метастазирования рака, предотвращение рецидива рака или остаточного заболевания и/или продление выживаемости пациента.

[0153] Биспецифическую связывающую молекулу можно вводить в терапевтически эффективном количестве пациенту, страдающему раком, описанным в настоящем документе. «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству вводимого терапевтического средства, которое облегчит до некоторой степени один или более симптомов заболевания, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество противоракового терапевтического средства может, например, привести к уменьшению размера опухоли, увеличению выживаемости, исключению раковых клеток, снижению прогрессирования заболевания, обращению метастазирования или другим клиническим конечным точкам, желаемым специалистами в области здравоохранения.

[0154] Согласно некоторым вариантам осуществления рак, который можно лечить биспецифической связывающей молекулой, описанной в настоящем документе, представляет собой ROR1-экспрессирующий (т.е., ROR1-положительный) рак. Рак может быть идентифицирован как ROR1-экспрессирующий любым подходящим способом определения экспрессии гена или белка, например, гистологией, проточной цитометрией, ОТ-ПЦР или РНК-секвенированем. Раковые клетки, используемые для определения, могут быть получены посредством биопсии опухоли или посредством сбора циркулирующих опухолевых клеток. Согласно определенным вариантам осуществления, если используется анализ на основе антител, такой как проточная цитометрия или иммуногистохимия, рак, экспрессирующий ROR1, представляет собой любой рак с клетками, которые проявляют реакционную способность анти-ROR1 антитела выше, чем у антитела изотипического контроля. Согласно определенным вариантам осуществления, если используется анализ на основе РНК, рак, экспрессирующий ROR1, представляет собой рак, который демонстрируют повышенный уровень РНК ROR1, по сравнению с клеткой отрицательного контроля или раком, который не экспрессирует ROR1.

[0155] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению применяют для лечения гематологических злокачественных опухолей (например, лейкозы и/или лимфомы). Согласно определенным вариантам осуществления биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению применяют для лечения солидных опухолей. Рак, подлежащий лечению, может быть выбран из, например, лимфомы, мелко клеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы маргинальной зоны, В-клеточной лимфомы маргинальной зоны, лимфомы Беркитта, лимфомы из клеток зоны мантии, фолликулярной лимфомы, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, неходжкинской лимфомы, которая подверглась трансформации Рихтера, Т-клеточной неходжкинской лимфомы, лимфоплазмацитоидной лимфомы, макроглобулинемии Вальденстрема, острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, Т-клеточного лейкоза, саркомы, остеосаркомы, саркомы Юинга, почечно-клеточного рака, гепатоклеточной карциномы, рака ободочной кишки, колоректального рака, рака молочной железы, эпителиального плоскоклеточного рака, глиобластомы, меланомы, миеломы, множественной миеломы, рака желудка, рака головного мозга, рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, рака поджелудочной железы, рака шейки матки, рака яичников, рака печени, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, рака яичек, рака щитовидной железы и рака головы и шеи. Согласно определенным вариантам осуществления рак выбран из лимфомы из клеток зоны мантии, рака молочной железы, рака легкого, остеосаркомы костей и саркомы Юинга.

[0156] Согласно некоторым вариантам осуществления подлежащий лечению рак может быть раком, резистентным к другим терапевтическим средствам (например, рак молочной железы с тройным негативным фенотипом). Рак может быть, например, на ранней, промежуточной, поздней или метастатической стадии.

[0157] Согласно некоторым вариантам осуществления пациент, подлежащий лечению биспецифической связывающей молекулой согласно настоящему изобретению, ранее получал противораковую терапию. Согласно другим аспектам пациент ранее не получал противораковую терапию.

[0158] Биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению можно вводить без дополнительных терапевтических лечений, т.е. в качестве независимого лечения (монотерапии). В качестве альтернативы лечение биспецифической связывающей молекулой согласно настоящему изобретению может включать по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое лечение (комбинированная терапия). Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическая связывающая молекула может быть введена или составлена совместно с другим медикаментом/лекарственным средством для лечения рака. Дополнительное лечение может включать, например, химиотерапевтическое, противоопухолевое или антиангиогенное средство, другое противораковое антитело и/или лучевую терапию.

[0159] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению применяют в комбинации с дополнительным терапевтическим средством или биологически активной молекулой (например, для лечения рака, описанного в настоящем документе). Примеры биологически активных молекул включают без ограничения пептиды, белки, ферменты, низкомолекулярные лекарственные средства, пролекарства, углеводы, агенты визуализации, липиды, нуклеозиды, радионуклиды, олигонуклеотиды, токсины, клетки, антибиотики, фунгициды, противовирусные агенты, противовоспалительные агенты, противоопухолевые агенты, сердечно-сосудистые агенты, противотревожные агенты, гормоны, факторы роста, стероидные агенты, токсины микробного происхождения и тому подобное. Согласно некоторым вариантам осуществления дополнительным терапевтическим средством является ингибитор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК), ингибитор мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR), ингибитор фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), ингибитор Янус-киназы/сигнальных трансукторов и активаторов передачи сигнала транскрипции (Jak/STAT), ингибитор В-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2), ингибитор тирозинкиназы селезенки (SYK), ингибитор микротрубочек, ингибитор рецептора эпителиального фактора роста (EGFR), ингибитор поли-АЭР-рибоза полимеразы (PARP), ингибитор киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитор репарации ДНК, сшивающий агент ДНК, нуклеозидный аналог или иммуномодулирующее средство. Согласно некоторым вариантам осуществления дополнительным терапевтическим средством является антитело, такое как ритуксимаб (aHTH-CD20) или бевацизумаб (анти-VEGF), ингибитор тирозинкиназы Брутона, такой как акалабрутиниб или ибрутиниб, ингибитор mTOR, такой как сапанисертиб, эверолимус или BEZ235, ингибитор PI3K, такой как иделалисиб или бупарлисиб, ингибитор передачи сиганла Jak/STAT, такой как руксолитиниб, ингибитор Bcl-2, такой как АВТ-199/венетоклакс, Bcl-2i-1 или Bcl-2i-2, ингибитор SYK, такой как фостаматиниб, ингибитор микротрубочек, такой как паклитаксел или винкристин, ингибитор EGFR, такой как эрлотиниб, ингибитор PARP, такой как олапариб, ингибитор ALK, такой как кризотиниб, ингибитор репарации ДНК, такой как карбоплатин, сшивающий агент ДНК, такой как оксалиплатин/цисплатин, нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин, или иммуномодулирующее средство (IMiD), такое как леналидомид или помалидомид. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительным терапевтическим средством является ибрутиниб, акалабрутиниб, венетоклакс, Bcl-2i-1, Bcl-2i-2, эверолимус, сапанисертиб, иделалисиб, пакритиниб, бупарлисиб, BEZ235, руксолитиниб, паклитаксел, ритуксимаб, ритуксимаб-СНОР, леналидомид, помалидомид, паклитаксел, винкристин, эрлотиниб, кризотиниб, карбоплатин, оксалиплатин/цисплатин, бевацизумаб или гемцитабин.

[0160] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению применяют в комбинации с модулятором иммунных контрольных точек, который усиливает иммунную систему пациента (например, для лечения рака, как описано в настоящем документе). Например, конъюгат применяют с ингибитором иммунной контрольной точки, таким как антитело или производное антитела, антисмысловой олигонуклеотид, малая интерферирующая РНК, аптамер или пептид, нацеленным на лиганд программируемой смерти клетки 1 (PD-L1, также известный как В7-Н1, CD274), белок 1 программируемой смерти клетки (PD-1), CTLA-4, PD-L2 (B7-DC, CD273), LAG3, TIM3, 2 В4, A2aR, В7Н1, В7НЗ, В7Н4, BTLA, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD70, CD80, CD86, CD137, CD160, CD226, CD276, DR3, GAL9, GITR, HAVCR2, HVEM, IDO1, IDO2, ICOS (индуцируемый Т-клеточный костимулятор), KIR, LAIR1, LIGHT, MARCO (рецептор макрофага с коллагеновой структурой), PS (фосфатидилсерин), ОХ-40, SLAM, TIGHT, VISTA, VTCN1 или любую их комбинацию.

[0161] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическую связывающую молекулу согласно настоящему изобретению вводят пациенту в комбинации с Т-клетками (например, Т-клетками, аутологичными или аллогенными для пациента). Согласно конкретным вариантам осуществления, когда пациентом является человек, Т-клетки также являются человеческими. Согласно некоторым вариантам осуществления биспецифическую связывающую молекулу связывают с Т-клетками перед введением пациенту.

[0162] Должно быть понятно, что биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно применять в способе лечения, как описано в настоящем документе, можно применять для лечения, как описано в настоящем документе, и/или можно применять для получения лекарственного средства для лечения, как описано в настоящем документе. Настоящее изобретение также относится к наборам и изделиям, содержащим биспецифические связывающие молекулы согласно настоящему изобретению, как описано в настоящем документе.

Изделия и наборы

[0163] Настоящее изобретение также относится к изделиям, например, наборам, содержащим один или более контейнеров (например, контейнеры одноразового применения или многоразового применения), содержащих фармацевтическую композицию биспецифической связывающей молекулы согласно настоящему изобретению, необязательно дополнительную биологически активную молекулу (например, другое терапевтическое средство) и инструкции для применения. Биспецифическая связывающая молекула и необязательная дополнительная биологически активная молекула могут быть упакованы отдельно в подходящей упаковке, такой как флакон или ампула, изготовленные из химически неактивного стекла или пластмассы. Согласно определенным вариантам осуществления флакон или ампула содержит лиофилизированный порошок, содержащий биспецифическую связывающую молекулу и/или дополнительную биологически активную молекулу. Согласно определенным вариантам осуществления флакон или ампула содержит концентрированный сток-раствор (например, 2×, 5×, 10× или более) биспецифической связывающей молекулы или биологически активной молекулы. Согласно определенным вариантам осуществления изделия, такие как наборы, включают медицинское устройство для введения биспецифической связывающей молекулы и/или биологически активной молекулы (например, шприц и иглу), и/или подходящий разбавитель (например, стерильную воду и физиологический раствор). Настоящее изобретение также относится к способам получения таких изделий.

[0164] Если в настоящем документе не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим раскрытием, имеют значения, которые обычно понимаются специалистами в данной области техники. Иллюстративные способы и материалы описаны ниже, хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, также могут быть использованы при осуществлении на практике или при тестировании согласно настоящему изобретению. В случае расхождений определяющими являются определения согласно настоящему изобретению.

[0165] В общем, терминология, используемая в связи со способами, клеточными культурами и культурами тканей, молекулярной биологией, иммунологией, микробиологией, генетикой, аналитической химией, синтетической органической химией, медицинской и фармацевтической химией, химией белков и нуклеиновых кислот и гибридизацией, описанная в настоящем документе, является хорошо известной и широко используются в данной области техники. Ферментативные реакции и способы очистки проводили в соответствии со спецификациями производителя, как в общем применяется в данной области техники или как описано в настоящем документе.

[0166] Кроме того, если иное не следует из контекста, термины в единственном числе должны включать множественное число, а термины во множественном числе должны включать единственное число. В описании настоящего изобретения и вариантах осуществления слова «иметь» и «содержать» или варианты, такие как «имеет», «имеющий», «содержит» или «содержащий», необходимо понимать, как включающие указанное целое или группу целых, но не исключающие любое другое целое или группу целых.

[0167] Все публикации и другие ссылочные источники, упомянутые в настоящем документе, полностью включены посредством ссылки во всей своей полноте. Хотя ряд документов процитирован в настоящем документе, ссылка на данные документы не является признанием того, что какой-либо из этих документов является частью общеизвестных знаний в данной области техники.

[0168] Для лучшего понимания настоящего изобретения представлены следующие примеры. Эти примеры приведены только в целях иллюстрации и не должны толковаться как ограничивающие объем настоящего изобретения каким-либо образом.

Примеры

[0169] Следующие примеры демонстрируют иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения и не ограничивают объем настоящего изобретения каким-либо образом.

Пример 1. Конструирование и экспрессия анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул

[0170] На эффективность биспецифических связывающих молекул in vivo влияет множество переменных, включая параметры РК, эпитопы, относительные аффинности связывающих компонентов и валентность, а также пространственную конфигурацию паратопов. В настоящее время не существует надежного способа конструирования априори отдельной молекулы с оптимизацией всех этих параметров. Соответственно, многочисленные анти-ROR1/анти-CD3 биспецифические конструкции конструировали, получали и исследовали для систематической оценки воздействия многих из этих параметров.

[0171] Для того, чтобы идентифицировать структуру, которая обеспечивает оптимальную конфигурацию, в частности, наиболее активное относительное пространственное размещение компонентов, связывающихся с ROR1 и CD3, были разработаны различные конструкции, как представлено на Фиг. 1. Хотя различные биспецифические форматы были описаны (см., например, Brinkmann and Kontermann, MABS'9:182-212 (2017)), настоящие усилия сосредоточены на форматах, которые содержат компонент Fc антитела для того, чтобы обеспечить благоприятную фармакокинетику и использовать установленные подходы очистки антител на основе белка А.

[0172] Компонент, связывающий ROR1, используемый в биспецифических связывающих молекулах, продемонстрировал высокую селективность в отношении ROR1 человека и показал безопасность в клинических испытаниях на людях (см., например, Choi et al., Cell Stem Cell 22:951-959 (2018)). Кроме того, биспецифические связывающие молекулы исследовали с компонентами, связывающими CD3, обладающими специфичностью в отношении двух разных эпитопов CD3, с применением последовательностей анти-CD3 scFv на основе антител SP34 и ОКТ3. Антитела CD3 классифицировали на основе различающихся характеристик их эпитопов (Tunnacliffe et al., International Immunology 1:546-550 (1989)). Используя эту систему SP34 отнесли к Группе I, тогда как ОКТ3 отнесли к Группе II.

[0173] Для определенных конструкций применение последовательностей Fc дикого типа позволило определить биспецифические конструкции, которые являются двухвалентными как для ROR1, так и для CD3 (Фиг. 1, А, В и Е). Для других конструкций применение мутаций выступы-во-впадины в области Fc обеспечило экспрессию биспецифических связывающих молекул с различными валентностями для ROR1 и CD3. Например, одна конструкция является двухвалентной для ROR1 и одновалентной для CD3 (Фиг. 1, D), тогда как другая конструкция является одновалентной как для ROR1, так и для CD3 (ФИГ. 1, С).

[0174] Наконец, паратопы ROR1 с измененными аффинностями и валентностями протестировали в сочетании с различными паратопами CD3 для оценки эффекта паратопов CD3 и ROR1 с различными относительными аффинностями/авидностями.

[0175] На основе этих параметров конструирования многочисленные биспецифические конструкции экспрессировали, очищали, а также определяли их характеристики.

Материалы и способы

[0176] Кодон-оптимизированную ДНК, кодирующую биспецифические конструкции, с лидерной последовательностью согласно SEQ ID NO: 110 клонировали в вектор pcDNA3.4, затем вводили в клетки Expi293 посредством транзиентной трансфекции. Клетки выращивали в культурах с объемом 40 мл, содержащих среду для экспрессии Expi293F Expression Medium (№А1435103 по каталогу ThermoFisher). Затем антитело очищали от супернатанта культуры в одну стадию с применением HiTrap MabSelect SuRe (№11-0034-93 по каталогу GE Healthcare). Очищенное антитело хранили в PBS, рН 7,2, и чистоту определяли посредством SDS-PAGE. Чистоту конструкций, содержащих три различные полипептидные цепи, далее определяли посредством SEC с применением колонки TSKgel G3000SWxl 7,8 мм х 380 мм. Подвижная фаза представляла собой 0,1М фосфатный буфер, 0,1М Na₂SO₄, рН 6,7, и колонку прогоняли при скорости потока 0,7 мл/мин.

Результаты

[0177] Последовательности анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул приведены в Таблице 1 (белок) и Таблице 2 (ДНК).

[0178] Большинство конструкций хорошо экспрессировались (17/20 экспрессированных >1 мг, 14/20 экспрессированных >2 мг) и в большинстве случаев были по существу очищены в одну стадию с использованием хроматографии на основе белка А (Таблица 3), как определено с помощью SDS-PAGE.

[0179] Конструкции, не содержащие дисульфид-стабилизированный анти-CD3 scFv, в общем имели более высокую чистоту (>90%) после хроматографии на основе белка А (Таблица 3, сравнение конструкций 2 и 5).

[0180] Анализ SEC проводили для конструкций, состоящих из трех различных полипептидных цепей. В общем, после одной стадии очистки на основе белка А конструкции, состоящие из двух различных цепей (Fc дикого типа), получали при более высокой чистоте, чем конструкции, состоящие из трех различных цепей (гетеромерный Fc) (Таблица 3, сравнение чистоты образцов 1-3 и 7-9 с образцами 13-17).

[0181] В совокупности эти данные демонстрируют, что большинство конструкций хорошо экспрессируются и имеют чистоту >90% после одной стадии очистки на основе белка А.

Пример 2. Связывание анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул с ROR1

[0182] Биспецифические связывающие молекулы с различными конфигурациями, аффинностями в отношении ROR1 и валентностями для ROR1 оценивали в отношении связывания с ROR1 человека с определением влияния этих параметров на цитотоксичность. Определение характеристик связывания биспецифических конструкций 1-20 с ROR1 человека проводили с применением ROR1-трансфицированных клеток МЕС, клеток JeKo-1 и рекомбинантного внеклеточного домена ROR1 (ECD).

Материалы и способы

Анализ связывания с ROR1 с применением клеток и проточной цитометрии [0183] Связывание с ROR1 количественно оценивали с применением как ROR1-трансфицированных клеток МЕС, так и клеток JeKo-1. Для каждого условия применяли 2,5Е5 клеток. Клетки помещали в 50 мкл PBS с 2% FBS. Затем клетки разбавляли равным объемом сток-раствора 2Х тестируемой биспецифической связывающей молекулы. Клетки и антитело совместно инкубировали на льду в течение 20 мин. Затем клетки промывали 3 раза с 300 мкл буфера FACS и ресуспендировали в 100 мкл конъюгата антитела против человеческого Fc-PE (№12499882 по каталогу Invitrogen) и инкубировали на льду с уменьшенным светом в течение 20 мин. Затем клетки промывали 3 раза с 300 мкл буфера FACS и фиксировали с 2% параформальдегида в течение 10 мин при 25°С.Затем клетки промывали 2 раза с 300 мкл буфера FACS и анализировали на анализаторе Miltenyi MACSQuant Analyzer.

Анализ связывания cROR1 с применением рекомбинанмного ROR1-ECD и ELISA

[0184] Связывание биспецифических связывающих молекул с рекомбинантным ROR1 оценивали посредством анализа ELISA с применением двух различных конфигураций. В первой конфигурации белок ROR1 иммобилизовали на 96-луночных планшетах и биспецифические конструкции титровали (подробно изложено далее). Определение характеристик биспецифических связывающих молекул также проводили в отношении связывания с ROR1 с применением второй конфигурации, в которой биспецифические связывающие молекулы иммобилизовали на 96-луночных планшетах и растворимый биотинилированный ROR1 (b-ROR1) титровали (подробно изложено далее).

Анализ ELISA иммобилизованного ROR1

[0185] 96-луночный планшет Costar-3366 покрывали при 50 мкл/лунка с применением 2 мкг/мл человеческого TL1A (№R01-H522Y по каталогу Aero Biosystems) в PBS в течение ночи при 4°С. Планшет промывали один раз с применением PBS, содержащей 0,05% Tween 20 (PBS-T), и блокировали с применением 100 мкл/лунка 5% обезжиренного молока в PBS (5% М-Р) в течение 1 часа при 25°С. Образцы антител серийно двукратно разбавляли с применением 5% М-Р и инкубировали в течение 1 часа при 25°С (50 мкл/лунка). Планшеты промывали три раза с применением PBS-T и 50 мкл/лунка конъюгата антитела против человеческого kappa-HRP (№2060-05 по каталогу Southern Biotech), разведенного 10000-кратно в 5% М-Р, добавляли в течение 1 часа при 25°С. Планшеты промывали три раза с применением PBS-T, добавляли 50 мкл/лунка 1-Step Ultra TMB-ELIS А (№34028 по каталогу Thermo Scientific). Реакцию останавливали посредством добавления 2Н H₂SO₄, и А450 определял с применение планшетного ридера.

Анализ ELISA растворимого ROR1

[0186] Для биотинилирования ROR1 200 мкг человеческого ROR1 (№R01-H522Y по каталогу Aero Biosystems) ресуспендировали в 2 мл воды до 100 мкг/мл и затем объединяли с EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin (№21327 по каталогу Thermo Scientific) при молярном соотношении 1:5 и инкубировали при 25°С в течение 2 часов. Реакцию останавливали посредством добавления 31 мкл 750 мМ гидрохлорида аргинина и хранили при 4°С.

[0187] Для измерения связывания биспецифических конструкций с растворимым ROR1, 96-луночный планшет Costar-3366 покрывали при 50 мкл/лунка с применением 2 мкг/мл козлиного антитела против человеческого kappa (№2060-01 по каталогу Southern Biotech) в PBS в течение ночи при 4°С. Планшет промывали один раз с применением PBS-Т, блокировали с применением 100 мкл/лунка 5% М-Р в течение 1 часа при 25°С, промывали один раз с применением PBS-T и добавляли 2 мкг/мл биспецифической связывающей молекулы, и инкубировали в течение 1 часа при 25°С. Планшет промывали три раза с применением PBS-T. Биотинилированный ROR1 серийно трехкратно разбавляли в 5% М-Р и инкубировали в течение 1 часа при 25°С (50 мкл/лунка). Планшет промывали три раза с применением PBS-T. Для обнаружения связывания с b-ROR1 добавляли 50 мкл/лунка Neutravidin-HRP (№31030 по каталогу Pierce), разбавленный 1:5000 в 1% BSA-PBS, в течение 1 часа при 25°С. Планшет промывали три раза с применением PBS-T, затем добавляли 50 мкл/лунка 1-Step Ultra TMB-ELISA (№34028 по каталогу Thermo Scientific). Реакцию останавливали посредством добавления 2 N H₂SO₄, и А450 определяли с применением планшетного ридера Spectramax.

Результаты

[0188] Определение характеристик трех вариантов анти-ROR1 Fab, каждый отличающийся от родительского антитела одной аминокислотой в H-CDR2, в отношении связывания с человеческим ROR1 проводили с применением скрининга на основе ELISA и связывания с живыми клетками. Два из вариантов, Т32А и Т32Е, проявляли более высокую аффинность, чем родительское Fab (Фиг. 2, Часть А, незакрашенные кружки и квадраты по сравнению с закрашенными кружками), тогда как другой вариант, W1 10Y, показал более низкую аффинность (Фиг. 2, Часть А, треугольники). Определение характеристик относительных аффинностей этих вариантов далее проводили с применением живых ROR1-трансфицированных клеток МЕС.Подобно скринингу на основе ELISA, варианты Т32А и Т32Е показали более высокую аффинность (Фиг. 2, Часть В, незакрашенные кружки и квадраты по сравнению с закрашенными кружками), тогда как W110Y показал более низкую аффинность (Фиг. 2, Часть В, треугольники). Связывание любого из вариантов не было обнаружено при использовании контрольных клеток МЕС, трансфицированных пустым вектором (не показано), что демонстрирует специфичность вариантов в отношении ROR1. Относительные силы связывания вариантов были весьма подобными, независимо от формата анализа. Например, вариант Т32А имел аффинность в 4-А,7 раза выше, чем аффинность родительского антитела, тогда как вариант W110Y имел аффинность в 5,9-6,8 раз ниже, чем аффинность родительского антитела. Эти очень близкие варианты отличаются друг от друга одной-двумя аминокислотами, демонстрируют 27-кратный диапазон активности связывания с ROR1 и позволяют конструировать анти-ROR1/анти-CD3 биспецифические связывающие молекулы с диапазоном аффинности в отношении ROR1, а также в отношении CD3.

[0189] Затем, два дополнительных варианта анти-ROR1 Fab, каждый содержащий различную мутацию CDR легкой цепи в комбинации с мутацией Т32А тяжелой цепи, охарактеризовали в отношении связывания с ROR1 с применением модифицированного варианта скрининга на основе ELISA, описанного ранее. В частности, первую стадию промывки после связывания Fab с иммобилизованным ROR1 заменяли путем помещения планшетов в большой объем PBS-T для продолжающейся один час стадии диссоциации. Это позволило отличить друг от друга варианты с низкой скоростью диссоциации. При использовании модифицированного анализа ELISA два варианта, Т32А (НС) + А25Р (LC) и Т32А (НС) + T69R (LC), показали более сильное связывание, чем Т32А (Фиг. 3). Как описано ранее, вариант Т32А показал более чем 5-кратное улучшение связывания по сравнению с родительским (WT), тогда как Т32А (НС) + А25Р (LC) и Т32А (НС) + T69R (LC) продемонстрировали дальнейшее улучшение связывания относительно родительского Fab (>8- и >13-кратное, соответственно). Эти очень близкие варианты отличаются друг от друга на 1-3 аминокислоты, демонстрируют 80-90-кратный диапазон активности связывания с ROR1 и позволяют сконструировать анти-ROR1/анти-CD3 биспецифические связывающие молекулы с диапазоном аффинности в отношении ROR1, а также в отношении CD3.

[0190] Биспецифические связывающие молекулы исследовали на связывание с ROR1 с применением трех анализов: (1) связывание с живыми клетками и обнаружение посредством проточной цитометрии, (2) связывание с иммобилизованным ROR1, как определено посредством ELISA, и (3) связывание с растворимым, биотинилированным ROR1, как определено посредством ELISA. Независимо от применяемого формата скрининга, все конструкции селективно связывали ROR1 (Фиг. 4-7).

[0191] Селективность в отношении ROR1 продемонстрировали посредством измерения связывания с ROR1-трансфицированными клетками МЕС и контрольными клетками МЕС.Связывание биспецифических связывающих молекул с ROR1-трансфицированными клетками было зависимым от концентрации (Фиг. 4, Часть А) и наблюдали отсутствие связывания с контрольными клетками при любой концентрации (Фиг. 4, Часть В). Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля («Контроль») для обеих клеточных линий.

[0192] Наблюдали вариацию силы связывания биспецифических конструкций с ROR1-трансфицированными клетками МЕС (Фиг. 4, Часть А). Например, двухвалентные для ROR1 конструкции связывались более сильно, чем одновалентные для ROR1 конструкции (Фиг. 4, Часть А, сравнение конструкций 1-3 и 7-9 с 13-15). Эта разница в силе связывания была наиболее очевидной при более низких концентрациях (<100 нг/мл).

[0193] Влияние уровней экспрессии ROR1 на связывание биспецифических конструкций оценивали посредством проточной цитометрии с применением клеток JeKo-1. Клетки JeKo-1 экспрессировали более низкие уровни ROR1 (~13000 копий/клетка), чем ROR1-трансфицированные клетки МЕС (~56000 копий/клетка). Все конструкции связывали JeKo-1 (Фиг. 5). Относительные тенденции связывания, наблюдаемые с использованием ROR1-трансфицированных клеток МЕС, наблюдали с клетками JeKo-1. В частности, одновалентные для ROR1 конструкции в общем связывались слабее, чем двухвалентные конструкции (Фиг. 5, Часть А, сравнение конструкций 14 и 15 с другими конструкциями, Фиг. 5, Часть С, сравнение конструкций 15-17 с другими конструкциями).

[0194] Затем связывание биспецифических связывающих молекул с ROR1 охарактеризовали посредством ELISA с применением рекомбинантно-экспрессированного внеклеточного домена ROR1. ROR1 иммобилизовали на микротитровальном планшете, биспецифические связывающие молекулы титровали и связывание количественно оценивали с применением реагента анти-человеческий kappa-HRP. В соответствии с данными о связывании клеток, все конструкции связывают ROR1 зависимым от концентрации образом (Фиг. 6). Более того, одновалентные для ROR1 конструкции 13-15 связываются менее сильно, чем все двухвалентные конструкции, кроме двух. Активности связывания двухвалентных биспецифических связывающих молекул были подобны родительскому анти-ROR1 IgG (контроль), демонстрируя, что присоединение доменов scFv к молекуле Ig не ингибирует связывание с ROR1. Относительные аффинности биспецифических конструкций, протестированных в этом формате, приведены в Таблице 4.

[0195] Более сильное связывание, наблюдаемое с двухвалентными конструкциями по сравнению с одновалентными конструкциями в клеточных анализах и анализах ELISA, в которых антигене иммобилизован, согласуется с эффектом авидности. Для того, чтобы определить, так ли это, связывание с растворимым мономерным ROR1 оценивали путем иммобилизации биспецифических связывающих молекул на микротитровальном планшете, покрытом козьим анти-человеческий kappa антителом, и титрования биотинилированного ROR1. Все биспецифические связывающие молекулы были активны в этом формате (Фиг. 7), в большинстве случаев не было заметных различий между одновалентными и двухвалентными конструкциями. Эти результаты согласуются с эффектом авидности в зависимости от используемого формата анализа. Более слабое связывание наблюдали с обоими вариантами, в которых анти-CD3 scFv был изменен на аминоконце тяжелой или легкой цепи (конструкции 19 и 20, соответственно), предполагая, что размещение паратопа CD3 в непосредственной близости от паратопа ROR1 может в некоторой степени ингибировать связывание с ROR1.

[0196] Конструкции биспецифических связывающих молекул, имеющие домен связывания с ROR1 с более высокой аффинностью (конструкции 16-18), связывали биотинилированный ROR1 с более высокой аффинностью, чем соответствующие конструкции, которые использовали домен связывания с ROR1 дикого типа (низкая аффинность) (конструкции 9, 19, 20). Биспецифическая конструкция 18 (двухвалентная, более высокая аффинность в отношении ROR1) связывались более сильно, чем соответствующая конструкция 9 (двухвалентная, более низкая аффинность в отношении ROR1). Подобным образом, биспецифические конструкции 16 и 17 (одновалентные, более высокая аффинность в отношении ROR1) связывались более сильно, чем конструкция 15 (одновалентная, более низкая аффинность в отношении ROR1). Эти данные приведены в Таблице 4. Кроме того, биспецифические связывающие молекулы с доменом связывания с ROR1 с более высокой аффинностью связывали растворимый ROR1 с более высокой аффинностью, чем родительский IgG (Контроль).

Пример 3. Интернализация ROR1 анти-ROR1/анти-CD3 биспецифическими связывающими молекулами

[0197] Интернализация и рециклинг ROR1 и биспецифические связывающие молекулы, которые распознают ROR1, могут влиять на терапевтическую эффективность in vivo. Например, связывание, интернализация и разрушение ROR1 до вовлечения Т-клеток, как ожидается, снижает цитотоксичность. Определяли характеристики анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекулах с пятью различными конфигурациями в отношении связывания и интернализации.

[0198] Одновременно с определением характеристик интернализации различных биспецифических конструкций исследовали экспрессию ROR1 на клеточной поверхности с использованием двух различных анти-ROR1 антител. Одно антитело (UC961) распознает тот же эпитоп ROR1, что и биспецифические связывающие молекулы, тогда как другое (4А5) распознает неперекрывающийся эпитоп ROR1.

[0199] Кроме того, связывание биспецифических связывающих молекул на поверхности клетки оценивали после 24 часов инкубации при 37°С для того, чтобы определить, влияет ли продолжительное воздействие на уровни на клеточной поверхности различных связывающих молекул.

[0200] Определяли характеристики интернализации ROR1 биспецифическими связывающими молекулами и рециклинга/повторной экспрессии ROR1 с использованием ROR1-трансфицированных клеток МЕС и проточной цитометрии.

Материалы и способы

Измерение интернализации биспецифических связывающих молекул

[0201] Интернализацию биспецифических связывающих молекул измеряли с использованием метода вытеснения метки, который определяет количество неинтернализованных антител клеточной поверхности через 0, 30, 60, 120, 180 и 240 минут с использованием проточной цитометрии. ROR1-трансфицированные клетки МЕС промывали холодным PBS и ресуспендировали при 1х10⁷ на мл в холодном буфере для инкубации (RPMI с 2% FBS, №16140071 по каталогу Fisher/Gibco). Затем, 3,5х10⁶ клеток аликвотировали в микроцентрифужные пробирки для каждой исследуемой биспецифической конструкции. Равный объем (350 мкл) биспецифической связывающей молекулы объединяли с клетками до конечной концентрации 30 мкг/мл. На основании предыдущих исследований связывания ожидали, что 30 мкг/мл будут насыщающими для более высокой аффинности/авидности двухвалентных для ROR1 конструкций (конструкции 1-12). Клетки и антитела инкубировали на льду в течение 20 минут, пять раз промывали 1 мл холодного буфера FACS (PBS с 2% FBS) и ресуспендировали в 1,4 мл буфера для инкубации. Затем образцы инкубировали при 37°С в течение 0, 30, 60, 120, 180 и 240 минут, после чего 200 мкл каждого образца переносили на лед для остановки интернализации.

[0202] Образцы для каждой конструкции и момента времени делили пополам (по 100 мкл) и центрифугировали. Половину образцов ресуспендировали в 100 мкл вторичных антител (козье анти-человеческий IgG-PE, Fc-гамма, специфическое, №12-4998 по каталогу eBiosciences) для обнаружения связанных биспецифических конструкций. Другую половину окрашивали 100 мкл коктейля UC961-PE и 4A5-AlexaFluor647. UC961 связывает тот же эпитоп, что и биспецифические конструкции, таким образом обнаруживая свободный RORT, не связанный биспецифическими связывающими молекулы. 4А5 связывает ROR1 на другом эпитопе и, следовательно, не конкурирует с биспецифическими связывающими молекулами за связывание. Таким образом, 4А5 обнаруживает общий ROR1 клеточной поверхности (связанный и свободный). Оба окрашенных набора оставляли в буфере для инкубации в течение 20 минут на льду в темноте. Клетки трижды промывали буфером FACS и ресуспендировали в 100 мкл фиксирующего буфера (2% параформальдегид в PBS) в течение 10 минут при 25°С. Затем фиксированные клетки промывали один раз буфером FACS и анализировали.

[0203] Медианную интенсивность флуоресценции (MFI) определяли количественно для каждого пятна. Использовали несколько контрольных условий. MFI РЕ и А1647 измеряли для неокрашенных контрольных клеток для того, чтобы использовать их для вычитания фоновой флуоресценции. Клетки, не подвергшиеся биспецифической конструкции, окрашивали вторичным антителом РЕ для учета неспецифического окрашивания вторичного антитела (вторичный отрицательный контроль) и UC961-PE для получения контроля максимального связывания UC961. Количественный анализ поверхностной биспецифической связывающей молекулы, незанятого эпитопа ROR1 клеточной поверхности и общего ROR1 проводили следующим образом:

Результаты

[0204] Предшествующие эксперименты с анти-ROR1 антителом, используемым для конструирования биспецифических связывающих молекул, описанных в настоящем документе, продемонстрировали: (1) что антитело было быстро интернализовано, и (2) ROR1 снова появлялся на поверхности клетки без связанного антитела. Эта экспрессия на клеточной поверхности была либо результатом рециклинга ROR1 из эндосомных компартментов, либо отражением быстрой активации ROR1 посредством синтеза de novo или перемещения внутриклеточных пулов (см., например, публикацию патента США №2018/0369406). Различные биспецифические конструкции показывали вариабельные модели интернализации и рециклинга/повторной экспрессии ROR1 (Фиг. 8 и Фиг. 9).

[0205] Размещение анти-CD3 scFv на карбоксильном конце тяжелой цепи (конфигурация А, конструкция 1) привело к быстрой интернализации (Фиг. 8, Часть А, кружки). В нулевой момент времени доступный биспецифический эпитоп ROR1 был насыщен, поскольку свободный эпитоп не был обнаружен. ROR1 не рециркулировал на клеточной поверхность или повторно не экспрессировался на значительных уровнях в ходе эксперимента, так как поверхностные уровни общего ROR1 снизились (Фиг. 8, Часть А, квадраты) и не обнаруживался свободный эпитоп ROR1, распознаваемый биспецифической связывающей молекулой (Фиг. 8, Часть А, треугольники). Эти данные согласуются с интернализацией комплекса биспецифической связывающей молекулы-ROR1 и миграцией в лизосомы. Очень похожую интернализацию и миграцию наблюдали с биспецифической связывающей молекулой конструкции 2 и 3 (не показаны).

[0206] Размещение анти-CD3 scFv на карбоксильном конце легкой цепи (конфигурация В, конструкция 7) значительно ингибировало интернализацию (Фиг. 8, Часть В, сравнение степени интернализации относительно конструкции 3 на Фиг. 8, Часть А). В момент времени 0 конструкция полностью насыщала свой эпитоп.Уровни на клеточной поверхности общего ROR1 оказались относительно постоянными (Фиг. 8, Часть В, квадраты). Кроме того, свободный эпитоп ROR1, распознаваемый биспецифической молекулой, увеличивался зависимым от времени образом (Фиг. 8, Часть В, треугольники), что согласуется либо с диссоциацией биспецифической связывающей молекулы с поверхности клетки, либо с рециклингом/повторной экспрессией ROR1. Очень похожую интернализацию и миграцию наблюдали с биспецифической связывающей молекулой конструкции 8 и 9 (не показаны).

[0207] Одновалентное анти-ROR1 (конфигурация С, конструкция 13) также не было эффективно интернализовано (Фиг. 8, Часть С). Предшествующие исследования продемонстрировали, что двухвалентные конструкции были насыщены при 30 мкг/мл (Фиг. 4, Часть А и ФИГ. 5). Однако связывание одновалентных анти-ROR1 биспецифических связывающих молекул при 30 мкг/мл, по-видимому, не насыщает ROR1 клеточной поверхности в этом эксперименте. В момент времени 0 степень связывания конструкции 13 составляла лишь ~80% от соответствующей насыщенной MFI конструкций 1 и 7 в момент времени 0 (Фиг. 8, Часть С, сравнение кружков с квадратами в момент времени 0). Кроме того, свободный эпитоп ROR1, распознаваемый конструкцией 13, также не был обнаружен в момент времени 0 (Фиг. 8, Часть С, треугольники). Таким образом, уровни одновалентной биспецифической молекулы конструкции 13, общего ROR1 клеточной поверхности и незанятого биспецифического эпитопа все оставались относительно постоянными на протяжении всего эксперимента. В совокупности эти данные соответствуют небольшой интернализации биспецифической связывающей молекулы 13. Очень похожую интернализацию и миграцию наблюдали с конструкцией 15 (не показана).

[0208] Размещение анти-CD3 scFv на аминоконце одной тяжелой цепи (конфигурация D, конструкция 19) привело к частичной интернализации (Фиг. 9, Часть А, кружки). ROR1 подвергался рециклингу на клеточную поверхность или повторной экспрессии на значительных уровнях в ходе эксперимента, так как поверхностные уровни общего ROR1 увеличивались (Фиг. 9, Часть А, квадраты) и наблюдали увеличенное зависимое от времени обнаружение эпитопа ROR1, распознаваемого биспецифической связывающей молекулой (Фиг. 9, Часть А, треугольники). Размещение анти-CD3 scFv на аминоконце одной тяжелой цепи привело к интернализации и миграции, очень подобным наблюдаемым для биспецифических связывающих молекул с конфигурацией В (анти-CD3 scFv, слитое с карбоксильным концом легкой цепи).

[0209] Размещение анти-CD3 scFv на аминоконце легкой цепи (конфигурация Е, конструкция 20) привело к частичной интернализации (Фиг. 9, Часть В, кружки). ROR1 подвергался рециклингу на клеточную поверхность или повторной экспрессии на значительных уровнях в ходе эксперимента, так как поверхностные уровни общего ROR1 увеличивались (Фиг. 9, Часть В, квадраты) и наблюдали увеличенное зависимое от времени обнаружение эпитопа ROR1, распознаваемого биспецифической связывающей молекулой (Фиг. 9, Часть В, треугольники). Размещение фрагмента анти-CD3 scFv на аминоконце легкой цепи привело к интернализации и миграции, очень подобным наблюдаемым для биспецифических связывающих молекул с конфигурацией В (анти-CD3 scFv, слитое с карбоксильным концом легкой цепи).

[0210] Для того, чтобы определить долгосрочное влияние миграции и экспрессии ROR1 на уровни биспецифических связывающих молекул, связанных с клеточной поверхностью, клетки инкубировали с биспецифической связывающей молекулой в течение 24 часов, промывали и измеряли биспецифическую связывающую молекулу на поверхности клетки. Количественное определение поверхностной биспецифической связывающей молекулы после 24 часов инкубации показало, что биспецифические связывающие молекулы с анти-CD3 scFv, слитым с карбоксильным концом тяжелой цепи (ФИГ. 10, конструкция 1, кружки), присутствовали при более низких уровнях, чем биспецифические связывающие молекулы с анти-CD3 scFv, слитым с карбоксильным концом легкой цепи (ФИГ. 10, конструкция 7, квадраты), или биспецифические связывающие молекулы с анти-CD3 scFv, слитым с аминоконцом Fc (ФИГ. 10, конструкция 13, треугольники). Уменьшенные уровни на клеточной поверхности конструкций, в которых анти-CD3 scFv слит с карбоксильным концом тяжелой цепи, но не других биспецифических конфигураций, предполагают понижающую регуляцию поверхностного ROR1 и согласуются с наблюдениями, сделанными в экспериментах по интернализации (Фиг. 8).

Пример 4. Связывание и интернализации CD3 анти-ROR1 /анти-CD3 биспецифических связывающих молекул

[0211] Ряд комплексов TCR-CD3 на поверхности Т-клеток отражает комбинацию синтеза и секреции нового белка, интернализации, рециклинга и разрушения. Обработка анти-CD3 антителом ОКТ3, как было показано, селективно удаляет CD3 с поверхности посредством интернализации.

[0212] Три последовательности анти-CD3 применяли в виде конструкций scFv в анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекулах. Две из последовательностей представляли собой разные гуманизированные варианты ОКТ3 (Ab8 и Ab9), тогда как третья последовательность представляла собой третий частично гуманизированный вариант другого анти-CD3 антитела, SP34 (Ab10). Как отмечено выше, ОКТ3 и SP34 связывали отдельные эпитопы, и анти-CD3 антитела классифицировали на основе различающихся характеристик их эпитопов (Turmacliffe et al., International Immunology 1:546-550 (1989)). Посредством применения этой системы SP34 отнесли к Группе I, тогда как ОКТ3 отнесли к группе II. Последовательность на основе SP34, но не последовательности на основе ОКТ3, как ожидалось, перекрестно реагируют с CD3 яванских макак.

[0213] Различные паратопы CD3 оценивали в пяти различных конфигурациях (Фиг. 1, А-Е), и связывание одновалентных анти-CD3 биспецифических конструкций (Фиг. 1, С и D) сравнивали с определенными двухвалентными анти-CD3 конструкциями (Фиг. 1, А, В и Е). Дисульфид-стабилизированные варианты всех трех последовательностей scFv также оценивали в различных биспецифических конфигурациях.

[0214] Оценивали интернализацию различных биспецифических конструкций при отсутствии соединения с ROR1. Связывание и интернализацию биспецифических связывающих молекул охарактеризовали с применением клеток Jurkat и проточной цитометрии.

Материалы и способы

Анализ связывания CD3

[0215] Для количественной оценки связывания CD3 применяли 2,5Е5 клеток Jurkat для каждого условия. 2Х сток-раствор клеток получали ресуспендированием клеток до 5Е6/мл посредством помещения в 50 мкл PBS с 2% FBS. Затем клетки разбавляли равным объемом сток-раствора 2Х тестируемой биспецифической связывающей молекулы. Клетки и антитело совместно инкубировали на льду в течение 20 мин. Затем клетки промывали 3 раза с 300 мкл буфера FACS и ресуспендировали в 100 мкл конъюгата антитела против человеческого Fc-PE (№12499882 по каталогу Invitrogen) и инкубировали на льду с уменьшенным светом в течение 20 мин. Затем клетки промывали 3 раза с 300 мкл буфера FACS и фиксировали с 2% параформальдегида в течение 10 мин при 25°С. Затем клетки промывали 2 раза с 300 мкл буфера.

Анализ интернализации CD3

[0216] Для количественной оценки интернализации биспецифических связывающих молекул 2,5Е5 клеток Jurkat совместно культивировали с 1 мкг/мл биспецифической связывающей молекулы на льду в течение 20 мин. Клетки затем промывали 3 раза с 300 мкл ледяного буфера FACS и ресуспендировали в культуральной среде и инкубировали при 37°С. В различные моменты времени клетки удаляли, промывали с 300 мкл ледяного буфера FACS и обрабатывали, как описано выше.

Результаты

[0217] Оценили пять различных биспецифических конфигураций (Фиг. 1). Связывание с CD3 сохранялось с последовательностями как на основе ОКТ3, так и на основе SP34 во всех исследованных биспецифических конфигурациях, как продемонстрировано посредством связывания с клетками Jurkat. Конструкции связывались с различной степенью (Фиг. 11 и Фиг. 12).

[0218] Среди все биспецифических конфигураций, протестированных с последовательностями ОКТ3 и SP34 (конструкции 1-15), последовательности на основе ОКТ3 связывались с более высокой аффинностью, чем последовательности на основе SP34. Например, конструкции 1 и 2 связывались более сильно, чем 3 (Фиг. 11, Часть А), конструкции 7 и 8 связывались более сильно, чем 9 (Фиг. 11, Часть В) и конструкции 13 и 14 связывались более сильно, чем 15 (Фиг. 11, Часть С). Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля («Контроль»).

[0219] Введение цистеиновых остатков для создания дисульфид-стабилизированных вариантов анти-CD3 scFv не оказало отрицательного влияния на связывание. Связывание дисульфид-стабилизированных вариантов невозможно отличить от соответствующей дисульфид-нестабилизированной последовательности (Фиг. 11, Часть А, сравнение конструкций 1-3 с 4-6, соответственно, и Фиг. 11, Часть В, сравнение конструкций 7-9 с 10-12, соответственно).

[0220] Конфигурация биспецифической связывающей молекулы оказала значительное влияние на связывание анти-CD3 scFv (Фиг. 12). Наиболее сильное связывание с клетками Jurkat наблюдалось при размещении фрагмента анти-CD3 scFv на аминоконце легкой цепи (Фиг. 12, Часть В, конструкция 20) или тяжелой цепи (Фиг. 12, Часть В, конструкция 19). Напротив, более слабое связывание наблюдалось, когда анти-CD3 scFv был размещен на карбоксильном конце легкой цепи (Фиг. 12, Часть В, конструкции 9 и 18). Один фрагмент анти-CD3 scFv, размещенный на аминоконце одной тяжелой цепи (связывание одновалентного CD3, Фиг. 12, Часть В, конструкция 19), связывался так же хорошо или лучше, чем при размещении двух фрагментов анти-CD3 scFv на карбоксильном конце тяжелой цепи (связывание двухвалентного CD3, Фиг. 12, Часть В, конструкция 3) или легкой цепи (связывание двухвалентного CD3, Фиг. 12, Часть В, конструкции 9 и 18). Неспецифический человеческий IgG включали в качестве контроля в одном эксперименте (Фиг. 12, Часть А, «Контроль»), тогда как не связанные с ROR1 х CD 3 биспецифические конструкции (публикация патента США №2017/0233472, согласно SEQ ID NO: 111-113) включали в качестве контроля во втором эксперименте (Фиг. 12, Часть В, «Контроль 1»).

[0221] Подобные тенденции наблюдали с подмножеством этих биспецифических конфигураций с использованием последовательностей ОКТ3. В частности, одновалентный анти-CD3 scFv, слитый с аминоконцом Fc, связывался сильнее (Фиг. 12, Часть А, конструкция 13), затем следовали конструкции, в которых scFv был слит с карбоксильным концом тяжелой цепи (Фиг. 12, Часть А, конструкция 1), а затем следовали конструкции, в которых scFv был слит с карбоксильным концом легкой цепи (Фиг. 12, Часть А, конструкция 7).

[0222] Примечательно, что конфигурация биспецифической связывающей молекулы, по-видимому, является более важным фактором, определяющим силу связывания с CD3, чем валентность паратопа CD3. Этот неожиданный эффект подчеркивается наблюдением, что одновалентные анти-CD3 конструкции, слитые с аминоконцом тяжелой цепи (Фиг. 12, Часть В, конструкция 19) или Fc (Фиг. 12, Часть А, конструкция 13 и Фиг. 12, Часть В, конструкции 15 и 16), связывались так же хорошо или лучше, чем двухвалентные анти-CD3 конструкции, слитые с карбоксильным концом тяжелых и легких цепей (Фиг. 12, Часть В, конструкции 3, 9 и 18).

[0223] В совокупности эти данные демонстрируют, что существует три различных подхода к модуляции силы связывания с CD3. Во-первых, последовательности на основе SP34 и ОКТ3 демонстрируют разную силу связывания по сравнению друг с другом в одних и тех же биспецифических форматах. Во-вторых, на силу связывания последовательностей на основе как SP34, так и ОКТ3 влияет конфигурация биспецифической связывающей молекулы. Наконец, использование гетеромерных конструкций Fc обеспечивает либо одновалентные, либо двухвалентные анти-CD3 биспецифические связывающие молекулы.

[0224] Активация Т-клеток анти-CD3 антителами может привести к повышенной интернализации CD3. После интернализации CD3 может вступить в путь рециклинга и повторно экспрессироваться на клеточной поверхности или может быть направлен в лизосомы и разрушен. Интернализация и разрушение CD3, индуцированные биспецифической связывающей молекулой в отсутствие взаимодействия с опухолевым антигеном (RORT), могут ингибировать цитотоксическую активность биспецифической связывающей молекулы in vivo. Следовательно, биспецифические связывающие молекулы были охарактеризованы в отношении интернализации после связывания с CD3 в отсутствие ROR1 (Фиг. 13).

[0225] После связывания биспецифической связывающей молекулы и промывки при 4°С, клетки Jurkat инкубировали при 37°С. Затем количество биспецифической связывающей молекулы на поверхности клетки количественно определяли в разные моменты времени. Так как биспецифические связывающие молекулы изначально связывались с различной силой (Фиг. 11 и Фиг. 12), интернализацию выражали в процентах от связывания, наблюдаемого в момент времени 0. Количественно определенный таким образом уровень поверхностной биспецифической связывающей молекулы отражает комбинацию интернализации и диссоциации. Тем не менее, по причинам, изложенным ниже, оказалось, что основным фактором, влияющим на поверхностные уровни, была интернализация, а не диссоциация биспецифических связывающих молекул.

[0226] Уровень поверхностной биспецифической связывающей молекулы уменьшался зависимым от времени образом для всех протестированных биспецифических конструкций, хотя степень потери варьировалась. Быструю интернализацию (>50%) наблюдали в течение первых 30 минут для восьми из девяти исследованных конструкций, после чего следовала более медленная, но непрерывная интернализация в течение следующих 3,5 часов. Конструкция 9, состоящая из последовательности на основе SP34, слитой с карбоксильным концом легкой цепи, была интернализована в наименьшей степени за время эксперимента, где приблизительно 50% биспецифической связывающей молекулы все еще определялись на поверхности клетки через 4 часа. Кроме того, конструкции 1 и 3, состоящие из фрагмента анти-CD3 scFv, слитого с карбоксильным концом тяжелой цепи, проявляли промежуточную интернализацию, при этом ~20% все еще обнаруживались на поверхности клетки после 4 ч инкубации.

[0227] Как раскрыто ранее, возможно, что уменьшение окрашивания биспецифической связывающей молекулы клеточной поверхности, наблюдаемое с течением времени, отражает диссоциацию биспецифической связывающей молекулы с поверхности в отличие от интернализации. Однако две биспецифические конструкции, которые показали наименьшую потерю сигнала с течением времени, конструкции 3 и 9, были среди самых слабых из охарактеризованных связывающих конструкций (Фиг. 11, Часть А и Часть В, соответственно), тогда как связывание конструкции 13, которая показала самое сильное связывание в момент времени 0 (Фиг. 11, Часть С), слабо окрашивалось в момент времени 4 ч (8% от начального сигнала). В совокупности эти данные позволяют предположить, что определенные конфигурации, состоящие из фрагментов анти-CD3 scFv на основе SP34, могут интернализовываться в меньшей степени, чем конфигурации, состоящие из фрагментов scFv на основе ОКТ3.

Пример 5. Перенаправленная Т-клеточная токсичность анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул in vitro

[0228] Двадцать анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул исследовали для оценки влияния множества параметров на эффективность антитела в анализах опосредованной Т-клетками цитотоксичности. Исследованные переменные включали эпитоп и валентность анти-CD3, аффинность и валентность анти-ROR1 и различные конфигурации компонентов связывания с CD3 и ROR1.

[0229] Способность к уничтожению конструкций исследовали в отношении панели раковых клеток гематологической и солидной опухоли при различных уровнях экспрессии ROR1. Помимо определения характеристик способности к уничтожению биспецифических связывающих молекул оценивали активацию Т-клеток с использованием CD69 в качестве маркера. Также определяли характеристики высвобождения цитокинов активированными Т-клетками.

Материалы и способы

Анализ цитотоксичности сРВМС человека

[0230] Для анализа цитотоксичности клетки-мишени ресуспендировали до 4Е5 клеток/мл в RPMI (без фенолового красного), 10% FBS, содержащей пенициллин-стрептомицин. Затем 2Е4 клеток/лунка (50 мкл/лунка) переносили на 96-луночный планшет и помещали в инкубатор при 37°С на 1 час.Планшеты с круглым дном использовали для суспендирования клеток и планшеты с плоским дном для прикрепленных клеточных линий. РВМС человека выделяли, как описано ниже. РВМС ресуспендировали до 2Е6 клеток/мл, а затем 2Е5 клеток/лунка (100 мкл/лунка) добавляли в лунки, содержащие клетки-мишени. Если не указано иное, соотношение используемых РВМС (эффекторных клеток) и опухолевых клеток (мишени) составляло 10:1 (соотношение Е: Т). Клетки-мишени и РВМС смешивали и помещали в инкубатор при 37°С на 1 час.Биспецифические связывающие молекулы разбавляли до соответствующей концентрации в среде и 50 мкл добавляли к смеси клеток-мишеней и РВМС, а затем помещали в инкубатор на 24 часа при 37°С. Для каждого эксперимента включали следующие контроли: (1) только среда (Среда), (2) среда, отрегулированная для лизисного буфера (Adj), (3) только РВМС (РВМС), (4) только клетки-мишени для спонтанного высвобождения LDH (SR), (5) только клетки-мишени для максимального высвобождения LDH (MR) и (6) клетки-мишени и РВМС без биспецифической связывающей молекулы (AICC).

Выделение РВМС

[0231] Нижнюю камеру конических пробирок SepMate-50 (StemCell Technologies) заполняли 15 мл фиколла. Кровь получали от нормальных доноров без идентифицирующей личность информации в пробирках для сбора крови с гепарином и смешивали при соотношении 1: 1 со стерильной PBS при 25°С.Разбавленную кровь наслаивали на верхнюю камеру пробирок SepMate-50 и центрифугировали при 1200 х g в течение 15 мин при 25°С с системой остановки. Для получения РВМС (содержимое верхней камеры) пробирки SepMate-50 быстро переворачивали в новую коническую пробирку с объемом 50 мл. Затем клетки трижды промывали холодным 5% FBS в PBS при центрифугировании при 500xg в течение 3 минут.Наконец, клетки ресуспендировали в 10 мл среды (RPMI без фенолового красного, 10% FBS, содержащая пенициллин-стрептомицин) и отбирали аликвоту для подсчета клеток. Затем клетки использовали для посева для анализа цитотоксичности.

Количественное определение высвобождения LDH

[0232] Для количественного определения высвобождения LDH после 24 ч инкубации в лунки Adj и MR добавляли 20 мкл 10Х лизисного буфера и содержимое каждой лунки переносили в 96-луночный планшет с V-образным дном и центрифугировали при 500 × g в течение 5 минут.Затем 170 мкл супернатанта переносили в отдельный 96-луночный планшет для использования в последующих анализах. В свежем 96-луночном планшете с прозрачным дном 50 мкл супернатанта объединяли с 50 мкл CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay (№G1780 по каталогу Promega), и планшет инкубировали в темноте при 25°С в течение 30 минут.Наконец, 50 мкл стоп-раствора добавляли до считывания оптической плотности при 490 нМ. Процент (%) высвобождения LDH вычисляли в соответствии с инструкциями производителя.

Оценка активации Т-клеток

[0233] Повышающую регуляцию CD69 применяли для определения характеристик ранней активации Т-клеток. Количественное определение CD69 проводили с применение проточной цитометрии. Кратко, осажденные клетки фиксировали ресуспендированием в 100 мкл 2% PFA в PBS и инкубировали в течение 10 мин при 25°С.Клетки дважды промывали с 300 мкл PBS, ресуспендировали в 150 мкл PBS и хранили при 4°С в темноте до использования. Затем клетки собирали центрифугированием, ресуспендировали в 100 мкл коктейля красителей и инкубировали в течение 20 мин при 4°С в темноте. Коктейль красителей состоял из анти-человеческий CD8 клона SKI Pacific Blue (№344717 по каталогу BioLegend), разбавленного при 1:75, РЕ/Су7 анти-человеческий CD69 клона FN50 (№310911 по каталогу BioLegend) при разбавлении 1: 500 и мышиного анти-человеческий ROR1 клона 4А5, разбавленного при 1: 500 в PBS. Затем клетки трижды промывали с 300 мкл холодного PBS и ресуспендировали в 150 мкл 2% FBS в PBS. Образцы анализировали на анализаторе Mitenyi MACSQuant Analyzer.

Количественное определение высвобождения цитокинов из РВМС в анализе перенаправленных Т-клеток

[0234] Для измерения высвобождения цитокинов применяли набор MSD® V-PLEX Cytokine Panel 1 Human Kit для одновременного измерения IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 и TNF-α. Анализ проводили согласно инструкциям производителя. Кратко, планшет с V-plex Cytokine Panel 1 промывали 3 раза с 150 мкл/лунка промывочного буфера (PBS с 0,05% Tween-20). Затем 50 мкл разбавленных образцов и калибровочных стандартов добавляли на лунку. Планшет герметизировали клеящейся пленкой для планшетов и инкубировали на шейкере в течение ночи при 4°С, 500 оборотов в минуту. На следующий день планшет промывали 3 раза 150 мкл/лунка промывочного буфера и инкубировали с 25 мкл раствора детекторных антител на шейкере в течение 2 часов при комнатной температуре. Планшет промывали еще 3 раза промывочным буфером. Наконец, 150 мкл буфера для считывания Т добавляли перед анализом с использованием устройства MSD.

Результаты

[0235] Антиген-зависимое уничтожение ROR1-трансфицированных клеток МЕС наблюдали для большинства протестированных биспецифических конструкций, хотя относительные эффективности варьировались. Иллюстративные профили титрования показаны на Фиг. 14, Часть А (конструкции с конфигурациями А, В и С) и на Фиг. 15, Часть А (конструкции с конфигурациями А, В, С, D и Е). Профили титрования конструкций 2, 8 и 14 (не показаны) подобны профилям титрования конструкций 1, 7 и 13, соответственно.

[0236] Как ожидалось, абсолютная эффективность биспецифических связывающих молекул варьировалась в некоторой степени при применении различных доноров РВМС.Тем не менее, относительны эффективности различных конструкций значительно не колебались. Например, конструкция биспецифической связывающей молекулы 9 была стабильно одной из самых активных и для ROR1-трансфицированных клеток-мишеней МЕС проявляла ЕС₅₀<0,1 нг/мл для одного донора (Фиг. 14, Часть А) и 1,1 нг/мл для второго донора (Фиг. 15, Часть А).

[0237] Все конструкции 1-3, 7-9 и 13-15 показали селективное уничтожение при 1 мкг/мл (5 нМ для конструкций 1-3 и 7-9, 8 нМ для конструкций 13-15 (Фиг. 16, черные полосы). Зависимое от антигена уничтожение было продемонстрировано отсутствием высвобождения LDH в образцах, которые не содержали клетки-мишени (Фиг. 16, «РВМС») или антитело (Фиг. 16, «нет biAb»), или когда нетрансфицированные клетки МЕС применяли в качестве клеток-мишеней (Фиг. 16, серые полосы). Напротив, контрольная анти-CD19/анти-CD3 биспецифическая связывающая молекула (№BSAB-L002 по каталогу Creative Biolabs) индуцировала цитотоксичность как ROR1-трансфицировнных, так и нетрансфицированных клеток МЕС (Фиг. 16, «CD19 × CD 3»). Биспецифические конструкции 16-20 не исследовали в этом эксперименте.

[0238] Активацию Т-клеток в культурах оценивали, исследуя повышающую регуляцию CD69, раннего маркера активации Т-клеток. В соответствии с данными цитотоксичности, активация наблюдалась для всех конструкций, кроме №17 и №19, при концентрации 1 мкг/мл (Фиг. 14, Часть В, Фиг. 15, Часть В). Для более эффективных биспецифических связывающих молекул активация наблюдалась при более низких концентрациях (Фиг. 14, Часть В, сравнение 7 с 3, Фиг. 15, Часть В, сравнение 18 с 3).

[0239] Активация Т-клеток, как оценивали по повышенной экспрессии CD69, в общем отражает цитотоксическую активность биспецифических связывающих молекул. Однако были примеры, когда активация CD69 не коррелировала напрямую с цитотоксичностью (Фиг. 19, сравнение 7 и 9, Фиг. 20, сравнение 7 с 8 и 9).

[0240] Активация Т-клеток была зависимой от антигена (Фиг. 17). Т-клетки, совместно культивированные с ROR1^-/CD19⁺ клетками МЕС, активировались в присутствии контрольной CD19 × CD3 биспецифической связывающей молекулы (Фиг. 17, Часть А, слева), но не в присутствии ROR1 биспецифических связывающих молекул (Фиг. 17, Часть А, справа). Однако, когда Т-клетки совместно культивировали с ROR1-трансфицированными клетками МЕС (ROR1^-/CD19⁺), Т-клетки активировались в присутствии ROR1 биспецифических связывающих молекул (Фиг. 17, Часть В, справа). Эти данные показывают, что ROR1 необходим для активации Т-клеток биспецифическими конструкциями, охарактеризованными в данном исследовании.

[0241] Далее исследовали ROR1-зависимо уничтожение различных клеток-мишеней человека биспецифическими связывающими молекулами. ROR1-зависимо уничтожение клеток JeKo-1, клеточная линия лимфомы из клеток зоны мантии, наблюдали со всеми биспецифическими связывающими молекулами конфигураций А, В, С и Е, хотя и с разными эффективностями. Иллюстративные профили титрования показаны на Фиг. 18, Часть А (конструкции 1-15) и Фиг. 19, Часть А (конструкции 16-20). В соответствии с наблюдениями, сделанными с ROR1-трансфицированными клетками МЕС, активация Т-клеток в общем отражала относительную цитотоксичность биспецифических связывающих молекул (Фиг. 18, Часть В, Фиг. 19, Часть В).

[0242] Вторую клеточную линию лимфомы из клеток зоны мантии, клетки Mino, также протестировали в качестве линии клеток-мишеней. Все три дисульфид-нестабилизированные конструкции с конфигурацией В проявили высокую активность в отношении клеток Mino (Фиг. 20, Часть А), причем последовательность CD3 на основе SP34 (конструкция 9) была наиболее эффективной. Представляет интерес тот факт, что конструкция 9 меньше активировала Т-клетки (как определено посредством повышающей регуляции CD69), чем конструкции на основе ОКТ3 (Фиг. 20, Часть В).

[0243] Подобным образом, ROR1-зависимое уничтожение клеточной линии молочной железы MDA-MB-468 наблюдали при различных эффективностях для биспецифических конфигураций А, В, С и Е. Иллюстративные профили титрования показаны на Фиг. 21, Часть А (конструкции 1-15) и Фиг. 22, Часть А (конструкции 16-20). В соответствии с наблюдениями, сделанными с ROR1-трансфицированными клетками МЕС и клетками JeKo-1, активация Т-клеток в общем отражала относительную цитотоксичность биспецифических связывающих молекул (Фиг. 21, Часть В, Фиг. 22, Часть В).

[0244] Определили характеристики индукции высвобождения цитокинов после активации Т-клеток для перенаправленного уничтожения клеток JeKo-1, ROR1-трансфицированных клеток МЕС и mock-трансфицированных (ROR1^-) клеток МЕС.Иллюстративные графики зависимости от дозы показаны для конструкций 7, 9, 18, 20 и контрольной ROR1xCD3 биспецифической связывающей молекулы (публикация патента США №2017/0233472) (Фиг. 23 (TNF-α), Фиг. 24 (IFN-γ), Фиг. 25 (IL-2), Фиг. 26 (IL-4), Фиг. 27 (IL-6), Фиг. 28 (IL-10)). Зависимую от дозы продукцию цитокинов (TNF-a, IFN-y, IL-2, IL-4, IL-6 и IL-10) наблюдали для клеток JeKo-1 (Часть А) и ROR1-трансфицированных клеток МЕС (Часть В), но не для mock-трансфицированных (ROR1^-) клеток МЕС (Часть С), для всех протестированных конструкций. ROR1-трансфицированные клетки МЕС экспрессировали более высокие уровни ROR1, чем клетки JeKo-1 (Таблица 5) и были более чувствительны к протестированным биспецифическим связывающим молекулам, чем клетки JeKo-1, что демонстрирует важное значение уровней экспрессии мишени. Секреция цитокинов была зависимой от ROR1. Инкубация 1 мкг/мл конструкций с mock-трансфицированными (ROR1^-) клетками МЕС (Часть С) не индуцировала секрецию какого-либо из цитокинов при уровнях, значительно выше исходного уровня (нет контроля биспецифического антитела). Напротив, инкубация ROR1 × CD3 биспецифических связывающих молекул («Контроль 1») с mock-трансфицированными (ROR1^-) клетками МЕС привела к некоторой секреции воспалительного цитокина IFN-γ (Фиг. 24, Часть С). За исключением IL-6, контроль 1 индуцировал более высокий общий уровень секреции цитокинов при тестировании с клетками JeKo-1. Напротив, все конструкции, включая контроль 1, индуцировали подобные уровни секреции цитокинов при тестировании с трансфицированными клетками МЕС, более высоко экспрессирующими ROR1.

[0245] Данные по активности некоторых из биспецифических связывающих молекул в отношении различных клеток-мишеней представлены в Таблице 5.

[0246] В общем, перенаправленное Т-клеточное уничтожение различных линий клеток-мишеней анти-ROR1/анти-CD3 биспецифическими связывающими молекулами с диапазоном свойств и конфигураций выявило определенные тенденции.

[0247] На основании анализов цитотоксичности in vitro с применением РВМС человека в качестве эффекторных клеток и различных линий клеток-мишеней, конфигурации В, Е и С имели тенденцию быть более эффективным, чем конфигурации А и D. Относительные эффективности на основе конфигураций могут отражать относительное пространственное расположение плечей, связывающих CD3 и ROR1. Эффективность может также отражать влияние различных конфигураций на миграцию биспецифических связывающих молекул. Например, биспецифические связывающие молекулы конфигурации В и С не интернализуются так же быстро или в той же степени, как биспецифические связывающие молекулы конфигурации А.

[0248] Хотя последовательности на основе ОКТ3, как оказалось имеют более высокую аффинность в отношении последовательностей на основе CD3, чем на основе SP34, биспецифические связывающие молекулы с двухвалентными последовательностями на основе SP34 часто были более эффективными. Повышенная активность может отражать аффинность или, дополнительно или альтернативно, различный эпитоп, распознаваемый SP34. Представляет интерес тот факт, что когда оценивали биспецифические связывающие молекулы с одновалентным связыванием с CD3, тенденция была иной. В некоторых случаях последовательности на основе ОКТ3 были более эффективными, чем последовательности на основе SP34 (Фиг. 14, сравнений конструкций 13 и 15).

[0249] Не наблюдалось прямой корреляции между уровнями экспрессии ROR1 в клетках-мишенях и цитотоксичностью (Таблица 5). Тем не менее, вариант с более высокой аффинностью анти-ROR1 антитела был более эффективным, чем исходная последовательность WT. Это может иметь повышенное значение в случаях, когда уровни экспрессии ROR1 являются более низкими.

[0250] Результаты этих экспериментов показывают, что хотя компоненты связывания с CD3 и ROR1 могут быть оптимизированы и охарактеризованы отдельно, наиболее активные биспецифические связывающие молекулы могут быть идентифицированы только посредством эмпирического тестирования различных объединений связывающих компонентов с применением различных биспецифических конфигураций. Эксперименты показали, что конструкции 9 и 18 (конфигурация В) неизменно входили в число самых эффективных анти-ROR1/анти-CD3 биспецифических связывающих молекул. Это особенно примечательно, так как эксперименты по связыванию с CD3 продемонстрировали, что эти конструкции были среди самых слабо связывающихся с клетками Jurkat в отсутствие ROR1. Ожидается, что это будет полезным признаком, так как активация и интернализация CD3 на Т-клетках будет минимальной до тех пор, пока ROR1 не будет включен в микросреду опухоли.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ВЕЛОСБАЙО ИНК.

<120> АНТИ-ROR1/АНТИ-CD3 БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ

<130> 024651.WO004

<140>

<141>

<150> 62/852,039

<151> 2019-05-23

<160> 114

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 701

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala

465 470 475 480

Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly

500 505 510

Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg

515 520 525

Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala

530 535 540

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr

545 550 555 560

Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly

565 570 575

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

595 600 605

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val

610 615 620

Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg

625 630 635 640

Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

645 650 655

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu

660 665 670

Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn

675 680 685

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

690 695 700

<210> 2

<211> 701

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 2

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly

450 455 460

Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala

465 470 475 480

Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly

500 505 510

Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr

515 520 525

Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser

530 535 540

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr

545 550 555 560

Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

565 570 575

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

595 600 605

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val

610 615 620

Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg

625 630 635 640

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

645 650 655

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

660 665 670

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn

675 680 685

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

690 695 700

<210> 3

<211> 711

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 3

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

465 470 475 480

Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn

500 505 510

Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

515 520 525

Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

530 535 540

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe

545 550 555 560

Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

565 570 575

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

580 585 590

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser

595 600 605

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

610 615 620

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val

625 630 635 640

Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn

645 650 655

Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly

660 665 670

Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala

675 680 685

Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln

690 695 700

Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

705 710

<210> 4

<211> 701

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 4

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala

465 470 475 480

Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly

500 505 510

Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg

515 520 525

Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala

530 535 540

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr

545 550 555 560

Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly

565 570 575

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

595 600 605

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val

610 615 620

Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg

625 630 635 640

Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

645 650 655

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu

660 665 670

Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn

675 680 685

Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

690 695 700

<210> 5

<211> 701

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly

450 455 460

Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala

465 470 475 480

Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly

500 505 510

Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr

515 520 525

Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser

530 535 540

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr

545 550 555 560

Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

565 570 575

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

595 600 605

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val

610 615 620

Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg

625 630 635 640

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

645 650 655

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

660 665 670

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn

675 680 685

Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

690 695 700

<210> 6

<211> 711

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 6

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

465 470 475 480

Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala

485 490 495

Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn

500 505 510

Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

515 520 525

Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

530 535 540

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe

545 550 555 560

Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

565 570 575

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

580 585 590

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser

595 600 605

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

610 615 620

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val

625 630 635 640

Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn

645 650 655

Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly

660 665 670

Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala

675 680 685

Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Cys

690 695 700

Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

705 710

<210> 7

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 8

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 8

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 9

<211> 477

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

145 150 155 160

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

180 185 190

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

245 250 255

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430

Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470 475

<210> 10

<211> 477

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

145 150 155 160

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

180 185 190

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

245 250 255

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430

Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470 475

<210> 11

<211> 487

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

145 150 155 160

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

165 170 175

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

180 185 190

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

210 215 220

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

225 230 235 240

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu

245 250 255

Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

260 265 270

Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

275 280 285

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

290 295 300

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

305 310 315 320

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

325 330 335

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

340 345 350

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

355 360 365

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

370 375 380

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

385 390 395 400

Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

405 410 415

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

420 425 430

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser

435 440 445

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

450 455 460

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

465 470 475 480

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485

<210> 12

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 12

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 13

<211> 487

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 13

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

145 150 155 160

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

165 170 175

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

180 185 190

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

210 215 220

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

225 230 235 240

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu

245 250 255

Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

260 265 270

Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

275 280 285

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

290 295 300

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

305 310 315 320

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

325 330 335

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

340 345 350

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

355 360 365

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

370 375 380

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

385 390 395 400

Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

405 410 415

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

420 425 430

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser

435 440 445

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

450 455 460

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

465 470 475 480

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485

<210> 14

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 14

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 15

<211> 711

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

145 150 155 160

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

165 170 175

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

180 185 190

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

210 215 220

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

225 230 235 240

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

245 250 255

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser

260 265 270

Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr

275 280 285

Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr Asn Ile His Trp Val Arg Gln

290 295 300

Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp

305 310 315 320

Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp

340 345 350

Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe

355 360 365

Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

370 375 380

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser

385 390 395 400

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

405 410 415

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

420 425 430

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

435 440 445

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

450 455 460

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu

465 470 475 480

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

485 490 495

Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

500 505 510

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

515 520 525

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

530 535 540

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

545 550 555 560

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

565 570 575

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

580 585 590

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

595 600 605

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

610 615 620

Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

625 630 635 640

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

645 650 655

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser

660 665 670

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

675 680 685

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

690 695 700

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710

<210> 16

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 17

<211> 469

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 17

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

225 230 235 240

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

245 250 255

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

260 265 270

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val

275 280 285

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

290 295 300

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

305 310 315 320

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

325 330 335

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

355 360 365

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

370 375 380

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

385 390 395 400

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

405 410 415

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

420 425 430

Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr

435 440 445

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr

450 455 460

Lys Leu Glu Ile Lys

465

<210> 18

<211> 469

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 18

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

225 230 235 240

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

245 250 255

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

260 265 270

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

275 280 285

Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

290 295 300

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

305 310 315 320

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

325 330 335

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

355 360 365

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

370 375 380

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

385 390 395 400

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

405 410 415

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

420 425 430

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr

435 440 445

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr

450 455 460

Lys Leu Glu Ile Lys

465

<210> 19

<211> 479

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 19

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

225 230 235 240

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

245 250 255

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

260 265 270

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

275 280 285

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

290 295 300

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

305 310 315 320

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

325 330 335

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

340 345 350

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

355 360 365

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

370 375 380

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

385 390 395 400

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

405 410 415

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

420 425 430

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

435 440 445

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

450 455 460

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

465 470 475

<210> 20

<211> 469

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 20

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

225 230 235 240

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

245 250 255

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile

260 265 270

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val

275 280 285

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

290 295 300

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

305 310 315 320

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

325 330 335

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

355 360 365

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

370 375 380

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

385 390 395 400

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

405 410 415

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

420 425 430

Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr

435 440 445

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr

450 455 460

Lys Leu Glu Ile Lys

465

<210> 21

<211> 469

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

225 230 235 240

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

245 250 255

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met

260 265 270

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

275 280 285

Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

290 295 300

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

305 310 315 320

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

325 330 335

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr

355 360 365

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile

370 375 380

Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln

385 390 395 400

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu

405 410 415

Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

420 425 430

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr

435 440 445

Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr

450 455 460

Lys Leu Glu Ile Lys

465

<210> 22

<211> 479

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 22

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

225 230 235 240

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

245 250 255

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val

260 265 270

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

275 280 285

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

290 295 300

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

305 310 315 320

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

325 330 335

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

340 345 350

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

355 360 365

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

370 375 380

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

385 390 395 400

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

405 410 415

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

420 425 430

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

435 440 445

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

450 455 460

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

465 470 475

<210> 23

<211> 479

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

145 150 155 160

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr

165 170 175

Ala Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe

180 185 190

Arg Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser

210 215 220

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr

225 230 235 240

Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

245 250 255

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr

260 265 270

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys

275 280 285

Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

290 295 300

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln

305 310 315 320

Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe

325 330 335

Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe

340 345 350

Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys

355 360 365

Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro

370 375 380

Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu

385 390 395 400

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp

405 410 415

Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp

420 425 430

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys

435 440 445

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln

450 455 460

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

465 470 475

<210> 24

<211> 2103

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 24

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctca agttcaactg 1380

gtgcaatccg gtggcggcgt tgtccagcct ggaagatctc tgagactgag ctgcaaggcc 1440

agcggctaca cattcacccg gtacaccatg cactgggttc gccaggctcc aggcaaaggc 1500

ttggagtgga tcggctacat caaccccagc cggggctaca ccaactacaa tcagaaagtg 1560

aaggaccgct tcacaatcag ccgggacaac tccaagaaca ccctgtacct gcagatggac 1620

tccctgagag ccgaggatac cgccgtgtac tactgcgccc ggtactacga cgatcactac 1680

agcctggatt attggggaca gggcaccacc gtgactgtgt caagcggtgg cggaggaagc 1740

ggaggcggcg gttctggtgg tggtggtagc ggaggtggtg gcagcgatat ccagatgaca 1800

cagagcccta gcagcctgtc tgccagcgtg ggagacagag tgaccatcac atgtagcgcc 1860

agctccagcg tgtcctacat gaactggtat cagcaaaagc ccggcaaggc ccctaagcgg 1920

tggatctacg atacaagcaa gctggcctct ggcgtgccat ccagattttc tggcagcggc 1980

tctggcaccg acttcacctt caccataagc agcctgcagc ctgaggacat tgccacatat 2040

tactgccagc agtggtccag caatcctttc acctttggcc agggcacaaa gctcgagatc 2100

aag 2103

<210> 25

<211> 2103

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 25

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctca agttcaactg 1380

gtgcagtctg gcgctgaagt gaagaaacct ggcgcctccg tgaaggtgtc ctgtaaagcc 1440

agcggctaca cattcacccg gtacaccatg cactgggttc gccaagctcc aggacaaggc 1500

ttggagtgga tgggctacat caaccccagc cggggctaca ccaactacaa tcaaaagttt 1560

aaggatcgcg tgaccctgac caccgacaag agcagctcta cagcctacat ggaactgagc 1620

agcctgcgga gcgaagatac cgccgtgtac tactgcgccc ggtactacga cgatcactac 1680

agcctggatt attggggaca gggcaccctc gtgactgtgt caagcggtgg cggaggaagc 1740

ggaggcggcg gttctggtgg tggtggtagc ggaggtggtg gcagcgatat ccagatgaca 1800

cagagcccta gcagcctgtc tgccagcgtg ggagacagag tgaccatcac atgtagcgcc 1860

agctccagcg tgtcctacat gaattggtat cagcaaaagc ccggcaaggc ccctaagcgg 1920

ctgatctacg atacaagcaa gctggcctct ggcgtgccat ccagattttc tggcagcggc 1980

tctggcaccg acttcaccct gacaatatct agcctgcagc ctgaggactt cgccacatat 2040

tactgccagc agtggtccag caatcccttc acctttggcc agggcaccaa gctggaaatc 2100

aag 2103

<210> 26

<211> 2133

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 26

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctga agttcagctg 1380

gttgaatctg gcggcggact ggttcaacct ggcggatctc tgagactgag ctgtgccgcc 1440

tccggcttca ccttcaatac ctacgccatg aattgggttc gacaagcccc aggcaaaggc 1500

ctggaatggg tcgccagaat cagaagcaag tacaacaact acgccacgta ctacgccgac 1560

agcgtgaagg gcagattcac catcagccgg gacgactcca agaacaccct gtacctgcag 1620

atgaactccc tgagagccga ggataccgcc gtgtactatt gtgtgcggca cggcaacttc 1680

ggcaacagct acgtgtccta ctttgcctat tggggacagg gcaccaccgt gactgtttct 1740

agcggtggcg gaggaagtgg tggcggcggt agcggaggtg gtggtagcgg aggcggaggt 1800

tctgagatcg tggttacaca gagccccgcc acactgagtg tgtctccagg cgaaagagcc 1860

actctgagct gcagatcttc tacaggcgcc gtgacagccg ccaattacgc caattgggtg 1920

caagagaagc ccggccaggc tttcagagga ctgattggcg gagccaacaa gagagcccct 1980

ggcgttccag ccagattttc tggcagtctg tctggcgacg aggctaccct gacaatcagc 2040

agcctgcaga gcgaggactt cgccgtgtat tactgcgccc tgttctacag caacctgtgg 2100

gtgttcggcc agggcacaaa gctggaaatc aag 2133

<210> 27

<211> 2103

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 27

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctca agttcaactg 1380

gtgcaatccg gtggcggcgt tgtccagcct ggaagatctc tgagactgag ctgcaaggcc 1440

agcggctaca cattcacccg gtacaccatg cactgggttc gccaggctcc aggcaaatgt 1500

ttggagtgga tcggctacat caaccccagc cggggctaca ccaactacaa tcagaaagtg 1560

aaggaccgct tcacaatcag ccgggacaac tccaagaaca ccctgtacct gcagatggac 1620

tccctgagag ccgaggatac cgccgtgtac tactgcgccc ggtactacga cgatcactac 1680

agcctggatt attggggaca gggcaccacc gtgactgtgt caagcggtgg cggaggaagc 1740

ggaggcggcg gttctggtgg tggtggtagc ggaggtggtg gcagcgatat ccagatgaca 1800

cagagcccta gcagcctgtc tgccagcgtg ggagacagag tgaccatcac atgtagcgcc 1860

agctccagcg tgtcctacat gaactggtat cagcaaaagc ccggcaaggc ccctaagcgg 1920

tggatctacg atacaagcaa gctggcctct ggcgtgccat ccagattttc tggcagcggc 1980

tctggcaccg acttcacctt caccataagc agcctgcagc ctgaggacat tgccacatat 2040

tactgccagc agtggtccag caatcctttc acctttggct gcggcacaaa gctcgagatc 2100

aag 2103

<210> 28

<211> 2103

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 28

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctca agttcaactg 1380

gtgcagtctg gcgctgaagt gaagaaacct ggcgcctccg tgaaggtgtc ctgtaaagcc 1440

agcggctaca cattcacccg gtacaccatg cactgggttc gccaagctcc aggacaatgc 1500

ttggagtgga tgggctacat caaccccagc cggggctaca ccaactacaa tcaaaagttt 1560

aaggatcgcg tgaccctgac caccgacaag agcagctcta cagcctacat ggaactgagc 1620

agcctgcgga gcgaagatac cgccgtgtac tactgcgccc ggtactacga cgatcactac 1680

agcctggatt attggggaca gggcaccctc gtgactgtgt caagcggtgg cggaggaagc 1740

ggaggcggcg gttctggtgg tggtggtagc ggaggtggtg gcagcgatat ccagatgaca 1800

cagagcccta gcagcctgtc tgccagcgtg ggagacagag tgaccatcac atgtagcgcc 1860

agctccagcg tgtcctacat gaattggtat cagcaaaagc ccggcaaggc ccctaagcgg 1920

ctgatctacg atacaagcaa gctggcctct ggcgtgccat ccagattttc tggcagcggc 1980

tctggcaccg acttcaccct gacaatatct agcctgcagc ctgaggactt cgccacatat 2040

tactgccagc agtggtccag caatcccttc acctttggct gcggcaccaa gctggaaatc 2100

aag 2103

<210> 29

<211> 2133

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 29

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggaaaagg cggcggagga tctggcggag gcggatctga agttcagctg 1380

gttgaatctg gcggcggact ggttcaacct ggcggatctc tgagactgag ctgtgccgcc 1440

tccggcttca ccttcaatac ctacgccatg aattgggttc gacaagcccc aggcaaatgc 1500

ctggaatggg tcgccagaat cagaagcaag tacaacaact acgccacgta ctacgccgac 1560

agcgtgaagg gcagattcac catcagccgg gacgactcca agaacaccct gtacctgcag 1620

atgaactccc tgagagccga ggataccgcc gtgtactatt gtgtgcggca cggcaacttc 1680

ggcaacagct acgtgtccta ctttgcctat tggggacagg gcaccaccgt gactgtttct 1740

agcggtggcg gaggaagtgg tggcggcggt agcggaggtg gtggtagcgg aggcggaggt 1800

tctgagatcg tggttacaca gagccccgcc acactgagtg tgtctccagg cgaaagagcc 1860

actctgagct gcagatcttc tacaggcgcc gtgacagccg ccaattacgc caattgggtg 1920

caagagaagc ccggccaggc tttcagagga ctgattggcg gagccaacaa gagagcccct 1980

ggcgttccag ccagattttc tggcagtctg tctggcgacg aggctaccct gacaatcagc 2040

agcctgcaga gcgaggactt cgccgtgtat tactgcgccc tgttctacag caacctgtgg 2100

gtgttcggct gcggcacaaa gctggaaatc aag 2133

<210> 30

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 30

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggcaaa 1338

<210> 31

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 31

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cgccttcacc gcctacaata tccactgggt ccgacaggcc 120

cctggacagg gacttgaatg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgtggtgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggcaaa 1338

<210> 32

<211> 1431

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 32

caggttcagc tggttcaatc tggcggcgga gttgtgcagc ctggcagatc tctgagactg 60

agctgtaaag ccagcggcta caccttcacc agatacacca tgcactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gacttgagtg gatcggctac atcaacccca gccggggcta caccaactac 180

aaccagaaag tgaaggaccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatgg acagcctgag agccgaggat accgccgtgt actactgtgc ccggtactac 300

gacgaccact acagcctgga ttattggggc cagggcacca ccgtgacagt ttctagcgga 360

ggcggaggat caggtggcgg tggatctggc ggtggtggaa gtggtggtgg cggaagcgat 420

atccagatga cacagagccc tagcagcctg tctgccagcg tgggagacag agtgaccatc 480

acatgtagcg ccagcagcag cgtgtcctac atgaactggt atcagcagaa gcccggcaag 540

gcccctaaga gatggatcta cgacaccagc aagctggcct ctggcgtgcc aagcagattt 600

tctggcagcg gctctggcac cgacttcacc tttaccataa gcagcctgca gcctgaggac 660

attgccacct actactgcca gcagtggtcc agcaatccct tcacattcgg ccaggggacc 720

aagctggaaa tcaaagagcc caagagcagc gacaagaccc acacctgtcc tccatgtcct 780

gctccagaag ctgcaggcgc cccttccgtg tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc 840

ctgatgatca gcaggacccc tgaagtgacc tgcgtggtgg tcgatgtgtc ccacgaggat 900

cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag 960

cctagagagg aacagtacaa cagcacctac agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac 1020

caggattggc tgaacggcaa agagtacaag tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct 1080

cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag ggccagccta gggaacccca ggtttacaca 1140

ctgcctccaa gcagggacga gctgaccaag aatcaggtgt ccctgagctg tgccgtgaag 1200

ggcttctacc cttccgatat cgccgtggaa tgggagagca atggccagcc agagaacaac 1260

tacaagacaa cccctcctgt gctggacagc gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg 1320

acagtggaca agagcagatg gcagcagggc aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag 1380

gccctgcaca accactacac ccagaagtcc ctgtctctga gccctggcaa g 1431

<210> 33

<211> 1431

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 33

caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60

tcctgcaagg cctctggcta cacattcacc cggtacacca tgcactgggt ccgacaggct 120

ccaggacaag gcttggagtg gatgggctac atcaacccca gccggggcta caccaactac 180

aaccagaaat tcaaggaccg cgtgaccctg accaccgaca agtctagcag caccgcctac 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc ccggtactac 300

gacgaccact acagcctgga ttattggggc cagggcaccc tggtcacagt ttctagcgga 360

ggcggaggat ctggtggcgg aggaagtggc ggaggcggta gtggtggtgg cggatctgat 420

atccagatga cacagagccc cagcagcctg tctgcctctg tgggagacag agtgaccatc 480

acctgtagcg ccagcagcag cgtgtcctac atgaattggt atcagcagaa gcccggcaag 540

gcccctaagc ggctgatcta cgatacaagc aaactggcca gcggcgtgcc cagcagattt 600

tctggttctg gcagcggcac cgacttcacc ctgacaatat ctagcctgca gccagaggac 660

ttcgccacct actactgcca gcagtggtcc agcaatccct tcacctttgg ccaggggacc 720

aagctggaaa tcaaagagcc caagagcagc gacaagaccc acacctgtcc tccatgtcct 780

gctccagaag ctgcaggcgc cccttccgtg tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc 840

ctgatgatca gcaggacccc tgaagtgacc tgcgtggtgg tcgatgtgtc ccacgaggac 900

ccagaagtga agttcaattg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag 960

cctagagagg aacagtacaa cagcacctac agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac 1020

caggattggc tgaacggcaa agagtacaag tgcaaggtgt ccaacaaagc cctgcctgct 1080

cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag ggccagccta gggaacccca ggtttacaca 1140

ctgcctccaa gcagggacga gctgaccaag aatcaggtgt ccctgagctg tgccgtgaag 1200

ggcttctacc cttccgatat cgccgtggaa tgggagagca atggccagcc agagaacaac 1260

tacaagacaa cccctcctgt gctggacagc gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg 1320

acagtggaca agagcagatg gcagcagggc aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag 1380

gccctgcaca accactacac acagaagtcc ctgtctctga gccccggcaa a 1431

<210> 34

<211> 1461

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 34

gaagtgcagc tggttgagtc tggcggagga ctggttcaac ctggcggaag cctgagactg 60

tcttgtgccg ccagcggctt caccttcaac acctacgcca tgaactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gccttgaatg ggtcgccaga atcagaagca agtacaacaa ttacgccacc 180

tactacgccg acagcgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240

ctgtacctgc agatgaacag cctgagagcc gaggacaccg ccgtgtacta ttgtgtgcgg 300

cacggcaact tcggcaacag ctacgtgtcc tacttcgcct attggggcca gggcaccacc 360

gtgacagttt ctagcggagg cggtggatct ggcggcggag gaagtggtgg cggaggtagt 420

ggcggaggcg gatctgagat tgtggtcaca cagagccccg ccacactgag tgtttctcca 480

ggcgaaagag ccacactgtc ctgcaggtct agtacaggcg ctgtgaccgc cgccaactac 540

gccaattggg tgcaagagaa acccggccag gccttcagag gactgattgg cggagccaac 600

aaacgcgctc ctggcgtgcc agccagattt tctggatccc tgagcggcga cgaggccact 660

ctgactatta gcagcctgca gtccgaggac tttgccgtgt attactgcgc cctgttctac 720

agcaacctgt gggtgttcgg ccaggggacc aagctggaaa tcaaagagcc caagagcagc 780

gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaag ctgctggcgc cccttccgtg 840

tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatca gcagaacccc tgaagtgacc 900

tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 960

ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cctagagagg aacagtacaa cagcacctac 1020

agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1080

tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1140

ggccagccta gggaacccca ggtttacaca ctgcctccaa gcagggacga gctgaccaag 1200

aatcaggtgt ccctgagctg cgccgtgaag ggattctacc cttccgatat cgccgtggaa 1260

tgggagagca atggacagcc cgagaacaac tacaagacca cacctcctgt gctggacagc 1320

gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg acagtggaca agagcagatg gcagcagggc 1380

aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1440

ctgtctctga gccctggcaa g 1461

<210> 35

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 35

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta tgccttcgcc gcctacaata tccactgggt ccgacaggct 120

ccaggacagg gacttgagtg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgtggtgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggcaaa 1338

<210> 36

<211> 1461

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 36

gaagtgcagc tggttgagtc tggcggagga ctggttcaac ctggcggaag cctgagactg 60

tcttgtgccg ccagcggctt caccttcaac acctacgcca tgaactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaat gccttgaatg ggtcgccaga atcagaagca agtacaacaa ttacgccacc 180

tactacgccg acagcgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240

ctgtacctgc agatgaacag cctgagagcc gaggacaccg ccgtgtacta ttgtgtgcgg 300

cacggcaact tcggcaacag ctacgtgtcc tacttcgcct attggggcca gggcaccacc 360

gtgacagttt ctagcggagg cggtggatct ggcggcggag gaagtggtgg cggaggtagt 420

ggcggaggcg gatctgagat tgtggtcaca cagagccccg ccacactgag tgtttctcca 480

ggcgaaagag ccacactgtc ctgcaggtct agtacaggcg ctgtgaccgc cgccaactac 540

gccaattggg tgcaagagaa acccggccag gccttcagag gactgattgg cggagccaac 600

aaacgcgctc ctggcgtgcc agccagattt tctggatccc tgagcggcga cgaggccact 660

ctgactatta gcagcctgca gtccgaggac tttgccgtgt attactgcgc cctgttctac 720

agcaacctgt gggtgttcgg ctgcgggacc aagctggaaa tcaaagagcc caagagcagc 780

gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaag ctgctggcgc cccttccgtg 840

tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatca gcagaacccc tgaagtgacc 900

tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 960

ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cctagagagg aacagtacaa cagcacctac 1020

agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1080

tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1140

ggccagccta gggaacccca ggtttacaca ctgcctccaa gcagggacga gctgaccaag 1200

aatcaggtgt ccctgagctg cgccgtgaag ggattctacc cttccgatat cgccgtggaa 1260

tgggagagca atggacagcc cgagaacaac tacaagacca cacctcctgt gctggacagc 1320

gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg acagtggaca agagcagatg gcagcagggc 1380

aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1440

ctgtctctga gccctggcaa g 1461

<210> 37

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 37

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta tgccttcgcc gcctacaata tccactgggt ccgacaggct 120

ccaggacagg gacttgagtg gatgggcagc ttcgaccctt acgatggcgg cagcagctac 180

aaccagaagt tcaaggaccg gctgaccatc agcaaggaca ccagcaagaa ccaggtggtg 240

ctgaccatga ccaacatgga ccctgtggac accgccacct actactgtgc cagaggctgg 300

tactacttcg actactgggg ccacggcacc ctggtcacag ttagctctgc ctctacaaag 360

ggccccagcg tgttccctct ggctcctagc agcaagtcta caagcggagg aacagccgct 420

ctgggctgcc tcgtgaagga ttactttccc gagccagtga ccgtgtcctg gaatagcgga 480

gcactgacaa gcggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc aaagcagcgg cctgtactct 540

ctgagcagcg tcgtgacagt gccaagcagc tctctgggca cccagaccta catctgcaat 600

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gagctgcgac 660

aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaagctg ctggcgcccc ttccgtgttt 720

ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccctga agtgacctgc 780

gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaacag cacctacaga 900

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960

aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgagaaaa ccatctccaa ggccaaggga 1020

cagcccaggg aaccccaggt ttacacactg cctccaagca gggacgagct gaccaagaat 1080

caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140

gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggacagcgac 1200

ggctcattct tcctgtacag caagctgaca gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260

gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg 1320

tctctgagcc ccggcaaa 1338

<210> 38

<211> 2133

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 38

gaagtgcagc tggttgagtc tggcggagga ctggttcaac ctggcggaag cctgagactg 60

tcttgtgccg ccagcggctt caccttcaac acctacgcca tgaactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gccttgaatg ggtcgccaga atcagaagca agtacaacaa ttacgccacc 180

tactacgccg acagcgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240

ctgtacctgc agatgaacag cctgagagcc gaggacaccg ccgtgtacta ttgtgtgcgg 300

cacggcaact tcggcaacag ctacgtgtcc tacttcgcct attggggcca gggcaccacc 360

gtgacagttt ctagcggagg cggtggatct ggcggcggag gaagtggtgg cggaggtagt 420

ggcggaggcg gatctgagat tgtggtcaca cagagccccg ccacactgag tgtttctcca 480

ggcgaaagag ccacactgtc ctgcaggtct agtacaggcg ctgtgaccgc cgccaactac 540

gccaattggg tgcaagagaa acccggccag gccttcagag gactgattgg cggagccaac 600

aaacgcgctc ctggcgtgcc agccagattt tctggatccc tgagcggcga cgaggccact 660

ctgactatta gcagcctgca gtccgaggac tttgccgtgt attactgcgc cctgttctac 720

agcaacctgt gggtgttcgg ccaggggacc aagctggaaa tcaaaggtgg cggtggttca 780

ggtggcggcg gatctcaagt tcagctgcaa gagtctggcc ctggcctggt caagcctagc 840

caaacactga gcctgacctg taccgtgtcc ggctacgcct tcaccgccta caatatccac 900

tgggttcgac aagctcccgg acagggactt gagtggatgg gcagcttcga cccttacgat 960

ggcggcagca gctacaacca gaagttcaag gaccggctga ccatcagcaa ggacacctcc 1020

aagaaccagg tggtgctgac catgaccaac atggaccctg tggacaccgc tacctactac 1080

tgtgccagag gctggtacta cttcgattac tggggccacg gaaccctggt cacagtgtct 1140

agcgcctcta caaagggccc cagcgttttc ccactggctc ctagcagcaa gtctaccagc 1200

ggaggaacag ccgctctggg ctgtctggtc aaggactact ttcccgagcc agtgaccgtg 1260

tcctggaata gcggagcact gacaagcggc gtgcacacct ttccagctgt gctgcaaagc 1320

agcggcctgt acagcctgtc tagcgtcgtg acagtgccaa gcagctctct gggcacccag 1380

acctacatct gcaatgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 1440

cccaagagct gcgacaagac ccacacatgc cctccatgtc ctgctccaga agctgctggc 1500

gccccttccg tgtttctgtt ccctccaaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 1560

cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg atcccgaagt gaagttcaat 1620

tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 1680

aacagcacct acagagtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 1740

aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgcctg ctcctatcga gaaaaccatc 1800

tccaaggcca aggggcagcc cagggaacct caggtttaca cactgcctcc aagcagggac 1860

gagctgacca aaaatcaggt gtccctgagc tgcgccgtga agggattcta cccttccgat 1920

atcgccgtgg aatgggagag caatggacag cccgagaaca actacaagac cacacctcct 1980

gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgacagtgga caagtccaga 2040

tggcagcagg gcaacgtgtt ctcctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 2100

acccagaaaa gcctgtctct gagccccggc aaa 2133

<210> 39

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 39

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac cggggcgaat gt 642

<210> 40

<211> 1407

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 40

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctcaagttca gctggttcaa tccggtggcg gcgttgtgca gcctggcaga 720

tctctgagac tgagctgcaa ggcctccggc tacaccttca ccagatacac catgcactgg 780

gtccgacagg cccctggcaa aggacttgag tggatcggct acatcaaccc cagccggggc 840

tacaccaact acaaccagaa agtgaaggac cggttcacca tcagccggga caacagcaag 900

aacaccctgt acctgcagat ggactccctg agagccgagg ataccgccgt gtactactgt 960

gcccggtact acgacgacca ctactccctg gattattggg gccagggcac caccgtgaca 1020

gtttctagcg gtggcggagg aagcggaggc ggcggttcag gtggtggtgg tagcggaggt 1080

ggtggctccg atatccagat gacacagagc cctagcagcc tgtctgccag cgtgggagac 1140

agagtgacca tcacatgtag cgccagcagc tccgtgtcct acatgaactg gtatcaacaa 1200

aaacccggca aggcccctaa gcggtggatc tacgatacaa gcaagctggc ctctggcgtg 1260

cccagcagat tttctggctc tggcagcggc accgacttta cctttacaat cagctccctg 1320

cagcctgagg acattgccac ctactactgt cagcagtggt ccagcaatcc cttcaccttc 1380

ggccagggga caaagctcga gatcaag 1407

<210> 41

<211> 1407

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 41

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctcaagttca gctggttcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc 720

tccgtgaagg tgtcctgtaa agcctccggc tacacattca cccggtacac catgcactgg 780

gtccgacagg cacctggcca aggacttgag tggatgggct acatcaaccc cagccggggc 840

tacaccaact acaaccagaa attcaaggac cgcgtgaccc tgacaaccga caagtctagc 900

agcaccgcct acatggaact gagcagcctg agaagcgagg ataccgccgt gtactactgc 960

gcccggtact acgacgatca ctactccctg gattactggg gccagggcac actggtcaca 1020

gtttctagcg gtggcggagg aagcggaggc ggcggttcag gtggtggtgg tagcggaggt 1080

ggtggctccg atatccagat gacacagagc cctagcagcc tgtctgccag cgtgggagac 1140

agagtgacca tcacatgtag cgccagcagc tccgtgtcct acatgaattg gtatcaacaa 1200

aagcccggca aggcccctaa gcggctgatc tacgatacaa gcaagctggc ctctggcgtg 1260

cccagcagat tttctggctc tggcagcggc accgacttta cactcaccat aagcagcctg 1320

cagccagagg acttcgccac ctactattgc cagcagtggt ccagcaatcc cttcaccttt 1380

ggccagggaa caaagctcga gatcaag 1407

<210> 42

<211> 1437

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 42

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctgaagttca gctggttgaa tcaggcggcg gactggttca acctggcgga 720

tctctgagac tgagctgtgc cgccagcggc ttcaccttca atacctacgc catgaactgg 780

gtccgacagg cccctggcaa aggccttgaa tgggtcgcca gaatcagaag caagtacaac 840

aactacgcca cgtactacgc cgacagcgtg aagggcagat tcaccatcag ccgggacgac 900

agcaagaaca ccctgtacct gcagatgaac tccctgagag ccgaggatac cgccgtgtac 960

tattgtgtgc ggcacggcaa cttcggcaac agctacgtgt cctacttcgc ctattggggc 1020

cagggcacca ccgtgacagt ttctagcggt ggcggaggaa gcggaggcgg cggttcaggt 1080

ggtggtggta gcggaggtgg tggctctgag atcgtggtta cacagagccc cgccacactg 1140

agtgtgtctc caggcgaaag agccacactg tcctgcaggt ctagtacagg cgctgtgacc 1200

gccgccaact atgccaattg ggtgcaagag aaacccggcc aggccttcag aggactgatt 1260

ggcggagcca acaaacgcgc tcctggcgtg ccagccagat tttctggaag cctgagcggc 1320

gacgaggcca ctctgactat tagcagcctg cagtctgagg acttcgccgt gtattactgc 1380

gccctgttct acagcaacct gtgggtgttc ggccagggga caaagctcga gatcaag 1437

<210> 43

<211> 1407

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 43

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctcaagttca gctggttcaa tccggtggcg gcgttgtgca gcctggcaga 720

tctctgagac tgagctgcaa ggcctccggc tacaccttca ccagatacac catgcactgg 780

gtccgacagg cccctggcaa atgccttgag tggatcggct acatcaaccc cagccggggc 840

tacaccaact acaaccagaa agtgaaggac cggttcacca tcagccggga caacagcaag 900

aacaccctgt acctgcagat ggactccctg agagccgagg ataccgccgt gtactactgt 960

gcccggtact acgacgacca ctactccctg gattattggg gccagggcac caccgtgaca 1020

gtttctagcg gtggcggagg aagcggaggc ggcggttcag gtggtggtgg tagcggaggt 1080

ggtggctccg atatccagat gacacagagc cctagcagcc tgtctgccag cgtgggagac 1140

agagtgacca tcacatgtag cgccagcagc tccgtgtcct acatgaactg gtatcaacaa 1200

aaacccggca aggcccctaa gcggtggatc tacgatacaa gcaagctggc ctctggcgtg 1260

cccagcagat tttctggctc tggcagcggc accgacttta cctttacaat cagctccctg 1320

cagcctgagg acattgccac ctactactgt cagcagtggt ccagcaatcc cttcaccttc 1380

ggctgcggga caaagctcga gatcaag 1407

<210> 44

<211> 1407

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 44

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctcaagttca gctggttcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc 720

tccgtgaagg tgtcctgtaa agcctccggc tacacattca cccggtacac catgcactgg 780

gtccgacagg cacctggcca atgccttgag tggatgggct acatcaaccc cagccggggc 840

tacaccaact acaaccagaa attcaaggac cgcgtgaccc tgacaaccga caagtctagc 900

agcaccgcct acatggaact gagcagcctg agaagcgagg ataccgccgt gtactactgc 960

gcccggtact acgacgatca ctactccctg gattactggg gccagggcac actggtcaca 1020

gtttctagcg gtggcggagg aagcggaggc ggcggttcag gtggtggtgg tagcggaggt 1080

ggtggctccg atatccagat gacacagagc cctagcagcc tgtctgccag cgtgggagac 1140

agagtgacca tcacatgtag cgccagcagc tccgtgtcct acatgaattg gtatcaacaa 1200

aagcccggca aggcccctaa gcggctgatc tacgatacaa gcaagctggc ctctggcgtg 1260

cccagcagat tttctggctc tggcagcggc accgacttta cactcaccat aagcagcctg 1320

cagccagagg acttcgccac ctactattgc cagcagtggt ccagcaatcc cttcaccttt 1380

ggctgcggaa caaagctcga gatcaag 1407

<210> 45

<211> 1437

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 45

gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga acctgccagc 60

atcagctgta gagccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggacaggctc cccggctgct gatctatagc ggaagcacac tgcagagcgg catccctcct 180

agattttccg gcagcggcta cggcaccgat ttcaccctga ccatcaacaa catcgagagc 240

gaggacgccg cctactactt ctgccagcag cacgatgaga gcccctacac atttggcgag 300

ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtg gccgctccta gcgtgttcat ctttccacct 360

agcgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagagaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caatagccaa 480

gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tctacctaca gcctgagcag caccctgaca 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600

ctttctagcc ctgtgaccaa gagcttcaac agaggcgaat gtggcggcgg aggatctggc 660

ggaggcggat ctgaagttca gctggttgaa tcaggcggcg gactggttca acctggcgga 720

tctctgagac tgagctgtgc cgccagcggc ttcaccttca atacctacgc catgaactgg 780

gtccgacagg cccctggcaa atgccttgaa tgggtcgcca gaatcagaag caagtacaac 840

aactacgcca cgtactacgc cgacagcgtg aagggcagat tcaccatcag ccgggacgac 900

agcaagaaca ccctgtacct gcagatgaac tccctgagag ccgaggatac cgccgtgtac 960

tattgtgtgc ggcacggcaa cttcggcaac agctacgtgt cctacttcgc ctattggggc 1020

cagggcacca ccgtgacagt ttctagcggt ggcggaggaa gcggaggcgg cggttcaggt 1080

ggtggtggta gcggaggtgg tggctctgag atcgtggtta cacagagccc cgccacactg 1140

agtgtgtctc caggcgaaag agccacactg tcctgcaggt ctagtacagg cgctgtgacc 1200

gccgccaact atgccaattg ggtgcaagag aaacccggcc aggccttcag aggactgatt 1260

ggcggagcca acaaacgcgc tcctggcgtg ccagccagat tttctggaag cctgagcggc 1320

gacgaggcca ctctgactat tagcagcctg cagtctgagg acttcgccgt gtattactgc 1380

gccctgttct acagcaacct gtgggtgttc ggctgcggga caaagctcga gatcaag 1437

<210> 46

<211> 1437

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид"

<400> 46

gaagtgcagc tggttgagtc tggcggagga ctggttcaac ctggcggaag cctgagactg 60

tcttgtgccg ccagcggctt caccttcaac acctacgcca tgaactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gccttgaatg ggtcgccaga atcagaagca agtacaacaa ttacgccacc 180

tactacgccg acagcgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240

ctgtacctgc agatgaacag cctgagagcc gaggacaccg ccgtgtacta ttgtgtgcgg 300

cacggcaact tcggcaacag ctacgtgtcc tacttcgcct attggggcca gggcaccacc 360

gtgacagttt ctagcggagg cggtggatct ggcggcggag gaagtggtgg cggaggtagt 420

ggcggaggcg gatctgagat tgtggtcaca cagagccccg ccacactgag tgtttctcca 480

ggcgaaagag ccacactgtc ctgcaggtct agtacaggcg ctgtgaccgc cgccaactac 540

gccaattggg tgcaagagaa acccggccag gccttcagag gactgattgg cggagccaac 600

aaacgcgctc ctggcgtgcc agccagattt tctggatccc tgagcggcga cgaggccact 660

ctgactatta gcagcctgca gtccgaggac tttgccgtgt attactgcgc cctgttctac 720

agcaacctgt gggtgttcgg ccaggggacc aagctggaaa tcaaaggtgg cggtggttca 780

ggtggcggcg gaagcgatat tgtgatgacc cagacacctc tgagcctgcc tgtgacacct 840

ggcgaacctg ccagcatcag ctgtagagcc agcaagagca tcagcaagta cctggcctgg 900

tatcagcaga agcccggaca ggctcctcgg ctgctgatct atagcggcag cacactgcag 960

agcggcatcc ctcctagatt ttccggcagc ggctacggca ccgatttcac cctgaccatc 1020

aacaacatcg agagcgagga tgccgcctac tacttctgcc agcagcacga cgagagcccc 1080

tacacatttg gcgagggcac aaaggtcgag atcaagcgga cagtggccgc tcctagcgtg 1140

ttcatctttc cacctagcga cgagcagctg aagtctggca cagcctctgt cgtgtgcctg 1200

ctgaacaact tctaccccag agaagccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 1260

tctggcaact cccaagagag cgtgaccgag caggacagca aggactctac ctacagcctg 1320

tcctccacac tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaagtgta cgcctgcgaa 1380

gtgacccacc agggcctttc tagccctgtg accaagagct tcaaccgggg cgaatgt 1437

<210> 47

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 47

Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His

1 5 10

<210> 48

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 48

Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 49

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 49

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 50

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 50

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn

1 5 10

<210> 51

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 51

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 52

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 52

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

1 5

<210> 53

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 53

Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 54

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 54

Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn

1 5 10

<210> 55

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 55

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 56

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 56

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr

1 5 10 15

<210> 57

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 57

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ala Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 58

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 58

Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 59

Ala Leu Phe Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 60

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 60

Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr Asn Ile His

1 5 10

<210> 61

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 61

Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 62

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 62

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 63

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 63

Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 64

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 64

Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 65

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 65

Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 66

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 66

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 67

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 67

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 68

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 69

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 69

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 70

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 71

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 71

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala

20 25 30

Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg

35 40 45

Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser

65 70 75 80

Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr Ser

85 90 95

Asn Leu Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 72

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 72

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 73

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 73

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 74

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 74

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 75

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 75

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 76

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 77

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 77

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 78

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 78

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 79

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 79

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 80

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Tyr Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 81

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 81

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala

20 25 30

Ala Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg

35 40 45

Gly Leu Ile Gly Gly Ala Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Asp Glu Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser

65 70 75 80

Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Phe Tyr Ser

85 90 95

Asn Leu Trp Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 82

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 82

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 83

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 83

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 84

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 84

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 85

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 85

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 86

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 86

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 87

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 87

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 88

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 88

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 89

<211> 937

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 89

Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Leu Leu Ala Leu

1 5 10 15

Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Ala Ala Gln Glu Thr

20 25 30

Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Ile

35 40 45

Ser Ser Glu Leu Asn Lys Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met

50 55 60

Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys

65 70 75 80

Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala

85 90 95

Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr

100 105 110

Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr

115 120 125

Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly

130 135 140

Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr Ala Ser Pro Gly Tyr

145 150 155 160

Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg Gly Ile

165 170 175

Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu Ser Leu

180 185 190

His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe Thr Met

195 200 205

Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe Ala Ile

210 215 220

Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr Ser Ser

225 230 235 240

Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu Ile Leu Glu

245 250 255

Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn Pro Met

260 265 270

Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro Gln Pro

275 280 285

Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro Met Ala

290 295 300

Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly Val Asp

305 310 315 320

Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys Gln Pro

325 330 335

Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe Thr Ala Leu Arg Phe

340 345 350

Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly Asn Gln

355 360 365

Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys Ser Asp

370 375 380

Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu Lys Asn

385 390 395 400

Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser Val Ala Ile Pro Leu

405 410 415

Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn Asn Gln

420 425 430

Lys Ser Ser Ser Ala Pro Val Gln Arg Gln Pro Lys His Val Arg Gly

435 440 445

Gln Asn Val Glu Met Ser Met Leu Asn Ala Tyr Lys Pro Lys Ser Lys

450 455 460

Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser Ala Val Arg Phe Met Glu Glu Leu Gly

465 470 475 480

Glu Cys Ala Phe Gly Lys Ile Tyr Lys Gly His Leu Tyr Leu Pro Gly

485 490 495

Met Asp His Ala Gln Leu Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Asp Tyr Asn

500 505 510

Asn Pro Gln Gln Trp Thr Glu Phe Gln Gln Glu Ala Ser Leu Met Ala

515 520 525

Glu Leu His His Pro Asn Ile Val Cys Leu Leu Gly Ala Val Thr Gln

530 535 540

Glu Gln Pro Val Cys Met Leu Phe Glu Tyr Ile Asn Gln Gly Asp Leu

545 550 555 560

His Glu Phe Leu Ile Met Arg Ser Pro His Ser Asp Val Gly Cys Ser

565 570 575

Ser Asp Glu Asp Gly Thr Val Lys Ser Ser Leu Asp His Gly Asp Phe

580 585 590

Leu His Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ala Gly Met Glu Tyr Leu Ser Ser

595 600 605

His Phe Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Ile Gly

610 615 620

Glu Gln Leu His Val Lys Ile Ser Asp Leu Gly Leu Ser Arg Glu Ile

625 630 635 640

Tyr Ser Ala Asp Tyr Tyr Arg Val Gln Ser Lys Ser Leu Leu Pro Ile

645 650 655

Arg Trp Met Pro Pro Glu Ala Ile Met Tyr Gly Lys Phe Ser Ser Asp

660 665 670

Ser Asp Ile Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Phe Ser Phe

675 680 685

Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly Phe Ser Asn Gln Glu Val Ile Glu Met

690 695 700

Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu Pro Cys Ser Glu Asp Cys Pro Pro Arg

705 710 715 720

Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu Cys Trp Asn Glu Ile Pro Ser Arg Arg

725 730 735

Pro Arg Phe Lys Asp Ile His Val Arg Leu Arg Ser Trp Glu Gly Leu

740 745 750

Ser Ser His Thr Ser Ser Thr Thr Pro Ser Gly Gly Asn Ala Thr Thr

755 760 765

Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala Ser Pro Val Ser Asn Leu Ser Asn Pro

770 775 780

Arg Tyr Pro Asn Tyr Met Phe Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro Gln Gly

785 790 795 800

Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Pro Ile Pro Gln Asn Gln Arg Phe

805 810 815

Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala Phe Pro

820 825 830

Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln His Cys

835 840 845

Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ser

850 855 860

Thr Gly His Val Thr Ser Leu Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln Glu Ala

865 870 875 880

Asn Ile Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro Asn His Pro Gly Gly

885 890 895

Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr Lys Ile

900 905 910

Asp Ser Lys Gln Ala Ser Leu Leu Gly Asp Ala Asn Ile His Gly His

915 920 925

Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Leu

930 935

<210> 90

<211> 182

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 90

Met Glu Gln Gly Lys Gly Leu Ala Val Leu Ile Leu Ala Ile Ile Leu

1 5 10 15

Leu Gln Gly Thr Leu Ala Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys

20 25 30

Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala

35 40 45

Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe

50 55 60

Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro

85 90 95

Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala

100 105 110

Ala Thr Ile Ser Gly Phe Leu Phe Ala Glu Ile Val Ser Ile Phe Val

115 120 125

Leu Ala Val Gly Val Tyr Phe Ile Ala Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr

145 150 155 160

Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly

165 170 175

Asn Gln Leu Arg Arg Asn

180

<210> 91

<211> 171

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 91

Met Glu His Ser Thr Phe Leu Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Leu Leu

1 5 10 15

Ser Gln Val Ser Pro Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg

20 25 30

Val Phe Val Asn Cys Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val

35 40 45

Gly Thr Leu Leu Ser Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile

50 55 60

Leu Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys

65 70 75 80

Asp Lys Glu Ser Thr Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Gln Ser Cys

85 90 95

Val Glu Leu Asp Pro Ala Thr Val Ala Gly Ile Ile Val Thr Asp Val

100 105 110

Ile Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Phe Cys Phe Ala Gly His

115 120 125

Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

130 135 140

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

145 150 155 160

Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys

165 170

<210> 92

<211> 207

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 92

Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser

1 5 10 15

Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr

20 25 30

Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr

35 40 45

Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys

50 55 60

Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp

65 70 75 80

His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr

85 90 95

Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu

100 105 110

Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met

115 120 125

Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu

130 135 140

Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys

145 150 155 160

Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn

165 170 175

Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg

180 185 190

Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile

195 200 205

<210> 93

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 93

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 94

<211> 22

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 94

Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe

1 5 10 15

Val Lys Phe Gly Pro Cys

20

<210> 95

<211> 16

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 95

Glu Val Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Cys

1 5 10 15

<210> 96

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 96

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 97

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 97

Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr Asn Ile His

1 5 10

<210> 98

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 98

Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr Asn Ile His

1 5 10

<210> 99

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 99

Arg Pro Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 100

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 100

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Pro Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 101

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 101

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Pro Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 102

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 102

Ser Gly Ser Arg Leu Gln Ser

1 5

<210> 103

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 103

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Arg Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 104

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 104

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Gly Ser Arg Leu Gln Ser Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Glu Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 105

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 105

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 106

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 106

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 107

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 107

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 108

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 108

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ala Phe Glu Ala Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Phe Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val

65 70 75 80

Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 109

<211> 232

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 109

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 110

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<400> 110

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser

<210> 111

<211> 508

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 111

Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly His Lys Thr Asp Thr

20 25 30

Ile Asp Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Ala Pro Arg Tyr Leu Met

35 40 45

Lys Leu Glu Gly Ser Gly Ser Tyr Asn Lys Gly Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Trp Tyr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Asp Tyr

85 90 95

Pro Gly Asn Tyr Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

130 135 140

Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala

145 150 155 160

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn

165 170 175

Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

180 185 190

Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

195 200 205

Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe

210 215 220

Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu

245 250 255

Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu

260 265 270

Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

275 280 285

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

290 295 300

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

305 310 315 320

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

325 330 335

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

340 345 350

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

355 360 365

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

370 375 380

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

385 390 395 400

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

405 410 415

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

420 425 430

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

435 440 445

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

450 455 460

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

465 470 475 480

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

485 490 495

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

500 505

<210> 112

<211> 272

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 112

Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly

100 105 110

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

130 135 140

Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly

145 150 155 160

Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Tyr Pro Ser Ser Gly Lys Thr

165 170 175

Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Ser Asp Asn

180 185 190

Ala Lys Asp Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

195 200 205

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Tyr Ala Asp Asp Ala Ala

210 215 220

Leu Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

225 230 235 240

Ser Thr Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu

245 250 255

Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu

260 265 270

<210> 113

<211> 227

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 113

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 114

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /пометка="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<220>

<221> САЙТ

<222> (1)..(20)

<223> /пометка="Эта последовательность может охватывать 1-4

повторяющихся звеньев 'Gly Gly Gly Gly Ser'"

<400> 114

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<---

Изобретение относится к области биохимии, в частности к биспецифической связывающей молекуле, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, а также к иммуноконъюгату, фармацевтической композиции, набору и флакону, его содержащим. Также раскрыты выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вышеуказанное антитело, а также вектор и клетка, ее содержащие. Изобретение также относится к способу получения биспецифической связывающей молекулы, предусматривающему применение вышеуказанное клетки. Изобретение эффективно для лечения ROR1-положительного рака у пациента. 17 н. и 33 з.п. ф-лы, 29 ил., 6 табл., 5 пр.

1. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, причем биспецифическая связывающая молекула содержит первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом ROR1 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с внеклеточным доменом CD3 человека, где первый антигенсвязывающий домен содержит:

a) (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDR1-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, или

b) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и

где второй антигенсвязывающий домен содержит:

a) (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDR1-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

b) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно, или

c) H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно.

2. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, где первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с ROR1 человека с антителом или связывается с тем же эпитопом ROR1 человека, что и указанное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и аминокислотную последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 83.

3. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, где первый антигенсвязывающий домен содержит:

a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 72, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 73,

b) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 74, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

c) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 72, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 73,

d) тяжелую цепь (HC), содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 84, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

e) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 82, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83,

f) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83 или

g) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83.

4. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-3, где второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с антителом или связывается с тем же эпитопом CD3 человека, что и указанное антитело, которое содержит:

a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71,

b) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67, или

c) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69.

5. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-3, где второй антигенсвязывающий домен содержит:

a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 70, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 71,

b) VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 67,

c) VH, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO: 69,

d) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 70, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 71,

e) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 66, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 67,

f) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 68, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 69,

g) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 80, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 81,

h) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 76, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 77, или

i) VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 78, и VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 79.

6. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, содержащая:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит (H)-CDR1-3 тяжелой цепи и (L)-CDR1-3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 54, 55, 56, 57, 58 и 59, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 97, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 53, 49, 50, 51 и 52, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 60, 61, 62, 63, 64 и 65, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 47, 48, 49, 50, 51 и 52, соответственно.

7. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, содержащая:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно.

8. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, содержащая:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 74 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно, или

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 72 и 73, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно.

9. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, содержащая:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит тяжелую цепь (HC) и легкую цепь (LC), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

g) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

h) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 70 и 71, соответственно,

i) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно,

j) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно,

k) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 68 и 69, соответственно, или

l) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно.

10. Биспецифическая связывающая молекула по п. 1, содержащая:

a) первый антигенсвязывающий домен, который содержит тяжелую цепь (HC) и легкую цепь (LC), содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

b) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

c) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

d) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

e) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 84 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

f) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC и LC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

g) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

h) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 80 и 81, соответственно,

i) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно,

j) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно,

k) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 87, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 107 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 78 и 79, соответственно, или

l) первый антигенсвязывающий домен, который содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 86, HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 106 или 109, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 83, и второй антигенсвязывающий домен, который содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно.

11. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, причем молекула содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 14, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 19, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2.

12. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, причем молекула содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 19, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2.

13. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, причем молекула содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 18, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2.

14. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, причем молекула содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 23, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2.

15. Биспецифическая связывающая молекула, которая специфически связывается с ROR1 человека и CD3 человека, содержащая

a) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 1, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

b) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 2, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

c) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 3, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

d) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 4, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

e) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 5, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

f) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 6, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

g) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 17, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

h) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 20, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

i) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 21, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

j) HC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 7, и LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 22, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2;

k) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 9, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1;

l) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 10, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1;

m) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 11, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1;

n) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 11, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1;

o) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 13, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1; или

p) две HC, содержащие аминокислотные последовательности согласно SEQ ID NO: 8, 15, и одну LC, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 16, причем первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2 и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1.

16. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-15, где:

a) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 2,

b) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 1, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1, или

c) первый антигенсвязывающий домен имеет валентность 2, и второй антигенсвязывающий домен имеет валентность 1.

17. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-8, содержащая константную область IgG1 человека.

18. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-8, содержащая константную область IgG1 человека, которая содержит аминокислотные замены L234A, L235A и G237A, где остатки пронумерованы согласно системе EU.

19. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-18, где второй антигенсвязывающий домен представляет собой scFv.

20. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-19, где аминокислотная последовательность тяжелой или легкой цепи второго антигенсвязывающего домена слита с аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи первого антигенсвязывающего домена посредством пептидного линкера.

21. Биспецифическая связывающая молекула по п. 20, где пептидный линкер между аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи второго антигенсвязывающего домена и аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи первого антигенсвязывающего домена имеет аминокислотную последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93).

22. Биспецифическая связывающая молекула по п. 20 или 21, где второй антигенсвязывающий домен слит с:

a) карбоксильным концом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена или

b) аминоконцом легкой цепи первого антигенсвязывающего домена.

23. Биспецифическая связывающая молекула по любому из пп. 1-22, имеющая по меньшей мере одно из следующих свойств:

a) имеет K_D для иммобилизованного ROR1, равную 0,5 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

b) имеет K_D для растворимого b-ROR1, равную 0,4 нМ или менее, как определено посредством ELISA,

c) показывает пониженную интернализацию в ROR1-трансфицированные клетки MEC и/или клетки Jurkat по сравнению с антителом, содержащим аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи согласно SEQ ID NO: 82 и 83, соответственно,

d) индуцирует высвобождение LDH в PBMC-экспонированных ROR1-трансфицированных клетках MEC при 1 мкг/мл или менее,

e) индуцирует высвобождение LDH в PBMC-экспонированных клетках JeKo-1 при 1 мкг/мл или менее,

f) индуцирует высвобождение LDH в PBMC-экспонированных клетках Mino при 1 мкг/мл или менее,

g) индуцирует высвобождение LDH в PBMC-экспонированных клетках MDA-MB-468 при 1 мкг/мл или менее,

h) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с ROR1-трансфицированными клетками MEC, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

i) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками JeKo-1, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

j) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками Mino, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии,

k) повышающе регулирует CD69 на поверхности Т-клеток, совместно культивированных с клетками MDA-MB-468, при 1 мкг/мл или менее, как определено посредством проточной цитометрии, и

l) индуцирует высвобождение IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4 и IL-2 из Т-клеток, совместно культивированных с клетками Jeko-1 или ROR1-трансфицированными клетками MEC, при 1 мкг/мл или менее.

24. Иммуноконъюгат для специфического связывания с ROR1 человека и CD3 человека, содержащий биспецифическую связывающую молекулу по любому из пп. 1-23, конъюгированную с цитотоксическим средством.

25. Фармацевтическая композиция для лечения ROR1-положительного рака, содержащая биспецифическую связывающую молекулу по любому из пп. 1-23 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

26. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая биспецифическую связывающую молекулу по любому из пп. 1-23, причем молекула содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные домены тяжелой и легкой цепи (VH и VL) первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержит нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23.

27. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 26, содержащая:

a) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 37 и 42,

b) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 42,

c) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 41,

d) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 46,

e) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 24 и 39,

f) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 25 и 39,

g) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 26 и 39,

h) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 27 и 39,

i) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 28 и 39,

j) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 29 и 39,

k) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 40,

l) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 43,

m) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 44,

n) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 30 и 45,

o) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

p) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

q) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

r) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

s) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 35, 36 и 39 или

t) нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 31, 38 и 39.

28. Экспрессионный вектор, содержащий выделенную(-ые) молекулу(-ы) нуклеиновой кислоты по п. 26 или 27.

29. Клетка-хозяин для получения биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23, содержащая нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные домены тяжелой и легкой цепи (VH и VL) первого антигенсвязывающего домена, и дополнительно содержащая нуклеотидные последовательности, которые кодируют VH и VL второго антигенсвязывающего домена, биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23.

30. Клетка-хозяин по п. 29, где указанная клетка-хозяин содержит нуклеотидную(-ые) последовательность(-и):

a) SEQ ID NO: 37 и 42,

b) SEQ ID NO: 30 и 42,

c) SEQ ID NO: 30 и 41,

d) SEQ ID NO: 30 и 46,

e) SEQ ID NO: 24 и 39,

f) SEQ ID NO: 25 и 39,

g) SEQ ID NO: 26 и 39,

h) SEQ ID NO: 27 и 39,

i) SEQ ID NO: 28 и 39,

j) SEQ ID NO: 29 и 39,

k) SEQ ID NO: 30 и 40,

l) SEQ ID NO: 30 и 43,

m) SEQ ID NO: 30 и 44,

n) SEQ ID NO: 30 и 45,

o) SEQ ID NO: 31, 32 и 39,

p) SEQ ID NO: 31, 33 и 39,

q) SEQ ID NO: 31, 34 и 39,

r) SEQ ID NO: 35, 34 и 39,

s) SEQ ID NO: 35, 36 и 39 или

t) SEQ ID NO: 31, 38 и 39.

31. Способ получения биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23, предусматривающий

предоставление клетки-хозяина по п. 29 или 30,

культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии биспецифической связывающей молекулы и

выделение полученной биспецифической связывающей молекулы.

32. Способ лечения ROR1-положительного рака у пациента, предусматривающий введение пациенту биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23.

33. Способ по п. 32, где раком является лейкоз, лимфома или солидная опухоль.

34. Способ по п. 32, где раком является острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, Т-клеточный лейкоз, лимфома из клеток зоны мантии, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, лимфома Беркитта, Т-клеточная неходжкинская лимфома, лимфоплазмацитоидная лимфома, макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, лимфома маргинальной зоны, мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома или неходжкинская лимфома, которая подверглась трансформации Рихтера.

35. Способ по п. 32, где раком является рак ободочной кишки, немелкоклеточный рак легкого, глиобластома, гепатоклеточная карцинома, рак поджелудочной железы, саркома Юинга, остеосаркома, рак головы и шеи, рак яичников, рак молочной железы или рак молочной железы с тройным негативным фенотипом.

36. Способ по любому из пп. 32-35, где пациент получает лечение дополнительным терапевтическим средством.

37. Способ по п. 36, где дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ингибитора тирозинкиназы Брутона (BTK), ингибитора В-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2), ингибитора мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR) и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы (PI3K).

38. Способ по п. 36, где дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ибрутиниба, акалабрутиниба, венетоклакса, эверолимуса, сапанисертиба и иделалисиба.

39. Применение биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23 для получения лекарственного средства для лечения ROR1-положительного рака у пациента.

40. Применение биспецифической связывающей молекулы по любому из пп. 1-23 для лечения ROR1-положительного рака у пациента.

41. Применение по п. 39 или 40, где раком является лейкоз, лимфома или солидная опухоль.

42. Применение по п. 39 или 40, где раком является острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, Т-клеточный лейкоз, лимфома из клеток зоны мантии, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, лимфома Беркитта, Т-клеточная неходжкинская лимфома, лимфоплазмацитоидная лимфома, макроглобулинемия Вальденстрема, множественная миелома, лимфома маргинальной зоны, мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома или неходжкинская лимфома, которая подверглась трансформации Рихтера.

43. Применение по п. 39 или 40, где раком является рак ободочной кишки, немелкоклеточный рак легкого, глиобластома, гепатоклеточная карцинома, рак поджелудочной железы, саркома Юинга, остеосаркома, рак головы и шеи, рак яичников, рак молочной железы или рак молочной железы с тройным негативным фенотипом.

44. Применение по любому из пп. 39-43, где пациент получает лечение дополнительным терапевтическим средством.

45. Применение по п. 44, где дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ингибитора тирозинкиназы Брутона (BTK), ингибитора В-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2), ингибитора мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR) и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы (PI3K).

46. Применение по п. 44, где дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ибрутиниба, акалабрутиниба, венетоклакса, эверолимуса, сапанисертиба и иделалисиба.

47. Набор для лечения ROR1-положительного рака, содержащий биспецифическую связывающую молекулу по любому из пп. 1-23 и инструкцию для применения.

48. Набор по п. 47 для применения для лечения рака в соответствии со способом по любому из пп. 32-38.

49. Флакон для лечения ROR1-положительного рака, содержащий биспецифическую связывающую молекулу по любому из пп. 1-23.

50. Флакон по п. 49, где лечение рака проводят в соответствии со способом по любому из пп. 32-38.