Способ получения (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью Российский патент 2024 года по МПК C07D487/04 A61K31/407 A61P31/06 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к способам получения новых индивидуальных соединений 3-гидрокси-1H-пиррол-2(5H)-онов, которые могут быть использованы в качестве исходных продуктов для синтеза новых гетероциклических систем и в фармакологии.

Известны структурные аналоги заявленных соединений, метил 3-бензоил-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-2-(1H-индол-3-ил)-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-2-карбоксилат (Пат. 2806041 РФ, МПК C07D 209/04, C07D 227/10, А61Р 31/04, А61К 31/404. Способ получения метил 3-бензоил-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-2-(1H-индол-3-ил)-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-2-карбоксилата, обладающего противомикробной активностью: №2023106454: заявл. 20.03.2023: опубл. 25.10.2023 / А.Н. Масливец, С.Ю. Баландина, А.И. Кобелев, Д.А. Караваев; заявители и патентообладатели ФГБОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» (RU). - 6 с.). Синтез структурных аналогов осуществляется по следующей схеме:

К недостаткам данного способа относится сложность получения (Е)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона.

Задачей изобретения является разработка простого способа синтеза, не описанного в литературе (Е)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона, обладающего противотуберкулезной активностью.

Технический результат - разработан способ синтеза (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона.

Технический результат достигается получением соединения путем взаимодействия 3-бензоил-2-гидрокси-3а-(1H-индол-3-ил)-1H-пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,4(3aH)-диона I с гидразином в мольном соотношении 1:2, с последующим выделением целевого продукта по следующей схеме:

Процесс ведут при 85°C, а в качестве растворителя используют безводный 1,4-диоксан.

Из патентной и технической литературы не были выявлены способы получения (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона, имеющие сходные признаки с заявленным способом, а именно, не использовались исходные продукты, растворители, в которых проходит реакция, на основании чего можно сделать вывод о соответствии заявленного технического решения критерию «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-дион.

К раствору 0,34 ммоль 3-бензоил-2-гидрокси-3а-(1H-индол-3-ил)-1H-пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона в 1,4 мл безводного диоксана добавили 34 мкл гидразина, выдерживали при 85°C, спустя 2 ч выпавший белый осадок отфильтровывали. Выход 82%, т.пл. 211-213°C(1,4-диоксан). Соединение (II) C₂₆H₂₂N₆O₄.

Найдено, %: C, 64.72; H, 4.60; N, 17.42; O, 13.26.

Вычислено, %: C, 64.70; H, 4.61;N, 17.45; O, 13.24.

Соединение (II) - белое кристаллическое вещество, плавящееся с разложением, легкорастворимое в ДМСО и ДМФА, растворимое в горячих водных смесях, 1,2 дихлорэтане, труднорастворимое в ароматических углеводородах, четыреххлористом углероде, этилацетате, нерастворимое в 1,4-диоксане, ацетоне, хлороформе, спиртах и алканах.

В ИК спектре соединения (II), снятого в виде пасты в вазелиновом масле, присутствуют полосы валентных колебаний групп ОН и NH при 3347 и 3343, 3587 см^-1 соответственно, карбонильных групп C=O, при 1701, 1673 см^-1.

В спектре ЯМР ¹H соединения (II), снятом в растворе ДМСО-d₆, кроме сигналов протонов алифатических заместителей, ароматических колец и связанных с ними групп, присутствуют уширенный синглет енольной OH-группы при 11.61 м.д. и синглет протона фенольной ОН-группы при 9.57 м.д., дублет аминогруппы индольного фрагмента 11.10 (J 2,4 Гц) м.д.

Фармакологическое исследование (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона (II) на наличие противотуберкулезной активности.

Для исследований химических веществ использован микрометод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде с использованием индикатора роста резазурина натриевой соли [Palomino J., Martin A., Camacho М. etal.ResazurinMicrotiter Assay Plate: Simple and Inexpensive Method for Detection of Drag Resistance in Mycobacterium tuberculosis. ResazurinMicrotiter Assay Plate: Simple and Inexpensive Method for Detection of Drag Resistance in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrobail Agents and Chemotherapy. 2002. Vol. 46, N 8.P. 2720-2722. ttps://doi.org/10.1128/AAC.46.8.2720.].

Исследуемые вещества в количестве 10 мг растворяли в 0,5 мл «Диметилсульфоксида», после чего добавляли 4,5 мл 0,9% изотонического раствора хлорида натрия, тем самым получая исходный раствор в 2,0 мг/мл.

В лунках стерильного 96-луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений химических соединений в питательной жидкой среде Мидлбрук 7Н, содержащую обогатительную добавку ВАСТЕС MGIT OADC (олеиновая кислота, альбумин, декстроза и каталаза). В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества и 30 мкл обогатительной добавки.

Из 14-ти суточной культуры М. tuberculosis штамм H37Rv готовили бактериальную суспензию, которая была стандартизирована по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда № 1 с использованием денситометра, после чего инокулят разводили 1:20 в питательной среде Мидлбрук 7Н9 и вносили в каждую лунку планшета по 150 мкл.

В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 1000,0 мкг/мл, минимальная - 1,0 мкг/мл.

Планшеты запечатывали в полиэтиленовые пакеты и инкубировали при 37°C в течение 8 суток. Через 8 дней инкубации в каждую лунку добавляли 30 мкл 0,01% раствора натрия резазурината, приготовленного в стерильной дистиллированной воде и культивировали еще 24 часа при 37°C, затем оценивали визуально изменение окраски резазурина. Изменение от синего до розового цвета указывает на снижение резазурина и, следовательно, рост бактерий.

Анализ полученных данных показал - соединение II обладает ингибирующей активностью в концентрации 500 мкг/мл в отношении культуры М. tuberculosis.

Изобретение относится к способу получения (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона формулы II. Способ осуществляют путем выдерживания при 85°C 3-бензоил-2-гидрокси-3a-(1H-индол-3-ил)-1H-пирроло[2,1-c][1,4]бензоксазин-1,4(3aH)-диона I с гидразином в мольном соотношении 1:2 по указанной ниже схеме. Технический результат: разработан способ получения (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона формулы II, обладающего противотуберкулезной активностью. 1 табл., 1 пр.

Способ получения (E)-5-амино-3-гидразоно-4-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-6a-(1H-индол-3-ил)-4-фенилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-2,6-диона формулы II, обладающего противотуберкулезной активностью, путем выдерживания при 85°C 3-бензоил-2-гидрокси-3a-(1H-индол-3-ил)-1H-пирроло[2,1-c][1,4]бензоксазин-1,4(3aH)-диона I с гидразином в мольном соотношении 1:2 по следующей схеме:

.