КОНФОРМАЦИОННО ОГРАНИЧЕННЫЕ ПЕПТИДЫ Российский патент 2025 года по МПК C07K14/475 A61K38/00 A61K47/12 A61P27/02 

ЗАЯВЛЕНИЕ, КАСАЮЩЕЕСЯ НИОКР, ФИНАНСИРУЕМЫХ ИЗ ФЕДЕРАЛЬНОГО БЮДЖЕТА

[0001] Настоящее изобретение создано при государственной поддержке в рамках гранта EY024327, выданного Национальным институтом здравоохранения. Правительство США имеет определенные права на настоящее изобретение.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Область техники

[0002] Настоящая заявка относится к областям химии, биохимии и медицины. Более конкретно, несколько вариантов реализации настоящей заявки относятся к конформационно ограниченным пептидам, композициям, способам применения и наборам, содержащим такие композиции. В частности, в нескольких вариантах реализации настоящей заявки описаны композиции, содержащие водный раствор, содержащий один или более конформационно ограниченных пептидов.

[0003] Несколько вариантов реализации настоящей заявки также относятся к конформационно ограниченным солям пептидов, композициям, способам применения и наборам, содержащим такие композиции. В нескольких вариантах реализации настоящей заявки также описаны композиции, содержащие водный раствор, содержащий одну или более конформационно ограниченных солей пептидов.

Описание уровня техники

[0004] Полипептиды все чаще рассматривают в качестве потенциальных терапевтических агентов. Следовательно, существует повышенный интерес к изучению полипептидов при выполнении фармацевтических исследований и разработок. Однако известно, что из полипептидов трудно готовить составы, а из-за добавок, применяемых для сохранения или стабилизации таких составов, возникают, например, нежелательные побочные эффекты. Полипептидные терапевтические средства также особенно подвержены деградации как во время хранения, так и после введения (например, протеолизу). Помимо этого, эффективность полипептидных терапевтических средств также часто обусловлена пептидом, образующим вторичную или третичную структуру.

Однако короткие пептиды, как правило, не сохраняют свою нативную конформацию и связывающую способность, особенно при иссечении в виде фрагмента более крупного белка, поскольку они лишены структурного армирования, обеспечиваемого оставшейся частью белка. Пептиды также подвержены протеолитической деградации и, как правило, не могут встраиваться в липидный слой или проникать через клеточную мембрану. Действительно, такие более короткие пептиды, в частности, имеют тенденцию образовывать неструктурированные случайные спирали в растворе и, таким образом, имеют сниженную эффективность и повышенную подверженность деградации.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] Существует неудовлетворенная потребность в пептидных композициях, которые обеспечивают терапевтические количества пептидов в их биологически активных конформациях, являются стабильными при комнатной температуре и содержат лишь следовые количества стабилизаторов и/или консервантов или совсем не содержат таковых. Для удовлетворения этих и других потребностей в нескольких вариантах реализации настоящей заявки предложена конформационно ограниченная соль полипептида, а также его фармацевтически приемлемые соли. В качестве конформационно ограниченных солей пептида, описанных в настоящем документе, используют самоассоциирующуюся анионную или катионную соль амфипатического пептида для обеспечения липофильной мицеллы, липидного бислоя или другой липидной поверхности для липофильной части амфипатического пептида, способной стабилизировать альфа-спиральную вторичную структуру пептида, тем самым сохраняя, улучшая и/или восстанавливая биологическую активность пептида, например, аффинность связывания с мишенью или мишенями пептида. Помимо этого, в нескольких вариантах реализации настоящей заявки предложены конформационно ограниченные пептиды и их фармацевтически приемлемые соли. Конформационное ограничение пептида, описанное в настоящем документе, включает армирование альфа-спиральной вторичной структуры пептида, тем самым обеспечивая сохранение, улучшение и/или восстанавление биологической активности, например, аффинности связывания с мишенью или мишенями пептида.

[0006] В некоторых вариантах реализации пептид (или комбинация пептидов) конформационно ограничен в композициях согласно настоящей заявке таким образом, чтобы обеспечить длительное хранение при сохранении эффективности и/или доставку в течение длительного периода времени. Таким образом, в некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида и композиции, содержащие конформационно ограниченную соль пептида, стабильны при температурах в отсутствие охлаждения без необходимости восстановления, и они сохраняют функционильную активность в диапазоне температур, включая температуры в диапазоне от 0 до 40°С. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида и композиции, содержащие конформационно ограниченную соль пептида, также обеспечивают повышенную биологическую и/или химическую стабильность и/или эффективность по сравнению с композициями не имеющих конформационных ограничений солей пептидов.

[0007] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида. В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-9, где указанная конформационно ограниченная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и где по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль представляет собой соль жирной кислоты с прямой цепью. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида находится в растворе.

[0008] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего SEQ ID NO: 1, причем указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль представляет собой соль жирной кислоты с прямой цепью. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида находится в растворе.

[0009] В некоторых вариантах реализации предложена композиция, содержащая, состоящая или состоящая по существу из примерно 0,001%-0,1% (например, 0,01% или 0,005%) конформационно ограниченной соли пептида, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс/масс, предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида; примерно 0,03%-3% (например, 0,2888%) буфера; примерно 0,0001%-0,01% (например, 0,001%) динатрия ЭДТА; необязательно примерно 0,005%-0,5% (например, 0,05%) поверхностно-активного вещества (например, тилоксапола или н-додецилфосфохолина(DPC)) и хлорида натрия; при этом рН композиции составляет от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет примерно 150-500 мОсм/кг или более (например, от 250 до 350) мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой жидкую композицию. Жидкие композиции включают, но не ограничиваются ими, комбинации, смеси, растворы, гелевые композиции и мази.

[0010] В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации цитратный буфер содержит примерно 0,001%-0,1% (например, 0,0098%) безводной лимонной кислоты и примерно 0,02%-2% (например, 0,279%) дигидрата цитрата натрия. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5.

[0011] В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 280 до примерно 320 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет примерно 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6% (например, примерно 0,5%).

[0012] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит парабен, такой как метилпарабен (например, 0,04% или менее). В альтернативных вариантах реализации парабены или другие консерванты не содержатся. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит хлорит натрия.

[0013] В некоторых вариантах реализации предложен набор, содержащий множество стерильных емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар для хранения композиции. В некоторых вариантах реализации емкость содержит от примерно 0,03 мл до примерно 1 мл (например, 0,040 мл, 0,050 мл, 0,060 мл, 0,070 мл, 0,075 мл, 0,1 мл, 0,15 мл, 0,2 мл, 0,25 мл, 0,3 мл, 0,35 мл, 0,4 мл, 0,45 мл, 0,5 мл, 0,6 мл, 0,7 мл, 0,8 мл, 0,9 мл) композиции. В некоторых вариантах реализации емкость предназначена для однократного применения, применения в течение дня, применения в течение недели или более длительного применения, например, стерильная емкость, выполненная по технологии выдувание-наполнение-запаивание (Blow-Fill-Seal). В одном из вариантов реализации применяют емкость объемом от 1 мл до 30 мл. В некоторых вариантах реализации емкости представляют собой флаконы-капельницы или тубы с гелем/мазью. В некоторых вариантах реализации емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть.

[0014] В некоторых вариантах реализации емкость выполена из одного или более из следующих материалов: поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций. В некоторых вариантах реализации предложены стеклянные емкости и поверхности, которые уменьшают адгезию композиции к внутренней поверхности емкости.

[0015] В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™, имеющего SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-9, или ее фрагмент или фрагменты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида имеет гомологию последовательности, составляющую по меньшей мере 80%, 85% 90% или 95%, с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2-9.

[0016] В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз композиции, такой как стерильные жидкие глазные капли, из емкости для однократного применения. В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз композиции, такой как стерильные не содержащие консерванта жидкие глазные капли, из емкости для однократного применения.

[0017] В некоторых вариантах реализации предложено применение композиций, описанных в настоящем документе, для лечения сухости глаза. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиций, описанных в настоящем документе, для лечения одного или более симптомов синдрома Шегрена. В некоторых вариантах реализации композиция содержит конформационно ограниченную соль Lacripep™.

[0018] В некоторых вариантах реализации пептида, конформационно ограниченной соли, композиции, набора, способа или применения белок или полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль белка или полипептида, где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации фосфолипид, жирная кислота с прямой цепью, жирная кислота с разветвленной цепью или комбинация любых из перечисленных выше соединений выбраны из солей миристолеиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, сапиеновой кислоты, олеиновой кислоты, элаидиновой кислоты, вакценовой кислоты, линолевой кислоты, линоэлаидиновой кислоты, альфа-линоэлаидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, каприловой кислоты, каприновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, арахиновой кислоты, бегеновой кислоты, лигноцериновой кислоты, церотиновой кислоты, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина (лецитина), додецилфосфохолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилинозитолфосфата, фосфатидилинозитолбифосфата, фосфатидилинозитолтрифосфата, церамидфосфорилхолина, церамидфосфорилэтаноламина и любых комбинаций перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль линолевой кислоты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль олеиновой кислоты.

[0019] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-9, где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего SEQ ID NO: 1, причем указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации соль представляет собой соль жирной кислоты с прямой цепью.

[0020] В некоторых вариантах реализации предложена жидкая композиция, содержащая: 0,001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида, описанной выше в настоящем документе, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс/масс, предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида; 0,01-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА; 0,01- 0,1% тилоксапола и хлорид натрия; при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации предложена жидкая композиция, содержащая: 0,001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида, описанной выше и в настоящем документе, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида; 0,01-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА и хлорид натрия; при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли пептида составляет 0,01% или 0,005%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида; количество буфера составляет 0,2888%; количество динатрия ЭДТА составляет 0,001%; количество тилоксапола составляет 0,05%, рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг; причем пептид представляет собой Lacripep, имеющий SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации цитратный буфер содержит 0,0098% безводной лимонной кислоты и 0,279% дигидрата цитрата натрия. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от 280 до 320 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6%. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет 0,5%. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит 0,04% метилпарабена. В некоторых вариантах реализации композиция является стерильной.

[0021] В некоторых вариантах реализации предложена композиция для местного применения, содержащая: 0,005-0,05% конформационно ограниченной соли пептида, раскрытой выше и в настоящем документе, где количество пептида представляет собой содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида, и одно или более из следующего: 0,1-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА; 0,01-0,1% тилоксапола и хлорид натрия, причем указанная композиция представляет собой раствор, гель или мазь. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида присутствует в количестве от 0,005% до 0,01%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида представляет собой гликопротеин слезной жидкости или его фрагмент. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида содержит любую из SEQ ID NO: 1-9 или состоит из любой из SEQ ID NO: 1-9. В некоторых вариантах реализации указанный пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep, состоящий из SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации композиции, раскрытые выше и в настоящем документе, предназначены для применения для лечения одного или более симптомов или признаков сухости глаза или синдрома Шегрена.

[0022] В некоторых вариантах реализации предложен набор, содержащий множество емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар для хранения композиций, описанных выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации указанная емкость содержит от примерно 0,05 мл до примерно 1 мл композиции. В некоторых вариантах реализации емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть. В некоторых вариантах реализации съемная герметизирующая верхняя часть не может повторно обеспечить герметизацию резервуара после ее удаления. В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций.

[0023] В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз одной или более капель композиции, описанной выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации введение дополнительно включает местное нанесение капли композиции на глаз из емкости для однократного применения из набора, описанного выше и в настоящем документе.

[0024] В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции, описанной выше и в настоящем документе, для лечения сухости глаза. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции, описанной выше и в настоящем документе, для лечения одного или более симптомов или признаков синдрома Шегрена.

[0025] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, композиция, набор, способ или применение, раскрытые выше и в настоящем документе, где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения фосфолипид, жирная кислота с прямой цепью, жирная кислота с разветвленной цепью или комбинация любых из перечисленных выше соединений выбраны из солей миристолеиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, сапиеновой кислоты, олеиновой кислоты, элаидиновой кислоты, вакценовой кислоты, линолевой кислоты, линоэлаидиновой кислоты, альфа-линоэлаидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, каприловой кислоты, каприновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, арахиновой кислоты, бегеновой кислоты, лигноцериновой кислоты, церотиновой кислоты, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина (лецитина), додецилфосфохолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилинозитолфосфата, фосфатидилинозитолбифосфата, фосфатидилинозитолтрифосфата, церамидфосфорилхолина, церамидфосфорилэтаноламина и любых комбинаций перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль линолевой кислоты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль олеиновой кислоты.

[0026] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, композиция, набор, способ или применение, описанные выше и в настоящем документе, где пептид состоит из SEQ ID NO: 1, причем N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения количество пептида составляет примерно 0,01%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения количество пептида составляет примерно 0,005%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или немодифицированной формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения тилоксапол заменен поверхностно-активным веществом. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения поверхностно-активное вещество содержит DPC или состоит из DPC. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченной соли пептида, композиции, набора, способа или применения присутствует растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 0,1-10%. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

[0027] В некоторых вариантах реализации пептид (или комбинация пептидов) конформационно ограничен в композициях согласно настоящей заявке таким образом, чтобы обеспечить длительное хранение при сохранении эффективности и/или доставку в течение длительного периода времени. Таким образом, в некоторых вариантах реализации композиции указанных конформационно ограниченных пептидов и их фармацевтически приемлемых солей стабильны при температурах в отсутствие охлаждения без необходимости восстановления, и они сохраняют функционильную активность в диапазоне температур, включая температуры в диапазоне от 0 до 40°С. В некоторых вариантах реализации композиции указанных конформационно ограниченных пептидов и их фармацевтически приемлемых солей также обеспечивают повышенную химическую и/или биологическую стабильность и/или дополнительную эффективность по сравнению с композициями не имеющих конформационных ограничений пептидов.

[0028] В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны в положениях i и i+3, i и i+4 или i и i+7, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию.

[0029] В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 2, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию.

[0030] В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+3 представляют собой соединение, содержащее сшивающий фрагмент, или модифицированы таким соединением, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+4 представляют собой соединение, содержащее сшивающий фрагмент, или модифицированы таким соединением, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+7 заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны.

[0031] В некоторых вариантах реализации соединение, содержащее сшивающий фрагмент, включает соединение формулы (I).

[0032] В некоторых вариантах реализации каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых вариантах реализации каждый PG независимо представляет собой Boc или Fmoc. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из:

[0033] В некоторых вариантах реализации каждый п независимо равен 3, 4, 5, 6 или 7. В некоторых вариантах реализации каждый PG представляет собой Fmoc. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ представляет собой атом водорода. В некоторых вариантах реализации каждый R² представляет собой или

[0034] В некоторых вариантах реализации предложен способ конформационного ограничения Lacripep, включающий приведение пептида, имеющего SEQ ID NO: 1, где по меньшей мере две аминокислоты заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, в контакт с реагентом, который представляет собой окислитель, катализатор на основе переходного металла или катализатор метатезиса олефинов; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен или азид и алкин, реагент представляет собой катализатор на основе переходного металла; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой сульфгидрил, реагент представляет собой окислитель; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен, реагент представляет собой катализатор метатезиса олефинов; и когда сшивающие фрагменты сшиты, по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.

[0035] В некоторых вариантах реализации предложена композиция, содержащая, состоящая или состоящая по существу из примерно 0,001%-0,1% (например, 0,01% или 0,005%) конформационно ограниченного пептида (или комбинации конформационно ограниченных пептидов) или его фармацевтически приемлемой соли, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы формы свободного основания пептида; примерно 0,03%-3% (например, 0,2888%) буфера; примерно 0,0001%-0,01% (например, 0,001%) динатрия ЭДТА; необязательно примерно 0,005%-0,5% (например, 0,05%) поверхностно-активного вещества (например, тилоксапола или н-додецилфосфохолина(ОРС)) и хлорида натрия; при этом рН композиции составляет от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет примерно 150-500 мОсм/кг или более (например, от 250 до 350 мОсм/кг). В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой жидкую композицию. Жидкие композиции включают, но не ограничиваются ими, комбинации, смеси, растворы, гелевые композиции и мази.

[0036] В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации цитратный буфер содержит примерно 0,001%-0,1% (например, 0,0098%) безводной лимонной кислоты и примерно 0,02%-2% (например, 0,279%) дигидрата цитрата натрия. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5.

[0037] В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 280 до примерно 320 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет примерно 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6% (например, примерно 0,5%).

[0038] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит парабен, такой как метилпарабен (например, 0,04% или менее). В альтернативных вариантах реализации парабены или другие консерванты не содержатся. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит хлорит натрия.

[0039] В некоторых вариантах реализации предложен набор, содержащий множество стерильных емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар для хранения композиции. В некоторых вариантах реализации емкость содержит от примерно 0,03 мл до примерно 1 мл (например, 0,040 мл, 0,050 мл, 0,060 мл, 0,070 мл, 0,075 мл, 0,1 мл, 0,15 мл, 0,2 мл, 0,25 мл, 0,3 мл, 0,35 мл, 0,4 мл, 0,45 мл, 0,5 мл, 0,6 мл, 0,7 мл, 0,8 мл, 0,9 мл) композиции. В некоторых вариантах реализации емкость предназначена для однократного применения, применения в течение дня, применения в течение недели или более длительного применения, например, стерильная емкость, выполненная по технологии выдувание-наполнение-запаивание (Blow-Fill-Seal). В одном из вариантов реализации применяют емкость объемом от 1 мл до 30 мл. В некоторых вариантах реализации емкости представляют собой флаконы-капельницы или тубы с гелем/мазью. В некоторых вариантах реализации емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть.

[0040] В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из одного или более из следующих материалов: поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций. В некоторых вариантах реализации предложены стеклянные емкости и поверхности, которые уменьшают адгезию композиции к внутренней поверхности емкости.

[0041] В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™, имеющий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемую соль, где по меньшей мере две аминокислоты Lacripep™ заменены или модифицированы таким образом, что они содержат сшивающий фрагмент, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-9, или ее фармацевтически приемлемую соль, или ее фрагмент или фрагменты, где по меньшей мере две аминокислоты указанной последовательности заменены или модифицированы таким образом, что они содержат сшивающий фрагмент, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид или его фармацевтически приемлемая соль имеет гомологию последовательности, составляющую по меньшей мере 80%, 85% 90%, 95% или 98%, с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2-9.

[0042] В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз композиции, такой как стерильные жидкие глазные капли, из емкости для однократного применения. В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз композиции, такой как стерильные не содержащие консерванта жидкие глазные капли, из емкости для однократного применения.

[0043] В некоторых вариантах реализации предложено применение композиций, описанных в настоящем документе, для лечения сухости глаза. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиций, описанных в настоящем документе, для лечения одного или более симптомов синдрома Шегрена. В некоторых вариантах реализации композиция содержит конформационно ограниченный Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль.

[0044] В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию. В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 2, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+4 представляют собой соединение, содержащее сшивающий фрагмент, или модифицированы таким соединением, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+7 заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации соединение, содержащее сшивающий фрагмент, включает соединение формулы (I):

где: каждый n независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10; каждый PG независимо представляет собой Boc или Fmoc; каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил; и каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из: В некоторых вариантах реализации каждый n независимо равен 3, 4, 5, 6 или 7. В некоторых вариантах реализации каждый PG представляет собой Fmoc. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ представляет собой атом водорода. В некоторых вариантах реализации каждый R² представляет собой

[0045] В некоторых вариантах реализации предложена жидкая композиция, содержащая: 0,001-0,05% конформационно ограниченного пептида или его фармацевтически приемлемой соли, описанной выше и в настоящем документе, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида; 0,01-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА; 0,01-0,1% тилоксапола и хлорид натрия; при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации предложена жидкая композиция, содержащая: 0,001-0,05% конформационно ограниченного пептида или его фармацевтически приемлемой соли, описанной выше и в настоящем документе, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида; 0,01-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА и хлорид натрия; при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченного пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 0,01% или 0,005%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с применением молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида; при этом количество буфера составляет 0,2888%; при этом количество динатрия ЭДТА составляет 0,001%; при этом количество тилоксапола составляет 0,05%, при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до 350 мОсм/кг; причем пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep, имеющий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации цитратный буфер содержит 0,0098% безводной лимонной кислоты и 0,279% дигидрата цитрата натрия. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от 280 до 320 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6%. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет 0,5%. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит 0,04% метилпарабена.

[0046] В некоторых вариантах реализации предложена композиция для местного применения, содержащая: 0,005-0,05% конформационно ограниченного пептида, раскрытого выше и в настоящем документе, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида, и одно или более из следующего: 0,1-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА; 0,01-0,1% тилоксапола и хлорид натрия, причем указанная композиция представляет собой раствор, гель или мазь. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченного пептида составляет от 0,001 до 0,01%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой гликопротеин слезной жидкости или его фрагмент. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой любую из SEQ ID NO: 1-9, где по меньшей мере две из аминокислот содержат сшивающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep. В некоторых вариантах реализации композиция является стерильной.

[0047] В некоторых вариантах реализации предложен набор, содержащий множество емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар для хранения композиции, описанной выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации указанная емкость содержит от примерно 0,05 мл до примерно 1 мл композиции. В некоторых вариантах реализации емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть. В некоторых вариантах реализации съемная герметизирующая верхняя часть не может повторно обеспечить герметизацию резервуара после ее удаления. В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций.

[0048] В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение на глаз одной или более капель композиции, описанной выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации введение дополнительно включает местное нанесение капли композиции на глаз из емкости для однократного применения из набора, описанного выше и в настоящем документе.

[0049] В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции, описанной выше и в настоящем документе, для лечения сухости глаза. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции, описанной выше и в настоящем документе, для лечения одного или более симптомов или признаков синдрома Шегрена.

[0050] В некоторых вариантах реализации предложен способ конформационного ограничения Lacripep, включающий приведение пептида, имеющего SEQ ID NO: 1, в контакт со сшивающим реагентом, при этом: по меньшей мере две аминокислоты, замененные или модифицированные соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, приводят в контакт с реагентом, выбранным из окислителя и катализатора на основе переходного металла; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен или азид и алкин, реагент представляет собой катализатор на основе переходного металла; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой сульфгидрил, реагент представляет собой окислитель; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен, реагент представляет собой катализатор метатезиса олефинов; и когда сшивающие фрагменты сшиты, по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.

[0051] В некоторых вариантах реализации предложены конформационно ограниченный пептид, композиция, набор, способ или применение, описанные выше и в настоящем документе, где пептид состоит из конформационно ограниченной формы SEQ ID NO: 1, причем N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченного пептида, композиции, набора, способа или применения количество пептида составляет примерно 0,01%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченного пептида, композиции, набора, способа или применения количество пептида составляет примерно 0,005%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., предпочтительно рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченного пептида, композиции, набора, способа или применения тилоксапол заменен поверхностно-активным веществом. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченного пептида, композиции, набора, способа или применения указанное поверхностно-активное вещество содержит DPC или состоит из DPC.

[0052] В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-9, где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и где по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации предложена конформационно ограниченная соль пептида, содержащего SEQ ID NO: 1, где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и где по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации указанная соль представляет собой соль жирной кислоты с прямой цепью. В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и при этом указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию. В некоторых вариантах реализации предложен пептид, содержащий SEQ ID NO: 2, или его фармацевтически приемлемая соль, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и при этом указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+4 представляют собой соединение, содержащее сшивающий фрагмент, или модифицированы таким соединением, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации две аминокислоты в положении i и i+7 заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны. В некоторых вариантах реализации соединение, содержащее сшивающий фрагмент, включает соединение формулы (I):

где: каждый n независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10; каждый PG независимо представляет собой Boc или Fmoc; каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил; и каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из:

Пептид по п. 8, где каждый n независимо равен 3, 4, 5, 6 или 7. В некоторых вариантах реализации каждый PG представляет собой Fmoc. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ представляет собой атом водорода. В некоторых вариантах реализации каждый R₂ представляет собой В некоторых вариантах реализации предложена жидкая композиция, содержащая: 0,00001-0,05% или 0,0001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида по любому из указанных выше вариантов реализации, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида; 0,01-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА и хлорид натрия; при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до 350 мОсм/кг, и при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации предложена композиция для местного применения, содержащая: 0,00001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида по любому из указанных выше вариантов реализации, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида, и одно или более из следующего: 0,1-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА и хлорид натрия, причем указанная композиция представляет собой раствор, гель или мазь. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит 0,01-0,1% тилоксапола. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида составляет 0,01%, 0,005%, 0,001%, 0,0001% или 0,00001%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида; при этом количество буфера составляет 0,2888%; при этом количество динатрия ЭДТА составляет 0,001%; при этом количество тилоксапола составляет 0,05%, при этом рН композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до 350 мОсм/кг; при этом пептид представляет собой Lacripep, имеющий SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации цитратный буфер содержит 0,0098% безводной лимонной кислоты и 0,279% дигидрата цитрата натрия. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от 150 до 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет примерно 200 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6%. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет 0,5%. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит 0,04% метилпарабена. В некоторых вариантах реализации композиция является стерильной. В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep или конформационно ограниченную соль Lacripep, состоящего из SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации композиция предназначена для применения для лечения одного или более симптомов или признаков сухости глаза или синдрома Шегрена. В некоторых вариантах реализации предложен набор, содержащий множество емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар для хранения композиции по любому из указанных выше вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации емкость содержит от примерно 0,05 мл до примерно 1 мл композиции. В некоторых вариантах реализации емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть. В некоторых вариантах реализации съемная герметизирующая верхняя часть не может повторно обеспечить герметизацию резервуара после ее удаления. В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций. В некоторых вариантах реализации предложен способ введения, включающий местное нанесение одной или более капель композиции по любому из указанных выше вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации введение дополнительно включает местное нанесение капли композиции на глаз из емкости для однократного применения набора по любому из указанных выше вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции по любому из указанных выше вариантов реализации для лечения сухости глаза. В некоторых вариантах реализации предложено применение композиции по любому из указанных выше вариантов реализации для лечения одного или более симптомов или признаков синдрома Шегрена. В некоторых вариантах реализации соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации фосфолипид, жирная кислота с прямой цепью, жирная кислота с разветвленной цепью или комбинация любых из перечисленных выше соединений выбраны из солей миристолеиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, сапиеновой кислоты, олеиновой кислоты, элаидиновой кислоты, вакценовой кислоты, линолевой кислоты, линоэлаидиновой кислоты, альфа-линоэлаидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, каприловой кислоты, каприновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, арахиновой кислоты, бегеновой кислоты, лигноцериновой кислоты, церотиновой кислоты, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина (лецитина), додецилфосфохолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилинозитолфосфата, фосфатидилинозитолбифосфата, фосфатидилинозитолтрифосфата, церамидфосфорилхолина, церамидфосфорилэтаноламина и любых комбинаций перечисленных выше соединений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль линолевой кислоты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль олеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации предложен способ конформационного ограничения Lacripep, включающий приведение пептида, имеющего SEQ ID NO: 1, в контакт со сшивающим реагентом, при этом: по меньшей мере две аминокислоты, замененные или модифицированные соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, приводят в контакт с реагентом, выбранным из окислителя и катализатора на основе переходного металла; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен или азид и алкин, реагент представляет собой катализатор на основе переходного металла; когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой сульфгидрил, реагент представляет собой окислитель; и когда сшивающие фрагменты сшиты, по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации пептид состоит из SEQ ID NO: 1, где N-конец ацетилирован и С-конец амидирован. В некоторых вариантах реализации количество пептида составляет примерно 0,01%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации количество пептида составляет примерно 0,005%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации количество пептида составляет примерно 0,0001%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации количество пептида составляет примерно 0,00001%, при этом количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида. В некоторых вариантах реализации тилоксапол заменен поверхностно-активным веществом. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество содержит DPC или состоит из DPC. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид, конформационно ограниченная соль пептида, композиция, набор, способ или применение по любому из указанных выше вариантов реализации дополнительно включают растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве от примерно 0,1 до примерно 10%. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0053] На фиг. 1 показаны данные спектров CD вариантов реализации конформационно ограниченных солей пептида.

[0054] На фиг. 2 показаны данные спектров CD других конформационно ограниченных солей пептида.

[0055] На фиг. 3 показаны данные спектров CD вариантов реализации содержащих «скрепки» пептидов Lacripep в присутствии 10 мМ DPC.

[0056] На фиг. 4 показаны данные спектров CD вариантов реализации содержащих «скрепки» пептидов Lacripep в отсутствие 10 mM DPC.

[0057] На фиг. 5 показаны данные спектров CD вариантов реализации пептидов Lacripep, содержащих образованные остатками цистеина дисульфидные мостики, в присутствии DPC.

[0058] На фиг. 6 показаны данные спектров CD вариантов реализации пептидов Lacripep, содержащих образованные остатками цистеина дисульфидные мостики, в отсутствие 10 мМ DPC.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0059] Пептиды, раскрытые в настоящей заявке, в растворе образуют случайные спирали, но при определенных условиях могут находиться в альфа-спиральной конформации. Чтобы уменьшить образование случайных спиралей и усилить спиральные структурные элементы Lacripep™ и других пептидов, раскрытых в настоящей заявке, в некоторых вариантах реализации настоящей заявки описаны конформационно ограниченные соли пептидов, и в других вариантах реализации настоящей заявки описаны конформационно ограниченные пептиды и их фармацевтически приемлемые соли.

[0060] Идентификации остатков в спиральной структуре Lacripep™ или других пептидов, описанных в настоящем документе, может способствовать представление их последовательностей в виде проекции спирального колеса (helical wheel). Например, ниже представлена проекция спирального колеса для Lacripep™.

[0061] Это представление демонстрирует амфипатический характер последовательности Lacripep™, в которой липофильные или гидрофобные остатки и гидрофильные остатки распределены с образованием двух отдельных поверхностей пептида и размещением остатков i, i+3, i+4 и i+7 в достаточной близости, чтобы быть ковалентно связанными или конформационно стабилизированными путем ассоциации с липофильной или гидрофобной поверхностью, образованной само ассоциирующейся стабилизирующей солью. Несмотря на то, что любой набор боковых цепей аминокислот, которые находятся в непосредственной близости в пространстве, может быть химически связан для стабилизации витка спирали, может быть предпочтительным осуществлять соединение вдоль либо липофильной/гидрофобной, либо гидрофильной поверхности спирали, а не между двумя поверхностями.

[0062] Стабилизация спиральной структуры Lacripep™ и других пептидов, описанных в настоящей заявке, может обеспечить преимущества, включая одно или более из улучшенной биологической активности при лечении сухости глаза, улучшенного фармакокинетического времени жизни в слезной жидкости, на поверхности глаза и в периокулярных тканях, а также улучшенной химической стабильности в составе.

[0063] Далее приведены иллюстративные определения терминов, используемых в настоящем документе. Если явно не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники в свете полного описания. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, упомянутые в настоящем документе, полностью включены посредством ссылки, если не указано иное.

[0064] Термин «примерно» в контексте настоящего описания относится к величине, значению, числу, частоте, процентному содержанию, количеству или массе, которые находятся в диапазоне +/- 10% относительно указанных величины, значения, числа, частоты, процентного содержания, количества или массы.

[0065] Если не указано иное, когда в настоящей заявке используется значение процентного содержания (%), указанное значение относится к значению процента по массе. Для определения значения процентного содержания (% масс./масс.) пептидов, конформационно ограниченных пептидов, конформационно ограниченных солей пептидов и их фармацевтически приемлемых солей, раскрытых в настоящем документе, указанное процентное содержание (% масс./масс.) рассчитывают с использованием молекулярной массы формы свободного основания немодифицированного или не имеющего конформационных ограничений пептида. Таким образом, процентное содержание (% масс./масс.) необходимо будет скорректировать в случае применения формы соли и/или модифицированной формы пептида, если желательна такая же молярная концентрация пептида в растворе, как это имеет место в некоторых вариантах реализации настоящей заявки.

[0066] Например, формы конформационно ограниченных солей Lacripep™, описанные в настоящем документе, имеют более высокую молекулярную массу, чем форма свободного основания Lacripep™, и поэтому их необходимо будет применять в количестве большем, чем 0,01% (масс./масс.), например, для получения такой же молярной концентрации Lacripep™, как в композиции, содержащей 0,01% (масс./масс.) свободного основания Lacripep™. Неограничивающие примеры молекулярных масс форм четырехзамещенныхсолей Lacripep™ с жирными кислотами по сравнению со свободным основанием Lacripep™ раскрыты в следующей таблице:

[0067] Термин «регулятор тоничности» в контексте настоящего описания включает вещества, которые изменяют осмоляльность композиции. Подходящие регуляторы тоничности включают, но не ограничиваются ими, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, хлорид кальция, простые сахара, такие как декстроза, фруктоза, галактоза, и/или простые многоатомные спирты, такие как сахарные спирты маннит, сорбит, ксилит, лактит, изомальтит, мальтит, гидролизаты гидрированного крахмала, глицерин и комбинации указанных выше соединений.

[0068] Термин «стабилизирующий агент» в контексте настоящего описания включает вещество, которое ингибирует химические реакции с участием пептида. Стабилизирующие агенты могут включать, например, антиоксиданты, такие как метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, ацетилцистеин, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол и комбинации указанных выше соединений.

[0069] Термин «поверхностно-активное вещество» в контексте настоящего описания включает амфифильные молекулы, то есть молекулы, содержащие как гидрофобные группы (хвосты), так и гидрофильные группы (головы). Таким образом, поверхностно-активное вещество содержит как нерастворимый в воде (или растворимый в масле) компонент, так и растворимый в воде компонент. В контексте настоящего описания поверхностно-активные вещества могут представлять собой детергенты, смачивающие агенты, эмульгаторы, пенообразующие агенты или диспергирующие агенты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида или конформационно ограниченный полипептид могут выполнять функцию поверхностно-активного вещества.

[0070] Термин «хелатирующий агент» в контексте настоящего описания включает соединение, которое может образовывать две или более связей с ионом металла, то есть полидентатный лиганд. Хелатирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), этилендиамин, аминокислоты, такие как глутаминовая кислота и гистидин, органические двухосновные кислоты, такие как щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, и тому подобное, и фармацевтически приемлемые соли указанных выше соединений. В нескольких вариантах реализации хелатирующий агент представляет собой ЭДТА или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида,или конформационно ограниченный полипептид, или его фармацевтически приемлемая соль могут выполнять функцию хелатора.

[0071] Термин «повышающий вязкость агент» в контексте настоящего описания включает вещества, которые влияют на вязкость (единица измерения - сантипуаз, или сП) композиции. Примеры повышающих вязкость агентов, включают, но не ограничиваются ими: полисахариды, такие как гиалуроновая кислота и ее соли, хондроитинсульфат и его соли, декстраны, различные полимеры ряда целлюлозы (и их производные), виниловые полимеры и полимеры акриловой кислоты. Неограничивающие примеры повышающих вязкость агентов включают поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон (PVP), полиэтиленгликоль (PEG) и полиакриловую кислоту (РАА).

[0072] Термин «офтальмологически приемлемый» в контексте настоящего описания включает вещества, совместимые с тканью глаза; то есть не оказывающие значительных или чрезмерно вредных воздействий при контакте с тканью глаза.

[0073] Термины «стабильный», «стабильность» или «стабилизированный» в контексте настоящего описания включают продукты и композиции, которые укрепляют первичную, вторичную и/или третичную структуру полипептида, но без образования ковалентных связей или солей с полипептидом. В некоторых вариантах реализации стабилизированные композиции могут иметь приемлемое процентное содержание продуктов деградации или агрегации пептида через определенный период времени. Эти продукты деградации пептида могут представлять собой результат, например, окисления и/или гидролиза пептида.

[0074] Термины «пептид», «полипептид» и «белок» в контексте настоящего описания используются взаимозаменяемо. Если иное не ясно из контекста, указанные термины включают полимер, содержащий по меньшей мере две аминокислоты, соединенные пептидными связями. Таким образом, указанные термины включают олигопептиды, их аналоги, производные, ацетилированные производные, гликозилированные производные, пегилированные производные и тому подобное.

[0075] Термины «конформационно ограниченный пептид», «конформационно ограниченный полипептид» и «конформационно ограниченный белок» в контексте настоящего описания используются взаимозаменяемо и включают полимер, содержащий встречающиеся в природе и/или не встречающиеся в природе аминокислоты, в котором по меньшей мере две аминокислоты содержат фрагменты, способные подвергаться реакции (реакциям) с образованием ковалентной связи (становиться «сшитыми») между указанными аминокислотами в дополнение к пептидному остову (далее «сшивающие фрагменты»), что способствует поддержанию спиральной конформации полимера (например, пептида), предпочтительно альфа-спирали. В некоторых вариантах реализации ковалентная связь включает связь углерод-углерод, связь углерод-азот, связь углерод-кислород, амидную связь, дисульфидную связь или циклоприсоединение. Когда сшивающие фрагменты сшиваются, то есть подвергаются реакции с образованием ковалентной связи, которая способствует поддержанию спиральной конформации, это сшивание называют «конформационно ограничивающим» пептид или комбинацию пептидов.

[0076] Термин «конформационно ограничивающая соль» или «конформационно ограниченная соль» относится к соли, предпочтительно к фармацевтически приемлемой соли, которая подвергается самоассоциации с обеспечением поддержания спиральной конформации пептида, полимера или полипептида, предпочтительно конформации альфа-спирали. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль находится в растворе. Конформационно ограничивающие соли включают соединения, которые будут подвергаться самоассоциации с образованием мицеллы или липидного бислоя. Примеры конформационно ограничивающих солей включают, но не ограничиваются ими, соли жирных кислот с прямой цепью, жирных кислот с разветвленной цепью, фосфолипидов и комбинаций любых из указанных выше соединений. Неограничивающие примеры ограничивающих солей включают соли миристолеиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, сапиеновой кислоты, олеиновой кислоты, элаидиновой кислоты, вакценовой кислоты, линолевой кислоты, линоэлаидиновой кислоты, альфа-линоэлаидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, каприловой кислоты, каприновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, арахиновой кислоты, бегеновой кислоты, лигноцериновой кислоты, церотиновой кислоты, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина (лецитина), фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилинозитолфосфата, фосфатидилинозитолбифосфата, фосфатидилинозитолтрифосфата, церамидфосфорилхолина, церамидфосфорилэтаноламина и комбинаций любых из указанных выше соединений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль линолевой кислоты, которая обладает сильным сигналом в диапазоне 220-230 нм в анализе кругового дихромизма, что согласуется со спиральной структурой этой соли. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль представляет собой соль олеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль связывается с липофильной или гидрофобной поверхностью амфипатической спирали, тем самым стабилизируя спиральную структуру. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль не обеспечивает образование солевого мостика между аминокислотами в пептиде. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль представляет собой соль додецилфосфохолина. В некоторых вариантах реализации конформационно ограничивающая соль представляет собой смесь солей.

[0077] Термин «аминокислота» относится к молекуле, содержащей как аминогруппу, так и карбоксильную группу. Аминокислоты включают альфа-аминокислоты и бета-аминокислоты. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой альфа-аминокислоту. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту. В некоторых вариантах реализации не встречающаяся в природе аминокислота включает (D)-аминокислоту или (L)-аминокислоту. В некоторых вариантах реализации не встречающаяся в природе аминокислота включает соединение формулы (I).

[0078] В некоторых вариантах реализации каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых вариантах реализации PG представляет собой подходящую защитную группу для аминогруппы. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из:

[0079] Термин «фармацевтически приемлемая соль» включает соль соединения, которая не вызывают значительного раздражения организма, в который ее вводят, и не подавляет или существенно не уменьшает биологическую активность и свойства соединения. В некоторых вариантах реализации соль соединения может усиливать биологическую активность и свойства соединения. В других вариантах реализации соль может дополнительно повышать структурную целостность или химическую стабильность соединения. В некоторых вариантах реализации соль представляет собой кислотно-аддитивную соль соединения. Фармацевтические соли могут быть получены путем приведения соединения во взаимодействие с неорганическими кислотами, такими как галогенводородная кислота (например, хлористоводородная кислота или бромистоводородная кислотоа), серная кислота, азотная кислота или фосфорная кислота. Фармацевтические соли также могут быть получены путем приведения соединения во взаимодействие с органической кислотой, такой как алифатическая или ароматическая карбоновая, фосфоновая, фосфорная, сульфиновая или сульфоновая кислоты, например, муравьиная, уксусная, янтарная, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, никотиновая, метансульфоновая, этансульфоновая, n-толуолсульфоновая, салициловая или нафталинсульфоновая кислота. Фармацевтические соли также могут быть получены путем приведения соединения во взаимодействие с основанием с получением соли, такой как соль аммония, соль щелочного металла, как то соль натрия или калия, соль щелочноземельного металла, как то соль кальция или магния, соль органических оснований, таких как дициклогексиламин, N-метил-D-глюкамин, трис(гидроксиметил)метиламин, С₁-С₇ алкиламин, циклогексиламин, триэтаноламин, этилендиамин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин и лизин. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой ацетатную соль.

[0080] В некоторых вариантах реализации пептид, например, конформационно ограниченный пептид, синтезируют с применением твердофазного пептидного синтеза (то есть пептид синтезируют на смоле и затем отщепляют от смолы). В некоторых вариантах реализации пептид является конформационно ограниченным, будучи присоединенным к смоле. В некоторых вариантах реализации пептид подвергают конформационому ограничению после отщепления от смолы.

[0081] В контексте настоящего описания термин «смола» относится к смоле, пригодной для применения для твердофазного пептидного синтеза. Твердофазный пептидный синтез является хорошо известным методом синтеза; см. в целом Atherton, Е., Sheppard, R.С. Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press, Oxford, England, 1989, и Stewart J.M., Young, J.D. Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd edition, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984. Типовые смолы, которые могут являться подходящими для выполнения синтеза конформационно ограниченных пептидов, включают, но не ограничиваются ими:

(1) алкенильные смолы (например, смола REM, смола на основе винилсульфона полимерсвязанного, смола на основе винилполистирола);

(2) аминофункционализированные смолы (например, амидиновая смола, N-(4-бензилоксибензил)-гидроксиламин полимерсвязанный, (аминометил)-полистирол полимерсвязанный, (R)-(+)-альфа-метилбензиламин, 2-хлортритильная смола Кнорра, смола на основе 2-N-Fmoc-аминодибензоциклогепта-1,4-диена полимерсвязанного, 4-[4-(1-Fmoc-аминоэтил)-2-метокси-5-нитрофенокси]-бутирамидометилполистирольная смола, 4-бензилоксибензиламин полимерсвязанный, 4-карбоксибензолсульфонамид полимерсвязанный, бис(трет-бутоксикарбонил)-тиоизомочевина полимерсвязанная, диметиламинометилполистирол, Fmoc-3-амино-3-(2-нитрофенил)-пропионовая кислота полимерсвязанная, N-метиламинометилированный полистирол, смола PAL, амидная смола Зибера (Sieber), трет-бутил-N-(2-меркаптоэтил)-карбамат полимерсвязанный, трифенилхлорметан-4-карбоксамид полимерсвязанный);

(3) бензгидриламиновые (ВНА) смолы (например, 2-хлорбензгидрилхлорид полимерсвязанный, НМРВ-бензгидриламин полимерсвязанный, 4-метилбензгидрол полимерсвязанный, бензгидрилхлорид полимерсвязанный, бензгидриламин полимерсвязанный);

(4) Br-функционализированные смолы (например, 4-(бензилокси)-бензилбромид полимерсвязанный, 4-бромполистирол, бромированная смола РРОА, бромированная смола Ванга, бромацеталь полимерсвязанный, бромополистирол, HypoGel® 200 Br, полистирол А-Br для пептидного синтеза, бромид селена полимерсвязанный, TentaGel HL-Br, TentaGel MB-Br, TentaGel S-Br, TentaGel S-Br);

(5) хлорметиловые смолы (например, 5-[4-(хлорметил-)фенил]-пентил]-стирол полимерсвязанный, 4-(бензилокси)-бензилхлорид полимерсвязанный, 4-метоксибензгидрилхлорид полимерсвязанный);

(6) СНО-функционализированные смолы (например, (4-формил-3-метоксифеноксиметил)полистирол, (4-формил-3-метоксифеноксиметил)полистирол, 3-бензилоксибензальдегид полимер связанный, 4-бензилокси-2,6-диметоксибензальдегид полимерсвязанный, формилполистирол, HypoGel® 200 СНО, смола на основе индола, полистирол A-CH(OEt)₂, TentaGel HL-CH(OEt)₂);

(7) Cl-функционализированные смолы (например, бензоилхлорид полимерсвязанный, (хлорметил)-полистирол, смола Меррифилда);

(8) CO₂H-функционализированные смолы (например, карбоксиэтилполистирол, HypoGel® 200 СООН, полистирол АМ-СООН, TentaGel HL-COOH, TentaGel МВ-СООН, TentaGel S-СООН);

(9) смолы Hypo-Gel (например, HypoGel® 200 FMP, HypoGel® 200 РНВ, HypoGel® 200 Trt-OH, HypoGel® 200 HMB);

(10) I-функционализированные смолы (например, 4-иодфенол полимерсвязанный, иодполистирол); Janda-Jels™ (-Rink амид, JandaJel-NH₂, JandaJel-Cl, JandaJel-4-меркаптофенол, JandaJel-OH, JandaJel-1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид, JandaJel-1,3,4,6,7,8-гексагидро-2H-пиримидо-[1,2-а]пиримидин, JandaJel-морфолин, JandaJel-полипиридин, JandaJel-трифенилфосфин, JandaJel-Wang);

(11) смолы MBHA (3[4'-(гидроксиметил)-фенокси]-пропионовая кислота-4-метилбензгидриламиновая смола, 4-(гидроксиметил)-феноксиуксусная кислота, полимерсвязанная со смолой МВНА, HMBA-4-метилбензгидриламин полимерсвязанный, 4-метилбензгидриламина гидрохлорид полимерсвязанный Capacity (amine));

(12) NH₂-функционализированные смолы ((аминометил)-полистирол, (аминометил)-полистирол, HypoGel® 200 NH₂, полистирол AM-NH₂, полистирольные микросферы 2-аминоэтилированные, полистирольные микросферы 2-бромэтилированные, полистирольные микросферы 2-гидроксиэтилированные, TentaGel HL-NH₂, Tentagel М Br, Tentagel М NH₂, Tentagel M OH, TentaGel MB-NH₂, TentaGel S-NH₂, TentaGel S-NH₂);

(13) ОН-функционализированные смолы (например, 4-гидроксиметилбензойная кислота полимерсвязанная, смолы на основе гидроксиметила, ОН-функционализированные смолы Ванга);

(14) смолы на основе оксимов (например, 4-хлорбензофенона оксим полимерсвязанный, бензофенона оксим полимерсвязанный, 4-метоксибензофенона оксим полимерсвязанный);

(15) ПЭГ-смолы (например, этиленгликоль полимерсвязанный);

(16) Вос-/Blz-смолы для синтеза пептидов (например, смола Boc-Lys(Boc)-Lys [Boc-Lys(Boc)]-Cys(Acm)-b-Ala-O-PAM, смола Boc-Lys(Fmoc)-Lys[Boc-Lys(Fmoc)]-b-Ala-O-Pam, смола Boc-Lys(Boc)-Lys[Boc-Lys(Boc)]-Lys{Boc-Lys(Boc)-Lys[Boc-Lys(Boc)]}-b-Ala-O-PAM, смола Boc-Lys(Fmoc)-Lys[Boc-Lys(Fmoc)]-Lys{Boc-Lys(Fmoc)-Lys[Boc-Lys(Fmoc)]}-b-Ala-O-PAM, смола Boc-Lys(Boc)-Lys[Boc-Lys(Boc)]-Lys{Boc-Lys(Boc)-Lys[Boc-Lys(Boc)]}-Cys(Acm)-b-Ala-O-PAM, предварительно загруженные смолы РАМ);

(17) Fmoc-/t-Bu-смолы для синтеза пептидов (например, Fmoc-Lys(Fmoc)-Lys[Fmoc-Lys(Fmoc)]-b-Ala-O-смола Ванга, Fmoc-Lys(Fmoc)-Lys[Fmoc-Lys(Fmoc)]-Lys{Fmoc-Lys(Fmoc)-Lys[Fmoc-Lys(Fmoc)]}-b-Ala-O-смола Ванга, предварительно загруженные тритильные смолы TentaGel® S, предварительно загруженные смолы TentaGel®, предварительно загруженные тритильные смолы, предварительно загруженные смолы Ванга, тритильные смолы, предварительно загруженные аминоспиртами);

(18) тиол-функционализированные смолы (например, HypoGel® 200 S-Trt, полистирол AM-S-Trityl, TentaGel HL-S-Trityl, TentaGel MB-S-Trityl, TentaGel S-S-Trityl)); и

(19) Смолы Ванга (например, Fmoc-Ala-смола Ванга, Fmoc-Arg(Pbf)-смола Ванга, Fmoc-Arg(Pmc)-смола Ванга, Fmoc-Asn(Trt)-смола Ванга, Fmoc-Asp(OtBu)-смола Ванга, Fmoc-Cys(Acm)-смола Ванга, Fmoc-Cys(StBu)-смола Ванга, Fmoc-Cys(Trt) смола Ванга, Fmoc-Gln(Trt)-смола Ванга, Fmoc-Glu(OtBu)-смола Ванга, Fmoc-Gly-смола Ванга, Fmoc-H is(Trt)-смола Ванга, Fmoc-Ile-смола Ванга, Fmoc-Leu-смола Ванга, Fmoc-Lys(Boc)-смола Ванга, Fmoc-Met-смола Ванга, Fmoc-D-Met-смола Ванга, Fmoc-Phe-смола Ванга, Fmoc-Pro-смола Ванга, Fmoc-Ser(tBu)-смола Ванга, Fmoc-Ser(Trt)-смола Ванга, Fmoc-Thr(tBu)-смола Ванга, Fmoc-Trp(Boc) смола Ванга, Fmoc-Trp-смола Ванга, Fmoc-Tyr(tBu)-смола Ванга, Fmoc-Val-смола Ванга).

[0082] «Подходящая защитная группа для аминогруппы» в контексте настоящего описания хорошо известна в данной области техники и включает защитные группы, подробно описанные в источнике Protecting Groups in Organic Synthesis, Т.W. Greene and P.G.M. Wuts, 3^rd edition, John Wiley & Sons, 1999, полностью включенном в настоящий документ посредством ссылки. Подходящие защитные группы для аминогруппы включают метилкарбамат, этилкарбамат, 9-флуоренилметилкарбамат (Fmoc), 9-(2-сульфо)флуоренилметилкарбамат, 9-(2,7-дибром)флуоренилметилкарбамат, 2,7-ди-т-бутил-[9-(10,10-диоксо-10,10,10,10-тетрагидротиоксантил)]метилкарбамат (DBD-Tmoc), 4-метоксифенацилкарбамат (Phenoc), 2,2,2-трихлорэтилкарбамат (Troc), 2-триметилсилилэтилкарбамат (Теос), 2-фенилэтилкарбамат (hZ), 1-(1-адамантил)-1-метилэтилкарбамат (Adpoc), 1,1-диметил-2-галогенэтилкарбамат, 1,1-диметил-2,2-дибромэтилкарбамат (DB-t-BOC), 1,1-диметил-2,2,2-трихлорэтилкарбамат (ТСВОС), 1-метил-1-(4-бифенилил)этилкарбамат (Врос), 1-(3,5-ди-т-бутилфенил)-1-метилэтилкарбамат (t-Bumeoc), 2-(2'- и 4'-пиридил)этилкарбамат (Руос), 2-(N,N-дициклогексилкарбоксамидо)этилкарбамат, т-бутилкарбамат (ВОС), 1-адамантилкарбамат (Adoc), винилкарбамат (Voc), аллилкарбамат (Alloc), 1-изопропилаллилкарбамат (Ipaoc), циннамилкарбамат (Coc), 4-нитроциннамилкарбамат (Noc), 8-хинолилкарбамат, N-гидроксипиперидинилкарбамат, алкилдитиокарбамат, бензилкарбамат (Cbz), п-метоксибензилкарбамат (Moz), п-нитробензилкарбамат, п-бромбензилкарбамат, п-хлорбензилкарбамат, 2,4-дихлорбензилкарбамат, 4-метилсульфинилбензилкарбамат (Msz), 9-антрилметилкарбамат, дифенилметилкарбамат, 2-метилтиоэтилкарбамат, 2-метилсульфонилэтилкарбамат, 2-(п-толуолсульфонил)этилкарбамат, [2-(1,3-дитианил)]метилкарбамат (Dmoc), 4-метилтиофенилкарбамат (Mtpc), 2,4-диметилтиофенилкарбамат (Bmpc), 2-фосфониоэтилкарбамат (Реос), 2-трифенилфосфониоизопропилкарбамат (Ррос), 1,1-диметил-2-цианоэтилкарбамат, м-хлор-п-ацилоксибензилкарбамат, п-(дигидроксиборил)бензилкарбамат, 5-бензизоксазолилметилкарбамат, 2-(трифторметил)-6-хромонилметилкарбамат (Tcroc), м-нитрофенилкарбамат, 3,5-диметоксибензилкарбамат, о-нитробензилкарбамат, 3,4-диметокси-6-нитробензилкарбамат, фенил(о-нитрофенил)метилкарбамат, фенотиазинил-(10)-карбонильное производное, N'-п-толуолсульфониламинокарбонильное производное, N'-фениламинотиокарбонильное производное, т-амилкарбамат, S-бензилтиокарбамат, п-цианобензилкарбамат, циклобутилкарбамат, циклогексилкарбамат, циклопентилкарбамат, циклопропилметилкарбамат, п-децилоксибензилкарбамат, 2,2-диметоксикарбонилвинилкарбамат, о-(N,N-диметилкарбоксамидо)бензилкарбамат, 1,1-диметил-3-(N,N-диметилкарбоксамидо)пропилкарбамат, 1,1-диметилпропинилкарбамат, ди(2-пиридил)метилкарбамат, 2-фуранилметилкарбамат, 2-иодэтилкарбамат, изоборнилкарбамат, изобутилкарбамат, изоникотинилкарбамат, п-(п'-метоксифенилазо)бензилкарбамат, 1-метилциклобутилкарбамат, 1-метилциклогексилкарбамат, 1-метил-1-циклопропилметилкарбамат, 1-метил-1-(3,5-диметоксифенил)этилкарбамат, 1-метил-1-(п-фенилазофенил)этилкарбамат, 1-метил-1-фенилэтилкарбамат, 1-метил-1-(4-пиридил)этилкарбамат, фенилкарбамат, п-(фенилазо)бензилкарбамат, 2,4,6-три-т-бутилфенилкарбамат, 4-(триметиламмоний)бензилкарбамат, 2,4,6-триметилбензилкарбамат, формамид, ацетамид, хлорацетамид, трихлорацетамид, трифторацетамид, фенилацетамид, 3-фенилпропанамид, пиколинамид, 3-пиридилкарбоксамид, N-бензоилфенилаланильное производное, бензамид, п-фенилбензамид, о-нитрофенилацетамид, о-нитрофеноксиацетамид, ацетоацетамид, (N'-дитиобензилоксикарбониламино)ацетамид, 3-(п-гидроксифенил)пропанамид, 3-(о-нитрофенил)пропанамид, 2-метил-2-(о-нитрофенокси)пропанамид, 2-метил-2-(о-фенилазофенокси)пропанамид, 4-хлорбутанамид, 3-метил-3-нитробутанамид, о-нитроциннамид, производное N-ацетилметионина, о-нитробензамид, о-(бензоилоксиметил)бензамид, 4,5-дифенил-3-оксазолин-2-он, N-фталимид, N-дитиасукцинимид (Dts), N-2,3-дифенилмалеимид, N-2,5-диметилпиррол, аддукт N-1,1,4,4-тетраметилдисилилазациклопентана (STABASE), 5-замещенный 1,3-диметил-1,3,5-триазациклогексан-2-он, 5-замещенный 1,3-дибензил-1,3,5-триазациклогексан-2-он, 1-замещенный 3,5-динитро-4-пиридон, N-метиламин, N-аллиламин, N-[2-(триметилсилил)этокси]метиламин (SEM), N-3-ацетоксипропиламин, N-(1-изопропил-4-нитро-2-оксо-3-пирролин-3-ил)амин, соли четвертичного аммония, N-бензиламин, N-ди(4-метоксифенил)метиламин, N-5-дибензосубериламин, N-трифенилметиламин (Tr), N-[(4-метоксифенил)дифенилметил]амин (MMTr), N-9-фенилфлуорениламин (PhF), N-2,7-дихлор-9-флуоренилметиленамин, N-ферроценилметиламино (Fcm), N-2-пиколиламино-N'-оксид, N-1,1-диметилтиометиленамин, N-бензилиденамин, N-п-метоксибензилиденамин, N-дифенилметиленамин, N-[(2-пиридил)мезитил]метиленамин, N-(N',N'-диметиламинометилен)амин, N,N'-изопропилидендиамин, N-п-нитробензилиденамин, N-салицилиденамин, N-5-хлорсалицилиденамин, N-(5-хлор-2-гидроксифенил)фенилметиленамин, N-циклогексилиденамин, N-(5,5-диметил-3-оксо-1-циклогексениламин, производное N-борана, производное N-дифенилбориновой кислоты, N-[фенил(пентакарбонилхром-или вольфрам)карбонил]амин, N-хелат меди, N-хелат цинка, N-нитроамин, N-нитрозамин, амин N-оксид, дифенилфосфинамид (Dpp), диметилтиофосфинамид (Mpt), дифенилтиофосфинамид (Ppt), диалкилфосфорамидаты, дибензилфосфорамидат, дифенилфосфорамидат, бензолсульфенамид, о-нитробензолсульфенамид (Nps), 2,4-динитробензолсульфенамид, пентахлорбензолсульфенамид, 2-нитро-4-метоксибензолсульфенамид, трифенилметилсульфенамид, 3-нитропиридинсульфенамид (Npys), п-толуолсульфонамид (Ts), бензолсульфонамид, 2,3,6,-триметил-4-метоксибензолсульфонамид (Mtr), 2,4,6-триметоксибензолсульфонамид (Mtb), 2,6-диметил-4-метоксибензолсульфонамид (Pme), 2,3,5,6-тетраметил-4-метоксибензолсульфонамид (Mte), 4-метоксибензолсульфонамид (Mbs), 2,4,6-триметилбензолсульфонамид (Mts), 2,6-диметокси-4-метилбензолсульфонамид (iMds), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонамид (Pmc), метансульфонамид (Ms), β-триметилсилилэтансульфонамид (SES), 9-антраценсульфонамид, 4-(4',8'-диметоксинафтилметилбензолсульфонамид (DNMBS), бензилсульфонамид, трифторметилсульфонамид и фенацилсульфонамид.

[0083] «Подходящая защитная группа для карбоновой кислоты» или «защищенная карбоновая кислота» в контексте настоящего описания хорошо известны в данной области техники и включают защитные группы и защищенные кислоты, подробно описанные в источнике Greene (1999). Примеры подходящим образом защищенных карбоновых кислот также включают, но не ограничиваются ими, силил-, алкил-, алкенил-, арил- и арилалкил-защищенные карбоновые кислоты. Примеры подходящих силильных групп включают триметилсилил, триэтилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, триизопропилсилил и тому подобное. Примеры подходящих алкильных групп включают метил, бензил, n-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, тритил, трет-бутил, тетрагидропиран-2-ил. Примеры подходящих алкенильных групп включают аллил. Примеры подходящих арильных групп включают необязательно замещенный фенил, дифенил или нафтил. Примеры подходящих арилалкильных групп включают необязательно замещенный бензил (например, п-метоксибензил (МРМ), 3,4-диметоксибензил, О-нитробензил, n-нитробензил, п-галогенбензил, 2,6-дихлорбензил, n-цианобензил), а также 2- и 4-пиколил.

[0084] «Подходящая защитная группа для гидроксильной группы» в контексте настоящего описания хорошо известна в данной области техники и включает защитные группы, подробно описанные в источнике Protecting Groups in Organic Synthesis, Т.W. Greene and P.G.M. Wuts, 3^rd edition, John Wiley & Sons, 1999, полностью включенном в настоящий документ посредством ссылки. Подходящие защитные группы для гидроксильной группы включают метил, метоксиметил (MOM), метилтиометил (МТМ), т-бутилтиометил, (фенилдиметилсилил)метоксиметил (SMOM), бензилоксиметил (ВОМ), п-метоксибензилоксиметил (РМВМ), (4-метоксифенокси)метил (р-АОМ), гваяколметил (GUM), т-бутоксиметил, 4-пентенилоксиметил (РОМ), силоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил (MEM), 2,2,2-трихлорэтоксиметил, бис(2-хлорэтокси)метил, 2-(триметилсилил)этоксиметил (SEMOR), тетрагидропиранил (ТНР), 3-бромтетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, 1-метоксициклогексил, 4-метокситетрагидропиранил (МТНР), 4-метокситетрагидротиопиранил, 4-метокситетрагидротиопиранил S,S-диоксид, 1-[(2-хлор-4-метил)фенил]-4-метоксипиперидин-4-ил (СТМР), 1,4-диоксан-2-ил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофуранил, 2,3,3а,4,5,6,7,7а-октагидро-7,8,8-триметил-4,7-метанобензофуран-2-ил, 1-этоксиэтил, 1-(2-хлорэтокси)этил, 1-метил-1-метоксиэтил, 1-метил-1-бензилоксиэтил, 1-метил-1-бензилокси-2-фторэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 2-триметилсилилэтил, 2-(фенилселенил)этил, т-бутил, аллил, п-хлорфенил, п-метоксифенил, 2,4-динитрофенил, бензил, п-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, о-нитробензил, п-нитробензил, п-галогенбензил, 2,6-дихлорбензил, п-цианобензил, п-фенилбензил, 2-пиколил, 4-пиколил, 3-метил-2-пиколил N-оксидо, дифенилметил, п,п'-динитробензгидрил, 5-дибензосуберил, трифенилметил, а-нафтилдифенилметил, п-метоксифенилдифенилметил, ди(п-метоксифенил)фенилметил, три(п-метоксифенил)метил, 4-(4'-бромфенацилоксифенил)дифенилметил, 4,4',4''-трис(4,5-дихлорфталимидофенил)метил, 4,4',4''-трис(левулиноилоксифенил)метил, 4,4',4''-трис(бензоилоксифенил)метил, 3-(имидазол-1-ил)бис(4',4''-диметоксифенил)метил, 1,1-бис(4-метоксифенил)-1'-пиренилметил, 9-антрил, 9-(9-фенил)ксантенил, 9-(9-фенил-10-оксо)антрил, 1,3-бензодитиолан-2-ил, бензизотиазолил S,S-диоксидо, триметилсилил (TMS), триэтилсилил (TES), триизопропилсилил (TIPS), диметилизопропилсилил (IPDMS), диэтилизопропилсилил (DEIPS), диметилгексилсилил, т-бутилдиметилсилил (TBDMS), т-бутилдифенилсилил (TBDPS), трибензилсилил, три-п-ксилилсилил, трифенилсилил, дифенилметилсилил (DPMS), т-бутилметоксифенилсилил (TBMPS), формиат, бензоилформиат, ацетат, хлорацетат, дихлорацетат, трихлорацетат, трифторацетат, метоксиацетат, трифенилметоксиацетат, феноксиацетат, п-хлорфеноксиацетат, 3-фенилпропионат, 4-оксопентаноат (левулинат), 4,4-(этилендитио)пентаноат (левулиноилдитиоацеталь), пивалоат, адамантоат, кротонат, 4-метоксикротонат, бензоат, п-фенилбензоат, 2,4,6-триметилбензоат (мезитоат), алкилметилкарбонат, 9-флуоренилметилкарбонат (Fmoc), алкилэтилкарбонат, алкил-2,2,2-трихлорэтилкарбонат (Troc), 2-(триметилсилил)этилкарбонат (TMSEC), 2-(фенилсульфонил)этилкарбонат (Psec), 2-(трифенилфосфонио)этилкарбонат (Реос), алкилизобутилкарбонат, алкилвинилкарбонат алкилаллилкарбонат, алкил-п-нитрофенилкарбонат, алкилбензилкарбонат, алкил-п-метоксибензилкарбонат, алкил-3,4-диметоксибензилкарбонат, алкил-о-нитробензилкарбонат, алкил-п-нитробензилкарбонат, алкил-S-бензилтиокарбонат, 4-этокси-1-нафтилкарбонат, метилдитиокарбонат, 2-иодбензоат, 4-азидобутират, 4-нитро-4-метилпентаноат, о-(дибромметил)бензоат, 2-формилбензолсульфонат, 2-(метилтиометокси)этил, 4-(метилтиометокси)бутират, 2-(метилтиометоксиметил)бензоат, 2,6-дихлор-4-метилфеноксиацетат, 2,6-дихлор-4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)феноксиацетат, 2,4-бис(1,1-диметилпропил)феноксиацетат, хлордифенилацетат, изобутират, моносукцинат, (Е)-2-метил-2-бутеноат, о-(метоксикарбонил)бензоат, α-нафтоат, нитрат, алкил-N,N,N',N'-тетраметилфосфородиамидат, алкил-N-фенилкарбамат, борат, диметилфосфинотиоил, алкил-2,4-динитрофенилсульфенат, сульфат, метансульфонат (мезилат), бензилсульфонат и тозилат (Ts). Для защиты 1,2- или 1,3-диолов защитные группы включают метиленацеталь, этилиденацеталь, 1-т-бутилэтилиденкеталь, 1-фенилэтилиденкеталь, (4-метоксифенил)этилиденацеталь, 2,2,2-трихлорэтилиденацеталь, ацетонид, циклопентилиденкеталь, циклогексилиденкеталь, циклогептилиденкеталь, бензилиденацеталь, п-метоксибензилиденацеталь, 2,4-диметоксибензилиденкеталь, 3,4-диметоксибензилиденацеталь, 2-нитробензилиденацеталь, метоксиметиленацеталь, этоксиметиленацеталь, ортоэфир диметоксиметилена, ортоэфир 1-метоксиэтилидена, ортоэфир 1-этоксиэтилидена, ортоэфир 1,2-диметоксиэтилидена, ортоэфир α-метоксибензилидена, производное 1-(N,N-диметиламино)этилидена, производное α-(N,N'-диметиламино)бензилидена, ортоэфир 2-оксациклопентилидена, ди-т-бутилсилиленовая группа (DTBS), производное 1,3-(1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксанилидена) (TIPDS), производное тетра-т-бутоксидисилоксан-1,3-диилидена (TBDS), циклические карбонаты, циклические боронаты, этилборонат и фенилборонат.

[0085] «Подходящая защитная группа для тиольной группы» в контексте настоящего описания хорошо известна в данной области техники и включает защитные группы, подробно описанные в источнике Protecting Groups in Organic Synthesis, Т. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3^rd edition, John Wiley & Sons, 1999, полностью включенном в настоящий документ посредством ссылки. Примеры подходящим образом защищенных тиольных групп также включают, но не ограничиваются ими, сложные тиоэфиры, карбонаты, сульфонаты, аллиловые простые тиоэфиры, простые тиоэфиры, силиловые простые тиоэфиры, алкиловые простые тиоэфиры, арилалкиловые простые тиоэфиры и алкилоксиалкиловые простые тиоэфиры. Примеры подходящих сложноэфирных групп включают формиаты, ацетаты, пропионаты, пентаноаты, кротонаты и бензоаты. Конкретные примеры подходящих сложноэфирных групп включают формиат, бензоилформиат, хлорацетат, трифторацетат, метоксиацетат, трифенилметоксиацетат, п-хлорфеноксиацетат, 3-фенилпропионат, 4-оксопентаноат, 4,4-(этилендитио)пентаноат, пивалоат (триметилацетат), кротонат, 4-метоксикротонат, бензоат, п-бензилбензоат, 2,4,6-триметилбензоат. Примеры подходящих карбонатов включают 9-флуоренилметил-, этил-, 2,2,2-трихлорэтил-, 2-(триметилсилил)этил-, 2-(фенилсульфонил)этил-, винил-, аллил- и п-нитробензилкарбонат. Примеры подходящих силильных групп включают триметилсилил, триэтилсилил, m-бутилдиметилсилил, m-бутилдифенилсилил, триизопропилсилиловый простой эфир и другие триалкилсилиловые простые эфиры. Примеры подходящих алкильных групп включают метил, бензил, n-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, тритил, m-бутил и аллиловый простой эфир или их производные. Примеры подходящих арилалкильных групп включают бензил, n-метоксибензил (МРМ), 3,4-диметоксибензил, О-нитробензил, n-нитробензил, n-галогенбензил, 2,6-дихлорбензил, n-цианобензил, 2- и 4-пиколиловые эфиры. Условия добавления и удаления упомянутых выше защитных групп, отдельно и в комбинациях, известны в данной области техники.

[0086] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, или конформационно ограниченный пептид, или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой альфа-спиральный пептид. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, или конформационно ограниченный пептид, или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой по существу альфа-спиральный пептид. В контексте настоящего описания фраза «по существу альфа-спиральный» относится к полипептиду, образующему в среднем торсионные углы остова (ϕ, ψ) в диапазоне от примерно (-90°, 15°) до примерно (35°, 70°). В альтернативном варианте фраза «по существу альфа-спиральный» относится к конформационно ограниченному полипептиду, образующему торсионные углы таким образом, что торсионный угол ψ одного остатка и торсионный угол ϕ следующего остатка в сумме составляют в среднем от примерно -80° до примерно 125°. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, или конформационно ограниченный пептид, или его фармацевтически приемлемая соль образуют торсионные углы таким образом, что торсионный угол ψ одного остатка и торсионный угол ϕ следующего остатка в сумме составляют в среднем от примерно -100° до примерно -110°. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида,или конформационно ограниченный пептид, или его фармацевтически приемлемая соль образуют торсионные углы таким образом, что торсионный угол ψ одного остатка и торсионный угол ϕ следующего остатка в сумме составляют в среднем примерно -105°.

[0087] Фраза «по существу альфа-спиральный» также может относиться к полипептиду, содержащему по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95% аминокислот, представленных в полипептидной цепи в альфа-спиральной конформации или имеющими торсионные углы, указанные в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, или конформационно ограниченный пептид, или его фармацевтически приемлемые соли находятся или находятся по меньшей мере на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или на любое промежуточное значение, в альфа-спиральной конформации. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемые соли демонстрируют по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, или на любое промежуточное значение, большую альфа-спиральность, чем эквивалентная не имеющая конформационных ограничений соль пептида или не имеющй конформационных ограничений полипептид. Подтверждение альфа-спиральной вторичной структуры может быть выполнено с помощью известных аналитических методов, таких как рентгеновская кристаллография, электронная кристаллография, волоконная дифракция, флуоресцентная анизотропия, круговой дихроизм (CD) и спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР).

[0088] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид включает полимер, содержащий по меньшей мере 4 встречающиеся в природе и/или не встречающиеся в природе аминокислоты и содержащий по меньшей мере два сшивающих фрагмента.

[0089] В некоторых вариантах реализации сшивающие фрагменты могут быть сшиты с образованием связи углерод-углерод, связи углерод-азот, связи углерод-кислород, связи углерод-сера, амидной связи, дисульфидной связи или циклоприсоединения. В некоторых вариантах реализации сшивающие фрагменты включают алкен, алкин, азид, сульфгидрил, карбоновую кислоту, амин, эпоксид, азиридин, нитрил или имин. Это сшивание способствует спиральности пептида.

[0090] Конформационно ограниченный пептид содержит по меньшей мере два, по меньшей мере четыре или по меньшей мере шесть сшивающих фрагментов в витке спирали. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид содержит 2, 4, 6 или 8 сшивающих фрагментов. В некоторых вариантах реализации сшивающие фрагменты находятся в положении i и i+3 в витке спирали пептида, положении i и i+4 витка спирали пептида, положении i и i+7 витка спирали пептида или комбинации этих положений, например, в положениях 2 и 6 (i и i+4) и положениях 12 и 16 (i и i+4) витка спирали пептида, или в положениях 2 и 6 (i и i+4) и положениях 10 и 17 (i и i+7) витка спирали пептида.

[0091] Способы получения амидных связей хорошо известны в данной области техники и включают, например, способы, описанные в источниках Valeur, et al., Chem. Soc. Rev., Vol. 38, No. 2, pp. 606-631 (2009), Montalbetti, et al., Tetrahedron, Vol. 61, No. 46, pp. 10827-10852 (2005), и Bode, et al., Nature, Vol. 480, pp. 471-479 (2011), полное содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Образование дисульфидных связей включает окисление двух близко расположенных сульфгидрильных групп (-SH). Подходящие окислители известны в данной области техники и включают, например, окислители, описанные в источнике Andreu, et al., Methods Mol. Biol., Vol. 35, pp. 91-169 (1994), полное содержание которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Подходящие способы получения связи углерод-кислород и получения связи углерод-азот известны в данной области техники и включают, например, способы, описанные в источнике Hein, et al., Pharm Res., Vol. 25, No. 10, pp. 2216-2230 (2008), полное содержание которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Подходящие способы осуществления реакций циклоприсоединения известны в данной области техники и включают, например, способы, описанные в источниках Hein, et al., Pharm Res., Vol. 25, No. 10, pp. 2216-2230 (2008) и Padwa and Pearson, "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Synthetic Applications of 1,3-Dipolar Cycloaddition Chemistry Toward Heterocycles and Natural Products," (2003, Wiley and Sons), полное содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Подходящие способы получения связи углерод-углерод известны в данной области техники и включают, например, способы, описанные в источниках Farina, et al., Org. Proc. Res. Dev., Vol. 13, p. 250 (2009), Grubbs, et al., J. Am. Chem. Soc, Vol. 127, p. 17160 (2005), Williams, et al., Chinia, Vol. 69, p.142 (2015), и Sanford, et al., Angew. Chem. Int. Ed., Vol. 39, p. 3451 (2000), полное содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации реагент для получения связи углерод-углерод представляет собой катализатор метатезиса с замыканием цикла. В некоторых вариантах реализации катализатор метатезиса с замыканием цикла выбран из бензилиден-бис(трициклогексилфосфино)-дихлоррутения, [1,3-бис-(2,4,6-триметилфенил)-2-имидазолидинилиден]дихлор(фенилметилен)(трициклогексилфосфино)рутения, дихлор(о-изопропоксифенилметилен)(трициклогексилфосфин)рутения(II) и [1,3-бис-(2,4,6-триметилфенил)-2-имидазолидинилилен]дихлор(о-изопропоксифенилметилен)рутения.

Преимущества нескольких вариантов реализации

[0092] Как описано выше и в настоящем документе, в некоторых вариантах реализации настоящей заявки предложены композиции, содержащие конформационно ограниченную соль пептида. В некоторых вариантах реализации настоящей заявки предложены композиции, содержащие конформационно ограниченную соль пептида (или комбинации пептидов). В некоторых вариантах реализации настоящей заявки предложены композиции, содержащие конформационно ограниченный пептид или его фармацевтически приемлемую соль.

[0093] В некоторых вариантах реализации указанные композиции содержат сниженные количества стабилизаторов и других добавок, которые могут вызывать нежелательные побочные эффекты, и вместе с тем обеспечивают желаемую конформационную и химическую стабильность. В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает стабильность в глазах, полости носа, полости рта, эпителии и других тканях на срок до 1, 3, 6, 12, 24 и 48 часов или более. В некоторых вариантах реализации композиция приготовлена таким образом, что некоторые или все ингредиенты не испаряются, не абсорбируются, не высыхают или иным образом не удаляются после нанесения на глаз или другую область, и вместо этого остаются стабильными и активными в течение нескольких часов (например, 1-3 часов, 3-6 часов, 6-12 часов, 12-24 часов и в промежуточных диапазонах). В некоторых вариантах реализации композиция содержит конформационно ограниченную соль пептида, например, Lacripep™ или других указанных в настоящем документе последовательностей, где конформационно ограниченную соль пептида наносят на глаз, и указанная конформационно ограниченная соль пептида интегрируется в липидный слой слезной жидкости, покрывающей глаз, или располагается на границе липидного и водного компонентов слезной жидкости, при этом конформационно ограниченная соль пептида стабилизирует слезную жидкость и остается в слезной жидкости в течение периода, составляющего по меньшей мере 1-3 часа, по меньшей мере 3-6 часов, или по меньшей мере 12-24 часа, или более 24 часов. В некоторых вариантах реализации композиция содержит конформационно ограниченный пептид, например, конформационно ограниченный Lacripep™ или другие конформационно ограниченные последовательности, указанные в настоящем документе, где конформационно ограниченный пептид наносят на глаз, и указанный конформационно ограниченный пептид интегрируется в липидный слой слезной жидкости, покрывающей глаз, или располагается на границе липидного и водного компонентов слезной жидкости, при этом конформационно ограниченный пептид стабилизирует слезную жидкость и остается в слезной жидкости в течение периода, составляющего по меньшей мере 1-3 часа, по меньшей мере 3-6 часов, или по меньшей мере 12-24 часа, или более 24 часов. Это свойство в некоторых вариантах реализации является особенно предпочтительным, поскольку оно позволяет активным ингредиентам (таким как пептид или конформационно ограниченный пептид) оставаться стабильными и эффективными в течение длительных периодов времени. В некоторых вариантах реализации пониженная частота введения в целом приводит к снижению общей нагрузки ингредиентов на чувствительные участки тела (такие как глаз). В некоторых вариантах реализации композиция содержит фармацевтически приемлемую соль конформационно ограниченного пептида (или комбинации конформационно ограниченных пептидов).

[0094] Несмотря на то, что конформационно ограниченные соли пептидов, конформационно ограниченные пептиды или их фармацевтически приемлемые соли предложены в нескольких вариантах реализации в настоящем документе, в качестве активных ингредиентов наряду с пептидом могут быть применены другие соединения.

[0095] Пептиды являются высокоселективными и эффективными, и в то же время относительно безопасными веществами с хорошей переносимостью. Конформационно ограниченные соли пептидов, конформационно ограниченные пептиды или их фармацевтически приемлемые соли особенно хорошо подходят для композиций, описанных в настоящем документе, поскольку конформационно ограниченные солипептидов, конформационно ограниченные пептиды или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь повышенную химическую и физическую стабильность по сравнению с не имеющими конформационных ограниченийсолями пептидов или не имеющими конформационных ограничений пептидами. Например, не имеющие конформационных ограничений соли пептидов или не имеющие конформационных ограничений пептиды более подвержены гидролизу, окислению и агрегации, чем их конформационно ограниченные соли или конформационно ограниченные эквиваленты. Композиции полипептиднов, как правило, представляют собой водный раствор, содержащий активный пептид наряду с многочисленными стабилизаторами, консервантами и другими агентами для поддержания эффективности пептида. Стабилизаторы, консерванты и другие агенты могут поддерживать химическую и/или структурную целостность полипептида, сохраняя тем самым его эффективность. Некоторые добавки, такие как стабилизаторы и консерванты, могут вызывать нежелательные побочные эффекты, в том числе реакции гиперчувствительности, зуд, а также покалывание или жжение. Однако для максимального увеличения срока годности пептида и сохранения эффективности эти добавки требуются в большинстве пептидных композиций в количествах, вызывающих нежелательные результаты. Даже в композициях, содержащих все эти добавки, пептидные терапевтические агенты, как правило, должны храниться в холодильнике, что затрудняет транспортировку, и даже при хранении в холодильнике они имеют короткий срок годности. Более того, поскольку пептиды со временем подвергаются деградации и/или агрегации (в частности, в результате нагревания и охлаждения при перемещении из охлаждаемого хранилища в условия с комнатной температурой с целью их применения), побочные продукты могут быть не только неактивными, они могут быть токсичными и/или иммуногенными. Разработчики композиций могут пытаться увеличить эффективность пептидной композиции путем увеличения количества активного пептида в композиции. Однако увеличение концентрации пептида также увеличивает скорость агрегации и инактивации пептида.

[0096] Таким образом, в нескольких вариантах реализации в настоящем документе предложены пептидные композиции, которые обеспечивают терапевтические количества конформационно ограниченных солей пептидов (или комбинаций пептидов), конформационно ограниченных пептидов (или комбинаций конформационно ограниченных пептидов) или их фармацевтически приемлемых солей, стабильны при комнатной температуре и содержат уменьшенные (например, только следовые) количества стабилизаторов и/или консервантов, или не содержат их вообще.

[0097] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой конформационно ограниченную форму аминокислотной последовательности (a) Ac-KQFIENGSEFAQKLLKKFS-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂, где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ ID NO: 1); или (b) Ac-KQFIENGSEFAQKLLKKFSLLKPWA-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu- Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-Leu-Leu-Lys-Pro-Trp-Ala-NH₂, где «Ас» представляет собой ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах реализации С-конец, N-конец или как С-конец, так и N-конец SEQ ID NO: 1 или 2 не модифицированы.

[0098] В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченную соль аминокислотной последовательности (а) Ас-KQFIENGSEFAQKLLKKFS-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly- Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂, где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ III NO: 1); или (b) Ас-KQFIENGSEFAQKLLKKFSLLKPWA-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-Leu-Leu-Lys-Pro-Trp-Ala-NH₂, где «Ас» представляет собой ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах реализации С-конец, N-конец или как С-конец, так и N-конец SEQ ID NO: 1 или 2 не модифицированы.

[0099] В некоторых вариантах реализации пептид или конформационно ограниченный пептид выбран из группы, состоящей из аминокислотной последовательности:

(a) Ac-XQFIXNGSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 10)

(b) Ac-XQFIENGXEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 11)

(c) AC-KXFIEXGSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 12)

(d) Ac-KXFIENGSXFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 13)

(e) AC-KQXIENXSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 14)

(f) AC-KQXIENGSEXAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 15)

(g) Ac-KQFXENGXEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 16)

(h) Ac-KQFXENGSEFXQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 17)

(i) AC-KQFIXNGSXFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 18)

(j) Ac-KQFIXNGSEFAXKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 19)

(k) AC-KQFIEXGSEXAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 20)

(l) AC-KQFIEXGSEFAQXLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 21)

(m) Ac-KQFIENXSEFXQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 22)

(n) Ac-KQFIENXSEFAQKXLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 23)

(o) Ac-KQFIENGXEFAXKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 24)

(p) Ac-KQFIENGXEFAQKLXKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 25)

(q) Ac-KQFIENGSXFAQXLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 26)

(r) Ac-KQFIENGSXFAQKLLXKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 27)

(s) Ac-KQFIENGSEXAQKXLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 28)

(t) AC-KQFIENGSEXAQKLLKXFS-NH₂ (SEQ ID NO: 29)

(u) AC-KQFIENGSEFXQKLXKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 30)

(v) Ac-KQFIENGSEFXQKLLKKXS-NH₂ (SEQ ID NO: 31)

(w) Ac-KQFIENGSEFAXKLLXKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 32)

(x) Ac-KQFIENGSEFAXKLLKKFX-NH₂ (SEQ ID NO: 33)

(y) Ac-KQFIENGSEFAQXLLKXFS-NH₂ (SEQ ID NO: 34)

(z) Ac-KQFIENGSEFAQKXLKKXS-NH₂ (SEQ ID NO: 35)

(aa) AC-KQFIENGSEFAQKLXKKFX-NH₂ (SEQ ID NO: 36)

(bb) Ac-XQFXENGSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 37)

(cc) Ac-KXFIXNGSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 38)

(dd) Ac-KQXIEXGSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 39)

(ее) Ac-KQFXENXSEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 40)

(ff) AC-KQFIXNGXEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 41)

(gg) AC-KQFIEXGSXFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 42)

(hh) Ac-KQFIENXSEXAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 43)

(ii) Ac-KQFIENGXEFXQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 44)

(jj) Ac-KQFIENGSXFAXKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 45)

(kk) Ac-KQFIENGSEXAQXLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 46)

(ll) AC-KQFIENGSEFXQKXLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 47)

(mm) Ac-KQFIENGSEFAXKLXKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 48)

(nn) AC-KQFIENGSEFAQXLLXKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 49)

(oo) AC-KQFIENGSEFAQKXLKXFS-NH₂ (SEQ ID NO: 50)

(pp) AC-KQFIENGSEFAQKLXKKXS-NH₂ (SEQ ID NO: 51)

(qq) AC-KQFIENGSEFAQKLLXKFX-NH₂ (SEQ ID NO: 52),

где «Ас» представляет собой ацетильную группу на N-конце и С-конец амидирован, а «X» представляет собой аминокислоту, содержащую сшивающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации X включает соединение формулы (I). Конформационно ограниченная форма пептида имеет ковалентную связь между двумя аминокислотами X, которая способствует поддержанию спиральной конформации пептида, предпочтительно альфа-спирали. В некоторых вариантах реализации С-конец, N-конец или как С-конец, так и N-конец последовательностей (a)-(qq), перечисленных выше, не модифицированы.В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой соль, имеющую одну из представленных выше последовательностей или ее фрагмент, необязательно с ацетилированным N-концом и/или амидированным С-концом.

[0100] В некоторых вариантах реализации пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой конформационно ограниченный пептид, имеющий одну из следующих аминокислотных последовательностей или ее фрагмент, необязательно с ацетилированным N-концом и/или амидированным С-концом, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент. Конформационно ограниченная форма пептида имеет ковалентную связь между двумя аминокислотами, содержащими сшивающие фрагменты, где указанная связь способствует поддержанию спиральной конформации пептида, предпочтительно альфа-спирали. В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченную соль, имеющую одну из следующих аминокислотных последовательностей или ее фрагмент, необязательно с ацетилированным N-концом и/или амидированным С-концом.

[0101] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой конформационно ограниченную форму пептида, имеющего аминокислотную последовательность Ac-KQFIENGSEFAQKLLKKFS-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂, где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой любую одну или более из SEQ ID NO: 1-9, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, и между указанными фрагментами образуется ковалентная связь, которая способствует поддержанию спиральной конформации, предпочтительно альфа-спирали. В некоторых вариантах реализации С-конец, N-конец или как С-конец, так и N-конец пептида не модифицированы.

[0102] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида представлена аминокислотной последовательностью Ас-KQFIENGSEFAQKLLKKFS-NH₂ или Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu- Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂, где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу и С-конец амидирован (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™. В некоторых вариантах реализации пептид представляет собой конформационно ограниченную соль любой одной или более из SEQ ID NO: 1-9. В некоторых вариантах реализации С-конец, N-конец или как С-конец, так и N-конец пептида не модифицированы.

Буферы и рН

[0103] Буферы стабилизируют рН раствора, то есть препятствуют изменениям рН при добавлении к раствору кислых или щелочных веществ. Подходящие для применения в настоящей композиции буферы включают, но не ограничиваются ими, гидрохлорид глицина, ацетат натрия, фосфатно-солевой буфер (ФБС) (включая гидрофосфатные и дигидрофосфатные соли), цитратный буфер (лимонная кислота и цитрат натрия), фосфатно-цитратный буфер, трис(гидроксиметил)аминометан (Трис), карбонатные буферы (карбонат натрия и бикарбонат натрия), боратные буферы и их комбинации.

[0104] В некоторых вариантах реализации буфер включает одно или более из ацетата натрия, фосфатно-солевого буфера (ФБС), цитратного буфера (лимонной кислоты и цитрата натрия) и фосфат-цитратного буфера. В некоторых вариантах реализации буфер выбран из группы, состоящей из ацетата натрия, фосфатно-солевого буфера (ФБС), цитратного буфера (лимонной кислоты и цитрата натрия) и фосфатно-цитратного буфера.

[0105] В некоторых вариантах реализации количество буфера ограничено значением менее 0,1, 0,2, 0,3 или 0,4% или находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0106] В одном из вариантов реализации буфер представляет собой цитратный буфер (лимонную кислоту и цитрат натрия). В одном из вариантов реализации единственный буфер представляет собой цитратный буфер, и в композиции не присутствует других буферных агентов.

[0107] В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет от 6 до 7,4; от 6,1 до 7,3; от 6,2 до 7,2; от 6,3 до 7,1; от 6,4 до 7,0; от 6,5 до 6,9; от 6,6 до 6,8 или любое промежуточное значение рН. В некоторых вариантах реализации рН композиции составляет или примерно составляет 6; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9; 7; 7,1; 7,2; 7,3; 7,4 или находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений. В одном из вариантов реализации рН композиции составляет или примерно составляет 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7 или 6,8.

[0108] Указанный рН композиции в случае необходимости может быть скорректирован путем добавления растворов кислоты или основания. Могут быть применены любые кислота или основание, сопряженное соединение которых является офтальмологически приемлемым. Кислоты включают, например, хлористоводородную кислоту, основания включают, например, гидроксиды натрия и калия.

Хелатирующие агенты

[0109] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более хелатирующих агентов. В некоторых вариантах реализации хелатирующие агенты выбраны из группы, состоящей из этилендиаминтетрауксусной кислоты, динатриевой соли ЭДТУ (ЭДТА), этилендиамина, аминокислот, таких как глутаминовая кислота и гистидин, органических двухосновных кислот, таких как щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота и тому подобное, 3-димеркаптопропансульфоновой кислоты (DMPS), альфа-липоевой кислоты (ALA), 2,3-димеркаптопропансульфоновой кислоты (DMPS), тиаминтетрагидрофурфурилдисульфида (TTFD), пеницилламина, димеркаптоянтарной кислоты (DMSA), их комбинаций и фармацевтически приемлемых солей перечисленных выше соединений.

[0110] В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент, ЭДТА в качестве неограничивающего примера, или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в количестве от 0,0001% до 0,1%; от 0,0005% до 0,05%; от 0,0006% до 0,04%; от 0,0007% до 0,003%; от 0,0008% до 0,002%; от 0,0009% до 0,001%; или находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений. В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент присутствует в количестве, равном или меньшем, чем 0,1%; 0,09%; 0,08%; 0,07%; 0,06%; 0,05%; 0,04%; 0,03%; 0,02%; 0,01%; 0,009%; 0,008%; 0,007%; 0,006%; 0,005%; 0,004%; 0,003%; 0,002%; 0,001%; 0,0009%; 0,0008%; 0,0007%; 0,0006%; 0,0005%; 0,0004%; 0,0003%; 0,0002% или 0,0001%, или его количество находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0111] В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент, такой как ЭДТА или другие, или его фармацевтически приемлемая соль, присутствует в количестве менее чем примерно 0,05% или менее чем примерно 0,005% (например, примерно 0,001%).

Стабилизирующие агенты

[0112] Буферы и хелатирующие агенты могут стабилизировать пептидные ингредиенты композиций, поддерживая рН и уменьшая опосредованную ионами металлов деградацию пептидов. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более стабилизирующих пептиды агентов помимо буфера и/или хелатирующего агента. В некоторых вариантах реализации указанные один или более стабилизирующих агентов помимо буфера и/или хелатирующего агента выбраны из группы, состоящей из дисахаридов, полисахаридов (например, гиалуроновой кислоты), многоатомных спиртов, сахарных спиртов, аминокислот, белков (например, сывороточного альбумина) и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации неограничивающие примеры стабилизирующих агентов включают трегалозу, сахарозу, маннит, сорбит, полисорбат 20, полисорбат 80, гистидин, глицин и аргинин, а также их комбинации. В одном из вариантов реализации композиция не содержит стабилизатора помимо буферного агента и/или хелатора.

Деградация полипептида

[0113] Полипептиды подвержены физической и химической деградации как во время хранения, так и после введения, например, агрегации, фрагментации, окислению, дезамидированию и гидролизу. Жидкие пептидные композиции, в частности, имеют высокий риск физической и химической нестабильности при получении и хранении. Уменьшение деградации полипептида, в частности, важно для разбавленных пептидных составов, которые исходно содержат очень небольшие количества конкретного пептида. Потеря даже незначительных количеств от исходного небольшого количества может существенно влиять на эффективность композиции.

[0114] В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В некоторых вариантах стабильность композиции определяют посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС). В некоторых вариантах реализации предложены конформационно ограниченныепептиды (или комбинации конформационно ограниченных пептидов) или их фармацевтически приемлемые соли, которые более устойчивы к деградации, чем соответствующий не имеющий конформационных ограничений пептид (или комбинация пептидов). В некоторых вариантах реализации предложены конформационно ограниченные соли пептидов (или комбинации конформационно ограниченных солей пептидов) или их фармацевтически приемлемые соли, которые более устойчивы к деградации, чем соответствующие не имеющие конформационных ограничений соли пептида (или комбинации пептидов).

[0115] В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют после того, как герметичная емкость с композицией находилась в темноте или подвергалась воздействию света при комнатной температуре в течение дней, недель или месяцев (например, 1-24 дней или месяцев, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 дней или месяцев). В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют после того, как герметичная емкость с композицией находилась в темноте или подвергалась воздействию света при температуре от 2 до 8°С, например, при 5°С или любом другом промежуточном значении температуры, в течение дней, недель или месяцев (например, 1-24 дней или месяцев, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 дней или месяцев). В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют после того, как герметичная емкость с композицией находилась в темноте или подвергалась воздействию света при температуре от -10 до -30°С, например, при -25°С или любом другом промежуточном значении температуры, в течение дней, недель или месяцев (например, 1-24 дней или месяцев, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 дней или месяцев). В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют после того, как герметичная емкость с композицией находилась в темноте или подвергалась воздействию света при температуре от 20 до 30°С, например, при 25°С или любом другом промежуточном значении температуры, в течение дней, недель или месяцев (например, 1-24 дней или месяцев, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 дней или месяцев). В некоторых вариантах реализации стабильность композиции определяют после того, как герметичная емкость с композицией находилась в темноте или подвергалась воздействию света и подвергалась перемещению из условий с температурой от 2 до 8°С (хранение) или любым другим промежуточным значением температуры в условия с комнатной температурой на 5 минут один, два, или три раза в день в течение 1-60 дней.

[0116] В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает по меньшей мере 99%; 98%; 97%; 96%; 95%; 94%; 93%; 92%; 91%; 90%; 89%; 88%; 87%; 86%; 85%; 84%; 83%; 82%; 81%; 80%; 79%; 78%; 77%; 76%; 75%; 74%; 73%; 72%; 71%; 70% или любое промежуточное значение исходного количества или активности конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в интактной, не деградированной или не агрегированной, форме пептида после воздействия одного или нескольких условий, описанных выше и в настоящем документе. В одном из вариантов реализации количество или активность интактного конформационно ограниченногополипептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере 80%, 85%, 90% или 95% от исходного количества. В некоторых вариантах реализации количество или активность интактного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере 97% от исходного количества.

[0117] В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает по меньшей мере 99%; 98%; 97%; 96%; 95%; 94%; 93%; 92%; 91%; 90%; 89%; 88%; 87%; 86%; 85%; 84%; 83%; 82%; 81%; 80%; 79%; 78%; 77%; 76%; 75%; 74%; 73%; 72%; 71%; 70% или любое промежуточное значение исходного количества или активности конформационно ограниченной соли полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в интактной, не деградированной или не агрегированной, форме пептида после воздействия одного или нескольких условий, описанных выше и в настоящем документе. В одном из вариантов реализации количество или активность интактной конформационно ограниченной соли полипептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере 80%, 85%, 90% или 95% от исходного количества. В некоторых вариантах реализации количество или активность интактного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере 97% от исходного количества.

[0118] В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает по меньшей мере на 1%; 2%; 3%; 4%; 5%; 6%; 7%; 8%; 9%; 10%; 11%; 12%; 13%; 14%; 15%; 16%; 17%; 18%; 19%; 20%; 21%; 22%; 23%; 24%; 25%; 26%; 27%; 28%; 29%; 30%; 31%; 32%; 33%; 34%; 35%; 36%; 37%; 38%; 39%; 40%; 41%; 42%; 43%; 44%; 45%; 46%; 47%; 48%; 49%; 50% или любое промежуточное значение большую активность, чем исходное количество или активность не имеющего конформационных ограничений полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в интактной, не деградированной или не агрегированной, форме после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе. В одном из вариантов реализации количество или активность конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% или 50% превышает активность не имеющего конформационных ограничений полипептида или его фармацевтически приемлемой соли.

[0119] В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает по меньшей мере на 1%; 2%; 3%; 4%; 5%; 6%; 7%; 8%; 9%; 10%; 11%; 12%; 13%; 14%; 15%; 16%; 17%; 18%; 19%; 20%; 21%; 22%; 23%; 24%; 25%; 26%; 27%; 28%; 29%; 30%; 31%; 32%; 33%; 34%; 35%; 36%; 37%; 38%; 39%; 40%; 41%; 42%; 43%; 44%; 45%; 46%; 47%; 48%; 49%; 50% или любое промежуточное значение большую активность, чем исходное количество или активность не имеющей конформационных ограничений соли полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в интактной, не деградированной или не агрегированной, форме после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе. В одном из вариантов реализации количество или активность конформационно ограниченной солиполипептида или его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% или 50% превышает активность не имеющей конформационных ограничений соли полипептида или его фармацевтически приемлемой соли.

[0120] В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем 30%; 29%; 28%; 27%; 26%; 25%; 24%; 23%; 22%; 21%; 20%; 19%; 18%; 17%; 16%; 15%; 14%; 13%; 12%; 11%; 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1% от общего количества конформационно ограниченного пептида в композиции в форме конкретного продукта агрегации и/или конкретного продукта деградации, или содержание такого продукта находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений, после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем примерно 15% или не более чем 20% неактивного конформационно ограниченного пептида.

[0121] В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем 30%; 29%; 28%; 27%; 26%; 25%; 24%; 23%; 22%; 21%; 20%; 19%; 18%; 17%; 16%; 15%; 14%; 13%; 12%; 11%; 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1% от общего количества конформационно ограниченной формы пептида в композиции в форме конкретного продукта агрегации и/или конкретного продукта деградации, или содержание такого продукта находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений, после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем примерно 15% или не более чем 20% неактивной конформационно ограниченной формы пептида.

[0122] В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем 30%; 29%; 28%; 27%; 26%; 25%; 24%; 23%; 22%; 21%; 20%; 19%; 18%; 17%; 16%; 15%; 14%; 13%; 12%; 11%; 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1% от общего количества конформационно ограниченной соли пептида в композиции в форме конкретного продукта агрегации и/или конкретного продукта деградации, или содержание такого продукта находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений, после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем примерно 15% или не более чем 20% неактивной конформационно ограниченной соли пептида.

[0123] В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем 30%; 29%; 28%; 27%; 26%; 25%; 24%; 23%; 22%; 21%; 20%; 19%; 18%; 17%; 16%; 15%; 14%; 13%; 12%; 11%; 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1% от общего количества конформационно ограниченногопептида в композиции в форме любого продукта деградации и/или продукта агрегации, или содержание такого продукта находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений, после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе.

[0124] В некоторых вариантах реализации композиция содержит не более чем 30%; 29%; 28%; 27%; 26%; 25%; 24%; 23%; 22%; 21%; 20%; 19%; 18%; 17%; 16%; 15%; 14%; 13%; 12%; 11%; 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1% от общего количества конформационно ограниченной соли пептида в композиции в форме любого продукта деградации и/или продукта агрегации, или содержание такого продукта находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений, после воздействия одного или более условий, описанных выше и в настоящем документе.

[0125] В некоторых вариантах реализации композиция содержит очень низкие количества буфера в комбинации с очень низкими количествами хелатора. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой цитратный буфер, и хелатор представляет собой ЭДТА.

[0126] Варианты реализации композиций конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида, описанные в настоящем документе, обеспечивают преимущества при получении, транспортировке, хранении и применении композиций конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида за счет уменьшения агрегации и деградации пептидов, тем самым поддерживая эффективность указанных композиций и снижая накопление нежелательных продуктов разложения в композиции.

[0127] В некоторых вариантах реализации композиция конформационно ограниченной соли пептида обеспечивает снижение скорости образования продуктов разложения и/или продуктов агрегации. В некоторых вариантах реализации композиция конформационно ограниченногопептида обеспечивает снижение скорости образования продуктов разложения и/или продуктов агрегации.

[0128] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации композиция содержит менее чем примерно 5%, 4%, 3%, 2% или примерно 1% общего количества продуктов деградации. В некоторых вариантах реализации стабилизированная композиция содержит не более чем 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75% или 2,0% любого отдельного продукта деградации. В некоторых вариантах реализации стабилизированная композиция содержит менее чем примерно 5%, 4%, 3%, 2% или примерно 1% общего количества продуктов деградации и не более 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75% или 2,0% любого отдельного продукта деградации.

[0129] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная сольпептида представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации композиция содержит менее чем примерно 5%, 4%, 3%, 2% или примерно 1% общего количества продуктов деградации. В некоторых вариантах реализации стабилизированная композиция содержит не более чем 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75% или 2,0% любого отдельного продукта деградации. В некоторых вариантах реализации стабилизированная композиция содержит менее чем примерно 5%, 4%, 3%, 2% или примерно 1% общего количества продуктов деградации и не более 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75% или 2,0% любого отдельного продукта деградации.

[0130] В некоторых вариантах реализации продукты агрегации включают димеры, тримеры, тетрамеры или пептидные агрегаты более крупного размера.

Консерванты

[0131] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более консервантов для предотвращения роста микроорганизмов в композиции. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более консервантов для поддержания стерильности композиции. В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более консервантов для предотвращения роста микроорганизмов и поддержания стерильности композиции. Однако во многих вариантах реализации консервант присутствует в сниженных количествах. В некоторых вариантах реализации один или более консервантов выбраны из группы, состоящей из бензалкония хлорида, цетилпиридиния хлорида, хлорбутанола, бензододециния бромида, метилпарабена, пропилпарабена, фенилэтилового спирта, пербората натрия, динатриевой соли ЭДТУ, хлорбутанола, сорбиновой кислоты, бензетония хлорида, ацетата натрия, поликватерния-1, нитрата фенилртути, бората фенилртути, пропионата натрия, хлоргексидина, тимеросала и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации композиция не содержит консерванта. В некоторых вариантах реализации композиция не содержит обнаруживаемых количеств консерванта. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль могут быть самоконсервирующимися, то есть не требуется дополнительных консервантов для поддержания стерильности композиции. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченнаясоль полипептидаили его фармацевтически приемлемая соль может быть самоконсервирующейся, то есть не требуется дополнительных консервантов для поддержания стерильности композиции.

[0132] В некоторых вариантах реализации консервант присутствует в количестве от 0,0001% до 1%; от 0,01% до 0,9%; от 0,05% до 0,8%; от 0,1% до 0,7%; от 0,2% до 0,3%; 0,4% или 0,5%, или в любом количестве, входящем в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации консервант присутствует в количестве, равном или меньшем, чем 1%; 0,9%; 0,8%; 0,7%; 0,6%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; 0,2%; 0,1%; 0,09%; 0,08%; 0,07%; 0,06%; 0,05%; 0,04%; 0,03%; 0,02%; 0,01%; 0,009%; 0,008%; 0,007%; 0,006%; 0,005%; 0,004%; 0,003%; 0,002% или 0,001%, или его количество находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0133] В некоторых вариантах реализации композиция является стерильной. В некоторых вариантах реализации композиция получена из стерильных ингредиентов в асептических условиях. В некоторых вариантах реализации композиция является стерильной и не содержит консервантов. В некоторых вариантах реализации композицию стерилизуют непосредственно перед упаковкой. В некоторых вариантах реализации композицию стерилизуют одним или более из следующих способов: (1) добавлением в композицию одного или более хлоридов четвертичного аммония; (2) воздействием на композицию ионизирующего излучения; (3) фильтрованием композиции; (4) воздействием на композицию ионизирующего излучения после упаковки; и любой комбинацией указанного выше. В некоторых вариантах реализации фильтрование включает пропускание композиции через фильтр (включая, но не ограничиваясь им, фильтр с диаметром пор 0,22 мкм с поливинилдифторидной или другой подходящей мембраной (например, полиэфирсульфоновой).

[0134] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, конформационно ограниченный пептид или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в бактериостатическом и/или бактерицидном количестве. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли пептида, конформационно ограниченного пептида или его фармацевтически приемлемой соли, представленное в композиции, является бактериостатическим и/или бактерицидным при нанесении одной, двух или трех капель композиции на поверхность глаза. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, конформационно ограниченный пептид или его фармацевтически приемлемая соль является бактериостатической и/или бактерицидной в отношении грамположительных и/или грамотрицательных бактерий, например, при нанесении на глаз. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли пептида, конформационно ограниченного пептида или его фармацевтически приемлемой соли в композиции является достаточным для подавления бактериального роста по меньшей мере на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% относительно контрольной композиции, не содержащей указанный пептид, при стандартном бактериологическом анализе. В некоторых вариантах реализации бактерии в бактериологическом анализе выбраны из P. aeruginosa, E. coli, S. epidermidis, S. aureus или их комбинаций. В некоторых вариантах реализации бактериологический анализ выбран из анализа бактериального роста, анализа с применением SYTOX Green, анализа диффузии в лунках, анализа методом разведения в питательной среде или агаре, исследования активности по времени гибели, анализа антимикробного градиента, анализа биолюминесценции АТФ или анализа методом проточной цитометрии с пропидия иодидом. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, конформационно ограниченный пептид или его фармацевтически приемлемая соль, присутствующие в бактериостатическом и/или бактерицидном количестве, представляют собой конформационно ограниченную соль или конформационно ограниченную форму Lacripep™.

[0135] В некоторых вариантах реализации бактериологический анализ представляет собой анализ в соответствии с разделом <51> Национальной фармакопеи США (USP) или анализ в соответствии с требованиями Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA). Например, берут оригинальные емкости с продуктом, содержащие раствор указанного пептида, и инокулируют каждую емкость одним из приготовленных и стандартизированных инокулятов (например, P.Aeruginosa, Е. coli, S. epidermidis, S. aureus или их комбинации) и перемешивают. Объем суспензии инокулятов должен составлять от примерно 0,5% до 1,0% от объема продукта, а концентрация тестового препарата сразу после инокуляции составляет от 1×10⁵ до 1×10⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на мл продукта (что определяют, например, чашечным методом подсчета или другим методом количественного определения микроорганизмов).

[0136] Емкости после инокуляции инкубируют при температуре 22,5±2,5°С в контролируемых условиях внешней среды и отбирают образцы в определенные промежутки времени, например, 7, 14 и 28 дней. Любые изменения внешнего вида регистрируют, и определяют количество КОЕ/мл при каждом отборе образцов. Изменение значений log₁₀ КОЕ/мл отражает изменение во времени в виде уменьшения log. Продукт обеспечивает уменьшение не менее чем на 1,0 log по сравнению с начальным рассчитанным количеством через 7 дней, уменьшение не менее чем на 3,0 log по сравнению с начальным рассчитанным количеством через 14 дней и отсутствие увеличения по сравнению с определенным через 14 дней количеством через 28 дней для бактерий, а также отсутствие увеличения по сравнению с начальным количеством для дрожжей и плесневых грибов. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль пептида, присутствующая в бактериостатическом и/или бактерицидном количестве, представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™. B некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный пептид, присутствующий в бактериостатическом и/или бактерицидном количестве, представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль.

Поверхностно-активные вещества

[0137] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит одно или более поверхностно-активных веществ. В некоторых вариантах реализации указанные одно или более поверхностно-активных веществ выбраны из детергентов, смачивающих агентов, эмульгаторов, пенообразующих агентов, диспергирующих агентов и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество включает конформационно ограничивающую соль.

[0138] В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой анионное поверхностно-активное вещество. Анионные поверхностно-активные вещества содержат в «голове» анионные функциональные группы, такие как сульфат, сульфонат, фосфат и карбоксилаты. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой сульфатный, сульфонатный или фосфатный сложный эфир, например, сульфатный сложный эфир. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активные вещества выбраны из группы, включающей или состоящей из лаурилсульфата аммония и лаурилсульфата натрия, например, лаурилсульфат натрия (также называемый ДСН (SDS), додецилсульфат натрия). В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой алкилэфирсульфат, такой как алкилэфирсульфаты, выбранные из группы, включающей или состоящей из лауретсульфата натрия (также известного как лаурилэфирсульфат натрия) и миретсульфата натрия. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой докузат, такой как диоктилсульфосукцинат натрия, перфтороктансульфонат (PFOS), перфторбутансульфонат, линейные алкилбензолсульфонаты (LABs). В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой карбоксилат, такой как алкилкарбоксилаты (мыла), например, стеарат натрия; лауроилсаркозинат натрия и фторсодержащие поверхностно-активные вещества на основе карбоксилатов, такие как перфторнонаноат, перфтороктаноат (PFOA или PFO). В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида вносит вклад в поверхностно-активные свойства композиции. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль вносят вклад в поверхностно-активные свойства композиции.

[0139] В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой катионное поверхностно-активное вещество, заряд которого может зависеть от рН, как то первичные, вторичные или третичные амины, например, октенидина дигидрохлорид; или может включать постоянно заряженные четвертичные аммониевые катионы, такие как соли алкилтриметиламмония, например цетилтриметиламмония бромид (СТАВ) или цетилтриметиламмония хлорид (СТАС); цетилпиридиния хлорид (СРС); бензалкония хлорид (ВАС); бензетония хлорид (BZT); 5-бром-5-нитро-1,3-диоксан; диметилдиоктадециламмония хлорид или диоктадецилдиметиламмония бромид (DODAB). В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой цвиттерионное поверхностно-активное вещество (то есть имеющее как катионный, так и анионный центры, присоединенные к одной и той же молекуле). Катионная часть может быть основана на первичных, вторичных или третичных аминах или четвертичных аммониевых катионах. Анионная часть может быть более разнообразной и включать сульфонаты, как в CHAPS (3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат). Другие анионные группы представляют собой султаины, например, кокамидопропилгидроксисултаин; бетаины, например, кокамидопропилбетаин; фосфаты, например, лецитин. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество может представлять собой неионное поверхностно-активное вещество (не несущее заряда).

[0140] Многие длинноцепочечные спирты проявляют некоторые свойства поверхностно-активных веществ и представлены в настоящем документе в качестве части композиции в некоторых вариантах реализации. Среди них значимыми являются жирные спирты, цетиловый спирт, стеариловый спирт и цетостеариловый спирт (состоящий преимущественно из цетилового и стеарилового спиртов), а также олеиловый спирт. Другие поверхностно-активные вещества включают кокамид МЕА (моноэтаноламина), кокамид DEA (диэтаноламина), додецилдиметиламина оксид и полиэтоксилированный таловый амин (РОЕА). Примеры неионных поверхностно-активных веществ включают простые алкилэфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как монододециловый простой эфир октаэтиленгликоля или монододециловый простой эфир пентаэтиленгликоля; простые алкилэфиры полиоксипропиленгликоля; простые алкилэфиры глюкозида, такие как децилглюкозид, лаурилглюкозид или октилглюкозид; октилфеноловые простые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как тритон Х-100; алкилфеноловые простые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как ноноксинол-9; сложные алкиловые эфиры глицерина, такие как глицериллаурат; алкиловые сложные эфиры полиоксиэтиленгликоля и сорбитана (полисорбат); алкиловые сложные эфиры сорбитана (спаны); блок-сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, или полоксамеры.

[0141] В некоторых вариантах реализации композиция может содержать один или более ингредиентов, присутствующих в искусственной слезе, в количествах, известных в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, карбоксиметилцеллюлозу, поливиниловый спирт, гидроксипропилметилцеллюлозу (также называемую ГПМЦ или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ) и гиалуроновую кислоту (также называемую гиалуронан, ГК) и их комбинации. В некоторых вариантах реализации композиция не содержит ни одного из перечисленных выше ингредиентов искусственной слезы.

[0142] В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой другой пептид или белок. В некоторых вариантах реализации, в качестве неограничивающего примера, поверхностно-активное вещество представляет собой человеческий сывороточный альбумин. В некоторых вариантах реализации, в качестве неограничивающего примера, поверхностно-активное вещество представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™. В некоторых вариантах реализации, в качестве еще одного неограничивающего примера, поверхностно-активное вещество представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™ или его фармацевтически приемлемую соль.

[0143] В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой тилоксапол (полимер формальдегида и оксирана с 4-(2,4,4-триметилпентан-2-ил)-фенолом). В одном из вариантов реализации единственным поверхностно-активным веществом является тилоксапол, и в композиции не присутствуют другие поверхностно-активные вещества. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество представляет собой DPC. В некоторых вариантах реализации единственным поверхностно-активным веществом является DPC, и в композиции не присутствуют другие поверхностно-активные вещества.

[0144] В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество, в качестве неограничивающего примера - тилоксапол, или DPC, присутствует в количестве от 0,01% до 1%; от 0,05% до 0,9%; от 0,1% до 0,8%; от 0,2% до 0,7%; от 0,3% до 0,6%; от 0,4% до 0,5% или в любом количестве, входящем в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество присутствует в количестве, равном или меньшем, чем 1%; 0,9%; 0,8%; 0,7%; 0,6%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; 0,2%; 0,1%; 0,09%; 0,08%; 0,07%; 0,06%; 0,05%; 0,04%; 0,03%; 0,02%; 0,01%; 0,009%; 0,008%; 0,007%; 0,006%; 0,005%; 0,004%; 0,003%; 0,002% или 0,001%, или в количестве, находящемся в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации от 0,1 мМ до 50 мМ, от 1 мМ до 20 мМ, от 5 до 15 мМ или в любой концентрации, входящей в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации, равной или меньшей, чем 0,1, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 30, 40, 50 или 100 мМ, или в концентрации, находящейся в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0145] В некоторых вариантах реализации композиция не содержит поверхностно-активного вещества, за исключением активного пептида, например, Lacripep™. В некоторых вариантах реализации композиция не содержит обнаруживаемых количеств поверхностно-активного вещества, за исключением активного пептида, например, Lacripep™.

Регуляторы тоничности и осмоляльность

[0146] В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно содержит один или более регуляторов тоничности. Такие регуляторы тоничности представляют собой добавку к любой конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченному пептиду или его фармацевтически приемлемой соли или буферу, которая оказывает модифицирующее тоничность действие. В некоторых вариантах реализации один или более регуляторов тоничности выбраны из пропиленгликоля, полиэтиленгликолей, хлорида натрия, хлорида калия, хлорида магния, хлорида кальция, простых сахаров, таких как декстроза, фруктоза, галактоза, и/или простых многоатомных спиртов, таких как сахарные спирты маннит, сорбит, ксилит, лактит, изомальтит, мальтит, гидролизаты гидрированного крахмала, глицерин, и их комбинаций.

[0147] В некоторых вариантах реализации один или более регуляторов тоничности выбраны из хлорида натрия, хлорида калия, хлорида магния, хлорида кальция, декстрозы, маннита и их комбинаций.

[0148] В некоторых вариантах реализации регулятор тоничности представляет собой хлорид натрия. В некоторых вариантах реализации хлорид натрия присутствует в количестве от 0,01% до 1%; от 0,05% до 0,9%; от 0,1% до 0,8%; от 0,2% до 0,75%; от 0,3% до 0,7%; от 0,4% до 0,6% или в любом количестве, входящем в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации хлорид натрия присутствует в количестве, составляющем или составляющем примерно 1%; 0,95%; 0,9%; 0,85%; 0,8%; 0,75%; 0,7%; 0,65%; 0,6%; 0,55%; 0,5%; 0,45%; 0,4%; 0,35%; 0,3%; 0,25%; 0,2%; 0,15%; 0,1%; 0,09%; 0,08%; 0,07%; 0,06%; 0,05%; 0,04%; 0,03%; 0,02% или 0,01%, или в количестве, находящемся в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0149] В некоторых вариантах реализации единственным регулятором тоничности является хлорид натрия, и в композиции не присутствуют другие регуляторы тоничности.

[0150] В некоторых вариантах реализации регулятор тоничности, в качестве неограничивающего примера - хлорид натрия, добавляют к композиции для коррекции осмоляльности до желаемого уровня. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до примерно 400 мОсм/кг; от примерно 170 до примерно 380 мОсм/кг; от примерно 190 до примерно 360 мОсм/кг; от примерно 210 до примерно 340 мОсм/кг; от примерно 230 до примерно 320 мОсм/кг; от примерно 250 до примерно 300 мОсм/кг; от примерно 270 до примерно 280 мОсм/кг или любое промежуточное значение. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг; от примерно 260 до примерно 340 мОсм/кг; от примерно 270 до примерно 330 мОсм/кг; от примерно 280 до примерно 320 мОсм/кг; от примерно 290 до примерно 310 мОсм/кг; от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг или любое промежуточное значение.

[0151] В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет или составляет примерно 150 мОсм/кг; 160 мОсм/кг; 170 мОсм/кг; 180 мОсм/кг; 190 мОсм/кг; 200 мОсм/кг; 210 мОсм/кг; 220 мОсм/кг; 230 мОсм/кг; 240 мОсм/кг; 250 мОсм/кг; 260 мОсм/кг; 270 мОсм/кг; 280 мОсм/кг; 290 мОсм/кг; 300 мОсм/кг; 310 мОсм/кг; 320 мОсм/кг; 330 мОсм/кг; 340 мОсм/кг или 350 мОсм/кг, или находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0152] В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 280 мОсм/кг до примерно 320 мОсм/кг. В одном из вариантов реализации осмоляльность композиции составляет примерно 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от 150 до 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации NaCl применяют для коррекции осмоляльности раствора до желаемого уровня. В одном из вариантов реализации композиция изотонична или примерно изотонична слезной жидкости человека.

Растворители

[0153] В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель добавляют для облегчения получения конформационно ограниченной соли полипептида в растворе, прозрачной суспензии поверхностно-активного вещества или комбинации раствора и прозрачной суспензии поверхностно-активного вещества. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченную соль полипептида получают в растворителе в концентрированной форме, необязательно нагревают, чтобы способствовать переходу конформационно ограниченной соли полипептида в раствор, а затем полученную концентрированную конформационно ограниченную соль полипептида в растворителе разбавляют другими вспомогательными веществами, описанными в настоящем документе, с получением конечной композиции, имеющей концентрации вспомогательных веществ, раскрытые в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой полярный апротонный растворитель. В некоторых вариантах реализации полярный апротонный растворитель выбран из группы, состоящей из дихлорметана (ДХМ), N-метилпирролидона, тетрагидрофурана (ТГФ), этилацетата (EtOAc), ацетона, диметилформамида (ДМФА), ацетонитрила (MeCN), диметилсульфоксида (ДМСО), пропиленкарбоната (ПК), диметилацетамида (ДМАА) и их смесей. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой диметилсульфоксид (ДМСО). В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой полярный протонный растворитель. В некоторых вариантах реализации полярный протонный растворитель выбран из группы, состоящей из муравьиной кислоты, н-бутанола, изопропанола, нитрометана, этанола, метанола, уксусной кислоты, воды и их смесей. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой смесь протонных и апротонных полярных растворителей, включающую смесь одного или более из указанных выше растворителей. В некоторых вариантах реализации указанная смесь представляет собой воду и ДМСО. В некоторых вариантах реализации концентрация растворителя в композиции после разбавления другими вспомогательными веществами составляет от 0,001% до 10%; от 0,1% до 9%; от 0,5% до 8%; от 1% до 7%; от 0,2% до 3%; от 0,4% до 5%, от 0,5% до 1,5% или любое значение, входящее в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве, равном или меньшем, чем 10%; 9%; 8%; 7%; 6%; 5%; 4%; 3%; 2%; 1%; 0,9%; 0,8%; 0,7%; 0,6%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; 0,2%; 0,1%; 0,09%; 0,08%; 0,07%; 0,06%; 0,05%; 0,04%; 0,03%; 0,02% или 0,01%, или в количестве, находящемся в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

Полипептиды и другие ингредиенты

[0154] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль содержит от 10 до 20 аминокислот; от 15 до 30 аминокислот; от 20 до 40 аминокислот; от 15 до 25 аминокислот; или любое число, входящее в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль содержит от 10 до 30 аминокислот; от 11 до 29 аминокислот; от 12 до 28 аминокислот, от 13 до 27 аминокислот; от 14 до 26 аминокислот; от 15 до 25 аминокислот, от 16 до 24 аминокислот; от 17 до 23 аминокислот; от 18 до 22 аминокислот; от 19 до 21 аминокислот; или любое число, входящее в указанные диапазоны. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль имеет длину, равную или примерно равную 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 аминокислотам, или длину, находящуюся в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0155] В некоторых вариантах реализации аминокислоты включают альфа-аминокислоты. В некоторых вариантах реализации аминокислоты независимо включают встречающиеся в природе аминокислоты, не встречающиеся в природе аминокислоты или комбинацию любых из указанных выше. В некоторых вариантах реализации каждая не встречающаяся в природе аминокислота независимо содержит сшивающий фрагмент.В некоторых вариантах реализации каждая не встречающаяся в природе аминокислота независимо содержит соединение формулы (I).

[0156] В некоторых вариантах реализации каждый п независимо равен 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых вариантах реализации PG представляет собой подходящую защитную группу для аминогруппы. В некоторых вариантах реализации каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из:

[0157] В некоторых вариантах реализации каждая не встречающаяся в природе аминокислота независимо включают (D)-аминокислоту, (L)-аминокислоту или их комбинацию.

[0158] В некоторых вариантах реализации С-конец конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли амидирован. В некоторых вариантах реализации N-конец конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли ацетилирован. В некоторых вариантах реализации одна или более боковых цепей конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли ацетилированы. В некоторых вариантах реализации одна или более боковых цепей конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли амидированы. В некоторых вариантах реализации N-конец конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли ацетилирован, а С-конец конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли амидирован.

[0159] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида содержит, состоит или состоит по существу из следующей аминокислотной последовательности: Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-Leu-Leu-Lys-Pro-Trp-Ala-NH₂ (SEQ ID NO: 2), где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу, а С-конец амидирован (обозначено «NH2») В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида содержит следующую аминокислотную последовательность: Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gln-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂ (SEQ ID NO: 1), где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу, а С-конец амидирован (обозначено «NH₂»). В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль, которая содержит, состоит или состоит по существу из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9 или их фрагментов.

[0160] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль содержит, состоит или состоит по существу из следующей аминокислотной последовательности: Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gm-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-Leu-Leu-Lys-Pro-Trp-Ala-NH₂ (SEQ ГО NO: 2), где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу, а С-конец амидирован (обозначено «NH₂»), и где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль содержит следующую аминокислотную последовательность: Ac-Lys-Gln-Phe-Ile-Glu-Asn-Gly-Ser-Glu-Phe-Ala-Gin-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-Ser-NH₂ (SEQ ГО NO: 1), где «Ас» представляет собой N-концевую ацетильную группу, а С-конец амидирован (обозначено «NH₂»), и где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль содержит, состоит или состоит по существу из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3-9, или их фрагментов, или их фармацевтически приемлемых солей, и где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченный полипептид, который содержит, состоит или состоит по существу из конформационно ограниченной формы последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9 или их фрагментов.

[0161] В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в композиции составляет или составляет примерно от 0,0001% до 1%; от 0,0005% до 0,5%; от 0,001% до 0,1%; от 0,005% до 0,05%; от 0,006% до 0,04%; от 0,007% до 0,03%; от 0,008% до 0,02% или от 0,009% до 0,01%. В некоторых вариантах реализации количество конформационно ограниченной соли полипептида, конформационно ограниченного полипептида или его фармацевтически приемлемой соли в композиции составляет или составляет примерно от 0,00001% до 0,05%. В одном из вариантов реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в композиции в количестве, составляющем примерно от 0,003% до 0,09% (например, 0,005%, 0,01%, 0,02%, 0,03% и определенные ими диапазоны). В одном из вариантов реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в композиции в количестве примерно от 0,0001% до 0,005% (например, 0,005%, 0,001%, 0,0005%, 0,0001%, 0,00001% и определенные указанными значениями диапазоны).

[0162] В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в композиции в количестве, которое составляет, составляет примерно, составляет более чем или составляет менее чем 0,0001, 0,00025, 0,0005, 0,00075, 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,010, 0,011, 0,012, 0,013, 0,014, 0,015, 0,020, 0,030, 0,040, 0,050, 0,060, 0,070, 0,080, 0,090, 0,10, 0,20, 0,30, 0,40, 0,50, 0,60, 0,70, 0,80, 0,90 или 1,0%, или находится диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль полипептида, конформационно ограниченный полипептид или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в композиции в количестве, которое составляет, составляет примерно, составляет более чем или составляет менее чем от 0,00001 до 0,0001, или находится диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

[0163] Как указано ранее, для определения значения процентного содержания (% масс./масс.) пептидов, конформационно ограниченных солей пептидов, конформационно ограниченных пептидов и их фармацевтически приемлемых солей, раскрытых в настоящем документе, количество (% масс./масс.) рассчитывают с использованием молекулярной массы формы свободного основания немодифицированного пептида. Таким образом, процентное содержание (% масс./масс.) необходимо будет скорректировать в случае применения формы соли и/или модифицированной формы пептида, если желательна такая же молярная концентрация пептида в растворе, как это имеет место в некоторых вариантах реализации настоящей заявки.

[0164] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из примерно 0,001% - примерно 0,05% полипептида, такого как конформационно ограниченная соль Lacripep™ или других пептидов, указанных в настоящем документе, или конформационно ограниченный Lacripep™, или другие пептиды, указанные в настоящем документе; от примерно 0,001% до примерно 0,015% безводной лимонной кислоты; от примерно 0,02% до примерно 0,40% дигидрата цитрата натрия; от примерно 0,0005% до примерно 0,005% динатрия ЭДТА; от примерно 0,005% до примерно 0,15% тилоксапола и, необязательно, от примерно 0,005% до примерно 0,1% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 рН до примерно 6,8 рН, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от примерно 0,1% до примерно 1%. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабен. В одном из вариантов реализации композиция состоит только из перечисленных ингредиентов и не содержит никаких дополнительных активных ингредиентов, вспомогательных веществ (например, повышающих вязкость агентов, буферных агентов, хелатирующих агентов, стабилизирующих агентов, консервантов, поверхностно-активных веществ и регуляторов тоничности), носителей или разбавителей.

[0165] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из 0,01%±0,001% полипептида, такого как конформационно ограниченная соль Lacripep™ или других пептидов, указанных в настоящем документе, или конформационно ограниченный Lacripep™, или другие пептиды, указанные в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола, примерно 0,04%±0,004% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабена.

[0166] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из 0,005%±0,0005% полипептида, такого как конформационно ограниченная соль Lacripep™ или других пептидов, указанных в настоящем документе, или конформационно ограниченный Lacripep™, или другие пептиды, указанные в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола, примерно 0,04%±0,004% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабена.

[0167] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,001%±0,0001% полипептида, такого как конформационно ограниченная соль Lacripep™ или других пептидов, указанных в настоящем документе, или конформационно ограниченный Lacripep™, или другие пептиды, указанные в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола, примерно 0,04%±0,004% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или НС1 таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабена.

[0168] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из примерно 0,0001% - примерно 0,005% полипептида, такого как конформационно ограниченная соль Lacripep™ или других пептидов, указанных в настоящем документе, или конформационно ограниченный Lacripep™, или другие пептиды, указанные в настоящем документе; от примерно 0,001% до примерно 0,015% безводной лимонной кислоты; от примерно 0,02% до примерно 0,40% дигидрата цитрата натрия; от примерно 0,0005% до примерно 0,005% динатрия ЭДТА; от примерно 0,005% до примерно 0,15% тилоксапола и, необязательно, от примерно 0,005% до примерно 0,1% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 рН до примерно 6,8 рН, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от примерно 0,1% до примерно 1%. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабена. В одном из вариантов реализации композиция состоит только из перечисленных ингредиентов и не содержит никаких дополнительных активных ингредиентов, вспомогательных веществ (например, повышающих вязкость агентов, буферных агентов, хелатирующих агентов, стабилизирующих агентов, консервантов, поверхностно-активных веществ и регуляторов тоничности), носителей или разбавителей.

[0169] В некоторых вариантах реализации, включая стерильные композиции, указанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль Lacripep™, имеющего SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль полипептида, имеющего SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную соль полипептида, имеющего последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 3-9, или ее фрагмент или фрагменты.

[0170] В некоторых вариантах реализации, включая стерильные композиции, указанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, полипептид представляет собой конформационно ограниченную форму Lacripep™, имеющего SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную форму полипептида, имеющего SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченную форму полипептида, имеющего последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 3-9, или ее фрагмент или фрагменты. В некоторых вариантах реализации, включая стерильные композиции, указанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, полипептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep™, имеющий SEQ ID NO: 1, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или комбинации этих положений заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой конформационно ограниченный полипептид, имеющий SEQ ID NO: 2, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или их комбинации заменены или модифицированы соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации полипептид представляет собой полипептид, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3-9, или ее фрагмент или фрагменты, где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+3, i и i+4, i и i+7 витка спирали или их комбинации представляют собой соединения, содержащие сшивающий фрагмент, или модифицированы такими соединениями, или его фармацевтически приемлемую соль.

[0171] В некоторых вариантах реализации, включая стерильные композиции, указанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, рН композиции составляет от примерно 6,5 до примерно 6,6.

[0172] В некоторых вариантах реализации, включая стерильные композиции, указанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, осмоляльность композиции составляет от примерно 280 до примерно 320 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет примерно 300 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг.

[0173] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,01%±0,001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%.

[0174] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,005%±0,0005% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%.

[0175] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,001%±0,0001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%.

[0176] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,0001%±0,00001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%.

[0177] В одном из вариантов реализации, включая стерильные композиции, описанные выше и в настоящем документе, но не ограничиваясь ими, композиция состоит только из перечисленных ингредиентов и не содержит каких-либо дополнительных активных ингредиентов, вспомогательных веществ (например, повышающих вязкость агентов, буферных агентов, хелатирующих агентов, стабилизирующих агентов, консервантов, поверхностно-активных веществ и регуляторов тоничности), носителей или разбавителей. В некоторых вариантах реализации количества любого одного или более из перечисленных ингредиентов представляют собой количество, которое составляет ±5% и/или ±1% от указанного количества.

[0178] В некоторых вариантах реализации композиции, раскрытые в настоящем документе, приготовлены в виде раствора, геля или мази. Гели или мази являются предпочтительными при обеспечении контакта композиции с глазом в течение более длительного периода времени, чем в случае раствора, или обеспечивают другие преимущества. Таким образом, в одном из вариантов реализации гель или мазь полезны при применении композиции у субъекта, когда указанный субъект будет спать или когда глаза субъекта будут закрыты в течение продолжительного периода времени (например, 1, 2, 3, 4 5 или более часов). Гели или мази могут быть применены в другое время в зависимости от предпочтений потребителя.

Другие терапевтические ингредиенты

[0179] В некоторых вариантах реализации композиции включают один или более дополнительных терапевтических агентов помимо конформационно ограниченных солей полипептидов или конформационно ограниченных полипептидов, раскрытых в настоящем документе. Эти терапевтические агенты могут включать вещества, известные специалистам в данной области техники, для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена. Дополнительные терапевтические ингредиенты могут обеспечивать лечение заболевания, синдрома или состояния или облегчение симптомов, связанных с заболеванием, синдромом или состоянием. Неисчерпывающий перечень дополнительных терапевтических агентов включает: холинергические средства (например, пилокарпин, цевимелин), циклоспорин, лифитеграст, дексаметазон (или другие кортикостероиды, такие как преднизолон), гиалуроновую кислоту (и ее производные) с хондроитинсульфатом или без него, Циклокат(Cyclokat), SI-614, skQ1, Cis-UCA, CycloASol, RGN-259, диквафосол, анакинру, тофацитиниб, EBI-005, EGP-437, KP-121, MIM-D3, OTX-DP, ребамипид (ОРС-12759) и RU-101. В некоторых вариантах реализации один или более дополнительных терапевтических агентов представлены в виде соли полипептида. В композиции могут также быть включены искусственная слеза и другие смазывающие вещества, которые содержат одно или более из: карбоксиметилцеллюлозы, поливинилового спирта, гидроксипропилметилцеллюлозы (также известной как ГПМЦ или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлозы, полимеров этиленгликоля, а также гиалуроновой кислоты (также известной как гиалуронан, ГК) и глазных мазей, таких как белый вазелин, минеральное масло, и схожих смазывающих веществ. Эти дополнительные терапевтические агенты могут быть включены в известных терапевтических количествах.

Емкости и наборы

[0180] В некоторых вариантах реализации композиция представлена в виде набора, содержащего одну или более емкостей для многократного применения. В некоторых вариантах реализации емкость для многократного применения включает защитный колпачок и флакон для хранения жидкости, причем указанный колпачок связан с флаконом через гибкий соединитель. В середине верхней поверхности защитного колпачка расположена заглушка. В середине крышки флакона расположен конический или другой подходящей формы выход для жидкости, который плотно совмещен с заглушкой защитного колпачка. Таким образом, стерильная композиция может быть помещена в емкость для многократного применения.

[0181] В некоторых вариантах реализации количество композиции в емкости составляет или составляет примерно 0,1-0,5, 0,5-1,0, 1-2, 2-5, 5-10, 10-20, 20-30 или 30-60 мл, или находится в промежуточных диапазонах. Емкости могут представлять собой бутыли, пробирки, флаконы или другие подходящие емкости. К емкостям для многократного применения могут быть приложены инструкции по применению для 12-часового, 24-часового, 2-7-дневного цикла, одномесячного цикла или до указанной даты истечения срока годности. Емкость для однократного применения может являться подходящей для применения для одного глаза или для обоих глаз за один цикл применения.

[0182] В некоторых вариантах реализации композиция представлена в виде набора, содержащего емкость для однократного применения. В некоторых вариантах реализации композиция представлена в виде набора, содержащего множество емкостей для однократного применения. В некоторых вариантах реализации емкость для однократного применения включает резервуар для хранения жидкости, съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара и, необязательно, горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть. Наборы, содержащие несколько емкостей для однократного применения совместно с инструкциями по применению, представлены в нескольких вариантах реализации.

[0183] В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из фармацевтически инертного материала. В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из стекла, поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталата, полиэтилентерефталат-гликоля, полиэтилена высокой плотности, полиэтилена низкой плотности, полибутилентерефталата, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона, акрилонитрилбутадиенстирола, политетрафторэтилена, поликарбоната, полистирола, полиметилметакрилата, полисульфона, поливинилиденхлорида или их комбинаций.

[0184] В некоторых вариантах реализации емкость выполнена из поливинилхлорида, полипропилена, полиэтилена низкой плотности, полиуретана, полиэтиленвинилацетата, силикона или их комбинаций.

[0185] В некоторых вариантах реализации количество композиции в емкости составляет или составляет примерно 0,02 мл; от 0,05 мл до 1 мл; от 0,1 мл до 0,95 мл; от 0,15 мл до 0,8 мл; от 0,2 мл до 0,85 мл; от 0,25 мл до 0,8 мл; от 0,3 мл до 0,75 мл; от 0,35 мл до 0,7 мл; от 0,4 мл до 0,65 мл; от 0,45 мл до 0,6 мл; от 0,5 мл до 0,55 мл; или любое промежуточное количество.

[0186] В некоторых вариантах реализации количество композиции в емкости составляет или составляет примерно 0,02 мл; 0,025 мл; 0,030 мл; 0,035 мл; 0,040 мл; 0,045 мл; 0,050 мл; 0,055 мл; 0,060 мл; 0,065 мл; 0,070 мл; 0,075 мл; 0,1 мл; 0,15 мл; 0,2 мл; 0,25 мл; 0,3 мл; 0,35 мл; 0,4 мл; 0,45 мл; 0,5 мл; 0,55 мл; 0,6 мл; 0,65 мл; 0,7 мл; 0,75 мл; 0,8 мл; 0,85 мл; 0,9 мл; 0,95 мл или 1 мл композиции, или количество, которое находится в диапазоне, определенном любыми двумя из предшествующих значений.

Офтальмологическое и другое введение

[0187] В некоторых вариантах реализации композицию вводят местно в глаз. В некоторых вариантах реализации композицию вводят субъекту, страдающему от любой формы сухости глаза или от сухости глаза (или других симптомов, таких как сухость во рту), связанной с синдромом Шегрена, для ее лечения. В некоторых вариантах реализации ее вводят в виде полоскания для рта, вкладки, пластыря, спрея или пастилки для полости рта. Композиции, описанные в настоящем документе, могут быть представлены в виде жидкостей (растворов, гелей, мазей и так далее) или других подходящих форм, таких как порошки или пластыри, вкладки и так далее. В некоторых вариантах реализации композиции, описанные в настоящем документе, применяют для достижения одного или более из следующего: восстановления базального слезоотделения, слюноотделения, общего увлажнения слизистой оболочки и поверхности глаза; восстановления гомеостаза слизистой оболочки и поверхности глаза, быстрого, но кратковременного способствования аутофагии с целью устранить давление, стресс или дегенеративные заболевания во всем глазу и в других органах; уменьшения воспаления, способствования заживлению ран (например, после рефракционной хирургии роговицы или заживлению ран полости рта), стабилизации липидного слоя слезной жидкости и подавления бактериальной инфекции.

[0188] В некоторых вариантах реализации местное введение в глаз включает введение одной или более капель композиции на поверхность глаза. Например, в одном из вариантов реализации потребитель проинструктирован осуществлять нанесение на поверхность глаза, а не на контактную линзу. В других вариантах реализации капли (или другой способ нанесения) подходят для введения при ношении контактных линз. В некоторых вариантах реализации композицию вводят из емкости в виде одной капли, доставляемой в виде одной дозы в каждый глаз. В некоторых вариантах реализации капля составляет от примерно 0,020 мл до примерно 0,050 мл или любой промежуточный объем. В некоторых вариантах реализации капля составляет примерно 0,035 мл.

[0189] В некоторых вариантах реализации введение композиции в глаз улучшает один или более симптомов, клинических признаков или показателей сухости глаза или синдрома Шегрена. Улучшение клинических признаков сухости глаза можно оценить по одному или более из следующих критериев:

Окрашиванию роговицы флуоресцеином (ОРФ) (от 0 до 3 баллов по зонам, всего 0-15 баллов, по шкале NEI/Industry Workshop) с особым вниманием к нижней зоне роговицы.

Окрашиванию конъюнктивы лиссаминовым зеленым (ОКЛЗ) (от 0 до 3 баллов по зонам, всего 0-18 баллов, по шкале NEI/Industry Workshop)

Тесту Ширмера с использованием анестезии (мм смачивания за 5 минут),

Времени разрыва слезной пленки (количество секунд);

Анкете глазных симптомов, связанных с сухостью глаза (SANDE: как часто и насколько серьезно проявляются симптомы сухости глаза).

[0190] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из от примерно 0,001% до примерно 0,05% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; от примерно 0,001% до примерно 0,015% безводной лимонной кислоты; от примерно 0,02% до примерно 0,40% дигидрата цитрата натрия; от примерно 0,0005% до примерно 0,005% динатрия ЭДТА; от примерно 0,005% до примерно 0,15% тилоксапола и от примерно 0,005% до примерно 0,1% метилпарабена; причем рН композиции корректируют с помощью NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 единиц рН до примерно 6,8 единиц рН, и осмоляльность композиции корректируют с помощью NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от примерно 0,1% до примерно 1%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В одном из вариантов реализации композиция не содержит метилпарабена. В одном из вариантов реализации композиция состоит только из перечисленных ингредиентов и не содержит никаких дополнительных активных ингредиентов, вспомогательных веществ (например, повышающих вязкость агентов, буферных агентов, хелатирующих агентов, стабилизирующих агентов, консервантов, поверхностно-активных веществ и регуляторов тоничности), носителей или разбавителей.

[0191] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую, состоящую или состоящую по существу из от примерно 0,001% до примерно 0,05% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; от примерно 0,001% до примерно 0,015% безводной лимонной кислоты; от примерно 0,02% до примерно 0,40% дигидрата цитрата натрия; от примерно 0,0005% до примерно 0,005% динатрия ЭДТА; и от примерно 0,005% до примерно 0,15% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 единиц рН до примерно 6,8 единиц рН, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет от примерно 0,1% до примерно 1%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО. В одном из вариантов реализации композиция состоит только из перечисленных ингредиентов и не содержит никаких дополнительных активных ингредиентов, вспомогательных веществ (например, повышающих вязкость агентов, буферных агентов, хелатирующих агентов, стабилизирующих агентов, консервантов, поверхностно-активных веществ и регуляторов тоничности), носителей или разбавителей.

[0192] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,01%±0,001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с помощью NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с помощью NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

[0193] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,005%±0,0005% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

[0194] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,001%±0,0001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

[0195] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,0001%±0,00001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола; причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации количество NaCl составляет примерно 0,50%±0,05%. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации композиция содержит DPC и/или другое поверхностно-активное вещество вместо тилоксапола или в дополнение к нему. В некоторых вариантах реализации композиция содержит растворитель. В некоторых вариантах реализации растворитель присутствует в количестве примерно 1%. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМСО.

[0196] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, содержащую примерно 0,001%±0,0001% конформационно ограниченной соли полипептида, например, Lacripep™, или других конформационно ограниченных солей пептидов, указанных в настоящем документе, конформационно ограниченного Lacripep™ или других конформационно ограниченных пептидов, указанных в настоящем документе; примерно 0,0098%±0,001% безводной лимонной кислоты; примерно 0,279%±0,028% дигидрата цитрата натрия; примерно 0,001%±0,0001% динатрия ЭДТА; примерно 0,05%±0,005% тилоксапола или примерно 0,10%±0,01% тилоксапола; примерно 1,0%±0,1% ДМСО (диметилсульфоксида); причем рН композиции корректируют с применением NaOH или HCl таким образом, чтобы он составлял от примерно 6,2 до примерно 6,8, и осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 250 до примерно 350 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации осмоляльность композиции корректируют с применением NaCl таким образом, чтобы она составляла от примерно 150 до примерно 250 мОсм/кг.

[0197] В некоторых вариантах реализации композицию получают путем добавления АФИ соли жирной кислоты и Lacripep (конформационно ограниченной соли) в стеклянный мерный стакан в количестве 0,001%. Добавляют ДМСО в количестве 1% к АФИ. Буферные растворы вспомогательных веществ готовят со всеми другими вспомогательными веществами в их 10-кратной конечной концентрации (до разведения). Буферные растворы и продукт АФИ/ДМСО нагревают до ~60°С. Буфер медленно добавляют к АФИ/ДМСО до количества, составляющего 10% серии. Затем смесь доводят водой до количества, составляющего 100% серии, снижая концентрацию вспомогательных веществ до их конечных концентраций. В некоторых вариантах реализации конформационно ограниченная соль жирной кислоты и пептида (например, Lacripep™) представляет собой соль пальмитиновой кислоты или соль линолевой кислоты.

[0198] В некоторых вариантах реализации композиция представляет собой стерильную водную композицию, имеющую состав, раскрытый в таблице 1. В некоторых вариантах реализации композицию получают, как описано в примере 4.

ПРИМЕРЫ

[0199] Ниже приведены неограничивающие примеры некоторых вариантов реализации, описанных в настоящем документе.

Пример 1 - Конформационно ограниченная соль олеиновой кислоты и Lacripep™

[0200] Lacripep™ синтезируют с применением стандартных методик твердофазного синтеза пептидов. Любые оставшиеся защитные группы удаляют, пептид отщепляют от смолы, очищают осаждением из диэтилового эфира и дополнительно очищают с помощью ВЭЖХ при 0,1% уксусной кислоты в подвижной фазе. Фракции, содержащие Lacripep™, замораживают и лиофилизируют с получением ацетатной соли Lacripep™.

[0201] Очищенную ацетатную соль пептида суспендируют в смеси вода: ацетонитрил (4:1) при комнатной температуре. Добавляют четыре эквивалента олеиновой кислоты (по одному на боковую цепь лизина) и осторожно перемешивают полученную смесь при комнатной температуре в течение пяти минут. Смесь замораживают и лиофилизируют с получением порошка. Лиофилизированный порошок суспендируют в воде и доводят рН до 6,2-6,8 с помощью лимонной кислоты и цитрата натрия, а также доводят осмоляльность до 250-350 мОсм/кг. Характеристики стабилизированной (конформационно ограниченной) соли олеиновой кислоты и Lacripep™ определяют с применением известных методик, например, масс-спектрометрии и кругового дихроизма.

Пример 2 - Сравнение конформационно ограниченной до децилфосфохолиновой формы Lacripep™ с ацетатной солью Lacripep™ в фосфатном буфере

[0202] Lacripep™ (SEQ ID NO: 1) синтезировали либо без применения (немодифицированный, KQFIENGSEFAQKLLKKFS), либо с применением (модифицированный, Ac-KQFIENGSEFAQKLLKKFS-NH₂) N-концевого ацетилирования и С-концевого амидирования в виде ацетатной соли. Соединения (0,2 мг/мл) перерастворяли в 10 мМ фосфатном буфере, содержащем 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, рН 7,4, с добавляением 10 мМ додецилфосфохолина для анализа кругового дихроизма. Спектры кругового дихроизма (CD) получали с помощью спектрополяриметра Jasco 810 CD/ORD с флуоресцентным монохроматором в кварцевой кювете с длиной оптического пути 1 мм от Starna Cells, Inc. Спектры получали при 35°С в диапазоне длин волн от 250 нм до 190 нм в режиме непрерывного сканирования (скорость сканирования 100 нм/мин; интервал сбора данных 0,1 нм; полоса пропускания 1 нм; время отклика 4 с) при скорости потока азота 100 мл/мин. Для каждого образца было получено в среднем 3 спектра (N=3). Для анализа спектров дихроизма могут быть использованы методы, известные в данной области техники, включая Dichro Web: On-line analysis for protein Circular Dichroism spectra; описанный в источниках Whitmore, L. and Wallace, B.A. (2008) Biopolymers 89: 392-400; Whitmore, L. and Wallace, B.A. (2004) Nucleic Acids Research 32: W668-673, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

[0203] На фиг. 1 показаны данные спектров CD. Как и ожидалось, как немодифицированная, так и модифицированная формы ацетатной соли демонстрировали незначительный дихроизм, что указывает на, что они имели небольшую альфа-спиральность (27% и 28%, соответственно). Напротив, как немодифицированная, так и модифицированная на концах додецилфосфохолиновые (10 мМ dpC, или DPC) формы демонстрировали высокий уровень дихроизма, что указывает на альфа-спиральную структуру, при этом модифицированная dpC-форма имела большую спиральность, чем немодифицированная dpC-форма (соответственно, 100% при 0% нерегулярной структуры по сравнению с 92% при 8% нерегулярной структуры).

Пример 3 - Сравнение конформационно ограниченной соли олеиновой кислоты и Lacripep™ с ацетатной солью Lacripep™ в цитратном буфере

[0204] Lacripep™ (SEQ ID NO: 1) синтезировали либо без применения, либо с применением N-концевого ацетилирования и С-концевого амидирования в виде ацетатной соли. Соединения перерастворяли в 10 мМ натрий-цитратном буфере, рН 6,5 для анализа кругового дихроизма. Lacripep™, синтезированный без применения, либо с применением N-концевого ацетилирования и С-концевого амидирования в виде ацетатной соли, превращали в олеатную соль путем растворения 1 эквивалента ацетатной соли Lacripep™ и 4 эквивалентов олеиновой кислоты (один эквивалент олеиновой кислоты на остаток лизина в Lacripep™) в водной смеси, забуференной лимонной кислотой до рН 6,5. Затем полученные растворы быстро замораживали и лиофилизировали под вакуумом для удаления более летучей уксусной кислоты. Лиофилизированный порошок суспендируют в воде и доводят рН до 6,2-6,8 с помощью лимонной кислоты и цитрата натрия, а осмоляльность доводят до 250-350 мОсм/кг. Четыре полученных забуференных лимонной кислотой раствора (ацетатная соль немодифицированная, без концевой модификации, ацетатная соль, модифицированная путем концевой модификации, олеатная соль без концевой модификации, олеатная соль с концевой модификацией) исследовали в отношении кругового дихроизма.

[0205] Для анализа кругового дихроизма все используемые образцы имели концентрацию 0,2 мг/мл. Спектры CD получали с помощью спектрополяриметра Jasco 810 CD/ORD с флуоресцентным монохроматором в кварцевой кювете с длиной оптического пути 1 мм от Starna Cells, Inc. Спектры получали при 35°С в диапазоне длин волн от 250 нм до 190 нм в режиме непрерывного сканирования (скорость сканирования 100 нм/мин; интервал сбора данных 0,1 нм; полоса пропускания 1 нм; время отклика 4 с) при скорости потока азота 100 мл/мин. Для каждого образца было получено в среднем 3 спектра (N=3).

[0206] На фиг. 2 показаны данные спектров CD. Форма олеатной соли с концевой модификацией показала наивысший уровень альфа-спиральности (57%), о чем свидетельствует наиболее сильное отрицательное изменение эллиптичности в спектрах CD. Следующей была немодифицированная форма олеатной соли (38% спиральности), за которой следовала модифицированная форма ацетатной соли (29% спиральности), и последней была немодифицированная форма ацетатной соли (28% спиральности). По сравнению с результатами примера 2, фиг. 1, представляется, что цитратный буфер немного повышает стабильность альфа-спирали по сравнению с фосфатным буфером как для немодифицированной, так и для имеющей концевую модификацию форм ацетатных солей.

Пример 4 - Конформационно ограниченная соль жирной кислоты и Lacripep™ в ДМСО с концентрированным буферным раствором

[0207] Примеры составов соли жирной кислоты и Lacripep™ с улучшенной растворимостью включают следующие составы.

[0208] Методика: Серии были получены в масштабе 100 г. АФИ соли жирной кислоты и Lacripep™ добавляли в стеклянный мерный стакан в количестве 0,001%. Добавляли ДМСО в количестве 1% к АФИ. Две концентрации буферного раствора тилоксапола/вспомогательных веществ были получены с применением тилоксапола в концентрации 0,5% и 1%; все другие вспомогательные вещества присутствовали в их 10-кратной конечной концентрации (до разведения). Буферные растворы и продукт АФИ/ДМСО нагревали до ~60°С. Буфер медленно добавляли к АФИ/ДМСО до количества, составляющего 10% серии. Затем смесь доводили водой до количества, составляющего 100% серии, снижая концентрацию вспомогательных веществ до их конечных концентраций.

[0209] Заключение: АФИ растворялся в ДМСО, но, по-видимому, растворимость зависела от размера частиц, поскольку более крупные агломераты растворялись труднее. Повышенная концентрация буфера, по-видимому, улучшала растворение АФИ, даже после доведения до конечного объема. Тилоксапол в концентрации 0,10%, по-видимому, работал в сравнимой степени, если не лучше, чем 0,05%

Пример 5 - Конформационно ограниченный дисульфидом Lacripep™

[0210] Пептид, имеющий последовательность KQCIENCSEFAQKLLKKFS, синтезируют с применением стандартных способов твердофазного синтеза пептидов. Любые защитные группы удаляют, пептид отщепляют от смолы, и затем очищают с помощью ВЭЖХ или осаждения из диэтилового эфира.

[0211] Пептид суспендируют в 50% уксусной кислоте (водн.) и добавляют 1 М HCl. По каплям добавляют 0,1 М йода в уксусной кислоте и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение трех часов. Затем реакцию останавливают добавлением по каплям 1 М тиосульфата натрия (водн.). Растворитель удаляют при пониженном давлении, и полученный остаток очищают осаждением из эфира с последующей ВЭЖХ с получением конформационно ограниченного дисульфидом пептида.

[0212] В альтернативном варианте пептид суспендируют в 1,0 М уксусной кислоте (водн.) и пропускают кислород через раствор в течение 3 часов при комнатной температуре с последующим удалением растворителя при пониженном давлении, а также очисткой путем осаждения из эфира и ВЭЖХ с получением конформационно ограниченного дисульфидом пептида. Характеристики конформационно ограниченного дисульфидом пептида определяют с применением известных методов, например, масс-спектрометрии, кругового дихроизма и ЯМР-спектроскопии.

Пример 6 - Конформационно ограниченный алкеном Lacripep™

[0213] Пептид, имеющий последовательность KQFIENXSEFAQKXLKKFS, синтезируют с применением стандартных способов твердофазного синтеза пептидов. Каждый X представляет собой 2-амино-8-ноненовую кислоту. Удаляют растворитель из связанной с полностью защищенным пептидом смолы, которую ресуспендируют в 1,2-дихлорэтане (ДХЭ) при комнатной температуре. Добавляют катализатор метатезиса с замыканием цикла (RCM) Граббса второго поколения, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Аналитический образец пептида отщепляют и анализируют с помощью масс-спектрометрии. Если степень превращения составляет менее 95%, растворитель удаляют, смолу промывают ДХЭ, смолу ресуспендируют в ДХЭ и проводят второй цикл RCM. Если требуется более быстрое протекание реакции, реакцию проводят в дихлорбензоле в импульсном режиме 10-20х при температуре до 120-200°С в СВЧ-реакторе.

[0214] Любые оставшиеся защитные группы удаляют в стандартных условиях, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищали осаждением эфиром с последующей ВЭЖХ с получением конформационно ограниченного алкеном пептида. Характеристики конформационно ограниченного алкеном пептида определяют с применением известных методов, например, масс-спектрометрии, кругового дихроизма и ЯМР-спектроскопии.

Пример 7 - Ацетатные соли конформационно ограниченного алкеном Lacripep™ в цитратном буфере.

[0215] Конформационно ограниченные алкеном аналоги Lacripep™ (SEQ ID NO:1) синтезировали с применением N-концевого ацетилирования и С-концевого амидирования в виде ацетатной соли. Соединения перерастворяли в 10 мМ натрий-цитратном буфере, рН 6,5, для анализа кругового дихроизма с добавлением или без добавления 10 мМ н-додецилфосфохолина (DPC). Полученные забуференные лимонной кислотой растворы исследовали на круговой дихроизм.

[0216] Для анализа кругового дихроизма все используемые образцы имели концентрацию 0,2 мг/мл. Спектры CD получали с помощью спектрополяриметра Jasco 810 CD/ORD с флуоресцентным монохроматором в кварцевой кювете с длиной оптического пути 1 мм от Starna Cells, Inc. Спектры получали при 35°С в диапазоне длин волн от 250 нм до 190 нм в режиме непрерывного сканирования (скорость сканирования 100 нм/мин; интервал сбора данных 0,1 нм; полоса пропускания 1 нм; время отклика 4 с) при скорости потока азота 100 мл/мин. Для каждого образца было получено в среднем 3 спектра (N=3).

[0217] На фиг. 3 показаны данные спектров CD в присутствии 10 мМ DPC. Содержащий «скрепки» в положении i-i+7 пептид, полученный из Ac-KQ [2-(7-октенил)аланин]-IENGSE-[2-(4-пентенил)аланин]-AQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 59) в соответствии со способом, описанным в примере 6 (SEQ ID NO: 59), демонстрировал наиболее интенсивный отрицательный сигнал CD (примерно -50 Δε) в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нм, что указывает на самое высокое содержание спирали. При этом содержащие «скрепки» в положении i-i+4 пептиды, полученные из Ac-KQFIEN [2-(4-октенил)аланин]-SEF-[2-(4-пентенил)аланин]-QKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 54) и Ac-KQFIENGSEF [2-(4-октенил)аланин]-QKL-[2-(4-пентенил)аланин]-KKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 53), демонстрировали наименее интенсивные отрицательные сигналы CD (примерно от -20 до -30 Δε) в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нм, что указывает на наименьшее содержание спирали. Остальные содержащие «скрепки» в положении i-i+7 пептиды, полученные из (Ac-KQF [2-(7-октенил)аланин]-ENGSEF-[2-(4-пентенил)аланин]-QKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 57), Ac-KQFIEN [2-(7-октенил)аланин]-SEFAQK-[2-(4-пентенил)аланин]-LKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 55) и Ac-KQFIENGSEF [2-(7-октенил)аланин]-QKLLKK-[2-(4-пентенил) аланин]-S-NH₂) (SEQ ID NO: 56), а также содержащие «скрепки» в положении i-i+4 пептиды (Ac-KQ [2-(4-октенил)аланин]-IEN [2-(4-пентенил)аланин]-SEFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 58), Ac-KQF [2-(4-октенил)аланин]-ENG-[2-(4-пентенил)аланин]-EFAQKLLKKFS-NH₂ (SEQ ID NO: 61), содержащий «скрепки» в положении i-i+4, и Ac-KQFIENGSEFAQK [2-(4-октенил)аланин]-LKK-[2-(4-пентенил)аланин]-D-NH₂) (SEQ ID NO: 62), демонстрируют промежуточную спиральность с отрицательными сигналами CD, составляющими от -30 до -40 Δε, в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нм.

[0218] На фиг.4 показаны данные спектров CD в отсутствие 10 мМ DPC. В отсутствие поверхностно-активного вещества (DPC) пептид Lacripep демонстрирует небольшую спиральность, тогда как содержащие «скрепки» пептиды демонстрируют более значительную спиральность.

Пример 8 - Ацетатные соли конформационно ограниченного дисульфидом цистеина Lacripep™ в цитратном буфере,

[0219]Конформационно ограниченные дисульфидом цистеина аналоги Lacripep™ (SEQ ID NO:1) синтезировали с применением N-концевого ацетилирования и С-концевого амидирования в виде ацетатной соли. Соединения перерастворяли в 10 мМ натрий-цитратном буфере, рН 6,5, для анализа кругового дихроизма с добавлением или без добавления 10 мМ DPC. Полученные забуференные лимонной кислотой растворы исследовали на круговой дихроизм.

[0220] Для анализа кругового дихроизма все используемые образцы имели концентрацию 0,2 мг/мл. Спектры CD получали с помощью спектрополяриметра Jasco 810 CD/ORD с флуоресцентным монохроматором в кварцевой кювете с длиной оптического пути 1 мм от Starna Cells, Inc. Спектры получали при 35°С в диапазоне длин волн от 250 нм до 190 нм в режиме непрерывного сканирования (скорость сканирования 100 нм/мин; интервал сбора данных 0,1 нм; полоса пропускания 1 нм; время отклика 4 с) при скорости потока азота 100 мл/мин. Для каждого образца было получено в среднем 3 спектра (N=3).

[0221] На фиг. 5 показаны данные спектров CD в присутствии DPC. Конформационно ограниченный дисульфидом цистеина в положении i-i+2 пептид, Ас - KQF C(S-)EN C(S-)SE FAQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 72), продемонстрировал наиболее интенсивный отрицательный сигнал CD (от примерно -20 до -30 As) в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нм, что указывает на самое высокое ссодержание спирали. При этом конформационно ограниченный дисульфидом цистеина в положении i-i+2 пептид, Ас - KQF IEN GSE FAQ KC(S-)L KC(S-)F S - NH₂ (SEQ ID NO: 69), демонстрировал наименее интенсивный отрицательный сигнал CD (от примерно -5 до -10 As) в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нм, что указывает на наименьшее содержание спирали. Остальные конформационно ограниченные дисульфидом цистеина в положении i-i+2 пептиды, Ас - KQF C(S-)EN C(S-)SE FAQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 72) и Ac - KQF PEN C(S-)SE C(S-)AQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 70), демонстрировали отрицательные CD сигналы промежуточной силы (от примерно -20 до -25 As) в диапазоне длин волн от 200 нм до 230 нМ и, таким образом, промежуточную спиральность.

[0222] На фиг.6 показаны данные спектров CD для конформационно ограниченных в положении i-i+2 пептидов и Lacripep в отсутствие 10 мМ DPC. Конформационно ограниченные дисульфидом в положении i-i+2 пептиды (то есть Ас -KQF C(S-)EN C(S-)SE FAQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 73), Ac - KQF FEN GSE FAQ KC(S-)L KC(S-)F S - NH (SEQ ID NO: 77)₂, Ac - KQF C(S-)EN C(S-)SE FAQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 73) и Ac - KQF IEN C(S-)SE C(S-)AQ KLL KKF S - NH₂ (SEQ ID NO: 75)) и Lacripep демонстрируют значительную спиральность в отсутствие поверхностно-активного вещества DPC. В целом конформационно ограниченные дисульфидом пептиды и Lacripep ведут себя схожим образом в отношении спиральности в присутствии и в отсутствие DPC. В некоторых вариантах реализации присутствие DPC включено в состав для сохранения спиральности.

[0223] Более того, хотя вышеуказанное было описано более подробно посредством иллюстраций и примеров для целей ясности и понимания, специалистам в данной области техники будет понятно, что могут быть осуществлены многочисленные и различные модификации без отступления от сущности настоящего раскрытия. Таким образом, следует ясно понимать, что формы, раскрытые в настоящем документе, являются исключительно иллюстративными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения, а, напротив, должны рассматриваться как также охватывающие все модификации и альтернативы, входящие в истинный объем и сущность вариантов реализации настоящего изобретения (изобретений).

[0224] Термины и фразы, используемые в настоящей заявке, и их варианты, в частности, в прилагаемой формуле изобретения, следует рассматривать как неограничивающие, в отличие от ограничивающих, если явным образом не указано иное. В качестве примера вышеизложенного, термин «включающий» следует понимать как «включающий без ограничений», «включающий, но не ограничивающийся указанным» или тому подобное.

[0225] Формы единственного числа не исключают множественного числа. Использование слова «примерно» перед числом включает само число. Например, «примерно 5» явным образом включает «5».

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> TearSolutions, Inc.

The University of Virginia Patent Foundation

Thomas R. Gadek

Paul A. Laskar

Gordon W. Laurie

<120> CONSTRAINED SALTS OF PEPTIDES

<130> TEAR.013WO

<150> 62/863,651

<151> 2019-06-19

<150> 62/863,666

<151> 2019-06-19

<160> 77

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 2

<211> 25

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser Leu Leu Lys Pro Trp Ala

20 25

<210> 3

<211> 138

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Lys Phe Thr Thr Leu Leu Phe Leu Ala Ala Val Ala Gly Ala Leu

1 5 10 15

Val Tyr Ala Glu Asp Ala Ser Ser Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala

20 25 30

Gln Glu Ala Gly Thr Ser Lys Pro Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala

35 40 45

Glu Pro Ala Ser Pro Pro Glu Thr Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser

50 55 60

Ala Ala Ala Val Gln Gly Thr Ala Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu

65 70 75 80

Leu Asn Pro Leu Lys Ser Ile Val Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu

85 90 95

Gln Ala Leu Ala Lys Ala Gly Lys Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly

100 105 110

Gly Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu

115 120 125

Lys Lys Phe Ser Leu Leu Lys Pro Trp Ala

130 135

<210> 4

<211> 119

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

Glu Asp Ala Ser Ser Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala Gln Glu Ala

1 5 10 15

Gly Thr Ser Lys Pro Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala Glu Pro Ala

20 25 30

Ser Pro Pro Glu Thr Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser Ala Ala Ala

35 40 45

Val Gln Gly Thr Ala Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu Leu Asn Pro

50 55 60

Leu Lys Ser Ile Val Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu Gln Ala Leu

65 70 75 80

Ala Lys Ala Gly Lys Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly Gly Lys Gln

85 90 95

Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys Lys Phe

100 105 110

Ser Leu Leu Lys Pro Trp Ala

115

<210> 5

<211> 114

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala Gln Glu Ala Gly Thr Ser Lys Pro

1 5 10 15

Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala Glu Pro Ala Ser Pro Pro Glu Thr

20 25 30

Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser Ala Ala Ala Val Gln Gly Thr Ala

35 40 45

Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu Leu Asn Pro Leu Lys Ser Ile Val

50 55 60

Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu Gln Ala Leu Ala Lys Ala Gly Lys

65 70 75 80

Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly Gly Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly

85 90 95

Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys Lys Phe Ser Leu Leu Lys Pro

100 105 110

Trp Ala

<210> 6

<211> 114

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

Glu Asp Ala Ser Ser Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala Gln Glu Ala

1 5 10 15

Gly Thr Ser Lys Pro Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala Glu Pro Ala

20 25 30

Ser Pro Pro Glu Thr Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser Ala Ala Ala

35 40 45

Val Gln Gly Thr Ala Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu Leu Asn Pro

50 55 60

Leu Lys Ser Ile Val Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu Gln Ala Leu

65 70 75 80

Ala Lys Ala Gly Lys Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly Gly Lys Gln

85 90 95

Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys Lys Phe

100 105 110

Ser Leu

<210> 7

<211> 109

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 7

Glu Asp Ala Ser Ser Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala Gln Glu Ala

1 5 10 15

Gly Thr Ser Lys Pro Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala Glu Pro Ala

20 25 30

Ser Pro Pro Glu Thr Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser Ala Ala Ala

35 40 45

Val Gln Gly Thr Ala Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu Leu Asn Pro

50 55 60

Leu Lys Ser Ile Val Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu Gln Ala Leu

65 70 75 80

Ala Lys Ala Gly Lys Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly Gly Lys Gln

85 90 95

Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu

100 105

<210> 8

<211> 104

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 8

Glu Asp Ala Ser Ser Asp Ser Thr Gly Ala Asp Pro Ala Gln Glu Ala

1 5 10 15

Gly Thr Ser Lys Pro Asn Glu Glu Ile Ser Gly Pro Ala Glu Pro Ala

20 25 30

Ser Pro Pro Glu Thr Thr Thr Thr Ala Gln Glu Thr Ser Ala Ala Ala

35 40 45

Val Gln Gly Thr Ala Lys Val Thr Ser Ser Arg Gln Glu Leu Asn Pro

50 55 60

Leu Lys Ser Ile Val Glu Lys Ser Ile Leu Leu Thr Glu Gln Ala Leu

65 70 75 80

Ala Lys Ala Gly Lys Gly Met His Gly Gly Val Pro Gly Gly Lys Gln

85 90 95

Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe

100

<210> 9

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 9

Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys Lys Phe Ser

1 5 10

<210> 10

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 10

Xaa Gln Phe Ile Xaa Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 11

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 11

Xaa Gln Phe Ile Glu Asn Gly Xaa Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 12

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 12

Lys Xaa Phe Ile Glu Xaa Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 13

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 13

Lys Xaa Phe Ile Glu Asn Gly Ser Xaa Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 14

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 14

Lys Gln Xaa Ile Glu Asn Xaa Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 15

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 15

Lys Gln Xaa Ile Glu Asn Gly Ser Glu Xaa Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 16

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 16

Lys Gln Phe Xaa Glu Asn Gly Xaa Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 17

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 17

Lys Gln Phe Xaa Glu Asn Gly Ser Glu Phe Xaa Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 18

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 18

Lys Gln Phe Ile Xaa Asn Gly Ser Xaa Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 19

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 19

Lys Gln Phe Ile Xaa Asn Gly Ser Glu Phe Ala Xaa Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 20

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 20

Lys Gln Phe Ile Glu Xaa Gly Ser Glu Xaa Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 21

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 21

Lys Gln Phe Ile Glu Xaa Gly Ser Glu Phe Ala Gln Xaa Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 22

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 22

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Xaa Ser Glu Phe Xaa Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 23

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 23

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Xaa Ser Glu Phe Ala Gln Lys Xaa Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 24

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 24

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Xaa Glu Phe Ala Xaa Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 25

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 25

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Xaa Glu Phe Ala Gln Lys Leu Xaa Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 26

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 26

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Xaa Phe Ala Gln Xaa Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 27

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 27

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Xaa Phe Ala Gln Lys Leu Leu Xaa

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 28

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 28

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Xaa Ala Gln Lys Xaa Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 29

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 29

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Xaa Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Xaa Phe Ser

<210> 30

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 30

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Xaa Gln Lys Leu Xaa Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 31

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 31

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Xaa Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Xaa Ser

<210> 32

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 32

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Xaa Lys Leu Leu Xaa

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 33

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 33

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Xaa Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Xaa

<210> 34

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 34

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Xaa Leu Leu Lys

1 5 10 15

Xaa Phe Ser

<210> 35

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 35

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Xaa Leu Lys

1 5 10 15

Lys Xaa Ser

<210> 36

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 36

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Xaa Lys

1 5 10 15

Lys Phe Xaa

<210> 37

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 37

Xaa Gln Phe Xaa Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 38

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 38

Lys Xaa Phe Ile Xaa Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 39

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 39

Lys Gln Xaa Ile Glu Xaa Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 40

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 40

Lys Gln Phe Xaa Glu Asn Xaa Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 41

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 41

Lys Gln Phe Ile Xaa Asn Gly Xaa Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 42

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 42

Lys Gln Phe Ile Glu Xaa Gly Ser Xaa Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 43

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 43

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Xaa Ser Glu Xaa Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 44

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 44

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Xaa Glu Phe Xaa Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 45

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 45

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Xaa Phe Ala Xaa Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 46

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 46

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Xaa Ala Gln Xaa Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 47

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 47

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Xaa Gln Lys Xaa Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 48

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 48

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Xaa Lys Leu Xaa Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 49

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 49

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Xaa Leu Leu Xaa

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 50

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 50

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Xaa Leu Lys

1 5 10 15

Xaa Phe Ser

<210> 51

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 51

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Xaa Lys

1 5 10 15

Lys Xaa Ser

<210> 52

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Xaa = any amino acid modified with a cross-linking

moiety

<400> 52

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Xaa

1 5 10 15

Lys Phe Xaa

<210> 53

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 53

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Ala Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 54

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 54

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Ala Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 55

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 55

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Ala Ser Glu Phe Ala Gln Lys Ala Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 56

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 56

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Ala Ser

<210> 57

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 57

Lys Gln Phe Ala Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 58

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 58

Lys Gln Ala Ile Glu Asn Ala Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 59

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 59

Lys Gln Ala Ile Glu Asn Gly Ser Glu Ala Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 60

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 60

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 61

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 61

Lys Gln Phe Ala Glu Asn Gly Ala Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 62

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 62

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Ala Leu Lys

1 5 10 15

Lys Ala Ser

<210> 63

<211> 17

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 63

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Gln Lys Leu Lys Lys Phe

1 5 10 15

Ser

<210> 64

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 64

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Ala Leu Lys

1 5 10 15

Lys Ala Ser

<210> 65

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 65

Lys Gln Ala Ile Glu Asn Ala Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 66

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 66

Lys Gln Phe Ala Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 67

<211> 18

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 67

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Ser Glu Phe Ala Gln Lys Ala Leu Lys Lys

1 5 10 15

Phe Ser

<210> 68

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 68

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Ala Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 69

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 69

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Cys Leu Lys

1 5 10 15

Cys Phe Ser

<210> 70

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 70

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Cys Ser Glu Cys Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 71

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 71

Lys Gln Cys Ile Glu Cys Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 72

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 72

Lys Gln Phe Cys Glu Asn Cys Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 73

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 73

Lys Gln Phe Cys Glu Asn Cys Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 74

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 74

Lys Gln Cys Ile Glu Cys Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 75

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 75

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Cys Ser Glu Cys Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 76

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 76

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys Phe Ser

<210> 77

<211> 19

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 77

Lys Gln Phe Ile Glu Asn Gly Ser Glu Phe Ala Gln Lys Cys Leu Lys

1 5 10 15

Cys Phe Ser

<---

Группа изобретений относится к области биотехнологии и может быть применима в медицине. Изобретение раскрывает конформационно ограниченные формы коротких/усеченных вариантов пептидов (SEQ ID NO: 1-9), сохраняющие при этом биологическую функцию полноразмерного белка, но способные к встраиванию или проникновению через клеточную мембрану. Содержащие пептиды согласно настоящему изобретению композиции могут быть применимы для лечения различных заболеваний глаза, в том числе синдрома Шегрена. В некоторых вариантах реализации композиция содержит конформационно ограниченную соль Lacripep™. 11 н. и 37 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 8 пр.

1. Конформационно ограниченная соль пептида для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, причем указанный пептид содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-9,

где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и где по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.

2. Конформационно ограниченная соль пептида для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, причем указанный пептид содержит SEQ ID NO: 1,

где указанная соль содержит фосфолипид, жирную кислоту с прямой цепью, жирную кислоту с разветвленной цепью или комбинацию любых из перечисленных выше соединений, и где по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.

3. Конформационно ограниченная соль пептида по п. 1 или 2, где указанные фосфолипид, жирная кислота с прямой цепью, жирная кислота с разветвленной цепью или комбинация любых из перечисленных выше соединений выбраны из солей миристолеиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, сапиеновой кислоты, олеиновой кислоты, элаидиновой кислоты, вакценовой кислоты, линолевой кислоты, линоэлаидиновой кислоты, альфа-линоэлаидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, каприловой кислоты, каприновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, арахиновой кислоты, бегеновой кислоты, лигноцериновой кислоты, церотиновой кислоты, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина (лецитина), додецилфосфохолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилинозитолфосфата, фосфатидилинозитолбифосфата, фосфатидилинозитолтрифосфата, церамидфосфорилхолина, церамидфосфорилэтаноламина и любых комбинаций перечисленных выше соединений.

4. Конформационно ограниченная соль по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная соль представляет собой соль жирной кислоты с прямой цепью.

5. Пептид для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, содержащий SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемая соль,

где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию, и где i представляет собой любую одну из аминокислот 1-15 из SEQ ID NO: 1.

6. Пептид для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, содержащий SEQ ID NO: 2, или его фармацевтически приемлемая соль,

где по меньшей мере две аминокислоты в положениях i и i+4 или i и i+7 витка спирали заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны, и где указанный пептид имеет альфа-спиральную конформацию, и где i представляет собой любую одну из аминокислот 1-21 из SEQ ID NO: 2.

7. Пептид по любому из пп. 5, 6 или его фармацевтически приемлемая соль, где две аминокислоты в положении i и i+4 представляют собой соединение, содержащее сшивающий фрагмент, или модифицированы таким соединением, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны.

8. Пептид по любому из пп. 5, 6 или его фармацевтически приемлемая соль, где две аминокислоты в положении i и i+7 заменены или модифицированы соединением, содержащим сшивающий фрагмент, и указанные сшивающие фрагменты ковалентно связаны.

9. Пептид по любому из пп. 5-8 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение, содержащее сшивающий фрагмент, включает соединение формулы (I):

где:

каждый n независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;

каждый PG независимо представляет собой Boc или Fmoc;

каждый R₁ независимо представляет собой атом водорода или метил; и

каждый R₂ независимо выбран из группы, состоящей из:

.

10. Пептид по п. 9, где каждый n независимо равен 3, 4, 5, 6 или 7.

11. Пептид по любому из пп. 9, 10, где каждый PG представляет собой Fmoc.

12. Пептид по любому из пп. 9-11, где каждый R₁ представляет собой атом водорода.

13. Пептид по любому из пп. 9-12, где каждый R₂ представляет собой или .

14. Жидкая фармацевтическая композиция для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, содержащая:

0,00001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида по любому из пп. 1-13, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида;

0,01-0,6% буфера;

0,0005-0,01% динатрия ЭДТА;

и хлорид натрия;

при этом рН указанной композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8; и

осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до 350 мОсм/кг, и

при этом по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.

15. Фармацевтическая композиция для местного применения для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, содержащая:

0,00001-0,05% конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида по любому из пп. 1-13, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида, и

одно или более из следующего: 0,1-0,6% буфера; 0,0005-0,01% динатрия ЭДТА и хлорид натрия,

при этом указанная композиция представляет собой раствор, гель или мазь.

16. Фармацевтическая композиция по п. 14 или 15, дополнительно содержащая 0,01- 0,1% поверхностно-активного вещества.

17. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-16,

в которой количество конформационно ограниченной соли пептида или конформационно ограниченного пептида составляет 0,01%, 0,005%, 0,001%, 0,0001% или 0,00001%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида;

при этом количество буфера составляет 0,2888%;

при этом количество динатрия ЭДТА составляет 0,001%;

при этом количество поверхностно-активного вещества составляет 0,05%;

при этом рН указанной композиции составляет от 6,2 до примерно 6,8; и

осмоляльность композиции составляет от примерно 150 до 350 мОсм/кг;

при этом пептид представляет собой Lacripep, имеющий SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и C-конец амидирован.

18. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 16, 17, где указанное поверхностно-активное вещество содержит или состоит из тилоксапола или DPC.

19. Фармацевтическая композиция по п. 18, где указанное поверхностно-активное вещество состоит из тилоксапола.

20. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-19, где указанный буфер представляет собой цитратный буфер.

21. Фармацевтическая композиция по п. 20, где указанный цитратный буфер содержит 0,0098% безводной лимонной кислоты и 0,279% дигидрата цитрата натрия.

22. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-21, отличающаяся тем, что рН композиции составляет примерно 6,5.

23. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-22, отличающаяся тем, что осмоляльность композиции составляет от 150 до 250 мОсм/кг.

24. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-23, отличающаяся тем, что осмоляльность композиции составляет примерно 200 мОсм/кг.

25. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-24, отличающаяся тем, что количество NaCl составляет от 0,4% до 0,6%.

26. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-25, отличающаяся тем, что количество NaCl составляет 0,5%.

27. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-26, отличающаяся тем, что указанная композиция дополнительно содержит 0,04% метилпарабена.

28. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-27, дополнительно содержащая растворитель.

29. Фармацевтическая композиция по п. 28, где растворитель присутствует в количестве от примерно 0,1 до примерно 10%.

30. Фармацевтическая композиция по п. 29, где растворитель присутствует в количестве примерно 1%.

31. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 28-30, где растворитель представляет собой ДМСО.

32. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-31, отличающаяся тем, что указанная композиция является стерильной.

33. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-32, отличающаяся тем, что пептид представляет собой конформационно ограниченный Lacripep или конформационно ограниченную соль Lacripep, состоящего из SEQ ID NO: 1, где необязательно N-конец ацетилирован и С-конец амидирован.

34. Фармацевтическая композиция по п. 33, где пептид состоит из SEQ ID NO: 1, в котором N-конец ацетилирован и С-конец амидирован.

35. Фармацевтическая композиция по п. 34, где количество пептида составляет примерно 0,01%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида.

36. Фармацевтическая композиция по п. 34, где количество пептида составляет примерно 0,005%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида.

37. Фармацевтическая композиция по п. 34, где количество пептида составляет примерно 0,0001%, где количество пептида представляет собой процентное содержание масс./масс., рассчитанное с использованием молекулярной массы свободного основания и/или не имеющей конформационных ограничений формы пептида.

38. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-37 для применения для лечения одного или более симптомов или признаков сухости глаза или синдрома Шегрена.

39. Набор для лечения сухости глаза и связанных с ней синдромов и состояний, включая синдром Шегрена, содержащий множество емкостей для однократного применения, где каждая емкость содержит резервуар, содержащий композицию по любому из пп. 14-38.

40. Набор по п. 39, где емкость содержит от примерно 0,05 мл до примерно 1 мл композиции.

41. Набор по любому из пп. 39, 40, где емкость включает съемную герметизирующую верхнюю часть для герметизации резервуара, а также горловинную часть, соединяющую резервуар и герметизирующую верхнюю часть.

42. Набор по п. 41, где указанная съемная герметизирующая верхняя часть не может повторно обеспечить герметизацию резервуара после ее удаления.

43. Набор по любому из пп. 39-42, где емкость содержит поливинилхлорид, полипропилен, полиэтилентерефталат, полиэтилентерефталат-гликоль, полиэтилен высокой плотности, полиэтилен низкой плотности, полибутилентерефталат, полиуретан, полиэтиленвинилацетат, силикон, акрилонитрилбутадиенстирол, политетрафторэтилен, поликарбонат, полистирол, полиметилметакрилат, полисульфон, поливинилиденхлорид или их комбинации.

44. Способ введения, включающий местное нанесение на глаз одной или более капель композиции по любому из пп. 14-38.

45. Способ по п. 44, где введение дополнительно включает местное нанесение капли композиции на глаз из емкости для однократного применения набора по любому из пп. 39-43.

46. Применение композиции по любому из пп. 14-38 для лечения сухости глаза.

47. Применение композиции по любому из пп. 14-38 для лечения одного или более симптомов или признаков синдрома Шегрена.

48. Способ конформационного ограничения Lacripep, включающий приведение пептида, имеющего SEQ ID NO: 1, в контакт со сшивающим реагентом, причем:

по меньшей мере две аминокислоты заменяют или модифицируют соединениями, содержащими сшивающий фрагмент, и приводят в контакт с реагентом, выбранным из окислителя и катализатора на основе переходного металла;

когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой алкен или азид и алкин, реагент представляет собой катализатор на основе переходного металла;

когда каждый из сшивающих фрагментов представляет собой сульфгидрил, реагент представляет собой окислитель; и

когда сшивающие фрагменты сшиты, по меньшей мере 90% пептида находится в альфа-спиральной конформации.