Способ увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства Российский патент 2025 года по МПК C12N7/00 A61K39/205 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и производству вакцинных препаратов, а именно разработан способ увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства.

Одной из самых сложных задач в разработке белковых препаратов является борьба с физической и химической неустойчивостью белков. В последние три десятилетия было проведено множество исследований, охватывающих детальное изучение процессов упаковывания и разворачивания белковых молекул, механизмы химической и физической неустойчивости белков и различные способы их стабилизации [1-8].

При длительном хранении суспензий инактивированного рибонуклеопротеина вируса бешенства отмечается значительное снижение концентрации данного иммуногенного компонента вакцины с сопутствующим снижением иммуногенности готового препарата. Стабильность вирионов в сырье для инактивированных антирабических вакцин оценивают по степени сохранности рибонуклеопротеина с использованием способа спектрометрического определения концентрации рибонуклеопротеина вируса бешенства по оценке количества молекул вирусной РНК в сырье для антирабических вакцин [9].

Вирусные белки могут быть стабилизированы за счет изменения их структуры, либо посредством преобразования среды, в которой они находятся. Структурные перестройки сопровождаются изменением внутренней энергии системы [10]. Существуют различные подходы к внутренней стабилизации нативных белков. Так, при увеличении внутренней гидрофобности протеинов повышается эффективность фолдинга и стабильности молекулы [11]. Стабильность нативных белков также определяется количеством водородных связей между аминокислотами в составе протеина, особенно в критических точках [12, 13]. Увеличение количества внутримолекулярных связей при формировании вторичной структуры белка также играет ключевую роль для дальнейшей стабилизации системы. Рост плотности заряда молекулы белка, по данным исследователей, дестабилизирует его [14]. Таким образом, механизмы внутренней стабилизации протеинов вызывают преобразования в пространственном расположении белковых молекул, что, в свою очередь, влечет за собой нежелательное изменение их биологических функций.

Для сохранения требуемой конфигурации и повышения стабильности белков исследователи предлагают использование механизмов внешней стабилизации, которые заключаются в усилении протеинстабилизирующих сил и ликвидации денатурирующих факторов. По данным ранее проведенных испытаний, стабильность рибонуклеопротеина возможно увеличить благодаря использованию различных консервантов, в частности, ди- и полисахаров, сывороточных белков, сурфактантов, полиэтиленгликолей. При этом следует отметить, что стабилизирующий эффект этих наполнителей сильно отличается друг от друга [1-8, 15].

Защиту белковых молекул от денатурации и конформационных изменений обеспечивают дисахара, которые предотвращают разворачивание спиралей белка, образуя с его молекулами стабильные водородные связи. Из сахаров рекомендуют применять сахарозу, трегалозу, декстрозу, маннит и маннозилглицерат [10]. По данным Arakawa et al. (1984), для достижения стабилизирующего эффекта в белковых системах требуется использование сахарозы с концентрацией не менее 0,3 М. Timasheff et al. (1993) предлагают применение 1 М сахарозы для защиты белковых молекул от диссоциации. Для стабилизации также применяют комплекс из лактозы, сахарозы, трегалозы и маннита [2]. Другие авторы обеспечивают стабильность белков за счет применения 20% декстрозы или 50% глицерина, а также 5% маннита в готовом продукте [6-8].

Для стабилизации белков зарубежные исследователи применяли комплексы из сахарозы и бычьего сывороточного альбумина (BSA) [11-13]. По данным исследователей, окислительной деградации белковых молекул препятствуют также многоатомные спирты, а именно этиленгликоль и глицерин [7].

Некоторые исследователи отмечают, что не все белки могут стабилизироваться под влиянием сахаров и полиолов [12]. Кроме того, не всегда рекомендуется использовать именно дисахара, поскольку их функциональные группы могут взаимодействовать с аминогруппами белков.

Для стабилизации белковых молекул применяют также неионогенные поверхностно-активные вещества (ПАВ), такие как Tween-20, Tween-80, тритон Х-100, Pluronic F68, Pluronic F127 [5]. Следует отметить, что не все сурфактанты способны стабилизировать белковые молекулы в суспензии. Кроме того, некоторые ПАВ, в частности, Tween-80, могут быть загрязнены алкилированными пероксидами, которые ускоряют процесс окисления белков [2, 5, 16].

Из представленных способов увеличения сохранности рибонуклеопротеина вируса бешенства наиболее близким прототипом является комплекс из 30% сахарозы и 1% бычьего сывороточного альбумина [5]. Однако данный способ имеет существенный недостаток - не обеспечивает длительную сохранность рибонуклеопротеина вируса бешенства. Спустя 6 месяцев хранения в данных условиях разрушение рибонуклеопротеина вируса бешенства происходит на 25-30%. Кроме того, сахароза и бычий сывороточный альбумин являются питательными компонентами для микроорганизмов, что может негативно отразиться на качестве препарата.

В связи с этим целесообразно провести разработку способа увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства. Для решения поставленной задачи требуется подобрать комплекс соединений с определенной концентрацией, что даст возможность увеличить продолжительность хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства для изготовления вакцинных препаратов и не будет повышать риски микробной контаминации конечного продукта.

В настоящее время для подавления агрегации некоторых белков используются современные низкомолекулярные соединения, такие как циклодекстрины [6, 7]. Данные соединения представляют собой белые кристаллические порошки, нетоксичные, практически не имеющие вкуса. Циклодекстрины - это белые кристаллические и аморфные субстанции. Количество кристаллизационной воды варьирует от 1 до 18% в зависимости от методов сушки и приготовления препарата.

Циклодекстрины различают по количеству остатков глюкозы, содержащихся в одной их молекуле. α-циклодекстрин состоит из 6 глюкопиранозных звеньев, β-циклодекстрин содержит 7, а γ-циклодекстрин - 8 звеньев. Именно эти три типа циклодекстринов наиболее распространены и исследованы [14].

В настоящее время циклодекстрины доступны по низким ценам, их мировое производство оценивается в объёмах десятков тысяч тонн.

Для увеличения продолжительности хранения рибонуклеопротеина вируса бешенства до 3 лет предлагается использовать циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозил. Данный сахарид обладает способностью связываться с остатками ароматических аминокислот в частично развернутых формах белковых молекул, что вызывает подавление процесса агрегации. Циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозил стабилен в щелочной среде и подвергается гидролизу до глюкозы в сильнокислой среде [7].

γ-циклодекстрин имеет самый большой размер полости среди природных циклодекстринов, таким образом, он хорошо подходит для размещения более крупных биомолекул, в частности, рибонуклеопротеина вируса бешенства. 

Благодаря наличию гидрофобной полости и полярной поверхности циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозил в водных растворах образует комплексы с неполярными соединениями за счет гидрофобных взаимодействий [6].

В фармацевтической промышленности для косметических препаратов применяют такое поверхностно-активное соединение, как гидрогель Pluronic F-127 (молекулярный вес составляет 12600 Да) [16]. Pluronic F-127, также известный как полоксамер 407, является нетоксичным и неионным сополимером. Содержит полиэтиленоксид-полипропиленоксид, расположенные в трехблочной структуре, образующей PEO-PPO-PEO симметрично. Поверхностно-активные свойства этого полимера, обусловленные его амфифильной природой, позволяют ему взаимодействовать с гидрофобными поверхностями и биологическими мембранами [5].

Задачей настоящего изобретения является разработка способа увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства с целью устранения вышеуказанных недостатков.

Данная задача решена благодаря разработки способа увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства с применением комплекса, состоящего из стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина.

Разработанный способ дает возможность - увеличить время хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства на 100% до 3 лет при температуре 2-8°С.

Сущность изобретения отражена на графических изображениях:

Фиг. 1 - Пространственное изображение молекулы стабилизатора циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила.

Фиг. 2 - Пространственное изображение молекулы стабилизатора Pluronic F-127.

Фиг. 3 - Степень сохранности рибонуклеопротеина вируса бешенства (в %) до внесения стабилизатора, спустя 3 года, 4 года при хранении при температуре 2-8°С. Примечание: А - прототипный способ, Б - разработанный способ, 1 - серия 01, 2 - серия 02, 3 - серия 03, 4 - серия 04.

Сущность изобретения заключается в применении комплекса стабилизирующих соединений, а именно, из стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина, для увеличения сохранности во времени производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства. Пространственное изображение молекул данных добавок представлено на фиг. 1 и 2.

Заявляемый способ основан на внесении в готовый рибонуклеопротеин вируса бешенства комплекса стабилизирующих соединений, а именно, из стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина вируса бешенства, что обеспечивает его сохранность при температуре 2-8°С за 3 года на 100%, за 4 года - на 93-94%.

В научных публикациях показана необходимость увеличения срока хранения рибонуклеопротеина вируса бешенства без значительного разрушения важнейшего иммуногенного компонента [6, 8]. В настоящее время доступно несколько соединений и их комплексов, отраженных выше, но при этом их применение не обеспечивает длительную сохранность рибонуклеопротеина. Сведений об аналогах предлагаемого способа увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства авторами не обнаружено.

Разработанный способ увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства по сравнению с прототипом отличается применением комплекса соединений, который ранее не применяли для стабилизации производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства.

В отличие от прототипа разработанный способ позволяет сохранять рибонуклеопротеин вируса бешенства при температуре 2-8°С с потерей за 3 года на 100%, за 4 года на 93-94%. Прототипный способ дает возможность стабилизировать рибонуклеопротеин вируса бешенства в указанных температурных условиях не более чем на 2,5 месяца (93-94%), а через 6 месяцев без внесения стабилизаторов рибонуклеопротеин вируса бешенства разрушается на 25-30%.

Таким образом, актуально применять предложенный способ для увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства.

Технический результат изобретения заключается в том, что разработанный способ дает возможность увеличить срок сохранности важнейшего иммуногенного компонента антирабических вакцин - рибонуклеопротеина вируса бешенства, при температуре 2-8°С до 3 лет на 100%.

Для увеличения времени сохранности рибонуклеопротеина вируса бешенства в его суспензию добавляют комплекс стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина вируса бешенства.

Для этого на первом этапе работы делают навески стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила и Pluronic F-127 для требуемого объема рибонуклеопротеина вируса бешенства, учитывая необходимые концентрации стабилизаторов в готовом препарате рибонуклеопротеина. После приготовления навесок компоненты вносят в рибонуклеопротеин, перемешивают и пропускают суспензию рибонуклеопротеина через стерилизующий фильтр диаметром 0,22 мкм (компания «Millipore»). Водородный показатель рибонуклеопротеина находится в диапазоне 7,6-7,8.

Определяют концентрацию рибонуклеопротеина вируса бешенства с помощью спектрометрического способа [9] сразу после внесения стабилизатора и далее спустя каждые 6 месяцев хранения при температуре 4-8°С в течение 4 лет.

Делают заключение о степени сохранности рибонуклеопротеина вируса бешенства и отражают полученные результаты в виде процента (DP, degree of preservation) рибонуклеопротеина вируса бешенства (RNP RabV) с применением формулы:

DP_{RNP RabV} = C₁×100/C₂,

где С₁ - концентрация рибонуклеопротеина вируса бешенства после хранения в течение определенного промежутка времени,

С₂ - концентрация рибонуклеопротеина вируса бешенства на момент начала хранения при определенных условиях.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Приготовление рибонуклеопротеина вируса бешенства для длительной сохранности рибонуклеопротеина с применением прототипного и разработанного способов

В соответствии с протоколом разработанного способа готовили навески циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила и Pluronic F-127 для каждой партии по 1 л рибонуклеопротеина вируса бешенства экспериментальных серий 01, 02, 03, 04, учитывая необходимые концентрации стабилизаторов в готовом препарате рибонуклеопротеина, а именно для циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила - 0,3% и Pluronic F-127 - 0,1%.

После приготовления навесок компоненты вносили в суспензию рибонуклеопротеина вируса бешенства, перемешивали и пропускали готовую суспензию через стерилизующий фильтр диаметром 0,22 мкм. Водородный показатель рибонуклеопротеина составлял 7,65-7,69 для указанных серий рибонуклеопротеина вируса бешенства.

В соответствии с протоколом прототипного способа четыре экспериментальные серии рибонуклеопротеина вируса бешенства параллельно смешивали с сахарозой (30% от массы рибонуклеопротеина) и бычьим сывороточным альбумином (1% от массы рибонуклеопротеина).

Приготовленные суспензии рибонуклеопротеина вируса бешенства (8 образцов) хранили при температуре 2-8°С в течение 4 лет.

Пример 2. Исследование стабильности производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства разных экспериментальных серий при использовании прототипного и разработанного способов

Образцы экспериментальных серий рибонуклеопротеина вируса бешенства, полученные в примере 1, исследовали спектрометрическим способом для определения концентрации рибонуклеопротеина вируса бешенства сразу после внесения стабилизатора и далее спустя каждые 6 месяцев хранения при температуре 2-8°С в течение 4 лет.

Делали заключение о степени сохранности рибонуклеопротеина вируса бешенства с использованием прототипного и разработанного способов и с применением следующей формулы, представленной выше.

Результаты исследования отражены в таблицах 1, 2 и на фиг. 3, из которых видно, что применение прототипного способа позволяет сохранить производственный рибонуклеопротеин вируса бешенства через 2,5 месяца в указанных температурных условиях на 93-94%, через 6 месяцев - на 70-75%, спустя 12 месяцев на 40-45%, через 3 года - на 15-16%, через 4 года - на 5-10%. Таким образом, прототипный способ не обеспечивает сохранения рибонуклеопротеина на длительный срок.

Благодаря использованию разработанного способа производственный рибонуклеопротеин вируса бешенства, каждой из указанных выше экспериментальных серий, сохранялся в течение 3 лет при температуре 2-8°С на 100%, через 4 года при тех же условиях - на 93-94%.

Пример 3. Исследование безвредности комплекса стабилизаторов в применяемых концентрациях в составе вакцины для собак

Контроль безвредности продукта на организм собак проводили путём внутримышечного введения вакцины, приготовленной на основе рибонуклеопротеина вируса бешенства с добавлением комплекса стабилизаторов в указанных выше количествах, в дозе 1,5 см³ (тройная доза). В опыте использовали 10 голов собак беспородных. Срок наблюдения составлял 10 суток. Нормальная температура тела собак должна составлять 37-39°С. После иммунизации температура тела животных повышалась до 39,2-39,3°С и удерживаться на этом уровне в течение 1 суток, что является нормальным. Со вторых суток температура составляла 37,6-38,3°С, то есть была в норме [17].

По результатам исследований изготовленная вакцина против бешенства культуральная инактивированная сорбированная была безвредна. Все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.

Пример 4. Исследование безвредности комплекса стабилизаторов в применяемых концентрациях в составе вакцины для кошек

Контроль безвредности продукта на организм кошек проводили путём внутримышечного введения вакцины, приготовленной на основе рибонуклеопротеина вируса бешенства с добавлением комплекса стабилизаторов в указанных выше количествах, в дозе 1,5 см³ (тройная доза). В опыте использовали 10 голов кошек беспородных. Срок наблюдения составил 10 суток. Нормальная температура тела собак должна составлять 37,5-39,5°С. После иммунизации температура тела животных повышалась до 39,6-39,8°С и удерживаться на этом уровне в течение 1 суток, что является нормальным. Со вторых суток температура составляла 37,9-38,7°С, то есть была в норме [17].

По результатам исследований изготовленная вакцина против бешенства культуральная инактивированная сорбированная была безвредна. Все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.

Источники информации

1. Boctor A.M. Enhancement of the stability of thrombin by polyols: microcalorimetric studies / Boctor A.M., Mehta S.C. // J. Pharm. Pharmacol. - 1992. - V. 44(7). - P. 600-603.

2. Kendrick B. Detergent Stabilization of Proteins against Surface and Freezing Denaturation // Pharm. Res. - 1997. - V.12. - 85 p.

3. Herman, A.C. Characterization, formulation, and stability of Neupogen (Filgrastim), a recombinant human granulocytecolony stimulating factor. In Formulation, characterization and stability of protein drugs (ed. R. Pearlman and Y.J. Wang) / Herman, A.C., Boone, T.C., Lu, H.S. // Plenum Press, New York. - 1996. - P. 303-328.

4. Escobar-Chávez JJ, López-Cervantes M, Naïk A, Kalia YN, Quintanar-Guerrero D, Ganem-Quintanar A. Applications of thermo-reversible pluronic F-127 gels in pharmaceutical formulations. J Pharm Pharm Sci. 2006; 9 (3): 339-58.

5. Wang W. Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals / Int. J. Pharm. 1999 Aug 20. - V. 185(2). - P.129-188.

6. Otzen, D.E. Structural basis for cyclodextrins' suppression of human growth hormone aggregation / Otzen, D.E., Knudsen, B.R., Aachmann, F., Larsen, K.L., Wimmer, R. // Protein Sci. - 2002. - V. 11. - P. 1779 - 1787.

7. Nomura, Y. Thermoresponsive controlled association of protein with a dynamic nanogel of hydrophobized polysaccharide and cyclodextrin: heat shock protein-like activity of artificial molecular chaperone / Nomura, Y., Sasaki, Y., Takagi, M., Narita, T., Aoyama, Y., Akiyoshi, K. // Biomacromolecules. - 2005. - V.6. - P. 447 - 452.

8. Kamerzell T.J. Protein-excipient interactions: mechanisms and biophysical characterization applied to protein formulation development / Kamerzell T.J., Esfandiary R., Joshi S.B., Middaugh C.R., Volkin D.B // Adv Drug Deliv Rev. - 2011 Oct. - V. 63(13). - P. 1118-1159.

9. Патент РФ №2748475. Способ спектрометрического определения концентрации рибонуклеопротеина вируса бешенства по оценке количества молекул вирусной РНК в сырье для антирабических вакцин. Заявка: 2020136134, 02.11.2020. Дата регистрации: 26.05.2021.

10. Querol, E. Analysis of protein conformational thermostability / Querol, E., Perez-Pons, J. A. // Protein Eng. - 1996. - V. 9. - P. 265-271.

11. Hingerty В. Topography of cyclodextrin inclusion complexes. Crystal and molecular structure of the a-cyclodextrin-methanol-pentahydrate complex. Disorder in a hydrophobic cage / Hingerty В., Saenger W. // J. Amer. Chem. Soc. - 1976. - V. 98. - P. 3357-3365.

12. Manning M.C. Stability of protein pharmaceuticals / Manning M.C., Patel K., Borchardt R.T. // Pharm Res. - 1989. - V. 6. - P. 903-918.

13. Mozhaev, V.V. Structure–stability relationships in proteins: new approaches to stabilizing enzymes / Mozhaev, V.V., Martinek, K. // Review. Enzyme and Microbial Technology. - 1984. - V.6. - P. 50-59.

14. Szejtli J. Introduction and general overview of cyclodextrin chemistry / Chemical Reviews. 1998. - V. 98, №5. - P. 1747-1748.

15. Tataurov A.V. Predicting ultraviolet spectrum of single stranded and double stranded deoxyribonucleic acids / A.V. Tataurov, Y. You, R. Owczarzy // Biophys. Chem. - 2008. - Vol. 133 (1-3). - P. 66-70.

16. Dos Santos D.D.L., Besegato J.F., de Melo P.B.G., Junior J.A.O., Chorilli M., Deng D., Bagnato V.S., de Souza Rastelli A.N. Effect of curcumin-encapsulated Pluronic^®F-127 over duo-species biofilm of Streptococcus mutans and Candida albicans. Lasers Med Sci. 2022 Apr; 37 (3): 1775-1786.

17. Полякова, Е.В. Основы физиологии: учебное пособие / Е.В. Полякова. - Пенза: ПГАУ, 2023. - 243 с. - URL: https://rucont.ru/efd/817594 (дата обращения: 30.06.2024).

Таблица 1

Динамика содержания рибонуклеопротеина вируса бешенства после хранения при температуре 2-8°С с применением прототипного способа

n = 10, p<0,005

Номер экспериментальной серии Содержание рибонуклеопротеина в антигене вируса бешенства спустя определенное количество месяцев, % 0 6 12 18 24 30 36 42 48 01 100 70,2±0,2 40,1±0,1 32,9±0,1 22,3±0,1 18,3±0,1 15,1±0,1 11,6±0,1 5,2±0,2 02 100 71,2±0,1 42,3±0,1 34,0±0,1 22,0±0,1 18,0±0,1 15,3±0,1 12,0±0,1 8,0±0,1 03 100 73,6±0,1 44,9±0,1 33,3±0,1 21,5±0,2 18,3±0,1 15,9±0,1 12,9±0,1 7,3±0,1 04 100 74,9±0,1 40,5±0,1 35,5±0,1 22,0±0,1 18,9±0,1 15,1±0,1 12,8±0,1 9,9±0,1

Примечание: через 2,5 месяца сохранение рибонуклеопротеина вируса бешенства составила 93-94%.

Таблица 2

Динамика содержания рибонуклеопротеина вируса бешенства после хранения при температуре 2-8°С с применением разработанного способа (Предлагаемое изобретение)

n = 10, p<0,005

Номер экспериментальной серии Содержание рибонуклеопротеина в антигене вируса бешенства спустя определенное количество месяцев, % 0 6 12 18 24 30 36 42 48 01 100 100 100 100 100 100 100 97,6±0,1 93,2±0,2 02 100 100 100 100 100 100 100 98,0±0,1 93,9±0,1 03 100 100 100 100 100 100 100 97,9±0,1 93,6±0,1 04 100 100 100 100 100 100 100 97,6±0,1 93,9±0,1

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарной вирусологии. Предложен способ увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства, включающий внесение в готовый рибонуклеопротеин вируса бешенства комплекса стабилизирующих соединений, состоящего из стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина. Изобретение обеспечивает увеличение времени хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства до 3 лет при температуре 2-8°С. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 4 пр.

1. Способ увеличения продолжительности хранения производственного рибонуклеопротеина вируса бешенства, включающий внесение в готовый рибонуклеопротеин вируса бешенства комплекса стабилизирующих соединений, состоящего из стерильного циклооктаакис-(1→4)-α-D-глюкопиранозила с концентрацией 0,3% и Pluronic F-127 с концентрацией 0,1% в готовом препарате рибонуклеопротеина.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что комплекс стабилизирующих соединений для целевых видов животных является безвредным.