Питательная среда для культивирования балантидий свиней Советский патент 1983 года по МПК C12N1/10 

КЭ

rsj Изобретение относится к биологии а именно к средам для культивирован паразитических инфузорий, и может быть использовано а работе диагност ческих лабораторий. Известна среда для культивирован балаитийий свиней, содержащая хлористый натрий, двузамещенный фосфор нокислый натрий, одноэамещенный фосфорнокислый калий, лизат слизист оболочки кишечника свиней, крахмал и воду Gli). Однако на указанной среде балант ЛИЙ хорошо растут и размножаются в течение первых 72 ч. В дальнейшем среда мутнеет и для поддержания инт сивного роста паразитов необходимо п юводить частые пересевь. Целью изобретения является удлинение сроков переживания балантидий и увеличение их биомассы. Поставленная цель достигается тем,.что среда дополнительно содержит биогенный стимулятор ФиБС при следующем соотношении ингредиентов, г/л: Натрий хлористый 6,0-8,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 1,0-2,0 калий фосфорнокислый однозамещенный 0,6-1,0 Биогенный .стимулятор . . ФиБС.80,0-150,0 Крахмал. 6,25-10,0 Вода. До 1 л П р. и м е р 1. Питательную среду приготавливают следующим образом. Взвешивают г хлористого натрия, 1,2 г натрия фосфорнокислого двузамещенноГо 0,6 г калия фосфорнокисло го однозамещенного и растворяют их в 1000 мл дистиллированной воды. В течение 10 мин раствор стерилиз.юг кипячением. После стерилизации удаляют осадок путем двукратного фильт рования через фильтровальную бумагу и доводят объем дис-иллированной во дои до первоначального.. Измеряют рН среды и титруют ее 5%-ным. водным раствором едкого натрия до 7,2-8,0. Среду разливают в пробирки по 9 мл и стерилизуют в автоклаве при i атл в течение 20 мин, .после остывания добавляют на кьнчике скальпеля рисовый крахмал и оставляют до полного просв.етления. Хранят среду в бытовом холодильнике до 30-45 дней. Перед посевом балантидий в каждую пробирку добавляют ФиВС в дозе 1 мл ФиВС - это биогенный стимулятор, приготовленный из отгона лиманной грязи и содержащий коричную кислоту кумарйны; Представляет собой бесцвётную жидкость, рН 4,6-5,4, расфасован в ампулы по 1 мл. Пример 2. От 26 поросят отобран материал (фекальные массы), который исследовали микроскопически на предмет обнаружения балантидий. В 17 пробах обнаружены простейшие (до 2500 экземпляров в 1 грамме). Со всех проб произвели высев на предлагаемую питательную среду и известную среду, которая служила в качестве контроля (по 3 пробирки из каждой пробы. Высев производили фекальными массами (плотные - величиной с горошину, жидкие 2-5 капель). Размножение простейших на предлагаемой среде наблюдалось уже к 18-му часу после посева. Плотность паразитов достигала 1500 в 1 мл. Размножение балантидий на известной среде к этому времени не отмечалось. Результаты исследований представлены в табл.1. Первый пересев на обе среды прюизводили на 24-м часу. Максимум роста отмечали к 48-му часу. Последующие пересевы на предлагаемую среду осуществляли через каждые 120 ч. На известную среду пересевы делали через 48-72 ч, так как через 96 ч она.становилась мутной, с хлопьями, и черей 144 ч культура погибала. Переживаемость балантидий на предлагаемой среде достигала 336 ч. Культурально балантидий вьщелены из всех 26 проб. Всего произвели 12 пассажей. В табл. 2 представлены среды с оптимальным, минимальным и максимальным содержанием компонентов. I Влияние содержания компонентов на рост балантидий в культуре показано в табл.3. Как видно из табл.3, оптимальное содержание компонентов в среде способствует более длительном периоду активного роста простейших (до 96 ч), позволяет получить более высокую концентрацию возбудителя (до 5 тыс. в 1 мл) и достичь -общей переживаемоети культуры до 14 сут. Предложенная среда пригодна как для вьщеления балантидий из Фекалий, так и для дальнейшего их пассирования и накопления, биомассы возбудителя. Среду используют также в диагностических целях. Применение указанной среды экономит химреактиаы и время исследователя, так как пересевы производят через 5 сут, а также нет необходимости ё приготовлении лизата слизистой ; оболочки кишечника свиней (ФиБС выпускается промышленностью).

1 а б лица 1

о

Таблица 3

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАЛАНТИДИП СВИНЕЙ, Содержащая натрий хлористый,натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый одноэамеценный, крахмал -и воду, отлич я-с я тем, что, с целью удлинения сроков переживания балантидий и увеличения их биомассы, среда дополнительно содержит биогенный стимулятор ФиБС при следующем соотношении ингредиентов, г/л: Натрий -хлористый 6,0-8,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 1,0-2,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,6-1,0 Биогенный стимулятор ФиБС80,0-150,0 Крахмал6,25-1(0 водаДо 1 л